TW201124425A - Parenteral formulations of gemcitabine derivatives - Google Patents

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201124425 六、發明說明： v 發明之領域 本發明係關於一種醫藥組成物，其包含2，，2，-二氟去氧 胞鳴°定核苷（吉西他濱（Gemcitabine ))之某些長鏈飽和及 單不飽和脂肪酸衍生物‘作為活性成分。特定言之，本發明 係關於一種醫藥組成物及其製備方法，其適於非經腸投予 治療有效劑量之該等衍生物以便改善癌症治療時之順應 發明之背景 由 Eli Lilly 吉西他濱為一種熟知細胞生長抑制化合物 & Co.公司以商標Gemzar銷售，其具有下式

HO—— 本發明醫藥組成物之活性成分包含式 生物： 之吉西他濱衍 201124425 nhr,

RjO (I) 其中Rlu r3係獨立地選自氫及Ci8•及c2。·飽和及單不 飽和酿基，其限制條件為Rl、m3不能全部為氫。 由 w〇 98/32762已知式〇)化合物適 用於治療癌症。 核苦及核芽類似物（諸如吉西他濱）之細胞吸收主要 經由選擇性核*轉運（ΝΤ)受體來進行。在臨床情形中發 生耐樂性時可見到對該受體之調節/抑制。該現象在試管内 可經由添加NT抑制劑觀察到。先前已報導吾等之衍生物不 受NT抑制劑存在的影響’因為在該等抑制劑存在下，較佳 衍生物之細胞生長抑制活性保留（w，〇 98/32762 )。 亦可能存在與癌症治療有關之其他耐藥性機制。多重 耐藥性（MDR)為在其他方面有效之藥物失效之主要原因 之-。已發現本發明之衍生物似乎並非mdr泵之受質，且 由此解決該難題。 由於内源性酶去氧胞嘴。定核苷去胺酶對相應尿哺。定安 生物（dFdU)之快速去胺作用，故吉西他濱在血聚中之斗 衰期約為10分鐘（P. G. Johnston等人，Cance

Chromatography and Bi〇I〇gical Resp〇nse M〇difiers，年刊 201124425 16，1996，第1章，卩化己如見：^等人編）。 相比之下’本發明之衍生物為去胺酶之不良受質。因 此，本發明之衍生物比吉西他濱本身更適於惡性腫瘤之全 身或局部治療。 然而，將治療有效量之式（I )難溶性衍生物調配成適 於非經腸投藥之醫藥組成物為一難題。出於靜脈内投予該 等衍生物起見’賦形劑之組成應經選擇以使得該等衍生物 可溶解或形成奈米尺寸之粒子。式（Ϊ )之吉西他濱衍生物 為兩親媒性且於水及油中之溶解度低’此限制了可用於溶 解其之潛在賦形劑的選擇。若該調配物為顆粒系統，則對 用於靜脈内投藥之調配物中的顆粒尺寸存在某些要求。此 •外，非經腸產品必須無菌且無菌過濾通常為用於醫藥顆粒 系統之唯一可行方法。此意謂該等調配物之粒度必須小於 220 nm( 0.22 μιη)，其為無菌過濾器之孔徑。在實踐及工業 規模製程中’顆粒應小得多以避免過濾器堵塞。 另一問題為由於該等衍生物充當吉西他濱之前藥，所 以預期（且最近經證貫，參見該文件中之實施例14 )其臨 床劑量與吉西他濱之臨床劑量處於相同數量級。Gemzar係 以1000 mg/m2之劑量（3.3 mm〇l/m2之活性劑）靜脈内（丨ν·) 扠予，且靜脈内吉西他濱_5’_反油酸酯之建議劑量為丨25〇 mg/m2 ( 2.4 mmol/m2之活性劑）。此意謂對於具有18 m2表 面積之一般患者，吉西他濱反油酸酯作為單藥療法之總 劑Έ將為2250 mg。 此將引起更多其他挑戰：a)為限制向患者非經腸投予 201124425 大體積液體，要求增加藥物力11丄 抽田甘 帛物在调配物中之濃度，& b)避免 使用其他功能性賦形劑，‘ 啫如抗氧化劑及防腐劑，該等賦 “1即使少直添加仍將合計達不可接受程度之總投予量。 最後式（I)之何生物在生理pH值下易於水解降解， 其速率視該衍生物之類型及缥彳 一 主汉緩衝液亇定。舉例而言，吉西 他凟-5'-反油酸g旨在pH 74下直亡队m、 P .4下具有約30分鐘之半衰期。此 Γ步對調配及對製造製程參數皆產生挑戰。醫藥產品通 吊較佳為即用$，但亦可將調配物冷康乾燥以避免在產品 儲存期限内降解。若該等衍生物為^型，則在其整個儲 存期限内應p；ar止其在非經腸調配物之水相環境中發生水解 降解。 本發明提供對上述所有問題之解決方案。 發明之概要 申請人已意外發現一種適於非經腸投藥之醫藥組成物 及式（I)之吉西他濱衍生物之製備方法，其產生基於磷脂 之即用型高藥物負載水性奈米顆粒調配物，其中藥物與脂 質之莫耳比高達1:2,甚至更佳高達1:1，其中當在28艽下 於氮氣層下儲存時，該等脂質奈米粒子防止該衍生物水解 降解為吉西他濱維持至少38個月。崦外，該方法使用來源 於蛋黃之天然磷脂’不併入任何界面活性劑，且如使用為 小粒度分析而設計之儀器（諸如Malvern Zetasizer Nan。） 所測定，產生具有5-20 nm的基於鵠積之D(vq|，G99)直徑或 30-50 nm的基於以強度為基礎之z平均值之直徑的微胞樣 201124425 奈米粒子。具有該尺ς 該製備方法為在工業；粒子可易於進行無菌過滤。另外’ ^ ^ 、上規模可擴大之方法，適於製造含水 無菌產品。 就 US 6,406 71 飞 r 5 及US 6,984,395中所述的調配物之侷 限性而論，無法箱粗 ★ 預枓到.本發明中所述之醫藥組成物會產生 s亥專獨特特徵β此主|键职 •V因於相比S亥專公開案中所述者較 佳之吉西他濱-5 ' - Β·ίτ ：£*· 曰肪I醋的物理化學特徵及改良之製造 方法。 發明之詳述 本心月之主要目標為提供一種適於非經腸投藥之基於 天然磷脂之醫藥組成物，其包含式⑴之吉西他濱衍生物 作為活(生成刀’其供應治療有效劑量之該等衍生物，在癌 症治療中與吉西他濱相比同樣有效或更有效。 本發明之此目標及其他目標可藉由如隨附申請專利範 圍中所述之醫藥組成物；及其製備方法來達成。 1.活性醫藥成分 根據本發明之一具體實例，提供一種醫藥組成物，其 包含式（I)之吉西他濱衍生物： 7 201124425 NHR,

(i) 其中Ri、Rz及R3係獨立地選自氫及;(：18及C2G飽和及單不 飽和酿基’其限制條件為、R2及不能全部為氫，或其 醫藥學上可接受之鹽作為活性成分； 其中將該活性成分溶解或分散於磷脂中。 活性成分被製備成包含以下者之調配物： a )選自由以下者所組成之群組之增溶劑磷脂：磷脂醯膽鹼、 磷月a醯甘油、磷脂醯乙醇胺、磷脂醯肌醇、磷脂醯絲胺酸、 構脂酸、溶血磷脂、神經鞘磷脂及心磷脂，該等磷脂呈任 何形式，包括鹽化或去鹽形式、氫彳^-或部分氫化形式、天 然形式、半合成或合成形式； b) 輔助增洛劑，其選自由帶電磷脂所組成之群組； c) 等張劑；且 其中該活)·生成刀與磷脂之莫耳比在i: 5至i: i之間且該調酉 物之平均粒度在2.5_3〇nm之間的範圍内。 在一較佳具體實你j中，< (Ο吉西他濱衍生物之R 及R3為氫且尺2為Cls或ο；”飽和或單不飽和醯基。 吉西他續具有三個可衍生化之官能基，亦即$，經基^ 201124425 3·-經基及N4-胺基。各基團可選擇性轉化成酯或醯胺衍生 物，但亦可形成二加合物（二酯或酯-醯胺）及三加合物。 在二加合物及三加合物之情況下，醯基取代基不必相同。 目前’單醯基衍生物（亦即Ri、R2及r3中之兩者為氫） ί· 較佳用作本發明醫藥組成物之活性成分。醯基之單取代尤 其較佳應位於糖部分之3’-Ο及5位置，而5'-0取代最佳。 單不飽和醢基之雙鍵可為順式或反式構型，不過治療 作用可能會視使用何種構型而不同。 單不飽和醯基中雙鍵之位置似乎亦影響活性。目前， 優選使用在ω-9位置具有不飽和之酯或醯胺。在命名法之ω_ 系統中，單不飽和脂肪产雙鍵之位置ω係自末端甲基開始 數起，因此例如二十碳烯酸（C20:l ω-9)在鏈中具有20個 奴原子且在自該鏈甲基末端開始數起之碳9及1 〇之間形成 單二雙鍵。優選使用衍生自油酸（C1 8:1 ω-9，順式）、反油 酸（C1 8:1 ω - 9，反式）、二十碳稀酸（c 2 0:1 ω - 9，順式）及 (C20:l ω-9，反式）之酯、酯-醯胺及醯胺且該等醯胺及5、 酉旨目前為最佳衍生物。 在一些情況下宜使用衍生自硬脂酸（C18:0)及二十燒 酸（C20:0)之吉西他讀之醋.、醋-酿胺及醯胺。 其中吉西他濱（N4)-反油酸醯胺、吉西他濱_5,_反油酸隨 及吉西他濱-3反油酸酯為最佳衍生物且根據本發明之— 較佳具體實例，吉西他濱_5’-反油酸酯為醫藥組成物之活性 成分。 根據先前技術中已知之方法製備式（j )之衍生物（更 201124425 多詳情參見WO 98/32762 ) » ' 本發明之醫藥組成物在本文中描述為含有活性醫藥成 分（如上所述）、增溶劑、辅助增溶劑及等張劑之含水調配 物。根據本發明之一較佳具體實例’醫藥組成物包含吉西 他濱-5’-反油酸酯、磷脂醯膽鹼、磷艏醯甘油、甘油及水。 2·增溶劑 根據本發明之一較佳具體實例，該醫藥組成物之磷脂 僅包含帶中性電荷之磷脂或與其他磷脂組合，其中至少一 者為帶負電碗脂。 填脂為細胞膜之天然組分且高度生物相容。磷脂為兩 親媒性分子，其在與水接觸時自發形成雙層且在進一步稀 釋後轉變成稱為脂質體之微粒及奈米尺寸粒子，親脂性分 子及兩親媒性分子可以特定莫耳比溶解於磷脂雙層中而不 破壞脂質體之結構。該種調配物中之最大藥物濃度取決於 填月a之類型及濃度及活性物質之物理化學特徵。該等調配 物中藥物與磷脂之常用莫耳比在1:2〇範圍内。 脂質體由天然或合成磷脂，主要由磷脂醯膽鹼製備而 成。出於穩定膠態粒子之目的，亦可併入較少量帶負電磷 脂，諸如磷脂醯甘油。由粒子之負電荷產生之靜電排斥提 供避免聚集及形成較大粒子的有效障，礙。 碌脂在與諸如膽汁鹽、甘膽酸、牛膽酸、泊洛沙姆 (poloxamer )、聚山梨醇酯、聚氧乙烯荒麻油 (cremophore )、脫水山梨糖醇單月桂酸酯等之界面活性劑 組合時，亦可形成（混合）微胞。在此情況下，兩親媒性

S 10 201124425 ^ 或親脂性藥物可以高於5由脂質體所預期之莫耳比溶解於微 胞中。原因在於由於不存在水核心且缺少脂質雙層之有組 織結構，故微胞允許更大濃度之磷脂，且因此每單位體積 之其奈米粒子比脂質體溶解更多兩親媒性/親脂性藥物。然 而’由於考慮到界面活性劑通常會顯示濃度依賴型毒性不 良作用，故醫藥調配物中該等賦形劑之添加應限制在最低 量0 調配物之脂質奈米丨結構可包含（但不限於）充當增溶 劑、形成雙層或形成微胞之賦形劑的以下磷脂：磷脂醯膽 鹼、磷脂醯甘油、磷脂醯乙醇胺、磷脂醯肌醇、磷脂醯絲 胺酸、磷脂酸、溶血磷脂、神經鞘磷脂、心磷脂。該等磷 月曰可呈任何形式，包括禮化或去鹽形式、氫化或部分氫化 形式、天然形式、半合成或合成形式。亦可將諸如聚乙二 醇（P:pG )之親水性聚合物連接於磷脂，以避免被網狀内皮 系統（RES )迅速清除。 在一較佳具體實例中，單獨使用來源於雞蛋之天然不 飽和磷脂或與增溶劑組合使用。 在本發明之另一具體實例中，天然卵稱脂包含在6-8 之pH值範圍内呈中性之兩性離子構脂，諸如卵磷脂醯膽 驗。在一較佳具體實例中’增溶劑為經純化之雞蛋磷脂醯 膽驗’其具有高於96.0%之磷脂醯膽鹼，及不超過1.0%之 溶血磷脂醯膽驗’不超過1 〇%之神經賴填脂，及不超過0/〇 之磷脂醯乙醇胺。 3·輔助増溶劑 201124425 本發明之調配物預期使用輔助增溶劑。輔助增溶劑可 為任何合適帶電磷脂。在一較佳具體實例中，磷脂帶負電 荷。在一更佳具體實例中，輔助增溶劑磷脂在6-8之pH值 範圍内帶負電，諸如雞蛋磷脂醯甘油，其具有高於98 0〇/〇之 磷脂醯甘油鈉鹽、不超過1.5%之磷脂酸、不超過0.5%之溶 血填脂醯甘油及不超過〇. 5 %之麟脂醯膽驗。 4·等張劑 在本發明之一具體實例中，在醫藥組成物中納入等張 劑。等張劑包括（但不限於）甘油、·丙二醇、聚乙二醇、 泊洛沙姆、多元醇、碳水化合物、糖、葡聚糖、胺基酸或 蛋白質、有機鹽或無機鹽及其混合物。在一較佳具體實例 中’等張劑為甘油。 5·視情況選用之賦形劑 在具體實例中，添加固醇。在一較佳具體實例中， 該固醇為膽固醇。 在一具體實例中，添加其他組分，諸如抗氧化劑，更 佳生育酚，或脂肪酸。 、在另具體實例中，於醫藥調配物中添加低溫保護劑 、有利於冷凍乾燥。低溫保護劑包括（但不限於）麥芽糖、 纖維二糖、乳糖、木二糖糖、甘露糖醇或葡 $ -體實例中’等張劑亦為低溫保護劑且出於 二Γ有利：冷凍乾燥之目的而添加於醫藥調配物中。 又圭一體實例中，該等張及低溫保護劑為雙酿，諸如

S 12 201124425 糖海溱糖'蔗糖、甘露糖醇及其類似物。 6.製造調配物 在本發明之一具體實例中，賦形劑之組成、藥物與脂 質之比率及製造方法經選擇以促進形成脂質體結構。在— 尤其較佳具體實例中’該等參數經選擇以促進形成微胞奈 米粒子或微胞與脂質體之組合。 醫藥組成物之一些賦形劑經選擇以便溶解式（I)化合 物溶解或增加式（I )化合物之溶解度。在一具體實例中， 。亥賦形劑可自最終產物移除。在一較佳具體實例中該蜱 形劑為乙醇且基本上自最終產物移除。 本發明之醫藥組成物為固體、半固體或液體，較佳呈 液體形式，且可以諸如小瓶、輸注袋或其類似物之個別單 元提供。最終組成物之醫藥形式為奈米尺寸懸浮液或分散 液’為脂質體或微胞樣奈米粒子，或兩者之組合。 製備具有高藥物與脂質比率之非脂質體脂質錯合物之 方法已描述於US 6,406,713及US 6,984,395中。該等所謂 高藥物：脂質錯合物（HDLC )描述於第一項專利中且以使用 合成飽和磷脂為基礎（較佳莫耳比為7:3之磷脂醯膽鹼及磷 脂醢甘油之組合）。該等謹慎選擇之磷脂錯合物可提供高達 50莫耳百分比之親脂性藥物而無需添加任何界面活性劑。 然而’該專利中HDLC之尺寸據報導在微米範圍内，從而 使該種調配物不能應用於靜脈内投藥。已描述了選擇粒子 之較小部分之分離方法.，此舉在製造產品之方法中引入了 額外耗時步驟。 13 201124425 US 6,984,395另外描述藉由改變加工條件及在緩衝液 中存在或不存在鹽’可在脂質體調配物或具有微胞結構之 HDLC之間進行選擇。發明者顯示該等結構為非脂質體結構 (未偵測出雙層），且視製造製程而定，HDLC之尺寸可低 至1 0-20 nm。該後者微胞調配物與先前專利中所述之較大 粒子相比，主要缺陷在於藥物與脂質之莫耳比低得多，亦 即在1:7至1: 1〇之範圍内。發明者解釋，與藥物相比增加 脂質量由於形成較小粒子而有助於改良產物之無菌過濾 性。然而，使用該方法僅獲得5〇〇 mL之過濾體積。對於藥 品之常規商業生產而言，將要求大得多的體積。 如本文所用之術語「最終醫藥組成物」係指可直接投 予患者之所製備醫藥組成物。此意謂若醫藥組成物為冷凍 乾燥固體’則最終醫藥組成物應指該調配物根據預置說明 書復原之溶液。 如本文所用之術語「治療有效量」係指在調配用於非 經腸投藥之含有0.001-80%式（1)吉西他濱衍生物或其醫 藥學上可接受之鹽之調配物中，每日約0 001至10公克式 (Ο吉西他濱衍生物或其醫藥學上可接受之鹽，更佳每曰 約10毫克至6公克式（I)吉西他濱衍生物或其醫藥學上可 接受之鹽。 ί 最終醫藥組成物中雄脂相之量可在約〇 . 1 %至5 〇 %，較 佳1-15%，且更佳5_12%之間變化。在最佳（但並非限制性） 具體實例中’鱗脂相之量為最終醫藥組成物之9.5_丨。包 括0 _ 1 %至50%之所有子範圍作為本發明之一部分。 201124425 最終醫藥组成物中式（ζ)吉西他濱衍生物與磷脂總量 之莫耳比可在1:13〇至1:1，較佳1:7〇至i:2之間變化。另 一較佳範圍包括1:6.6(相當於最終調配物中1〇 mg/mi吉西 他濱衍生物比脂質）至1.: 1.9(相當於最終調配物中3 5 mg/ml 吉西他濱衍生物比脂質）β另一較佳範圍包括1:5 3(相當於 最終調配物中12.5 mg/ml吉西他濱衍生物比脂質）至1:2 2 (相當於最終調配物中3〇 mg/ml吉西他濱衍生物比脂 質）。另一較佳範圍為1:5至1:2。最佳範圍為1:5至1:1。 式（I )吉西他濱衍生物與磷脂總量之另一最佳莫耳比為 1 ·4·4 (相當於最終調配物中丨5 mg/ml吉西他濱衍生物比脂 質）。包括1:130與1:1之間的所有子範圍作為本發明之一 部分。 組成物中卵磷脂醯膽鹼與卵磷脂醯甘油之莫耳比可在 1:1至"：卜較佳2:1至80:1之間變化，最佳比率為25:1。 另一較佳範圍包括15:1至40:1，更佳20:1至30:1，甚至更 佳23:1至27:卜包括1:1與99:1之間的所有子範圍作為本 發明之一部分。 11 、 .05.1至1_1，更佳〇_2:1至05:1之莫耳比將膽固 醇添加至鱗脂中。 々調整作為等張劑之甘油之量以在最終醫藥組成物中提 仏等〜條件’且可添加或可不添加作為等張劑之甘油。若 # 視調配物之其他組分而定在約5〇福至35〇 碰之間變化。在—較佳具體實例中，甘油之量為脉彻 遞，尤其較佳量為285 mM。包括5〇 _與35〇碰之間 15 201124425 的所有子範圍作為本發明之一部分。 用作等張/低溫保護劑之雙醣之臺可在最終醫藥組成物 之1/〇至50%，更佳5%至15%且最佳7%1〇%之間變化。包 括1%與5G%之間的所有子範圍作為本發明之一部分。 在另具體實例中，等張/低溫保護劑與總磷脂之莫耳 匕在10-1與1:5，更佳5:1至1:1之間。包括10:1與1:5之 間的所有子範圍作為本發明之一部分。 本發明亦提供一種製備如上所述之醫藥組成物之方 法。該方法包含將磷脂與式⑴吉西他料生物溶解於合 f可與水思溶之有機溶劑中之步驟。可與水混溶之溶劑的 為丙酮、乙腈'〔甲基甲醯胺、乙二醇甘油、甲醇、 ,醇2丙醇、乙醇及DMSO。構脂及式（I)吉西他濱 行生物可〆谷解於相同或不同可與水混溶之有機溶劑中，只 要-亥兩種有機溶液可混合在一起即可。在謹慎選擇之條件 下4有機溶液隨後注入水溶&中，纟此形成脂質奈米粒 ^、該「中間本體溶液」中奈米粒子之尺寸及結構由調配 左射參數決定…個重要參數為中間本體溶液 =類型及遭度。在-較佳具體實例中，有機溶劑為以中 :本，之5%至40%，更佳1〇%至3〇%之量使用的乙 發明涵蓋5〇/〇與40〇/〇之間的所有中間值。最後 間本體溶液進行均質化且移除有機溶劑。 ⑴在-較佳程序中，將活性醫藥成分、增溶劑（較佳為 =純化之璘脂醯膽驗）及輔助增溶劑（較佳為鱗” 讀於乙醇中，且隨後注人含有水及等張劑（較佳為甘油由

16 S 201124425 之水溶液中以形成中間〖本體溶液。 在-具體實例中，使用習知設備將中間本體溶液均質

化直至獲得目標粒度，且A i fk後藉由切向流過濾將本體溶液 濃縮至最終體箱· §_ ϋ 士卩、& . . ^ 檟且精由進一步透濾移除有機溶劑。在另一 具體實例中，該本體，玄油苦土、垂w 體冷液首先濃鈿至最終體積或中間體 積’此後使用習知技術及設備進行均質化直至獲得所需粒 度其後必要時進一步濃縮本體溶液且最終藉由透遽移除 有機溶液。亦1將最終<濃縮及透滤組合於一個步驟中。 在較佳程序中，對中間本體溶液進行高麼均質化（典 型地在625-1000巴之間）其+ 士，古E = l ' 間；右干—人直至再次進行後未觀測 到粒度之進一步變化。;?可藉由雷射光散射便利地量測粒度 以侍到基於體積之直徑量測值_D(v。丨广根據上述製造方法形 成之粒子具有如下D(VC)1)(量測為具有小於指定範圍尺寸之 粒子的;百分比）： D(v〇i，〇.99) : 5-11 nm. D(v〇i，〇.9〇) : 4-7 nm D(v〇i，〇.5〇) : 2.5-5 nm 申請人據估算大部分粒子屬於D(v<>1) 2 5_3Q nm 範圍。 、 或者，藉由雷射光散射技術所量測之粒度亦可表示為 基於強度之平均流體動力學體積（Z_平均值^熟習此項技 術者應瞭解，使用基於體積及強度之單位進行粒度分析報 導之絕對值不同。根據土述製造方法形成 凡〈植子具有如下 實測Z -平均值範圍： 17 201124425 Z-平均值：20-50 nm 即使對於小得多的評估樣本，乂可進行粒度之物理量 測已°平估固持於玻璃狀冰中之粒子的透射電子顯微術。 粒子似乎主要為觀測直徑在15-20 nm之間的小粒子，以及 /里觀測直;^高達5〇 nm之較大粒子。圖i及2提供如實 J中所述製備之藥品的樣本透射<電子顯微圖（TEM )。 圖3顯示圖2之放大圖像。 ，可最初將醫藥濕潤劑添加至活性物質中，隨後與脂質 賦7劑混α。濕澗劑之實例為聚合物、界面活性劑、碳水 物 >聽、礦物質固體、油、醇或酸、有機物或無機 '、醫藥組成物之奈米粒子為脂質體樣，意謂由磷月 曰圍繞之微脂粒，或為微胞樣，或兩者之組合。粒度， 了為單峰、雙峰或甚至多.，盆听在丨政从达斗 夕峄’其限制條件為其不影響^ 體冷液之無菌過濾性。如 笛射先政射所測定且以基於體毛 直！單位表示的最终醫

请梁組成物之粒度可在2.5 nm J 220 nm範圍内。在一 | : /、媸貫例中，粒度分佈為單峰且平友 人亇在2.5 nm至30 nm之 m ^备 間次在3〇nm與220nm之間的襄 佈，二二Γη體實：中’粒度分佈為雙峰且具有2㈣ -且體實:f Φ η0" _而第二個為3〇跡220 nm。在另 〃、體實例中，粒度分 nm > τ , 勹夕峰且刀佈具有2.5 imi與22( nm之間的平均值。在一 最終醫㈣且成m # (i並非限制性）具體實例中， 甫梁組成物之粒度分佈為 有2 5 w 师為又峰，其中主要粒子部分具 句二5-25 nm之平均尺寸， 第一粒子部分具有40-120 nm

S 18 201124425 之平均粒度。本發明涵I 2 5 nm與22Q 之間的所有中間 粒度值。替代罝測技術或表示單位可對上述絕對範圍造成 少許變化，然而實測粒度之直徑始終小於200 nm。 7.給藥 本發明之醫藥組成:物適用於治療多種癌症，且尤立包 括轉移性胰腺癌、非轉移性騰腺癌、轉移性乳癌、非轉移 性乳癌、非小細胞肺癌、子宮癌、印巢癌、子宮頸癌、前 列腺癌、膽管癌、頭頸痒、献p、成 ^ ^ 貝耖林巴瘤、骨髓瘤及軟組織肉瘤。 醫藥組成物亦可作為單藥疼+ #田& e / t , π平衆原/*使用或與其他經批准或實驗 性癌症療法組合使用。 、本發明提供-種如上所定義之醫藥組成物，其係用於 治療癌症，且尤其治療上文指出之癌症。 靜脈内投藥之較佳給藥時程為1250 mg/m2，每週一次 或在4週時間中每日投予持續3週。替代給藥時程可適合 於特定癌症類型，或吉严他濱_5，._反油酸酯與其他治療劑結 合使用之情形。 在下文中，將藉由實施例進一步說明本發明。意欲該 等實施例僅具例示性且不應視為具有限制性。 實施例 實施例1 ’ 將莫耳比為5.8:25:1的吉西他濱反油酸酯、卵磷脂 醯膽鹼（EPC )及卵磷脂醯甘油（EPG )(此莫耳比致使活 性劑與脂質之比率為14.4)以1:7.2之重量比添加至乙醇 中。在加熱至5 0 C下擾拌混合物，直至所有固體物質溶解。 19 201124425 此後將該乙醇溶液在攪拌下以25〇 mL/min注入甘油/ 水（2.6% w/w)溶液中。乙醇溶液滅甘油溶液之重量比為 1 ·7·6。藉由切向流過濾濃縮本體溶液，且在15_2〇。〇下經由 均質器處理濃縮之本體溶液6次。藉由切向流過渡進一步 濃縮所得產物至20 L之最終批次體積及15 mg/mL之最終 吉西他濱-5’-反油酸酯濃度。隨後藉由透濾進行洗滌步驟來 移除殘餘乙醇，對最終產物進行無菌過滤且無菌填充於無 菌小瓶中’以氮氣淨化且密封。小瓶在2;下避光儲存， 且監測該批次之穩定性多達38個月】在此㈣性研究過程 中，未觀測到吉西他濱-5，-反油酸酯之含量變化。主要降解 產物吉西他濱之量在38個月後為〇.〇3%。該批次顯示雙峰 粒度分佈；38個月後，主要部分（99 7%)之平均尺寸為 4_3nm，而另一部分（0.3%)之平均尺寸為69nm。在製造 時，忒產物之D(v。丨，0 99)經量測為11 nm ,且Z-平均值經量測 為 47 nm 〇 實施例2 將莫耳比為13.5:25:1的吉西他^_5，_反油酸酯、卵磷脂 酿膽驗（EPC)及㈣脂醯甘油（EpG)(此莫耳比致使活 性劑與脂質之比率為1:1.9)以1:6之重量比添加至乙醇中。 授拌混合物直至所有固體物質溶解。 此後將該乙醇溶液在攪拌下注入甘油/水（26% w/w) 溶液中。乙醇溶液與甘油溶液之重量比為1:8.7〇對本體溶 液均質化2次且隨後藉由切向流過濾濃縮。隨後利用均質 器處理濃縮之本體溶液4次。藉由切向流過濾進—步濃縮 £ 20 201124425 所得產物至最終批次體積及35 mg/ml之吉西他濱-5，-反油 酸醋濃度。隨後藉由透濾進行洗滌步驟來移除殘餘乙醇， 對最終產物進行無菌過濾且填充於小瓶中，以氮氣淨化且 密封。所測得之該批次的d(vq1()99)為7.2 nm。所測得之基 於Z-平均強度之粒度為丨46 nm。 實施例3 將莫耳比為1 3.5 :2 5 :1的吉西他濱-5'-反油酸酯、卵碟脂 醯膽驗（EPC )及卵磷脂醯甘油（EpG )(此莫耳比致使活 性劑與脂質之比率為1:1 _9 )以i :0 7之重量比添加至乙醇 中。攪拌混合物直至所有固體物質溶解。 將3亥乙醇 >谷液注入甘油/水（2 · 6% w/w )溶液中，隨後 立即進行均質器處理。丨乙醇溶液與甘油溶液之重量比為 1:5.3。.在該等操作條件下，使用均質器來混合及減小粒度。 藉由切:向流過濾濃縮本體溶液，且利用均質器處理濃縮之 本體溶液12次。藉由切向流過濾進一步濃縮所得產物至最 終批次體積及35 mg/ml之吉西他濱_5，_反油酸酯濃度。隨後 藉由透濾進行洗滌步驟來移除殘餘乙醇且對最終產物進行 無菌過滤。該批次顯示雙峰體積粒度分佈；主要部分 (99.9%)之尺寸為3 9nm，而另一部分（〇 ι%)之平均尺 寸為79nm。所測得之基於z_平均強度之粒度為6i nm。 實施例4 將莫耳比為13 5:25:1的吉西他濱_5、反油酸酯、卵磷脂 醯膽驗（EPC)及㈣脂醯甘油（EpG)( 性劑與脂質之比率為i•"…_25之重Θ广使活 干两i.i.y」以i_z·)之重篁比添加至乙醇 21 201124425 中°授拌混合物直至所有固體物質溶解。 將s亥乙醇溶液注入甘油/水（2.6% w/w )溶液中，隨後 立即進行均質器處理。乙醇溶液與甘油溶液之重量比為 1:2.2。在該等操作條件下，使用均質器來混合及減小粒度。 藉由切向流過渡濃縮本體溶液，且啊用均㈣處理本體溶 液3次。藉由切向流過濾濃縮所得產物至最終批次體積及 35 mg/ml之吉西他濱巧，_反油酸酯濃度。隨後經由均質器再 處理本體溶液6次隨後藉由㈣進行洗滌步驟來移除殘 餘乙醇且對最終產物進行無菌過濾。該批次顯示雙峰體積 粒度分佈；主要部分（99.9%)之尺寸為2 9nm，而另一部 刀（0.1%)之平均尺寸為有42 nm。所測得之基於平均 強度之粒度為15 nm。 實施例S ί 將莫耳比為13·5··25:1的吉西他濱-5ι_反油酸酯、即磷脂 醯膽鹼（EPC) &印磷脂醯甘油（EpG)(此莫耳比致使活 :劑與脂質之比率為1:1.9)以1:1.5之重量比添加至乙酵 。攪拌混合物直至所有固體物質溶解。 將該乙醇溶液注入甘油/水（2.6% w/w)溶液中，隨後 立即進行均質器處理。乙醇溶液與甘油溶液之重量比為 1:3 °在該等操作條件下，使㈣f器來混合及減小粒度。 產：句質益處理本體溶液3 :欠。藉由切向流過濾濃縮所得 =至最終批次體積及35 mg/ml之吉西他濱_5,_反油酸醋 後利㈣質器再處理本體溶液6次。隨後藉由透 〜進仃洗梅步驟來移除殘餘乙醇且對最終產物進行無菌過

S 22 201124425 滤。該批次顯示雙峰體.積粒度分佈；主要部分（9 9 9 % )之 尺寸為3.9 nm，而另一部分（0 1〇/〇)之平均尺寸為44 nm。 所測得之基於Z-平均強度之粒度為14 nm。 實施例6 將莫耳比為15·4:25··1的吉西他濱_5，_反油酸酯、卵磷脂 醯膽鹼（EPC )及卵磷脂醯甘油（EpG )(此莫耳比致使活 性劑與脂質之比率為1:1_7)以ι:5·2之重量比添加至乙醇 中。攪拌混合物直至所，有固體物質溶解。 f 將該乙醇溶液注入甘油/水（2·6% w/w )溶液中，隨後 立即進行均質器處理。乙醇溶液與甘油溶液之重量比為 1:8 · 5。在該等操作條件下，使用均質器來混合及減小粒度。 利用均質器處理本體溶缚2次且隨後藉由切向流過濾濃縮 至40 mg/mi之吉西他濱_5’_反油酸酯濃度並經由透濾移除 殘餘乙醇。隨後利用均質器再處理本體溶液4次且無菌過 慮並填充於小瓶中’以氮氣淨化且密封。該批次之所測得 之 D(V<j1,〇_99)為 9.1 nm。所測得之基於z-平均強度之粒度為 33 nm。 實施例7 將莫耳比為23.2:25:1的吉西他濱-5，-反油酸酯、卵磷脂 酿膽驗（EPC )及卵磷脂醯甘油（EPG )(此莫耳比致使活 性劑與脂質之比率為以1:52之重量比添加至乙醇 中°攪拌混合物直至所有固體物質溶解。 將該乙醇溶液注入甘油/水（2.6% w/w )溶液中，隨後 立即進行均質器處理。乙醇溶液與甘油溶液之重量比為 23 201124425 1:8.5。在該等操作條件下，使用均質器來混合及減小粒度。 利用均質益處理本體溶液6次且隨後藉由切向流過濾濃縮 至60 mg/ml之吉西他濱_5,_反油酸酯濃度並經由透濾移除 殘餘乙醇。隨後對本體溶液進行無帛㈣並填充於小瓶 中，以氮氣淨化且密封。所測得之基於z_平均強度之粒度 為 44 nm。 實施例8 藉由差示掃描熱量測定（Dsc )對實施例丨中所述之調 配物進行熱分析以確認該產物之儲存及運輸溫度。顯示凝 固點低於-22 C ’此可能歸因於水過冷。溶點為約_3。〇。此 表明2-8 C之儲存及運輸溫度將不會引起磷脂之熔融或凝固 且由此將不會對粒子結構造成任何負面影響。 已對使用實施们t所述之程賴造之藥品批次進行 穩定性研究，纟2-8°C/環i竟RH之健存條件下穩定期高達38 個月，且在25〇C/60%RH之儲存條件下穩定期高達9個月。 彼等研究之結果證明在所述儲存條伴下，產物在所評估之 時間區間内穩定。 已對使用實施例2及6中所述之程序製造之藥品批次 進行穩定性研究，在2-rc/環境紐之儲存條件下穩定期高 達6個β ’且在25。(：/60% RH之儲存條件下穩定期高達6 個月。彼等研究之結果證明在所述儲存條件下，產物之吉 西他濱-5，-反油酸酯含量及粒度在所評估之時間區間内穩 定。在所述儲存條件下未觀察到沈澱.。 實施例9

24 S 201124425 將莫耳比為5.9:25:1的吉西他濱_5，_反油酸酯、卵磷脂 醯膽鹼（EPC )及卵磷脂醯甘油（EpG )(此莫耳比致使活 性劑與脂質之比率為1:1.45) w 1:14之重量比添加至乙醇 中。攪拌混合物直至所有固體物質溶解。使用受控孔徑注 射裝置將此溶液注入乙酸鹽/蔗糖緩衝液（pH 5 〇 )中且濃 縮懸浮液至最終體積，得到丨5 mg/ml之吉西他濱_5,反油酸 酯最終濃度。最後，將緩衝液更換為甘油/水（2 6% w/w)。 该批次之粒度為92 nm ( z_平均值）且多分散性指數 (P〇lydispersity index)為 〇_24。 藉由將脂質及藥物之起始濃度減小2〇%同時保持其餘 參數不變來製造另—批次。該批次之粒度為53 nm ( Z-平均 值）且多分散性指數為〇27。 假定兩個批次之粒子具有脂質體結構。兩個批次皆儲 存在2-8 C下且在5個月後進行分析。對於92 nm批次，粒 度保持不變，而具有較小粒度之批次顯示雙峰分佈（表明 粒子聚集）°另外’兩個;批次在5個月後顯示吉西他濱_5，_ 反油S文酉曰有4 /〇-5%降解。與實施例」中說明之臨床批次相 比，該調配物不穩定得多。 實施例10 t不使用磷脂形成粒子並未成功。將吉西他濱_5，.反油酸 -曰以1.24之重里比溶解於乙醇中。搜拌混合物直至所有固 體物質溶解。 · 此後在劇烈混合下將該乙醇溶液注入注射溶液用水 中。乙醇溶液與甘油溶液之重量比為1:12。如目視檢查所 25 201124425 確定’混合物似乎含有聚結物。嘗試均質化失敗，表明在 不存在磷脂時，吉西他濱_5，_反油酸酯不能形成穩定粒子。 實施例11 具有磷脂與非離子型界面活性劑之混合微胞調配物不 t 能成功用於製備高藥物負載調配物。使用重量比為1:丨之印 磷脂：Tween 20製備混合微胞，得到50 mg/ml之溶解固體最 終濃度。嘗試用吉西他濱·5，_反油酸酯裝載混合微胞，獲得 小於5 mg/ml之最大濃度。用乙酵酸章代界面活性劑組分， 得到2 mg/ml之最大吉西他濱_5，_反油酸酯濃度。 實施例12 卵填脂與油酸之脂質體調配物不能成功用於製備高藥 物負載調配物。藉助於將吉西他濱_5;_反油酸酯、卵磷脂及 油酸以1:14.4:2之莫耳比溶解於乙醇中來製備脂質體。蒸發 溶劑且使用Ultraturrax將殘餘固體分散於含2 6%甘油之水 中，隨後進行高壓均質化。可獲得高達3 mg/ml吉西他濱_5、 反油酸酯之穩定調配物。發現具有較.高濃度吉西他濱反 油酸酯之調配物含有未溶解固體。 實施例13 研究在實施例1至7中及第6節「製造調配物」下所 述之調配物中獲得之活性化合物的出乎意料之高濃度（Μ mg/mL_60mg/mL)是否為式⑴中所示化合物所獨有，或 該方法是否具有更普遍之性質。使用如式（π)令所示之鲈 構類似化合物艾西拉濱（elacytarabine )(阿拉伯糖普 油酸醋）作為相關模型物質。該模型物質含有與式⑴

26 S 201124425 (R1 =R3 = H，R2 =反油敵酯）中所見相同之5'-反油酸酯部 分及相同胞嘧啶核苷環系統。式（I )與式（II )中所述化 合物之間的次要差異為式（I )核糖環之2'位上的取代含有 偕位氟，而式（II )含有Η及OH。

式（II) 艾西拉濱濃度 脂質 30 mg/mL 20 mg/mL 15 mg/mL 10 mg/mL 卵PC/ 卵 PG 在溶劑注入 期間沈澱 在均質化 期間沈澱 最終含量為12 mg/mL，在 2-8°C下儲存時觀察到沈澱 最終含量為8 mg/mL， 過濾後可見大脂質聚集 物，粒度（Z-平均值） 為 97 nm 使用穩定的填脂及製造技術，以20 mg/mL之過量包括 式II化合物之調配物在處理期間產生沈澱。可在小於1 5 mg/mL之式II化合物目標濃度下製備調配物，然而發現該 L r 等相同調配物在儲存期間不穩定，發生沈澱及聚集。推斷 式I化合物向所述基於脂質之調配物提供出乎意料的高負 載及穩定性之獨特屬性。

J 實施例1 7 如實施例1中所述之吉西他濱-5'-反油酸酯之靜脈内調 27 201124425 配物百;^於人類臨床研究之第i期:。該研究之目的為確定 〇西他濱5反油酸醋之安全性、毒丨生、(最大耐受劑 量）及RD (建議劑量），描述其藥物動力學（ρκ)特徵， 及評估其初步抗腫瘤活性。 每4週在第（d)卜8及15天藉由30分鐘靜脈内輸注 投予吉西他濱-5，-反油酸酯。劑量範圍為3〇 mg/m2/d至16〇〇 mg/m2/d。登記43名患者且確定RD為125〇mg/m2/d。該藥 物較好耐受且最常見的毒性作用包括噁心、疲勞、嘔吐及 厭食症，大多為輕度。7名患者（胰腺癌、結腸癌及卵巢癌） 報導疾病穩定（习個月）持續時間在3.5個月至多於8個 月之間。一名卵巢癌患者腫瘤質量降低2 8.3 %。 給藥後24小時在血漿中偵測到吉西他濱_5，_反油酸， 酯。當以相當劑量濃度靜脈内投予吉西他濱時，吉西他濱 (dFdC )暴露量之AUC顯著高於報導值。在前24小時内， 主要代謝物dFdU之尿液排出為劑量之48%-71 %。 £ 28

Claims (1)

1. 201124425 七、申請專利範圍： 1· 一種醫藥組成物，其包含式I之吉西他濱

   其中Ri及R3為氫且R2為Cu或c2g飽和及單不飽和醯基， 或其醫藥學上可接受之;鹽作為活性成分； 其中該活性成分被製備成包含以下者之調配物： a )選自由以下者所組成之群組之增溶劑填脂：構脂醯膽驗、 填脂醯甘油、磷脂醯乙醇胺、罐脂醯肌醇、磷脂醯絲胺酸、 填知I、溶jk磷脂、神經勒碟脂及心填脂，該等璘脂呈任 何形式’包括鹽化或去鹽形式、氫化或部分氫化形式、天 然形式、半合成或合成形式；

   c)等張劑；

   分為吉西他濱_5，_反油酸酯。 29 201124425 3 ·如申請專利範圍第1項之醫藥組成物，其中該增溶劑 磷脂包含來源於雞蛋之天然磷脂，其包含在6-8之pH值範 圍内呈中性之兩性離子磷脂。 4. 如申請專利範圍第1項之醫藥組成物，其中該增溶劑 磷脂包含來源於雞蛋之經純化磷脂醯膽鹼。 ·> 5. 如申請專利範圍第1項之醫藥組成物，其中該輔助增 溶劑為雞蛋磷脂醯甘油。 6. 如申請專利範圍第1項之醫藥組成物，其中該等張劑 為甘油。 7. 如申請專利範圍第1項之醫藥組成物，其中該活性成 分為吉西他濱-5’·反油酸酯，該增溶劑為磷脂醯膽鹼，該辅 助增溶劑為磷脂醯甘油，且該等張劑為甘油。 8. 如申請專利範圍第丨項之醫藥組成物，其中該活性成 分與磷脂之莫耳比在1:5至1:2之間。 9. 一種醫藥組成物’其包含式I之吉西他濱衍生物：

   其中R!及R3為氫且I為Ci8或C2()飽和及單不飽和醯基， 或其醫藥學上可接受之鹽作為活性成分； 其中s亥活性成分被製備成包含以下者之調配物： S 30 201124425 a )選自由以下者所組成之群組之增溶劑磷脂：磷脂醯膽驗、 磷脂醯甘油、磷脂醯乙醇胺、墙脂醯肌醇、磷脂醯絲胺酸、 填脂酸、溶血填脂、神經稍鱗脂及心填脂，該等填知呈任 何形式，包括鹽化或去鹽形式、氫化或部分氫化形式、天 然形式、半合成或合成形式； b) 輔助增溶劑’其選自由帶電磷脂所組成之群組； c) 等張劑；且 其中該活性成分與磷脂之莫耳比在1:5至1:1之間且該調配 物之平均D(VC)1)粒度在2.5-30 nm之間的範圍内，其係用作 醫藥品。 10 如申請專利範圍第9項之醫藥組成物’其中該活性 成分為吉西他濱-5'-反油酸酯。 11 ·如申請專利範圍第9項之醫藥組成物，其中該活性 成分與磷脂之莫耳比在1:5至1:2之間。. 12_ —種醫藥組成物，其包含式I之吉西他濱衍生物：

   (I) 其中Ri及R3為氫且R2‘為C18或Cm飽和及單不飽和醯基， 或其醫藥學上可接受之鹽作為活性成分； 其中該活性成分被製備成包含以下者之調配物： 31 201124425 a )、自由以下者所組成之群組之磷脂增溶劑：磷脂醯膽鹼、 磷月曰醯甘油 '磷脂醯乙醇胺、磷脂醯^肌醇、磷脂醯絲胺酸、 填月a S文、溶血鱗脂、神經鞘磷脂及心磷脂，該等磷脂呈任 何形式，包括鹽化或去鹽形式、氩化或部分氫化形式 '天 然形式 '半合成或合成形式； b )輔助增溶劑’其選自由帶電磷脂所組成之群組；及 c)等張劑； 其中成分與鱗脂之莫耳比在i 至^:丄之間且該調配 物之平均粒度在2 5_3〇 nm之郜的範圍内，其係用於 治療癌症。 13 ·如申咐專利範圍第丨2項之醫藥組成物，其中該活性 成分為吉西他濱-5 ’ -反油酸g旨。 14.如申請專利範圍第12項之醫藥組成物，其中該活性 成分與磷脂之莫耳比在1 :5至1 :2之間。 15·如申請專利範圍第12項之醫藥組成物，其中該癌症 係選自由以下者所組成之群組：轉移性胰腺癌、非轉移性 胰腺癌、轉移性乳癌、非轉移性乳癌7、非小細胞肺癌、子 宮癌、即巢癌 '子宮頸癌、冑列腺癌、膽管癌、頭頸癌、 淋巴瘤、骨髓瘤、及軟組織肉瘤。 16·如申請專利範圍第12或15項之醫藥組成物，其進 一步包含與其他經批准或實驗性癌症療法之組合。 17.—種製備如申請專利範圍第丨項之醫藥組成物之方 法，其包含以下步驟： a)將磷脂及式（I)之吉西他濱衍生物溶解於合適可與水混 32 S 201124425 溶之有機溶劑中； b) 將步驟a)中獲得之有機溶液注入水溶液中，隨之形成 脂質奈米粒子； c) 對步驟b)中獲得之中間本體溶液進行均質化且移除有 機溶劑。 18. 如申請專利範圍第17項之方法，其中該可與水混溶 之有機溶劑係選自乙醇、丙酮、乙腈、二甲基曱醯胺、乙 二醇、甘油、曱醇、1-丙醇、2-丙醇或DMSO之群組。 19. 如申請專利範圍第17項之方法，其中步驟a )之該 可與水混溶之溶劑為乙醇。 八、圖式： (如次頁） 33