TW201641020A

TW201641020A - 有益於植物生長及治療植物疾病之微生物組合物及使用方法

Info

Publication number: TW201641020A
Application number: TW104144291A
Authority: TW
Inventors: 賽夫雅泰歌夫; 德雷李丹尼爾凡; 羅迪克麥利歐; 凱文ＲＪ布洛斯特; 約翰Ｅ基比
Original assignee: 富曼西公司
Priority date: 2014-12-29
Filing date: 2015-12-29
Publication date: 2016-12-01
Also published as: US10375964B2; UA124376C2; US9622484B2; US20160183538A1; JP2018508471A; EP3240403A1; BR112017014053B1; RU2721966C2; AR103287A1; EP3240403B1; CN114617136B; JP6758296B2; CA2970688C; CN107960103B; PL3240403T3; BR112017014053A2; UY36478A; PT3240403T; MX2017008728A; RU2017127137A3

Abstract

本發明提供關於解澱粉芽孢桿菌RTI301新菌株與枯草芽孢桿菌RTI477新菌株之組合的組合物及方法，該組合具有促生長活性及對抗植物病原體之活性。當含有RTI301及RTI477菌株之該等組合物施用於植物根部、種子、癒合組織、移植物及插條時，有用於有益於植物生長及/或賦予保護以避免病原性感染。觀測到此等菌株之組合的協同結果，且菌株組合適用於增加包括大豆及玉米之作物的產量。含有該等菌株組合之該等組合物可單獨或與其他微生物、生物或化學殺蟲劑、殺真菌劑、殺線蟲劑、殺菌劑、除草劑、植物提取物、植物生長調節劑及肥料組合施用。

Description

有益於植物生長及治療植物疾病之微生物組合物及使用方法

相關申請案之交叉參考

本申請案主張2014年12月29日申請之美國臨時申請案第62/097,287號之權益，該案之揭示內容以全文引用的方式併入本文中。

本發明揭示之標的物係關於包含分離之微生物菌株之組合物，其用於施用於植物、植物種子及植物周圍土壤，以有益於植物生長及治療植物疾病。在某些情況下，微生物菌株與具有抗微生物特性之化學活性劑組合輸送至植物、植物種子及植物周圍土壤。

已知對植物生長及健康具有有益作用之多種微生物存在於土壤中，特別與植物聯合存活於根區中(植物根圍促生長細菌「PGPR」)，或以內寄生菌形式存在於植物內。其有益促進植物生長特性包括固氮；鐵螯合；磷酸鹽溶解；抑制非有益微生物；抗蟲害；誘導系統抗性(ISR)；系統獲得抗性(SAR)；植物物質分解於土壤中以增加有用土壤有機物；及合成植物激素，諸如吲哚-乙酸(IAA)、乙偶姻及2,3-丁二醇，其刺激植物生長、發育及對環境壓力(諸如乾旱)作出反應。另外，此等微生物可藉由使前驅分子1-胺基環丙烷-1-甲酸酯 (ACC)分解來干擾植物之乙烯壓力反應，藉此刺激植物生長且減緩果實熟化。此等有益微生物可改善土壤品質、植物生長、產量及作物品質。各種微生物展現生物活性以便適用於控制植物疾病。此類生物殺蟲劑(活生物體及由此等生物體天然產生之化合物)可比合成肥料及殺蟲劑更安全且更生物可降解。

真菌植物病原體，包括(但不限於)葡萄孢屬(Botrytis spp.)(例如灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea))、鐮刀菌屬(Fusarium spp.)(例如尖孢鐮刀菌(F.oxysporum)及禾穀鐮刀菌(F.graminearum))、絲核菌屬(Rhizoctonia spp.)(例如紋枯病菌(R.solani))、稻瘟菌屬(Magnaporthe spp.)、球腔菌屬(Mycosphaerella spp.)、柄鏽菌屬(Puccinia spp.)(例如小麥葉鏽菌(P.recondita))、疫菌屬(Phytopthora spp.)及層鏽菌屬(Phakopsora spp.)(例如豆薯層鏽菌(P.pachyrhizi))為一種類型之植物蟲害，其可在農業及園藝行業中造成嚴重經濟損失。化學試劑可用於控制真菌植物病原體，但使用化學試劑具有如下缺點，包括成本高、缺乏功效、出現真菌抗性菌株及不希望之環境影響。另外，除靶向處理之植物病原體之外，此類化學處理往往不加選擇而可能會對有益細菌、真菌及節肢動物有不利影響。第二種類型之植物蟲害為細菌病原體，包括(但不限於)歐文氏菌屬(Erwinia spp.)(諸如菊歐文氏菌(Erwinia chrysanthemi))、泛菌屬(Pantoea spp.)(諸如綠檸檬泛菌(P.citrea))、黃單孢菌屬(Xanthomonas)(例如野油菜黃單孢菌(Xanthomonas campestris))、假單孢菌屬(Pseudomonas spp.)(諸如丁香假單孢菌(P.syringae))及青枯病菌屬(Ralstonia spp.)(諸如番茄青枯病菌(R.soleacearum))，其在農業及園藝行業中造成嚴重經濟損失。類似於病原性真菌，使用化學試劑處理此等細菌病原體具有缺點。病毒及病毒樣生物體包含第三種類型之植物致病劑，其難以控制，但細菌微生物可經由誘導系統抗性(ISR)對其提供植物抗性。因此，可用作生物肥料及/或生物殺蟲劑來控制病原性真菌、病毒及細菌之微生物為合乎需要的且高度需要其用以提高農業可持續性。最後一種類型之植物病原體包括植物病原性線蟲及昆蟲，其可造成植物嚴重損害及損失。

已報導芽孢桿菌屬之一些成員為生物控制菌株，且一些已應用於商業產品中(Joseph W.Kloepper等人，2004，Phytopathology第94卷，第11期，1259-1266)。舉例而言，當前用於商業生物控制產品中之菌株包括：地衣芽孢桿菌(Bacillus pumilus)菌株QST2808，用作SONATA及BALLAD-PLUS中之活性成分，由BAYER CROP SCIENCE生產；地衣芽孢桿菌菌株GB34，用作YIELDSHIELD中之活性成分，由BAYER CROP SCIENCE生產；枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)菌株QST713，用作SERENADE之活性成分，由BAYER CROP SCIENCE生產；枯草芽孢桿菌菌株GBO3，用作KODIAK及SYSTEM3中之活性成分，由HELENA CHEMICAL COMPANY生產。蘇雲金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensis)及強固芽孢桿菌(Bacillus firmus)之各種菌株已用作對抗線蟲及病媒昆蟲之生物控制劑，且此等菌株充當許多市售生物控制產品之基礎，該等產品包括NORTICA及PONCHO-VOTIVO，由BAYER CROP SCIENCE生產。另外，當前用於商業生物刺激產品中之芽孢桿菌菌株包括：解澱粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)菌株FZB42，用作RHIZOVITAL 42中之活性成分，由ABiTEP GmbH生產；以及各種其他枯草芽孢桿菌屬，包括其作為全細胞，包括其在生物刺激產品中之醱酵提取物，諸如由JHBiotech Inc.生產之FULZYME。

本發明揭示之標的物提供有益於植物生長及治療植物疾病之微生物組合物及其使用方法。

在一個實施例中，提供一種有益於植物生長及/或植物健康之組合物，該組合物包含：以ATCC第PTA-121165號寄存之解澱粉芽孢桿菌RTI301或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物，及以ATCC第PTA-121167號寄存之枯草芽孢桿菌RTI477或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物，其中該組合物施用於植物種子、植物根部或植物周圍土壤有益於植物生長及/或植物健康。

在一個實施例中，提供一種有益於植物生長及/或植物健康之方法，該方法包含將包含以下之組合物輸送至植物種子、植物根部或植物周圍土壤：以ATCC第PTA-121165號寄存之解澱粉芽孢桿菌RTI301或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物；及以ATCC第PTA-121167號寄存之枯草芽孢桿菌RTI477或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物，其中該組合物之輸送有益於植物生長及/或植物健康。

在一個實施例中，提供一種有益於植物生長及/或植物健康之方法，該方法包含將第一組合物與第二組合物之組合輸送至植物種子、植物根部或植物周圍土壤，該第一組合物包含以ATCC第PTA-121165號寄存之解澱粉芽孢桿菌RTI301或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物，且該第二組合物包含以ATCC第PTA-121167號寄存之枯草芽孢桿菌RTI477或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物，其中該組合之輸送有益於植物生長及/或植物健康。

在一個實施例中，提供一種植物種子，其中該植物種子用有益於植物生長及/或植物健康之組合物塗佈，該組合物包含：以ATCC第PTA-121165號寄存之解澱粉芽孢桿菌RTI301或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物的孢子；及以ATCC第PTA-121167號寄存之枯草芽孢桿菌RTI477或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物的孢子。

在一個實施例中，提供一種植物種子，其中該植物種子用有益於植物生長及/或植物健康之組合物塗佈，該組合物包含：以ATCC第PTA-121165號寄存之解澱粉芽孢桿菌RTI301或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物的孢子；以ATCC第PTA-121167號寄存之枯草芽孢桿菌RTI477或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物的孢子；以及畢芬寧(bifenthrin)殺蟲劑。

在一個實施例中，提供一種有益於植物生長及/或植物健康之方法，該方法包含將植物種子種植於適合生長介質中，其中該種子已經包含以下之組合物塗佈：以ATCC第PTA-121165號寄存之解澱粉芽孢桿菌RTI301或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物的孢子；及以ATCC第PTA-121167號寄存之枯草芽孢桿菌RTI477或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物的孢子，以適合於有益於植物生長及/或植物健康之量存在。

在一個實施例中，提供一種有益於植物生長之組合物，該組合物包含：以ATCC第PTA-121165號寄存之解澱粉芽孢桿菌RTI301或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物；以ATCC第PTA-121167號寄存之枯草芽孢桿菌RTI477或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物；以及畢芬寧殺蟲劑。

在一個實施例中，提供一種有益於植物生長之組合物，該組合物包含：以ATCC第PTA-121165號寄存之解澱粉芽孢桿菌RTI301或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物；以ATCC第PTA-121167號寄存之枯草芽孢桿菌RTI477或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物；以及畢芬寧殺蟲劑，其中該組合物呈與液體肥料相容之調配物。

在一個實施例中，提供一種有益於植物生長之組合物，該組合物包含：以ATCC第PTA-121165號寄存之解澱粉芽孢桿菌RTI301或其具有所有其鑑別特徵之突變體的生物純培養物；以ATCC第PTA-121167號寄存之枯草芽孢桿菌RTI477或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物；以及包含來自白羽扇豆(Lupinus albus doce)之提取物、BLAD多肽或BLAD多肽片段之一或組合的殺真菌劑。

在一個實施例中，提供一種產品，該產品包含：包含以ATCC第PTA-121165號寄存之解澱粉芽孢桿菌RTI301或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物及以ATCC第PTA-121167號寄存之枯草芽孢桿菌RTI477或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物的第一組合物；包含微生物、生物或化學殺蟲劑、殺真菌劑、殺線蟲劑、殺菌劑、除草劑、植物提取物、植物生長調節劑或肥料之一或組合的第二組合物，其中該第一組合物及該第二組合物分開包裝；以及視情況存在之說明書，該說明書係針對用於將適合於有益於植物生長之量的第一組合物與第二組合物之組合輸送至：植物葉、植物莖皮、植物果實、植物花、植物種子、植物根部、植物剪枝、植物移植物、植物癒合組織；植物周圍土壤或生長介質；在土壤或生長介質中播種植物種子之前的土壤或生長介質；或在土壤或生長介質中種植植物、植物剪枝、植物移植物或植物癒合組織之前的土壤或生長介質。

圖1展示根據本發明之一或多個實施例，與兩種解澱粉芽孢桿菌參考菌株解澱粉芽孢桿菌FZB42及解澱粉芽孢桿菌TrigoCor1448之對應區域相比，圍繞且包括在解澱粉芽孢桿菌菌株RTI301中發現之獨特羊毛硫抗生素生物合成操縱子的基因組結構之示意圖。

圖2A為展示對照植物在生長13天後所提取之小麥植物的影像。圖2B為展示用RTI477菌株接種之植物在生長13天後所提取之小麥植物的影像。此等影像展示根據本發明之一或多個實施例，枯草芽孢桿菌菌株RTI477對小麥中早期植物生長之積極作用。

圖3A為展示點樣至菌株解澱粉芽孢桿菌RTI472之菌苔上的菌株解澱粉芽孢桿菌RTI301之影像。圖3B為展示點樣至菌株枯草芽孢桿菌RTI477之菌苔上的菌株解澱粉芽孢桿菌RTI301之影像。此等影像展示根據本發明之一或多個實施例，解澱粉芽孢桿菌菌株RTI301與枯草芽孢桿菌菌株RTI477之間的相容性。

圖4A為展示根據本發明之一或多個實施例，菌株解澱粉芽孢桿菌RTI301之形態的影像。圖4B為展示根據本發明之一或多個實施例，菌株枯草芽孢桿菌RTI477之形態的影像。

圖5A展示對照植物。圖5B展示以10⁶cfu/ml接種RTI301加上RTI477(比率3：1)之植物。圖5A-5B為展示根據本發明之一或多個實施例，大豆種子接種解澱粉芽孢桿菌RTI301加上枯草芽孢桿菌菌株RTI477之組合所產生的對早期植物生長之積極作用且生長8天後提取的影像。

圖6為展示由包括解澱粉芽孢桿菌及枯草芽孢桿菌之微生物物種產生的先前報導之豐原素型及去羥基豐原素型環狀脂肽，及由根據本發明之一或多個實施例，解澱粉芽孢桿菌RTI301及枯草芽孢桿菌RTI477分離株中一或兩者產生之新鑑別(以粗體展示)之豐原素型及去羥基豐原素型分子的示意圖。

術語「一(a/an)」及「該」在用於本申請案(包括申請專利範圍)時係指「一或多個」。因此，除非上下文明確相反，否則例如提及「植物」包括複數種植物。

在本說明書及申請專利範圍通篇中，除上下文另外要求之外，術語「包含(comprise/comprises/comprising)」以非排斥含義使用。同樣，術語「包括」及其語法變化形式意欲為非限制性的，使得清單中項目之列舉不排除可取代或添加至所列項目中之其他類似項目。

出於本說明書及申請專利範圍之目的，術語「約」在與一或多個數字或數值範圍結合使用時應理解為指所有此類數字，包括範圍內之所有數字，且藉由擴展邊界高於及低於所闡述數值來修改彼範圍。由端點列舉之數值範圍包括包含在彼範圍內及彼範圍內任何範圍之所有數字，例如全部整數，包括其分數(例如，列舉1至5包括1、2、3、4及5，以及其分數，例如1.5、2.25、3.75、4.1及其類似者)。

出於本說明書及申請專利範圍之目的，術語「代謝物」及「化合物」當與由RTI301菌株或其他解澱粉芽孢桿菌菌株產生之具有抗微生物活性之化合物結合使用時可互換使用。

在本發明之一或多個實施例中，提供有益於植物生長及/或植物健康之組合物及方法。在一個實施例中，提供一種有益於植物生長及/或植物健康之組合物，該組合物包括兩種或兩種以上相容微生物，其中具有抗微生物特性之第一微生物藉由抑制土壤中存在或與植物一起生活之內源性微生物之生長及發育而用於產生生態棲位。第二微生物具有有益於植物生長及/或植物健康之特性且與第一微生物生長相容。第二微生物以足夠變得土著化且有益於植物生長及/或植物健康之量存在。組合物施用於植物種子、植物根部或植物周圍土壤有益於植物生長及/或植物健康。有益於植物生長及/或植物健康之第二微生物之特性包括植物產量增加、幼苗活力提高、根發育改善、植物生長改善、植物健康提高、外觀改善、對植物病原體之抗性提高、病原性感染減少之一或其組合。植物病原體可包括昆蟲、線蟲、植物病原性真菌或植物病原性細菌之一或組合。

在另一個實施例中，提供一種有益於植物生長及/或植物健康之方法，該方法包含將包括兩種或兩種以上相容微生物之組合物輸送至植物種子、植物根部或植物周圍土壤。組合物包括具有抗微生物特性且以適合於抑制植物周圍土壤中存在或與植物一起生活之內源性微生物之生長的量存在之第一微生物之至少一種生物純培養物。此為建立待變得土著化之第二微生物之生態棲位。組合物亦包括具有有益於植物生長及/或植物健康之特性的第二微生物之至少一種生物純培養物，其中第二微生物之生長與第一微生物之生長相容，且其中第二微生物以適合於變得土著化且有益於植物生長及/或植物健康之量存在。組合物輸送至植物種子、植物根部或植物周圍土壤有益於植物生長及/或植物健康。

為促進第二微生物土著化之過程，第二微生物之生長可比第一微生物之生長快，且第二微生物特徵可為群集及高運動性表現型。

組合物及方法包括用於任何類型之植物，包括例如單子葉植物、雙子葉植物、穀物、玉米、甜玉米、爆玉米、玉米種、青貯玉米、飼料玉米、稻穀、小麥、大麥、高粱、蘆筍、漿果、藍莓、黑莓、樹莓、羅甘莓、越橘、蔓越橘、醋栗、接骨木、黑醋栗、蔓越莓、越莓、甘藍型蔬菜、椰菜、甘藍菜、花椰菜、芽甘藍、散葉甘藍、羽衣甘藍、芥菜、球莖甘藍、瓜類蔬菜、黃瓜、哈密瓜、甜瓜、香甘瓜、番南瓜、西瓜、南瓜、茄子、鱗莖類蔬菜、洋蔥、大蒜、蔥、陳皮、橘子、葡萄柚、檸檬、紅橘、橘柚、柚子、果蔬菜、胡椒、番茄、地面櫻桃、樹蕃茄、秋葵、葡萄、香草/香料、綠葉蔬菜、萵苣、芹菜、菠菜、香芹、菊苣、豆科植物/蔬菜(多汁且乾燥之豆子及豌豆)、豆子、四季豆、食莢菜豆、殼豆、大豆、乾豆、回回豆、利馬豆、豌豆、鷹嘴豆、豌豆瓣、扁豆、油料種子作物、芥花、蓖麻、椰子、棉花、亞麻、油棕櫚、橄欖、花生、油菜籽、紅花、芝麻、向日葵、大豆、梨果、蘋果、海棠果、梨、榅桲、夏花山楂、根/塊莖及球莖蔬菜、胡蘿蔔、馬鈴薯、甘薯、木薯、甜菜、薑、辣根、蘿蔔、人參、蕪菁、核果、杏子、櫻桃、油桃、桃子、李子、梅子、草莓、堅果、杏仁、開心果、山核桃、核桃、榛子、板栗、腰果、山毛櫸堅果、胡桃、夏威夷果、獼猴桃、香蕉、(藍)龍舌蘭、草、草皮草、觀賞植物、一品紅、硬木剪枝、栗樹、橡樹、楓樹、甘蔗或甜菜。

用於本發明之組合物及方法的具有抗微生物特性之第一微生物及具有有益於植物生長及/或植物健康之特性的第二微生物可為芽孢桿菌微生物。出於本說明書及申請專利範圍之目的，術語「拮抗」與「抗微生物」在本文中可互換使用。第一微生物可為芽孢桿菌菌株且芽孢桿菌菌株可為解澱粉芽孢桿菌。具有有益於植物生長及/或植物健康之特性的第二微生物可為枯草芽孢桿菌。有益於植物生長及/或植物健康之特性可為以下中之一或兩者：促生長特性；及賦予保護以避免植物病原性感染及/或治療或控制植物病原性感染的拮抗特性。

下文描述用於本發明之組合物及方法中的具有抗微生物特性之第一微生物及具有有益於植物生長及/或植物健康之特性的第二微生物之實例。舉例而言，鑑別為屬於物種枯草芽孢桿菌之植物相關細菌自生長在北卡羅來納州(North Carolina)之辣木(Moringa oleifera)根部分離且隨後測試促進植物生長及植物病原體拮抗特性。更特定言之，經由高度保守之16S rRNA及rpoB基因之序列分析將分離之細菌菌株鑑別為枯草芽孢桿菌之新菌株(參見實例1)。測得新細菌分離株(稱為「枯草芽孢桿菌RTI477」)之16S RNA序列與枯草芽孢桿菌之三種其他已知菌株、解澱粉芽孢桿菌菌株NS6(KF177175)及枯草芽孢桿菌亞種(Bacillus subtilis subsp.)枯草菌株DSM 10(NR_027552)的16S rRNA基因序列一致。此外，確定RTI477菌株之rpoB序列與已知枯草芽孢桿菌PY79(CP006881)或枯草芽孢桿菌亞種枯草6051-HGW(CP003329)菌株(亦即99%序列一致性；9bp差異)或枯草芽孢桿菌亞種枯草BAB-1a(CP004405)(亦即99%序列一致性；10bp差異)具有最高程度序列相似性。在DNA層面下rpoB基因之序列差異指示RTI477為枯草芽孢桿菌之新菌株。枯草芽孢桿菌RTI477之該菌株於2014年4月17日依據國際承認用於專利程序的微生物寄存布達佩斯條約之條款寄存於美國菌種保藏中心(American Type Culture Collection，ATCC)(Manassas，Virginia，USA)且具有專利寄存編號PTA-121167。

作為具有抗微生物特性之第一微生物之實例，鑑別為屬於物種解澱粉芽孢桿菌之植物相關細菌自生長在紐約(NY)之溫亞德(vineyard)的葡萄藤根圍土壤分離且隨後測試植物病原體拮抗特性。更特定言之，經由高度保守之16S rRNA及rpoB基因之序列分析將分離之細菌菌株鑑別為解澱粉芽孢桿菌之新菌株(參見實例2)。測得新細菌分離株(稱為「解澱粉芽孢桿菌RTI301」)之16S RNA序列與解澱粉芽孢桿菌之三種其他已知菌株、解澱粉芽孢桿菌菌株NS6(KF177175)、解澱粉芽抱桿菌菌株FZB42(NR_075005)及枯草芽孢桿菌亞種枯草菌株DSM 10(NR_027552)的16S rRNA基因序列一致。亦確定RTI301菌株之rpoB基因序列與解澱粉芽孢桿菌植物亞種TrigoCor1448(CP007244)(99%序列一致性；3個鹼基對差異)、解澱粉芽孢桿菌植物亞種AS43.3(CP003838)(99%序列一致性；7個鹼基對差異)、解澱粉芽孢桿菌CC178(CP006845)(99%序列一致性；8個鹼基對差異)及解澱粉芽孢桿菌FZB42(CP000560)(99%序列一致性；8個鹼基對差異)中相同基因具有序列相似性。RTI301菌株鑑別為解澱粉芽孢桿菌。在DNA層面下rpoB基因之序列差異指示RTI301為解澱粉芽孢桿菌之新菌株。解澱粉芽孢桿菌RTI301之該菌株於2014年4月17日依據國際承認用於專利程序的微生物寄存布達佩斯條約之條款寄存於美國菌種保藏中心(ATCC)(Manassas，Virginia，USA)且具有專利寄存編號PTA-121165。

解澱粉芽孢桿菌RTI301菌株之基因組的進一步序列分析揭露該菌株具有同源物在其他緊密相關解澱粉芽孢桿菌RTI301菌株中缺乏的與羊毛硫抗生素生物合成相關之基因(參見實例3)。此在圖1中說明，其展示在解澱粉芽孢桿菌RTI301中發現之獨特羊毛硫抗生素生物合成簇及兩種已知解澱粉芽孢桿菌參考菌株FZB42(中間)及TrigoCor1448(底部)(展示在RTI301菌株下面)之對應區域之基因組結構的示意圖。自圖1可觀測到FZB42及TrigoCor1448菌株缺乏許多存在於此簇中之基因，且存在之許多基因內序列一致性程度低。針對NCBI之非冗餘(nr)核苷酸資料庫對此簇之BLASTn分析展示與解澱粉芽孢桿菌菌株之5'及3'側接區域具有高度同源性(類似於圖1中高度相似性%)。然而，羊毛硫肽生物合成簇為RTI301獨特的，且未觀測到與NCBI nr資料庫中任何先前測序之DNA具有顯著同源性。該等資料表明新鑑別之RTI301具有獨特之羊毛硫抗生素生物合成路徑。

另外，對解澱粉芽孢桿菌RTI301菌株之基因組的進一步序列分析揭露此菌株具有與產生具有抗微生物特性之分子之大量生物合成路徑相關的基因。此等包括枯草菌素(subtilosin)、表面活性素(surfactin)、伊枯草菌素(iturin)、豐原素(fengycin)、解澱粉菌素(amylocyclicin)、地非西丁(difficidin)、桿菌溶素(bacilysin)、桿菌抗黴素(bacillomycin)及芽孢菌素(bacillaene)之生物合成路徑。與具有廣泛範圍抗微生物生物合成路徑之RTI301菌株對比，對RTI477菌株之進一步序列分析揭露此菌株具有與一組更有限具有抗微生物特性之分子的生物合成路徑相關的基因。RTI477菌株具有枯草菌素、豐原素、表面活性素、地非西丁、芽孢菌素、桿菌溶素及桿菌抗黴素之生物合成路徑，但未觀測到伊枯草菌素、羊毛硫抗生素及解澱粉菌素之完整生物合成路徑。

進行實驗以確定RTI301及RTI477菌株之促生長及拮抗活性。本文實例4-6中描述為確定枯草芽孢桿菌RTI477菌株在各種植物中及在變化條件下之促生長及拮抗活性所進行的實驗。實例4描述如盤分析中所量測，枯草芽孢桿菌RTI477分離株對抗主要植物病原體之拮抗活性。實例5描述枯草芽孢桿菌RTI477分離株之各種表現性狀的量測且展示此分離株具有快速生長及強群集表現型。實例6描述小麥中RTI477分離株之促生長活性。將發芽小麥種子在約2×10⁷CFU/mlRTI477菌株之懸浮液中接種2天，且隨後在盆中種植。生長13天後所提取之植物之照片展示於圖2中。圖2A展示對照植物且圖2B展示接種RTI477之植物。確定小麥幼苗之乾重，結果為用枯草芽孢桿菌RTI477菌株接種之植物的總平均植物乾重等於35.41mg，相比而言，未接種對照之重量等於33.38mg，RTI477處理植物乾重比未接種對照增加6%。

類似於RTI477菌株，進行實驗以確定解澱粉芽孢桿菌RTI301菌株在各種植物中及在變化條件下之促生及拮抗活性。此等實驗描述於本文中實例4-5。實例4描述如盤分析中所量測，解澱粉芽孢桿菌RTI301分離株對抗主要植物病原體之拮抗活性。RTI301菌株展示與RTI477菌株相比，對抗廣泛範圍植物病原性微生物之優良拮抗特性。實例5描述解澱粉芽孢桿菌RTI301分離株之各種表現性狀之量測。值得注意地，與RTI301相比，RTI477生長更快且具有強群集表現型。

菌株解澱粉芽孢桿菌RTI301與其他芽孢桿菌分離株之相容性藉由將RTI301菌株點樣至各種其他菌株之菌苔上來測試。此等資料描述於實例7中。此實驗結果展示在圖3A-3B中。圖3A-3B為展示菌株解澱粉芽孢桿菌RTI301與枯草芽孢桿菌RTI477之間的生長相容性及RTI301菌株與另一解澱粉芽孢桿菌菌株，以PTA-121166寄存在美國菌種保藏中心(ATCC)之解澱粉芽孢桿菌RTI472之間缺乏相容性的影像。當菌株RTI301點樣至菌株RTI472之菌苔上時(圖3A)，觀測到菌株RTI472生長之清晰抑制區。相比之下，當菌株RTI301點樣至菌株RTI477之菌苔上時(圖3B)，僅僅觀測到RTI477菌株最低程度之抑制且細胞菌苔未清除。因此，推斷RTI301與RTI477之生長為相容的。

不限於任何特定作用機制，如下提出一種作用模式以解釋所觀測到之菌株相容性差異。基於三種測試菌株(亦即RTI301、RTI472及RTI477)之基因組序列，預測此等菌株均產生拮抗化合物桿菌溶素、芽孢菌素、地非西丁及桿菌抗黴素。然而，雖然解澱粉芽孢桿菌RTI301與枯草芽孢桿菌RTI477均具有合成枯草菌素之基因，但此基因在解澱粉芽孢桿菌RTI472之基因組中不存在。枯草菌素為一種細菌素，細菌素為一類由細菌產生以抑制類似或緊密相關菌株生長之蛋白質毒素。因此，假定藉由解澱粉芽孢桿菌RTI301合成之枯草菌素可能為解澱粉芽孢桿菌RTI472生長之抑制劑。相比之下，枯草芽孢桿菌RTI477菌株不由RTI301抑制，因為RTI477菌株產生其自身枯草菌素且因此對化合物具抗性。

亦分析解澱粉芽孢桿菌RTI301與枯草芽孢桿菌RTI477菌株之間的菌株形態差異。展示此等菌株各者形態之影像展示在圖4中：解澱粉芽孢桿菌RTI301(圖4A)及枯草芽孢桿菌RTI477(圖4B)。展示在圖4A-4B中的解澱粉芽孢桿菌RTI301及枯草芽孢桿菌RTI477菌株之菌落形態指示當涉及到運動性時菌株行為可能存在差異。運動性為植物相關細菌進行根圍移生之關鍵性狀。解澱粉芽孢桿菌RTI301生長為界限明確之圓形菌落。相比之下，枯草芽孢桿菌RTI477生長為蓬鬆菌落，此形態指示群集及運動性。群集及運動性為根圍及植物根表面快速移生之相關表現型。再次，不限於任何特定作用機制，假定與枯草芽孢桿菌RTI477菌株形態相關的強群集表現型使得此菌株成為比解澱粉芽孢桿菌RTI301更有效之根圍移生菌。

根據生長相容性及觀測到之表現型差異，測試RTI301與RTI477菌株之組合促進植物生長及健康之能力。進行實驗以確定單獨及組合施用枯草芽孢桿菌RTI477及解澱粉芽孢桿菌RTI301菌株至大豆種子對出芽、根發育及早期植物生長的作用。實驗如實例8中所述，使用RTI301及RTI477之孢子進行。將RTI301與RTI477孢子之組合以1：3、1：1及3：1之比率添加至種子中。資料展示在表V中。大豆種子用濃度為1×10⁶、1×10⁷及1×10⁸之解澱粉芽孢桿菌RTI301接種對植物生長及根發育及結構無影響。大豆種子用相同濃度之枯草芽孢桿菌RTI477接種僅僅提供最低濃度下根發育及結構略微改善。然而，大豆種子用RTI301與RTI477(以1：3之比率)之組合接種使得在所有測試濃度下根發育及早期植物生長得到改善。當RTI301及RTI477以3：1之比率在1×10⁶CFU/ml之濃度下施用時觀測到根發育之最佳結果。種子用3：1此比率之RTI301加上RTI477孢子接種的積極作用之影像展示在圖5A及5B中(A-對照植物；B-接種10⁶cfu/ml之RTI301加上RTI477(比率3：1)之植物)。尤其對根形成及結構具有積極作用，如圖5A-5B中所示。細根毛在水分、養分之吸收及植物與根圈中其他微生物之相互作用中為重要的。此等結果展示雖然與對照植物相比個別菌株之施用幾乎無作用，但施用枯草芽孢桿菌RTI477與解澱粉芽孢桿菌RTI301菌株組合之種子處理提供大豆早期生長及土著化之超過預期的益處。觀測到枯草芽孢桿菌RTI477與解澱粉芽孢桿菌RTI301菌株之組合的協同效應且此協同效應為植物生長提供意外益處。

在大豆中進行額外實驗以檢查使用RTI301與RTI477菌株之組合處理種子對產量之作用。實驗設定如下：1)種子未經處理；2)種子經CRUISERMAXX(噻蟲嗪、護汰寧加上滅達樂-M；SYNGENTA CROP PROTECTION,INC)與甲基托布津(其為典型大豆種子處理)之組合(CRUISERMAXX與甲基托布津之組合稱為「化學對照」)處理；3)種子經化學對照處理加上接種每顆種子5.0×10⁺⁵cfu菌株RTI301；4)種子經化學對照處理加上接種每顆種子5.0×10⁺⁵cfu菌株RTI477；5)種子經化學對照處理加上接種每顆種子5.0×10⁺⁵cfu兩種菌株之組合。十個試驗作為10個獨立小塊土地進行且大豆產量結果(蒲式耳/英畝)呈現在表VI中。表VI中之結果展示與經單獨化學對照處理之種子相比，接種單獨解澱粉芽孢桿菌RTI301或枯草芽孢桿菌RTI477對大豆整個產量無作用。如先前實驗中所觀測，接種解澱粉芽孢桿菌RTI301與枯草芽孢桿菌RTI477之組合提供協同效應且使得大豆產量增加5%(自58.2蒲式耳/英畝至61.1蒲式耳/英畝)。枯草芽孢桿菌RTI477與解澱粉芽孢桿菌RTI301菌株之組合對大豆產量提供意外益處。

實例9描述用枯草芽孢桿菌RTI477與解澱粉芽孢桿菌RTI301菌株之組合處理種子在玉米中之益處。對於玉米實驗，資料概述在表VII中且設定如下：1)種子未經處理(「UTC」)；2)種子經3種常用化學活性劑之組合(稱為「化學對照」或「CC」)處理；以及3)種子經化學對照加上每顆種子5.0×10⁺⁵cfu菌株RTI301與RTI477各者之組合(「CC+RTI 301/477 1：1」)處理。兩個試驗在天然疾病壓力或土壤接種絲核菌之條件下進行。值得注意地，對於天然病原體壓力及接種絲核菌之田間試驗，分別觀測到RTI301與RTI477之1：1組合加上化學對照的產量比單獨化學對照增加10.7蒲式耳/英畝及59.8蒲式耳/英畝。此等資料指示用此等菌株之組合處理種子可極大增強玉米產量。

實例10描述展示除化學活性劑用於控制病原體之外，當種子經RTI301與RTI477菌株之組合處理時對大豆中萌芽及產量之作用的實驗。特定言之，大豆中實驗如下設定：1)種子未經處理(UTC)；2)種子經3種常用化學活性劑之組合(稱為「化學對照」)處理；3)種子經VIBRANCE(活性成分氟唑環菌胺；SYNGENTA CROP PROTECTION,INC)處理；以及4)種子經化學對照加上每顆種子5.0×10⁺⁵cfu菌株RTI301及RTI477各者處理。進行兩個試驗，其中植物種子在種植時接種立枯絲核菌。表VIII中之結果展示除化學對照之外，用解澱粉芽孢桿菌RTI301與枯草芽孢桿菌RTI477之組合處理使得產量比單獨化學對照平均增加13.3蒲式耳/英畝(自59.4蒲式耳/英畝至72.7蒲式耳/英畝)。因此，用RTI301與RTI477之組合處理種子提供大豆產量之顯著改善，即使在嚴重病原體壓力之條件下。

實例11中鑑別由RTI301及RTI477菌株產生之抗微生物代謝物且展示在圖6中。實例11描述由RTI301及RTI477菌株產生之環狀脂肽豐原素及去羥基豐原素之研究，且意料地，先前未報導之幾類此等分子的鑑別。確定解澱粉芽孢桿菌RTI301產生先前報導之豐原素A、豐原素B及豐原素C化合物以及去羥基豐原素A、去羥基豐原素B及去羥基豐原素C化合物。意外地，除此等已知之化合物之外，確定RTI301菌株亦產生先前未鑑別之此等化合物之衍生物，其中環狀肽鏈之位置8的L-異白胺酸(圖6中稱為X₃)經L-甲硫胺酸置換。新類別豐原素及去羥基豐原素在本文中稱為MA、MB及MC，係指A類、B類及C類衍生物，其中圖6中X₃處之L-異白胺酸經L-甲硫胺酸置換。新鑑別之分子粗體展示在圖6中及表IX中。對於RTI477菌株，亦觀測到新鑑別之豐原素MA、MB及MC化合物，然而，對於RTI477菌株，未觀測到對應去羥基豐原素MA、MB及MC化合物(參見表IX)。

進一步確定RTI301菌株產生先前尚未鑑別之其他類別豐原素及去羥基豐原素。在此類別中，豐原素B及去羥基豐原素B之L-異白胺酸(圖6中之位置X₃)經L-高半胱胺酸(Hcy)置換。此等先前未鑑別之豐原素及去羥基豐原素代謝物在本文中稱作豐原素H及去羥基豐原素H且展示在圖6及表IX中。對於RTI477菌株，亦觀測到新鑑別之豐原素H化合物，然而，對於RTI477菌株，未觀測到對應去羥基豐原素H化合物(參見表IX)。

進一步確定RTI301菌株產生先前未鑑別之其他類別豐原素及去羥基豐原素代謝物。在此類別中，環狀肽主鏈結構之位置4(圖6中之位置X₁)的胺基酸經L-異白胺酸置換。此等先前未鑑別之代謝物在本文中稱為豐原素I及去羥基豐原素I且展示在圖6及表IX中。對於RTI477菌株，均觀測到新鑑別之豐原素I及去羥基豐原素I化合物(參見表IX)。

因此，在本發明之組合物及方法中，具有抗微生物特性之解澱粉芽孢桿菌可為以ATCC第PTA-121165號寄存之解澱粉芽孢桿菌RTI301或其具有其所有鑑別特徵之突變體。類似地，具有有益於植物生長及/或健康之特性的枯草芽孢桿菌可為以ATCC第PTA-121167號寄存之枯草芽孢桿菌RTI477或其具有其所有鑑別特徵之突變體。在本發明之組合物及方法中，植物可包括大豆或玉米且植物生長益處可藉由產量增加展現。

在一個實施例中，提供一種用於有益於植物生長及/或植物健康之具有兩種或兩種以上相容微生物的組合物，該組合物包含：具有抗微生物特性且以適合於抑制植物周圍土壤中存在或與植物一起生活之內源性微生物生長的量存在之第一微生物的至少一種生物純培養物；及具有有益於植物生長及/或植物健康之特性之第二微生物的至少一種生物純培養物，其中第二微生物之生長與第一微生物之生長相容，且其中第二微生物以足夠變得土著化且有益於植物生長及/或植物健康之量存在，其中組合物施用至植物種子、植物根部或植物周圍土壤有益於植物生長及/或植物健康。有益於植物生長及/或植物健康之第二微生物之特性包括植物產量增加、幼苗活力提高、根發育改善、植物生長改善、植物健康提高、外觀改善、對植物病原體之抗性提高、病原性感染減少之一或其組合。植物病原體包括昆蟲、線蟲、植物病原性真菌或植物病原性細菌之一或組合。

在一個實施例中，提供一種有益於植物生長及/或植物健康之組合物，該組合物包含：以ATCC第PTA-121165號寄存之解澱粉芽孢桿菌RTI301或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物；及以 ATCC第PTA-121167號寄存之枯草芽孢桿菌RTI477或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物，以適合於有益於植物生長及/或植物健康之量存在。組合物施用於植物種子、植物根部或植物周圍土壤有益於植物生長及/或植物健康。

如本文所用，片語「細菌菌株之生物純培養物」係指以下各者之一或組合：細菌菌株之生物純醱酵培養物之孢子；細菌菌株之生物純醱酵培養物之營養細胞；細菌菌株之生物純醱酵培養物之一或多種產物；細菌菌株之生物純醱酵培養物之培養物固體；細菌菌株之生物純醱酵培養物之培養物上清液；細菌菌株之生物純醱酵培養物之提取物；及細菌菌株之生物純醱酵培養物之一或多種代謝物。

在一個實施例中，組合物呈種植基質形式。種植基質可呈盆栽土形式。

在一個實施例中，組合物可進一步包括載劑、分散劑或酵母提取物之一或組合。

在一個實施例中，組合物進一步包含微生物、生物或化學殺蟲劑、殺真菌劑、殺線蟲劑、殺菌劑、除草劑、植物提取物、植物生長調節劑或肥料之一或組合，以適合於有益於植物生長及/或對植物賦予保護以避免病原性感染之量存在。

在一個實施例中，有益於植物生長之組合物包含：以ATCC第PTA-121165號寄存之解澱粉芽孢桿菌RTI301或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物；以ATCC第PTA-121167號寄存之枯草芽孢桿菌RTI477或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物；以及畢芬寧殺蟲劑。

在一個實施例中，有益於植物生長之組合物包含：以ATCC第PTA-121165號寄存之解澱粉芽孢桿菌RTI301或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物；以ATCC第PTA-121167號寄存之枯草芽孢桿菌RTI477或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物；以及畢芬寧殺蟲劑，其中該組合物呈與液體肥料相容之調配物。與液體肥料相容之調配物可包含水合鋁-鎂矽酸鹽及至少一種分散劑。畢芬寧殺蟲劑可以在0.1g/ml至0.2g/ml範圍內之濃度存在。畢芬寧殺蟲劑可以約0.1715g/ml之濃度存在。如整個說明書中及申請專利範圍中所用之術語「呈與液體肥料相容之調配物」意欲意謂調配物能夠溶解或分散或乳化於水溶液中以允許與肥料混合用於在液體調配物中輸送至植物。

在一個實施例中，提供一種有益於植物生長及/或植物健康之方法，該方法包含將包含以下之組合物輸送至植物種子、植物根部或植物周圍土壤：具有抗微生物特性且以適合於抑制植物周圍土壤中存在或與植物一起生活之內源性微生物生長的量存在之第一微生物的至少一種生物純培養物；及具有有益於植物生長及/或植物健康之特性之第二微生物的至少一種生物純培養物，其中第二微生物之生長與第一微生物之生長相容，且其中第二微生物以適合於變得土著化且有益於植物生長及/或植物健康之量存在，其中組合物之輸送有益於植物生長及/或植物健康。

在一個實施例中，提供一種有益於植物生長及/或植物健康之方法，該方法包含：將第一組合物與第二組合物之組合輸送至植物種子、植物根部或植物周圍土壤，該第一組合物包含：以ATCC第PTA-121165號寄存之解澱粉芽孢桿菌RTI301或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物；且該第二組合物包含以ATCC第PTA-121167號寄存之枯草芽孢桿菌RTI477或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物，其中該組合之輸送有益於植物生長及/或植物健康。

包含微生物之組合物可呈液體、油性分散液、粉劑、乾燥可潤濕粉末、可撒佈顆粒或乾燥可潤濕顆粒形式。微生物可呈孢子或營養細胞形式存在。該組合物可呈液體形式，且枯草芽孢桿菌RTI477及解澱粉芽孢桿菌RTI301各者可以約1.0×10⁸CFU/ml至約1.0×10¹²CFU/ml之濃度存在。組合物可呈粉劑、乾燥可潤濕粉末、可撒佈顆粒或乾燥可潤濕顆粒形式，且枯草芽孢桿菌RTI477及解澱粉芽孢桿菌RTI301各者可以約1.0×10⁸CFU/g至約1.0×10¹²CFU/g之量存在。組合物可呈油性分散液形式且枯草芽孢桿菌RTI477及解澱粉芽孢桿菌RTI301各者可以約1.0×10⁸CFU/ml至約1.0×10¹²CFU/ml之濃度存在。

包含微生物之組合物可進一步包含載劑、分散劑或酵母提取物之一或組合。

在一個實施例中，提供一種植物種子，其經有益於植物生長及/或植物健康的具有兩種或兩種以上相容微生物之組合物塗佈。塗佈組合物包括具有抗微生物特性且以適合於抑制植物周圍土壤中存在或與植物一起生活之內源性微生物之生長的量存在之第一微生物之至少一種生物純培養物的孢子。組合物亦包括具有有益於植物生長及/或植物健康之特性之第二微生物的至少一種生物純培養物之孢子，其中第二微生物之生長與第一微生物之生長相容，且其中第二微生物以足夠變得土著化且有益於植物生長及/或植物健康之量存在。

在一個實施例中，提供一種用有益於植物生長及/或植物健康之組合物塗佈之植物種子，該組合物包含：以ATCC第PTA-121165號寄存之解澱粉芽孢桿菌RTI301或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物的孢子；及以ATCC第PTA-121167號寄存之枯草芽孢桿菌RTI477或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物的孢子。

在一個實施例中，枯草芽孢桿菌RTI477及解澱粉芽孢桿菌RTI301以每顆種子約1.0×10²CFU至每顆種子約1.0×10⁹CFU範圍內之量存在。

在一個實施例中，植物種子進一步包含微生物、生物或化學殺蟲劑、殺真菌劑、殺線蟲劑、殺菌劑、除草劑、植物提取物、植物生長調節劑或肥料之一或組合，以適合於有益於植物生長及/或對該植物賦予保護以避免病原性感染之量存在。在一個實施例中，殺蟲劑包含畢芬寧。

在一個實施例中，提供一種植物種子，其中該植物種子用有益於植物生長及/或植物健康之組合物塗佈，該組合物包含：以ATCC第PTA-121165號寄存之解澱粉芽孢桿菌RTI301或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物的孢子；以ATCC第PTA-121167號寄存之枯草芽孢桿菌RTI477或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物的孢子；以及畢芬寧殺蟲劑。

在一個實施例中，提供一種有益於植物生長及/或植物健康之方法，該方法包含將植物種子種植在適合生長介質中，其中種子已經包含以下之組合物塗佈：具有抗微生物特性且以適合於抑制植物周圍土壤中存在或與植物一起生活之內源性微生物之生長的量存在之第一微生物之至少一種生物純培養物的孢子；及具有促進植物生長及/或植物健康之特性之第二微生物的至少一種生物純培養物之孢子，其中第二微生物之生長與第一微生物之生長相容，且其中第二微生物以適合於變得土著化且有益於植物生長及/或植物健康之量存在。

在一個實施例中，提供一種有益於植物生長及/或植物健康之方法，該方法包含：將植物種子種植在適合生長介質中，其中該種子已經包含以下之組合物塗佈：以ATCC第PTA-121165號寄存之解澱粉芽孢桿菌RTI301或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物的孢子；及以ATCC第PTA-121167號寄存之枯草芽孢桿菌RTI477或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物的孢子，其中包含RTI301及RTI477之孢子的塗佈有益於植物生長及/或植物健康。

本發明之經塗佈種子可為來自多種植物之種子，包括例如單子葉植物、雙子葉植物、穀物、玉米、甜玉米、爆玉米、玉米種、青貯玉米、飼料玉米、稻穀、小麥、大麥、高粱、甘藍型蔬菜、椰菜、甘藍菜、花椰菜、芽甘藍、散葉甘蘭、羽衣甘藍、芥菜、球莖甘藍、鱗莖類蔬菜、洋蔥、大蒜、蔥、果蔬菜、胡椒、番茄、地面櫻桃、樹蕃茄、秋葵、葡萄、香草/香料、瓜類蔬菜、黃瓜、哈密瓜、甜瓜、香甘瓜、番南瓜、西瓜、南瓜、茄子、綠葉蔬菜、萵苣、芹菜、菠菜、香芹、菊苣、豆科植物/蔬菜(多汁且乾燥之豆子及豌豆)、豆子、四季豆、食莢菜豆、殼豆、大豆、乾豆、回回豆、利馬豆、豌豆、鷹嘴豆、豌豆瓣、扁豆、油料種子作物、芥花、蓖麻、棉花、亞麻、花生、油菜籽、紅花、芝麻、向日葵、大豆、根/塊莖及球莖蔬菜、胡蘿蔔、馬鈴薯、甘薯、甜菜、薑、辣根、蘿蔔、人參、蕪菁、甘蔗、甜菜、草及草皮草之種子。

經塗佈之植物種子包含玉米或大豆且植物生長益處藉由產量增加展現。

對於經塗佈之植物種子，有益於植物生長及/或植物健康之第二微生物特性包括產量增加、幼苗活力提高、根發育改善、植物生長改善、植物健康提高、外觀改善、對植物病原體之抗性提高或病原性感染減少中之一或多者或其組合。植物病原體可包括昆蟲、線蟲、植物病原性真菌或植物病原性細菌之一或組合。

塗佈植物種子之組合物的第一及第二微生物可為芽孢桿菌微生物。第二微生物之生長可比第一微生物快，且第二微生物特徵可為群集及高運動性表現型。第二微生物可為枯草芽孢桿菌。第一微生物可為解澱粉芽孢桿菌且第二微生物可為枯草芽孢桿菌。解澱粉芽孢桿菌可為以ATCC第PTA-121165號寄存之解澱粉芽孢桿菌RTI301或其具有其所有鑑別特徵之突變體。枯草芽孢桿菌可為以ATCC第PTA-121167號寄存之枯草芽孢桿菌RTI477或其具有其所有鑑別特徵之突變體。塗佈至植物種子上之組合物可包括每顆種子約1.0×10²CFU至約1.0×10⁹CFU之量的第一微生物及第二微生物各者之孢子。

在一個實施例中，提供一種有益於植物生長及/或植物健康之方法，該方法包含：將植物種子種植在適合生長介質中，其中該種子已經包含以下之組合物塗佈：以ATCC第PTA-121165號寄存之解澱粉芽孢桿菌RTI301或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物的孢子；及以ATCC第PTA-121167號寄存之枯草芽孢桿菌RTI477或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物的孢子，其以適合於有益於植物生長及/或植物健康之量存在。

在一個實施例中，提供一種有益於植物生長及/或植物健康之組合物，該組合物包含：一或多種具有抗菌或抗真菌特性中之一或兩者且以適合於抑制植物周圍土壤中存在或與植物一起生活之內源性微生物生長之量存在的化學活性劑；及具有有益於植物生長及/或植物健康之特性之微生物的至少一種生物純培養物。微生物生長與化學活性劑相容且微生物以適合於變得土著化且有益於植物生長及/或植物健康之量存在。組合物施用於植物種子、植物根部或植物周圍土壤有益於植物生長及/或植物健康。

在一個實施例中，提供一種有益於植物生長及/或植物健康之方法，該方法包含將以下各物之組合輸送至植物種子、植物根部或植物周圍土壤：一或多種具有抗菌或抗真菌特性中之一或兩者且以適合於抑制植物周圍土壤中存在或與植物一起生活之內源性微生物生長之量存在的化學活性劑；及包含具有有益於植物生長及/或植物健康之特性之微生物的至少一種生物純培養物之組合物。微生物之生長與化學活性劑相容或在不相容之情況下，微生物在輸送化學活性劑之後輸送。微生物以適合於變得土著化且有益於植物生長及/或植物健康之量存在，使得化學活性劑與微生物之組合的輸送有益於植物生長及/或植物健康。在一或多種化學活性劑及微生物相容之情況下，一或多種化學活性劑可與包括微生物之組合物一起調配。化學活性劑與微生物之組合輸送至植物種子、植物根部或植物周圍土壤有益於植物生長及/或植物健康。

對於包括一或多種化學活性劑之組合物及方法，有益於植物生長及/或植物健康之微生物特性可包括產量增加、幼苗活力提高、根發育改善、植物生長改善、植物健康提高、外觀改善、對植物病原體之抗性提高、病原性感染減少或其組合。植物病原體可包括昆蟲、線蟲、植物病原性真菌或植物病原性細菌之一或組合。

一或多種用於產生生態棲位之化學活性劑可包括例如(但不限於)：甲氧基丙烯酸酯(strobilurine)、三唑、護汰芬(flutriafol)、得克利、丙硫菌唑(prothiaconazole)、氟環唑(expoxyconazole)、氟吡菌醯胺、四氯異苯腈、甲基托布津、基於銅之殺真菌劑、氫氧化銅殺真菌劑、基於EDBC之殺真菌劑、鋅錳乃浦(mancozeb)、琥珀酸去氫酶(succinase dehydrogenase，SDHI)殺真菌劑、必殺吩、依普同(iprodione)、達滅芬或威利芬那雷特。在另一實例中，一或多種化學活性劑可包括熏劑，諸如氯化苦(chloropicrin)、邁隆、1,3-二氯丙烯(Telone)、二硫二甲烷、威百畝鈉/鉀、溴化甲烷。

組合物可呈液體、油性分散液、粉劑、乾燥可潤濕粉末、可撒佈顆粒或乾燥可潤濕顆粒形式。有益微生物可呈孢子或營養細胞形式存在。有益微生物可為芽孢桿菌屬。有益微生物可為枯草芽孢桿菌。微生物可為特徵為群集及高運動性表現型之枯草芽孢桿菌。微生物可為以ATCC第PTA-121167號寄存之枯草芽孢桿菌RTI477或其具有其所有鑑別特徵之突變體。組合物可呈液體形式，且有益微生物可為枯草芽孢桿菌RTI477，以約1.0×10⁸CFU/ml至約1.0×10¹²CFU/ml之濃度存在。組合物可呈粉劑、乾燥可潤濕粉末、可撒佈顆粒或乾燥可潤濕顆粒形式，且枯草芽孢桿菌RTI477可以約1.0×10⁸CFU/g至約1.0×10¹²CFU/g之量存在。組合物可呈油性分散液形式且枯草芽孢桿菌RTI477可以約1.0×10⁸CFU/ml至約1.0×10¹²CFU/ml之濃度存在。

在本發明之有益於植物生長及/或植物健康的具有兩種或兩種以上相容微生物之組合物及方法中，組合物可進一步包括微生物、生物或化學殺蟲劑、殺真菌劑、殺線蟲劑、殺菌劑、除草劑、植物提取物、植物生長調節劑或肥料之一或組合，以適合於有益於植物生長及/或對植物賦予保護以避免病原性感染之量存在。

在一個實施例中，殺真菌劑可包括來自白羽扇豆之提取物。在一個實施例中，殺真菌劑可包括BLAD多肽。BLAD多肽可為來自甜羽扇豆(白羽扇豆)之天然存在之種子儲存蛋白的片段，其藉由對真菌細胞壁造成損害且破壞內細胞膜而作用於易感真菌病原體。組合物可包括約20% BLAD多肽。

在一個實施例中，殺蟲劑可包含畢芬寧。殺線蟲劑可包含硫線磷(cadusafos)。組合物可調配為液體、粉末、可潤濕可溶解顆粒或可撒佈顆粒。殺蟲劑可包含畢芬寧及可尼丁(clothianidin)。殺蟲劑可包含畢芬寧及可尼丁且組合物可調配用於與液體肥料相容。殺蟲劑可包含畢芬寧或ξ-賽滅寧。

殺線蟲劑可包含硫線磷。殺蟲劑可包含畢芬寧及可尼丁。組合物可調配為液體且殺蟲劑可包含畢芬寧或ξ-賽滅寧。

在一個實施例中，該方法可進一步包括向以下各者施用液體肥料：植物周圍土壤或生長介質；在土壤或生長介質中播種植物種子之前的土壤或生長介質；或在土壤或生長介質中種植植物之前的土壤或生長介質。

在一實施例中，畢芬寧組合物可包含：畢芬寧；水合鋁-鎂矽酸鹽；以及至少一種選自以下之分散劑：蔗糖酯、木質素磺酸鹽、烷基多醣苷、萘磺酸甲醛縮合物及磷酸酯。

畢芬寧可較佳以按組合物中所有組分之總重量計1.0重量%至35重量%，更尤其15重量%至25重量%之濃度存在。畢芬寧殺蟲劑組合物可以在0.1g/ml至0.2g/ml範圍內之濃度存在於液體調配物。畢芬寧殺蟲劑可以約0.1715g/ml之濃度存在於液體調配物。

分散劑可較佳以按組合物中所有組分之總重量計約0.02重量%至約20重量%之總濃度存在。

在一些實施例中，水合鋁-鎂矽酸鹽可選自由蒙脫石及綠坡縷石組成之群。

在一些實施例中，磷酸酯可選自壬基酚磷酸酯及十三烷醇乙氧基化磷酸酯鉀鹽。

其他實施例可進一步包括抗凍劑、消泡劑及殺生物劑中之至少一者。

在一個實施例中，提供一種有益於植物生長之組合物，該組合物包含：以ATCC第PTA-121165號寄存之解澱粉芽孢桿菌RTI301或其具有所有其鑑別特徵之突變體的生物純培養物；以ATCC第PTA-121167號寄存之解澱粉芽孢桿菌RTI477或其具有所有其鑑別特徵之突變體的生物純培養物；以及殺蟲劑，其中該組合物呈與液體肥料相容之調配物。殺蟲劑可為擬除蟲菊酯(pyrethroid)、畢芬寧、七氟菊酯 (tefluthrin)、ξ-賽滅寧、有機磷酸酯、氯氧磷(chlorethoxyfos)、陶斯松(chlorpyrifos)、丁基嘧啶磷(tebupirimfos)、賽扶寧(cyfluthrin)、非潑羅(fiproles)、費普尼(fipronil)、菸鹼類(nicotinoids)或可尼丁之一或組合。殺蟲劑可包括畢芬寧。組合物可包括畢芬寧殺蟲劑及水合鋁-鎂矽酸鹽及至少一種分散劑。畢芬寧殺蟲劑可以在0.1g/ml至0.2g/ml範圍內之濃度存在。畢芬寧殺蟲劑可以約0.1715g/ml之濃度存在。

另外，本發明之組合物及方法之適合殺蟲劑、除草劑、殺真菌劑及殺線蟲劑可包括以下：殺蟲劑：A0)各種殺蟲劑，包括農用殺蟲劑(agrigata)、磷化鋁、鈍綏蟎、蚜小蜂、蚜繭蜂、食蚜蜂、青蒿素、苜蓿銀紋夜蛾NPV、三唑錫(azocyclotin)、枯草芽孢桿菌、蘇雲金芽孢桿菌屬亞莎華亞種(Bacillus thuringiensis-spp.aizawai)、蘇雲金芽孢桿菌屬庫斯塔克亞種(Bacillus thuringiensis spp.kurstaki)、蘇雲金芽孢桿菌、白僵菌(Beauveria)、球孢白僵菌(Beauveria bassiana)、高效氟氯氰菊酯(betacyfluthrin)、生物製劑、殺蟲雙(bisultap)、溴氟菊酯(brofluthrinate)、溴硫磷-e(bromophos-e)、溴蟎酯(bromopropylate)、Bt-玉米-GM、Bt-大豆-GM、辣椒鹼(capsaicin)、培丹(cartap)、南蛇藤提取物、氯蟲苯甲醯胺(chlorantraniliprole)、滅幼脲(chlorbenzuron)、氯氧磷(chlorethoxyfos)、克福隆(chlorfluazuron)、陶斯松-e、蛇床子素、冰晶石、殺螟腈(cyanophos)、氰強尼普羅(cyantraniliprole)、賽洛寧(cyhalothrin)、錫蟎丹(cyhexatin)、賽滅寧、離額繭蜂、DCIP、二氯丙烯、三氯殺蟎醇(dicofol)、潛蠅、潛蠅+離額繭蜂、混滅威(dimethacarb)、二硫醚、乙酸十二烷基酯、因滅汀(emamectin)、麗蚜小蜂、EPN、漿角蚜小蜂、二溴化乙烯、桉油醇、脂肪酸、脂肪酸/鹽、芬殺蟎、仲丁威(BPMC)、芬普蟎、溴氟菊酯、氟蟎嗪、複滅蟎、安果、呋線威、γ-賽洛寧、大蒜汁、顆粒體病毒、異色瓢蟲、棉鈴蟲NPV、不活化細菌、吲哚-3-基丁酸、碘甲烷、鐵、水胺硫磷、異丙胺磷、異丙胺磷-m、異丙威、異拌磷、高嶺土、靈丹、瀏陽黴素、苦參鹼、地安磷、聚乙醛、綠僵菌、達馬松、速滅威(MTMC)、礦物油、滅蟻靈、間異硫氰酸鹽、殺蟲單、疣孢漆斑菌、二溴磷、芙新姬小蜂、菸鹼、菸鹼殺蟲劑、油、油酸、氧樂果、小花蝽、氧化苦參鹼、擬青黴菌、石蠟油、巴拉松-e(parathion-e)、巴氏桿菌、石油、信息素、磷酸、光桿狀菌、巴賽松(phoxim)、小植綏蟎、亞特松-e(pirimiphos-e)、植物油、小菜蛾GV、多角體病毒、多酚提取物、油酸鉀、布飛松(profenofos)、補骨內酯、普硫松(prothiofos)、吡唑硫磷、除蟲菊酯、噠嗪硫磷、嘧蟎醚、吡丙醚、皂樹提取物、滅蟎猛、油菜油、魚藤酮、皂素、皂劑(saponozit)、鈉化合物、氟矽酸鈉、澱粉、斯氏線蟲、鏈黴菌、氟蟲胺、硫、丁基嘧啶磷、七氟菊酯、雙硫磷、四氯殺蟎碸、久效威、甲基乙拌磷、轉基因(例如Cry3Bb1)、唑蚜威、木黴菌、赤眼蜂、三福隆、輪枝菌、藜蘆鹼、異構殺蟲劑(例如κ-畢芬寧、κ-七氟菊酯)、介離子殺蟲劑、雙醯胺類殺蟲劑、吡嗪氟醯胺(pyraziflumid)；A1)胺基甲酸酯類，包括得滅克(aldicarb)、棉靈威(alanycarb)、免扶克(benfuracarb)、加保利(carbaryl)、加保扶(carbofuran)、丁基加保扶(carbosulfan)、滅賜克(methiocarb)、納乃得(methomyl)、歐殺滅(oxamyl)、比加普(pirimicarb)、安丹(propoxur)及硫敵克(thiodicarb)；A2)有機磷酸酯類，包括歐殺松(acephate)、穀速松-乙基(azinphos-ethyl)、穀速松-甲基(azinphos-methyl)、克芬松(chlorfenvinphos)、陶斯松(chlorpyrifos)、陶斯松-甲基(chlorpyrifos-methyl)、內吸磷-S-甲基(demeton-S-methyl)、大利松(diazinon)、二氯松(dichlorvos)/DDVP、雙特松(dicrotophos)、大滅松(dimethoate)、二硫松(disulfoton)、愛殺松(ethion)、撲滅松(fenitrothion)、芬殺松(fenthion)、加福松 (isoxathion)、馬拉松(malathion)、達馬松(methamidaphos)、滅大松(methidathion)、美文松(mevinphos)、亞素靈(monocrotophos)、氧樂果(oxymethoate)、甲基滅多松(oxydemeton-methyl)、巴拉松(parathion)、甲基巴拉松(parathion-methyl)、賽達松(phenthoate)、福瑞松(phorate)、裕必松(phosalone)、益滅松(phosmet)、福賜米松(phosphamidon)、甲基亞特松(pirimiphos-methyl)、拜裕松(quinalphos)、託福松(terbufos)、樂本松(tetrachlorvinphos)、三落松(triazophos)及三氯松(trichlorfon)；A3)環戊二烯有機氯化合物類，諸如安殺番(endosulfan)；A4)非潑羅類，包括乙蟲清(ethiprole)、費普尼、氟蟲腈(pyrafluprole)及派瑞樂(pyriprole)；A5)新菸鹼類似物類，包括啶蟲脒(acetamiprid)、可尼丁、呋蟲胺(dinotefuran)、吡蟲啉(imidacloprid)、烯啶蟲胺(nitenpyram)、噻蟲啉(thiacloprid)及噻蟲嗪(thiamethoxam)；A6)賜諾殺類，諸如賜諾殺及斯平托蘭(spinetoram)；A7)來自汀類之氯離子通道活化劑，包括阿巴汀(abamectin)、苯甲酸因滅汀、伊維汀、林皮汀及密滅汀；A8)保幼激素模擬物，諸如烯蟲乙酯、烯蟲炔酯、美賜平(methoprene)、芬諾克(fenoxycarb)及百利普芬(pyriproxyfen)；A9)選擇性同翅目餵養阻斷劑，諸如派滅淨(pymetrozine)、氟啶蟲醯胺(flonicamid)及哌氟喹腙(pyrifluquinazon)；A10)蟎生長抑制劑，諸如克芬蟎、合賽多及依殺蟎；A11)粒線體ATP合成酶抑制劑，諸如汰芬諾克、芬布錫及毆蟎多；氧化磷酸化去偶合劑，諸如克凡派(chlorfenapyr)；A12)菸鹼乙醯膽鹼受體通道阻斷劑，諸如殺蟲磺(bensultap)、鹽酸培丹、硫賜安(thiocyclam)及殺蟲雙鈉；A13)來自苯甲醯脲類之甲殼素生物合成類型0抑制劑，包括雙三氟蟲脲、二福隆、氟芬隆、六伏隆、祿芬隆、諾伐隆及得福隆；A14)甲殼素生物合成類型1抑制劑，諸如布芬淨；A15)蛻皮瓦解劑，諸如賽滅淨；A16)蛻皮素受體促效劑，諸如滅芬諾、得芬諾、合芬隆及環蟲醯肼；A17)章魚胺受體促效劑，諸如三亞蟎；A18)粒線體複合物電子輸送抑制劑比達本(pyridaben)、得芬瑞(tebufenpyrad)、脫芬瑞(tolfenpyrad)、氟芬內林、腈吡蟎酯、丁氟蟎酯、愛美松、亞醌蟎或嘧蟎酯；A19)電壓依賴性鈉通道阻斷劑，諸如因得克(indoxacarb)及氰氟蟲胺；A20)脂質合成抑制劑，諸如賜派芬、螺甲蟎酯及螺蟲乙酯；A21)來自二醯胺類之利阿諾定受體調節劑，包括氟蟲雙醯胺、鄰苯二甲醯胺化合物(R)-3-氯-N1-{2-甲基-4-[1,2,2,2-四氟-1-(三氟甲基)乙基]苯基}-N2-(1-甲基-2-甲基磺醯基乙基)鄰苯二甲醯胺及(S)-3-氯-N1-{2-甲基-4-[1,2,2,2-四氟-1-(三氟甲基)乙基]苯基}-N2-(1-甲基-2-甲基磺醯基乙基)鄰苯二甲醯胺、氯蟲醯胺(chloranthraniliprole)及氰強尼普羅；A22)未知或不確定作用模式之化合物，諸如印楝素、安米氟美(amidoflumet)、畢芬載(bifenazate)、氟噻蟲碸、協力精、啶蟲丙醚、氟啶蟲胺腈；或A23)來自擬除蟲菊酯類之鈉通道調節劑，包括阿納寧、丙烯除蟲菊酯、畢芬寧、賽扶寧、λ-賽洛寧、賽滅寧、α-賽滅寧、β-賽滅寧、ξ-賽滅寧、第滅寧、益化利、依芬寧、芬普寧、芬化利、護賽寧、τ-福化利、百滅寧、矽護芬及泰滅寧。

殺真菌劑：B0)苯并烯氟菌唑、抗霜黴菌、辛唑嘧菌胺、吲唑磺菌胺、銅鹽(例如氫氧化銅、氯氧化銅、硫酸銅、過氧硫酸銅)、白可列(boscalid)、硫氟醯胺(thiflumazide)、氟替尼(flutianil)、呋霜靈(furalaxyl)、腐絕(thiabendazole)、麥鏽靈(benodanil)、滅普寧(mepronil)、艾索非他米(isofetamid)、甲呋醯胺(fenfuram)、必殺吩(bixafen)、氟唑菌醯胺(fluxapyroxad)、噴福芬(penflufen)、氟唑環菌胺(sedaxane)、丁香菌酯(coumoxystrobin)、烯肟菌酯(enoxastrobin)、氟菌蟎酯(flufenoxystrobin)、唑菌酯(pyraoxystrobin)、唑胺菌酯(pyrametostrobin)、三環吡菌威(triclopyricarb)、烯肟菌胺 (fenaminstrobin)、苯氧菌胺(metominostrobin)、吡菌苯威(pyribencarb)、敵蟎普(meptyldinocap)、三苯醋錫(fentin acetate)、氯化三苯錫(fentin chloride)、氫氧化三苯錫(fentin hydroxide)、土黴素(oxytetracycline)、克氯得(chlozolinate)、地茂散(chloroneb)、四氯硝基苯(tecnazene)、依得利(etridiazole)、霜黴威(iodocarb)、硫菌威(prothiocarb)、枯草芽孢桿菌合成、解澱粉芽孢桿菌(例如菌株QST 713、FZB24、MBI600、D747)、來自互生葉白千層(Melaleuca alternifolia)之提取物、啶菌噁唑(pyrisoxazole)、噁咪唑(oxpoconazole)、乙環唑(etaconazole)、胺苯吡菌酮(fenpyrazamine)、萘替芬(naftifine)、特比萘芬(terbinafine)、維利微素(validamycin)、丁吡嗎啉(pyrimorph)、威利芬那雷特(valifenalate)、熱必斯(fthalide)、撲殺熱(probenazole)、異噻菌胺(isotianil)、昆布糖(laminarin)、來自大虎杖之提取物、亞磷酸及鹽、葉枯酞(teclofthalam)、咪唑嗪(triazoxide)、甲氧苯唳菌(pyriofenone)、有機油、碳酸氫鉀、四氯異苯腈、唑呋草(fluoroimide)；B1)唑類，包括比多農、糠菌唑、環克座、待克利、達克利、恩康唑、依普座、氟喹唑、芬克座、護矽得、護汰芬、菲克利、亞胺唑、種菌唑、滅特座、邁克尼、平克座、普克利、丙硫菌唑、矽氟唑、三泰芬、三泰隆、得克利、四克利、滅菌唑、咪醯胺、披扶座、依滅列、賽福座、賽座滅、免賴得、貝芬替、腐絕、麥穗靈、噻唑菌胺、依得利及殺紋寧、氧環唑、達克利-M、噁咪唑、巴克素、烯效唑、1-(4-氯-苯基)-2-([1,2,4]三唑-1-基)-環庚醇及硫酸依滅列；B2)嗜毬果傘素，包括亞托敏、醚菌胺、烯肟菌酯、氟嘧菌酯、克收欣(kresoxim-methyl)、苯氧菌胺、肟醚菌胺、啶氧菌酯、百克敏、三氟敏、烯肟菌酯、(2-氯-5-[1-(3-甲基苄氧亞胺基)乙基]苄基)胺基甲酸甲酯、(2-氯-5-[1-(6-甲基吡啶-2-基甲氧亞胺基)乙基]苄基)胺基甲酸甲酯及2-(鄰-(2,5-二甲基苯氧亞甲基)-苯基)-3-甲氧基丙烯酸甲酯、2-(2-(6-(3-氯-2-甲基-苯氧基)-5-氟-嘧啶-4-基氧基)-苯基)-2-甲氧亞胺基-N-甲基-乙醯胺及3-甲氧基-2-(2-(N-(4-甲氧基-苯基)-環丙烷伸亞胺醯基硫基甲基)-苯基)-丙烯酸甲酯；B3)羧醯胺，包括萎鏽靈、本達樂(benalaxyl)、本達樂-M、環醯菌胺、福多寧(flutolanil)、福拉比(furametpyr)、滅普寧(mepronil)、滅達樂(metalaxyl)、右滅達樂(mefenoxam)、呋醯胺、歐殺斯(oxadixyl)、嘉保信(oxycarboxin)、吡噻菌胺、吡唑萘菌胺、賽氟滅(thifluzamide)、汰敵寧(tiadinil)、3,4-二氯-N-(2-氰基苯基)異噻唑-5-甲醯胺、達滅芬(dimethomorph)、氟嗎啉、氟醯菌胺、氟吡菌胺(吡考苯紮(picobenzamid))、座賽胺、加普胺、二氯西莫、雙炔醯菌胺、N-(2-(4-[3-(4-氯苯基)丙-2-炔氧基]-3-甲氧苯基)乙基)-2-甲磺醯基-胺基-3-甲基丁醯胺、N-(2-(4-[3-(4-氯-苯基)丙-2-炔氧基]-3-甲氧基-苯基)乙基)-2-乙磺醯胺基-3-甲基丁醯胺、3-(4-氯苯基)-3-(2-異丙氧羰基-胺基-3-甲基-丁醯胺基)丙酸甲酯、N-(4'-溴聯苯-2-基)-4-二氟甲基-甲基噻唑-δ-甲醯胺、N-(4'-三氟甲基-聯苯-2-基)-4-二氟甲基-2-甲基噻唑-5-甲醯胺、N-(4'-氯-3'-氟聯苯-2-基)-4-二氟甲基-2-甲基-噻唑-5-甲醯胺、N-(3\4'-二氯-4-氟聯苯-2-基)-3-二氟-甲基-1-甲基-吡唑-4-甲醯胺、N-(3',4'-二氯-5-氟聯苯-2-基)-3-二氟甲基-1-甲基吡唑-4-甲醯胺、N-(2-氰基-苯基)-3,4-二氯異噻唑-5-甲醯胺、2-胺基-4-甲基-噻唑-5-甲醯苯胺、2-氯-N-(1,1,3-三甲基-茚滿-4-基)-菸鹼醯胺、N-(2-(1,3-二甲基丁基)-苯基)-1,3-二甲基-5-氟-1H-吡唑-4-甲醯胺、N-(4'-氯-3',5-二氟-聯苯-2-基)-3-二氟甲基-1-甲基-1H-吡唑-4-甲醯胺、N-(4'-氯-3',5-二氟-聯苯-2-基)-3-三氟甲基-1-甲基-1H-吡唑-4-甲醯胺、N-(3',4'-二氯-5-氟-聯苯-2-基)-3-三氟甲基-1-甲基-1H-吡唑-4-甲醯胺、N-(3',5-二氟-4'-甲基-聯苯-2-基)-3-二氟甲基-1-甲基-1H-吡唑-4-甲醯胺、N-(3',5-二氟-4'-甲基-聯苯-2-基)-3-三氟甲基-1-甲基-1H-吡唑-4-甲醯胺、N-(順-2-雙環丙基-2-基-苯基)-3-二氟甲基- 1-甲基-1H-吡唑-4-甲醯胺、N-(反-2-雙環丙基-2-基-苯基)-3-二氟-甲基-1-甲基-1H-吡唑-4-甲醯胺、氟吡菌醯胺、N-(3-乙基-3,5-5-三甲基-環己基)-3-甲醯胺基-2-羥基-苯甲醯胺、土黴素、矽硫芬、N-(6-甲氧基-吡啶-3-基)環丙烷甲醯胺、2-碘-N-苯基-苯甲醯胺、N-(2-雙環-丙基-2-基-苯基)-3-二氟甲基-1-甲基吡唑-4-基甲醯胺、N-(3',4',5'-三氟聯苯-2-基)-1,3-二甲基吡唑-4-基甲醯胺、N-(3',4',5'-三氟聯苯-2-基)-1,3-二甲基-5-氟吡唑-4-基-甲醯胺、N-(3',4',5'-三氟聯苯-2-基)-5-氯-1,3-二甲基-吡唑-4-基甲醯胺、N-(3',4',5'-三氟聯苯-2-基)-3-氟甲基-1-甲基吡唑-4-基甲醯胺、N-(3',4',5'-三氟聯苯-2-基)-3-(氯氟甲基)-1-甲基吡唑-4-基甲醯胺、N-(3',4',5'-三氟聯苯-2-基)-3-二氟甲基-1-甲基吡唑-4-基甲醯胺、N-(3',4',5'-三氟聯苯-2-基)-3-二氟甲基-5-氟-1-甲基吡唑-4-基甲醯胺、N-(3',4',5'-三氟聯苯-2-基)-5-氯-3-二氟甲基-1-甲基吡唑-4-基甲醯胺、N-(3',4',5'-三氟聯苯-2-基)-3-(氯二氟甲基)-1-甲基吡唑-4-基甲醯胺、N-(3',4',5'-三氟聯苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基吡唑-4-基甲醯胺、N-(3',4',5'-三氟聯苯-2-基)-5-氟-1-甲基-3-三氟甲基吡唑-4-基甲醯胺、N-(3',4',5'-三氟聯苯-2-基)-5-氯-1-甲基-3-三氟甲基吡唑-4-基甲醯胺、N-(2',4',5'-三氟聯苯-2-基)-1,3-二甲基吡唑-4-基甲醯胺、N-(2',4',5'-三氟聯苯-2-基)-1,3-二甲基-5-氟吡唑-4-基甲醯胺、N-(2',4',5'-三氟聯苯-2-基)-5-氯-1,3-二甲基吡唑-4-基甲醯胺、N-(2',4',5'-三氟聯苯-2-基)-3-氟甲基-1-甲基吡唑-4-基甲醯胺、N-(2',4',5'-三氟聯苯-2-基)-3-(氯氟甲基)-1-甲基吡唑-4-基甲醯胺、N-(2',4',5'-三氟聯苯-2-基)-3-二氟甲基-1-甲基吡唑-4-基甲醯胺、N-(2',4',5'-三氟聯苯-2-基)-3-二氟甲基-5-氟-1-甲基吡唑-4-基甲醯胺、N-(2',4',5'-三氟聯苯-2-基)-5-氯-3-二氟甲基-1-甲基吡唑-4-基甲醯胺、N-(2',4',5'-三氟聯苯-2-基)-3-(氯二氟甲基)-1-甲基吡唑-4-基甲醯胺、N-(2',4',5'-三氟聯苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基吡唑-4-基甲醯胺、N-(2',4',5'-三氟聯苯-2-基)-5-氟-1- 甲基-3-三氟甲基吡唑-4-基甲醯胺、N-(2',4',5'-三氟聯苯-2-基)-5-氯-1-甲基-3-三氟甲基吡唑-4-基甲醯胺、N-(3',4'-二氯-3-氟聯苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲醯胺、N-(3',4'-二氯-3-氟聯苯-2-基)-1-甲基-3-二氟甲基-1H-吡唑-4-甲醯胺、N-(3',4'-二氟-3-氟聯苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲醯胺、N-(3',4'-二氟-3-氟聯苯-2-基)-1-甲基-S-二氟甲基-1H-吡唑-4-甲醯胺、N-(3'-氯-4'-氟-3-氟聯苯-2-基)-1-甲基-3-二氟甲基-1H-吡唑-4-甲醯胺、N-(3',4'-二氯-4-氟聯苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲醯胺、N-(3',4'-二氟-4-氟聯苯-2-基)-1-甲基-S-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲醯胺、N-(3',4'-二氯-4-氟聯苯-2-基)-1-甲基-3-二氟甲基-1H-吡唑-4-甲醯胺、N-(3',4'-二氟-4-氟聯苯-2-基)-1-甲基-3-二氟甲基-1H-吡唑-4-甲醯胺、N-(3'-氯-4'-氟-4-氟聯苯-2-基)-1-甲基-S-二氟甲基-1H-吡唑-4-甲醯胺、N-(3',4'-二氯-5-氟聯苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲醯胺、N-(3',4'-二氟-5-氟聯苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲醯胺、N-(3',4'-二氯-5-氟聯苯-2-基)-1-甲基-S-二氟甲基-1H-吡唑-甲醯胺、N-(3',4'-二氟-5-氟聯苯-2-基)-1-甲基-3-二氟甲基-1H-吡唑-4-甲醯胺、N-(3',4'-二氯-5-氟聯苯-2-基)-1,3-二甲基-1H-吡唑-4-甲醯胺、N-(3'-氯-4'-氟-5-氟聯苯-2-基)-1-甲基-3-二氟甲基-1H-吡唑-4-甲醯胺、N-(4'-氟-4-氟聯苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲醯胺、N-(4'-氟-5-氟聯苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲醯胺、N-(4'-氯-5-氟聯苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲醯胺、N-(4'-甲基-5-氟聯苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲醯胺、N-(4'-氟-5-氟聯苯-2-基)-1,3-二甲基-1 H-吡唑-4-甲醯胺、N-(4'-氯-5-氟聯苯-2-基)-1,3-二甲基-1H-吡唑-4-甲醯胺、N-(4'-甲基-5-氟聯苯-2-基)-1,3-二甲基-1H-吡唑-4-甲醯胺、N-(4'-氟-6-氟聯苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲醯胺、N-(4'-氯-6-氟聯苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲醯胺、N-[2-(1,1,2,3,3,3-六氟丙氧基)-苯基]-3-二氟甲基-1-甲基-1H-吡唑-4-甲醯胺、N-[4'-(三氟甲硫基)-聯苯-2-基]-3-二氟甲基-1-甲基-1 H-吡唑-4-甲醯胺及N-[4'-(三氟甲硫基)-聯苯-2-基]-1-甲基-3-三氟甲基-1-甲基-1H-吡唑-4-甲醯胺；B4)雜環化合物，包括扶吉胺、比芬諾(pyrifenox)、布瑞莫(bupirimate)、嘧菌環胺、芬瑞莫(fenarimol)、富米綜(ferimzone)、嘧菌胺、尼瑞莫(nuarimol)、派美尼(pyrimethanil)、賽福寧(triforine)、拌種咯、護汰寧、阿迪嗎啉(aldimorph)、嗎菌靈、芬普福、三得芬、苯鏽啶、依普同、撲滅寧、免克寧、凡殺同、咪唑菌酮、辛噻酮、撲殺熱、5-氯-7-(4-甲基-哌啶-1-基)-6-(2,4,6-三氟苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶、敵菌靈、達滅淨、百快隆、丙氧喹啉、三賽唑、2-丁氧基-6-碘-3-丙基烯-4-酮、酸化苯并噻二唑-S-甲酯、四氯丹、蓋普丹(captan)、邁隆、福爾培(folpet)、氰菌胺、快諾芬(quinoxyfen)、N,N-二甲基-3-(3-溴-6-氟-2-甲基吲哚-1-磺醯基)-[1,2,4]三唑-1-磺醯胺、5-乙基-6-辛基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-2,7-二胺、2,3,5,6-四氯-4-甲磺醯基-吡啶、3,4,5-三氯-吡啶-2,6-二甲腈、N-(1-(5-溴-3-氯-吡啶-2-基)-乙基)-2,4-二氯-菸鹼醯胺、N-((5-溴-3-氯吡啶-2-基)-甲基)-2,4-二氯-菸鹼醯胺、二氟林、氯啶、嗎菌靈乙酸酯、唑呋草、殺稻瘟菌素-S、蟎離丹、咪菌威、野燕枯、野燕枯-甲基硫酸鹽、歐索林酸及粉病靈；B5)胺基甲酸酯，包括鋅錳乃浦、錳乃浦、威百畝、磺菌威、免得爛、福美鐵、甲基鋅乃浦、得恩地、鋅乃浦、益穗、乙黴威、纈黴威、苯噻菌胺、霜黴威、霜黴威鹽酸鹽、N-(1-(1-(4-氰基苯基)-乙磺醯基)丁-2-基)胺基甲酸4-氟苯酯、3-(4-氯-苯基)-3-(2-異丙氧基羰胺基-3-甲基-丁醯基胺基)丙酸甲酯；或B6)其他殺真菌劑，包括胍、多寧、多寧游離鹼、克熱淨、雙胍鹽；抗生素：春日黴素、土黴素及其鹽、鏈黴素、保粒黴素、維利黴素A；硝基苯基衍生物：百蟎克、白粉克、大脫蟎；含硫雜環基化合物：腈硫醌、稻瘟靈；有機金屬化合物：薯瘟錫鹽；有機磷化合物：護粒松、丙基喜樂松、福賽得(fosetyl)、福賽得-鋁、亞磷酸及其鹽、白粉松、甲基脫克松；有機氯化合物：益發靈、氟硫滅、六氯苯、苯酞、賓克隆、五氯硝基苯、多保淨、甲基多保淨、甲基益發靈；其他：環氟菌胺、克絕、二甲嘧酚、依瑞莫、呋霜靈、滅芬農及螺環菌胺、雙胍辛乙酸鹽、克熱淨乙酸鹽、克熱淨-參(烷苯磺酸鹽)、春日黴素鹽酸鹽水合物、二氯酚、五氯苯酚及其鹽、N-(4-氯-2-硝基-苯基)-N-乙基-4-甲基-苯磺醯胺、氯硝胺、異丙基滅鏽胺、四氯硝基苯、聯苯、溴硝丙二醇、二苯胺、米多黴素、啉銅、調環酸鈣、N-(環丙基甲氧基亞胺基-(6-二氟甲氧基-2,3-二氟-苯基)-甲基)-2-苯基乙醯胺、N'-(4-(4-氯-3-三氟甲基-苯氧基)-2,5-二甲基-苯基)-N-乙基-N-甲基甲脒、N'-(4-(4-氟-3-三氟甲基-苯氧基)-2,5-二甲基-苯基)-N-乙基-N-甲基甲脒、N'-(2-甲基-5-三氟甲基-4-(3-三甲基矽烷基-丙氧基)-苯基)-N-乙基-N-甲基甲脒及N'-(5-二氟甲基-2-甲基-4-(3-三甲基矽烷基-丙氧基)-苯基)-N-乙基-N-甲基甲脒。

除草劑：C1)乙醯輔酶A羧化酶抑制劑(ACC)，例如環己烯酮肟醚，諸如禾草滅、克草同、氯丙氧定、環殺草、西殺草、肟草酮、丁苯草酮、環苯草酮或吡喃草酮；苯氧基苯氧丙酸酯，諸如炔草酯、氰氟草酯、禾草靈、噁唑禾草靈、精噁唑禾草靈、噻唑禾草靈、吡氟禾草靈、精吡氟禾草靈、吡氟氯禾靈、氟吡甲禾靈、精氟吡甲禾靈、異噁草醚、喔草酯、喹禾靈、精喹禾靈或喹禾糠酯；或芳胺基丙酸，諸如麥草氟甲酯或麥草氟異丙酯；C2)乙醯乳酸合成酶抑制劑(ALS)，例如咪唑啉酮，諸如依滅草、滅草喹、甲基咪草酯(咪草酯)、甲氧咪草菸、甲基咪草菸或咪草菸；嘧啶基醚，諸如嘧硫酸、嘧硫鈉、雙草醚鈉、KIH-6127或嘧苯草肟(pyribenzoxym)；磺醯胺，諸如雙氟磺草胺、唑嘧磺草胺或磺草唑胺；或磺醯脲，諸如醯嘧磺隆、四唑嘧磺隆、苄嘧磺隆、氯嘧磺隆、氯磺隆、醚磺隆、環磺隆、胺苯磺隆、乙氧嘧磺隆、嘧啶磺隆、氯吡嘧磺隆、唑吡嘧磺隆、甲磺隆、菸嘧磺隆、氟嘧磺隆、氟磺隆、吡嘧磺隆、碸嘧磺隆、甲嘧磺隆、噻吩磺隆、醚苯磺隆、苯磺隆、氟胺磺隆、三氟甲磺隆、磺醯磺隆、甲醯嘧磺隆或碘甲磺隆；C3)醯胺，例如草毒死(CDAA)、新燕靈、溴丁醯草胺、草克樂(chiorthiamid)、草乃敵、乙苯醯草(etobenzanid(benzchlomet))、噻唑草醯胺、調節膦(fosamin)或庚醯草胺；C4)生長素除草劑，例如吡啶甲酸，諸如畢克草或畢克爛；或2,4-D或草除靈；C5)生長素輸送抑制劑，例如萘草胺或二氟吡隆；C6)類胡蘿蔔素生物合成抑制劑，例如吡草酮、可滅蹤(clomazone/dimethazone)、吡氟草胺、氟咯草酮、氟啶草酮、吡唑特、苄草唑、異噁唑草酮、異噁氯草酮、甲基磺草酮、磺草酮(sulcotrione/chlormesulone)、克草酮(ketospiradox)、呋草酮、達草滅或殺草強；C7)烯醇丙酮醯莽草酸-3-磷酸合成酶抑制劑(EPSPS)，例如草甘膦或草硫膦；C8)麩醯胺酸合成酶抑制劑，例如畢拉草(bilanafos/bialaphos)或草銨膦；C9)脂質生物合成抑制劑，例如醯苯胺，諸如莎稗磷或苯噻草胺；氯代乙醯苯胺，諸如二甲噻草胺、S-二甲噻草胺、乙草胺、甲草胺、丁草胺、丁烯草胺、乙醯甲草胺、二甲草胺、吡草胺、異丙甲草胺、S-異丙甲草胺、丙草胺、撲草胺、廣草胺、猛殺草、甲氧噻草胺或二甲苯草胺；硫脲，諸如蘇達滅、草滅特、燕麥敵、哌草丹、EPTC、戊草丹、草達滅、克草猛、苄草丹、禾草丹(thiobencarb/benthiocarb)、野麥畏或滅草猛；或呋草黃或氟草磺胺；C10)有絲分裂抑制劑，例如胺基甲酸酯，諸如黃草靈、長殺草、氯苯胺靈、坪草丹、拿草特(pronamid/propyzamid)、苯胺靈或仲草丹；二硝基苯胺，諸如氟草胺、比達寧、敵樂胺、丁氟消草、氟消草、黃草消、胺硝草、胺基丙氟靈或氟樂靈；吡啶，諸如氟硫草定或噻草定；或抑草磷、敵草索(DCPA)或抑芽丹；C11)原卟啉原IX氧化酶抑制劑，例如二苯基醚，諸如氟鎖草醚、氟鎖草醚鈉、苯草醚、必芬諾(bifenox)、草枯醚(CNP)、氯氟草醚、消草醚、乙羧氟草醚、氟黃胺草醚、氟呋草醚、乳氟禾草靈、除草醚、硝氟草醚或氧氟吩；噁二唑，諸如丙炔噁草酮或惡草靈；環狀醯亞胺，諸如草芬定、佈芬草、唑草酮、吲哚酮草酯、氟烯草酸、丙炔氟草胺、氟米丙平、富普巴(flupropacil)、氟噻甲草酯、甲磺草胺或噻二唑胺；或吡唑，諸如ET-751.JV 485或氟氯草胺；C12)光合作用抑制劑，例如敵稗、噠草特或吡啶達醇；苯并噻二嗪酮，諸如本達隆(bentazone)；二硝基苯酚，例如殺草全、地樂酚、地樂酯、特樂酚或DNOC；聯吡啶，諸如莎草快、苯敵快、敵草快或百草枯；脲，諸如氯溴隆、綠麥隆、枯莠隆、噁唑隆、敵草隆、噻二唑隆、非草隆、伏草隆、異丙隆、異惡隆、利穀隆、噻唑隆、滅草唑、吡喃隆、甲氧隆、綠穀隆、草不隆、環草隆或得匍隆；苯酚，諸如溴苯腈或碘苯腈；氯草敏；三嗪，諸如莠滅淨、莠去津、氰草津、敵草淨(desmein)、戊草津(dimethamethryn)、六嗪酮、撲滅通、撲草淨、撲滅津、西瑪津、西草淨、甲氧去草淨、去草淨、特丁津或草達津；三嗪酮，諸如苯嗪草酮或賽克津；尿嘧啶，諸如除草定、環草定或特草定；或雙胺基甲酸酯，諸如甜菜安或甜菜寧；C13)增效劑，例如環氧乙烷，諸如滅草環；C14)CIS細胞壁合成抑制劑，例如異噁草胺或敵草腈；C15)各種其他除草劑，例如二氯丙酸，諸如茅草枯；二氫苯并呋喃，諸如乙呋草黃；苯乙酸，諸如伐草克(chlorfenac/fenac)；或疊氮津、燕麥靈、地散磷、苯噻隆、氟磺胺草、特克草(buminafos)、特咪唑草、炔草隆、唑草胺、氯草靈、燕麥酯、枯草隆、環庚草醚、苄草隆、環莠隆、環草津、三環噻草胺、二苄基隆(dibenzyluron)、殺草淨、香草隆、草止津、草藻滅、乙嗪草酮、氟唑磺隆、氟苯草滅(fluorbentranil)、氟胺草唑、草特靈、異樂靈、卡草靈、氟磺醯草胺、滅草隆、滅落脫、敵草胺、磺樂靈、噁美酮(oxaciclomefone)、棉胺寧、哌草磷、環丙腈津、環丙氟靈、稗草畏、密草通、草克死(CDEC)、芽根靈、三嗪氟草胺、三唑羧醯胺(triazofenamid)或三甲隆；或其環境上相容的鹽。

殺線蟲劑或生物殺線蟲劑：免賴得、地蟲威、涕滅碸威、威線肟、二胺磷、芬滅松、硫線磷、除線磷、普伏松、豐索磷、噻唑磷、速殺硫磷、異醯胺松(isamidofof)、依殺松、磷蟲威、硫磷嗪、菸鹼硫磷、甲基減蚜磷、乙醯蟲腈、苯氯噻、氯化苦、邁隆、氟噻蟲碸、1,3-二氯丙烯(二氯丙烯)、二硫二甲烷、威百畝鈉、威百畝鉀、威百畝鹽(所有MITC產生劑)、溴化甲烷、生物土壤改良劑(例如芥菜籽、芥菜籽提取物)、土壤蒸汽薰蒸、異硫氰酸烯丙酯(AITC)、硫酸二甲酯、糠醛(醛)。

本發明之適合植物生長調節因子包括以下各物：植物生長調節因子：D1)抗生長素，諸如降固醇酸、2,3,5-三碘苯甲酸；D2)生長素，諸如4-CPA、2,4-D、2,4-DB、2,4-DEP、2,4-滴丙酸(dichlorprop)、涕丙酸、IAA、IBA、萘乙醯胺、α-萘乙酸、1-萘酚、萘氧基乙酸、環烷酸鉀、環烷酸鈉、2,4,5-T；D3)細胞分裂素，諸如2iP、苄基腺嘌呤、4-羥基苯乙醇、活動素、玉米素；D4)脫葉劑，諸如氰胺化鈣、噻節因、草多索、益收生長素、脫葉亞磷、甲氧隆、五氯苯酚、噻苯隆、脫葉磷；D5)乙烯抑制劑，諸如艾維激素(aviglycine)、1-甲基環丙烯；D6)乙烯釋放劑，諸如ACC、乙烯矽、益收生長素、乙二肟；D7)殺配子劑，諸如噠嗪酮酸鉀、抑芽丹；D8)赤黴素，諸如赤黴素、赤黴酸；D9)生長抑制劑，諸如脫落酸、嘧啶醇、比達寧(butralin)、加保利、三丁氯苄膦、氯苯胺靈、敵草克、氟節胺、增糖胺、殺木膦、草甘二膦、苯嘧丙醇、茉莉酸、抑芽丹、壯棉素、哌壯素、茉莉酮、苯胺靈、調節安(tiaojiean)、2,3,5-三碘苯甲酸；D10)形態素，諸如氯氟酸、氯甲丹、二氯甲丹、抑草丁；D11)生長延緩劑，諸如克美素 (chlormequat)、丁醯肼、調嘧醇、氟磺醯草胺、巴克素、四環唑、烯效唑；D12)生長刺激劑，諸如油菜素內酯、油菜素內酯-乙基、DCPTA、氯吡脲、惡黴靈、補骨內酯、三十烷醇；D13)類別不明之植物生長調節劑，諸如菊乙胺酯、氟磺胺草、特克草、香芹酮、氯化膽鹼、苯氰丁醯胺、苯噠嗪酸、氰胺、環丙酸醯胺、環己醯亞胺、環丙磺醯胺、丙醯芸苔素內酯、吲熟酯、乙烯、呋苯硫脲、乙二醇縮糖醛、增產肟、氯乙亞磺酸(holosulf)、依納素、砷酸鉛、滅速克、調環酸、比達農(pydanon)、殺雄啉、抑芽唑、抗倒酯。

肥料可為液體肥料。術語「液體肥料」係指呈含有不同比率之氮、磷及鉀(例如(但不限於)10%氮、34%磷及0%鉀)及微量養分的流體或液體形式之肥料，通常稱為高磷且促進快速及強有力根生長之基肥。

本發明之化學調配物可呈任何適當習知形式，例如乳液濃縮物(EC)、懸浮液濃縮物(SC)、懸乳乳液(SE)、膠囊懸浮液(CS)、水可分散顆粒(WG)、可乳化顆粒(EG)、油包水乳液(EO)、水包油乳液(EW)、微乳液(ME)、油性分散液(OD)、油狀可混溶可流動劑(OF)、油狀可混溶液體(OL)、可溶濃縮物(SL)、超低體積懸浮液(SU)、超低體積液體(UL)、可分散濃縮物(DC)、可濕潤粉末(WP)或與農業上可接受之佐劑組合之任何技術上可行調配物。

在一個實施例中，提供一種產品，其包含：第一組合物，該第一組合物包含以ATCC第PTA-121165號寄存之解澱粉芽孢桿菌RTI301或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物及以ATCC第PTA-121167號寄存之枯草芽孢桿菌RTI477或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物；第二組合物，該第二組合物包含微生物、生物或化學殺蟲劑、殺真菌劑、殺線蟲劑、殺菌劑、除草劑、植物提取物、植物生長調節劑或肥料之一或組合，其中該第一組合物及該第二組合物分開包裝；以及視情況存在之說明書，該說明書係針對用於輸送適合於有益於植物生長之量的該第一組合物與該第二組合物之組合至：植物之葉、植物之莖皮、植物之果實、植物之花、植物之種子、植物之根部、植物之剪枝、植物之移植物、植物之癒合組織；植物之周圍土壤或生長介質；在土壤或生長介質中播種植物之種子之前的土壤或生長介質；或在土壤或生長介質中種植植物、植物剪枝、植物移植物或植物癒合組織之前的土壤或生長介質。

在一個實施例中，第一組合物進一步包含載劑、分散劑或酵母提取物之一或組合。

在一個實施例中，第一組合物呈液體、粉劑、可撒佈顆粒、乾燥可潤濕粉末或乾燥可潤濕顆粒形式。在一個實施例中，第一組合物呈液體形式，且解澱粉芽孢桿菌RTI301及枯草芽孢桿菌RTI477以約1.0×10⁸CFU/ml至約1.0×10¹²CFU/ml之濃度存在。在一個實施例中，第一組合物呈粉劑、乾燥可潤濕粉末、可撒佈顆粒或乾燥可潤濕顆粒形式且解澱粉芽孢桿菌RTI301及枯草芽孢桿菌RTI477各者以約1.0×10⁸CFU/g至約1.0×10¹²CFU/g之量存在。在一個實施例中，第一組合物呈油性分散液形式且解澱粉芽孢桿菌RTI301及枯草芽孢桿菌RTI477各者以約1.0×10⁸CFU/ml至約1.0×10¹²CFU/ml之濃度存在。

在產品中，殺蟲劑可為擬除蟲菊酯、畢芬寧、七氟菊酯、ξ-賽滅寧、有機磷酸酯、氯氧磷、陶斯松、丁基嘧啶磷、賽扶寧、非潑羅、費普尼、菸鹼類或可尼丁之一或組合。在一個實施例中，產品之第二組合物中之殺蟲劑包含畢芬寧。在一個實施例中，產品之第二組合物中之殺蟲劑包含畢芬寧且其呈與液體肥料相容之調配物。

實例

包括以下實例以為一般技術者實施本發明揭示之標的物之代表性實施例提供指導。鑒於本發明及此項技術中之一般技術水準，一般技術者可瞭解，以下實例意欲僅為例示性的且可在不背離當前所揭示標的物之範疇的情況下採用許多變化、修改及改變。

實例1 經由序列分析鑑別細菌分離株為枯草芽孢桿菌

將本文中稱為RTI477之植物相關菌株自生長在北卡羅來納州之辣木根部分離。將RTI477菌株之16S rRNA及rpoB基因定序，且隨後使用BLAST與NCBI及RDP資料庫中之其他已知細菌菌株進行比較。確定RTI477(SEQ ID NO：1)之16S RNA部分序列與枯草芽孢桿菌菌株BSn5(CP002468)、解澱粉芽孢桿菌菌株NS6(KF177175)及枯草芽孢桿菌亞種枯草菌株DSM 10(NR_027552)之部分16S rRNA基因序列一致。另外，確定RTI477之rpoB序列與已知菌株枯草芽孢桿菌PY79(CP006881)、枯草芽孢桿菌亞種枯草6051-HGW(CP003329)菌株(亦即99%序列一致性；9bp差異)及枯草芽孢桿菌亞種枯草BAB-1a(CP004405)(亦即99%序列一致性；10bp差異)具有99%序列相似性。RTI477菌株經鑑別為枯草芽孢桿菌菌株。在DNA層面上rpoB基因之序列差異表明RTI477為枯草芽孢桿菌之新菌株。枯草芽孢桿菌RTI477於2014年4月17日依據國際承認用於專利程序的微生物寄存布達佩斯條約之條款寄存於美國菌種保藏中心(ATCC)(Manassas,Virginia,USA)且具有專利寄存編號PTA-121167。

實例2 經由序列分析鑑別細菌分離株為解澱粉芽孢桿菌

將本文中稱為RTI301之植物相關菌株自生長在紐約之溫亞德的葡萄藤根圍土壤分離。將RTI301菌株之16S rRNA及rpoB基因定序，且隨後使用BLAST與NCBI及RDP資料庫中之其他已知細菌菌株進行比較。確定RTI301(SEQ ID NO：3)之16S RNA部分序列與解澱粉芽孢桿菌菌株NS6(KF177175)、解澱粉芽孢桿菌菌株FZB42(NR_075005) 及枯草芽孢桿菌亞種枯草菌株DSM 10(NR_027552)之16S rRNA基因序列一致。亦確定RTI301(SEQ ID NO：4)之rpoB基因序列與解澱粉芽孢桿菌植物亞種TrigoCor1448(CP007244)(99%序列一致性；3個鹼基對差異)、解澱粉芽孢桿菌植物亞種AS43.3(CP003838)(99%序列一致性；7個鹼基對差異)、解澱粉芽孢桿菌CC178(CP006845)(99%序列一致性；8個鹼基對差異)及解澱粉芽孢桿菌FZB42(CP000560)(99%序列一致性；8個鹼基對差異)中相同基因具有序列相似性。RTI301菌株經鑑別為解澱粉芽孢桿菌。在DNA層面上rpoB基因之序列差異表明RTI301為解澱粉芽孢桿菌之新菌株。解澱粉芽孢桿菌RTI301於2014年4月17日依據國際承認用於專利程序的微生物寄存布達佩斯條約之條款寄存於美國菌種保藏中心(ATCC)(Manassas，Virginia，USA)且具有專利寄存編號PTA-121165。

實例3 解澱粉芽孢桿菌RTI301及枯草芽孢桿菌RTI477中與抗微生物化合物之生物合成相關之基因

解澱粉芽孢桿菌RTI301菌株之基因組的進一步序列分析顯示，此菌株具有與產生具有抗微生物特性之分子之大量生物合成路徑相關的基因。此等包括枯草菌素、表面活性素、伊枯草菌素、豐原素、解澱粉菌素、地非西丁、桿菌溶素、桿菌抗黴素及芽孢菌素之生物合成路徑。此外，在RTI301菌株中發現與羊毛硫抗生素生物合成相關之基因，其在其他緊密相關解澱粉芽孢桿菌菌株中並無同源物。此展示在圖1中，其展示圍繞且包括在解澱粉芽孢桿菌RTI301中發現之羊毛硫抗生素生物合成操縱子之基因組結構的示意圖。圖1中，頂部箭頭組表示RTI301菌株之蛋白質編碼區，其中指示相對轉錄方向。為進行比較，兩種解澱粉芽孢桿菌參考菌株FZB42及TrigoCor1448的對應區域展示在RTI301菌株下面。RTI301菌株中羊毛硫抗生素合成操縱子中之基因最初使用RAST鑑別且其身分接著使用BLASTp精確化。與兩種參考菌株相比，由RTI301菌株之基因編碼的蛋白質之腔基酸一致性程度由代表性箭頭之陰影程度以及箭頭內指示之一致性百分比兩者指示。自圖1可觀測到來自3種不同菌株之基因中羊毛硫抗生素合成操縱子周圍之區域中存在高度序列一致性，僅僅羊毛硫抗生素合成操縱子內序列一致性程度低(亦即羊毛硫抗生素合成操縱子內少於40%，但周圍區域中大於99%)。針對NCBI之非冗餘(nr)核苷酸資料庫進行對此簇之BLASTn分析，且分析展示與解澱粉芽孢桿菌菌株之5'及3'側接區域具有高度同源性(類似於圖1中高度相似性%)。然而，羊毛硫肽生物合成簇為RTI301獨特的，且未觀測到與NCBI nr資料庫中任何先前測序之DNA具有顯著同源性。因此，此羊毛硫抗生素合成操縱子為解澱粉芽孢桿菌菌株RTI301之獨特特徵。

與具有廣泛範圍抗微生物生物合成路徑之RTI301菌株對比，對RTI477菌株之進一步序列分析揭露此菌株具有與一組更有限具有抗微生物特性之分子的生物合成路徑相關的基因。RTI477菌株具有枯草菌素、豐原素、表面活性素、地非西丁、芽孢菌素、桿菌溶素及桿菌抗黴素之生物合成路徑，但未觀測到伊枯草菌素、羊毛硫抗生素及解澱粉菌素之完整生物合成路徑。

實例4 枯草芽孢桿菌RTI477及解澱粉芽孢桿菌RTI301分離株之抗微生物特性

在盤分析中量測枯草芽孢桿菌RTI477及解澱粉芽孢桿菌RTI301分離株對抗主要植物病原體之拮抗能力。藉由在869瓊脂培養盤上以4cm距離使細菌分離株及病原性真菌並排生長進行評估對抗植物真菌病原體之拮抗作用的盤分析。在室溫下培育培養盤，且長達兩週定期檢查生長行為，諸如生長抑制、地位佔用或無效果。在針對對抗細菌病原體之拮抗特性篩選之情況下，病原體首先在869瓊脂培養盤上擴散為菌苔。隨後，將各分離株之培養物之20μl等分試樣點樣於培養盤上。在室溫下培育培養盤，且長達兩週定期檢查已施用RTI477及RTI301之位置周圍的菌苔中之抑制區。以下表I及II中分別展示RTI477及RTI301菌株各者之拮抗活性的概述。與RTI477菌株相比，RTI301菌株展示對抗廣泛範圍之植物病原性微生物的優良拮抗特性。

實例5 枯草芽孢桿菌RTI477及解澱粉芽孢桿菌RTI301分離株之表現性狀

除拮抗特性之外，亦量測枯草芽抱桿菌RTI477及解澱粉芽孢桿菌RTI301菌株之各種表現性狀且各菌株之資料分別展示於以下表III及IV中。根據表下方文字中所描述之程序進行分析。值得注意地，與RTI301相比，RTI477生長更快且具有強群集表現型。

乙偶姻測試. 將20μl含菌元培養物之869培養基轉移至1ml甲基紅-Voges Proskauer培養基(Sigma Aldrich 39484)。培養物在30℃、200rpm下培育2天。轉移0.5ml培養物，且添加50μl 0.2g/l甲基紅。紅色指示產酸。其餘0.5ml培養物與0.3ml 5% α-萘酚(Sigma Aldrich N1000)，隨後0.1ml 40% KOH混合。培育30分鐘後解譯樣品。紅色顯影指示乙偶姻產生。對於酸及乙偶姻測試，未接種培養基用作陰性對照(Sokol等人，1979，Journal of Clinical Microbiology.9：538-540)。

吲哚-3-乙酸. 將20μl含菌元培養物之豐富869培養基轉移至補充有0.5g/l色胺酸之1ml 1/10 869培養基(Sigma Aldrich T0254)。在暗處在30℃、200RPM下培育培養物4-5天。使樣品離心，且使0.1ml上清液與0.2ml薩爾科夫斯基氏試劑(Salkowski's Reagent)(35%過氯酸，10mM FeCl3)混合。在暗處培育30分鐘後，產生粉紅色之樣品記錄為對IAA合成呈陽性。IAA稀釋液(Sigma Aldrich I5148)用作陽性比較；未接種培養基用作陰性對照(Taghavi等人，2009，Applied and Environmental Microbiology 75：748-757)。

磷酸鹽溶解測試. 將細菌接種於皮科夫斯卡婭(PVK)瓊脂培養基上，該培養基由每公升10g葡萄糖、5g三磷酸鈣、0.2g氯化鉀、0.5g硫酸銨、0.2g氯化鈉、0.1g硫酸鎂七水合物、0.5g酵母提取物、2mg硫酸錳、2mg硫酸鐵及15g瓊脂組成，pH為7，高壓滅菌。清除區指示磷酸鹽溶解細菌(Sharma等人，2011，Journal of Microbiology and Biotechnology Research 1：90-95)。

殼質酶活性. 將10%濕重膠狀殼質添加至經改質之PVK瓊脂培養基(每公升10g葡萄糖、0.2g氯化鉀、0.5g硫酸銨、0.2g氯化鈉、0.1g硫酸鎂七水合物、0.5g酵母提取物、2mg硫酸錳、2mg硫酸鐵及15g瓊脂，pH為7，高壓滅菌)中。細菌塗鋪在此等殼質盤上；清除區指示殼質酶活性(N.K.S.Murthy及Bleakley.，2012.「Simplified Method of Preparing Colloidal Chitin Used for Screening of Chitinase Producing Microorganisms」.The Internet Journal of Microbiology.10(2))。

蛋白酶活性. 細菌塗鋪在補充有10%牛奶之869瓊脂培養基上。清除區指示分解蛋白質之能力，表明蛋白酶活性(Sokol等人，1979，Journal of Clinical Microbiology.9：538-540)。

實例6 枯草芽孢桿菌RTI477分離株在小麥中之生長作用

確定施用枯草芽孢桿菌RTI477對小麥之早期植物生長及活力的作用。實驗藉由在室溫下在通氣下在黑暗中在約2×10⁷CFU/ml細菌之懸浮液中接種表面滅菌之發芽小麥種子2天來進行(亦在無細菌下進行對照)。隨後，接種及對照種子種植在填充有沙之6"盆中。每盆種植10顆種子且每次處理種植1盆，且根據需要交替澆水與經改質之霍格蘭氏溶液(Hoagland's solution)。盆在實驗室窗台中大約21℃下提供天然光/暗週期下培育13天，此時回收植物且量測參數。乾重測定為每9株植物之總重量，結果用枯草芽孢桿菌RTI477菌株接種之植物的總平均植物乾重等於35.41mg，相比而言，未接種對照之重量等於33.38mg，乾重比未接種對照增加6%。生長13天後所提取之植物之照片展示於圖2中。圖2A展示對照植物且圖2B展示用RTI477接種之植物。

實例7 解澱粉芽孢桿菌RTI301及枯草芽孢桿菌RTI477之生長相容性

菌株解澱粉芽孢桿菌RTI301與其他芽孢桿菌分離株之相容性藉由將RTI301菌株點樣至各種其他菌株之菌苔上來測試。此實驗之結果展示於圖3A-3B中。圖3A-3B為展示菌株解澱粉芽孢桿菌RTI301與枯草芽孢桿菌RTI477之間的生長相容性及RTI301菌株與另一解澱粉芽孢桿菌菌株，以PTA-121166寄存在美國菌種保藏中心(ATCC)之解澱粉芽孢桿菌RTI472之間缺乏相容性的影像。當菌株RTI301點樣至菌株RTI472之菌苔上時(圖3A)，觀測到菌株RTI472生長之清晰抑制區。相比之下，當菌株RTI301點樣至菌株RTI477之菌苔上時(圖3B)，僅僅觀測到RTI477菌株最低程度之抑制且細胞菌苔未清除。因此，推斷RTI301與RTI477之生長為相容的。

不限於任何特定作用機制，如下提出一種作用模式以解釋所觀測到之菌株相容性差異。基於三種測試菌株(亦即RTI301、RTI472及RTI477)之基因組序列，預測此等菌株均產生拮抗化合物桿菌溶素、芽孢菌素、地非西丁及桿菌抗黴素。然而，雖然解澱粉芽孢桿菌RTI301與枯草芽孢桿菌RTI477均具有合成枯草菌素之基因，但此基因在解澱粉芽孢桿菌RTI472之基因組中不存在。枯草菌素為一種細菌素，細菌素為一類由細菌產生以抑制類似或緊密相關菌株生長之蛋白質毒素。因此，假定藉由解澱粉芽孢桿菌RTI301合成之枯草菌素可為解澱粉芽孢桿菌RTI472生長之抑制劑。相比之下，枯草芽孢桿菌 RTI477菌株不由RTI301抑制，因為RTI477菌株產生其自身枯草菌素且因此對化合物具抗性。

亦分析解澱粉芽孢桿菌RTI301與枯草芽孢桿菌RTI477菌株之間的菌株形態差異。展示此等菌株各者形態之影像展示在圖4中：解澱粉芽孢桿菌RTI301(圖4A)及枯草芽孢桿菌RTI477(圖4B)。展示在圖4A-4B中的解澱粉芽孢桿菌RTI301及枯草芽孢桿菌RTI477菌株之菌落形態指示當涉及到運動性時菌株行為可能存在差異。運動性為植物相關細菌進行根圍移生之關鍵性狀。解澱粉芽孢桿菌RTI301生長為界限明確之圓形菌落。相比之下，枯草芽孢桿菌RTI477生長為蓬鬆菌落，此形態指示群集及運動性。群集及運動性可能為根圍及植物根表面快速移生之重要表現型。再次，不限於任何特定作用機制，假定由枯草芽孢桿菌RTI477菌株形態表明的強群集表現型可使得此菌株成為比解澱粉芽孢桿菌RTI301更有效之根圍移生菌。

根據生長相容性及觀測到之表現型差異，進一步測試RTI301與RTI477菌株之組合促進植物生長及健康之活性。

實例8 枯草芽孢桿菌RTI477與解澱粉芽孢桿菌RTI301之組合產生協同促進植物生長特性

對於用營養細胞接種或用枯草芽孢桿菌RTI477菌株之孢子塗佈的多種植物種子，觀測到對種子出芽及根發育及結構之積極作用。此描述於例如上文實例6之小麥中。另外，進行實驗以確定枯草芽孢桿菌RTI477及解澱粉芽孢桿菌RTI301菌株施用於大豆種子對出芽、根發育及結構以及早期植物生長及/或植物健康之作用。實驗如下所述，使用RTI301及RTI477之孢子進行。對於實驗，菌株在14L醱酵槽中2XSG中形成孢子。收集孢子但之後未洗滌，濃度為至少1.0×10⁸CFU/mL。在該等實驗中將孢子濃度稀釋10倍或更大。將無菌濾紙置於個別無菌塑膠生長室底部，且將六顆種子置於各容器中。將3mL RTI301或RTI477各者孢子之稀釋液添加至生長室中，關閉生長室且在19℃下培育8天，之後使幼苗成像。另外，亦測試以1：3、1：1及3：1之比率添加的RTI301與RTI477孢子之組合。資料展示於下表V中。與未接種對照相比，當單獨施用時兩個菌株均不抑制種子出芽。

大豆種子用濃度為1×10⁶、1×10⁷及1×10⁸之解澱粉芽孢桿菌RTI301接種對根發育及結構無作用。大豆種子用相同濃度之枯草芽孢桿菌RTI477接種僅僅提供最低濃度下根發育及結構略微改善。出乎意料地，大豆種子用RTI301與RTI477(比率1：3)之組合接種使得在所有測試濃度下根發育改善。大豆種子用RTI301與RTI477(比率1：1)之組合接種使得1×10⁶CFU/ml及1×10⁷CFU/ml之濃度下根發育改善，其中1×10⁶CFU/ml之濃度下觀測到最一致結果。當RTI301及RTI477以3：1之比率在1×10⁶CFU/ml之濃度下施用時觀測到根發育之最佳結果。

另外，種子用RTI301加上RTI477孢子(比率3：1)接種之積極作用的影像展示在圖5A及5B中(A-對照植物；B-接種10⁶cfu/ml之RTI301加上RTI477(比率3：1)之植物)。尤其對根形成及結構具有積極作用，如圖5A-5B中所示。細根毛在水分、養分之吸收及植物與根圈中其他微生物之相互作用中為重要的。此等結果展示雖然與對照植物相比個別菌株之施用幾乎無作用，但施用枯草芽孢桿菌RTI477與解澱粉芽孢桿菌RTI301菌株組合之種子處理可對大豆早期生長及土著化具有顯著益處。

進行額外實驗以研究在植物種子用RTI301與RTI477菌株之組合接種之後對植物生長及發育之作用。特定言之，大豆中之實驗設定如下：1)種子未經處理；2)種子經CRUISERMAXX(殺蟲劑加上殺真菌劑，含有噻蟲嗪、護汰寧加上滅達樂-M；SYNGENTA CROP PROTECTION,INC)與甲基托布津殺真菌劑(其為典型大豆種子處理)之組合(CRUISERMAXX與甲基托布津之組合稱為「化學對照」)處理；3)種子經化學對照處理加上接種每顆種子5.0×10⁺⁵cfu菌株RTI301；4)種子經化學對照處理加上接種每顆種子5.0×10⁺⁵cfu菌株RTI477；5)種子經化學對照處理加上接種每顆種子5.0×10⁺⁵cfu兩種菌株組合。進行十個試驗，每個試驗每次處理4或5個複本。十個田間試驗之平均大豆產量結果(蒲式耳/英畝)呈現在以下表VI中，其中田間試驗場所位於威斯康星州(2)、印地安那州(2)、伊利諾伊州(3)及愛荷華州(3)。四個試驗接種立枯絲核菌，三個試驗接種禾穀鐮刀菌或棒形鐮刀菌，一個試驗接種大豆疫黴菌且兩個試驗不接種。各病原體分開生長在潮濕高壓處理之顆粒種子上且接著空氣乾燥。用於所選試驗中之乾燥接種體與種子以指定施用率混合種植，以在種子開始生長時提供感染。

表VI中之結果展示與經單獨化學對照處理之種子相比，接種單獨解澱粉芽孢桿菌RTI301或枯草芽孢桿菌RTI477對大豆整個平均產量無作用。如先前實驗中所觀測，接種解澱粉芽抱桿菌RTI301與枯草芽孢桿菌RTI477之組合提供協同效應且使得10個田間試驗中大豆產量平均增加5%(自58.2蒲式耳/英畝至61.1蒲式耳/英畝，參見表VI)。值得注意地，觀測到在未接種田間試驗(N=2個試驗)中RTI301與RTI477之組合加上化學對照相比於化學對照，產量益處為3.7蒲式耳/英畝；對於接種絲核菌之試驗(N=4個試驗)，兩個菌株加上化學對照相比於化學對照，增加4.3蒲式耳/英畝；對於接種鐮刀菌之試驗(N=3個試驗)，兩個菌株加上化學對照相比於化學對照，增加1.5蒲式耳/英畝；且對於接種疫黴菌之試驗(N=1個試驗)，兩個菌株加上化學對照相比於化學對照，增加1.0蒲式耳/英畝，因此無論疾病接種及用化學殺真菌劑處理種子如何，均發生產量反應。

不限於任何特定作用機制，觀測到之兩種菌株組合對大豆產量之協同結果的一個解釋如下。解澱粉芽孢桿菌RTI301產生廣泛範圍之拮抗代謝物，諸如枯草菌素，其可抑制真菌與細菌之競爭菌株，包括緊密相關之芽孢桿菌物種的生長及發育。藉此，當RTI301菌株施用於單獨植物時可為其在根圍中之土著化開闢生態棲位/空間。然而，資料未證實解澱粉芽孢桿菌RTI301之強促進植物生長特性。因此，在已引入RTI301菌株且在根圍中開闢生態棲位之後，其可土著化，但無法顯著促進植物生長及/或植物健康。此由種子用單獨解澱粉芽孢桿菌RTI301處理後未觀測到大豆產量增加來證實。

相比之下，枯草芽孢桿菌RTI477似乎比解澱粉芽孢桿菌RTI301 之拮抗作用範圍狹窄，因此可預期其在施用於單獨植物種子時開闢其變得土著化之生態棲位不太有效。因此，菌株可能更不容易在大豆根圍中土著化，此可能引起對植物生長之有益作用缺乏。此由種子用單獨枯草芽孢桿菌RTI477處理後未觀測到大豆產量增加來證實。

實驗已展示枯草芽孢桿菌RTI477菌株之生長與解澱粉芽孢桿菌RTI301相容。另外，RTI477之表現型指示此菌株可為強群集表現型且因此假設其為比解澱粉芽孢桿菌RTI301更有效之根圍移生菌。因此，可預期兩種菌株之組合對大豆具有有益作用。特定言之，一旦解澱粉芽孢桿菌RTI301在大豆根圍中為土著化開闢生態棲位，則枯草芽孢桿菌RTI477可因其群集表現型而在競爭中勝過解澱粉芽孢桿菌RTI301。RTI477菌株可接著在大豆根圍中本身土著化，其中其可為其植物宿主提供有益作用。此由植物種子用兩種菌株組合接種後觀測到大豆產量增加來證實。

實例9 用枯草芽孢桿菌RTI477與解澱粉芽孢桿菌RTI301孢子之組合處理種子增加玉米產量

進行額外實驗以研究在植物種子用RTI301與RTI477菌株之組合接種之後對植物生長、發育及產量之作用。

特定言之，玉米中之實驗設定如下且資料概述於以下表IX中：1)種子未經處理(「UTC」)；2)種子經MAXIM(廣譜種子處理殺真菌劑護汰寧作為其活性成分，每顆種子0.0625mg；SYNGENTA CROP PROTECTION,INC)、APRON XL(活性成分滅達樂-M，每顆種子0.0625mg；SYNGENTA CROP PROTECTION,INC)及PONCHO(可尼丁殺蟲劑，每顆種子0.25mg；BAYER CROPSCIENCE,INC)(其為典型玉米種子處理)(MAXIM、APRON XL及PONCHO之組合稱為「化學對照」或「CC」)；以及3)種子經化學對照處理加上每顆種子5.0×10⁺⁵ cfu菌株RTI301及RTI477各者之組合(「CC+RTI 301/477 1：1」)。分別在天然疾病壓力或土壤接種絲核菌之條件下進行兩個試驗，其中每個試驗每次處理5個複本。對於接種試驗，絲核菌分開生長在濕潤高壓處理之顆粒種子上且接著空氣乾燥。乾燥接種體與種子在種植時以指定施用率混合，以在種子開始生長時提供感染。田間試驗之平均玉米產量結果(蒲式耳/英畝)呈現在以下表IX中，其中田間試驗場所位於伊利諾伊州肖尼敦(Shawneetown,Illinois)。

表VII中之結果展示接種化學對照加上解澱粉芽孢桿菌RTI301與枯草芽孢桿菌RTI477之1：1組合與經單獨化學對照處理之種子相比，顯著增加平均玉米產量。值得注意地，對於天然病原體壓力及接種絲核菌之田間試驗，分別觀測到RTI301與RTI477之1：1組合加上化學對照的產量比單獨化學對照增加10.7蒲式耳/英畝及59.8蒲式耳/英畝。此等資料指示種子用此等菌株之組合處理顯著增強玉米產量。

實例10 用枯草芽孢桿菌RTI477與解澱粉芽孢桿菌RTI301之組合處理種子增加人工接種立枯絲核菌之大豆的產量

進行實驗以研究除化學活性劑用於控制病原體之外，當種子經RTI301與RTI477菌株之組合處理時對大豆中萌芽及產量之作用。特定言之，大豆中之實驗設定如下：1)種子未經處理(UTC)；2)種子經 CRUISERMAXX(殺蟲劑加上殺真菌劑，含有噻蟲嗪、護汰寧加上滅達樂-M；SYNGENTA CROP PROTECTION,INC)及甲基托布津殺真菌劑(其為典型大豆種子處理)之組合(CRUISERMAXX與甲基托布津之組合稱為「化學對照」)處理；3)種子經VIBRANCE(活性成分氟唑環菌胺；SYNGENTA CROP PROTECTION,INC)處理；以及4)種子經化學對照加上每顆種子5.0×10⁺⁵cfu菌株RTI301及RTI477各者處理。兩個試驗在威斯康星州白水(Whitewater,WI)進行，其中每個試驗每次處理4個複本。藉由首先病原體分開在濕潤高壓處理之顆粒種子上生長，將試驗用立枯絲核菌接種且隨後乾燥接種體與種子在種植時混合至指定施用率，以在種子開始生長時提供感染。試驗之平均大豆萌芽及產量結果呈現在以下表VIII中。表VIII中之結果展示除化學對照之外，用解澱粉芽孢桿菌RTI301與枯草芽孢桿菌RTI477之組合處理使得相比於單獨化學活性劑，產量平均增加13.3蒲式耳/英畝(自59.4至72.7蒲式耳/英畝)。因此，使用RTI301與RTI477之組合的種子處理可提供大豆產量之顯著改善，即使在嚴重病原體壓力之條件下。

實例11 鑑別由枯草芽孢桿菌RTI477及解澱粉芽孢桿菌RTI301分離株產生之新代謝物

先前已報導五種類別豐原素型代謝物及去羥基豐原素型代謝物藉由包括枯草芽孢桿菌及解澱粉芽孢桿菌之微生物物種產生(參見例如Li,Xing-Yu等人，2013,J.Microbiol.Biotechnol.23(3),313-321；Pecci Y等人，2010,Mass Spectrom.,45(7)：772-77)。此等代謝物為亦含有脂肪酸基之環狀肽分子。五種類別豐原素及去羥基豐原素型代謝物稱為A、B、C、D及S。五種類別各者之此等代謝物之主鏈結構以及特定胺基酸序列展示在圖6中。在枯草芽孢桿菌中豐原素型化合物稱為大側柏素(Plipastatin)。大側柏素A及B在分子量上與豐原素A及B相似，不同之處僅僅在於肽環之位置3的酪胺酸殘基在豐原素中為D-形式，而在大側柏素中為L-形式，且肽環位置9之酪胺酸殘基在豐原素中為L-形式，而在大側柏素中為D-形式。(Marc Ongena及Philippe Jacques,2007,Trends in Microbiology第16卷，第3期：115-125)。出於本說明書及申請專利範圍之目的，術語「豐原素」將用以指大側柏素代謝物與豐原素代謝物。類似地，出於本說明書及申請專利範圍之目的，術語「去羥基豐原素」將用以指去羥基大側柏素代謝物與去羥基豐原素代謝物。

藉由枯草芽孢桿菌RTI477及解澱粉芽孢桿菌RTI301產生之豐原素型及去羥基豐原素型代謝物使用UHPLC-TOF MS分析。在869培養基或2x SG培養基中30℃下生長6天之後藉由菌株產生之此等代謝物之分子量與針對豐原素型及去羥基豐原素型代謝物所預期之理論分子量相比。另外，為確定藉由菌株產生之各種豐原素型代謝物之胺基酸組成，對先前經由UHPLC-TOF MS鑑別之豐原素型代謝物各者使用LC-MS-MS進行肽測序。以此方式，確定菌株產生豐原素A、豐原素B、豐原素C、豐原素D及豐原素S以及去羥基豐原素A、去羥基豐原素B、去羥基豐原素D及去羥基豐原素S。意外地，除此等已知之化合物之外，確定菌株亦產生先前未鑑別之此等化合物衍生物。

舉例而言，確定解澱粉芽孢桿菌RTI301菌株產生豐原素樣及去羥基豐原素樣化合物，其中環狀肽鏈之位置8(圖6中稱為X₃)之L-異白胺酸經L-甲硫胺酸置換。新類別豐原素及去羥基豐原素在本文中稱為MA、MB及MC，係指A類、B類及C類衍生物，其中圖6中X₃處之L-異白胺酸經L-甲硫胺酸置換。新鑑別之分子以粗體展示於圖6及以下表IX中。對於RTI477菌株，亦觀測到新鑑別之豐原素MA、MB及MC化合物，然而，對於RTI477菌株，未觀測到對應去羥基豐原素MA、MB及MC化合物(表IX)。

進一步確定RTI301菌株產生其他類別之先前未鑑別豐原素及去羥基豐原素。在此類別中，豐原素B及去羥基豐原素B之L-異白胺酸(圖6中之位置X₃)經L-高半胱胺酸(Hcy)置換。此等先前未鑑別之豐原素及去羥基豐原素代謝物在本文中稱作豐原素H及去羥基豐原素H且展示在圖6及表IX中。對於RTI477菌株，亦觀測到新鑑別之豐原素H化合物，然而，對於RTI477菌株，未觀測到對應去羥基豐原素H化合物(表IX)。

進一步確定RTI301菌株產生其他類別先前未鑑別之豐原素及去羥基豐原素代謝物。在此類別中，環狀肽主鏈結構之位置4(圖6中之位置X₁)的胺基酸經L-異白胺酸置換。此等先前未鑑別之代謝物本文中稱為豐原素I及去羥基豐原素I且展示在圖6及表IX中。對於RTI477菌株，亦觀測到新鑑別之豐原素I與去羥基豐原素I化合物(表IX)。

下表IX中提供先前報導之豐原素型及去羥基豐原素型代謝物及新鑑別之代謝物的胺基酸序列的概述。

參考文獻

本文中引用之所有公開案、專利申請案、專利及其他參考文獻均以全文引用的方式併入本文中。

雖然以上標的物已以說明及實例方式出於清楚瞭解之目的相當詳細地描述，但熟習此項技術者應瞭解某些改變及修改可在申請專利範圍之範疇內進行。

【生物材料寄存】國內寄存資訊【請依寄存機構、日期、號碼順序註記】

1.食品工業發展研究所生物資源保存及研究中心；105年04月26日；BCRC910728

2.食品工業發展研究所生物資源保存及研究中心；105年04月26日；BCRC910730

國外寄存資訊【請依寄存國家、機構、日期、號碼順序註記】

1.美國；American Type Culture Collection(ATCC)；2014年04月17日；PTA-121165

2.美國；American Type Culture Collection(ATCC)；2014年04月17日；PTA-121167

<110> 美商富曼西公司

<120> 有益於植物生長及治療植物疾病之微生物組合物及使用方法

<130> 61068-PCT

<160> 4

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 1556

<212> DNA

<213> 枯草芽孢桿菌

<400> 1

<210> 2

<211> 3441

<212> DNA

<213> 枯草芽孢桿菌

<400> 2

<210> 3

<211> 1554

<212> DNA

<213> 解澱粉芽孢桿菌

<400> 3

<210> 4

<211> 3246

<212> DNA

<213> 解澱粉芽孢桿菌

<400> 4

Claims

一種有益於植物生長及/或植物健康之組合物，該組合物包含：以ATCC第PTA-121165號寄存之解澱粉芽孢桿菌RTI301或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物；及以ATCC第PTA-121167號寄存之枯草芽孢桿菌RTI477或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物，其中該組合物施用於該植物之種子、該植物之根部或該植物周圍土壤有益於植物生長及/或植物健康。
如請求項1之組合物，其中有益於植物生長及/或植物健康之特性包含以下：經增加之產量、經提高之幼苗活力、經改善之根發育、經改善之植物生長、經提高之植物健康、經改善之外觀、對植物病原體之經提高之抗性、經減少之病原性感染或其組合。
如請求項1之組合物，其中該組合物呈液體、油性分散液、粉劑、乾燥可潤濕粉末、可撒佈顆粒或乾燥可潤濕顆粒形式。
如請求項1之組合物，其中該組合物呈液體形式，且該枯草芽孢桿菌RTI477及該解澱粉芽孢桿菌RTI301各者係以約1.0×10⁸CFU/ml至約1.0×10¹²CFU/ml之濃度存在。
如請求項1之組合物，其中該組合物呈粉劑、乾燥可潤濕粉末、可撒佈顆粒或乾燥可潤濕顆粒形式，且該枯草芽孢桿菌RTI477及該解澱粉芽孢桿菌RTI301各者係以約1.0×10⁸CFU/g至約1.0×10¹²CFU/g之量存在。
如請求項1之組合物，其中該組合物呈油性分散液形式，且該枯草芽孢桿菌RTI477及該解澱粉芽孢桿菌RTI301各者係以約1.0×10⁸CFU/ml至約1.0×10¹²CFU/ml之濃度存在。
如請求項1之組合物，其中該枯草芽孢桿菌RTI477及該解澱粉芽孢桿菌RTI301各者係以孢子或營養細胞形式存在。
如請求項1之組合物，其進一步包含以下之一或組合：載劑、分散劑或酵母提取物。
如請求項1之組合物，其進一步包含存在適合於有益於植物生長及/或對該植物賦予保護以避免病原性感染之量之以下之一或組合：微生物、生物或化學殺蟲劑、殺真菌劑、殺線蟲劑、殺菌劑、除草劑、植物提取物、植物生長調節劑或肥料。
如請求項9之組合物，其中該殺蟲劑包含畢芬寧(bifenthrin)。
如請求項10之組合物，其中該組合物呈與液體肥料相容之調配物。
如請求項10之組合物，其中該組合物進一步包含水合鋁-鎂矽酸鹽及至少一種分散劑。
如請求項10之組合物，其中該畢芬寧殺蟲劑係以0.1g/ml至0.2g/ml範圍內之濃度存在。
如請求項10之組合物，其中該畢芬寧殺蟲劑係以約0.1715g/ml之濃度存在。
如請求項1之組合物，其中該組合物呈種植基質形式。
如請求項15之組合物，其中該種植基質呈盆栽土形式。
一種經以有益於植物生長及/或植物健康之組合物塗佈之植物種子，該組合物包含：以ATCC第PTA-121165號寄存之解澱粉芽孢桿菌RTI301或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物的孢子；及以ATCC第PTA-121167號寄存之枯草芽孢桿菌RTI477或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物的孢子。
如請求項17之植物種子，其中該植物生長及/或植物健康益處包含以下一或多者：經增加之產量、經提高之幼苗活力、經改善之根發育、經改善之植物生長、經提高之植物健康、經改善之外觀、對植物病原體之經提高之抗性或經減少之病原性感染。
如請求項17之植物種子，其中該植物病原體包含以下之一或組合：昆蟲、線蟲、植物病原性真菌或植物病原性細菌。
如請求項17之植物種子，其中該植物病原體包含以下之一或多者：植物真菌病原體、植物細菌病原體、鏽菌、葡萄孢屬(Botrytis spp.)、灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)、蔥鱗葡萄孢菌(Botrytis squamosa)、歐文菌屬(Erwinia spp.)、胡蘿蔔軟腐歐文菌(Erwinia carotovora)、解澱粉歐文菌(Erwinia amylovora)、鐮刀菌屬(Fusarium spp.)、大刀鐮刀菌(Fusarium colmorum)、禾穀鐮刀菌(Fusarium graminearum)、尖孢鐮刀菌(Fusarium oxysporum)、古巴尖孢鐮刀菌(Fusarium oxysporum f.sp.Cubense)、番茄尖孢鐮刀菌(Fusarium oxysporumf.sp.Lycopersici)、棒形鐮刀菌(Fusarium virguliforme)、黃單孢菌屬(Xanthomonas spp.)、地毯草黃單孢菌(Xanthomonas axonopodis)、油菜黃單孢菌胡蘿蔔致病變種(Xanthomonas campestris pv.carotae)、桃李黃單孢菌(Xanthomonas pruni)、核桃黃單孢菌(Xanthomonas arboricola)、水稻黃單孢菌水稻變種(Xanthomonas oryzae pv.oryzae)、假單胞菌屬(Pseudomonas spp.)、丁香假單胞菌番茄變種(Pseudomonas syringae pv.Tomato)、疫黴菌屬(Phytophthora spp.)、致病疫黴菌(Phytophthora infestans)、寄生疫黴菌(Phytophthora parasitica)、大豆疫黴菌(Phytophthora sojae)、辣椒疫黴菌(Phytophthora capsici)、樟疫黴菌(Phytophthora cinnamon)、草莓疫黴菌(Phytophthora fragariae)、疫黴菌屬(Phytophthora spp.)、櫟樹猝死病菌(Phytophthora ramorum)、棕櫚疫黴菌(Phytophthora palmivara)、菸草疫黴菌(Phytophthora nicotianae)、絲核菌屬(Rhizoctonia spp.)、立枯絲核菌(Rhizoctonia solani)、玉蜀黍絲核菌(Rhizoctonia zeae)、稻枯斑絲核菌(Rhizoctonia oryzae)、褐色絲核菌(Rhizoctonia caritae)、禾穀絲核菌(Rhizoctonia cerealis)、紫紋羽絲核菌(Rhizoctonia crocorum)、草莓絲核菌(Rhizoctonia fragariae)、枝生絲核菌(Rhizoctonia ramicola)、覆盆子絲核菌(Rhizoctonia rubi)、豆狀絲核菌(Rhizoctonia leguminicola)、菜豆殼球孢菌(Macrophomina phaseolina)、稻瘟菌(Magnaorthe oryzae)、腐黴屬(Pythium spp.)、終極腐黴菌(Pythium ultimum)、瓜果腐黴菌(Pythium aphanidermatum)、畸雌腐黴菌(Pythium irregularum)、簇囊腐黴菌(Pythium ulosum)、水生腐黴菌(Pythium lutriarium)、森林腐黴菌(Pythium sylvatium)、黑粉菌屬(Ustilago spp.)、裸黑粉菌(Ustilago nuda)、玉蜀黍黑粉菌(Ustilago maydis)、甘蔗鞭黑粉菌(Ustilago scitaminea)、麥角菌屬(Claviceps spp.)、麥角菌(Claviceps puprrea)、腥黑粉菌屬(Tilletia spp.)、小麥腥黑粉菌(Tilletia tritici)、光滑腥黑粉菌(Tilletia laevis)、稻粒黑粉菌(Tilletia horrid)、小麥矮腥黑粉菌(Tilletia controversa)、莖點黴屬(Phoma spp.)、大豆生莖點黴(Phoma glycinicola)、多變莖點黴(Phoma exigua)、甘藍莖點黴(Phoma lingam)、禾旋孢腔菌(Cocliobolus sativus)、禾頂囊殼(Gaeumanomyces gaminis)或炭疽菌屬(Colleototricum spp.)。
如請求項17之植物種子，其中該枯草芽孢桿菌RTI477及該解澱粉芽孢桿菌RTI301係以約1.0×10²CFU/種子至約1.0×10⁹CFU/種子之量存在。
如請求項17之植物種子，其中該植物種子包含以下之種子：單子葉植物、雙子葉植物、穀物、玉米、甜玉米、爆玉米、玉米種、青貯玉米、飼料玉米、稻穀、小麥、大麥、高粱、甘藍型蔬菜、椰菜、甘藍菜、花椰菜、芽甘藍、散葉甘蘭、羽衣甘藍、芥菜、球莖甘藍、鱗莖類蔬菜、洋蔥、大蒜、蔥、果蔬菜、胡椒、番茄、茄子、地面櫻桃、樹蕃茄、秋葵、葡萄、香草/香料、瓜類蔬菜、黃瓜、哈密瓜、甜瓜、香甘瓜、番南瓜、西瓜、南瓜、茄子、綠葉蔬菜、萵苣、芹菜、菠菜、香芹、菊苣、豆科植物/蔬菜(多汁且乾燥之豆子及豌豆)、豆子、四季豆、食莢菜豆、殼豆、大豆、乾豆、回回豆、利馬豆、豌豆、鷹嘴豆、豌豆瓣、扁豆、油料種子作物、芥花、蓖麻、棉花、亞麻、花生、油菜籽、紅花、芝麻、向日葵、大豆、根/塊莖及球莖蔬菜、胡蘿蔔、馬鈴薯、甘薯、甜菜、薑、辣根、蘿蔔、人參、蕪菁、甘蔗、甜菜、草或草皮草。
如請求項17之植物種子，其中該植物包含大豆或玉米之種子，且該植物生長益處係藉由經增加之產量展現。
如請求項17之植物種子，其進一步包含存在適合於有益於植物生長及/或對該植物賦予保護以避免病原性感染之量之以下之一或組合：微生物、生物或化學殺蟲劑、殺真菌劑、殺線蟲劑、殺菌劑、除草劑、植物提取物、植物生長調節劑或肥料。
如請求項24之植物種子，其中該殺蟲劑包含畢芬寧。
一種有益於植物生長及/或植物健康之方法，該方法包含：將包含以下之組合物輸送至植物種子、植物根部或植物周圍土壤：以ATCC第PTA-121165號寄存之解澱粉芽孢桿菌RTI301或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物；及以ATCC第PTA-121167號寄存之枯草芽孢桿菌RTI477或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物，其中該組合物之輸送有益於植物生長及/或植物健康。
如請求項26之方法，其中該等植物生長及/或植物健康益處包含以下：經增加之產量、經提高之幼苗活力、經改善之根發育、經改善之植物生長、經提高之植物健康、經改善之外觀、對植物病原體之經提高之抗性、經減少之病原性感染或其組合。
如請求項27之方法，其中該植物病原體包含以下之一或組合：昆蟲、線蟲、植物病原性真菌或植物病原性細菌。
如請求項27之方法，其中該植物病原體包含以下之一或多者：植物真菌病原體、植物細菌病原體、鏽菌、葡萄孢屬、灰葡萄孢菌、蔥鱗葡萄孢菌、歐文菌屬、胡蘿蔔軟腐歐文菌、解澱粉歐文菌、狄克氏菌屬(Dickeya spp.)、達旦狄克氏菌(Dickeya dadantii)、黑脛病菌(Dickeya solani)、土壤桿菌屬(Agrobacterium spp.)、根癌土壤桿菌(Agrobacterium tumefaciens)、黃單孢菌屬、地毯草黃單孢菌、油菜黃單孢菌胡蘿蔔致病變種、桃李黃單孢菌、核桃黃單孢菌、水稻黃單孢菌水稻變種、焦枯菌屬(Xylella spp.)、葉緣焦枯菌(Xylella fastidiosa)、卡地菌屬(Candidatus spp.)、韌皮部桿菌(Candidatus liberibacter)、鐮刀菌屬、大刀鐮刀菌、禾穀鐮刀菌、尖孢鐮刀菌、古巴尖孢鐮刀菌、番茄尖孢鐮刀菌、棒形鐮刀菌、核盤菌屬(Sclerotinia spp.)、向日葵核盤菌(Sclerotinia sclerotiorum)、小核盤菌(Sclerotinia minor)、同果核盤菌(Sclerotinia homeocarpa)、尾孢菌屬(Cercospora/Cercosporidium spp.)、鉤絲殼屬(Uncinula spp.)、葡萄白粉病菌(Uncinula necator)(白粉病(Powdery Mildew))、叉絲單囊殼屬(Podosphaera spp.)(白粉病)、白叉絲單囊殼(Podosphaera leucotricha)、克蘭德叉絲單囊殼(Podosphaera clandestine)、擬莖點菌屬(Phomopsis spp.)、葡萄擬莖點黴病菌(Phomopsis viticola)、交鏈孢菌屬(Alternaria spp.)、細極鏈格孢菌(Alternaria tenuissima)、蔥鏈格孢菌(Alternaria porri)、交鏈格孢菌(Alternaria alternate)、立枯交鏈孢菌、鏈格孢菌(Alternaria tenuis)、假單胞菌屬、丁香假單胞菌番茄變種、疫黴菌屬、致病疫黴菌、寄生疫黴菌、大豆疫黴菌、辣椒疫黴菌、樟疫黴菌、草莓疫黴菌、疫黴菌屬、櫟樹猝死病菌、棕櫚疫黴菌、菸草疫黴菌、層鏽菌屬、豆薯層鏽菌、層鏽層假尾孢菌(Phakopsora meibomiae)、曲黴菌屬(Aspergillus spp.)、黃麴黴(Aspergillus flavus)、黑麯黴(Aspergillus niger)、單孢鏽菌屬(Uromyces spp.)、菜豆銹病菌、枝孢菌屬(Cladosporium spp.)、多主枝孢黴(Cladosporium herbarum)、根黴菌屬(Rhizopus spp.)、少根根黴菌(Rhizopus arrhizus)、青黴菌屬(Penicillium spp.)、絲核菌屬、立枯絲核菌、玉蜀黍絲核菌、稻枯斑絲核菌、褐色絲核菌、禾穀絲核菌、紫紋羽絲核菌、草莓絲核菌、枝生絲核菌、覆盆子絲核菌、豆狀絲核菌、菜豆殼球孢菌、稻瘟菌、球腔菌屬、禾生球腔菌(Mycosphaerella graminocola)、斐濟球腔菌(Mycosphaerella fijiensis)(黑色香蕉葉斑病(Black sigatoga))、蘋果斑點球腔菌(Mycosphaerella pomi)、檸檬球腔菌(Mycosphaerella citri)、稻瘟菌屬、稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)、鏈核盤菌屬(Monilinia spp.)、桃褐腐病菌(Monilinia fruticola)、藍莓僵果病病原菌(Monilinia vacciniicorymbosi)、核果鏈核盤菌(Monilinia laxa)、炭疽菌屬(Colletotrichum spp.)、膠孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporiodes)、辣椒炭疽菌(Colletotrichum acutatum)、石斛炭疽菌(Colletotrichum Candidum)、間座殼屬(Diaporthe spp.)、柑桔間座殼菌(Diaporthe citri)、棒孢菌屬(Corynespora spp.)、多主棒孢菌(Corynespora Cassiicola)、膠鏽菌屬(Gymnosporangium spp.)、植物受檜膠鏽菌(Gymnosporangium juniperi-virginianae)、裂盾菌屬(Schizothyrium spp.)、仁果裂盾菌(Schizothyrium pomi)、黏殼孢菌屬(Gloeodes spp.)、梨果黏殼孢菌(Gloeodes pomigena)、葡萄座腔菌屬(Botryosphaeria spp.)、葡萄潰瘍病病菌(Botryosphaeria dothidea)、明孢盤菌屬(Neofabraea spp.)、威爾遜孢殼菌屬(Wilsonomyces spp.)、嗜果威爾遜孢殼菌(Wilsonomyces carpophilus)、單囊殼菌屬(Sphaerotheca spp.)、斑點單囊殼菌(Sphaerotheca macularis)、薔薇單囊殼菌(Sphaerotheca pannosa)、白粉菌屬(Erysiphe spp.)、殼多孢菌屬(Stagonospora spp.)、穎枯殼針孢(Stagonospora nodorum)、腐黴屬、終極腐黴菌、瓜果腐黴菌、畸雌腐黴菌、簇囊腐黴菌、水生腐黴菌、森林腐黴菌、黑星菌屬(Venturia spp)、蘋果黑星病菌(Venturia inaequalis)、輪枝孢菌屬(Verticillium spp.)、黑粉菌屬、裸黑粉菌、玉蜀黍黑粉菌、甘蔗鞭黑粉菌、麥角菌屬、麥角菌、腥黑粉菌屬、小麥腥黑粉菌、光滑腥黑粉菌、稻粒黑粉菌、小麥矮腥黑粉菌、莖點黴屬、大豆生莖點黴、多變莖點黴、甘藍莖點黴、禾旋孢腔菌、禾頂囊殼、炭疽菌屬、雲紋病菌屬(Rhychosporium spp.)、大麥雲紋病菌(Rhychosporium secalis)、離蠕孢屬(Biopolaris spp.)、長蠕孢屬(Helminthosporium spp.)、大麥長蠕孢(Helminthosporium secalis)、玉蜀黍長蠕孢(Helminthosporium maydis)、索萊長蠕孢(Helminthosporium solai)或小麥褐斑長蠕孢(Helminthosporium tritici-repentis)。
如請求項26之方法，其中該組合物呈液體、油性分散液、粉劑、乾燥可潤濕粉末、可撒佈顆粒或乾燥可潤濕顆粒形式。
如請求項26之方法，其中該組合物呈液體形式，且該枯草芽孢桿菌RTI477及該解澱粉芽孢桿菌RTI301各者係以約1.0×10⁸CFU/ml至約1.0×10¹²CFU/ml之濃度存在。
如請求項26之方法，其中該組合物呈粉劑、乾燥可潤濕粉末、可撒佈顆粒或乾燥可潤濕顆粒形式，且該枯草芽孢桿菌RTI477及該解澱粉芽孢桿菌RTI301各者係以約1.0×10⁸CFU/g至約1.0×10¹²CFU/g之量存在。
如請求項26之方法，其中該組合物呈油性分散液形式，且該枯草芽孢桿菌RTI477及該解澱粉芽孢桿菌RTI301各者係以約1.0×10⁸CFU/ml至約1.0×10¹²CFU/ml之濃度存在。
如請求項26之方法，其中該枯草芽孢桿菌RTI477及該解澱粉芽孢桿菌RTI301呈孢子或營養細胞形式存在。
如請求項26之方法，其中該組合物進一步包含以下之一或組合：載劑、分散劑或酵母提取物。
如請求項26之方法，其中該植物包含單子葉植物、雙子葉植物、穀物、玉米、甜玉米、爆玉米、玉米種、青貯玉米、飼料玉米、稻穀、小麥、大麥、高粱、蘆筍、漿果、藍莓、黑莓、樹莓、羅甘莓、越橘、蔓越橘、醋栗、接骨木、黑醋栗、蔓越莓、越莓、甘藍型蔬菜、椰菜、甘藍菜、花椰菜、芽甘藍、散葉甘藍、羽衣甘藍、芥菜、球莖甘藍、瓜類蔬菜、黃瓜、哈密瓜、甜瓜、香甘瓜、番南瓜、西瓜、南瓜、茄子、鱗莖類蔬菜、洋蔥、大蒜、蔥、陳皮、橘子、葡萄柚、檸檬、紅橘、橘柚、柚子、果蔬菜、胡椒、番茄、地面櫻桃、樹蕃茄、秋葵、葡萄、香草/香料、綠葉蔬菜、萵苣、芹菜、菠菜、香芹、菊苣、豆科植物/蔬菜(多汁且乾燥之豆子及豌豆)、豆子、四季豆、食莢菜豆、殼豆、大豆、乾豆、回回豆、利馬豆、豌豆、鷹嘴豆、豌豆瓣、扁豆、油料種子作物、芥花、蓖麻、椰子、棉花、亞麻、油棕櫚、橄欖、花生、油菜籽、紅花、芝麻、向日葵、大豆、梨果、蘋果、海棠果、梨、榅桲、夏花山楂、根/塊莖及球莖蔬菜、胡蘿蔔、馬鈴薯、甘薯、木薯、甜菜、薑、辣根、蘿蔔、人參、蕪菁、核果、杏子、櫻桃、油桃、桃子、李子、梅子、草莓、堅果、杏仁、開心果、山核桃、核桃、榛子、板栗、腰果、山毛櫸堅果、胡桃、夏威夷果、獼猴桃、香蕉、(藍)龍舌蘭、草、草皮草、觀賞植物、一品紅、硬木剪枝、栗樹、橡樹、楓樹、甘蔗或甜菜。
如請求項26之方法，其中該植物包含大豆或玉米，且該植物生長益處係藉由經增加之產量展現。
如請求項26之方法，其中該組合物進一步包含存在適合於有益於植物生長及/或對該植物賦予保護以避免病原性感染之量之以下之一或組合：微生物、生物或化學殺蟲劑、殺真菌劑、殺線蟲劑、殺菌劑、除草劑、植物提取物、植物生長調節劑或肥料。
如請求項38之方法，其中該殺蟲劑包含畢芬寧。
如請求項39之方法，其中該組合物呈與液體肥料相容之調配物。
如請求項39之方法，其中該組合物進一步包含水合鋁-鎂矽酸鹽及至少一種分散劑。
如請求項39之方法，其中該畢芬寧殺蟲劑係以0.1g/ml至0.2g/ml範圍內之濃度存在。
如請求項39之方法，其中該畢芬寧殺蟲劑係以約0.1715g/ml之濃度存在。
一種有益於植物生長及/或植物健康之方法，該方法包含：將第一組合物與第二組合物之組合輸送至植物種子、植物根部或植物周圍土壤：該第一組合物包含以ATCC第PTA-121165號寄存之解澱粉芽孢桿菌RTI301或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物；且該第二組合物包含以ATCC第PTA-121167號寄存之枯草芽孢桿菌RTI477或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物，其中該組合之輸送有益於該植物生長及/或植物健康。
如請求項44之方法，其中該等植物生長及/或植物健康益處包含以下：經增加之產量、經提高之幼苗活力、經改善之根發育、經改善之植物生長、經提高之植物健康、經改善之外觀、對植物病原體之經提高之抗性、經減少之病原性感染或其組合。
如請求項45之方法，其中該植物病原體包含以下之一或組合：昆蟲、線蟲、植物病原性真菌或植物病原性細菌。
如請求項45之方法，其中該植物病原體包含以下之一或多者：植物真菌病原體、植物細菌病原體、鏽菌、葡萄孢屬、灰葡萄孢菌、蔥鱗葡萄孢菌、歐文菌屬、胡蘿蔔軟腐歐文菌、解澱粉歐文菌、狄克氏菌屬、達旦狄克氏菌、黑脛病菌、土壤桿菌屬、根癌土壤桿菌、黃單孢菌屬、地毯草黃單孢菌、油菜黃單孢菌胡蘿蔔致病變種、桃李黃單孢菌、核桃黃單孢菌、水稻黃單孢菌水稻變種、焦枯菌屬、葉緣焦枯菌、卡地菌屬、韌皮部桿菌、鐮刀菌屬、大刀鐮刀菌、禾穀鐮刀菌、尖孢鐮刀菌、古巴尖孢鐮刀菌、番茄尖孢鐮刀菌、棒形鐮刀菌、核盤菌屬、向日葵核盤菌、小核盤菌、同果核盤菌、尾孢菌屬、鉤絲殼屬、葡萄白粉病菌(白粉病)、叉絲單囊殼屬(白粉病)、白叉絲單囊殼、克蘭德叉絲單囊殼、擬莖點菌屬、葡萄擬莖點黴病菌、交鏈孢菌屬、細極鏈格孢菌、蔥鏈格孢菌、交鏈格孢菌、立枯交鏈孢菌、鏈格孢菌、假單胞菌屬、丁香假單胞菌番茄變種、疫黴菌屬、致病疫黴菌、寄生疫黴菌、大豆疫黴菌、辣椒疫黴菌、樟疫黴菌、草莓疫黴菌、疫黴菌屬、櫟樹猝死病菌、棕櫚疫黴菌、菸草疫黴菌、層鏽菌屬、豆薯層鏽菌、層鏽層假尾孢菌、曲黴菌屬、黃麴黴、黑麯黴、單孢鏽菌屬、菜豆銹病菌、枝孢菌屬、多主枝孢黴、根黴菌屬、少根根黴菌、青黴菌屬、絲核菌屬、立枯絲核菌、玉蜀黍絲核菌、稻枯斑絲核菌、褐色絲核菌、禾穀絲核菌、紫紋羽絲核菌、草莓絲核菌、枝生絲核菌、覆盆子絲核菌、豆狀絲核菌、菜豆殼球孢菌、稻瘟菌、球腔菌屬、禾生球腔菌、斐濟球腔菌(黑色香蕉葉斑病)、蘋果斑點球腔菌、檸檬球腔菌、稻瘟菌屬、稻瘟病菌、鏈核盤菌屬、桃褐腐病菌、藍莓僵果病病原菌、核果鏈核盤菌、炭疽菌屬、膠孢炭疽菌、辣椒炭疽菌、石斛炭疽菌、間座殼屬、柑桔間座殼菌、棒孢菌屬、多主棒孢菌、膠鏽菌屬、植物受檜膠鏽菌、裂盾菌屬、仁果裂盾菌、黏殼孢菌屬、梨果黏殼孢菌、葡萄座腔菌屬、葡萄潰瘍病病菌、明孢盤菌屬、威爾遜孢殼菌屬、嗜果威爾遜孢殼菌、單囊殼菌屬、斑點單囊殼菌、薔薇單囊殼菌、白粉菌屬、殼多孢菌屬、穎枯殼針孢、腐黴屬、終極腐黴菌、瓜果腐黴菌、畸雌腐黴菌、簇囊腐黴菌、水生腐黴菌、森林腐黴菌、黑星菌屬、蘋果黑星病菌、輪枝孢菌屬、黑粉菌屬、裸黑粉菌、玉蜀黍黑粉菌、甘蔗鞭黑粉菌、麥角菌屬、麥角菌、腥黑粉菌屬、小麥腥黑粉菌、光滑腥黑粉菌、稻粒黑粉菌、小麥矮腥黑粉菌、莖點黴屬、大豆生莖點黴、多變莖點黴、甘藍莖點黴、禾旋孢腔菌、禾頂囊殼、炭疽菌屬、雲紋病菌屬、大麥雲紋病菌、離蠕孢屬、長蠕孢屬、大麥長蠕孢、玉蜀黍長蠕孢、索萊長蠕孢或小麥褐斑長蠕孢。
如請求項44之方法，其中該第一組合物及該第二組合物呈液體、油性分散液、粉劑、乾燥可潤濕粉末、可撒佈顆粒或乾燥可潤濕顆粒形式。
如請求項44之方法，其中該第一組合物及該第二組合物呈液體形式，且該枯草芽孢桿菌RTI477及該解澱粉芽孢桿菌RTI301各者係以約1.0×10⁸CFU/ml至約1.0×10¹²CFU/ml之濃度存在。
如請求項44之方法，其中該第一組合物及該第二組合物呈粉劑、乾燥可潤濕粉末、可撒佈顆粒或乾燥可潤濕顆粒形式，且該枯草芽孢桿菌RTI477及該解澱粉芽孢桿菌RTI301各者係以約1.0×10⁸CFU/g至約1.0×10¹²CFU/g之量存在。
如請求項44之方法，其中該第一組合物及該第二組合物呈油性分散液形式，且該枯草芽孢桿菌RTI477及該解澱粉芽孢桿菌RTI301各者係以約1.0×10⁸CFU/ml至約1.0×10¹²CFU/ml之濃度存在。
如請求項44之方法，其中該枯草芽孢桿菌RTI477及該解澱粉芽孢桿菌RTI301呈孢子或營養細胞形式。
如請求項44之方法，其中該第一組合物及該第二組合物進一步包含以下之一或組合：載劑、分散劑或酵母提取物。
如請求項44之方法，其中該植物包含單子葉植物、雙子葉植物、穀物、玉米、甜玉米、爆玉米、玉米種、青貯玉米、飼料玉米、稻穀、小麥、大麥、高粱、蘆筍、漿果、藍莓、黑莓、樹莓、羅甘莓、越橘、蔓越橘、醋栗、接骨木、黑醋栗、蔓越莓、越莓、甘藍型蔬菜、椰菜、甘藍菜、花椰菜、芽甘藍、散葉甘藍、羽衣甘藍、芥菜、球莖甘藍、瓜類蔬菜、黃瓜、哈密瓜、甜瓜、香甘瓜、番南瓜、西瓜、南瓜、茄子、鱗莖類蔬菜、洋蔥、大蒜、蔥、陳皮、橘子、葡萄柚、檸檬、紅橘、橘柚、柚子、果蔬菜、胡椒、番茄、地面櫻桃、樹蕃茄、秋葵、葡萄、香草/香料、綠葉蔬菜、萵苣、芹菜、菠菜、香芹、菊苣、豆科植物/蔬菜(多汁且乾燥之豆子及豌豆)、豆子、四季豆、食莢菜豆、殼豆、大豆、乾豆、回回豆、利馬豆、豌豆、鷹嘴豆、豌豆瓣、扁豆、油料種子作物、芥花、蓖麻、椰子、棉花、亞麻、油棕櫚、橄欖、花生、油菜籽、紅花、芝麻、向日葵、大豆、梨果、蘋果、海棠果、梨、榅桲、夏花山楂、根/塊莖及球莖蔬菜、胡蘿蔔、馬鈴薯、甘薯、木薯、甜菜、薑、辣根、蘿蔔、人參、蕪菁、核果、杏子、櫻桃、油桃、桃子、李子、梅子、草莓、堅果、杏仁、開心果、山核桃、核桃、榛子、板栗、腰果、山毛櫸堅果、胡桃、夏威夷果、獼猴桃、香蕉、(藍)龍舌蘭、草、草皮草、觀賞植物、一品紅、硬木剪枝、栗樹、橡樹、楓樹、甘蔗或甜菜。
如請求項44之方法，其中該植物包含大豆或玉米，且該植物生長益處係藉由經增加之產量展現。
如請求項44之方法，其中該第一組合物及該第二組合物中之一或兩者進一步包含存在適合於有益於植物生長及/或對該植物賦予保護以避免病原性感染之量之以下之一或組合：微生物、生物或化學殺蟲劑、殺真菌劑、殺線蟲劑、殺菌劑、除草劑、植物提取物、植物生長調節劑或肥料。
如請求項56之方法，其中該殺蟲劑包含畢芬寧。
如請求項57之方法，其中該組合物呈與液體肥料相容之調配物。
如請求項57之方法，其中該組合物進一步包含水合鋁-鎂矽酸鹽及至少一種分散劑。
如請求項57之方法，其中該畢芬寧殺蟲劑係以在0.1g/ml至0.2g/ml範圍之濃度存在。
如請求項57之組合物，其中該畢芬寧殺蟲劑係以約0.1715g/ml之濃度存在。
一種有益於植物生長及/或植物健康之方法，該方法包含：將植物種子種植在適合生長介質中，其中該種子業經包含以下之組合物塗佈：以ATCC第PTA-121165號寄存之解澱粉芽孢桿菌RTI301或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物的孢子；及以ATCC第PTA-121167號寄存之枯草芽孢桿菌RTI477或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物的孢子，其中該解澱粉芽孢桿菌RTI301及該枯草芽孢桿菌RTI477係以適合於有益於植物生長及/或植物健康之量存在。
如請求項62之方法，其中該植物生長及/或植物健康益處包含以下：經增加之產量、經提高之幼苗活力、經改善之根發育、經改善之植物生長、經提高之植物健康、經改善之外觀、對植物病原體之經提高之抗性、經減少之病原性感染或其組合。
如請求項63之方法，其中該植物病原體包含以下之一或組合：昆蟲、線蟲、植物病原性真菌或植物病原性細菌。
如請求項63之方法，其中該植物病原體包含以下之一或多者：植物真菌病原體、植物細菌病原體、鏽菌、葡萄孢屬、灰葡萄孢菌、蔥鱗葡萄孢菌、歐文菌屬、胡蘿蔔軟腐歐文菌、解澱粉歐文菌、鐮刀菌屬、大刀鐮刀菌、禾穀鐮刀菌、尖孢鐮刀菌、古巴尖孢鐮刀菌、番茄尖孢鐮刀菌、棒形鐮刀菌、黃單孢菌屬、地毯草黃單孢菌、油菜黃單孢菌胡蘿蔔致病變種、桃李黃單孢菌、核桃黃單孢菌、水稻黃單孢菌水稻變種、假單胞菌屬、丁香假單胞菌番茄變種、疫黴菌屬、致病疫黴菌、寄生疫黴菌、大豆疫黴菌、辣椒疫黴菌、樟疫黴菌、草莓疫黴菌、疫黴菌屬、櫟樹猝死病菌、棕櫚疫黴菌、菸草疫黴菌、絲核菌屬、立枯絲核菌、玉蜀黍絲核菌、稻枯斑絲核菌、褐色絲核菌、禾穀絲核菌、紫紋羽絲核菌、草莓絲核菌、枝生絲核菌、覆盆子絲核菌、豆狀絲核菌、菜豆殼球孢菌、稻瘟菌、腐黴屬、終極腐黴菌、瓜果腐黴菌、畸雌腐黴菌、簇囊腐黴菌、水生腐黴菌、森林腐黴菌、黑粉菌屬、裸黑粉菌、玉蜀黍黑粉菌、甘蔗鞭黑粉菌、麥角菌屬、麥角菌、腥黑粉菌屬、小麥腥黑粉菌、光滑腥黑粉菌、稻粒黑粉菌、小麥矮腥黑粉菌、莖點黴屬、大豆生莖點黴、多變莖點黴、甘藍莖點黴、禾旋孢腔菌、禾頂囊殼或炭疽菌屬。
如請求項62之方法，其中該組合物進一步包含存在適合於有益於植物生長及/或對該易感病植物賦予保護以避免病原性感染之量之以下之一或組合：微生物、生物或化學殺蟲劑、殺真菌劑、殺線蟲劑、殺菌劑、除草劑、植物提取物、植物生長調節劑或肥料。
如請求項66之方法，其中該殺蟲劑包含畢芬寧。
如請求項62之方法，其中該枯草芽孢桿菌RTI477及該解澱粉芽孢桿菌RTI301各者係以約1.0×10²CFU/種子至約1.0×10⁹CFU/種子之量存在。
如請求項62之方法，其中該植物種子包含以下種子：單子葉植物、雙子葉植物、穀物、玉米、甜玉米、爆玉米、玉米種、青貯玉米、飼料玉米、稻穀、小麥、大麥、高粱、甘藍型蔬菜、椰菜、甘藍菜、花椰菜、芽甘藍、散葉甘蘭、羽衣甘藍、芥菜、球莖甘藍、鱗莖類蔬菜、洋蔥、大蒜、蔥、果蔬菜、胡椒、番茄、地面櫻桃、樹蕃茄、秋葵、葡萄、香草/香料、瓜類蔬菜、黃瓜、哈密瓜、甜瓜、香甘瓜、番南瓜、西瓜、南瓜、茄子、綠葉蔬菜、萵苣、芹菜、菠菜、香芹、菊苣、豆科植物/蔬菜(多汁且乾燥之豆子及豌豆)、豆子、四季豆、食莢菜豆、殼豆、大豆、乾豆、回回豆、利馬豆、豌豆、鷹嘴豆、豌豆瓣、扁豆、油料種子作物、芥花、蓖麻、棉花、亞麻、花生、油菜籽、紅花、芝麻、向日葵、大豆、根/塊莖及球莖蔬菜、胡蘿蔔、馬鈴薯、甘薯、甜菜、薑、辣根、蘿蔔、人參、蕪菁、甘蔗、甜菜、草或草皮草。
如請求項62之方法，其中該植物種子包含大豆或玉米，且該植物生長益處係藉由經增加之產量展現。
一種有益於植物生長之組合物，該組合物包含：以ATCC第PTA-121165號寄存之解澱粉芽孢桿菌RTI301或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物；以ATCC第PTA-121167號寄存之枯草芽孢桿菌RTI477或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物；以及畢芬寧殺蟲劑。
一種有益於植物生長之組合物，該組合物包含：以ATCC第PTA-121165號寄存之解澱粉芽孢桿菌RTI301或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物；以ATCC第PTA-121167號寄存之枯草芽孢桿菌RTI477或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物；以及畢芬寧殺蟲劑，其中該組合物呈與液體肥料相容之調配物。
如請求項72之組合物，其中該組合物進一步包含水合鋁-鎂矽酸鹽及至少一種分散劑。
如請求項72之組合物，其中該畢芬寧殺蟲劑係以0.1g/ml至0.2g/ml範圍內之濃度存在。
如請求項72之組合物，其中該畢芬寧殺蟲劑係以約0.1715g/ml之濃度存在。
一種有益於植物生長之組合物，該組合物包含：以ATCC第PTA-121165號寄存之解澱粉芽孢桿菌RTI301或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物；以ATCC第PTA-121167號寄存之枯草芽孢桿菌RTI477或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物；以及包含來自白羽扇豆之提取物、BLAD多肽或BLAD多肽之片段之一或組合的殺真菌劑。
如請求項87之組合物，其中該組合物包含約20%該BLAD多肽或該BLAD多肽之片段。
一種植物種子，其經有益於植物生長及/或植物健康之組合物塗佈，該組合物包含：以ATCC第PTA-121165號寄存之解澱粉芽孢桿菌RTI301或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物的孢子；以ATCC第PTA-121167號寄存之枯草芽孢桿菌RTI477或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物的孢子；以及畢芬寧殺蟲劑。
一種產品，其包含：第一組合物，該第一組合物包含以ATCC第PTA-121165號寄存之解澱粉芽孢桿菌RTI301或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物及以ATCC第PTA-121167號寄存之枯草芽孢桿菌RTI477或其具有其所有鑑別特徵之突變體的生物純培養物；第二組合物，該第二組合物包含微生物、生物或化學殺蟲劑、殺真菌劑、殺線蟲劑、殺菌劑、除草劑、植物提取物、植物生長調節劑或肥料之一或組合，其中該第一組合物及該第二組合物分開包裝；以及說明書，該說明書係針對用於輸送適合於有益於植物生長之量的該第一組合物與該第二組合物之組合至：該植物之葉、該植物之莖皮、該植物之果實、該植物之花、該植物之種子、該植物之根部、該植物之剪枝、該植物之移植物、該植物之癒合組織；該植物之周圍土壤或生長介質；在土壤或生長介質中播種該植物之種子之前的該土壤或生長介質；或在土壤或生長介質中種植該植物、該植物剪枝、該植物移植物或該植物癒合組織之前的該土壤或生長介質。
如請求項79之產品，其中該殺蟲劑為以下之一或組合：擬除蟲菊酯(pyrethroid)、畢芬寧、七氟菊酯(tefluthrin)、ξ-賽滅寧(zeta-cypermethrin)、有機磷酸酯、氯氧磷(chlorethoxyphos)、陶斯松(chlorpyrifos)、丁基嘧啶磷(tebupirimphos)、賽扶寧(cyfluthrin)、非潑羅(fiproles)、費普尼(fipronil)、菸鹼類(nicotinoids)或可尼丁(clothianidin)。
如請求項80之產品，其中該殺蟲劑包含畢芬寧。
如請求項81之產品，其中該第二組合物呈與液體肥料相容之調配物。
如請求項79之產品，其中該第一組合物進一步包含以下之一或組合：載劑、分散劑或酵母提取物。
如請求項79之產品，其中該第一組合物呈液體、粉劑、可撒佈顆粒、乾燥可潤濕粉末或乾燥可潤濕顆粒形式。
如請求項79之產品，其中該第一組合物呈液體形式，且該解澱粉芽孢桿菌RTI301及該枯草芽孢桿菌RTI477各者係以約1.0×10⁸CFU/ml至約1.0×10¹²CFU/ml之濃度存在。
如請求項79之產品，其中該第一組合物呈粉劑、乾燥可潤濕粉末、可撒佈顆粒或乾燥可潤濕顆粒形式，且該解澱粉芽孢桿菌RTI301及該枯草芽孢桿菌RTI477各者係以約1.0×10⁸CFU/g至約1.0×10¹²CFU/g之量存在。
如請求項79之產品，其中該第一組合物呈油性分散液形式，且該解澱粉芽孢桿菌RTI301及該枯草芽孢桿菌RTI477各者係以約1.0×10⁸CFU/ml至約1.0×10¹²CFU/ml之濃度存在。