JP2015209417A - 経口疾患治療薬 - Google Patents

Abstract

【課題】 本発明は、金属ポルフィリン錯体包埋リポソームを導入した経口投与可能な疾患治療薬を提供することを目的とする。【解決手段】 本発明の経口疾患治療薬は、ナノサイズ大の鉄またはマンガンポルフィリン錯体包埋リポソームを含有する経口疾患治療薬であって、前記鉄またはマンガンポルフィリン錯体包埋リポソームは胃液防護・腸液溶解性物質に包含されており、腸液内でのみ開放されて生体内に吸収されるように形成されていることを特徴とする。【選択図】 図３

Description

本発明は、生体内の非正常組織の疾患を治療する経口疾患治療薬に係り、特に、活性酸素濃度の高い非正常組織の治療に好適な経口疾患治療薬に関する。

一般に、生体内で生成される数々の活性酸素種は炎症疾患、神経疾患、動脈硬化、癌、糖尿病など多くの病態に関与していると言われているが，通常生体では、これらの活性酸素種に対し、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）、グルタチオンペルオキシダーゼ、カタラーゼなどのラジカル消去酵素を備えてバランスを保っている。

しかしながら、生体内の非正常組織の一例である癌細胞においてはスーパーオキシドアニオンラジカル（Ｏ_２−・）が多量に存在していることが知られており、ラジカル消去酵素の酵素活性が低下していることが伺える。

一方、炎症疾患、神経疾患、動脈硬化、糖尿病などの疾病でも、その原因は、ＳＯＤ、グルタチオンペルオキシダーゼ、カタラーゼなどのラジカル消去酵素のバランスが崩れ、Ｏ_２−・等の活性酸素種が増加したことによるものとされている。

そこで、本発明者等は、高いＳＯＤ活性を示すことが報告されている金属ポルフィリン錯体をリポソームに包含させた金属ポルフィリン錯体包埋リポソームとして生体に投与することにより、Ｏ_２−・を初めとする活性酸素種を有効に消去させるとともに、これによって副次的に過酸化水素を生成し、さらにはＦｅｎｔｏｎ反応を介してヒドロキシラジカルを発生させることにより、従来の抗癌剤であるシスプラチン（ＣＤＤＰ）やマイトマイシンＣ（ＭＭＣ）と比較して、高い抗腫瘍活性を実現可能な疾患治療薬を完成させた（特許文献１参照）。そして、この疾患治療薬は、従来の抗癌剤に比べて正常組織に対する細胞毒性が極めて低く、副作用の少ない非正常細胞の治療に成功している。

特開２０１０−２０８９５５号公報

しかしながら、従来の抗癌剤や抗炎症剤は注射や点滴などによって血中投与するものがほとんどであり、頻繁に投与を必要とする場合には通院や痛みなど患者への負担が甚大であるという問題点を有している。

そこで、本発明においては、金属ポルフィリン錯体包埋リポソームを導入した経口投与可能な疾患治療薬を提供することを目的とする。

上記目的を達成するべく、本発明の第１の態様の経口疾患治療薬は、ナノサイズ大の鉄またはマンガンポルフィリン錯体包埋リポソームを含有する経口疾患治療薬であって、前記鉄またはマンガンポルフィリン錯体包埋リポソームは胃液防護・腸液溶解性物質に包含されており、腸液内でのみ開放されて生体内に吸収されるように形成されていることを特徴とする。また、本発明の第２の態様の経口疾患治療薬は、前記胃液防護・腸液溶解性物質が、アルギン酸およびアルギン酸誘導体からなることを特徴とする。またさらに、本発明の第３の態様の経口疾患治療薬は、前記アルギン酸誘導体が、アルギン酸塩であることを特徴とする。

このような、本発明の第１〜第３の態様の経口疾患治療薬とすることにより、優れた抗酸化効果・抗癌効果を有する鉄またはマンガンポルフィリン錯体包埋リポソームの経口からの摂取を可能とし、胃で溶けずに腸で溶けて適正に生体内に吸収されて活性酸素種を多量に生成する非正常組織へ集積して当該非正常組織への治療効果を発揮する。

本発明の第４の態様の経口疾患治療薬は、前記鉄またはマンガンポルフィリン錯体包埋リポソームの粒径が、２００ｎｍ以下であることを特徴とする。

このような、本発明の第４の態様の経口疾患治療薬とすることにより、鉄またはマンガンポルフィリン錯体包埋リポソームの腸からの効率的な吸収および非正常組織への集積を可能とする。

本発明の第５の態様の経口疾患治療薬は、粒径が、１ｍｍ以下であることを特徴とする。

このような、本発明の第５の態様の経口疾患治療薬とすることにより、腸液中で即溶する経口疾患治療薬を提供することを可能とする。

このような、本発明の経口疾患治療薬によれば、優れた抗酸化効果・抗癌効果を有する鉄またはマンガンポルフィリン錯体包埋リポソームを経口投与することができる。

さらに、本発明の経口疾患治療薬を用いることにより、従来の注射や点滴などの血中投与と比べて、患者のクオリティ・オブ・ライフ（ＱＯＬ）を損ねることなく疾患の治療や予防を行うことを可能とする。

マンガンリポソーム錯体包埋リポソームのＴＥＭ像および平均粒子径測定結果であり、（ａ）は比較用リポソームのＴＥＭ像および粒子径分布図、（ｂ）は本発明の経口疾患治療薬を溶解後に得られたリポソームのＴＥＭ像および粒径分布図を示す 実施例３における本発明の経口疾患治療薬の抗酸化効果を表すカプラン・マイヤー生存率曲線であり、（ａ）は経静脈投与量の２倍量を投与したもの（第２群）のカプラン・マイヤー生存率曲線、（ｂ）は経静脈投与量の６倍量を投与したもの（第３群）のカプラン・マイヤー生存率曲線を示す 実施例４における本発明の経口疾患治療薬の癌予防効果を表す癌細胞投与マウスの８日目における表面癌体積の測定結果を示すグラフ

以下に、本発明の実施の形態について説明する。

本発明の経口疾患治療薬は、ナノサイズ大の鉄またはマンガンポルフィリン錯体包埋リポソームを含有しており、当該鉄またはマンガンポルフィリン錯体包埋リポソームが胃液防護・腸液溶解性物質に包含された形状とされている。

胃液防護・腸液溶解性物質は、アルギン酸およびアルギン酸誘導体からなる。一般的にアルギン酸は、水に溶けずにアルカリで中和されると溶解する性質を利用して薬剤の崩壊剤として利用されており、当該アルギン酸によって包まれた薬剤は、酸性の胃液中では溶解せずに錠剤の形を保ったまま腸へ送られ、腸液中で徐々にｐＨが高くなると崩壊して薬剤成分を放出するように作用する。本発明においては、アルギン酸およびアルギン酸誘導体であるアルギン酸塩およびアルギン酸エステルなどを用いるようにされている。特に、アルギン酸塩を用いることが好ましく、具体的には、アルギン酸カルシウム、アルギン酸亜鉛、アルギン酸アルミニウム、アルギン酸アンモニウム、アルギン酸第一鉄およびアルギン酸第二鉄からなる群から適宜選択して用いることにより安価で薬剤を製造することを可能とする。また、この他にも、乳酸カルシウム、カルボキシメチルセルロースなど胃液に不溶で腸液に溶解する物質であり、人体に悪影響を与えない物質であれば用いることができる。

ここで、鉄またはマンガンポルフィリン錯体包埋リポソームとは、鉄またはマンガンポルフィリン錯体が、リポソームを構成する脂質中に組み込まれ、その一部がリポソーム膜外に出ているか、あるいは全体がリポソーム膜内に包含されているものを意味する。

鉄またはマンガンポルフィリン錯体包埋リポソームの構成成分である鉄またはマンガンポルフィリン錯体と、アニオン系界面活性剤とにより形成するイオンコンプレックス（以下、単に「イオンコンプレックス」という）は、鉄またはマンガンポルフィリン錯体に界面活性剤を反応させることにより調製される。このイオンコンプレックスを形成する成分の一つである鉄またはマンガンポルフィリン錯体は、置換基としてカチオン性窒素原子を有する基を有するものであり、例えば、次の化学構造式（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩＩ）で表すものを挙げることができる。

（式中、Ｍは、鉄またはマンガン、Ｒ_１ないしＲ_４は、Ｎ-低級アルキルピリジニウム基、Ｎ-アルキルアンモニオフェニル基、Ｎ-アルキルイミダゾリル基、低級ジアルキルチオフェニル基から選ばれる基を示し、Ｒ_１１ないしＲ_１６は、低級アルキル基または低級アルコキシ基を、Ｒ_１７ないしＲ_１８は、Ｎ-低級アルキルピリジニウム基、アルキルアンモニオフェニル基、Ｎ-アルキルイミダゾリル基を示し、Ｒ_２１ないしＲ_２６は、低級アルキル基または低級アルコキシ基を、Ｒ_２７ないしＲ_２８は、アルキルアンモニオフェニル基を示す）

より具体的には、上記（Ｉ）式において、基Ｒ_１-Ｒ_４がメチルピリジニウム基である、５,１０,１５,２０-テトラキス（Ｎ-メチルピリジニウム-２-イル）ポルフィリン（Ｔ２ＭＰｙＰ）、５,１０,１５,２０-テトラキス（Ｎ-メチルピリジニウム-３-イル）ポルフィリン、５,１０,１５,２０-テトラキス（Ｎ-メチルピリジニウム-４-イル）ポルフィリン（Ｔ４ＭＰｙＰ）；基Ｒ_１-Ｒ_４がエチルピリジニウム基である、５,１０,１５,２０-テトラキス（Ｎ-エチルピリジニウム-２-イル）ポルフィリン、５,１０,１５,２０-テトラキス（Ｎ-エチルピリジニウム-３-イル）ポルフィリン、５,１０,１５,２０-テトラキス（Ｎ-エチルピリジニウム-４-イル）ポルフィリン；基Ｒ_１-Ｒ_４がプロピルピリジニウム基である、５,１０,１５,２０-テトラキス（Ｎ-プロピルピリジニウム-２-イル）ポルフィリン、５,１０,１５,２０-テトラキス（Ｎ-プロピルピリジニウム-３-イル）ポルフィリン、５,１０,１５,２０-テトラキス（Ｎ-プロピルピリジニウム-４-イル）ポルフィリン；基Ｒ_１-Ｒ_４がブチルピリジニウム基である、５,１０,１５,２０-テトラキス（Ｎ-ブチルピリジニウム-２-イル）ポルフィリン、５,１０,１５,２０-テトラキス（Ｎ-ブチルピリジニウム-３-イル）ポルフィリン、５,１０,１５,２０-テトラキス（Ｎ-ブチルピリジニウム-４-イル）ポルフィリン；基Ｒ_１-Ｒ_４がメチルアンモニオフェニル基である、５,１０,１５,２０-テトラキス（２-メチルアンモニオフェニル）ポルフィリン、５,１０,１５,２０-テトラキス（３-メチルアンモニオフェニル）ポルフィリン、５,１０,１５,２０-テトラキス（４-メチルアンモニオフェニル）ポルフィリン；基Ｒ_１-Ｒ_４がメチルイミダゾリル基である、５,１０,１５,２０-テトラキス（２-メチルイミダゾリル）ポルフィリン、５,１０,１５,２０-テトラキス（３-メチルイミダゾリル）ポルフィリン、５,１０,１５,２０-テトラキス（４-メチルイミダゾリル）ポルフィリン、基Ｒ_１-Ｒ_４がジメチルチオフェニル基である、５,１０,１５,２０-テトラキス(２-ジメチルチオフェニル)ポルフィリン、５,１０,１５,２０-テトラキス(３-ジメチルチオフェニル)ポルフィリン、５,１０,１５,２０-テトラキス(４-ジメチルチオフェニル)ポルフィリン；基Ｒ_１-Ｒ_４がエチルメチルチオフェニル基である、５,１０,１５,２０-テトラキス(２-エチルメチルチオフェニル)ポルフィリン、５,１０,１５,２０-テトラキス(３-エチルメチルチオフェニル)ポルフィリン、５,１０,１５,２０-テトラキス(４-エチルメチルチオフェニル)ポルフィリン；基Ｒ_１-Ｒ_４がジエチルチオフェニル基である、５,１０,１５,２０-テトラキス(２-ジエチルチオフェニル)ポルフィリン、５,１０,１５,２０-テトラキス(３-ジエチルチオフェニル)ポルフィリン、５,１０,１５,２０-テトラキス(４-ジエチルチオフェニル)ポルフィリン；基Ｒ_１-Ｒ_４がジプロピルチオフェニル基である、５,１０,１５,２０-テトラキス(２-ジプロピルチオフェニル)ポルフィリン、５,１０,１５,２０-テトラキス(３-ジプロピルチオフェニル)ポルフィリン、５,１０,１５,２０-テトラキス(４-ジプロピルチオフェニル)ポルフィリン等が挙げられる。

また、上式（ＩＩ）式において、基Ｒ_１１、Ｒ_１２、Ｒ_１４、Ｒ_１６がメチル、基Ｒ_１３、Ｒ_１５がビニル、基Ｒ_１７、Ｒ_１８がメチルピリジルである、［１,３,５,８-テトラメチル-２,４-ジビニル-６,７-ジ（メチルピリジルアミドエチル）ポルフィリン］（ＰＰＩＸ-ＤＭＰｙＡｍ）；基Ｒ_１１、Ｒ_１２、Ｒ_１４、Ｒ_１６がメチル、基Ｒ_１３、Ｒ_１５がビニル、基Ｒ_１７、Ｒ_１８がアンモニオフェニルである、［１,３,５,８-テトラメチル-２,４-ジビニル-６,７-ジ（アンモニオフェニルアミドエチル）ポルフィリン］；基Ｒ_１１、Ｒ_１２、Ｒ_１４、Ｒ_１６がメチル、基Ｒ_１３、Ｒ_１５がビニル、基Ｒ_１７、Ｒ_１８がメチルイミダゾリルである、［１,３,５,８-テトラメチル-２,４-ジビニル-６,７-ジ（メチルイミダゾリルアミドエチル）ポルフィリン］；基Ｒ_１１、Ｒ_１２、Ｒ_１４、Ｒ_１６がメチル、基Ｒ_１３、Ｒ_１５がメトキシ、基Ｒ_１７、Ｒ_１８がメチルピリジルである、［１,３,５,８-テトラメチル-２,４-ジメトキシ-６,７-ジ（メチルピリジルアミドエチル）ポルフィリン］；基Ｒ_１１-Ｒ_１６がメチル、基Ｒ_１７、Ｒ_１８がメチルピリジルである、［１,２,３,４,５,８-ヘキサメチル-６,７-ジ（メチルピリジルアミドエチル）ポルフィリン］；基Ｒ_１１-Ｒ_１６がエチル、基Ｒ_１７、Ｒ_１８がメチルピリジルである、［１,２,３,４,５,８-ヘキサエチル-６,７-ジ（メチルピリジルアミドエチル）ポルフィリン］等が挙げられる。

更に、上式（ＩＩＩ）式において、基Ｒ_２１、Ｒ_２２、Ｒ_２４、Ｒ_２６がメチル、基Ｒ_２３、Ｒ_２５がビニル、基Ｒ_２７、Ｒ_２８がメチルアンモニオである、［１,３,５,８-テトラメチル-２,４-ジビニル-６,７-ジ（メチルアンモニオカルボニルエチル）ポルフィリン］；基Ｒ_２１、Ｒ_２２、Ｒ_２４、Ｒ_２６がメチル、基Ｒ_２３、Ｒ_２５がメトキシ、基Ｒ_２７、Ｒ_２８がメチルアンモニオである、［１,３,５,８-テトラメチル-２,４-ジメトキシ-６,７-ジ（メチルアンモニオカルボニルエチル）ポルフィリン］；基Ｒ_２１-Ｒ_２６がメチル、基Ｒ_２７、Ｒ_２８がメチルアンモニオである、［１,２,３,４,５,８-ヘキサメチル-６,７-ジ（メチルアンモニオカルボニルエチル）ポルフィリン］；基Ｒ_２１-Ｒ_２６がエチル、基Ｒ_２７、Ｒ_２８がメチルアンモニオである、［１,２,３,４,５,８-ヘキサエチル-６,７-ジ（メチルアンモニオカルボニルエチル）ポルフィリン］等が挙げられる。

上記のうち、金属が配位した式（Ｉ）で表されるカチオン化カチオン性ポルフィリン錯体の合成は、K. Kalyanasundaram, Inorg. Chem., 23, 2453 (1984)、 A. D. Adler et al., J. Inorg. Nucl. Chem., 32, 2443 (1970)、 T, Yonetani et al., J. Biol. Chem., 245, 2988 (1970)、 P. Hambright et al., Inorg. Chem., 15, 2314 (1976)、M. Antionietti, Langmuir, 16, 3214 (2000)、D. Adler et al., J. Org. Chem., 32, 476 (1967)、D. Adler et al., Inorg. Synth., 16, 213 (1976)、Harriman et al., J. Chem. Soc., Faraday. Trans. II, 1532 (1979) 等に記載の方法に準じて行うことができる。

また、金属が配位した式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）で表されるカチオン化カチオン性ポルフィリン錯体の合成は、E. Tsuchida, H. Nishide, H. Yokoyama, R. Young, and C. K. Chang, Chem. Lett., 1984, 991等に記載の方法に準じて行うことができる。

なお、上記した金属［５,１０,１５,２０-テトラキス(４-ジメチルチオフェニル)ポルフィリン］（ＭＴ４Ｍｅ２ＳｕＰ）の化学構造式を示せば下記の化２：ＭＴ４Ｍｅ_２ＳｕＰの化学構造式のとおりである。

一方、イオンコンプレックスを形成する別の成分の一つであるアニオン系界面活性剤としては、脂肪酸のアルカリ金属塩や、アルキル硫酸のアルカリ金属塩が好ましい。アルカリ金属塩の例としては、ラウリン酸（ＬＡＳ）、ミリスチン酸（ＭＡＳ）、パルミチン酸（ＰＡＳ）、ステアリン酸（ＳＡＳ）、オレイン酸（ＯＡＳ）等の脂肪酸のアルカリ金属塩や、ドデシル硫酸（ＳＤＳ）、テトラデシル硫酸（ＳＴＳ）、ヘキサデシル硫酸（ＳＨＳ）、オクタデシル硫酸（ＳＯＳ）等のアルキル硫酸のアルカリ金属塩挙げることができる。なお、脂肪酸のアルカリ金属塩や、アルキル硫酸のアルカリ金属塩としては、ナトリウム、カリウム等が好ましい。

このイオンコンプレックスを形成するには、適当な溶媒中で鉄またはマンガンポルフィリン錯体とアニオン系界面活性剤を混合すれば良く、鉄またはマンガンポルフィリン錯体とアニオン系界面活性剤との配合比は、それらのモル比で、１：１ないし１：２０程度とすれば良い。

このようにして形成されたイオンコンプレックスは、リポソーム形成能を有する脂質（以下、「脂質類」という）と混合し、リポソームを形成させるための常法により鉄またはマンガンポルフィリン錯体包埋リポソームとすることができる。

脂質類としては、大豆レシチン（ＳＢＬ）、卵黄レシチン（ＥＹＬ）、水素添加大豆ホスファチジルコリン（ＨＳＰＣ）、ジラウロイルホスファチジルコリン（ＤＬＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、モノオレオイル-モノアルキル-ホスファチジルコリン（ＭＯＭＡＰＣ）等を単独で含むリン脂質あるいはこれを主成分とし他の成分も含む基質（以下、「混合リン脂質」ということがある）を挙げることができる。本発明においては、特に、ＤＭＰＣ、ＤＰＰＣおよびＨＳＰＣを用いてリポソームの調製を行った。

混合リン脂質の調製にあたり、リン脂質と混合することのできる成分としては、分散剤としてのＴｗｅｅｎ-２０（ＴＷ２０）およびＴｗｅｅｎ-６０（ＴＷ６０）等のツイン系およびＰｌｕｒｏｎｉｃＦ６８（ＰＦ６８）およびＰｌｕｒｏｎｉｃＦ８８（ＰＦ８８）等のプルロニック系などの界面活性剤を挙げることができる。

特に、ＤＭＰＣ、ＤＰＰＣおよびＨＳＰＣ等のリン脂質、ＴＷ２０、ＴＷ６０、ＰＦ６８およびＰＦ８８等のノニオン性界面活性剤を成分とする混合脂質系より得られるリポソームは、ｐＨ感受性リポソームとなる。そして、例えばこのリポソームが癌細胞内に取り込まれると、癌細胞内が低ｐＨであるため、このリポソーム集合体の崩壊が生じ、抗癌剤のより効果的な徐放が促される。このようなｐＨ感受性リポソームにイオンコンプレックスを包埋した系（鉄またはマンガンポルフィリン錯体包埋／ｐＨ感受性リポソーム）も合成できる。

また、混合リン脂質として、リン脂質に周知のコレステロール（Ｃｈｏｌ）、シトステロール等およびそれらの誘導体等を安定化剤として加えたものや、リン脂質にポリエチレングリコール（ＰＥＧ）またはその誘導体を加えたものを挙げることができる。

鉄またはマンガンポルフィリン錯体包埋リポソームの調製は、公知の方法により行うことができ、例えば、上記イオンコンプレックスおよび脂質類を揮発性溶媒中に溶解、混合した後、揮発溶媒のみを揮散、除去してラメラ構造の薄膜を形成し、次いでこれに適当な水性溶媒、具体的には、精製水、生理食塩水などを加えてインキュベートさせて当該薄膜を水和・膨潤をさせた後、激しく攪拌したり超音波処理を施すことによって鉄またはマンガンポルフィリン錯体包埋リポソームとすることができる。

なお、必要により、水性溶媒に替えて医学的に有効な成分を溶解した溶液や、ある種の培地などを使用することができ、これらを内包した鉄またはマンガンポルフィリン錯体包埋リポソームとしてもよい。

なお、リポソームの粒径は、腸からの吸収および非正常組織への集積を考慮すると、２０ｎｍ〜２００ｎｍとされていることが好ましく、経時安定性を備えていることが必要である。

ここで、最適なリポソームの調製と経時安定性の検討を行う。
リポソームの調製は、下記の条件にて上記の方法を用いて行い、得られた結果を表１に示す。
リン脂質：ＤＭＰＣ，ＤＰＰＣまたはＨＳＰＣ
分散剤：Ｔｗｅｅｎ２０またはＴｗｅｅｎ６０
安定化剤：コレステロール（ＣＨ）
膜成分とＰＥＧ脂質の割合：９：１
調製法：超音波照射法

表１に示すように、得られたリポソームの粒径は、リン脂質の種類においては、ＨＳＰＣ＞ＤＰＰＣ＞ＤＭＰＣという傾向を示し、分散剤の種類においては、Ｔｗｅｅｎ２０＜Ｔｗｅｅｎ６０という傾向を示した。本検討においては、ＤＭＰＣ：ＣＨ：Ｔｗｅｅｎ２０＝８：２：１．１の組成のリポソームが粒径１３８ｎｍとなり、最も最適な組成であることが明らかとなった。

また、上記検討によって得られた最適組成のリポソームにマンガンポルフィリン錯体を導入し、得られたマンガンポルフィリン錯体包埋リポソームの粒径の経時変化について検討した結果を表２に示す。なお、マンガンポルフィリン錯体包埋リポソームの調製は、下記の条件にて行った。
マンガンポルフィリン濃度：ＭｎＴ４Ｍｅ_２ＳｕＰ：最適組成リポソーム＝１：４０（ｍｏｌ）
最適組成リポソーム：ＤＭＰＣ：ＣＨ：Ｔｗｅｅｎ２０＝１：０．２５：０．１４（８：２：１．１）

表２に示すように、調製後の平均粒径は１２３ｎｍであり、７２時間の経過後においても１３０ｎｍと経時安定性があることを確認した。一般的に、経口から摂取されたものが排泄されるまでに要する時間は、２４〜７２時間とされているので、本検討における最適組成リポソームにマンガンポルフィリン錯体を包埋させることによって、腸からの吸収および非正常組織への集積が可能なマンガンポルフィリン錯体包埋リポソームが得られることが明らかとなった。

なお、本検討においては、イオンコンプレックス（ＭｎＴ４Ｍｅ_２ＳｕＰ）１モルに対して、脂質類（最適組成リポソーム）を４０モルとして行ったが、脂質類を１０〜５００モルの範囲において適宜選択して調製することができる。

＜実施例１＞
本発明の経口疾患治療薬の実施例１について説明する。本実施例においては、胃液防護・腸液溶解性物質としてアルギン酸塩の一種であるアルギン酸カルシウムを用いて経口疾患治療薬の調製条件の検討を行った。

経口疾患治療薬の調整方法は、リポソーム溶液に水溶性のアルギン酸ナトリウムを混合したアルギン酸ナトリウム混合リポソーム溶液としたものを、塩化カルシウム水溶液中に滴下させることによって、当該アルギン酸ナトリウム混合リポソーム溶液の滴のアルギン酸ナトリウムをイオン架橋によってゲル化させて不溶性のアルギン酸カルシウムとすることで調製した。なお、アルギン酸ナトリウム混合リポソーム溶液は、リポソーム溶液に対してアルギン酸ナトリウムを１％添加したものを用いた。また、塩化カルシウム水溶液の濃度は、０．４，１，２，１０，２０，３０％とした。

得られた本実施例における経口疾患治療薬の各サンプルについて、人工胃液中にて３７℃、７０ｒｐｍの条件下で１時間攪拌し溶解性を検討するとともに、人工腸液中にて３７℃、７０ｒｐｍの条件下での溶解時間の検討を行い、得られた結果を表３に示す。

表３に示すように、全てのサンプルにおいて人工胃液に対して不溶であることが確認された。また、人工腸液への溶解速度は、経口疾患治療薬の調製時に用いる塩化カルシウム水溶液の濃度には依存しないことが明らかとなった。

また、本実施例の調製時において、塩化カルシウム水溶液の濃度が高いほど、早くイオン架橋が生じ、さらには、より硬い膜が形成されていることが認められた。そこで、経口疾患治療薬のサイズを１，１．５，２，４ｍｍとしたものを調製し、人工腸液中にて３７℃、７０ｒｐｍの条件下で攪拌した際の溶解時間を比較した結果を表４に示す。なお、経口疾患治療薬の調製には、３０％濃度の塩化カルシウム水溶液を用いた。

表４に示すように、経口疾患治療薬の人工腸液中における溶解速度は、経口疾患治療薬のサイズ（粒径）に依存することが明らかとなった。本実施例においては、粒径１ｍｍとしたものが３０分以下と最も早く溶解した。

表３および表４の結果から、経口疾患治療薬の調製時における塩化カルシウム濃度を高くするとともに、粒径を小さく調製することにより、イオン架橋密度が高く、腸液への即溶性のある経口疾患治療薬が得られることが明らかとなった。

また、本実施例においては、アルギン酸ナトリウム混合リポソーム溶液を滴下することによって球状の経口疾患治療薬として調製したが、ゾンデ内径が小径のシリンジから塩化カルシウム溶液中に連続的に当該アルギン酸ナトリウム混合リポソーム溶液を射出し、得られた糸状体を切断することによって微細糸状とした経口疾患治療薬を調製することで、極めて表面積の小さい経口疾患治療薬とすることもできる。

なお、本実施例においては、胃液防護・腸液溶解性物質として、アルギン酸塩の一種であるアルギン酸カルシウムを用いたが、その他のアルギン酸塩、アルギン酸、またはアルギン酸エステルなどを用いても同様の結果が得られるものである。

＜実施例２＞
本発明の経口疾患治療薬の実施例２について説明する。本実施例においては、胃液防護・腸液溶解性物質としてアルギン酸カルシウムを用い、経口疾患治療薬を調製するとともに、得られた経口疾患治療薬の人工胃液および人工腸液への暴露後のリポソームについて検討を行った。

本実施例における経口疾患治療薬の調製においては、マンガンポルフィリン錯体を混合したリポソーム溶液２ｍｌに５％のアルギン酸ナトリウムを０．５ｍｌ添加した１％アルギン酸ナトリウム混合リポソーム溶液を２０％の塩化カルシウム水溶液に滴下して経口疾患治療薬を調製する。得られた経口疾患治療薬を、人工胃液中にて３７℃、７０ｒｐｍの条件下で１時間攪拌した後、人工腸液中にて３７℃、７０ｒｐｍで攪拌した経口疾患治療薬腸液溶解液を高速遠心分離器にて１００００ｐｒｍで４０分間遠心分離し、得られた上澄み液を４０℃で加熱・フィルター処理しサンプルを得た。当該サンプルを急速凍結装置（Ｌｅｉｃａ ＥＭ ＣＰＣ，Ｌｅｉｃａ Ｃｏ．社製）にて急速凍結させてガラスナイフで割断し、その割断面にＰｔ−Ｃ蒸着を施してＴＥＭ観察（加速電圧は１２０ｋＶとした）を行った。また、得られたサンプルについて、動的光散乱光度計を用いて、平均粒子径の測定を行った。なお、リポソームの状態や平均粒子径を比較するために、マンガンポルフィリン錯体包埋リポソームのみを調製したサンプルについても、ＴＥＭ観察および平均粒子径の測定を行った。得られたＴＥＭ像および平均粒子径を図１に示す。

図１に示すように、本実施例における経口疾患治療薬は、人工腸液中において胃液防護・腸液溶解性物質としてのアルギン酸カルシウムが溶解されても、マンガンポルフィリン錯体包埋リポソームは崩壊せずに人工腸液中に溶出していることが確認された。

また、経口疾患治療薬腸液溶解液について、ＵＶ−ｖｉｓスペクトル評価を行い、マンガンポルフィリンの変性について検討した結果を表５に示す。

表５に示すように、経口疾患治療薬腸液溶解液は、Ｓｏｒｅｔ帯およびＱ帯のいずれにおいてもマンガンポルフィリンおよびマンガンポルフィリン錯体包埋リポソームと同等の帯域であったので、人工腸液で溶出したリポソーム中のポルフィリンはマンガンポルフィリンであり、人工胃液によってもマンガンが脱落などせずに保持されていることが明らかとなった。

＜実施例３＞
本発明の経口疾患治療薬の実施例３について説明する。本実施例においては、パラコート障害マウスを用いた抗酸化効果および薬剤投与量の検討を行った。

ここで、パラコートとは、生体内に投与されると活性酸素を大量に発生させて、各臓器に炎症などの多大な損傷を与える。本実施例においては、このパラコートを投与したマウスに、本発明の経口疾患治療薬を経口投与して、その抗酸化効果および薬剤投与量を検討した。

試験種には、１３週齢雄Ｃ５７／ＢＬ６ｓｌｃマウス（１群につき８匹）を用いた。投与スケジュールは、まず薬剤を経口投与、４時間後にパラコートおよびカタラーゼを腹腔投与、そして２４時間後に再度薬剤を経口投与し、マウスの生死を観察し、生存率を比較する。第１群にはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を経口投与、第２群には本願発明の経口疾患治療薬（イオンコンプレックス（ＭｎＴ４Ｍｅ_２ＳｕＰ）：最適組成リポソーム＝１：４０ｍＭ）を０．２ｍｌ経口投与（経静脈投与量の２倍量に相当）、第３群には本願発明の経口疾患治療薬（イオンコンプレックス（ＭｎＴ４Ｍｅ_２ＳｕＰ）：最適組成リポソーム＝１：６０ｍＭ）を０．４ｍｌ経口投与（経静脈投与量の６倍量に相当）した。各マウスの観察結果をカプラン・マイヤー生存率曲線として図２に示す。

図２に示すように、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を経口投与したマウスにおいては、９日目で生存率がゼロとなった。これに対して、図２（ａ）に示すように、経静脈投与量の２倍量に相当する本発明の経口疾患治療薬を経口投与した第２群のマウスにおいては、５日目で生存率が０．５となり、１０日目までその値を維持した。また、図２（ｂ）に示すように、経静脈投与量の６倍量に相当する本発明の経口疾患治療薬を経口投与した第３群のマウスにおいては、４日目で生存率が０．６となり、１０日目までその値を維持した。これらの結果に基づいて、ログランク検定による各軍のＰ値を算出した結果を表６に示す。

表６に示すように、経静脈投与量の６倍量に相当する第３群においてＰ値が０．０５以下の有意差のある結果を示し、パラコート障害に対して抗酸化効果があることが認められた。

＜実施例４＞
本発明の経口疾患治療薬の実施例４について説明する。本実施例においては、実施例３において抗酸化効果が得られた経静脈投与量の６倍量に相当する本発明の経口疾患治療薬を癌細胞を移植したマウスに対して経口投与し、その癌予防効果について検討した。

試験種には、１３週齢雄Ｃ５７／ＢＬ６ｓｌｃマウス（１群につき８匹）を用いた。投与スケジュールは、まず癌細胞を移植し、２４時間おきに８日間薬剤を経口投与し、癌体積を計測し、体積変化を比較する。プラセボ群には、実施例３の第１群と同様にリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を経口投与した。そして、薬剤投与群には、実施例３の第３群と同様に経静脈投与量の６倍量に相当する本発明の経口疾患治療薬を経口投与した。各群のマウスにおける８日目の表面癌体積の測定結果を図３に示す。

図３に示すように、経静脈投与量の６倍量に相当する本発明の経口疾患治療薬を経口投与した薬剤投与群の８日目の表面癌体積は、プラセボ群の１０分の１以下であり、Ｐ値が０．０５以下の有意差のある結果を示し、本発明の経口疾患治療薬は生体内において優れた抗癌効果を示すことを確認した。また、本実施例において、プラセボ群においては２日目で癌細胞が定着したのに対して、薬剤投与群では、８日目になって癌細胞の定着が確認された。

以上のことから、本発明の経口疾患治療薬によれば、優れた抗酸化効果・抗癌効果を有する鉄またはマンガンポルフィリン錯体包埋リポソームを経口投与することを可能とし、従来の注射や点滴などの血中投与と比べて、患者のクオリティ・オブ・ライフ（ＱＯＬ）を損ねることなく疾患の治療や予防を行うことを可能とする。

本発明の経口疾患治療薬は、上記の実施例に限定されるものではなく、発明の特徴を損なわない範囲において種々の変更が可能である。

Claims (5)

1. ナノサイズ大の鉄またはマンガンポルフィリン錯体包埋リポソームを含有する経口疾患治療薬であって、
   前記鉄またはマンガンポルフィリン錯体包埋リポソームは胃液防護・腸液溶解性物質に包含されており、腸液内でのみ開放されて生体内に吸収されるように形成されていることを特徴とする経口疾患治療薬。
2. 前記胃液防護・腸液溶解性物質が、アルギン酸およびアルギン酸誘導体からなることを特徴とする請求項１に記載の経口疾患治療薬。
3. 前記アルギン酸誘導体が、アルギン酸塩であることを特徴とする請求項２に記載の経口疾患治療薬。
4. 前記鉄またはマンガンポルフィリン錯体包埋リポソームの粒径が、２００ｎｍ以下であることを特徴とする請求項１乃至請求項３のいずれか１項に記載の経口疾患治療薬。
5. 粒径が、１ｍｍ以下であることを特徴とする請求項１乃至請求項４のいずれか１項に記載の経口疾患治療薬。