TW201706286A - 作為ｋ類鴉片受體（ＫＯＲ）激動劑之新穎短鏈胜肽 - Google Patents

作為ｋ類鴉片受體（ＫＯＲ）激動劑之新穎短鏈胜肽 Download PDF

Info

Publication number
TW201706286A
TW201706286A TW105114457A TW105114457A TW201706286A TW 201706286 A TW201706286 A TW 201706286A TW 105114457 A TW105114457 A TW 105114457A TW 105114457 A TW105114457 A TW 105114457A TW 201706286 A TW201706286 A TW 201706286A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
inflammation
peptide
coor
acid
group
Prior art date
Application number
TW105114457A
Other languages
English (en)
Inventor
蘭吉特 德賽
拉傑許 貝荷卡
維杰 帕察帕提
拉金德拉 蕭邦
Original Assignee
卡地拉保健有限公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 卡地拉保健有限公司 filed Critical 卡地拉保健有限公司
Publication of TW201706286A publication Critical patent/TW201706286A/zh

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/1016—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/07—Tetrapeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本發明關於新穎的通式(I)之短鏈胜肽，其為選擇性及末梢作用之KOR激動劑，彼等之互變異構物形式、彼等之鏡像異構物、彼等之非鏡像異構物、彼等之立體異構物、彼等之醫藥上可接受之鹽或其前藥，該等有用於治療或預防其中涉及κ類鴉片受體(KOR)之疾病，諸如治療或預防內臟疼痛、痛覺過敏、類風濕性關節發炎、骨關節發炎、IBD發炎、IBS發炎、眼發炎、耳發炎或自體免疫發炎。本發明亦關於製造該短鏈胜肽之方法及含有該等胜肽之醫藥組成物與彼等之用途。 A-B-C-D-E (式I)

Description

作為k類鴉片受體(KOR)激動劑之新穎短鏈胜肽
本發明關於新穎的通式(I)之短鏈胜肽，其為選擇性及末梢作用之KOR激動劑，彼等之互變異構物形式、彼等之鏡像異構物、彼等之非鏡像異構物、彼等之立體異構物、彼等之醫藥上可接受之鹽或其前藥，該等有用於治療或預防其中涉及κ類鴉片受體(KOR)之疾病，諸如治療或預防內臟疼痛、痛覺過敏、類風濕性關節發炎、骨關節發炎、IBD發炎、IBS發炎、眼發炎、耳發炎或自體免疫發炎。本發明亦關於製造該短鏈胜肽之方法及含有該等胜肽之醫藥組成物與彼等之用途。
已發現有三種類型的類鴉片受體(Mu(μ)、Kappa(κ)和Delta(δ))表現在CNS及末梢二者中，且可用的類鴉片止痛劑係通過該等類鴉片受體媒介其作用(Evans,C.,Keith,J.D.,Morrison,H.,Magendzo,K和Edwards,R.,Science,258,1952-1955,1992；Cox,B.M.,Mol.Pharmacol.,83,723-728,2013；Chen,Y.,Mestek, A.,Liu,J.,Hurley,J和Yu,L.,Mol.Pharmacol.,44,8-12,1993；Meng,F.,Xie,G.X.,Thompson,R.,Mansour,A.,Goldstein,A.,Watson,S.J和Akil,H.,Proc.Natl.Acad.Sci.,U.S.A.,90,9954-9958,1993；Simonin,F.,Gaveriaux,R.C.,Befort,K.,Matthes,H.,Lannes,B.,Micheletti,G.,Mattei,M.G.,Charron,G.,Bloch,B和Kieffer,B.,Proc.Natl.Acad.Sci.,U.S.A.,92,7006-7010,1995；Stein,C.,Anesth.Analg.,76,182-191,1993)。目前大多數的類鴉片止痛劑(例如嗎啡)係藉由結合至μ-類鴉片受體而作用且彼等之止痛活性係與非所欲副作用(諸如身體依賴性，呼吸抑制，尿滯留，便秘、欣快症/煩躁不安和便秘)的頻譜相關聯(Pasternak,G.W.,Clin.Neuropharmacol.,16,1-18,1993)。
近年來，相當大的注意力集中在發展受體選擇性κ-激動劑作為有效力且有效的止痛劑，沒有μ止痛劑的非所欲副作用(Barber,A和Gottschlich,R.,Med.Res.Rev.,12,525-562,1992)。不像δ及μ受體之激動劑，κ-類鴉片受體之激動劑不引起便秘和欣快症。κ-類鴉片受體為G蛋白偶合受體(GPCR)的超級家族之成員。結合至κ-受體之激動劑激活細胞內相關聯之Gi蛋白質，其降低Ca2+通道傳導或抑制腺苷酸環化酶(AC)(Prather,P.L.,McGinn,T.M.,Claude,P.A.,Liu-Chen,L.Y.,Loh,H.H和Law,P.Y.,Mol.Brain.Res.,29,336-346,1995)。
已示意κ-類鴉片激動劑具有治療切口性/發炎性疼 痛、燒傷疼痛(Field,M.J.,Carnell,A.J.,Gonzalez,M.I.,McCleary,S.,Oles,R.J.,Smith,R.,Hughes,J和Singh,L.,Pain,80,383-389,1999)、神經病性疼痛(Catheline,G.,Guilbaud,G和Kayser,V.,Eur.J.Pharmacol.,357,171-178,1998)、內臟疼痛(包括痛經或胃腸疼痛)(Delgado Aros S.,Chial H.J.,Camilleri M.,Szarka L.A.,Weber F.T.,Jacob,J.,Ferber,I.,McKinzie,S.,Burton,D.D和Zinsmeister,A.R.,Am.J.Physiol.Gastrointest.Liver Phsyiol.,284,G558-G566,2002)、躁性大腸症候群(IBS)(Dapoigny,M.,Abitbol,J.L.,Fraitag,B.,Digest.Dis.Sci.,40,2244-2249,1995；Mangel,A.W.,Bornstein,J.D.,Hamm,L.R.,Buda,J.,Wang,J.,Irish,W.,Urso,D.,Pharmacol.Ther.,28,239-249,2008)、類風濕性關節炎(Endoh,T.,Tajima,A.,Suzuki,T.,Kamei,J.,Suzuki,T.,Narita,M.,Tseng,L和Nagase,H.,Eur.J.Pharmacol.387,133-140,2000)及止癢效果(Peters,G和Gaylor,S.,Clin.Pharmacol.Ther.,51,PPF-5,1989)之效力。Walker等人(Walker,J.S.,Adv.Exp.Med.Biol.,521,148-60,2003)確定κ激動劑用於治療骨關節炎、類風濕性關節炎、發炎性腸道疾病和濕疹之抗發炎性質。
Bileviciute-Ljungar等人(Bileviciute-Ljungar,T.Saxne和M.Spetea,Rheumatology,45,295-302,2006)說明以κ激動劑U-50,488減輕疼痛及佛氏(Freund's)佐劑誘發關節炎退化。因此，κ-受體代表重要的治療標的 (Pan,Z.Z.,Tershner,S.A.,Fields,H.L.,Nature,389,382-385,1997；Chavkin,C.,Neuropsychopharmacology,36,369-370,2011)。
κ-類鴉片受體廣泛地存在於中樞神經系統(CNS)中且在許多生理及病理功能中扮演重要的角色。雖然有此等可能的應用，但是臨床研究顯示κ-受體激動劑引起通常說成〝焦慮行為〞(Pfeiffer,A.,Brantl,V.,Herz,A和Emrich,H.M.,Science,233,774-776,1986)、水利尿(Dykstra,L.A.,Gmerek,D.E.,Winger,G和Woods,J.H.,J.Pharmacol.Exp.Ther.,242,413-420,1987)和迷幻效果(Rimoy,G.H.,Wright,D.M.,Bhaskar,N.K.,Rubin,P.C,Eur.J.Clin.Pharmacol.46(3),203-207,1994)之嚴重的中樞媒介之副作用。該等副作用似乎使此類別化合物的進一步臨床發展停止。許多研究顯示鴉片劑具有末梢止痛效果，尤其對發炎或痛覺過敏症狀(Barber,A和Gottschlich,R.,Med.Res.Rev.,12,525-562,1992)。
κ-類鴉片受體激動劑在類風濕性關節炎模式中顯示於局部投予之後產生止痛及降低發炎(Wilson,J.L.,Nayanar,V及Walker,J.S.,Br.J.Pharmacol.,118,1754-1760,1996)。經限制之CNS穿透為降低具有益於末梢作用的藥物之中樞副作用的常用策略。曾嘗試發展於經末梢限制之κ-類鴉片激動劑，諸如ICI204448(Shaw,J.S.,Carroll,J.A.,Alcoc,P和Main,B.G.,Br.J.Pharmacol.,96,986-992,1989)、GR94839(Rogers,H.,Birch,P.J., Harrison,S.M.,Palmer,E.,Manchee,G.R.,Judd,D.B.,Naylor,A.,Scopes,D.I.C和Hayes,A.G.,Br.J.Pharmacol.,106,783-789,1992)、Cadila Healthcare Ltd.的作為κ類鴉片激動劑之新穎雜環化合物(WO2015/119660)和EMD61753/阿西馬朵林(Asimadoline)(Barber,A.,Bartoszyk,G.D.,Bender,H.M.,Gottschlich,R.,Greiner,H.E.,Harting,J.,Mauler,F.,Minck,K.O.,Murray,R.D.,Simon,M和Seyfried,C.A.,Br.J.Pharmacol.,113,1317-1327,1994)。
不幸地，大多數的該等化合物係由於不良的生物利用率、缺乏效能或以止痛劑量的CNS副作用而於臨床試驗中中斷(Barber,A和Gottschlich,R.,Exp.Opin.Invest.Drugs,6,1351-1368,1997)。設計且合成阿西馬朵林，使其本身與其他報導之末梢KOR激動劑(諸如ICI 204448、GR94839和BRL 52974)有所區別。阿西馬朵林為含有疏水性二苯基甲基及親水性羥基之兩親性分子。阿西馬朵林成功地通過躁性大腸症候群(IBS)適效/治療的第II期臨床試驗，且目前進行治療患有腹瀉型IBS(D-IBS)之病患的第III期臨床試驗。
CR665和CR845為由非常有效力且選擇性地結合至KOR的所有D-胺基酸所組成之四胜肽。Dooley等人(Dooley,C.T.,Ny,P.,Bidlack,J.M和Houghten,R.A.,J.Biol.Chem.,273,18848-18856,1998)報導發現作為高親和性及選擇性κ-類鴉片激動劑之四胜肽(FE200041/CR665)。 數據證明FE200041為高選擇性κ-類鴉片抗致痛劑，在比有效劑量更高的劑量下沒有CNS副作用。FE20041之末梢抗致痛作用示意有可能發展用於控制疼痛的經末梢限制之類鴉片胜肽。在第I期研究中，CR845沒有出現煩躁不安或迷幻效果之跡象的完全耐受性。然而，在第III期研究中，CR845係由於高鈉血症(血液中的鈉含量升高)而處於臨床擱置。
Cara Therapeutics Inc.揭示合成的胜肽醯胺配體作為有用於治療與各種疾病和症狀相關聯的疼痛及發炎之末梢KOR激動劑(WO99/32510；US2008/7402564；US2009/0075907；US2009/0156508；US2009/0264373；US2010/7727963；US2010/0075910；US2010/7713937；US2010/7842662；US2010/0029575；US2011/0118186；US2011/0257105；US2011/0212882；US2013/0012448；WO2007/139921；WO2008/060552；WO2013/184794；WO2015/065867及US2015/0150935)。
來自Cara therapeutics之專利申請案(WO2008057608)揭示以下通式之合成的胜肽醯胺化合物作為κ-類鴉片受體。
其中以下部分 係選自
考慮到控制/預防內臟疼痛、痛覺過敏、類風濕性關節發炎、骨關節發炎、IBD發炎、IBS發炎、眼發炎、耳發炎或自體免疫發炎症狀之KOR激動劑的效力，吾等開 始製備幾種短鏈胜肽(如WO2008/057608，圖表-1中所列示的兩種化合物)及彼等之類似物。
然而，該等合成胜肽未顯示有效力的試管內κ類鴉片受體激動活性(EC50>10nM濃度)或在乙酸誘發之扭動模式中有效力的活體內活性(活體內抗致痛活性，ED50>3毫克/公斤，iv劑量)。驚訝的是某些含有胜肽的雙環(諸如在表1中所列示之化合物4、5、15、16、35、36和37)顯示有效力的試管內KOR激動活性(EC50<100pM濃度，表-4)及在乙酸誘發之扭動模式中有效力的活體內效能(活體內抗致痛活性，ED50 0.1毫克/公斤，iv劑量，表5)。這明確地指出合成胜肽的右端(含氮雙環及橋連環之環系統)為在此類別的分子中提供有效力的試管內KOR激動活性及活體內抗致痛活性所必需的重要因素之一。
吾等於本文揭示新穎的通式(I)之短鏈胜肽系列， 其為選擇性及末梢KOR激動劑，有用於治療或預防其中涉及κ類鴉片受體(KOR)之疾病，諸如治療或預防內臟疼痛、痛覺過敏、類風濕性關節發炎、骨關節發炎、IBD發炎、IBS發炎、眼發炎、耳發炎或自體免疫發炎。
【發明內容及實施方式】 發明概要
本發明關於新穎的通式(I)之短鏈胜肽、彼等之互變異構物形式、彼等之鏡像異構物、彼等之非鏡像異構物、彼等之立體異構物、彼等之醫藥上可接受之鹽，該等有用於治療或預防其中涉及κ類鴉片受體(KOR)之疾病，諸如治療或預防內臟疼痛、痛覺過敏、類風濕性關節發炎、骨關節發炎、IBD發炎、IBS發炎、眼發炎、耳發炎或自體免疫發炎。本發明亦關於製造該化合物之方法及含有該等化合物之醫藥組成物與彼等之用途。
A-B-C-D-E (式I)
本發明的實施態樣
本發明的實施態樣提供新穎的通式(I)之短鏈胜肽、彼等之互變異構物形式、彼等之鏡像異構物、彼等之非鏡像異構物、彼等之立體異構物、彼等之醫藥上可接受之鹽，及含有該等胜肽之醫藥組成物或彼等適合的混合物。
在本發明另外的實施態樣中，其係提供醫藥組成物，該組成物含有通式(I)之短鏈胜肽、彼等之互變異構物 形式、彼等之鏡像異構物、彼等之非鏡像異構物、彼等之立體異構物、彼等之醫藥上可接受之鹽或彼等之混合物與適合的載劑、溶劑、稀釋劑及正規用於製備此等組成物之其他介質的組合。
在本發明又另外的實施態樣中，其係提供本發明的新穎短鏈胜肽作為KOR激動劑之用途，其係藉由將治療有效且無毒量的通式(I)之短鏈胜肽或彼等之醫藥上可接受之組成物投予哺乳類。
在本發明又另外的實施態樣中，其係提供製備式(I)之短鏈胜肽或彼等之醫藥上可接受之鹽、互變異構物及鏡像異構物形式之方法。
在製備本發明化合物之說明中所使用的縮寫名單：
AC：腺苷酸環化酶
ACN：乙腈
Ala：丙二酸
Asn：天冬醯胺酸
Asp：天冬胺酸
Arg：精胺酸
Boc：三級丁氧基羰基
BOP：六氟磷酸苯並三唑-1-基-氧基-參-(二甲基胺基)-鏻
Cbz：苯甲氧基羰基
CNS：中樞神經系統
DCC：N,N’-二環己基碳二醯亞胺
DIPCDI：N,N’-二異丙基碳二醯亞胺
DCM：二氯甲烷
DIPEA：N,N-二異丙基乙胺
DMAP：二甲基胺基吡啶
DMF：N,N-二甲基甲醯胺
Gln：麩醯胺
Glu：麩胺酸
Gly：甘胺酸
GPCR：G蛋白偶合受體
δ：δ(Delta)
Har：高精胺酸
His：組胺酸
Hlys：高離胺酸
HOBt：1-羥基苯並三唑
HPLC：高性能液相層析術
IBD：發炎性腸道疾病
IBS：躁性大腸症候群
κ：κ(Kappa)
KOR：κ類鴉片受體
μ：μ(Mu)
Leu：白胺酸
Lys：離胺酸
NMM：N-甲基嗎啉
Orn：鳥胺酸
PNS：末梢神經系統
Ser：絲胺酸
TFA：三氟乙酸
Thr：蘇胺酸
TIS：三異丙基矽烷
Trt：三苯甲基
Tyr：酪胺酸
Val：纈胺酸
本發明的說明
據此，本發明關於新穎的以下通式(I)代表之短鏈胜肽&包括彼等之醫藥上可接受之鹽A-B-C-D-E (式I)其中‘A’和‘B’獨立地代表第一和第二個胺基酸，且可獨立地選自Phe、α-Me-Phe、Tyr、苯基甘胺酸、高苯基丙胺酸(homophenylalanine)、環己基甘胺酸、環己基丙胺酸，其中存在於該等胺基酸之任一者中的芳族環可經H、鹵基、NO2、NH2、烷基、CF3和CN取代，‘C’代表第三個胺基酸，其可選自正白胺酸、Phe、Ala、Leu、α-Me-Leu、高白胺酸、Val、1-胺基環己烷羧酸、1-胺基環戊烷羧酸、環己基甘胺酸；‘D’係選自由下列所組成之群組：Arg、Lys、Har、Orn、Ala、Hlys、正白胺酸、His；‘E’係選自由下列所組成之群組： 其中R在每次出現時係選自H、-NR’R”、-CN、-COOR’、-CONR’R”、-CO(CH2)n-OR’、-OR’、-(CH2)nOR’、-SO2R’或-SO2NR’R”、-(CH2)nCOOR’、-(CH2)nCONR’R”、-(CH2)nNR’R”、-NH(CH2)nCOOR’、-(CH2)nCONHR、-CH2CON[(CH2)nCOOR’]2、-CH2CON[(CH2)nOR’]2、-COCH2N[(CH2)nCOOR’]2、-CO(CH2)n-NR’R”、-CO(CH2)nCOOR’、-CO(CH2)nCONR’R”、-(CH2)nCONHNR’R”、-CO(CH2)nCONHNR’R”、-(CH2)nNHNR’R”、-(CH2)nCN、-CHR1COOR’、-CR1R2COOR’、-烷基芳基、芳基、C1-C10烷基、甲脒基、經C1-C6烷基取代之甲脒基，其中R’和R”之各者在每次出現時可獨立地或同時選自H、C1-C10烷基、支鏈烷基、烷基芳基、芳基，或R’與R”可組合形成4至6員環；n=1至10，其中R1 & R2在每次出現時可獨立地或同 時選自烷基&鹵素。
在替代的實施態樣中，R & R’之各者亦可代表選自由下列所組成之群組的胺基酸：Asp、Glu、Asn、Gln、Lys、Arg、His、Ala、Ser、Thr、Leu、Val、Gly、Har、2-胺基庚二酸。
在較佳的實施態樣中，‘A’和B之各者係獨立地選自Phe & Tyr；代表第三個胺基酸的‘C’較佳地可選自Leu、正白胺酸& 1-胺基環己烷羧酸；代表第四個胺基酸的‘D’較佳地可選自Lys、Arg & Ala。
特別有用的化合物可選自但不限於下列者：
短鏈胜肽之製備：
可使用許多合成路徑製備本發明的短鏈胜肽。式(I)之短鏈胜肽(其中所有的符號係如先前所定義)可使用下文所述之方法連同那些熟習胜肽合成技術領域者已知的慣用技術或那些熟習本技術領域者鑑定的其變型來合成。所述及之方法包括但不限於那些下文所述者。
本文所述之短鏈胜肽可使用下列兩種技術之適合的變型之化學合成法製造：溶液相(較佳地使用生物化學法；如下列者所概述：M.Bodansky,A.Bodansky,“The practice of peptide synthesis”,Springer-Verlag,Berlim,1984；E.Gross,J.Meinhofer,“The peptide synthesis,analysis,biology”,Vol.1,Academic Press,London,1979)及/或固相，諸如那些由下列者所概述：G.Barany & R.B.Merrifield,"The peptides：Analysis,synthesis, Biology"；Volume 2-"Special methods in peptide synthesis,Part A",pp.3-284,E.Gross & J.Meienhofer,Eds.,Academic Press,New York,1980；及J.M.Stewart和J.D.Young,"Solid-phase peptide synthesis" 2nd Ed.,Pierce chemical Co.,Rockford,Il,1984。
製備本發明的短鏈胜肽之較佳策略係以使用固相及/或溶液相方法為基礎。
固相胜肽合成法(SPPS)：
式(I)化合物可藉由流程1所述之固相合成法連同完全在熟習本技術領域者的範圍內之適合的修改/變型來製備。使用以Fmoc為基礎之SPPS方法，其中組合使用暫時保護α-胺基之Fmoc(9-茀基甲氧基羰基)與暫時保護若存在的胺基酸側鏈之酸不穩定保護基，諸如三級丁氧基羰基(Boc)、三級丁基(But)、三苯甲基(Trt)(參見例如E.Atherton & R.C.Sheppard,"The Fluorenylmethoxycarbonyl amino protecting group"，在"The peptides：Analysis,synthesis,Biology"；Volume 9-"Special methods in peptide synthesis,Part C",pp.1-38,S.Undenfriend & J.Meienhofer,Eds.,Academic Press,San Diego,1987)。
短鏈胜肽可以逐步方式在不可溶的聚合物載體(樹脂)上自胜肽之C-端開始合成。在一實施態樣中，使胜肽之C-端胺基酸通過形成醯胺、酯或醚鍵聯而附加至樹 脂，藉此開始合成。這容許最後釋放分別成為C-端醯胺、羧酸或醇之所得胜肽。
在以Fmoc為基礎之SPPS中，在合成中所使用的C-端胺基酸及所有其他的胺基酸必需具有彼等經區別地保護之α-胺基及側鏈官能基(若存在)(正交性保護(orthogonal protection))，使得α-胺基保護基在合成期間使用適合的鹼(諸如20%哌啶溶液)適當地移除而沒有任何自樹脂過早分裂的胜肽或沒有通常以酸不穩定保護基保護之側鏈保護基的去保護。
胺基酸之偶合係藉由活化其羧基成為活性酯及與附加至樹脂之N-端胺基酸的未封端之α-胺基反應來進行。在每一偶合及去保護之後，將胜肽基-樹脂以過量溶劑清洗，諸如DMF、DCM及二乙醚。重複α-胺基去保護及偶合的順序，直到組合成所欲胜肽序列為止(流程1)。接著將胜肽使用適當的分裂混合物伴隨側鏈官能基的去保護而自樹脂分裂，通常在適當的清除劑存在下以限制副反應。所得胜肽最後以反相HPLC純化。
作為前驅物所必需之胜肽基-樹脂合成最終胜肽係利用商業上可取得的交聯之聚苯乙烯聚合物樹脂(Novabiochem，San Diego，CA)。在本發明中較佳的是使用Fmoc-PAL-PEG-PS樹脂、4-(2',4'-二甲氧基苯基-Fmoc-胺基甲基)-苯氧基乙醯基-對-甲基二苯甲基胺樹脂(Fmoc-Rink醯胺MBHA樹脂)、2-氯-三苯甲基氯樹脂或對-苯甲氧基苯甲醇樹脂(HMP樹脂)、三氯乙醯亞胺 酯(trichloroacedimidate)樹脂、對-硝苯基碳酸酯wang樹脂，C-端胺基酸可能已或可能未連接至該等樹脂。若未連接C-端胺基酸，則其連接可藉由其與DIPCDI反應所形成的經Fmoc-保護之胺基酸的HOBt活性酯來達成。在2-氯-三苯甲基樹脂的例子中，第一個經Fmoc-保護之胺基酸的偶合係使用DIPEA達成。胜肽基樹脂之N-端保護係使用10-20%哌啶溶液選擇性地去保護，以進行下一胺基酸之組配。在每一偶合及去保護之後，過量胺基酸及偶合試劑係藉由以DMF、DCM和醚清洗而移除。後續胺基酸之偶合可使用分別自DIPCDI/HOBt或DIPCDI/HOAt所製得的HOBt或HOAt活性酯來實現。在一些困難偶合的例子中，尤其在那些胺基酸為疏水性或具有龐大的側鏈保護之胺基酸的偶合；完全偶合可使用高效偶合劑(諸如HBTU、PyBOP或TBTU)與添加劑(諸如DIPEA)之組合來達成。
本文所述之短鏈胜肽的合成可使用分批或連續流動胜肽合成裝置(諸如CS-Bio或AAPPTEC胜肽合成器)利用Fmoc/三苯甲基保護策略來進行。存在於不同位置上的非天然、非商業性胺基酸係使用一或多種本技術中已知的方法併入胜肽鏈中。在一個方法中，經Fmoc-保護之非天然胺基酸係使用適當的文獻程序在溶液中製備。
在短鏈胜肽的以Fmoc為基礎之固相胜肽合成法(SPPS)中所使用的一些經保護之胺基酸的實例：
經Fmoc-保護之α-甲基化胺基酸係使用不對稱Strecker合成法製備(Boesten,W.H.J.，等人之Org.Lett.,3(8),2001,1121-1124；Cativiela C.,Diaz-de-villegas M.D.,Tetrahedran Asymmetry,9,1988,3517-3599)。接著將所得衍生物用於胜肽之分批合成法中。另一選擇地， 必需之非天然胺基酸係使用合成有機化學程序直接建構在樹脂上且建構胜肽直鏈。
用於彼等各個短鏈胜肽之胜肽-樹脂前驅物可使用文獻中所述之標準的分裂步驟中任一者之適合的變型進行分裂及去保護(King D.S.，等人之Int.J.Peptide Protein Res.,1990,36,255-266)。用於本發明的較佳方法為在水及作為清除劑的TIPS存在下使用TFA分裂混合物。胜肽基-樹脂通常在室溫下於TFA/水/TIPS(95：2.5：2.5)中培育1.5-4小時。將分裂之樹脂濾除且將TFA溶液濃縮或在減壓下乾燥。將所得粗製胜肽沉澱或以Et2O清洗或再溶解在DMF或50%之水性乙酸中，以製備性HPLC純化。
具有所欲純度之短鏈胜肽可藉由使用製備性HPLC純化而獲得。將粗製胜肽之溶液注入尺寸250 X 50毫米之半製備性管柱(Luna 10μm；C18；100A°)中且以水中的ACN(二者皆以0.1%之TFA緩衝)之線性梯度使用40毫升/分鐘之流速洗提，以PDA檢測器在220奈米下監控流出物。純化之短鏈胜肽的結構可以電噴灑質譜法(ES-MS)分析來確定。
在Prep-HPLC純化之後，可將製得的所有胜肽分離成三氟乙酸鹽，具有TFA作為相對離子。然而，將一些胜肽通過適合的離子交換樹脂床進行脫鹽，較佳地通過陰離子交換樹脂Dowex SBR P(C1)或等效的鹼性陰離子交換樹脂。在一些例子中，將TFA相對離子通過以稀釋的乙 酸緩衝液洗提之適合的離子交換樹脂而以乙酸離子替換。為了製備胜肽之鹽酸鹽，將具有乙酸鹽的經選擇之胜肽在最後的製造階段以4M HCl處理。將所得溶液通過膜濾器(0.2微米)過濾且接著凍乾，得到白至灰白色的HCl鹽。本發明的短鏈胜肽之其他適合的醫藥上可接受之鹽係依照類似的技術及/或完全在熟習本技術領域者之範圍內的此等適合的修改來製備。
流程1：以固相方法合成式(I)化合物之通用流程
使用SPPS方法製備短鏈胜肽之通用方法： 短鏈胜肽在樹脂上的組合：
將足夠量(50-100毫克)的Fmoc-PAL-PEG-PS樹脂或Fmoc-Rink醯胺MBHA樹脂或2-氯-三苯甲基樹脂裝載量：0.5-1.0毫莫耳/克在DMF(1-10毫升/100毫克樹脂)中經2-10分鐘膨脹。將樹脂上的Fmoc-基團藉由以DMF中的10-30%哌啶(10-30毫升/100毫克樹脂)培育10-30 分鐘而移除。將去保護之樹脂過濾且以過量DMF、DCM及醚清洗。將清洗之樹脂在新鮮蒸餾之DMF(1毫升/100毫克樹脂)於氮氛圍下培育5分鐘。將在DMF中以HOBt(1-3當量)及DIPCDI(1-2當量)預活化的第一個經Fmoc-保護之胺基酸(1-3當量)的0.5M溶液添加至樹脂中且接著將樹脂在氮氛圍下搖動1-3小時。偶合的完成係使用定性茚三酮試驗監控。在偶合第一個胺基酸之後，將樹脂以DMF、DCM及二乙醚清洗。下一個胺基酸的偶合：首先將以樹脂偶合的第一個胺基酸上的Fmoc-保護使用10-20%哌啶溶液去保護，接著使用適合的偶合劑及如上文所述偶合經Fmoc保護之第二個胺基酸。依照上述通用流程1進行去保護、清洗、偶合及清洗的重複循環，直到在樹脂上組合成所欲胜肽鏈為止。最後將上述製備之經Fmoc保護之胜肽基-樹脂如上述以20%哌啶處理而去保護且將胜肽基-樹脂以DMF、DCM及二乙醚清洗。將含有所欲胜肽之樹脂在氮氣壓力下經10-15分鐘乾燥且進行分裂/去保護。
使用上述方案及在熟習本技術領域者的範圍內之其適合的變型，使本發明設計之短鏈胜肽使用Fmoc-SPPS方法製備。此外，將樹脂結合之短鏈胜肽使用下列方案分裂且去保護、純化及特徵化。
分裂及去保護：
所欲短鏈胜肽係藉由如下以TFA分裂混合物處理而 自彼等各自的胜肽基-樹脂分裂及去保護。將TFA/水/三異丙基矽烷(95：2.5：2.5)(10毫升/100毫克胜肽基-樹脂)之溶液添加至胜肽基-樹脂中且將混合物以偶爾攪拌保持在室溫下。將樹脂過濾，以分裂混合物清洗且將組合的過濾物蒸發至乾燥。將獲得的殘餘物溶解在10毫升水中，將水層以醚萃取三次(各20毫升)且最後將水層冷凍乾燥。將冷凍乾燥之後所獲得的粗製胜肽以如下的製備性HPLC純化：
粗製短鏈胜肽之製備性HPLC純化：
製備性HPLC係在Shimadzu LC-8A液相層析儀上進行。將溶解在DMF或水中的粗製胜肽溶液注入尺寸250 X 50毫米之半製備性管柱(Luna 10μm；C18；100A°)中且以水中的ACN(二者皆以0.1%之TFA緩衝)之線性梯度使用15-50毫升/分鐘之流速洗提，以PDA檢測器在220奈米下監控流出物。使用20%至70%之以0.1% TFA緩衝的水-ACN混合物的代表梯度經50分鐘時間，以每分鐘1%之梯度變化。以單一10-20毫升餾份收集洗提之所欲產物且藉由凍乾各個製備性HPLC餾份獲得成為非晶形白色粉末的純短鏈胜肽。
純化之短鏈胜肽的HPLC分析
在以如上述之製備性HPLC純化之後，將各胜肽在Shimadzu LC-10AD分析性HPLC系統上的分析性RP- HPLC分析。使用尺寸250 X 4.6毫米管柱之Luna 5μm；C18；100A°以0.1% TFA及ACN緩衝液之線性梯度進行短鏈胜肽之分析性HPLC分析，且使用PDA檢測器在220奈米下進行層析圖擷取。
以質譜法特徵化
各胜肽係以電噴霧離子化質譜法(ESI-MS)以流動注入或LC/MS模式特徵化。以正離子及負離子電噴霧模式的所有分析中使用三段式四極質譜儀(API-3000(MDS-SCIES，Canada)。完整的掃描數據係在單位解析下操作的四極質量範圍內取得。在所有的例子中，經實驗測量之分子量係在0.5道耳吞的經計算之單一同位素分子量範圍內。質譜法的定量係使用Analyst 1.4.1軟體進行。
第17號化合物之自動化固化合成的代表性實例：
線性短鏈胜肽H2N-Phe-Phe-Leu-Lys-Hpp-PAL-PEG-PS係使用Fmoc固相胜肽合成(SPPS)方法(流程2)在自動化CS-Bio 536 PepSynthesiserTM上組合。將Fmoc胺基酸及四氟硼酸2-(1H-苯並三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓(TBTU)一起裝填在小瓶中且以合成器的胺基酸模式定位。
將二異丙基乙胺(DIPEA；0.9M)及DMF之儲存溶液儲存在無水氮氛圍下的試劑瓶中。將樹脂Fmoc-PAL-PEG-PS(0.38毫莫耳/克；1克)在真空中經P2O5乾燥(1小時)且在新鮮蒸餾之DMF(5毫升)中膨脹。將膨脹之樹脂以漿液裝填至玻璃管柱中且在合成器中定位。所有的合成循環係在5毫升分鐘-1之流速下進行，表1。將樹脂以新鮮蒸餾之DMF清洗10分鐘。Fmoc基團之去保護係以在DMF中的20%哌啶進行10分鐘且在304奈米下以管柱流出物的UV檢定監控去保護。
將過量哌啶以三次輔助清洗循環及蒸餾之DMF清洗循環而移除，各循環15分鐘。將胺基以Fmoc-胺基酸(4當量)處理，在DIPEA(8當量)的存在下以TBTU(3.9當量)預活化及再循環120分鐘。將過量胺基酸及可溶性副產物以四次輔助清洗循環及蒸餾之DMF清洗循環而自管柱及環路移除，各循環10分鐘。
此外，重複用於完成組裝線性胜肽之合成循環(去保護、清洗、醯化及清洗)。最後的去保護循環係以DMF中的20%哌啶進行15分鐘，以移除末端Fmoc基團，接著以清洗循環(10 X 4分鐘)。完成之胜肽-樹脂通過燒結之玻璃濾器過濾，連續以DMF、DCM、甲醇、DMF及二乙醚清洗三次(各100毫升)。將胜肽-樹脂在真空中經P2O5乾燥(2小時)且儲存在-20℃下。
流程2：第17號化合物之SPPS
進行茚三酮樹脂試驗以檢查樹脂結合之胜肽的N-端游離胺基。溶液及樹脂珠的藍紫色外觀表示在樹脂結合之胜肽上有游離胺基的存在且認為是正試驗。
進行小規模分裂以評定樹脂結合之胜肽的純度。將乾燥之胜肽-樹脂(約10毫克)在室溫下以TFA、水、三異丙基矽烷(95：2.5：2.5 v/v)之混合物(1毫升)經偶爾溫和的旋轉處理90分鐘。將樹脂過濾，以純TFA(1毫升)徹底清洗且將整個過濾物在減壓下蒸發。將殘餘的TFA與二乙醚(2毫升)共沸三次。將獲得的殘餘物懸浮在蒸餾水(2毫升)中且將水層以二乙醚(3毫升)萃取三次。將水層分離且冷凍乾燥，得到粗製胜肽H2N-Phe-Phe-Leu-Lys-Hpp-CONH2。將凍乾之胜肽H2N-Phe-Phe-Leu-Lys-Hpp-CONH2溶解在0.1%水性TFA(約1毫克/1毫升)中，以分析性RP-HPLC分析其純度且以電噴霧離子化質譜法(ESI-MS)特徵化。以HPLC的純度：85%(粗製胜肽)。ESI-MS；H2N-Phe-Phe-Leu-Lys-Hpp-CONH2之計算值：706.8(M+H+),728.8(M+Na+)和744.8(M+K+)；實測值(m/z)：706.8(M+H+),728.8(M+Na+)和744.8(M+K+)；以HPLC的純度：99.18%(純胜肽)。
溶液相胜肽合成法：
式(I)化合物可藉由流程3所述之溶液相合成法連同完全在熟習本技術領域者的範圍內之適合的修改/變型 來製備。
步驟i：化合物(1)與化合物(2)使用適合的偶合劑(諸如EDCI/HOBt、HATU、BOP、PyBOP、DCC/HOBt及類似者)、在適合的溶劑中(諸如DCM、DMF及類似者)、在有或沒有鹼的存在下(如DMAP、DIPEA)縮合可得到化合物(3)。
步驟ii：化合物(3)可使用適合的鹼(諸如LiOH、NaOH、KOH及類似者)、在適合的溶劑中(諸如THF、MeOH、EtOH及類似者)水解成化合物(4)。
步驟iii：化合物(4)與化合物(5)使用適合的偶合劑(諸如EDCI/HOBt、HATU、BOP、PyBOP、DCC/HOBt及類似者)、在適合的溶劑中(諸如DCM、DMF及類似者)、在有或沒有鹼的存在下(如DMAP、DIPEA)縮合可得到化合物(6)。
流程3：以溶液相方法合成式(I)化合物之通用流程
其中A、B、C、D & E於發明內容中說明。
步驟iv：化合物(6)可使用適合的鹼(諸如LiOH、NaOH、KOH及類似者)、在適合的溶劑中(諸如THF、MeOH、EtOH及類似者)水解成化合物(7)。
步驟v：化合物(7)與化合物(8)使用適合的偶合劑(諸如EDCI/HOBt、HATU、BOP、PyBOP、DCC/HOBt及類似者)、在適合的溶劑中(諸如DCM、DMF及類似者)、在有或沒有鹼的存在下(如DMAP、DIPEA)縮合可得到化合物(9)。
步驟vi：化合物(9)可使用適合的鹼(諸如LiOH、NaOH、KOH及類似者)、在適合的溶劑中(諸如THF、MeOH、EtOH及類似者)水解成化合物(10)。
步驟vii：化合物(10)與化合物(11)使用適合的偶合劑(諸如EDCI/HOBt、HATU、BOP、PyBOP、DCC/HOBt及類似者)、在適合的溶劑中(諸如DCM、DMF及類似者)、在有或沒有鹼的存在下(如DMAP、DIPEA)縮合可得到化合物(12)。
步驟viii：化合物(12)的Boc保護基可藉由TFA在適合的溶劑中(諸如DCM及類似者)移除，得到式(I)化合物。
下列的新穎短鏈胜肽係利用本文所述之合成方法連同其他一般已知的技術及其適合的變型來製備。此列表指出各種群組的短鏈胜肽，其可以根據本發明製備且預期至少包括該等短鏈胜肽的顯著變型。然而，此揭示內容不應解釋成以任何方式限制本發明的範圍。
第34號化合物之溶液相合成法的代表性實例：
步驟i：2-(2-((三級丁氧基羰基)胺基)-3-苯基丙醯胺基)-3-苯基丙酸甲酯之合成
將HOBt(1.02克，7.53毫莫耳)及DCC(1.55克，7.53毫莫耳)在25-30℃下添加至DCM(20毫升)中的Boc-Phe-OH(2.0克，7.53毫莫耳)之溶液中。將混合物攪拌10分鐘且將H2N-Phe-OMe(1.35克，7.53毫莫耳)添加至其中。將反應混合物在25-30℃下攪拌24小時，過濾且將過濾物以DCM稀釋。將有機層以飽和NaHCO3溶液、檸檬酸溶液及食鹽水清洗，經Na2SO4乾燥且蒸發，得到粗製產物。將粗製產物以使用DCM中的0至2% MeOH作為洗提系統的管柱層析術純化，得到成為白色固體的標題化合物(3.0克，94%產率)；ESI-MS：427.2(M+H+)。
步驟ii：2-(2-((三級丁氧基羰基)胺基)-3-苯基丙醯胺基)-3-苯基丙酸之合成
將H2O(10毫升)中的NaOH(0.38克，9.38毫莫耳)在25-30℃下添加至MeOH(20毫升)中的2-(2-((三級丁氧基羰基)胺基)-3-苯基丙醯胺基)-3-苯基丙酸甲酯(2.0克，4.69毫莫耳)之溶液中。將反應混合物在25-30℃下攪拌1小時。在1小時之後，將MeOH蒸發&將水層以檸檬酸溶液酸化，獲得固體。將固體過濾&將其乾燥，得到成為白色固體的標題化合物(1.89克， 98%產率)；ESI-MS：413.2(M+H+)。
步驟iii：6,9-二苯甲基-12-異丁基-2,2-二甲基-4,7,10-三酮基-3-氧雜-5,8,11-三氮雜十三烷-13-酸甲酯之合成
將HOBt(0.49克，3.64毫莫耳)及DCC(0.75克，3.64毫莫耳)在25-30℃下添加至DCM(15毫升)中的2-(2-((三級丁氧基羰基)胺基)-3-苯基丙醯胺基)-3-苯基丙酸(1.5克，3.64毫莫耳)之溶液中。將混合物攪拌10分鐘且將H2N-Leu-OMe(0.52克，3.64毫莫耳)添加至其中。將反應混合物在25-30℃下攪拌24小時。過濾且將過濾物以DCM稀釋。將有機層以飽和NaHCO3溶液、檸檬酸溶液及食鹽水清洗，經Na2SO4乾燥且蒸發，得到粗製產物。將粗製產物以使用DCM中的0至2% MeOH作為洗提系統的管柱層析術純化，得到成為白色固體的標題化合物(1.82克，93%產率)；ESI-MS：541.1(M+H+)。
步驟iv：6,9-二苯甲基-12-異丁基-2,2-二甲基-4,7,10-三酮基-3-氧雜-5,8,11-三氮雜十三烷-13-酸之合成
將H2O(7毫升)中的NaOH(0.19克，4.82毫莫耳)在25-30℃下添加至MeOH(13毫升)中的6,9-二苯甲基-12-異丁基-2,2-二甲基-4,7,10-三酮基-3-氧雜-5,8,11-三氮雜十三烷-13-酸甲酯(1.3克，2.41毫莫耳)之溶液中。將反應混合物在25-30℃下攪拌1小時。在1小時之後，將MeOH蒸發&將水層以檸檬酸溶液酸化，獲得固體。將固體過濾&將其乾燥，得到成為白色固體的標題化合物(1.22克，96%產率)；ESI-MS：527.0(M+H+)。
步驟v：6,9-二苯甲基-15-(4-((三級丁氧基羰基)胺基)丁基)-12-異丁基-2,2-二甲基-4,7,10,13-四酮基-3-氧雜-5,8,11,14-四氮雜十六烷-16-酸甲酯之合成
將HOBt(0.26克，1.90毫莫耳)及DCC(0.39克，1.90毫莫耳)在25-30℃下添加至DCM(10毫升)中的6,9-二苯甲基-12-異丁基-2,2-二甲基-4,7,10-三酮基-3-氧雜-5,8,11-三氮雜十三烷-13-酸(1.0克，1.90毫莫耳)之溶 液中。混合物攪拌10分鐘且將H2N-Lys(Boc)-OMe(0.49克，1.90毫莫耳)添加至其中。將反應混合物在25-30℃下攪拌24小時。過濾且將過濾物以DCM稀釋。將有機層以飽和NaHCO3溶液、檸檬酸溶液及食鹽水清洗，經Na2SO4乾燥且蒸發，得到粗製產物。將粗製產物以使用DCM中的0至2% MeOH作為洗提系統的管柱層析術純化，得到成為白色固體的標題化合物(1.34克，92%產率)；ESI-MS：768.4(M+H+)。
步驟vi：6,9-二苯甲基-15-(4-((三級丁氧基羰基)胺基)丁基)-12-異丁基-2,2-二甲基-4,7,10,13-四酮基-3-氧雜-5,8,11,14-四氮雜十六烷-16-酸之合成
將H2O(5毫升)中的NaOH(0.11克，2.66毫莫耳)在25-30℃下添加至MeOH(10毫升)中的6,9-二苯甲基-15-(4-((三級丁氧基羰基)胺基)丁基)-12-異丁基-2,2-二甲基-4,7,10,13-四酮基-3-氧雜-5,8,11,14-四氮雜十六烷-16-酸甲酯(1.0克，1.33毫莫耳)之溶液中。將反應混合物在25-30℃下攪拌1小時。在1小時之後，將MeOH蒸發&將水層以檸檬酸溶液酸化，獲得固體。將固體過濾&將其乾燥，得到成為白色固體的標題化合物 (0.95克，97%產率)；ESI-MS：754.4(M+H+)。
步驟vii：雙-Boc-N-(6-胺基-1-(3-苯甲基-3,6-二氮雜雙環〔3.1.1〕庚-6-基)-1-酮己-2-基)-2-(2-(2-胺基-3-苯基丙醯胺基)-3-苯基丙醯胺基)-4-甲基戊醯胺之合成
將HOBt(0.04克，0.26毫莫耳)及DCC(0.06克，0.26毫莫耳)在25-30℃下添加至DCM(2毫升)中的6,9-二苯甲基-15-(4-((三級丁氧基羰基)胺基)丁基)-12-異丁基-2,2-二甲基-4,7,10,13-四酮基-3-氧雜-5,8,11,14-四氮雜十六烷-16-酸(0.2克，0.26毫莫耳)之溶液中。混合物攪拌10分鐘且將3-苯甲基-3,6-二氮雜雙環〔3.1.1〕庚烷(0.05克，0.26毫莫耳)〔根據文獻：TL 53,6332-6334,2012製備〕添加至其中。將反應混合物在25-30℃下攪拌24小時。過濾且將過濾物以DCM稀釋。將有機層以飽和NaHCO3溶液、檸檬酸溶液及食鹽水清洗，經Na2SO4乾燥且蒸發，得到粗製產物。將粗製產物以使用DCM中的0至3% MeOH作為洗提系統的管柱層析術純化，得到成為白色固體的標題化合物(0.22克，89%產率)；ESI-MS：924.6(M+H+)。
步驟viii：N-(6-胺基-1-(3-苯甲基-3,6-二氮雜雙環〔 3.1.1〕庚-6-基)-1-酮己-2-基)-2-(2-(2-胺基-3-苯基丙醯胺基)-3-苯基丙醯胺基)-4-甲基戊醯胺之合成
將TFA(2毫升)在25-30℃下添加至DCM(2毫升)中的雙-Boc-N-(6-胺基-1-(3-苯甲基-3,6-二氮雜雙環〔3.1.1〕庚-6-基)-1-酮己-2-基)-2-(2-(2-胺基-3-苯基丙醯胺基)-3-苯基丙醯胺基)-4-甲基戊醯胺(0.18克，0.19毫莫耳)之溶液中。將反應混合物在25-30℃下攪拌3小時。在3小時之後，將溶劑蒸發，將獲得的殘餘物以二乙醚清洗。將粗製化合物以製備性HPLC純化，收集純餾份&凍乾，得到成為白色固體的標題化合物(0.12克，84%產率)；ESI-MS：725.0(M+H+)。
表1中所述之本發明的其他化合物係以上述方法與如必要的慣例變型之組合來製備，該變型完全在熟習本技術領域者的範圍內。化合物係通過下文提供的質譜特徵化(表3)。
將代表性化合物的質譜數據列示於表3中。
如下文所提供，測試合成之化合物的生物活性：
生物活性篩選： a)使用以cAMP為基礎之功能檢定法的試管內(EC 50 )測定：
試驗化合物之試管內KOR激動活性係使用以cAMP為基礎之功能檢定法評定。在100微升/槽孔之完全漢姆(Ham)氏F-12培養基中以30,000個細胞/槽孔之密度接種在96槽孔盤中。在接種之後，將盤在37℃，5% CO2的CO2恆溫室中培育隔夜。丟棄隔夜的培養基且將盤以100微升/槽孔之無菌PBS清洗。接著將90微升在完全漢姆氏F12中的含有0.5%不含脂肪酸的BSA之0.1mM IBMX添加至各槽孔中。這容許在37℃，5% CO2下培育30分鐘。將0.5%不含脂肪酸的BSA中的20μM弗斯可林(Forskolin)添加至各槽孔中且容許在室溫下培育5分鐘。將試驗化合物在DMSO中進行200X稀釋且接著在含有完全漢姆氏F12的BSA中以1：10倍稀釋。將激動劑(試驗化合物，在10% DMSO中)添加至各槽孔中(5微升)且容許在37℃，5% CO2下培育20分鐘。在20分鐘之後，自槽孔吸出培養基且將槽孔以1X PBS清洗。將細胞溶解緩衝液4X(Arbor Assays，Cat # X074-60ML)在MilliQ中以1：4稀釋且以每槽孔添加90微升此緩衝液。容許細胞在室溫下以500rpm搖動20分鐘。將細胞溶解產物收集在1.5毫升微量離心管(eppendorf tube)中且在4℃下以13.2k rpm離心15分鐘。接著以細胞溶解產物的 50微升上清液用於以cAMP Direct ELISA套組(Arbor Assays，Cat # K019-H5)的cAMP評估。將代表性化合物的試管內κ類鴉片受體激動活性(EC50)列示於表4中。
本發明的試驗化合物係在類似用於人類μ和δ類鴉片 受體之效力的檢定法中測試。經測試之各化合物對人類μ和δ類鴉片受體具有大於或等於10μM之EC50，其顯示選擇性κ類鴉片受體激動活性。
活體內效能研究： 動物
將動物以每籠圈養6隻動物群組經一星期，以便於動物習慣於動物飼養條件(25±4℃，60-65%之相對濕度，12：12小時之日光：黑暗循環，在早上7.30開燈)。所有的動物實驗係根據依照由‘Zydus Research Center animal ethical committee’批准之國際合法的指導方針進行。
疼痛模式 使用乙酸誘發之扭動模式的活體內(ED 50 )測定
乙酸誘發之扭動檢定法可檢測類鴉片藥物作用在末梢、脊髓和上脊髓層的抗致痛活性。動物在測試前禁食12至16小時。致痛性反應(腹部收縮或扭動)係在0分鐘時間經腹膜內(i.p.)投予稀釋之乙酸(以0.6%，10毫升/公斤用於小鼠，及以2.5%，0.5毫升用於大鼠)而誘發。
在小鼠實驗中，將化合物經口、靜脈內(i.v.)或皮下(s.c.)投予。為了測定抗致痛效力及效能，給出在投予乙酸前5分鐘以試驗化合物建構之全劑量反應曲線。藉由使用增加投予乙酸前的預處理時間(5、60和120分 鐘)以劑量反應曲線研究期間界定之次最大有效劑量來測定作用持續期間。在大鼠實驗中，將化合物在乙酸投予前15分鐘經口、靜脈內(i.v.)或皮下(s.c.)投予。在投予乙酸後計數經15分鐘的扭動次數。將扭動定義成腹部區域的收縮，常常偕同後腿的延伸。最大的可能止痛效應百分比(MPE)經計算如下：% MPE=100-〔(以試驗化合物處理之動物的扭動次數/以媒劑處理之動物的扭動次數)〕x100。ED50劑量係使用GraphPad Prism測定。一些試驗化合物的代表性數據(ED50)列示於表5中。
試驗化合物的CNS效應評定
將試驗化合物溶解在生理食鹽水中，經口、腹膜內(i.v.)或皮下(s.c.)路徑投予。注入3毫克/公斤之第一劑量且觀察動物(大鼠或小鼠)的自發性運動、鎮靜及強直性昏厥。若藥力學效應存在或不存在，則分別將劑量按比例減少或增加。顯示出藥力學效應的最低劑量視為是閾劑量(TD)。
試驗化合物的止痛效應對鎮靜效應：
以試驗化合物抑制乙酸誘發之扭動為止痛效應的適效性，而且以試驗化合物引起的減少自發性運動、鎮靜及強直性昏厥可用作為其一般鎮靜效應的量度。安全指數(SI)可以TD對ED50劑量之比計算。代表性化合物(化合物4、5、15、35和36)顯示50-100倍安全指數，其表明試驗化合物沒有主要與其他的類鴉片受體激動劑相關聯的CNS副作用。
該等化合物有用於減緩由慢性發炎疾病(諸如類風濕性關節炎)施加的疼痛及痛苦，以及治療由手術或腹膜炎誘發之胃腸蠕動障礙(諸如腸阻塞)。較佳的利用性為產生末梢止痛而沒有經CNS媒介之類鴉片副作用。例如，可減輕由腹腔鏡手術所誘發之腹部疼痛。
本發明提供治療或預防哺乳動物(諸如人類)中與κ類鴉片受體相關聯的疾病或病況之方法，其中該方法包括將包含有效量之本發明的通式(I)化合物之組成物投予哺乳動物。在另一實施態樣中，與κ類鴉片受體相關聯的病況為疼痛、發炎、皮膚瘙癢、水腫、腸阻塞、痙咳或青光眼。
本發明的新穎化合物可藉由與適合的賦形劑以熟知的技術、方法及濃度組合而調配成適合的醫藥上可接受之組成物。
式(I)化合物或含有彼等之醫藥組成物係用作為 KOR激動劑及適合於人類和其他溫血動物之藥品，且可經口、局部或非經腸投予方式投予。
因此，包含本發明的化合物之醫藥組成物可包含適合的黏結劑、適合的增積劑&/或稀釋劑及可能必要的任何其他適合的劑。醫藥組成物可隨意地以適合的包膜劑適當地包膜。
本發明的化合物(I)為KOR激動劑且有用治療或預防其中涉及κ類鴉片受體(KOR)之疾病，諸如治療或預防內臟疼痛、痛覺過敏、類風濕性關節發炎、骨關節發炎、IBD發炎、IBS發炎、眼發炎、耳發炎或自體免疫發炎。
在實施態樣之一者中，本發明的式(I)可與一或多種適合的醫藥活性劑組合而共同投予。在特別的實施態樣中，本發明的醫藥組成物可與一或多種其他的治療化合物或佐劑共同投予或可包括該等化合物或佐劑，諸如但不限於其他的類鴉片、大麻鹼、抗抑鬱劑、抗痙攣劑、精神抑制劑、抗組織胺、乙醯胺苯酚、皮質類固醇、離子通道阻斷劑、非類固醇抗發炎藥物(NSAID)和利尿劑，許多該等化合物或佐劑係與本發明的化合物協同作用。
適合的類鴉片包括而不限於阿芬太尼(alfentanil)、阿法羅定(alphaprodine)、阿尼利定(anileridine)、布馬佐辛(bremazocine)、可待因(codine)、右旋嗎醯胺(dextromoramide)、地佐辛(dezocine)、二乙醯嗎啡(diamorphine)、二氫可待因(dihydrocodeine)、二氫 嗎啡、乙基卡他佐辛(ethylketazocine)、乙基嗎啡、芬太尼(fentanyl)、氫可酮(hydrocodone)、氫嗎啡酮(hydromorphone)、洛呱丁胺(loperamide)、美沙酮(methadone)、嗎啡、納洛芬(nalorphine)、羥可酮(oxycodone)、羥嗎啡酮(oxymorphone)、普匹蘭(propiram)和曲馬多(tramadol)。
本發明的一個實施態樣係以μ類鴉片劑量利用效應(dose-sparing effect)為目的而共同調配及/或共同投予式(I)化合物與μ類鴉片受體激動劑，諸如嗎啡、芬太尼或羥可酮，其中減少μ類鴉片的劑量，使常見的μ類鴉片副作用減至最少，其包括便秘、噁心、嘔吐、嗜睡、呼吸抑制、瘙癢、精神混亂和癲癇發作。
可與本發明的醫藥組成物共同投予或併入其中之適合的抗抑鬱劑包括例如三環抗抑鬱劑，諸如米帕明(imipramine)、地昔帕明(desipramine)、曲米帕明(trimipramine)和氯丙咪嗪(clomipramine)。可與本發明的醫藥組成物共同投予或併入其中之適合的精神抑制劑包括任何精神抑制劑，例如具有D2多巴胺受體拮抗活性之化合物，諸如多潘利酮(domperidone)、滅吐靈(metoclopramide)、佐替平(zotepine)、氯丙秦(chlorpromazine)、乙醯吩嗪(acetophenazine)、丙氯拉秦(prochlorperazine)和甲哌硫丙硫蒽(thiothixene)。抗痙攣劑(諸如苯巴比妥(phenobarbital)、苯洛英(phenyloin)、卡馬氮呯(carbamazepine)、丙戊酸 (valporic acid)、加巴噴汀(gabapentin)和托吡酯(topiramate))亦可併入本發明的醫藥組成物中。肌肉鬆弛劑(諸如美索巴莫(methocarbamol)、地西泮(diazepam)和氯唑沙宗(chlorzoxazone))；抗偏頭痛劑(諸如舒馬坦(sumitriptan)；興奮劑(諸如咖啡因)；抗組織胺(諸如氯芬尼拉明(chloropheniramine)和比拉明(pyrilamine))；離子通道阻斷劑(諸如鈉離子通道阻斷劑、卡馬氮呯(carbamazepine)、鈣離子通道阻斷劑，諸如齊考諾肽(ziconotide))；適合的NSAID(諸如胺基芳基羧酸衍生物、芳基乙酸衍生物、芳基丁酸衍生物、芳基丙酸衍生物、苯基烷酸衍生物和水楊酸衍生物)；以及皮質類固醇(諸如甲基-去氫皮質醇、氫皮質酮、皮質酮和去炎松(triameinolone))可併入本發明的醫藥組成物中。
在醫藥組成物及其單位劑型中的活性組份(亦即根據本發明的式(I)化合物)之量可取決於特別的應用方法、特別的化合物效力及所欲濃度而廣泛地改變或調整。活性組份之量通常係在介於組成物重量的0.5%至90%之間的範圍內。
雖然本發明已以其特定的實施態樣為角度來說明，但是特定的修改及同等物為那些熟習本技術領域者所明白且意欲包括在本發明的範圍內。

Claims (8)

  1. 一種具有通式(I)的經分離之短鏈胜肽：A-B-C-D-E (式I)或彼等之互變異構物形式、彼等之鏡像異構物、彼等之非鏡像異構物、彼等之立體異構物、彼等之醫藥上可接受之鹽及含有彼等之醫藥組成物，其中‘A’和‘B’之各者在每次出現時獨立地選自Phe、α-Me-Phe、Tyr、苯基甘胺酸、高苯基丙胺酸(homophenylalanine)、環己基甘胺酸、環己基丙胺酸，其中存在於該等胺基酸之任一者中的該芳族環可經H、鹵基、NO2、NH2、烷基、CF3和CN取代，‘C’係選自正白胺酸、Phe、Ala、Leu、α-Me-Leu、高白胺酸、Val、1-胺基環己烷羧酸、1-胺基環戊烷羧酸、環己基甘胺酸；‘D’係選自由下列所組成之群組：Arg、Lys、Har、Orn、Ala、Hlys、正白胺酸、His；‘E’係選自由下列所組成之群組： 其中R在每次出現時選自H、-NR’R”、-CN、-COOR’、-CONR’R”、-CO(CH2)n-OR’、-OR’、-(CH2)nOR’、-SO2R’或-SO2NR’R”、-(CH2)nCOOR’、-(CH2)nCONR’R”、-(CH2)nNR’R”、-NH(CH2)nCOOR’、-(CH2)nCONHR、-CH2CON[(CH2)nCOOR’]2、-CH2CON[(CH2)nOR’]2、-COCH2N[(CH2)nCOOR’]2、-CO(CH2)n-NR’R”、-CO(CH2)nCOOR’、-CO(CH2)nCONR’R”、-(CH2)nCONHNR’R”、-CO(CH2)nCONHNR’R”、-(CH2)nNHNR’R”、-(CH2)nCN、-CHR1COOR’、-CR1R2COOR’、-烷基芳基、芳基、C1-C10烷基、甲脒基、經C1-C6烷基取代之甲脒基，其中R’和R”之各者在每次出現時可獨立地或同時選自H、C1-C10烷基、支鏈烷基、烷基芳基、芳基，或R’與R”可組合形成4至6員環；n=1至10，其中R1和R2在每次出現時可獨立地或同 時選自烷基和鹵素；在替代的實施態樣中，R和R’之各者亦可代表選自由下列所組成之群組的胺基酸：Asp、Glu、Asn、Gln、Lys、Arg、His、Ala、Ser、Thr、Leu、Val、Gly、Har、2-胺基庚二酸。
  2. 如申請專利範圍第1項之胜肽，其中‘A’和B之各者係獨立地選自Phe和Tyr。
  3. 如申請專利範圍第1項之胜肽，其中C係選自Leu、正白胺酸和1-胺基環己烷羧酸。
  4. 如申請專利範圍第1項之胜肽，其中D係選自Lys、Arg和Ala。
  5. 如申請專利範圍第1項的式(I)之胜肽，其係選自：
  6. 一種醫藥組成物，其包含治療有效量的如申請專利範圍第1項之式(I)化合物及隨意地一或多種醫藥上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。
  7. 一種如前述申請專利範圍任一項之化合物於製備藥品之用途，該藥品係用於治療或預防內臟疼痛、痛覺過敏、類風濕性關節發炎、骨關節發炎、IBD發炎、IBS發炎、眼發炎、耳發炎或自體免疫發炎。
  8. 如申請專利範圍第6項之醫藥組成物，其係與適合的類鴉片、大麻鹼、抗抑鬱劑、抗痙攣劑、精神抑制劑、抗組織胺、乙醯胺苯酚、皮質類固醇、離子通道阻斷劑、非類固醇抗發炎藥物(NSAID)和利尿劑組合。
TW105114457A 2015-05-11 2016-05-10 作為ｋ類鴉片受體（ＫＯＲ）激動劑之新穎短鏈胜肽 TW201706286A (zh)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
IN1849MU2015 2015-05-11

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW201706286A true TW201706286A (zh) 2017-02-16

Family

ID=56345189

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW105114457A TW201706286A (zh) 2015-05-11 2016-05-10 作為ｋ類鴉片受體（ＫＯＲ）激動劑之新穎短鏈胜肽

Country Status (6)

Country Link
US (1) US10550150B2 (zh)
EP (1) EP3294315A2 (zh)
JP (1) JP6651546B2 (zh)
AR (1) AR104784A1 (zh)
TW (1) TW201706286A (zh)
WO (1) WO2016181408A2 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113624898A (zh) * 2021-08-23 2021-11-09 成都诺和晟泰生物科技有限公司 一种手性镇痛类多肽药物的纯化方法

Families Citing this family (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2015238537B2 (en) 2014-03-26 2019-08-01 F. Hoffmann-La Roche Ag Bicyclic compounds as autotaxin (ATX) and lysophosphatidic acid (LPA) production inhibitors
RU2746481C1 (ru) 2015-09-04 2021-04-14 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Феноксиметильные производные
CN109563133B (zh) 2016-09-27 2020-09-11 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 多酰胺化合物及其用途
JP7090099B2 (ja) 2017-03-16 2022-06-23 エフ．ホフマン－ラ ロシュ アーゲー Ａｔｘインヒビターとしての新規二環式化合物
WO2018167001A1 (en) 2017-03-16 2018-09-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Heterocyclic compounds useful as dual atx/ca inhibitors
DK3483164T3 (da) 2017-03-20 2020-03-23 Forma Therapeutics Inc Pyrrolopyrrolsammensætninger som pyruvatkinase (pkr) aktivatorer
EP3656782B1 (en) 2017-07-21 2021-12-22 Sichuan Haisco Pharmaceutical Co., Ltd. Peptide amide compound and preparation method and medical use thereof
US20220031671A1 (en) 2018-09-19 2022-02-03 Forma Therapeutics, Inc. Treating sickle cell disease with a pyruvate kinase r activating compound
US20230055923A1 (en) * 2018-09-19 2023-02-23 Forma Therapeutics, Inc. Activating pyruvate kinase r
EP3852792A4 (en) * 2018-09-19 2022-07-06 Forma Therapeutics, Inc. INHIBITION OF UBIQUITIN-SPECIFIC PEPTIDASE 9X
JP2022501362A (ja) * 2018-09-19 2022-01-06 フォーマ セラピューティクス，インコーポレイテッド ユビキチン特異的ペプチダーゼ９ｘの阻害
WO2021013086A1 (zh) * 2019-07-25 2021-01-28 四川海思科制药有限公司 氘代肽酰胺类化合物及其制备方法和在医药上的用途
CN114341155A (zh) * 2019-09-10 2022-04-12 四川海思科制药有限公司 一种肽酰胺类化合物及其中间体的制备方法
CN110790817A (zh) 2019-11-12 2020-02-14 成都诺和晟泰生物科技有限公司 一种多肽类化合物、制剂、药物组合物及制备方法、应用
US20230174487A1 (en) * 2020-04-30 2023-06-08 Medshine Discovery Inc. Phenylpropionamide compound and use thereof
JP2023536221A (ja) 2020-06-25 2023-08-24 ヒューマンウェル ファーマシューティカル ユーエス 医学的障害の治療のためのペプチド
CN115043904A (zh) * 2021-03-08 2022-09-13 成都奥达生物科技有限公司 一种长效k阿片受体激动剂

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4251438A (en) * 1979-06-14 1981-02-17 The Upjohn Company Piperazinone and piperazine polypeptides
IT1274018B (it) 1994-02-23 1997-07-14 Riace Ets Derivati del 3,8-diazabiciclo(3.2.1.)ottano ad attivita' analgesica
US5965701A (en) 1997-12-23 1999-10-12 Ferring Bv Kappa receptor opioid peptides
EP2029617A2 (en) 2006-05-26 2009-03-04 Cara Therapeutics, Inc. N-oxides of kappa opioid receptor peptides
CA2653072A1 (en) * 2006-05-26 2007-12-06 Cara Therapeutics, Inc. Method for elevating prolactin in mammals
US8906859B2 (en) 2006-11-10 2014-12-09 Cera Therapeutics, Inc. Uses of kappa opioid synthetic peptide amides
US7713937B2 (en) 2006-11-10 2010-05-11 Cara Therapeutics, Inc. Synthetic peptide amides and dimeric forms thereof
WO2008057608A2 (en) 2006-11-10 2008-05-15 Cara Therapeutics, Inc. Synthetic peptide amides
US7842662B2 (en) 2006-11-10 2010-11-30 Cara Therapeutics, Inc. Synthetic peptide amide dimers
US8236766B2 (en) 2006-11-10 2012-08-07 Cara Therapeutics, Inc. Uses of synthetic peptide amides
US20150150935A1 (en) 2012-06-05 2015-06-04 Cara Therapeutics, Inc. Peripheral kappa receptor agonists for reducing pain and inflammation
US20160250277A1 (en) 2013-10-28 2016-09-01 Cara Therapeutics, Inc. Peripheral kappa opioid receptor agonists for preventing, inhibiting or treating nausea and vomiting
US9785152B2 (en) 2014-02-07 2017-10-10 Crown Equipment Corporation Systems, methods, and mobile client devices for supervising industrial vehicles

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113624898A (zh) * 2021-08-23 2021-11-09 成都诺和晟泰生物科技有限公司 一种手性镇痛类多肽药物的纯化方法
CN113624898B (zh) * 2021-08-23 2023-08-25 成都诺和晟泰生物科技有限公司 一种手性镇痛类多肽药物的纯化方法

Also Published As

Publication number Publication date
WO2016181408A2 (en) 2016-11-17
WO2016181408A3 (en) 2016-12-22
US10550150B2 (en) 2020-02-04
JP6651546B2 (ja) 2020-02-19
US20180282369A1 (en) 2018-10-04
AR104784A1 (es) 2017-08-16
EP3294315A2 (en) 2018-03-21
JP2018516894A (ja) 2018-06-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6651546B2 (ja) カッパ（κ）オピオイド受容体（ＫＯＲ）アゴニストとしての新規の短鎖ペプチド
JPH06501938A (ja) ペプチドよりなるｈｉｖ複製阻害剤
JPH09511500A (ja) Ｎ−置換化グリシンを含むブラジキニン拮抗薬ペプチド
SK83995A3 (en) New peptides
US7220725B2 (en) Pharmaceutical composition comprising an analgesic peptide and method for treating pain
CN115298194A (zh) Vipr2拮抗肽
Hardy et al. Peripherally acting enkephalin analogs. 1. Polar pentapeptides
JP2001518515A (ja) リウマチ性関節炎の治療組成物および治療方法
JP6143270B2 (ja) マイオスタチン阻害ペプチド
JP2019508419A (ja) 新規アルファコノトキシンペプチド
SK281899B6 (sk) Bicyklické peptidy, farmaceutický prostriedok s ich obsahom a ich použitie
AU671118B2 (en) Tachykinin antagonist tricyclic compounds, preparation of same and pharmaceutical compositions containing such compounds
CA2405724C (en) Substance p analogs for the treatment of cancer
JP6952320B2 (ja) 新規ｎｋ３受容体アゴニスト
US6596692B1 (en) Substance P analogs for the treatment of cancer
EP0423236A1 (en) Peptides with extraordinary opioid receptor selectivity
CZ55496A3 (en) Tripeptides, processes of their preparation, their use, pharmaceutical compositions and diagnostic agents based thereon
RU2144038C1 (ru) Пептиды для ингибирования высвобождения пепсина, фармацевтическая композиция
WO2024043249A1 (ja) 環状ペプチドまたはその塩、およびｍｄｍｘ阻害剤
JPH06509571A (ja) タキキニン拮抗薬としての環状ヘキサペプチドの製法およびその薬学的化合物
RU2146681C1 (ru) Опиоидные пептиды и фармацевтическая композиция
JP2023529825A (ja) コンフォメーション化された拘束型α－ＲＧＩＡアナログ
JPH10500404A (ja) 混合したμアゴニスト／δアンタゴニストの性質を有する新規なオピオイドペプチド類似体
JPH0482897A (ja) トリペプチドアミド類
JP2513440B2 (ja) 新規ペプチド