TW200948753A - Method of preparation of combretastatin - Google Patents

Description

200948753 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於一種製備康布列塔司他ί丁（combretastatin)(A) 之驗形式或酸加成鹽形式的方法。

Η (A) 【先前技術】 US 6 759 555闡述一種製備以下結構式的康布列塔司他 汀之方法：

其中，X代表-NH2或以下兩基團中之一個：

PG表示保護胺官能團的基團。

Bioorg. Med. Chem. 2000, 8, 2417-2425與 US 2003/0220404 亦闡述製備康布列塔司他汀之方法。 J. Pept. Res. 1999, 54(1)，54-65中比較用於形成肽鍵之 酸活化劑，且總結出以TDBTU為最佳。

Bioorg. Med. Chem. 2006, 14, 3231-3244 闡述利用 DCC、 H0Bt-H20(步驟e，化合物10)作為酸活化劑，藉由偶合法 製備結構式（A)康布列塔司他汀。 138425.doc 200948753

Chem. Commun. 1999，1847-1848闡述用於製備醯胺鍵的 T3P，但T3P比HAPyU更容易產生差向異構物及導致較差 收率（見表3)。 此等文獻中既未描述又未建議請求項1之内容之方法。 同樣，既未描述利用苯甲醇與乙腈富集胺基化合物鹽，亦 未闡述利用T3P的偶合法。 康布列塔司他汀或芪衍生物顯示強細胞毒活性及因此可 作爲抗癌劑。但是，（Z)異構物顯示最強之細胞毒活性。 此等化合物尤其在US 5 73 1 353、US 5 561 122或US 6 759 555中已闡述。本申請人已改善製備康布列塔司他汀（A)之 方法。 【發明内容】 本發明係關於一種製備康布列塔司他汀（A)之鹼形式或 酸加成鹽形式之方法：

其包括在鹼與結構式（ΙΠ)Τ3Ρ存在下：

(III)

或（Z)-胺基化合物 偶合（Z)-胺基化合物Mee 138425.doc 200948753

鹽Me0-\ 《\尸叫+ Β· (B_表示抗衡陰離子）與結構式

MeO 'OMe OMe (II)的雙重保護的L-絲胺酸衍生物（其中PG表示

PG 保護胺官能團的基團），以獲得結構式（z)-(lb)化合物：

然後在酸存在下，脫除保護基及打開（z)-(lb)環，以獲得 鹽（-Nil/)形式的康布列塔司他汀（A)，及視需要添加鹼， 獲得鹼（-NH2)形式的康布列塔司他汀（A)， 富集（Z)異構物形式之如下結構式的胺基化合物之鹽，獲 得（Z)-胺基化合物之鹽：

@_表示抗衡陰離子），此富集法包括： •將苯曱醇加入（Z)-與（E)-胺基化合物之鹽混合物的乙 腈懸浮液中，然後 •機械分離富集（Z)異構物的胺基化合物之鹽。 本發明亦關於（Z)異構物形式之如下結構式的胺基化合 物之鹽之富集法： 138425.doc 200948753

表示抗衡陰離子，其包括： •將苯曱醇加入含（Ζ)_與（Ε)_胺基化合物之鹽混合物的 乙腈懸浮液中，然後 •機械分離富集（Ζ)異構物的胺基化合物之鹽。 本發明亦關於結構式（ΠΙ)Τ3Ρ之用途，其係用於在鹼存 在下’偶合（Ζ)-胺基化合物或（ζ)_胺基化合物鹽與雙重保 護的L-絲胺酸衍生物。

乙腈/(Ζ)-與（Ε)-胺基化合物之鹽之比例（以重量比表示） 係在5至17之間，較佳在10至12之間。富集法之溫度較佳 係在20至70°C之間。苯甲醇/(Ζ)_與（Ε)_胺基化合物鹽比例 (以重莖比表示）係在1至4之間，較佳在2至3之間。 【實施方式】 以下反應圖1描述一種製備康布列塔司他汀（Α)之方法的 反應步驟⑴至（iv): 138425.doc 200948753

反應圖1 步称（1)·在驗存在下，由硝基曱氧基苯甲醛與三甲氧基 苯甲基鱗溴化物或氯化物之間發生Wittig反 應’產生硝基化合物之鹽，其係呈2_曱氧基_5_ [2-(3，4,5-三曱氧基苯基）乙烯基]硝基苯的兩種 (Z)與（E)異構物混合物（(z)_與（E)_硝基）之形 式； 步称（η) ·還原該混合物’使（z)_與（E)_胺基化合物之混合 物轉化為鹽（B_代表抗衡陰離子，例如或 S〇4^) ’隨後進行分離（Z)-胺基化合物之步驟； 步琢（in):偶合（Z)·胺基化合物與在_〇h及胺官能團上雙 重保護的L-絲胺酸衍生物（結構式（η)化合物）， 產生化合物（Z)-(Ib)。 138425.doc 200948753

P G表示保§蔓胺官能團的基團：其可為例如第一 丁氧基羰基（BOC)、苯曱基氧羰基（(；^2)或9_场 基甲氧基羰基（FMOC); 步驟（iv)與（v):脫除保護基及打開該環，產生鹽或非睡形 式的康布列塔司他汀（A)。 US 5 73 1 353 與 Bioorg. Med. Chem. 2000，8，2417. 2425(反應圖1)中亦描述步驟（i)。該反應在鹼（強鹼較佳， 例如MeONa或NaH)存在下，於有機溶劑中進行，例如芳 香族溶劑（例如甲苯）。（Z)/(E)比約為75/25。 US 6 759 555中所述的還原步驟（ii)在過量鐵（相對於 (la)，超過2當量）存在下進行。如us 5 525 632(實例2，步 驟2)中所述，亦可能在鋅存在下還原，但反應不完全（收率= 49.3%)且另形成大量「偶氮」副產物。隨後藉由一次或多 次複雜分離，獲得足夠純度的〇胺基化合物。還原後的 分離法係進行連續結晶。第一次結晶可移除（E)_胺基化合 物’然後第二次結晶可分離（Z)_胺基化合物（見US 6 759 555，實例 1)。 步驟（iii)之偶合最佳係在酸性活化劑存在下進行，該酸 性活化劑為例如EDCI(l-(3-三甲基胺基丙基）_3_乙基碳化 一亞胺氣）、DCC(二環己基碳化二亞胺）、τ〇τυ(〇_[乙氧 基羰基]氰基亞甲基胺基）-Ν，Ν，Ν'，Ν'-四甲基脲鏽四氟硼酸 酯）、HBTU(0-苯并三唑-卜基·Ν，Ν，Ν，，Ν，_四甲基脲鏽六氟 138425.doc •10· 200948753 成酸醋）、pivCl(特戍酿氯）或Ν，Ν-纟厌基一* °米°坐。術語「酸 性活化劑」（「偶合劑」）用於表示一種化合物，其功能為 活化酸性官能團_COOH以促進肽鍵形成。酸性活化劑的更 多細節，參考Aldrich Chemical公司出版的ChemFiles第7 卷，第2號’第3頁之評論或Tetrahedron report 672號， 2004，60，2447-2467，「有機合成中肽偶合試劑的近期發展 (Recent development of peptide coupling reagents in organic synthesis)」。Tetrahedron 2005, 61，10827-10852之 Φ

評論揭示可利用多種酸性活化劑。 步驟（iv)係在酸存在下進行，以促進開環及獲得鹽 (-NH3+)形式的康布列塔司他汀（A)。其包括脫除保護基/開 環。宜在BOC存在下使用鹽酸’例如呈甲醇溶液之形式， 而獲得鹽酸鹽。利用鹼（例如氫氧化鈉）中和鹽而獲得鹼形 式的康布列塔司他汀（A)(比較實例1_步驟（1丨丨)）。 根據本發明之方法 本發明之方法重複反應圖！的相同步驟，但改良步驟（u) 與（ill)。實際上，在本發明中，藉由包含以下的方法獲得 胺基化合物之鹽的（Z)異構物，該方法包括： 將苯甲醇加入含（z)_與⑹-胺基化合物之鹽混合物的 乙腈懸浮液中，及 •機械分離富集（Z)異構物的胺基化合物之鹽。 上=?z)異構物係藉由「富集」獲得，該術語意指在 物二加結束時，（z)異構物比例相對於⑻異構 離：異構1論及—種從⑻與⑻異構物混合物—分 ()異構物之方法。與(再)結晶相比，富集 138425.doc 200948753 簡便執行之益處。可獲得具有低含量（E)異構物殘質（其至 多<1莫耳％ ;參照實例1，其中產物（Z)純度為99 93%且（E) 為0.07%)的富集（Z)異構物的胺基化合物。機械分離法可 為例如：過濾或離心。在機械分離後，（Z)異構物之鹽可 視需要洗淨與乾燥。 懸浮液中乙腈/(Z)-與（E)-胺基化合物之鹽之較佳重量比 在5至17之間，較佳在1〇至12之間（即，懸浮液中乙腈重量 為（Z)-與（E)-胺基化合物重量之5至17倍之間）。 添加的苯曱醇量較佳是使苯甲酵/〇與（幻、胺基化合物 ❿ 之鹽比例（重量比表示）在1至4之間，較佳在2至3之間（即， 添加的本曱醇重直為（Z)-與（E)-胺基化合物重量之1至4倍 之間）。該比例可使最終產物保留高（Z)/(E)比。苯曱醇的 功能為優先溶解（E)-胺基化合物之鹽。 备集法較佳係在20至70。〇之間的溫度下進行，更佳在3〇 至7〇。(：之間，最佳在35至65。〇之間。7〇t以上時，胺基化 合物開始緩慢分解。

以下闊述製備懸浮液的較佳方法。利用連二亞硫酸鈉 G (NhS2^)於溶劑中還原（z)_與（E)_硝基化合物，該溶劑可 為水與醇的混合物’例如水/甲醇混合物。還原後，引入 強酸(例如’而或聊4)於反應媒質中，該酸與反應中間_ 體=應’亦與連二亞硫酸鹽及二亞硫酸鹽殘質反應 '㈣ - 獲>(Z)與（E)-胺基化合物之鹽（例如，鹽酸鹽或硫酸鹽）的 混合物。然後，添加強鹼，獲得游離鹼（-NH3+—-NH2)，再 以有機溶劑（例如氣化溶劑，如二氣曱烷（dcm))萃取。將 138425.doc 12 200948753 含強酸的醇溶液加人有機相中，然後改以乙腈置換該醇， 獲付（Z)-與（E)-胺基化合物之鹽的乙腈懸浮液。強酸可為 hci^h2so4 (b-=ci^so4-)〇 醇後，添加乙腈來置換溶劑。乙腈之添加亦可與真空下去 除醇同時進行。醇較佳為低碳數醇，例如甲醇或乙醇。

就步驟（iii)，利用丙烷膦酸酐（T3P)作爲酸性活化劑，在 鹼存在下，於有機溶劑中進行（ζ)_胺基化合物之鹽與雙重 保護的結構式（II)L-絲胺酸衍生物之間的偶合。鹼的功能 為捕捉酸物質’及轉化鹽為游離驗。添加的驗量在相對於 (Z):胺基化合物之鹽的2至3當量之間（見實，其中使用 7田置）。亦可在T3P與鹼存在下，直接偶合〇胺基化合 物與結構式（Π)化合物；在此情況下 添加的驗比例較 J在1至2虽量之間（比使用鹽為起始物時減少約1當量）。 鹼可為第三⑮，例如三乙胺（ΤΕΑ)、三異丙基乙胺 (DIEA)、Ν_甲基料_Μ)或甲基Μ。有機溶劑可為二 氣甲烷（DCM)、甲苯、甲基異丁基_(μιβκ)、6酸乙酿、 乙腈、四氫呋喃（THF)、Me_w氫呋。南（Me_T明或環戍基 甲醚。 T3P具有以下結構式： %八ρ々。 n-Pr^ I j 〜n-Pr

°\ /〇 利用T3P而非其它酸性活化劑的益處在於τ3ρ的副產物容 易去除（所有副產物均可溶於水），且其為—種廉價的活化 138425.doc •13- 200948753 劑。另，反應可在（z)-胺基化合物（呈鹽或鹼形式）與化合 物（π)存在下進行，根據「一鍋」法一起進行 因此在同 一容器中，在T3P與鹼存在下，由（z)_胺基化合物（呈鹽或 鹼形式）與化合物（II)反應。並非所有偶合試劑為這種情 況，因為對於同一反應，有時候，如：Pivcl(特戊醯 乳））’在可以添加（Z)-胺基化合物之鹽之前，需要先活化 化合物（II)的酸官能團。 最終，吾等已發現，T3P不會導致不對稱中心的差向異 構化，藉此可獲得具有良好純度與收率的康布列塔司他汀 (A)。亦注意到就偶合產物而言，T3P可獲得良好收率（見 表III)。 偶合反應一般在5它至7〇r之間的溫度下，例如在dCM 回流下進行。T3P相對於（Z)-胺基化合物的比例在1至2當 量之間，較佳在1.5至1.8當量之間。 [實例] 實例1(根據本發明） 步驟（i): 在5-10°(：之間的溫度下，將曱醇鈉（5.66 1^，29.34 111〇1) 溶液加入包含曱苯（9 1.1升）、三曱氧基苯曱基鱗溴（15.3 5 kg，29.33 mol)與 4-甲氧基-3-硝基苯甲醛（5.06 kg, 27.93 mol)的混合物中。反應結束後，加入0.32升（5.59 mol)乙 酸。媒質保持在20。(：下後，過濾。以曱苯（11.1升）洗淨濾 餅。以水（20.2升）洗淨濾液多次，然後真空濃縮。添加異 丙醇（87.6升）及濃縮媒質，然後冷卻。在1〇。(：下過濾懸浮 138425.doc 200948753 液。真空下乾燥分離之產物（6.46 kg, 52.2%)。分離之產物 純度對（Z)而言約為78%及對（E)而言約為22%。 步驟（ii): 50°C下，將水（80 ml)加入包含甲醇（1〇〇 ml)、待還原的 (Z)-與（E)-硝基化合物（20 g，0.058 mol)與連二亞硫酸鈉 (36_8 g，0.179 mol，3.1當量）的媒質中。反應完成後（於 50°C下反應1 h)，立即添加鹽酸（36.3 ml, 0.406 mol)。於 φ 水（70 ml)與DCM(80 ml)中處理，然後以氫氧化鈉（鹼液 3 0.5%，10 N)調至PH=7。經DCM(20 ml)再萃取後，去除水 相及然後在真空下（35°C下約200 mbar)濃縮DCM相及改換 成乙腈（160 ml);將溶劑由DCM改成乙腈之過程係在減壓 下進行’以保持約200 ml之反應體積。加入鹽酸之曱醇溶 液（27 ml，0,081 mol)且然後在減壓（90 mbar)下蒸發溶劑， 在約233 ml恆定體積下’使溶劑從曱醇_乙腈變爲乙腈。溶 劑變化完成時，調節總體積（溶劑+有機化合物）至280 ml。 φ 據此獲得白色漿狀物形式的懸浮液。在45士3。(：下，添加 苯甲醇（46 ml)於該懸浮液中。冷卻至25後’過濾媒質及 以乙腈（30 ml)與苯曱醇（3.3 ml)洗淨》然後，真空下乾燥 • 分離之產物（11.7 g，74·4%)。該產物之純度，對（Ζ)而言為 99·93%及對（Ε)而言為0.07%，其由HPLC確定。在步驟（ii) 結束時’據此直接且簡便即可獲得具有良好純度的（z)_胺 基化合物之鹽。 步驟（iii): 在 20°C 下，依序將 TEA(53.4 ml, 0.383 mol)及 T3P 的 138425.doc 200948753 DCM 溶液（154 g, 0.242 mol)加入包含 DCM(500 ml)、鹽酸 鹽形式的（Z)-胺基化合物（50 g, 0.142 mol)與由PG=BOC雙 重保護的結構式（II)L-絲胺酸（L-絲胺酸-N-BOC-縮丙酮； 41.8 g, 0.170 mol)的媒質中。使該媒質回流及然後添加水 (500 ml)。沉降分離及濃縮後，添加鹽酸之甲醇溶液（189.5 ml, 1.136 mol)與甲醇（189.5 ml)。於媒質中添加水（300 ml)，然後藉由沉降而分相。於水相中添加乙酸異丙酉旨 (650 ml)及然後在20°C下注入氫氧化鈉（115 ml，1.150 mol)。將藉由沉降及洗淨而分離的有機相在真空下濃縮， 然後加熱至65 °C。在該溫度下，加入甲醇（35 ml)及隨後加 入鹽酸之甲醇溶液（47.4 ml, 0·142 mol)。冷卻及過濾後， 分離產物（49.6 g, 79.5%)。最終產物具有99.2%的純度。 實例2(根據本發明） 將鹽酸鹽形式的（Z)-胺基化合物（Z-安米諾（乙-aminostil)), HC1(50.0 g)、N-BOC-縮丙酮（41.8 g)與 500 ml DCM注入配備有套層的1.6升反應器中。然後，在22±3°C 下，注入53.4 ml三乙胺（2.7當量），隨後注入50%之T3P的 DCM溶液（1.7當量）。在DCM回流下，攪拌該混合物1小 時。然後冷卻該混合物至22±3°C及添加500 ml去離子水。 沉降分離該混合物及分相。以500 ml 6重量％(30 g)的磷酸 氫鈉水溶液洗淨DCM相，然後以500 ml去離子水洗淨。在 360至150 mbar之間之減壓下，及在約40-50°C下濃縮DCM 相。然後加入3 moUl(3 79 ml, 8當量）HC1的甲醇溶液，隨 後加入3 00 ml去離子水。沉降分離該混合物及分相。以去 138425.doc •16· 200948753 離子水（200 ml)再萃取DCM/曱醇相及分相。添加650 ml乙 酸異丙酯及隨後添加115 ml 30%氫氧化納溶液（8.1當量）。 沉降分離該混合物且以400 ml去離子水洗淨有機相。沉降 分離該混合物及分相。然後在160至60 mbar的減廢下濃縮 . 有機相，直至獲得300-350 nU，完成從DCM變爲乙酸異丙 酯溶液。然後，在62°C下加熱該混合物，添加35 ml甲 * 醇，且注入3 mol"(47.4 ml，1當量）鹽酸的曱醇溶液。然後 φ 將所得產物冷卻至室溫且過濾白色漿狀物。洗淨最終固 體。 在實例3-6中，初始以不同量的（z)-與（E)-硝基化合物重 複步驟（ii)。乙腈/(Z)-與（E)-胺基化合物之鹽之比例固定在 10.8 ’且苯甲醇/(z)-與（E)-胺基化合物之鹽之比例可以根 據其份數變化。 實例3(根據本發明） 5〇°C下，將水（60 ml)注入包含曱醇（5〇 ml)、待還原的 ❹ （Z)·與（E)_硝基化合物（15 g，0.043 mol)與連二亞硫酸鈉 (27·2 g，0.133 mol)的媒質中。完全反應後，添加鹽酸(26.2 ml，0.314 m〇l)。注入水與DCM進行處理，然後注入氫氧 . 化納至PH=7。添加鹽酸之甲醇溶液（18.9 ml, 0.05 86 mol) ， 於DCM相中，然後以乙腈置換溶劑。據此獲得漿狀物。在 5〇°C下，添加苯甲醇（31 ml)至懸浮液中，且在65t下保持 2小時。冷卻後，濾除媒質且洗淨。然後真空乾燥所分離 之產物。 實例4-6 :與實例3類似，但苯甲醇量不同 138425.doc 17 200948753 表i 苯甲醇/Z+E胺基 鹽重量比 Zr胺基的 HPLC純度 Z-胺基的 粗產率 實例4 1.96 99.5% 82.0% 實例3 2.09 99.6% 81.0% 實例5 2.25 99.7% 77.0% 實例6 2.38 99.9% 75.6% 在實例5與7-9中，苯甲醇/(Z)-與（E)-胺基化合物之鹽之 比例固定在2.25且乙腈/(Z)-與（E)-胺基化合物之鹽之比例 可以變化。

表II 乙腈/Z+E胺基鹽 重量比 Z-胺基的HPLC 純度 實例7 9.10 99.7 實例5 10.80 99.9 實例8 11.88 98.9 實例9 12.65 94.5 苯甲醇/Z+E胺基鹽比=2.25 實例10-14闡述利用T3P以外的偶合劑進行偶合（步驟 (iii))的結果。

實例1〇(對比）··使用TOTU

重複步驟（iii)條件，但在TOTU作爲酸活化劑存在下（1當 量TOTU+5當量TEA)進行。最終收率僅為71%〇 實例11(對比）：使用TOTU _在5°〇 下，依序添加 TEA(0.71 g, 7.0 mmol)與 τ〇τυ(0.46 g，1.4 mmol)至包含DCM(10 ml)、鹽酸鹽形式的（ζ)_胺基化 合物（0.50 g，1.4 mmol)與由PG=BOC雙重保護的結構式 138425.doc • 18· 200948753 (II)L-絲胺酸（L-絲胺酸-N-BOC-縮丙酮；0.35 g，1.4 mmol) 的媒質中。該媒質保持在5°C下24小時，隨後添加水（5 ml)。沉降分離後，以HPLC分析有機相。定量偶合產物的 收率為50.1 %且其純度為69.3%。 實例12(對比）：使用BOP-C丨（雙（2-氧-3-噁唑烷基）膦醯氣） 在 5°C 下，依序添加 NMM(0.42 g, 4.2 mmol)與 BOP-C1 (0.72 g，2.8 mmol)至包含 DCM(5 ml)、（Z)-胺基化合物 (0.50 g, 1.4 mmol)與由PG=BOC雙重保護的結構式（II)L-絲 胺酸（L-絲胺酸-N-BOC-縮丙酮；0.35 g, 1.4 mmol)的媒質 中。該媒質保持在5°C下24小時及隨後添加水（5 ml)。沉降 分離後，以HPLC分析有機相。定量偶合產物收率為29.1% 且其純度為91.6%。 實例13(對比）：使用PyClOP(氣代三吡咯烷基鐫六氟磷酸盥） 在 5°C 下，依序添加 NMN(0.42 g, 4.2 mmol)與 PyClOP (1.2 g, 2.8 mmol)至包含乙酸乙酯（10 ml)、（Z)-胺基化合物 (0.50 g，1.4 mmol)與由PG=BOC雙重保護的結構式（II)L-絲 胺酸（L-絲胺酸-N-BOC-縮丙酮；0.70 g，2.8 mmol)的媒質 中。該媒質保持在5°C下24小時及隨後添加水（5 ml)。沉降 分離後，以HPLC分析有機相。定量偶合產物的收率為 53.3%且其純度為83.9%。 實例14(對比）：使用PyBROP(三吡咯烷基溴化媾六氟磷酸鹽） 在 25°C 下，依序添加 NMN(0.42g, 4.2〇1111〇1)與？丫8110? (0·65 g, 1.4 mmol)至包含 Me-CN(5 ml)、（Z)-胺基化合物 (0.50 g，1.4 mmol)與由PG=BOC雙重保護的結構式（II)L-絲 138425.doc -19- 200948753 胺酸（L-絲胺酸-N-BOC-縮丙嗣；0.35 g，1.4 mmol)的媒質 中。該媒質保持在25°C下24小時及隨後添加水（5 mi)。沉 降分離後，以HPLC分析有機相。定量偶合產物的收率為 24.9%且其純度為75.4%。

表III 偶合劑 基質 偶合產物 的定量收$： 得自HPLC 的純度 實例2 T3P TEA-2.7 當量 99.7% 實例11 TOTU TEA-5當量 50.1% 69.3% 實例12 BOP-C1 NMN-3當量 29.1% 91.6% 實例13 PyClOP NMN-3當量 53.3% 83.9% 實例14 PyBROP NMN- 1當量 24.9% 75.4% 已發現就偶合產物而言，T3P比TOTU、BOP-C1、 PyClOP或PyBROP可獲得更佳的收率。 138425.doc -20-

Claims (1)

1. 200948753 七、申請專利範圍： 1. 一種製備康布列塔司他汀（A)之鹼形式或酸加成鹽形式之 方法：

   Η 三 ΝΗ2 MeO 〇Me 〇Me (A) 其包括： •在鹼與結構式（III)T3P之存在下：

   MeO OMe OMe MeO—(v Λ If 'v—NH,

   或（z)-胺基化合物 鲁 偶合（Z)-胺基化合物

   nh3+日"(；8_表示抗衡陰離子（counteranion)) 與結構式 i > (II)的雙重保護的L-絲胺酸衍生物（其 PG 中PG表示保護胺官能團的基團），以獲得結構式（Z)-(Ib) 化合物：

   138425.doc 200948753 •然後在酸存在下，脫除保護基及打開（Z)-(Ib)環，獲得 鹽形式的結構式（A)康布列塔司他汀； •及視需要添加驗以獲得驗形式的結構式（A)康布列塔 司他》T， 富集（Z)異構物形式之如下結構式的胺基化合物之鹽，獲 得（Z)-胺基化合物之鹽··

   nh3+ b-— OCH3 (B_表示抗衡陰離子），其包含： 將苯曱醇加入含（z)-與⑻-胺基化合物之鹽混合物的乙 腈懸浮液中，然後 2. •機械分離富集（Z)異構物形式的胺基化合物之鹽。 -種富集（Z)異構物形式之如下結構式的胺基化合踐 之方法： i

   OMe OMe nh3+ b· 其中B-表示抗衡陰離子，其包含： .與(Ε)·胺基化合物之鹽混一 .域㈣構物形 如請求項⑷胺基化。物之鹽。 4. 一種製# ,，、中βχ機械分離法為過濾。 方^備康布列塔司他、;丁⑷之驗形式或酸加成鹽形式之 138425.doc 200948753

   MeO 〇Me 其包括： 偶合（Z )-胺基化合物 •在驗與T3P存在下 參 MeO OMe OMe MeO MeO

   MeO 〇Me OMe 或（z )-胺基化合物鹽 nh3+ B_( B _表示抗衡陰離子）與結構式 (II)的雙重保護的L-絲胺酸衍生物（其中PG PG, ^ 表示保護胺官能團的基團），以獲得結構式（Z)-(Ib)化 合物：

   •然後在酸存在下，脫除保護基及打開（Z)-(Ib)環，獲得 鹽形式的康布列塔司他汀（A); •及視需要添加鹼，獲得鹼形式的康布列塔司他汀 (A)。 5.如請求項1或4之方法，其中PG代表BOC、CBZ或 FMOC。 138425.doc 200948753 6. 如請求項1、2及4中任一項之方法，其中B-表示ci·或 S042· 〇 7. 如請求項1或4之方法’其中PG代表b〇c且Β·表示Cl·。 8. 如請求項1或4之方法’其中鹼為第三胺。 9. 如請求項8之方法’其中鹼為三乙胺（tea)、二異丙基乙 胺（DIEA)、N-甲基嗎啉（NMM)或曱基旅啶。 10. 如請求項1或4之方法，其十由（z)_胺基化合物或（z)胺基 化合物之鹽與結構式（II)化合物在T3P與鹼存在下，於同 一容器中反應。 11. 如請求項1或2之方法’其中乙腈/(z)_與（E)_胺基化合物 之鹽的比例（以重量比表示）係在5與17之間，較佳在1 〇與 12之間。 12. 如請求項1或2之方法’其中進行富集的溫度係在2〇與 7〇°C之間。 13. 如請求項1或2之方法’其中苯甲醇/(z)-與（E)-胺基化合 物之鹽的比例（以重量比表示）係在1與4之間，較佳在2與 3之間。 14. 一種結構式（ΠΙ)之T3P之用途：

   NH2(Z)-胺基化合物或 其係用於偶合結構式MeC 138425.doc 200948753 MeO OMe OMe 結構式Me0~~^~A ^^/~NH3+ B_(z)-胺基化合物之鹽（B_表示 抗衡陰離子）與結構式 HO

   (Π)

   的雙重保護的L-絲胺酸衍生物（其中PG表示保護胺官能 團的基團）。 15. 如請求項14之用途，其中PG表示BOC、CBZ或FMOC及/ 或B·表示CT或S042·。 16. 如請求項14或15之用途，其中鹼為第三胺。 17. 如請求項14或15之用途，其中（Z)-胺基化合物或（Z)-胺基 化合物之鹽與結構式（II)化合物係在T3P與鹼存在下，於 同一容器中反應。

   138425.doc 200948753 四、指定代表圖： (一) 本案指定代表圖為：（無） (二) 本代表圖之元件符號簡單說明： 五、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式：

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