TW200911826A - Antibodies to TNF alpha and use thereof - Google Patents

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TW200911826A TW097118657A TW97118657A TW200911826A TW 200911826 A TW200911826 A TW 200911826A TW 097118657 A TW097118657 A TW 097118657A TW 97118657 A TW97118657 A TW 97118657A TW 200911826 A TW200911826 A TW 200911826A
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200911826 九、發明說明： 相關申請案的交又引述 本申請案主張2007年5月21提申的美國臨時專利 申請案案號60/924,551之優先權，其之揭示係以其之全體 5 併入本文中以作為參考資料。 【發明所屬之技術領域3 發明領域 本發明有關具有腫瘤壞死因子-阿伐（α)(下文 “TNF-α”)之結合專一性的抗體與其等之片段。本發明亦有 10 關用於蒒選的與TNF-oc有關的疾病或障礙之方法，以及預 防或治療與TNF-a有關的疾病或障礙之方法，該等方法係 藉由投藥該等抗體或其等之片段。 I：先前技術3 發明背景 15 TNF-a是一藉由種種的細胞生產的多效性細胞激 素，包括：經活化的巨嗟細胞、單核細胞、T與B淋巴細 胞、自然殺手細胞、星形膠質細胞、内皮細胞、平滑肌細 胞、一些腫瘤細胞，以及上皮細胞。單核細胞，例如，表 現至少5種具有21.5-28 kDa的分子質量之不同的分子形式 20 之TNF-a，其等主要差異在於轉譯後的改變，如：糖基化 與磷酸化。參見美國專利申請案早期公開案號 2007/0015699。 TNF-a是TNF-配體的超級家族的一員，該家族包括 TNF-a、TNF-β (淋巴細胞毒素-a)、LT-b、OX40L、FASL、 5 200911826 CD30L、CD27L、CD40L，以及 4-1BBL。TNF 配體的超級 家族的配體是酸性的、於細胞外領域共享大概20%的序列 同源性，以及存在為三聚體/多聚體複合體之具有生物活性 形式之膜結合的形式。舉例而言：TNF-α與TNF-β共享32% 5 的胺基酸序列同源性。參見美國專利案號5,891,679。 2種不同形式的TNF-a存在，一26kDa膜(233 個 胺基酸）的形式以及可溶解的Π kDa (157個胺基酸)細胞激 素，其係衍生自26 kDa膜的形式之蛋白水解性分裂。可溶 解的（成熟的）TNF-α多肽是157個胺基酸長以及係在76-殘 10 基胜肽自前蛋白的胺端分裂之後而分泌。TNF-α之同質三 聚體是活性的’ 157個殘基的各單體折疊成為反平行貝他鏈 (antiparallel beta strand)之“果凍捲(jelly roll)，，的結構，含有 一單一的、分子内的雙硫架橋，以及於溶液内是三聚體。 Reed,等人（October 1997) “Crystal structure of TNF-a 15 mutant R31D with greater affinity for receptor R1 compared with R2.,? Protein Eng. 10(10):1101-7 ； Eck and Sprang (October 1989) “The structure of tumor necrosis factor-alpha at 2.6 A resolution. Implications for receptor binding” J. Biol. Chem.，Vol· 264, Issue 29，17595-17605 ;參見美國專利案號 20 7,056,695。 TNF-α是發炎、免疫上，以及病理生理上反應的一 主要的媒介。於活體外，TNF-α具有多樣的生物作用，包 括：殺死經轉形的細胞、刺激顆粒細胞與纖維母細胞、損 傷内皮細胞、乾癬性關節炎，以及抗寄生蟲作用。於活體 200911826 内，TNF-α扮演一關鍵角色，像是發炎、免疫與宿主防禦 功能之内源的媒介’以及其係涉及—些病理病況。TNF-a 能夠獨立地作用以及結合影響不同的身體功能之完全地過 剩之其他的因子而作用。此等作用可以是對宿主有利的或 5 是對威脅宿主生命的。此等作用的一些是直接的，其他的 作用可以透過誘導其他的分泌的因子而傳達。參見美國專 利案號 5,891，679。 TNF-a係經由2個不同的膜TNF_a受體之交互作 用而行使其之生物作用，一種55 kDa，稱為p55 TNF-R以 10及一種75 kDa稱為P75 TNF-R。該二TNF受體在胺基酸位 準顯現ώ 28%的相似性。此係限制在細胞外領域以及由各 大概40個胺基酸之4個重複富含半胱胺酸的部分所構成。 各部分含有4至6個半胱胺酸於守恆的位置。參見美國專 利案號 7,056,695。 15 如以下更加詳盡地提出的，據信TNF-ot於許多疾病 或障礙的發展上扮演一角色，包括但不限於：類風濕性關 節炎、牛皮癬、氣喘 '第丨型與第2型糖尿病、中風、肺 纖維化、憂鬱症與阿茲海默症(Aizheimer，s disease)。由於 意識到TNF-α涉及於廣泛範圍的疾病或障礙中，本技藝中 20對於預防或治療與TNF-a有關的疾病之組成物和方法， 及篩選辨識具有與TNF-a有關的疾病或障礙的病人之方法 存在有一需求。特別佳的抗-TNF - a組成物是當投藥至病人 時具有最小的或最小化不利的反應的那些。降低或抑制與 200911826 TNF-α有關的疾病或障礙之組成物或方法對於需要其之病 人是有利的。 【發明内容3 發明概要 5 本發明係針對具有TNF-α之結合專一性的特定抗體 與其等之片段’特別地具有專一的抗原決定位專一性及/或 功能性質之抗體。本發明的一個實施例係包含能夠結合至 TNF-a及/或TNF-a/ TNFR複合體之專__的人類化的抗體與 其等之片段。本發明的另一個實施例係有關本文中說明的 10 抗體，其等係包含本文中說明的VH、\^與CDR多肽之序 列’以及編碼其等之多核苦酸。於本發明的更具體的實施 例中，此等抗體會擁有低於5〇微微莫耳的結合親合性(Kds) 及/或低於或等於1(T4 S—1的值。 於本發明的另-個實施例中，此等抗體和人類化的 Μ將會衍生自兔免疫細胞(Β淋巴細跑）以及可以依據直 等對人類生殖種系序列之同源性(序列同—性）予以選擇。此 等抗體可能需要最小的修飾或不需序列修都，藉此促進在 人類化之後的功能性質之保持。本發明的—個另外的實施 例係針對來自包含，例如，衍生自兔免疫細胞的％、％ 與CDR多肽之抗-TNF-cx抗體的片段以及編碼其等之多核 «’以及此等抗體片段與編碼其等之多核賊於創造能 _識TNF-d/或TNF-a/ TNFR複合體的新顆的抗體和 多肽組成物之用途。 200911826 本發明亦預期結合至一或多個功能性或可偵測的部 分之抗TNF-α抗體與其等之結合片段的結合物。本發明亦 預期製造該等人類化的抗TNF-a或抗TNF-a/ TNFR複合體 抗體與其等之結合片段的方法。於一實施例中，結合片段 5 包括，但不限於：Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、scFv 片段、SMIPs(小 分子免疫藥物）、駱駝抗體（camelbodies)、奈米抗體 (nanobodies)，以及 IgNAR ° 本發明的實施例有關抗TNF-α抗體在與TNF-α或其 之異常表現有關的疾病或障礙之診斷、評估與治療的用 10 途。本發明亦預期抗TNF-a抗體的片段於與TNF_a或其之 異常表現有關的疾病或障礙之診斷、評估與治療的用途。 本發明的其他的實施例係有關在重組型宿主細胞内 之抗TNF-a抗體的生產，重組型宿主細胞較佳地是二倍體 酵母，如：二倍體畢赤酵母(pichia)和其他的酵母菌株。 15 圖式簡單說明 第1圖顯示出藉由抗體篩選的操作程序製備的大量 的抗TNF-α抗體(抗體AM、Ab2、Ab3與Ab4)所辨識的種 種的獨特的抗原決定位。抗原決定位可變性係藉由抗體 20 -TNF-a的結合競爭研究予以確認(ForteBio 〇ctet)。埤2卡 (Remicade)係使用作為—固著分子以捕捉TNF至表面^及 封阻該抗原紅料it —步辨識。於此實驗巾的抗體妹入 不會分旱為了結合目的之相同的抗原決定位； 9 200911826 第2圖顯示出介於一兔抗體變異輕和變異重序列和 同源的人類序列以及最後的人類化序列之間的變異輕和變 異重序列之排列。架構區係經辨識的FR1-FR4。互補決定 區（CDRs)係經辨識為CDR1-CDR3。胺基酸殘基係如顯示的 5 予以編號。變異輕和變異重序列之起始的兔序列各別地被 稱為RbtVL和RbtVH。3個最相似的人類生殖抗體序列， 跨越架構1至架構3的末端，係排列於兔序列的下方。認 為是最相似於兔序列的人類序列係顯示在最前面。於此實 例中’輕鏈之最相似的序列是L12A以及重鏈之最相似的 10 序列是3-64-04。人類CDR3序列未顯示。最接近的人類架 構4序列係排列於兔架構4序列的下方。垂直的破折號表 示一殘基’其中兔殘基與在相同的位置的一或多個人類殘 基是相同的。粗體殘基指出在那個位置的人類殘基與在相 同的位置之兔殘基是相同的。變異輕和變異重序列之最後 15 的人類化序列各別地稱為VLh和VHh。畫底線的殘基指出 殘基與在那個位置的兔殘基是相同的，但是不同於3個經 排列的人類序列中之在那個位置的人類殘基； 第3圖展示出一例示性huTNF-a的操作程序之介於 生產的IgG之間的高的相關性和抗原專一性。20個井中有 20 18個顯示出具有抗原辨識之專一的IgG的相關性； 第4圖描繪抗-TNF-a抗體Abl之結合親合性； 第5圖比較Abl與瑞米卡®之中和結合親合性； 10 200911826 第6A圖係提供對應於抗體Abl, Ab2, Ab3，和Ab4 以及瑞米卡®，—商業上可得的抗-TNF-α抗體之間的競爭性 結合實驗的數據； 第6B圖係提供對應於抗體Ab5、Ab9以及瑞米卡 5 ®’一商業上可得的抗-TNF-α抗體之間的競爭性結合實驗的 數據； 第6C圖係提供對應於抗體Ab7、Abl8以及瑞米卡 ®’一商業上可得的抗_TNF_a抗體之間的競爭性結合實驗的 數據； 10 第6D圖係提供對應於抗體Abl2、Abl6、Abl9以 及細米卡 商業上可得的抗-TNF-a抗體之間的競爭性結 合實驗的數據； 第7圖插繪抗-TNF-a抗體的Abl與Ab5之抗原決 定位、會圖。第7圖顯示出對應於線形胜肽存庫之抗體結合 15的墨‘第7圖亦提供線形胜肽存庫内的胜狀之序列。
2〇 t實施方式】 較佳實施例之詳細說明 限於所說明之特定的方法學、操 要瞭解到本發明不 作擇序、細胞株、動物種或屬，以及試劑，就其本身可以 變化也要瞭糾本文巾所使用的術語僅僅為了說明特定 的實之目㈤卩及不欲限制本發明的範♦，其僅由附 隨的申凊專利範圍所限定。 200911826 當於本文中使用’單數形式，，一"、”和”，以及，，該” 包括複數的指示對象，除非上下文清楚地指定用別的方 法。因此’舉例而言：提及”―細胞"包括數個此等細胞以 及提及，，該蛋白"包括提及一或多個蛋白和其之本技藝中具 5 有技術的那些人所知道的均等物，等等。本文中所使用的 所有的技術和科學術語具有本發明所屬之技藝中具有通常 技術的一個人所通常瞭解的相同的意義，除非清楚地用別 的方法指出。 腫瘤壞死因子-阿伐(a(alpha)) (TNF-α):當於本文中 10 使用，TNF-a不僅包含下列可得的233胺基酸序列，如同
GenBank蛋白存取編號：CAA26669 (智人TNF-a): MSTESMIRDVELAEEALPKKTGGPQGSRRCLFLSLFSFLI VAGATTLFCLLHFGVIGPQREEFPRDLSLISPLAQAVRSSS RTPSDKPVAHVVANPQAEGQLQWLNRRANALLANGVEL 15 RDNQLVVPSEGLYLIYSQVLFKGQGCPSTHVLLTHTISRIA VSYQTKVNLLSAIKSPCQRETPEGAEAKPWYEPIYLGGV FQLEKGDRLSAEINRPDYLDFAESGQVYFGIIAL (序列辨 識編號：1)，而且也包含此TNF-α胺基酸序列的任何原前 (pre-pro)、前(pro-)、成熟的、可溶的，及/或膜結合的形式， 2〇 以及此序列的突變型（mutiens)、剪接的變異型、直系同源 物(orthologues)、同源物與變異型。 配對的勝任酵母的物種：於本發明中，此係意欲廣 泛地包含任何能於培養物内生長的二倍體或三倍體酵母。 酵母的此等物種可以以一單倍體、二倍體，或是四倍體的 12 200911826 形式存在。特定的多倍體之細胞可以，於適當的條件之下 以該形式增殖無限數目的世代。二倍體細胞也能形成跑子 以形成單倍體細胞。相繼的配對能經由進一步的二倍體菌 株的配對或融合而導致四倍體菌株。於本發明中，二 一'借體 5 或多倍體酵母細胞較佳地係藉由配對或原生質球狀體的融 合予以生產。 於本發明的一個實施例中，配對的勝任酵母是酵母 科家族的一成員，其包括：阿席歐酵 母屬；糞盤菌（Ac〇hoz少/ηα)屬；固囊酵 (CVierowyces)屬；得巴利酵母少ce·?)屬；德克酵母 屬；假囊酵母（£>挪〇淡eci’ww)屬；伊薩酵孙 15 20 屬；哈薩克酵母(尺屬；克魯維酵 母（i^wj；verow_yce^屬；柯達菌（Li/flwaea)屬；路德酵母 (jL〇iWerom_yca)屬；管囊酵母（Pac/^o/⑼)屬；畢赤酵母 (Pichia)屬；酵母菌（^Vzcckromyce·?)屬：木黴菌屬 ;四重孢酵母屬;有抱圓酵母 (Torulaspora)屬·’擬成爾酵母（WWiopsis)屬；以及結合酵母 (Z少gosaa/mrom少ces)屬。本發明中可能有用的其他類的酵 母包括：耶羅威亞（TarrovWa)、紅冬孢酵母菌 (Rhodosporidium)、念珠蛰（Candida)、漢過酵母 (Hansenula)、擔子菌 (Filobasium)、線擔菌 (^Ρζ7οΖ?ύ^·ί/β///α)、鎖擲酵母(5)?〇Γΰ/ί·οΖ)〇/Μ·5)、布勒擲跑酵母 〇Sw//era)、白冬孢酵母（XewcoworWwm)以及線擔菌 (Filobasidella)。 13 200911826 於本發明的一個較佳的實施例中，配對的勝任酵母 是畢赤屬的一成員。於本發明的一個更佳的實施例中，畢 赤屬的配對的勝任酵母是下列的物種的其中之一：巴斯徙 畢赤酵母βα加咖）、甲醇畢赤酵母（朽 5 则thanolica)，以反多形漢遜酵母（H_enula p〇lym〇⑽^ (安格斯畢赤酵母(P/cAk ⑽如)）。於本發明的一個特別佳 的實施例中，畢赤屬的配對勝任酵母是巴斯德畢赤酵母 (/^c/n'apaWor^s)物種。 單倍體酵母細胞：一細胞，其之正常的基因體（染色 1〇 體)組的各基因具有一單一副本。 多倍體酵母細胞：一細胞，其之正常的基因體（染色 體）組具有多於一個副本。 一倍體酵母細胞：一細胞，其之正常的基因體組之 實質上每個基因具有2個副本(對偶基因），典型地係藉由2 15 個單倍體細胞的融合的過程（配對）而形成。 四倍體酵母細胞：一細胞，其之正常的基因體組之 實質上每個基因具有4個副本(對偶基因）’典型地係藉由2 個單倍體細胞的融合的過程（配對）而形成。四倍體可以帶有 2、3、4’或是更多不同的表現卡匣。此等四倍體可以藉由 2〇 以下方式獲得：於啤酒酵母菌内選擇性配對同型接合的異 宗配合的（heterothallic) a/a和阿伐(a(alPha)V阿伐二倍體， 以及於畢赤酵母内藉由相繼的單倍體配對以獲得營養缺陷 型的二倍體。舉例而言：一 [met his]單倍體可以配對以[ade his]單倍體以獲得二倍體[his];以及一[met arg]單倍體可以 14 200911826 配對以[ade arg]單倍體以獲得二倍體[arg];接而誃_ • ^ —-1 Γ〇 [his] X二倍體[arg]以獲得一個四倍體原質營養生物。本 藝中具有技術的那些人會瞭解到提及二倍體細胞的優= 用途也可以應用至四倍體細胞。 /、 5 酵母配對：2個單倍體酵母細胞天然地融合以形 個二倍體酵母細胞之過程。 減數分裂：一個二倍體酵母細胞經歷減少性分穸r 形成4個單倍體孢子產物之過程。各孢子接而可以生長、 形成1個單倍體有生長力的成長細胞株。 10 可選擇的標記：一可選擇的標記是一基因或基因片 段，其當舉例而言經由一轉形事件時，會賦予接受那個烏 因的一細胞一生長表現型（生理生長特徵）。可選擇的標★己允 許那個細胞在未接受那個可選擇的標記基因之細胞無法生 長的條件下可於一選擇性生長培養基中存活和生長。可選 15 擇的標記基因通常屬於數個類型，包括：正向可選擇的枳 記基因，如：賦予一細胞對一抗生素或其他藥物、溫声之 抗性的基因，當雜交2個ts突變型或是轉形1個ts突變型 時；負向可選擇的標記基因，如：賦予一細胞生長於沒有 一特定的營養物之培養基内的能力之生合成的基因，該款 20 養物是沒有那個生合成的基因之所有的細胞所需要的，戍 是致突變的生合成的基因，其賦予一細胞不能藉由沒有該 野生型基因的細胞而生長；和類似物。合適的標記包括但 不限於：ZEO; G418; LYS3 ; MET1 ; MET3a; ADE1 ; ADE3 ; URA3 ;和類似物。 15 200911826 表現載體：此等DNA載體含有幫助操作一外來蛋 白的於標的宿主細胞内的表現之元素。方便地，轉形之序 列的操作和DNA的生產係首先於一細菌宿主，例如，大腸 桿菌内執行，以及通常載體會包括：幫助此等操作的序列， 5 包括：複製之一細菌來源以及適當的細菌篩選標記。篩選 標記編碼於一選擇性培養基中生長之經轉形的宿主細胞的 存/舌或生長必須的蛋白。未經含有篩選基因之載體予以轉 形的宿主細胞不會存活於培養基中。典型的篩選基因係編 碼以下蛋白：（a)賦予抗生素或其他毒素抗性，（b)互補營 10 養缺陷型的缺陷（complement auxotrophic deficiencies)，或 是(c)供應不可得自於複合培養基的關鍵性營養物。例示性 載體以及用於轉形酵母的方法係，舉例而言：於Burke，D.， Dawson, D., & Stearns, T. (2000). Methods in yeast genetics: a Cold Spring Harbor Laboratory course manual. Plainview, 15 Ν·γ·: c〇ld Spring Harbor Laboratory Press 中予以說明。 供用於本發明的方法之表現載體進一步會包括酵母 的特異性序列，包括：一用於辨識經轉形的酵母菌株之可 選擇的營養缺陷型或藥物標記。一藥物標記可以進一步用 來擴增一酵母宿主細胞内的載體之副本的數目。 20 編碼有興趣的序列之多肽係操作地連結至提供用於 酵母細胞内之多肽的表現之轉錄和轉譯調控序列。此等載 體組份可以包括，但不限於下列的一或多個：—增強子元 素、-啟動子，以及-轉錄終止序列。也可以包括關於該 多肽的分泌之序列’例如訊息序列，和類似物。一酵 200911826 母的複製的原點是選擇性的，因表現載體往往被併入至酵 母的基因體之内。於本發明的一個實施例中，有興趣的多 肽係被操作地連結，或是被融合至來自酵母二倍體細胞的 提供用於最佳化多肽的分泌之序列。 5 核酸係與另一個核酸序列"操作地連結”，當置於一 功能關係時。舉例而言：一訊息序列的DNA係予以操作地 連結至一多肽的DNA ’設若其係表現為—參與該多肽的分 泌之前蛋白；一啟動子或增強子係予以操作地連結至一編 碼序列，設若其影響該序列的轉錄。一般而言，"操作地連 10 結”係意指被連接的DNA序列是連續的，以及，於—分泌 前導子的情況下，是連續且在閱讀架構上的。然而，增強 子不必要是連續的。連結係在方便的限制位址藉由連接或 任擇地透過本技藝中具有技術的那些人所熟悉的PCr/重 組方法（GatewayR Technology ; Invitr〇gen, Carlsbad 15 California)予以完成。設若此等位址不存在，合成的寡核苷 酸接合體或連結子係依照慣用的慣例使用。 啟動子是座落於至一結構基因的起始密碼子之上游 (5’）（通常在大約100至1〇〇〇 bp的範圍内）的未轉譯的序 列，其控制其等操作地連結的特定的核酸序列之轉錄和轉 2〇譯。此等啟動子屬於數個種類：可誘導的、構成性的以 及可抑fj的啟動子（其等對缺乏_抑制子反應而增加轉錄 的位準）。可誘導的啟動子可以對培養條件的—些變化，例 如，存在或缺少一營養物或溫度的變化，作出反應而在其 等的控制之下起始來自DNA之增加的轉錄的位準。” 17 200911826 酵母的啟動子片段也可以作用為同源重組的位址以 及表現載體併入至酵母的基因體之内的相同的位址；任擇 地，一可選擇的標記係被使用作為同源重組的位址。畢赤 的轉形係於 Cregg 等人（1985) Mol. Cell. Biol. 5:3376-3385 5 之中說明。 來自畢赤之合適的啟動子實例包括：AOX1與啟動 子（Cregg 等人（1989) Mol. Cell. Biol. 9:1316-1323); ICL1 啟 動子（Menendez 等人(2003) Yeast 20(13):1097-108);甘油醛 -3-磷酸脫氫酶啟動子（GAP) (Waterham等人（1997) Gene 10 ^60):37-44);以及 FLD1 啟動子（Shen 等人（1998) Gene 216(1):93-102)。GAP啟動子是一強的構成性的啟動子以及 AOX和FLD1啟動子是可誘導的。 其他的酵母的啟動子包括：ADH1、乙醇脫氫酶π、 GAL4、PH03、PHQ5、Pyk，以及自其衍生的嵌合啟動子。 15此外，非酵母的啟動子可以使用於本發明之中，如：哺乳 動物、昆蟲、植物、欣蟲類、兩棲動物、病毒，以及鳥類 的啟動子。最典型地，啟動子會包含一哺乳動物的啟動子 (可能對表現的基因是内源的）或是會包含—於酵母系統提 供有效的轉錄之酵母的或病毒的啟動子。 、有興趣的纽不僅可以直接地重組生產而且也可 以為一帶有一異種多肽，例如在成熟蛋白或多肽的N端具 有特定的分裂的位址之訊息序列或其他的多肽，的融合多 肽:—般而言，訊息序列可以是載體的-組份，或是其可 以是插入至載體之内的多肽編碼序列的—部分。選擇的異 18 200911826 種信號序列較佳地係經由宿主細胞内的標準途徑的其中之 一辨識且處理的一個。啤酒酵母菌阿伐(α)因子原前訊息已 經被證實在來自巴斯德畢赤酵母之種種的重組梨蛋白的分 泌是有效的。其他的酵母的訊息序列包括：阿伐(α)配對因 5 子訊息序列、轉化酶訊息序列，以及衍生自其他的經分泌 的酵母多肽之訊息序列。此外，此等訊息胜肽序列可以是 經工程化的以提高於二倍體酵母表現系統内提供的分泌。 其他有興趣的分泌訊息也包括：哺乳動物的訊息序列’其 等對於待分泌的蛋白可以是異種的，或是可以是待分泌的 10 蛋白之天然的序列。訊息序列包括：前胜肽序列（pre-peptide sequences)，以及於一些實例中，可以包括：原胜肽序列。 許多此等訊息序列係本技藝中所知道的，包括：免疫球蛋 白鏈上發現的訊息序列，例如：K28原前毒素序列、PHA-E、 FACE、人類MCP-1、人類血清白蛋白訊息序列、人類Ig 15 重鏈、人類b輕鏈’和類似物。舉例而言：參見Hashimoto 等人 Protein Eng 11(2) 75 (1"8);以及 Kobayashi 等人 Therapeutic Apheresis 2(4) 257 (1998)。 轉錄可以藉由插入一轉錄活化子序列至載體之内而 增加。此等活化子係DNA的順式作用元素，通常大約自 20 10至300 bp，其等作用於-啟動子上以增加其之轉錄。轉 錄增強子係相對地定位且位置獨立的，已經發現在轉錄單 元的5’和3,，在一插入子之内，以及在編碼序列本身之: 的。增強子可以料剪接至表現舰在—個編碼序列的5, 或3’位置，但是較佳地係座落於啟動子的5，的位址。 19 200911826 使用於真核宿主細胞之中的表現載體也可以含有轉 錄的終止以及安定mRNA必須的序列。此等序列通常可得 自於3’至轉譯終止密碼，於真核的或是病毒DNA或cDNA 之未轉譯區。此料域含有核魏#段，其料於mRNA 5 的未轉澤部分内轉錄為聚腺苷酸化的片段。 3有一或多個以上列出的組份之合適的載體的建構 係使用標準的連接技術或PCR/重組方法。經單離的質體或 DNA片段係被切開、修改，以及以所欲的形式予以再連接 以產生需要的質體或透過重組方法。為了分析以確認於建 10 構的質體内之正確的序列，連接的混合物係予以用來轉形 宿主細胞，以及成功的轉形體係藉由適當的抗生素抗性(例 如：氨比西林(ampicillin)或吉歐黴素(Ze〇cin))予以選擇。來 自δ玄專轉形體的質體係予以製備，藉由限制核酸内切酶消 化及/或定序予以分析。 15 以att位址為基礎的重組方法和重組酵素可以用來 插入DNA序列至一載體之内以作為片段的限制和連接的 另一選擇。此等方法係，舉例而言：由丄andy (1989) Ann.Rev.Biochem. 5(5:913-949予以說明；以及是本技藝中 具有技術的那些人所知道的。此等方法利用由X(lambda)和 20 大腸桿讀-編碼的重組型蛋白的混合物所媒介的分子内 DNA重組。重組發生於交互作用的DNA分子之特定的連 接(αίί)位址之間。關於att位址的說明，參見Weisberg和 Landy (1983) Site-Specific Recombination in Phage Lambda, in Lambda //, Weisberg, ed.(Cold Spring Harbor, NY:Cold 20 200911826
Spring Harbor Press), pp_211-250。位於重組位址的側邊之 DNA片段被交換，以致於在重組之後，att位址係由各親代 載體所捐贈的序列所組成之雜種序列。重組能發生於任何 局部解剖學的DNA之間。 5 位址可以藉由以下方式予以引導至有興趣的一 序列之内：連接有興趣的序列至一適當的載體之内；經由 使用專一的引子而產生一含有B位址之PCR產物；產 生一經選殖至一含有att位址的適當的載體之内的cDNA存 庫；和類似物。 折疊，如本文中所使用的’係提及多肽與蛋白之三 維結構，其中介於胺基酸殘基之間的交互作用係作用來安 定該結構。雖然非共價的交互作用在決定結構上是重要 的，通常有興趣的蛋白會具有由2個半胱胺酸殘基形成的 分子内的及/或分子間的共價雙硫鍵。關於天然存在的蛋白 15 與多肽或衍生物以及其等之變異型，適當的折疊典型地導 致最理想的生物活性之配置，以及能方便地藉由活性的分 析予以監測，例如：配體的結合、酵素活性，等等。 於一些實例中’舉例而言，所欲的產物係合成的來 源製成的，以生物活性為基礎的分析法會是較無意義的。 20 此等分子之適當的折疊可以基於生理性質、積極的考量、 模式研究，和類似物來決定。 表現宿主可以藉由引進編碼一或多個提高雙硫鍵的 折叠和形成之酶，也就是折疊酶 '伴護蛋白（chaperonin)， 等等，的序列而予以進一步地修飾。此等序列可以利用本 21 200911826 技藝中所知道的載體、標記，等等，而於酵母宿主細胞内 構成地或可誘導地表現。較佳地，包括對於所欲的表現模 式足夠的轉錄調控元素之序列係經由一種標的方法學予以 安定地併入至酵母的基因體之内。 5 10 15 20 舉例而言：真核的PDI不僅是半胱胺酸氧化和雙硫 鍵同分異構作用之一有效的催化劑蛋白，而且也顯現出伴 護蛋白（chaperone)的活性。PDI的共表現能幫助具有多重的 雙硫鍵之活性蛋白的生產。BIP (免疫球蛋白重鏈結合蛋 白）；環胞菌素（cyclophilin);和類似物的表現也是有興趣 的。於本發明的一個實施例中’單倍體的親代菌株的各個 表現一種不同的折疊酶，例如，—菌株可以表現Βιρ，以 及另一個菌株可以表現PDI或是其等之組合。 術語”所欲的蛋白"或是，，標的蛋白，，係可交換地使用 以及通常關連於本文中說明的—人類化抗體或其等之处八 部分。術語“抗體，，係意欲包括具有—適合且辨識_抗原: 定位之特定的形狀之任何含有多肽鏈的分子結構，其中一 或多個非㈣的結合交互作料安定介於分子結構和抗原 決定位之間的複合體。原始型抗體分子係為免疫球蛋白， 以及來自所有的來源，例如：人類、《動物、兔、乳牛、 韩羊、豬、狗、其他的魏動物、雞、其他的鳥類，等等， 之所有種類的免疫球蛋白、IgG、IgM、igAigEigD， 等等均被認為是“抗體，，。依據本發明料起始材料是有用 的-生產抗體之較㈣來源是兔子。許多的抗體編媽 已經被說明；以及其他的可叫由本技藝中所熟知的方法 22 200911826 予以培育出。其等之實例包括：嵌合抗體、人類抗體與其 他非人類的哺乳動物抗體、人類化抗體、如scFvs之單鏈 抗體、駱秘抗體（camelbodies)、奈米抗體（nanobodies)、 IgNAR(係衍生自鯊魚的單鏈抗體）、小分子免疫藥物 5 (small-modular immunopharmaceuticals) (SMIPs)，以及抗體 片段，如：Fabs、Fab'、F(ab')2 和類似物。參見 Streltsov VA， 等人，Structure of a shark IgNAR antibody variable domain and modeling of an early-developmental isotype, Protein Sci. 2005 Nov;14(l 1):2901-9. Epub 2005 Sep 30 ; Greenberg 10 AS，等人，A new antigen receptor gene family that undergoes rearrangement and extensive somatic diversification in sharks, Nature. 1995 Mar 9;374(6518):168-73 ; Nuttall SD， 等人，Isolation of the new antigen receptor from wobbegong sharks, and use as a scaffold for the display of protein loop 15 libraries, Mol Immunol. 2001 Aug;38(4):313-26 ;
Hamers-Casterman C，等人，Naturally occurring antibodies devoid of light chains, Nature. 1993 Jun 3;363(6428):446-8 ; Gill DS，等人，Biopharmaceutical drug discovery using novel protein scaffolds, Curr Opin 20 Biotechnol. 2006 Dec;17(6):653-8· Epub 2006 Oct 19。 舉例而言：抗體或抗原結合片段可以藉由基因工程 予以生產。於此種技術中，如同用其他的方法，生產抗體 的細胞係對所欲的抗原或免疫原致敏化。自抗體生產細胞 單離的信使RNA係使用作為利用PCR擴增的一模板以製 23 200911826 各載體含有保留走私 性之-重鏈基因和—輕鐽基因，係藉由插 蛋白之適當的區段至表現載體而產：二= 係藉由組合重鏈基因庫與輕鏈基因庫而建構^存庫 現-重與輕鏈(類似—抗體分子的秘片段或=致共表 段)的純株的存庫。攜帶此等基因之载體且轉^合片 細胞内。當於經轉_魅㈣導抗^種宿主 輕鏈蛋白自行組裝以產生活性抗體，其⑼^時1與 是免疫原的篩選予以價測。 9用抗原或 10 15 20 有興趣的抗體編碼序列包括··由天然 該等，以及’由於遺傳密碼的簡併，在序列上與# ’厂碼的 酸不相同的核酸，以及其等之變異型。變異型多肽=不的核 胺基酸(aa)取代、加入或是刪除。胺基酸取代可以括： 胺基酸取代或是消除非必須胺基酸之取代，如改變寸陵性 化作用的位址，或是藉由取代或刪除對功能不 糠基 受'的式 多個半胱胺酸殘基以最小化不當折疊。變異型許 4 1:1予以毁今十 以便於保留或是具有蛋白的一特定區域（例如，_ α L 1力能領 域、催化作用的胺基酸殘基，等等）之提高的生物活 異型也包括：本文中所揭示的多肽之片段，尤其生物、 片段及/或對應於功能領域的片段。選殖的基因之活挪 〇艰外的 致突變的技術係為已知的。本發明也包括的是已趣估 1文用普 通的分子生物技術予以修飾的多肽，以便於改善其等斜 白水解性降解之抗性或是以最佳化溶解度性質或是使其等 成為更合適作為一治療劑。 24 200911826 嵌合抗體可以藉由透過以下方式之重組方法予以製 造：組合獲得自一物種的抗體生產細胞之變異輕與重鍵區 (vL和vH)以及帶有來自另一者的守恆輕與重鏈區。典型 地，嵌合抗體係使用齧齒動物或兔的變異區以及人類的守 5 恒區’俾以生產具有顯著地人類的領域之一抗體。此等私 合抗體的生產係本技藝中所熟知的，以及可以藉由標準的 方法予以達成(如同例如於美國專利案號5,624,659中說明 的’其係以其之全體併入本文中以作為參考資料）。進—步 預期到的是本發明的嵌合抗體之人類守恆區可以選自於： 10 IgG 卜 IgG2、IgG3、IgG4、IgG5、IgG6、IgG7、IgG8、IgG9、 IgGlO、IgGl 1、IgG12、IgG13、IgG14、IgG15、IgG16、IgG17、 IgG18或是IgG19守恆區。 人類化抗體係予以工程化以包含甚至更多的類人類 的免疫球蛋白領域，以及只併入動物-衍生的抗體之互補決 15 定區。此係藉由小心地檢查單株抗體的變異區之高度變異 環的序列，以及使其等適合於人類抗體鏈的結構而完成。 縱然表面錯综複雜’在實施上方法是直接明確的。參見， 例如，美國專利案號6,187,287，其係完全併入本文中以作 為參考資料。 20 除整個免疫球蛋白（或其等之重組配對物）之外，還 可以合成包含抗原決定位結合位址的免疫球蛋白片段（例 如’ Fab’、F(ab，)2 ’或是其他的片段）。‘‘片段，，，或是最小 的免疫球蛋白可以使用重組免疫球蛋白的技術予以設計。 例如’供用於本發明中的“Fv”免疫球蛋白可以藉由合成一 25 200911826 經融合的變異輕鏈區與一變異重鏈區而生產。抗體的組合 也疋有興趣的，例如，二聚抗體(diabodies)，其等包含2 個不同的Fv的專一性。於本發明的另一個實施例中，免 疫球蛋白片段包含SMIPs (小分子免疫藥物）、駱騎抗體 5 (camelb〇dies)、奈米抗體（nan〇b〇dies)，以及 igNAR。 免疫球蛋白以及其等之片段可以是，例如，經轉譯 後修飾的，以提供效應部分，如：化學連接子，可偵測的 部分’如：螢光染料、酶、毒素、受質、生物發光材料、 放射材料、化學發光部分和類似物，或是專一的結合部分， 10 如.鏈黴抗生物素蛋白（streptavidin)、抗生物素蛋白 (avidin)，或是生物素，和類似物可以使用於本發明的方法 和組成物之内。額外的效應分子之實例係於以下提供。 術語“安定地表現或表現一所欲的分泌的異種多肽 歷時延長的時間之多倍體酵母，，係提及一酵母的培養物，其 15 分泌該多狀以閾的表現位準，典型地至少1 〇_25 mg/公升以 及較佳地實質更大的量，歷時至少數天至丨週，更佳地至 少1個月，還更佳地至少1-6個月，以及甚至還更佳地歷 時多於一年。 術語“分泌所欲量的重組多肽之多倍體酵母培養物” 20 係提及培養物，其安定地或是歷時延長的期間分泌至少 10-25 mg/公升，更佳地至少50-500 mg/公升，以及最佳地 500-1000 mg/升或更多之異種多肽。 设右依知、遺傳#碼轉έ睪多核苦酸序列會產出多狀序 歹1J(也就是，該多核苷酸序列·•編碼”該多肽序列），那麼一多 26 200911826 核苷酸序列"對應”於一多肽序列，設若二序列編碼相同的 多肽序列’那麼一多核苷酸序列”對應”於另一個多核苷酸 序列。 5 10 15 20 一 DNA建構物之"異種的"區域或領域是於—個更 大的DNA分子内的一 DNA之可辨識的片段，該片段在本 負上未發現與該更大的分子關連。因此，當該異種區編碼 一哺乳動物的基因時，該基因通常會有DNA位於其之側 邊’該DNA於來源有機體的基因體内係不在哺乳動物的基 體DNA之左右的。一異種區的另一個實例是一建構物， 該編碼序列本身在本質上不存在(例如，-eDNA，其基因 體編碼序列含有插人子，或是具有不同於天糾基因之密 碼子的合成相）。對偶基因的變異體或是天然發生的突變 事件不引起如本文中所界定的DNA之異種區。 一”編碼序列’’是-在架構上的密碼子序列，考虑 到遺傳密媽)係對應於或是編碼—蛋白或胜肽序列。設若該 等序列或是其等之互補序列編碼相同_基酸序列，那麼2 列係互相對應的。-與適當的調控序列關連的編 馬序列可巧轉錄和付_成—以。1 的訊息和轉錄終止序列通常會座落於該編鳴序列的3，。一” ^動子㈣，，是_ DNA難區域，其能夠結合於—細胞内 錚"Γ動2酶以及起始—下游(3,方向）—碼序列之轉 動子序列典型地含有額外的影響編碼序列的轉錄之 調控分子的(例如，轉錄因子)的結合位址。：：= έ士人〜队〜 §RNA聚合_ 〜_的啟動子㈣且轉__㈣成為m娜 27 200911826 時，一編碼序列係在該啟動子序列的”的控制之下”或是"操 作地連結”至該啟動子，該mRNA接而依序轉譯成由該編碼 序列所編碼的蛋白。 載體係予以用來引導一外來物質，如：DNA、RNA 5 或蛋白，進入一有機體或宿主細胞内。典型的載體包括： 重組型病毒（用於多核苷酸)和脂質體（用於多肽）。一 "DNA 載體"是一複製子，如：質體、噬菌體或是黏接質體，另一 個多核苷酸片段可以連接至其以便於引起連接的片段之複 製。一”表現載體”是一 DNA載體，其含有會指示經由一適 10 當的宿主細胞之多肽的合成之調控序列。此通常意指一啟 動子以結合RNA聚合酶且起始mRNA的轉錄，以及核酸 體結合位址和起始訊息以指示轉譯mRNA成多肽。在恰當 的的位址和於正確的閱讀架構上併入一多核苷酸序列至一 表現載體内，接著由載體轉形一適當的宿主細胞’使得生 15 產由該多核苷酸序列所編碼的一多肽成為可能。 多核苷酸序列的"擴增”是一特定的核酸序列之多副 本的活體外生產。經擴增的序列通常有DNA的形式。種種 的進行此擴增的技術係於Van Brunt的一回顧文章中說明 (1990，Bio/Technol·, 8(4):291-294)° 聚合酶連鎖反應或是 2〇 PCR是核酸擴增的原型，以及本文中的PCR之使用應視為 其他合適的擴增技術之例示。 現在相當地暸解脊椎動物體内的抗體之一般結構 (Edelman，G. M.，Ann. N.Y. Acad. Sci., 190: 5 (1971))。抗體 係由分子量大概23,000道爾頓之2個相同的輕多肽鏈（“輕 28 200911826 鏈”），以及分子量53,000_70,000的2個相同的重鏈（“重鍵，，) 所構成。4條鏈係藉由雙硫鍵予以結合成“γ，，组態，其中輕 鏈托住重鏈開始於“Υ”組_ σ部。“γ”組態的“分支”部分 係稱為Fab區域；“Υ”組態的柄部分係稱為&區域。胺基酸 5序狀位係自“Y”組Μ部的N端末端進行至各鏈底料 C端末端。N端末端擁有具有引出其的抗原之專一性的變 異區，以及在長度上大概是100個胺基酸，介於輕與重鏈 之間以及抗體至抗體之間有輕微的變異。 於各鏈内的變異區係連結至一守恆區，其係延伸該 10 鏈剩下的長度以及在一特定種類的抗體中其不隨著抗體的 專一性(也就是’引出其抗原）而變化。有五種決定免疫球蛋 白分子的種類之已知的主要種類的守恆區（IgG、lgM、IgA、 IgD ’ 以及 IgE，對應於 γ、μ、α、δ，和 ε (加馬（gamma)、 幕(mu)、阿伐、德爾塔(delta)，或是艾普士龍(epSii〇n))重鏈 15 守恆區）。守恆區或種類決定抗體隨後的效應功能，包括·· 補體的活化（Kabat，E. A., Structural Concepts in Immunology and Immunochemistry, 2nd Ed., p. 413-436， Holt, Rinehart，Winston (1976))，以及其他的細胞反應 (Andrews, D· W.，等人 ’ Clinical Immunobiology, ρρ 1-18, W. 20 B. Sanders (1980) ; Kohl, S_，等人 ’ Immunology, 48: 187 (1983));同時變異區決定其會反應的抗原。輕鏈分類為K (kappa)或λ (lambda)。各重鏈種類能藉由κ或是λ輕鏈予 以製備。當由融合瘤或是由Β細胞產生免疫球蛋白時’輕 29 200911826 與重鏈係互相共價鍵結’以及2個重鏈的“尾’’部係藉由共 價的雙硫連結而互相鍵結。 措辭“變異區”或“VR”係提及一抗體内的各對的輕 與重鏈内之領域，其等直接地涉及抗體與抗原的結合。各 5 重鏈在一端有一變異領域(VH)接著一些恆定領域。各輕鏈 在一端有一變異領域（Vl)以及在其之另一端有一恆定領 域；輕鏈的惶定領域係與重鏈的第一丨互定領域一起排列， 以及輕鏈變異領域係與重鏈變異領域一起排列。 措辭“互補決定區”、“高度變異區”，或是“CDR”係 10 提及一抗體的輕或重鏈之變異區内存在的一或多個高度變 異或互補決定區（CDRs)(參見Kabat, Ε· A.等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda，Md.，（1987))。此等措辭包括：像是由 Kabat 等人所定義的南度變異區（“Sequences of Proteins of 15 Immunological Interest,” Kabat Ε· ’ 等人，US Dept, of Health and Human Services，1983)或是抗體的3維結構中的高度變 異環（Chothia 和 Lesk，J Mol. Biol. 196 901-917 (1987))。於 各鏈内的CDRs係藉由架構區而保持很靠近以及，與另一 個鏈的CDRs —起’促成抗原結合位址的形成。在CDRs 20 之内，有已經被說明為選擇性決定區（SDRs)之挑選的胺基 酸’其等代表於抗體-抗原交互作用中CDR所使用的關鍵 接觸殘基（Kashmiri, S” Methods, 36:25-34 (2005))。 措辭“架構區”或“FR”係提及在一抗體的輕與重鏈之 變異區内的一或多個架構區（參見Kabat, E. A.等人， 30 200911826
Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda，Md·，（1987))。此等措辭包 括：插入於一抗體的輕與重鏈之變異區内的CDRs之間的 胺基酸序列區域。 5 抗TNF-α抗體與其等之結合片段 於一個實施例中，本發明包括具有TNF-a的結合專 一性且擁有包含以下提出的序列之一變異輕鏈序列之抗 體：
10 MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCADIVMTQTPASV EAAVGGTVTIKCQASQNIRSWLAWYQQKPGQPPKLLIYG ASTLASGVPSRFQGSGSGTEYTLTIIDLDCADAATYYCQS 附08仰呢¥0冊（序列辨識編號：2)。 本發明亦包括具有TNF-a的結合專一性且擁有包含 15 以下提出的序列之一變異重鏈序列之抗體·· METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLT CTVSGFSLSTYNMGWVRQAPGKGLEYIGYVLGSGITYYA SWAKGRFTISKTSTTVDLEITSPTTEDTATYFCARDAGGR ASL (序列辨識編號：3)。 20 本發明進一步預期包含以下的抗體：序列辨識編 號：4 ;序列辨識編號：5 ;和序列辨識編號：6的多肽序列 之一或多個，其等係對應至序列辨識編號：2的變異輕鏈序 列之互補決定區（CDRs，或高變區），及/或序列辨識編號： 7的；序列辨識編號：8 ;和序列辨識編號：9的多肽序列 31 200911826 之一或多個，其等係對應至序列辨識編號：3的變異重鍵序 列之互補決定區（CDRs，或高變區），或是此等多肽序列之 組合。於本發明的另一個實施例中，本發明的抗體包括以 上提出的CDRS以及變異重與輕鏈序列之組合。 5 於另—個實施例中’本發明預期其他的抗體，如舉 例而s嵌合抗體，其等包含序列辨識編號：4 ;序列辨識編 號.5 ;和序列辨識編號：6的多肽序列之一或多個，其等 係對應至序列辨識編號：2的變異輕鏈序列之互補決定區 (CDRs，或高變區），及/或序列辨識編號：7 ;序列辨識編 1〇 號.8 ;和序列辨識編號：9的多肽序列之一或多個，其等 係對應至序列辨識編號：3的變異重鏈序列之互補決定區 (CDRs ’或高變區），或是此等多肽序列之組合。於本發明 的另一個實施例中，本發明的抗體包括以上提出的CDRS 以及變異重與輕鏈序列之組合。 15 本發明亦預期具有TNF-α的結合專一性之抗體的片 段。於本發明的一個實施例中，本發明的抗體片段包含， 或任擇地由序列辨識編號：2的多肽序列所組成。於本發明 的另一個實施例中，本發明的抗體片段包含，或任擇地由 序列辨識編號：3的多肽序列所組成。 20 於本發明的一個另外的實施例中，本發明的具有 TNF-α結合專一性的抗體片段包含，或任擇地由序列辨識 編號：4 ;序列辨識編號：5 ;和序列辨識編號：6的多肽序 列之一或多個所組成，其等係對應至序列辨識編號：2的變 異輕鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區）。 32 200911826 於本發明的一個另外的實施例中，具有TNF_a結合 專一性的抗體片段包含，或任擇地由序列辨識編號：7;序 列辨識編號：8 ;和序列辨識編號：9的多肽序列之一或多 個所組成，其等係對應至序列辨識編號：3的變異重鏈序列 5 之互補決定區（CDRs，或高變區）。 本發明亦預期包括本文中說明的一或多個抗體片段 的抗體片段。於本發明的一個實施例中，具有TNF-a結合 專一性的抗體片段係包含，或任擇地由下列的抗體片段的 一、二、三或更多個’包括全部’所組成：序列辨識編號： 10 2的變異輕鏈區；序列辨識編號的變異重鏈區；序列辨 識編號：2的變異輕鏈區之互補決定區（序列辨識編號：4 ; 序列辨識編號 5，和序列辨識編號：6);以及序列辨識 編號：3的變異重鏈區之互補決定區（序列辨識編號：7 ;序 列辨識編號：8 ;和序列辨識編號：9)。 15 於本發明的一個較佳的實施例中，抗TNF-α抗體係
Abl，其包含序列辨識編號：2與序列辨識編號：3，以及 具有至少一種本文提出的生物活性。 於另一個實施例中，本發明係包括具有TNF-a的結 合專一性且擁有一包含以下提出的序列之變異輕鏈序列的 20 抗體： MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCADIVMTQTPSSV SEPVRGTVTIKCQASQNIYSYLSWYQQSPGQPPKLLIYKA STLASGVPSRFKGSGSGTDFTLTISDLECADAATYYCQSN YGSDSDSFGNA(序列辨識編號：18)。 33 200911826 本發明亦包括具有TNF-α的結合專一性且擁有包含 以下提出的序列之一變異重鏈序列之抗體： METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLT CSVSGFSLNNYVMGWVRQAPGKGLEFIGYIAFGIGPYYA 5 SWAKGRFTISSTSSTTVDLKMTSLTPEDTATYFCARGDYS GNDI (序列辨識編號：19)。 本發明進一步預期包含以下的抗體：序列辨識編 號：20 ;序列辨識編號：21 ;和序列辨識編號：22的多肽 序列之一或多個，其等係對應至序列辨識編號：18的變異 10 輕鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區），及/或序列辨識 編號：23 ;序列辨識編號：24 ;與序列辨識編號：25的多 肽序列之一或多個，其等係對應至序列辨識編號：19的變 異重鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區），或此等多肽 序列的組合。於本發明的另一個實施例中，本發明的抗體 15 包括以上提出的CDRs以及變異重與輕鏈序列之組合。 於另一個實施例中’本發明預期其他的抗體，如舉 例而言嵌合抗體，其等包含序列辨識編號：2〇 ;序列辨識 編號：21 ;和序列辨識編號：22的多肽序列之一或多個， 其等係對應至序列辨識編號：18的變異輕鏈序列之互補決 20定區（CDRs，或高變區）’及/或序列辨識編號：23 ;序列辨 識編號：24;與序列辨識編號：25的多肽序列之一或多個， 其等係對應至序列辨識編號：19的變異重鏈序列之互補決 疋區（CDRs，或高變區），或此等多肽序列的組合。於本發 34 200911826 明的另一個實施例中，本發明的抗體包括以上提出的c D R s 以及變異重與輕鏈序列之組合。 本發明亦預期具有TNF-a結合專一性的抗體片段。 於本發明的一個實施例中，本發明的抗體片段包含，或任 5擇地由序列辨識編號：18的多肽序列所組成。於本發明的 另一個實施例中，本發明的抗體片段包含，或任擇地由序 列辨識編號：19的多肽序列所組成。 於本發明的一個另外的實施例中，本發明的具有 TNF-a結合專一性的抗體片段包含，或任擇地由序列辨識 、’扁號.20 ;序列辨識編號：21 ;和序列辨識編號：22的多 肽序列之一或多個所組成，其等係對應至序列辨識編號： 18的變異輕鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區）。 於本發明的一個另外的實施例中，本發明的具有 TNF-a結合專一性的抗體片段包含，或任擇地由序列辨識 \ 5 妹· ， ^ ’ 3 ;序列辨識編號：24 ;和序列辨識編號·· 25的多 序歹j之或多個所組成，其等係對應至序列辨識編號： 19的變異重鍵序列之互補決錢(CDRs，或高變區）。 本發明亦預期包括本文中說明的一或多個抗體片段 的抗體, 奴。於本發明的一個實施例中，具有TNF-a結合 2〇 專—性 έΛ J"11* sa u 仇體片段係包含，或任擇地由下列的抗體片段的 _ 一、三或更多個，包括全部，所組成：序列辨識編號： 的變異鏈區；序列辨識編號：19的變異重鏈區；序列 ^識編號’ 18的變異輕鏈區之互補決定區（序列辨識編號： ’序列辨識編號：21 ;和序列辨識編號：22);以及序 35 200911826 列辨識編號：19的變異重鏈區之互補決定區（序列辨識編 號：23 ;序列辨識編號：24 ;和序列辨識編號：25)。 於本發明的一個較佳的實施例中，該抗TNF-α抗體 係Ab2，其包含序列辨識編號：18與序列辨識編號：19， 5 以及具有至少一種本文提出的生物活性。 於另一個實施例中，本發明係包括具有TNF-a的結 合專一性且擁有一包含以下提出的序列之變異輕鏈序列的 抗體： MDTRAPTQLLGLLLLWLPGSTFAIKVTQTPASVSA 10 AVGGTVSINCQASEDIESYLAWYQQKPGQPPKLLLYDAS ALASGVPSRFKGSGSGTEYTLTISGVECADAATYYCQQG YSYSNVDNS (序列辨識編號：34)。
本發明亦包括具有TNF-a的結合專一性且擁有包含 以下提出的序列之一變異重鏈序列之抗體： 15 METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLT CKVSGFSLSSYDMTWVRQAPGKGLEWIGYIWNDGSTAY ASWATGRFTISKTSTTVDLKIASPTTEDTATYFCARGPVFA TTLGYYFTI (序列辨識編號：35)。 本發明進一步預期包含以下的抗體：序列辨識編 20 號：36 ;序列辨識編號：37 ;和序列辨識編號：38的多肽 序列之一或多個，其等係對應至序列辨識編號：34的變異 輕鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區），及/或序列辨識 編號：39 ;序列辨識編號：40 ;與序列辨識編號：41的多 肽序列之一或多個，其等係對應至序列辨識編號：35的變 36 200911826 異重鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區），或此等多肽 序列的組合。於本發明的另一個實施例中，本發明的抗體 包括以上提出的CDRs以及變異重與輕鏈序列之組合。 於另一個實施例中，本發明預期其他的抗體，如舉 5例而言嵌合抗體，其等包含序列辨識編號：36 ;序列辨識 ' 編號：37 ;和序列辨識編號：38的多肽序列之一或多個， - 其等係對應至序列辨識編號：34的變異輕鏈序列之互補決 定區（CDRs ’或高變區），及/或序列辨識編號：％ ;序列辨 ' 識編號：4〇;與序列辨識编號：41的多肽序列之一或多個， 10 其等係對應至序列辨識編號：35的變異重鏈序列之互補決 定區（CDRs，或高變區），或此等多肽序列的組合。於本發 明的另一個實施例中，本發明的抗體包括以上提出的cDRs 以及變異重與輕鏈序列之組合。 本發明亦預期具有TNF-α結合專一性的抗體片段。 15 於本發明的一個實施例中，本發明的抗體片段包含，或任 擇地由序列辨識編號：34的多肽序列所組成。於本發明的 f 另一個實施例中，本發明的抗體片段包含，或任擇地由序 列辨識編號：35的多肽序列所組成。 於本發明的一個另外的實施例中，本發明的具有 20 TNF_a結合專一性的抗體片段包含’或任擇地由序列辨識編 號：36 ;序列辨識編號：37 ;和序列辨識編號：38的多肽 序列之一或多個所組成，其等係對應至序列辨識編號：34 的變異輕鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區）。 37 200911826 於本發明的j固另外的實施例中本發明的具有 警_α結合專—性的抗體片段包含，或任擇地*序列辨識編 號.39 ’序列辨識編號：4〇 ;和序列辨識編號：Μ的多肽 序列之-或多個所組成，其等係對應至序列辨識編號：％ 5的變異重鏈序列之互補決定區(CDRs，或高變區）。 本發明亦預期包括本文中說明的-或多個抗體片段 的抗體片段。於本發明的—個實施财，具有τΝρ·α結合專 性的抗體片段係包含，或任擇地由下列的抗體片段的 、一、二或更多個，包括全部，所組成：序列辨識編號： 10 34的變異輕鏈區；序列辨識編號：35的變異重鏈區；序列 辨識編號：34的變異輕鏈區之互補決定區（序列辨識編號： 36，序列辨識編號：37 ;和序列辨識編號：38);以及序 列辨識編號：35的變異重鏈區之互補決定區（序列辨識編 號.39 ’序列辨識編號：40 ;和序列辨識編號：41)。 15 於本發明的一個較佳的實施例中，該抗TNF-α抗體 係Ab3 ’其包含序列辨識編號：34與序列辨識編號：35，以 及具有至少一種本文提出的生物活性。 於另一個實施例中，本發明係包括具有TNF-α的結 合專一性且擁有一包含以下提出的序列之變異輕鏈序列的 20 抗體： MDTRAPTQLLGLLLLWLTGATFAAVLTQTPSPVSA VVGGTVSISCQSSKRVVNSVALSWYQQKPGRSPKLLIYFA SKLASGVPSRFKGSGSGTQFTLAISDVQCDDAATYYCAG HYTDSGDDA(序列辨識編號：50)。 38 200911826 本發明亦包括具有TNF-α的結合專一性且擁有包含 以下提出的序列之一變異重鏈序列之抗體： METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLT CTVSGLSLSTETINWVRQAPGKGLEWIGYIDSSGGTGYA 5 NWARGRFTISKTSTTVDLKITSPTTGDTATYFCARGTITTG MNI (序列辨識編號：51)。. 本發明進一步預期包含以下的抗體：序列辨識編 號：52 ;序列辨識編號：53 ;和序列辨識編號：54的多肽 序列之一或多個，其等係對應至序列辨識編號：50的變異 10 輕鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區），及/或序列辨識 編號_ 55 ;序列辨識編號：56 ;與序列辨識編號：57的多 肽序列之一或多個，其等係對應至序列辨識編號：51的變 異重鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區），或此等多肽 序列的組合。於本發明的另一個實施例中，本發明的抗體 15 包括以上提出的CDRs以及變異重與輕鏈序列之組合。 於另一個實施例中，本發明預期其他的抗體，如舉 例而言丧合抗體，其等包含序列辨識編號：52 ;序列辨識 編號.53，和序列辨識編號：54的多肽序列之一或多個， 其等係對應至序列辨識編號 :50的變異輕鏈序列之互補決 20 定區（CDRS，或高變區），及/或序列辨識編號：55 ;序列辨 識編號：56 ;與序列辨識編號：57的多肽序列之一或多個， 其等係對應至序列辨識編號：51的變異重鏈序列之互補決 定區（CDRs ’或高變區），或此等多肽序列的組合。於本發 39 200911826 明的另一個實施例中，本發明的机體包括以上提出的CDRs 以及變異重與輕鏈序列之組合。 本發明亦預期具有TNF-a結合專一性的抗體片段。 於本發明的一個實施例中’本發明的抗體片段包含，或任 5 擇地由序列辨識編號：50的多肽序列所組成。於本發明的 另一個實施例中，本發明的抗體片k包含，或任擇地由序 列辨識編號：51的多肽序列所組成。 於本發明的一個另外的實施例中，本發明的具有 TNF-a結合專一性的抗體片段包含’或任擇地由序列辨識編 10 號：52 ;序列辨識編號：53 ;和序列辨識編號：54的多肽 序列之一或多個所組成，其等係對應至序列辨識編號：50 的變異輕鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區）。 於本發明的一個另外的實施例中，本發明的具有 TNF-a結合專一性的抗體片段包含，或任擇地由序列辨識編 15 號：55 ;序列辨識編號：56 ;和序列辨識編號：57的多肽 序列之一或多個所組成’其等係對應至序列辨識編號：51 的變異重鏈序列之互補決定區（CDRs ,或高變區）。 本發明亦預期包括本文中說明的一或多個抗體片段 的抗體片段。於本發明的一個實施例中，具有TNF_a結合專 20 一性的抗體片段係包含，或任擇地由下列的抗體片段的 一、一、一或更夕個，包括全部，所組成：序列辨識編號： 50的％:異輕鏈區；序列辨識編號：51的變異重鏈區；序列 辨識編號：鏈區之互補決龍（序咖識編號： 52 ;序列辨識編號：53 ;和序列辨識編號：54);以及序 40 200911826 列辨識編號：51的變異重鏈區之互補決定區（序列辨識編 號：55 ;序列辨識編號：56 ;和序列辨識編號：57)。 於本發明的一個較佳的實施例中，該抗TNF-α抗體 係Ab4 ’其包含序列辨識編號：50與序列辨識編號：51，以 5 及具有至少一種本文提出的生物活性。 於另一個實施例中，本發明係包括具有TNF-a的結 合專一性且擁有一包含以下提出的序列之變異輕鏈序列的 抗體· MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATLAQVVTQTPASVS 10 AAVGGTVTISCQSSQNVYNNNDLVWFQQKPGQPPKRLV YWASTLASGVSSRFRGSGSGTQFILTISDLQCDDAATYYC AGAYDSEIRA(序列辨識編號：66)。
本發明亦包括具有TNF-a的結合專一性且擁有包含 以下提出的序列之一變異重鏈序列之抗體： 15 METGLRWLLLVAVLKGVQCQS VEESGGRLVTPGTPLTLT CAVSGFSLSVYWMTWVRQAPGKGLEWIGTISTDGITVYA TWAKGRFTISKTSSTAVDLKLTSPTTEDTATYFCAGGGGM DP (序列辨識編號：67)。 本發明進一步預期包含以下的抗體：序列辨識編 2〇 號：68 ;序列辨識編號：69 ;和序列辨識編號：70的多肽 序列之一或多個，其等係對應至序列辨識編號：66的變異 輕鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區），及/或序列辨識 編號：71 ;序列辨識編號：72 ;與序列辨識編號：73的多 肽序列之一或多個，其等係對應至序列辨識編號：67的變 41 200911826 異重鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區），或此等多肽 序列的組合。於本發明的另一個實施例中，本發明的抗體 包括以上提出的CDRs以及變異重與輕鏈序列之組合。 於另一個實施例中，本發明預期其他的抗體，如舉 5 例而言嵌合抗體，其等包含序列辨識編號：68 ;序列辨識 編號：69 ;和序列辨識編號：70的多肽序列之一或多個， 其等係對應至序列辨識編號：66的變異輕鏈序列之互補決 定區（CDRs ’或高變區），及/或序列辨識編號：71 ;序列辨 識編號：72;與序列辨識編號：73的多肽序列之一或多個， 10 其等係對應至序列辨識編號：67的變異重鏈序列之互補決 定區（CDRs，或高變區）’或此等多肽序列的組合。於本發 明的另一個實施例中’本發明的抗體包括以上提出的CDRs 以及變異重與輕鏈序列之組合。 本發明亦預期具有TNF-α結合專一性的抗體片段。 15 於本發明的一個實施例中’本發明的抗體片段包含，或任 擇地由序列辨識編號：66的多肽序列所組成。於本發明的 另一個實施例中，本發明的抗體片段包含，或任擇地由序 列辨識編號：67的多肽序列所組成。 於本發明的一個另外的實施例中，本發明的具有 2〇 TNF-a結合專一性的抗體片段包含，或任擇地由序列辨識編 號：68 ;序列辨識編號：69 ;和序列辨識編號：70的多狀 序列之一或多個所組成’其等係對應至序列辨識編號：66 的變異輕鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區）。 42 200911826 於本發明的-個另外的實施例中，本發明的具有 聊-α結合專-性的抗體諸包含，或任擇地由序列辨識編 唬.71，序列辨識編號：72 ;和序列辨識編號：乃的多肽 序列之-或多個所組成，其等係對應至序列辨識編號：67 5的變異重鏈序列之互補決定區（CDRS，或高變區）。 本發明亦預期包括本文中說明的一或多個抗體片段 的抗體片段。於本發明的一個實施例中，具有TNF_a結合專 一性的抗體片段係包含，或任擇地由下列的抗體片段的 一、二、二或更多個，包括全部，所組成：序列辨識編號： 10 66的變異輕鏈區；序列辨識編號：67的變異重鏈區；序列 辨識編號：66的變異輕鏈區之互補決定區（序列辨識編號： 68 ;序列辨識編號：69 ;和序列辨識編號：70);以及序 列辨識編號：67的變異重鏈區之互補決定區（序列辨識編 號· 71 ’序列辨識編號：72 ;和序列辨識編號：73)。 15 於本發明的一個較佳的實施例中，該抗TNF-α抗體 係Ab5，其包含序列辨識編號：66與序列辨識編號：67，以 及具有至少一種本文提出的生物活性。 於另一個實施例中，本發明係包括具有TNF-a的結 合專一性且擁有一包含以下提出的序列之變異輕鏈序列的 20 抗體： MDTRAPTQLLGLLLLWLPDARCAYDMTQTPASV EVAGGGTVTIKCQASQSIANRLAWYQQKPGQPPKLLIYY ASTLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISGVQCDDAATYYCQQ TYSDNNVDNA(序列辨識編號：82)。 43 200911826 本發明亦包括具有TNF-α的結合專一性且擁有包含 以下提出的序列之一變異重鏈序列之抗體： METGLRWLLLVAVFKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLT CTVSGFSLSSNTISWVRQAPGKGLEWIGYIWRGVSTYYA 5 TWAKGRFTISKTSSTTVDLKITGPTTEDTATYFCARDAGD GGGYSLDL (序列辨識編號：83)。 本發明進一步預期包含以下的抗體：序列辨識編 號：84 ;序列辨識編號：85 ;和序列辨識編號：86的多狀 序列之一或多個’其等係對應至序列辨識編號：82的變異 10 輕鏈序列之互補決定區(CDRs，或高變區），及/或序列辨識 編號：87 ;序列辨識編號：88 ;與序列辨識編號：89的多 肽序列之一或多個，其等係對應至序列辨識編號：83的變 異重鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區），或此等多肽 序列的組合。於本發明的另一個實施例中，本發明的抗體 15 包括以上提出的CDRs以及變異重與輕鏈序列之組合。 於另一個實施例中，本發明預期其他的抗體，如舉 例而言嵌合抗體，其等包含序列辨識編號：84 ;序列辨識 編號：85 ;和序列辨識編號：86的多肽序列之一或多個， 其等係對應至序列辨識編號：82的變異輕鏈序列之互補決 20定區（CDRs，或高變區），及/或序列辨識編號：87;序列辨 識編號：88 ;與序列辨識編號：89的多肽序列之一或多個， 其等係對應至序列辨識編號：83的變異重鏈序列之互補決 定區(CDRs’或高變區），或此等多肽序列的組合於本發 44 200911826 明的另-個實施例中，本發明的抗體包括以上提出的CDRs 以及變異重與輕鏈序列之組合。 本發明亦預期具有TNF_a結合專—性的抗體片段。 於本發明的一個實施例中，本發明的抗體片段包含，或任 5擇地由序列辨識編號：82的多肽序列所組成。於本發明的 另-個實施例中，本發明的抗體片段包含，或任擇地由序 列辨識編號：83的多肽序列所組成。 於本發明的一個另外的實施例中，本發明的具有 TNF-α結合專一性的抗體片段包含，或任擇地由序列辨識編 10號：84 ·’序列辨識編號·· 85 ;和序列辨識編號·· ％的多肽 序列之一或多個所組成，其等係對應至序列辨識編號：82 的變異輕鏈序列之互補決定區（CDRS，或高變區）。 於本發明的一個另外的實施例中，本發明的具有 TNF-α結合專一性的抗體片段包含，或任擇地由序列辨識編 15 说· 87，序列辨識編號.88，和序列辨識編號：89的多肽 序列之一或多個所組成，其等係對應至序列辨識編號：83 的變異重鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區）。 本發明亦預期包括本文中說明的一或多個抗體片段 的抗體片段。於本發明的一個實施例中，具有TNF_a結合專 20 一性的抗體片段係包含，或任擇地由下列的抗體片段的 一、二、三或更多個，包括全部，所組成：序列辨識編號： 82的變異輕鏈區·，序列辨識編號：83的變異重鏈區；序列 辨識編號· 82的變異輕鏈區之互補決定區（序列辨識編號： 84 ;序列辨識編號·· 85 ;和序列辨識編號·· 86);以及序 45 200911826 列辨識編號：83的變異重鏈區之互補決定區（序列辨識編 號：87 ;序列辨識編號：88 ;和序列辨識編號：89)。 於本發明的-個較佳的實施例中，該抗TNF_a抗體 係Ab6，其包含序列辨識編號_· 82與序列辨識編號：幻，以 5 及具有至少一種本文提出的生物活性。 於另一個實施例中，本發明係包括具有TNF a的結 合專一性且擁有一包含以下提出的序列之變異輕鏈序列的 抗體： MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCADIVMTQTPASV 10 EAAVGGTVTINCQASQSIVSWLAWYQQKPGQPPKLLIYG ASTLASGVPSRFKGSGSGTEYTLTISDLECADAATYYCQS NYGSNSHSFGNT (序列辨識編號：98)。
本發明亦包括具有TNF-a的結合專一性且擁有包含 以下提出的序列之一變異重鏈序列之抗體： 15 METGLRWLLLVAVLKGVQCQS VEESGGRLVTPGTPLTLT CTVSGFSLSSDNMGWVRQAPGKGLEYIGYITYGGFTYYA TWAKGRFTISKTSTTVDLKMTSPTTEDTATYFCAREAGG RANV (序列辨識編號：99)。 本發明進一步預期包含以下的抗體：序列辨識編 20 號：100 ;序列辨識編號：101 ;和序列辨識編號：102的多 肽序列之一或多個，其等係對應至序列辨識編號：98的變 異輕鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區）’及/或序列辨 識編號：103 ;序列辨識編號：1〇4 ;與序列辨識編號：105 的多肽序列之一或多個，其等係對應至序列辨識編號：99 46 200911826 的變異重鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區），或此等 多肽序列的組合。於本發明的另一個實施例中，本發明的 抗體包括以上提出的CDRs以及變異重與輕鏈序列之組 合0 5 於另一個實施例中，本發明預期其他的抗體，如舉 例而言嵌合抗體，其等包含序列辨識編號：100 ;序列辨識 編號：101 ;和序列辨識編號：102的多肽序列之一或多個， 其等係對應至序列辨識編號：98的變異輕鏈序列之互補決 定區（CDRs，或高變區），及/或序列辨識編號：1〇3 ;序列 10 辨識編號：1〇4 ;與序列辨識編號：105的多肽序列之—或 多個’其等係對應至序列辨識編號：99的變異重鏈序列之 互補決定區（CDRs，或高變區），或此等多肽序列的組合。 於本發明的另一個實施例中，本發明的抗體包括以上提出 的CDRs以及變異重與輕鍵序列之組合。 15 本發明亦預期具有TNF-α結合專一性的抗體片段。 於本發明的一個實施例中，本發明的抗體片段包含，或任 擇地由序列辨識編號：98的多肽序列所組成。於本發明的 另一個實施例中’本發明的抗體片段包含，或任擇地由序 列辨識編號：99的多肽序列所組成。 2〇 ^ , 於本發明的一個另外的實施例中，本發明的具有 TNF-a結合專一性的抗體片段包含，或任擇地由序列辨識編 號：10〇 ;序列辨識編號：101 ;和序列辨識編號：102的多 狀序列之—或多個所組成，其等係對應至序列辨識編號： 98的變異輕鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區）。 47 200911826 於本發明的一個另外的實施例中，本發明的具有 TNF-cx結合專一性的抗體片段包含，或任擇地由序列辨識編 號· 103 ’序列辨識編號：1〇4 ;和序列辨識編號u〇5的多 肽序列之一或多個所組成，其等係對應至序列辨識編號： 5 99的變異重鏈序列之互補決定區（CDRs ,或高變區）。 本發明亦預期包括本文中說明的一或多個抗體片段 的抗體片段。於本發明的一個實施例中，具有TNF_a結合專 一性的抗體片段係包含，或任擇地由下列的抗體片段的 一、二、三或更多個，包括全部，所組成：序列辨識編號： 10 98的變異輕鏈區；序列辨識編號：99的變異重鏈區；序列 辨識編號：98的變異輕鏈區之互補決定區（序列辨識編號： 100 ;序列辨識編號：1〇1 ;和序列辨識編號：1〇2);以及 序列辨識編號：99的變異重鏈區之互補決定區（序列辨識編 號：103 ;序列辨識編號：1〇4 ;和序列辨識編號：1〇5)。 15 於本發明的一個較佳的實施例中，該抗TNF-a抗體 係Ab7，其包含序列辨識編號：98與序列辨識編號：99，以 及具有至少一種本文提出的生物活性。 於另一個實施例中，本發明係包括具有TNF-a的結 合專一性且擁有一包含以下提出的序列之變異輕鏈序列的 20 抗體： MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCADIVMTQTPSSV SEPVGGTVTIMCQASQNIYSYLSWYQQKPGQPPKLLIYK ASTLASGVPSRFAGSGSGTDFTLTISDLECADAATYYCQS NYGSNSDSFGNA(序列辨識編號：114)。 48 200911826 本發明亦包括具有TNF-α的結合專一性且擁有包含 以下提出的序列之一變異重鏈序列之抗體： METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLT CTASGFSLSNYVMGWVRQAPGKGLEFIGYIAFGIGPYYAT 5 WAKGRFSISSTSSTTVDLTMTSLTPEDTATYFCARGDYSG NNI (序列辨識編號：115)。 本發明進一步預期包含以下的抗體：序列辨識編 號：116 ;序列辨識編號：117 ;和序列辨識編號：118的多 肽序列之一或多個，其等係對應至序列辨識編號：114的變 10 異輕鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區），及/或序列辨 識編號：119 ;序列辨識編號：120 ;與序列辨識編號：121 的多肽序列之一或多個，其等係對應至序列辨識編號：115 的變異重鏈序列之互補決定區(CDRs，或高變區），或此等 多肽序列的組合。於本發明的另一個實施例中，本發明的 15 抗體包括以上提出的CDRs以及變異重與輕鏈序列之組 合。 於另一個實施例中，本發明預期其他的抗體，如舉 例而言嵌合抗體，其等包含序列辨識編號：116 ;序列辨識 編號：117 ;和序列辨識編號：118的多肽序列之一或多個， 20 其等係對應至序列辨識編號：114的變異輕鏈序列之互補決 定區(CDRs，或高變區），及/或序列辨識編號：119 ;序列 辨識編號.120，與序列辨識編號· 121的多狀序列之一或 多個，其等係對應至序列辨識編號：115的變異重鏈序列之 互補決定區（CDRs ’或高變區），或此等多肽序列的組合。 49 200911826 於本發明的另-個實施例中，本發明的抗體包括以上提出 的CDRs以及變異重與輕鏈序列之級合。 本發明亦顏具有TNF讀合專—性的抗體片段。 於本發明的-個實施例中，本發明的抗體片段包含，或任 5擇地*序列辨識減：114的多肽序列所組成。於本發明的 另-個實施例中，本發明的抗體片段包含，或任擇地由序 列辨識編號：115的多肽序列所組成。 於本發明的一個另外的實施例中，本發明的呈有 -«結合專-性的抗體片段包含，或任擇地由序列辨識編 1〇號：序列辨識編號：116 ;序列辨識編號：117 ;和序列辨 識編號：m的多肽序列之-或多個所組成，其等係對摩至 序列辨識編號：m的變異輕鏈序列之互補決定區(cdrs， 或高變區）。 15 20 於本發明的-個另外的實施例中，本發明的具有 =F_a結合專—性的抗體片段包含，或任擇地由序列辨識編 ι 119 ’序列辨識編號：12G ;和序列辨識編號：121的多 ^序列之-❹個離成’料鑛應至序賴識編號： 5的變異重鏈序列之互補決定區(CDRs，或高變區卜 旧别巴秸丰文中說明的一或多個抗體片段 一抗體片段。於本發明的_個實施例中，具有結合專 :性的抗體片段係包含，或任擇地由下列的抗體片段的 一或更夕個’包括全部’所組成：序列辨識編號: 的變異輕鏈區；序列辨識編號：115的變異重鏈區；序 列辨識編號:114的變異輕鍵區之互補決定區(序列辨識編 50 200911826 號：116 ;序列辨識編號：n7 ;和序列辨識編號：118); 以及序列辨識編號：115的變異重鏈區之互補決定區（序列 辨識編號：119 ;序列辨識編號：120 ;和序列辨識編號： 121)。 5 於本發明的一個較佳的實施例中，該抗TNF-α抗體 係Ab8 ’其包含序列辨識編號：114與序列辨識編號：115， 以及具有至少一種本文提出的生物活性。 於另一個實施例中，本發明係包括具有TNF-a的結 合專一性且擁有一包含以下提出的序列之變異輕鏈序列的 10 抗體： MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAQVLTQTPSSVS AAVGGTVTVSCQSSQNVYNNNDFVWFQQKPGQPPKRLI YWASTLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTINDLECDDAATYY CAGAYITELRT (序列辨識編號：130)。 15 本發明亦包括具有TNF-a的結合專一性且擁有包含 以下提出的序列之一變異重鏈序列之抗體： METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLT CTVSGFSLSIYWMTWVRQAPGKGLEWIGVISTDGSAYYA TWAKGRFTISKTSSTTVDLRITSPTTEDTATYFCAGGGGM 20 DP (序列辨識編號：131)。 本發明進一步預期包含以下的抗體：序列辨識編 號：132 ;序列辨識編號：133 ;和序列辨識編號：134的多 肽序列之一或多個，其等係對應至序列辨識編號：130的變 異輕鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區），及/或序列辨 51 200911826 識編號.135 ;序列辨識編號：136 ;與序列辨識編號：i37 的多肽序列之一或多個，其等係對應至序列辨識編號：131 的、臭異重鍵序列之互補決定區（CDRs，或南變區），或此等 多肽序列的組合。於本發明的另一個實施例中，本發明的 5 抗體包括以上提出的CDRs以及變異重與輕鏈序列之組 合。 於另一個實施例中，本發明預期其他的抗體，如舉 例而言嵌合抗體，其等包含序列辨識編號：132 ;序列辨識 編號：133 ;和序列辨識編號：134的多肽序列之—或多個， 10 其等係對應至序列辨識編號：130的變異輕鏈序列之互補決 定區（CDRs，或高變區）’及/或序列辨識編號：135 ;序列 辨識編號：136 ;與序列辨識編號：137的多肽序列之一或 多個，其等係對應至序列辨識編號：131的變異重鏈序列之 互補決定區（CDRs，或高變區），或此等多肽序列的組合。 15 於本發明的另一個實施例中，本發明的抗體包括以上提出 的CDRs以及變異重與輕鍵序列之組合。 本發明亦預期具有TNF-α結合專一性的抗體片p 於本發明的一個實施例中，本發明的抗體片段包含，或任 擇地由序列辨識編號：130的多肽序列所組成。於本發明的 20 另一個實施例中，本發明的抗體片段包含，或住擇地由序 列辨識編號· 131的多狀序列所組成。 於本發明的一個另外的實施例中，本發明的具有 TNF-a結合專-性的抗體片段包含，或任擇地由序列辨識編 號：132 ;序列辨識編號：133 ;和序列辨識編號：134的多 52 200911826 5 f 10 15
肽序列之或夕個所組成，其替、對應至序列辨識編號： 13〇的變異輕鏈序列之互補決定區(cdRs，或高變區）。 於本發明的一個另外的實施例中，本發明的具有 TNF α、、σ σ專&的抗體#段包含，或任擇地由序列辨識編 號：序列辨識編號：136 :和序列辨識編號：賴多 肽序列之—或多_組成，其㈣職至序_識編號： 131的變異_㈣之互補決定區(CDRS，或高變區）。 本f明亦預期包括本文中說明的—或多個抗體片段 的抗體^段。於本發明的—個實施例中，具有TNF_a結合專 一性的抗體片段係包含，或任擇地由下列的抗體片段的 一或更多個’包括全部’所組成：序列辨識編號: 130的變異輕鏈區；序列辨識編號：131的變異重鏈區；序 列辨識編號：13G的變異輕鏈區之互補決定區（序列辨識編 號：132，序列辨識編號：133 ;和序列辨識編號：134); 以及序列辨識編號：131的變異重鏈區之互補決定區（序列 辨識編號：135;序列辨識編號：136;和序列辨識編號： 137)。 於本發明的-個較佳的實施例中，該抗TNF_a抗體 係Ab9，其包含序列辨識編號：130與序列辨識編號.131， 20 以及具有至少一種本文提出的生物活性。 於另-個實施例中，本發明係包括具有TNFa的結 合專-性且擁有-包含以下提出的序列之變異輕鏈序列的 抗體： 53 200911826 MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAQVLTQTASSVS AAVGGTVTISCQSSQSVYNNNDFIWFQQKPGQPPKRLIY WASTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTINDLECDDAAVYYC AGAYDSEVRA(序列辨識編號：146)。 5 本發明亦包括具有TNF-α的結合專一性且擁有包含 以下提出的序列之一變異重鏈序列之抗體： METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLT CTVSGFSLSIYWMTWVRQAPGRGLEWIGVISTDGTTYYA NWAKGRFTISKASSTTVDLRITSPTTEDTATYFCAGGGGM 10 DP (序列辨識編號：147)。 本發明進一步預期包含以下的抗體：序列辨識編 號：148 ;序列辨識編號：149 ;和序列辨識編號：150的多 肽序列之一或多個，其等係對應至序列辨識編號：146的變 異輕鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區），及/或序列辨 15 識編號：151 ;序列辨識編號：152 ;與序列辨識編號：153 的多肽序列之一或多個，其等係對應至序列辨識編號：147 的變異重鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區），或此等 多肽序列的組合。於本發明的另一個實施例中，本發明的 抗體包括以上提出的CDRs以及變異重與輕鏈序列之組 20 合。 於另一個實施例中，本發明預期其他的抗體，如舉 例而言嵌合抗體，其等包含序列辨識編號：148 ;序列辨識 編號：149;和序列辨識編號：15〇的多肽序列之一或多個， 其等係對應至序列辨識編號：146的變異輕鏈序列之互補決 54 200911826 定區(CDRs，或高變區），及/或序列辨識編號：i5i ;序列 辨識編號：152 ;與序列辨識編號：153的多狀序列之一或 多個’其等係對應至序列辨識編號：147的變異重鏈序列之 互補決定區（CDRs，或高變區），或此等多肽序列的組合。 5於本發明的另-個實施例中，本發明的抗體包括以上提出 的CDRs以及變異重與輕鏈序列之組合。 本發明亦預期具有TNF-α結合專一性的抗體片段。 於本發明的-個實施例中，本發明的抗體片段包含，或任 擇地由序列辨識編號：146的多肽序列所組成。於本發明的 10另-個實_中，本發_抗體片段包含，或任擇地由序 列辨識編號：147的多肽序列所組成。 於本發明的一個另外的實施例中，本發明的具有 TNF-α結合專一性的抗體片段包含，或任擇地由序列辨識編 號· 148，序列辨識編號：149 ;和序列辨識編號：15〇的多 15 肽序列之一或多個所組成，其等係對應至序列辨識編號： 146的變異輕鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區）。 於本發明的一個另外的實施例中，本發明的具有 T N F - a結合專一性的抗體片段包含，或任擇地由序列辨識編 號：151 ;序列辨識編號·· 152 ;和序列辨識編號：ι53的多 20 肽序列之一或多個所組成，其等係對應至序列辨識編號： 147的變異重鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區）。 本發明亦預期包括本文中說明的一或多個抗體片段 的抗體片段。於本發明的一個實施例中，具有TNF-a結合專 一性的抗體片段係包含’或任擇地由下列的抗體片段的 55 200911826 一、—、二或更多個，包括全部’所組成.序列辨識編號. 146的變異輕鏈區；序列辨識編號：147的變異重鏈區；序 列辨識編號：146的變異輕鏈區之互補決定區（序列辨識編 號：148 ;序列辨識編號：149 ;和序列辨識編號：15〇); 5 以及序列辨識編號：147的變異重鏈區之互補決定區（序列 辨識編號：151 ;序列辨識編號：152 ;和序列辨識編號： 153)。 於本發明的一個較佳的實施例中，該抗TNF-α抗體 係AblO,其包含序列辨識編號：146與序列辨識編號：147 , 10 以及具有至少一種本文提出的生物活性。 於另一個實施例中，本發明係包括具有TNF-α的結 合專一性且擁有一包含以下提出的序列之變異輕鏈序列的 抗體： MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAQVMTQTPASVS 15 AAVGGTVTISCQSSESVYNNNDLIWFRQKPGQPPKRLIY WASQLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTINDLECDDAATYYC AGAYDSEIRA(序列辨識編號：162)。 本發明亦包括具有TNF-a的結合專一性且擁有包含 以下提出的序列之一變異重鏈序列之抗體： 20 METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLT CTVSGFSLSIYWMTWVRQAPGKGLEWIGVIASDGSTYYA SWAKGRFTISKASSTTVDLKIASPTIEDTATYFCAGGGGM DP (序列辨識編號：163)。 56 200911826 本發明進一步預期包含以下的抗體：序列辨識編 號：164 ;序列辨識編號：165 ;和序列辨識編號：166的多 肽序列之一或多個，其等係對應至序列辨識編號：162的變 異輕鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區），及/或序列辨 5 識編號：167 ;序列辨識編號：168 ;與序列辨識編號：169 的多肽序列之一或多個，其等係對應至序列辨識編號：163 的變異重鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區），或此等 多肽序列的組合。於本發明的另一個實施例中，本發明的 抗體包括以上提出的CDRs以及變異重與輕鏈序列之組 10 合。 於另一個實施例中，本發明預期其他的抗體，如舉 例而言嵌合抗體，其等包含序列辨識編號：164 ;序列辨識 編號.16 5 ’和序列辨識編號：16 6的多狀序列之一或多個， 其等係對應至序列辨識編號：162的變異輕鏈序列之互補決 15 定區（CDRs，或高變區）’及/或序列辨識編號：167 ;序列 辨識編號：168 ;與序列辨識編號：169的多肽序列之一或 多個，其等係對應至序列辨識編號：163的變異重鏈序列之 互補決定區（CDRs，或高變區），或此等多肽序列的組合。 於本發明的另一個實施例中，本發明的抗體包括以上提出 2〇 的CDRs以及變異重與輕鏈序列之組合。 本發明亦預期具有TNF-α結合專一性的抗體片段。 於本發明的—個實施例中，本發明的抗體片段包含，或任 擇地由序列辨識編號：162的多肽序列所組成。於本發明的 57 200911826 另一個實施例中，本發明 W如體片段包含，或任擇地由序 列辨識編號：163的多肽序列所組成。 於本發明的一個另& 卜的實施例中，本發明的具有 TNF-α結合專一性的抗體片 5 10 15 5奴包含’或任擇地由序列辨識編 號：164 ;序列辨識編號：丨 165，和序列辨識編號：166的多 肽序列之-或多個频成，料係對應至序顺識編號： 162的變異輕鏈相之細枝邮DRS，《變區）。 於本發明的-個另外的實施例中，本發明的具有 TNF-a結合專-性的抗㈣段包含，或任擇地由序列辨識編 5虎· 167，序列辨識編號：168 ;和序列辨識編號：169的多 肽序列之所組成’其等係對應至序列辨識編號： 163的變異重鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區）。 本發明亦預期包括本文中說明的一或多個抗體片段 的抗體片段。於本發明的一個實施例中，具有TNF_a結合專 一性的抗體片段係包含’或任擇地由下列的抗體片段的 一、二、三或更多個，包括全部，所組成：序列辨識編號： 162的變異輕鏈區；序列辨識編號：163的變異重鏈區；序 列辨識編號：162的變異輕鏈區之互補決定區（序列辨識編 號：164 ;序列辨識編號：165 ;和序列辨識編號：166)； 20 以及序列辨識編號：163的變異重鏈區之互補決定區（序列 辨識編號：167 ;序列辨識編號：168 ;和序列辨識編號： 58 169)。 200911826 於本發明的一個較佳的實施例中，該抗TNF-α抗體 係Abll，其包含序列辨識編號：162與序列辨識編號：163， 以及具有至少一種本文提出的生物活性。 於另一個實施例中，本發明係包括具有TNF-α的結 5 合專一性且擁有一包含以下提出的序列之變異輕鏈序列的 抗體： MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCALVMTQTPSPVS AAVGGTVTISCQSSESVVFNNRLSWYQQKPGQPPKLLIY WASTLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTISGVECDDAATYYC 10 AGYKSYSNDDFA (序列辨識編號：178)。 本發明亦包括具有TNF-α的結合專一性且擁有包含 以下提出的序列之一變異重鏈序列之抗體： METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLT CTVSGFSLSHYAMGWVRQAPGKGLEWIGIISSNGVTYYA 15 TWASGRFTISKTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARGDDTSI IYYIYAFDL (序列辨識編號：179)。 本發明進一步預期包含以下的抗體：序列辨識編 號：180 ;序列辨識編號：181 ;和序列辨識編號：182的多 肽序列之一或多個，其等係對應至序列辨識編號：178的變 2〇 異輕鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區），及/或序列辨 識編號：183 ;序列辨識編號：184 ;與序列辨識編號：185 的多肽序列之一或多個，其等係對應至序列辨識編號：179 的變異重鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區），或此等 多肽序列的組合。於本發明的另一個實施例中，本發明的 59 200911826 抗體包括以上提出的CDRs以及變異重與輕鍵序列之組 合。 於另一個實施例中，本發明預期其他的抗體，如舉 例而言嵌合抗體，其等包含序列辨識編號：180 ;序列辨識 5 編就· 181，和序列辨識編號：182的多狀序列之一或多個， 其等係對應至序列辨識編號：178的變異輕鏈序列之互補決 定區(CDRs，或高變區）’及/或序列辨識編號：183 ;序列 辨識編號：184 ;與序列辨識編號：185的多肽序列之一或 多個，其等係對應至序列辨識編號：179的變異重鏈序列之 10 互補決定區（CDRs，或高變區），或此等多肽序列的組合。 於本發明的另一個實施例中，本發明的抗體包括以上提出 的CDRs以及變異重與輕鏈序列之組合。 本發明亦預期具有TNF-α結合專一性的抗體片段。 於本發明的一個實施例中，本發明的抗體片段包含，或任 15 擇地由序列辨識編號：178的多肽序列所組成。於本發明的 另一個實施例中’本發明的抗體片段包含，或任擇地由序 列辨識編號：Π9的多肽序列所組成。 於本發明的一個另外的實施例中，本發明的具有 TNF-a結合專一性的抗體片段包含’或任擇地由序列辨識編 20 號：180 ;序列辨識編號：181 ;和序列辨識編號：182的多 肽序列之一或多個所組成’其等係對應至序列辨識編號： 178的變異輕鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區）。 於本發明的一個另外的實施例中，本發明的具有 TNF-a結合專一性的抗體片段包含，或任擇地由序列辨識編 60 200911826 號：183 ;序列辨識編號：184 ;和序列辨識編號：ι85的多 肽序列之~或多個所組成，其等係對應至序列辨識編號： 179的變異重鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區）。 本發明亦預期包括本文中說明的一或多個抗體片段 5 的抗體片段。於本發明的一個實施例中，具有TNF-α結合專 一性的抗體片段係包含，或任擇地由下列的抗體片段的 一、二、三或更多個，包括全部，所組成：序列辨識編號： 178的變異輕鏈區；序列辨識編號：179的變異重鏈區；序 列辨識編號：Π8的變異輕鏈區之互補決定區（序列辨識編 10 號：180 ;序列辨識編號：181 ;和序列辨識編號：182); 以及序列辨識編號：179的變異重鏈區之互補決定區（序列 辨識編號：183 ;序列辨識編號：184 ;和序列辨識編號： 185)。 於本發明的一個較佳的實施例中，該抗TNF-α抗體 15 係八^>12 ’其包含序列辨識編號：178與序列辨識編號：179， 以及具有至少一種本文提出的生物活性。 於另一個實施例中’本發明係包括具有TNF-a的結 合專一性且擁有一包含以下提出的序列之變異輕鏈序列的 机體·
20 MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCADIVMTQTPASV SEPVGGTVTIKCQASQNIYSTLAWYQQKPGQPPKLLIYLA STLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTISDLECADAATYYCQTS HGSNSDSFGYA(序列辨識編號：194)。 61 200911826 本發明亦包括具有TNF-α的結合專一性且擁有包含 以下提出的序列之一變異重鏈序列之抗體： METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLT CTVSGIDLSSYAMGWVRQAPGKGLEYIGYILSSGITYYAS 5 WARGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARNGNY NSGTDI (序列辨識編號：195)。 本發明進一步預期包含以下的抗體：序列辨識編 號：196 ;序列辨識編號：197 ;和序列辨識編號：198的多 肽序列之一或多個，其等係對應至序列辨識編號：194的變 10 異輕鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區），及/或序列辨 識編號：199 ;序列辨識編號：200 ;與序列辨識編號：2〇1 的多肽序列之一或多個，其等係對應至序列辨識編號：195 的變異重鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區），或此等 多肽序列的組合。於本發明的另一個實施例中，本發明的 15 抗體包括以上提出的CDRs以及變異重與輕鏈序列之組 合。 於另一個實施例中，本發明預期其他的抗體，如舉 例而言嵌合抗體，其等包含序列辨識編號：196 ;序列辨識 編號：197 ;和序列辨識編號：198的多肽序列之一或多個， 其等係對應至序列辨識編號：194的變異輕鏈序列之互補決 定區（CDRs，或高變區），及/或序列辨識編號：199 ;序列 辨識編號：200 ;與序列辨識編號：2〇1的多肽序列之一或 多個，其等係對應至序列辨識編號：195的變異重鏈序列之 互補決定區（CDRs，或高變區），或此等多肽序列的組合。 62 200911826 ;發月的另一個實施例中，本發明的抗體包括以上提出 的CDRS以及變異重與輕鏈序列之組合。 、 本發明亦預期具有TNF-α結合專一性的抗體片段。 ;本發明的—個實施例中，本發明的抗體片段包含，或任 擇也由序列辨識編號：194的多肽序列所組成。於本發明的 另—個實施例十，本發明的抗體片段包含，或任擇地由序 列辨識編號：195的多肽序列所組成。 於本發明的一個另外的實施例中，本發明的具有 T N F - α結合專一性的抗體片段包含，或任擇地由序列辨識 1 〇 口电 現：196 ;序列辨識編號：197 ;和序列辨識編號：198的多 肽序列之一或多個所組成，其等係對應至序列辨識編號： 194的變異輕鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區）。 於本發明的一個另外的實施例中，本發明的具有 TNF-a結合專一性的抗體片段包含，或任擇地由序列辨識編 號.199 ’序列辨識編號：2〇〇 ;和序列辨識編號：2〇1的多 肽序列之一或多個所組成，其等係對應至序列辨識編號： 195的變異重鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區）。 本發明亦預期包括本文中說明的一或多個抗體片段 的抗體片段。於本發明的一個實施例中，具有TNF_a結合專 〇 —性的抗體片段係包含，或任擇地由下列的抗體片段的 —、二、三或更多個，包括全部，所組成：序列辨識編號： 194的變異輕鏈區；序列辨識編號：195的變異重鏈區；序 列辨識編號：194的變異輕鏈區之互補決定區（序列辨識編 號：196 ;序列辨識編號·· 197 ;和序列辨識編號：198) ·， 63 200911826 以及序列辨識編號：195的變異重鏈區之互補決定區（序列 辨識編谠· 199 ;序列辨識編號：2〇〇 ;和序列辨識編號： 201)。 於本發明的一個較佳的實施例中，該抗TNF_a抗體 5 係八^3，其包含序列辨識編號：194與序列辨識編號：195， 以及具有至少一種本文提出的生物活性。 於另一個實施例中’本發明係包括具有TNF_a的結 合專一性且擁有一包含以下提出的序列之變異輕鏈序列的 抗體：
10 MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCADIVMTQTPASV SEPVGGTVTIKCQASQNIYSTLAWYQQKPGQPPKLLIYLA STLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTISDLECADAATYYCQTN HGSNSDSFGYA(序列辨識編號：210)。 本發明亦包括具有TNF-a的結合專一性且擁有包含 15 以下提出的序列之一變異重鏈序列之抗體： METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLT CTVSGFSLSSYAMGWVRQAPGKGLEYIGYIGSSGITYYTS WARGRFTISKPSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARNGNY NSGTDI (序列辨識編號：211)。 20 本發明進一步預期包含以下的抗體：序列辨識編 號：212 ;序列辨識編號：213 ;和序列辨識編號：214的多 肽序列之一或多個，其等係對應至序列辨識編號：210的變 異輕鏈序列之互補決定區(CDRs，或高變區）’及/或序列辨 識編號：215 ;序列辨識編號：216 ;與序列辨識編號：217 64 200911826 的多肽序列之-或多個，其等係對應至序列辨識編號：2ΐι 的變異重鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區），或此等 多肽序列的組合。於本發明的另一個實施例中，本發明的 抗體包括以上提出的CDRs以及變異重與輕鏈序列之組 5 合。 ' 於另-個實施例中，本發明預期其他的抗體，如舉 例而言彼合抗體，其等包含序列辨識編號：212;序列辨識 編號：213 ;和序列辨識編號：214的多肽序列之—或多個， 其等係對應至序列辨識編號：210的變異輕鏈序列之互補決 1〇疋區（CDRs ’或南變區），及/或序列辨識編號：215 ;序列 辨識編號：216 ;與序列辨識編號：217的多肽序列之一或 多個，其等係對應至序列辨識編號：211的變異重鍵序列之 互補決定區（CDRs，或高變區），或此等多狀序列的組合。 於本發明的另-個實施例中，本發明的抗體包括以上提出 15的CDRs以及變異重與輕鏈序列之組合。 本發明亦預期具有TNF_a結合專—性的抗體片段。 於本發明的—個實施例中，本發明的抗體片段包含，或任 擇地由序列辨識編號：21G的纽序列所組成。於本發明的 另一個實施例中，本發明的抗體片段包含，或任擇地由序 20列辨識編號：211的多肽序列所組成。 於本發明的-個另外的實施例中，本發明的且有 fNF-a結合專抗體片段包含，或任擇地由序列辨識編 ’序列辨識編號：2⑴和序列辨識編號：214的多 65 200911826 肽序列之一或多個所組成，其等係對應至序列辨識編號： 210的變異輕鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區）。 於本發明的一個另外的實施例中，本發明的具有 TNF-α結合專一性的抗體片段包含，或任擇地由序列辨識編 5 號：215 ;序列辨識編號：216 ;和序列辨識編號：217的多 肽序列之一或多個所組成，其等係對應至序列辨識編號： 211的變異重鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區）。 本發明亦預期包括本文中說明的一或多個抗體片段 的抗體片段。於本發明的一個實施例中，具有TNF-α結合專 10 一性的抗體片段係包含，或任擇地由下列的抗體片段的 一、二、三或更多個，包括全部，所組成：序列辨識編號： 210的變異輕鏈區；序列辨識編號：211的變異重鏈區；序 列辨識編號：210的變異輕鏈區之互補決定區（序列辨識編 號：212 ;序列辨識編號：213 ;和序列辨識編號：214)； 15 以及序列辨識編號：211的變異重鏈區之互補決定區（序列 辨識編號：215 ;序列辨識編號：216 ;和序列辨識編號： 217)。 於本發明的一個較佳的實施例中，該抗TNF-α抗體 係Abl4,其包含序列辨識編號：210與序列辨識編號：211， 20 以及具有至少一種本文提出的生物活性。 於另一個實施例中，本發明係包括具有TNF-a的結 合專一性且擁有一包含以下提出的序列之變異輕鏈序列的 抗體： 66 200911826 MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCADIVMTQTPASV SEPVGGTVTIKCQASQSIYSSFSWYQQIPGQRPKLLIYYAS TLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISDLECADAATYYCQSNH GSNGDSFGNA(序列辨識編號：226)。 5 本發明亦包括具有TNF-α的結合專一性且擁有包含 以下提出的序列之一變異重鏈序列之抗體·· METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVSPGTPLTLT CTVSGIDLSSYGMGWVRQAPGKGLEYIGYMIASGITYYA AWAKGRFTISKTSSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARNYYG 10 MDP (序列辨識編號：227)。 本發明進一步預期包含以下的抗體：序列辨識編 號：228 ;序列辨識編號：229 ;和序列辨識編號：230的多 肽序列之一或多個，其等係對應至序列辨識編號：226的變 異輕鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區），及/或序列辨 15 識編號：231 ;序列辨識編號：232 ;與序列辨識編號：233 的多肽序列之一或多個，其等係對應至序列辨識編號：227 的變異重鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區），或此等 多肽序列的組合。於本發明的另一個實施例中，本發明的 抗體包括以上提出的CDRs以及變異重與輕鏈序列之組 20 合。 於另一個實施例中，本發明預期其他的抗體，如舉 例而言嵌合抗體，其等包含序列辨識編號：228 ;序列辨識 編號：229;和序列辨識編號：230的多肽序列之一或多個， 其等係對應至序列辨識編號：226的變異輕鏈序列之互補決 67 200911826 定區(CDRs，或高變區），及/或序歹丨J辨識編號：231 ;序列 辨識編號：232 ;與序列辨識編號：233的多肽序列之一或 多個，其等係對應至序列辨識編號：227的變異重鏈序列之 互補決定區（CDRs，或高變區），或此等多肽序列的組合。 5 於本發明的另一個實施例中，本發明的抗體包括以上提出 的CDRs以及變異重與輕鏈序列之組合。 本發明亦預期具有TNF-α結合專一性的抗體片段。 於本發明的一個實施例中，本發明的抗體片段包含，或任 擇地由序列辨識編號：226的多肽序列所組成。於本發明的 10 另一個實施例中，本發明的抗體片段包含，或任擇地由序 列辨識編號：227的多肽序列所組成。 於本發明的一個另外的實施例中，本發明的具有 TNF-a結合專一性的抗體片段包含，或任擇地由序列辨識編 號：228 ;序列辨識編號：229 ;和序列辨識編號：230的多 15 肽序列之一或多個所組成，其等係對應至序列辨識編號： 226的變異輕鏈序列之互補決定區（cdrs，或高變區）。 於本發明的一個另外的實施例中，本發明的具有 TNF-a結合專一性的抗體片段包含，或任擇地由序列辨識編 號：231，序列辨識編號：232 ;和序列辨識編號：233的多 20肽序列之一或多個所組成，其等係對應至序列辨識編號： 227的變異重鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區）。 本發明亦預期包括本文中說明的一或多個抗體片段 的抗體片段。於本發明的一個實施例中，具有TNF_a結合專 性的抗體片段係包含，或任擇地由下列的抗體片段的 68 200911826 一、二、三或更多個’包括全部，所組成：序列辨識編號： 226的變異輕鏈區；序列辨識編號：227的變異重鏈區；序 列辨識編號：226的變異輕鏈區之互補決定區（序列辨識編 號：228 ;序列辨識編號：229 ;和序列辨識編號：230); 以及序列辨識編號：227的變異重鏈區之互補決定區（序列 辨識編號：231 ;序列辨識編號：232 ;和序列辨識編號： 233)。 於本發明的一個較佳的實施例中，該抗TNF-α抗體 係Abl5，其包含序列辨識編號：226與序列辨識編號：227， 1〇 以及具有至少一種本文提出的生物活性。 於另一個實施例中，本發明係包括具有TNF-a的結 合專一性且擁有一包含以下提出的序列之變異輕鏈序列的 抗體： MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCADIVMTQTPASV 15 SEPVGGTVTIKCQASQTIYSSLSWYQQKPGQRPKLLIYAA STLASGVPSRFKGSGSGTDFTLTISDLECADAATYYCQSN HGSNSDSYGNA(序列辨識編號：242)。 本發明亦包括具有TNF-a的結合專一性且擁有包含 以下提出的序列之一變異重鏈序列之抗體： 20 METGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGRLVKPDETLTITC TVSGIDLNNYNMGWVRQAPGKGLEYIGYILGSGITYYAT WAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCAGSIYYR GYGMDP (序列辨識編號：243)。 69 200911826 本發明進一步預期包含以下的抗體：序列辨識編 號：244 ;序列辨識編號：245 ;和序列辨識編號：246的多 肽序列之一或多個’其等係對應至序列辨識編號：242的變 異輕鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區），及/或序列辨 5 識編號：247 ;序列辨識編號：248 ;與序列辨識編號：249 的多肽序列之一或多個’其等係對應至序列辨識編號：243 的變異重鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區），或此等 多肽序列的組合。於本發明的另一個實施例中，本發明的 抗體包括以上提出的CDRs以及變異重與輕鏈序列之組 10 合。 於另一個實施例中，本發明預期其他的抗體，如舉 例而言嵌合抗體，其等包含序列辨識編號：244 ;序列辨識 編號：245 ’和序列辨識編號.246的多狀序列之一或多個， 其等係對應至序列辨識編號：242的變異輕鏈序列之互補決 15 定區（CDRs ’或高變區）’及/或序列辨識編號：247 ;序列 辨識編號：248 ;與序列辨識編號：249的多肽序列之一或 多個’其等係對應至序列辨識編號：243的變異重鍵序列之 互補決定區（CDRs，或高變區）’或此等多肽序列的組合。 於本發明的另一個實施例中’本發明的抗體包括以上提出 20 的CDRs以及變異重與輕鏈序列之組合。 本發明亦預期具有TNF-α結合專—性的抗體片段。 於本發明的一個實施例中，本發明的抗體片段包含，或任 擇地由序列辨識編號：242的多肽序列所組成。於本發明的 70 200911826 另一個實施例中，本發明的抗體片段包含，或任擇地由序 列辨識編號：243的多肽序列所組成。 於本發明的一個另外的實施例中，本發明的具有 TNF-α結合專一性的抗體片段包含’或任擇地由序列辨識編 5 號：244 ;序列辨識編號：245 ;和序列辨識編號：246的多 肽序列之一或多個所組成’其等係對應至序列辨識編號： 242的變異輕鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區）。 於本發明的一個另外的實施例中，本發明的具有 TNF-a結合專一性的抗體片段包含，或任擇地由序列辨識編 10 號：247 ;序列辨識編號：248 ;和序列辨識編號：249的多 肽序列之一或多個所組成，其等係對應至序列辨識編號： 243的變異重鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區）。 本發明亦預期包括本文中說明的_或多個抗體片段 的抗體片段。於本發明的一個實施例中，具有TNF_a結合專 15 -性的抗體片段係包含’或任擇地由下列的抗體片段的 -、二、三或更多個，包括全部，戶斤組成：序列辨識編號： 242的變異輕鏈區；序列辨識編號：243的變異重鍵區；序 列辨識編號：242的變異輕鏈區之互補決定區（序列辨識編 號：244 ;序列辨識編號：245 ;和序列辨識編號：夠； 20以及序列辨識編號：243的變異重鏈區之互補決定區（序列 辨識編號：247 ;序列辨識編號：248 ;和序列辨識編號： 249)。 71 200911826 於本發明的一個較佳的實施例中，該抗TNF_a抗體 係Abl6，其包含序列辨識編號：242與序列辨識編號：243， 以及具有至少一種本文提出的生物活性。 於另一個實施例中，本發明係包括具有TNF-a的結 5 合專一性且擁有一包含以下提出的序列之變異輕鏈序列的 抗體. MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCADIVMTQTPASV SEPVGGTVTIKCQASQSIYSTLAWYQQKPGQPPKLLISLA STLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTISDLECADAATYYCQTN 10 HGSNSDSFGYA(序列辨識編號：258)。 本發明亦包括具有TNF-a的結合專一性且擁有包含 以下提出的序列之一變異重鏈序列之抗體： METGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGRLVTPGGSLTLT CTVSGIDLSSYAMGWVRQAPGKGLEYIGYVLGSGITYYA 15 SWARGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCVRNDNY NSGTDI (序列辨識編號：259)。 本發明進一步預期包含以下的抗體：序列辨識編 號：260 ;序列辨識編號：261 ;和序列辨識編號：262的多 肽序列之一或多個，其等係對應至序列辨識編號：258的變 2〇 異輕鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區），及/或序列辨 識編號：263 ;序列辨識編號：264 ;與序列辨識編號：265 的多肽序列之一或多個，其等係對應至序列辨識編號：259 的變異重鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區），或此等 多肽序列的組合。於本發明的另一個實施例中，本發明的 72 200911826 抗體包括以上提出的CDRs 合0 以及變異重與輕鍵序列之組 於另-個實施例中，本發明預期其他的抗體，如舉 例而言嵌合抗體， 其等包含序列辨識編號·· 26〇 ;序列辨識
;與序列辨識編號：265的多肽序列之一或 多個’其等係對應至序列辨識編號：259的變異重鏈序列之 1〇互補決定區(CDRs，或高變區），或此等多肽序列的組合。 於本發明的另-個實施例中，本發明的抗體包括以上提出 的CDRs以及變異重與輕鏈序列之組合。 本發明亦預期具有T N F _ α結合專一性的抗體片段。 於本發明的一個實施例中，本發明的抗體片段包含，或任 15擇地由序列辨識編號：258的多肽序列所組成。於本發明的 另一個實施例中，本發明的抗體片段包含，或任擇地由序 列辨識編號：259的多肽序列所組成。 於本發明的一個另外的實施例中，本發明的具有 TNF-α結合專一性的抗體片段包含，或任擇地由序列辨識編 20 號：260 ;序列辨識編號：261 ;和序列辨識編號：262的多 肽序列之一或多個所組成，其等係對應至序列辨識編號： 258的變異輕鏈序列之互補決定區（CDRS，或高變區）。 於本發明的一個另外的實施例中，本發明的具有 TNF-ct結合專一性的抗體片段包含，或任擇地由序列辨識編 73 200911826 號：263 ;序列辨識編號：264 ;和序列辨識編號：265的多 肽序列之一或多個所組成，其等係對應至序列辨識編號： 259的變異重鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區）。 本發明亦預期包括本文中說明的一或多個抗體片段 5 的抗體片段。於本發明的一個實施例中’具有TNF-α結合專 一性的抗體片段係包含，或任擇地由下列的抗體片段的 一、二、三或更多個，包括全部，所組成：序列辨識編號： 258的變異輕鏈區；序列辨識編號：259的變異重鏈區；序 列辨識編號：258的變異輕鏈區之互補決定區（序列辨識編 10 號：260 ;序列辨識編號：261 ;和序列辨識編號：262); 以及序列辨識編號：259的變異重鏈區之互補決定區（序列 辨識編號：263 ;序列辨識編號：264 ;和序列辨識編號： 265)。 於本發明的一個較佳的實施例中，該抗TNF-ct抗體 15 係Abl7,其包含序列辨識編號：258與序列辨識編號：259， 以及具有至少一種本文提出的生物活性。 於另一個實施例中，本發明係包括具有TNF-α的結 合專一性且擁有一包含以下提出的序列之變異輕鏈序列的 抗體：
20 MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCADIVMTQTPASV SEPVGGTVTIKCQASQNIYSTLAWYQQKPGQPPKLLIYLA STLESGVPSRFKGSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCQTS HGSNSESFGYA(序列辨識編號：274)。 74 200911826 本發明亦包括具有TNF-α的結合專一性且擁有包含 以下提出的序列之一變異重鏈序列之抗體： METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLT CTVSGIDLSSYAMGWVRQAPGKGLEYIGYILSSGITYYAS 5 WARGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCVRNGNY NVGTDI (序列辨識編號：275)。 本發明進一步預期包含以下的抗體：序列辨識編 號：276 ;序列辨識編號：277 ;和序列辨識編號：278的多 肽序列之一或多個，其等係對應至序列辨識編號：274的變 10 異輕鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區），及/或序列辨 識編號：279 ;序列辨識編號：280 ;與序列辨識編號：281 的多肽序列之一或多個，其等係對應至序列辨識編號：275 的變異重鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區），或此等 多肽序列的組合。於本發明的另一個實施例中，本發明的 15 抗體包括以上提出的CDRs以及變異重與輕鏈序列之組 合。 於另一個實施例中，本發明預期其他的抗體，如舉 例而言嵌合抗體，其等包含序列辨識編號：276 ;序列辨識 編號：277 ;和序列辨識編號：278的多肽序列之—或多個， 20 其等係對應至序列辨識編號：274的變異輕鏈序列之互補決 定區（CDRs ’或高變區），及/或序列辨識編號：279 ;序列 辨識編號：280 ;與序列辨識編號：281的多肽序列之一或 多個，其等係對應至序列辨識編號：275的變異重鍵序列之 互補決定區（CDRs，或高變區），或此等多肽序列的組合。 75 200911826 於本發明的另一個實施例中，本發明的抗體包括以上提出 的CDRs以及變異重與輕鏈序列之組合。 本發明亦預期具有TNF-ot結合專一性的抗體片段。 於本發明的一個實施例中，本發明的抗體片段包含，或任 5 擇地由序列辨識編號：274的多肽序列所組成。於本發明的 另一個實施例中，本發明的抗體片段包含，或任擇地由序 列辨識編號：275的多肽序列所組成。 於本發明的一個另外的實施例中，本發明的具有 TNF-α結合專一性的抗體片段包含，或任擇地由序列辨識編 10 號：276 ;序列辨識編號：277 ;和序列辨識編號：278的多 肽序列之一或多個所組成，其等係對應至序列辨識編號： 274的變異輕鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區）。 於本發明的一個另外的實施例中，本發明的具有 TNF-α結合專一性的抗體片段包含，或任擇地由序列辨識編 15 號：279 ;序列辨識編號：280 ;和序列辨識編號：281的多 肽序列之一或多個所組成，其等係對應至序列辨識編號： 275的變異重鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區）。 本發明亦預期包括本文中說明的一或多個抗體片段 的抗體片段。於本發明的一個實施例中，具有TNF-α結合專 20 一性的抗體片段係包含，或任擇地由下列的抗體片段的 一、二、三或更多個，包括全部，所組成：序列辨識編號： 274的變異輕鏈區；序列辨識編號：275的變異重鏈區；序 列辨識編號：274的變異輕鏈區之互補決定區（序列辨識編 號：276 ;序列辨識編號：277 ;和序列辨識編號：278); 76 200911826 以及序列辨識編號：275的變異重鏈區之互補決定區（序列 辨識編號：279 ;序列辨識編號：280 ;和序列辨識編號： 281) 〇 於本發明的一個較佳的實施例中，該抗TNF-α抗體 5 係AM8 ’其包含序列辨識編號：274與序列辨識編號：275， 以及具有至少一種本文提出的生物活性。 於另一個實施例中，本發明係包括具有TNF-a的結 合專一性且擁有一包含以下提出的序列之變異輕鏈序列的 抗體：
10 MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCADIVMTQTPSSV SEPVRGTVTIKCQASQNIYSYLSWYRQSPGQPPNLLIYKA STLASGVPSRFKGSGSGTDFTLTISDLECADAATYYCQSN YGSNSDSFGNA(序列辨識編號：290)。 本發明亦包括具有TNF-a的結合專一性且擁有包含 15 以下提出的序列之一變異重鏈序列之抗體： METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLT CSVSGFSLNNYIMGWVRQAPGKGLEFIGYIAFGIGPYYAS WAKGRFTSSSTSSTTVDLKMTSLTPEDTATYFCARGDVS GNDI (序列辨識編號：291)。 2〇 本發明進一步預期包含以下的抗體：序列辨識編 5虎.292，序列辨識編號.293 ;和序列辨識編號：294的多 肽序列之一或多個，其等係對應至序列辨識編號：290的變 異輕鏈序列之互補決定區（CDRs ’或高變區），及/或序列辨 識編號：295 ;序列辨識編號：296 ;與序列辨識編號：297 77 200911826 的多肽序列之一或多個，其等係對應至序列辨識編號：291 的變異重鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區），或此等 多肽序列的組合。於本發明的另一個實施例中，本發明的 抗體包括以上提出的(：：01^以及變異重與輕鏈序列之組 5 合。 於另一個實施例中’本發明預期其他的抗體，如舉 例而έ欲合抗體’其等包含序列辨識編號：292 ;序列辨識 編號：293 ;和序列辨識編號：294的多肽序列之一或多個， 其等係對應至序列辨識編號：290的變異輕鏈序列之互補決 10 定區（CDRs，或尚變區），及/或序列辨識編號：295 ;序列 辨識編號：296 ;與序列辨識編號：297的多肽序列之一或 多個，其等係對應至序列辨識編號：291的變異重鏈序列之 互補決定區（CDRs，或高變區），或此等多肽序列的組合。 於本發明的另一個實施例中，本發明的抗體包括以上提出 15 的CDRs以及變異重與輕鏈序列之組合。 本發明亦預期具有TNF-α結合專一性的抗體片段。 於本發明的一個實施例中，本發明的抗體片段包含，或任 擇地由序列辨識編號：290的多肽序列所組成。於本發明的 另一個實施例中’本發明的抗體片段包含，或任擇地由序 20 列辨識編號：291的多肽序列所組成。 於本發明的一個另外的實施例中，本發明的具有 TNF-a結合專一性的抗體片段包含’或任擇地由序列辨識編 號：292 ;序列辨識編號：293 ;和序列辨識編號：294的多 78 200911826 肽序列之一或多個所组成，其等係對應至序列辨識編號： 290的變異輕鏈序列之互補決定區(CDRs，或高變區）。 於本發明的一個另外的實施例中，本發明的具有 TNF-α結合專一性的抗體g段包含，或任擇地由序列辨識編 5 號：295 ’·序列辨識編號：296 ;和序列辨識編號：297的多 肽序列之一或多個所組成，其等係對應至序列辨識編號： 291的變異重鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區）。 本發明亦預期包括本文中說明的一或多個抗體片段 的抗體片段。於本發明的一個實施例中，具有TNF_a結合專 10 一性的抗體片段係包含，或任擇地由下列的抗體片段的 一、二、三或更多個，包括全部，所組成：序列辨識編號： 290的變異輕鏈區；序列辨識編號·· 291的變異重鍵區；序 列辨識編號：290的變異輕鏈區之互補決定區（序列辨識編 號：292 ;序列辨識編號：293 ;和序列辨識編號：294); 15 以及序列辨識編號：291的變異重鏈區之互補決定區（序列 辨識編號：295 ;序列辨識編號：296 ;和序列辨識編號： 297)。 於本發明的一個較佳的實施例中，該抗體 係Ab 19，其包含序列辨識編號：290與序列辨識編號：291， 2〇 以及具有至少一種本文提出的生物活性。 於另一個實施例中，本發明係包括具的結 合專一性且擁有一包含以下提出的序列之變異輕鏈序列的 抗體： 79 200911826 MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCADIVMTQTPASV SEPVGGTVTIKCQASQNIYTTLAWYQQKPGQPPKLLIYLA STLASGVPSRFKGSGSETQFTLTISDLECADAATYYCQTS HGSNSDSFGYV (序歹丨J辨識編號：306)。 5 本發明亦包括具有TNF-α的結合專一性且擁有包含 以下提出的序列之一變異重鏈序列之抗體： METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLT CTVSGIDLNSYAMGWVRQAPGKGLEYIGYILSSGITYYAT WAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCVRNGNY 10 NSGTDI (序列辨識編號：307)。 本發明進一步預期包含以下的抗體：序列辨識編 號：308 ;序列辨識編號：309 ;和序列辨識編號：310的多 肽序列之一或多個，其等係對應至序列辨識編號：306的變 異輕鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區），及/或序列辨 15 識編號：311 ;序列辨識編號：312 ;與序列辨識編號：313 的多肽序列之一或多個，其等係對應至序列辨識編號：307 的變異重鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區），或此等 多肽序列的組合。於本發明的另一個實施例中，本發明的 抗體包括以上提出的CDRs以及變異重與輕鏈序列之組 20 合。 於另一個實施例中，本發明預期其他的抗體，如舉 例而言嵌合抗體，其等包含序列辨識編號：308 ;序列辨識 編號：309;和序列辨識編號：310的多肽序列之一或多個， 其等係對應至序列辨識編號：306的變異輕鏈序列之互補決 80 200911826 疋區（CDRs ’或高變區）’及/或序列辨識編號：311 :序列 辨識編號：312 ;與序列辨識編號：313的多肽序列之—或 多個，其等係對應至序列辨識編號：3〇7的變異重鏈序列之 互補決定區（CDRs，或高變區），或此等多肽序列的組合。 5於本發明的另一個實施例中，本發明的抗體包括以上提出 的CDRs以及變異重與輕鍵序列之組合。 本發明亦預期具有TNF-α結合專一性的抗體片段。 於本發明的一個實施例中，本發明的抗體片段包含，或任 擇地由序列辨識編號306 :的多肽序列所組成。於本發明的 10 另一個實施例中，本發明的抗體片段包含，或任擇地由序 列辨識編號：307的多肽序列所組成。 於本發明的一個另外的實施例中，本發明的具有 TNF-α結合專一性的抗體片段包含，或任擇地由序列辨識編 號：308 ;序列辨識編號：309 ;和序列辨識編號：310的多 15 肽序列之一或多個所組成，其等係對應至序列辨識編號： 306的變異輕鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區）。 於本發明的一個另外的實施例中，本發明的具有 TNF-α結合專一性的抗體片段包含，或任擇地由序列辨識編 號：311 ;序列辨識編號：312 ;和序列辨識編號：313的多 20 肽序列之一或多個所組成，其等係對應至序列辨識編號： 307的變異重鏈序列之互補決定區（CDRs ’或高變區）。 本發明亦預期包括本文中說明的一或多個抗體片段 的抗體片段。於本發明的一個實施例中，具有TNF-α結合專 一性的抗體片段係包含，或任擇地由下列的抗體片段的 81 200911826 一、二、三或更多個，包括全部，所組成：序列辨識編號： 306的變異輕鏈區；序列辨識編號：307的變異重鏈區；序 列辨識編號：306的變異輕鏈區之互補決定區（序列辨識編 號：308 ;序列辨識編號：309 ;和序列辨識編號：310); 5 以及序列辨識編號：307的變異重鏈區之互補決定區（序列 辨識編號：311 ;序列辨識編號：312 ;和序列辨識編號： 313)。 於本發明的一個較佳的實施例中，該抗TNF-α抗體 係Ab20,其包含序列辨識編號：306與序列辨識編號：307， 10 以及具有至少一種本文提出的生物活性。 於另一個實施例中，本發明係包括具有TNF-a的結 合專一性且擁有一包含以下提出的序列之變異輕鏈序列的 抗體： MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCADIVMTQTPSSV 15 SAAVGGTVTIKCQASQSIDTYLAWYQQKPGQRPKLLIYG ASNLASGVSSRFKGSGSGTEFALTISDLECADAATYYCQS NYGSNSDSFGNG(序列辨識編號：322)。 本發明亦包括具有TNF-a的結合專一性且擁有包含 以下提出的序列之一變異重鏈序列之抗體： 20 METGLRWLLLVAVFKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLT CTVSGFSLSTYTMGWVRQAPGKGLEYIGYISYGGLAYYA TWVNGRFTISKTSTTVDLKMTSLTASDTATYFCARAASG AWGHAYGLDL (序列辨識編號：323)。 82 200911826 本發明進—步預期包含以下的抗體：序列辨識編 號· 324 ;序列辨識編號：325 ;和序列辨識編號：326的多 月太序列之一或多個’其等係對應至序列辨識編號：322的變 異輕鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區），及/或序列辨 5識編號：327 ;序列辨識編號：328 ;與序列辨識編號：329 的多狀序列之一或多個，其等係對應至序列辨識編號：323 的變異重鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區），或此等 多肽序列的組合。於本發明的另一個實施例中，本發明的 抗體包括以上出的CDRs以及變異重與輕鍵序列之組 10 合。 於另一個實施例中，本發明預期其他的抗體，如舉 例而言嵌合抗體，其等包含序列辨識編號：324 ;序列辨識 編號：325 ;和序列辨識編號：326的多肽序列之一或多個， 其等係對應至序列辨識編號：322的變異輕鏈序列之互補決 15 定區（CDRs，或高變區），及/或序列辨識編號：327 ;序列 辨識編號：328 ;與序列辨識編號：329的多肽序列之一戋 多個’其等係對應至序列辨識編號：323的變異重鏈序列之 互補決定區（CDRs ’或高變區），或此等多肽序列的組合。 於本發明的另一個實施例中，本發明的抗體包括以上提出 2〇 的CDRs以及變異重與輕鏈序列之組合。 本發明亦預期具有TNF-oi結合專一性的抗體片段。 於本發明的一個實施例中，本發明的抗體片段包含，或任 擇地由序列辨識編號：322的多肽序列所組成。於本發明的 83 200911826 另一個實施例中，本發明的抗體片段包含，或任擇地由序 列辨識編號：323的多肽序列所組成。 於本發明的一個另外的實施例中，本發明的具有 TNF-α結合專一性的抗體片段包含’或任擇地由序列辨識編 5 號：324 ;序列辨識編號：325 ;和序列辨識編號：326的多 狀序列之一或多個所組成’其等係對應至序列辨識編號： 322的變異輕鏈序列之互補決定區（cdrs，或高變區）。 於本發明的一個另外的實施例中，本發明的具有 TNF-α結合專一性的抗體片段包含，或任擇地由序列辨識編 1〇 號：327 ;序列辨識編號：328 ;和序列辨識編號：329的多 肽序列之一或多個所組成’其等係對應至序列辨識編號： 323的變異重鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區）。 本發明亦預期包括本文中說明的一或多個抗體片段 的抗體片段。於本發明的一個實施例中，具有TNF-a結合專 15 一性的抗體片段係包含，或任擇地由下列的抗體片段的 一、二、三或更多個’包括全部，所組成：序列辨識編號： 322的變異輕鏈區；序列辨識編號：323的變異重鏈區；序 列辨識編號：322的變異輕鏈區之互補決定區（序列辨識編 號：324 ;序列辨識編號：325 ;和序列辨識編號：326); 20 以及序列辨識編號：323的變異重鏈區之互補決定區（序列 辨識編號：327 ;序列辨識編號：328 ;和序列辨識編號： 329) 〇 84 200911826 於本發明的一個較佳的實施例中，該抗TNF-α抗體 係Ab2卜其包含序列辨識編號：322與序列辨識編號：323， 以及具有至少一種本文提出的生物活性。 於另一個實施例中，本發明係包括具有TNF-α的結 5 合專一性且擁有一包含以下提出的序列之變異輕鏈序列的 抗體： MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCADIVMTQTPASV SGPVGGTVTIKCQASQNIYSSFSWYQQIPGQRPKLLIYYA STLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISDLECADAATYYCQSN 10 HGSNGDSFGNA(序列辨識編號：338)。 本發明亦包括具有TNF-α的結合專一性且擁有包含 以下提出的序列之一變異重鏈序列之抗體： METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVSPGTPLTLT CTVSGIDLSSYGMGWVRQAPGKGLDYIGYMLPSGITYYA 15 AWAKGRFTISKTSSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARNYYG MDP (序列辨識編號：339)。 本發明進一步預期包含以下的抗體：序列辨識編 號：340 ;序列辨識編號：341 ;和序列辨識編號：342的多 肽序列之一或多個，其等係對應至序列辨識編號：338的變 20 異輕鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區），及/或序列辨 識編號：343 ;序列辨識編號：344 ;與序列辨識編號：345 的多肽序列之一或多個，其等係對應至序列辨識編號：339 的變異重鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區），或此等 多肽序列的組合。於本發明的另一個實施例中，本發明的 85 200911826 抗體包括以上提出的CDRs以及變異重與輕鏈序列之組 合0 於另一個實施例中，本發明預期其他的抗體，如舉 例而言嵌合抗體’其等包含序列辨識編號：340 ;序列辨識 5 編號：341 ;和序列辨識編號：342的多肽序列之一或多個， 其等係對應至序列辨識編號：338的變異輕鏈序列之互補決 定區（CDRs ’或高變區）’及/或序列辨識編號：343 ;序列 辨識編號：344 ;與序列辨識編號：345的多肽序列之一或 多個，其等係對應至序列辨識編號：339的變異重鏈序列之 10 互補決定區(CDRs，或高變區）’或此等多肽序列的組合。 於本發明的另一個實施例中，本發明的抗體包括以上提出 的CDRs以及變異重與輕鏈序列之組合。 本發明亦預期具有TNF-α結合專一性的抗體片段。 於本發明的一個實施例中，本發明的抗體片段包含，或任 15 擇地由序列辨識編號：338的多肽序列所組成。於本發明的 另一個實施例中，本發明的抗體片段包含，或任擇地由序 列辨識編號：339的多肽序列所組成。 於本發明的一個另外的實施例中，本發明的具有 TNF-α結合專一性的抗體片段包含，或任擇地由序列辨識編 20 號：340 ;序列辨識編號：341 ;和序列辨識編號：342的多 肽序列之一或多個所組成，其等係對應至序列辨識編號： 338的變異輕鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區）。 於本發明的一個另外的實施例中，本發明的具有 TNF-a結合專-性的抗體片段包含，或任擇地由序列辨識編 86 200911826 號：343 ;序列辨識編號：344 ;和序列辨識編號：345的多 肽序列之一或多個所組成，其等係對應至序列辨識編號： 339的變異重鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區）。 本發明亦預期包括本文中說明的一或多個抗體片段 5 的抗體片段。於本發明的一個實施例中，具有TNF-tx結合專 一性的抗體片段係包含，或任擇地由下列的抗體片段的 一、二、三或更多個，包括全部，所組成：序列辨識編號： 338的變異輕鏈區；序列辨識編號：339的變異重鏈區；序 列辨識編號：338的變異輕鏈區之互補決定區（序列辨識編 10 號：340 ;序列辨識編號：341 ;和序列辨識編號：342); 以及序列辨識編號：339的變異重鏈區之互補決定區（序列 辨識編號：343 ;序列辨識編號：344 ;和序列辨識編號： 345)。 於本發明的一個較佳的實施例中，該抗TNF-α抗體 15 係Ab22,其包含序列辨識編號：338與序列辨識編號：339， 以及具有至少一種本文提出的生物活性。 於另一個實施例中，本發明係包括具有TNF-a的結 合專一性且擁有一包含以下提出的序列之變異輕鏈序列的 抗體：
20 MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCADIVMTQTPASV SEPVGGTVTIKCQASQSIYRYLSWYHHKPGQPPKLLIYGA SNLESGVPSRFKGSGSGTEYTLTISDLECDDAATYYCQSN YGANSDSYGDA(序列辨識編號：354)。 87 200911826 本發明亦包括具有TNF-α的結合專一性且擁有包含 以下提出的序列之一變異重鏈序列之抗體： METGLRWLLLVAVLKGVQCQEQLEESGGDLVKPGASLTL TCKASGFSFSSGYYMGWVRQAPGKGLQYIGYIDYGGSA 5 YYASWAKGRFTISKTSSTTVTLQMTSLTAADTATFFCTRR DYTGGVVRGLDL (序列辨識編號：355)。 本發明進一步預期包含以下的抗體：序列辨識編 號：356 ;序列辨識編號：357 ;和序列辨識編號：358的多 肽序列之一或多個，其等係對應至序列辨識編號：354的變 10 異輕鏈序列之互補決定區(CDRs，或高變區），及/或序列辨 識編號：359 ;序列辨識編號：360 ;與序列辨識編號：361 的多肽序列之一或多個，其等係對應至序列辨識編號：355 的變異重鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區），或此等 多肽序列的組合。於本發明的另一個實施例中，本發明的 15 抗體包括以上提出的CDRs以及變異重與輕鏈序列之組 合。 於另一個實施例中，本發明預期其他的抗體，如舉 例而言嵌合抗體’其等包含序列辨識編號：356 ;序列辨識 編號：357 ;和序列辨識編號：358的多肽序列之一或多個， 2〇 其等係對應至序列辨識編號：354的變異輕鏈序列之互補決 定區（CDRs，或高變區），及/或序列辨識編號：359 ;序列 辨識編號：360 ;與序列辨識編號：361的多肽序列之一或 多個’其等係對應至序列辨識編號：355的變異重鏈序列之 互補決定區（CDRs，或高變區），或此等多肽序列的組合。 88 200911826 於本發_另-個實施财，切日㈣抗體包括以上提出 的CDRs以及變異重與輕鏈序列之組人。 本發明亦賴具有聊讀/專—性的抗體片段。 於本發明的—個實施财，本發㈣抗體片段包含，或任 擇地由序列辨識編號：354的多狀序列所組成。於本發明的 另一個實施例中，本發明的抗體片段包含，或任擇地由序 列辨識編號：355的多肽序列所組成。 10 15 20 於本發明的-個另外的實施例中，本發明的具有 TNF-α結合專—性的抗體片段包含，或任擇地由序列辨識編 號· 356 ;序列辨識職：357 ;和序列辨識編號：358的多 肽序列之-❹额組成，料係對絲序·識編號： 354的變異輕鏈相之互補決定區(咖8，或高變區）。 於本發明的一個另外的實施例中，本發明的具有 a結合專—性的抗體片段包含，或任擇地由序列辨識編 唬359 ’序列辨識編號.36〇 ;和序列辨識編號：加的多 肽序列之細組成，其㈣對應至序_識編號： 355的變異重鏈序列之互補決定區(CDRs，或高變區）。 本心明亦預期包括本文中說明的—或多個抗體片段 的抗體片&。於本發明的_個實施例中，具有TNF_a結合專 f生的4几體片段係包含，或任擇地由下列的抗體片段的 一一或更多個，包括全部，所組成：序列辨識編號： 354的隻異|續區；序列辨識編號：扮的變異重鍵區；序 ^辨識編號· 354的變異輕鏈區之互補決定區（序列辨識編 號356，序列辨識編號：357 ;和序列辨識編號：358); 89 200911826 以及序列辨識編號：355的變異重鏈區之互補決定區（序列 辨識編號：359 ;序列辨識編號：360 ;和序列辨識編號： 361)。 於本發明的一個較佳的實施例中，該抗TNF-α抗體 5 係Ab23 ’其包含序列辨識編號：354與序列辨識編號：355， 以及具有至少一種本文提出的生物活性。 於另一個實施例中，本發明係包括具有TNF-a的結 合專一性且擁有一包含以下提出的序列之變異輕鏈序列的 OA · •J几體·
10 MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCADIVMTQTPSSV SAAVGGTVTINCQASQNIYSSLAWYQQKPGQPPKLLIFGA SNLESGVPSRFKGSGSGTEFTLTISDLECADAAAYYCQSH HGSNSDSYGNA(序列辨識編號：370)。 本發明亦包括具有TNF-a的結合專一性且擁有包含 15 以下提出的序列之一變異重鏈序列之抗體： METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLT CTASGFSLNNYYMTWVRQAPGKGLESIGYFASGGGTYY ANWAKGRFTISKTSTTVDLKITSPTTDDTATYFCARGGAY LGTGSL (序列辨識編號：371)。 20 本發明進一步預期包含以下的抗體：序列辨識編 號：372 ;序列辨識編號：373 ;和序列辨識編號：374的多 肽序列之一或多個，其等係對應至序列辨識編號：370的變 異輕鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區），及/或序列辨 識編號：375 ;序列辨識編號：376 ;與序列辨識編號：377 90 200911826 的多肽序列之一或多個，其等係對應至序列辨識編號：371 的變異重鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區），或此等 多肽序列的組合。於本發明的另一個實施例中，本發明的 抗體包括以上提出的CDRs以及變異重與輕鏈序列之組 5 合。 於另一個實施例中，本發明預期其他的抗體，如舉 例而言嵌合抗體，其等包含序列辨識編號：372;序列辨識 編號：373 ;和序列辨識編號：374的多肽序列之一或多個， 其等係對應至序列辨識編號：370的變異輕鏈序列之互補決 1〇定區（CDRs，或高變區），及/或序列辨識編號：375 ;序列 辨識編號：376 ;與序列辨識編號：377的多肽序列之一或 多個，其等係對應至序列辨識編號：371的變異重鏈序列之 互補決定區（CDRs，或高變區），或此❹肽序列的組合。 於本發明的另一個實施例中，本發明的抗體包括以上提出 15 的CDRs以及變異重與輕鏈序列之組合。 本發明亦預期具有TNF_a結合專—性的抗體片段。 於本發明的-個實施例中，本發明的抗體片段包含，或任 擇地由序列辨識編號：370的多肽序列所組成。於本發明的 另-個實施例中，本發明的抗體片段包含，或任擇地由序 20 列辨識編號：371的多肽序列所組成。 於本發明的-個另外的實施例中本發明的且有 T脈a結合專—性的抗㈣段包含，或任擇地由序列辨識編 被：372 ;序列辨識編號：373 ;和序列辨識編號：374的多 91 200911826 狀序列之-或多個所组成，其等係對應至序列辨識編號： 370的變異輕鏈序列之互補決定區(CDRs，或高變區）。 於本發明的—個另外的實施例中，本發明的具有 ™F_a結合專一性的抗體片段包含，或任擇地由序列辨識編 5號.375 ;序列辨識編號：376 ;和序列辨識編號：377的多 狀序列之—或多個所組成，其等係對應至序列辨識編號： I異重鏈序列之互補決定區（Cdrs，或高變區）。 本發明亦預期包括本文中說明的一或多個抗體片段 的抗體>|段。於本發明的—個實施例中，具有T脈α結合專 1〇 ^生的抗體片段係包含’或任擇地由下列的抗體片段的 一或更多個，包括全部，所組成：序列辨識編號： 的殳異輕鏈區；序列辨識編號：371的變異重鏈區；序 列辨識編號：37G的變異輕鏈區之互補決定區（序列辨識編 號372，序列辨識編號：373 ;和序列辨識編號：374); 15以及序列辨識編號：371的變異重鏈區之互補決定區（序列 辨識編?虎.3 7 5 ’序列辨識編號：3 7 6 ;和序列辨識編號： 377)。 於本發明的一個較佳的實施例中，該抗TNF_a抗體 係Ab24，其包含序列辨識編號：370與序列辨識編號·· 371， 20 以及具有至少一種本文提出的生物活性。 於另一個實施例中，本發明係包括具有TNF_a的結 合專一性且擁有一包含以下提出的序列之變異輕鏈序列的 抗體· 92 200911826 MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCADIVMTQTPSSV SVPVGGTVTIKCQASQNIYSSLAWYQQKPGQPPKRLIYY AATLASGVPSRFKGSGSGTDFTLTISDLECADAATYYCQS NHGSNSDSYGNP(序列辨識編號：386)。 5 本發明亦包括具有TNF-α的結合專一性且擁有包含 以下提出的序列之一變異重鏈序列之抗體： METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLT CTVAGFSLSTYGVTWVRQAPGKGLESIGYITYGNIKYYAT WAKGRFTISKTSTTVDLKMTSPTTEDTATYFCTRYGGSGI 10 GEDL (序列辨識編號：387)。 本發明進一步預期包含以下的抗體：序列辨識編 號：388 ;序列辨識編號：389 ;和序列辨識編號：390的多 肽序列之一或多個，其等係對應至序列辨識編號：386的變 異輕鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區），及/或序列辨 15 識編號：391 ;序列辨識編號：392 ;與序列辨識編號：393 的多肽序列之一或多個，其等係對應至序列辨識編號：387 的變異重鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區），或此等 多肽序列的組合。於本發明的另一個實施例中，本發明的 抗體包括以上提出的CDRs以及變異重與輕鏈序列之組 20 合。 於另-個實施例中，本發明預期其他的抗體，如舉 例而言嵌合抗體，其等包含序列辨識編號：娜；序列辨識 編號：389;和序列辨識編號：39〇的多肽序列之一或多個， 其等係對應至序列辨識編號：3 8 6的變異輕鍵序列之互補決 93 200911826 定區（CDRs，或高變區），及/或序列辨識編號.391 ;序列 辨識編號：392 ;與序列辨識編號：393的多肽序列之一或 多個，其等係對應至序列辨識編號：387的變異重鏈序列之 互補決定區（CDRs，或高變區），或此等多肽序列的組合。 5 於本發明的另一個實施例中’本發明的抗體包括以上提出 的CDRs以及變異重與輕鏈序列之組合。 本發明亦預期具有TNF-α結合專一性的抗體片段。 於本發明的一個實施例中，本發明的抗體片段包含，或任 擇地由序列辨識編號：386的多肽序列所組成。於本發明的 10 另一個實施例中，本發明的抗體片段包含，或任擇地由序 列辨識編號：387的多肽序列所組成。 於奉發明的一個另外的實施例 15 20 TNF-a結合專一性的抗體片段包含’或任擇地由序列辨識編 號：388 ;序列辨識編號：389 ;和序列辨識編號：390的多 肽序列之一或多個所組成，其等係對應至序列辨識編號： 386的變異輕鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區）。 於本發明的一個另外的實施例中，本發明的具有 TNF-a結合專-性的抗體片段包含，或任擇地由序列辨識編 號：391 ;序列辨識編號：392 ;和序列辨識編號：州的多 肽序列之-或乡個雜成，其料對應至相辨識編號夕 387的變異重鏈序列之互補決定區（cdRs，或高變區）。 本發明亦預期包括本文中說明的一或多 的抗體片段。於本發明的—個實施例中，具有挪妙^ 一性的抗體片段係包含’或任擇地由下列的抗體片 94 200911826 一、二、二或更多個，包括全部，所組成：序列辨識編號： 386的變異輕鏈區；序列辨識編號：387的變異重鏈區；序 列辨識編號：386的變異輕鏈區之互補決定區（序列辨識編 號：388 ;序列辨識編號：389 ;和序列辨識編號：39〇); 5 以及序列辨識編號：387的變異重鏈區之互補決定區（序列 辨識編號：391 ;序列辨識編號：392 ;和序列辨識編號： 393)。 於本發明的一個較佳的實施例中，該抗TNF-α抗體 係Ab25，其包含序列辨識編號：386與序列辨識編號：387， 10 以及具有至少一種本文提出的生物活性。 於另一個實施例中，本發明係包括具有TNF-a的結 合專一性且擁有一包含以下提出的序列之變異輕鏈序列的 抗體： MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCADVVMTQTPSS 15 VSEPVGGTVTIKCQASETIGNYLSWYQQKPGQPPKRLIYY ASTLSSGVPSRFKGSGSGTDFTLTISDLECADAATYYCQK NYGSGASSLGA(序列辨識編號：402)。 本發明亦包括具有TNF-a的結合專一性且擁有包含 以下提出的序列之一變異重鏈序列之抗體： 20 METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLT CTVSGFSLSSYYMAWVRQAPGKGLEWIGYIGFGGSTYYA TWAKGRVTISRTSTTVDLQITSPTTEDTATYFCARGVYGD FRTGADL (序列辨識編號：403)。 95 200911826 本發明進一步預期包含以下的抗體：序列辨識編 號：404 ;序列辨識編號：405 ;和序列辨識編號：406的多 肽序列之一或多個，其等係對應至序列辨識編號：402的變 異輕鍵序列之互補決定區（CDRs ’或南變區）’及/或序列辨 5 識編號：;序列辨識編號：408 ;與序列辨識編號：409 的多肽序列之一或多個，其等係對應至序列辨識編號：403 的變異重鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區），或此等 多肽序列的組合。於本發明的另一個實施例中，本發明的 抗體包括以上提出的CDRs以及變異重與輕鏈序列之組 10 合。 於另一個實施例中，本發明預期其他的抗體，如舉 例而言嵌合抗體，其等包含序列辨識編號：4〇4 ;序列辨識 編號：405 ;和序列辨識編號：406的多肽序列之一或多個， 其等係對應至序列辨識編號：402的變異輕鏈序列之互補決 15定區（CDRs ’或高變區）’及/或序列辨識編號：術；序列 辨識編號：408 ;與序列辨識編號：4〇9的多肽序列之一或 多個’其等係對應至序列辨亂編號：403的變異重鏈序列之 互補決定區（CDRs，或高變區），或此等多狀序列的組合。 於本發明的另一個實施例中，本發明的抗體包括以上提出 20 的CDRs以及變異重與輕鏈序列之組合。 本發明亦顏具有卿铺/專—性的抗體片段。 於本發明的一個實施例中，本發明的抗體片段包含，或任 擇地由序列辨識編號：術的多肽序列所組成。於本發明的 96 200911826 另一個實施例中，本發明的抗體片段包含，或任擇地由序 列辨識編號：403的多肽序列所組成。 於本發明的一個另外的實施例中，本發明的具有 TNF-α結合專一性的抗體片段包含’或任擇地由序列辨識編 5 號：404 ;序列辨識編號：405 ;和序列辨識編號：406的多 肽序列之一或多個所組成，其等係對應至序列辨識編號： 402的變異輕鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區）。 於本發明的一個另外的實施例中，本發明的具有 TNF-a結合專一性的抗體片段包含’或任擇地由序列辨識編 10 號：407 ;序列辨識編號：408 ;和序列辨識編號：409的多 肽序列之一或多個所組成，其等係對應至序列辨識編號： 403的變異重鏈序列之互補決定區（CDRs，或高變區）。 本發明亦預期包括本文中說明的一或多個抗體片段 的抗體片段。於本發明的一個實施例中’具有TNF-a結合專 15 —性的抗體片段係包含’或任擇地由下列的抗體片段的 —、二、三或更多個，包括全部’所組成：序列辨識編號： 402的變異輕鏈區；序列辨識編號：403的變異重鏈區；序 列辨識編號：402的變異輕鏈區之互補決定區（序列辨識編 號：404 ;序列辨識編號：405 ;和序列辨識編號：406); 以及序列辨識編號：403的變異重鏈區之互補決定區（序列 辨識編號：407 ;序列辨識編號：408 ;和序列辨識編號： 409)。 97 200911826 於本發明的一個較佳的實施例中，該抗TNF-α抗體 係Ab26，其包含序列辨識編號：402與序列辨識編號：403， 以及具有至少一種本文提出的生物活性。 此等抗體片段可以以一或多個下列的非限制性形式 5 存在：Fab、Fab'、F(ab')2、Fv以及單鏈Fv抗體形式。於一 較佳的實施例中，本文中說明的抗TNF-α抗體進一步包含含 有以下提出的序列之卡巴恆定輕鏈序列： VAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREA KVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSK 10 ADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (序列辨識 編號：418)。 於另一個較佳的實施例中，本文中說明的抗TNF-a 抗體進一步包含含有以下提出的序列之γ-l守恆重鏈多肽 序列：
15 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPE PVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPA PELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDP EVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVL 20 HQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQV YTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPE NNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSV MHEALHNHYTQKSLSLSPGK(序列辨識編號：420)。 98 200911826 於本發明的一個實施例中，該等抗體係發源自或係 選自於在本文中提及的人類化方法起始之前的一或多個兔 B細胞族群。 於本發明的另一個實施例中，抗-TNF-α抗體與其等 5 之片段具有人類TNF-a蛋白的靈長類動物同系物的結合專 一性。人類TNF-a蛋白的靈長類動物同系物的一非限制性 實例係自馬來獼猴(似<3<^^^/<31?<：/〇1//以/15)(亦知道為食蟹猴 (cynomolgus monkey))獲得的TNF-a。於本發明的另一個實 施例中，抗TNF-a抗體與其等之片段不具有TNF-R’ p55 10 TNF-R及/或p75 TNF-R的任一個之結合專一性。於本發明 的一個另外的實施例中，抗-TNF-a抗體與其等之片段抑制 TNF-a與 TNF-R，p55 TNF-R 及/或 p75 TNF-R 的任一個之 結合。 如本文中的第26頁第6-12行中說明的，抗體與其 15 等之片段可以予以轉譯後修飾以加入效應部分，如：化學 連接子，可伯測的部分，如舉例而言：螢光染料，酶，受 質，生物發光材料，放射材料’以及化學發光部分，或是 功能部分，如舉例而言：鏈黴抗生物素蛋白（streptoavidin)、 抗生物素蛋白（avidin)、生物素、一細胞毒素 '一細胞毒殺 2〇 劑，以及放射材料。 關於可偵測的部分’另外的例示性酶包括’但不限 於：辣根過氧化酶、乙醯膽驗酶、驗性磷酸酶、貝他 (P)(Z>eia-galactosidase)以及勞光素酶。另外的例示性營光材 料包括，但不限於：若丹明（rhodamine)、螢光黃、螢光異 99 200911826 硫氰酸鹽、繳形酮（umbelliferone)、二氣三嗪基胺 (dichlorotriazinylamine)、藻紅蛋白（phycoerythrin)以及丹 醯氯(dansyl chloride)。另外的例示性化學發光部分包括， 但不限於：魯米諾（luminal)。另外的例示性生物發光材料 5 包括，但不限於：登光素（luciferin)和水母素埃奎明 (aequorin)。另外的例示性放射材料包括，但不限於：碘125 (1251)、碳 14 (14C)、硫 35 (35S)、氣(3H)以及磷 32 (32P)。 關於功能部分，例示性細胞毒殺劑包括，但不限於： 甲氨喋呤(methotrexate)、氨基喋呤(aminopterin)、6-巯基嗓 10 呤（6-mercaptopurine)、6-硫鳥嘌呤（6-thioguanine)、阿糖胞 苷（cytarabine)、5-氟尿嘧啶氮烯咪胺（5-fluorouracil decarbazine);院化劑如：甲二氯二乙胺氮芬 (mechlorethamine)、沙奥特帕苯丁 酸氮芥（thi〇epa chlorambucil)、美法侖(melphalan)、卡莫司汀（carmustine) 15 (BSNU)、絲裂徽素 C、洛莫司汀(lomustine) (CCNU)、1-曱 亞确脲（Ι-methylnitrosourea)、環構醯胺 (cyclothosphamide)、曱二氯二乙胺（mechl〇rethamine)、白血 福恩(busulfan)、二溴甘露醇(dibromomannitol)、鏈佐菌素 (streptozotocin)、絲裂黴素 C、順鉑（cis-dichlorodiamine 20 platinum (II) (DDP)順鉑（cisplatin)以及卡波鉑 (carboplatin)(卡波鉑 parapiatin);蒽環類（anthraCyCiines)包 括紅比黴素（daunorubicin)(以前daunomycin道諾黴素）、多 柔比星（doxorubicin)(阿黴素（adriamycin))、地托比星 (detorubicin)、洋紅黴素（carminomycin)、依達比星 100 200911826 10 15
20 (idarubicin)、表柔比星（epirubicin)、米托蒽醌(mitoxantrone) 以及比生群(bisantrene);抗生素包括更生黴素（dactinomycin) (放線菌素D (actinomycin D))、平陽黴素(bleomycin)、卡奇 黴素(calicheamicin)、光神黴素(mithramycin)以及安曲霉素 (anthramycin) (AMC);以及抗分裂劑（antimytotic agents) 如：長春花生物驗(vinca alkaloid)、長春新鹼(vincristine) 以及長春驗(vinblastine)。其他的細胞毒殺劑包括：紫杉醇 (paclitaxel)(紫杉醇(taxol))、篦麻毒素(ricin)、假單胞菌屬 外毒素（pseudomonas exotoxin)、吉西他汀（gemcitabine)、細 胞鬆弛素 B (cytochalasin B)、短桿菌肽 D (gramicidin D)、 溴化乙錠（ethidium bromide)、吐根驗(emetine)、依托泊甙 (etoposide)、替尼泊皆（tenoposide)、秋水仙驗(colchicin)、 二氫炭症菌素二酮(dihydroxy anthracin dione)、 1-二氫睪固 酮（1 -dehydrotestosterone)、糖皮質激素(glucocortic〇ids)、普 魯卡因（procaine)、四卡因（tetracaine)、利多卡因 (lidocaine)、普萘洛爾（propranolol)、嗓呤徽素(puromycin)、 丙卡巴肼(procarbazine)、羥基脲(hydroxyurea)、天門冬醯胺 酶（asparaginase)、皮質類固醇（corticosteroids)、米托坦 (mytotane)(0,P4DDD))、干擾素，以及此等細胞毒殺劑的 混合物。 進一步的細胞毒殺劑包括，但不限於：化療劑，如： 卡波鉑（carboplatin)、順鉑（cisplatin)、紫杉醇(paclitaxel)、 吉西他汀(gemcitabine)、卡奇黴素(calicheamicin)、多柔比 星(doxorubicin)、5-氟尿嘴°定(5-fluorouracil)、絲裂黴素 C、 101 200911826 放線菌素D、環填醜胺（cyclophosphamide)、長春新驗 (vincristine)以及平陽黴素(bleomycin)。來自植物和細菌的 毒性酶，如：篦麻毒素、白喉毒素和假單胞菌屬 毒素可以能是係被結合至人類化的抗體，或 5 其等之結合片段’以產生的細胞類型專一性的毒殺試劑 (cell-type-specific-killing reagents) (Youle ’ 等人，Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 77:5483 (1980); Gilliland，等人，Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 77:4539 (1980) ; Krolick，等人，Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 77:5419 (1980)) ° 10 其他的細胞毒殺劑包括，如同於美國專利案號 6,653，104中Goldenberg所說明的細胞毒殺核糖核酸酶。本 發明的實施例亦有關放射免疫結合劑，其中一發出阿伐或 是貝他粒子的放射性核種係安定地耦合至抗體，或其等之 結合片段’有或是沒有使用一複合體-形成劑。此等放射性 15 核種包括：β發射體，如：磷-32 (32P)、銃-47 (47Sc)、銅-67 (67Cu)、鎵-67 (67Ga)、釔-88 (88Y)、釔-90 (9°Y)、碘-125 (1251)、碘-131 (13|1)、釤-153 (153Sm)、镏-177 (177Lu)、銖-186 (186Re)或銶-188 (188Re)，以及α發射體，如：石艾(Astatine)-211 (211At)、鉛-212 (212Pb)、鉍-212 (212Bi)或-213 (213Bi)或是婀 20 -225 (225Ac)。 用於結合一抗體或其之結合片段至一可偵測的部分 與類似物的方法係本技藝中所知道的，如舉例而言以下說 明的那些方法：Hunter 等人，Nature 144:945 (1962); David 專人 ’ Biochemistry 13:1014 (1974); Pain 等人，J· Immunol. 102 200911826
Meth. 40:219 (1981);以及 Nygren，J·, Histochem. and Cytochem. 30:407 (1982)。 本文中說明的實施例進一步包括本文中提出的抗 體、抗體片段、二聚抗體、SMIPs、駱乾抗體(camelbodies)、 5 奈米抗體(nanobodies)、IgNAR、多肽、變異區以及CDRs 實貝同源的變異型和均等物。此等可以含有，例如，守.|·亙 性取代突變（也就是，由相似的胺基酸之取代一或多個胺基 酸）。舉例而言：守恆性取代係提及用具有相同的一般種類 之另一個取代一個胺基酸，例如，用另一個酸性胺基酸取 10 代個酸性胺基酸、用另一個驗性胺基酸取代一個驗性胺 基酸，或是由另一個中性胺基酸取代一個中性胺基酸。一 寸恆性胺基酸取代所預期的係本技藝中所熟知的。 於另一個實施例中，本發明係預期多肽序列，其等 具有本文中提出的抗體片段、變異區與CDRs之多肽序列 15的任何一個或多個之至少90%或更大的序列同源性。更佳 地，本發明係預期多肽序列，其等具有本文中提出的抗體 片奴、變異區與CDRs之多肽序列的任何一個或多個之至 )95%或更大的序列同源性，甚至還更佳地至少98%或更 大的序列同源性，以及還更佳地至少99%或更大的序列同 2〇源性。決定介於核酸與胺基酸序列之間的同源性之方法係 本技藝中具有通常技術的那些人所熟知的。 於另一個實施例中，本發明係進—步預期如本文中 提出的進一步具有抗_ TNF-α活性之抗體片段、變異區與 CDRS的以上詳述的多肽同系物。抗_ 活性之非限制 103 200911826 性的實例係如本文中提出的，舉例而言：於以下的第16 頁第7-24行中。 於另一個實施例中，本發明係進一步預期結合前I 的序列之任何一個之抗遺傳性型抗體的生產和用途。 V > "" *» 5 個例示的實施例中’此一抗遺傳性型抗體能予以投藥至— 主體，其已經接受一抗TNF-α抗體以調整、降低，或是中 和抗TNF-a抗體的作用。此等抗遺傳性型抗體對於— 、 符徵 在於抗TNF-a抗體的存在之自體免疫疾病的治療也可以β 有用的。此等抗遺傳性型抗體之另外的例示性用途 10 本發明的抗-TNF-a抗體之偵測，舉例而言監測主體的也.夜 或是其他的體液存在的抗-TNF-a抗體的位準。 本發明亦預期抗-TNF-a抗體，其等包含本文中說 的多肽或是多核苷酸序列之任何一個代替本文中說明的& 他的多核苷酸序列之任何一個。舉例而言：沒有限制至那 15 裡，本發明預期包含本文中說明的變異輕鏈與變異重鏈序 列之任何一個的組合之抗體，以及進一步預期到本文中說 明的CDR序列之任何一個的取代本文中說明的其他的 CDR序列之任何一個所產生的抗體。 20 額外的本發明的例示實施例 於另一個實施例中，本發明係預期一或多個抗人類 TNF-a抗體或抗體片段’其等係專一地結合至—完整的人 類T N F - a多肽或其之片段上之相同的線形或構形抗原決定 位及/或競爭用於結合至相同的線形或構形抗原決定位，其 104 200911826 係為一選自於以下所構成的群組之抗人類TNF-α抗體：
Ab卜 Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、AblO、 Abll、AM2、Abl3、AM4、Abl5、Abl6、Abl7、Abl8、 Abl9、Ab20、Ab21、Ab22、Ab23、Ab24、Ab25，以及 5 Ab26。於一較佳的實施例中，該抗人類TNF-α抗體或片段 專一地結合至相同的線形或構形抗原決定位及/或競爭用 於結合至相同的線形或構形抗原決定位於一完整的人類 TNF-α多肽或其之一片段，其係為Abl或是Abl6。 於本發明的另一個實施例中，抗人類TNF-α抗體係 10 專一地結合至一完整的TNF-a多肽或其之片段上之相同的 線形或構形抗原決定位，該（等)抗原決定位係由Abl專一 地結合，係結合至藉由利用跨越全長的天然人類IL-6多肽 之重疊的線形胜肽片段之抗原決定位繪圖予以確定的 TNF-a抗原決定位。於本發明的一個實施例中，TNF-a抗原 15 決定位係包含，或任擇地由TNF-a片段中所包含的一或多 個殘基所構成，該等片段係選自於各別含有胺基酸殘基 118-126的該等。 於本發明的一個實施例中，於2個之前的段落中討 論的抗人類TNF-a抗體包含至少2個互補決定區（CDRs)於 2〇 各個變異輕和變異重區域内，其等係與一選自於以下所構 成的群組之抗人類TNF-a抗體内含有的該等是相同的： AM、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、AblO、 Abll、Abl2、AM3、Abl4、Abl5、Abl6、Abl7、Abl8、 105 200911826
Abl9、Ab20、Ab21、Ab22、Ab23、Ab24、Ab25，以及
Ab26。 於一較佳的實施例中，以上討論的抗人類TNF-α抗 體包含至少2個互補決定區（CDRs)於各個變異輕和變異重 5 區域内，其等係與Abl或是Ab 16之内包含的該等是相同 的。於另一個實施例中，以上討論的抗人類TNF-α抗體之 所有的CDRs係與一選自於以下所構成的群組之抗人類 TNF-a抗體内包含的CDRs是相同的：Abl、Ab2、Ab3、 Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、AblO、Abll、Abl2、 10 Abl3、Abl4、AM5、Abl6、AM7、Abl8、Abl9、Ab20、 Ab21、Ab22、Ab23、Ab24、Ab25，以及 Ab26。於本發明 的一個較佳的實施例中，以上討論的抗人類TNF-α抗體之 所有的CDRs係與包含於Abl或是Abl6之内的CDRs是相 同的。 15 本發明進一步預期以上討論的一或多個抗人類 TNF-a抗體是無糖基化的，其等含有已經予以修飾以改變 效應功能、半生期、蛋白水解、及/或糖基化作用之Fc區 域；係人類的、人類化的、單鏈或嵌合的；以及係一衍生 自一兔的（親代)抗人類TNF-a抗體之人類化抗體。 20 本發明進一步預期一或多個抗人類TNF-a抗體，其 中於該抗體的該等變異輕區域和該等變異重區域之架構區 (FRs)各別地是人類FRs，其等係未經修飾的或是其等已經 藉由用該親代兔抗體之對應的FR殘基取代該變異輕或重 鏈區内的至多2或是3個人類FR殘基而予以修飾，以及其 106 200911826 中該等人類FRs已經衍生自人類變異重鏈與輕鏈抗體序 列’該等係以其等相對於包含於資料庫之内的其他的人類 生殖抗體序列之與對應的兔變異重或輕鍵區域之高位準的 同源性為基礎而自人類生殖抗體序列的資料庫予以選擇 5 出。 於本發明的一個實施例中，抗人類TNF-α抗體或片 段專一地結合至TNF-a的表現人類細胞及/或活體内循環的 可溶解的TNF-a分子，包括於具有與表現TNF-a的細胞相 關連的一疾病之一病人體内的表現於人類細胞之上的或是 10 由人類細胞表現的TNF-a。 於另一個實施例中，該疾病係選自於：類風濕性關 節炎、乾癬性關節病變、僵直性脊椎炎、幼年型類風濕性 關節炎、史迪爾氏病（Still's Disease)、系統性紅斑性狼瘡、 修格連氏症（Sjogren’s Disease)、混合型結締組織障礙、多 15 發性肌疼痛風濕症（Polymyalgia Rheumatica)、巨細胞動脈 炎、韋格納肉芽腫（Wegener’s Granulomatosis)、川崎病 (Kawasaki’s disease)、自體免疫血管炎、自體免疫葡萄膜 炎、發炎性腸道疾病、貝西氏病（Bechet’s Disease)、牛皮癖、 葛瑞夫茲病（Graves Disease)、橋本氏甲狀腺炎(Hashim〇t〇,s 20 thyroiditis)、氣喘、第1型糖尿病、第2型糖尿病、缺血性 心臟病、周邊血管疾病、中風、壞疽性膿皮症、類肉瘤病、 德爾肯氏病（Dercum’s disease)、毒性表皮溶解症、自發性葡 萄膜炎或鞏膜炎、鳥彈視網膜脈絡膜炎（birdsh〇t retinochoroiditis)、葡萄膜炎性與糖尿病性囊狀黃斑部水腫 107 200911826 (uveitic and diabetic cystoid macular edema)、老年性黃斑部 退化、肺纖維化、慢性阻塞性肺部疾病、憂鬱症、精神分 裂症、阿茲海默症、血管型失智症、腎絲球腎炎、動脈粥 狀硬化症、再狹窄、自體免疫疾病、克隆氏症（Crohn’s 5 disease)、移植物對抗宿主（GVH)反應（包括器官移植排 斥）、敗血性休克、惡病質、食慾缺乏、多發性硬化症、格 蘭氏陰性敗血症、内毒素性休克、贅瘤性疾病，包括：乳 癌、卵巢癌、膀胱癌、肺癌、甲狀腺癌、神經膠質母細胞 瘤、胃癌、子宮内膜癌、腎臟癌、大腸與大腸直腸癌、胰 1〇 臟癌與前列腺癌、葡萄膜炎(例如，幼年時期與血清陰性）， 狼瘡以及其他免疫複合體媒介的疾病，如：天皰瘡與腎絲 球腎炎、先天性甲狀腺機能抗進(CH)、遲發型過敏反應 (DTH)，如：接觸型過敏反應、類肉瘤病、慢性關節炎、成 人史提爾氏病（adult still disease)、硬皮病、巨細胞動脈炎、 15 SAPH0症候群、原發性膽汁性肝硬化(PBC)、骨髓發育不 良症候群(myelodysplastic syndromes)、血管炎、血液$性 疾病、耳蝎前庭的障礙、巨噬細胞活化症候群、間質性肺 疾、C型肝炎、誘導排卵，以及骨髓發育不良症候群。於 一較佳的實施例中，該疾病係選自於：一癌症、發炎障礙 20 或自體免疫障礙。於一特別佳的實施例中，該疾病係類風 濕性關節炎。 本發明進一步預期直接地或間接地附著至—可彳貞、則 的標記或治療劑之抗人類TNF-α抗體或片段。 108 200911826 本發明亦預期導致如以上提出的一種抗人類TNF-α 抗體或抗體片段的表現之一或多個核酸序列，該核酸序列 包括含有酵母或人類偏好密碼子之該等，或任擇地由酵母 或人類偏好密碼子所構成之該等。本發明亦預期包含該（等） 5 核酸序列之載體（包括質體或重組病毒載體）。本發明亦預期 表現以上提出的至少一個抗體之宿主細胞或是重組型宿主 細胞，包括：哺乳動物細胞、酵母細胞、細菌細胞，以及 昆蟲細胞。於一較佳的實施例中，宿主細胞是一酵母細胞。 於一更較佳的實施例中，酵母細胞是係一個二倍體酵母細 10 胞。於一更較佳的實施例中，酵母細胞是一畢赤酵母(Pichia yeast)。 本發明亦預期一種治療的方法，其包含投藥一治療 有效量的至少一個抗人類TNF-α抗體或片段至具有與 TNF-a表現細胞有關的一疾病或病況的一病人。可以治療 15 的疾病係存在於以上提出的非限制性的列表内。於一較佳 的實施例中，該疾病係選自於：一癌症、發炎障礙，或自 體免疫障礙。於一特別佳的實施例中，該疾病係類風濕性 關節炎。於另一個實施例中，治療進一步包括另一種治療 劑的投藥或選自於：化療、放射療法、細胞激素的投藥或 20 基因療法之攝生法。 本發明進一步預期一種活體内成像的方法，其係偵 測表現TNF-a的細胞之存在，該方法包含投藥一診斷有效 量的至少一個抗人類TNF-a抗體。於一實施例中，投藥進 一步包括一幫助在TNF-a表現的疾病位置之抗體的彳貞測之 109 200911826 放射性核種或螢光團（fluorophore)的投藥。於本發明的另— 個實施例中，活體内成像的方法係使用來偵測TNF_a表現 腫瘤或轉移或是係使用來偵測與TNF-a表現細胞關連的自 體免疫障礙之位址的存在。於一另外的實施例中，活體内 5 成像的方法之結果係用來幫助一適合的治療攝生法的設 計，包括含有放射療法，化療或其等之一組合的治療攝生 法。 編碼抗-TNF抗艎多肽之多核苷酸 10 本發明進一步針對編碼具有對TNF - a的結合專一性 之抗體的多肽之多核苷酸。於本發明的一個實施例中，本 發明的多核苷酸包含下列編碼序列辨識編號：2的變異輕鏈 多肽序列之多核苷酸序列，或任擇地由下列編碼序列辨識 編號：2的變異輕鏈多肽序列之多核苷酸序列所構成：
15 ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGG
GCTCCTACTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGCTG ACATTGTGATGACCCAGACTCCAGCCTCCGTGGAGGCA GCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGGCCA GTCAGAACATTCGCAGTTGGTTAGCCTGGTATCAGCAG
20 AAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATGGTGC ATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGATTCCAAG GCAGTGGATCTGGGACAGAGTACACTCTCACCATCATC GACCTGGACTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCA 110 200911826 AAGCAATTATGGTAGTAATGATAATAGTTATGGTAATGG T(序列辨識編號：i〇)。 於本發明的另一個實施例中，本發明的多核苷酸包 含下列編碼序列辨識編號：3的變異重鏈多肽序列之多核苷 5 酸序列，或任擇地由下列編碼序列辨識編號：3的變異重鏈 多肽序列之多核苷酸序列所構成：
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTC GCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGGTGGAGG AGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCT 10 GACACTC ACCTGCAC AGTCTCTGGATTCTCCCTCAGTA CCTACAACATGGGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAA GGGGCTGGAATACATCGGATACGTGTTGGGAAGTGGTA TCACATACTACGCGAGCTGGGCAAAAGGCCGATTCACC ATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGGAGATCAC 15 TAGTCCGACAACCGAGGAC ACGGCCACCTATTTCTGTG CCAGAGATGCTGGTGGCAGAGCTTCCTTG (序列辨識編 號：11)。 於本發明的一個另外的實施例中，編碼具有TNF-a 結合專一性的抗體片段之多核苷酸係包含序列辨識編號： 20 12 ;序列辨識編號：13 ;與序列辨識編號：14的多核苷酸 序列的一或多個，或任擇地由序列辨識編號：12 ;序列辨 識編號：13 ;與序列辨識編號：14的多核苷酸序列的一或 多個所組成，其等係對應至編碼序列辨識編號：2的輕鏈變 異序列之互補決定區（CDRs，或高變區）之多核苷酸。 111 200911826 於本發明的一個另外的實施例中，編碼具有TNF-ct 結合專一性的抗體片段之多核苷酸係包含序列辨識編號： 15 ;序列辨識編號：16 ;和序列辨識編號：17的多核苷酸 序列的一或多個，或任擇地由序列辨識編號：15 ;序列辨 5 識編號：16 ;和序列辨識編號：Π的多核苷酸序列的一或 多個所組成，其等係對應至編碼序列辨識編號：3的重鏈變 異序列之互補決定區（CDRs，或高變區）之多核普酸。 本發明亦預期多核苷酸序列，其等包括編碼本文中 說明的抗體片段之多核苷酸序列的一或多個。於本發明的 10 一個實施例中，編碼具有TNF-α結合專一性的抗體片段之 多核苦酸係包含，或任擇地由下列的編碼抗體片段之多核 苷酸的之一、二、三或更多個，包括全部，所組成：編碼 序列辨識編號：2的輕鏈變異區之多核苷酸序列辨識編號： 10;編碼序列辨識編號：3的重鏈變異區之多核苷酸序列辨 15 識編號：丨1 ;編瑪序列辨識編號：2的輕鏈變異區之互補決 定區（序列辨識編號：12 ;序列辨識編號：丨3 ;與序列辨識 編號：14)之多核苷酸；以及編碼序列辨識編號：3的重鏈 變異區之互補決定區（序列辨識編號：15 ;序列辨識編號： 16 ;與序列辨識編號：17)之多核苦酸。 2 〇 本發明進一步針對編碼具有對T N F - a的結合專一性 之抗體的多肽之多核苷酸。於本發明的一個實施例中，本 發明的多核苷酸包含下列編碼序列辨識編號：18的變異輕 鏈多肽序列之多核苷酸序列，或任擇地由下列編碼序列辨 識編號：18的變異輕鏈多肽序列之多核苷酸序列所構成： 112 200911826 ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGG GCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGCTG ACATTGTGATGACCCAGACTCCATCCTCCGTGTCTGAA CCTGTGCGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGGCCA 5 GTCAGAACATTTACAGCTACTTGTCCTGGTATCAACAG AGCCCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTACAAGGC ATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAAAG GCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGC GACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCA 10 ATCCAATTATGGTAGTGATAGTGATAGTTTTGGGAATGC T(序列辨識編號：26)。 於本發明的另一個實施例中，本發明的多核苷酸包 含下列編碼序列辨識編號：19的變異重鏈多肽序列之多核 苷酸序列，或任擇地由下列編碼序列辨識編號：19的變異 15 重鏈多肽序列之多核苷酸序列所構成：
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTC GCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGGTGGAGG AGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCT GACACTCACCTGCTCAGTCTCTGGATTCTCCCTCAATAA 20 TTATGTAATGGGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGG GGCTGGAATTCATCGGATACATTGCTTTTGGTATTGGCC CATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATC TCCAGCACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGAC CAGTCTGACACCCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTG 113 200911826 CCAGAGGTGATTATAGTGGTAATGACATT (序列辨識編 號：27)。 於本發明的一個另外的實施例中，編碼具有TNF_a 結合專一性的抗體片段之多核音酸係包含序列辨識編號： 5 28 ;序列辨識編號：29 ;和序列辨識編號：30的多核苦酸 序列之一或多個’或任擇地由序列辨識編號：28 ;序列辨 識編5虎.29，和序列辨識編號：30的多核普酸序列之一或 多個所組成，其等係對應至編碼序列辨識編號：18的輕鏈 變異序列之互補決定區（CDRs，或高變區）之多核苷酸。 1〇 於本發明的一個另外的實施例中，編碼具有TNF-a 結合專一性的抗體片段之多核苷酸係包含序列辨識編號： 31，序列辨識編號：32 ;和序列辨識編號：33的多核苷酸 序列之一或多個，或任擇地由序列辨識編號：31 ;序列辨 識編號· 32 ;和序列辨識編號：33的多核苷酸序列之一或 夕個所組成，其等係對應至編碼序列辨識編號：19的重鏈 變異序列之互補決定區(CDRs，或高變區）之多核普酸。 本發明亦預期多核苷酸序列，其等包括編碼本文中 "兒明的抗體片段之多核_酸序列的―或多個。於本發明的 2〇 個實細*例中，編碼具有TNF-a結合專一性的抗體片段之 多核苦S文係包含，或任擇地由下列的編瑪抗體片段之多核 普酸的之一、二、 ~ 二或更多個，包括全部，所組成：編碼 序列辨識編號： 〇 18的輕鏈變異區之多核苷酸序列辨識編 ' '扁碼序列辨識編號：19的重鏈變異區之多核苷酸 序列辨識編號：27 /’編碼序列辨識編號：18的輕鏈變異區 114 200911826 之互補決定區（序列辨識編號：28 ;序列辨識編號：29 ;與 序列辨識編號：30)之多核苷酸；以及編碼序列辨識編號： 19的重鏈變異區之互補決定區（序列辨識編號：31 ;序列辨 識編號：32 ;與序列辨識編號：33)之多核苷酸。 5 本發明進一步針對編碼具有對T N F - α的結合專一性 之抗體的多狀之多核苦酸。於本發明的一個實施例中，本 發明的多核苷酸包含，或任擇地由下列編碼序列辨識編 號：34的變異輕鏈多肽序列之多核苷酸序列所構成：
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGG 10 GCTCCTGCTGCTCTGGCTCCC AGGTTCC AC ATTTGCC AT CAAAGTGACCCAGACACCAGCCTCCGTGTCTGCAGCT GTGGGAGGCACAGTCAGCATCAATTGCCAGGCCAGTG AGGACATTGAAAGCTATTTGGCCTGGTATCAGCAGAAA CCAGGGCAGCCTCCCAAACTCCTTCTCTATGATGCATCC 15 GCTCTGGCTTCTGGGGTCCC ATCGCGGTTCAAAGGCAG TGGATCTGGGACAGAGTACACTCTCACCATCAGCGGCG TGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCAACAG GGTTATAGTTATAGTAATGTTGATAATTCT (序列辨識編 號：42)。 2〇 於本發明的另一個實施例中，本發明的多核苷酸包 含，或任擇地由下列編碼序列辨識編號：35的變異重鏈多 肽序列之多核苷酸序列所構成：
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTC
GCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGGTGGAGG 115 200911826 AGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCT GACACTCACCTGCAAAGTCTCTGGATTCTCCCTCAGCA GCTACGACATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAA GGGGCTGGAGTGGATCGGATACATTTGGAATGATGGTA 5 GTACAGCCTACGCGAGCTGGGCGACAGGCCGATTCACC ATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATCGC CAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTG CCAGAGGTCCTGTTTTTGCGACTACTCTTGGGTACTACT TTACCATC (序列辨識編號：43)。 l〇 於本發明的一個另外的實施例中，編碼具有TNF-α 結合專一性的抗體片段之多核苷酸係包含，或任擇地由序 列辨識編號：44 ;序列辨識編號：45 ;和序列辨識編號： 46的多核苷酸序列之一或多個所組成，其等係對應至編碼 序列辨識編號：34的輕鏈變異序列之互補決定區（CDRs， 15 或高變區）之多核苷酸。 於本發明的一個另外的實施例中’編碼具有TNF-a 結合專一性的抗體片段之多核苷酸係包含’或任擇地由序 列辨識編號：47 ;序列辨識編號：48 ;和序列辨識編號： 49的多核苷酸序列之一或多個所組成，其等係對應至編碼 20 序列辨識編號：35的重鏈變異序列之互補決定區（CDRs， 或高變區）之多核苷酸。 本發明亦預期多核苷酸序列，其等包括編碼本文中 說明的抗體片段之多核苷酸序列的一或多個。於本發明的 一個實施例中’蝙碼具有TNF-a結合專一性的抗體片段之 116 200911826 多核苷酸係包含，或任擇地由下列的編碼抗體片段之多核 苷酸的之一、二、三或更多個，包括全部，所組成：編碼 序列辨識編號：34的輕鏈變異區之多核苷酸序列辨識編 號：42 ;編碼序列辨識編號：35的重鏈變異區之多核苷酸 5 序列辨識編號：43 ;編碼序列辨識編號：34的輕鏈變異區 之互補決定區（序列辨識編號：44 ;序列辨識編號：45 ;與 序列辨識編號.46)之多核普酸；以及編碼序列辨識編號： 35的重鏈變異區之互補決定區（序列辨識編號：47 ;序列辨 識編號：48 ;與序列辨識編號：49)之多核苷酸。 〇 本發明進一步針對編碼具有對TN F - α的結合專一性 之抗體的多肽之多核苷酸。於本發明的一個實施例中，本 發明的多核苷酸包含，或任擇地由下列編碼序列辨識編 號：50的變異輕鏈多肽序列之多核苷酸序列所構成：
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGG 15 GCTCCTGCTGCTCTGGCTCACAGGTGCCACATTTGCCG CCGTGCTGACCCAGACTCCATCTCCCGTGTCTGCAGTT GTGGGAGGCACAGTCAGCATCAGTTGCCAGTCCAGCA AGAGAGTTGTTAATAGCGTTGCCTTATCCTGGTATCAGC AGAAACCAGGGCGCTCTCCTAAGCTCCTGATCTATTTT 20 GCATCCAAACTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAA AGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCGCCATTA GCGACGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGT GCAGGCCATTATACTGATAGTGGTGATGATGCT (序列辨 識編號：58)。 117 200911826 於本發明的另一個實施例中，本發明的多核苷酸包 含，或任擇地由下列編碼序列辨識編號：51的變異重鏈多 肽序列之多核苷酸序列所構成： ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTC 5 GCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGGTGGAGG AGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCT GACACTCACCTGCACAGTCTCTGGATTATCCCTCAGTA CCGAGACAATTAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAA GGGACTGGAGTGGATCGGATACATTGATAGTTCTGGTG 10 GC AC AGGCTACGCG A ACTGGGCG AGAGGCCGATTC AC CATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATTTGAAAATCA CCAGTCCGACAACCGGGGACACGGCCACCTATTTCTGT GCCAGAGGAACTATTACTACTGGCATGAACATC (序列辨 識編號：59)。 15 於本發明的一個另外的實施例中，編碼具有TNF-a 結合專一性的抗體片段之多核苷酸係包含，或任擇地由序 列辨識編號：60 ;序列辨識編號：61 ;和序列辨識編號： 62的多核苷酸序列之一或多個所組成’其等係對應至編碼 序列辨識編號：50的輕鏈變異序列之互補決定區（CDRs， 20 或高變區）之多核苷酸。 於本發明的一個另外的實施例中，編碼具有TNF-a 結合專一性的抗體片段之多核苷酸係包含，或任擇地由序 列辨識編號：63 ;序列辨識編號：64 ;和序列辨識編號： 65的多核苷酸序列之一或多個所組成’其等係對應至編碼 118 200911826 序列辨識編號：51的重鏈變異序列之互補決定區（CDRs， 或高變區）之多核苷酸。 本發明亦預期多核苷酸序列，其等包括編碼本文中 说明的抗體片段之多核苷酸序列的一或多個。於本發明的 5 一個實施例中，編碼具有TNF-α結合專一性的抗體片段之 多核苦酸係包含’或任擇地由下列的編碼抗體片段之多核 苷酸的之一、二、三或更多個，包括全部，所組成：編碼 序列辨識編號：50的輕鏈變異區之多核苷酸序列辨識編 號：58 ;編碼序列辨識編號：51的重鏈變異區之多核苷酸 10 序列辨識編號：59 ;編碼序列辨識編號：50的輕鏈變異區 之互補決定區（序列辨識編號：6〇 ;序列辨識編號：61 ;與 序列辨識編號：62)之多核苷酸；以及編碼序列辨識編號： 51的重鏈變異區之互補決定區（序列辨識編號：63 ;序列辨 識編號：64 ;與序列辨識編號：65)之多核苷酸。 15 本發明進一步針對編碼具有對TNF-a的結合專一性 之抗體的多肽之多核苷酸。於本發明的一個實施例中，本 發明的多核苷酸包含，或任擇地由下列編碼序列辨識編 號：66的變異輕鏈多肽序列之多核苷酸序列所構成：
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGG 20 GCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCACACTTGCGC AAGTGGTGACCCAGACTCCAGCCTCCGTGTCTGCAGCT GTGGGAGGCACAGTCACCATCAGTTGCCAGTCCAGTC AGAATGTTTATAATAATAATGACTTAGTCTGGTTTCAGC AGAAACCAGGTCAGCCTCCCAAGCGCCTGGTCTACTG 119 200911826 GGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCA GAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCATTCTCACCATC AGCGACCTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTATTG TGCAGGCGCCTATGATAGTGAAATTAGGGCT (序列辨識 5 編號：74)。 於本發明的另一個實施例中，本發明的多核苷酸包 含，或任擇地由下列編碼序列辨識編號：67的變異重鏈多 肽序列之多核苷酸序列所構成：
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTC 10 GCTGTGCTC AA AGGTGTCCAGTGTC AGTCGGTGGAGG
AGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCT GACACTCACCTGCGCAGTCTCTGGATTCTCCCTCAGTG TTTACTGGATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAG GGGCTGGAATGGATCGGAACCATTAGTACTGATGGTAT 15 C ACTGTCTACGCGACCTGGGCGAAAGGCCGATTC ACC A TCTCCAAAACCTCGTCGACCGCGGTGGATCTGAAACTC ACCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTG TGCCGGAGGGGGCGGCATGGACCCC (序列辨識編號： 75)。 20 於本發明的一個另外的實施例中，編碼具有TNF-a 結合專一性的抗體片段之多核皆酸係包含，或任擇地由序 列辨識編號：76 ;序列辨識編號：77 ;和序列辨識編號： 78的多核苷酸序列之一或多個所組成，其等係對應至編碼 120 200911826 序列辨識編號：66的輕鏈變異序列之互補決定區（CDRs， 或高變區）之多核苷酸。 於本發明的一個另外的實施例中，編碼具有TNF_a 結合專一性的抗體片段之多核普酸係包含，或任擇地由序 5 列辨識編號.79 ’序列辨識編號：80 ;和序列辨識編號： 81的多核苷酸序列之一或多個所組成，其等係對應至編碼 序列辨識編號：67的重鏈變異序列之互補決定區（CDRs， 或高變區）之多核苷酸。 本發明亦預期多核苷酸序列，其等包括編碼本文中 10 說明的抗體片段之多核苷酸序列的一或多個。於本發明的 一個實施例中’編碼具有TNF-α結合專一性的抗體片段之 多核苷酸係包含，或任擇地由下列的編碼抗體片段之多核 苷酸的之一、二、三或更多個，包括全部，所組成：編碼 序列辨識編號：66的輕鏈變異區之多核苷酸序列辨識編 15 號;編碼序列辨識編號：67的重鏈變異區之多核苷酸 序列辨識編號：75 ;編碼序列辨識編號：66的輕鏈變異區 之互補決定區（序列辨識編號：76 ;序列辨識編號：77 ;與 序列辨識編號：78)之多核苷酸；以及編碼序列辨識編號： 67的重鏈變異區之互補決定區（序列辨識編號：79;序列辨 2〇 識編號：80 ;與序列辨識編號：81)之多核苷酸。 本發明進一步針對編碼具有對T N F - α的結合專一性 之抗體的多肽之多核苷酸。於本發明的一個實施例中’本 發明的多核苷酸包含，或任擇地由下列編碼序列辨識編 號：95的變異輕鏈多肽序列之多核苷酸序列所構成* 121 200911826 ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGG GCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGATGCCAGATGTGCCTA TGATATGACCCAGACTCCAGCCTCTGTGGAGGTAGCTG GGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTCA 5 GAGCATTGCTAATAGGTTAGCCTGGTATCAGCAGAAAC CAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATTATGCATCCA CGCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAGCGGCAGT GGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGTGGCGT GCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCAGCAGA 10 CTTATAGTGATAATAATGTCGATAATGCT (序列辨識編 號：90)。 於本發明的另一個實施例中，本發明的多核苷酸包 含，或任擇地由下列編碼序列辨識編號：96的變異重鏈多 肽序列之多核苷酸序列所構成：
15 ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTC
GCTGTGTTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGGTGGAGG AGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCT GACACTCACCTGCACAGTCTCTGGATTCTCCCTCAGTA GCAATACAATAAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAA 20 GGGGCTGGAGTGGATCGGATACATTTGGCGTGGTGTTA GCACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCCGATTCACC ATCTCCAAAACCTCGTCGACGACGGTGGATCTGAAGAT CACCGGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCT 122 200911826 GTGCCAGAGATGCTGGTGATGGTGGTGGATATTCCTTG GATCTC (序歹d辨識編號：91) 〇 於本發明的一個另外的實施例中，編碼具有TNF-α 結合專一性的抗體片段之多核苷酸係包含，或任擇地由序 5 列辨識編號：92 ;序列辨識編號：93 ;和序列辨識編號： 94的多核苷酸序列之一或多個所組成，其等係對應至編碼 序列辨識編號：95的輕鏈變異序列之互補決定區（CDRs， 或高變區）之多核苷酸。 於本發明的一個另外的實施例中，編碼具有TNF-a 10 結合專一性的抗體片段之多核苷酸係包含，或任擇地由序 列辨識編號：95 ;序列辨識編號：96 ;和序列辨識編號： 97的多核苷酸序列之一或多個所組成，其等係對應至編碼 序列辨識編號：96的重鏈變異序列之互補決定區（CDRs， 或高變區）之多核皆酸。 15 本發明亦預期多核苷酸序列，其等包括編碼本文中 。兒明的抗體片段之多核苦酸序列的一或多個。於本發明的 一個貫施例中，編碼具有TNF-a結合專一性的抗體片段之 多核苷酸係包含，或任擇地由下列的編碼抗體片段之多核 苷酸的之一、二、三或更多個，包括全部，所組成：編碼 20 序列辨識編號：95的輕鏈變異區之多核苷酸序列辨識編 唬.90 ;編碼序列辨識編號：96的重鏈變異區之多核苷酸 序列辨識編號：91 ;編碼序列辨識編號·· 95的輕鏈變異區 之互補決定區（序列辨識編號：92 ;序列辨識編號：93 ;與 序列辨識編號：94)之多核苷酸；以及編碼序列辨識編號： 123 200911826 %的重鏈變異區之互補決定區（序列辨識編號：95 ;序列辨 識編號：96 ;與序列辨識編號：97)之多核苷酸。 本發明進一步針對編碼具有對TN F - α的結合專一性 之抗體的多肽之多核苷酸。於本發明的一個實施例中，本 5 發明的多核苷酸包含，或任擇地由下列編碼序列辨識編 號：98的變異輕鏈多肽序列之多核苷酸序列所構成： ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGG GCTCCTACTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGCTG ACATTGTGATGACCCAGACTCCAGCCTCCGTGGAGGCA 10 GCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCA GTCAGAGCATTGTCAGTTGGTTAGCCTGGTATCAGCAG AAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATGGTGC ATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAAAG GCAGTGGATCTGGGACAGAGTACACTCTCACCATCAGC 15 GACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCC ACTTACTACTGTCA AAGCAATTATGGTAGTAATAGTCATAGTTTTGGGAATAC Τ(序列辨識編號：106)。 於本發明的另一個實施例中，本發明的多核苷酸包 含，或任擇地由下列編碼序列辨識編號：99的變異重鏈多 20 肽序列之多核苷酸序列所構成：
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTC
GCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCAGTGGAGG
AGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCT
GACACTCACCTGCACAGTCTCTGGATTCTCCCTCAGTA 124 200911826
GCGACAATATGGGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAA GGGGCTGGAATACATCGGATACATTACTTATGGTGGTTT CACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCA TCTCCAAGACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACC 5 AGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGC - CAGAGAAGCTGGTGGTAGGGCTAATGTC (序列辨識編 . 號：107)。 於本發明的一個另外的實施例中，編碼具有TNF-α f 結合專一性的抗體片段之多核苷酸係包含，或任擇地由序 10 列辨識編號：108 ;序列辨識編號：109 ;和序列辨識編號： 110的多核苷酸序列之一或多個所組成’其等係對應至編碼 序列辨識編號：98的輕鏈變異序列之互補決定區（CDRs， 或高變區）之多核苷酸。 於本發明的一個另外的實施例中’編碼具有TNF-a 15 結合專一性的抗體片段之多核苷酸係包含，或任擇地由序 列辨識編號：111 ;序列辨識編號：112 ;和序列辨識編號： I 113的多核苷酸序列之一或多個所組成’其等係對應至編碼 … 序列辨識編號：99的重鏈變異序列之互補決定區(CDRs， 或高變區）之多核苷酸。 20 本發明亦預期多核苷酸序列，其等包括編碼本文中 說明的抗體片段之多核苷酸序列的一或多個。於本發明的 一個實施例中，編碼具有TNF-a結合專一性的抗體片段之 多核苷酸係包含，或任擇地由下列的編碼抗體片段之多核 苷酸的之一、二、三或更多個，包括全部’所組成：編碼 125 200911826 序列辨識編號：98的輕鏈變異區之多核苦酸序列辨識編 號：106;編碼序列辨識編號：99的重鏈變異區之多核苷酸 序列辨識編號：107 ;編碼序列辨識編號：98的輕鏈變異區 之互補決定區（序列辨識編號：108 ;序列辨識編號：109 ; 5與序列辨識編號：丨1〇)之多核苷酸；以及編碼序列辨識編 號：99的重鏈變異區之互補決定區（序列辨識編號：lu ; 序列辨識編號：112 ;與序列辨識編號：113)之多核苷酸。 本發明進一步針對編碼具有對TN F - α的結合專一性 之抗體的多肽之多核苦酸。於本發明的一個實施例中，本 10 發明的多核苷酸包含，或任擇地由下列編碼序列辨識編 號：114的變異輕鏈多肽序列之多核苷酸序列所構成：
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGG GCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGCTG ACATTGTGATGACCCAGACTCCATCCTCCGTGTCTGAA 15 CCTGTGGGAGGCACAGTCACCATC ATGTGCC AGGCCAG TCAGAACATTTACAGCTACTTATCCTGGTATCAGCAGAA ACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTACAAGGCAT CCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCGCAGGC AGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCGA 20 CCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCAAA GCAATTATGGTAGTAATAGTGATAGTTTTGGGAATGCT (序列辨識編號：122)。 126 200911826 於本發明的另一個實施例中，本發明的多核苷酸包 含，或任擇地由下列編碼序列辨識編號：115的變異重鏈多 肽序列之多核苷酸序列所構成： ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTC 5 GCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGGTGGAGG AGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCT GACACTCACCTGCACAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTA ATTATGTAATGGGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAG GGGCTGGAATTCATCGGATACATTGCTTTTGGTATTGGC 10 CCATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCCGATTCTCCAT CTCCAGCACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGACAATGA CCAGTCTGACACCCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGT GCCAGAGGTGATTATAGTGGTAATAACATT (序列辨識編 號：123)。 15 於本發明的一個另外的實施例中，編碼具有TNF-a 結合專一性的抗體片段之多核苷酸係包含，或任擇地由序 列辨識編號：124 ;序列辨識編號：125 ;和序列辨識編號： 126的多核苷酸序列之一或多個所組成，其等係對應至編碼 序列辨識編號：114的輕鏈變異序列之互補決定區（cdrs， 2〇 或高變區）之多核苷酸。 於本發明的一個另外的實施例中，編碼具有TNF_a 結合專一性的抗體片段之多核苷酸係包含，或任擇地由序 列辨識編號：127 ;序列辨識編號：丨28 ;和序列辨識編號： 12 9的多核苷酸序列之一或多個所組成，其等係對應至編碼 127 200911826 序列辨識編號：115的重鏈變異序列之互補決定區（CDRs， 或高變區）之多核苷酸。 本發明亦預期多核苷酸序列，其等包括編碼本文中 說明的抗體片段之多核苷酸序列的一或多個。於本發明的 5 一個實施例中，編碼具有TNF-ct結合專一性的抗體片段之 多核苷酸係包含，或任擇地由下列的編碼抗體片段之多核 苷西文的之、一、二或更多個，包括全部，所組成：編碼 序列辨識編號：114的輕鏈變異區之多核苷酸序列辨識編 號：122 ;編碼序列辨識編號：115的重鏈變異區之多核苷 10 酸序列辨識編號：123 ;編碼序列辨識編號：114的輕鏈變 異&之互補決疋區（序列辨識編號：124 ;序列辨識編號： 125 ;與序列辨識編號：126)之多核苷酸；以及編碼序列辨 識編號：115的重鏈變異區之互補決定區（序列辨識編號： 127，序列辨識編號：128 ;與序列辨識編號：129)之多核 15 苷酸。 本發明進一步針對編碼具有對T N F - α的結合專一性 之抗體的多肽之多核普酸。於本發明的一個實施例中，本 發明的多核苷酸包含，或任擇地由下列編碼序列辨識編 號：130的變異輕鏈多肽序列之多核苷酸序列所構成：
20 ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGG
GCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCACATTTGCGC
AAGTGCTGACCCAGACTCCATCCTCCGTGTCTGCAGCT
GTGGGAGGCACAGTCACCGTCAGTTGCCAGTCCAGTC
AGAATGTTTATAATAACAACGACTTCGTCTGGTTTCAGC 128 200911826 AGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCGCCTAATCTACTGG GCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAA AGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCA ACGACCTGGAATGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGT 5 GCAGGCGCTTATATTACTGAGCTTAGGACT (序列辨識編 號：138)。 於本發明的另一個實施例中，本發明的多核苷酸包 含，或任擇地由下列編碼序列辨識編號：131的變異重鏈多 肽序列之多核苷酸序列所構成：
10 ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTC GCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGGTGGAGG AGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCT GACACTCACCTGCACAGTCTCTGGATTCTCCCTCAGTAT CTACTGGATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAG 15 GGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTAGTACTGATGGTAG CGCATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCA TCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAGGATC ACCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTG TGCCGGAGGGGGCGGCATGGACCCC (序列辨識編號： 20 139)。 於本發明的一個另外的實施例中，編碼具有TNF-a 結合專一性的抗體片段之多核苷酸係包含，或任擇地由序 列辨識編號：140 ;序列辨識編號：141 ;和序列辨識編號： 142的多核苷酸序列之一或多個所組成，其等係對應至編碼 129 200911826 序列辨識編號：130的輕鏈變異序列之互補決定區（CDRs， 或高變區）之多核苷酸。 於本發明的一個另外的實施例中，編碼具有TNF-a 結合專一性的抗體片段之多核苦酸係包含，或任擇地由序 5 列辨識編號：143 ;序列辨識編號：144 ;和序列辨識編號： 145的多核苷酸序列之一或多個所組成，其等係對應至編碼 序列辨識編號：131的重鏈變異序列之互補決定區（CDRs， 或高變區）之多核苷酸。 本發明亦預期多核苷酸序列，其等包括編碼本文中 10 說明的抗體片段之多核苷酸序列的一或多個。於本發明的 一個實施例中’編碼具有TNF-α結合專一性的抗體片段之 多核苷酸係包含，或任擇地由下列的編碼抗體片段之多核 苷酸的之一、二、三或更多個，包括全部，所組成：編碼 序列辨識編號：130的輕鏈變異區之多核誓酸序列辨識編 15 號：138 ;編碼序列辨識編號：131的重鏈變異區之多核普 酸序列辨識編號：139 ;編碼序列辨識編號：130的輕鏈變 異區之互補決定區（序列辨識編號：14〇 ;序列辨識編號： 141 ;與序列辨識編號：142)之多核苷酸；以及編碼序列辨 s哉編號.131的重鏈變異區之互補決定區（序列辨識編號： 20丨43，序列辨識編號：144 ;與序列辨識編號：145)之多核 苷酸。 本發明進一步針對編碼具有對T n F - a的結合專一性 之抗體的多肽之多核苷酸。於本發明的一個實施例中，本 130 200911826 發明的多核苷酸包含，或任擇地由下列編碼序列辨識編 號：146的變異輕鏈多肽序列之多核苷酸序列所構成： ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGG GCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCACATTTGCGC 5 AAGTGCTGACCCAGACTGCATCGTCCGTGTCTGCAGCT GTGGGAGGCACAGTCACCATCAGTTGCCAGTCCAGTC AGAGTGTTTATAATAATAACGACTTCATCTGGTTTCAGC AGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCGCCTCATCTACTGG GCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCAA 10 AGGC AGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACC ATCA ACGACCTGGAGTGTGACGATGCTGCCGTTTACTATTGT GCAGGCGCTTATGATAGTGAGGTTAGGGCT (序列辨識編 號：154)。 於本發明的另一個實施例中，本發明的多核苷酸包 15 含，或任擇地由下列編碼序列辨識編號：147的變異重鏈多 肽序列之多核苷酸序列所構成：
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTC GCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGGTGGAGG AGTCTGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCT 20 GACACTCACCTGCACAGTCTCTGGATTCTCCCTCAGTAT CTACTGGATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAGG GGGCTGGAATGGATCGGGGTCATTAGTACTGATGGTAC CACATACTACGCGAACTGGGCGAAAGGCCGATTCACCA TCTCCAAAGCCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAGAATC 131 200911826 accagtccgacaaccgaggacacggccacctatttctg TGCCGGAGGGGGCGGCATGGACCCC (序列辨識編號： 155)。 於本發明的一個另外的實施例中，編碼具有TNF-a 5 結合專一性的抗體片段之多核苷酸係包含，或任擇地由序 列辨識編號：156 ;序列辨識編號：157 ;和序列辨識編號： 158的多核苷酸序列之一或多個所組成，其等係對應至編碼 序列辨識編號：146的輕鏈變異序列之互補決定區（CDRs， 或高變區）之多核苷酸。 10 於本發明的一個另外的實施例中，編碼具有TNF-a 結合專一性的抗體片段之多核發酸係包含，或任擇地由序 列辨識編號.159，序列辨識編號：160 ;和序列辨識編號： 161的多核苷酸序列之一或多個所組成’其等係對應至編碼 序列辨識編號.147的重鏈變異序列之互補決定區（cDRs， 15 或高變區）之多核苷酸。 本發明亦預期多核苷酸序列，其等包括編碼本文中 說明的抗體片段之多核㈣序列的—或多個。於本發明的 -個實施例中，編碼具有TNF_a結合專_性的抗體片段之 多核普酸係包含’或任擇地由下列的編碼抗體片段之多核 20 苷酸的之一、二、三或更多個 三或更多個，包括全部，所組成：編碼
異區之互補決定區（序列辨識編號：156 ; 序列辨識編號： 132 200911826 157 ;與序列辨識編號：158)之多核苷酸；以及編碼序列辨 識編號：147的重鏈變異區之互補決定區（序列辨識編號： 159 ;序列辨識編號：160 ;與序列辨識編號：161)之多核 芽酸。 5 本發明進一步針對編碼具有對T N F - α的結合專一性 之抗體的多肽之多核苷酸。於本發明的一個實施例中，本 發明的多核苷酸包含，或任擇地由下列編碼序列辨識編 號：162的變異輕鏈多肽序列之多核苷酸序列所構成： ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGG 10 GCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCC AC ATTTGCGC AAGTGATGACCCAGACTCCAGCCTCCGTGTCTGCAGCT GTGGGAGGCACAGTCACCATCAGTTGCCAGTCCAGTG AGAGTGTTTATAATAATAATGACTTAATCTGGTTCCGGC AGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCGCCTAATTTACTGG 15 GCATCCC AACTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGGTTC ΑΑ AGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCA ACGACCTGGAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGT GCAGGCGCTTATGATAGTGAGATTAGGGCT (序列辨識編 號：170)。 20 於本發明的另一個實施例中，本發明的多核苷酸包 含，或任擇地由下列編碼序列辨識編號：163的變異重鏈多 肽序列之多核苷酸序列所構成：
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTC
GCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGGTGGAGG 133 200911826 AGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCT GACACTCACCTGCACAGTCTCTGGATTCTCCCTCAGTAT CTACTGGATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAG GGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGCTTCTGATGGTAG 5 CACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCA TCTCCAAAGCCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAGATT GCCAGCCCGACAATTGAGGACACGGCCACCTATTTCTG TGCCGGAGGGGGCGGCATGGACCCC (序列辨識編號： 171)。 10 於本發明的一個另外的實施例中，編碼具有TNF-α 結合專一性的抗體片段之多核苷酸係包含，或任擇地由序 列辨識編號：172 ;序列辨識編號：173 ;和序列辨識編號： Π4的多核苷酸序列之一或多個所組成，其等係對應至編碼 序列辨識編號：162的輕鏈變異序列之互補決定區（CDRs， 15 或高變區）之多核芽酸。 於本發明的一個另外的實施例中，編碼具有TNF-a 結合專一性的抗體片段之多核苷酸係包含，或任擇地由序 列辨識編號：175 ;序列辨識編號：176 ;和序列辨識編號： Π7的多核苷酸序列之一或多個所組成’其等係對應至編碼 20 序列辨識編號：163的重鏈變異序列之互補決定區（CDRs， 或高變區）之多核苷酸。 本發明亦預期多核苷酸序列，其等包括編碼本文中 說明的抗體片段之多核苷酸序列的一或多個。於本發明的 一個實施例中，編碼具有TNF-α結合專一性的抗體片段之 134 200911826 多核芽酸係包含，或任擇地由下列的編碼抗體片段之多核 苷酸的之一、二、三或更多個，包括全部，所組成：編碼 序列辨識編號：162的輕鏈變異區之多核苷酸序列辨識編 號.Π0 ;編碼序列辨識編號：163的重鏈變異區之多核苷 5 酸序列辨識編號：171 ;編碼序列辨識編號：162的輕鏈變 . 異區之互補決定區（序列辨識編號：172 ;序列辨識編號： 173，與序列辨識編號：174)之多核苷酸；以及編碼序列辨 . 識編號：163的重鏈變異區之互補決定區（序列辨識編號： 175 ;序列辨識編號：176 ;與序列辨識編號：177)之多核 10 苷酸。 本發明進一步針對編碼具有對TN F - α的結合專一性 之抗體的多肽之多核苷酸。於本發明的一個實施例中，本 發明的多核苷酸包含，或任擇地由下列編碼序列辨識編 號：178的變異輕鏈多肽序列之多核苷酸序列所構成：
15 ATGGAC ACGAGGGCCCCC ACTC AGCTGCTGGG
GCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGCGC TTGTGATGACCCAGACTCCATCCCCTGTGTCTGCAGCT GTGGGAGGCACAGTCACCATCAGTTGCCAGTCTAGTGA GAGCGTTGTTTTTAACAACCGCTTATCCTGGTATCAGCA 20 GAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTACTGGG CATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAAA GGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAG TGGCGTGGAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTG 135 200911826 CAGGATATAAAAGTTATAGTAATGATGATTTTGCT (序列 辨識編號：186)。 於本發明的另一個實施例中，本發明的多核苷酸包 含，或任擇地由下列編碼序列辨識編號：179的變異重鏈多 5 肽序列之多核苷酸序列所構成：
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTC GCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGGTGGAGG AGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCT GACACTCACCTGCACAGTCTCTGGATTCTCCCTCAGTC 10 ACTATGC AATGGGCTGGGTCCGCCAGGCTCC AGGGAAG GGGCTGGAATGGATCGGAATCATTAGTAGTAATGGTGT CACATACTACGCGACCTGGGCGAGCGGCCGATTCACCA TCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATCACC AGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGC 15 C AGAGGAGATGATACTAGTATTATTTATTAC ATTTACGCC TTTGATCTC (序歹丨]辨識編號：187)。 於本發明的一個另外的實施例中’編碼具有TNF-a 結合專一性的抗體片段之多核苷酸係包含，或任擇地由序 列辨識編號：188 ;序列辨識編號：189 ;和序列辨識編號： 20 190的多核苷酸序列之一或多個所組成，其等係對應至編碼 序列辨識編號：Π8的輕鏈變異序列之互補決定區（CDRs， 或高變區）之多核苷酸。 於本發明的一個另外的實施例中’編碼具有TNF-a 結合專一性的抗體片段之多核苷酸係包含，或任擇地由序 136 200911826 列辨識編號：191 ;序列辨識編號：192 ;和序列辨識編號： 19 3的多核普酸序列之一或多個所組成，其等係對應至編碼 序列辨識編號：179的重鏈變異序列之互補決定區（CDRs ’ 或高變區）之多核苷酸。 5 本發明亦預期多核苷酸序列，其等包括編碼本文中 說明的抗體片段之多核苷酸序列的一或多個。於本發明的 一個實施例中，編碼具有丁NF_a結合專一性的抗體片段之 多核苦酸係包含，或任擇地由下列的編碼抗體片段之多核 苷酸的之一、二、三或更多個，包括全部，所組成：編碼 1〇 序列辨識編號：178的輕鏈變異區之多核苷酸序列辨識編 號：186 ;編碼序列辨識編號：179的重鏈變異區之多核苷 酸序列辨識編號：187 ;編碼序列辨識編號：178的輕鏈變 異區之互補決定區（序列辨識編號：188 ;序列辨識編號： 189 ;與序列辨識編號：190)之多核苷酸；以及編碼序列辨 15 識編號.179的重鏈變異區之互補決定區（序列辨識編號： 191 ;序列辨識編號·· I% ;與序列辨識編號：193)之多核 苷酸。 本發明進一步針對編碼具有對TNF-a的結合專一性 之抗體的多肽之多核苷酸。於本發明的一個實施例中，本 20 發明的多核苷酸包含’或任擇地由下列編碼序列辨識編 號：194的變異輕鏈多肽序列之多核苷酸序列所構成：
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGG
GCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGCTG
ACATTGTGATGACCCAGACTCCAGCCTCCGTGTCTGAA 137 200911826 CCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGGCCA GTCAGAACATTTACAGCACCTTAGCCTGGTATCAGCAG AAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATCTGGC ATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAAAG 5 GCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGC GACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTATTACTGTCA AACCAGTCATGGTAGTAATAGTGATAGTTTTGGTTATGC T (序列辨識編號：202)。 於本發明的另一個實施例中，本發明的多核苷酸包 10 含，或任擇地由下列編碼序列辨識編號：195的變異重鏈多 肽序列之多核苷酸序列所構成：
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTC GCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGGTGGAGG AGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCT 15 G AC ACTC ACTTGCAC AGTCTCTGG A ATCG ACCTCAGTA GCTATGCAATGGGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAG GGGCTGGAATACATCGGATACATTCTTAGTAGTGGTATC ACATACTACGCGAGTTGGGCGAGAGGCCGATTCACCAT CTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGA 20 CCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGT GCCAGAAATGGTAATTATAATAGTGGTACGGACATC (序 列辨識編號：203)。 於本發明的一個另外的實施例中，編碼具有TNF-a 結合專一性的抗體片段之多核苷酸係包含，或任擇地由序 138 200911826 列辨識編號：204 ;序列辨識編號：205 ;和序列辨識編號： 206的多核苷酸序列之一或多個所組成’其等係對應至編碼 序列辨識編號：194的輕鏈變異序列之互補決定區（CDRs， 或高變區）之多核苷酸。 5 於本發明的一個另外的實施例中，編碼具有TNF-ct 結合專一性的抗體片段之多核苷酸係包含，或任擇地由序 列辨識編號：207 ;序列辨識編號：208 ;和序列辨識編號： 209的多核苷酸序列之一或多個所組成，其等係對應至編碼 序列辨識編號：195的重鏈變異序列之互補決定區（cdRs， 10 或高變區）之多核苷酸。 本發明亦預期多核苦酸序列，其等包括編碼本文中 説明的抗體片段之多核苷酸序列的一或多個。於本發明的 一個實施例中，編碼具有TNF_a結合專一性的抗體片段之 多核苷酸係包含，或任擇地由下列的編碼抗體片段之多核 15苷酸的之-、二、三或更多個，包括全部，所組二二 序列辨識編號：194的輕鏈變異區之多核苷酸序列辨識編 號：202 ;編碼序列辨識編號：195的重鏈變異區之多核苷 酸序列辨識編號：203 ;編碼序列辨識編號：194的輕鏈變 異區之互補決定區（序列辨識編號：2〇4 ;序列辨識編號： 2〇 205 ;與序列辨識編號：2G6)之多核賊；以及岸_ 識編號：195的重鏈變異區之互補決定區（序列辨識編號： 207，序列辨識編號：208 ;與序列辨識編號：2〇9)之多核 苦酸。 139 200911826 本發明進一步針對編碼具有對TN F - α的結合專一性 之抗體的多肽之多核苷酸。於本發明的一個實施例中，本 發明的多核苷酸包含，或任擇地由下列編碼序列辨識編 號：210的變異輕鏈多肽序列之多核苷酸序列所構成：
5 ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGG
GCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGCTG ACATTGTGATGACCCAGACTCCAGCCTCCGTGTCTGAA CCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGGCCA GTCAGAACATTTACAGCACCTTAGCCTGGTATCAGCAG 10 AAACC AGGGC AGCCTCCC AAGCTCCTGATCTATCTGGC ATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAAAG GCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGC GACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACCTATTACTGTCA AACCAATCATGGTAGTAATAGTGATAGTTTTGGTTATGC 15 Τ(序列辨識編號：218)。 於本發明的另一個實施例中，本發明的多核苷酸包 含，或任擇地由下列編碼序列辨識編號：211的變異重鏈多 肽序列之多核苷酸序列所構成：
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTC 20 GCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGGTGGAGG AGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCT GACACTCACCTGCACAGTCTCTGGATTCTCCCTCAGTA GCTATGCAATGGGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAG GGGCTGGAATACATCGGATACATTGGTAGTAGTGGTATC 140 200911826 ACATACTACACGAGTTGGGCGAGAGGCCGTTTCACCAT CTCCAAACCCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGA CCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGT GCCAGAAATGGTAATTATAATAGTGGTACGGACATC (序 5 列辨識編號：219)。 於本發明的一個另外的實施例中，編碼具有TNF-α 結合專一性的抗體片段之多核苷酸係包含，或任擇地由序 列辨識編號：220 ;序列辨識編號：221 ;和序列辨識編號： 222的多核苷酸序列之一或多個所組成’其等係對應至編碼 10 序列辨識編號：210的輕鏈變異序列之互補決定區（CDRs， 或南變區）之多核苦酸。 於本發明的一個另外的實施例中，編碼具有TNF_a 結合專一性的抗體片段之多核苷酸係包含，或任擇地由序 列辨識編號：223 ;序列辨識編號：224 ;和序列辨識編號： 15 225的多核苷酸序列之一或多個所組成，其等係對應至編碼 序列辨識編號：211的重鏈變異序列之互補決定區（CDRs， 或高變區）之多核苷酸。 本發明亦預期多核苷酸序列’其等包括編碼本文中 說明的抗體片段之多核苷酸序列的一或多個。於本發明的 20 一個實施例中，編碼具有TNF-a結合專一性的抗體片段之 多核苷酸係包含’或任擇地由下列的編碼抗體片段之多核 苷酸的之一、二 '三或更多個，包括全部，所組成：編碼 序列辨識編號：210的輕鏈變異區之多核苷酸序列辨識編 唬：218 ;編碼序列辨識編號：211的重鏈變異區之多核苷 141 200911826 酸序列辨識編號：219 ;編碼序列辨識編號：21〇的輕鏈變 異區之互補決定區（序列辨識編號：220 ;序列辨識編號： 221 ;與序列辨識編號.222)之多核苷酸；以及編碼序列辨 識編號：211的重鏈變異區之互補決定區（序列辨識編號： 5 223 ;序列辨識編號：224 ;與序列辨識編號：225)之多核 苦酸。 本發明進一步針對編碼具有對TNF-α的結合專一性 之抗體的多肽之多核苷酸。於本發明的一個實施例中，本 發明的多核苷酸包含，或任擇地由下列編碼序列辨識編 10 號：226的變異輕鏈多肽序列之多核苷酸序列所構成： ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGG GCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGCTG ACATTGTGATGACCCAGACTCCAGCCTCCGTGTCTGAA CCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGGCCA 15 GTC AGAGC ATTTAC AGCTCCTTTTCCTGGTATC AAC AGA TACCAGGCCAGCGTCCCAAGCTCCTGATCTATTATGCAT CCACTCTGGCCTCTGGGGTCCCATCGCGATTCAGCGGC AGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCGA CCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCAAA 20 GCAATCATGGTAGTAATGGTGATAGTTTTGGTAATGCT (序列辨識編號：234)。 於本發明的另一個實施例中，本發明的多核苷酸包 含’或任擇地由下列編碼序列辨識編號：227的變異重鏈多 肽序列之多核苷酸序列所構成： 142 200911826 ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTC GCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGGTGGAGG AGTCCGGGGGTCGCCTGGTGTCGCCTGGGACACCCCT GACACTCACCTGCACAGTCTCTGGAATCGACCTCAGTA 5 GTTATGGAATGGGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAG GGGCTGGAATACATCGGATACATGATTGCTAGTGGTATC ACATATTACGCGGCCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCAT CTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATCA CCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGT 10 GCCAGAAATTACTACGGCATGGACCCC (序列辨識編 號：235)。 於本發明的一個另外的實施例中，編碼具有TNF-α 結合專一性的抗體片段之多核苷酸係包含，或任擇地由序 列辨識編號：236 ;序列辨識編號：237 ;和序列辨識編號： 15 238的多核苷酸序列之一或多個所組成，其等係對應至編碼 序列辨識編號：226的輕鏈變異序列之互補決定區（CDRs， 或高變區）之多核苷酸。 於本發明的一個另外的實施例中’編碼具有TNF-α 結合專一性的抗體片段之多核苷酸係包含，或任擇地由序 20 列辨識編號：239 ;序列辨識編號：240 ;和序列辨識編號： 241的多核苷酸序列之一或多個所組成，其等係對應至編碼 序列辨識編號：227的重鏈變異序列之互補決定區（CDRs ’ 或高變區）之多核苷酸。 143 200911826 本發明亦預期多核苷酸序列，其等包括編碼本文中 S兒明的抗體片段之多核普酸序列的一或多個。於本發明的 一個實施例中，編碼具有TNF-α結合專一性的抗體片段之 多核苷酸係包含，或任擇地由下列的編碼抗體片段之多核 5 苷酸的之一、二、三或更多個，包括全部，所組成：編碼 序列辨識編號：226的輕鏈變異區之多核苷酸序列辨識編 號：234 ;編碼序列辨識編號：227的重鏈變異區之多核苦 酸序列辨識編號：235 ;編碼序列辨識編號：226的輕鏈變 異區之互補決定區（序列辨識編號：236 ;序列辨識編號： 10 237 ;與序列辨識編號：238)之多核苷酸；以及編碼序列辨 識編5虎.227的重鍵變異區之互補決定區（序列辨識編號： 239 ;序列辨識編號：240 ;與序列辨識編號：241)之多核 皆酸。 本發明進一步針對編碼具有對TNF-α的結合專一性 15 之抗體的多肽之多核苷酸。於本發明的一個實施例中，本 發明的多核苷酸包含，或任擇地由下列編碼序列辨識編 號：242的變異輕鏈多肽序列之多核苷酸序列所構成：
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGG GCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGCTG 20 ACATTGTGATGACGCAGACTCCAGCCTCCGTGTCCGAA CCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGTCAGGCCA GTCAGACCATTTACAGTAGCTTATCCTGGTATCAGCAGA AACCAGGGCAGCGTCCCAAGCTCCTGATCTATGCTGCA TCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAAAGG 144 200911826 CAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATAAGCG ACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCAA AGTAATCATGGTAGTAATAGTGATAGTTATGGCAATGCT (序列辨識編號：250)。 5 於本發明的另一個實施例中，本發明的多核苷酸包 含，或任擇地由下列編碼序列辨識編號：243的變異重鏈多 肽序列之多核苷酸序列所構成： ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTC GCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGCTGGAGG 10 AGTCCGGGGGTCGCCTGGTCAAGCCTGACGAAACCCT GACAATCACCTGCACAGTCTCTGGAATCGACCTCAATA ACTACAACATGGGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAA GGGGCTGGAATACATCGGATACATTCTTGGTAGTGGTAT CACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCA 15 TCTCGAA AACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATG ACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACGTATTTCTG TGCTGGTAGTATTTATTATAGGGGGTACGGCATGGACCC C (序列辨識編號：251)。 於本發明的一個另外的實施例中，編碼具有TNF-a 20 結合專一性的抗體片段之多核苦酸係包含，或任擇地由序 列辨識編號：252 ;序列辨識編號：253 ;和序列辨識編號： 25 4的多核苷酸序列之一或多個所組成，其等係對應至編碼 序列辨識編號：242的輕鏈變異序列之互補決定區（CDRs， 或高變區）之多核苷酸。 145 200911826 於本發明的一個另外的實施例中，編碼具有TNF-α 結合專一性的抗體片段之多核苷酸係包含，或任擇地由序 列辨識編號：255 ;序列辨識編號：256 ;和序列辨識編號： 257的多核苷酸序列之一或多個所組成，其等係對應至編碼 5 序列辨識編號：243的重鏈變異序列之互補決定區(cdRs， 或高變區）之多核苷酸。 本發明亦預期多核苷酸序列’其等包括編碼本文中 說明的抗體片段之多核苦酸序列的一或多個。於本發明的 一個實施例中，編碼具有TNF_a結合專一性的抗體片段之 10多核苷酸係包含，或任擇地由下列的編碼抗體片段之多核 誓酸的之-、二、三或更多個，包括全部，所組成：編碼 序列辨識編號：242的輕鏈變異區之多核苦酸序列辨識編 號：250 ;編碼序列辨識編號：243的重鏈變異區之多核苷 酸序列辨識編號：251 ;編碼序列辨識編號：242的輕鍵變 15異區之互補決定區（序列辨識編號：252 ;序列辨識編號： 253 ;與序列辨識編號：254)之多核苦酸；以及編碼序列辨 識編號：243的重鏈變異區之互補決定區（序列辨識編號： 255 ;序列辨識編號：256 ;與序列辨識編號：257)之多核 苷酸。 2〇 本發明進一步針對編碼具有對TNF-a的結合專一性 之抗體的多肽之多核苷酸。於本發明的_個實施例中本 發明的多核㈣包含，或任擇地由下列編碼序列辨識編 號：258的變異輕鏈多肽序列之多核苷酸序列所構成. 146 200911826 ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGG GCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGCTG ACATTGTGATGACCCAGACTCCAGCCTCCGTGTCTGAA CCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGGCCA 5 GTCAGAGCATTTACAGCACCTTAGCCTGGTATCAGCAG AAACCAGGGCAGCCTCCCAAACTCCTGATCTCGCTGGC ATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAAAG GCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGC GACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTATTACTGTCA 10 AACC AATC ATGGTAGTAATAGTGATAGTTTTGGTTATGC T (序列辨識編號：266)。 於本發明的另一個實施例中，本發明的多核苷酸包 含，或任擇地由下列編碼序列辨識編號：259的變異重鏈多 肽序列之多核苷酸序列所構成：
15 ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTC
GCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGCTGGAGG AGTCCGGGGGTCGCCTGGTAACGCCTGGAGGATCCCTG ACACTCACCTGCACAGTCTCTGGAATCGACCTCAGTAG CTATGCAATGGGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGG 20 GGCTGGAATACATCGGATACGTTCTTGGTAGTGGTATCA CATACTACGCGAGTTGGGCGAGAGGCCGATTCACCATC TCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAGATGAC CAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTG 147 200911826 TCAGAAATGATAATTATAATAGTGGCACGGACATC (序列 辨識編號：267)。 於本發明的一個另外的實施例中，編碼具有TNF-a 結合專一性的抗體片段之多核苷酸係包含，或任擇地由序 5 列辨識編號：268 ;序列辨識編號：269 ;和序列辨識編號： 270的多核苷酸序列之一或多個所組成，其等係對應至編碼 序列辨識編號：258的輕鏈變異序列之互補決定區（CDRs， 或高變區）之多核苷酸。 於本發明的一個另外的實施例中，編碼具有TNF-a 10 結合專一性的抗體片段之多核普酸係包含，或任擇地由序 列辨識編號：271 ;序列辨識編號：272 ;和序列辨識編號： 273的多核苷酸序列之一或多個所組成，其等係對應至編碼 序列辨識編號：259的重鏈變異序列之互補決定區（CDRs， 或高變區）之多核苷酸。 15 本發明亦預期多核苷酸序列，其等包括編碼本文中 說明的抗體片段之多核苷酸序列的一或多個。於本發明的 一個實施例中，編碼具有TNF-a結合專一性的抗體片段之 多核苷酸係包含，或任擇地由下列的編碼抗體片段之多核 苷酸的之一、二、三或更多個，包括全部，所組成：編碼 2〇 序列辨識編號：258的輕鏈變異區之多核苷酸序列辨識編 號：266 ;編碼序列辨識編號：259的重鏈變異區之多核苷 酸序列辨識編號.267 ;編碼序列辨識編號：258的輕鏈變 異區之互補決定區（序列辨識編號：268 ;序列辨識編號： 269 ;與序列辨識編號：270)之多核苷酸；以及編碼序列辨 148 200911826 識編號：259的重鏈變異區之互補決定區（序列辨識編號： 271 ;序列辨識編號：272 ;與序列辨識編號：273)之多核 苷酸。 本發明進一步針對編碼具有對T N F - α的結合專一性 5 之抗體的多肽之多核苷酸。於本發明的一個實施例中，本 發明的多核苷酸包含，或任擇地由下列編碼序列辨識編 號：274的變異輕鏈多肽序列之多核苷酸序列所構成：
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGG GCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGCTG 10 AC ATTGTGATGACCCAGACTCC AGCCTCCGTGTCTGAA CCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGGCCA GTCAGAACATTTACAGCACCTTAGCCTGGTATCAGCAG AAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATCTGGC ATCCACTCTGGAATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAAAG 15 GC AGTGGATCTGGGAC AGAGTTCACTCTCACC ATC AGC GACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTATTACTGTCA AACCAGTCATGGTAGTAATAGTGAAAGTTTTGGTTATGC T(序列辨識編號：282)。 於本發明的另一個實施例中，本發明的多核苷酸包 20 含，或任擇地由下列編碼序列辨識編號：275的變異重鏈多 肽序列之多核苷酸序列所構成：
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTC
GCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGGTGGAGG
AGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCT 149 200911826 GACACTCACTTGCACGGTCTCTGGAATCGACCTCAGTA GCTATGCAATGGGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAG GGGCTGGAATACATCGGATACATTCTTAGTAGTGGTATC ACATACTACGCGAGTTGGGCGAGAGGCCGATTCACCAT 5 CTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGA CCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGT GTCAGAAATGGTAATTATAATGTTGGTACGGACATC (序 列辨識編號：283)。 於本發明的一個另外的實施例中，編碼具有TNF-α 10 結合專一性的抗體片段之多核苷酸係包含，或任擇地由序 列辨識編號：284 ;序列辨識編號：285 ;和序列辨識編號： 286的多核苷酸序列之一或多個所組成，其等係對應至編碼 序列辨識編號：274的輕鏈變異序列之互補決定區（CDRs， 或高變區）之多核苷酸。 15 於本發明的一個另外的實施例中，編碼具有TNF-a 結合專一性的抗體片段之多核誓酸係包含，或任擇地由序 列辨識編號：287 ;序列辨識編號：288 ;和序列辨識編號： 289的多核苷酸序列之—或多個所組成，其等係對應至編碼 序列辨識編號：275的重鏈變異序列之互補決定區（CDRs， 2〇 或面變區）之多核苦酸。 本發明亦預期多核苷酸序列，其等包括編碼本文中 說明的抗體片段之多核苷酸序列的一或多個。於本發明的 一個實施例中’編碼具有TNF-a結合專一性的抗體片段之 多核苷酸係包含’或任擇地由下列的編碼抗體片段之多核 150 200911826 —、二、三或更多個，包括全部，所組成：編碼 辨識編號：274的輕鏈變異區之多核《序列辨識編 唬.282 ’編碼序列辨識編號：275的重鏈變異區之多核苷 W歹]辨識編號：283 ;編碼序列辨識編號：π的輕鍵變 5異區之互補決定區（序列辨識編號：284，·序列辨識編號： 285 ;與序列辨識編號：286)之多核魏；以及編碼序列辨 識編號：275的重鏈變異區之互補蚊區（序列辨識編號： 287，序列辨識編號：288 ;與序列辨識編號：289)之多核 普酸。 〇 本發明進一步針對編碼具有對T N F _ α的結合專一性 之抗體的多肽之多核苷酸。於本發明的一個實施例中，本 發明的多核苷酸包含，或任擇地由下列編碼序列辨識編 號：290的變異輕鏈多肽序列之多核苷酸序列所構成：
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGG
15 GCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGCTG ACATTGTGATGACCCAGACTCCATCCTCCGTGTCTGAA CCTGTGCGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGGCCA GTCAGAACATTTACAGCTACTTGTCCTGGTATCGACAG AGCCCAGGGCAGCCTCCCAACCTCCTGATCTACAAGGC 20 ATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAAAG GCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGC GACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCA AAGCAATTATGGTAGTAATAGTGATAGTTTTGGGAATGC Τ (序列辨識編號：298)。 151 200911826 於本發明的另一個實施例中，本發明的多核苷酸包 含，或任擇地由下列編碼序列辨識編號：291的變異重鏈多 肽序列之多核苷酸序列所構成： ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTC 5 GCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGGTGGAGG AGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCT GACACTCACCTGCTCAGTCTCTGGATTCTCCCTCAATAA CTATATAATGGGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGG GGCTGGAATTCATCGGATACATTGCTTTTGGTATTGGCC 10 CATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCAGC TCCAGCACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGAC CAGTCTGACACCCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTG CCAGAGGTGATGTTAGTGGTAATGACATT (序列辨識編 號：299)。 15 於本發明的一個另外的實施例中，編碼具有TNF-a 結合專一性的抗體片段之多核苷酸係包含，或任擇地由序 列辨識編號：300 ;序列辨識編號：301 ;和序列辨識編號： 302的多核苷酸序列之一或多個所組成’其等係對應至編碼 序列辨識編號：290的輕鏈變異序列之互補決定區（CDRs， 20 或高變區）之多核苷酸。 於本發明的一個另外的實施例中，編碼具有TNF-a 結合專一性的抗體片段之多核苷酸係包含，或任擇地由序 列辨識編號：303 ;序列辨識編號：304 ;和序列辨識編號： 305的多核苷酸序列之一或多個所組成，其等係對應至編碼 152 200911826 序列辨識編號.291的重鏈變異序列之互補決定區（CDRs， 或高變區）之多核苷酸。 本發明亦預期多核苷酸序列，其等包括編碼本文中 說明的抗體片段之多核苷酸序列的一或多個。於本發明的 5 個貫施例中，編碼具有TNF-a結合專一性的抗體片段之 多核苷酸係包含，或任擇地由下列的編碼抗體片段之多核 苷酸的之一、二、三或更多個，包括全部，所組成：編碼 序列辨識編號：290的輕鏈變異區之多核苷酸序列辨識編 號：298 ;編碼序列辨識編號：291的重鏈變異區之多核_ 10 酸序列辨識編號：299 ;編碼序列辨識編號：29〇的輕鏈變 異區之互補決定區（序列辨識編號：3〇〇 ;序列辨識編號： 301 ;與序列辨識編號：302)之多核苷酸；以及編碼序列辨 識編號：291的重鏈變異區之互補決定區（序列辨識編號： 303 ;序列辨識編號：304 ;與序列辨識編號：305)之多核 15 苦酸。 本發明進一步針對編碼具有對T N F - α的結合專一性 之抗體的多肽之多核苷酸。於本發明的一個實施例中，本 發明的多核苷酸包含，或任擇地由下列編碼序列辨識編 號：306的變異輕鏈多肽序列之多核苷酸序列所構成：
20 ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGG
GCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGCTG ACATTGTGATGACCCAGACTCCAGCCTCCGTGTCTGAA CCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAATGCCAGGCCA GTCAGAACATTTACACCACCTTAGCCTGGTATCAGCAG 153 200911826 AAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATCTGGC ATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAAAG GCAGTGGATCTGAGACACAGTTCACTCTCACCATCAGC GACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTATTACTGTCA 5 AACCAGTCATGGTAGTAATAGTGATAGTTTTGGTTATGT T (序列辨識編號：314)。 於本發明的另一個實施例中，本發明的多核誓酸包 含，或任擇地由下列編碼序列辨識編號：307的變異重鏈多 肽序列之多核苷酸序列所構成：
10 ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTC
GCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCAGTGGAGG AGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCT GACACTCACTTGCACAGTCTCTGGAATCGACCTCAATA GCTATGCAATGGGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAG 15 GGGCTGGAATAC ATCGGATAC ATTCTTAGTAGTGGTATC ACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCAT CTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGA CCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGT GTCAGGAATGGTAATTATAATAGTGGTACGGACATC (序 20 列辨識編號：315)。 於本發明的一個另外的實施例中，編碼具有TNF-a 結合專一性的抗體片段之多核苷酸係包含，或任擇地由序 列辨識編號：316 ;序列辨識編號：317 ;和序列辨識編號： 318的多核苷酸序列之一或多個所組成，其等係對應至編碼 154 200911826 序列辨識編號：306的輕鏈變異序列之互補決定區（CDRs， 或高變區）之多核苷酸。 於本發明的一個另外的實施例中，編碼具有TNF-α 結合專一性的抗體片段之多核皆酸係包含，或任擇地由序 5 列辨識編號：319 ;序列辨識編號：320 ;和序列辨識編號： 3 21的多核苷酸序列之一或多個所組成，其等係對應至編碼 序列辨識編號：307的重鏈變異序列之互補決定區（CDRs， 或高變區）之多核苷酸。 本發明亦預期多核苷酸序列，其等包括編碼本文中 10 說明的抗體片段之多核苷酸序列的一或多個。於本發明的 一個實施例中，編碼具有TNF-α結合專一性的抗體片段之 多核苷酸係包含，或任擇地由下列的編碼抗體片段之多核 苷酸的之一、二、三或更多個，包括全部，所組成：編碼 序列辨識編號：306的輕鏈變異區之多核苷酸序列辨識編 15 號：314 ;編碼序列辨識編號：307的重鏈變異區之多核苷 酸序列辨識編號：315 ;編碼序列辨識編號：3〇6的輕鏈變 異區之互補決定區（序列辨識編號：316 ;序列辨識編號： 317，與序列辨識編號：318)之多核苷酸；以及編碼序列辨 識編號：307的重鏈變異區之互補決定區（序列辨識編號： 20 319，序列辨識編號：320 ;與序列辨識編號：321)之多核 苦酸。 本發明進一步針對編碼具有對TN F _ α的結合專一性 之抗體的多肽之多核苷酸。於本發明的一個實施例中，本 155 200911826 發明的多核苷酸包含，或任擇地由下列編碼序列辨識編 號：322的變異輕鏈多肽序列之多核苷酸序列所構成：
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGG GCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGCTG 5 ACATTGTGATGACCCAGACTCCATCCTCCGTGTCTGCA GCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGGCCA GTCAGAGCATTGATACCTACTTAGCCTGGTATCAGCAG AAACCAGGGCAGCGTCCCAAGCTCCTGATCTATGGTGC ATCCAATCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCAAAG 10 GC AGTGG ATCTGGGAC AG AATTCGCTCTCACC ATC AGC GACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCA AAGCAATTATGGTAGTAATAGTGATAGTTTTGGTAATGG T (序列辨識編號：330)。 於本發明的另一個實施例中，本發明的多核苷酸包 15 含，或任擇地由下列編碼序列辨識編號：323的變異重鏈多 肽序列之多核苷酸序列所構成：
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTC GCTGTGTTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGGTGGAGG AGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCT 20 GACACTCACCTGCACAGTCTCTGGATTCTCCCTCAGTA CCTATACAATGGGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAG GGGCTGGAATACATCGGGTACATTAGTTATGGTGGTCTC GCATACTACGCGACCTGGGTGAATGGCCGATTCACCAT CTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCA 156 200911826 GTCTGACAGCTTCAGACACGGCCACCTATTTCTGTGCC AGAGCGGCTAGTGGTGCCTGGGGTCATGCCTACGGCTT GGACCTC (序列辨識編號：331)。 於本發明的一個另外的實施例中，編碼具有TNF-α 結合專一性的抗體片段之多核苷酸係包含，或任擇地由序 列辨識編號：332 ;序列辨識編號：333 ;和序列辨識編號： 334的多核苷酸序列之一或多個所組成，其等係對應至編碼 序列辨識編號· 322的輕鍵變異序列之互補決定區（CDRs， 或高變區）之多核苷酸。 於本發明的一個另外的實施例中，編碼具有TNF-a 結合專一性的抗體片段之多核苷酸係包含，或任擇地由序 列辨識編號.3 3 5 ’序列辨識編號：3 3 6 ;和序列辨識編號： 337的多核苷酸序列之一或多個所組成，其等係對應至編碼 序列辨識編號.323的重鍵變異序列之互補決定區（cdrs， 或高變區）之多核苷酸。 本發明亦預期多核苷酸序列，其等包括編碼本文中 說明的抗體片段之多核苷酸序列的一或多個。於本發明的 一個實施例中’編碼具有TNF-a結合專一性的抗體片段之 多核苷酸係包含，或任擇地由下列的編碼抗體片段之多核 苦酸的之-、二、三或更多個，包括全部，所組成：編碼 序列辨識編號：322的輕鏈變異區之多核苷酸序列辨識編 號：330 ;編碼序列辨識編號：323的重鏈變異區之多核苷 酸序列辨識編號：331 ;編碼序列辨識編鈮：322的輕鏈變 異區之互補決定區(序列辨識編號：332 ;序列辨識編號： 157 200911826 333 ;與序列辨識編號：334)之多核苷酸；以及編碼序列辨 識編號：323的重鏈變異區之互補決定區（序列辨識編號： 335 ;序列辨識編號：336 ;與序列辨識編號：337)之多核 苦酸。 5 本發明進一步針對編碼具有對TNF - α的結合專一性 之抗體的多肽之多核苷酸。於本發明的一個實施例中，本 發明的多核苷酸包含，或任擇地由下列編碼序列辨識編 號：338的變異輕鏈多肽序列之多核苷酸序列所構成： ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGG 10 GCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGCTG ACATTGTGATGACCCAGACTCCAGCCTCCGTGTCTGGA CCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGGCCA GTCAGAACATTTACAGCTCCTTTTCCTGGTATCAACAAA TACCAGGCCAGCGTCCCAAGCTCCTGATCTATTATGCAT 15 CCACTCTGGCCTCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAGCGGC AGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCGA CCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCAAA GCAATCATGGTAGTAATGGTGATAGTTTTGGTAATGCT (序列辨識編號：346)。 2〇 於本發明的另一個實施例中，本發明的多核苷酸包 含’或任擇地由下列編碼序列辨識編號：339的變異重鏈多 肽序列之多核苷酸序列所構成：
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTC
GCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGGTGGAGG 158 200911826
AGTCCGGGGGTCGCCTGGTGTCGCCTGGGACACCCCT GACACTCACCTGCACAGTCTCTGGAATCGACCTCAGTA GCTATGGAATGGGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAA GGGGCTGGATTACATCGGATACATGCTTCCTAGTGGTAT 5 CACATATTACGCGGCCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCA TCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATC - ACCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTG TGCCAGAAATTACTACGGCATGGACCCC (序列辨識編 (號：347)。 10 於本發明的一個另外的實施例中，編碼具有TNF-α 結合專一性的抗體片段之多核苷酸係包含，或任擇地由序 列辨識編號：348 ;序列辨識編號：349 ;和序列辨識編號： 350的多核苷酸序列之一或多個所組成，其等係對應至編碼 序列辨識編號：338的輕鏈變異序列之互補決定區（CDRs， 15 或高變區）之多核苷酸。 於本發明的一個另外的實施例中，編碼具有TNF-a 結合專一性的抗體片段之多核苷酸係包含，或任擇地由序 列辨識編號：351 ;序列辨識編號：352 ;和序列辨識編號： 353的多核苷酸序列之一或多個所組成’其等係對應至編碼 2〇 序列辨識編號：339的重鏈變異序列之互補決定區（CDRs， 或而變區）之多核普酸。 本發明亦預期多核苦酸序列’其專包括編碼本文中 說明的抗體片段之多核苷酸序列的一或多個。於本發明的 一個實施例中，編碼具有TNF-α結合專一性的抗體片段之 159 200911826 多核普@夂係包含’或任擇地由下列的編碼抗體片段之多核 苦酸的之-、一、二或更多個，包括全部，所組成：編碼 序列辨識編號：338的輕鏈變異區之多核苦酸序列辨識編 號：346 ;編碼序列辨識編號：339的重鍵變異區之多核普 5酸序列辨識編號.347，編碼序列辨識編號：338的輕鏈變 異區之互補決定區（序列辨識編號：348 ;序觸識編號： 349 ;與序列辨識編號：350)之多核苷酸；以及編碼序列辨 識編號：339的重鏈變異區之互補決定區（序列辨識編號： 351，序列辨識編號：352 ;與序列辨識編號：353)之多核 10 苦酸。 本發明進一步針對編碼具有對τ N F - α的結合專一性 之抗體的多肽之多核苷酸。於本發明的一個實施例中，本 發明的多核苷酸包含’或任擇地由下列編碼序列辨識編 號：354的變異輕鏈多肽序列之多核苷酸序列所構成：
15 ATGGACACGAGGGCCCCCACTC AGCTGCTGGG
GCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGCTG ACATTGTGATGACCCAGACTCCAGCCTCCGTGTCTGAA CCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGGCCA GTCAGAGCATTTACAGGTACTTATCCTGGTATCACCACA 20 AACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATGGTGCA TCCAATCTGGAATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAAAGG CAGTGGATCTGGGACAGAGTACACTCTCACCATCAGCG ACCTGGAGTGTGACGATGCTGCCACTTATTACTGTCAG 160 200911826 AGCAATTATGGTGCTAATAGTGATAGTTATGGGGATGCT (序列辨識編號：362)。 於本發明的另一個實施例中，本發明的多核苷酸包 含，或任擇地由下列編碼序列辨識編號：355的變異重鏈多 5 肽序列之多核苷酸序列所構成： ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTC GCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGGAGCAGCTGG AGGAGTCCGGGGGAGACCTGGTCAAGCCTGGGGCATC CCTGACACTCACCTGCAAAGCCTCTGGATTCTCCTTCA 10 GTAGCGGCTACTACATGGGCTGGGTCCGCCAGGCTCCA GGGAAAGGGCTGCAATACATCGGTTACATTGATTATGGT GGTAGCGCATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATT CACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGACTCTGC AAATGACCAGTCTGACAGCCGCGGACACGGCCACCTT 15 TTTCTGTACGAGACGTGACTATACTGGTGGTGTTGTCA GAGGGCTGGATCTC (序列辨識編號：363) 〇 於本發明的一個另外的實施例中，編碼具有TNF-a 結合專一性的抗體片段之多核苷酸係包含，或任擇地由序 列辨識編號：364 ;序列辨識編號：365 ;和序列辨識編號： 2〇 366的多核苷酸序列之一或多個所組成，其等係對應至編碼 序列辨識編號：354的輕鏈變異序列之互補決定區（CdRs， 或高變區）之多核苷酸。 於本發明的一個另外的實施例中’編碼具有TNF-a 結合專一性的抗體片段之多核苷酸係包含，或任擇地由序 161 200911826 列辨識編號：367 ;序列辨識編號：368 ;和序列辨識編號： 369的多核苷酸序列之一或多個所組成，其等係對應至編碼 序列辨識編號：355的重鏈變異序列之互補決定區（CDRs， 或高變區）之多核苷酸。 5 本發明亦預期多核苷酸序列，其等包括編碼本文中 說明的抗體片段之多核苷酸序列的一或多個。於本發明的 一個實施例中，編碼具有TNF-α結合專一性的抗體片段之 多核苷酸係包含，或任擇地由下列的編碼抗體片段之多核 苷酸的之一、二、三或更多個，包括全部，所組成：編碼 10 序列辨識編號：354的輕鏈變異區之多核苷酸序列辨識編 號：362 ;編碼序列辨識編號：355的重鏈變異區之多核苷 酸序列辨識編號：363 ;編碼序列辨識編號：354的輕鏈變 異區之互補決定區（序列辨識編號：364 ;序列辨識編號： 365 ;與序列辨識編號：366)之多核苷酸；以及編碼序列辨 15 識編號：355的重鏈變異區之互補決定區（序列辨識編號： 367 ;序列辨識編號：368 ;與序列辨識編號：369)之多核 苷酸。 本發明進一步針對編碼具有對TN F - a的結合專一性 之抗體的多肽之多核苷酸。於本發明的一個實施例中，本 2〇 發明的多核苷酸包含，或任擇地由下列編碼序列辨識編 號：370的變異輕鏈多肽序列之多核苷酸序列所構成：
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGG
GCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGCCG
ACATTGTGATGACCCAGACTCCATCCTCCGTGTCTGCA 162 200911826 GCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCA GTCAGAACATTTACAGCTCTTTAGCCTGGTATCAGCAG AAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTTTGGTGC ATCCAATCTGGAATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAAAG 5 GCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGC GACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCGCTTACTACTGTCA GAGCCATCATGGTAGTAATAGTGATAGTTATGGTAATGC T (序列辨識編號：378)。 於本發明的另一個實施例中，本發明的多核苷酸包 10 含，或任擇地由下列編碼序列辨識編號：371的變異重鏈多 肽序列之多核苷酸序列所構成： ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTC GCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGGTGGAGG AGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCT 15 GACACTC ACCTGC AC AGCCTCTGGATTCTCCCTTAATA ACTACTACATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAG GGGCTGGAATCCATCGGATATTTTGCTTCTGGTGGTGGC ACATACTACGCGAACTGGGCGAAAGGCCGATTCACCAT CTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAGATCACCA 20 GTCCGACAACCGACGATACGGCCACCTATTTCTGTGCC AGGGGTGGTGCTTATTTGGGTACTGGGAGTTTG (序列辨 識編號：379)。 於本發明的一個另外的實施例中，編碼具有TNF-a 結合專一性的抗體片段之多核苷酸係包含，或任擇地由序 163 200911826 列辨識編號.380 ’序列辨識編號：381 ;和序列辨識編號： 382的多核苷酸序列之一或多個所組成，其等係對應至編碼 序列辨識編號：370的輕鏈變異序列之互補決定區（CDRs， 或高變區）之多核苷酸。 5 於本發明的一個另外的實施例中，編碼具有TNF-a 結合專一性的抗體片段之多核苷酸係包含，或任擇地由序 列辨識編號：383 ;序列辨識編號：384 ;和序列辨識編號： 385的多核苷酸序列之一或多個所組成，其等係對應至編碼 序列辨谶編號· 371的重鏈變異序列之互補決定區（cdrs， 10 或高變區）之多核苷酸。 本發明亦預期多核苷酸序列，其等包括編碼本文中 說明的抗體片段之多核苷酸序列的一或多個。於本發明的 一個實施例中，編碼具有TNF-α結合專一性的抗體片段之 多核苷酸係包含，或任擇地由下列的編碼抗體片段之多核 15 «的之-、二、三或更多個，包括全部，所組成：編碼 序列辨識編號：370的輕鏈變異區之多核苷酸序列辨識編 號：378 ;編碼序列辨識編號：371的重鏈變異區之多核苷 酸序列辨識編號：379 ;編碼序列辨識編號：37〇的輕鏈變 異區之互補決定區（序列辨識編號：38〇 ;序列辨識編號： 20 381 ;與序列辨識編號：382)之多核苷酸；以及編碼序列辨 識編號：371的重鏈變異區之互補決定區（序列辨識編號： 383 ;序列辨識編號：384 ;與序列辨識編號：385)之多核 苷酸。 164 200911826 本發明進一步針對編碼具有對TNF - α的結合專一性 之抗體的多肽之多核苷酸。於本發明的一個實施例中，本 發明的多核苷酸包含，或任擇地由下列編碼序列辨識編 號：386的變異輕鏈多肽序列之多核苷酸序列所構成：
5 ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGG GCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGCTG ACATTGTGATGACCCAGACTCCATCCTCCGTGTCTGTAC CTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGGCCAG TCAGAACATTTACAGCTCTTTAGCCTGGTATCAGCAGA 10 AACCAGGAC AGCCTCCC AAGCGCCTGATCTATTATGCC GCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAAAGG CAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCG ACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTATTGTCAA AGCAATCATGGTAGTAATAGTGATAGTTATGGTAATCCT 15 (序列辨識編號：394)。 於本發明的另一個實施例中，本發明的多核苷酸包 含，或任擇地由下列編碼序列辨識編號：387的變異重鏈多 肽序列之多核苷酸序列所構成：
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTC 20 GCTGTGCTCAAGGGTGTCCAGTGTCAGTCGGTGGAGG AGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCT GACACTCACCTGCACAGTCGCTGGATTCTCCCTCAGTA CCTATGGAGTGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAA GGGGCTGGAATCCATCGGATACATTACTTATGGTAATAT 165 200911826 TAAATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCA TCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACC AGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTAC CAGATATGGTGGTAGTGGGATTGGTGAGGACTTG (序列 5 辨識編號：395)。 於本發明的一個另外的實施例中，編碼具有TNF-α 結合專一性的抗體片段之多核苷酸係包含，或任擇地由序 列辨識編號：396 ;序列辨識編號：397 ;和序列辨識編號： 398的多核苷酸序列之一或多個所組成，其等係對應至編碼 10 序列辨識編號：386的輕鏈變異序列之互補決定區(CDRs， 或高變區）之多核苷酸。 於本發明的一個另外的實施例中，編碼具有TNF-a 結合專一性的抗體片段之多核苷酸係包含，或任擇地由序 列辨識編號：399 ;序列辨識編號：400 ;和序列辨識編號： 15 401的多核苷酸序列之一或多個所組成，其等係對應至編碼 序列辨識編號：387的重鏈變異序列之互補決定區（CDRs， 或高變區）之多核苷酸。 本發明亦預期多核苷酸序列，其等包括編碼本文中 說明的抗體片段之多核普酸序列的一或多個。於本發明的 20 一個實施例中，編碼具有TNF-α結合專一性的抗體片段之 多核苷酸係包含，或任擇地由下列的編碼抗體片段之多核 苷酸的之一、二、三或更多個，包括全部，所組成：編碼 序列辨識編號：386的輕鏈變異區之多核苷酸序列辨識編 號：394 ;編碼序列辨識編號：387的重鏈變異區之多核苷 166 200911826 酸序列辨識編號：395 ;編碼序列辨識編號：386的輕鏈變 異區之互補決定區（序列辨識編號：396 ;序列辨識編號： 397 ;與序列辨識編號：398)之多核苷酸；以及編碼序列辨 識編號：387的重鏈變異區之互補決定區（序列辨識編號： 5 399 ;序列辨識編號：400 ;與序列辨識編號：401)之多核 普酸。 本發明進一步針對編碼具有對TNF-α的結合專一性 之抗體的多肽之多核苷酸。於本發明的一個實施例中，本 發明的多核苷酸包含，或任擇地由下列編碼序列辨識編 10 號：402的變異輕鏈多肽序列之多核苷酸序列所構成： ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGG GCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGCCG ACGTCGTGATGACCCAGACTCCATCCTCCGTGTCTGAA CCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGGCCA 15 GTGAAACCATTGGTAACTACTTATCCTGGTATCAGCAGA AACCAGGGCAGCCTCCCAAGCGCCTGATCTATTATGCA TCCACTCTGTCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAAAGG CAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCG ACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGCCAA 20 AAGAATTATGGTAGTGGTGCTAGTAGTTTGGGTGCT (序 列辨識編號：410)。 於本發明的另一個實施例中，本發明的多核苷酸包 含，或任擇地由下列編碼序列辨識編號：403的變異重鏈多 肽序列之多核苷酸序列所構成： 167 200911826 ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTC GCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGGTGGAGG AGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCT GACACTCACCTGCACAGTCTCTGGATTCTCCCTCAGTA 5 GCTACTACATGGCCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAG GGGCTGGAGTGGATCGGATATATTGGTTTTGGTGGTAGC ACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCCGGGTCACCAT CTCCAGGACCTCGACCACGGTGGATCTGCAAATCACCA GTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCC 10 AGAGGAGTTTATGGTGATTTTCGTACTGGTGCCGACTT G (序列辨識編號·· 411)。 於本發明的一個另外的實施例中，編碼具有TNF-α 結合專一性的抗體片段之多核普酸係包含，或任擇地由序 列辨識編號：412 ;序列辨識編號：413 ;和序列辨識編號： 15 414的多核苷酸序列之一或多個所組成，其等係對應至編碼 序列辨識編號：402的輕鏈變異序列之互補決定區（cdRs， 或高變區）之多核苷酸。 於本發明的一個另外的實施例中，編碼具有TNF-a 結合專一性的抗體片段之多核苷酸係包含，或任擇地由序 2〇 列辨識編號：415 ;序列辨識編號：416 ;和序列辨識編號： 417的多核苷酸序列之一或多個所組成，其等係對應至編碼 序列辨識編號：403的重鏈變異序列之互補決定區（CDRs， 或高變區）之多核苷酸。 168 200911826 本發明亦預期多核《序列，其等包括編碼本文中 ^月的抗體諸之Μ«序列的1多個。於本發明的 ^固實施财，編碼具有TNF_a結合專—性的抗體片段之 多_酸係包含’或任擇地由下列的編碼抗體片段之多核 2的之―、二、三或更多個，包括全部，所组成：編碼 序列辨識編號M02的輕鏈變異區之多核苦酸序列辨識編 號：410 ;編碼序列辨識編號：4〇3的重鏈變異區之多核芽 酸序列辨識編號：4H ;編碼序列辨識編號：術的輕鍵變 異區之互補決定區(序列辨識編號：412 ;序列辨識編號： 10 413 ;與相韻職MM)之多核料；以及編碼序列辨 識編號：403的重鏈變異區之互補決定區（序列辨識編號： 415 ;序列辨識編號：416 ;與序列辨識編號：417)之多核 苷酸。 於本發明的另一個實施例中，本發明的多核苷酸進 15 一步包含下列的編碼序列辨識編號：418的卡巴怪定輕鏈序 列之多核苷酸序列：
GTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCAT CTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTG TGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGT 20 ACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACT
CCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACA
GCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAA
AGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAA 169 200911826 GTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGA GCTTCAACAGGGGAGAGTGT(序列辨識編號：419)。 於本發明的另一個實施例中，本發明的多核苷酸進 一步包含下列的編碼序列辨識編號：420的加馬（gamma)-l 5 怪定重鏈多肽序列之多核苷酸序列：
GCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTG GCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGG CCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCG GTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCG 10 GCGTGC AC ACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTC AGGA
CTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAG CAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATC ACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGA GCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGT 15 GCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTC CTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTC CCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTG AGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACG TGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCC 20 GCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTC AGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGG CAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTC CCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAG GGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCC 170 200911826 ATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTG ACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGC CGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAAC TACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTC 5 CTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCA GGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATG CATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCC TCTCCCTGTCTCCGGGTAAA(序列辨識編號：421)。 ( 本發明進一步預期包含編碼變異重與輕鏈多肽序 10 列，以及個別的互補決定區（CDRs，或是高度變異區）之多 核苷酸序列的載體，如本文中提出的，以及包含該等序列 之宿主細胞。於本發明的一個實施例中，宿主細胞是一酵 母細胞。於本發明的另一個實施例中，酵母宿主細胞屬於 畢赤屬。 15 抗-TNF-α活性 I' 本發明的抗TNF-a抗體，與其之具有TNF-a之結合 ' 專一性的片段之抗TNF-a活性，也可以藉由其等對TNF-a 的結合力或其等對TNF-a之親合性予以說明。於本發明的 20 一個實施例中，本發明的具有TNF-a的結合專一性之抗 TNF-a抗體和其等之片段係以低於或等於如下的一解離常 數(KD)結合至 TNF-a: 5xl(T7、1〇_7、5xl〇-8、10_8、5xl0·9、 1CT9、5xl〇-10、ΙΟ.10、5χΗΓη、10.11、5xl〇.12、ι〇-12、5xl0·13、 ΙΟ·13、5xl0_14、10—丨4、5xl(T15 或是 1〇—15。較佳地，抗 TNF-a 171 200911826 抗體與其之片段係以低於或等於5χΐο·1()的一解離常數來結 合TNF-α。於本發明的另一個實施例中，本發明的抗TNF-a 抗體與其之具有TNF-a之結合專一性的片段係結合至一線 形或構形TNF-a抗原決定位。 5 於本發明的另一個實施例中，本發明的抗TNF-a抗 體與其之具有TNF-a之結合專一性的片段之抗TNF-a活性 係以低於或等於以下的脫離速率結合至TNF-a : 10_4 S—1、 5xl〇-5 S·1、10·5 S·1、5xl〇-6 S.1、10—6 S.1、5xl0.7 S.1 ’ 或是 HT7 S-1。 10 於本發明的一個另外的實施例中，本發明的抗 TNF-a抗體與其之具有TNF-a之結合專一性的片段之抗 TNF-a活性，係藉由預防、改善或減少與TNF-a有關的疾 病或障礙之症狀，或任擇地治療與TNF-a有關的疾病或障 礙而顯現出抗-TNF-a活性。與TNF-a有關的疾病或障礙之 15 非限制性之實例係於以下提出。 B細胞篩選以及單離 於一實施例中，本發明係提供單離一純株族群的抗 原專一性B細胞的方法，該等B細胞可以使用於單離至少 20 一個抗原專一性細胞。如同以下所說明和的例示的，此等 方法含有能分別地、組合地、連續地、重複地，或是週期 性地使用的一系列的培養和篩選步驟。較佳地，此等方法 係使用於單離至少一個抗原專一性細胞，其能用來生產一 172 200911826 對一所欲的抗原專一的單株抗體，或是對應此一抗體的一 核酸序列。 於一實施例中，本發明係提供一種包含以下步驟的 方法： 5 a.自一經免疫的宿主收穫一細胞族群以獲得一經 收穫的細胞族群；製備包含至少一個抗原專一性B細胞的 一細胞族群； b.藉由例如，層析法濃化該細胞族群，以形成一包 含至少一抗原專一性B細胞之經濃化的細胞族群； 10 c·自該經濃化的B細胞族群單離一單一的B細胞； 以及 d.決定是否該單一的B細胞生產對於該抗原專一 的一抗體。 於另一個實施例中，本發明係提供一種單離一單一 15 的、生產抗體的B細胞的方法之改良，該改良之處包含濃 化自一已經予以免疫或是天然地暴露至一抗原的宿主獲得 之B細胞族群，其中該濃化步驟在任何的篩選步驟之前， 包含至少一培養步驟，以及導致一生產對該抗原專一的單 一單株抗體的B細胞的純株族群。 20 貫穿本申請案，一“B細胞的一純株族群”係提及只 分泌對一所欲的抗原專一的一單一抗體之一族群的B細 胞。也就是說，此等細胞只生產對所欲的抗原專一的一類 型的單株抗體。 173 200911826 於本申請案中，“濃化” 一細胞族群細胞係意指增加 一混合的細胞族群，例如，一自對所欲的抗原免疫的一宿 主所衍生的含有B細胞之分離株，所包含的所欲細胞，典 型地抗原專一性細胞，的頻率。因此，一經濃化的細胞族 5 群係包含一由於一濃化步驟而具有更高頻率的抗原專一性 細胞之細胞族群，但是此族群的細胞可以含有且生產不同 的抗體。 通稱“細胞族群”係包含濃化前與濃化後的細胞族 群，要記住當執行多重的濃化步驟時，一細胞族群可以是 10 濃化前與濃化後的二者。舉例而言：於一實施例中，本發 明係提供一種方法： a. 自一經免疫的宿主收穫一細胞族群以獲得一經 收穫的細胞族群； b. 自該經收穫的細胞族群創造至少一單一細胞懸 15 浮液； c. 濃化至少一單一細胞懸浮液以形成一第一濃化 的細胞族群； d. 濃化該第一濃化的細胞族群以形成一第二濃化 的細胞族群； 20 e.濃化該第二濃化的細胞族群以形成一第三濃化 的細胞族群；以及 f.篩選一藉由該第三濃化的細胞族群之抗原專一 性細胞生產的抗體。 174 200911826 各細胞族群可以直接地於下一個步驟使用，或是其 能部分地或是整個冷凍用於長期或是短期的儲存或是用於 稍後的步驟。並且，來自一細胞族群的細胞能逐個地予以 懸浮以產出單一細胞懸浮液。該單一細胞懸浮液能予以濃 5 化，以使得一單一細胞懸浮液係作用為濃化前的細胞族 群。接而，一或多種抗原專一性單一細胞懸浮液一起形成 經濃化的細胞族群；抗原專一性單一細胞懸浮液能予以聚 集在一起，例如，再次平板培養的用於進一步的分析及/或 抗體生產。 10 於一實施例中，本發明係提供一種濃化一細胞族群 的方法以產出一經濃化的細胞族群，其具有頻率大約50% 至大約100%，或是其内的增加量之抗原專一性細胞。較佳 地，該經濃化的細胞族群具有一抗原專一性細胞頻率大於 或是等於大約 50%、60%、70%、75%、80%、90%、95%、 15 99%，或是 100%。 於另一個實施例中，本發明係提供一種濃化一細胞 族群的方法，藉此抗原專一性細胞的頻率係增加至少大約2 倍、5倍、10倍、20倍、50倍、100倍，或是其内的增加 量。 20 貫穿本申請案，術語“增加量”係使用來界定於變化 的精確度内的一數值，例如：至最接近的10、卜0.：!、0.01， 等等。增加量可以圍繞一範圍的二邊之任何可測量的精確 度，以及增加量不必要圍繞相同程度的精確性。舉例而言： 1至100的範圍或是其内的增加量包括，如：20至80、5 175 200911826 至50，以及0.4至98的範圍。當—範圍是開放式的時，例 如’低於100的一範圍’其内的增加量係意指介於1〇〇和 可測量的限度之間的增加量。舉例而言：低於i⑻或是其 内的增加量係意指〇至1〇〇或是其内的增加量，除非該特 5 徵’例如溫度不限制於〇。 抗原專一性可以有關於任何的抗原予以測量。抗原 可以是一抗體能結合的任何物質，包括，但不限於 :胜肽、 蛋白或是其等之片段；碳水化合物；有機和無機分子；藉 由動物細胞、細菌細胞，和病毒生產的受體；酶；生物途 10徑的激動劑和括抗劑；激素；以及細胞激素。例示性抗原 包括，但不限於：IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、IL-13、 IL-18、IFN-α、IFN-γ、BAFF、CXCL13、IP-10、VEGF、 EPO、EGF、HRG，肝細胞生長因子（HGF)以及鐵調節激素 (Hepddin)。較佳的抗原包括·· IL_6、IL_ j 3、TNF a、VEGF a， 15肝細胞生長因子(HGF)以及鐵調節激素。於一種使用多於一 個濃化步驟的方法中，於各濃化步驟之中使用的抗原可以 是相同的或是彼此不同的。用相同的抗原之多重濃化步驟 可以出產大的及/或互異的抗原專一性細胞的族群；用不同 的抗原之多重濃化步驟可以出產對不同的抗原具有交叉專 20 一性之經濃化的細胞族群。 / 辰化細胞族群可以藉由本技藝中所知道的用於單 離抗原專-性細胞之任何的細胞·篩選方法予以執行。舉例 而。、’、田胞知群可以藉由層析的技術予以濃化，例如： 美天旎小珠(Miltenyi bead)或是磁珠的技術。小珠子可以直 176 200911826 接地或間接地附著至有興趣的抗原。於一較佳的實施例 中，濃化一細胞族群的方法包括至少一個層析濃化步驟。 5 10 15 20 一細胞族群也能藉由本技藝中所知道的任何的抗原 專一性分析技術予以執行而濃化，例如，EUSA分析法或 是-螢光暈法(halo assay)。EUSA分析法包括，但不限於·· 選擇性抗原定化(例如，藉由鏈黴抗生物素蛋白、抗生物 素蛋白或疋中性抗生物素蛋白⑽加⑽他打)塗覆的平板之 生物素化的抗原捕捉法）、非專一性抗原平板塗層，以及經 由—抗原聚集的策略(例如，選擇性抗原捕捉法接著結合搭 產生―異構的蛋白抗原複合體）。抗原可以直接地 =接地附著至—固體基質或频，例m 一螢
細接觸裝載抗原的小珠以及對用於收穫B 如-螢光團示的抗宿主抗體。標示可以是，例 至少-種單Γ:實施例中，至少一個分析濃化步驟係於 種早—細胞_液上執行。於另_ 藝中所:二小:見密度“濃化”-細胞族群的方法係本技 抗原專—性濃化細錢專利5,627，052。除藉由 方法之中。 外’此❹驟還可以使用於本 含有至少-個能夠辨識—抗原的 以及其等之子：：包括’但不限於:B細胞'1 細胞， 、實施例中，本發明係提供—含有一 177 200911826 單一種類的抗原專一性B細胞之純株細胞族群，也就是， 該細胞族群生產對一所欲的抗原專一的一單一單株抗體。 於此實施例中，據信B細胞之純株的抗原專一的族 群係主要由抗原專一的、抗體分泌細胞組成，其等係藉由 5 本文中提供之新穎的培養和篩選的操作程序而獲得。於 是，本發明亦提供用於獲得一含有至少一種抗原專一的、 抗體分泌細胞之經濃化的細胞族群的方法。於一實施例 中，本發明係提供一經濃化的細胞族群，其含有大約50% 至大約100%，或是其内的增加量，或是大於或等於大約 10 60%、70%、80%、90%，或100%的抗原專一的、抗體分泌 細胞。 於一實施例中，本發明係提供一種單離一單一的B 細胞的方法，其係在藉由任何的篩選步驟之前，例如：自 一細胞族群篩選一特定的B細胞及/或篩選一藉由一特定的 15 細胞生產的抗體，濃化自一宿主獲得的一細胞族群。濃化 步驟可以予以執行為一、二、三或更多個步驟。於一實施 例中，一單一的B細胞係在確認是否該單一的B細胞分泌 一具有抗原專一性及/或一所欲的性質之抗體之前自一經 濃化的細胞族群予以單離。 20 於一實施例中，一種濃化一細胞族群的方法係被使 用於一種用於抗體生產及/或篩選的方法之中。因此，本發 明提供一種方法，其包含在篩選一抗體之前濃化一細胞族 群。該方法能包括以下步驟：製備一包含至少一個抗原專 一性細胞之細胞族群，藉由單離至少一個抗原專一性細胞 178 200911826 而/辰化該細胞族雜、 至少1抗原專=形成—經濃化的細胞族群，以及誘導 中，經产 性細胞的抗體生產。於一較佳的實施例 -實施::的細胞族群含有多於-個抗原專-性細胞。於 裡單離」:經濃化的族群之各抗原專一性細胞係在從那 ;θ m 几體生產的細胞及7或使用該B細胞生產一抗體， 我疋對應此—牯 原專—十 體的—核酸序列之前，於產出一純株的抗 开n生B細胞族群的條件之下予以培養。與先前的技術 10 15 20 之細胞埃群2 ΓΓ—具有低頻率的抗原專—性細胞 胞之—座，本發明允許在一高頻率的抗原專一性細 传用，進行k體師選。因為—濃化步驟係在抗體篩選之前 用於抗體生產的細胞的多數，較佳差不多全部的細 匕=為抗原專—的。藉由自具有增加頻率的抗原專一性 群、·田胞生產抗體，抗體的量和變種係增加的。 较π “本發明的k體篩選方法中，—抗體較佳地係在導 :原專—的B細胞的—純株族群之濃化步驟和培養步驟 ^予以師選。該等方法進一步能包含來自一或多個經單 原專一性細胞之經薛選的抗體或其之部分的定序步 驟。任何本技藝中所知道的用於定序的方法能被使用以及 可㈣、_、變異區’及/或互補決㈣(cdr)。 ~除了濃化步驟之外，供驗抗體筛選的 方法也可以 包括筛選-用於抗原辨識及/或抗體功能的細胞族群之一 或夕個步，驟|例而3 .所欲的抗體可以具有特定的結構 特色’如：結合至一特定的抗原決定位或是一特定的的，士 構之擬態；拮抗贱激動劑活性；或是中和的活性，例如， 179 200911826 抑制抗原和一配體之間的結合。於一實施例中，抗體功能 篩選係為配體依賴性的。抗體功能的篩選包括，但不限於： 一重建抗原配體與重組受體蛋白之天然的交互作用之活體 外的蛋白-蛋白交互作用分析；以及一配體依賴性的以及容 5 易監測的細胞為基礎的反應（例如，增殖反應）。於一實施例 中，抗體篩選的方法包括藉由測量抑制濃度(IC50)而篩選細 胞族群的抗體功能的一個步驟。於一實施例中，經單離的 抗原專一性細胞的至少一個生產一具有低於大約1〇〇、5〇、 30、25、10 pg/mL，或是其内的增加量之IC50的抗體。 10 除了濃化步驟之外，供用於抗體篩選的方法也可以 包括：篩選一細胞族群抗體結合力的一或多個步驟。抗體 結合力能藉由本技藝中所知道的任何方法予以測量（例 如，Biacore)。於一實施例中，經單離的抗原專一性細胞的 至少一個生產一具有高的抗原親合性之抗體，例如：低於 15 大約 5xl(T1() M-卜較佳地大約 lxl〇13 至 5xl01()、lxl〇-12 至 lxlO10、lxl〇12 至 7·5χ10-11、ΙχΚΓ11 至 2x10."、大約 1·5χ1(Τπ或是更少，或是其内的增加量的解離常數(Kd)D於 此實施例中，該等抗體被認為是親合性成熟。於一較佳的 實施例中，該等抗體的親合性係比得上或是更高於以下任 2〇 何一個的親合性：Panorex® (依決洛單抗(edrecolomab))、 Rituxan® (利妥昔單抗(rituximab))、Herceptin® (托拉妥單 抗（traztuzumab))、Mylotarg® (吉妥單抗（gentuzumab))、 Campath® (阿來組單抗(alemtuzumab))、Zevalin™ (替伊莫 單抗(ibritumomab))、Erbitux™ (西妥昔單抗(cetuximab))、 180 200911826
Avastin™ (貝伐單抗(bevicizumab))、Raptiva™ (依法利珠單 抗（efalizumab))、瑞米卡 ® (英利昔單抗（infliximab))、 Humira™ (P可達木單抗(a(iaiimumab))，以及 x〇iairTM (奥馬 珠單抗(omalizumab))。較佳地，該等抗體的親合性係比得 5 上或是更高於HumiraTM的親合性。一抗體的親合性也能藉 由已知的親合性成熟的技術予以增加。於一實施例中，至 少一個細胞族群係予以篩選抗體功能和抗體結合力的至少 一個，較佳二個都有。 1 除了濃化步驟之外，供用於抗體篩選的方法也可以 10包括：篩選的一細胞族群的抗體序列同源性之一或多個步 驟，尤其是人類同源性。於一實施例中，經單離的抗原專 -性細胞的至少-個係生產_抗體，其具有大約5〇%至大 約1〇〇%’或是其内的增加量，的—人類抗體之同源性，或 是大於約60%、7〇%、80%、85%、9〇%，或是95%同源 I5的。該等抗體可以藉由本技藝中所知道的技術予以人類化 , 以增加㈣於—人類序列的同源性，如：CDR移植或是選 I 擇性決定殘基移植(SDR)。 於另-個實施例中，本發明亦提供如以上在㈣、
Kd，及/或同源性方面所朗的實施例之任何—個的抗體其 20 等本身。 本文中所揭示的B細胞篩選的操作程序相對其他用 於獲得對所欲的標的抗原專—的抗體分泌β細胞與單株抗 體的方法而言具有-些固有的優點。此等優點包括，但不 限定於，下列： 181 200911826 百先，已經發現到當此等篩選的程序係對於，如： K ^是TNF-a之所欲的抗原使用時，該等方法可再現地 ，夂月t夠產生看來是實質無所不包的抗體的全體也就 疋、.。合至抗原的各種不同的抗原決定位之抗體 ，之抗原 5 的B細胞。不願被理論所㈣，假定無所不包的全體 係可歸因於在之起始的B細胞回收之前所執行的抗原濃化 二驟。而且’此優點允許具有不同的性質之抗體的單離和 帛選因此等性貞可以取決於特定的抗體之抗原、決定位專 一性而變化。 其次’已經發現到B細胞篩選的操作程序可再現地 產出含有-單-的B細胞，或是其之子代的-純株的B細 胞培養物，其分泌-通常以相對高的結合親合性，也就是 微微莫耳或更好的抗原結合親合性，結合至該所欲的抗原 1之早一的單株抗體。相比之下，先前的抗體筛選的方法傾 向產出相對少的尚親合性抗體以及因而需要大量的篩選的 &序以單離-具有治療潛力的抗體。不願被理論所束缚， 饭定雜作程序導致宿主的活體内的B細胞免疫作用（初級 免疫)接著—級賴外的B細胞的刺激(二級抗原首次接觸 步驟)—者’其等可以提高經回收的純株的b細胞分泌對抗 原‘的專-的一單一的高親合性單株抗體之能力和傾向。 第二，已經觀察到（如本文中用TNF-α專一性B細 胞所顯示的)B細胞㈣的操作程序可再現地產出經濃化的 細胞’其等生產’平均上，對所欲的標的高度地選擇性(抗 原專-性)之IgG。藉由此等方法回收的抗原濃化的B細胞 182 200911826 據信含有能夠產出如上討論的所欲的抗原決定位專—性之 全體的B細胞。 第四，已經觀察到B細胞篩選的操作程序，即使卷 使用小的抗原時，也就是，100個胺基酸或更少的胜肽，例 5如’ 5_50個胺基酸長，可再現地引起—分泌小的抗原 如一胜肽，之單一的高親合性抗體之純株的B細胞培養 物。此係高度令人驚釾地，因生產小胜狀的高親合性抗體 通常是相當困難、費力，以及有時甚至是不可行的。於是， 本發明可以使用來生產所欲的胜肽標的，例如：病毒、会 10 ®或是自體抗原胜肽’之治療性抗體，藉此允許具有非常 不連接的結合性質之單株抗體的的生產或是甚至不同的月: 肽標的之單株抗體的混合物的生產，例如 此優點尤其是在生產-具有-所欲的效價之治療 疾病的疫苗時是有用的，如：一誘導不同的HPV株之保護 15 性免疫的HPV疫苗。 第五，B細胞篩選的操作程序，尤其當使用衍生自 兔的B細胞時，傾向可再現地產出非常相似於内源的人類 免疫球蛋白（在胺基酸位準約9〇%相似的）以及含有具有非 常類似於人類免疫球蛋白的長度之CDRs的抗原專一的抗 2〇體序列’以及因而需要很少或是不需要序列修飾(典型地最 多只有於親代抗體序列内的一些CDR殘基可能被修飾且沒 有引入架構外源的殘基）俾以為了消除可能的免疫原性關 係。特別地，較佳地重組型抗體只會含有抗原辨識所需要 的宿主（兔）的CDR1和CDR2殘基以及整個的CDR3。因 183 200911826 此，依據B細胞和抗體篩選的操作程序生產的回收的抗體 序列之高的抗原結合親合性保持是完整的或是實質完整 的，即使有人類化。 簡言之，此等方法藉著使用比之前已知的更有效率 5 的操作程序而能用來生產的顯現出對於更多的不同的抗原 決定位較高的結合親合性之抗體。 於一特定的實施例中，本發明提供一種用於辨識一 單一的B細胞的方法，該B細胞係分泌對一所欲的抗原專 一的抗體且選擇性地具有至少一個所欲的功能性質，如： 10 親合性、結合性、細胞溶解的活性和類似物，該方法係經 由包括下列步驟的過程： a. 免疫一宿主對抗一抗原； b. 收穫來自該宿主的B細胞； c. 濃化該等收穫的B細胞以增加抗原專一性細胞 15 的頻率； d. 創造至少一單一細胞懸浮液； e. 在有利於每個培養井的一單一的抗原專一性B 細胞存活的條件之下培養來自該單一細胞懸浮液的次族 群； 20 f.自該次族群單離B細胞；以及 g.決定是否該單一的B細胞生產對於該抗原專一 的抗體的。 典型地，此等方法會進一步包含一額外的單離和定 序步驟，整體或是部分地，編碼所欲的抗體之多肽和核酸 184 200911826 的序列。此等序列或經修飾的變體或其等之部分可以於所 欲的宿主細胞内表現俾以生產一所欲的抗原之重組型抗 體。 如之前提到的，據信B細胞的純株族群主要地包含 5 生產對抗所欲的抗原之抗體的抗體分泌B細胞。以使用數 個抗原和不同的B細胞族群獲得的實驗結果為基礎，也相 信如本發明所生產的純株生產的B細胞與自其衍生的經單 離的抗原專一性B細胞係分泌一單株抗體，該抗體典型地 具有相對地高親合性以及而且能夠有效地且可再現地生產 10 有更多的抗原決定位可變性之單株抗體選出物，與其他的 自經培養的抗原專一性B細胞衍生單株抗體的方法相比。 於一個例示的實施例中’於此等B細胞篩選的方法中使用 的免疫細胞族群將會衍生自兔子。然而，生產抗體之其他 的宿主，包括：非人類和人類宿主，能任擇地使用作為免 疫B細胞的來源。據信使用兔子作為b細胞的來源可以能 提高由該等方法衍生的單株抗體之多樣性。並且，依據本 發明之衍生自兔的抗體序列典型地擁有具有人類抗體序列 之高度的序列同一性之序列，使得其等有助於人類的用 ^ 途，因其等應具有很少的抗原性。在人類化的過程中，最 終的人類化抗體含有低得多的外來的/宿主殘基含量，通常 限於戟劇性地不同之次組的宿主的CDR殘基，由於其等之 本質相對於移植所使用的人類標的序列。此提高人類化抗 體蛋白的完全的活性回收之可能性。 185 200911826 本文中所揭示的使用一濃化步驟之抗體篩選的方法 包括自一經免疫的宿主獲得一含有免疫細胞的細胞族群的 一步驟。自一經免疫的宿主獲得一含有免疫細胞的細胞族 群的方法係本技藝中所知道的以及通常包括：於一宿主體 5 内誘導一免疫反應且自該宿主收穫細胞以獲得一或多個細 胞族群。該反應可以藉由免疫宿主對抗一所欲的抗原而引 出。任擇地，使用作為此等免疫細胞的來源之宿主可以天 然地暴露至所欲的抗原，如：已經感染一特定的病原體， 如一細菌或病毒，的一個體或是任擇地對折磨該個體的癌 10 症已經發動一專一的抗體的反應之個體。 宿主動物係本技藝中所熟知的以及包括，但不限 於：天竺鼠、兔、小鼠、大鼠、非人類靈長類動物、人類， 和其他的哺乳動物以及齧齒動物、雞、乳牛、豬、山羊， 和綿羊。較佳地，宿主係為一哺乳動物，更佳地，兔、小 15 鼠、大鼠，或人類。當暴露至一抗原時，宿主會生產為對 抗抗原天然的免疫反應的一部份之抗體。當提及時，免疫 反應能天然發生，由於疾病，或是其可以藉由用抗原的免 疫作用予以誘導。免疫作用可以藉由本技藝中所知道的任 何方法予以執行，如：藉由帶有或是不帶有提高免疫反應 20 的製劑，如：完全或是不完全佛蘭氏佐劑（complete or incomplete Freund’s adjuvant)之抗原的一或多個的注射。作 為活體内免疫一宿主動物的一選擇，該方法能包含於活體 外免疫一宿主細胞培養物。 186 200911826 在免疫反應的許可時間之後(例如，如藉由血清抗體 的偵測予以測量），宿主動物細胞係予以收穫以獲得一或多 個細胞族群。於一較佳的實施例中，一收穫的細胞族群係 予以篩選抗體結合力及/或抗體功能。一收穫的細胞族群較 5 佳地來自以下的至少一個：脾臟、淋巴結、骨髓，及/或周 邊血液單核細胞(PBMCs)。細胞可以收穫自多於一個來源 以及合在一起。某些來源對於某些抗原可能是較佳的。舉 例而言：脾臟、淋巴結，和PBMCs對於IL-6是較佳的； 以及淋巴結對於TNF是較佳的。細胞族群係在免疫作用之 10 後大約20至大約90天或是其内的增加量予以收穫，較佳 地大約50至大約60天。一收穫的細胞族群及/或從那裡的 單一細胞懸浮液能予以濃化、篩選，及/或係培養供用於抗 體篩選。一收穫的細胞族群之内的抗原專一性細胞的頻率 通常是大約1%至大約5%，或是其内的增加量。 15 坑--實施例中，來自一收獲的細胞族群的一單一細 胞懸浮液係予以濃化，較佳地藉由使用美天旎小珠子。來 自具有大約1%至大約5%的抗原專一性細胞的頻率之收穫 的細胞族群，以此方式衍生的一經濃化的細胞族群具有接 近100%的抗原專一性細胞的頻率。 20 使用一濃化步驟之抗體篩選的方法包括從來自一經 濃化的細胞族群之至少一個抗原專一性細胞生產抗體的一 步驟。活體外生產抗體的方法係本技藝中所熟知的，以及 能使用任何合適的方法。浓—實施例中，一經濃化的細胞 族群，如：來自一收獲的細胞族群之一抗原專一性單一細 187 200911826 胞懸浮液係以不同的每井細胞密度，如：％、刚、25〇、 …或U於1和1GGG個細胞之間的其他的增加量，予 Z板培養。較佳地，次族群包含不多於大約1G，_個抗 ^一的、抗體分泌細胞，更佳地不多於大約 50-10,000、 :她，_、大約，，_、大約5〇鲁^ 10 15 20 =料-的、抗體分泌細胞，或是其内的增加量。接而， 件二:群係用合適的培養基(例如，-經活化的T細胞條 尤其化的兔了細胞條件培養基)於-Itt予以培養，較佳地在有利於每個培養井的一單一 抗體刀（細胞存活的條件之下。顧養層，通常由經 =細胞物㈣.，EL4B_，不構成細胞族群 生產的I田胞係於—合相培養基㈣養歷時足夠抗體 = 時間’舉例而言大約1天至大約2週、大約i天至 = ::、至少大約3天、大約3至大約5天、大約5 -實如1天’至少大約7天或是其内的其他增加量。於 單一㈣多於—個次族群係同時地培養。較佳地，一 提供“產㈣的細胞和其等之子代存砂各井t，藉此 =井中的抗原專一的B細胞的一純株族群。在此階 株族群所生產的免疫球蛋白G(IgG)係高度相關 々專^性。於—較佳的實施例中，柳顯現出關於抗 90。/ ^約5G%的相關性，更佳地大於鳩、跳、 ;:、99% ’或是其内的增加量。參見第㈣，其展 188 200911826 物而展示出相關性。比較抗原專一性相對一般IgG的合 成。觀察3個族群；辨識一單一的版式抗原（生物素化的和 直接的塗層）的IgG，可偵測的IgG和不論固定化之抗原辨 識，以及單獨IgG生產。IgG生產係高度相關於抗原專一 5 性。 選擇性地收集一含有該等抗體之懸浮液，其可以依 據以上所說明的步驟予以濃化、篩選，及/或培養供用於抗 體篩選。於一實施例中，懸浮液係予以濃化(較佳地藉由一 抗原專一性分析，尤其是ELISA分析法）及/或用於抗體功 10 能的篩選。 於另一個實施例中，經濃化的，較佳純株的抗原專 一性B細胞族群，由其而來的以上所說明的一懸浮液係選 擇性地予以筛選俾以偵測所欲的經分泌之單株抗體的存 在，係用於單離一些B細胞，較佳地一單一的B細胞，其 15 接而於一適當的分析法中測試俾以確認純株B細胞族群内 之一單一的生產抗體的B細胞的存在。於一實施例中，大 約1至大約20個細胞係自純株的B細胞族群單離，較佳地 低於大約15、12、10、5，或是3個細胞，或是其内的增加 量，最佳地一單一的細胞。篩選較佳地藉由一抗原專一性 20 分析，尤其是一螢光暈法實現。螢光暈法可以用全長的蛋 白或其之一片段予以執行。含有抗體之懸浮液也能篩選以 下的至少一個：抗原結合親合性；抗原配體結合的激動或 是拮抗，一特定標的細胞類型的增殖；一標的細胞的胞溶 作用，以及涉及該抗原的一生物途徑的之誘導或抑制。 189 200911826 經辨識的抗原專一性細胞可以用來衍生編碼所欲的 單株抗體之對應的核酸序列。（Alul消化能確認每井只有生 產一單一單株抗體的類型。）當如上提及時，此等序列可 以予以突變，如經由人類化，俾以使其等成為合適供用於 5 人類藥劑。 當提及時，使用於本方法之中的經濃化的B細胞族 群也能進一步予以濃化、篩選，及/或係培養的供用於依據 以上所說明的步驟之抗體篩選，其等可以以不同的順序重 複或是執行。於一較佳的實施例中，經濃化的，較佳地純 10 株的抗原專一性細胞的族群之至少一個細胞係予以單離、 培養，以及使用於抗體篩選。 因此，於一實施例中，本發明係提供一種包含以下 的方法. a. 自一經免疫的宿主收穫一細胞族群以獲得一經 15 收穫的細胞族群； b. 自一收穫的細胞族群創造至少一單一細胞懸浮 液； c. 濃化至少一單一細胞懸浮液，較佳地藉由層析 法，以形成一第一經濃化的細胞族群； 20 d.濃化該第一經濃化的細胞族群，較佳地藉由 ELISA分析法，以形成一第二經經濃化的細胞族群，其較 佳是純株的，也就是，其只含有一單一種類的抗原專一性 B細胞； 190 200911826 e.濃化該第二經濃化的細胞族群，較佳地藉由螢光 暈法，以形成一第三經濃化的細胞族群，其含有生產對一 所欲的抗原專一的抗體之一單一的或是一些數目的B細 胞；以及 5 f.篩選藉由自該第三經濃化的細胞族群單離的一 抗原專一性細胞所生產的一抗體。 本方法能進一步包括一或多個篩選收穫的細胞族群 之抗體結合力（親合性、結合性）及/或抗體功能的步驟。合 適的篩選步驟包括，但不限於偵測以下之分析的方法：是 10 否藉由經辨識的抗原專一性B細胞所生產的抗體會生產一 擁有一最小的抗原結合親合性之抗體，是否該抗體會激動 或拮抗一所欲的抗原的結合至一配體；是否該抗體會誘導 或抑制一特定的細胞類型之增殖；是否該抗體會誘導或是 引出一對抗標的細胞的細胞溶解的反應；是否該抗體會結 15 合至一特定的抗原決定位；以及是否該抗體會調整(抑制或 激動）涉及該抗原的一特定的生物途徑或多個途徑。 同樣地，該方法能包括一或多個篩選該第二經濃化 的細胞族群之抗體結合力及/或抗體功能的步驟。 本方法能進一步包括一定序經選擇的抗體的多肽序 20 列或對應的核酸序列之步驟。該方法也可以包括一使用該 經選擇的抗體的序列、其之一片段，或是一遺傳上經修飾 的變體而生產一重組型抗體的步驟。為了保留所欲的性質 之用於突變抗體序列的方法係本技藝中具有技術的那些人 所熟知的，以及包括：人類化、嵌合、單鏈抗體的生產； 191 200911826 此等突變的方法能產出具有所欲的效應功能、免疫原性、 安定性、糖基化作用的移動或是加入，和類似物之重組型 抗體。重組型抗體可以藉由任何適合的重組細胞予以生 產，包括，但不限於：哺乳動物細胞，如：CHO，COS， 5 BHK，HEK-293，細菌細胞，酵母細胞，植物細胞，昆蟲 細胞，以及兩棲動物細胞。於一實施例中，抗體係於多倍 體酵母細胞内表現，也就是，二倍體酵母細胞，尤其畢赤。 於一實施例中，該方法包含： a.免疫一宿主對抗一抗原以生產宿主抗體； 10 b.篩選宿主抗體的抗原專一性和中和性； c. 收穫來自該宿主的B細胞； d. 濃化該等收穫的B細胞以創造一具有增加頻率 的抗原專一性細胞之經濃化的細胞族群； e. 在有利於一單一的B細胞存活的條件之下培養 15 來自該經濃化的細胞族群之一或多個次族群以生產一純株 族群於至少一個培養井内； f. 決定是否該純株族群生產對於該抗原專一的一 抗體； g. 單離一單一的B細胞；以及 20 h.定序由該單一的B細胞生產的抗體之核酸序列。 人類化抗體的方法 192 200911826 於本發明的另一個實施例中，有提供一種用於人類 化抗體的重與輕鏈的方法。於此實施例中，採用下列的方 法以人類化重與輕鏈： 輕鏈 5 1.辨識接在訊息胜肽序列之後的第一個胺基酸。 此係架構1的開端。訊息胜肽開始於第一個起始曱硫胺酸 以及兔輕鏈蛋白序列典型地，但不必然地在長度上是22個 胺基酸。成熟多肽的開始也能藉由N端蛋白定序予以實驗 決定，或是可以利用一預測演算法來預測。此亦是如本領 10 域中的那些人正統地界定的架構1的開端。 實例：於第2圖中的RbtVL胺基酸殘基1，開始 ‘AYDM..·，。 2. 辨識架構3的末端。此係典型地接在架構1的 開端之後的86-90個胺基酸以及典型地2個酪胺酸殘基在1 15 個半胱胺酸殘基之前。此係如本領域中的那些人正統地界 定的架構3的末端。 實例：於第2圖中的RbtVL胺基酸殘基88，結束為 ‘TYYC’。 3. 使用如上界定的開始於架構1的起點至架構3 20 的末端之兔輕鏈多肽的序列以及執行一序列同源性的搜尋 以得到最相似的人類抗體蛋白序列。此典型地是在抗體成 熟之前對於人類生殖序列的搜尋俾以降低免疫原性的可能 性，然而，能使用任何的人類序列。典型地，像是BLAST 的一程式可以用來搜尋一序列資料庫以得到最同源的。人 193 200911826 類抗體序列的資料庫可以由各種的來源找到如：ncbi (國 家生物技術資訊中心）。 實例：於第2圖中的RbtVL胺基酸序列編號i至88 的殘基係對於~人類抗體生殖資料庫進行BLAST。前3個 獨特的送回之序列係顯示於第2圖中為L12A、V1和Vx〇2。 4· 般而言’最同源的人類生殖變異輕鏈序列接 而使用作為人類化的根據。然而，本技藝中具有技術的那 些人可以以包括序列間隔和架構的相似性之其他的因子為 基礎來決定要使用另外不是最高的（藉由同源性演算決定) 10 同源性的序列。 實例：於第2圖中，L12A是最同源的人類生殖變 異輕鏈序列以及係使用作為RMV]L的人類化的根據。 5·決定使用於輕鏈的人類化之人類同系物的架構 與 CDR 配置(FR1、pR2、FR3、CDR1 & CDR2)。此係利用 15如本領域之中說明的傳統的佈局。排列兔變異輕鏈序列與 人類同系物’同時維持架構與CDr區域的佈局。 貫例：於第2圖中，RbtVL序列係與人類同源的序 列L12A—起排列，以及架構與cDR領域被指出。 6.以來自該兔序列的CDR1和CDR2序列取代人 20 類同源的輕鏈序列CDRi和CDR2區域。設若在長度上介 於兔與人類的CDR序列之間有差異的話，那麼使用完整的 兔CDR序列和其等之長度。設若執行較少或較多的序列交 換，或是設若改變特定的殘基的話，形成的人類化抗體之 專一性、親合性及/或免疫原性可能未改變是可能的’然 194 200911826 而如同所说明的交換已經成功地使用，但是不排除可能 允許其他的改變之可能性。 實例：於第2圖中’人類同源的變異輕鏈L12A之 CDR1和CDR2胺基酸殘基係用來自RbtVL兔抗體輕鏈序 5列的CDR1和CDR2胺基酸序列予以取代。人類L12A架 構1、2和3是未改變的。形成的人類化序列係於以下顯示 為VLh編號1至88的殘基。注意到只有與L12A人類序 列不同的殘基是畫底線的，以及因此是兔_衍生的胺基酸殘 基。於此實例中，88個殘基只有8個係與人類序列不同。 10 7.在步驟6中創造的新的雜種序列的架構3之後， 連接兔輕鏈抗體序列的整個CDR3。CDR3序列能有不同的 長度’但是在長度上典型地是9至15個胺基酸殘基。CDR3 區域和接著的架構4區域的開始是本技藝中具有技術的那 些人正統地界定的以及可辨識的。典型地，架構4的起點， 15 以及因此在CDR3的末端之後係由序列‘FGGG..·，所構 成’然而，一些變異可能存在於此等殘基中。 實例：於第2圖中，RbtVL的CDR3(編號89-100 的胺基酸殘基)係加入在表示為VLh的人類化序列内的架 構3的末端之後。 20 8·兔輕鏈架構4，其典型地變異輕鏈最後11個胺 基酸殘基且如以上的步驟7中表示的胺基酸殘基開始以及 典型地以胺基酸序列‘…VVKR，作為結尾，係以最接近的 人類輕鏈架構4同系物，通常來自生瘦序列，予以取代。 時常’此人類輕鏈架構4具有序列‘FGGGTKVEIKR，。其他 195 200911826 的不是最同源的或者否則是不同的人類輕鏈架構4序列可 以使用而不會影響形成的人類化抗體之專一性、親合性及/ 或免疫原性是可能的。加入此人類輕鏈架構4序列至變異 的輕鏈人類化序列的末端、立即接著來自以上步驟7的 5 CDR3序列。此現在是變異的輕鏈人類化序列胺基酸序列的 末端。 實例：於第2圖中，RbtVL兔輕鏈序列的架構4(FR4) 係顯示於一同源的人類FR4序列之上。就在以上的步驟7 中加入的CD3區域末端之後加入人類FR4序列至人類化變 10 異的輕鏈序列(VLh)。 重鏈 1. 辨識接在訊息胜肽序列之後的第一個胺基酸。 此係架構1的開端。訊息胜肽開始於第一個起始曱硫胺酸 15 以及兔重鏈蛋白序列典型地在長度上是19個胺基酸。典型 地，但不必然總是，一兔重鏈訊息胜肽之最後的3個胺基 酸殘基是‘...VQC’，接著架構1的開端。成熟多肽的開始 也能藉由N端蛋白定序予以實驗決定，或是可以利用一預 測演算法來預測。此亦是如本領域中的那些人正統地界定 20 的架構1的開端。 實例：於第2圖中的RbtVH胺基酸殘基1，開始 4QEQL·..，。 2. 辨識架構3的末端。此係典型地接在架構1的 開端之後的95-100個胺基酸以及典型地具有‘...CAR’的 196 200911826 最終序列（縱然丙胺酸也能是纈胺酸）。此係如本領域中的那 些人正統地界定的架構3的末端。 實例：於第2圖中的RbtVH胺基酸殘基98，結束 為‘_..FCVR’。 5 3_使用如上界定的開始於架構1的起點至架構3 的末端之兔重鏈多肽的序列以及執行一序列同源性的搜尋 以得到最相似的人類抗體蛋白序列。此典型地是在抗體成 熟之前對於人類生殖序列的搜尋俾以降低免疫原性的可能 性，然而，能使用任何的人類序列。典型地，像是BLAST 10 的一程式可以用來搜尋一序列資料庫以得到最同源的。人 類抗體序列的資料庫可以由各種的來源找到，如：NCBI (國 家生物技術資訊中心）。 實例：於第2圖中的RbtVH胺基酸序列編號1至 98的殘基係對於一人類抗體生殖資料庫進行BLAST。前3 15 個獨特的送回之序列係顯示於第2圖中為3-64-04、3-66-04 和 3-53-02 。 4. 一般而言，最同源的人類生殖變異重鏈序列接 而使用作為人類化的根據。然而，本技藝中具有技術的那 些人可以以包括序列間隔和架構的相似性之其他的因子為 20 基礎來決定要使用另外不是最高的（藉由同源性演算決定） 同源性的序列。 實例：於第2圖中，3-64-04是最同源的人類生殖變 異重鏈序列以及係使用作為RbtVH的人類化的根據。 197 200911826 5. 決定使用於重鏈的人類化之人類同系物的架構 與 CDR 配置(FRJ、FR2、FR3、CDR1 & CDR2)。此係利用 如本領域之中說明的傳統的佈局。排列兔變異重鏈序列與 人類同系物，同時維持架構與CDR區域的佈局。 5 實例：於第2圖中，RbtVH序列係與人類同源的序 列3-64-04 —起排列，以及架構與CDR領域被指出。 6. 以來自該兔序列的CDR1和CDR2序列取代人 類同源的重鏈序列CDR1和CDR2區域。設若在長度上介 於兔與人類的CDR序列之間有差異的話，那麼使用完整的 10 兔CDR序列和其等之長度。此外’可能必須以兔重鏈架構 1的最後3個胺基酸取代人類重鏈架構1區域的最後3個胺 基酸。典型地但並不總是，於兔重鏈架構1中，此3個殘 基接著在1個前面有絲胺酸殘基的甘胺酸殘基之後。此外， 可能必須以兔重鏈架構2的最後的胺基酸取代人類重鏈架 15 構2區域的最後的胺基酸。典型地’但不必然總是’此於 兔重鏈架構2内是在前面有一異白胺酸殘基的甘胺酸殘 基。設若執行較少或較多的序列交換’或是設若改變特定 的殘基的話，形成的人類化抗體之專一性、親合性及/或免 疫原性可能未改變是可能的’然而’如同所說明的交換已 20 經成功地使用，但是不排除可能允許其他的改變之可能 性。舉例而言：一色胺酸胺基酸殘基典型地發生在兔重鏈 CDR2區域的末端之前4個殘基處，而於人類的重鏈CDR2 中，此殘基典型地是一絲胺酸殘基。改變此兔色胺酸殘基 成為在此位置的一人類絲胺酸殘基已經展示出對於人類化 198 200911826 抗體的專一性或親合性具有最小的作用至沒有作用，以及 因而進一步最小化人類化序列内的兔序列衍生的胺基酸殘 基之含量。 實例：於第2圖中，人類同源的變異重鏈序列之 5 CDR1和CDR2胺基酸殘基係用來自RMVH兔抗體重鏈序 列的CDR1和CDR2胺基酸序列予以取代，除了圍起來的 殘基之外，其係兔序列的色胺酸(位置號碼63)和在人類序 列相同的位置之絲胺酸，以及保持為人類絲胺酸殘基。除 CDR1和CDR2的改變之外，架構i的最後3個胺基酸(位 10 置28-30)以及架構2之最後的殘基(位置49)還保留為兔胺 基酸殘基代替人類的殘基《形成的人類化序列係於以下顯 示為VHh編號1至98的殘基。注意到只有與3_64_〇4人 類序列不同的殘基是畫底線的，以及因此是兔_衍生的胺基 酸殘基。於此實例中，98個殘基只有15個係與人類序列 15 不同。 7.在步驟6中創造的新的雜種序列的架構3之後， 連接兔重鏈抗體序列的整個CDR3°CDR3序列能有不同的 長度’但是在長度上典型地是9至15個胺基酸殘基。CDR3 區域和接著的架構4區域的開始是本技藝中具有技術的那 20 些人正統地界定的以及可辨識的。典型地，架構4的起點，
以及因此在CDR3的末端之後係由序列‘WGXG.··(其中X 通常是Q或P)，所構成，然而，一些變異可能存在於此等殘 基中。 199 200911826 實例：於第2圖中，RbtVH的CDR3(編號99-110 的胺基酸殘基)係加入在表示為 VHh的人類化序列内的架 構3的末端之後。 8·兔重鏈架構4，其典型地變異重鏈最後11個胺 5基酸殘基且如以上的步驟7中表示的胺基酸殘基開始以及 典型地以胺基酸序列‘...TVSS，作為結尾，係以最接近的人 類重鍵架構4同系物，通常來自生殖序列予以取代。時常， 此人類重鏈架構4具有序列‘WGqGTLVTVSS，。其他的不 疋最同源的或者否則是不同的人類重鏈架構4序列可以予 1〇以使用而不會影響形成的人類化抗體之專一性、親合性及/ 或免疫原性是可能的。加入此人類重鏈架構4序列至變異 的重鍵人類化序列的末端、立即接著來自以上步驟7的 CDR3序列。此現在是變異的重鏈人類化序列胺基酸序列的 末端。 15 實例：於第2圖中，RbtVH兔重鏈序列的架構4(FR4) 係顯示於一同源的人類重FR4序列之上。就在以上的步驟 7中加入的CD3區域末端之後加入人類FR4序列至人類化 變異的重鏈序列(VHh)。 20 生產抗體與其等之片段的方法 本發明亦針對本文中說明的抗體或其等之片段的生 產。對應於本文中說明的抗體或其等之片段之重組多肽係 自配對的勝任酵母的多倍體’較佳地二倍體或三倍體菌株 分泌。於一個例不的實施例中，本發明係針對使用含有多 200 200911826 倍體酵母的培養物來生產此等分泌形式的重組多肽歷時延 長的期間的方法，也就是，至少數天至1週，更佳地至少1 個月或數個月，以及甚至還更佳地至少6個月至一年或是 更長。此等多倍體酵母培養物會表現至少10-25 mg/公升的 5 多肽，更佳地至少50-250 mg/公升，還更佳地至少500-1000 mg/公升，以及最佳地每公升1公克或更多的重組多肽。 於本發明的一個實施例中，一對遺傳上經標誌的酵 母單倍體細胞係用包含一所欲的異型多聚體蛋白質之次單 元的表現載體予以轉形。一個單倍體細胞的包含一第一表 10 現載體，以及一第二單倍體細胞的包含一第二表現載體。 於另一個實施例中，二倍體酵母細胞會用提供用於一或多 個重組多肽的表現和分泌之一或多個表現載體予以轉形。 於又另一個實施例中，一單一單倍體細胞可以用一或多個 載體予以轉形以及藉由融合或配對策略而使用來生產的一 15 多倍體酵母。於再另一個實施例中，一個二倍體酵母培養 物可以用提供用一所欲的多肽或多個多肽的表現和分泌之 一或多個載體予以轉形。此等載體可以包含載體，例如， 線性化的質體或是其他的線形DNA產物，其等經由同源 重組，或是使用一重組酶，如：Cre/Lox或是Flp/Frt，而隨 20 機地併入至酵母細胞的基因體之内。選擇性地，額外的表 現載體可以引導至單倍體或二倍體細胞之内；或是第一或 第二表現載體可以包含額外的編碼序列；為了異三元體、 異四元體等等的合成。非同一的多肽之表現位準可以逐個 地經由適當的篩選、載體副本的數目、啟動子強度及/或誘 201 200911826 導和_物而予以校正和調整。經轉形的單倍體細胞係遺 傳上雜父的或疋融合的。形成的二倍體或三倍體菌株係使 用來生產和分泌完全組裝的和生物功能性蛋白本文中說 明的人類化的抗體或其等之片段。 5 使用二倍體或三倍體細胞於蛋白生產係提供意想不 到好處。細胞可以為了以下的目的而生長：為了生產的目 的，也就是規模增加，以及為了延㈣時間_，於可能 有害於單倍體細胞生長的條件下，該條件可以包括高的細 胞密度；於基礎培養基内的生長；在低溫的生長；於沒有 ]〇選擇性壓力下的穩定生長；以及其可以提供在期間内維持 異種基因序列的凡整性和維持高位準的表現。發明人確實 已經凡成超過大約1 g/公升之表現的產量以及此等產出可 以藉由進-步的最佳化而提高。不希望由此被束缚，發明 人推理此等好處可能，至少部分地，由創造來自2個不同 15的親代單倍體菌株的二倍體菌株所引起。此等翠倍體菌株 能包含許多較小的自營突變，該等突變係於二倍體或三倍 體内互補，使得在高度地選擇性的條件之下能夠生長且提 高生產。 經轉形的配對勝任單倍體酵母細胞提供一種基因的 20方法，其使得一所欲蛋白的次單元配對。單倍體酵母菌株 係用2個表現載體的各個予以轉形，一第一載體以指示一 多肽鏈的合成以及一第二載體以指示一第二，非同一的多 狀鍵之合成。2個單倍體菌株係配對以提供二倍體宿主，其 中能獲得最佳化的標的蛋白生產。 202 200911826 選擇性地，額外的賴—的編碼序列料以提供。 此等序列可以存在於額外的表現載體上或是於第一或第二 表現載體之内。如本技藝中所知道的，多重編碼序列可以 獨立於個體的啟動子表現；或是可以經由包含一“内部的核 5 酸體進入位址或“IRES”而協同地表現，内部的核酸體進入 位址是促進直接的内部的核酸體進入—順反子（dstr〇n)(一 蛋白編碼區）的起始密碼子，如ATG，的—元素，藉此導致 基因的cap-非依賴性(cap_independent)轉譯。酵母内的IRES 元素功能係於 Thompson 等人（2001) p.N.A.S 10 98:12866-12868 所說明。 於本發明的一個實施例中，抗體序列係組合以—分 泌的J鏈生產，J鏈係提供IgA提高的安定性（參見美國專 利案號 5,959,177 ;以及 5,202,422)。 於一較佳的實施例中，二單倍體酵母菌株是各自營 15 養缺陷型的，以及需要補充單倍體細胞的生長之培養基。 一對營養缺陷型是互補性的，以致於二倍體產物會在缺乏 單倍體細胞的所需要的補充品的狀況下生長。許多酵母内 的此等遺傳標誌係為已知的，包括：胺基酸需求（例如： met、lys、his、arg ’ 等等）、核苷（例如：ura3、adel，等等）； 20 和類似物。胺基酸標誌可能對於本發明的方法是較佳。任 擇地，含有所欲的載體之二倍體細胞可以藉由其他的方法 予以選擇，例如··藉由使用其他的標記，如：綠色螢光蛋 白、抗生素抗性基因、各種的顯性可選擇的標記，和類似 物。 203 200911826 二個經轉形的單倍體細胞可以遺傳上雜交的以及此 配對事件產生的二倍體菌株係藉由其等之雜交物營養的需 求及/或抗生素抗性範圍予以選擇。任擇地，二個經轉形的 單倍體菌株的族群是原生質球狀體化的且融合的，以及二 5 倍體子代予以再生且予以選擇。透過任一種方法，二倍體 菌株能予以辨識以及以其等比起其等之親代於不同的培養 基内之生長能力為基礎而選擇性地生長。舉例而言：二倍 體細胞可以於可以包括抗生素的基礎培養基内生長。二倍 體的合成策略具有某些優點。二倍體菌株透過更廣泛的潛 10 在的突變之互補分佈而具有生產提高位準的異種蛋白之潛 力，該等突變可能影響重組型蛋白的生產及/或分泌。而 且，一旦獲得穩定的菌株，任何用來篩選菌株的抗生素不 必然地需要持續地存在於生長培養基中。 如上指出的，於一些實施例中，一單倍體酵母可以 15 用一單一或是多重的載體予以轉形，以及用一未經轉形的 細胞予以配對或是融合以生產一含有該載體或該等載體的 二倍體細胞。於其他的實施例中，一個二倍體酵母細胞可 以用一或多個載體予以轉形，其等提供藉由二倍體酵母細 胞的一所欲的異種多肽之表現和分泌。 20 於本發明的一個實施例中，2個單倍體菌株係用一 多肽存庫予以轉形，例如，一抗體重或輕鏈存庫。合成多 肽之經轉形的單倍體細胞係與互補的單倍體細胞配對。形 成的二倍體細胞係予以篩選功能性蛋白。二倍體細胞提供 一快速、方便且不昂貴的方法，其帶來用於功能性測試的 204 200911826 大量的多肽之組合。此技術尤其可應用於異種二聚體蛋白 產物的生產，其中最佳化的次單元的合成位準對於功能性 蛋白的表現和分泌是關鍵性的。 於本發明的另一個實施例中，二個次單元的表現位 5 準的比率係予以調控俾以最大化產物的生產。異種二聚體 的次單元蛋白位準先前已經顯示出會影響最終產物的生產 (Simmons 10 15 20 1;263(1_2):133_47)。调控可以藉由篩選一存在於表現載體 上的標記而在配對步驟之前予以完成。藉著平穩地增加載 體之副本的數目，表現位準能增加。於一些情況下，增加 -鏈相對於另-鏈的位準可能是所欲的，以便於達到介於 多肽的次單元之_平衡的比例。抗生素抗性標記對於此 目的是有用的，例如：吉歐黴素抗性標記、G418抗性等等， 以及提供-手段以濃化含衫重的併人的副本於_菌株内 的-表現載體之菌株，其係藉由_對於更高位準的士歐 徽素或剛有抗性的轉形體。次單元基因恰當的比例，例 如：i m ;等等對於有效的蛋白生產可以是重要的。 即使當使用相_啟動子來轉錄次單元二者時，許多 的因子促成表現的蛋白之最終位準以及因而，增加—編 的基因相對於另一個的副本數目可以是有用的。任擇地: 生產更高位準的一多肽之二倍體喆 囷株，相對於單-副本載 =株，鋪由配對2 _財”柄纽載體 體鹵株而創造出。 σ 205 200911826 10 15 20 宿主細胞係用以上說明的表現栽體予以轉形，予以 配對以形紅倍體㈣，以及於慣心營養培養基中培 ^ ’制的營養培養基係輕地料修⑽料啟動子、 師選轉形體或_編碼所欲的序狀基因。—些合適於酵 母生長的基礎培養基係本技藝情知道的。此等培養基的 任何-個可以視需要補充鹽類(如：氣化納、弼、鎂，和碟 酸鹽）、緩衝液(如酸鹽、H腿）、_(如：腺芽和胸牛 普）、抗生素、微量元素，以及葡萄糖或是一等效的能量來 源。也可以包括本技藝中具有技術_些人所知道的適當 的濃度之任何其他必須的補充品。培養條件，如：溫度: pH與類似物，是先前宿主細胞使用予以筛選表現的該等培 養條件，以及對於具有通常技術的人是明顯的。 經分泌的蛋白係自培養基予以回收。—蛋 劑，如：笨甲基卿MSF)可以對於抑制 :::水:性降解是有用™包括抗生素以二 的生長。組成物可關韓技藝中所知道的方 法予以濃縮、過濾、透析，等等。 本發明的二倍體細胞係為了生產的 等生產的㈣希望包括於基礎培養基内的生長=二 缺少預形成的胺基酸和其他的複~ 有氨作A…-他的複口體生物分子’例如：含 ’’、、乳的來源，以及葡萄糖作為能量和麵 =為物、約和類似物的來源之培養基。:佳地 鳴。定，c劑，如:抗生素、胺基酸、嗓吟、 4 °料二倍體細胞可以生長至高的細胞密度， 206 200911826 舉例而言至少大約50 g/L ;更常地是至少大約100 g/L ;以 及可以是至少大約300、大約400、大約500 g/L或是更多。 於本發明的一個實施例中，用於生產的目的之主體 細胞的生長係在低溫下執行，溫度可以在log期的期間、 5 在穩定期的期間，或是二者的期間予以降低。術語“低溫” 係提及至少大約15°C的溫度，更常地是至少大約17°C，以 及可以是大約20°C，以及通常不多於大約25°C，更常不多 於大約22°C。於本發明的另一個實施例中，低溫通常是不 多於約28°C。生長溫度能影響生產培養物中的全長的經分 10 泌的蛋白之生產，以及降低培養生長溫度能強大地提高完 整的產物產量。降低的溫度似乎經由宿主用來產生標的產 物之折疊和轉譯後處理途徑來協助細胞内的運輸，與降低 細胞的蛋白酶降解一起。 本發明的方法係提供用於經分泌的、活性的蛋白之 15 表現，較佳地一哺乳動物的蛋白。於一實施例中，如本文 中所使用的經分泌的、“活性抗體”係提及至少2個恰當配 對的鏈之正確地折疊的多聚體，其正確地結合至其之同源 的抗原。活性蛋白的表現位準通常是至少大約10-50 mg/ 公升培養物，更常地是至少大約100 mg/公升，較佳地至少 20 大約500 mg/公升，以及可以是係1000 mg/公升或更多。 本發明的方法能提供在生產期間之宿主和異種的編 碼序列的增加的安定性。安定性，舉例而言係藉由維持高 位準的表現時間而證明，其中表現的起始位準的減少不多 207 200911826 於大約20%，通常不多於10%，以及可以減少不多於大約 5%，在大約20倍數、50倍數、1〇〇倍數，或更多的期間。 菌株的安定性亦提供維持異種的基因序列隨著時間 的完整性，其中主動編碼序列與必要的轉錄調控元素的序 5列係維持在至少大約99%的二倍體細胞，通常至少大約 99.9%的二倍體細胞，以及較佳地至少大約99 99%的二倍 體細胞，大約20倍數、50倍數、1 〇〇倍數，或更多的期間。 較佳地，實質全部的一倍體細胞維持主動編碼序列的序列 與必要的轉錄調控元素。 10 其他的生產抗體的方法係本技藝中具有通常技術的 那些人所熟知的。舉例而言：生產嵌合抗體的方法係本技 藝中現在所熟知的（參見’舉例而言：Cabilly等人的美國專 利案號 4,816,567;Morrison 等人，p.n.A.S. USA, 81:8651-55 (1984) ; Neuberger, M_S.等人，Nature, 314:268-270 (1985); 15 Boulianne, G_L.等人，Nature，312:643-46 (1984)，其等之各 個的揭示係以其等之全體併入本文中以作為參考資料）。 同樣地，其他的生產人類化抗體的方法係本技藝中 現在所熟知的（參見，舉例而言：Queen等人的美國專利案 號 5,530，10卜 5,585,089、5,693,762,以及 6,180,370; Winter 20 的美國專利案號5,225,539和6,548,640; Carter等人的美國 專利案號 6,054,297、6,407,213 和 6,639,055 ; Adair 的美國 專利案號 6,632,927 ; Jones, Ρ·Τ·等人，Nature, 321:522-525 (1986); Reichmann, L.，等人，Nature, 332:323-327 (1988); 208 200911826
Verhoeyen，Μ ’ 等人，Science，239:1534-36 (1988)，其等之 各個的揭示係以其等之全體併入本文中以作為參考資料）。 本發明之具有TNF-a的結合專一性的抗體多肽也 可以藉由使用本技藝中具有通常技術的那些人所熟知的慣 5 用的技術來建構一含有一操縱子和一編碼一抗體重鏈之 DNA序列的表現载體而生產，其中編碼抗體的專一性需要 的CDRs之DNA序列係衍生自一非人類的細胞來源，較佳 地一兔子的B細胞來源，同時編碼該抗體鏈的剩餘部分之 DNA序列係衍生自—人類的細胞來源。 10 一第二表現载體係使用本技藝中具有通常技術的那 些人所熟知的相同的慣用手段予以生產，該表現載體含有 一操縱子以及一編碼一抗體輕鏈之DNA序列，其中編碼抗 體的專一性需要的CDRs之DNA序列係衍生自一非人類的 細胞來源，較佳地一兔子的B細胞來源，同時編碼該抗體 15 鏈的剩餘部分之DNA序列係衍生自一人類的細胞來源。 表現載體係藉由本技藝中具有通常技術的那些人所 熟知的慣用技術予以轉染的至一宿主細胞内以生產—經轉 染的宿主細胞，該經轉染的宿主細胞係藉由本技藝中具有 通常技術的那些人所熟知的慣用技術予以培養以生產抗體 20 多肽。 宿主細胞可以與以上所說明的二個表現載體共轉 染’第一表現載體含有編碼一操縱子和一輕鏈-衍生的多狀 之DNA以及苐-一載體含有編碼·一操縱子和一重鍵-衍生的 多肽之DNA。該二載體含有不同的可篩選的標記，伯θ 209 200911826 佳地完成重與輕鏈多肽之實質相等的表現。任擇地，可以 使用一單一的載體，該載體包括編碼重與輕鏈多肽二者的 DNA。重與輕鏈之編碼序列可以包含cDNA。 用來表現抗體多肽之宿主細胞可以是一細菌細胞， 5 如大腸桿菌，或一真核細胞。於本發明的一個特別佳的實 施例中，可以使用為了此目的之一定義明確的類型之哺乳 動物細胞，如：一骨聽癌細胞或是一中國倉氣印巢(CHO)細 胞株。 可以建構載體的一般的方法，生產宿主細胞所需要 10 的轉染方法以及自宿主細胞生產抗體多肽所需要的培養方 法全部包括慣用的技術。縱然較佳地使用來生產抗體的細 胞株是一 α甫乳動物細胞株’任何其他的合適的細胞株’例 如一細菌細胞株，如一大腸桿菌-衍生的細菌菌株，或是一 酵母細胞株，可以任擇地使用。 15 同樣地，一旦生產，抗體多肽可以依據本技藝中標 準的程序予以純化，如舉例而言：掃流式過渡、硫酸銨沈 澱、親合性管柱層析法和類似物。 本文中說明的抗體多肽也可以用於胜肽或是非胜肽 仿效物設計和合成，其等對於如同本發明的抗體多肽之相 20 同的治療應用會是有用的。參見，舉例而言：Saragobi等 人，Science, 253:792-795 (1991)，其之内容係以其之全體 併入本文中以作為參考資料。 篩選分析 210 200911826 本發明亦包括設計用於協助辨識在顯現出TNF-α相 關的疾病或障礙症狀的病人體内的與TNF-α有關的疾病或 障礙的篩選分析法。 於本發明的一個實施例中，本發明的抗TNF-a抗 5 體，或其等之TNF-a結合片段係用來偵測自顯現出與 TNF-a有關的一疾病或障礙的症狀的一病人所獲得的一生 物樣本中的TNF-a的存在。TNF-a的存在，或是其之提高 的位準，當與於一可比較的生物樣本中的TNF-a之疾病前 的位準相比時，可以有益於診斷與TNF-a有關的一疾病或 10 障礙。 本發明的另一個實施例係提供一診斷或篩選分析以 協助診斷於顯現出本文中的辨識的T N F - a有關的疾病或障 礙的症狀的病人體内的與TNF-a有關的疾病或障礙，其包 含利用一轉譯後修飾的抗TNF-a抗體或其之結合片段予以 15 分析來自該病人的一生物樣本中的TNF-a表現位準。抗 TNF-a抗體或其之結合片段可以予以轉譯後修飾成包括如 本揭示中先前提出的一可偵測的部分。 於生物樣本中的TNF-a位準係使用如本文中提出的 一經修飾的抗TNF-oc抗體或其之結合片段予以決定，以及 20 比較該生物樣本中的TNF-a位準對於標準的TNF-a的位準 (例如，於正常的生物樣本中的位準）。具有技藝的臨床醫生 會瞭解到一些可變性可以存在於正常的生物樣本之間，以 及當評估結果時會考慮到這些。 211 200911826 以上詳述的分析法於監測一疾病或障礙也可以是有 用的，其中來自一據信具有TNF-α有關的疾病或障礙之病 人的一生物樣本中所獲得的TNF-a的位準係與來自相同的 病人之先前的生物樣本中的TNF-a的位準比較，俾以確定 5 是否於該病人體内的TNF-a的位準已經隨著舉例而言：一 治療攝生法而改變。 一具有技藝的臨床醫生會瞭解到一生物樣本包括， 但不限於：血清、血漿、尿液、唾液、黏液、胸膜液、關 節液以及脊髓液。 10 改善或減少舆TNF-a有關的疾病或障礙的症狀，或治療， 或預防舆TNF-a有關的疾病或障礙之方法 於本發明的另一個實施例中，本文中說明的抗 TNF-a抗體，或其等之片段，對於改善或減少與TNF-a有 15 關的疾病或障礙的症狀，或治療，或預防與TNF-a有關的 疾病或障礙是有用的。本文中說明的抗TNF-a抗體，或其 等之片段，也能以如下更加詳盡地說明的一藥學組成物的 形式予以投藥至於需要治療與TNF-a有關的疾病或障礙之 病人。 20 於本發明的一個實施例中，本文中說明的抗TNF-脉 抗體，或其等之片段，對於改善或減少下列非限制性的名 單之疾病或障礙的症狀，或治療，或預防下列非限制性的 名單之疾病或障礙是有用的：類風濕性關節炎、乾癬性關 節病變、僵直性脊椎炎、幼年型類風濕性關節炎、史迪爾 212 200911826 氏病、系祕紅峰歸、修格連氏症 障礙、多發性肌疼.雇 1、，、〇缔組織 脸二 症、巨細胞動脈炎、韋格納肉芽 腫、川崎病、自體免疫血管炎、自 牙 性腸、首广 免疫葡萄膜炎、發炎 «道疾病、貝西氏病、牛皮癬、 ： 狀腺炎、氣喘、第！型糖尿病、第2都糖“橋本氏甲 臟病、周邊血管疾病、中風、壞疽_皮^\、缺血性心 衣i f生膿皮症、類肉瘤、 10 15 ^爾月氏病、毒性表皮溶解症、自發性葡萄膜炎或鞏膜炎、 鳥^視網職絡膜炎、葡_炎性與糖尿病性囊狀黃斑部 水腫、老年性黃㈣退化、肺纖維化、慢恤塞性肺部疾 病、憂營症、精神分裂症、《海默症、血管型失智症/ 於本發明的另-個實施例中，本文中說明的抗 TNF-cx抗體，或其等之片段，對於改善或減少下列非限制 性的名單之疾病或障礙的錄，—或肋下列非限制 性的名單之疾病或障礙是有用的：腎絲球腎炎、動脈粥狀 硬化症、再狹窄、自體免疫疾病、克隆氏症、移植物對抗 伯主（GVH)反應（包括器官移植排斥）、敗血性休克、惡病 質、食慾缺乏、多發性硬化症、格蘭氏陰性敗血症，以及 内毒素性休克。 於本發明的另-個實施例中，本文中說明的抗 20 TNF-oc抗體，或其等之片段，對於改善或減少下列非限制 性的名單之疾病或障礙的症狀，或治療，或預防下列非限 制性的名單之疾病或障礙是有用的：贅瘤性疾病，包括： 乳癌、卵巢癌、膀胱癌、肺癌 '甲狀腺癌、神經膠質母細 213 200911826 胞瘤、胃癌、子宮内膜癌、腎臟癌、大腸與大腸直腸癌、 胰臟癌與前列腺癌。 於本發明的另一個實施例中，本文中說明的抗 TNF-α抗體，或其等之片段，對於改善或減少下列非限制 5 性的名單之疾病或障礙的症狀，或治療，或預防下列非限 制性的名單之疾病或障礙是有用的：葡萄膜炎（例如，幼 年時期與血清陰性），狼瘡以及其他免疫複合體媒介的疾 病，如：天皰瘡與腎絲球腎炎、先天性甲狀腺機能抗進 (CH)、遲發型過敏反應(DTH)，如：接觸型過敏反應、類肉 10 瘤病、慢性關節炎、成人史提爾氏病、硬皮病、巨細胞動 脈炎、SAPHO症候群、原發性膽汁性肝硬化(PBC)、骨髓 發育不良症候群、血管炎、血液惡性疾病、耳堝前庭的障 礙、巨噬細胞活化症候群、間質性肺疾、C型肝炎、誘導 排卵，以及骨髓發育不良症候群。其他的TNF-a有關的疾 15 病與障礙之係揭露於Salfeld等人的美國專利案號 6,090,382,以及Barbanti等人的美國專利案號5,436,154之 中，該二者係以其等之全體併入以作為參考資料。 投藥 20 於本發明的一個實施例中，本文中說明的抗TNF-a 抗體，或其等之TNF-α結合片段，以及該等抗體片段的組 合，係以介於約0.1和10 mg/kg接受者主體的體重之間的一 濃度予以投藥至一主體。於本發明的一個較佳的實施例 中，本文中說明的抗TNF-a抗體，或其等之TNF-a結合片 214 200911826 段，以及該等抗體片段的組合，係以大約0.4 mg/kg接受者 主體的體重的一濃度予以投藥至一主體。於本發明的一個 較佳的實施例中，本文中說明的抗TNF-α抗體，或其等之 TNF-ot結合片段，以及該等抗體片段的組合，係以每二十 5 六週一次或更少的頻率投藥至一接受者主體，如：每十六 週一次或更少、每八週一次或更少，或是每四週一次，或 是更少。 本技藝中具有技術的一個人能夠經由例行的實驗來 決定一投藥的有效劑量和頻率，舉例而言··藉由本文中的 10 揭示以及以下的教示的指引：Goodman, L. S·, Gilman, A.， Brunton, L. L., Lazo, J. S., & Parker, K. L. (2006). Goodman & Gilman's the pharmacological basis of therapeutics. New York: McGraw-Hill ； Howland, R. D., Mycek, M. J., Harvey, R. A., Champe, P. C., & Mycek, M. J. (2006). Pharmacology. 15 Lippincott's illustrated reviews. Philadelphia: Lippincott Williams & Wilkins ;以及Golan, D. E. (2008). Principles of pharmacology: the pathophysiologic basis of drug therapy. Philadelphia, Pa·，[等等]:Lippincott Williams & Wilkins。 於本發明的另一個實施例中，本文中說明的抗 20 TNF-α抗體，或其等之TNF-α結合片段，以及該等抗體片 段之組合，係於一藥學調配物内投藥至一主體。 一“藥學組成物”係提及合適於投藥至一哺乳動物的 一化學或生物的組成物。此等組成物可以特別地配方供用 於透過一些途徑的一或多個之投藥，途徑包括但不限於： 215 200911826 頻的、表皮的（epicutaneous)、硬腦膜上的、吸入、動脈内 的、心内的、側腦室内的、真皮内的、肌内的、鼻内的 眼内的、腹膜内的、脊椎内的、椎管内的、靜脈内的、口 腔、非經腸的、透過一灌腸或栓劑之直腸的、皮下的、 真 5 皮下的、舌下的、經皮的，以及經黏膜的途徑。此外， — ’投 藥能用注射、粉末、液體、凝膠、滴劑，或是其他的方、、去 投藥而發生。 於本發明的一個實施例中，本文中說明的抗TNf以 抗體，或其等之TNF-α結合片段，以及該等抗體片段的紐 10 合，可以選擇性地組合以一或多個活性劑予以投藥。此等 活性劑包括：止痛劑、退熱劑、抗發炎劑、抗生素、抗病 毒劑，以及抗細胞激素劑。活性劑包括：TNF-a、IL-2、n4 IL-6、IL-10、IL-12、IL-13、IL-18、IFN-cx、IFN-γ、BAFf CXCL13、IP-10、VEGF、EPO、EGF、HRG、肝細皰生長 15 因子(HGF)、鐵調節激素的激動劑、拮抗劑，以及調節劑， 其包括··對前述的任何一個有反應的抗體，以及對其等之 受體的任何一個有反應的抗體。活性劑也包括：2-芳基@ 酸(2-Arylpropionic acids)、醋氯芬酸(Aceclofenac)、）¾]•西美 辛（Acemetacin)、乙酰水楊酸(Acetylsalicylic acid)(阿斯匹 20 靈（Aspirin))、阿氣芬酸（Alclofenac)、阿明洛芬 (Alminoprofen)、阿莫西匹靈（Amoxiprin)、安替比林 (Ampyrone)、芳香基烧酸(Arylalkanoic acids)、阿扎丙酮 (Azapropazone)、貝諾酯/苯樂來（Benorylate/Benorilate)、苯 0惡洛芬（Benoxaprofen)、、;臭芬酸（Bromfenac)、卡洛芬 216 200911826 (Carprofen)、塞來昔布（Celecoxib)、膽鹼水楊酸鎂（choline magnesium salicylate)、氣非宗（Cl〇fezone)、COX-2 抑制 劑、右布洛芬(Dexibuprofen)、右旋鲷洛芬(Dexketoprofen)、 雙氣酚酸(Diclofenac)、二氟尼柳（Diflunisal)、屈噁昔康 5 (Droxicam)、乙柳醯胺(Ethenzamide)、依托度酸(Etodolac)、 依托考昔(Etoricoxib)、費索胺(Faislamine)、芬那酸(fenamic acid)、芬布芬(Fenbufen)、非諾洛芬(Fenoprofen)、氟芬那 酸(Flufenamic acid)、氟諾洛芬(Flunoxaprofen)、氟吡洛芬 (Flurbiprofen)、布洛芬(Ibuprofen)、異 丁普生（Ibuproxam)、 10 吲哚美辛（Indometacin)、吲哚洛芬（Indoprofen)、凱布宗 (Kebuzone)、克特普芬(Ketoprofen)' 酮咯酸(Ketorolac)、氣 諾昔康（Lornoxicam)、洛索洛芬（Loxoprofen)、羅美昔布 (Lumiracoxib)、水楊酸鎂（Magnesium salicylate)、甲氯芬那 酸(Meclofenamic acid)、甲芬那酸(Mefenamic acid)、美洛昔 15 康（Meloxicam)、安乃近(Metamizole)、甲基水揚酸(Methyl salicylate)、莫非布宗（Mofebutazone)、萘 丁美酮 (Nabumetone)、萘普生（Naproxen)、N-芳基鄰氨基苯甲酸 (N-Arylanthranilic acid)、奥沙美辛(Oxametacin)、奥沙普嗪 (Oxaprozin)、昔康（Oxicams)、經布宗（Oxyphenbutazone)、 20 帕瑞考昔（Parecoxib)、非那宗（Phenazone)、保泰松 (Phenylbutazone)、保泰松（Phenylbutazone)、°比羅西康 (Piroxicam)、°比洛芬(Pirprofen)、洛芬(profens)、丙谷美辛 (Proglumetacin)、°比嗤烧(Pyrazolidine)衍生物、羅非昔布 (Rofecoxib)、雙水楊醋（Salicyl salicylate)、水楊酿胺 217 200911826 (Salicylamide)、水楊酸（Salicylates)、磺砒 _ (Sulfinpyrazone)、舒林酸(Sulindac)、舒洛芬（Suprofen)、替 諾昔康（Tenoxicam)、嗟洛芬酸(Tiaprofenic acid)、托芬那I楚 (Tolfenamic acid)、托美 >丁（T〇lmetin)以及戊地昔布 5 (Valdecoxib)。抗生素包括：艾米康絲菌素(Amikacin)、氰 基糖苷（Aminoglycosides)、阿莫西林(Amoxicillin)、氨比西 林（Ampicillin)、安莎黴素（Ansamycins)、珅酌·胺 (Arsphenamine) ' 阿齊黴素（Azithromycin)、阿洛西林 (Azlocillin)、氨曲南（Aztreonam)、枯草菌素(Bacitracin)、 10 碳頭孢晞(Carbacephem)、碳青黴稀(Carbapenems)、卡苯尼 西林（Carbenicillin)、頭孢克洛（Cefaclor)、頭孢經氨苄 (Cefadroxil)、頭孢氨苄（Cefalexin)、頭孢°塞吩(Cefalothin)、 頭孢α塞α定（Cefalotin)、頭孢孟多（Cefamandole)、頭孢嗤淋 (Cefazolin)、頭孢地尼（Cefdinir)、頭孢托备（Cefditoren)、 15 頭孢°比將（Cefepime)、頭孢克將（Cefixime)、頭孢派酮 (Cefoperazone)、頭孢嘆肪（Cefotaxime)、頭孢西丁 (Cefoxitin)、頭孢泊膀(Cefpodoxime)、頭孢丙烯(Cefprozil)、 頭孢他啶（Ceftazidime)、頭孢布烯（Ceftibuten)、頭孢唑肟 (Ceftizoxime)、頭孢必普洛（Ceftobiprole)、頭孢曲松 2〇 (Ceftriaxone)、頭孢呋肟（Cefuroxime)、頭孢菌素 (Cephalosporins)、氣黴素（Chloramphenicol)、西司他丁 (Cilastatin)、環丙沙星（ciprofloxacin)、克拉徽素 (Clarithromycin)、克林達黴素（clindamycin)、氯唑西林 (Cloxacillin)、黏菌素（c〇listin)、磺胺甲基異惡唑 218 200911826 (Co-trimoxazole)、達福普汀（Dalfopristin)、地美環素 (Demeclocycline)、雙氣西林（Dicloxacillin)、地紅黴素 (Dirithromycin)、多利培南（Doripenem)、多西環素 (Doxycycline)、依諾沙星（Enoxacin)、爾他培南 5 (Ertapenem)、紅黴素（Erythromycin)、乙胺丁醇 (Ethambutol)、氟氯西林（Flucloxacillin)、碟黴素 (Fosfomycin)、D夫喃峻綱（Furazolidone)、夫西地酸(Fusidic acid)、加替沙星（Gatifloxacin)、格爾德黴素 (Geldanamycin)、見大黴素（Gentamicin)、（Glycopeptides)、 10 除莠黴素（Herbimycin)、亞胺培南（Imipenem)、異煙肼 (Isoniazid)、卡那黴素（Kanamycin)、左氧氟沙星 (Levofloxacin)、林可黴素（Lincomycin)、雷奈佐利 (Linezolid)、洛美沙星（Lomefloxacin)、氣礙頭孢 (Loracarbef)、大環内醋（Macrolides)、石黃胺米隆(Mafenide)、 15 美洛培南（Meropenem)、财甲氧西林（Meticillin)、甲确嗤 (Metronidazole)、美洛西林（Mezlocillin)、米諾環素 (Minocycline)、單環内酿胺（Monobactams)、莫西沙星 (Moxifloxacin)、莫匹羅星（Mupirocin)、萘夫西林 (Nafcillin)、新黴素(Neomycin)、奈替米星(Netilmicin)、〇夫 20 α南妥因（Nitrofurantoin)、諾氟沙星(Norfloxacin)、氧氟沙星 (Ofloxacin)、苯D圭西林（Oxacillin)、經四環黴素 (Oxytetracycline)、巴龍黴素（Paromomycin)、青黴素 (Penicillin)、青黴素(Penicillins)、旅拉西林(Piperacillin)、 平板黴素(Platensimycin)、多枯菌素B(Polymyxin B)、多肽 219 200911826 (Polypeptides)、百浪多息（Prontosil)、吡嗪醯胺 (Pyrazinamide)、喹諾酮（Quinolones)、奎奴普丁 (Quinupristin)、利福平(Rifampicin)、利福平（Rifa mpin)、 羅紅黴素(Roxithromycin)、大觀黴素（Spectinomycin)、鏈黴 5 素（Streptomycin)、磺胺乙醯（Sulfacetamide)、磺胺曱噻唑 (Sulfamethizole)、氨笨績胺（Sulfanilimide)、柳氮磺吡啶 (Sulfasalazine)、磺胺異噁唑（Sulfisoxazole)、磺胺 (Sulfonamides)、替考拉寧（Teicoplanin)、泰利黴素 (Telithromycin)、四環黴素（Tetracycline)、四環黴素 10 (Tetracyclines)、替卡西林（Ticarcillin)、梯尼達諾 (Tinidazole)、泰百黴素（Tobramycin)、甲氧 τ 0定 (Trimethoprim)、曱氧苄咬石黃胺甲異°惡°坐 (Trimethoprim-Sulfamethoxazole)、醋竹桃黴素 (Troleandomycin)、曲氟沙星（Trovafloxacin)，以及萬古黴素 15 (Vancomycin)。活性劑也包括：酿固酮(Aldosterone)、倍氯 米松(Beclometasone)、倍他米松(Betamethasone)、皮質類固 醇、可體松（Cortisol)、乙酸可體松（Cortisone acetate)、乙 酸去氧皮質酮(Deoxycorticosterone acetate)、醋酸地塞米松 (Dexamethasone)、醋酸氟氫可體松（IHudiOCortisone 20 acetate)、糖皮質激素、氫化可體松(Hydrocortisone)、甲潑 尼松龍（Methylprednisolone)、潑尼松龍（Prednisolone)、潑 尼松 （Prednisone)、類固醇，以及曲安西龍 (Triamcinolone)。也預期到此等活性劑之任何合適的組合。 220 200911826 -“藥學賦卿或是“藥學上可接$的賦形劑” 是-載劑，通常是—液體，其中配方一活性治療劑。於本 發明的一個實施例中，活性治療劑係為本文中說明的一人 類化抗體，或其之一或多個片段。賦形劑通常不提供任何 5的藥學活性給調配物，雖然其可以提供化學及/或生物的 安定性，以及釋放特性。例示性調配物可以，舉例而言： 於 Remington’s Pharmaceutical Sciences, 19th Ed Grennaro A.，Ed·，1995中找到，其係併入以作為參考資料。 當於本文中使用，“藥學上可接受的載劑，，或是‘‘賦形 10 劑”包括任何以及全部的生理上相容的溶劑、分散媒介、塗 層' 抗細菌劑和抗真菌劑、等張劑和吸收延遲劑。於一實 施例中，載劑係合適於非腸胃的投藥。任擇地，載劑可以 合適於靜脈内的、腹膜内的、肌肉内的，或是舌下的投藥。 藥學上可接受的載劑包括：無菌的水溶液或分散液以及用 15 於即席的製備無菌的可注射的溶液或是分散液之無菌的粉 末。使用用於藥學上活性的物質之此等媒介和製劑係本技 藝中所熟知的。除了在範圍内之與活性化合物不相容的任 何的慣用的媒介和製劑之外，其等於本發明的藥學組成物 之用途係預期到的。補充性活性化合物也能併入至組成物 20 之中。 藥學組成物的典型地必須於製造和儲存的條件之下 是無菌且安定的。本發明係預期以凍乾的形式存在之藥學 組成物。組成物可以予以配方為一溶液、微乳劑、脂質體， 或是合適於高的藥物濃度之其他的次序的結構。載劑可以 221 200911826 是一溶劑或是分散媒介，其含有，舉例而言：水、乙醇、 多元醇(舉例而言：甘油、丙二醇，和液態聚乙二醇），以及 其等之合適的混合物。本發明進一步預期一安定劑的内含 物於藥學組成物内。恰當的流動性可以藉由，舉例而言： 5 使用—塗層，如：卵磷脂，藉由於分散液的情況下維持所 需要的粗子大小’以及藉由使用界面活性劑來維持。 於許多情況下，於組成物中較佳包括等張劑，舉例 而言：糖、多元醇，如：甘露糖醇、山梨糖醇，或是氯化 鈉。包括於組成物中的一延遲吸收的製劑，舉例而言：單 10 硬脂酸鹽和明膠，可促使可注射的組成物之延長的吸收。 而且，鹼性多肽可以配方於一定時釋放調配物内，舉例而 言：於一包括一緩慢釋放聚合物的組成物中。活性化合物 可以用防止化合物不被快速釋放的载劑予以製備，如：一 控制釋放調配物，包括：植入物和微膠囊化遞送系統。能 15使用生物可降解的、生物相容的聚合物，如：乙烯醋酸乙 稀知、聚酸酐、聚乙醇酸(p〇lyglyc〇lic acid)、膠原蛋白、 聚原酸酯、聚乳酸以及聚乳酸、聚乙醇酸共聚物(pLG)。許 少製借此等調配物的方法係本技藝中具有技術的那些人所 知道的。 20 …關於各個詳述的實施例’化合物能藉由種種的劑量 形式予以投藥。本技藝中具有通常技術的人所知道的任何 生物上可接受的劑量形式，以及其等之組合係預期到的。 此等劑量形式之實例包括，沒有限制：可重構的粉末、驰 劑、液體、溶液、懸浮液、乳劑、粉末、顆粒、粒子、微 222 200911826 ；： 可刀散的顆粒、膠囊（cachet)、吸入劑、氣溶膠(aerosol) 吸入劑、PJt y 、巧、粒子吸入劑、植入物、補給植入物（depot plant)、可注射物（包括：皮下的、肌肉内的、靜脈内的， 以及皮内的）、注人物，以及其等之組合。 g 本發明的種種作例證的實施例之上述的說明不意欲 ^底的或是要限制本發明至揭示的明確的形式。縱然本 :务月之特疋的實施例和實例在本文中為了闡釋的目的而說 月各種的均等修飾是可以落在本發明的範脅之内的，如 相關技蔽Φ ίΛ 10 15 20 發明之'的那些熟悉技術者會承認的。本文中提供的本 二目：教不可以應用到除了以上所說明的實例之外的其他 的變化上的詳細綱，本發明可叫到此等和其他 不應解釋:言’於下列㈣請專利範圍中，使用術語 … 成限制本發明至說明書和巾 特定的申明專利範圍中揭露的 的貫化例。於是，本發明不被 發明的範疇係〜入 佝不所限制，而是本 糸元全地由下列的巾請專利範❹以決定。 伞發明可以以除了於前述的說 說明的方式予。杳 明說明和實施例之中特別 述教示是可纟t 的修飾和變化按照上 疋了此的以及，因而，係落在 的範疇之内。 寸隨的申請專利範圍 有關用於獲得抗原專-的B細胞的 法之某些教示係揭露於·6年5月19的—純株族群的方 專利申請案案號_01，412之中，其之:提申的美國臨時 併入本文中以作為參考資料。、之揭示係以其之全體 223 200911826 有關利用配對的勝任酵母生產抗體或其等之片段與 對應的方法之某些教示係揭露於2〇〇6年5月8曰提申的美 國專利申請案案號11/429,〇53(美國專利申請案早期公開案 號US2006/0270045)之中，其之揭示係以其之全體併入本文 5 中以作為參考資料。 有關於抗·ΤΝΡ_α抗體、彻制勝任酵母生產抗 體或其等之片段的方法與對應的方法之某些教示係揭露於 2007年5月21日提申的美國臨時專利申請案案號 60/924,551之中’其之揭示係以其之全體併人本文中以作 1〇 為參考資料。 某些TNF.a抗體多核㈣與多肽係揭露於伴隨此專 利申請案提申的序列表之中的，以及序列表之揭示係以其 之全體併入本文中以作為參考資料。 於本發明的背景、詳細說明，以及實施例中所引述 15的各文件（包括：專利、專利申請案、期刊文章、摘要、手 冊、書藉’或是其他的揭示)之整個的揭示仙其等之全體 併入本文中以作為參考資料。 提出下列㈣關以便於提供本技藝巾具有通常技 術的那二人如何做以及如何使用本發明之完全的揭示和說 月、及不心欲限制視為本發明的範缚。已經努力破保有 關於使用的數目（例如：數量、溫度、濃度等等）之正確性， 但應允許—些的實驗錯誤和誤差。除非用別的方法指出， 刀疋1^ 4里相部分’分子量是平均分子量，溫度是攝 氏度數；以及壓力是在或是接近大氣的。 224 200911826 實施例 實施例1經濃化的抗肩專—性B細跑抗ϋ培養物的生產 抗體組係藉由免疫慣例的抗體宿主動物以開發對一 有興趣的標的抗原之天然的免疫反應而衍生得到。典型 地，用於免疫作用的宿主是一兔子或其他的宿主 ，其會使 10 用一相似的成熟方法生產抗體以及提供會生產可相比的多 樣性之抗體，例如抗原歧位多樣性，的抗原專—性β細 胞的一族群。起始的抗原免疫相可以使用完全佛蘭氏佐 _)予以進行，以及隨後的提升係用不完全佛蘭氏佐劑 實現。在免疫作狀後大約5〇·6()天，較佳地在第55天， 測試抗體力價，以及起始抗體篩選的（ABS)程序設若適 當的力價賊立。ABS起始的二個騎要件是？株血清内 的有效能的抗原辨識以及改良功能的活性。 15
在陽性抗體力價建㈣時候’犧牲動物以及單離B 細胞的來源。此等來源包括：脾臟、淋巴結、骨髓，以及 周邊血液單核細胞(PBMCS)。|-細胞懸浮液係產生，以 及清洗細胞液以使得可低溫長_存。細胞接而典型 地被冷;東。 20 為了起始抗Μ識過程’小部分的冷柬細胞懸浮液 予以解来、洗，以及放置於組織培養基之内。此等懸浮液 接而與-用來產生動物的免疫反應之生物素化形式的抗原 混合，以及利用美天旎磁珠細胞篩選方法學回收抗原專二 性細胞。特定的濃化係利用鏈黴抗生物素蛋白小珠子予、 225 200911826 進行。經濃化的族群係予以回 性B細胞的單離。 收以及進行下—階段的專— 實施例2純株的、含有抗原專一性B紅胞_典養物的生產 依據實施例1生產的經濃化的B細胞接而以每井不 同的細胞密度予以平板培養於96井微滴定平板内。_ ^ 10 15 言，此係以每井50、100、250，或是500個細胞，每組\而〇 個平板。培養基補充以4%經活化的兔τ細胞條件培養烏 與50K冷凍幅射的EL4B餵養細胞。此等培養物保持未成 干擾歷時5-7天，屆時收集含有經分泌的抗體的懸浮液2 及於一分別的分析設定中評估標的性質。剩下的懸浮液保 持完整’以及平板係冷凍在-70°C下。於此等的條件之下， 培養方法典型地導致含有包含抗原專一的B細胞的一純株 方矢群之混合的細胞族群的井’也就是，一單一的井cr合人 有對所欲的抗原專一的一單一單株抗體。 實施例3·筛選所欲的抗原專一性及/或功能性質之單株抗 «的抗髏懸浮液 含有抗體的懸浮液最初係利用ELISA方法予以篩 20選抗原辨識性，該等懸浮液係衍生自含有依據實施例2生 產的一純株的抗原專一性B細胞族群之井。此包括選擇性 抗原的固定化(例如，藉由鏈黴抗生物素蛋白塗覆的平板之 生物素化的抗原捕捉法）、非專一性抗原的平板塗層，或任 擇地，經由一抗原聚集的策略(例如，選擇性抗原捕捉法接 226 200911826 著結合搭檔的加入以產生一異構的蛋白抗原複合體）。抗原 陽性井的懸浮液接而選擇性地於一嚴格地取決於配體的改 良功能分析法中測試。一個此實例是一重建抗原配體與重 組受體蛋白之天然的交互作用之活體外的蛋白-蛋白交互 5 作用分析。任擇地，使用一配體依賴性的以及容易監測的 細胞為基礎的反應（例如，增殖反應）。顯示出顯著的抗原辨 識和效力的懸浮液視為一陽性井。衍生自原始的陽性井的 細胞接而轉換至抗體回收的階段。 10 實施例4 :回收具所欲的抗原專一性之單一的、生產^ 醴的B細胞尨 自含有抗原專一的B細胞的一純株族群(依據實施 例2或3生產的）之井單離一些數目的細胞，該B細胞八必 一單一的抗體序列。經單離的細胞接而予以分析以單離， 15 單一的、抗體分泌細胞。Dynal鏈黴抗生物素蛋白小珠子 係於緩衝培養基之下塗覆以生物素化的標的抗原以製備與 細胞存活率相容的含有抗原的微珠。接著，裝載抗原、 珠、來自陽性井之生產抗體的細胞，以及—螢光異硫& 2 鹽（FITC)-標不的抗-宿主H&LIgG抗體(如提及的宿主。 以是任何的哺乳動物宿主，例如：兔、小鼠、大鼠等百可 在37 C下一起培育。此混合物接而再次以吸量管吸出八' 部分至i破片上以使得各分裝部分具有平均上 的、生產抗體的B細胞。抗原專一的'抗體分泌細胞t 經螢光顯微鏡偵測。經分泌的抗體係由於結合的抗原 227 200911826 以局部地集中至鄰近的小珠子上以及提供以強的榮光訊號 為基礎的局部化資訊。抗體分泌細胞係透過鄰接分泌細胞 形成的抗體抗原複合體的FITC偵測而予以辨識。於此複合 體的中心找到的單一的細胞接而利用一顯微操作器予以回 5 收。細胞係於一微量離心管PCR管内急速冷;東供儲存在 -80°C下直到要開始抗體序列的回收為止。 實施例5 : 來自抗原專一性B細胞的抗艟序列之單離 抗體序列係利用一組合的RT-PCR為主的方法、自 10 依據實施例4生產的一單一的經單離的B細胞或是一自依 據實施例2獲得的純株的B細胞族群單離的一抗原專_性 B-細胞予以回收。引子係予以設計以黏合標的免疫球蛋白 基因（重和輕）’如：兔免疫球蛋白序列，的守恒與固定區以 及2步驟巢式PCR回收的步驟係用以獲得抗體序列。來自 15 各井的擴增產物係予以分析回收和大小的完整性。形成的 片段接而用AIuI予以消化以指紋鑑別序列單株性。同—的 序列在其等之電泳分析中顯示出共同的分裂模式。值得注 目地，此證實細胞單株性之共同的分裂模式廣泛地被觀察 到，即使於起初平板培養高至1〇〇〇個細胞/井的井中。原 20 始的重與輕鏈擴增產物片段接而用Hindlll和Xhol或是 Hindlll和BsiWI予以限制酶消化以製備供選殖的DNa之 各別片段。形成的消化物接而連接至一表現載體内以及轉 形至供質體繁殖和生產的細菌内。選擇菌株用於定序列特 徵。 228 200911826 實施例6:所欲的抗原專一性及/或功能性質之單株抗髋的 重纽的生產 各井的含有一單一單株抗體的正確的全長的抗體序 列係予以建立以及miniprep DNA係藉由使用Qiagen固相 5 方法學予以製備。此DNA接而用來轉染哺乳動物細胞以 生產重組型全長的抗體。粗製的抗體產物係予以測試抗原 辨識和功能性質以確認原始的特徵存在於重組型抗體蛋白 中。適當時，完成大規模的暫時性哺乳動物轉染，以及抗 體係經由蛋白A親合性層析法予以純化。Kd以及IC50係 10 於—效價分析中使用標準的方法（例如，Biacore)予以評估。 實施例7 : 結合HuTNF-α的抗體之製備 精由使用本文中說明的抗體筛選的操作程序，能產 生顯現出有效能的TNF-α功能性拮抗之大量的抗體組。該 15 等抗體闡明種種的TNF-α抗原決定位以及因此可以提供對 準先前辨識的TNF-α抗原決定位之抗體，如：瑞米卡⑧（英 利昔單抗），之有用的選擇物或是附屬物。 —種師選的方法能用來辨識會結合任擇的TNF-a抗 原決定位，同時保留顯著的功能性拮抗之抗體。在初步的 20 抗原辨識篩選之後，陽性BCC井係測試對於TNF_a之功能 性拮抗以及抗原決定位競爭，例如，競爭英利昔單抗。獨 特的抗原決定位辨識係藉由F0rteBi0 〇ctet抗體_TNF a的 結合競爭研究來建立。參見第i圖。顯示出功能活性以及 缺少競爭的BCC井繼續進行，以及此等井中存在的抗體之 229 200911826 編碼序列係重新獲得。經回收的序列之多數顯示出原始的 標的特徵：有效能的抗原辨識、功能性拮抗，以及不同的 抗原決定位辨識。因此，形成的大量抗體係建立與有效能 的功能性拮抗有關連的多重的新穎的抗原決定位區域。 5 免疫策略： 用TNF-a(R&D#210-TA)免疫兔子。免疫作用係由 以下所構成·配於完全佛蘭氏佐劑（CFA) (Sigma)内的1〇〇 Mg之第一次皮下（sc)注射’接著，各配於不完全佛蘭氏佐 劑（IFA) (Sigma)内的50 pg之2次提升，相隔2週。於第 10 55天給動物抽血，以及血清力價係藉由EUSA(抗原辨識) 以及藉由使用WEHI細胞株之非放射性的增殖分析 (Promega)予以決定。 抗體篩選的力價評估 抗原辨識係藉由用配於磷酸鹽緩衝食鹽水(pBS, 15 Hyd(me)中的1 Kg/ml 的 huTNF-a (50 μΐ/井)塗覆 Immul〇n 4 個平板(Thermo)在4°C下隔夜予以決定。於分析那天，用 PBS /Tween 20清洗平板3次（pBST藥片，⑽減咖）。 平板接而用配於PBS中之2〇〇 μ1/井的〇 5%魚皮明膠卿，
Slg_在37°C下予以封阻歷時3〇分鐘。移去封阻溶液，’ 20以及墨點分析平板11遍的起始_倍數 均於FSG 50 μΐ/井中進行），接著1:1〇稀釋倍數橫越平板(第 12行是空白的作為背景對照）製作金清樣本(抽血和抽血 前）。平板在W下培育歷時3〇分鐘。用ρΒδ/τ_2〇 清洗平板3次。加入稀釋1:5〇〇〇的山羊抗兔fc撕㈣叫 230 200911826 至全部的井（50 μΐ/井）中，以及平板在37°C下培育歷時3〇 分鐘。如以上所說明的方式清洗平板。加入50 μΐ/井的 TMB-Stable stop (Fitzgerald Industries)至平板，以及允$ 顏色顯影，通常歷時3至5分鐘。用50 μΐ/井的0·5 iviUci 5 停止顯影反應。平板在450 nm讀取。光密度(0D)相對稀釋 倍數係利用Graph Pad Prizm軟體予以繪圖，以及決定力 價。 功能力價評估 樣本的功能活性係藉由一 TNF-α刺激的WEHI細 10 胞毒殺分析予以決定。WEHI細胞例行地於以上所說明的 沒有huIL-6的培養基中供養。於分析那天，細胞存活率係 藉由錐藍(trypan blue)決定。細胞係以1E06細胞/ml的數 量重新懸浮以及以50 μΐ/井(調整體積至許多樣本和複製品） 平板培養於無菌的平底的96-井組織培養盤中。平板係在 15 37°C下予以培育歷時2 h。 分別地，於一圓底的96-井平板，加入以1:1〇〇稀釋 (in the所說明的培養基）的血清樣本，接著以1:1〇稀釋倍 數橫越平板（第2至1〇行，第η行只有培養基作為TNF-a 對照）’以50 μΐ/井5重複的方式（第b至F列，第G列只有 2〇 培養基作為背景對照）。含有最終的EC50(各批次的濃度係 先前決定的）的4倍濃度之TNF-a的50 μΐ/井的培養基以及 1 pg/ml的放線菌素〇係予以加入至全部的的樣本井，除了 第F列之外。平板在37。(：下予以培育歷時1 h。 231 200911826 在1 h時，50 μΐ/井的血清/Ag複合體和對照轉移至 含有固定密度之50 μΐ/井的反應細胞之平底的、96_井平底 的平板（最終體積：100 μΐ/井）以及在37°C下予以培育歷時 24 h。（用200 μΐ/井的培養基填滿第1和12行以及第八和 5 Η列以預防蒸發以及發生邊緣效應。） 在24 h時，依照製造者的操作程序加入2〇 井的
CellTiter96(Promega)試劑至全部的測試井，以及平板係在 37°C下培育歷時2 h。在2 h之後’輕輕地搖動平板以允許 測試井内的均勻性。平板在490 nm波長讀取。〇d相對稀 10 釋係利用Graph Pad Prizm (使用非線形的S形的劑量/反應 曲線）予以繪圖，以及決定功能力價。 組織收穫 兔脾臟、淋巴結，以及全血係予以收穫、處理，以 及予以冷凍如下： 15 脾臟和淋巴結係藉由解離組織以及用一 20 cc針筒 的活塞予以推擠通過70 μιη的無菌的金屬格網(Fisher)而加 工成一單一細胞懸浮液。細胞係被收集至以上所說明的沒 有huIL-6，但是具有低葡萄糖的改良的RPMI培養基内。 細胞係藉由離心予以清洗2次。在最後的清洗後，細胞密 20 度係藉由錐藍予以決定。細胞係以1500 rpm離心歷時10 分鐘；丟棄懸浮液。令細胞重新懸浮於配於FBS(Hyclone) 中的適當體積的10%二甲亞颯(DMSO, Sigma)内以及以1 ml/小玻璃瓶予以分配。小玻璃瓶接而在放置於一液態氮 (LN2)槽内供長期儲存之前係儲存於-70°C下歷時24 h。 232 200911826 周邊血液單核細胞(PBMCs)係藉由混合全血與等份 量的以上所說明的無FBS之低葡萄糖培養基而予以單離。 35 ml的全血混合物小心地層疊於8 ml的兔淋巴細胞分離 液(Lympholyte Rabbit) (Cedarlane)至 45 mi 圓錐管(Corning) 5 内以及以2500 rpm在室溫下離心30分鐘無煞車。在離心 之後的’ PBMC層小心地利用一玻璃的巴斯德吸管（pasteur pipette) (VWR)予以移動，組合，以及放置於一乾淨的5〇 ml 小玻璃瓶中。細胞係用以上所說明的改良的培養基、藉由 在室溫下以1500 rpm離心歷時1 〇分鐘予以清洗2次，以 10 及細胞密度係藉由錐藍染色予以決定。在最後的清洗之 後’細胞予以重新懸浮於適當體積的10% DMSO/FBS培養 基内以及如以上所說明的予以冷凍。 B細胞培養物（BCC) 在建立B細胞培養物的那天’解凍pBMC、脾臟細 15 胞，或是淋巴結小玻璃瓶供使用。小玻璃瓶係自LN2槽移 出以及放置於37°C水浴内直到解凍為止。小玻璃瓶的内容 物被轉移至15 ml圓錐離心管（Corning)以及緩慢地加入 10 ml的以上所說明的改良的RPMI至管子中。細胞係以 1.5K rpm離心歷時5分鐘，以及丟棄懸浮液。細胞被重新 2〇 懸浮於1〇 ml的新鮮的培養基。細胞密度和存活率係藉由 錐藍予以決定。細胞係再次予以清洗以及以1E07細胞/8〇 ul培養基予以重新懸浮。以3 ug/mL的最終濃度添加生物 素化的huTNF-α至細胞懸浮液以及在4。(：下予以培育歷時 30分鐘。未結合的生物素化的huTNF-a係用2次10 mi的 233 200911826 無Ca/Mg的磷酸鹽緩衝食鹽水(PBF)、2 mM乙二胺四乙 酸（EDTA)、0.5%小牛血清白蛋白（BSA) (Sigma-無生物 素），的清洗予以移除。在第二次清洗之後，細胞係以1E07 5 10 15 20 細胞/80 ul PBF予以重新懸浮。添加20 μΐ的MACS®鏈黴 抗生物素蛋白小珠子(Milteni)/10E7細胞至細胞懸浮液。細 胞係在4°C下培育歷時15分鐘。細胞係用2 ml的PBF/10E7 細胞予以清洗1次。在清洗之後，細胞係以1E08細胞/500 μΐ PBF予以重新懸浮以及放置在旁邊。一 MACS® MS管 柱(Milteni)係用500 ml的PBF於一磁性臺（Milteni)上予以 預沖洗。細胞懸浮液係經由一預濾器而施用至管柱，以及 收集未結合的部分。管柱係用15 ml的PBF緩衝液予以清 洗。自磁性臺移動管柱以及放置於一乾淨' 無菌的5ml聚 丙烯Falc〇n管子上。加入1 ml的PBF緩衝液至管柱的 頂4，以及收集陽性篩選的細胞。陽性和陰性細胞部分的 產1和存活率係藉由錐藍染色予以決定。陽性篩選係產出 開始細胞濃度的1%的平均數。 一試驗性的細胞篩選係予以建立以提供培養物的播 種位準之個1Q_平板組(總共3G個平板)係被以5〇、 1〇〇和200個經濃化的B細胞/井的量予以播種。此外， 各井5〇K細胞/井的經幅射的EL-4.B5細胞（5,000
Rads)以及最終體積250 μΐ/井之配於高葡萄糖的改良的 〇 暴中的適當位準的Τ細胞懸浮液（範圍落在 1 5/〇取决於製備）。培養物係於 4% C02中、37〇c下予以 培育歷時5至7工 ’天’以及測試兔的IgG的生產。 234 200911826 抗原辨識薛$ 抗原辨識篩選係如以上所說明的予以執行作為單 點使用的ELISA編排形式係如以上所說明的，除了來自 B，，·田胞養物(BCC)井(全部的％個平板)之％ ^懸浮液係 5使用作為抗體的來源之外。條件培養基係轉移至塗覆抗原 的平板。在陽性井經辨識之後，移動懸浮液且轉移至至96_ 井的主要平板。原始的培養平板接而予以冷;東其係藉由 移動王。P的懸浮液，除了 4〇 μ1/井之外，以及加入6〇 井 的配於FBS中的16〇/〇 DMSO。用紙巾裹覆平板以緩慢的冷 10 凍以及放置於-70。〇 功能活性的I争撰 功能活性的篩選係藉由WEHI細胞毒殺分析予以執 行。來自主要的平板之懸浮液係於τ·_α刺激的WEHi細 胞毒殺分析（如以上所說明的）内予以測試作為單點。懸浮液 15 係依據下列的模板予以測試作為純淨的： 第F列是只有培養基作為背景對照（5〇μ1/井）。 第G列是培養基+ TNF_a作為陽性細胞毒殺對照。 第B-E列以及第2-11行是來自BCC的井(4〇 μΐ/井， 單點）。 20 40 μ1的ΤΝΡ·α +放線菌素D係以經測定的EC50 之4倍的濃度加入至全部的井（除了培養基列之外）供分 析。在1 h培育之後，Ab/Ag複合體係予以轉移至一 TC處 理的96-井平底的平板。添加20 μΐ的細胞懸浮液(WEHI以 1E06細胞/ml)至全部的井（最終體積：1〇〇 μ1/井），以及平 235 200911826 板係在37°C下予以培育歷時24 h。在24 h時，依據製造 者的指示加入CellTiter96試劑。平板係在490 nm波長讀 取，自井減去背景，以及轉換OD值成抑制％。 重組型抗體之二級功能活性分析法：用huTNF-α處理的 5 HUVEC細胞之TT,(S的夹規的封阻 人類臍帶靜脈内皮細胞（HUVECs)例行地於内皮生 長培養基（EGM)的培養基以及適當的HUVEC補充品 (Cambrex)予以供養。於分析那天，HUVEC存活率係藉由 錐藍予以決定。細胞係以5E05/ml於用於分析法必須的適 10 當體積的培養基内重新懸浮（100 μΐ/井）。細胞係在96-井平 底的培養盤之中間的井内予以平板培養，以及加入200 μΐ 的培養基至全部的外部周圍井以預防蒸發。平板係在370C 下予以培育歷時24 h。 在24 h時，以所欲的最終濃度之4倍於EGM内做 15 出適當的抗體稀釋。（開始抗體的濃度是1 pg/ml ; 1:3稀 釋係予以執行橫越平板，除了最後列之外。）加入配於EGM 内之相同體積的rhuTNF-a (4倍所欲的最終濃度)係予以至 井中。平板係在37。(：下予以培育歷時1 h以形成抗體/抗原 的複合體。在1 h時，來自HUVEC培養盤之50 μΐ的培養 20 基係予以移動且吾棄。加入50 μΐ Ab-Ag的混合物，以及平 板係在37°C下予以培育歷時48 h。包括標準的陽性和陰性 對照：只有huTNF-a (第11行）、只有培養基（無Ab/無TNF) 作為背景的生長（第G列）。 236 200911826 在4 8h時’條件培養基IL-6的位準係藉由ELISA 予以評估。一 Immulon平板係以50 μΐ/井用1 pg/mi山羊抗 -huIL-6予以塗覆’在4°C下隔夜，或是室溫歷時1小時。 平板係於平板洗滌器内以PBS + 0.5% Tween 20予以清洗 5 (2〇〇 μΐ/井；3次）。平板係用200 μΐ/井FSG在室溫下予以 封阻歷時1小時。吸出封阻溶液，以及墨點分析平板。 huIL-6標準設定於第八和β列（二重複），以1 μ§/πι1開始 且予以稀釋1:3橫越平板(全部的稀釋於FSG做出）留下第 12行作為空白。加入來自HUVEC培養物的樣本至低於標 10 準曲線的井内以及在室溫下予以培育歷時1小時、吸出且 重複清洗。1 pg/ml ALD515v5 (抗-huIL-6)係以50 μΐ/井加入 至平板以及在室溫下予以培育歷時1小時。重複清洗的操 作程序。1:5000稀釋之二級抗人類IgGFcHRp係以5〇μ1/ 井予以加入以及在室溫下予以培育歷時45分鐘。重複清 15洗。分析係用5〇叫井3,3，，5,5,四甲基聯苯胺(ΤΜΒ)予以顯 衫歷時最少5分4里。移除未結合的二級抗體以及重複清洗。 數據係使用Graph Pad Prizm予以分析。 B細胞回收 含有有興趣的井之平板係自_7〇〇c移出以及來自 20各井的細胞係用5_200 Μ的清洗的培養基/井予以回收。將 洗務水聚集在-1.5 ml無菌的離心管中，以及以簡— 歷時2分鐘造粒細胞。 令管子重《轉’以及小心地移動懸浮液。 細胞係予以重新懸浮於100μ1/管的培養基内。生物 237 200911826 素化的TNF-α塗覆的鏈黴抗生物素蛋白M28〇 (Invitrogen)以及以1:H)0稀釋於培養基内的16μι的山羊抗 兔H&L IgG-FITC係予以添加至細胞懸浮液。 2〇 μΐ的細胞/小珠子/FITC懸浮液係予以移動，以及 5 於一先前用slgmacote (sigma)和一不透水的屏障處理的載 玻片（Corning)上製備5 μ1小滴（大概35至4〇小滴/載玻 片）。添加白蠟油（JT Baker)以浸沒小滴，以及載玻片係在黑 暗中4% C02及370C下予以培育歷時90分鐘。 生產抗體的專一性B細胞能藉由圍繞其等的螢光環 10予以辨識’其係由於抗體的分泌、、结合小珠子的生物素化 的抗原之辨識，以及隨後藉由螢光-IgG偵測試劑之偵測。 一旦辨識出一有興趣的細胞，於螢光環的中心之細胞係透 過一顯微操作器（微量離心管）予以回收。將合成和輸出抗體 的單一細胞轉移至—250 μΐ微量離心管内以及放置於乾冰 15内在回收全部有興趣的細胞之後，將此等轉移至-70°C供 長期儲存。 實施例8:競爭性結合實驗 為了展示出於此實驗中提出的抗體對TNF-α之結合 2〇本質相對於瑞米卡⑧顯示出獨特的抗原決定位辨識，一空間 °的J刀析法係於一 Octet QK儀器（ForteBio ; Menlo ’ ）使用生物膜層干涉技術(biolayer interferometry) 發展出。缺少結合競爭性建立了 TNF-a_L之不同的結合抗 原決定位。 238 200911826 簡言之，一生物素化的瑞米卡®的樣本(Cent〇c〇r， Malvern PA，依據製造者的建議利用產品號碼21338之 Pierce EZ-link確酸-NHS-LC-LC-生物素予以生物素化）係 予以使用來固定化 TNF-α (R&D systems, Minneapolis，MN, 5 產品號碼210-TA-CF)至一組鏈黴抗生物素蛋白生物感測器 (產品號碼 18-502, ForteBio, Menlo Park，CA)。結合係藉由 訊號的增加予以測量。 為了確保TNF-α上之全部的瑞米卡結合位址是飽和 的’此等感測器用非生物素化的（未標示的）瑞米卡⑧予以進 10 —步培育。感測器接而於測試抗體存在之下予以培育，或 是用瑞米卡®予以培育作為一對照。用一測試抗體之訊號的 增加展示出瑞米卡®和討論中的抗體均能夠同時地結合 TNF-a以及因而瑞米卡®和測試抗體不競爭TNF上之相同 的地形空間。 15 第6A圖係提供對應於介於抗體Abl、Ab2、Ab3， 和Ab4以及一商業上可得的抗_TNF-a抗體瑞米卡®之間的 競爭性結合實驗的數據。 第6B圖係提供對應於介於抗體Ab5、Ab9以及一 商業上可得的抗-TNF-a抗體瑞米卡®之間的競爭性結合實 20 驗的數據。 第6C圖係提供對應於介於抗體Ab7、AM8以及一 商業上可得的抗-T N F - a抗體瑞米卡®之間的競爭性結合實 驗的數據。 239 200911826 第6D圖係提供對應於介於抗體aM2、Abl6、Abl9 以及一商業上可得的抗-TNF-α抗體瑞米卡®之間的競爭性 結合實驗的數據。 5 實施例9:抗原決定位繪圖 A.抗-TNF-α抗體 進行下列的抗原決定位繪圖的實驗以辨識抗 -TNF-α抗體Abl結合至TNF-α的抗原決定位。使用的 TNF-a序列(NCBI#P01375)是158個胺基酸長，其代表帶有 10 —加入的N端甲硫胺酸之V77直到L233。一包含此序列的 重疊長度12個胺基酸胜肽之49員的存庫是商業上合成的 以及共價地結合至一 PepSpots硝基纖維素膜(JPT Peptide technologies，Berlin, Germany)。墨點分析係依據製造者的 建議予以製備以及探測。 15 抗-TNF-α抗體係以1 pg/ml最終的稀釋予以使用， 以及HRP-結合的山羊抗人類η+L二級抗體（Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc.，West Grove，PA;產品號 碼109-035-088)係以1:1000稀釋予以使用。封阻步驟和抗 體培育係於配於 PBS/0.05% Tween 20 (Bio-Rad, Hercules, 20 CA ;零件號碼170-6531)之10%脫脂牛奶内執行。墨點係 使用ECL先進西方墨點法的偵測套組（GE Healthcare, Piscataway NJ，產品號碼RPN2135)予以顯影以及化學冷光 係利用一 CCD 照相機(Alphalnnotec，San Leandro, CA)予 以偵測。 240 200911826 抗-TNF-α抗體Abl之墨點的結果係呈現於第7(A) 圖中。墨點顯示出抗-TNF-α抗體Abl係結合至下列TNF-a 抗原決定位之上：ELRDNQLVV。 B.抗-TNF-α抗體/65 5 以上的抗-TNF-a抗體Abl執行的實驗係予以重複 用於抗-TNF-a抗體Ab5。抗-TNF-α抗體Ab5之墨點的結果 係呈現於第7(A)圖中。墨點顯示出抗-TNF-a抗體Ab5係結 合至下列TNF-a抗原決定位之上： VRSSSRTPSDKPVA。 10 實施例10:親合性常數決定 於此實驗中提及的某些抗-TNF-a抗體的結合動力 學係係於一 Octet QK 儀器（ForteBio ; Menlo Park, CA)使用 生物膜層干涉技術決定。生物素化的TNF-α (R&Dsystems 零件號碼210-TA，利用產品號碼21338之Pierce EZ-link磺 15 酸-NHS-LC-LC-生物素依據製造者的操作程序予以生物素 化）最初結合至一鏈黴抗生物素蛋白塗覆的生物感測器 (ForteBio, Menlo Park, CA 零件號碼 18-5006)上。TNF-α塗 覆的感測器接而以範圍落在8 nM至1 nM的濃度之抗 -TNF-a抗體予以培育。結合係以訊號的增加持續9〇〇秒的 20 期間予以監測。 自抗體稀釋移出且立即於稀釋液内培育的感測器係 予以監測一解離相1800秒的時間期間。為了此等研究，全 部的蛋白係利用ForteBio’s的樣本稀釋緩衝液(ForteBio, 241 200911826
Menlo Park，CA零件號碼18-5028)予以稀釋。動力學數據 分析係使用完全解離模式利用ForteBio軟體予以執行。 抗體Abl - Abl9之親合性常數判定係於以下表1内 提出： 5 表1
抗體 KD Abl 10 pM Ab2 10 pM Ab3 20-40 pM Ab4 10 pM Ab5 25-50 pM Ab6 10 pM Ab7 10 pM Ab8 10 pM Ab9 25-50 pM AblO 15-30 pM Abll 20 pM Abl2 10-25 pM Abl3 10-50 pM Abl4 10 pM Abl5 10 pM 242 200911826
Abl6 10 pM Abl7 10 pM Abl8 10 pM Abl9 60 pM 【圖式簡草說*明】 第1圖顯示出藉由抗體篩選的操作程序製備的大量 (' 的抗TNF_a抗體(抗體Ab卜Ab2、Ab3與Ab4)所辨識的種 5 種的獨特的抗原決定位。抗原決定位可變性係藉由抗體 -TNF-a的結合競爭研究予以確認(F〇rteBi〇 〇ctet)。瑞米卡 (Remicade)係使用作為一固著分子以捕捉TNF至表面以及 封阻該抗原決定位不進一步辨識。於此實驗中的抗體結合 不會分享為了結合目的之相同的抗原決定位； 1〇 第2圖顯示出介於一兔抗體變異輕和變異重序列和 同源的人類序列以及最後的人類化序列之間的變異輕和變 (- 異重序列之排列。架構區係經辨識的FR1-FR4。互補決定 ' - 區（CDRs)係經辨識為CDR1-CDR3。胺基酸殘基係如顯示的 • 予以編號。變異輕和變異重序列之起始的兔序列各別地被 15 稱為RbtVL和RbtVH。3個最相似的人類生殖抗體序列， 跨越架構1至架構3的末端，係排列於兔序列的下方。認 為是最相似於兔序列的人類序列係顯示在最前面。於此實 例中，輕鏈之最相似的序列是L12A以及重鏈之最相似的 序列是3-64-04。人類CDR3序列未顯示。最接近的人類架 20 構4序列係排列於兔架構4序列的下方。垂直的破折號表 243 200911826 不-殘基’其中兔殘基與在相同的位置的—或多個人類殘 基是相同的。粗體殘基指出在那個位置的人類殘基與在相 同的位置之兔殘基是相同的。變異輕和變異重序列之最後 的人類化序列各別地稱為VLh和VHh。晝底線的殘基指出 5殘基與在那個位置的域基是相同的，但是不同於3個經 排列的人類序列中之在那個位置的人類殘基； 第3圖展示出一例示性huTNF-a的操作程序之介於 生產的IgG之間的高的相關性和抗原專一性。2〇個井中有 18個顯示出具有抗原辨識之專一的IgG的相關性； 10 第4圖描繪抗-TNF-α抗體Abl之結合親合性； 第5圖比較Abl與瑞米卡®之中和結合親合性； 第6A圖係提供對應於抗體Abl, Ab2, Ab3，和Ab4 以及瑞米卡®’一商業上可得的抗-TNF-a抗體之間的競爭性 結合實驗的數據； 15 第6B圖係提供對應於抗體Ab5、Ab9以及瑞米卡 ®’一商業上可得的抗-TNF-a抗體之間的競爭性結合實驗的 數據； 第6C圖係提供對應於抗體Ab7、Abl8以及瑞米卡 ’一商業上可得的抗-TNF-a抗體之間的競爭性結合實驗的 2〇 數據； 第6D圖係提供對應於抗體Abl2、Abl6、Abl9以 及瑞米卡®，一商業上可得的抗-TNF-a抗體之間的競爭性結 合實驗的數據； 244 200911826 第7圖描繪抗-TNF-α抗體的Abl與Ab5之抗原決 定位繪圖。第7圖顯示出對應於線形胜肽存庫之抗體結合 的墨點。第7圖亦提供線形胜肽存庫内的胜肽之序列。 【主要元件符號說明】 (無） 245 200911826 序列表 <11〇>歐爾生凱提 杜薩班 詹生安娜 賈西亞李奥 歐加拉艾森 雷特漢約翰 <120> 抗 TNFct(ALPHA)的抗體 <130> 67858.701900 <150 60/924,551 <151> 2007-05—21 <160〉 421 <170> Patentln 版本 3.5 <210> 1 <211> 233 <212〉 PRT <213> 智人 <400> 1
Met Ser Thr Glu Ser Met lie Arg Asp Val Glu Leu Ala Glu Glu Ala 15 10 15
Leu Pro Lys Lys Thr Gly Gly Pro Gin Gly Ser Arg Arg Cys Leu Phe 20 25 30
Leu Ser Leu Phe Ser Phe Leu lie Val Ala Gly Ala Thr Thr Leu Phe 35 40 45 1 200911826 <212> PRT <213>智人 <400> 1
Met Ser Thr Glu Ser Met lie Arg Asp Val Glu Leu Ala Glu Glu Ala 15
Leu Pro Lys Lys Thr Gly Gly Pro Gin Gly Ser Arg Arg Cys Leu Phe 20 25 30
Leu Ser Leu Phe Ser Phe Leu lie Val Ala Gly Ala Thr Thr Leu Phe 35 40 45
Cys Leu Leu His Phe Gly Val lie Gly Pro Gin Arg Glu Glu Phe Pro 50 55 60 2 200911826
Arg Asp Leu Ser Leu lie Ser Pro Leu Ala Gin Ala Val Arg Ser Ser 65 70 75
Ser Arg Thr Pro Ser Asp Lys Pro Val Ala His Val Val Ala Asn Pro 85 90 95
Gin Ala Glu Gly Gin Leu Gin Trp Leu Asn Arg Arg Ala Asn Ala Leu 100 105 110
Leu Ala Asn Gly Val Glu Leu Arg Asp Asn Gin Leu Val Val Pro $er 115 120 125
Glu Gly Leu Tyr Leu lie Tyr Ser Gin Val Leu Phe Lys Gly Gin Gly 200911826 130 135 140
Cys Pro Ser Thr His Val Leu Leu Thr His Thr lie Ser Arg lie Ala 160 145 150 155
Val Ser Tyr Gin Thr Lys Val Asn Leu Leu Ser Ala lie Lys Ser Pro 165 170 175
Cys Gin Arg Glu Thr Pro Glu Gly Ala Glu Ala Lys Pro Trp Tyr Glu 180 185 190
Pro lie Tyr Leu Gly Gly Val Phe Gin Leu Glu Lys Gly Asp Arg Leu 195 200 205 4 200911826
Ser Ala Glu lie Asn Arg Pro Asp Tyr Leu Asp Phe Ala Glu Ser Gly 210 215 220
Gin Val Tyr Phe Gly lie lie Ala Leu 225 230 <210> 2 <211> 125 <212> PRT <213>六兔屬穴兔 <400> 2
Met Asp Thr Arg Ala Pro Thr Gin Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp 1 5 10 15 200911826
Leu Pro Gly Ala Arg Cys Ala Asp lie Val Met Thr Gin Thr Pro Ala 20 25 30
Ser Val Glu Ala Ala Val Gly Gly Thr Val Thr lie Lys Cys Gin Ala 35 40 45
Ser Gin Asn lie Arg Ser Trp Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly 50 55 60
Gin Pro Pro Lys Leu Leu lie Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly
80 65 70 75
Val Pro Ser Arg Phe Gin Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu 85 90 95 6 200911826
Thr lie lie Asp Leu Asp Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin 100 105 110
Ser Asn Tyr Gly Ser Asn Asp Asn Ser Tyr Gly Asn Gly 115 120 125
<210> 3 <211> 121 <212> PRT <213> 穴兔屬穴兔 <40Q> 3
Met Glu Thr Gly Leu Arg Trp Leu Leu Leu Val Ala Val Leu Lys Gly 15 200911826
Val Gin Cys Gin Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro 20 25 30
Gly Thr Pro Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser 35 40 45
Thr Tyr Asn Met Gly Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu 50 55 60
Tyr lie Gly Tyr Val Leu Gly Ser Gly lie Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp 80 65 70 75
Ala Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu 85 90 95 200911826
Glu lie Thr Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala 100 105 110
Arg Asp Ala Gly Gly Arg Ala Ser Leu 115 120
<210> 4 <211> 11 <212> PRT <213> 穴兔屬穴兔 <400> 4
Gin Ala Ser Gin Asn lie Arg Ser Trp Leu Ala 5 10 200911826 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> 穴兔屬穴兔 <400> 5
Gly Ala Ser Thr Leu Ala Ser 1 5 <210> 6 <211> 14 <212> PRT <213> 穴兔屬穴兔 <400> 6 10 200911826
Gin Ser Asn Tyr Gly Ser Asn Asp Asn Ser Tyr Gly Asn Gly 1 5 10 <210> 7 <211> 5 <212> PRT <213> 穴兔屬六兔 <400> 7
Thr Tyr Asn Met Gly 1 5 <210> 8 <211> 16 <212> PRT 11 200911826 <213> 穴兔屬穴兔 <400> 8
Tyr Val Leu Gly Ser Gly lie Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly 1 5 10 / <210> 9 <211> 8 <212> PRT <213>穴兔屬穴兔 /. · ν'. <400> 9
Asp Ala Gly Gly Arg Ala Ser Leu 1 15 5 12 200911826 <210> 10 <211> 375 <212> DNA <213>六兔屬穴兔 <400> 10 atggacacga gggcccccac tcagctgctg gggctcctac tgctctggct cccaggtgcc 60 agatgtgctg acattgtgat gacccagact ccagcctccg tggaggcagc tgtgggaggc 120 acagtcacca tcaagtgcca ggccagtcag aacattcgca gttggttagc ctggtatcag 180 cagaaaccag ggcagcctcc caagctcctg atctatggtg catccactct ggcatctggg 240 gtcccatcgc gattccaagg cagtggatct gggacagagt acactctcac catcatcgac 300 ctggactgtg ccgatgctgc cacttactac tgtcaaagca attatggtag taatgataat 360 agttatggta atggt 375 13 200911826 <210> 11 <211> 363 <212> DNA <213>穴兔屬穴兔 〆 <400> 11 atggagactg ggctgcgctg gcttctcctg gtcgctgtgc tcaaaggtgt ccagtgtcag 60 tcggtggagg agtccggggg tcgcctggtc acgcctggga cacccctgac actcacctgc 120 acagtctctg gattctccct cagtacctac aacatgggct gggtccgcca ggctccaggg 180 i , \ . aaggggctgg aatacatcgg atacgtgttg ggaagtggta tcacatacta cgcgagctgg 240 gcaaaaggcc gattcaccat ctccaaaacc tcgaccacgg tggatctgga gatcactagt 300 ccgacaaccg aggacacggc cacctatttc tgtgccagag atgctggtgg cagagcttcc 360 14 363 363200911826 ttg <210> 12 <211> 33 <212> DNA <213>穴兔屬穴兔 <400> 12 caggccagtc agaacattcg cagttggtta gcc 33 <210> 13 <211> 21 <212> DNA <213> 六兔屬穴兔 <400> 13 15 200911826 ggtgcatcca ctctggcatc t <210> 14 <211> 42 <212> DNA ^ <213> 穴兔屬穴兔 <400> 14 caaagcaatt atggtagtaa tgataatagt tatggtaatg gt <210> 1 ' 15 <211> • 15 ^ <212> DNA <213> 穴兔屬穴兔 <400> 15 acctacaaca tgggc 200911826 <210> 16 <211> 48 <212> DNA <213> 穴兔屬穴兔 <400> 16 tacgtgttgg gaagtggtat cacatactac gcgagctggg caaaaggc 48 <210> 17 <211> 24 <212> DNA <213> 穴兔屬穴兔 <400> 17 gatgctggtg gcagagcttc cttg 24 17 200911826 <210> 18 <211> 125 <212> PRT <213> 穴兔屬穴兔 <400> 18
Met Asp Thr Arg Ala Pro Thr Gin Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp 15 10 15
Leu Pro Gly Ala Arg Cys Ala Asp lie Val Met Thr Gin Thr Pro Ser 20 25 30
Ser Val Ser Glu Pro Val Arg Gly Thr Val Thr lie Lys Cys Gin Ala 35 40 45 18 200911826
Ser Gin Asn lie Tyr Ser Tyr Leu Ser Trp Tyr Gin Gin Ser Pro Gly 50 55 60
Gin Pro Pro Lys Leu Leu lie Tyr Lys Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly 80 65 70 75
Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu 85 90 95
Thr lie Ser Asp Leu Glu Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin 100 105 110
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Met Glu Thr Gly Leu Arg Trp Leu Leu Leu Val Ala Val Leu Lys Gly 15 10 15
Val Gin Cys Gin Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro 20 25 30
Gly Thr Pro Leu Thr Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Phe Ser Leu Asn 35 40 45 20 200911826
Asn Tyr Val Met Gly Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu 50 55 60
Phe lie Gly Tyr lie Ala Phe Gly lie Gly Pro Tyr Tyr Ala Ser Trp 80 65 70 75
Ala Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Ser Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp 85 90 95
Leu Lys Met Thr Ser Leu Thr Pro Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys 100 105 110
Ala Arg Gly Asp Tyr Ser Gly Asn Asp lie 21 200911826 115 120 <210> 20 <211> 11 <212> PRT <213> 六兔屬穴兔 <400> 20
Gin Ala Ser Gin Asn lie Tyr Ser Tyr Leu Ser 1 5 10 <210> 21 <211> 7 <212> PRT <213> 穴兔屬穴兔 22 200911826 <400> 21
Lys Ala Ser Thr Leu Ala Ser 1 5 <210> 22 <211> 14 <212> PRT <213> 穴兔屬Λ兔 <400> 22
Gin Ser Asn Tyr Gly Ser Asp Ser Asp Ser Phe Gly Asn Ala 1 5 10 <210> 23 <211> 5 23 200911826 <212> PRT <213>穴兔屬穴兔 <400> 23
Asn Tyr Val Met Gly 1 5 <210> 24 <211> 16 <212> PRT <213> 穴兔屬穴兔 <400> 24
Tyr lie Ala Phe Gly lie Gly Pro Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly 1 5 10 24 15 200911826 <210> 25 <211> 8 <212> PRT <213> 穴兔屬六兔 <400> 25
Gly Asp Tyr Ser Gly Asn Asp lie 1 5 <210> 26 <211> 375 <212> DNA <213>穴兔屬穴兔 <400> 26 60 atggacacga gggcccccac tcagctgctg gggctcctgc tgctctggct cccaggtgcc 25 200911826 agatgtgctg acattgtgat gacccagact ccatcctccg tgtctgaacc tgtgcgaggc 120 acagtcacca tcaagtgcca ggccagtcag aacatttaca gctacttgtc ctggtatcaa 180 cagagcccag ggcagcctcc caagctcctg atctacaagg catccactct ggcatctggg 240 gtcccatcgc ggttcaaagg cagtggatct gggacagatt tcactctcac catcagcgac 300 ctggagtgtg ccgatgctgc cacttactac tgtcaatcca attatggtag tgatagtgat 360 agttttggga atgct 375 <210> 27 <211> 366 <212> DNA <213> 穴兔屬穴兔 26 200911826 <400> 27 atggagactg ggctgcgctg gcttctcctg gtcgctgtgc tcaaaggtgt ccagtgtcag 60 tcggtggagg agtccggggg tcgcctggtc acgcctggga cacccctgac actcacctgc 120 tcagtctctg gattctccct caataattat gtaatgggct gggtccgcca ggctccaggg 180 aaggggctgg aattcatcgg atacattgct tttggtattg gcccatacta cgcgagctgg 240 gcgaaaggcc gattcaccat ctccagcacc tcgtcgacca cggtggatct gaaaatgacc 300 agtctgacac ccgaggacac ggccacctat ttctgtgcca gaggtgatta tagtggtaat 360
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<210> 30 <211> 42 <212> DNA <213>穴兔屬穴兔 200911826 <400> 30 caatccaatt atggtagtga tagtgatagt tttgggaatg ct 42 <210> 31 <211> 15 <212> DNA <213> 穴兔屬穴兔 15 <400> 31 aattatgtaa tgggc <210> 32 <211> 48 <212> DNA <213> 穴兔屬穴兔 29 200911826 <400> 32 tacattgctt ttggtattgg cccatactac gcgagctggg cgaaaggc 48 <210> 33 <211> 24 <212> DNA <213> 穴兔屬穴兔 <400> 33 ggtgattata gtggtaatga catt 24 <210> 34 <211> 122 <212> PRT <213>穴兔屬六兔 <400> 34 30 200911826
Met Asp Thr Arg Ala Pro Thr Gin Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp 1 5 10 15
Leu Pro Gly Ser Thr Phe Ala lie Lys Val Thr Gin Thr Pro Ala Ser 20 25 30
Val Ser Ala Ala Val Gly Gly Thr Val Ser lie Asn Cys Gin Ala Ser 35 40 45
Glu Asp lie Glu Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin 50 55 60
Pro Pro Lys Leu Leu Leu Tyr Asp Ala Ser Ala Leu Ala Ser Gly Val 80 65 70 75 31 200911826
Pro Ser Arg Phe Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr 85 90 95 lie Ser Gly Val Glu Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin 100 105 110
Gly Tyr Ser Tyr Ser Asn Val Asp Asn Ser 115 120 / . * i'' <210> 35 <211> 127 <212> PRT <213> 穴兔屬穴兔 32 200911826 <400> 35
Met Glu Thr Gly Leu Arg Trp Leu Leu Leu Val Ala Val Leu Lys Gly 15 10 15
Val Gin Cys Gin Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro 20 25 30
Gly Thr Pro Leu Thr Leu Thr Cys Lys Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser 35 40 45
Ser Tyr Asp Met Thr Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu 50 55 60
Trp lie Gly Tyr lie Trp Asn Asp Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Ser Trp 33 200911826 65 70 75
Ala Thr Gly Arg Phe Thr lie Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu 85 90 95
Lys lie Ala Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala 100 105 110
Arg Gly Pro Val Phe Ala Thr Thr Leu Gly Tyr Tyr Phe Thr lie 115 80 120 125
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Gin Gin Gly Tyr Ser Tyr Ser Asn Val Asp Asn Ser 1 5 10 <210> 39 <211> 5 <212> PRT i: - \ ； <213> 穴兔屬穴兔 <400> 39
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Met Asp Thr Arg Ala Pro Thr Gin Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp 15 10 15
Leu Thr Gly Ala Thr Phe Ala Ala Val Leu Thr Gin Thr Pro Ser Pro 20 25 30 43 200911826
Val Ser Ala Val Val Gly Gly Thr Val Ser lie Ser Cys Gin Ser Ser 35 40 45
Lys Arg Val Val Asn Ser Val Ala Leu Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro 50 55 60
Gly A「g Se「Pro Lys Leu Leu lie Tyr Phe Ala Se「Lys Leu Ala Se「 80 65 70 75 \ Ψ , Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gin Phe Thr 85 90 95
Leu Ala He Ser Asp Val Gin Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys 44 200911826 100 105 110
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Met Glu Thr Gly Leu Arg Trp Leu Leu Leu Val Ala Val Leu Lys Gly 15 10 15
Val Gin Cys Gin Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro 45 200911826 20 25 30
Gly Thr Pro Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Leu Ser Leu Ser 35 40 45
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Lys lie Thr Ser Pro Thr Thr Gly Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala 100 105 110
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Tyr lie Asp Ser Ser Gly Gly Thr Gly Tyr Ala Asn Trp Ala Arg Gly 1 5 10 / <210> 57 <211> 9 <212> PRT <213>穴兔屬穴兔 <400> 57 / - _ Gly Thr lie Thr Thr Gly Met Asn lie 产 1 5 <210> 58 <211> 369 50 200911826 <212> DNA <213>六兔屬穴兔 <400> 58 atggacacga gggcccccac tcagctgctg gggctcctgc tgctctggct cacaggtgcc 60 acatttgccg ccgtgctgac ccagactcca tctcccgtgt ctgcagttgt gggaggcaca 120 gtcagcatca gttgccagtc cagcaagaga gttgttaata gcgttgcctt atcctggtat 180 cagcagaaac cagggcgctc tcctaagctc ctgatctatt ttgcatccaa actggcatct 240 ggggtcccat cgcggttcaa aggcagtgga tctgggacac agttcactct cgccattagc 300 gacgtgcagt gtgacgatgc tgccacttac tactgtgcag gccattatac tgatagtggt 360 gatgatgct 369 51 200911826 <210> 59 <211> 366 <212> DNA <213>穴兔屬穴兔 <400> 59 f atggagactg ggctgcgctg gcttctcctg gtcgctgtgc tcaaaggtgt ccagtgtcag tcggtggagg agtccggggg tcgcctggtc acgcctggga cacccctgac actcacctgc acagtctctg gattatccct cagtaccgag acaattaact gggtccgcca ggctccaggg aagggactgg agtggatcgg atacattgat agttctggtg gcacaggcta cgcgaactgg k r gcgagaggcc gattcaccat ctccaaaacc tcgaccacgg tggatttgaa aatcaccagt ccgacaaccg gggacacggc cacctatttc tgtgccagag gaactattac tactggcatg aacatc 60 120 180 240 300 52 366 360 200911826 <210> 60 <211> 39 <212> DNA <213> 穴兔屬穴兔 <400> 60 cagtccagca agagagttgt taatagcgtt gccttatcc 39 <210> 61 <211> 21 <212> DNA <213> 穴兔屬穴兔 <400> 61 tttgcatcca aactggcatc t 21 53 200911826 <210> 62 <211> 33 <212> DNA <213> 穴兔屬穴兔 <400> 62 gcaggccatt atactgatag tggtgatgat get 33 <210> 63 <211> 15 <212> DNA 〆 _ \ . <213> 穴兔屬穴兔 <400> 63 accgagacaa ttaac 15 54 200911826 <210> 64 <211> 48 <212> DNA <213> 穴兔屬穴兔 <400> 64 tacattgata gttctggtgg cacaggctac gcgaactggg cgagaggc 48 <210> 65 <211> 27 <212> DNA <213> 穴兔屬穴兔 <400> 65 ggaactatta ctactggcat gaacatc 27 <210> 66 55 200911826
<211> 122 <212> PRT <213> 穴兔屬穴兔 <400> 66
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Leu Pro Gly Ala Thr Leu Ala Gin Val Val Thr Gin Thr Pro Ala Ser 20 25 30
Val Ser Ala Ala Val Gly Gly Thr Val Thr lie Ser Cys Gin Ser Ser 35 40 45
Gin Asn Val Tyr Asn Asn Asn Asp Leu Val Trp Phe Gin Gin Lys Pro 56 200911826 50 55 60 80
Gly Gin Pro Pro Lys Arg Leu Val Tyr Trp Ala Ser Thr Leu Ala Ser 65 70 75
Gly Val Ser Ser Arg Phe Arg Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gin Phe lie 85 90 95
Leu Thr lie Ser Asp Leu Gin Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys 100 105 110
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Met Glu Thr Gly Leu Arg Trp Leu Leu Leu Val Ala Val Leu Lys Gly 15 10 15
Val Gin Cys Gin Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro 20 25 30
Gly Thr Pro Leu Thr Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser 35 40 45 58 200911826
Val Tyr Trp Met Thr Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu 50 55 60
Trp lie Gly Thr lie Ser Thr Asp Gly lie Thr Val Tyr Ala Thr Trp 80 65 70 75
Ala Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Lys Thr Ser Ser Thr Ala Val Asp 85 90 95
Leu Lys Leu Thr Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys 100 105 110
Ala Gly Gly Gly Gly Met Asp Pro 115 120 59 200911826 <210> 68 <211> 13 <212> PRT <213> 穴兔屬穴兔 <400> 68
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Trp Ala Ser Thr Leu Ala Ser 1 5 <210> 70 <211> 10 <212> PRT <213>六兔屬穴兔 <400> 70
Ala Gly Ala Tyr Asp Ser Glu lie Arg Ala 1 5
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Thr lie Ser Thr Asp Gly lie Thr Val Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly 1 5 10 <210> 73 62 200911826 <211> 6 <212> PRT <213> 穴兔屬穴兔 <400> 73
Gly Gly Gly Met Asp Pro 1 5 <210> 74 <211> 366 <212> DNA <213> 穴兔屬穴兔 <400> 74 60 atggacacga gggcccccac tcagctgctg gggctcctgc tgctctggct cccaggtgcc acacttgcgc aagtggtgac ccagactcca gcctccgtgt ctgcagctgt gggaggcaca 63 120 200911826 gtcaccatca gttgccagtc cagtcagaat gtttataata ataatgactt agtctggttt 180 cagcagaaac caggtcagcc tcccaagcgc ctggtctact gggcatccac tctggcatct 240 ggggtctcat cgcggttcag aggcagtgga tctgggacac agttcattct caccatcagc 300 gacctgcagt gtgacgatgc tgccacttac tattgtgcag gcgcctatga tagtgaaatt 360 366 agggct <210> 75 <211> 360 <212> DNA <213> 穴兔屬穴兔 <400> 75 atggagactg ggctgcgctg gcttctcctg gtcgctgtgc tcaaaggtgt ccagtgtcag 60 64 200911826 tcggtggagg agtccggggg tcgcctggtc acgcctggga cacccctgac actcacctgc 120 gcagtctctg gattctccct cagtgtttac tggatgacct gggtccgcca ggctccaggg 180 aaggggctgg aatggatcgg aaccattagt actgatggta tcactgtcta cgcgacctgg 240 gcgaaaggcc gattcaccat ctccaaaacc tcgtcgaccg cggtggatct gaaactcacc 300 agtccgacaa ccgaggacac ggccacctat ttctgtgccg gagggggcgg catggacccc 360 <210> 76 <211> 39 <212> DNA <213>穴兔屬穴兔 <400> 76 cagtccagtc agaatgttta taataataat gacttagtc 39 65 200911826 <210> 77 <211> 21 <212> DNA <213>穴兔屬穴兔 <400> 77 tgggcatcca ctctggcatc t 21 <210> 78 <211> 30 <212> DNA <213> 穴兔屬穴兔 <400> 78 30 gcaggcgcct atgatagtga aattagggct 66 200911826 <210> 79 <211> 15 <212> DNA <213> 穴兔屬穴兔 <400> 79 gtttactgga tgacc 15 <210> 80 <211> 48 <212> DNA <213>六兔屬穴兔 <400> 80 accattagta ctgatggtat cactgtctac gcgacctggg cgaaaggc 48 67 200911826 <210> 81 <211> 18 <212> DNA <213>穴:兔屬穴兔 <400> 81 18 gggggcggca tggacccc
<210> 82 <211> 122 <212> PRT <213>穴兔屬穴兔 <400> 82
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Leu Pro Asp Ala Arg Cys Ala Tyr Asp Met Thr Gin Thr Pro Ala Ser 20 25 30
Val Glu Val Ala Gly Gly Gly Thr Val Thr lie Lys Cys Gin Ala Ser 35 40 45
Gin Ser lie Ala Asn Arg Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin 50 55 60
Pro Pro Lys Leu Leu lie Tyr Tyr Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val 80 65 70 75
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr 85 90 95 69 200911826 lie Ser Gly Val Gin Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin 100 105 110 « f Thr Tyr Ser Asp Asn Asn Val Asp Asn Ala 115 120 <210> 83 <211> 126 <212> / . PRT k <213> 穴兔屬穴兔 <400> 83
Met Glu Thr Gly Leu Arg Trp Leu Leu Leu Val Ala Val Phe Lys Gly 15 10 15 70 200911826
Val Gin Cys Gin Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro 20 25 30
Gly Thr Pro Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser 35 40 45
Ser Asn Thr lie Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu 50 55 60 80
Trp lie Gly Tyr lie Trp Arg Gly Val Ser Thr TyrTyr Ala Thr Trp 65 70 75
Ala Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp 71 200911826 85 90 95
Leu Lys lie Thr Gly Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys 100 105 110
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Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu 85 90 95 ί
Thr lie Ser Asp Leu Glu Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin 100 105 110
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Val Gin Cys Gin Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro 20 25 30
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Ser Asp Asn Met Gly Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu 50 55 60
Tyr lie Gly Tyr lie Thr Tyr Gly Gly Phe Thr Tyr Tyr Ala Thr Trp 80 65 70 75
Ala Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu 85 90 95
Lys Met Thr Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala 100 105 110 84 200911826
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Ser Asn Tyr Gly Ser Asn Ser Asp Ser Phe Gly Asn Ala 115 120 125
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Gly Thr Pro Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser 35 40 45
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Phe lie Gly Tyr He Ala Phe Gly lie Gly Pro Tyr Tyr Ala Thr Trp 65 70 75
Ala Lys Gly Arg Phe Ser lie Ser Ser Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp 85 90 95
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Met Asp Thr Arg Ala Pro Thr Gin Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp 15 10 15
Leu Pro Gly Ala Thr Phe Ala Gin Val Leu Thr Gin Thr Pro Ser Ser 106 200911826 20 25 30
Val Ser Ala Ala Val Gly Gly Thr Val Thr Val Ser Cys Gin Ser Ser 35 40 45
Gin Asn Val Tyr Asn Asn Asn Asp Phe Val Trp Phe Gin Gin Lys Pro 50 55 60
Gly Gin Pro Pro Lys Arg Leu lie Tyr Trp Ala Ser Thr Leu Ala Ser 80 65 70 75
Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gin Phe Thr 85 90 95 107 200911826
Leu Thr lie Asn Asp Leu Glu Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys 100 105 110
Ala Gly Ala Tyr lie Thr Glu Leu Arg Thr 115 120 <210> 131 <211> 120 <212> PRT <213>穴兔屬穴兔 <400> 131
Met Glu Thr Gly Leu Arg Trp Leu Leu Leu Val Ala Val Leu Lys Gly 15 10 15 108 200911826
Val Gin Cys Gin Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro 20 25 30
Gly Thr Pro Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser 35 40 45 lie Tyr Trp Met Thr Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu 50 55 60 80
Trp lie Gly Val lie Ser Thr Asp Gly Ser Ala Tyr Tyr Ala Thr Trp 65 70 75
Ala Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp 85 90 95 109 200911826
Leu Arg lie Thr Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys 100 105 110
Ala Gly Gly Gly Gly Met Asp Pro 115 120 <210> 132 <211> 13 <212> PRT <213> 穴兔屬穴兔 <400> 132
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Ala Gly Ala Tyr lie Thr Glu Leu Arg Thr 1 5 <210> 135 <211> 5 <212> PRT <213>穴兔屬六兔 <400> 135 lie Tyr Trp Met Thr 1 5 <210> 136 <211> 16 <212> PRT <213> 穴兔屬穴兔 200911826 <400> 136
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Val Gin Cys Gin Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro 20 25 30
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Leu Arg lie Thr Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys 100 105 110 \
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Leu Ala Ser Thr Leu Ala Ser 1 5
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Tyr lie Leu Ser Ser Gly lie Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Arg Gly 1 5 10 15 <210> 201 <211> 10 <212> PRT <213> 穴兔屬穴兔 <400> 201
Asn Gly Asn Tyr Asn Ser Gly Thr Asp lie 163 200911826 10 1 5 <210> 202 <211> 375 <212> DNA <213> 穴兔屬穴兔 <400> 202 atggacacga gggcccccac tcagctgctg gggctcctgc tgctctggct cccaggtgcc 60 agatgtgctg acattgtgat gacccagact ccagcctccg tgtctgaacc tgtgggaggc 120 acagtcacca tcaagtgcca ggccagtcag aacatttaca gcaccttagc ctggtatcag 180 cagaaaccag ggcagcctcc caagctcctg atctatctgg catccactct ggcatctggg 240 gtcccatcgc ggttcaaagg cagtggatct gggacacagt tcactctcac catcagcgac 300 164 200911826 ctggagtgtg ccgatgctgc cacttattac tgtcaaacca gtcatggtag taatagtgat 360 agttttggtt atgct 375 <210> 203 <211> 372 <212> DNA <213>穴兔屬穴兔 <400> 203 atggagactg ggctgcgctg gcttctcctg gtcgctgtgc tcaaaggtgt ccagtgtcag 60 tcggtggagg agtccggggg tcgcctggtc acgcctggga cacccctgac actcacttgc 120 acagtctctg gaatcgacct cagtagctat gcaatgggct gggtccgcca ggctccaggg 180 aaggggctgg aatacatcgg atacattctt agtagtggta tcacatacta cgcgagttgg 240 165 200911826 gcgagaggcc gattcaccat ctccaaaacc tcgtcgacca cggtggatct gaaaatgacc 300 agtctgacaa ccgaggacac ggccacctat ttctgtgcca gaaatggtaa ttataatagt 360 ggtacggaca tc 372 <210> 204 <211> 33 <212> DNA <213> 穴兔屬穴兔 <400> 204 33 caggccagtc agaacattta cagcacctta gcc
<210> 205 <211> 21 <212> DNA 166 200911826 <213> 六兔屬穴兔 21 <400> 205 ctggcatcca ctctggcatc t <210> 206 <211> 42 <212> DNA <213> 穴兔屬穴兔 <400> 206 caaaccagtc atggtagtaa tagtgatagt tttggttatg ct 42 <210> 207 <211> 15 <212> DNA <213> 穴兔屬穴兔 167 200911826 <400> 207 agctatgcaa tgggc 15 <210> 208 / <211> 48 <212> DNA <213> 穴兔屬穴兔 <400> 208 tacattctta gtagtggtat cacatactac gcgagttggg cgagaggc 48 . <210> 209 <211> 30 <212> DNA <213> 穴兔屬穴兔 168 200911826 <400> 209 30 aatggtaatt ataatagtgg tacggacatc <210> 210 <211> 125 <212> PRT <213>穴兔屬穴兔 <400> 210
Met Asp Thr Arg Ala Pro Thr Gin Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp 15 10 15
Leu Pro Gly Ala Arg Cys Ala Asp lie Val Met Thr Gin Thr Pro Ala 20 25 30 169 200911826
Ser Val Ser Glu Pro Val Gly Gly Thr Val Thr lie Lys Cys Gin Ala 35 40 45
Ser Gin Asn lie Tyr Ser Thr Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly 50 55 60
Gin Pro Pro Lys Leu Leu He Tyr Leu Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly 80 65 70 75
Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gin Phe Thr Leu 85 90 95
Thr lie Ser Asp Leu Glu Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin 100 105 110 170 200911826
Thr Asn His Gly Ser Asn Ser Asp Ser Phe Gly Tyr Ala 115 120 125 <210> 211 <211> 124 <212> PRT <213> 穴兔屬穴兔 <400> 211
Met Glu Thr Gly Leu Arg Trp Leu Leu Leu Val Ala Val Leu Lys Gly 15 10 15
Val Gin Cys Gin Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro 20 25 30 171 200911826 ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420 gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 480 tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacgcc 540 agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 600 gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 660 aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 720 atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780 gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840 ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 900 cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 960 cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 990 172

Claims (1)

  1. 200911826 十、申請專利範圍： 1· 一種抗人類TNF-α抗體或抗體片段，其如同一選自於 以下所構成的群組之抗人類TNF_a抗體係專一地結合 至一之完整的人類TNF-ot多肽或其之片段上之相同的 5 線形或構形抗原決定位及/或競爭用於結合至相同的 線形或構形抗原決定位：Abl、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、 Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、AblO、AbU、Abl2、Abl3、 Abl4、Abl5、Abl6、Abl7、Abl8、Abl9、Ab20、 Ab21、Ab22、Ab23、Ab24、Ab25，以及Ab26。 10 2. 如申請專利範圍第1項之抗人類TNF-a抗體或片段，其 如同Abl或是AM6係專一地結合至一之完整的人類 TNF-a多肽或其之片段上之相同的線形或構形抗原決 定位及/或競爭用於結合至相同的線形或構形抗原決 定位。 15 3. 如申請專利範圍第1項之抗人類TNF-a抗體或片段，其 如同一選自於以下所構成的群組之抗人類TNF-a抗體 係專一地結合至一完整的人類TNF-oc多肽或其之片段 上之相同的線形或構形抗原決定位：Ab卜Ab2、Ab3、 Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、AblO、Abll、 20 Abl2、AM3、Abl4、Abl5、Abl6、Abl7、Abl8、 Abl9、Ab20、Ab21、Ab22、Ab23、Ab24、Ab25，以 及 Ab26。 4. 如申請專利範圍第3項之抗人類TNF-a抗體或片段，其 如同Abl或是Ab 16係專一地結合至一完整的人類 1 200911826 TNF-α多肽或其之片段上之相同的線形或構形抗原決 定位。 5. 如申請專利範圍第1項之抗人類TNF-α抗體，其係專_ 地結合至一完整的TNF-a多肽或其之片段上之專一地 5 結合Ab 1的相同的線形或構形抗原決定位，以及直中 該（等）抗原決定位’當藉由利用跨越全長的天然人類 TNF-a多肽之重疊的線形胜肽片段之抗原決定位繪圖 予以確定時’係包括TNF-a片段中所包含的一或多個 殘基’該等片段係選自於各別含有胺基酸殘基118_126 10 的該等。 6. 如申請專利範圍第1項之抗人類TNF-a抗體，其包含至 少2個互補決定區（CDRs)於各個變異輕和變異重區域 内’該等互補決定區係與一選自於以下所構成的群組 之抗人類TNF-a抗體内含有的該等是相同的：Abl、 15 Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、AblO、 Abll、Abl2、AM3、Abl4、Abl5、AM6、Abl7、 Abl8、Abl9、Ab20、Ab21、Ab22、Ab23、Ab24、 Ab25，以及Ab26。 7. 如申請專利範圍第6項之抗人類TNF-ot抗體，其包含至 2〇 少2個互補決定區（CDRs)於各個變異輕和變異重區域 内，該等互補決定區係與Abl之内包含的該等是相同 的。 8· 如申請專利範圍第6項之抗人類TNF-a抗體，其中該等 所有的CDRs係與一選自於以下所構成的群組之抗人 2 200911826 類TNF-α抗體内包含的CDRs是相同的：Abl、Ab2、 Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、AblO、Abll、 AM2、Abl3、Abl4、Abl5、AM6、Abl7、AM8、 Abl9、Ab20、Ab2卜 Ab22、Ab23、Ab24、Ab25，以 5 及 Ab26。 9. 如申請專利範圍第6項之抗人類TNF-α抗體，其中該等 所有的CDRs係與包含於Abl之内的CDRs是相同的。 10. 如申請專利範圍第1項之抗人類TNF-α抗體或片段，其 係無糖基化的。 10 11.如申請專利範圍第1項之抗人類TNF-a抗體，其含有一 已經予以修飾以改變效應功能、半生期、蛋白水解、 及/或糖基化作用之Fc區域。 12.如申請專利範圍第1項之抗人類TNF_a抗體或片段，其 係一人類的、人類化的、單鏈或嵌合抗體。 15 13.如申請專利範圍第12項之抗人類TNF-a抗體，其係一 行生自兔的（親代）抗人類TNF-a抗體之人類化抗 體。 14·如申明專利範圍第13項之抗人類TNF-a抗體，其中於 就體的該變異輕區域和該等變異重區域之架構區 20 (FRS)各別地是人類FRS，其等係未經修飾的或是其等 已4藉由用該親代兔抗體之對應的FR殘基取代該變 異^或重鏈區内的至多2或是3個人類FR殘基而予以 〇飾以及其中該等人類FRs已經衍生自人類變異重 鍵與輕鏈抗體序列，該等序列係以其等相餅於包含於 3 200911826 資料庫之内的其他的人類生殖抗體序列之與對應的兔 變異重或輕鏈區域之高位準的同源性為基礎而自人類 生殖抗體序列的資料庫予以選擇出。 15. 如申請專利範圍第丨項之抗人類TNF-α抗體或片段，其 5 專一地結合至TNF-α的表現人類細胞及/或活體内循 環的可溶解的TNF-a分子。 16. 如申請專利範圍第15項之抗人類TNF-a抗體或片段， 其於具有與表現TNF_a的細胞相關連的一疾病之一病 人體内專一地結合至表現於人類細胞之上的或是由人 10 類細胞表現的TNF-a。 17. 如申請專利範圍第16項之抗人類TNF-a抗體或片段， 其中該疾病係選自於：類風濕性關節炎、乾癖性關節 病變、僵直性脊椎炎、幼年型類風濕性關節炎、史迪 爾氏病（Still's Disease)、系統性紅斑性狼瘡、修格連氏 15 症（Sjogren’s Disease)、混合型結締組織障礙、多發性 肌疼痛風濕症（Polymyalgia Rheumatica)、巨細胞動脈 炎、韋格納肉芽腫(Wegener’s Granulomatosis)、川崎病 (Kawasaki’s disease)、自體免疫血管炎、自體免疫葡萄 膜炎、發炎性腸道疾病、貝西氏病（Bechet’s Disease)、 20 牛皮癖、葛瑞夫茲病(Graves Disease)、橋本氏曱狀腺 炎(取811丨111〇1〇’8仇71'0丨(1沿8)、氣喘、第1型糖尿病、第2 型糖尿病、缺jk性心臟病、周邊血管疾病、中風、壞 疽性膿皮症、類肉瘤病、德爾肯氏病（Dercum，s disease)、毒性表皮溶解症、自發性葡萄膜炎或鞏膜 4 200911826 炎、鳥彈視網膜脈絡膜炎（birdshotretinochoroiditis)、 葡萄膜炎性與糖尿病性囊狀黃斑部水腫(uveitic and diabetic cystoid macular edema)、老年性黃斑部退化、 肺纖維化、慢性阻塞性肺部疾病、憂鬱症、精神分裂 症、阿茲海默症(Alzheimer，s disease)、血管型失智 症、腎絲球腎炎、動脈粥狀硬化症、再狹窄、自體免 疫疾病、克隆氏症（Crohn’s disease)、移植物對抗宿主 (GVH)反應（包括器官移植排斥）、敗血性休克、惡病 質、食慈缺乏、多發性硬化症、格蘭氏陰性敗血症、 内毒素性休克、贅瘤性疾病，包括：乳癌、卵巢癌、 膀胱癌、肺癌、甲狀腺癌、神經膠質母細胞瘤、胃癌、 子宮内膜癌、腎臟癌、大腸與大腸直腸癌、胰臟癌與 蝻列腺癌、葡萄膜炎（例如’幼年時期與血清陰性）， 狼瘡以及其他免疫複合體媒介的疾病，如：天皰瘡與 腎絲球腎炎、先天性甲狀腺機能抗進(CH)、遲發型過 敏反應（DTH)，如：接觸型過敏反應、類肉瘤病、慢 F生關卵乂、成人史提爾氏病（adult still disease)、硬皮 病、巨細胞動脈炎、SAPH〇症候群、原發性膽汁性肝 石更化（PBC)、骨髓發育不良症候群（myel〇dySplaStic syndromes)、灰管炎、血液惡性疾病、耳蜗前庭的障 礙、巨嗟細胞活化症候群、間質性肺疾、C型肝炎、 誘導排印，以及骨髓發育不良症候群。 18·如申请專利範圍第丨6項之抗人類TNF_a抗體或片段， 其中该疾病係選自於：一癌症、發炎障礙，或自體免 5 200911826 疫障礙。 19. 如申請專利範圍第16項之抗人類TNF-α抗體或片段， 其中該疾病係類風濕性關節炎。 20. 如申請專利範圍第1項之抗人類TNF-cx抗體或片段，其 5 係直接地或間接地附著至一可偵測的標記或治療劑。 21 _ —種核酸序列(nucleic acid sequence)或多個核酸序列 (nucleic acid sequences)，其係導致如申請專利範圍第 16項之抗人類TNF-α抗體或抗體片段的表現。 22. 如申請專利範圍第21項之核酸序列或多個序列，其係 10 由酵母或人類偏好密碼子組成。 23. —種載體，其包含如申請專利範圍第21項之核酸序列 或多個序列。 24_如申請專利範圍第23項之载體，其係一質體或重組病 毒載體。 15 25· 一重組細胞’其表現如申請專利範圍第1項之抗體或 抗體片段。 26. 如申請專利範圍第25項之細胞，其係選自於：哺乳動 物細胞、酵母細胞、細菌細胞，以及昆蟲細胞。 27. 如申請專利範圍第26項之細胞，其係一酵母細胞。 20 28.如申請專利範圍第27項之細胞，其係一個二倍體酵母 細胞。 29.如申請專利範圍第28項之酵母細胞，其係一畢赤酵母 (Pichia yeast)。 30. 一種治療方法，其包含投藥—治療有效量的至少一個 6 200911826 如申請專利範圍第1項之抗人類TNF-α抗體或片段至 具有與TNF-α表現細胞有關的一疾病或病況的一病 人。 31.如申請專利範圍第30項之方法，其中該疾病係選自 5 於：類風濕性關節炎、乾癬性關節病變、僵直性脊椎 炎、幼年型類風濕性關節炎、史迪爾氏病、系統性紅 斑性狼瘡、修格連氏症、混合型結締組織障礙、多發 性肌疼痛風濕症、巨細胞動脈炎、韋格納肉芽腫、川 崎病、自體免疫血管炎、自體免疫葡萄膜炎、發炎性 10 腸道疾病、貝西氏病、牛皮癬 '葛瑞夫茲病、橋本氏 甲狀腺炎、氣喘、第1型糖尿病、第2型糖尿病、缺血 性心臟病、周邊血管疾病、中風、壞疽性膿皮症、類 肉瘤病、德爾肯氏病（Dercum's disease)、毒性表皮溶 解症、自發性葡萄膜炎或鞏膜炎、鳥彈視網膜脈絡膜 15 炎、葡萄膜炎性與糖尿病性囊狀黃斑部水腫、老年性 黃斑部退化、肺纖維化、慢性阻塞性肺部疾病、憂鬱 症、精神分裂症、阿茲海默症、血管型失智症、腎絲 球腎炎、動脈粥狀硬化症、再狹窄、自體免疫疾病、 克隆氏症、移植物對抗宿主（GVH)反應（包括器官移植 20 排斥）、敗血性休克、惡病質、食慾缺乏、多發性硬化 症、格蘭氏陰性敗血症、内毒素性休克、贅瘤性疾病， 包括.乳癌、印巢癌、膀脱癌、肺癌、甲狀腺癌、神 經膠質母細胞瘤、胃癌、子宮内膜癌、腎臟癌、大腸 與大腸直腸癌、胰臟癌與前列腺癌、葡萄膜炎（例如， 7 200911826 幼年時期與血清陰性），狼瘡以及其他免疫複合體媒介 的疾病，如：天皰瘡與腎絲球腎炎、先天性甲狀腺機 能抗進(CH)、遲發型過敏反應(DTH)，如：接觸型過 敏反應、類肉瘤病、慢性關節炎、成人史提爾氏病（adult 5 still disease)、硬皮病、巨細胞動脈炎、SAPHO症候群、 原發性膽汁性肝硬化（PBC)、骨髓發育不良症候群 (myelodysplastic syndromes)、血管炎、血液惡性疾病、 耳蝸前庭的障礙、巨噬細胞活化症候群、間質性肺疾、 C型肝炎、誘導排卵，以及骨髓發育不良症候群。 10 32.如申請專利範圍第30項之方法，其中該疾病或病況係 一癌症、自體免疫疾病，或發炎病況。 33.如申請專利範圍第30項之方法’其中該治療進一步勺 括另一種治療劑的投藥或選自於：化療、放射療法、 細胞激素的投藥或基因療法之攝生法。 15 34·如申請專利範圍第30項之方法，其係用來治療一自體 免疫障礙的一副作用。 35·如申請專利範圍第34項之方法，其中該副作用係類 濕性關節炎。 ^ 36. 一種活體内成像的方法，其係偵測表現!^^,的細胞 2〇 之存在，該方法包含投藥一診斷有效量的至少—個如 申清專利範圍第1項之抗人類TNF-α抗體。 37. 如申請專利範圍第娜之方法，其中該投藥進一步包 括一幫助在1^17々表現的疾病位置之抗體的偵測之放 射随核種或鸯光團（fluorophore)的投藥。 8 200911826 38. 如申請專利範圍第36項之方法，其係使用來偵測 TNF-α表現的腫瘤或轉移。 39. 如申請專利範圍第36項之方法，其係使用來偵測與 TNF-a表現細胞關連的自體免疫障礙之位址的存在。 5 40.如申請專利範圍第36項之方法，其中該等結果係用來 幫助設計一適合的治療攝生法。 41. 如申請專利範圍第40項之方法，其中該治療攝生法包 括放射療法，化療或其等之一組合。 42. 一種經單離的抗TNF-a抗體，其包含一選自於以下構 10 成的群組之VH(變異重鏈）多肽序列：序列辨識編號： 3、19、35、51、67、83、99、115、131、147、163、 179、195、21 卜 227、243、259、275、29卜 307、323、 339、355、371、387和序列辨識編號：403 ;以及進一 步包含一選自於以下構成的群組之VL(變異輕鏈）多肽 15 序列：序列辨識編號：2、18、34、50、66、82、98、 114、130、146、162、178、194、210、226、242、258、 274、290、306、322、338、354、370、386和序列辨 識編號：402或其之一變異型，其中於該vH或是VL多 肽中的一或多個架構殘基(FR殘基）已經以導致一專一 20 地結合TNF_a之抗TNF-a抗體的另一個胺基酸殘基予 以取代。 43. 如申請專利範圍第42項之經單離的抗體，其中該等FR 殘基的一或多個係以存在於一親代兔抗體中 的對應位置之一胺基酸予以取代，包含於該等 9 200911826 多肽之内的互補決定區（CDRs)已經自該親代兔抗 TNF-α抗體衍生，或是經由一守恆性胺基酸取代。 44.如申請專利範圍第42項之抗體，其中該抗體係人類化 的。 5 45.如申請專利範圍第42項之抗體，其中該抗體係嵌合 的。 46·如申請專利範圍第45項之抗體，其中該嵌合抗體包含 一人類Fc。 47. 如申請專利範圍第46項之抗體，其中該人類Fc係衍生 10 自 IgG 卜 IgG2、IgG3、IgG4、IgG5、IgG6、IgG7、IgG8、 IgG9、IgGlO、IgGU、IgG12、IgG13、IgG14、IgG15、 IgG16、IgG17、IgG18或是IgG19。 48. 如申請專利範圍第42-46項中任一項之抗體，其中該抗 體抑制TNF-ct與TNF-R及/或其等之多聚體的結合及/ 15 或拮抗其之生物作用。 49. 一種經單離的抗TNF-a抗體’其包含一與申請專利範 圍第42項之多肽序列的任何一個具有至少9〇%或更大 的同源性的多肽序列。 50. 如申請專利範圍第48項之抗體，其中該抗體係以低 20 於或等於如下的一解離常數（KD)予以結合至 TNF-a : 5χ10-7、ΚΓ7、5xl〇·8、1〇_8、5xl(T9、10_9、 5xl(T10、1(Τ10、5x10·〗1、ΗΤ11、5χ1(Γ12、1(Γ12、5x1 〇-丨3， 或是1(Τ13。 51. 如申請專利範圍第50項之抗體，其中該抗體係以低 10 200911826 於或等於5xl0—1G的一解離常數(KD)結合至TNF-α。 52. 如申請專利範圍第48項之抗體，其中該抗體係以低 於或等於以下的脫離速率（K脫離）結合至TNF-α : 10_4 S'1'5xl〇·5 S'1' 10'5 S'1 > 5xl〇·6 S'1' 10'6 S"1'5xl0'7 S'1 » 5 或是 1(T7 S_1。 53. 如申請專利範圍第42項之抗體，其中包含於該抗體 之内的該VH或VL多肽係發源自一或多個兔B細胞 族群。 54. 如申請專利範圍第42-45項中任一項之抗體，其中該抗 10 體具有人類TNF-a的靈長類動物同系物之結合專一 性。 55. 如申請專利範圍第54項之抗體，其中該靈長類動物 是係馬來獼猴。 56. 如申請專利範圍第42-45項中任一項之抗體，其中該抗 15 體不具有TNF-R的結合專一性。 57. 如申請專利範圍第42-45項中任一項之抗體，其中該抗 體抑制TNF-a/TNF-R複合體的生產及/或 TNF-oT/TNF-R多聚體的生產。 58. 如申請專利範圍第56項之抗體，其中該TNF-R是p55 20 TNF-R。 59. 如申請專利範圍第57項之抗體，其中該TNF-R是p75 TNF-R。 60. 一種如申請專利範圍第42-45項中任一項之抗體的片 段，其中該片段係選自於：一 Fab片段、一 Fab,片段， 11 200911826 或一 F(ab，；)2 片段。 61. 如申請專利範圍第42-45項中任一項之抗體，其中該抗 體進一步包^—效應部分。 62. 如申請專利範圍第61項之抗體，其中該效應部分係一 5 可偵測的部分或一功能部分。 63. 如申請專利範圍第62項之抗體，其中該可偵測的部分 是一螢光染料、一酶、一受質、一生物發光材料、一 放射材料，或是一化學發光材料。 64. 如申請專利範圍第62項之抗體，其中該功能部分是鏈 10 黴抗生物素蛋白（streptavidin)、抗生物素蛋白 (avidin)、生物素、一細胞毒素、一細胞毒殺劑，或是 一放射材料。 65. 一種改善或減少與TNF-α有關的疾病或障礙之症狀的 方法，其包含投藥如申請專利範圍第42-47項中任一項 15 的抗體的一治療有效量至顯現出與T N F - a有關的一疾 病或障礙的症狀的一病人。 66. 如申請專利範圍第65項之方法，其中該與TNF-oc有關 的疾病或障礙係類風濕性關節炎。 67. 如申請專利範圍第65項之方法，其中該與TNF-α有關 20 的疾病或障礙係選自於：乾癬性關節病變、僵直性脊 椎炎、幼年型類風濕性關節炎、史迪爾氏病、系統性 紅斑性狼瘡、修格連氏症、混合型結締組織障礙、多 發性肌疼痛風濕症、巨細胞動脈炎、韋格納肉芽腫、 川崎病、自體免疫血管炎、自體免疫葡萄膜炎、發炎 12 200911826 5 10 性腸道疾病、貝西氏病、牛皮癬、葛瑞夫兹病、橋本 氏甲狀腺炎、氣喘、第1型糖尿病、第2型糖尿病、缺 血性心臟病、周邊血管疾病、中風、壞疽性膿皮症、 類肉瘤病、制肯Μ、雜表纽解症、自發性葡 萄膜炎或鞏膜炎、鳥彈視網膜脈絡膜炎、葡萄膜炎性 與糖尿病性餘黃斑部水腫、老年性黃料退化、肺 纖維化、慢性阻塞性肺部疾病、憂鬱症、精神分裂症、 阿兹海默症、企管型失智症、腎絲球腎炎、動脈粥狀 硬化症、再狹窄、自體免疫疾病、克隆氏症、移植物 對抗宿主(GVH)反應（包括器官移植排斥）、敗血性休 克、惡病質、食m缺乏、多發性硬化症、格蘭氏陰性 敗血症、时素性休克 '贅触疾病，包括：乳癌、 印巢癌、膀胱癌、肺癌、曱狀腺癌、神經膠質母細胞 瘤、胃癌、子s内膜癌、腎臟癌、大腸與大腸直腸癌、 15 胰臟癌與前列腺癌、葡萄膜炎(例如，幼年時期與血清 陰性），狼瘡以及其他免疫複合體媒介的疾病，如：天 皰瘡與腎絲球腎炎、先天性曱狀腺機能抗進(CH)、遲 發型過敏反應(DTH)，如：接觸型過敏反應、類肉瘤 病、慢性關節炎、成人史提爾氏病、硬皮病、巨細胞 20 動脈炎、SAPHO症候群、原發性膽汁性肝硬化(pBC)、 骨髓發育不良症候群、血管炎、血液惡性疾病 、耳蝸 前庭的障礙、巨噬細胞活化症候群、間質性肺疾、c型 肝炎、誘導排卵’以及骨髓發育不良症候群。 68_ —種於一多倍體酵母培養物中製造如申請專利範圍第 13 200911826 4 2項之抗體的方法’該培養物係安定地表現且分泌至少 10-25 mg/升的該抗體至該培養基之内，該方法包含. (i) 將至少一個表現載體導入一單倍體酵母細跑 内，該表現載體含有編碼操作地連結至一啟動子 5 和一訊息序列之該抗體的一或多個異種多核苷 酸； (ii) 藉由配對或原生質球狀體的融合而自第—及/ 或第二單倍體酵母細胞產生一多倍體酵母； (iii) 篩選穩定地表現該抗體之多倍體酵母細跑； 10 以及 (iv) 自穩定地表現至少10-25 mg/升的該抗體至兮 培養基之内的該等多倍體酵母細胞來生產穩定的 多倍體酵母培養物。 69.如申請專利範圍第68項之方法，其中該酵母係選自 15 於下列的屬：阿席歐酵母;糞盤菌 (JscoZjoir少少ma);固囊酵母（CVieromyces);得巴利酵 母（DMaryowyce·?);德克酵母;假囊酵母 (Eremothecium) ’，伊讓酵母（Issatchenkia) 哈緩 I 鲜 母(火<瓜?<:/^加《以）；克魯維酵母(^7吵^〇所_>^^);柯達 20 菌（i^odawaea);路德酵母(ZWi/erow少ces);管囊酵母 (尸acAj^so/ew);畢赤酵母（Pichia);酵母菌 (Saccharomyces) ·，木徽菌（Saturnispora);四重抱酵母 ;有孢圓酵母(T〇rw/os/?ora);擬威爾 酵母（奶//ίο/λ^);以及結合酵母少ces)。 14 200911826 70. 如申請專利範圍第69項之方法，其中該酵母屬是畢 赤。 71. 如申請專利範圍第70項之方法，其中畢赤的物種係 選自於：巴斯德畢赤酵母CP/cA/α、甲醇畢赤 5 酵母（Pichia 以及多形漢遜酵母 (Hansenula polymorpha)(安格斯畢赤酵母（Pichia 72. 一種經單離的多核苷酸載體，其包含一編碼一選自於 以下之抗-TNF-α VH抗體胺基酸序列的多核苷酸：序 10 列辨識編號：3 ' 19、35、5卜 67、83、99、115、13卜 147、163、179、195、211、227、243、259、275、 291、307、323、339、355、371、387 和序列辨識編 號：403，或編碼其之一變異型，其中至少一架構殘 基(FR殘基）已經以存在於一兔抗TNF-a抗體VH多肽 15 内的對應位置之一胺基酸或一守恆性胺基酸取代物 予以取代。 73. 一種載體，其包含如申請專利範圍第72項之該多核苷 酸序列。 74. 一種宿主細胞，其包含如申請專利範圍第73項之載 20 體。 75. 如申請專利範圍第74項之宿主細胞，其中該宿主細胞 是一屬於畢赤屬的酵母細胞。 76. 如申請專利範圍第68項之方法，其中該異種多核苷 酸進一步包含一編碼一選自於以下的抗TNF-a抗體 15 200911826 5 VL胺基酸序列之多核苷酸序列：2、18、34、50、 66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、 226、242、258、274、290、306、322、338、354、 370、386和序列辨識編號：402，或編碼其之一變異 型，其中至少一架構殘基(FR殘基）已經以存在於一兔 抗TNF-α抗體VL多肽内的對應位置之一胺基酸或一 守恆性胺基酸取代物予以取代。 . 77. 一種包含多核苷酸序列之經單離的多核苷酸，該多 f 核苷酸序列編碼以下的抗TNF-a抗體ViJ充體胺基酸 10 序列：2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、 162、178、194、210、226、242、258、274、290、 15 306、322、338、354、370、386 和序列辨識編號：402， 或編碼其之一變異型，其中至少一架構殘基(FR殘基) 已經以存在於的對應位置之一胺基酸予以取代的於 兔抗TNF-tx抗體Vl多狀内的或·—守‘f亙性胺基酸取 代。 78. 一種載體，其包含如申請專利範圍第77項之多核苷酸 序列。 79. 一種宿主細胞，其包含如申請專利範圍第78項之載 20 體。 80. 如申睛專利範圍第79項之宿主細胞，其中該宿主細胞 是一屬於畢赤屬的酵母細胞。 81. 如申請專利範圍第68項之方法，其中該異種多核苷酸 係含有一編碼包含以下的多肽之序列：序列辨識編 16 200911826 號：2和序列辨識編號：3 ;序列辨識編號：18和序列 辨識編號：19 ;序列辨識編號：34和序列辨識編號： 35，序列辨識編號：5〇和序列辨識編號：51 ;序列辨 識編號：66和序列辨識編號：67 ;序列辨識編號：82 和序列辨識編號：83 ;序列辨識編號：98和序列辨識 編號：99 ;序列辨識編號：114和序列辨識編號：115 ; 序列辨識編號：130和序列辨識編號：131 ;序列辨識 編號：146和序列辨識編號：147 ;序列辨識編號：162 和序列辨識編號：163 ;序列辨識編號：178和序列辨 識編號：179 ;序列辨識編號：194和序列辨識編號： 195 ;序列辨識編號：21〇和序列辨識編號：211 ;序列 辨識編號：226和序列辨識編號：227 ;序列辨識編號： 242和序列辨識編號：243 ;序列辨識編號：258和序列 辨識編號：259 ;序列辨識編號：274和序列辨識編號： 275 ;序列辨識編號：290和序列辨識編號：291 ;序列 辨識編號：306和序列辨識編號：307 ;序列辨識編號： 322和序列辨識編號：323 ;序列辨識編號：338和序列 辨識編號：339;序列辨識編號：354和序列辨識編號： 355 ;序列辨識編號：370和序列辨識編號：371 ;序列 辨識編號：386和序列辨識編號：387 ;或是序列辨識 編號：402和序列辨識編號：403。 一種抗TNF-α抗體，其如同申請專利範圍第81項之 多核苷酸序列的任一者所編碼的一抗體或抗體片段 係結合用於結合至TNF-a的相同的TNF-a抗原決定 17 200911826 位及/或與一結合至TNF-α的抗TNF-α抗體競爭。 83. 如申請專利範圍第82項之抗TNF-α抗體’其如同一 選自於以下的抗TNF-a抗體係結合至相同的TNF-a 抗原決定位：Abl、Ab2、Ab3 ' Ab4、Ab5、Ab6、 5 Ab7、Ab8、Ab9、AblO、AbH、Abl2、Abl3、Abl4、 Abl5、AM6、AM7、AM8、Abl9、Ab20、Ab21、 Ab22、Ab23、Ab24、Ab25，以及 Ab26。 84. 一種經單離的抗TNF-a抗體或抗體片段，其包含選自 於以下構成的群組之VH多肽序列之内所含有的一或 10 多個 CDRs :序列辨識編號：3、19、35、51、67、83、 99、115、13 卜 147、163、179、195、211、227、243、 259 、 275 、 29卜 307 、 323 、 339 、 355 、 371 、 387 和 序列辨識編號：403及/或選自於以下構成的群組之 VL多肽序列之内所含有的一或多個CDRs:序列辨識 15 編號：2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、 162 、 178 、 194 、 210 、 226 、 242 、 258 、 274 、 290 、 306、322、338、354、370、386 和序列辨識編號：402。 85. 如申請專利範圍第83或84項之抗體，其中該抗體係人 類化的。 2〇 86.如申請專利範圍第83或84項之抗體，其中該抗體係嵌 合的。 87. 如申請專利範圍第86項之抗體，其中該嵌合抗體包含 一人類Fc。 88. 如申請專利範圍第83或84項之抗體，其包含一單鏈抗 18 200911826 體。 89. 如申請專利範圍第87項之抗體，其中該人類Fe係衍生 自人類IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgG5、IgG6、IgG7、 IgG8、IgG9、IgGlO、IgGU、IgG12、IgG13、IgG14、 5 IgG15、IgG16、IgG17、IgG18或是IgG19。 90. 如申請專利範圍第82-89項中任一項之抗體，其中該抗 體係結合至一線形或構形TNF-α抗原決定位。 91. 一種經單離的抗TNF-a抗體，其包含一與申請專利範 圍第83項之多肽序列的任何一個具有至少9〇%或更大 10 的同源性之VL或是vH多肽序列。 92_如申請專利範圍第91項之抗體，其中該抗體係以低 於或等於如下的一解離常數（Kd)予以結合至 TNF-a : 5xl〇-7、10-7、5xl〇·8、1〇·8、5χ1(Γ9、1〇-9、 5x10 10、1〇_丨〇、5χ1〇-ιι、1〇-丨丨、5χ1〇-ΐ2、1〇-!2、5χ1〇_13 , 15 或是 10_13。 93. 如申請專利範圍第89項之抗體，其中該抗體係以低 於或等於5x1ο-1。的一解離常數（Kd)予以結合至 TNF-a 〇 94. 如申請專利範圍第91項之抗體，其中該抗體係以低 20 於或等於如下的一脫離速率（K_)結合至TNF-a: 1〇·4 S、5xl〇 5 s]、1〇_5 s-1、5xl〇-6 s-1、10-6 S·1、5xl〇-7 S_1 ’ 或是 UT7 S-1。 95_如申請專利範圍第83或84項之抗體，其中該抗體係 發源自一或多個兔B細胞族群。 19 200911826 96. 如申請專利範圍第82-89項中任一項之抗體，其中該抗 體具有人類TNF-α的靈長類動物同系物之結合專一 性。 97. 如申請專利範圍第97項之抗體，其中該靈長類動物是 5 馬來獼猴。 98. 如申請專利範圍第82-89項中任一項之抗體，其中該抗 體不具有TNF-R的結合專一性。 99. 如申請專利範圍第82-89項中任一項之抗體，其中該抗 體抑制TNF-a與TNF-R及/或其等之多聚體的結合及/ 10 或拮抗其之生物作用。 100. 如申請專利範圍第99項之抗體，其中該TNF-R是p55 TNF-R或是p75 TNF-R。 101. —種如申請專利範圍第82-89項中任一項之抗體的片 段，其中該片段係選自於：一Fab片段、一Fab_片段， 15 或一 F(ab’)2片段。 102. 如申請專利範圍第82-89項中任一項之抗體，其中該 抗體進一步包含一效應部分。 103. 如申請專利範圍第100項之抗體，其中該效應部分係 一可偵測的部分或一功能部分。 20 104.如申請專利範圍第103項之抗體，其中該可偵測的部 分是一榮光染料、一酶、一受質、一生物發光材料、 一放射材料，或是一化學發光材料。 105.如申請專利範圍第103項之抗體，其中該功能部分是 鏈黴抗生物素蛋白、抗生物素蛋白、生物素、一細胞 20 200911826 毒素、一細胞毒殺劑’或是一放射材料。 106· —種改善或減少與TNF-α有關的疾病或障礙之症狀的 方法’其包含投藥一治療有效量的如申請專利範圍第 82-89項中任一項之抗體至顯現出與丁抑^有關的一 5 疾病或障礙之症狀的一病人。 107.如申請專利範圍第1〇6項之方法，其中與7^1?_〇1有關的 該疾病或障礙係類風濕性關節炎。 108·如申請專利範圍第1〇6項之方法，其中與1^17_〇1有關的 該疾病或障礙係選自於：乾癖性關節病變、僵直性脊 10 椎炎、幼年型類風濕性關節炎 '史迪爾氏病、系統性 紅斑性狼瘡、修格連氏症、混合型結締組織障礙、多 發性肌疼痛風濕症、巨細胞動脈炎、韋格納肉芽腫、 川崎病、自體免疫血管炎、自體免疫葡萄膜炎、發炎 性腸道疾病、貝西氏病、牛皮癬、葛瑞夫茲病、橋本 15 氏甲狀腺炎、氣喘、第1型糖尿病、第2型糖尿病、缺 血性心臟病、周邊血管疾病、中風、壞疫性腹皮症、 類肉瘤病、德时氏病、毒性表皮溶解症、自發性葡 萄膜炎或鞏膜炎、鳥彈視網膜脈絡膜炎、葡萄膜炎性 與糖尿病性囊狀黃斑部水腫、老年性黃斑部退化、肺 20 纖維化 '慢性阻塞性肺部疾病、憂鬱症、精神分裂症、 阿茲海默症、企管型失智症、腎絲球腎炎、動脈粥狀 硬化症、再狹窄、自體免疫疾病、克隆氏症、移植物 對抗宿主(GVH)反應（包括器官移植排斥）、敗血性休 克、惡病質、食慾缺乏、多發性硬化症、格蘭氏陰性 21 200911826 敗血症、内毒素性休克、贅瘤性疾病，包括：乳癌、 卵巢癌、膀胱癌、肺癌、曱狀腺癌、神經膠質母細胞 瘤、胃癌、子宮内膜癌、腎臟癌、大腸與大腸直腸癌、 胰臟癌與前列腺癌、葡萄膜炎(例如，幼年時期與血清 5 陰性），狼瘡以及其他免疫複合體媒介的疾病，如：天 皰瘡與腎絲球腎炎、先天性曱狀腺機能抗進(CH)、遲 發型過敏反應（DTH)，如：接觸型過敏反應、類肉瘤 病、慢性關節炎、成人史提爾氏病、硬皮病、巨細胞 動脈炎、SAPHO症候群、原發性膽汁性肝硬化(PBC)、 10 骨髓發育不良症候群、血管炎、血液惡性疾病、耳蝸 前庭的障礙、巨噬細胞活化症候群、間質性肺疾、C型 肝炎、誘導排卵，以及骨髓發育不良症候群。 109. —種於一多倍體酵母培養物中製造如申請專利範圍 第82-89項中任一項之抗體的方法，該培養物係安定地 15 表現且分泌至少10-25 mg/升的該抗體至該培養基之 内，該方法包含： (i) 將至少一個表現載體導入一單倍體酵母細胞 内，該表現載體含有編碼操作地連結至一啟動子 和一訊息序列之該抗體的一或多個異種多核苷 20 酸； (ii) 藉由配對或原生質球狀體的融合而自第一及 /或第二單倍體酵母細胞產生一多倍體酵母； (iii) 篩選穩定地表現該抗體之多倍體酵母細 胞；以及 22 200911826 (=定地魏W5mg/料該抗體至該 的夕2内的該等多倍體酵母細胞來生產穩定 的夕倍體酵母培養物。 110.如申請專利範 5 10 15 20 下列的屬：阿= 法’其中該酵母係選自於 ^歐酵母；糞盤菌；㈣酵母；得巴利 多廣L克酵母’假囊酵母；伊薩酵母；哈薩克酵母； 維酵母’柯達路德酵母；管囊酵母；畢赤； 酸母菌’木黴菌；四重孢酵母；有孢圓酵母;擬威爾 醇母；以及結合酵母。 •如申請專利範圍第11G項之方法，其中該酵母屬是畢 赤。 申请專利In圍第111項之方法，其中的物種畢赤係選 自於.巴斯德畢赤酵母(朽c/n.a〜^〇以·5)、甲醇畢赤酵 母（Pichia methanolica)以及多形漢遜酵母（Hansemda Vworp/m)(女格斯畢赤酵母训公⑽仏)）。 種經單離的多核苷酸載體，其表現一含有至少一個 自—抗TNF-α抗體衍生的cdr多肽之多肽，其中該 表現的多肽單獨專一地結合TNF-ct或是當與另一個 多核苷酸序列聯合表現時專一地結合TNF-α，該另一 個多核苷酸序列表現一含有至少一個自一抗TNF-a 抗體衍生的CDR多肽之多肽，其中該至少一個CDR 係選自於包含於以下的序列辨識編號之内的VL或是 Vh多肽所含有的該等：3、19、35、51、67、83、99、 U5、131、147、163、179、195、211、227、243、 23 200911826 259、275、29卜 307、323、339、355、37卜 387、2、 18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、 194 、 210 、 226 、 242 、 258 、 274 、 290 、 306 、 322 、 338、354、370、386和序列辨識編號：402。 5 114. 一種載體，其包含如申請專利範圍第113項之多核苷酸 序列的至少一個。 115. —種宿主細胞，其包含如申請專利範圍第114項之載 體。 116. 如申請專利範圍第115項之宿主細胞，其中該宿主細胞 10 是一屬於畢赤屬的酵母細胞。 117. 如申請專利範圍第109項之方法，其中該異種多核苷酸 係含有一或多個編碼至少一個CDR之該多核苷酸序 列，其中該至少一個CDR係包含於選自於以下的序列 辨識編號之VL或是VH多肽之内：3、19、35、51、67、 15 83、99、115、m、147、163、179、195、21 卜 227、 243、259、275、29卜 307、323、339、355、371、387、 2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、 178、194、210、226、242、258、274、290、306、322、 338、354、370、386和序列辨識編號：402。 20 118•一種藥學或診斷組成物，其含有至少一個如申請專利 範圍第1項或第82-89項中任一項之TNF-α抗體或片 段，以及一藥學上可接受的載劑。 119.如申請專利範圍第118項之藥學或診斷組成物，其進一 步包含至少一安定劑。 24 200911826 120. 如申請專利範圍第118項之藥學或診斷組成物，其係凍 乾的。 121. 如申請專利範圍第118項之藥學或診斷組成物，其包含 選自於以下的一或多個抗-TNF-ot抗體：Abl、Ab2、 5 Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、AblO、Abn、 Abl2、Abl3、Abl4、AM5、Abl6、Abl7、Abl8、 Abl9、Ab20、Ab21、Ab22、Ab23、Ab24、Ab25，以 及Ab26，或是一嵌合的、人類化抗體或自其衍生的片 段。 10 122.如申請專利範圍第121項之藥學或診斷組成物，其中 該抗體包含Abl或是一人類化的或嵌合抗體或自其衍 生的片段。 123. —種治療一TNF-α關連的疾病的方法，其包含投藥如 申請專利範圍第119-122項中任一項之藥學組成物的 15 一治療有效量》 124. 如申請專利範圍第123項之方法，其中該疾病係選自 於·一癌症病況、自體免疫病況與一發炎的疾病。 125. 如申請專利範圍第124項之方法’其中該疾病係類風 濕性關節炎。 20 126.-種活體内成像的方法，其係情測表現ΤΝρ_α的細胞 之存在，该方法包含投藥如申請專利範圍第119-122 項中任一項之診斷組成物的一診斷有效量。 127·如中π專利乾圍第126項之方法，其制來彳貞測或成 像TNF-a表現腫瘤或轉移。 25 200911826 128. 如申請專利範圍第126項之方法，其係用來偵測或成 像TNF-α表現的發炎位址。 129. 如申請專利範圍第127或128項之方法，其係使用作為 一用於設計一有效的關節炎治療操作程序之計畫性攝 5 生法的一部分。 130. 如申請專利範圍第129項之方法，其中該治療操作程 序包括輻射、化療、細胞激素療法、基因療法，以及 抗體療法的一或多個。 131. 如申請專利範圍第130項之方法，其中該抗體包含如 10 申請專利範圍第1或82-89項中任一項之抗TNF-a抗體 或片段。 132. 如申請專利範圍第88項之抗體，其中該單鏈抗體係選 自於：scFv、駱4它抗體（camelbody)、奈米抗體 (nanobody)、IgNAR、SMIP，以及其等之組合。 15 26
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