JP2020520961A - がん免疫療法のための組成物及び方法 - Google Patents

Abstract

特に固形腫瘍におけるがん免疫療法を改善するための処置が本明細書で提供される。記載された処置は、持続放出型オリゴヌクレオチド剤を、任意選択で免疫療法剤と一緒に含む。記載された処置でがんを処置する方法もまた開示される。【選択図】 図４Ａ

Description

本開示は、特に固形腫瘍におけるがん免疫療法を改善するための処置に関する。記載された処置は、ＲＮＡ干渉剤を含むオリゴヌクレオチドを含む１つ又は複数の化学治療剤の持続放出を含む。免疫療法剤の投与を更に含む記載された処置でがんを処置する方法もまた開示される。

免疫腫瘍学（ＩＯ）とも称されるがんのための免疫療法は、免疫系を利用してがんを処置する。ＩＯ剤は、チェックポイント遮断剤、キメラ抗原受容体Ｔ細胞、ワクチン接種等を含む種々の方法を用いる。チェックポイント遮断剤、例えばＣＴＬＡ−４及びＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１チェックポイントを遮断する薬剤は、一部の固形腫瘍における重大な臨床応答を実証している。しかしながら、多くの患者はそのような療法に応答しない。特に、米国におけるがん関係の死のうちで４番目によく見られる死因である膵臓がんを有する患者は、いくつかの臨床研究において全く（又は、非常に限定された程度でしか）応答を示さなかった（Ｒｏｙａｌ ２０１０年、Ｂｒａｈｍｅｒ ２０１２年、Ｆｅｉｇ ２０１３年、Ｊａｖｌｅ ２０１６年）。ＩＯ耐性の理由は完全にはわかっていないが、明白に、細胞傷害性Ｔ細胞の固形腫瘍への限定的な浸潤と関連している。免疫細胞は膵臓腫瘍細胞塊の実に５０％を構成していることが見出されているが、免疫抑制性の制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞及び骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）が優勢で、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）が腫瘍にほとんど浸潤していない（Ｃｌａｒｋ ２００７年）。下回るとＣＤ８^＋Ｔ細胞を含む白血球の細胞溶解活性が無効となる臨界濃度があることが提唱されている。更に、膵臓腫瘍の血管機能不全は、免疫療法薬の全身送達の更なる主要な障壁の代表である（Ｆｅｉｇ ２０１２年）。したがって、がん療法に対する免疫療法的手法、特に固形腫瘍のための免疫療法処置の改善に対して継続した必要性が存在する。特に、ＣＤ８^＋及びＣＤ４^＋を含むＴ細胞、並びにＮＫ及びＮＫＴ細胞の腫瘍コアへの浸潤を加速する緊急の必要性がある。

対象の固形腫瘍を免疫療法処置に対して馴化させることに使用するための組成物が、本明細書で提供される。記載された組成物は、固形腫瘍及び／又は周囲の微小環境へ送達されると固形腫瘍を免疫療法処置に対して馴化させる化学治療剤を含む高分子薬物送達装置を含む。

化学治療剤を含む高分子薬物送達装置、及び免疫療法組成物を含む、固形腫瘍の処置における使用のための組成物もまた本明細書で提供される。

記載された組成物は全て、腫瘍及び／若しくは腫瘍微小環境を免疫療法に対して馴化させることにおける使用のための、並びに／又は腫瘍の処置における使用のための医薬の調製に用いることができることが理解されると予想される。

同様に、記載された組成物は、腫瘍及び／若しくは腫瘍微小環境を免疫療法に関して馴化させるための方法、並びに／又は固形腫瘍の処置のための方法に用いることができる。

前述の及び他の目的、特徴、及び利点は、添付の図面を参照して行われる以下の詳細な説明からより明白になると予想される。

膵臓腫瘍の空隙容積に対するｓｉＧ１２Ｄ−ＬＯＤＥＲの以前に公開した効果を示す図である。効果は、顕微鏡観察により示されており（図１Ａ）、定量化されている（下のパネル）。 膵臓腫瘍の空隙容積に対するｓｉＧ１２Ｄ−ＬＯＤＥＲの以前に公開した効果を示す図である。効果は、顕微鏡観察により示されており（図１Ａ）、定量化されている（下のパネル）。 膵臓腫瘍の空隙容積に対するｓｉＧ１２Ｄ−ＬＯＤＥＲの以前に公開した効果を示す図である。効果は、顕微鏡観察により示されており（図１Ａ）、定量化されている（下のパネル）。 前立腺腫瘍の壊死、したがって空隙容積に対するｓｉＡＲ−ＬＯＤＥＲ、ｓｉＢＭＩ１−ＬＯＤＥＲ、及びｓｉＨＳＰ９０−ＬＯＤＥＲの以前に公開した効果を示す棒グラフである。 ＴＮＦ−アルファ（図２Ａ）、ＩＦＮ−ベータ（図２Ｂ）、及びＩＰ−１０（図２Ｃ）の膵臓腫瘍細胞発現に対するｓｉＧ１２Ｄトランスフェクションの効果を示すグラフである。 ＴＮＦ−アルファ（図２Ａ）、ＩＦＮ−ベータ（図２Ｂ）、及びＩＰ−１０（図２Ｃ）の膵臓腫瘍細胞発現に対するｓｉＧ１２Ｄトランスフェクションの効果を示すグラフである。 ＴＮＦ−アルファ（図２Ａ）、ＩＦＮ−ベータ（図２Ｂ）、及びＩＰ−１０（図２Ｃ）の膵臓腫瘍細胞発現に対するｓｉＧ１２Ｄトランスフェクションの効果を示すグラフである。 ＩＦＮ−アルファ（図３Ａ）、ＩＬ−８（図３Ｂ）、ＩＬ１−ＲＡ（図３Ｃ）、及びＭＣＰ−１（図３Ｄ）発現に関するＰＢＭＣ発現に対するｓｉＧ１２Ｄトランスフェクションの効果を示すグラフである。各条件の陽性及び陰性対照も示す。 ＩＦＮ−アルファ（図３Ａ）、ＩＬ−８（図３Ｂ）、ＩＬ１−ＲＡ（図３Ｃ）、及びＭＣＰ−１（図３Ｄ）発現に関するＰＢＭＣ発現に対するｓｉＧ１２Ｄトランスフェクションの効果を示すグラフである。各条件の陽性及び陰性対照も示す。 ＩＦＮ−アルファ（図３Ａ）、ＩＬ−８（図３Ｂ）、ＩＬ１−ＲＡ（図３Ｃ）、及びＭＣＰ−１（図３Ｄ）発現に関するＰＢＭＣ発現に対するｓｉＧ１２Ｄトランスフェクションの効果を示すグラフである。各条件の陽性及び陰性対照も示す。 ＩＦＮ−アルファ（図３Ａ）、ＩＬ−８（図３Ｂ）、ＩＬ１−ＲＡ（図３Ｃ）、及びＭＣＰ−１（図３Ｄ）発現に関するＰＢＭＣ発現に対するｓｉＧ１２Ｄトランスフェクションの効果を示すグラフである。各条件の陽性及び陰性対照も示す。 ｉｎ−ｖｉｖｏにおいてｓｉＧ１２Ｄ−ＬＯＤＥＲが腫瘍組織でＩＦＮβを誘導することを示すグラフである。図４Ａ：５μｇ ｓｉＧ１２Ｄ−ＬＯＤＥＲ用量は、腫瘍周縁部で主にＩＦＮβの発現を増加させる。図４Ｂ。１５μｇ ｓｉＧ１２Ｄ−ＬＯＤＥＲ用量は、腫瘍全体にわたってＩＦＮβの発現を増加させる。 ｉｎ−ｖｉｖｏにおいてｓｉＧ１２Ｄ−ＬＯＤＥＲが腫瘍組織でＩＦＮβを誘導することを示すグラフである。図４Ａ：５μｇ ｓｉＧ１２Ｄ−ＬＯＤＥＲ用量は、腫瘍周縁部で主にＩＦＮβの発現を増加させる。図４Ｂ。１５μｇ ｓｉＧ１２Ｄ−ＬＯＤＥＲ用量は、腫瘍全体にわたってＩＦＮβの発現を増加させる。 処理試料と未処理試料との間の、ＣＤ４染色（ＣＤ４^＋Ｔ細胞を同定する）に関する比較を示す図である。細胞を、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ／Ｉｎｄｉｃａ Ｌａｂｓのハロ（ＨＡＬＯ）（商標）を用いて計数した。図５Ａ：ＣＤ４染色に陽性の細胞を、ｓｉＧ１２Ｄ−ＬＯＤＥＲ処理腫瘍のＬＯＤＥＲ端部からの様々な距離で計数した。図５Ｂ：未処理腫瘍では、ＣＤ４陽性細胞を腫瘍中心からの様々な距離で計数した。これは、ＬＯＤＥＲ端部／腫瘍中心の周りの０．５ｍｍ幅の同心円内の陽性染色細胞を計数することによって行われた。各同心円内の全ての細胞を計数し、陽性染色細胞濃度を算出した。結果は、ｓｉＧ１２Ｄ−ＬＯＤＥＲ処理後の腫瘍の中央でＣＤ４^＋Ｔ細胞のより高い濃度を示している。図５Ｃは、腫瘍内のＴ細胞濃度及び分布に対するｓｉＧ１２Ｄ−ＬＯＤＥＲの定量的効果を示す。 処理試料と未処理試料との間の、ＣＤ４染色（ＣＤ４^＋Ｔ細胞を同定する）に関する比較を示す図である。細胞を、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ／Ｉｎｄｉｃａ Ｌａｂｓのハロ（ＨＡＬＯ）（商標）を用いて計数した。図５Ａ：ＣＤ４染色に陽性の細胞を、ｓｉＧ１２Ｄ−ＬＯＤＥＲ処理腫瘍のＬＯＤＥＲ端部からの様々な距離で計数した。図５Ｂ：未処理腫瘍では、ＣＤ４陽性細胞を腫瘍中心からの様々な距離で計数した。これは、ＬＯＤＥＲ端部／腫瘍中心の周りの０．５ｍｍ幅の同心円内の陽性染色細胞を計数することによって行われた。各同心円内の全ての細胞を計数し、陽性染色細胞濃度を算出した。結果は、ｓｉＧ１２Ｄ−ＬＯＤＥＲ処理後の腫瘍の中央でＣＤ４^＋Ｔ細胞のより高い濃度を示している。図５Ｃは、腫瘍内のＴ細胞濃度及び分布に対するｓｉＧ１２Ｄ−ＬＯＤＥＲの定量的効果を示す。 処理試料と未処理試料との間の、ＣＤ４染色（ＣＤ４^＋Ｔ細胞を同定する）に関する比較を示す図である。細胞を、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ／Ｉｎｄｉｃａ Ｌａｂｓのハロ（ＨＡＬＯ）（商標）を用いて計数した。図５Ａ：ＣＤ４染色に陽性の細胞を、ｓｉＧ１２Ｄ−ＬＯＤＥＲ処理腫瘍のＬＯＤＥＲ端部からの様々な距離で計数した。図５Ｂ：未処理腫瘍では、ＣＤ４陽性細胞を腫瘍中心からの様々な距離で計数した。これは、ＬＯＤＥＲ端部／腫瘍中心の周りの０．５ｍｍ幅の同心円内の陽性染色細胞を計数することによって行われた。各同心円内の全ての細胞を計数し、陽性染色細胞濃度を算出した。結果は、ｓｉＧ１２Ｄ−ＬＯＤＥＲ処理後の腫瘍の中央でＣＤ４^＋Ｔ細胞のより高い濃度を示している。図５Ｃは、腫瘍内のＴ細胞濃度及び分布に対するｓｉＧ１２Ｄ−ＬＯＤＥＲの定量的効果を示す。

〔記載される配列の簡単な説明〕
本明細書と共に提供される核酸配列は、米国特許法規則１．８２２に定義されているヌクレオチド塩基に関する標準的な文字略語を用いて示される。各核酸配列の一方の鎖のみが示されるが、表示された鎖への任意の参照により、相補鎖が含まれることが理解される。配列表は、２０１８年５月２３日に作成された、２１４２ １０ ２ ｓｅｑ ｌｉｓｔ＿ＳＴ２５という名称の約６ＫＢのＡＳＣＩＩテキストファイルとして提出され、これは参照によって本明細書に組み込まれる。添付の配列表において、
配列番号１は、ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄを標的化するｓｉＲＮＡのセンス鎖である。

配列番号２は、ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄを標的化するｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖である。

配列番号３は、アンドロゲン受容体（ＡＲ）を標的化するｓｉＲＮＡのセンス鎖である。

配列番号４は、アンドロゲン受容体（ＡＲ）を標的化するｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖である。

配列番号５は、ＢＭＩ１を標的化するｓｉＲＮＡのセンス鎖である。

配列番号６は、ＢＭＩ１を標的化するｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖である。

配列番号７は、ＨＳＰ９０を標的化するｓｉＲＮＡのセンス鎖である。

配列番号８は、ＨＳＰ９０を標的化するｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖である。

配列番号９は、ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄを標的化する２−Ｏ−ｍｅｔ−修飾ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖である。

配列番号１０は、ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄを標的化する２−Ｏ−ｍｅｔ−修飾ｓｉＲＮＡのセンス鎖である。

配列番号１１は、細胞膜透過性ペプチドのＴａｔである。

配列番号１２は、細胞膜透過性ペプチドのＭＰＧである。

配列番号１３は、細胞膜透過性ペプチドのＰｅｐ−１である。

配列番号１４は、ルシフェラーゼを標的化するｓｉＲＮＡのセンス鎖である。

配列番号１５は、ルシフェラーゼを標的化するｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖である。

〔詳細な説明〕
Ｉ．用語
別段の説明がない限り、本明細書で用いられる全ての技術及び科学用語は、本開示が属する当業者によって通常理解されるものと同じ意味を有する。単数形の用語「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」及び「その（ｔｈｅ）」は、文脈が明確にそうではないことを指示していない限り、複数のものを含む。同様に、単語「又は」は、文脈が明確にそうではないことを指示していない限り、「及び」を含むことが意図されている。用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」は「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」を意味する。略語「ｅ．ｇ．」は、ラテン語のｅｘｅｍｐｌｉ ｇｒａｔｉａに由来し、本明細書では非限定例を示すのに用いられる。したがって、略語「ｅ．ｇ．」は用語「例えば（ｆｏｒ ｅｘａｍｐｌｅ）」と同義である。矛盾する場合は、用語の説明を含む本明細書が優先する。加えて、全ての材料、方法、及び例は、例証的なものであって、限定することは意図されていない。

投与：選択された経路による対象への組成物の導入。活性化合物又は組成物の投与は、当業者に公知の任意の経路によるものであり得る。投与は局所的でも全身的でもよい。局所投与の例は、局部投与、腫瘍内投与、皮下投与、筋肉内投与、髄腔内投与、眼内投与、局部眼投与、又は吸入投与による鼻粘膜若しくは肺への投与を含むが、これらに限定されない。加えて、局所投与は、例えば血管内投与を特定の器官のための動脈供給に向けることによって、全身投与のために典型的には用いられる投与経路を含む。したがって、特定の実施形態では、局所投与は、動脈内投与及び静脈内投与が特定の器官に供給する脈管構造を標的化している場合、そのような投与を含む。局所投与はまた、移植可能な装置又は構築物（例えば本明細書に記載される薬物送達装置）への活性化合物及び薬剤の組込みを含み、これにより、活性薬剤及び化合物は持続的な処置効果のための長い時間間隔で放出される。移植可能な装置は、所与の処置の区域である組織又は組織環境への挿入に関する、当技術分野で公知の任意の手段によって「移植される」。

全身投与は、循環系を介して活性化合物又は組成物を身体全体に広く分布させるように設計された任意の投与経路を含む。したがって、全身投与は、動脈内及び静脈内投与を含むが、これらに限定されない。全身投与はまた、局部投与、皮下投与、筋肉内投与、又は吸入による投与が循環系による身体全体への吸収及び分布に向けられている場合、そのような投与を含むが、これらに限定されない。

変化した発現：対象における生体分子（例えば、ＲＮＡ（ｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ等）若しくはタンパク質）又は対象由来の生体試料の発現であって、同じ対象における生体分子又は対象由来の生体試料が分子と関連する生物学的状態に関して正常な又は変化していない特性を有している場合の発現から逸脱している、発現。正常な発現は、対照、集団の標準、及び他の同様の発現のベースライン測定において見出され得る。生体分子の変化した発現は、がん等の疾患と関連し得る。と関連するという用語は、疾患を発症する増加した危険性及び疾患それ自体を含む。発現は、増加又は減少するという仕方で変化し得る。ＲＮＡ又はタンパク質の発現の、対象となる変化は、病的状態と関連する分子に対する直接的な効果、又はそのような分子に対する間接的な効果の結果として生じる治療的利益と関連し得る（例えば、ここで、変化した発現は、病理関係の分子に影響を与える下流の発現の変更を結果的にもたらす）。

抗体：免疫グロブリン遺伝子又は免疫グロブリン遺伝子の断片によって実質的にコードされた１つ又は複数のポリペプチドを含むタンパク質（又はタンパク質複合体）。認識されている免疫グロブリン遺伝子は、カッパ、ラムダ、アルファ、ガンマ、デルタ、イプシロン、及びミュー定常領域遺伝子、並びに無数の免疫グロブリン可変領域遺伝子を含む。軽鎖はカッパ又はラムダのどちらかとして分類される。重鎖はガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、又はイプシロンとして分類され、これらが免疫グロブリンクラスの、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥをそれぞれ定義する。

基本的な免疫グロブリン（抗体）構造単位は、一般的には四量体である。各四量体は、同一な二対のポリペプチド鎖から構成されており、各対は１本の軽鎖（約２５ｋＤ）及び１本の重鎖（約５０〜７０ｋＤ）を有している。各鎖のＮ末端は、抗原認識の主要な要因である約１００〜１１０個以上のアミノ酸の可変領域を定義する。可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）及び可変重鎖（Ｖ_Ｈ）という用語は、これらの軽鎖及び重鎖をそれぞれ指す。

本明細書で用いる場合、抗体という用語は、完全型免疫グロブリン、及び多様なペプチダーゼでの消化によって産生された、いくつかの十分に特性解析された抗体断片、又は遺伝子操作された人工抗体を含む。したがって、例えば、ペプシンは、ヒンジ領域のジスルフィド連結より下の抗体を消化して、Ｆ（ａｂ）’_２、すなわち、それ自体がジスルフィド結合によってＶ_Ｈ−Ｃ_Ｈ１に接合した軽鎖であるＦａｂの二量体を産生する。Ｆ（ａｂ）’_２は、穏やかな条件下で還元されてヒンジ領域のジスルフィド連結を破壊し、それによってＦ（ａｂ）’_２二量体をＦａｂ’単量体に変換し得る。Ｆａｂ’単量体は、本質的には、ヒンジ領域の一部を有するＦａｂである（Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｗ．Ｅ．Ｐａｕｌ編、Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｎ．Ｙ．、１９９３年を参照のこと）。多様な抗体断片が完全型抗体の消化という観点から定義されているが、Ｆａｂ’断片は化学的に、又は組換えＤＮＡ方法を利用することによって、新たに合成できることが理解されると予想される。したがって、抗体という用語は、本明細書で用いる場合、抗体全体の修飾によって産生された、又は組換えＤＮＡ方法を用いて新たに合成された抗体断片も含む。

本開示の方法、組成物、及びシステムにおける使用のための抗体は、モノクローナル又はポリクローナルであり得る。単に例として、モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ及びＭｉｌｓｔｅｉｎ（Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５〜４９７ページ、１９７５年）の古典的な方法、又はその派生的な方法に従ってマウスハイブリドーマから調製され得る。モノクローナル抗体作製の詳細な手順は、Ｈａｒｌｏｗ及びＬａｎｅ（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、ＣＳＨＬ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９８８年）に記載されている。

一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）は、好適なポリペプチドリンカーによって連結された１つ又は複数の抗体のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインを、遺伝子融合した一本鎖分子として含有する遺伝子操作された分子である（例えば、Ｂｉｒｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４２：４２３〜４２６ページ、１９８８年；Ｈｕｓｔｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、８５：５８７９〜５８８３ページ、１９８８年を参照のこと）。ダイアボディは、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインが１本のポリペプチド鎖で発現しているが、非常に短く同じ鎖の２つのドメインの間で対形成することができないリンカーを用いているために、ドメインを別の鎖の相補的なドメインと強制的に対形成させて２つの抗原結合部位を創製している、二価の二重特異性抗体である（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、９０：６４４４〜６４４８ページ、１９９３年；Ｐｏｌｊａｋら、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ、２：１１２１〜１１２３ページ、１９９４年を参照のこと）。１つ又は複数のＣＤＲが分子に共有結合又は非共有結合のどちらかによって取り込まれ、結果として得られる分子をイムノアドヘシンにしてもよい。イムノアドヘシンは、より長いポリペプチド鎖の一部としてＣＤＲ（複数可）を取り込んでいてもよく、別のポリペプチド鎖にＣＤＲ（複数可）を共有結合によって連結していてもよく、ＣＤＲ（複数可）を非共有結合によって取り込んでいてもよい。ＣＤＲは、イムノアドヘシンが目的の特定の抗原に特異的に結合することを可能にする。キメラ抗体は、１つの抗体由来の１つ又は複数の領域と、１つ又は複数の他の抗体由来の１つ又は複数の領域とを含有する抗体である。

抗体は１つ又は複数の結合部位を有し得る。２つ以上の結合部位がある場合、結合部位は互いに同一であっても異なっていてもよい。例えば、天然に存在する免疫グロブリンは同一な２つの結合部位を有し、一本鎖抗体又はＦａｂ断片は１つの結合部位を有するが、二重特異性又は二機能性抗体は２つの異なる結合部位を有する。

中和抗体又は阻害性抗体は、標的−−通例、ポリペプチド−−の少なくとも１つの活性を、例えばポリペプチドの、ポリペプチドが正常に結合しているリガンドへの結合を遮断することによって、又はポリペプチドと第２のポリペプチドとのタンパク質−タンパク質相互作用を妨害する若しくはそうでなければ干渉することによって阻害する抗体である。活性化抗体は、ポリペプチドの活性を増加させる抗体である。抗体は、標的タンパク質活性の模倣薬として、又は標的タンパク質活性の遮断薬として機能し得、それにより治療効果が得られる。

アンチセンス阻害薬：ハイブリダイズする標的核酸分子の領域に少なくとも部分的に相補的であるオリゴマー化合物を指す。本明細書で用いる場合、標的核酸分子「に対して特異的」であるアンチセンス阻害薬（「アンチセンス化合物」とも称される）は、標的核酸分子と特異的にハイブリダイズして標的核酸分子の発現を調節するものである。本明細書で用いる場合、「標的」核酸は、アンチセンス化合物が特異的にハイブリダイズして発現を調節するように設計されている、核酸分子である。アンチセンス化合物の非限定的な例は、プライマー、プローブ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、アンチセンスモルホリノ、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）剤、例えば低分子（又は短鎖）干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、低分子（又は短鎖）ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、及びリボザイムを含む。したがって、これらの化合物は、一本鎖、二本鎖、環状、分岐、又はヘアピン化合物として導入することができ、内部又は末端バルジ又はループ等の構造要素を含有することができる。二本鎖アンチセンス化合物は、ハイブリダイズして二本鎖の化合物を形成する２本の鎖、又はハイブリダイゼーションと、完全に若しくは部分的に二本鎖の化合物の形成とを可能にするのに十分な自己相補性を有する１本の鎖であり得る。

がん：異常増殖の産物は新生物（腫瘍又はがん）であり、新生物は過剰な細胞分裂の結果として生じる組織の異常成長である。異常増殖は増殖障害の一例である。「がん細胞」は新生物性の細胞であり、例えば腫瘍から単離された細胞又は細胞株である。

肉腫及び癌腫等の固形腫瘍の例は、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原生肉腫、及び他の肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、リンパ性悪性腫瘍、膵臓がん、乳がん、肺がん（例えば小細胞肺癌、及び非小細胞肺癌）、卵巣がん、前立腺がん、肝細胞癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、甲状腺髄様癌、甲状腺乳頭癌、褐色細胞腫、脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、髄様癌、気管支原生癌、腎細胞癌、肝細胞腫、胆管癌、絨毛癌、ウィルムス腫瘍、子宮がん、精巣腫瘍、精上皮腫、膀胱癌、黒色腫、並びにＣＮＳ腫瘍（例えば神経膠腫、星細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫、乏突起神経膠腫、髄膜腫、神経芽腫、及び網膜芽腫）を含む。特定の実施形態では、記載された組成物及び方法による処置のために標的化されるがんは、原発腫瘍ではない転移である。

血液腫瘍の例は、急性白血病（例えば急性リンパ性白血病、急性骨髄球性白血病、急性骨髄性白血病、並びに骨髄芽球性、前骨髄球性、骨髄単球性、単球性、及び赤白血病）、慢性白血病（例えば慢性骨髄球性（顆粒球性）白血病、慢性骨髄性白血病、及び慢性リンパ性白血病）、真性多血症、悪性リンパ腫、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫（緩慢性及び高悪性度型）、多発性骨髄腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、重鎖病、骨髄異形成症候群、有毛細胞白血病、並びに脊髄形成異常を含む白血病を含む。

チェックポイント阻害性薬剤又はチェックポイント阻害性抗体：免疫チェックポイント機構として当技術分野で公知のものの一部としての、Ｔ細胞活性化後にＴ細胞阻害を導くシグナルカスケードを妨害することができる薬剤、特に抗体（又は抗体様分子）。チェックポイント阻害性薬剤又はチェックポイント阻害性抗体の非限定的な例は、ＣＴＬＡ−４（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｐ１６４１０）、ＰＤ−１（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｑ１５１１６）、ＰＤ−Ｌ１（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｑ９ＮＺＱ７）、及びＢ７Ｈ３（ＣＤ２７６；Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｑ５ＺＰＲ３）に対する抗体を含む。

本明細書の文脈では、チェックポイントアゴニスト剤又はチェックポイントアゴニスト抗体は、免疫チェックポイント機構として当技術分野で公知のものの一部としての、Ｔ細胞活性化を導くシグナルカスケードに従事することができる抗体（又は抗体様分子）を含むが、これに限定されない。Ｔ細胞活性化を刺激することが公知の受容体の非限定的な例は、ＣＤ１２２及びＣＤ１３７（４−１ＢＢ；Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｑ０７０１１）を含む。チェックポイントアゴニスト剤又はチェックポイントアゴニスト抗体という用語は、ＣＤ１３７に対するアゴニスト抗体を包含する。

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、イピリムマブ（ヤーボイ；ＣＡＳ番号４７７２０２−００−９）である。

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１）とＰＤ−１の受容体であるＰＤ−Ｌ１との相互作用の阻害薬である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、臨床的に利用可能な抗体薬である、ニボルマブ（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ；ＣＡＳ番号９４６４１４−９４−４）、ペムブロリズマブ（Ｍｅｒｃｋ Ｉｎｃ．；ＣＡＳ番号１３７４８５３−９１−４）、ピジリズマブ（ＣＡＳ番号１０３６７３０−４２−３）、アテゾリズマブ（Ｒｏｃｈｅ ＡＧ；ＣＡＳ番号１３８０７２３−４４−３）、及びアベルマブ（Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ；ＣＡＳ番号１５３７０３２−８２−８）から選択される。

化学治療剤：異常な細胞増殖又は過形成を特徴とする疾患の処置における治療有用性を有する抗がん剤。そのような疾患は、がん、自己免疫疾患、及び乾癬等の過形成性増殖を特徴とする疾患を含む。当業者は、化学治療剤を容易に同定することができる（例えば、Ｓｌａｐａｋ及びＫｕｆｅ、Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、第１４版の第８６章；Ｐｅｒｒｙら、Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ、Ａｂｅｌｏｆｆ、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ第２版の第１７章、（Ｃ）２０００ Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ，Ｉｎｃ；Ｂａｌｔｚｅｒ Ｌ、Ｂｅｒｋｅｒｙ Ｒ（編）：Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｐｏｃｋｅｔ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ、第２版、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、Ｍｏｓｂｙ−Ｙｅａｒ Ｂｏｏｋ、１９９５年；Ｆｉｓｃｈｅｒ ＤＳ、Ｋｎｏｂｆ ＭＦ、Ｄｕｒｉｖａｇｅ ＨＪ（編）：Ｔｈｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ、第４版、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、Ｍｏｓｂｙ−Ｙｅａｒ Ｂｏｏｋ、１９９３年を参照のこと）。化学治療剤の非限定的な例は、ＩＣＬ誘導剤、例えばメルファラン（アルケラン（Ａｌｋｅｒａｎ）（商標））、シクロホスファミド（シトキサン（Ｃｙｔｏｘａｎ）（商標））、シスプラチン（プラチノール（Ｐｌａｔｉｎｏｌ）（商標））、及びブスルファン（ブシルベックス（Ｂｕｓｉｌｖｅｘ）（商標）、ミレラン（Ｍｙｌｅｒａｎ）（商標））を含む。化学治療剤は、小分子、核酸、ペプチド、及び抗体ベースの治療剤を含み、その全ての例は当技術分野で公知である。異物、例えば固形腫瘍を含む腫瘍に対する対象の免疫系の活性を高める免疫調節剤は、化学治療剤の他の例である。

薬物送達装置（ＤＤＤ）：アンチセンス阻害薬又は化学治療剤等の治療剤を対象に提供する装置。ＤＤＤの非限定的な例は、薬物溶出インプラント及びステントを含む。ＬＯＤＥＲインプラントは、特定の例では、ＲＮＡｉ剤との使用に関して本明細書に記載されており、例証的なＤＤＤである。

化合物の有効量：処置される対象において所望の効果を達成するのに十分な化合物の分量。化合物の有効量は、処置の経過中、単回用量又は複数の用量で、例えば毎日投与され得る。しかしながら、化合物の有効量は、適用される化合物、処置される対象、苦痛の重症度及び種類、並びに化合物の投与方法に依存すると予想される。

免疫療法／がん免疫療法：疾患の処置のために免疫系活性を調節（活性化又は阻害）する治療的処置。本明細書で用いる場合、免疫療法はがん免疫療法と同義に用いられ、これは、より詳細には、免疫療法処置の標的ががん細胞及び／又は腫瘍の標的化、阻害、及び／又は除去であることを示す。免疫治療剤の非限定的な例は、チェックポイント阻害薬及び活性化薬、抗体、天然及び操作された免疫細胞、例えばＧ−ＣＳＦリンパ球、及び養子細胞移入のために操作されたＴ細胞を含む。

注射用組成物：少なくとも１つの有効成分、例えば、ＲＮＡｉ剤を含む核酸、ペプチド、又は抗体を含む、薬学的に許容できる流体組成物。有効成分は、通例、生理学的に許容できる担体に溶解又は懸濁されており、組成物は少量の１つ又は複数の非毒性の補助物質、例えば乳化剤、保存剤、ｐＨ緩衝剤等を更に含んでいてもよい。本開示の組成物との使用に有用であるそのような注射用組成物は簡便であり、適切な製剤は当技術分野で周知である。

感受性を増加する：所与の処置に対する標的細胞、組織、又は器官の感受性を増加する。増加している感受性は、とりわけ、処置のより大きい効力、処置のより高い効率性等によって測定することができる。本明細書に記載されるように、がん免疫治療剤の効果に対する固形腫瘍の感受性は、腫瘍又は周囲の腫瘍床に化学治療剤を送達する薬物送達装置の事前投与又は同時投与によって増加され得る。

ローカルドラッグエリュートＲ（ＬＯＤＥＲ：Ｌｏｃａｌ Ｄｒｕｇ ＥｌｕｔｅＲ）：所与の薬物が取り込まれたポリマーから構成される、ミリメートル規模の挿入可能な薬物送達装置（ＤＤＤ）又はインプラント。薬物、例えば、これらに限定されないが、ＲＮＡｉ剤、小分子、ペプチド、又は抗体は、ＬＯＤＥＲ組成物に応じて変わり得る期間にわたって周囲の環境に放出される。例えば、特定の実施形態では、ＬＯＤＥＲは数時間、数日間、数週間、及び数か月間にわたってさえ薬物を放出することができる。ポリマー及び薬物に加えて、ＬＯＤＥＲは、ＬＯＤＥＲ製造及び／又はｉｎ−ｖｉｖｏの内部環境と関連する疎水性及び／又はｐＨを変化（改変）させる薬剤を含有していてもよい。

マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）：典型的には１８〜２４ヌクレオチド長の、短い一本鎖ＲＮＡ分子。ｍｉＲＮＡは、転写された非コードＤＮＡのより長い前駆体分子から細胞で内在性に産生され、翻訳を阻害することができる、又は標的核酸への相補的若しくはほぼ相補的なハイブリダイゼーションにより、標的ｍＲＮＡの切断を導くことができる（Ｂｏｙｄ、Ｌａｂ Ｉｎｖｅｓｔ．、８８：５６９〜５７８ページ、２００８年）。本明細書で用いる場合、「マイクロＲＮＡ配列」は、成熟ｍｉＲＮＡ配列と前駆体配列との両方を含む。本明細書で用いる場合、マイクロＲＮＡ「シード配列」は、標的核酸と完全に相補的である、一般的には約７ヌクレオチド長の短い配列である。

異常増殖、悪性腫瘍、がん、及び腫瘍：新生物は過剰な細胞分裂の結果として生じる組織又は細胞の異常成長である。新生物性成長は腫瘍を産生し得る。個体における腫瘍の量は、腫瘍の数、体積、又は重量として測定することができる「腫瘍負荷」である。転移しない腫瘍は「良性」と称される。周囲の組織に侵入する、及び／又は転移し得る腫瘍は「悪性」と称される。悪性腫瘍は「がん」とも称される。

医薬剤：対象又は細胞に正しく投与された場合に所望の治療又は予防効果を誘導することができる化学化合物又は組成物。インキュベートすることは、薬剤が細胞と相互作用するのに十分な期間、標的を薬剤に暴露することを含む。接触させることは、固体の又は液体形態の薬剤を細胞とインキュベートすること、例えば腫瘍を、懸濁液の又は薬物送達装置に取り込まれた記載されたｓｉＲＮＡと接触させることを含む。

（治療標的を）馴化させる：標的組織、器官、又は細胞を、追加の処置のために準備又は前処理する。これにより、馴化処理は追加の処置の効力を改善する。効力改善は、色々な方法で認識することができ、その方法の非限定的な例は、馴化を行わない処置による改善である標準的な投薬量と同じ又は改善した効果又は効力を達成するために、より少ない処置投薬量を必要とすることを含む。特定の実施形態では、化学治療剤を固形腫瘍（又は周囲の組織床）に提供するＬＯＤＥＲ等の薬物送達装置の投与は、腫瘍を免疫療法処置に関して馴化させることができる。

疾患を防止又は処置すること：疾患を防止することは、疾患の発症を阻止すること、例えば冠動脈疾患を有する人における心筋梗塞の発症を阻止すること、又は新生物を有する対象における腫瘍の進行若しくは転移を阻止することを指す。処置は、疾患又は病的状態が発症し始めた後の、疾患又は病的状態の徴候又は症状を回復する治療的介入を指す。特定の例では、がんの処置は、疾患の進行の阻止及び／又は再発の防止を含み得る。別の例では、処置は、腫瘍を、免疫調節療法等の追加の処置に感作すること、又は追加の処置をしやすい状態にすることを含み得る。

放射線療法（放射療法）：対象又は対象の組織の放射性物質への暴露による、疾患（例えばがん又は別の過剰増殖性疾患若しくは状態）の処置。放射線療法は、悪性細胞を制御するがん処置の一部としての、電離放射線の医学的使用である。放射療法は、治癒的又は補助的ながん処置のために用いられることがある。放射療法は、治癒が不可能であって、目的が局所疾患制御又は症状緩和である場合に、対症的な処置として用いられる。

ＲＮＡ干渉（ＲＮＡサイレンシング；ＲＮＡｉ）：これによって特定の分子、例えば二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）が、相同なｍＲＮＡ（標的ＲＮＡとも称される）の分解を惹起する、遺伝子サイレンシング機構。二本鎖ＲＮＡは、低分子（若しくは短鎖）干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）であり得る、又はｓｉＲＮＡにプロセシングされ、ｓｉＲＮＡは、ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）における相同なｍＲＮＡの切断のガイドとして役立つ。残りの標的ＲＮＡは、次いで、ｓｉＲＮＡとして作用し、したがって、その結果カスケード効果をもたらすことがある。ＲＮＡｉ剤は、ｓｉＲＮＡとして直接役立ち得る、ｓｉＲＮＡにプロセシングされ得る、又はｓｉＲＮＡを産生し得る任意の核酸、例えば転写されて、ｓｉＲＮＡにプロセシングされるＲＮＡを産生するＤＮＡを含む。

センス／アンチセンス鎖：ＲＮＡ転写配列（５’から３’方向へ読み取られる）を含有するｄｓＤＮＡの鎖はセンス鎖であり、「フォワード」鎖としても公知である。細胞のＲＮＡポリメラーゼの鋳型として用いられる反対側の逆相補的な鎖はアンチセンス鎖であり、「リバース」鎖としても公知である。同様に、ｄｓＲＮＡ分子では、「センス」鎖は標的遺伝子コード配列に相当し、アンチセンス鎖はセンス鎖の逆相補鎖である。

低分子干渉ＲＮＡ：無脊椎動物及び脊椎動物種において発現の遺伝子特異的な阻害を誘導することができる、合成の又は天然に産生される低分子二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）。低分子干渉ＲＮＡは、標的遺伝子の発現の干渉又は阻害に好適であり、各鎖に０〜約５ヌクレオチドの長さを有する３’及び／又は５’オーバーハングを含有する約１５〜約４０ヌクレオチドの二本鎖ＲＮＡを含み、二本鎖ＲＮＡの配列は、発現の干渉又は阻害が所望されている標的遺伝子のコード領域の一部分と本質的に同一である。二本鎖ＲＮＡは、相補的なｓｓＲＮＡから、又はヘアピンを形成する一本鎖ＲＮＡから、又はＤＮＡベクターによる発現から形成され得る。

小分子（阻害薬）：１０００ダルトン未満、又は一部の実施形態では約５００ダルトン未満の分子量を典型的には有し、特定の実施形態では、ある測定可能な程度まで、ある標的分子の活性を阻害することができる、分子。

対象：ヒト及び非ヒト哺乳動物の両方を含む区分である脊椎生物を含む、生きている多細胞生物。

疾患又は状態にかかりやすい対象：疾患又は状態を発症し得る、しやすい、又はしやすい状態になっている、対象。疾患又は状態の症状を既に有している又は示している対象は、疾患又は状態を既に発症しているために、「かかりやすい」と考えられると理解される。

標的配列：標的配列は、治療に有効なオリゴヌクレオチドにハイブリダイズすると標的の発現の阻害を結果的にもたらす、ｓｓＤＮＡ、ｄｓＤＮＡ、又はＲＮＡの一部分である。

治療有効量：処置される対象において所望の効果を達成するのに十分な化合物の分量。化合物の有効量は、処置の経過中、単回用量又は複数の用量で、例えば毎日投与されてもよい。しかしながら、有効量は、適用される化合物、処置される対象、苦痛の重症度及び種類、並びに化合物の投与方法に依存すると予想される。

腫瘍床：固形腫瘍を囲む組織。

ＩＩ．いくつかの実施形態の概観
対象の固形腫瘍を免疫療法処置に対して馴化させることに使用するための組成物が、本明細書で提供される。記載された組成物は、固形腫瘍及び／又は周囲の微小環境へ送達されると固形腫瘍を免疫療法処置に対して馴化させる化学治療剤を含む高分子薬物送達装置を含む。

特定の実施形態では、高分子薬物送達装置は、ポリ（グリコリド−ｃｏ−ラクチド）（ＰＬＧＡ）、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ポリグリコール酸（ＰＧＡ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及びポリカプロラクトン（ＰＣＬ）からなる群から選択されるポリマーを含む生体適合性高分子及び／又は生分解性高分子マトリックスを含む。

いくつかの特定の実施形態では、化学治療剤は、核酸、ペプチド、小分子、抗体若しくはその断片、又はそれらの組合せである。例えば、核酸は、一本鎖ＲＮＡ又は二本鎖ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）剤であり得、いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ剤は本明細書でＫＲＡＳ ｓｉＧ１２Ｄとして記載されているｓｉＲＮＡである。

他の特定の実施形態では、高分子薬物送達装置（ＤＤＤ）は、７５〜９０％のＰＬＧＡ（８５：１５）、５〜１５％のマンニトール、及び０．１〜０．５％の重炭酸ナトリウムを含む、ローカルドラッグエリュートＲ（ＬＯＤＥＲ）である。

更なる実施形態では、記載された組成物はまた、免疫療法組成物、例えばＰＤ−１阻害薬、ＰＤ−Ｌ１阻害薬、又はＣＴＬＡ−４阻害薬を含む。特定の例示的な実施形態では、ＰＤ−１阻害薬は、ペムブロリズマブ（キイトルーダ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ））、若しくはニボルマブ（オプジーボ（Ｏｐｄｉｖｏ））、又はそれらのバイオシミラーであり、ＰＤ−Ｌ１阻害薬は、アテゾリズマブ（テセントリク）、アベルマブ（バベンチオ）、若しくはデュルバルマブ（イミフィンジ）、又はそれらのバイオシミラーであり、ＣＴＬＡ−４阻害薬は、イピリムマブ（ヤーボイ（Ｙｅｒｖｏｙ））、又はそのバイオシミラーである。

化学治療剤を含む高分子薬物送達装置、及び免疫療法組成物を含む、固形腫瘍の処置における使用のための組成物もまた本明細書で提供される。

特定の実施形態では、高分子薬物送達装置は、ポリ（グリコリド−ｃｏ−ラクチド）（ＰＬＧＡ）、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ポリグリコール酸（ＰＧＡ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及びポリカプロラクトン（ＰＣＬ）からなる群から選択されるポリマーを含む生体適合性高分子マトリックスを含む。

いくつかの特定の実施形態では、化学治療剤は、核酸、ペプチド、小分子、抗体若しくはその断片、又はそれらの組合せである。例えば、核酸は、一本鎖ＲＮＡ又は二本鎖ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）剤であり得、いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ剤は本明細書でＫＲＡＳ ｓｉＧ１２Ｄとして記載されているｓｉＲＮＡである。

他の特定の実施形態では、高分子薬物送達装置（ＤＤＤ）は、７５〜９０％のＰＬＧＡ（８５：１５）、５〜１５％のマンニトール、及び０．１〜０．５％の重炭酸ナトリウムを含む、ローカルドラッグエリュートＲ（ＬＯＤＥＲ）である。

特定の実施形態では、記載された組成物は、膵臓腫瘍である固形腫瘍を処置することにおける使用のためものである。

更なる実施形態では、記載された組成物はまた、免疫療法組成物、例えばＰＤ−１阻害薬、ＰＤ−Ｌ１阻害薬、又はＣＴＬＡ−４阻害薬を含む。特定の例示的な実施形態では、ＰＤ−１阻害薬は、ペムブロリズマブ（キイトルーダ）、若しくはニボルマブ（オプジーボ）、又はそれらのバイオシミラーであり、ＰＤ−Ｌ１阻害薬は、アテゾリズマブ（テセントリク）、アベルマブ（バベンチオ）、若しくはデュルバルマブ（イミフィンジ）、又はそれらのバイオシミラーであり、ＣＴＬＡ−４阻害薬は、イピリムマブ（ヤーボイ）、又はそのバイオシミラーである。

示された処置のための医薬の調製のための記載された組成物の使用、及びそれを必要とする対象への投与によって示されるような記載された組成物を利用する処置の方法もまた、記載される。

ＩＩＩ．がん免疫療法を高めるための薬物送達装置
生分解性高分子送達装置を含む高分子送達装置を介して固形腫瘍に送達される化学治療剤が、腫瘍、具体的には腫瘍微小環境の物理的変化を誘導し得るという観察が本明細書に記載される。本明細書に記載されるそのような変化は、腫瘍及び／又は腫瘍微小環境を「馴化させる」とも称される。これらの変化は、例えばＳｈｅｍｉら、２０１５年に記載されているような間隙流体圧（ＩＦＰ）及び「空隙容積」（細胞によって占められていない容積）の変化、サイトカイン及びケモカインレベルの変化、並びに新生抗原提示を含む生物学的応答を含むが、これらに限定されない。腫瘍微小環境のそのような変化は、腫瘍及び腫瘍微小環境を特異的及び非特異的免疫系薬剤（例えば、ＣＤ８Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞、サイトカイン等）による浸潤に対して開放することとして本明細書に記載される。これらの観察は、そのような組成物による化学治療剤のそのような送達が、固形腫瘍を免疫療法処置に対して馴化させ得ることを示す。

これらの観察を踏まえて、固形腫瘍を免疫療法処置に対して馴化させることにおける使用のための方法及び組成物が本明細書に記載される。記載された方法では、化学治療剤を含む生分解性薬物送達装置（ＤＤＤ又はＬＯＤＥＲ）は、ＤＤＤの化学治療剤のペイロードが腫瘍又は周囲の区域に放出されるように固形腫瘍又は周囲の腫瘍床に移植される。

ＤＤＤは、一般的には、生分解性高分子マトリックス、及びＲＮＡｉ剤等の少なくとも１つの化学治療剤から構成されており、化学治療剤は、生分解性高分子マトリックスに取り込まれる。

記載されたＤＤＤは、円筒、球、又は移植に好適な（すなわち、対象に移植することができる）任意の他の形であり得る。特定の実施形態では、ＤＤＤは「ミリメートル規模」のものである。すなわち、最短の直径が少なくとも０．３ｍｍの装置である。いくつかの実施形態では、各々の寸法（球又は円筒の場合は直径、並びに円筒、箱様構造、立方体、又は平壁を有する他の形の場合は高さ、及び／又は幅若しくは長さ）は、両端を含めて０．３〜１０ｍｍの間である。他の実施形態では、各寸法は、両端を含めて０．５〜８ｍｍの間である。更に他の実施形態では、各寸法は両端を含めて０．８〜５．２ｍｍの間、両端を含めて１〜４ｍｍの間、両端を含めて１〜３．５ｍｍの間、両端を含めて１〜３ｍｍの間、又は両端を含めて１〜２．５ｍｍの間である。

特定の実施形態では、装置は、０．８ｍｍの直径を有する円筒である。他の好ましい実施形態では、円筒は５．５ｍｍの長さを有する。他の実施形態では、円筒は約０．８ｍｍの直径、及び５．５ｍｍの長さを有する。他の実施形態では、記載された方法及び組成物のＤＤＤは、１８ゲージ針の直径を有する。

他の実施形態では、装置の体積は、０．１ｍｍ^３と１０００ｍｍ^３との間、０．２ｍｍ^３と５００ｍｍ^３との間、０．５ｍｍ^３と３００ｍｍ^３との間、０．８ｍｍ^３と２５０ｍｍ^３との間、１ｍｍ^３と２００ｍｍ^３との間、２ｍｍ^３と１５０ｍｍ^３との間、３ｍｍ^３と１００ｍｍ^３との間、又は５ｍｍ^３と５０ｍｍ^３との間である。

特定の一実施形態では、ＤＤＤは、０．８ｍｍの直径、及び５．５ｍｍの長さを有し、２５％ｗ／ｗのｓｉＲＮＡ、すなわち約６５０μｇのｓｉＲＮＡを含有する。

他の実施形態では、ｗ／ｗとしての薬剤：ポリマーの充填比は、１：１００より大きい。より好ましい実施形態では、充填率は１：２０より大きい。より好ましい実施形態では、充填率は１：９より大きい。更により好ましい実施形態では、充填率は１：３より大きい。

ＤＤＤはポリマーから構成され、ここで、ｓｉＲＮＡ等の化学治療剤の放出機構は、ポリマーのバルク浸食と化学治療剤の拡散との両方を含む；又は、一部の実施形態では、非分解性若しくは遅分解性ポリマーが用いられ、ここで、主な放出機構は拡散であり、ＤＤＤは表面浸食及び／若しくはバルク浸食を含み、一部の実施形態では、ＤＤＤの外側部分は膜として機能し、ＤＤＤの内側部分は薬物容器として機能し、薬物容器は、事実上独立しており、長い期間（例えば約１週間〜約数か月）周囲による影響を受けない。いくつかの賦形剤を有する又は有しない異なるポリマーと異なる放出機構との組合せもまた、任意選択で用いられ得る。表面の濃度勾配は、薬物放出総期間のうちの重大な期間の間、一定であるのが好ましく、したがって、拡散速度は、実際上一定である（「ゼロモード」拡散と称される）。用語「一定」は、治療有効性の下限閾値よりも上に維持されているが、なお任意選択で、初期バーストという特徴を有し得る、並びに／又は変動し得る、例えばある特定の程度で増加及び低下し得る、拡散速度を指す。他の実施形態では、薬物の総量の１０％未満の初期バーストがあり、これは無視できると考えられる。他の実施形態では、薬物の総量の約２０％の初期バーストがある。他の実施形態では、設計により、薬物の総量の３０％以上の強力な初期バーストを可能にする。拡散速度は、長期間、そのように維持されるのが好ましく、治療に有効な期間、例えば有効なサイレンシング期間を最適化するある特定のレベルまで一定であると考えられる。

特定の実施形態では、ＤＤＤは、ＲＮＡｉ剤等の化学治療剤を制御された方法で放出し、これは、ＤＤＤの構成ポリマー、添加剤、及び表面積対体積比を含むが、これらに限定されない要因に応じて変わり得る。例えば、表面積対体積比を低下させると、ＲＮＡｉ剤放出時間の持続時間が増加し得る。

本明細書に記載されるＤＤＤは、特定の薬物放出プロファイルで設計されている。１つの関連するパラメータは、活性薬剤の９５％が放出された時点である。一部の実施形態では、ＤＤＤは、活性薬剤の９５％をｉｎ ｖｉｖｏで、例えばヒト前立腺又は膵臓腫瘍で、両端を含めて３〜２４か月の間、例えば３、４、５、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、又は２４か月の期間、及びその間の任意の持続時間、例えば、両端を含めて、３〜１２、２〜２４、２〜１５、又は３〜１０か月にわたって放出する。別の関連するパラメータは、活性薬剤の９０％が放出された時点であり、この時点は上述の時間枠のいずれでもよい。

別の関連するパラメータは、所与の時点で放出された化学治療剤の百分率である。例えば、ＤＤＤがＲＮＡｉ剤を放出しているような一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤の両端を含めて８０〜９９％が移植後３か月で放出される。他の実施形態では、活性薬剤の８０〜９９％が移植後２、４、６、９、１２、又は２４か月で放出される。或いは又は加えて、一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤の３０〜５０％以下が、移植後の最初の３週間の間にＤＤＤから放出される。いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ剤の５％未満が、移植から開始して１か月の期間にわたってＤＤＤから放出される。他の実施形態では、ＲＮＡｉ剤の１０％未満が、移植から開始して１か月の期間にわたってＤＤＤから放出される。

遅延放出型ＤＤＤは、記載された化学治療剤と共に利用される。「遅延放出型」は、本明細書で用いる場合、最初の２か月以内に薬剤の１０％超を放出しないＤＤＤを指す（ときどき生じる、最大２０％の初期バーストは考慮しない）。他の実施形態では、ＤＤＤは、最初の３か月以内にＤＤＤの薬物充填量の１０％超を放出しない。特定の実施形態では、トレハロースを１％含有するＤＤＤは、遅延放出型を呈する。

他の実施形態では、ＤＤＤは、薬物を含有しない遅分解性ポリマーで（浸漬、噴霧、又は当業者に公知の任意の他の方法によって）コーティングされている。遅分解性ポリマーの多様な実施形態が本明細書に記載されており、そのそれぞれは、遅延放出型ＤＤＤを創製するために利用することができる。一部の実施形態では、コーティングは、直鎖単糖、二糖、環式単糖、環式二糖を含む。他の実施形態では、コーティングは、ラクトース、スクロース、デキストラン、及びヒドロキシエチルデンプンから選択される添加剤を含む。更に他の実施形態では、コーティングはマンニトールを含む。或いは、コーティングはトレハロースを含んでもよい。更に他の実施形態では、コーティングは糖を含まない。

ＤＤＤは、化学治療（例えばＲＮＡｉ）剤が取り込まれた生分解性高分子マトリックスを含有する。特定の実施形態では、マトリックスはポリ（乳酸）（ＰＬＡ）から構成される。他の実施形態では、生分解性マトリックスはポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）から構成される。更に他の実施形態では、生分解性マトリックスは、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）として公知のＰＬＡとＰＧＡとのコポリマーを含む。

様々な比のＰＬＡ：ＰＧＡを有するＰＬＧＡマトリックスが周知であり、市販されている。同様に、ＲＮＡｉ剤を取り込んでいるマトリックスを作製するための方法は当技術分野で周知である。例示的な方法は、米国特許出願公開第２０１１／０１９５１２３号に記載されている。特定の実施形態では、ＰＬＧＡコポリマーのＰＬＡ：ＰＧＡ比は、９５：５と５：９５との間、より詳細には、２５：７５と７５：２５との間である。他の実施形態では、比は、５０：５０と７５：２５との間であり、これは、ＤＤＤにおけるコポリマーの量が、５０〜７５％の間のＰＬＡ、２５〜５０％の間のＰＧＡを含んでいることを意味する。他の実施形態では、ＰＬＡ：ＰＧＡ比は、２５：７５と５０：５０との間、３５：６５と７５：２５との間、４５：５５と７５：２５との間、５５：４５と７５：２５との間、６５：３５と７５：２５との間、７５：２５と３５：６５との間、７５：２５と４５：５５との間、７５：２５と５５：４５との間、又は７５：２５と６５：２５との間である。他の実施形態では、ＰＬＡ：ＰＧＡ比は、両端を含めて８０：２０と９０：１０との間である。他の実施形態では、ＰＬＡ／ＰＧＡ比は、７５：２５より大きく、７５：２５と８５：１５との間、又は７５：２５と９５：５との間である。或いは、比は、２５：７５より小さく、２５：７５と１５：８５との間、又は２５：７５と５：９５との間である。一部の実施形態では、コポリマーは、両端を含めて８０：２０と９０：１０との間、例えば８０：２０、８２：１８、８４：１６、８６：１４、８８：１２、又は９０：１０のＰＬＡ：ＰＧＡ比を有する。他の実施形態では、コポリマーは、７５：２５より大きく、例えば７６：２４、７８：２２、８０：２０、８２：１８、８４：１６、８６：１４、８８：１２、９０：１０、９２：８、９４：６、９６：４、又は９８：２のＰＬＡ：ＰＧＡ比を有する。更に他の実施形態では、コポリマーは、両端を含めて、２５：７５より小さく、例えば２４：７６、２２：７８、２０：８０、１８：８２、１６：８４、又は１４：８６、１２：８８、１０：９０、８：９２、６：９４、４：９６、又は２：９８のＰＬＡ：ＰＧＡ比を有する。

他の実施形態では、生分解性高分子マトリックスはＰＥＧ（ポリ（エチレングリコール））から構成されており、ＰＥＧは、ＤＤＤの大部分であってもよいし、又は本明細書に記載される任意の他のポリマーと組み合わせて用いられてもよい。

記載されたＤＤＤに用いられ得る他のポリマーは、トリブロックＰＬＡ−ＰＣＬ−ＰＬＡ（ここでＰＣＬはポリカプロラクトンを表す）；ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）（ＤＬ−ＰＬＡ）、ポリ（Ｄ，Ｌ−グリコリド）；又はポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド）を含む。規定の放出プロファイルを有する、ＰＬＡ、ＰＧＡ、ＰＥＧ、及び／又はＰＣＬを含有する生分解性薬物送達制御担体の設計は、とりわけＭａｋａｄｉａ及びＳｉｅｇｅｌ、２０１１年に記載されている。

一部の実施形態では、記載されたＤＤＤに用いられるポリマーは、５キロダルトン（ｋＤａ）より大きい分子量（ＭＷ）を有する。他の実施形態では、ＭＷは５０ｋＤａより大きい。他の実施形態では、ＭＷは、７ｋＤａより大きく、１０ｋＤａ、１５ｋＤａ、２０ｋＤａ、３０ｋＤａ、７０ｋＤａ、１００ｋＤａ、１５０ｋＤａ、又は２００ｋＤａより大きい。他の実施形態では、ＭＷは、５〜１００ｋＤａの間、７〜８０ｋＤａの間、１０〜６０ｋＤａ、２０〜５０ｋＤａ、又は２５〜５０ｋＤａの間である。特定の一例では、長い徐放（およそ６か月）は、９０：１０等の高いＰＬＡ：ＰＧＡ比、及び５０ＫＤａよりも高いＭＷ（分子量）を有するＰＬＧＡコポリマーを含有するＤＤＤで達成され得る。同様の効果がＰＬＡの使用によって達成され得る。

他の実施形態では、生分解性マトリックスは、親水性−疎水性相互作用を調節すること、薬物の分散を可能にして凝集を除去すること、薬物を高温又は低温保管条件で保存すること、及びマトリックスからの薬物拡散に影響を及ぼすインプラントの空洞の創製を容易にすることを含む種々の目的のために、１種又は複数種の添加剤を更に含む。

親水性−疎水性相互作用は、疎水性ポリマー内に取り込まれたｓｉＲＮＡ等の親水性活性物質の場合に活性物質の凝集を引き起こし、その結果、作製中、又はその後に装置を対象の身体に移植して、例えば加水分解にさらされるときに凝集をもたらすことがある。そのような相互作用を低減するそのような添加剤の非限定的な例は、開鎖単糖類、例えばマンニトール；トレハロース等の二糖類；ソルビトール；並びにグルコース、フルクトース、ガラクトース等の他の環式単糖類、及びスクロース等の二糖類、又は任意の他の凍結保護剤である。これらの添加剤はまた、一部の実施形態では、水分子が置き換えられたとき生体分子と水素結合を形成することによって機能し、生物学的材料が本来の生理学的構造及び機能を保持することを可能にする。上の添加剤は、キラルである場合、Ｄ−エナンチオマー、Ｌ−エナンチオマー、又はラセミ混合物の形態であり得る。そのような添加剤の更なる非限定的な例は、ラクトース、スクロース、デキストラン、及びヒドロキシエチルデンプンである。

特定の実施形態では、ＤＤＤは、１％と１５％との間、例えば１％、１．５％、２％、２．５％、５％、７．５％、１０％、若しくは１２．５％、及び１５％、又はその間の任意の量のマンニトールを有する。

他の特定の実施形態では、ＤＤＤは、５％未満のトレハロースを有し、例えば異なる実施形態で、０．５％、１％、１．５％、２％、２．５％、３％、３．５％、４％、又は４．５％のトレハロースを有し、トレハロースのＲＮＡｉ剤放出に対する効果は、容易に試験することができる。

他の実施形態では、生分解性マトリックスは、移植後にＲＮＡｉ剤等の薬剤を低ｐＨから保護するための添加剤を含む。ＤＤＤインプラント内部の微小環境は酸性になる傾向がある。ＲＮＡｉ剤を送達する場合、ｐＨは、好ましくは、閾値よりも上に維持されるべきである。例えば、ＰＬＧＡとＲＮＡｉ薬を含むオリゴヌクレオチドとを含むポリマーは、ｐＨ＜３で分解し得る。したがって、ＤＤＤがＲＮＡｉ剤を固形腫瘍又は腫瘍床に提供する場合等のより具体的な実施形態では、そのようなｐＨ調節（すなわちｐＨ変更）添加剤は、重炭酸塩及び炭酸塩、例えば重炭酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、並びに水酸化マグネシウムから選択され得る。特定の例では、重炭酸ナトリウムは、０．０５％〜約５％の間、例えば約１％の濃度で含まれる。他の例では、重炭酸ナトリウム（又は他のｐＨ調節剤）は、１％未満で含まれる、例えば０．９％、０．８％、０．７％、０．６％、０．４％、及び０．２％で含まれるか、又はそれよりさらに少なく含まれる。更に他の例では、重炭酸ナトリウム（又は他のｐＨ調節剤）は、２％、３％、４％、５％、又は１％と５％との間の任意の増分で含まれる。

記載されたＤＤＤは、少なくとも１０μｇのＲＮＡｉ剤、例えばｓｉＲＮＡを含有し得る。他の実施形態では、量は、装置１つあたり１０〜２０００μｇの間のｓｉＲＮＡ、例えば装置１つあたり３００〜１７００μｇの間のｓｉＲＮＡ、装置１つあたり３００〜１１００μｇの間のｓｉＲＮＡ、又は装置１つあたり４００〜９００μｇの間のｓｉＲＮＡである。特定の実施形態では、本明細書に記載されるＲＮＡｉ剤に加えて、又は代替として、他の治療剤が記載されたＤＤＤに取り込まれ、送達され得る。そのような薬剤の非限定的な例は、他のがん関連遺伝子を標的化する追加のＲＮＡｉ剤、小分子化学治療剤、並びに他の生物学的免疫治療剤、例えば、これらに限定されないが、免疫調節性サイトカイン、及びモノクローナル抗体を含む。

複数のＤＤＤが所与の処置で移植され得ることが理解される。バッチ（単回用量）として投与される全てのＤＤＤにおけるＲＮＡｉ剤の量は、少なくとも４μｇ、例えば少なくとも５μｇ、少なくとも６μｇ、少なくとも７μｇ、少なくとも８μｇ、少なくとも１０μｇ、少なくとも１２μｇ、又は少なくとも１５μｇであり得る。更に他の実施形態では、１用量あたりに存在するＲＮＡｉ剤の量は、両端を含めて２〜１０μｇの間、例えば２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０μｇである。

更に他の実施形態では、バッチとして投与される全てのＤＤＤは、両端を含めて０．００８〜０．０６５ｍｇ／ｋｇ／月、例えば０．００８ｍｇ／ｋｇ／月、０．０１ｍｇ／ｋｇ／月、０．０１５ｍｇ／ｋｇ／月、０．０２ｍｇ／ｋｇ／月、０．０３ｍｇ／ｋｇ／月、０．０５ｍｇ／ｋｇ／月、又は０．０６５ｍｇ／ｋｇ／月の用量を送達する。

いくつかの実施形態では、記載されたＤＤＤの薬物百分率は少なくとも２０％である。別の実施形態では、薬物百分率は少なくとも３０％、例えば３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、又は６０％である。別の実施形態では、薬物百分率は両端を含めて８〜３０％の間、例えば８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２２％、２４％、２６％、２８％、又は３０％である。

記載されたように、多様な量のポリマー、ＲＮＡｉ剤、及び任意選択の添加剤を取る多種多様なＤＤＤが企図され得る。そのようなＤＤＤの特定の非限定的な例は、以下のものである。

特定の一実施形態では、ＤＤＤ（ＬＯＤＥＲ）は、６４〜７６％のＰＬＧＡ（ＰＬＡ：ＰＧＡの比は９０：１０）、１６〜２７％のＲＮＡｉ剤、及び５〜１２％のマンニトール含有し、重炭酸ナトリウムを．０５％〜１．５％有する又は有しない。他の特定の実施形態では、ＤＤＤは、８０〜８５％がＰＬＧＡ（ＰＬＡ：ＰＧＡの比は８５：１５）、１０〜１２％がｓｉＲＮＡ、７．５〜１０％がマンニトール、及び０．１〜０．３％が重炭酸ナトリウムであり得る。

更に他の実施形態では、記載されたＤＤＤは、トレハロースを含有し、マンニトールを含有しない。更に他の実施形態では、ＤＤＤは、トレハロースとマンニトールとを両方含む。より具体的な実施形態では、ＤＤＤは、７０〜９１．２％のＰＬＧＡ、８〜３０％のｓｉＲＮＡ、０．６〜１．５％のトレハロース、及び０．１〜０．４％の重炭酸ナトリウムを含有し得る。他の実施形態では、ＤＤＤは、７５〜９１．２％のＰＬＧＡ、８〜２５％のｓｉＲＮＡを、０．６〜１．５％のトレハロース、及び０．１〜０．４％の重炭酸ナトリウムを含有し得る。更に他の実施形態では、ＤＤＤは、８０〜９１．２％のＰＬＧＡ、８〜２０％のｓｉＲＮＡ、０．６〜１．５％のトレハロース、及び０．１〜０．４％の重炭酸ナトリウムを含有し得る。更に他の実施形態では、ＤＤＤは、８５〜９１．２％のＰＬＧＡ、８〜１５％のｓｉＲＮＡ、０．６〜１．５％のトレハロース、及び０．１〜０．４％の重炭酸ナトリウムを含有し得る。更なる実施形態では、ＤＤＤは、８８〜９１．２％のＰＬＧＡ、８〜１２％のｓｉＲＮＡ、０．６〜１．５％のトレハロース、及び０．１〜０．４％の重炭酸ナトリウムを含有し得る。更に他の実施形態では、ＤＤＤは、８９〜９１％のＰＬＧＡ、８〜１０％のｓｉＲＮＡ、０．６〜１．５％のトレハロース、及び０．１〜０．４％の重炭酸ナトリウムを含有し得る。更に他の実施形態では、ＤＤＤは、約９０％のＰＬＧＡ８５：１５、約９％のｓｉＧ１２Ｄ、約１％のトレハロース、及び約０．２％のＮａＨＣＯ_３を含有し得る。上のＤＤＤ製剤のいずれにおいても、ｓｉＲＮＡは、代替的な化学治療剤、例えば代替的な核酸、小分子、又はペプチドベースの薬剤（例えば抗体）に替えられていてもよい。

他の実施形態では、記載されたＤＤＤはコーティングされ得る。コーティングは、放出速度を調節すること、又は長期保管中のタンパク質の粘着性を防止することを含むいくつかの特性のために設計され得る。コーティングは、一部の実施形態では、マトリックスを形成するために用いられるものと同じ材料、例えば、添加剤を有する若しくは有しない、又は添加剤を異なる比で有するが化学治療剤（例えばＲＮＡｉ剤）を有しないＰＬＧＡコポリマーマトリックスを含む。他の実施形態では、コーティングは、ＲＮＡｉ剤を有しないだけで、マトリックスを形成するために用いられるものと同様の（例えば、同じ構築ブロックを異なる比で含有している、又は異なるＭＷを有している以外は同じポリマーを含有している）材料を含む。他の実施形態では、コーティングは、マトリックスを形成するために用いられるものと同じ材料を、ＰＥＧ等の少なくとも１つの他の高分子材料と一緒に含む。他の実施形態では、コーティングは、ＰＬＡを含む。更に他の実施形態では、コーティングは、ＰＬＡ：ＰＧＡが少なくとも８０：２０、例えば８０：２０、８２：１８、８４：１６、８５：１５、８６：１４、８８：１２、９０：１０、９２：８、９４：６、９６：４、９８：２、及び９９：１の比であり、５０ＫＤａより大きく、例えば６０ＫＤａ、７０ＫＤａ、８０ＫＤａ、１００ＫＤａ、１２０ＫＤａ、１５００ＫＤａ、又は２００ＫＤａ）のＭＶを有するＰＬＧＡコポリマーを含む。

特定の実施形態では、記載されたＤＤＤは、ＤＤＤの生分解性高分子マトリックス内に分布する、化学治療剤複合体小粒子も含有する。小粒子は、「マイクロ粒子」及び「ナノ粒子」を含む。マイクロ粒子は、８００ｎｍ〜５μｍの範囲内のサイズを有する粒子（マイクロスフェアとも称される）を含む。ナノ粒子は、４ｎｍ〜８００ｎｍの範囲内のサイズの粒子を含む。（約４ｎｍの下限サイズは、ここで記載されている比較的小さい粒子の典型であり、粒子は、典型的な実施形態では、スフェアではなく、分子複合体、例えばポリマーと複合体形成している、又は追加の分子（複数可）にコンジュゲートしているｓｉＲＮＡ分子等の薬物分子である）。

いくつかの実施形態では、粒子は、本明細書に記載されるような高分子材料を含み、高分子材料は、マトリックスのものと異なっていても同一であってもよい。

「と異なっている」は、マトリックスのものとは異なる構築ブロックから作製されている、又はマトリックスのポリマーと少なくとも１つの構築ブロックを共有しているとしても異なる組成を有するポリマーを指す。例えば、粒子はＰＬＡから構成され得る一方で、ＤＤＤの周囲のマトリックスは、ＰＬＧＡから構成され得る。別の例では、粒子のポリマーとＤＤＤマトリックスとの間の相違は、所与の構築ブロックのラセミ混合物に対向する特定のエナンチオマー（ＤＬ−ＰＬＡに対するＬ−ＰＬＡ）を含有するポリマー、同じ構築ブロックを異なる比で含有する（同じ若しくは異なる分子量（ＭＷ）を有する）、又は同じ構築ブロックを含有するが異なるＭＷを有する（同じ若しくは異なる比を有する）ポリマーを含む。「と同一である」は、同じ構築ブロック、同じ比、及び同じＭＷを有するポリマーを指す。

ＤＤＤマトリックスの構成ポリマーと「同一である」ポリマーから構成される粒子がマトリックスとは異なっている追加の材料を含有していてもよいことが理解されると予想される。特定の実施形態では、粒子のポリマーはマトリックスのポリマーと非同一である。

更に他の実施形態では、小粒子は高分子マトリックスを含まない。例えば、粒子はリポソームであり得る。他の例は、上記と同様にＲＮＡｉ剤と複合体形成しているＤＯＴＡＰ、又はＰＥＩ、又は別のカチオン性分子を含む粒子を含む。

薬剤複合体小粒子を含むＤＤＤの特定の実施形態では、粒子複合体、例えばｓｉＲＮＡ−ＤＯＴＡＰ複合体は、クロロホルムに溶解し、より大きいＰＬＡ粒子に取り込まれる。そのような粒子は、次いで、酢酸エチルに懸濁され、ＰＬＧＡと混合されてマトリックスを形成する。

特定の例では、ＤＤＤマトリックスと小粒子との両方がＲＮＡｉ剤と複合体形成している。他の例では、ＤＤＤマトリックスはＲＮＡｉ剤と複合体形成していないが、懸濁粒子はＲＮＡｉ剤と複合体形成している。ＤＤＤマトリックスと粒子との両方がＲＮＡｉ剤と複合体形成している実施形態では、ＲＮＡｉ剤はマトリックスと粒子とで同じであっても、マトリックスと粒子とで異なっていてもよい。

構成成分、作製方法等を含む、小粒子を含有するＤＤＤの更なる例は、米国特許出願公開第２０１３／０１２２０９６号に見出され、その内容は全体が参照によって本明細書に組み込まれる。

特定の実施形態では、記載された方法及び組成物における使用のためのＲＮＡｉ剤は、短鎖（又は低分子）干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、短鎖ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、又はマイクロＲＮＡである。他の実施形態では、ＲＮＡｉ剤は、細胞内でプロセシングされてｓｉＲＮＡを産出する、より長鎖のポリヌクレオチド分子を含む。特定の例は、ＲＮアーゼクラスＩＩＩのエンドリボヌクレアーゼダイサーによって、２塩基の３’オーバーハングを有する２１〜２３塩基の二重鎖に切断されている、ＤｓｉＲＮＡ；アンロックド核酸塩基類似体（ｕｎｌｏｃｋｅｄ ｎｕｃｌｅｏｂａｓｅ ａｎａｌｏｇ、ＵＮＡ）と称される非ヌクレオチドの非環式単量体で修飾されている二重鎖ｓｉＲＮＡであり、リボースの隣接する２つの炭素原子の間の結合が取り除かれており、ＲＮＡｉ経路を、ダイサー酵素を介して又は直接、ＲＩＳＣに導くよう設計されていてもよい、ＵｓｉＲＮＡ；ＲＸｉ ＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓのｒｘＲＮＡ（登録商標）等の自己送達ＲＮＡ（ｓｄＲＮＡ）、及びＵ１アダプター（Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ＤＮＡ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（ＩＤＴ）Ｉｎｃ）等の、ポリＡ尾部付加というプレｍＲＮＡ成熟工程を阻害する薬剤を含む。

いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ剤は２５〜３０ヌクレオチド（ｎｔ）の間、例えば２５〜２７ｎｔ及び１９〜２５ｎｔの長さである。他の実施形態では、ＲＮＡｉ剤は１９ｎｔ長である。他の実施形態では、センス鎖及び／又はアンチセンス鎖は１〜６ｎｔの３’オーバーハングを更に含む。特定の実施形態では、ＲＮＡｉ剤は、ＲＮＡｉ剤の標的配列と１００％相補的である。他の実施形態では、ＲＮＡｉ剤は、部分的にのみ相補的であり、ＲＮＡｉ剤の標的配列と異なる１、２、３以上のヌクレオチドを有する。他の実施形態では、２塩基の３’オーバーハングが存在する。より具体的な実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖は各々、２ｎｔの３’オーバーハングを更に含む。更なる実施形態では、３’オーバーハングは連続するデオキシチミン（ｄＴ）ヌクレオチドから作られ、そのため、２ｎｔの３’オーバーハングはｄＴｄＴとなる。他の実施形態では、記載された方法及び組成物で用いられるｓｉＲＮＡは、１９＋２オーバーハングという設計、すなわち、１９塩基対ヌクレオチドのセンス及びアンチセンスと、各々の鎖の３’末端の２不対ヌクレオチドとを有する。いくつかの実施形態では、本明細書で例示したように、オーバーハングは各々ｄＴｄＴである。

他の実施形態では、記載されたＲＮＡｉ剤の１つ又は複数のヌクレオチドは、２’−ＯＭｅ又は２’−Ｆによって修飾されている。特定の実施形態では、そのような修飾は、記載されたｓｉＲＮＡの一方又は両方の鎖でなされている。記載された修飾配列は、各々の鎖の３’末端のオーバーハングで、又は他の実施形態では、各々の鎖の３’末端のオーバーハング以外で用いられ得る（ｄｓＲＮＡ ＲＮＡｉ剤の場合）。いくつかの実施形態では、オーバーハングは各々２不対ヌクレオチドからなる。より具体的な実施形態では、本明細書で例示したように、オーバーハングは各々ｄＴｄＴ（２つのデオキシチミジン残基）である。

他の実施形態では、記載されたＲＮＡｉ剤は、上記の修飾とは別々に、又は上記の修飾に加えて化学的に修飾されていてもよい。特定の一実施形態では、修飾は、骨格又は連結修飾である。別の実施形態では、修飾はヌクレオシド塩基修飾である。更なる一実施形態では、修飾は糖修飾である。より具体的な実施形態では、上記のヌクレオチド修飾を含む修飾は、下の表１に見られる修飾から選択される。他の実施形態では、修飾は、ロックド核酸（ＬＮＡ）及び／又はペプチド核酸（ＰＮＡ）骨格から選択される。他の修飾は米国特許出願公開第２０１１／０１９５１２３号に記載されている。

他の実施形態では、記載されたＲＮＡｉ剤は、コレステロール、細胞膜透過性ペプチド、又はアルファ−トコフェロール−ビタミンＥにコンジュゲートし得る。ＲＮＡｉ剤が二本鎖であるいくつかの実施形態では、コレステロールはセンス鎖の３’末端にコンジュゲートし得る。他の実施形態では、コレステロールはセンス鎖の５’末端にコンジュゲートし得る。いくつかの実施形態では、ヘアピン型分子の場合、コレステロールはループにコンジュゲートし得る。コンジュゲート分子のこれらの及び更なる例は、米国特許出願公開第２０１１／０１９５１２３号に記載されている。

いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ剤は、共有結合を介して、又は非共有複合体形成を介して、タンパク質形質導入ドメイン（ＰＴＤ）とも称される細胞膜透過性ペプチド（ＣＰＰ）と会合し、この会合が、細胞の細胞質への分子の積荷の送達を容易にし得る。ＣＰＰの非限定的な例は、ＨＩＶ−１ Ｔａｔ（ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１５５８７１）又は配列ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（配列番号１１）を含むその断片；ｐＡｎｔｐ（ペネトラチン）（ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：４０８３５）；Ｉｓｌ−１（ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：３６７０）；トランスポータン、Ｐｏｏｇａら）、ＭＰＧ（ＧＡＬＦＬＧＦＬＧＡＡＧＳＴＭＧＡ［配列番号１２）；及びＰｅｐ−１（ＫＥＴＷＷＥＴＷＷＴＥＷ；配列番号１３）を含む。ＣＰＰは当業者に公知であり、とりわけＤｅｓｈａｙｅｓらに記載されている。

他の実施形態では、記載されたＲＮＡｉ剤は、ＤＯＴＡＰ（Ｎ−［１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウム）、ＤＯＰＥ（１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジルエタノールアミン）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１，２−ジ−Ｏ−オクタデセニル−３−トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＴＭＡ）、スペルミン、ＰＥＩ（ポリエチレンイミン）、ＰＥＩ−ＰＬＡポリマー、又はＮ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）等のカチオン性分子と複合体形成し得る。

特定の実施形態では、ＲＮＡｉ剤は全身送達のために製剤化されており、他の実施形態では、ＲＮＡｉ剤は処置の区域への局所送達のために製剤化されている。

更に他の実施形態では、記載された方法及び組成物では、代替的な化学治療（本明細書では「抗がん」とも記載されている）剤が、ＲＮＡｉ剤に代えて又は加えて利用される。

より具体的な実施形態では、化学治療剤はピリミジン類似体を含み、ピリミジン類似体の非限定的な例は、５−アザシチジン、５−アザ−２’−デオキシシチジン、５−フルオロ−ウラシル、５−フルオロ−デオキシウリジン（フロクスウリジン）、及び５−フルオロデオキシウリジンモノホスフェートである。より具体的な実施形態では、抗がん剤は、リボヌクレオシド−ジホスフェートレダクターゼ大サブユニット（ＥＣ１．１７．４．１）の阻害薬であり、阻害薬の非限定的な例は、モテキサフィンガドリニウム（ＣＨＥＢＩ：５０１６１）；ヒドロキシウレア；ゲムシタビン（２’，２’−ジフルオロデオキシシチジン）；エラシタラビン（ＣＰ−４０５５；アラ−Ｃ−５’エライジン酸エステル）、及びＣＰ−４１２６、（ＣＯ１．０１；ゲムシタビン−５’エライジン酸エステル；Ａｄｅｍａ ＡＤら、Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ａｎｄ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃ ｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ ａｎａｌｏｇｓ ｅｌａｃｙｔａｒａｂｉｎｅ ａｎｄ ＣＰ−４１２６、Ｉｎｖｅｓｔ Ｎｅｗ Ｄｒｕｇｓ、２０１１年１０月１５日）、並びに、その内容が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１１０６２５０３号に記載されているものである。より一層具体的な実施形態では、抗がん剤はゲムシタビンを含む。代替的な実施形態では、抗がん剤はゲムシタビンである。更に他の実施形態では、抗がん剤はＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害薬である。更に他の実施形態では、抗がん剤はチミジレートシンターゼ阻害薬を含む。より具体的な実施形態では、抗がん剤はロイコボリン（フォリン酸；２−［［４−［（２−アミノ−５−ホルミル−４−オキソ−１，６，７，８−テトラヒドロプテリジン−６−イル）メチルアミノ］ベンゾイル］アミノ］ペンタン二酸）を含む。更に他の実施形態では、抗がん剤はイリノテカンを含む。更に他の実施形態では、抗がん剤はオキサリプラチンを含む。更に他の実施形態では、抗がん剤はフォルフィリン（５−フルオロウラシル、ロイコボリン、及びイリノテカンの組合せ）を含む。更に他の実施形態では、抗がん剤は、フォルフィリノックス（５−フルオロウラシル、ロイコボリン、イリノテカン、及びオキサリプラチンの組合せ）、又はフォルフィリノックスの４種の薬剤のサブセットの任意の組合せである。一実施形態では、ＤＤＤに加えて投与される薬剤は、以下の通りに投与される改変フォルフィリノックスであり得る：オキサリプラチン（８５ｍｇ／ｍ^２）−２時間ＩＶ、すぐに続けてイリノテカン（１８０ｍｇ／ｍ^２）−９０分ＩＶ、ロイコボリン−４００ｍｇ／ｍ^２、続けて２，４００ｍｇ／ｍ^２のフルオロウラシル継続ＩＶ注入（４６時間にわたって）を２週間ごと。更に他の実施形態では、抗がん剤はＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害薬を含む。より具体的な実施形態では、抗がん剤はエルロチニブである。特定の実施形態では、抗がん剤はＤＤＤに加えて投与され、抗がん剤の投与と同時、前、又は後に投与される。

本明細書に記載される方法及び組成物は、がん（例えば固形腫瘍）を免疫療法に関して馴化させるために用いられる。特定の実施形態では、がんは前立腺がんである。他の非限定的な実施形態では、がんは別のがん、例えば、膵臓腫瘍、結腸腫瘍、肺腫瘍、脳がん、肝臓がん、腎臓がん、黒色腫、子宮内膜癌、胃癌、腎癌、胆道癌、子宮がん、及び膀胱癌から選択されるがんである。より具体的な実施形態では、がんは、膵臓がん、膵管腺癌、小細胞肺癌、及び結腸直腸がんから選択される。

特定の実施形態では、遅延放出型ＤＤＤと非遅延放出型ＤＤＤとの混合物が対象に移植される。遅延放出型ＤＤＤと非遅延放出型ＤＤＤとの組合せの提供は、一部の実施形態では、より長い時間経過の重大な化学治療剤（例えばｓｉＲＮＡ）放出を、繰り返される治療介入の必要なしに可能にする。

一部の実施形態では、記載されたＤＤＤは腫瘍内に移植される。他の実施形態では、ＤＤＤは、腫瘍の近傍に移植される。より具体的な実施形態では、十分に明確化された固形腫瘍の場合、いくつかの装置が腫瘍容積内に配置される。更に他の実施形態では、いくつかの装置は針管腔を通って腫瘍内に移植される。更に他の実施形態では、１つ又は複数の装置は、腫瘍の縁に直接接しないように移植される。或いは、不十分に明確化された固形腫瘍の場合、装置は、腫瘍細胞を含有していると考えられる区域に挿入される。

本明細書に示されるように、化学治療剤送達ＤＤＤの使用は、固形腫瘍を免疫療法処置に対して馴化させ得る。したがって、ＤＤＤの移植と同時に、又は後に、免疫療法は対象に提供される。

特定の実施形態では、免疫療法組成物は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、及びＣＴＬＡ４阻害薬等の免疫チェックポイント阻害薬を含む。記載された方法において及び記載された組成物と共に使用するための免疫療法剤の非限定的な例は、ＰＤ−１抗体であるニボルマブ（オプジーボ（登録商標））；ＣＴＬＡ−４抗体であるイピリムマブ（ヤーボイ（登録商標））；ＰＤ−１抗体であるペムブロリズマブ（キイトルーダ（登録商標）、ＭＫ−３４７５）；ＣＳｔｏｎｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓによって開発された抗体：ＣＳ１００１（抗ＰＤ−Ｌ１）、ＣＳ１００２（抗ＣＴＬＡ−４）、及びＣＳ１００３（抗ＰＤ−１）；ＺＫＡＢ００１（抗ＰＤ−Ｌ１、Ｃｈｉｎａ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｆｏｃｕｓ／Ｓｏｒｒｅｎｔｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）；ＳＨＲ−１２１０（抗ＰＤ−１、Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｈｅｎｇｒｕｉ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏ．Ｌｔｄ．）；ＪＳ−００１（抗ＰＤ−１、Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｊｕｎｓｈｉ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）；ＩＢＩ３０８（抗ＰＤ−１、Ｉｎｎｏｖｅｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）；ＫＩＴ、ＣＳＦ１Ｒ、及びＦＬＴ３のチロシンキナーゼ阻害薬であるＰＬＸ３３９７；Ｂ７−Ｈ３を標的化する抗体であるＭＧＡ２７１；活性化したＲＡＳ経路を保有するがん細胞で特異的に複製することができる腫瘍溶解性ウイルスであるレオリシン（Ｒｅｏｌｙｓｉｎ）（登録商標）；デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）：ＰＤ−Ｌ１抗体＋／−ＣＴＬＡ−４抗体であるトレメリムマブ；Ｂ７−Ｈ３×ＣＤ３ ＤＡＲＴタンパク質であるＭＧＤ００９；ＣＤ４０抗体であるＲＯ７００９７８９０；アルゲンパンツセル−Ｌ；ＮＹ−ＥＳＯ−１を発現する進行がんを有する患者のＮＹ−ＥＳＯ−１タンパク質；ＧＶＡＸワクチン＋／−ニボルマブ；樹状細胞ワクチン；ＴＥＲＴワクチン；ＩＬ−１２ワクチン；養子細胞療法、例えば特異的抗原を標的化するように操作されたＴ細胞；モノクローナル抗体療法（上で列挙したものに加えて）；アジュバント免疫療法；並びにサイトカイン療法を含む。

上の及び他の免疫治療剤は、インターネット上のｃａｎｃｅｒｒｅｓｅａｒｃｈ．ｏｒｇ／ｃａｎｃｅｒ−ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ／ｉｍｐａｃｔｉｎｇ−ａｌｌ−ｃａｎｃｅｒｓ／ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ−ｃａｎｃｅｒで列挙されている。更なる免疫治療剤は、例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体であるＭＰＤＬ３２８０Ａ、抗４−１ＢＢ／ＣＤ１３７抗体であるＰＦ−０５０８２５６６、及びウレルマブ（ＢＭＳ−６６３５１３）を含む。他の免疫治療剤は、ＳＩＲＰ−アルファアンタゴニスト：ＯＳＥ−１７２（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ ａｎｄ ＯＳＥ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＣＤ４７アンタゴニスト：Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４−（Ｆｏｒｔｙ Ｓｅｖｅｎ）、ＣＣ−９０００２（Ｃｅｌｇｅｎｅ）、ＴＴＩ−６２１及びＴＴＩ−６２２（Ｔｒｉｌｌｉｕｍ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＳＴＩＮＧ（インターフェロン遺伝子の刺激因子）活性化薬：ＡＤＵ−Ｓ１００／ＭＩＷ８１５（Ａｄｕｒｏ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、及びＭＫ−１４５４（Ｍｅｒｃｋ）を含む。同様に、免疫療法剤はＬｉｕ及びＷｕ、２０１７年に列挙されている。

上記の治療方法は、上記の化学治療剤のいずれかの追加の投与を伴っていても伴っていなくてもよい。例えば、ゲムシタビン単独、ゲムシタビン＋アブラキサン、エルロチニブ、フォルフィリノックス薬の組合せ（フルオロウラシル［５−ＦＵ］、ロイコボリン、イリノテカン、及びオキサリプラチン）又は１つ若しくは少数のこの組合せ。

特定の実施形態では、薬物送達装置は、腫瘍に又は周囲の腫瘍床に直接挿入され、免疫療法剤は全身又は局所投与される。他の実施形態では、免疫療法剤はＤＤＤに含まれ、したがって、腫瘍に又は腫瘍の区域に直接送達される。

他の実施形態では、免疫療法剤は、別々の局所注射によってであれ、全身的な投与方法（ＩＶ、ＩＰ、筋肉内、又は経口方法でさえ）によってであれ、高分子薬物送達装置と別々に患者に投与される。

特定の実施形態では、高分子薬物送達装置は単回投与で腫瘍／腫瘍床に挿入され、それに続いて１、２、３、４、５、６週間、又は１、２、３、４、５、６か月、又は最長３６か月以上の経過にわたる免疫療法剤の多回投与が行われる。

更なる実施形態では、本明細書に記載される処置は、記載された免疫療法剤に加えて又は代わりに全身投与される、伝統的／標準治療の化学治療剤を含み得る。

更に他の実施形態では、記載された方法は、患者に放射線療法を投与するステップを含む。一部の実施形態では、放射線は、ＤＤＤの投与後、例えばＤＤＤの投与の最長１０日後に患者に投与される。或いは、放射線はＤＤＤの投与と同時に患者に投与される。更に他の実施形態では、放射線はＤＤＤの投与前に患者に投与される。更に他の実施形態では、ＤＤＤは、進行中の放射線の投与中に投与される。

以下の実施例は、いくつかの特定の特徴及び／又は実施形態を例証するために提供される。これらの実施例は、本開示を記載された特定の特徴又は実施形態に限定するものと解釈されるべきではない。

実施例１：ｓｉＲＮＡ送達ＬＯＤＥＲは腫瘍壊死及び空隙容積を増加させる
ｓｉＧ１２Ｄ−ＬＯＤＥＲは、変異型ＫＲＡＳに対して標的化されているｓｉＲＮＡを含有するミリメートル規模の高分子薬剤である。ｓｉＧ１２Ｄ−ＬＯＤＥＲは、超音波ガイド下内視鏡法によって腫瘍に挿入（注射ではない）され、ｓｉＲＮＡを少なくとも４か月間継続して放出する。変異型ＫＲＡＳは膵臓がん患者集団の９０％超に著しく影響しているが、今までのところ、ＫＲＡＳは、古典的な小分子手法を用いては「新薬の開発に繋がらない」標的と考えられている。ｓｉＧ１２Ｄ−ＬＯＤＥＲは、前臨床動物モデル、標準的な動物毒性学プロトコル、及び第１／２ａ相臨床研究において研究されている（それぞれ、Ｚｏｒｄｅ−Ｋｈｖａｌｅｖｓｋｙ ２０１３年、及びＳｈｅｍｉ ２０１５年；Ｒａｍｏｔ ２０１６年；Ｇｏｌａｎ ２０１５年）。前臨床モデルにおいて、本発明者らはＫＲＡＳ−Ｇ１２Ｄの特異的なサイレンシングと細胞のアポトーシス及び壊死との相関関係を観察した。これらの効果は数か月間続く。

腫瘍微小環境に対するｓｉＧ１２Ｄ−ＬＯＤＥＲの更なる効果、すなわち腫瘍空隙容積（細胞によって占められていない容積）の変化を、ここに記載する実験で研究した。

腫瘍異種移植片を、１００μＬのＰＢＳにおける１０^６個の対数期増殖生存Ｐａｎｃ０２細胞の、雌Ｃ５７ＢＬ／６マウスへの皮下注射によって樹立した。細胞をマウスの側腹部に注射した。腫瘍が８０ｍｍ^３の平均体積に達したとき、５μｇのｓｉＧ１２Ｄを含有するＬＯＤＥＲ、ｓｉＬｕｃ、又は空のＬＯＤＥＲを、麻酔下で腫瘍に移植した。

ＬＯＤＥＲ（本明細書ではＤＤＤとしても記載されている）は、原薬が埋め込まれた、滑らかで小型で棒状の高分子（ＰＬＧＡマトリックス）管である。マウスへの移植のために用いられたｓｉＧ１２Ｄ−ＬＯＤＥＲは、約２．５〜３ｍｍの長さ及び約０．９ｍｍの直径を有するものであった。本明細書に記載されているように、いくつかのＬＯＤＥＲ製剤は、同様の効果を有することが試験されている。現在及び以下の実施例で提示される実験では、約８０〜８５％のＰＬＧＡ（８５：１５）；示されるように、約１０〜１２％のｓｉＲＮＡ；約５〜１０％のマンニトール、及び約０．１〜１％の重炭酸ナトリウムを含むＬＯＤＥＲを使用した。

以下の配列を本明細書に記載される実験で用いた。以下の配列において、大文字はＲＮＡ塩基を表し、下線が引かれた太字の大文字はＤＮＡ塩基を表す。全てのヌクレオチド間の連結はホスホジエステルである。

処置後、異なる時点でマウスを屠殺し、腫瘍をホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）した。組織学的分析のために、組織を５μｍの切片に切り、切片をヘマトキシリン及びエオジン（Ｈ＆Ｅ）で染色した。Ｈ＆Ｅ染色により、細胞構造及び組織構造の検出が可能となる。

ｓｉＧ１２Ｄ−ＬＯＤＥＲの挿入の約１週間後、本発明者らは、「空隙容積」が場の約０％〜１０％まで増加するという腫瘍微小環境の変化を観察した。（図１Ａ〜１Ｃを参照のこと）。この空隙容積の増加は、局所腫瘍環境の開放を表している（Ｓｈｅｍｉら ２０１５年）。

ｓｉＲＮＡ送達ＬＯＤＥＲの壊死効果は、細胞型特異的な効果でもｓｉＲＮＡ特異的な効果でもない。図１Ｄ（米国特許出願公開第２０１７／０２８３８０３号から引用）に示されているように、アンドロゲン受容体遺伝子を標的化するためのＬＯＤＥＲ送達ｓｉＲＮＡ（ｓｉＡＲ−ＬＯＤＥＲ；配列番号３及び４）、ＢＭＩ１遺伝子を標的化するためのＬＯＤＥＲ送達ｓｉＲＮＡ（ｓｉＢＭＩ１−ＬＯＤＥＲ；配列番号５及び６）、並びにヒートショックタンパク質９０遺伝子を標的化するためのＬＯＤＥＲ送達ｓｉＲＮＡ（ｓｉＨＳＰ９０−ＬＯＤＥＲ；配列番号７及び８）もまた、増加した腫瘍壊死を誘導する。

実施例２：ｓｉＲＮＡトランスフェクション及びｓｉＲＮＡ−ＬＯＤＥＲの非特異的な免疫賦活効果
特異的な遺伝子サイレンシング及び／又は翻訳停止薬（ｕｎｌｏｃｋｅｄ ｎｕｃｌｅｏｂａｓｅ ａｎａｌｏｇ）に加えて、アンチセンス、マイクロＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ及びｓｉＲＮＡを含むオリゴヌクレオチドもまた、非特異的な免疫賦活性を惹起することができる。実際、前臨床研究では、ｓｉＧ１２Ｄトランスフェクション（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）及びｓｉＧ１２Ｄ−ＬＯＤＥＲ（ｉｎ ｖｉｖｏ）は、ＩＦＮα、ＩＦＮβ、及びＴＮＦを含む腫瘍抑制サイトカインのレベルを上げた。

ｓｉＧ１２Ｄの、自然免疫応答を誘導する可能性を研究するために、ＰＡＮＣ−１細胞にｓｉＧ１２Ｄ若しくはｓｉＧ１２Ｄ−８’をトランスフェクトした、又はＰＡＮＣ−１細胞をｓｉＧ１２Ｄ若しくはｓｉＧ１２Ｄ−８’とインキュベートした（配列番号９及び１０の２−Ｏ−ｍｅｔ−修飾ｓｉＲＮＡを比較のために用いた）。ポリ（Ｉ：Ｃ）とのインキュベーションを陽性対照として用いた。ＴＮＦ−α及びＩＦＮ−β誘導を、市販されているＰＣＲプライマーを用いて、リアルタイムＰＣＲによって評価した（図２Ａ〜Ｂ）。

これらの結果は、ｓｉＧ１２ＤをトランスフェクトしたＰＡＮＣ−１細胞、すなわちｓｉＧ１２ＤがＴＮＦ−α及びＩＦＮ−β発現を誘導することを示している。

ｓｉＧ１２Ｄ誘導ＩＦＮ−βが分泌され、下流のシグナル伝達を自己分泌的に誘導しているかどうかを決定するために、ＩＰ１０サイトカインの分泌を、ｓｉＧ１２ＤをトランスフェクトしたＰＡＮＣ−１（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ変異型）及びＢｘＰｃ３（ＫＲＡＳ ｗｔ）細胞に対して、ＥＬＩＳＡアッセイを用いて評価した。ＰＡＮＣ−１細胞は、未処理細胞とｓｉＧ１２Ｄトランスフェクト細胞との間では明確な相違を示し、ｓｉＧ１２ＤトランスフェクトＰＡＮＣ−１細胞の応答は、ポリ（Ｉ：Ｃ）陽性対照の応答と同じ範囲である。ｓｉＧ１２Ｄに応答するＩＰ１０分泌は、非ＫＲＡＳ変異型の膵臓がん細胞株であるＢｘＰｃ３細胞でも観察された。ＰＡＮＣ−１細胞の応答と同様に、ＢｘＰｃ３においても、ｓｉＧ１２Ｄ及びポリ（Ｉ：Ｃ）処理細胞は、ＰＡＮＣ−１細胞で観察された応答と比較して低い程度ではあったが、同様の応答を示した（図２Ｃ）。

ｓｉＧ１２Ｄによるサイトカイン誘導を、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）においても研究した。新鮮ヒトＰＢＭＣを、フィコール勾配遠心分離によって、３名の異なる（匿名の）健康なドナーの軟膜（白血球が豊富で赤血球が乏しい、遠心分離された血液）から調製した。ｓｉＧ１２Ｄを、２つの異なるトランスフェクション反応（Ｄｏｔａｐ及びジーンポーター−２）を用いて、３つの異なる濃度でトランスフェクトした。陽性及び陰性対照を用いた。ヒトＰＢＭＣは、全てのＴＬＲを発現する混合白血球集団（単球、樹状細胞、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、及びＮＫ細胞）を含む。細胞培養上清を、トランスフェクションの２４時間後に多重ＥＬＩＳＡによって、サイトカイン発現に関して分析した。

ｓｉＧ１２Ｄは、用量応答的に複数のレベルのＩＦＮ−α、ＩＬ１−ＲＡ、ＩＬ−８、及びＭＣＰ−１を誘導することが見出され、５０ｎＭの用量ではほとんど無視できる効果が観察された。観察された応答は、全てのレベルで、陽性対照であるｓｉＲＮＡ（２５マー平滑末端）のものよりも弱かった（図３）。

上記のｉｎ ｖｉｔｒｏ実験に加えて、ｉｎ ｖｉｖｏ実験も行い、ｓｉＧ１２Ｄ−ＬＯＤＥＲによる自然免疫系誘導の可能性を評価した。腫瘍異種移植片を、対数期増殖中の１０^６個の生存Ｐａｎｃ０２細胞（１５０μＬのＰＢＳ中）の、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの側腹部への皮下注射によって樹立した。腫瘍が８０ｍｍ^３の平均体積と測定されたとき、マウスを体積に応じて等しい群に分けた。ｓｉＧ１２Ｄ−ＬＯＤＥＲ又は空のＬＯＤＥＲを麻酔下で腫瘍に移植した（１ＬＯＤＥＲ／腫瘍）。マウスへの移植のために用いられたＬＯＤＥＲは、実施例１において上記したものと同じ種類のものであった。腫瘍成長に続いてノギス測定を行った。ｓｉＧ１２Ｄ−ＬＯＤＥＲでの処理後の腫瘍組織におけるＩＦＮβ誘導のパターンを探索するために、本発明者らは周囲の腫瘍組織におけるＩＦＮ−βの相対的なレベルを、ＬＯＤＥＲ境界からの半径距離の関数として検出した。腫瘍をホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）し、切片を作製し、組織をＲＮＡ精製のためにスライドからこすり取った。遺伝子発現をＲＴ−ＰＣＲによって定量した。腫瘍組織切片は、ＬＯＤＥＲから１、２、３、４、及び５ｍｍの半径距離で、１ｍｍ幅の同心円において放射状にこすり取られた。結果は、５μｇという低ｓｉＧ１２Ｄ用量では、ｓｉＧ１２Ｄ−ＬＯＤＥＲは腫瘍の境界において主にＩＦＮ−βを誘導することを明らかにし、これは、組織においてマクロファージが免疫誘導に関わっていることを示唆している。１５μｇ ｓｉＧ１２Ｄ／ＬＯＤＥＲという高用量で処理した腫瘍では、ＩＦＮ−βの誘導は腫瘍全体にわたって観察された（図４）。

実施例３：ｉｎ ｖｉｖｏにおける腫瘍へのＴ細胞浸潤に対するｓｉＧ１２Ｄ−ＬＯＤＥＲの効果
実施例１は、ｓｉＧ１２Ｄ−ＬＯＤＥＲが腫瘍壊死及び空隙容積をどのように増加させるかを記載している。本実施例は、ｓｉＧ１２Ｄ−ＬＯＤＥＲのこの効果はまた、同系同所性膵臓がんモデルにおいて腫瘍内へのＴ細胞の浸潤及び分布を高めることを実証する。したがって、本実施例は、ｓｉＲＮＡ送達ＬＯＤＥＲは固形腫瘍の免疫療法を改良できる（すなわち、固形腫瘍の免疫療法の効力を高めることができる）ことを示す。

Ｐｄｘ１−Ｃｒｅ、ＬＳＬ−ＫＲＡＳ^{（Ｇ１２Ｄ）／＋}、Ｐ５３^−／−トランスジェニックマウス由来の膵臓腫瘍同種移植片を、同所移植前にＣ５７ＢＬ／６マウスの皮下に維持した。種腫瘍の体積が７００〜１０００ｍｍ^３に達したとき、腫瘍を回収して直径約４ｍｍの小片に切り分けた。ｓｉＧ１２Ｄ−ＬＯＤＥＲを処理群の各腫瘍小片に挿入した。移植されたｓｉＧ１２Ｄ−ＬＯＤＥＲは、約０．８ｍｍの直径を有していた以外は実施例１において上記したＬＯＤＥＲと同様の特性であった。未処理群に関しては、腫瘍小片を偽操作した。ＬＯＤＥＲを有する又は有しない腫瘍小片をＣ５７ＢＬ／６マウスの膵臓に縫い付けた。腫瘍接種の２週間後にマウスを屠殺し、組織学的分析のために腫瘍を取り出した。図５Ａ〜５Ｃは、処理試料と未処理試料との間の、ＣＤ４染色（ＣＤ４^＋Ｔ細胞を同定する）に関する比較を示している。ＣＤ４染色に陽性の細胞を、ｓｉＧ１２Ｄ−ＬＯＤＥＲ処理腫瘍のＬＯＤＥＲ端部からの様々な距離で計数した。未処理腫瘍では、ＣＤ４陽性細胞を腫瘍中心からの様々な距離で計数した。計数は、ＬＯＤＥＲ端部／腫瘍中心の周りの０．５ｍｍ幅の同心円内の陽性染色細胞を計数することによって行われた。各同心円内の全ての細胞を計数し、陽性染色細胞濃度を算出した。処理試料及び未処理試料の陽性染色細胞を図５Ａ及び５Ｂにそれぞれ示す。図５Ｃに提示されている定量比較された結果は、ｓｉＧ１２Ｄ−ＬＯＤＥＲ処理後の腫瘍の中央でＣＤ４^＋Ｔ細胞のより高い濃度を示している。

実施例４：ｉｎ ｖｉｖｏにおける腫瘍へのＴ細胞浸潤に対するｓｉＧ１２Ｄ−ＬＯＤＥＲの効果
本実施例は、同系皮下腫瘍モデルにおける、腫瘍内へのＴ細胞の浸潤及び分布に対するｓｉＧ１２Ｄ−ＬＯＤＥＲの効果を実証する。

実験は、固形腫瘍への免疫細胞浸潤（Ｔ細胞、マクロファージ、及びナチュラルキラー細胞）に対するｓｉＧ１２Ｄ−ＬＯＤＥＲの効果、並びに他の免疫関係の効果を試験する。ＣＴ２６マウス結腸癌細胞株は、薬物開発に通常用いられており、いくつかの承認された免疫腫瘍学薬物（イピリムマブ（ヤーボイ）、ニボルマブ（オプジーボ）、アテゾリズマブ（テセントリク））の開発においても用いられた。

ＣＴ２６細胞はＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ変異型であり、ｓｉＧ１２Ｄ処理による影響を受ける（細胞生存率の低減）ことがＳｉｌｅｎｓｅｅｄによって以前にｉｎ ｖｉｔｒｏで示された。したがって、ＣＴ２６細胞株は、固形腫瘍における免疫細胞浸潤に対するｓｉＧ１２Ｄ−ＬＯＤＥＲ処理の効果を試験するための良好なモデルとして役立ち得る。

ＣＴ２６細胞をＢａｌｂ／ｃマウスの右側腹部に皮下注射する。腫瘍が約８０ｍｍ^３の最小サイズ（約５．５〜６ｍｍの直径、ノギスによって測定）に達するとき、マウスを以下の処理のために同様の平均腫瘍サイズの群に分ける：（１）未処理（６匹）、（２）空のＬＯＤＥＲ（６匹）、及び（３）ｓｉＧ１２Ｄ−ＬＯＤＥＲ（１２μｇ）（６匹）。用いられるＬＯＤＥＲは約０．８ｍｍの直径を有する、上記と同じ特性のものである。

ＬＯＤＥＲ移植の１週間後に、マウスを屠殺し、以下の分析のために腫瘍を取り出す：腫瘍サイズ、及び組織学。組織学的分析のために腫瘍を半分に切り分ける。ＬＯＤＥＲ移植腫瘍を、切断面がＬＯＤＥＲを通るように切る。組織構造及び細胞構造を標準的なＨ＆Ｅ染色によって観察する。免疫組織化学染色を、ＫＲＡＳ／ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＦｏｘＰ３、Ｆ４／８０、ＣＤ３３５、及びＩＦＮｇの検出のために用いる。

これまでの実施例と同様、ｓｉＧ１２Ｄ−ＬＯＤＥＲ処理腫瘍由来の試料は、未処理腫瘍よりも多い量の免疫細胞浸潤を示すことが予想される。

実施例５：ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるＴ細胞及びＮＫ細胞の浸潤に対するｓｉＧ１２Ｄの効果
本実施例は、マルチチャンバー細胞遊走モデルにおいて、腫瘍培養へのＴ細胞及びＮＫ細胞の遊走に対するｓｉＧ１２Ｄの影響を実証する。

ＰＡＮＣ−１細胞を８０％の集密状態まで播種し、翌日、リポフェクタミン２０００を用いて、ＰＡＮＣ−１細胞にｓｉＧ１２Ｄ、ポリ（Ｉ：Ｃ）をトランスフェクトする、及び疑似トランスフェクトする。

トランスフェクションの１日後、細胞を分離し、計数し、８μｍの孔径を有するトランスウェルプレートの下部チャンバーに播種し、集密まで増殖させる。各プレートの上部チャンバーにＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞、又はＣＤ８^＋Ｔ細胞、又はＮＫ細胞のいずれかを充填する（２×１０^５個のＪｕｒｋａｔ細胞を６ウェルトランスウェルプレートに充填した（Ｄｅｌ Ｇａｌｄｏ及びＪｉｍｅｎｅｚ ２００７年））。

トランスウェルプレートを、次いで、３時間〜６時間インキュベートし、下部チャンバーを各時点で撮影する（２００倍の倍率で６つの無作為な視野）。

下部チャンバーに遊走した、Ｊｕｒｋａｔ及び／若しくはＣＤ８^＋Ｔ細胞、並びに／又はＮＫ細胞を比色アッセイによって計数又は評価する。各実験は３連で行う。

実施例６：免疫療法＋／−ｓｉＧ１２Ｄ−ＬＯＤＥＲの臨床研究
本実施例は、免疫療法をｓｉＧ１２Ｄ−ＬＯＤＥＲの超音波ガイド下内視鏡投与と組み合わせることの効果を示す。

本研究では、膵臓がん患者に、免疫治療剤（例えばニボルマブ、イピリムマブ、又はペムブロリズマブ）を、追加の化学療法剤（フォルフィリノックス、ゲムシタビン＋／−ナブパクリタキセル）と共に又は伴わずに与える。患者を２年間追跡して、腫瘍の全奏効率（ＯＲＲ）を、主要エンドポイントとして、並びに無憎悪生存期間（ＰＦＳ）に関して、及び全生存期間に関して、測定する。

各々の薬物種の投与計画に関しては多くの可能な実施形態がある。例えば、薬物をアジュバントとして又はネオアジュバントとして与えることができる。一実施形態では、最初（例えばスクリーニング後）にｓｉＧ１２Ｄ−ＬＯＤＥＲを与え、次いで１〜２週間後にＩＯ剤を化学療法と共に／伴わずに投与する。

別の実施形態では、患者はＩＯ若しくは化学療法又は併用の全身処置を既に受けており、ｓｉＧ１２Ｄ−ＬＯＤＥＲが更に与えられる。

患者のステージ分類は特定のステージに限定されない。例えば、局所進行膵臓がん（ＬＡＰＣ、ステージＩＩＩ）が標的集団であってもよい。しかしながら、別の実施形態では、ステージＩＶ（転移性）が含まれてもよい。別の実施形態では、Ｉ〜ＩＶの全てのステージが組入れ基準に含まれてもよい。

ヒトにおける臨床使用のためのｓｉＧ１２Ｄ−ＬＯＤＥＲは、５．５±１．０ｍｍ長で０．８０±０．０４ｍｍの直径を有する、上記と同じＰＬＧＡマトリックスのもので、ｓｉＧ１２Ｄは高分子マトリックスに埋め込まれている。

患者の年齢及び性別は限定されない。一実施形態では、１８歳〜７６歳の年齢範囲が組入れ基準を満たす。

各々の薬物の用量は限定されない。一実施形態では、患者は３か月ごとに６ＬＯＤＥＲの投与を受ける（投与１回あたり、約２０００μｇのｓｉＧ１２Ｄ）。

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本開示の発明の原理が適用され得る多くの可能な実施形態を踏まえて、例証された実施形態は、本発明の好ましい例に過ぎず、本発明の範囲を限定するものとして考えられるべきではないことが認識されるべきである。むしろ、本発明の範囲は以下の特許請求の範囲によって定義される。したがって、本発明者らは、本発明者らの発明として、この特許請求の範囲の範囲及び趣旨内にある全てを特許請求する。

〔関連出願の相互参照〕
２０１７年５月２４日に提出された米国特許仮出願第６２／５１０，２８１号に対する利益が主張され、その内容は、全体が参照によって本明細書に組み込まれる。

Claims (18)

1. 対象の固形腫瘍を免疫療法処置に対して馴化させることに使用するための組成物であって、
   化学治療剤を含む高分子薬物送達装置
   を含み、
   化学治療剤の対象への送達が、固形腫瘍を免疫療法処置に対して馴化させる、組成物。
2. 高分子薬物送達装置が、凍結保護剤を含む添加剤含有又は非含有の、ポリ（グリコリド−ｃｏ−ラクチド）（ＰＬＧＡ）、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ポリグリコール酸（ＰＧＡ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及びポリカプロラクトン（ＰＣＬ）からなる群から選択されるポリマーを含む生体適合性高分子マトリックスを含む、請求項１に記載の組成物。
3. 化学治療剤が、核酸、ペプチド、小分子、抗体若しくはその断片、又はそれらの組合せである、請求項１又は２に記載の組成物。
4. 核酸が、一本鎖ＲＮＡ又は二本鎖ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）剤を含む、請求項３に記載の組成物。
5. ＲＮＡｉ剤が、ＫＲＡＳ ｓｉＧ１２Ｄである、請求項４に記載の組成物。
6. 高分子薬物送達装置が、７５〜９０％のＰＬＧＡ（８５：１５）、５〜１５％のマンニトール、及び０．１〜０．５％の重炭酸ナトリウムを含むＬＯＤＥＲである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
7. 免疫療法組成物を更に含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
8. 免疫療法組成物が、ＰＤ−１阻害薬、ＰＤ−Ｌ１阻害薬、及びＣＴＬＡ−４阻害薬からなる群から選択される、請求項７に記載の組成物。
9. ＰＤ−１阻害薬が、ペムブロリズマブ（キイトルーダ）、若しくはニボルマブ（オプジーボ）、又はそれらのバイオシミラーであり、ＰＤ−Ｌ１阻害薬が、アテゾリズマブ（テセントリク）、アベルマブ（バベンチオ）、若しくはデュルバルマブ（イミフィンジ）、又はそれらのバイオシミラーであり、ＣＴＬＡ−４阻害薬が、イピリムマブ（ヤーボイ）、又はそのバイオシミラーである、請求項８に記載の組成物。
10. 化学治療剤を含む高分子薬物送達装置、及び
    免疫療法組成物
    を含む、固形腫瘍の処置のための組成物。
11. 高分子薬物送達装置が、凍結保護剤を含む添加剤含有又は非含有の、ポリ（グリコリド−ｃｏ−ラクチド）（ＰＬＧＡ）、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ポリグリコール酸（ＰＧＡ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及びポリカプロラクトン（ＰＣＬ））からなる群から選択されるポリマーを含む生体適合性高分子マトリックスを含む、請求項１０に記載の組成物。
12. 化学治療剤が、核酸、ペプチド、小分子、抗体若しくはその断片、又はそれらの組合せである、請求項１０又は１１に記載の組成物。
13. 核酸が、一本鎖ＲＮＡ又は二本鎖ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）剤を含む、請求項１２に記載の組成物。
14. ＲＮＡｉ剤が、ＫＲＡＳ ｓｉＧ１２Ｄである、請求項１３に記載の組成物。
15. 高分子薬物送達装置が、７５〜９０％のＰＬＧＡ（８５：１５）、５〜１５％のマンニトール、及び０．１〜０．５％の重炭酸ナトリウムを含むＬＯＤＥＲである、請求項１０〜１４のいずれか一項に記載の組成物。
16. 固形腫瘍が膵臓腫瘍である、請求項１１〜１５のいずれか一項に記載の組成物。
17. 免疫療法組成物が、ＰＤ−１阻害薬、ＰＤ−Ｌ１阻害薬、及びＣＴＬＡ−４阻害薬のうちの少なくとも１つである、請求項１１〜１６のいずれか一項に記載の組成物。
18. ＰＤ−１阻害薬が、ペムブロリズマブ（キイトルーダ）、若しくはニボルマブ（オプジーボ）、又はそれらのバイオシミラーであり、ＰＤ−Ｌ１阻害薬が、アテゾリズマブ（テセントリク）、アベルマブ（バベンチオ）、若しくはデュルバルマブ（イミフィンジ）、又はそれらのバイオシミラーであり、ＣＴＬＡ−４阻害薬が、イピリムマブ（ヤーボイ）、又はそのバイオシミラーである、請求項１７に記載の組成物。

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