TW200913987A - Extract of Myrothecium sp. mycelium used to inhibit growth of tumor cell - Google Patents

Description

200913987 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於一種用於抑制腫瘤細胞生長之化合 物’尤其係關於一種自漆斑黴(MyoAecz·麵Sp.)菌絲體 萃取物中分離純化而得且可用於抑制肺癌、肝癌與前列 腺癌細胞生長之化合物。 【先前技術】 二十世紀之後，癌症已成為危害人類健康之頭號殺 手’根據衛生署91年6月所公佈的資料，自民國71年起 至今，惡性腫瘤連續20年位居國人十大死因之首，其死 亡率每十萬人口為147.68人，民國九十年約有三萬三千 人死於惡性腫瘤’因此，尋找有效且副作用和緩的抗癌 物質就顯得更為迫切。 單端孢霉烯族化合物（trichothecenes)係屬於具有 廣泛生理活性之倍半萜類（seSqUiterpenoids)物質，其主 要係由錄抱徽(Fusarium)、聚端抱徵（Tn’chothecium)、木 徽（TWc/zoArma)、漆斑徽、頭孢徽 、葡萄狀穗黴(价和柱果黴 (C>/z>7办οαποπ)等真菌所產生，研究指出單端孢霉烯族 化合物係具抗菌活性，且於體外試驗中亦證實其具有抑 制細胞活性(cytostatic activity)之效用；此外，單端抱霉 200913987 烯族化合物可依其結構再區分為開環和巨環内酉旨 (macrolides)類，而具有巨環内酯單端孢霉烯族化合物 (macrocyclic trichothecenes)之真菌毒素（Myc〇t〇xin)例 如 vermcarins、roridins、satratoxill、vertisporin、 baccharinoid係為單端孢霉烯族化合物中較受矚目並具 生物活性之物質，該些物質可藉由單端孢霉烯族化合物 與真核細胞上之聚核糖體（P〇lyS〇mes)與8〇S核糖體 (ribosomes)結合，使得蛋白質轉譯功能無法被活化啟 動，進而干擾蛋白質合成。前述該些真菌毒素大都應用 於製成可抑制病菌生長之抗生素以及抗發炎療效與免 疫調節功能（immunomodulatory)方面，其中 verrucarms(別名 muconomycin)係由漆斑黴㈣ SP.)等真菌所產生’依其化學結構式又可分為verrucarin A(別名 muconomycin A)、verrucarin J(別名 muconomycin B)以及verrucarin K等，研究指出verrucarin係為可長效 性抑制蛋白質與醣蛋白（glycoprotein)合成之物質，並具 有免疫抑制活性’其亦可用於對抗特定種類之蟲害與抑 制新城雞癌_病毒(Newcastle virus)和煙草花葉病毒活性。 剷述verrucarin之相關應用中，並未有將verrucarin 用於抑制肺癌、肝癌與前列腺癌之研究，故若能將 vemicarin應用於抑制前述癌症方面上，對於人類肺癌、 肝癌與前列腺癌之治療將產生莫大的助益。 200913987 【發明内容】 為研究出可有效抑制癌細胞生長之物質，本發明係 由漆斑黴(Myroi/zec/ww sp.)之菌絲體中分離純化出具下 列結構式之化合物：

ch3 如式（1)結構式之化合物，其化學名為verrucarinA (別名muconomycin A)，分子式為C27H3208，分子量為 484。

如式(2)結構式之化合物，其化學名為verrucarin J 200913987 34〇9，分子量為 (別名 muconomycin B)，分子式為 C27H 502 〇 7 本發明中式⑴、式⑺之化合物係分離純化自漆斑 =絲體之有機溶解取物，有機溶劑可包括甲醇、乙 ^或丙醇等醇類溶液’其中較佳者為乙醇。但並不以此 :::凡是可自漆斑黴菌絲體萃取出式⑴、式⑺化合 己溶劑包括酯類（例如乙酸乙酯）、烷類（例如 幻或i烧（例如氣曱烧、氣乙燒）等皆可應用於此。 化合物’本發明細其應祕抑制腫瘤細 增進一步用於治療癌症之醫藥組成份中， 抑制肺癌腫^τ、效果。本發明化合物得應用之範圍包括 等之生+ ^、、田胞、肝癌腫瘤細胞與前列腺癌腫瘤細胞 瘤之=瘤細胞無法迅逮生長，進而抑制腫 癌、肝癌化，因此，可進—步利用於肺 厲與别列腺癌等癌症之治療。 物利：二面：二=⑴或/與式⑺之化合 藉《抑制該等腫瘤:細胞等，組成物之成 括藥學ΐί:=(1)或/與一^ 充劑（如4糖$靜體。載體可為賦形劑（如水）、填 稀釋劑、崩解4 '黏合劑（如纖維素衍生物）、 此。本發”藥組成物可依m未劑，但並未僅限於 1¾知樂學之製備方法生 200913987 產製造，將式（1)或/與式(2)有效成分劑量與一種以上之 載體相混合，製備出所需之劑想，此劑型可包括疑劑、 粉劑、粒劑、膠囊或其他液體製劑，但未以此為隈。 以下將配合圖式進一步說明本發明的實施方式，下 述所列舉的只施例係用以闡明本發明，並非用以限定本 發明之範圍，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明之精 神和範圍内，當可做些許更動與潤飾，因此本發明之保 護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。 【實施方式】 首先進行漆斑黴屬（场；r〇认ecz•麵叩.）菌絲體之衫 養，藉以獲得該_之_體。接著將該賴體利用! 知之萃取方式，以有機溶劑進行萃取，藉以取得漆班稽 菌絲體之錢㈣萃取物。其中，有機溶劑可包括糾 (例如曱醇、乙醇或丙醇）、_類（例如乙酸乙醋） 统類（例如己燒）¾姐（例如氣代、氯乙炫）" 並不以此為限。其中較佳者為醇類，更佳者為95%乙« 經萃取過後之漆斑黴菌絲 一步藉由高效液相層析加以分離^=_萃取物，可 =果之分液進行成分分析，將二，，則針對知 刀再分別進-步做癌症腫：產生抑癌效果的力 已之抑制效果測試。最與 200913987 即發現本發明中如式（1)/式（2)之化合物係具有抑制肺 癌、肝癌與前列腺癌等癌症腫瘤細胞生長之效果。 為證實式（1)/式（2)化合物對腫瘤細胞生長之抑制 效果’本發明中係以MTT分析法，根據美國國家癌症 研究所（National Cancer Institute, NCI)抗腫瘤藥物篩 檢模式’對包括肺癌、肝癌與前列腺癌等腫瘤細胞進行 細胞存活率之測試。由該些測試證實 verm car in A 及 verrucarin J對於肺癌腫瘤細胞（包括A549)、肝癌腫 瘤細胞（包括Hep 3B與Hep G2)以及前列腺癌腫瘤細 胞（包括LNCaP與DU-145)等可降低其存活率，相對 之下並可同時其生長半抑制率所需濃度（即IC5G值）， 因此得將verrucarin A及verrucarin J應用於肺癌、肝癌 與别列腺癌等腫瘤細胞之生長抑制上，而進一步可利用 於肺癌、肝癌與前列腺癌等癌症之治療。茲對前述實施 方式詳盡說明如下： 實施例1 : 漆斑徽菌絲體之培養 先6周配適於漆斑徽屬（均;Sp.)菌株生長之 養基，其培養基之配置方法如下所述：分別秤取〇. 1 _2 克之氣化納(NaCl)、5_1〇克之蛋白;東(pept〇n)、12克之 酵母萃出物(yeast extract)、3-10 克之洋菜（agar)、3_1〇 克之榖類（榖類可選自米、小麥、糯米或玉米等）、卜2克 10 200913987 之氮源（氣源種類為NH4NO3或ΚΝ〇3)、1 _3克碳源(碳源種 類為葡萄糖、果糖或蔗糖)及少許碟酸鹽，並加入微量 金屬離子（例如：鎂[Mg]或鈣[Ca]等）。加入800-1000毫 升(mL)之—人療館水至上述材料中，授掉均勻後，以in 氳氧化鈉(NaOH)或1N鹽酸(HC1)調整混合液之pH值至 6.5〜7.5後’將混合液倒入錐形瓶中，以棉花封口，置 120 C以上高溫滅菌至少20分鐘以上，待涼後，於無菌 操作台上將漆斑黴菌屬菌株例如：疲孢漆斑菌 IMyrothecium verrucaria)氙露潘、漆斑菌（J^yrothecium 如办）等植入培養基中，並置於培養箱中以 20-30°C溫度培養4-8週，即可獲得漆斑黴屬菌株之菌絲 體’其中’漆斑黴屬菌株之取得來源，係從台灣南部雪 山山脈山腰之樹木下土壤中採得’經台大曾顯雄教授鑑 定而得’且漆斑徽屬菌株之種類並不僅限於此，凡是可 由菌絲體中分離得化合物verrucarin A及verrucarin J之 菌種皆可應用於此。 實施例2 : 分離具抗癌活性之化合物 取實施例1培養好之漆斑菌屬菌株之菌絲體約1〇〇 克，置入三角錐形瓶中，加入95%醇類溶液，於20〜25°C 下攪拌萃取至少1小時以上，之後以濾紙及0.45 μπι濾 11 200913987 膜過濾，收集萃取液。其中，該醇類溶液可包括甲醇、 乙醇或丙醇4，較佳者為乙醇，但並不以此為限。 將前述收集之漆斑黴菌絲體醇類萃取液，利用高效 能液相層析儀（High perf0rmance Liquid chromatography)’以填充有矽膠(smca㈣)之層析管柱 進行分析，並以正已烷(hexane)與乙酸乙酯（ethylacetate， EA)等溶液進行沖提，同時以紫外_可見光全波長偵測器 分析，最後分離出1〇段分液(fracti〇n)，之後再對每一 分液進行生物活性分析。最後，則再針對具生物活性之 分液進行成分分析’藉由不同比例之正已烧與丙酮 (acetone)沖提之’並分離出具前述式（i )結構之化合物 與具劎述式（2)結構之化合物。經比對後，式（1 )結 構之化合物係為verrucarin A，其分子式為C27H32〇8， 刀子里484 ’式（2)結構之化合物係為verrucarin j， 其分子式為C27H34O9，分子量502。 實施例3 : 體外抗肝癌腫瘤細胞之活性測試 為進一步測試verrucarin A與verrucarin J化合物對 腫瘤細胞之抑制效果，本實施例將根據美國國家癌症研 究所（National Cancer Institute, NCI)抗腫瘤藥物篩檢 板式進行之’首先取實施例2中所分離之verrucarin a 與verrucarin J化合物，加入含有Hep3B與HepG2人類 12 200913987 肝癌腫瘤細胞之培養液中，以進行腫瘤細胞存活率之測 試。細胞存活率之測試可採習知之MTT分析法進行分 析，而Hep3B與HepG2皆係人類之肝癌腫瘤細胞系，此 兩肝癌腫瘤細胞係購自財團法人食品工業研究所，其編 號分別為 BCRC 60434 及 BCRC 60025。 MTT分析法是一種常見用於分析細胞增生（ceu proliferation )、存活率（percent of viable cells )以及細 胞毒性（cytotoxicity )的分析方法。其中，MTT ( 3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]2,5-diphenyltetrazolium bromide )為一黃色染劑，它可被活細胞吸收並被粒腺 體中的琥珀酸四嗤還原酶（succinate tetrazolhim reductase)還原成不溶水性且呈藍紫色的f〇rmazan，因 此藉由formazan形成與否’即可判斷並計算細胞之存活 〇 首先將人類肝癌細胞Hep3B與HepG2分別於含有胎 牛血清之培養液中培養24小時。將增生後之細胞以 清洗一次，並以1倍之胰蛋白酶_EDTA處理細胞，隨後 於l，200 rpm下離心5分鐘，將細胞沈澱並丟棄上清液。 之後加入10 ml的新培養液，輕微搖晃使細胞再次懸 浮，再將細胞分置於96孔微量盤内。測試時，分別於 每一孔内加入 100、30、10、3、卜 0.3、0.1 與 0.03 ng/ml 漆斑黴菌絲體粗萃取物（對照組，未經高效能液相層析 純化分離之漆斑黴菌絲體乙醇總萃取物）以及i 〇 〇、3 〇、 13 200913987 10、3、1、0.3、0，1 與 〇,〇3 ng/ml verrucarin A 與 verrucarin J (實驗組）’於37°C、5% C02下培養48小時。其 後’於避光的環境下於每一孔内加入2.5 mg/ml的 MTT，反應4小時後再於每一孔内加入1〇〇 μ1的lysis buffer終止反應。最後以酵素免疫分析儀在57〇 nm吸 光波長下測定其吸光值，藉以計算細胞的存活率，並推 算出其生長半抑制率所需濃度（即IC5〇值），其結果如 表一所示。 表一：體外抑制肝癌腫瘤細胞生長之測試結果 測試樣品 __IC5〇 (ng/ml)

Hep3B HepG2 對照組 漆斑徽菌絲體 粗萃取物 23.81 45.89 實驗組 verrucarin A 2.31 10.21 ---------. verrucarin J 3.12 13.31 由表一中可知’藉由verrucarin A與verrucarin J的作 用’其可有效降低人類肝癌腫瘤細胞Hep3B及HepG2之 存活率。verrucarin A與verrucarin J對於人類肝癌腫瘤細 胞Hep3B之IC5〇值可分別降低至2.31 ng/ml與3.12 ng/ml ’且經與對照組比(23 81 ng/ml)對換算得〗&值之降 低比率分別約為90.3%與86.9%，而對於人類肝癌腫瘤細胞 HepG2之1值亦可分別降低至10.21 ng/ml與13.31 ng/ml ’且經與對照組（45 89 ng/ml)比對換算得a。值之降 ，比率分別約為Ή.75%與71%，故該些IC5G數值相較於對 …、、、且漆斑黴菌絲體粗萃取物所測得之IC5〇值與係低的 14 200913987 多，因此可證實漆斑黴菌絲體萃取物中所分離得之 verrucarin A與verrucarin J確實能夠利用於肝癌腫瘤細 胞生長之抑制；此外，由表一中亦可發現，經verrucarin A處理後之癌細胞ic5G值係低於經verrucarin J處理後之 癌細胞IC5〇值，亦即僅需較少濃度之verrucarin A便可抑 制半數肝癌腫瘤細胞的生長，此顯示verrucarin A抑制肝 癌細胞之功效係優於verrucarin J。 實施例4 : 體外抗肺癌腫瘤細胞之活性測試 本測試亦係根據美國國家癌症研究所抗腫瘤藥物 師檢模式進行’將實施例2中所分離之verrucarjn a與 verrucarin J化合物，加入含有A549人類肺癌腫瘤細胞 之培養液中，並採前述MTT分析法進行分析，藉以測 5式肺癌腫瘤細胞存活率’其中，A549係為人類之肺癌 腫瘤細胞系，此肺癌腫瘤細胞係購自財團法人食品工業 研究所，其編號為BCRC 60074。 首先將人類肺癌細胞A549分別於含有胎牛企清之 培養液中培養24小時。將增生後之細胞以pBs清洗一 次，並以1倍之胰蛋白酶-EDTA處理細胞，隨後於1200 rpm下離心5分鐘’將細胞沈澱並丟棄上清液。之後加 入ml的新培養液，輕微搖晃使細胞再次懸浮，再將 細胞分置於96孔微量盤内。測試時，分別於每一孔内 15 200913987 加入 100、30、10、3、1、0.3、0.1ng/ml 漆斑徵菌絲體 粗卒取物（對照組，未經面效能液相層析純化分離之漆 斑黴菌絲體乙醇總萃取物）以及100、30、10、3、1、 0.3、0.1ng/ml verrucarin A 與 verrucarin J (實驗組）, 於37°C、5% C〇2下培養48小時。其後，於避光的環 境下於每一孔内加入2.5 mg/ml的MTT，反應4小時後 再於每一孔内加入1〇〇 μΐ的lysis buffer終止反應。最 後以酵素免疫分析儀在570 nm吸光波長下測定其吸光 值，藉以計算細胞的存活率，並推算出其生長半抑制率 所需》農度（IC50值），其結果如表二所示。 表二：體外抑制肺癌腫瘤細胞生長之測試結果 測試樣品 IC5〇 ( ng/ml) A549 對照組 漆斑黴菌絲體 粗萃取物 52 實驗組 verrucarin A 1.12 verrucarin J 2.34 由表二中可知，藉由verrucarin A與verrucarin J的作 用’其可有效降低人類肺癌腫瘤細胞A549之存活率。相 較於對照組漆斑黴菌絲體粗萃取物所測得之IC5G值（52 ng/ml)’經verrucarinA處理人類肺癌腫瘤細胞A549後， 其ICso值可大幅降低至1.12 ng/m卜且與對照組比對換算得 IQo值之降低比率約為97.85%，而經verrucarin J處理人類肺 癌腫瘤細胞A549後，其IC5〇值可大幅降低至2.34 ng/ml， 且與對照組比對換算得IC5〇值之降低比率約為95.5%，兩化合 16 200913987 物所顯示之生長半抑制率所需濃度皆相對大幅低於對 照組，因此可證實由漆斑黴菌絲體萃取物中所分離得之 verrucarin A與verrucarin J讀實能狗利用於肺癌腫瘤細 胞生長之抑制；此外，由表二中亦可發現’經verrucarin A處理後之癌細胞;[c5Q值係低於經verrucarin J處理後之 癌細胞IC5〇值’亦即僅需較少濃度之verrucarin a便可抑 制半數肺癌腫瘤細胞的生長，此顯 示verrucarin A抑制肺 癌細胞之功效係優於verrucarin J。 實施例5 : 體外抗前列腺癌腫瘤細胞之活性測試 本測試亦係根據美國國家癌症研究所抗腫瘤藥物 師檢板式進行’將實施例2中所分離之verrucarin A與 verrucarin J化合物，加入LNCaP與DU-145人類前列腺 癌腫瘤細胞培養液中，並採前述MTT分析法進行分析， 藉以測試前列腺癌腫瘤細胞存活率。細胞存活率之測試 可採習知之MTT分析法進行分析，而LNCaP與DU-145 係為人類之前列腺癌腫瘤細胞系，其中，前列腺癌係發 源於前列腺腺體上皮細胞之癌症，且癌細胞生長初期需 倚賴男性荷爾蒙，因此又稱為男性荷爾蒙依賴型前列腺 癌（androgen-dependent prostate cancer)，LNCaP 即屬於 此類型癌細胞’該型癌細胞係可藉由阻斷男性荷爾蒙而 治療之，但數年後約30 %患者之腫瘤會再度復發，且該 17 200913987 類病患體内的男性荷爾蒙量已非常少，故復發的腫瘤遂 轉變（progression)為不需要倚賴男性荷爾蒙便能夠生 長’成為非男性荷爾蒙依賴型前列腺癌 (androgen-independent prostate cancer)，而這種復發的癌 症至今仍未發現有效的治療方式，Du_145便屬於此類 型前列腺癌細胞’本發明所用前列腺癌腫瘤細胞LNCaP 與DU-145係購自財團法人食品工業研究所，其編號分 別為 CCRC 60088 及 CCRC 60348。 首先將人類前列腺癌細胞LNCaP與DU-145置於 含有胎牛血清之培養液中培養24小時。將增生後之細 胞以PBS清洗一次，並以1倍之胰蛋白酶_EDTA處理 細胞，隨後於1，200 rpm下離心5分鐘，將細胞沈澱並 丟棄上清液。之後加入1〇 ml的新鮮培養液，輕微搖晃 使細胞再次懸浮’再將細胞分置於96孔微量盤内。測 試時’分別於每一孔内加入水(控制組）、濃度為4.2 ng/mi 之紫杉醇（對照組）、濃度為100、10、1、(U與0 01 ng/ml 漆斑黴菌絲體粗萃取物（對照組，未經高效能液相層析 純化分離之之漆斑徽菌絲體乙醇總萃取物）、以及濃度 刀別為 100、10、1、0.1、0.01 與 0.001 ng/ml 之 vermcarin A 及 verrucarinJ 化合物（實驗組），於 37〇C、5% C02 下培養48小時。其後，於避光的環境下於每一孔内加 入2.5 mg/ml的MTT試劑，反應4小時後再於每一孔内 加入100 μΐ的lysis buffer終止反應。最後以酵素免疫 18 200913987 分析儀(ELISA reader)在570 nm吸光波長下測定其吸 光值，藉以計算細胞的存活率，並推算出其半抑制率所 需濃度（即IC5G值）’其結果如表三與表四所示。 表三：體外抑制前列腺癌腫瘤細胞生長之測試結果 IC5〇 (ng/ml) 内口八休口口 LNCaP DU-145 對照組 漆斑黴菌絲體 粗萃取物 29.31 33.16 實驗組 verrucarin A 2.85 0.02 verrucarin J 0.31 0.28 由表三中可知，藉由verrucarin A與vermcarin J的作 用’其可有效降低人類前列腺癌腫瘤細胞LNCaP與 DU-145之存活率。verrucarin A與verrucarin J對於人類前 列腺癌腫瘤細胞LNCaP之IC5G值可分別降低至2.85 ng/ml與0.31 ng/m卜且經與對照組比(29.31 ng/ml)對換算 得IQo值之降低比率分別約為90.28%與98.94%，而對於人類 前列腺癌腫瘤細胞DU-145之IC5G值更可分別降低至〇 〇2 ng/ml與0.28ng/m卜且經與對照組(33.16ng/ml)比對換算 得IQo值之降低比率分別約為99.93%與99.16%，故該些ic 數值相較於對照組漆斑黴菌絲體粗萃取物所測得之IC5〇 值(29.31 ng/ml與33.16 ng/ml)係低的多；此外，由表三 中亦可發現’經verrucarin J處理後之LNCaP癌細胞ic 5 〇 值係低於經verrucarin A處理後之LNCaP癌細胞ic5◦值， 此顯示verrucarin J抑制LNCaP肝癌細胞之功效係優於 vermcarin A ;而經vermcarin A處理後之du-145癌細胞 19 200913987 ICso值係低於經verrucarin填理後之DU」45癌細胞IC5〇 值’此顯示verrucarinA抑制DU-145肝癌細胞之功效係 優於 verrucarin J。 表四：verrucarin A及verrucarin J於體外對前列腺癌腫 瘤細胞DU-145存活率之測試結果 測試樣品 濃度 (ng/ml) 細胞 存活率（％) 控制組 水 100 紫杉醇（Taxol) 4.2 63.88 100 20.60 對照組 漆斑黴菌絲體 10 91.01 之粗萃取物 1 94.30 0.1 101.31 100 16.96 10 17.07 verrucarin A 1 16.99 0.1 21.01 實驗組 0.01 72.31 0.001 94.33 100 2036 10 18.95 verrucarin J 1 19.93 0.1 81.11 0.01 101.30 0.001 100.21 另一方面’請參閱表四，藉由verrucarin A及 vemicarin J的作用，其可有效降低人類前列腺癌腫瘤細 胞DU-145之存活率，相對於控制組，當以濃度介於1 ng/ml~l00 ng/ml 之 verrucarin A 及 verrucarin J 處理時，

癌細胞之存活率可降低至20%左右；而將 verrucarin A 20 200913987 及verrucarin J與對照組之抑菌效果相比較後，可觀察 到隨著漆斑黴菌絲體粗萃取物、verrucarin A及 verrucarin J的施用濃度增加，其各自之細胞存活率會隨 之下降，反之，當施用濃度減少時，其各自之細胞存活 率便會上升’其中，當其個別之施用濃度皆減少至1〇 ng/ml時，漆斑黴菌絲體粗萃取物之細胞存活率會攀升 至91.01 %，而分離自漆斑黴菌絲體粗萃取物之 verrucarin A及verrucarin J的細胞存活率仍可低至19乂 左右，此結果證實verrucarin Α及verrucarin J的確為抑 制人類前列癌腫瘤細胞DU-145之有效活性成分；此 外，當對照組紫杉醇(Taxol)之施用濃度為4.2 ng/ml時， 其細胞存活率為63.88%，而化合物verrucarin A及 verrucarin J之施用濃度介於1 ng/ml〜10 ng/ml時，其細 胞存活率可大幅降低至20%以下，此結果顯示於相似施 用濃度下，verrucarin A及verrucarin J抑制人類前列癌 腫瘤細胞DU-145之效果係優於紫杉醇，且當verrucarin A及verrucarin J之施用濃度極少時（o.l ng/ml〜1 ng/ml)，其仍具有顯著之抑癌功效。 此外，由表四亦可發現，當verrucarin A及verrucarin J施用於DU-145細胞之濃度為1 ng/ml以上（1 ng/ml〜l〇 ng/ml)時，其所呈現之細胞存活率數值非常相近，亦即 於該些濃度範圍下，兩者具有近似之抑癌功效；而當 verrucarin A及verrucarin J施用於DU-145細胞之濃度為 21 200913987 0.1 ng/ml以下（0.001 ng/ml〜0.1 ng/ml)時，即便用量已減 少至極低之濃度，經verrucarin A處理後之細胞存活率數 值仍可低至21.01%以下，而經verrucarin J處理後之細胞 存活率已因抑癌有效濃度過低而升高至81.11%以上，此^ 表示verrucarin A抑制DU-145肝癌細胞之功效係優於 verrucarin J ° 由上述結果可證實漆斑黴菌絲體萃取物中所分離 得之verrucarin A與verrucarin J皆可有效抑制具有不b 特性之前列腺癌腫瘤細胞LNCaP與DU-145的生香，同 不verrucarin A與verrucarin J除可應用於抑制男性寸” 蒙依賴型前列腺癌細胞LNCaP ,亦可利用於 荷爾 荷爾蒙依賴型前列腺癌細胞DU-145的生長上，藉γ男性 於前列腺癌與再復發性前親癌之治療。…助益 【圖式簡單說明】 益 【主要元件符號說明】 益 〇、、 22

Claims (1)

1. 200913987 十、申請專利範圍： 1、一種用於抑制腫瘤細胞生長並具有下列結構式之化 合物，其中該腫瘤細胞係為肝癌細胞、肺癌細胞或 前列腺癌細胞：

   V0 0 2、 如申請專利範圍第1項所述用於抑制腫瘤細胞生長 之化合物，其中該化合物係由漆斑黴（M少 sp.)菌絲體所分離製得。 3、 如申請專利範圍第1項所述用於抑制腫瘤細胞生長 之化合物，其中該肝癌細胞係為Hep3B或HepG2細 胞系。 4、 如申請專利範圍第3項所述用於抑制腫瘤細胞生長 之化合物，其中該化合物抑制肝癌細胞Hep3B生長 半抑制率所需濃度(IC5〇)為2.31ng/ml。 23 200913987 5、 如申請專利範圍第3項所述用於抑制腫瘤細胞生長 之化合物，其中該化合物抑制肝癌細胞HepG2生長 半抑制率所需濃度(IC5G)為10.21ng/ml。 6、 如申請專利範圍第1項所述用於抑制腫瘤細胞生長 之化合物，其中該肺癌細胞係為A549細胞系。 7、 如申請專利範圍第6項所述用於抑制腫瘤細胞生長 之化合物，其中該化合物抑制肺癌細胞A549生長半 抑制率所需濃度(IC5〇)為1.12ng/ml。 8、 如申請專利範圍第1項所述用於抑制腫瘤細胞生長 之化合物，其中該前列腺癌細胞係為LNCaP或 DU-145。 9、 如申請專利範圍第8項所述用於抑制腫瘤細胞生長 之化合物，其中該化合物抑制前列腺癌細胞LNCaP 生長半抑制率所需濃度(IC5〇)為2_85ng/m卜 10、 如申請專利範圍第8項所述用於抑制腫瘤細胞生長 之化合物，其中該化合物抑制前列腺癌細胞DU-145 生長半抑制率所需濃度(IC5〇)為0.02ng/ml。 11、 一種用於抑制肝癌、肺癌或前列腺癌細胞生長之醫 藥組成物，其至少包括一有效劑量如申請專利範圍 第1項所述之化合物以及一醫學上可接受之載體。 24 200913987 12、一種用於抑制腫瘤細胞生長並具有下列結構式之化 合物，其中該腫瘤細胞係為肝癌細胞、肺癌細胞或 前列腺癌細胞：

   13、 如申請專利範圍第12項所述用於抑制腫瘤細胞生 長之化合物，其中該化合物係由漆斑黴 sp.)菌絲體所分離製得。 14、 如申請專利範圍第12項所述用於抑制腫瘤細胞生 長之化合物，其中該肝癌細胞係為Hep3B或HepG2 細胞系。 15、 如申請專利範圍第14項所述用於抑制腫瘤細胞生 長之化合物，其中該化合物抑制肝癌細胞Hep3B生 長半抑制率所需濃度(IC5〇)為3.12ng/m卜 16、 如申請專利範圍第14項所述用於抑制腫瘤細胞生 長之化合物，其中該化合物抑制肝癌細胞HepG2生 長半抑制率所需濃度(IC5〇)為13.31ng/ml。 25 200913987 17、 如申請專利範圍第12項所述用於抑制腫瘤細胞生 長之化合物，其中該肺癌細胞係為A549細胞系。 18、 如申請專利範圍第17項戶斤述用於抑制腫瘤細胞生 長之化合物，其中該化合物抑制肺癌細胞A549生長 半抑制率所需濃度(ic5G)為2‘34ng/ml° 19、 如申請專利範圍第12項所述用於抑制腫瘤細胞生 長之化合物，其中該前列腺癌細胞係為LNCaP或 DU-145。 20、 如申請專利範圍第19項户斤述用於抑制腫瘤細胞生 長之化合物，其中該化合物抑制前列腺癌細胞 LNCaP生長半抑制率所需7農度(IC5〇)為ing/mi。 21、 如申請專利範圍第19項戶斤述用於抑制腫瘤細胞生 長之化合物，其中該化合物抑制前列腺癌細胞 DU-145生長半抑制率所需丨農度(IC5〇)為〇.28ng/mi。 22、 一種用於抑制肝癌、肺癌威前列腺癌細胞生長之醫 藥組成物’其至少包括一有效劑量如申請專利範圍 第12項所述之化合物以及/醫學上可接受之載體。 26 200913987 七、 指定代表圖： (一) 本案指定代表圖為：第（無）圖。 (二) 本代表圖之元件符號簡單說明： 無 八、 本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式: 無