TW201808898A - 作為登革熱病毒複製抑制劑的經取代的吲哚啉衍生物 - Google Patents

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Abstract

本發明涉及經取代的吲哚啉衍生物、藉由使用所述化合物預防或治療登革熱病毒感染之方法，並且還涉及所述化合物用作藥物，更較佳的是用作治療或預防登革熱病毒感染之藥物。此外，本發明涉及該等化合物之醫藥組成物或組合製劑，涉及用作藥物，更較佳的是用於預防或治療登革熱病毒感染之組成物或製劑。本發明還涉及用於製備該等化合物之方法。

Description

作為登革熱病毒複製抑制劑的經取代的吲哚啉衍生物
本發明涉及經取代的吲哚啉衍生物、藉由使用所述化合物預防或治療登革熱病毒感染之方法，並且還涉及所述化合物用作藥物，更較佳的是用作治療或預防登革熱病毒感染之藥物。此外，本發明涉及該等化合物的醫藥組成物或組合製劑，涉及用作藥物，更較佳的是用於預防或治療登革熱病毒感染的組成物或製劑。本發明還涉及用於製備該等化合物之方法。
藉由蚊子或蜱傳播的黃病毒在人中引起危及生命的感染，如腦炎和出血熱。已知黃病毒登革熱的四種不同的但密切相關的血清型，所謂的DENV-1、-2、-3和-4。登革熱係在全世界大多數熱帶和亞熱帶地區地方性的，主要在城市和半城市地區。根據世界衛生組織(WHO)，25億人(其中10億兒童)處於DENV感染的風險(WHO，2002)。估計每年在世界範圍內發生5000萬至1億登革熱[DF]病例、50萬嚴重登革熱疾病(即登革出血熱[DHF]和登革熱休克症候群[DSS])病例以及超過20,000例死亡。DHF已經成為流行地區中兒童之中住院和死亡的主要原因。總而言之，登革熱代表蟲媒病毒(arboviral)疾病的最常見原因。由於在位於拉丁美洲、東南亞和西太平洋的國家(包括巴西、波多黎各、委內瑞拉、柬埔寨、印尼、越南、泰國)中的最近大暴發，登革熱病例的數量已經在過去幾年急劇上升。隨著疾病傳播至新的區 域，不僅登革熱病例的數量在增加，而且暴發傾向於更嚴重。
雖然正在針對登革熱的疫苗開發中(在Dengvaxia®疫苗的有效性方面)取得進展，但是遇到許多困難。該等困難包括被稱為抗體依賴性增強作用(ADE)的現象的存在。從一種血清型感染中恢復提供針對該血清型的終身免疫，但是僅賦予針對其他三種血清型中的一種的隨後感染的部分和短暫保護。
在感染另一種血清型之後，預先存在的異源抗體與新感染的登革病毒血清型形成複合物，但是不中和病原體。相反，據信促進病毒進入細胞，從而導致不受控制的病毒複製和更高的峰病毒滴度。在原發感染和繼發感染兩者中，更高的病毒滴度與更嚴重的登革熱疾病相關。因為母體抗體能夠容易地藉由母乳餵養傳遞至嬰兒，所以這可能是兒童比成年人更多受嚴重登革熱疾病影響的原因之一。
在具有兩種或更多種血清型同時流通的區域(還被稱為超流行地區)，嚴重登革熱疾病的風險顯著更高，這係由於經歷繼發性、更嚴重感染的風險增加。此外，在超流行性的情況下，更強毒株出現的概率增加，這進而增加登革出血熱(DHF)或登革熱休克症候群的概率。
攜帶登革熱的蚊子，包括埃及斑蚊(Aedes aegypti)和白紋伊蚊(Aedes albopictus)(虎斑蚊(tiger mosquito))在地球上向北方移動。根據美國(US)疾病控制與預防中心(CDC)，兩種蚊子當前在德克薩斯州南部普遍存在。攜帶登革熱的蚊子向北傳播不限於美國，而且也已在歐洲觀察到。
Dengvaxia®，由賽諾菲巴斯德公司(Sanofi Pasteur)生產的登革熱疫苗在墨西哥首次獲得批准，並且已經同時在更多國家中獲得批准。儘管如此，由於功效有限，尤其是針對DENV-1和DENV-2，在黃病毒初次感染受試者中的功效低和漫長的給藥方案，該疫苗留下了相當大的改進餘地。
儘管存在該等缺點，該疫苗係流行地區的規則改變 者，因為它將為大部分人群提供保護，但是可能不能保護非常小的嬰兒，該等嬰兒承載著登革熱的最大負擔。此外，給藥方案和在黃病毒初次感染受試者中的功效非常有限使它對於從非流行地區到登革熱流行地區的遊客而言是不合適的並且可能是不值得的/成本有效的。登革熱疫苗的上述缺點係為何需要預暴露預防性登革熱抗病毒劑之原因。
此外，當前不可獲得用於治療或預防登革熱病毒感染的特異性抗病毒藥物。顯然，對於用於預防或治療動物中(更具體地人中)的病毒感染並且尤其是針對由黃病毒(更具體地登革病毒)引起的病毒感染的治療劑仍然存在巨大未滿足的醫學需求。高度需要具有良好抗病毒效力、無副作用或低水平的副作用、針對多種登革熱病毒血清型的廣效活性、低毒性和/或良好藥物動力學或藥效-動力學特性的化合物。
WO-2010/021878揭露了2-苯基吡咯啶和吲哚啉衍生物作為冷的薄荷醇受體拮抗劑用於治療炎性和中樞性疾病。WO-2013/045516揭露了吲哚和吲哚啉衍生物，用於在治療登革熱病毒感染中使用。
本發明現在提供化合物經取代的吲哚啉衍生物，該等化合物顯示針對所有四種(4)登革熱病毒血清型的高效活性。
本發明係基於上文提到的問題中的至少一個可以藉由本發明的當前化合物來解決的出人意料的發現。
本發明提供化合物，該等化合物已顯示具有針對當前已知的所有四種(4)血清型的有效抗病毒活性。此外，本發明證明該等化合物有效地抑制登革熱病毒(DENV)之增殖。因此，該等化合物構成可用於治療和/或預防動物、哺乳動物和人中的病毒感染，更具體地用於治療和/或預防登革熱病毒感染的一類有用的有效化合物。
此外，本發明涉及這類化合物作為藥物之用途，並且涉及其用於製造用以治療和/或預防動物或哺乳動物(更具體地人)中的病毒感染，特別是屬於登革熱病毒家族的病毒感染的藥劑之用途。本發明還涉及用於製備所有這類化合物之方法，並且涉及包含有效量的該等化合物之醫藥組成物。
本發明還涉及一種藉由向有需要的患者給予有效量的一種或多種這類化合物或其藥學上可接受的鹽視情況與一種或多種其他藥物(像另一種抗病毒劑)的組合來治療或預防人中的登革熱病毒感染之方法。
本發明的一個方面係提供具有化學式(I)之化合物、其立體異構形式、藥學上可接受的鹽、溶劑化物或多晶型物：
其中該等化合物選自下組，該組包括： 。
在可替代的實施方式中，本發明涉及具有化學式(I)之化合物
其立體異構形式、藥學上可接受的鹽、溶劑化物或多晶型物， 其中R1係氟，R2係氫，R3係三氟甲基，並且R4係氫；或R1係氟，R2係氫，R3係三氟甲氧基，並且R4係氫；或R1係氯，R2係氫，R3係三氟甲基，並且R4係氫；或R1係氯，R2係氫，R3係三氟甲氧基，並且R4係氫；或R1係氯，R2係氫，R3係三氟甲基，並且R4係甲氧基；或R1係氯，R2係甲氧基，R3係三氟甲基，並且R4係氫；或R1係氯，R2係甲氧基，R3係三氟甲基，並且R4係甲氧基；或R1係氯，R2係甲氧基，R3係三氟甲氧基，並且R4係氫；或R1係氯，R2係氟，R3係三氟甲基，並且R4係氫；或R1係氯，R2係氟，R3係三氟甲氧基，並且R4係氫；或R1係氯，R2係氟，R3係三氟甲基，並且R4係甲氧基；或R1係氯，R2係氫，R3係三氟甲氧基，並且R4係甲氧基。
本發明的一部分還係一種醫藥組成物，該醫藥組成物包括以上提到的化合物或其立體異構形式、藥學上可接受的鹽、溶劑化物或多晶型物，連同一種或多種藥學上可接受的賦形劑、稀釋劑或載體。
所述化合物的藥學上可接受的鹽包括其酸加成鹽以及鹼鹽。合適的酸加成鹽係從形成無毒鹽的酸形成。合適的鹼鹽係從形成無毒鹽的鹼形成的。
本發明的化合物還可以按非溶劑化的和溶劑化的形式存在。術語“溶劑化物”在此用以描述包括本發明的化合物以及一種或多種藥學上可接受的溶劑分子(例如，乙醇)的分子複合物。
術語“多晶型物”係指本發明的化合物能夠以一種以上的形式或晶體結構存在。
可以將本發明的化合物以晶態的或非晶態的產品給予。它們可藉由諸如沈澱、結晶、冷凍乾燥、噴霧乾燥或蒸發乾燥等方法以例如固體填料、粉末或膜形式獲得。它們可以單獨給 予或與一種或多種本發明的其他化合物組合給予或與一種或多種其他藥物組合給予。通常，它們將作為與一種或多種藥學上可接受的賦形劑相結合的配製物給予。術語“賦形劑”在此用以描述除本發明的一種或多種化合物之外的任何成分。賦形劑的選擇大體上取決於如具體給予模式、賦形劑對溶解性和穩定性的影響以及劑型的性質等因素。
本發明的化合物或其任何亞群可以被配製成用於給予目的不同藥物形式。作為適當的組成物，可能引用了所有經常用於全身性給藥的組成物。為製備本發明的醫藥組成物，將作為活性成分的有效量的具體化合物，視情況為加成鹽形式與藥學上可接受的載體組合成緊密混合物，其載體根據給藥需要的劑型可以採用各種形式。令人希望地，該等醫藥組成物處於適合於例如口服或經直腸給予的單位劑型。例如，在製備處於口服劑型的組成物中，可使用任何常見藥物介質，在口服液體製劑(如懸浮液、糖漿劑、酏劑、乳液以及溶液)的情況下，例如像水，二醇類、油類、醇類等；或在粉劑、丸劑、膠嚢劑和片劑的情況下，固體載體如澱粉、糖、高嶺土、稀釋劑、潤滑劑、黏合劑、崩散劑等。因為其容易給予，片劑和膠囊劑代表最有利的口服單位劑型，在該情況下顯然使用固體藥物載體。也包括可在即將使用前轉化成液體形式的固體形式製劑。
為了便於給予和劑量的均一性，將上述醫藥組成物配製成單位劑型係特別有利的。如在此所用的單位劑型係指適合作為單位劑量的物理離散單位，各單位包含預定量的活性成分，該預定量的活性成分經計算與所需藥物載體相結合而產生所希望的治療效果。此類單位劑型的實例係片劑(包括刻痕或包衣的片劑)、膠囊劑、丸劑、粉末包(powder packet)、糯米紙囊劑(wafer)、栓劑、可注射溶液或懸浮液以及類似劑型，及其分離的多劑量形式(multiples)。
在感染性疾病治療領域中的普通技術人員將能夠從 下文所呈現的測試結果來確定有效量。通常，預期每日有效量將為從0.01mg/kg至50mg/kg體重，更較佳的是從0.1mg/kg至10mg/kg體重。可以適當地將所需劑量在全天中以適當的時間間隔作為兩個、三個、四個或更多個子劑量給予。所述子劑量可配製成單位劑型，例如每單位劑型含有1mg至1000mg，且具體來說5mg至200mg的活性成分。
熟習該項技術者所熟知的，給予的精確劑量和頻率取決於所使用的本發明的具體化合物、正在被治療的具體病症、正在被治療的病症的嚴重性、具體患者的年齡、體重和總體身體狀況以及個體可能服用的其他藥物。此外，顯而易見的是可根據所治療受試者的反應和/或根據用本發明化合物開處方的醫師的評估來降低或增加有效量。因此，上文所述的有效量範圍僅為指導且並不打算在任何程度上限制本發明的範圍或使用。
本揭露還旨在包括存在於本發明的化合物中的原子的任何同位素。例如，氫的同位素包括氚和氘，並且碳的同位素包括C-13和C-14。
用於本發明中的該等化合物還可以其立體化學異構形式存在，從而定義由相同鍵序列鍵合的相同原子組成但具有不可互換的不同三維結構的所有可能的化合物。除非另外提及或指明，化合物的化學命名涵蓋所述化合物可以具有的所有可能的立體化學異構形式的混合物。所述混合物可以包含所述化合物的基本分子結構的所有非鏡像異構物和/或鏡像異構物。用於本發明中的處於純形式的或彼此混合的化合物的所有立體化學異構形式旨在被涵蓋於本發明的範圍內，包括任何外消旋混合物或外消旋體。
在此提到的化合物和中間體的純的立體異構形式被定義為基本上不具有所述化合物或中間體的相同基本分子結構的其他鏡像異構或非鏡像異構形式的異構物。具體地說，術語‘立體異構純’涉及具有至少80%立體異構過量(即，最少90%的一種異構物和最大10%的其他可能的異構物)到100%立體異構過量 (即，100%的一種異構物並且沒有其他異構物)的化合物或中間體，更具體地具有90%至100%立體異構過量、甚至更具體地具有94%至100%立體異構過量並且最具體地具有97%至100%立體異構過量的化合物或中間體。應當以類似的方式理解術語‘鏡像異構純’和‘非鏡像異構純’，但是討論中的分別是關於混合物中的鏡像異構過量以及非鏡像異構過量。
可以藉由領域已知的程式的應用來獲得用於本發明中的化合物和中間體的純的立體異構形式。例如，鏡像異構物可以藉由用光學活性酸或鹼使它們的非鏡像異構鹽進行選擇性結晶而得以彼此分離。它們的實例係酒石酸、二苯甲醯基酒石酸、二甲苯甲醯基酒石酸以及樟腦磺酸。可替代地，可以藉由使用手性固定相的層析技術分離鏡像異構物。所述純的立體化學異構形式還可以衍生自適當起始材料的相對應的純的立體化學異構形式，其條件係反應立體特異性地發生。較佳的是，如果一種具體的立體異構物係所希望的，那麼所述化合物將藉由立體專一的製備方法得以合成。該等方法將有利地使用鏡像異構純的起始材料。
本發明的具有化學式(I)之化合物均具有至少一個如在以下圖中藉由用*標記的碳原子來指示的手性碳原子：
由於存在所述手性碳原子，“具有化學式(I)之化合物”可以係(R)-鏡像異構物、(S)-鏡像異構物、外消旋形式、或兩種單獨鏡像異構物以任何比率的任何可能組合。當鏡像異構物的絕對(R)-或(S)-組態係未知的時，這種鏡像異構物也可以藉由在測量所述特定鏡像異構物的比旋光度之後，指示該鏡像異構物係右旋的(+)- 還係左旋的來鑒定。
在一方面，本發明涉及第一組具有化學式(I)之化合物，其中具有化學式(I)之化合物具有(+)比旋光度。
在另一方面，本發明涉及第二組具有化學式(I)之化合物，其中具有化學式(I)之化合物具有(-)比旋光度。
實例 LC/MS方法
使用LC泵、二極體陣列(DAD)或UV檢測器以及如在對應的方法中所指定的柱進行高效液相層析(HPLC)測量。如果必要的話，包括其他檢測器(參見下文的方法表格)。
將來自柱的流帶至配置有大氣壓離子源的質譜儀(MS)。設置調諧參數(例如掃描範圍、停留時間等)以便獲得允許鑒定化合物的標稱單一同位素分子量(MW)的離子在技術人員的知識內。使用適當的軟體進行數據採集。
藉由其實驗保留時間(Rt)和離子描述化合物。如果未在數據表中不同地指定，那麼報導的分子離子對應於[M+H]+(質子化的分子)和/或[M-H]-(去質子的分子)。在該化合物不是直接可電離的情況下，指定加合物類型(即[M+NH4]+、[M+HCOO]-等)。對於具有多種同位素模式的分子(Br、Cl)，所報告值係針對最低同位素質量所獲得的值。所獲得的所有結果均具有實驗不確定性，這通常與所使用方法相關。
下文中，“SQD”意指單四極檢測器，“MSD”質量選擇性檢測器，“RT”室溫，“BEH”橋連乙基矽氧烷/二氧化矽雜化體，“DAD”二極體陣列檢測器，“HSS”高強度二氧化矽。
LC/MS方法代碼(以mL/分鐘來表示流量；以℃表示 柱溫度(T)；以分鐘表示執行時間)
SFC-MS方法
使用分析型超臨界流體層析(SFC)系統來進行SFC測量，該系統由以下構成：用於遞送二氧化碳(CO2)和改性劑的二元泵、自動進樣器、柱烘箱、配備有經得起400巴的高壓流動池的二極體陣列檢測器。如果配置有質譜儀(MS)，來自柱的流被帶至該(MS)。設置調諧參數(例如掃描範圍、停留時間等)以便獲得允許鑒定化合物的標稱單一同位素分子量(MW)的離子在技術人員的知識內。使用適當的軟體進行數據採集。
分析型SFC/MS方法(以mL/min表示流量；以℃表示柱溫度(T)；以分鐘表示執行時間，以巴表示背壓(BPR))。
熔點
值係峰值抑或熔融範圍，並且所獲得的值具有通常與這個分析方法相關的實驗不確定性。
DSC823e(指示為DSC)
對於多種化合物，熔點係用DSC823e(梅特勒-托利多(Mettler-Toledo))來確定的。使用10℃/分鐘的溫度梯度來測量熔點。最高溫度係300℃。
旋光度：在鉑金埃爾默(Perkin-Elmer)341旋光計上用鈉燈測量旋光度並且記錄如下：[α]°(λ，c g/100ml，溶劑，T℃)。
[α]λ T=(100α)/(l×c)：其中l係以dm計的路徑長度並且c係針對在溫度T(℃)和波長λ(以nm計)下的樣品的以g/100ml計的濃度。如果所使用的光波長係589nm(鈉D線)，那麼可以改為使用符號D。始終應給出旋轉符號(+或-)。當使用這一等式時，常常在旋轉後的括弧中提供濃度和溶劑。使用度報導旋轉並且濃度不帶單位的給出(將其假定為g/100ml)。
實例1：4-(3-((1-(4-氟苯基)-2-側氧基-2-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙基)胺基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物1)的合成以及手性分離成鏡像異構物1A和1B
中間體1a的合成：向4-溴丁酸三級丁酯[CAS 110661-91-1](42.3g，0.19 mol)於DMF(600mL)中的機械攪拌溶液中分部分地添加3-胺基-5-甲氧基苯酚[CAS 162155-27-3](26.4g，0.19mol)和Cs2CO3(123.6g，0.379mol)的固體混合物。將該反應在60℃下攪拌65h，並且允許其達到室溫。將該混合物傾倒入H2O(2.5L)中。將該產物用Et2O進行萃取(2次)。將合併的有機層用鹽水洗滌，經MgSO4乾燥並濾出。將該溶劑在減壓下蒸發，並且然後與甲苯共蒸發。將該殘餘物經由正相HPLC(固定相：矽膠60A 25-40μm(默克公司(Merck))，流動相：梯度從20% EtOAc、80%庚烷至60% EtOAc、40%庚烷)進行純化，產生4-(3-胺基-5-甲氧基苯氧基)丁酸三級丁酯1a(27g)。
中間體1b的合成：將2-溴-2-(4-氟苯基)乙酸甲酯[CAS 71783-54-5](0.400g，1.62mmol)、4-(3-胺基-5-甲氧基苯氧基)丁酸三級丁酯1a(0.547g，1.94mmol)和三乙胺(0.337mL，2.43mmol)於CH3CN(4mL)中的混合物在微波爐中在100℃下加熱20min。將該反應混合物用EtOAc稀釋並且用1N HCl洗滌。將有機相用H2O和鹽水洗滌，經MgSO4乾燥，過濾且在減壓下濃縮。將殘餘物使用EtOAc(2%至20%)於庚烷中的梯度藉由在矽膠上快速層析進行純化，以給出4-(3-((1-(4-氟苯基)-2-甲氧基-2-側氧基乙基)胺基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸三級丁酯1b(0.511g)。
中間體1c的合成：向4-(3-((1-(4-氟苯基)-2-甲氧基-2-側氧基乙基)胺基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸三級丁酯1b(0.510g，1.14mmol)於THF(3mL)、MeOH(3mL)和H2O(3mL)的溶劑混合物中的溶液中添加氫氧化鋰(0.239g，5.70mmol)。將該反應混合物在室溫下攪拌2h。將該反應混合物在減壓下部分濃縮以移除有機溶劑。將該殘餘物用1N HCl酸化並且用CH2Cl2萃取。將有機相經MgSO4乾燥，過濾並且在減壓下濃縮。將殘餘物使用MeOH(0%至10%)於CH2Cl2(包含2%的乙酸)中的梯度藉由在矽膠上快速層析進行 純化，以給出2-((3-(4-(三級丁氧基)-4-側氧基丁氧基)-5-甲氧基苯基)胺基)-2-(4-氟苯基)乙酸1c(0.326g)。
中間體1d的合成：向2-((3-(4-(三級丁氧基)-4-側氧基丁氧基)-5-甲氧基苯基)胺基)-2-(4-氟苯基)乙酸1c(0.326g，0.75mmol)於DMF(6mL)中的溶液中添加HATU(0.286g，0.75mmol)、三乙胺(0.418mL，3.01mmol)和6-(三氟甲基)吲哚啉[CAS 181513-29-1](0.141g，0.75mmol)。將該反應混合物在室溫下攪拌3h。將該反應混合物用EtOAc稀釋並且用1N HCl洗滌。將有機相用飽和NaHCO3水溶液和鹽水洗滌，經MgSO4乾燥，過濾並且在減壓下濃縮。將殘餘物使用EtOAc(5%至50%)於庚烷中的梯度藉由在矽膠上快速層析進行純化，以給出4-(3-((1-(4-氟苯基)-2-側氧基-2-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙基)胺基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸三級丁酯1d(0.134g)。
化合物1的合成以及手性分離成鏡像異構物1A和1B：向4-(3-((1-(4-氟苯基)-2-側氧基-2-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙基)胺基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸三級丁酯1d(0.134g，0.22mmol)於CH2Cl2(3mL)中的溶液中添加於二(3mL，12mmol)中的4M氯化氫溶液。將該反應混合物在室溫下攪拌過夜。將該反應混合物在減壓下進行濃縮。將殘餘物用Et2O/庚烷的混合物研磨。將固體濾出並且在真空下乾燥，以給出作為外消旋混合物的4-(3-((1-(4-氟苯基)-2-側氧基-2-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙基)胺基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物1，103mg)。
將化合物1(1.3g)的鏡像異構物經由製備型SFC(固定相：Chiralcel® Diacel OD 20 x 250mm，流動相：CO2，乙醇)進行分離。將產物級分合並且在減壓下蒸發。將第一洗提鏡像異構物藉由快速層析(固定相：Grace Reveleris®二氧化矽40g，流動相：庚烷/EtOAc/EtOH/HOAc梯度100/0/0/0至0/75/24.5/0.5)進行進一步純化。將所希望的級分合併，在減壓下蒸發，並且與EtOAc 共蒸發，並且然後與MeOH/H2O共蒸發。將殘餘物在H2O(15mL)+MeOH(1.5mL)中攪拌45分鐘，過濾出，用MeOH/H2O(4/1)洗滌(4x)，並且在真空下在45℃下乾燥，以提供鏡像異構物1A(475mg)。將第二洗提鏡像異構物藉由快速層析(固定相：Grace Reveleris®二氧化矽40g，流動相：庚烷/EtOAc/EtOH/HOAc梯度100/0/0/0至0/75/24.5/0.5)進行進一步純化。將所希望的級分合併，在減壓下蒸發，並且與EtOAc共蒸發，並且然後與MeOH/H2O共蒸發。將殘餘物在H2O(15mL)+MeOH(1.5mL)中攪拌75分鐘，過濾出，用MeOH/H2O(4/1)洗滌(4x)，並且在真空下在45℃下乾燥，以提供鏡像異構物1B(461mg)。
化合物1： 1H NMR(300MHz,DMSO-d 6)δ ppm 1.80-1.94(m,2 H)2.22-2.48(m,2 H)3.09-3.27(m,2 H)3.62(s,3 H)3.85(t,J=6.2Hz,2 H)3.91-4.06(m,1 H)4.48-4.61(m,1 H)5.57(d,J=8.7Hz,1 H)5.76(s,1 H)5.94(s,1 H)5.96(s,1 H)6.39(d,J=8.3Hz,1 H)7.21(t,J=8.7Hz,2 H)7.35-7.49(m,2 H)7.58(dd,J=8.1,5.8Hz,2 H)8.38(s,1 H)12.1(br.s.,1 H)
LC/MS(方法LC-C)：Rt 1.94min，MH+ 547
鏡像異構物1A： 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 1.87(quin,J=6.8Hz,2 H)2.33(t,J=7.4Hz,2 H)3.14-3.29(m,2 H)3.62(s,3 H)3.85(t,J=6.5Hz,2 H)4.00(td,J=10.5,7.3Hz,1 H)4.54(td,J=10.4,6.3Hz,1 H)5.56(d,J=8.6Hz,1 H)5.76(t,J=2.0Hz,1 H)5.95(dt,J=9.1,1.8Hz,2 H)6.36(d,J=8.8Hz,1 H)7.20(t,J=8.9Hz,2 H)7.34-7.41(m,1 H)7.42-7.49(m,1 H)7.52-7.62(m,2 H)8.38(br s,1 H)12.10(br s,1 H)
LC/MS(方法LC-D)：Rt 0.99min，MH+ 547
[α]D 20：-49.0°(c 0.41，DMF)
手性SFC(方法SFC-J)：Rt 2.92min，MH+ 547，手性純度100%。
鏡像異構物1B： 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 1.87(quin,J=6.9Hz,2 H)2.33(t,J=7.3Hz,2 H)3.12-3.29(m,2 H)3.62(s,3 H)3.85(t,J=6.5Hz,2 H)4.00(td,J=10.4,7.2Hz,1 H)4.54(td,J=10.4,6.3Hz,1 H)5.56(d,J=8.8Hz,1 H)5.76(t,J=2.1Hz,1 H)5.95(dt,J=9.1,2.0Hz,2 H)6.36(d,J=8.8Hz,1 H)7.20(t,J=8.2Hz,2 H)7.35-7.41(m,1 H)7.42-7.48(m,1 H)7.53-7.62(m,2 H)8.38(br s,1 H)12.11(br s,1 H)
LC/MS(方法LC-D)：Rt 1.00min，MH+ 547
[α]D 20：+49.5°(c 0.525，DMF)
手性SFC(方法SFC-J)：Rt 2.81min，MH+ 547，手性純度100%。
實例2：4-(3-((1-(4-氟苯基)-2-側氧基-2-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙基)胺基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物2)的合成以及手性分離成鏡像異構物2A和2B。
中間體2a的合成：將6-(三氟甲氧基)吲哚啉[CAS 959235-95-1](2g，9.84mmol)、2-(4-氟苯基)乙酸[CAS 405-50-5](1.67g，10.8mmol)、HATU(5.6g，14.8mmol)和二異丙基乙胺(4.9mL，29.5mmol)於DMF(40mL)中的混合物在室溫下攪拌12h。添加水並且將該沈澱過濾出。將殘餘物用EtOAc吸收。將有機溶液用10% K2CO3水溶液、鹽水洗滌，經MgSO4乾燥，過濾，並且在減壓下蒸 發溶劑。將殘餘物在矽膠上藉由層析法(15-40μm，80g，庚烷/EtOAc梯度90/10至60/40)進行純化。將純的級分合併，並且將溶劑在減壓下濃縮，以給出2-(4-氟苯基)-1-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙酮2a(2.5g)。
中間體2b的合成：在-78℃，在N2流下，將1.5M於THF中的LiHMDS(9.82mL，14.7mmol)滴加至2-(4-氟苯基)-1-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙酮2a(2.5g，7.37mmol)於THF(40mL)中的混合物中。將該混合物在-78℃下攪拌15min，並且滴加N-溴代琥珀醯亞胺(1.44g，8.1mmol)於THF(30mL)中的溶液。在-78℃下攪拌2h之後，將該反應用NH4Cl的飽和水溶液淬滅。將該混合物用EtOAc進行萃取。將有機層分離，經MgSO4乾燥，過濾並且在減壓下蒸發溶劑，以在從CH3CN/二異丙醚沈澱之後給出2-溴-2-(4-氟苯基)-1-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙酮2b(3g)。將該化合物按原樣用於下一步驟中。
中間體2c的合成：將2-溴-2-(4-氟苯基)-1-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙酮2b(1.1g，2.63mmol)、4-(3-胺基-5-甲氧基-苯氧基)丁酸三級丁酯1a(0.74g，2.63mmol)和二異丙基乙胺(0.54mL，3.15mmol)於CH3CN(40mL)中的混合物在70℃下攪拌4h。將該混合物在減壓下濃縮。將殘餘物用EtOAc稀釋，用1N HCl和水洗滌。將有機相分離，經MgSO4乾燥，過濾並且在減壓下蒸發溶劑。將該化合物藉由在矽膠上快速層析(15-40μm，80g，庚烷/EtOAc 80/20)進行純化。將純的級分合併，並且蒸發至乾。將殘餘物從二異丙醚/石油醚中結晶，以給出4-(3-((1-(4-氟苯基)-2-側氧基-2-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙基)胺基)-5-甲氧基-苯氧基)丁酸三級丁酯2c(1.25g)。
化合物2的合成以及手性分離成鏡像異構物2A和2B：將4-(3-((1-(4-氟苯基)-2-側氧基-2-(6-(三氟甲氧基) 吲哚啉-1-基)乙基)胺基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸三級丁酯2c(1.5g，2.42mmol)於在二(15mL)中的4M HCl中的溶液在5℃下攪拌3h並且在室溫下攪拌3h。將該沈澱過濾出並乾燥，以提供呈HCl鹽的4-(3-((1-(4-氟苯基)-2-側氧基-2-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙基)胺基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物2，1.4g，0.76當量HCl，0.1當量H2O)。在手性分離之前，將化合物2(HCl鹽)藉由用1N NaOH處理化合物2(HCl鹽)於EtOAc或CH2Cl2中的溶液並在減壓下蒸發有機層來中和。將化合物2(1.3g)的鏡像異構物經由製備型手性SFC(固定相：Chiralcel® OD-H 5μm 250 x 30mm，流動相：50% CO2，50% MeOH)分離並且經由反相層析(固定相：YMC-actus Triart-C18 10μm 150 x 30mm，流動相：梯度從60% HCOONH4 0.6g/L pH=3.5，40% CH3CN至0% HCOONH4 0.6g/L pH=3.5，100% CH3CN)進行進一步純化。將產物級分合並且在減壓下蒸發。將第一洗提鏡像異構物(205mg)從石油醚/二異丙醚中固化，以給出鏡像異構物2A(168mg)。將第二洗提鏡像異構物(259mg)從石油醚/二異丙醚中固化，以給出鏡像異構物2B(180mg)。
化合物2： 1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 1.87(quin,J=6.9Hz,2 H)2.34(t,J=7.3Hz,2 H)3.05-3.28(m,2 H)3.62(s,3 H)3.85(t,J=6.5Hz,2 H)4.01(td,J=10.3,7.4Hz,1 H)4.53(td,J=10.2,6.6Hz,1 H)5.56(s,1 H)5.76(s,1 H)5.96(br d,J=10.4Hz,2 H)7.01(br d,J=7.9Hz,1 H)7.21(t,J=8.8Hz,2 H)7.33(d,J=8.2Hz,1 H)7.57(dd,J=8.5,5.7Hz,2 H)8.04(s,1 H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt 2.80min，MH+ 563
熔點：136℃
鏡像異構物2A： 1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 1.86(quin,J=6.9Hz,2 H)2.33(t,J=7.3Hz,2 H)3.05-3.26(m,2 H)3.61(s,3 H)3.84(t,J=6.3Hz,2 H)3.96-4.08(m,1 H)4.46-4.60(m,1 H)5.55(d, J=8.8Hz,1 H)5.75(s,1 H)5.95(br d,J=11.0Hz,2 H)6.41(br d,J=8.5Hz,1 H)7.01(br d,J=8.2Hz,1 H)7.21(t,J=8.8Hz,2 H)7.33(d,J=8.2Hz,1 H)7.57(dd,J=8.2,5.7Hz,2 H)8.04(s,1 H)12.19(br s,1 H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt 2.87min，MH+ 563
[α]D 20：-46.3°(c 0.27，DMF)
手性SFC(方法SFC-B)：Rt 1.75min，MH+ 563，手性純度100%。
鏡像異構物2B： 1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 1.86(quin,J=6.9Hz,2 H)2.32(t,J=7.3Hz,2 H)3.05-3.26(m,2 H)3.61(s,3 H)3.84(t,J=6.5Hz,2 H)4.01(td,J=10.3,7.4Hz,1 H)4.53(td,J=10.2,6.0Hz,1 H)5.55(d,J=8.8Hz,1 H)5.75(s,1 H)5.95(br d,J=12.0Hz,2 H)6.41(d,J=8.8Hz,1 H)7.01(br d,J=7.9Hz,1 H)7.20(t,J=8.7Hz,2 H)7.33(d,J=8.2Hz,1 H)7.57(dd,J=8.5,5.7Hz,2 H)8.04(s,1 H)11.49-12.49(m,1 H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt 2.87min，MH+ 563
[α]D 20：+47.0°(c 0.27，DMF)
手性SFC(方法SFC-B)：Rt 3.83min，MH+ 563，手性純度100%。
實例3：4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-側氧基-2-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙基)胺基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物3)的合成以及手性分離成鏡像異構物3A和3B。
中間體3a的合成：將6-(三氟甲基)吲哚啉[CAS 181513-29-1](3g，16.0mmol)、2-(4-氯苯基)乙酸[CAS 1878-66-6](3.53g，20.8mmol)、HATU(9.1g，24.0mmol)和二異丙基乙胺(7.95mL，48.1mmol)於DMF(75mL)中的混合物在室溫下攪拌12h。添加水並且將該沈澱過濾出。將殘餘物用EtOAc吸收。將有機溶液用10% K2CO3水溶液、鹽水洗滌，經MgSO4乾燥，過濾，並且在減壓下蒸發溶劑。將殘餘物在矽膠上藉由層析法(15-40μm，80g，庚烷/EtOAc梯度90/10至60/40)進行純化。將純的級分合併，並且將溶劑在減壓下濃縮，以給出2-(4-氯苯基)-1-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮3a(4.5g)。
中間體3b的合成：在-78℃下，在N2流下，將1.5M於THF中的LiHMDS(17.7mL，26.5mmol)滴加至2-(4-氯苯基)-1-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮3a(4.5g，13.3mmol)於THF(65mL)中的混合物中。將該混合物在-78℃下攪拌15min，並且滴加N-溴代琥珀醯亞胺(2.6g，14.6mmol)於THF(35mL)中的溶液。在-78℃下攪拌2h之後，將該反應用NH4Cl的飽和溶液淬滅。將該混合物用EtOAc進行萃取。將有機層分離，經MgSO4乾燥，過濾並且在減壓下蒸發溶劑。將殘餘物用二異丙醚吸收。將沈澱物過濾出並且丟棄(殘餘的琥珀醯亞胺)。將濾液在減壓下濃縮，以給出2-溴-2-(4- 氯苯基)-1-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮3b(5g)。將該化合物按原樣用於下一步驟中。
中間體3c的合成：將2-溴-2-(4-氯苯基)-1-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮3b(5g，11.9mmol)、4-(3-胺基-5-甲氧基苯氧基)丁酸三級丁酯1a(3.3g，11.9mmol)和二異丙基乙胺(2.47mL，14.3mmol)於CH3CN(120mL)中的混合物在70℃下攪拌6h。將該混合物在減壓下濃縮，用EtOAc稀釋，並且用1N HCl和水洗滌。將有機相分離，經MgSO4乾燥，過濾並且在減壓下蒸發溶劑。將該化合物藉由在矽膠上快速層析(15-40μm，80g，庚烷/EtOAc梯度90/10至60/40)進行純化。將純的級分合併，並且蒸發至乾，以給出4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-側氧基-2-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙基)胺基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸三級丁酯3c(1.6g)。
化合物3的合成以及手性分離成鏡像異構物3A和3B：將4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-側氧基-2-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙基)胺基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸三級丁酯3c(1.6g，2.58mmol)於在二(22mL)中的4M HCl中的溶液在5℃下攪拌3h並且在室溫下攪拌8h。將該溶液在減壓下濃縮。將該殘餘物吸收在CH3CN/二異丙醚中。將該沈澱過濾出並乾燥，以提供呈HCl鹽的4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-側氧基-2-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙基)胺基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(1.15g，0.95當量HCl，0.07當量H2O)。將小部分的化合物3(HCl鹽)藉由用1N NaOH處理化合物3(HCl鹽)於EtOAc或CH2Cl2中的溶液並在減壓下蒸發有機層來中和以給出化合物3。將剩餘量的化合物3(HCl鹽)用於手性分離：將該等鏡像異構物經由製備型手性SFC(固定相：Chiralcel® OD-H 5μm 250 x 30mm，流動相：50% CO2，50% iPrOH)進行分離。將第一洗提鏡像異構物(470mg)從石油醚/二異丙醚中固化，以給出鏡像異構物3A(404mg)。將第二洗提鏡像異構物(480mg)從石油醚/二異丙醚中固化，以給出鏡像異構物3B(433mg)。
化合物3： 1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 1.87(quin,J=6.8Hz,2 H)2.33(t,J=7.3Hz,2 H)3.18-3.27(m,2 H)3.62(s,3 H)3.85(t,J=6.3Hz,2 H)3.97-4.09(m,1 H)4.46-4.59(m,1 H)5.57(d,J=8.6Hz,1 H)5.76(s,1 H)5.95(br d,J=9.1Hz,2 H)6.40(br d,J=8.6Hz,1 H)7.34-7.49(m,4 H)7.55(d,J=8.6Hz,2 H)8.38(s,1 H)11.90-12.25(m,1 H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt 2.88min，MH+ 563
熔點：192℃
鏡像異構物3A： 1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 1.87(br t,J=6.6Hz,2 H)2.34(br t,J=7.1Hz,2 H)3.15-3.31(m,2 H)3.62(s,3 H)3.85(br t,J=6.1Hz,2 H)3.97-4.09(m,1 H)4.48-4.60(m,1 H)5.59(br d,J=8.5Hz,1 H)5.77(br s,1 H)5.95(br d,J=11.3Hz,2 H)6.44(br d,J=8.5Hz,1 H)7.36-7.50(m,4 H)7.56(br d,J=8.2Hz,2 H)8.38(s,1 H)12.17(br s,1 H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt 2.93min，MH+ 563
[α]D 20：-42.4°(c 0.25，DMF)
手性SFC(方法SFC-C)：Rt 2.12min，MH+ 563，手性純度100%。
鏡像異構物3B： 1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 1.87(quin,J=6.7Hz,2 H)2.34(br t,J=7.1Hz,2 H)3.15-3.31(m,2 H)3.62(s,3 H)3.85(br t,J=6.3Hz,2 H)3.97-4.10(m,1 H)4.49-4.61(m,1 H)5.59(br d,J=8.8Hz,1 H)5.77(s,1 H)5.95(br d,J=11.3Hz,2 H)6.44(br d,J=8.5Hz,1 H)7.36-7.49(m,4 H)7.56(br d,J=8.2Hz,2 H)8.38(s,1 H)12.17(br s,1 H
LC/MS(方法LC-A)：Rt 2.93min，MH+ 563
[α]D 20：+50.7°(c 0.27，DMF)
手性SFC(方法SFC-C)：Rt 4.87min，MH+ 563，手性純度100%。
實例4：4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-側氧基-2-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙基)胺基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物4)的合成以及手性分離成鏡像異構物4A和4B。
中間體4a的合成：將6-(三氟甲氧基)吲哚啉[CAS 959235-95-1](2g，9.84mmol)、2-(4-氯苯基)乙酸[CAS 1878-66-6](1.85g，10.8mmol)、HATU(5.6g，14.8mmol)和二異丙基乙胺(4.9mL，29.5mmol)於DMF(40mL)中的混合物在室溫下攪拌12h。添加水並且將該沈澱過濾出。將殘餘物用EtOAc吸收。將有機溶液用10% K2CO3水溶液、鹽水洗滌，經MgSO4乾燥，過濾，並且在減壓下蒸發溶劑。將殘餘物在矽膠上藉由層析法(15-40μm，80g，庚烷/EtOAc梯度90/10至60/40)進行純化。將純的級分合併，並且將溶劑在減壓下濃縮，以給出2-(4-氯苯基)-1-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙酮4a(3g)。
中間體4b的合成：在-78℃下，在N2流下，將1.5M於THF中的LiHMDS(11.2mL，16.9mmol)滴加至2-(4-氯苯基)-1-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙酮4a(3g，8.43mmol)於THF(50mL)中的混合物中。將該混合物在-78℃下攪拌15min，並且滴加N-溴代琥珀醯亞 胺(1.65g，9.3mmol)於THF(30mL)中的溶液。在-78℃下攪拌2h之後，將該反應用NH4Cl的飽和溶液淬滅。將該混合物用EtOAc進行萃取。將有機層分離，經MgSO4乾燥，過濾並且將該溶劑在減壓下蒸發，以給出2-溴-2-(4-氯苯基)-1-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙酮4b(3.6g)。將該化合物按原樣用於下一步驟中。
中間體4c的合成：將2-溴-2-(4-氯苯基)-1-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙酮4b(3.6g，8.3mmol)、4-(3-胺基-5-甲氧基苯氧基)丁酸三級丁酯1a(2.3g，8.3mmol)和二異丙基乙胺(1.7mL，9.94mmol)於CH3CN(80mL)中的混合物在70℃下攪拌4h。將該混合物在減壓下濃縮，用EtOAc稀釋，並且用1N HCl和水洗滌。將有機相分離，經MgSO4乾燥，過濾並且在減壓下蒸發溶劑。將該化合物藉由在矽膠上快速層析(15-40μm，120g，庚烷/EtOAc 80/20)進行純化。將純的級分合併，並且蒸發至乾，以在從二異丙醚中結晶之後給出4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-側氧基-2-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙基)胺基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸三級丁酯4c(2.6g)。
化合物4的合成以及手性分離成鏡像異構物4A和4B：將4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-側氧基-2-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙基)胺基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸三級丁酯4c(2.4g，3.8mmol)於在二(24mL)中的4M HCl中的溶液在5℃下攪拌3h並且在室溫下攪拌3h。將該沈澱過濾出並乾燥，以提供呈HCl鹽的4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-側氧基-2-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙基)胺基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物4，2g，0.8當量HCl，0.07當量H2O)。在手性分離之前，將化合物4(2g，HCl鹽)藉由用1N NaOH處理化合物4(HCl鹽)於乙酸乙酯中的溶液並在減壓下蒸發有機層來中和。將該等鏡像異構物經由製備型手性SFC(固定相：Chiralcel® OD-H 5μm 250 x 30mm，流動相：50% CO2，50% iPrOH(+0.3% iPrNH2))分離並且經由製備型手性SFC(固定相：Cyano® 6μm 150 x 21.2mm，流動相：80% CO2，20% MeOH(+0.3% iPrNH2))進行進一步純化。將產物級分合並且在減壓下蒸發。將兩種鏡像異構物用EtOAc吸收並用1N HCl洗滌。將有機層分離，經MgSO4乾燥，過濾並且在減壓下蒸發溶劑。將第一洗提鏡像異構物從醚/二異丙醚中固化，以給出鏡像異構物4A(616mg)。將第二洗提鏡像異構物從醚/二異丙醚中固化，以給出鏡像異構物4B(715mg)。
還有可能從外消旋體的HCl鹽開始使用用於手性分離的相同條件來分離鏡像異構物。
化合物4： 1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 1.87(quin,J=6.9Hz,2 H)2.34(t,J=7.3Hz,2 H)3.07-3.28(m,2 H)3.62(s,3 H)3.85(t,J=6.5Hz,2 H)4.04(td,J=10.5,7.1Hz,1 H)4.52(td,J=10.3,6.5Hz,1 H)5.57(s,1 H)5.76(t,J=2.2Hz,1 H)5.90-6.00(m,2 H)7.01(dd,J=8.2,1.6Hz,1 H)7.33(d,J=8.2Hz,1 H)7.41-7.48(m,2 H)7.55(d,J=8.5Hz,2 H)8.03(s,1 H)
LC/MS(方法LC-B)：Rt 2.70min，MH+ 579
熔點：150℃
鏡像異構物4A： 1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 1.87(quin,J=6.7Hz,2 H)2.34(br t,J=7.3Hz,2 H)3.08-3.27(m,2 H)3.62(s,3 H)3.85(br t,J=6.3Hz,2 H)3.99-4.11(m,1 H)4.47-4.57(m,1 H)5.57(br s,1 H)5.76(s,1 H)5.95(br d,J=10.1Hz,2 H)6.45(br s,1 H)7.01(br d,J=7.6Hz,1 H)7.34(br d,J=7.9Hz,1 H)7.44(br d,J=8.5Hz,2 H)7.55(br d,J=8.2Hz,2 H)8.04(br s,1 H)12.12(br s,1 H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt 2.95min，MH+ 579
[α]D 20：-48.5°(c 0.27，DMF)
手性SFC(方法SFC-A)：Rt 1.13min，MH+ 579，手性純度100%。
鏡像異構物4B： 1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 1.87(br t,J=6.8Hz,2 H)2.34(br t,J=7.3Hz,2 H)3.09-3.27(m,2 H)3.62(s,3 H)3.85(br t,J=6.1Hz,2 H)3.99-4.10(m,1 H)4.46-4.59(m,1 H)5.57(s,1 H)5.76(br s,1 H)5.95(br d,J=10.1Hz,2 H)6.45(br s,1 H)7.01(br d,J=7.9Hz,1 H)7.34(br d,J=7.9Hz,1 H)7.44(br d,J=8.2Hz,2 H)7.55(br d,J=8.2Hz,2 H)8.04(br s,1 H)12.12(br s,1 H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt 2.94min，MH+ 579
[α]D 20：+42.9°(c 0.28，DMF)
手性SFC(方法SFC-A)：Rt 2.13min，MH+ 579，手性純度100%。
實例5：4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)-2-側氧基乙基)胺基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物5)的合成以及手性分離成鏡像異構物5A和5B。
中間體5a的合成：在-10℃下，將1-甲氧基-4-硝基-2-(三氟甲基)苯[CAS 654-76-2](24.5g，110.8mmol)和4-氯苯氧基乙腈[CAS 3598-13-8](20.4g，121.9mmol)於DMF(100mL)中的混合物經30min滴加至tBuOK(27.35g，243.7mmol)於DMF(100mL)中的攪拌 溶液中。在添加之後，將紫色溶液在-10℃下保持1h。添加500mL的冰水和500mL的6N HCl，將沈澱過濾出，用水洗滌並在減壓下乾燥，以提供40.4g的2-(5-甲氧基-2-硝基-4-(三氟甲基)苯基)乙腈5a(按原樣用於下一步驟中)。
中間體5b的合成：將2-(5-甲氧基-2-硝基-4-(三氟甲基)苯基)乙腈5a(26g，99.9mmol)於乙醇/水(9/1)(500mL)和AcOH(5.2mL)中的溶液在3.5巴的大氣壓下用10% Pd/C(15.3g)作為催化劑進行氫化持續1h。將該反應混合物通過矽藻土(celite)®墊過濾，並且將該濾餅用CH2Cl2和CH3OH的溶劑混合物洗滌。將濾液在減壓下濃縮。將該殘餘物藉由用二氧化矽60-200μm填充的玻璃過濾器使用庚烷/EtOAc 80/20作為洗提液來進行過濾。將含有所期望的化合物的級分合併，並且將該溶劑在減壓下濃縮，以給出5-甲氧基-6-(三氟甲基)-1H-吲哚5b(15.6g)。
中間體5c的合成：在0℃下，將BH3-吡啶(23.5mL，232.4mmol)滴加至5-甲氧基-6-(三氟甲基)-1H-吲哚5b(10g，46.5mmol)於EtOH(60mL)中的溶液中。緩慢添加6N HCl(140mL)，同時保持溫度低於10℃。將該混合物在0℃下攪拌2h。添加水(200mL)，並且將該混合物用濃縮的NaOH水溶液鹼化至pH 8-9(該反應溫度保持低於20℃)。將沈澱過濾出，用水洗滌(兩次)並且在減壓下與甲苯共蒸發，以給出5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉5c(9g)。
中間體5d的合成：將5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉5c(2g，9.21mmol)、2-(4氯苯基)乙酸[CAS 1878-66-6](1.73g，10.1mmol)、HATU(5.25g，13.8mmol)和二異丙基乙胺(4.6mL，27.6mmol)於DMF(40mL)中的混合物在室溫下攪拌12h。添加水並且將該沈澱過濾出。將殘餘物用EtOAc吸收。將有機溶液用10% K2CO3水溶液、鹽水洗滌，經MgSO4乾燥，過濾，並且在減壓下蒸發溶 劑。將殘餘物在矽膠上藉由層析法(15-40μm，80g，庚烷/EtOAc梯度90/10至60/40)進行純化。將純的級分合併，並且將溶劑在減壓下濃縮，以給出2-(4-氯苯基)-1-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮5d(3g)。
中間體5e的合成：在-78℃下，在N2流下，將1M於THF中的LiHMDS(17.3mL，17.3mmol)滴加至2-(4-氯苯基)-1-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮5d(3.2g，8.65mmol)於THF(45mL)中的混合物中。滴加TMSCl(1.32mL，10.4mmol)。將該混合物在-78℃下攪拌15min，並且滴加N-溴代琥珀醯亞胺(1.85g，10.4mmol)於THF(30mL)中的溶液。在-78℃下攪拌2h之後，將該反應用NH4Cl的飽和溶液淬滅。將該混合物用EtOAc進行萃取。將有機層分離，經MgSO4乾燥，過濾並且將該溶劑在減壓下蒸發，以給出2-溴-2-(4-氯苯基)-1-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮5e(3.1g)。將該化合物按原樣用於下一步驟中。
中間體5f的合成：將2-溴-2-(4-氯苯基)-1-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮5e(3.5g，7.8mmol)、4-(3-胺基-5-甲氧基苯氧基)丁酸三級丁酯1a(2.2g，7.8mmol)和二異丙基乙胺(1.6mL，9.4mmol)於CH3CN(80mL)中的混合物在70℃下攪拌4h。將該混合物在減壓下濃縮，用EtOAc稀釋並且用1N HCl和水洗滌。將有機相分離，經MgSO4乾燥，過濾並且在減壓下蒸發溶劑。將該殘餘物藉由在矽膠上快速層析(15-40μm，80g，庚烷/EtOAc 80/20)進行純化。將純的級分合併，並且蒸發至乾，以在從二異丙醚中結晶之後給出4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)-2-側氧基乙基)胺基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸三級丁酯5f(2.1g)。
化合物5的合成以及手性分離成鏡像異構物5A和5B：將4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)-吲 哚啉-1-基)-2-側氧基乙基)胺基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸三級丁酯5f(3.1g，4.77mmol)於在二(42.2mL)中的4M HCl中的溶液在5℃下攪拌3h並且在室溫下攪拌8h。將沈澱過濾出並乾燥，以給出呈HCl鹽的4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)-2-側氧基乙基)胺基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物5，2g)。將該等鏡像異構物經由製備型手性SFC(固定相：Chiralpak® IA 5μm 250 x 20mm，流動相：50% CO2，50% iPrOH(+0.3% iPrNH2+10% CH2Cl2))進行分離。將產物級分合並且在減壓下蒸發。將兩種鏡像異構物用EtOAc吸收並用1N HCl洗滌。將有機層分離，經MgSO4乾燥，過濾並且在減壓下蒸發溶劑。將第一洗提鏡像異構物(847mg)從石油醚/二異丙醚中固化，以給出鏡像異構物5A(772mg)。將第二洗提鏡像異構物(840mg)從醚/二異丙醚中固化，以給出鏡像異構物5B(724mg)。
化合物5： 1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 1.87(quin,J=6.9Hz,2 H)2.34(t,J=7.3Hz,2 H)3.14-3.35(m,2 H)3.61(s,3 H)3.80-3.89(m,5 H)3.94-4.04(m,1 H)4.51(td,J=10.2,6.3Hz,1 H)5.55(s,1 H)5.76(s,1 H)5.95(br d,J=11.7Hz,2 H)7.23(s,1 H)7.43(d,J=8.2Hz,2 H)7.55(d,J=8.2Hz,2 H)8.34(s,1 H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt 2.86min，MH+ 593
熔點：130℃
鏡像異構物5A： 1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 1.87(quin,J=6.9Hz,2 H)2.34(t,J=7.3Hz,2 H)3.12-3.31(m,2 H)3.62(s,3 H)3.81-3.89(m,5 H)3.94-4.05(m,1 H)4.45-4.56(m,1 H)5.55(br s,1 H)5.76(s,1 H)5.95(br d,J=11.0Hz,2 H)6.40(br s,1 H)7.23(s,1 H)7.44(d,J=8.2Hz,2 H)7.56(d,J=8.5Hz,2 H)8.34(s,1 H)12.14(br s,1 H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt 2.85min，MH+ 593
[α]D 20：-43.2°(c 0.25，DMF)
手性SFC(方法SFC-D)：Rt 2.16min，MH+ 593，手性純度100%。
鏡像異構物5B： 1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 1.87(quin,J=6.8Hz,2 H)2.34(t,J=7.3Hz,2 H)3.13-3.33(m,2 H)3.62(s,3 H)3.79-3.88(m,5 H)3.94-4.03(m,1 H)4.51(td,J=10.3,6.1Hz,1 H)5.54(br s,1 H)5.75(s,1 H)5.95(br d,J=11.3Hz,2 H)6.40(br s,1 H)7.23(s,1 H)7.43(d,J=8.2Hz,2 H)7.55(d,J=8.5Hz,2 H)8.34(s,1 H)12.14(br s,1 H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt 2.85min，MH+ 593
[α]D 20：+41.4°(c 0.28，DMF)
手性SFC(方法SFC-D)：Rt 3.75min，MH+ 593，手性純度99.37%。
實例6：4-(3-((1-(4-氯-2-甲氧基苯基)-2-側氧基-2-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙基)胺基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物6)的合成以及手性分離成鏡像異構物6A和6B。
中間體6a的合成：將6-(三氟甲基)吲哚啉[CAS 181513-29-1](2g，10.7mmol)、2-(4-氯-2-甲氧基苯基)乙酸[CAS 170737-95-8](2.36g，11.8mmol)、HATU(6.1g，16mmol)和二異丙基乙胺(5.3mL， 32mmol)於DMF(50mL)中的混合物在室溫下攪拌12h。添加水並且將該沈澱過濾出。將殘餘物用EtOAc吸收。將有機溶液用10% K2CO3水溶液、鹽水洗滌，經MgSO4乾燥，過濾，並且在減壓下蒸發溶劑。將殘餘物在矽膠上藉由層析法(15-40μm，80g，庚烷/EtOAc梯度90/10至60/40)進行純化。將純的級分合併，並且將溶劑在減壓下濃縮，以給出2-(4-氯-2-甲氧基苯基)-1-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮6a(3.9g)。
中間體6b的合成：在-78℃下，在N2流下，將1M於THF中的LiHMDS(13.5mL，13.5mmol)滴加至2-(4-氯-2-甲氧基苯基)-1-(6-(三氟甲基)-吲哚啉-1-基)乙酮6a(2.5g，6.76mmol)於THF(40mL)中的混合物中。將該混合物在-78℃下攪拌15min，並且滴加N-溴代琥珀醯亞胺(1.32g，7.44mmol)於THF(20mL)中的溶液。在-78℃下攪拌2h之後，將該反應用NH4Cl的飽和溶液淬滅。將該混合物用EtOAc進行萃取。將有機層分離，經MgSO4乾燥，過濾並且將該溶劑在減壓下蒸發，以給出2-溴-2-(4-氯-2-甲氧基苯基)-1-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮6b(3g)。將該化合物按原樣用於下一步驟中。
中間體6c的合成：將2-溴-2-(4-氯-2-甲氧基苯基)-1-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮6b(3g，6.69mmol)、4-(3-胺基-5-甲氧基苯氧基)丁酸三級丁酯1a(1.88g，6.69mmol)和二異丙基乙胺(1.4mL，8mmol)於CH3CN(100mL)中的混合物在70℃下攪拌6h。將該混合物在減壓下濃縮，用EtOAc稀釋並且用1N HCl和水洗滌。將有機相分離，經MgSO4乾燥，過濾並且在減壓下蒸發溶劑。將該化合物藉由在矽膠上快速層析(15-40μm，80g，庚烷/EtOAc 80/20)進行純化。將純的級分合併，並且蒸發至乾，以給出4-(3-((1-(4-氯-2-甲氧基苯基)-2-側氧基-2-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙基)胺基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸三級丁酯6c(1.6g)。
化合物6的合成以及手性分離成鏡像異構物6A和6B：將4-(3-((1-(4-氯-2-甲氧基苯基)-2-側氧基-2-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙基)胺基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸三級丁酯6c(1.53g，2.36mmol)於在二(20mL)中的4M HCl中的溶液在5℃下攪拌3h並且在室溫下攪拌8h。將該溶液在減壓下濃縮。將該殘餘物吸收在CH3CN/二異丙醚中。將該沈澱過濾出並乾燥，以提供呈HCl鹽的4-(3-((1-(4-氯-2-甲氧基苯基)-2-側氧基-2-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙基)胺基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物6)(1.35g，0.67當量HCl，0.28當量H2O)。將該等鏡像異構物經由製備型手性SFC(固定相：Chiralcel® OD-H 5μm 250 x 30mm，流動相：65% CO2，35% EtOH)進行分離。將產物級分合並且在減壓下蒸發。將第一洗提鏡像異構物經由反相層析法(固定相：YMC-actus Triart-C18 10μm 150 x 30mm，流動相：梯度從55%甲酸0.1%、45% CH3CN至0%甲酸0.1%、100% CH3CN)進行進一步純化。將純的級分合並且在減壓下蒸發。將該殘餘物(417mg)從石油醚/二異丙醚中固化，以給出鏡像異構物6A(370mg)。將第二洗提鏡像異構物經由反相層析法(固定相：YMC-actus Triart-C18 10μm 150 x 30mm，流動相：梯度從55%甲酸0.1%、45% CH3CN至0%甲酸0.1%、100% CH3CN)進行進一步純化。將純的級分合並且在減壓下蒸發。然後將該殘餘物(400mg)從石油醚/二異丙醚中固化，以給出鏡像異構物6B(363mg)。
化合物6： 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 1.87(br t,J=6.6Hz,2 H)2.33(br t,J=7.3Hz,2 H)3.18-3.32(m,2 H)3.61(s,3 H)3.80-3.87(m,2 H)3.90(s,3 H)3.96-4.07(m,1 H)4.31-4.45(m,1 H)5.61(s,1 H)5.76(s,1 H)5.87(br d,J=7.6Hz,2 H)7.02(br d,J=8.1Hz,1 H)7.14(s,1 H)7.32(d,J=8.1Hz,1 H)7.35-7.41(m,1 H)7.43-7.50(m,1 H)8.37(s,1 H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt 2.90min，MH+ 593
熔點：130℃
鏡像異構物6A： 1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 1.87(quin,J=6.9Hz,2 H)2.33(t,J=7.3Hz,2 H)3.24(br dd,J=18.6,11.7Hz,2 H)3.61(s,3 H)3.80-3.87(m,2 H)3.90(s,3 H)3.97-4.06(m,1 H)4.33-4.43(m,1 H)5.61(d,J=8.8Hz,1 H)5.76(s,1 H)5.87(br d,J=10.4Hz,2 H)6.43(d,J=8.5Hz,1 H)7.03(dd,J=8.2,1.9Hz,1 H)7.15(d,J=1.6Hz,1 H)7.32(d,J=8.2Hz,1 H)7.39(d,J=7.9Hz,1 H)7.46(d,J=7.9Hz,1 H)8.37(s,1 H)12.16(br s,1 H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt 2.99min，MH+ 593
[α]D 20：-28.6°(c 0.29，DMF)
手性SFC(方法SFC-E)：Rt 2.17min，MH+ 593，手性純度100%。
熔點：178℃
鏡像異構物6B： 1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 1.87(quin,J=6.9Hz,2 H)2.33(t,J=7.3Hz,2 H)3.24(br dd,J=18.8,11.5Hz,2 H)3.61(s,3 H)3.83(q,J=6.2Hz,2 H)3.90(s,3 H)3.96-4.08(m,1 H)4.32-4.43(m,1 H)5.61(d,J=8.5Hz,1 H)5.76(s,1 H)5.87(br d,J=10.1Hz,2 H)6.43(br d,J=8.5Hz,1 H)7.03(dd,J=8.2,1.6Hz,1 H)7.15(d,J=1.6Hz,1 H)7.32(d,J=8.2Hz,1 H)7.39(d,J=7.6Hz,1 H)7.46(d,J=7.9Hz,1 H)8.37(s,1 H)12.16(br s,1 H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt 3.00min，MH+ 593
[α]D 20：+32.1°(c 0.28，DMF)
手性SFC(方法SFC-E)：Rt 4.04min，MH+ 593，手性純度100%。
實例7：4-(3-((1-(4-氯-2-甲氧基苯基)-2-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)-2-側氧基乙基)胺基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物7)的合成以及手性分離成鏡像異構物7A和7B。
中間體7a的合成：將5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉5c(1.5g，6.9mmol)、2-(4-氯-2-甲氧基苯基)乙酸[CAS 170737-95-8](1.4g，6.9mmol)、HATU(3.94g，10.4mmol)和二異丙基乙胺(3.4mL，20.7mmol)於DMF(40mL)中的混合物在室溫下攪拌12h。添加冰/水並且將該沈澱過濾出。將該殘餘物用CH2Cl2吸收。將有機溶液用10% K2CO3水溶液、鹽水洗滌，經MgSO4乾燥，過濾，並且在減壓下蒸發溶劑。將該殘餘物從二異丙醚中結晶，以給出2-(4-氯-2-甲氧基-苯基)-1-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮7a(2.48g)。
中間體7b的合成：在-78℃下，在N2流下，將1M於THF中的LiHMDS(16.5mL，16.5mmol)滴加至2-(4-氯-2-甲氧基苯基)-1-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮7a(3.3g，8.25mmol)於THF(45mL)中的混合物中。滴加TMSCl(1.26mL，9.91mmol)。將該混合物在-78℃下攪拌15min，並且滴加N-溴代琥珀醯亞胺(1.76g，9.91mmol)於THF(30mL)中的溶液。在-78℃下攪拌2h之後，將該反應用NH4Cl的飽和溶液淬滅。將該混合物用EtOAc進行萃取。將有機層分離，經MgSO4乾燥，過濾並且將該溶劑在減壓下蒸發，以給出2-溴-2-(4-氯-2-甲氧基-苯基)-1-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮7b(3.5g)。將該化合物按原樣用於下一步驟 中。
中間體7c的合成：將2-溴-2-(4-氯-2-甲氧基苯基)-1-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮7b(3.5g，7.31mmol)、4-(3-胺基-5-甲氧基苯氧基)-丁酸三級丁酯1a(2g，7.31mmol)和二異丙基乙胺(1.5mL，8.8mmol)於CH3CN(80mL)中的混合物在70℃下攪拌4h。將該混合物在減壓下濃縮，用EtOAc稀釋並且用1N HCl和水洗滌。將有機相分離，經MgSO4乾燥，過濾並且在減壓下蒸發溶劑。將該化合物藉由在矽膠上快速層析(15-40μm，80g，庚烷/EtOAc 80/20)進行純化。將純的級分合併，並且蒸發至乾，以給出4-(3-((1-(4-氯-2-甲氧基苯基)-2-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)-2-側氧基乙基)胺基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸三級丁酯7c(2.2g)。
化合物7的合成以及手性分離成鏡像異構物7A和7B：將4-(3-((1-(4-氯-2-甲氧基苯基)-2-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)-2-側氧基乙基)胺基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸三級丁酯7c(2.1g，3.1mmol)於在二(27.4mL)中的4M HCl中的溶液在5℃下攪拌3h並且在室溫下攪拌8h。將該溶液在減壓下濃縮。將該殘餘物吸收在CH3CN/二異丙醚中。將該沈澱過濾出並乾燥，以提供呈HCl鹽的4-(3-((1-(4-氯-2-甲氧基苯基)-2-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)-2-側氧基乙基)胺基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物7)(1.5g，0.74當量HCl，0.29當量H2O)。將該等鏡像異構物經由製備型手性SFC(固定相：Chiralcel® OD-H 5μm 250 x 30mm，流動相：55% CO2，45% iPrOH)進行分離。將產物級分合並且在減壓下蒸發。將第一洗提鏡像異構物(671mg)從石油醚/二異丙醚中固化，以給出鏡像異構物7A(606mg)。將第二洗提鏡像異構物(647mg)從石油醚/二異丙醚中固化，以給出鏡像異構物6B(580mg)。
化合物7： 1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 1.87(quin,J=6.7Hz,2 H) 2.34(t,J=7.3Hz,2 H)3.17-3.30(m,2 H)3.61(s,3 H)3.79-3.87(m,5 H)3.90(s,3 H)3.93-4.02(m,1 H)4.29-4.40(m,1 H)5.59(s,1 H)5.75(s,1 H)5.87(br d,J=10.7Hz,2 H)7.02(dd,J=8.2,1.6Hz,1 H)7.14(d,J=1.3Hz,1 H)7.24(s,1 H)7.32(d,J=8.5Hz,1 H)8.32(s,1 H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt 2.89min，MH+ 623
熔點：160℃
鏡像異構物7A： 1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 1.87(br t,J=6.8Hz,2 H)2.34(br t,J=7.1Hz,2 H)3.18-3.28(m,2 H)3.61(s,3 H)3.79-3.87(m,5 H)3.91(s,3 H)3.94-4.05(m,1 H)4.31-4.42(m,1 H)5.59(br d,J=8.2Hz,1 H)5.76(br s,1 H)5.87(br d,J=10.4Hz,2 H)6.40(br d,J=8.5Hz,1 H)7.02(br d,J=7.9Hz,1 H)7.14(s,1 H)7.24(s,1 H)7.33(br d,J=8.2Hz,1 H)8.33(s,1 H)12.18(br s,1 H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt 2.87min，MH+ 623
[α]D 20：-23.9°(c 0.28，DMF)
手性SFC(方法SFC-C)：Rt 1.76min，MH+ 623，手性純度100%。
鏡像異構物7B： 1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 1.87(quin,J=6.5Hz,2 H)2.34(br t,J=7.1Hz,2 H)3.18-3.28(m,2 H)3.61(s,3 H)3.80-3.87(m,5 H)3.91(s,3 H)3.94-4.02(m,1 H)4.28-4.41(m,1 H)5.59(br d,J=8.2Hz,1 H)5.75(br s,1 H)5.87(br d,J=10.4Hz,2 H)6.40(br d,J=8.5Hz,1 H)7.02(br d,J=7.9Hz,1 H)7.14(s,1 H)7.24(s,1 H)7.33(br d,J=8.2Hz,1 H)8.33(s,1 H)12.17(br s,1 H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt 2.87min，MH+ 623
[α]D 20：+28.5°(c 0.26，DMF)
手性SFC(方法SFC-C)：Rt 3.52min，MH+ 623，手性純度100%。
實例8：4-(3-((1-(4-氯-2-甲氧基苯基)-2-側氧基-2-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙基)胺基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物8)的合成以及手性分離成鏡像異構物8A和8B。
中間體8a的合成：將6-(三氟甲氧基)吲哚啉[CAS 959235-95-1](2.5g，12.3mmol)、2-(4-氯-2-甲氧基苯基)乙酸[CAS 170737-95-8](2.47g，12.3mmol)、HATU(7g，18.5mmol)和二異丙基乙胺(6.1mL，36.9mmol)於DMF(40-mL)中的混合物在室溫下攪拌4h。添加水和EtOAc。將有機層分離，用水洗滌，經MgSO4乾燥，過濾並且在減壓下蒸發溶劑。將殘餘物在矽膠上藉由層析法(15-40μm，80g，庚烷/EtOAc 85/15)進行純化。將純的級分合併，並且將溶劑在減壓下濃縮，以在從CH3CN/庚烷中結晶之後給出2-(4-氯-2-甲氧基苯基)-1-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙酮8a(4.3g)。
中間體8b的合成：在-78℃下，在N2流下，將1M於THF中的LiHMDS(19.7mL，19.7mmol)滴加至2-(4-氯-2-甲氧基苯基)-1-(6-(三氟甲氧基)-吲哚啉-1-基)乙酮8a(3.8g，9.8mmol)於THF(50mL)中的混合物中。滴加TMSCl(1.5mL，11.8mmol)。將該混合物在-78℃下攪拌15min，並且滴加N-溴代琥珀醯亞胺(1.9g，10.8mmol)於THF(35mL)中的溶液。在-78℃下攪拌2h之後，將該反應用NH4Cl的飽和溶液淬滅。將該混合物用EtOAc進行萃取。將 有機層分離，經MgSO4乾燥，過濾並且將該溶劑在減壓下蒸發，以給出2-溴-2-(4-氯-2-甲氧基苯基)-1-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙酮8b(4.5g)。將該化合物按原樣用於下一步驟中。
中間體8c的合成：將2-溴-2-(4-氯-2-甲氧基苯基)-1-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙酮8b(4.5g，9.68mmol)、4-(3-胺基-5-甲氧基苯氧基)-丁酸三級丁酯1a(2.7g，9.68mmol)和二異丙基乙胺(2mL，11.6mmol)於CH3CN(100mL)中的混合物在70℃下攪拌4h。將該混合物在減壓下濃縮，用EtOAc稀釋並且用1N HCl和水洗滌。將有機相分離，經MgSO4乾燥，過濾並且在減壓下蒸發溶劑。將該殘餘物藉由在矽膠上快速層析(15-40μm，120g，庚烷/EtOAc 80/20)進行純化。將純的級分合併，並且蒸發至乾，以在從CH3CN中結晶之後給出4-(3-((1-(4-氯-2-甲氧基苯基)-2-側氧基-2-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙基)胺基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸三級丁酯8c(2.3g)。
化合物8的合成以及手性分離成鏡像異構物8A和8B：將4-(3-((1-(4-氯-2-甲氧基苯基)-2-側氧基-2-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙基)胺基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸三級丁酯8c(2.3g，3.46mmol)於在二(30mL)中的4M HCl中的溶液在5℃下攪拌3h並且在室溫下攪拌12h。將該沈澱過濾出，用二異丙醚洗滌並乾燥，以提供呈HCl鹽的4-(3-((1-(4-氯-2-甲氧基苯基)-2-側氧基-2-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙基)胺基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物8)(1.79g，0.86當量HCl，0.22當量H2O)。將該等鏡像異構物經由製備型手性SFC(固定相：Chiralcel® OD-H 5μm 250 x 30mm，流動相：65% CO2，35% iPrOH)進行分離。將產物級分合並且在減壓下蒸發。將第一洗提鏡像異構物(726mg)從石油醚/二異丙醚中固化，以給出鏡像異構物8A(612mg)。將第二洗提鏡像異構物(712mg)從石油醚/二異丙醚中固化，以給出鏡像異構物8B(643mg)。
化合物8： 1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 1.87(quin,J=6.9Hz,2 H)2.34(br t,J=7.3Hz,2 H)3.08-3.26(m,2 H)3.61(s,3 H)3.83(q,J=6.5Hz,2 H)3.90(s,3 H)3.98-4.09(m,1 H)4.31-4.42(m,1 H)5.60(s,1 H)5.76(s,1 H)5.87(br d,J=9.5Hz,2 H)6.98-7.05(m,2 H)7.14(d,J=1.9Hz,1 H)7.31(d,J=8.2Hz,1 H)7.34(d,J=8.2Hz,1 H)8.02(s,1 H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt 3.04min，MH+ 609
熔點：139℃
鏡像異構物8A： 1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 1.87(quin,J=6.9Hz,2 H)2.33(t,J=7.4Hz,2 H)3.09-3.25(m,2 H)3.61(s,3 H)3.78-3.87(m,2 H)3.90(s,3 H)3.98-4.07(m,1 H)4.32-4.42(m,1 H)5.59(d,J=8.5Hz,1 H)5.76(s,1 H)5.86(s,1 H)5.88(s,1 H)6.45(d,J=8.8Hz,1 H)6.97-7.06(m,2 H)7.14(d,J=1.3Hz,1 H)7.31(d,J=8.5Hz,1 H)7.34(d,J=8.2Hz,1 H)8.02(s,1 H)12.14(br s,1 H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt 3.03min，MH+ 609
[α]D 20：-39.3°(c 0.28，DMF)
手性SFC(方法SFC-F)：Rt 2.32min，MH+ 609，手性純度100%。
鏡像異構物8B： 1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 1.87(quin,J=6.8Hz,2 H)2.34(t,J=7.3Hz,2 H)3.09-3.25(m,2 H)3.61(s,3 H)3.79-3.88(m,2 H)3.90(s,3 H)4.02(td,J=10.2,6.9Hz,1 H)4.33-4.41(m,1 H)5.60(s,1 H)5.76(s,1 H)5.86(s,1 H)5.88(s,1 H)6.45(br s,1 H)6.99-7.05(m,2 H)7.14(d,J=1.6Hz,1 H)7.31(d,J=8.5Hz,1 H)7.34(d,J=8.2Hz,1 H)8.02(s,1 H)12.12(br s,1 H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt 3.03min，MH+ 609
[α]D 20：+34.5°(c 0.29，DMF)
手性SFC(方法SFC-F)：Rt 3.51min，MH+ 609，手性純度100%。
實例9：4-(3-((1-(4-氯-2-氟苯基)-2-側氧基-2-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙基)胺基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物9)的合成以及手性分離成鏡像異構物9A和9B。
中間體9a的合成：將2-(4-氯-2-氟苯基)乙酸[CAS 194240-75-0](2.52g，13.4mmol)、6-(三氟甲基)吲哚啉[CAS 181513-29-1](2.5g，13.4mmol)、羥基苯並三唑(2.7g，20.04mmol)、1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)-碳二亞胺(3.84g，20.04mmol)和三甲胺(3.71mL，26.7mmol)於CH2Cl2(30mL)中的混合物在室溫下攪拌12h。添加水並且將各層進行分離。將有機層用水洗滌，經MgSO4乾燥，過濾並且在減壓下蒸發溶劑，以在從CH3CN/二異丙醚中結晶之後給出2-(4-氯-2-氟苯基)-1-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮9a(3.9g)。將該化合物按原樣用於下一步驟中。
中間體9b的合成：在-78℃下，在N2流下，將1M於THF中的LiHMDS(13.98mL，13.98mmol)滴加至2-(4-氯-2-氟苯基)-1-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮9a(2.5g，6.99mmol)於THF(20mL)中的混合物中。將該混合物在-78℃下攪拌15min，並且滴加N-溴代琥珀醯亞胺(1.37g，7.69mmol)於THF(15mL)中的溶液。在-78℃下攪拌2h之後，將該反應用NH4Cl的飽和溶液淬滅。將該混合物用EtOAc進行萃取。將有機層分離，經MgSO4乾燥，過濾並且將該 溶劑在減壓下蒸發，以給出2-溴-2-(4-氯-2-氟苯基)-1-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮9b(2.8g)。將該化合物按原樣用於下一步驟中。
中間體9c的合成：將2-溴-2-(4-氯-2-氟苯基)-1-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮9b(2.8g，6.41mmol)、4-(3-胺基-5-甲氧基苯氧基)丁酸三級丁酯1a(1.8g，6.41mmol)和二異丙基乙胺(1.33mL，7.7mmol)於CH3CN(90mL)中的混合物在70℃下攪拌4h。將該混合物在減壓下濃縮，用EtOAc稀釋並且用1N HCl和水洗滌。將有機相分離，經MgSO4乾燥，過濾並且在減壓下蒸發溶劑。將該殘餘物藉由在矽膠上快速層析(15-40μm，80g，庚烷/EtOAc 80/20)進行純化。將純的級分合併，並且蒸發至乾，以在從CH3CN/二異丙醚中結晶之後給出4-(3-((1-(4-氯-2-氟苯基)-2-側氧基-2-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙基)胺基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸三級丁酯9c(1.75g)。
化合物9的合成以及手性分離成鏡像異構物9A和9B：將4-(3-((1-(4-氯-2-氟苯基)-2-側氧基-2-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙基)胺基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸三級丁酯9c(1.75g，2.75mmol)於在二(24.3mL)中的4M HCl中的溶液在5℃下攪拌3h並且在室溫下攪拌8h。將該混合物在減壓下濃縮。將該殘餘物從CH3CN/二異丙醚中結晶，以提供呈HCl鹽的4-(3-((1-(4-氯-2-氟苯基)-2-側氧基-2-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙基)胺基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物9)(1.4g，0.8當量HCl，0.78當量H2O)。將該等鏡像異構物經由製備型手性SFC(固定相：Chiralpak® AD-H 5μm 250 x 30mm，流動相：70% CO2，30% iPrOH)進行分離。將產物級分合並且在減壓下蒸發。將第一洗提鏡像異構物(618mg)從石油醚/二異丙醚中固化，以給出鏡像異構物9A(505mg)。將第二洗提鏡像異構物(548mg)從石油醚/二異丙醚中固化，以給出鏡像異構物9B(495mg)。
化合物9： 1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 1.87(quin,J=6.9Hz,2 H)2.34(t,J=7.3Hz,2 H)3.18-3.34(m,2 H)3.63(s,3 H)3.80-3.90(m,2 H)4.02-4.14(m,1 H)4.40-4.49(m,1 H)5.72(s,1 H)5.80(s,1 H)5.94(br d,J=10.1Hz,2 H)7.33(dd,J=8.5,1.6Hz,1 H)7.39-7.43(m,1 H)7.43-7.50(m,3 H)8.36(s,1 H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt 2.99min，MH+ 581
熔點：110℃
鏡像異構物9A： 1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 1.87(quin,J=6.7Hz,2 H)2.33(br t,J=7.1Hz,2 H)3.22-3.28(m,2 H)3.62(s,3 H)3.80-3.90(m,2 H)4.03-4.13(m,1 H)4.39-4.48(m,1 H)5.72(br d,J=8.8Hz,1 H)5.80(s,1 H)5.93(br d,J=10.7Hz,2 H)6.60(br d,J=8.8Hz,1 H)7.33(br d,J=7.9Hz,1 H)7.39-7.43(m,1 H)7.43-7.51(m,3 H)8.36(s,1 H)12.19(br s,1 H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt 2.98min，MH+ 581
[α]D 20：-30.0°(c 0.29，DMF)
手性SFC(方法SFC-G)：Rt 1.97min，MH+ 581，手性純度100%。
鏡像異構物9B： 1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 1.87(quin,J=6.9Hz,2 H)2.33(t,J=7.3Hz,2 H)3.21-3.28(m,2 H)3.63(s,3 H)3.80-3.91(m,2 H)4.02-4.12(m,1 H)4.40-4.49(m,1 H)5.72(d,J=9.1Hz,1 H)5.80(s,1 H)5.94(br d,J=11.0Hz,2 H)6.60(br d,J=8.8Hz,1 H)7.33(dd,J=8.2,1.6Hz,1 H)7.38-7.43(m,1 H)7.43-7.50(m,3 H)8.36(s,1 H)11.04-12.93(m,1 H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt 2.98min，MH+ 581
[α]D 20：+27.9°(c 0.28，DMF)
手性SFC(方法SFC-G)：Rt 3.19min，MH+ 581，手性純度 99.35%。
實例10：4-(3-((1-(4-氯-2-氟苯基)-2-側氧基-2-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙基)胺基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物10)的合成以及手性分離成鏡像異構物10A和10B。
中間體10a的合成：將HATU(7.02g，18.46mmol)添加至6-(三氟甲氧基)吲哚啉[CAS 959235-95-1](2.5g，12.3mmol)、2-(4-氯-2-氟苯基)乙酸[CAS 194240-75-0](2.32g，12.3mmol)和二異丙基乙胺(6.1mL，36.9mmol)於DMF(100mL)中的混合物中。將所得混合物在室溫下攪拌12h。將該混合物用水稀釋，將沈澱物過濾出並用水洗滌。將該殘餘物用EtOAc吸收，並且將有機溶液用10% K2CO3水溶液、鹽水洗滌，經MgSO4乾燥，過濾，並且在減壓下蒸發溶劑。將該殘餘物產品從二異丙醚中結晶以給出2-(4-氯-2-氟苯基)-1-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙酮10a(4g)。
中間體10b的合成：在-78℃下，在N2流下，將1M於THF中的LiHMDS(21.4mL，21.4mmol)滴加至2-(4-氯-2-氟苯基)-1-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙酮10a(4g，10.7mmol)於THF(60mL)中的混合物中。將該混合物在-78℃下攪拌15min，並且滴加N-溴代琥珀醯亞胺(2.1g，11.8mmol)於THF(40mL)中的溶液。在-78℃下攪拌2h之後，將該反應用NH4Cl的飽和溶液淬滅。將該混合物 用EtOAc進行萃取。將有機層分離，經MgSO4乾燥，過濾並且將該溶劑在減壓下蒸發，以給出2-溴-2-(4-氯-2-氟苯基)-1-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙酮10b(4.8g)。將該化合物按原樣用於下一步驟中。
中間體10c的合成：將2-溴-2-(4-氯-2-氟苯基)-1-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙酮10b(3g，6.63mmol)、4-(3-胺基-5-甲氧基苯氧基)丁酸三級丁酯1a(1.86g，6.63mmol)和二異丙基乙胺(1.37mL，7.95mmol)於CH3CN(60mL)中的混合物在70℃下攪拌4h。將該混合物在減壓下濃縮，用EtOAc稀釋並且用1N HCl 1N和水洗滌。將有機相分離，經MgSO4乾燥，過濾並且在減壓下蒸發溶劑。將該殘餘物藉由在矽膠上快速層析(15-40μm，120g，庚烷/EtOAc 80/20)進行純化。將純的級分合併，並且蒸發至乾，以給出4-(3-((1-(4-氯-2-氟苯基)-2-側氧基-2-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙基)胺基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸三級丁酯10c(835mg)。
化合物10的合成以及手性分離成鏡像異構物10A和10B：將4-(3-((1-(4-氯-2-氟苯基)-2-側氧基-2-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙基)胺基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸三級丁酯10c(835mg，1.28mmol)於在二(11.3mL)中的4M HCl中的溶液在5℃下攪拌3h並且在室溫下攪拌8h。將該溶液在減壓下濃縮。將該殘餘物從二異丙醚中固化，以提供4-(3-((1-(4-氯-2-氟苯基)-2-側氧基-2-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙基)胺基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物10)(620mg)。將該等鏡像異構物經由製備型手性SFC(固定相：Chiralpak® IC 5μm 250 x 30mm，流動相：70% CO2，30% iPrOH(+0.3% iPrNH2))進行分離。將產物級分合並且在減壓下蒸發。將第一洗提鏡像異構物(249mg)用EtOAc吸收並且用1N HCl洗滌。將有機層分離，經MgSO4乾燥，過濾且在減壓下濃縮。將該殘餘物從石油醚/二異丙醚中固化，以給出鏡像異構物10A(183mg)。將第二洗提鏡像異構物(274mg)用EtOAc 吸收並且用1N HCl洗滌。將有機層分離，經MgSO4乾燥，過濾且在減壓下濃縮。將該殘餘物從石油醚/二異丙醚中固化，以給出鏡像異構物10B(186mg)。
化合物10： 1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 1.87(quin,J=6.8Hz,2 H)2.33(br t,J=7.3Hz,2 H)3.09-3.24(m,2 H)3.62(s,3 H)3.81-3.89(m,2 H)4.05-4.13(m,1 H)4.38-4.47(m,1 H)5.70(br d,J=9.1Hz,1 H)5.79(s,1 H)5.93(br d,J=9.8Hz,2 H)6.62(br d,J=8.8Hz,1 H)7.03(br d,J=8.2Hz,1 H)7.31-7.37(m,2 H)7.41-7.50(m,2 H)8.02(s,1 H)12.15(br s,1 H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt 3.07min，MH+ 597
鏡像異構物10A： 1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 1.87(quin,J=6.9Hz,2 H)2.34(t,J=7.3Hz,2 H)3.12-3.22(m,2 H)3.62(s,3 H)3.79-3.90(m,2 H)4.04-4.13(m,1 H)4.38-4.48(m,1 H)5.70(d,J=8.8Hz,1 H)5.79(s,1 H)5.93(br d,J=9.8Hz,2 H)6.62(d,J=8.8Hz,1 H)7.03(br d,J=9.5Hz,1 H)7.30-7.38(m,2 H)7.41-7.51(m,2 H)8.02(s,1 H)12.10(br s,1 H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt 3.04min，MH+ 597
[α]D 20：+23.1°(c 0.26，DMF)
手性SFC(方法SFC-H)：Rt 3.22min，MH+ 597，手性純度100%。
鏡像異構物10B： 1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 1.87(br t,J=6.8Hz,2 H)2.34(br t,J=7.3Hz,2 H)3.12-3.25(m,2 H)3.63(s,3 H)3.80-3.90(m,2 H)4.05-4.14(m,1 H)4.38-4.49(m,1 H)5.71(br d,J=9.1Hz,1 H)5.80(br s,1 H)5.94(br d,J=9.5Hz,2 H)6.62(br d,J=8.8Hz,1 H)7.03(br d,J=7.9Hz,1 H)7.30-7.38(m,2 H)7.41-7.52(m,2 H)8.02(br s,1 H)12.12(br s,1 H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt 3.04min，MH+ 597
[α]D 20：-23.0°(c 0.3，DMF)
手性SFC(方法SFC-H)：Rt 4.05min，MH+ 597，手性純度100%。
實例11：4-(3-((1-(4-氯-2-氟苯基)-2-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)-2-側氧基乙基)胺基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物11)的合成以及手性分離成鏡像異構物11A和11B。
中間體11a的合成：將HATU(5.25g，13.81mmol)添加至5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉5c(2g，9.21mmol)、2-(4-氯-2-氟苯基)乙酸[CAS 194240-75-0](1.74g，9.21mmol)和二異丙基乙胺(4.57mL，27.6mmol)於DMF(50mL)中的混合物中。將所得混合物在室溫下攪拌12h。將該混合物用冰/水稀釋。將沈澱過濾出並且用水洗滌。將殘餘物用CH2Cl2吸收並且將有機溶液用10% K2CO3水溶液、鹽水洗滌，經MgSO4乾燥，過濾，並且在減壓下蒸發溶劑。將該殘餘物從二異丙醚中結晶，以給出2-(4-氯-2-氟苯基)-1-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮11a(3.4g)。
中間體11b的合成：在-78℃下，在N2流下，將1M於THF中的LiHMDS(17.5mL，17.5mmol)滴加至2-(4-氯-2-氟苯基)-1-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮11a(3.4g，8.77mmol)於THF(45mL) 中的混合物中。滴加TMSCl(1.34mL，10.5mmol)。將該混合物在-78℃下攪拌15min，並且滴加N-溴代琥珀醯亞胺(1.87g，10.52mmol)於THF(30mL)中的溶液。在-78℃下攪拌2h之後，將該反應用NH4Cl的飽和溶液淬滅。將該混合物用EtOAc進行萃取。將有機層分離，經MgSO4乾燥，過濾並且將該溶劑在減壓下蒸發，以給出2-溴-2-(4-氯-2-氟苯基)-1-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮11b(4g)。將該化合物按原樣用於下一步驟中。
中間體11c的合成：將2-溴-2-(4-氯-2-氟苯基)-1-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮11b(4g，8.57mmol)、4-(3-胺基-5-甲氧基苯氧基)丁酸三級丁酯1a(2.4g，8.57mmol)和二異丙基乙胺(1.77mL，10.3mmol)於CH3CN(100mL)中的混合物在70℃下攪拌4h。將該混合物在減壓下濃縮，用EtOAc稀釋並且用1N HCl和水洗滌。將有機相分離，經MgSO4乾燥，過濾並且在減壓下蒸發溶劑。將該化合物藉由在矽膠上快速層析(15-40μm，80g，庚烷/EtOAc 80/20)進行純化。將該化合物經由手性SFC(固定相：2-乙基吡啶5μm 150 x 30mm，流動相：85% CO2，15% MeOH)進行進一步純化。將純的級分合併，並且蒸發至乾，以給出4-(3-((1-(4-氯-2-氟苯基)-2-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)-2-側氧基乙基)胺基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸三級丁酯11c(2.6g)。
化合物11的合成以及手性分離成鏡像異構物11A和11B：將4-(3-((1-(4-氯-2-氟苯基)-2-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)-2-側氧基乙基)胺基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸三級丁酯11c(2.2g，3.3mmol)於在二(29.2mL)中的4M HCl中的溶液在5℃下攪拌3h並且在室溫下攪拌8h。將該溶液在減壓下濃縮。將該殘餘物從CH3CN/二異丙醚中結晶，以提供呈HCl鹽的4-(3-((1-(4-氯-2-氟苯基)-2-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)-2-側氧基乙基)胺基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物11)(800mg，0.85當量HCl，0.36當量H2O)。將此級分與另一批(總量：1.8 g)合併用於手性分離。將該等鏡像異構物經由製備型手性SFC(固定相：Chiralcel® OD-H 5μm 250 x 30mm，流動相：55% CO2，45% iPrOH)進行分離。將產物級分合並且在減壓下蒸發。將第一洗提鏡像異構物(788mg)從石油醚/二異丙醚中固化，以給出鏡像異構物11A(693mg)。將第二洗提鏡像異構物(771mg)從石油醚/二異丙醚中固化，以給出鏡像異構物11B(695mg)。
化合物11： 1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 1.87(quin,J=6.8Hz,2 H)2.34(br t,J=7.4Hz,2 H)3.18-3.31(m,2 H)3.63(s,3 H)3.85(s,5 H)3.98-4.09(m,1 H)4.37-4.48(m,1 H)5.69(s,1 H)5.79(s,1 H)5.93(br d,J=11.0Hz,2 H)7.26(s,1 H)7.32(br d,J=8.5Hz,1 H)7.44-7.52(m,2 H)8.32(s,1 H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt 2.90min，MH+ 611
熔點：121℃
鏡像異構物11A： 1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 1.88(quin,J=6.8Hz,2 H)2.34(t,J=7.3Hz,2 H)3.18-3.29(m,2 H)3.63(s,3 H)3.86(s,5 H)3.99-4.07(m,1 H)4.38-4.47(m,1 H)5.69(br s,1 H)5.79(s,1 H)5.93(br d,J=10.7Hz,2 H)6.55(br s,1 H)7.25(s,1 H)7.32(dd,J=8.5,1.3Hz,1 H)7.43-7.51(m,2 H)8.33(s,1 H)12.13(br s,1 H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt 2.90min，MH+ 611
[α]D 20：-23.9°(c 0.26，DMF)
手性SFC(方法SFC-C)：Rt 1.70min，MH+ 611，手性純度100%。
鏡像異構物11B： 1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 1.88(quin,J=6.8Hz,2 H)2.34(br t,J=7.3Hz,2 H)3.18-3.31(m,2 H)3.63(s,3 H)3.85(s,5 H)3.99-4.07(m,1 H)4.37-4.47(m,1 H)5.69(br s,1 H)5.79(s,1 H)5.93(br d,J=11.0Hz,2 H)6.56(br s,1 H)7.25(s,1 H)7.32(br d,J=8.2Hz,1 H)7.43-7.50(m,2 H)8.33(s,1 H)12.13(br s,1 H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt 2.89min，MH+ 611
[α]D 20：+24.0°(c 0.25，DMF)
手性SFC(方法SFC-C)：Rt 2.96min，MH+ 611，手性純度100%。
實例12：4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-(5-甲氧基-6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)-2-側氧基乙基)胺基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物12)的合成以及手性分離成鏡像異構物12A和12B。
中間體12a的合成：在5℃下，將4-甲氧基-3-(三氟甲氧基)苯胺[CAS 647855-21-8](3.1g，15.0mmol)於甲苯(50mL)中的溶液用N-溴代琥珀醯亞胺(2.8g，15.7mmol)處理並且將所得混合物在5℃-10℃下攪拌2h。將該混合物用水淬滅並且用EtOAc萃取。將合併的萃取物經MgSO4乾燥，過濾並且在減壓下蒸發。藉由在矽膠上快速層析(15-40μm，24g，庚烷/EtOAc梯度95/5至90/10)進行純化。將純的級分合併，並蒸發至乾以給出2-溴-4-甲氧基-5-(三氟甲氧基)苯胺12a(2.5g)。
中間體12b的合成：將2-溴-4-甲氧基-5-(三氟甲氧基)苯胺12a(2.72g，9.51mmol)於DMF(30mL)中的溶液用N2脫氣15min。添加二氯雙(三苯基膦)鈀(667mg，0.95mmol)、碘化銅(I)(362mg，1.90mmol)、三乙胺(3.96mL，28.5mmol)和三甲基甲矽烷基乙炔(3.95mL，28.53mmol)。將該反應混合物在70℃下在N2流下加熱12h。在冷卻至室溫之後，將該反應混合物用H2O稀釋並用EtOAc萃取。將有機相合併，經MgSO4乾燥，過濾且在減壓下濃縮。將該殘餘物藉由在矽膠上快速層析(15-40μm，80g，庚烷/EtOAc 85/15)進行純化。將純的級分合併，並且蒸發至乾以給出4-甲氧基-5-(三氟甲氧基)-2-((三甲基甲矽烷基)乙炔基)苯胺12b(1.4g)。
中間體12c的合成：在N2流下，向4-甲氧基-5-(三氟甲氧基)-2-((三甲基甲矽烷基)乙炔基)苯胺12b(1.2g，3.96mmol)於NMP(11mL)中的溶液裡一次性添加tBuOK(1.33g，11.9mmol)。將該反應混合物在80℃下加熱4h，在冷卻至室溫之後，將該混合物傾倒入冰/水中並且用3N HCl酸化直至pH 4-5。將反應混合物用EtOAc萃取。合併有機相，用H2O洗滌，經MgSO4乾燥，過濾並在減壓下濃縮。將該殘餘物藉由在矽膠上快速層析(15-40μm，40g，庚烷/EtOAc 85/15)進行純化。將純的級分合併，並且蒸發至乾以給出5-甲氧基-6-(三氟甲氧基)-1H-吲哚12c(490mg)。
中間體12d的合成：在0℃下，將BH3-吡啶(10.5mL，103.8mmol)滴加至5-甲氧基-6-(三氟甲氧基)-1H-吲哚12c(8g，34.6mmol)於EtOH(45mL)中的溶液中。緩慢添加6N HCl(6mL)，同時保持溫度低於10℃。將該混合物在0℃下攪拌3h。添加水(210mL)，並且將該混合物用NaOH在水中的濃溶液鹼化直至pH 8-9(在添加 期間，該反應溫度保持低於20℃)。將該混合物用EtOAc進行萃取。將有機層用水洗滌，經MgSO4乾燥，過濾並且在減壓下蒸發溶劑。添加甲苯並且將該溶液在減壓下濃縮，以給出7.5g的5-甲氧基-6-(三氟甲氧基)吲哚啉12d。
中間體12e的合成：將5-甲氧基-6-(三氟甲氧基)吲哚啉12d(1g，4.29mmol)、2-(4-氯苯基)乙酸[CAS 1878-66-6](805mg，4.72mmol)、HATU(2.44g，6.43mmol)和二異丙基乙胺(2.13mL，12.87mmol)於DMF(20mL)中的混合物在室溫下攪拌12h。添加冰/水並且將該沈澱過濾出。將該殘餘物用CH2Cl2吸收。將有機溶液分離，經MgSO4乾燥，過濾並且將該溶劑在減壓下蒸發，以給出2-(4-氯苯基)-1-(5-甲氧基-6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙酮12e(1.68g)。
中間體12f的合成：在-78℃下，在N2流下，將1M於THF中的LiHMDS(8.3mL，8.3mmol)滴加至2-(4-氯苯基)-1-(5-甲氧基-6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙酮12e(1.6g，4.15mmol)於THF(25mL)中的混合物中。滴加TMSCl(0.63mL，4.98mmol)。將該混合物在-78℃下攪拌15min，並且滴加N-溴代琥珀醯亞胺(0.89g，4.98mmol)於THF(15mL)中的溶液。在-78℃下攪拌2h之後，將該反應用NH4Cl的飽和溶液淬滅。將該混合物用EtOAc進行萃取。將有機層分離，經MgSO4乾燥，過濾並且將該溶劑在減壓下蒸發，以給出2-溴-2-(4-氯苯基)-1-(5-甲氧基-6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙酮12f(2.3g，純度(藉由LC)：50%)。將該化合物按原樣用於下一步驟中。
中間體12g的合成：將2-溴-2-(4-氯苯基)-1-(5-甲氧基-6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙酮12f(2.3g，2.48mmol，純度(藉由LC)：50%)、 4-(3-胺基-5-甲氧基苯氧基)丁酸三級丁酯1a(0.696g，2.48mmol)和二異丙基乙胺(0.512mL，2.97mmol)於CH3CN(25mL)中的混合物在70℃下攪拌4h。將該混合物在減壓下濃縮，用EtOAc稀釋並且用1N HCl和水洗滌。將有機相分離，經MgSO4乾燥，過濾並且在減壓下蒸發溶劑。將該殘餘物藉由在矽膠上快速層析(15-40μm，80g，庚烷/EtOAc 80/20)進行純化。將包含產物的級分合併，並且在減壓下蒸發，並且將該殘餘物藉由在矽膠上快速層析(15-40μm，40g，CH2Cl2)再次純化。將純的級分合併，並且蒸發至乾以給出4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-(5-甲氧基-6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)-2-側氧基乙基)胺基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸三級丁酯12g(920mg)。
化合物12的合成以及手性分離成鏡像異構物12A和12B：將4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-(5-甲氧基-6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)-2-側氧基乙基)胺基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸三級丁酯12g(920mg，1.38mmol)於在二(15mL)中的4M HCl中的溶液在5℃下攪拌3h並且在室溫下攪拌12h。將該沈澱過濾出，用二異丙醚洗滌並乾燥，以提供4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-(5-甲氧基-6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)-2-側氧基乙基)胺基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物12，802mg，0.2當量H2O)。將該等鏡像異構物經由製備型手性SFC(固定相：Chiralpak® AD-H 5μm 250 x 20mm，流動相：50% CO2，50% iPrOH)進行分離。將產物級分合並且在減壓下蒸發。將第一洗提鏡像異構物(260mg)從庚烷/二異丙醚中固化，以給出鏡像異構物12A(165mg)。將第二洗提鏡像異構物(241mg)從庚烷/二異丙醚中固化，以給出鏡像異構物12B(184mg)。
化合物12： 1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 1.86(quin,J=6.9Hz,2 H)2.33(t,J=7.3Hz,2 H)3.08-3.28(m,2 H)3.61(s,3 H)3.81(s,3 H) 3.84(br t,J=6.5Hz,2 H)3.97-4.06(m,1 H)4.48(td,J=10.4,6.3Hz,1 H)5.53(s,1 H)5.75(s,1 H)5.94(br d,J=10.1Hz,2 H)7.20(s,1 H)7.43(d,J=8.5Hz,2 H)7.54(d,J=8.5Hz,2 H)8.06(s,1 H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt 2.89min，MH+ 609
鏡像異構物12A： 1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 1.86(quin,J=6.8Hz,2 H)2.33(t,J=7.3Hz,2 H)3.09-3.26(m,2 H)3.61(s,3 H)3.81(s,3 H)3.84(br t,J=6.5Hz,2 H)4.02(td,J=10.3,7.1Hz,1 H)4.48(td,J=10.4,6.3Hz,1 H)5.53(d,J=8.5Hz,1 H)5.75(s,1 H)5.93(s,1 H)5.95(s,1 H)6.43(d,J=8.8Hz,1 H)7.20(s,1 H)7.43(d,J=8.2Hz,2 H)7.55(d,J=8.5Hz,2 H)8.06(s,1 H)12.12(br s,1 H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt 2.92min，MH+ 609
[α]D 20：-44.2°(c 0.197，DMF)
手性SFC(方法SFC-I)：Rt 0.99min，MH+ 609，手性純度100%。
鏡像異構物12B： 1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 1.86(quin,J=6.9Hz,2 H)2.33(t,J=7.3Hz,2 H)3.09-3.27(m,2 H)3.61(s,3 H)3.81(s,3 H)3.84(br t,J=6.5Hz,2 H)3.98-4.06(m,1 H)4.48(td,J=10.5,6.1Hz,1 H)5.53(d,J=8.8Hz,1 H)5.75(s,1 H)5.93(s,1 H)5.95(s,1 H)6.43(d,J=8.8Hz,1 H)7.20(s,1 H)7.43(d,J=8.5Hz,2 H)7.54(d,J=8.5Hz,2 H)8.06(s,1 H)12.16(br s,1 H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt 2.91min，MH+ 609
[α]D 20：+40.7°(c 0.189，DMF)
手性SFC(方法SFC-I)：Rt 1.45min，MH+ 609，手性純度98.53%。
本發明的化合物的抗病毒活性
DENV-2抗病毒測定
本發明的所有化合物的抗病毒活性針對DENV-2 16681株進行測試，該菌株用增強型綠色螢光蛋白標記(eGPF)。培養基由補充有2%熱滅活的胎牛血清、0.04%慶大黴素(50mg/mL)以及2mM L-穀胺醯胺的最低必需培養基組成。將獲自ECACC的維洛(Vero)細胞懸浮於培養基中，並且將25μL添加至384孔板(2500個細胞/孔)，該等板已經含有抗病毒化合物。通常，該等板包含測試化合物的9個稀釋步驟的5倍連續稀釋液，在於100% DMSO(200nL)中的最終濃度的200倍下。此外，一式四份地測試每一化合物濃度(對於多數活性化合物而言，最終濃度範圍：25μM-0.000064μM或2.5μM-0.0000064μM)。最後，每個板包含被指定為病毒對照(在不存在化合物的情況下包含細胞和病毒)、細胞對照(在不存在病毒和化合物的情況下包含細胞)和培養基對照(在不存在細胞、病毒和化合物的情況下包含培養基)的孔。向被指定為培養基對照的該等孔添加25μL的培養基而不是維洛(Vero)細胞。一旦細胞被添加到該等板，就將該等板在室溫下培養30分鐘以便允許該等細胞在該等孔內均勻地分佈。接著，將該等板在完全潤濕的培養箱(37℃，5% CO2)中培養直到第二天。然後，以0.5的感染複數(MOI)添加用eGFP標記的DENV-2株16681。因此，將15μL的病毒懸浮液添加至所有包含測試化合物的孔中並且添加至被指定為病毒對照的孔中。並行地，將15μL的培養基添加至培養基對照和細胞對照。接著，將該等板在完全潤濕的培養箱(37℃，5% CO2)中培養3天。在讀出當天，使用自動化螢光顯微鏡在488nm(藍色雷射)下測量eGFP螢光。使用內部LIMS系統，計算每種化合物的抑制劑量反應曲線並且測定半最大有效濃度(EC50)。因此，使用以下公式來計算每一測試濃度的抑制百分比(I)：I=100*(ST-SCC)/(SVC-SCC)；ST、SCC和SVC分別是測試化合物孔、細胞對照孔和病毒對照孔中的eGFP信號的量。EC50表示如藉由相較於病毒對照的eGFP螢光強度的50%降低所測 量，病毒複製被抑制50%的化合物的濃度。使用線性內插法計算EC50(表1)。
並行地，在相同板上評定該等化合物的毒性。一旦進行eGFP信號的讀出，就將40μL的ATPlite(細胞存活力染色劑)添加至384孔板的所有孔。ATP存在於所有代謝活性細胞中，並且當細胞經歷壞死或凋亡時，濃度下降非常迅速。ATPLite測定系統係基於藉由ATP與添加的螢光素酶和螢蟲素反應引起的光的產生。將該等板在室溫下培養10分鐘。接著，在ViewLux上測量該等板。還測定了半最大細胞毒性濃度(CC50)，其被定義為使發光信號相較於細胞對照孔的發光信號降低50%所需的濃度。最後，測定該等化合物的選擇性指數(SI)，該指數如下計算：SI=CC50/EC50。
N=對該等化合物進行測試的獨立實驗的數目。
四價逆轉錄酶定量-PCR(RT-qPCR)測定
在RT-qPCR測定中測試本發明的化合物針對DENV-1株TC974#666(NCPV)、DENV-2株16681、DENV-3株H87 (NCPV)以及DENV-4株H241(NCPV)的抗病毒活性。因此，在存在或不存在測試化合物的情況下用DENV-1抑或DENV-2抑或DENV-3抑或DENV-4感染維洛(Vero)細胞。在感染後第3天，將細胞溶解並且細胞溶解產物用於製備病毒靶標(DENV的3’UTR；表2)和細胞參考基因(β-肌動蛋白，表2)兩者的cDNA。隨後，在Lightcycler480儀上進行雙重即時PCR。所生成的Cp值與該等靶標的RNA表現的量成反比。藉由測試化合物抑制DENV複製導致3’UTR基因的Cp的移位。另一方面，如果測試化合物對該等細胞來說係具有毒性的，那麼將觀察到對β-肌動蛋白表現的類似作用。對比△△Cp方法用於計算EC50，該方法係基於用細胞持家基因(β-肌動蛋白)標準化的靶基因(3’UTR)的相對基因表現。此外，CC50值係基於針對持家基因β-肌動蛋白獲取的Cp值來測定的。
a報導染料(FAM，HEX)和淬滅劑(ZEN和IABkFQ)元素以粗體和斜體指示。
b該等引物和探針的核苷酸序列選自登革熱病毒基因組的3’UTR區中的保守區，其係基於保藏在Genbank的四種登革熱血清型的300個核苷酸序列的比對(宮(Gong)等人，2013，分子生物學方法(Methods Mol Biol)，第16章)。
培養基由補充有2%熱滅活的胎牛血清、0.04%慶大黴素(50mg/mL)以及2mM L-穀胺醯胺的最低必需培養基組成。將獲自ECACC的維洛(Vero)細胞懸浮於培養基中，並且將75μL/孔添加在96孔板(10000個細胞/孔)中，該等板已經包含抗病毒化合物。通常，該等板包含測試化合物的9個稀釋步驟的5倍連續稀釋液，在於100% DMSO(500nL；對於大多數活性化合物而言，最終濃度範圍：25μM-0.000064μM或2.5μM-0.0000064μM)中的最終濃度的200倍下。此外，每個板包含被指定為病毒對照(在不存在化合物的情況下包含細胞和病毒)和細胞對照(在不存在病毒和化合物的情況下包含細胞)的孔。一旦將該等細胞添加在該等板中，就將該等板在完全潤濕的培養箱(37℃，5% CO2)中培養直到第二天。稀釋登革熱病毒血清型1、-2、-3和-4，以便在測定中獲得約22-24的Cp。因此，將25μL的病毒懸浮液添加至所有包含測試化合物的孔中並且添加至被指定為病毒對照的孔中。並行地，將25μL的培養基添加至細胞對照。接著，將該等板在完全潤濕的培養箱(37℃，5% CO2)中培養3天。在3天之後，將上清液從該等孔中除去並且將該等細胞用冰冷PBS(約100μL)洗滌兩次。將該等96-孔板內的細胞沈澱儲存在-80℃下持續至少1天。接著，根據製造商的指導(生命技術公司(Life Technologies))使用Cells-to-CTTM溶解套組(kit)提取RNA。該等細胞溶解產物可以儲存在-80℃下或立即用於逆轉錄步驟中。
在逆轉錄步驟的準備中，製備混合物A(表3A)並且將7.57μL/孔分配在96孔板中。在添加5μL的細胞溶解產物之後，進行在75℃下的五分鐘變性步驟(表3B)。之後，添加7.43μL的混合物B(表3C)並且起始逆轉錄步驟(表3D)以產生cDNA。
最後，製備RT-qPCR混合物，混合物C(表4A)，並且將該混合物(22.02μL/孔)分配在96孔LightCycler qPCR板中，向該等板添加3μL的cDNA，並且根據表4B中的條件在LightCycler 480上進行qPCR。
使用LightCycler軟體和內部LIMS系統，計算每種化合物的劑量反應曲線，並且測定半最大有效濃度(EC50)和半最大細胞毒性濃度(CC50)(表5-8)。
N=對該等化合物進行測試的獨立實驗的數目。
N=對該等化合物進行測試的獨立實驗的數目。
N=對該等化合物進行測試的獨立實驗的數目。
N=對該等化合物進行測試的獨立實驗的數目。
先前技術實例
揭露於WO-2013/045516中的化合物(56)和(170)作為本發明的化合物已經在類似的DENV-2抗病毒測定中被檢測並且以下列出了其經報導的活性。
實驗部分中所使用的縮寫
<110> 健生醫藥公司 天主教魯汶大學
<120> 作為登革熱病毒複製抑制劑的經取代的吲哚啉衍生物
<130> TIP 359 PCT
<150> EP16163488.6
<151> 2016-04-01
<160> 6
<170> BiSSAP 1.2
<210> 1
<211> 19
<212> DNA
<213> 登革熱病毒
<220>
<221> 來源
<222> 1..19
<223> /生物體="登革熱病毒" /分子類型="未指定DNA"
<400> 1
<210> 2
<211> 21
<212> DNA
<213> 登革熱病毒
<220>
<221> 來源
<222> 1..21
<223> /生物體="登革熱病毒"/分子類型="未指定DNA"
<400> 2
<210> 3
<211> 28
<212> DNA
<213> 登革熱病毒
<220>
<221> 來源
<222> 1..28
<223> /生物體="登革熱病毒"/分子類型="未指定DNA"
<400> 3
<210> 4
<211> 18
<212> DNA
<213> 登革熱病毒
<220>
<221> 來源
<222> 1..18
<223> /生物體="登革熱病毒"/分子類型="未指定DNA"
<400> 4
<210> 5
<211> 21
<212> DNA
<213> 登革熱病毒
<220>
<221> 來源
<222> 1..21
<223> /生物體="登革熱病毒"/分子類型="未指定DNA"
<400> 5
<210> 6
<211> 21
<212> DNA
<213> 登革熱病毒
<220>
<221> 來源
<222> 1..21
<223> /生物體="登革熱病毒"/分子類型="未指定DNA"
<400> 6

Claims (14)

  1. 一種具有化學式(I)之化合物 其立體異構形式、藥學上可接受的鹽、溶劑化物或多晶型物，其中該等化合物選自下組，該組包括：
  2. 一種醫藥組成物，包括如申請專利範圍第1項所述之化合物或其立體異構形式、其藥學上可接受的鹽、溶劑化物或多晶型物，連同一種或多種藥學上可接受的賦形劑、稀釋劑或載體。
  3. 如申請專利範圍第1項所述之化合物或其立體異構形式、其藥學上可接受的鹽、溶劑化物或多晶型物，或如申請專利範圍第2項所述之醫藥組成物，用於用作藥劑。
  4. 如申請專利範圍第1項所述之化合物或其立體異構形式、其藥學上可接受的鹽、溶劑化物或多晶型物，或如申請專利範圍第2項所述之醫藥組成物，用於在治療登革熱中使用。
  5. 一種由來自如申請專利範圍第1項的任一結構式所表示之化合物、其立體異構形式、藥學上可接受的鹽、溶劑化物或多晶型物用於抑制生物樣品或患者中的一種或多種登革熱病毒的複製之用途，該化合物包含單取代的或二取代的吲哚基團。
  6. 如申請專利範圍第5項所述之化合物之用途，進一步包括共同給予另外的治療劑。
  7. 如申請專利範圍第6項所述之用途，其中所述另外的治療劑選自抗病毒劑或登革熱疫苗或兩者。
  8. 如申請專利範圍第1項所述之化合物，其中該化合物係 或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物或多晶型物。
  9. 一種醫藥組成物，包括如申請專利範圍第8項所述之化合物、其藥學上可接受的鹽、溶劑化物或多晶型物，連同一種或多種藥學上可接受的賦形劑、稀釋劑或載體。
  10. 如申請專利範圍第8項所述之化合物、其藥學上可接受的鹽、溶劑化物或多晶型物，或如申請專利範圍第9項所述之醫藥組成物，用於用作藥劑。
  11. 如申請專利範圍第8項所述之化合物、其藥學上可接受的鹽、溶劑化物或多晶型物，或如申請專利範圍第9項所述之醫藥組成物，用於在治療登革熱中使用。
  12. 一種由來自申請專利範圍8的任一結構式表示之化合物、其藥學上可接受的鹽、溶劑化物或多晶型物用於抑制生物樣品或患者中的一種或多種登革熱病毒的複製之用途，該化合物包含單取代的或二取代的吲哚基團。
  13. 如申請專利範圍第12項所述之用途，該用途進一步包括共同給予另外的治療劑。
  14. 如申請專利範圍第13項所述之用途，其中所述另外的治療劑選自抗病毒劑或登革熱疫苗或兩者。
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Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB201116559D0 (en) 2011-09-26 2011-11-09 Univ Leuven Kath Novel viral replication inhibitors
GB201305376D0 (en) 2013-03-25 2013-05-08 Univ Leuven Kath Novel viral replication inhibitors
JOP20160086B1 (ar) 2015-05-08 2021-08-17 2 Katholieke Univ Leuven Ku Leuven Research And Development مشتقات اندول مستبدلة احاديا او ثنائيا بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
JOP20160198B1 (ar) 2015-09-16 2022-03-14 Janssen Pharmaceuticals Inc مشتقات اندول مستبدلة احاديا او ثنائيا بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
JO3633B1 (ar) 2015-09-16 2020-08-27 Katholieke Univ Leuven Ku Leuven Research & Development مشتقات اندول مستبدلة احاديا او ثنائيا بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
MA44498A (fr) * 2016-03-31 2019-02-06 Janssen Pharmaceuticals Inc Dérivés d'indoline substituée utilisés en tant qu'inhibiteurs de la réplication du virus de la dengue
SG11201808138YA (en) 2016-03-31 2018-10-30 Janssen Pharmaceuticals Inc Substituted indole derivatives as dengue viral replication inhibitors
JOP20170069B1 (ar) * 2016-04-01 2021-08-17 1 Janssen Pharmaceuticals Inc مشتقات اندولين مستبدلة بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
EA201892200A1 (ru) 2016-04-01 2019-03-29 Янссен Фармасьютикалз, Инк. Замещенные производные соединений индола в качестве ингибиторов репликации вирусов денге
JOP20180026A1 (ar) * 2017-03-31 2019-01-30 Univ Leuven Kath مشتقات اندولين مستبدلة بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
JOP20180025B1 (ar) 2017-03-31 2021-08-17 Janssen Pharmaceuticals Inc مشتقات اندولين مستبدلة بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
US11407715B2 (en) * 2017-05-22 2022-08-09 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Substituted indoline derivatives as dengue viral replication inhibitors
KR102625991B1 (ko) * 2017-05-22 2024-01-16 얀센 파마슈티칼즈, 인코포레이티드 뎅기 바이러스 복제 억제제로서의 치환 인돌린 유도체
IL292970A (en) 2019-11-15 2022-07-01 Janssen Pharmaceuticals Inc Treatment and prevention of dengue disease

Family Cites Families (42)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2001520998A (ja) 1997-10-27 2001-11-06 イーライ・リリー・アンド・カンパニー インドールｓＰＬＡ２阻害剤のモルホリノ−Ｎ−エチルエステルプロドラッグ
GB0110832D0 (en) 2001-05-03 2001-06-27 Virogen Ltd Antiviral compounds
US20050074457A1 (en) 2001-12-12 2005-04-07 Adeela Kamal Assays and implements for determining and modulating hsp90 binding activity
GB0215293D0 (en) 2002-07-03 2002-08-14 Rega Foundation Viral inhibitors
CA2593450A1 (en) 2005-01-14 2006-07-20 Genelabs Technologies, Inc. Indole derivatives for treating viral infections
CA2597213A1 (en) 2005-02-09 2006-09-14 Migenix Inc. Compositions and methods for treating or preventing flaviviridae infections
CN102056483A (zh) 2008-06-03 2011-05-11 西佳技术公司 用于治疗或预防登革病毒感染的小分子抑制剂
JP5559174B2 (ja) * 2008-08-19 2014-07-23 ジヤンセン・フアーマシユーチカ・ナームローゼ・フエンノートシヤツプ 冷感−メントール受容体拮抗剤
TWI453207B (zh) 2008-09-08 2014-09-21 Signal Pharm Llc 胺基三唑并吡啶，其組合物及使用其之治療方法
WO2010091413A1 (en) 2009-02-09 2010-08-12 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Linked dibenzimidazole derivatives
GB0910003D0 (en) 2009-06-11 2009-07-22 Univ Leuven Kath Novel compounds for the treatment of neurodegenerative diseases
US8993604B2 (en) 2009-06-30 2015-03-31 Siga Technologies, Inc. Treatment and prevention of dengue virus infections
SG182478A1 (en) 2010-01-15 2012-08-30 Gilead Sciences Inc Inhibitors of flaviviridae viruses
EP2552211A4 (en) 2010-03-26 2013-10-23 Glaxo Group Ltd INDAZOLYL-PYRIMIDINE AS KINASEHEMMER
JP5716205B2 (ja) 2011-03-29 2015-05-13 学校法人日本大学 グルコシダーゼ活性阻害用組成物及びそのスクリーニング方法
GB201116559D0 (en) * 2011-09-26 2011-11-09 Univ Leuven Kath Novel viral replication inhibitors
GB201305376D0 (en) 2013-03-25 2013-05-08 Univ Leuven Kath Novel viral replication inhibitors
AP2016009122A0 (en) 2013-10-23 2016-03-31 Janssen Sciences Ireland Uc Carboxamide derivatives and the use thereof as medicaments for the treatment of hepatitis b
HUE040226T2 (hu) 2014-01-31 2019-02-28 Bristol Myers Squibb Co Makrociklusok heterociklusos P2' csoportokkal XIA faktor inhibitorokként
NO2721243T3 (zh) 2014-10-01 2018-10-20
PL3201176T3 (pl) 2014-10-01 2019-06-28 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Mono- lub di-podstawione pochodne indolowe jako inhibitory replikacji wirusa dengi
CN107001265B (zh) 2014-10-01 2021-06-15 杨森制药公司 作为登革热病毒复制抑制剂的经单取代的或二取代的吲哚
JOP20150335B1 (ar) * 2015-01-16 2022-03-14 Janssen Pharmaceuticals Inc مشتقات اندول بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
AR103680A1 (es) 2015-02-23 2017-05-24 Lilly Co Eli Inhibidores selectivos de bace1
JOP20160086B1 (ar) 2015-05-08 2021-08-17 2 Katholieke Univ Leuven Ku Leuven Research And Development مشتقات اندول مستبدلة احاديا او ثنائيا بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
JO3633B1 (ar) 2015-09-16 2020-08-27 Katholieke Univ Leuven Ku Leuven Research & Development مشتقات اندول مستبدلة احاديا او ثنائيا بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
JOP20160198B1 (ar) 2015-09-16 2022-03-14 Janssen Pharmaceuticals Inc مشتقات اندول مستبدلة احاديا او ثنائيا بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
PL3370698T3 (pl) 2015-11-03 2022-04-25 Zoetis Services Llc Kompozyty polimerowe zol-żel i ich zastosowania
SG11201808138YA (en) 2016-03-31 2018-10-30 Janssen Pharmaceuticals Inc Substituted indole derivatives as dengue viral replication inhibitors
MY194647A (en) 2016-03-31 2022-12-09 Takeda Pharmaceuticals Co Heterocyclic compound
MA44498A (fr) 2016-03-31 2019-02-06 Janssen Pharmaceuticals Inc Dérivés d'indoline substituée utilisés en tant qu'inhibiteurs de la réplication du virus de la dengue
JOP20170069B1 (ar) 2016-04-01 2021-08-17 1 Janssen Pharmaceuticals Inc مشتقات اندولين مستبدلة بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
SG11201808411RA (en) 2016-04-01 2018-10-30 Kite Pharma Inc Chimeric antigen and t cell receptors and methods of use
TN2018000337A1 (en) 2016-04-01 2020-01-16 Amgen Inc Chimeric receptors to flt3 and methods of use thereof
UA123912C2 (uk) 2016-04-01 2021-06-23 Басф Се Біциклічні сполуки
JP7014731B2 (ja) 2016-04-01 2022-02-01 シグナル ファーマシューティカルズ，エルエルシー 置換アミノプリン化合物、その組成物、及びそれらを用いた治療方法
WO2017173384A1 (en) 2016-04-01 2017-10-05 Kite Pharma, Inc. Chimeric receptors and methods of use thereof
EA201892200A1 (ru) 2016-04-01 2019-03-29 Янссен Фармасьютикалз, Инк. Замещенные производные соединений индола в качестве ингибиторов репликации вирусов денге
JOP20180026A1 (ar) 2017-03-31 2019-01-30 Univ Leuven Kath مشتقات اندولين مستبدلة بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
JOP20180025B1 (ar) 2017-03-31 2021-08-17 Janssen Pharmaceuticals Inc مشتقات اندولين مستبدلة بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
US11407715B2 (en) 2017-05-22 2022-08-09 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Substituted indoline derivatives as dengue viral replication inhibitors
KR102625991B1 (ko) 2017-05-22 2024-01-16 얀센 파마슈티칼즈, 인코포레이티드 뎅기 바이러스 복제 억제제로서의 치환 인돌린 유도체

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