TW200848429A - Methods and compositions for treating and monitoring treatment of IL-13-associated disorders - Google Patents

Methods and compositions for treating and monitoring treatment of IL-13-associated disorders Download PDF

Info

Publication number
TW200848429A
TW200848429A TW097114612A TW97114612A TW200848429A TW 200848429 A TW200848429 A TW 200848429A TW 097114612 A TW097114612 A TW 097114612A TW 97114612 A TW97114612 A TW 97114612A TW 200848429 A TW200848429 A TW 200848429A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
subject
antibody molecule
sequence
average
antibody
Prior art date
Application number
TW097114612A
Other languages
English (en)
Inventor
Yulia Vugmeyster
Xin Xu
Xian-Bin Tian
Donald G Raible
Yuji Simon Zhou
Billie Durn
Original Assignee
Wyeth Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Wyeth Corp filed Critical Wyeth Corp
Publication of TW200848429A publication Critical patent/TW200848429A/zh

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/244—Interleukins [IL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/04—Antipruritics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6854—Immunoglobulins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/567—Framework region [FR]
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A90/00—Technologies having an indirect contribution to adaptation to climate change
    • Y02A90/10—Information and communication technologies [ICT] supporting adaptation to climate change, e.g. for weather forecasting or climate simulation

Description

200848429 九、發明說明： L發明所屑技術領域;j 有關申請案介紹 本申請案主張2007年4月23日申請之美國專利申請案 • 5 序號第60/926,078號及第60/925,932號之優先權。前述申請 • 案之全文皆在此併入本案以為參考資料。 序列表 隨本文附上以電子及紙本格式之序列表的副本。 1' 發明領域 ίο 本發明係有關於用於處置及監測IL-13相關疾病之治 療的方法以及組成物。 C先前技術3 發明背景 介百素-13(IL-13)為藉T淋巴細胞及肥大細胞而分泌之 15 細胞素（McKenzie等人（1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:3735-39; Bost等人（1996)Immunology 87:663-41). IL-13 ( 和IL_4共同具有幾種生物活性，例如IL-4或IL-13可在B細胞 内導致IgE同型物轉變（Tomkinson等人(2001) J. Immunol· 166:5792-5800)。另外，在氣喘病患者體内已發現細胞表面 20 CD23 及血清 CD23(sCD23)之位準增加（Sanchez-Guererro ^ 等人（1994) Allergy 49··587·92; DiLorenzo 等人（1999)
Allergy Asthma Proc· 20:119-25)。此外，IL_4或IL-13可上調 MHC II與低親和力IgE受體（CD23)對B細胞及單核細胞之 表現性，其會導致增強的抗原遞呈（antigen presentation)及 25 受控的巨嗟細胞機能(Tomkinson等人，如上述）。重要的是， IL-4或IL-13可增加VCAM-1對内皮細胞之表現性，其可加 5 200848429 速嗜伊紅血球(及T細胞）優先補充至呼吸道組織(Tomkinson 等人，如上述）。IL-4或IL-13亦可增加呼吸道黏液分泌，其 會惡化呼吸道反應性(Tomkinson等人，如上述）。這些觀察 資料認為雖然IL-13未必，或甚可，誘發Th2形成，但是IL-13 5 可以是呼吸道嗜伊紅血球增多及AHR之形成的主要因素 (Tomkinson等人，如上述，Wills-Karp等人（1998) Science 282:2258-61)。 L發明内容3 發明概要 10 15 20 本發明揭示用於處置及/或監測IL-13相關疾病或病症 之治療的方法及組成物。在一實施例中，相對於未經治療 之患者，申請者已發現IL-13拮抗劑，例如IL-13抗體分子之 投藥可減少患者，例如人類之經過敏原誘發的早期及/或晚 期氣喘反應之至少一症狀。在該患者接觸過敏原後數分鐘 内、及在早期氣喘反應期間（例如接觸該過敏原後至高約3 小時）’已檢測出一或多種氣喘症狀之減少。症狀之減少在 晚期氣喘反應（例如過敏原接觸後約3至24小時期間）仍可維 持。在其它實施例中’係揭示評估抗·IL13抗體分子及/或與 該抗體分子有W之治躲的料。該特財法包括檢測 該患者體内之抗—1L13抗體分子的i少一藥物動力學/藥理 動力子（PK/PD)參數。因此，亦揭示凡七結合劑或括抗劑 用於減少或㈣、及/或預喊延緩患者之飢七相關之疾 病或病症的早缺/錢财關之—或多種㈣之發作的 用途。在料實施财，亦揭示歸評飢七結合劑或枯 抗劑在治療或預防患者之該M3相關疾病或病症之動力 25 200848429 學及/或效力的方法。 10 15 20 因此，本發明之一方面係描述治療或預防患者之IL-13 相關疾病或病症之早期及/或晚期症狀的方法。該方法包括 對該患者投肌結合劑或拮抗劑，其投與量能有效減少 該疾病或病症之-或多種症狀（例如其投與量能有效減少 以下症狀t或夕種.呼吸症狀(例如支氣管縮小）、該患者 體内之IgE位準、組織胺或白三稀素之釋放量或位準、或嗜 伊紅趨化因子(eotaxin)位準）。就預防用途(例如用於預防: 減少或延緩該疾病或病症之—或多種症狀的發作或復 而言’該患者可或可不罹患該疾病或病症之-或多種1 狀。例如可在接觸危害前或該等症狀之任何可檢測顯現之 發作前’或在可檢測至少部份，以並_有料症狀Γ 投與狐-13結合劑或抬抗劑。就治療用途而言’該治^ 可改善、治癒、保持或降低患者 間 顯現 至 閜。在治療用途中，該患者可复 持、、、只犄
Ij具有該等症狀之部 〇在典型的情況下，治療法 次凡王 醫生可檢測之程度或可預防讀疾或病症 在一實施例中，該IL-13、社人w、 、匕。 一或多種與該IL-13相關疾病之早抗^可抑制或減少 氣喘反應，，或“ EAR，’。例如慨早的症狀，例如“早期 (例如過敏原接觸)後，例如約心抗劑在危害 2、約2.5或約3小日危害(例接二1、机5、約 止。可減少一或多種與EAR*關之症:原接:)谈約3小時為 拮抗劑可降低或預防該EAR之〜正 4lUl3結合劑或 或多種症狀，其包括但不 7 200848429 限於以下之一或多種：自，例如呼吸道巨大細胞或嗜鹼細 胞釋放至少一種過敏性介質，諸如白三烯素（例如LTA4、 LTB4、LTC4、LTD4、LTE4及/或LTF4)及/或組織胺；至少一 種過敏性介質，諸如白三烯素及/或組織胺之位準增加；支 5 氣管縮小；及/或呼吸道水腫。與，例如未投與該IL-13結合 劑或拮抗劑之患者的該症狀之大小或程度比較，該IL-13結 合劑或拮抗劑可導致該患者之這些EAR症狀之一或多種的 減少。或者，例如與未投與該IL-13結合劑或拮抗劑之患者 的該症狀之大小或程度比較，該IL-13結合劑或拮抗劑可預 10 防該症狀之大增加。 在其它實施例中，該IL-13結合劑或拮抗劑可抑制或減 ^ --或多種與IL-13相關疾病之晚期有關的症狀’例如“晚期 氣喘反應”或“LAR”，方例如在危害（例如過敏原接觸）後至 少約3、約3.5、約4、約4.5、約5、約5.5、約6、約6.5、約7、 15 約8、約9、約10、約11、約12或約13小時至高在危害（例如 過敏原接觸）後約24小時，該IL-13結合劑或拮抗劑可減少一 或多種與LAR有關之症狀。例如該IL-13結合劑或拮抗劑可 減少或預防LAR之一或多種症狀，例如以下症狀之〜或多 種：呼吸道反應性及/或流入物及/或炎症細胞，諸如淋巴細 20 胞、嗜伊紅血球及/或巨噬細胞在該等呼吸道及/或支氣管黏 膜内之活化作用。例如，與未投與該IL_13結合劑或拮抗劑 之患者的該症狀之大小或程度比較’該1L-13結合劑或括抗 劑可導致患者之LAR的這些症狀之一或多種的減少。戈 者，例如與投與該IL-13結合劑或拮抗劑之患者的該症狀之 8 200848429 大小或程度比較，該IL-13結合劑或拮抗劑或預防該症狀之 大增加。 可以在一或多種與該IL-13疾病或病症有關之症狀發 作或復發前，但是在與該疾病或病症有關之症狀完全顯現 5 前投與該IL-13結合劑或拮抗劑。在特定實施例中，係在接 觸可引發或惡化IL-13相關疾病或病症之介質，例如過敏 原、污染物、毒性藥劑、感染物及/或壓力前，對患者投予 該IL-13結合劑或拮抗劑。在某些實施例中，可在接觸引發 及/或惡化該IL -13相關疾病或病症之介質前，期間或其後不 10 久，投與該IL-13結合劑或拮抗劑。例如可在接觸該引發或 惡化劑前或後1、5、10、25或24小時；2、3、4、5、10、 20或30天；或4、5、6、7或8週或更久投與該IL-13結合劑 或拮抗劑，典型上，可在接觸該引發或惡化劑之前或後24 小時與兩天之間投予該IL-13結合劑或拮抗劑。在接觸該藥 15 劑後才進行投藥之實施例中，該患者可未罹患症狀或可罹 患該等症狀之部份顯現。例如該患者可具有該疾病或病症 之早期階段的症狀。可藉吸入或注射（例如皮下注射）投與各 約0.5-10毫克/公斤（例如約0.7-5毫克/公斤、約0.9-4毫克/公 斤、約1-3毫克/公斤、約1.5-2.5毫克/公斤或約2毫克/公斤） 20 之劑量。在一實施例中，該單一治療間隔包括相隔至少4、 7、9或14天投與約1-3毫克/公斤、約1.5-2.5毫克/公斤或約2 毫克/公斤之兩皮下劑量的抗-IL13抗體分子。例如該單一治 療間隔可包括相隔7天投與約2毫克/公斤之兩皮下劑量的 抗-IL13抗體分子。在某些實施例中，係對該患者投與固定 9 200848429 劑量之抗-IL13抗體分子，例如以下之固定劑量：在約50毫 克與500毫克之間、在約60毫克與490毫克之間、在約70毫 克與480毫克之間、在約75毫克與460毫克之間、約80毫克 至450毫克之間、在約100毫克與約450毫克之間、約150毫 5 克至約400毫克、約200毫克至約300毫克、約200毫克至約 250毫克；或約60毫克、65毫克、70毫克、75毫克、80毫克、 90毫克、100毫克、125毫克、150毫克、175毫克、200毫克、 225毫克或250毫克。可以以約每週一次、每兩週一次、每3 週一次或每四週一次或其任何組合之計劃或如由臨床醫師 10 決定投與該固定劑量（例如75毫克、200毫克或225毫克該抗 IL_13抗體分子）(或該固定劑量之任何組合）。該抗IL-13抗體 之固定劑量的計劃實例如下：於第1天之初劑量，繼而於約 第8、28、42、56、70及84天之劑量。 在一實施例中，係於單一治療間隔下投與該IL-13結合 15 劑或拮抗劑，例如以單一劑量投予或以在單一治療間隔期 間不超過2或3種劑量之重複劑量投與，例如在自該初劑量 之投與算起一週或更短的時間内投與該重複劑量。 可對惟患或有惟患IL-13相關疾病或病症之危險的患 者投與該IL-13拮抗劑或結合劑。典型上，該患者為哺乳動 20 物，例如罹患或有罹患IL-13相關疾病或病症之危險的人類 (例如兒童、青少年或成年）。IL-13相關疾病或病症之實例 包括，但不限於選自以下之一或多種之疾病：IgE相關疾 病，其包括但不限於異位性疾病，例如得自對IL-13之敏感 性增加的異位性疾病（例如異位性皮炎、蓴麻療、濕療、及 10 200848429 過敏性病症，諸如過敏性鼻炎及過敏性腸胃炎）；呼吸疾 病’例如氣喘（例如過敏性及非過敏性氣喘（例如發生在幼童 之由於感染，例如呼吸道合胞病毒(rsv)所致之氣喘））、慢 性阻塞性肺病（COPD)、及其它疾病，其包括呼吸道炎症、 5 嗜伊紅血球增多、纖維變性及過量黏液產生，例如纖維囊 泡症及肺纖維變性；炎性及/或自體免疫疾病或病症，例如 皮膚炎性疾病或病症（例如異位性皮炎）、胃腸疾病或病症 (例如發炎性腸病（IBD)、潰瘍性結腸炎及/或克隆氏症 (Crohn’s disease))、肝疾病或病症（例如肝硬化、肝細胞癌）、 10 及硬皮症；腫瘤或癌（例如軟組織或實體腫瘤），諸如白血 病、神經膠母細胞瘤、及淋巴瘤，例如霍吉金氏淋巴瘤 (Hodgkin’s lymphoma);病毒感染（例如得自^^-丨之病毒 感染），其它器官之纖維變性，例如肝之纖維變性(例如由B 型肝炎及/或C型肝炎病毒引起之纖維變性）；及保護性第i 15型免疫反應之表現性的抑制作用（例如在進行接種期間）。 在特定實施例中’該患者為罹患輕度、中度或重度氣 %，例如特異反應性氣喘之人類。可在過敏原接觸前、期 間或其後進行文中揭示之治療方法及預防方法。例如該患 者可以是對季節性過敏原，例如豚草過敏之人類或接觸普 20通感冒或流行感冒病毒後或在普通感冒或流行感冒季節期 間之氣喘病患者。在該等症狀發作前(例如過敏性或氣喘性 症狀或在過敏反應或普通感冒或流行感冒季節前或期 間），可對該患者施行單一劑量間隔之該抗扎_13結合劑或拮 抗劑，藉此可減少該等症狀及/或延緩該疾病或病症之發 11 200848429 作。類似地，當治療其特徵為該疾病或病症之復發性潮红 或發作之慢性疾病時，可在與—或多種該疾病或病症有關 之症狀顯現前(砂在該等錢全㈣現前）進行該il_⑽ 合劑或拮抗劑之投藥。用於治療過敏性鼻炎或其它過敏^ 5疾病之方法實例可包括在接觸過敏原，例如在季節性接觸 過敏原之前，例如在過敏原大量出現之前，首先 合劑或拮抗劑進行治療。此種治療法可包括單—治療間 隔，例如單-劑量之該IL_13結合劑或枯抗劑。在其它實施 例中’該m結合_拮抗_與職反應免疫治療法一 1〇起投與。❹該IL_13結合劑或拮抗㈣與過敏反應免疫 劑’例如含一或多種過敏原，諸如豚草、塵蜗、及黑麥草 之疫苗-起投與。可重複飢·13結合劑或拮抗劑之投藥， 直到在患者體«得衫之纽程度為止。 在/、匕貝把例中，係投與能有效減少或預防或延緩該 …L-U相關疾病或病症之一或多種症狀之發作的數量之該 IL_13結合劑或拮抗劑。例如可投與該IL_13結合劑或拮抗 d其投與践降低以下之—或多種：⑴m(例如游離態 IL-13)在患者體内之位準；⑼嗜伊紅趨化因子在患者體内 之位準；（iii)組織胺或白三稀素在患者體内之位準；（iy)藉 巨大、.，田月匕或曰驗細胞（例如血液嗜鹼細胞）而釋放之組織胺 或白三稀素的數量；（v)該Ig£在患者體内之滴定濃度；及/ 或(vi)患者之呼吸症狀的一或多種變化(例如支氣管縮小， 例如呼吸困難、喘鳴、Μ、呼吸短促及/或難以進行正常 曰常活動）。 12 200848429 在其它實施例中，該IL-13結合劑或拮抗劑可抑制或減 少IL-13或IL-13受體（例如IL-13受體《 1或1L_13受體α 2)之 一或多種活性。可使用文中所述之IL-13結合劑或拮抗劑減 少之生物活性實例包括，但不限於以下之一或多種：CD23 5 表現性之誘發；藉人類B細胞而產生1gE ;轉錄因子，例如 STAT蛋白質（例如STAT6蛋白質）之磷酸化反應；經抗原誘 發之活體内嗜伊紅血球增多；經抗原誘發之活體内支氣管 縮小；及/或經藥物誘發之活體内呼吸道機能亢進。使用 IL-13/IL-13R之抬抗劑所進行之枯抗作用未必顯示該 10 IL-13/IL-13R多肽之生物活性的總消除。 在一實施例中，用於治療及預防方法中之該抗乩—^抗 體分子係描述在文中。在其它實施例中，用於該等方法中 之該抗IL-13抗體分子係描述在2005年12月29日公開之WO 05/123126及其美國同等申請案u.s· 06/0063228(這兩種申 15 請案之全文在此皆併入本案以為參考資料）中。例如該抗體 分子為可干擾(例如抑制、阻斷或降低工或 IL-13R«2中之抗原決定位的結合性。在其它實施例中，該 抗體分子可結合至包括IL-13及IL_13Ral的複合體。在實施 例中，該抗體分子可結合至U3並干擾(例如抑制、阻斷或 2〇 2肛_13及1L-13Ra 1之複口體與IL-4Ra的結合性。在其 匕貝^例中，在注射後至少6週，於羊模式中該抗體分子 可’例如提供抗接觸结蟲屬抗原之注射後保護作用。 在一實施例中，該1L·13結合劑或拮抗劑係與另-治療 」起技與。該組合治療物可包括可以與-或多種另外治 13 200848429 療劑，例如一或多種如文中更具體描述之細胞素及生長因 子抑制劑量、免疫抑制劑、消炎劑(例如全身性消炎劑）:代 謝抑制劑、酶抑制劑、及/或細胞毒殺劑或細胞生長抑制劑 共調配及/或共投與之IL-13結合劑，例如抗比_13抗體分 5 子。該1L-丨3結合劑及另外治療劑亦可分別投與。 可以與IL-13結合劑共投與及/或共調配之較佳另外治 療劑實例包括：吸入性類固醇；K足效劑，例如短效性^ 長效性/5-促效劑；白三烯素或白三烯素受體之拮抗劑；組 合藥物，諸如ADVAIR® ; IgE抑制劑，例如抗IgE抗體(例如 10 XOLAIR®);磷酸二醋酶抑制劑(例如PDE4抑制劑）；黃嘌呤 素，抗膽素激導性藥物；巨大細胞安定劑，諸如色甘酸 (mnnolyn) ; IL-4抑制劑(例如IL-4抑制劑抗體、iL_4受體融 合物或IL_4突變蛋白）；IL-5抑制劑；嗜伊紅趨化因子/CCR3 抑制劑；及抗組織胺藥物。此等組合可用以治療氣喘及其 15 它呼吸疾病。可以與1L-U結合劑共投與及/或共調配之治療 劑的另外貫例包括以下之一或多種：TNF拮抗劑（例如tnF 受體之可溶性片段，例如p55或p75人類TNF受體或其衍生 物，例如75kdTNFR-IgG(75kDTNF受體-IgG融合蛋白質， ENBREL®)) ; TNF酶拮抗劑，例如TNFa轉化酶(TACE)抑 2〇 制劑；毒蕈鹼受體拮抗劑；TGF-θ拮抗劑；7干擾素；，比 非尼酮（perfenidone);化療劑，例如阿美蘇嗓呤 (methotrexate)、雷夫米德（leflunomide)或西羅里莫 (sirolimus)(雷帕黴素（rapamycin))或其類似物，例如 CCI-779 ; COX2及cPLA2抑制劑；NSAIDs ;免疫調節劑； 14 200848429 p38抑制劑、TPL-2、Mk-2及NFPB抑制劑。 本申請案另一方面係提供包括藥學上可接受載劑及至 少一種IL-13結合劑，例如抗IL-13抗體分子之組成物，例如 藥學組成物。在一實施例中，該等組成物，例如藥學組成 5 物包含2或多種IL-13結合劑，例如2或多種抗IL-13抗體分子 之組合。亦可使用該IL-13結合劑（例如抗-IL_13抗體分子) 及藥物，例如如文中所述之治療劑（例如抗組織胺藥物、抗 白三烯素藥物、細胞素或生長因子抑制劑、免疫抑制劑、 消炎劑（例如全身性消炎劑）、代謝抑制劑、酶抑制劑、及/ 10 或細胞毒殺劑或細胞生長抑制劑中之一或多種）的組合。 在又另一實施例中，文中所述之方法進一步包括：評 估IL-13結合劑（例如如文中或WO 15/123126中所述之抗 IL-13抗體分子）在患者，例如人類或非人類患者體内之效 力。除了文中所述之治療及/或診斷方法外，還可僅進行該 15 評估IL-13結合劑之效力的方法。在實施例中，係藉評估以 下參數之一或多種而鑑定該IL-13結合劑在減少肺症狀（例 如嗜伊紅血球增多、黏液產生、支氣管縮小、支氣管痙攣） 之效力·⑴檢測该IL-13在試樣中之位準（例如檢測與如文中 所述之抗IL-13抗體未結合及/或結合之該IL_13的位準）；⑴) 2〇 測定嗜伊紅趨化因子在試樣中之位準；（iii)檢測組織胺及/ 或白三烯素之釋放量；（iv)檢測IgE-滴定濃度（全部及/或過 破原特異性IgE)，（v)檢測半脱胺酸基白三烯素受體1或2蛋 白質或mRNA位準之任何變化；（vi)評估患者之症狀（例如 支氣管縮小，例如呼吸困難、喘鳴、咳嗷、呼吸短促及/ 15 200848429 或難以進行正常日常活動）之變化；（Vii)評估患者之肺機能 (例如在1秒内之用力呼氣流量(FEV1); (viii)評估一或多種 細胞素（例如MCP-l ' TNFa&/或介百素_6(11^_6))位準之變 化；（ix)評估得自患者之試樣的炎症細胞及/或標記之變 5 化；及/或(X)評估該比-13結合劑之至少一藥物動力學/藥理 動力學(PK/PD)參數，例如如文中所述之pK/pD參數。可在 對患者投與该IL-13結合劑前及/或後（在單一或多投藥 後)(例如於開始治療後每隔特定時間）進行參數⑴_⑷之評 估。可藉臨床醫師或支援人員而進行該評估。該試樣可以 10 是生物試樣，諸如血清、血漿、血液或痰或組織試樣。相 對於預定位準（例如治療前及後之比較值），在(i)-(x)中之一 或多項内的變化，例如減少，表示該IL-13結合劑能有效減 少該患者之肺炎症。在實施例中，該患者為人類患者，例 如成人或兒童。 15 在實施例中，以電腦可讀取記錄媒體記錄或記憶不論 是否符合特別挑選之效力標準之效力值或表示。可將符合 特別挑選之效力標準之此等數值或表示值列示在產物插 頁、手冊(例如美國藥典(U.S· Pharmac〇peia)或任何其它資 料上，例如可分配供，例如商業用途或提交至美國或外國 20 管理機構之標籤。 本發明之另一方面係表示評估或選用虬—^結合劑或 拮抗劑’例如抗IL-13抗體分子(例如如文中或w〇 05/123126 中所述之IL-13抗體）之方法。該方法包括： 得到該IL-13結合劑在患者，例如人類或動物患者中之 16 200848429 至少一藥物動力學/藥理動力學(PK/PD)參數的試驗值，例 如平均試驗值；並 比較所得到之試驗值，例如平均試驗值，及至少一參 考值以評估或選擇該IL-13結合劑。 5 可使用非區室（non-compartmental)法、區室法（例如雙 區室模式法）、及/或PK/PD模式以估計該ΡΚ/PD參數。該 PK/PD參數可選自以下之一或多種：該抗IL-13抗體分子之 活體内濃度（例如在血液、金清、血漿及/或組織中之濃度）； 該抗1L-13抗體分子之清除率（CL);該抗體IL-13抗體分子之 10穩定體積分佈（Vdss);該抗IL-13抗體分子之半衰期(t1/2);該 抗IL-13抗體分子之生物可利用率；該抗IL_13抗體分子之劑 里標準化最大血液、血清或血漿濃度；該抗几-^抗體分子 之劑量標準化曝露；《抗IL_13抗體分子之組朗血清比。 在一相關實施例中，可自該雙區室或pK_pD模式估計 15該叹™參數。該腺D參數可選自以下之-或多種：得自 中央區至之凊除率（CLAb);該中央區室與周邊區室間之分佈 /月除率(CLd，Ab);結合速率常數(κ〇η);解離速率常數·, °亥Ab-IL-13複合體之血清清除率(CL複合體）；IL-13產生之内源 r生速率兩數除UIL_13之血清清除率(Ksyn/CLu3”抗m 抗體IL 13複合體在血液、血清、血漿或組織内之活體内濃 = (CAb-1L-13及C(Ab_1L·13)2);或游離態IL_13(Cil_13)在血液、血 清、血漿或組織中之活體内濃度。 。亥比k法可包括測定該試驗值是否與該參考值具有預 另J挑4之關係，例如測定其是否在該參考值之範圍内（該範 17 200848429 圍點包括在内或不包括）；等於或大於該參考值。在實 施例中，若贫# 2士 一 w忒驗值符合預別挑選之關係，例如在該參考 範圍内，則選擇該IL_13結合劑。 5 10 15 20 13尨合劑包括全長抗體之實施例中，該參考 值’例如平均參考值，包括以下之一或多種:在對患者靜 脈注射飢_13結合_，在_5魏9、⑽6魏5、嶋 或0.067至〇·2宅升/小時/公斤範圍内之清除率(CL)平 句值(例如對人類靜脈注射後，在約().G5至0.5、0.06至0.1、 或0.065至〇.15宅升/小時/公斤範圍内之平均值）；對患者 (例如對照組或病患）靜脈注射後，小於約150、130、120、 110、100、90、80或7G毫升/公斤之平均穩態分佈體積(Vdss) 值（例如對患者靜脈、皮下、腹膜内注射後，約5〇_8〇〇、 70-750、1〇〇至 6〇〇、400-800、500-700、550至750、552至 696、576至 720、600至 800、650至 750、670至 725、或 670 至710小時之平均半衰期（tl/2)(例如對人類靜脈或皮下注射 後，約400-800、480-780、或500-700之平均值心2);對患者 投藥，例如皮下或腹膜内注射後，約50至1〇〇、60至90、或 70至85°/◦之平均生體可用率；對患者靜脈注射後，約2至 40、4至25、5至22、10至20、20至40、或丨丨至^微克/毫升 之劑量標準化（一參數值除以劑量）平均最大血清或血漿濃 度’或對患者皮下注射後’約〇·1至30、0.5至15、0.75至12、 1至10、或3至8微克/毫升之劑量標準化平均最大血清或血 漿濃度、對患者皮下注射後，約或6-200、6_4〇、20-50、或 40-120小時之平均Tmax ;對患者靜脈注射後，約8〇〇至 18 200848429 18,000、600至 15,000、500至 12,〇〇〇、300至1〇 〇〇〇、15〇至 5,000(微克小時/毫升)/(*克/公斤）之平均劑量標準化曝露 量（亦即自零至無限之濃度-時間分析曲線下的面積除以劑 里的平均值）’或對患者皮下注射後，4〇〇至μ⑼、5〇〇至 5 15’000、600至 12，議、800至 10,000、1，〇〇〇至5,〇〇〇(微克小 時/毫升)/(毫克/公斤）之平均劑量標準化曝露量；小於約 0.8、0.6、0.5、0.4之平均組織對血清比；或抗體分子在一 選自由肺、月臟、肝臟、心臟及脾臟所組成之群組的組織 内之平均優先曝露量（例如於特定時間點下，曝露量或組織 10 濃度大於50%、60%、70%或大於其它器官）。 在該IL-13結合劑包括抗體分子(例如單鏈抗體、Fab片 段、（Fab)’2、VH、VHH}、Fv、單鏈Fv片段或含該抗體分子 之抗原結合部位的融合蛋白質）之抗原結合部位的實施例 中，該參考值，例如平均參考值，包括以下之〆或多種： 15對患者投藥，例如皮下注射、靜脈注射、腹膜内注射後， 約 0.1 至 100、0.2至75、0.3至 50、〇·4至45、〇 5至30、0.5至 15、0.5至10、或〇.5至5小時之平均半衰期⑹2)。 在该IL-13結合劑係與亿_13複合之實施例中，該參考 值，例如平均參考值，包括對非人類靈長目動物或人類患 20者投藥，例如皮下注射、靜脈注射、腹膜内注射後，小於 0.02毫升/小時/公斤、〇·_毫升/小時/公斤、〇·_毫升/小 時/公斤、0.003毫升/小時/公斤或〇 〇〇2毫升/小時/公斤之平 均清除率。在其它實施例中，係使用如文中所述之雙區室 整合之PK-PD模式評估該結合劑（例如‘‘連續結合 19 200848429 性）。该模式包括中央區室（CAb，V)及周邊區室（C2，Ab, v2)。 在此等實施例中，係評估以下PK/PD參數之一或多種：該 抗IL-13抗體分子之活體内濃度(例如在血清、血漿、血液、 及/或組織内之濃度）(CAb);得自該中央區室之清除率 5 (CLAb)，在该中央區室與周邊區室間之分佈清除率 (CLd,Ab);結合速率常數(κ〇η);解離速率常數(Kw);該 Ab-IL-13複合體之清除率（cLe〇mplex);或m產生之内源性 速率常數除以IL-13之清除率（例如血清清除 率)(Ksyn/CLIL_13)。 10 使用其中该1L-13結合劑為全長抗體之雙區室模式所 評估之IL-13結合劑的代表性參考值，例如平均參考值包括 以下之一或多種：對患者靜脈注射該儿_13結合劑後，得自 a亥中央區至之清除率（CLAb)平均值在約〇·仍至ο”、0 06至 0.5、0.065至0.3、或0.67至0.2毫升/小時/公斤之範圍内（例 15如對人類靜脈注射後，平均CLAb值在約〇.〇5至〇.5、〇〇6至 0.1、或0.065至0.15¾升/小時/公斤之範圍内）；對患者靜脈 注射後，在5亥中央區至内之分佈體積小於約1 、1 、1 2〇、 110、90、80或70¾升/公斤（例如對人類靜脈注射後，小於 約120、90、80或70毫升/公斤）；對患者靜脈注射後，在該 2〇 中央區室與周邊區室間之分佈清除率（CLd，Ab)平均值在約 0.0001-6.0、0.0005至5.0、0.00067至4.5、〇 〇〇1 至4 0毫升/ 小時/公斤之範圍内（例如對人類靜脈注射後，0 0002至5.7、 或0.0005至4.6毫升/小時/公斤）；對患者靜脈注射後，該周 邊區室之體分佈（V2)平均值小於150、130、120、110、90、 20 200848429 80或70毫升/公斤（例如對人類靜脈注射後，小於約12〇、9〇、 8〇或7〇毫升/公斤）；結合速率常數(Kon)平均值在約0.9至 0.0(Π、0.5至0·(Π、0.3至0.02、或㈣26至⑽6毫微莫耳濃度 (ηΜ )天之|巳圍内，解離速率常數(κ。^平均值在約〇·4至 5 0·0000卜 〇·3至〇·〇〇〇卜 〇·2至〇·〇(Π、或〇.19至0 01 之範圍内； 該Ab-IL-13複合體之血清清除率（CL_^iex)平均值為約〇·4〇 至0.00083、0.25至0.0042、〇」7至0.0083、0.15至0.0125毫 升/小時/公斤，或IL-13產生之内源性速率常數除以^43之 血清清除率（Ksyn/CLIL_n)平均值為約〇·〇9至0 0001 ' 〇 〇6至 10 〇·〇〇1、〇·〇5至0.003、0.045至〇·〇〇5ηΜ。 在實施例中，係以，例如電腦可讀取媒體記錄或記憶 不論是否符合預別挑選之關係之試驗值或顯示值。可將符 合預別挑選之關係的此等試驗值或顯示值列示在產物插 頁、手冊（例如美國藥典）或任何其它資料上，例如可分配 15 供，例如商業用途或提交至美國或外國管理機構之標籤。 在實施例中，提供試驗值之步驟包括獲得該抗體分子 之試樣，例如抗體培養物之試樣批，並測試文中所述藥物 動力學參數中之至少一種。自方法觀點，例如用以監測或 確保批次一致性或品質之方法而言，文中所述之方法很有效。 2〇 在實施例中，係根據該試驗值是否符合所預挑選之關 係（例如在所提供該參考值之範圍内）而作出決定或採取步 驟。例如該抗IL-13抗體分子可經分類、選擇、釋放（進行交 易）或保留、加工成藥物產物、裝運、移至新地點、調配、 標記、包裝、出售或供銷售。 21 200848429 在其它實施例中，係在以約1至100毫克/公斤、 毫克/公斤或1至2毫克/公斤之劑量進行該抗體分子之單一 或多投藥後，獲得所提供之該試驗值。 在其它實施例中，該患者為人類或非人類動物，例如 5 α齒齒目動物或靈長目動物。例如該患者可選自以下之一或 多種：例如嚙齒目動物（例如小鼠、大鼠）、靈長目動物（例 如猴子或人類，例如病患）。該人類病患可具有約45_13〇公 斤或約50-80公斤之體重。典型上為60公斤。 本發明另一方面係提供決定用於患者之經IL-13媒介 10 疾病之IL-13結合劑（例如抗il-13抗體分子，例如如文中或 WO 05/123126中戶斤述之IL-13抗體）的治療方式（例如劑量、 時間選擇或用藥方式）之方法。該方法包括： 得到該IL-13結合劑在，例如人類或動物患者體内之至 少一種藥物動力學/藥理動力學(PK/PD)參數的試驗值，例 15 如平均試驗值。 比較所得到該試驗值，例如平均試驗值，與至少一參 考值，例如平均參考值；並 根據至少一試驗值對該參考值之比較而選擇劑量、時 間選擇或用藥模式中之一或多種。 20 可使用非區室（non_compartmental)法、區室法（例如雙 區室模式法）、及/或PK/PD模式以估計該PK/PD參數。該 PK/PD參數可選自以下之一或多種：該抗IL-13抗體分子之 活體内濃度（例如在血液、血清、血漿及/或組織中之濃度）； 該抗IL-13抗體分子之清除率（CL);該抗體IL-13抗體分子之 22 200848429 穩定體積分佈(Vdss);該抗IL-13抗體分子之半衰期(t1/2);該 抗IL-13抗體分子之生物可利用率；該抗il-13抗體分子之劑 量標準化最大血液、血清或血漿濃度；該抗IL-13抗體分子 之劑量標準化曝露；或該抗IL-13抗體分子之組織對血清比。 5 在一相關實施例中，可自該雙區室或PK-PD模式估計 該PK/PD參數。該PK/PD參數可選自以下之一或多種：得自 中央區室之清除率（CLAb);該中央區室與周邊區室間之分佈 清除率(CLd，Ab);結合速率常數(κ〇η);解離速率常數(κ_); 該Ab-IL-13複合體之血清清除率（cu合體）；IL_13產生之内源 1〇性速率常數除以1L_13之血清清除率(Ksyn/CLu);抗IL_13 抗體IL-13複合體在血液、血清、血聚或組織内之活體内濃 度（CAb-1L_13及C(‘il-i3)2);或游離態IL-13(Cil_13)在血液、血 /月、血漿或組織中之活體内濃度。 X匕較法了包括測定该試驗值是否與該參考值具有預 15別挑選之關係，例如測定其是否在該參考值之範圍内（該範 圍之端點包括在内或不包括）；等於或大於該參考值。在實 靶例中，右该試驗值符合預別挑選之關係，例如在該參考 值之範圍内，則選擇該IL-13結合劑。 在抓·13結合劑包括全長抗體之實施例中，該參考 20值，例如平均參考值，包括以下之一或多種：在對患者靜 脈注射飢他合财，在細5⑽、議皿5〇〇65 至0.3、或〇.〇67至〇2毫升/小時/公斤範圍内之清除率㈣平 均值(例如對人_脈注射後，在纟_纽5、㈣㈣卜 或_至〇.15毫升/小時/公斤範圍内之平均CL值）；對患者 23 200848429 (例如對照組或病患）靜脈注射後，小於約150、130、120、 110、100、90、80或70毫升/公斤之平均穩態分佈體積(Vdss) 值（例如對患者靜脈、皮下、腹膜内注射後，約50-800、 70-750、100至600、400-800、500-700、550至 750、552至 5 696、576至720、600至 800、650至750、670至725、或670 至710小時之平均半衰期（t1/2)(例如對人類靜脈或皮下注射 後，約400-800 ' 480-780、或500-700之平均值tl/2);對患者 投藥，例如皮下或腹膜内注射後，約50至1〇〇、60至90、或 70至85%之平均生體可用率；對患者靜脈注射後，約2至 10 40、4至25、5至22、10至20、20至40、或11至15微克/毫升 之劑量標準化（一參數值除以劑量）平均最大血清或血漿濃 度’或對患者皮下注射後，約〇·1至30、〇·5至15、0.75至12、 1至10、或3至8微克/毫升之劑量標準化平均最大血清或血 漿濃度、對患者皮下注射後，約或6_2〇〇、6·4〇、2〇_5〇、或 15 40_120小時之平均Tmax ;對患者靜脈注射後，約8〇〇至 18.000、 600至 15,000、500至 12,〇〇〇、300至 1〇,〇〇〇、150至 5,〇〇〇(微克小時/毫升)/(毫克/公斤）之平均劑量標準化曝露 里（亦即自零至無限之濃度-時間分析曲線下的面積除以劑 畺的平均值）’或對患者皮下注射後，4⑼至⑻、5⑻至 15.000、 600至 12,00G、8〇〇至 1〇,〇〇〇、！，刪至5,刪(微克小 時/毫升)/(毫克/公斤）之平均劑量標準化曝露量；小於約 二_8 〇·6、G·5、G·4之平均組織對血清比；或抗體分子在- 4自由肺、腎臟、肝臟、心臟及脾臟所組成之群組的組織内 之平均優祕S量⑽如於特定時_下，曝露量或組織濃度 24 200848429 大於50%、60%、70%或大於其它器官）。 在該IL-13結合劑包括抗體分子（例如單鏈抗體、Fab片 段、（Fab)’2、VH、VHH)、Fv、單鏈Fv片段或含該抗體分子 之抗原結合部位的融合蛋白質）之抗原結合部位的實施例 5 中，該參考值，例如平均參考值，包括以下之一或多種： 對患者投藥，例如皮下注射、靜脈注射、腹膜内注射後， 約 0.1 至 100、0.2至75、0.3至50、0.4至45、0.5至30、0.5至 15、0.5至10、或0.5至5小時之平均半衰期（t1/2)。
10 15 20 在該IL-13結合劑係與IL-13複合之實施例中，該參考 值，例如平均參考值，包括對非人類靈長目動物或人類患 者投藥，例如皮下注射、靜脈注射、腹膜内注射後，小於 0.02毫升/小時/公斤、0.009毫升/小時/公斤、0.004毫升/小 時/公斤、0.003毫升/小時/公斤或0.002毫升/小時/公斤之平 均清除率。在其它實施例中，係使用如文中所述之雙區室 整合之PK-PD模式評估該IL-13結合劑（例如“連續結合 性”）。該模式包括中央區室（CAb，V)及周邊區室（C2,Ab，V2)。 在此等實施例中，係評估以下PK/PD參數之一或多種：該 抗IL-13抗體分子之活體内濃度（例如在血清、血漿、血液、 及/或組織内之濃度）(CAb);得自該中央區室之清除率 (CLAb);在該中央區室與周邊區室間之分佈清除率 (CLd，Ab);結合速率常數(KQn);解離速率常數(KQff);該 Ab-IL-13複合體之清除率（CLeQmplex);或IL-13產生之内源性 速率常數除以IL-13之清除率（例如血清清除 率）(Ksyn/CLIL_13)。 25 200848429 使用其中该IL-13結合劑為全長抗體之雙區室模式所 評估之IL-13結合劑的代表性參考值，例如平均參考值包括 以下之一或多種：對患者靜脈注射該比-13結合劑後，得自 該中央區室之清除率（CLAb)平均值在約〇 〇5至〇 9、〇 〇6至 5 〇·5、0·065至〇·3、或〇·67至〇.2毫升/小時/公斤之範圍内（例 如對人類靜脈注射後，平均CLAb值在約〇 〇5至〇 5、〇 〇6至 0.1、或0.065至0.15毫升/小時/公斤之範圍内）；對患者靜脈 注射後，在該中央區室内之分佈體積小於約15〇、13〇、12〇、 110、90、80或70*升/公斤（例如對人類靜脈注射後，小於 10約120、90、8〇或7〇毫升/公斤）；對患者靜脈注射後，在該 中央區室與周邊區室間之分佈清除率（CL—平均值在約 0.0001-6.0、0.0005至5.0、〇·00067至4 5、〇 〇〇1至4 〇毫升/ 小時/公斤之範圍内（例如對人類靜脈注射後，〇 〇〇〇2至5.7、 或0.0005至4.6毫升/小時/公斤）；對患者靜脈注射後，該周 15 邊區室之體分佈（V2)平均值小於150、130、120、11〇、90、 80或70毫升/公斤（例如對人類靜脈注射後，小於約12〇、卯、 80或70毫升/公斤）；結合速率常數(κ〇η)平均值在約〇.9至 0.001、0.5至0.01、0_3至〇·〇2、或〇 026至0.06毫微莫耳濃度 (ηΜ·1)天之範圍内，解離速率常數(K〇ff)平均值在約〇.4至 20 0.00001、〇·3至0·00(Π、0.2至0·0(Η、或0」9至0 01 之範圍内； 該Ab-IL-13複合體之血清清除率(CL_piex)平均值為約〇·4〇 至0.00083、〇·25至0·0042、〇.17至〇 〇〇83、〇 15至〇 〇125 毫 升/小時/公斤，或IL-13產生之内源性速率常數除以几_13之 血清清除率（Ksyn/CL^3)平均值為約〇 〇9至〇 〇〇〇1、〇 〇6至 26 200848429 0.001、0.05至0.003、0.045至〇·〇〇5ηΜ。 可部份根據該試驗值與參考值之比較而選擇治療形式 (例如劑量、時間選擇或用藥模式）。該比較可包括測定該試 驗值是否與參考值具有預挑選的關係，例如測定該試驗值 5 是否在參考值之範圍内（包括在該範圍之端點内或不包 括）；等於或大於該參考值。例如若該結合劑之半衰期在該 參考值所詳述之範圍内，開業醫師可決定投藥頻率可減 至，例如每月一次或兩次。一起或獨立投藥，可投與，例 如小於5、4、3、2、1毫克/公斤之一的低劑量該結合劑。 10 基於該比較而選用之治療形式可根據爭議中之該IL-13相 關疾病而不同。就呼吸疾病，例如氣喘而言，可藉吸入、 皮下或靜脈注射方式傳遞該IL-13結合劑。 在實施例中，該患者為人類或非人類動物，例如喷齒 目動物或靈長目動物。例如該患者可選自以下之一或多 15 種：例如嚙齒目動物（例如小鼠、大鼠）、靈長目動物（例如 猴子或人類，例如病患）。該人類可具有約45-130公斤或約 50-80公斤之體重，典型上為60公斤。該人類可以是對照組 或病患。 本發明另一方面之特徵為提供治療患者，例如如文中 20 所述之患者之IL-13相關疾病（例如如文中所述之〗L-13疾病） 的方法，其包括對罹患或有罹患該IL-13相關疾病之危險的 患者投與有效量之該IL-13結合劑，例如使用文中所述 PK/PD參數之一或多種所評估或選擇之該抗IL-13抗體分子。 本發明另一方面之特徵為指示或轉移有關於使用 27 200848429 M3結合劑’例如抗以3抗體分子以治雜_13相關疾病 之貢訊給接受者(例如病患、藥劑師、護理照料者、臨床醫 師、醫療人員之成員、製造商或批發商）的方法。該方法包 括指示或發送資訊給該接受者使其瞭解，該IL-13結合劑具 5有PK/PD翏數之至少一試驗值，例如平均試驗值該叹㈣ - 參數係選自以下所組成之群組： · 對患者#脈注射該IL-13結合劑後，清除率(CL)平均值 在約0.05至0·9、0.06姐5、〇 〇65至〇 3、或〇 〇67至〇 2毫升/ 小時/公斤之範圍内（例如人類靜脈注射後，平均cl值在約 10 〇.05至0·5、0·06至〇·卜或0.065至0.15毫升/小時/公斤之範圍 内），其中該IL-13結合劑包括全長抗體；對該患者（例如對 照組或病患）靜脈注射後，平均穩態分佈體積(Vdss)值小於約 150、130、120、11〇、1〇〇、9〇、8〇或 7〇毫升/公斤，其中 該IL-13結合劑包括全長抗體；對該患者投藥，例如靜脈、 15 皮下、腹膜内注射後，平均半衰期（t1/2)為約50至800、70至 750、100至600、400至 800、500至700、550至750、552至 696 、 576至720 、 600至800 、 650至750 、 670至725 、或670 至710小時(例如對人類靜脈或皮下注射後，平均11 / 2為約4 〇 〇 至800、480至780、或500至700小時）；對患者投藥，例如 20 皮下或腹膜内注射後，平均生體可用率為約50至100、60至 · 90、或70至85% ;對該患者靜脈注射後，劑量標準化（一參 數值除以該劑量）平均最大血清或血漿濃度為約2至40、4至 25、5至22、10至20、20至40、或11至15微克/毫升，或對 該患者皮下注射後，約0.1至30、0.5至15、0_75至12、1至 28 200848429 10、或3至8微克/毫升；對該患者皮下注射後，平均Tmax 為約或6至200、6至40、20至50、或40至120小時；對該患 者靜脈注射後，平均劑量標準化曝露量（亦即在自時間零至 無限之濃度-時間分佈曲線下的面積除以該劑量之平均值) ' 5 為約 800 至 18,000、600 至 15,000、500 至 12,000、300 至 • 10,000、150至5,000(微克小時/毫升)/(毫克/公斤），或對該 患者皮下注射後，400至18000、500至15,000、600至12,000、 800至10,000、1，〇〇〇至5,000(毫克小時/毫升)/(毫克/公斤）； / 、 平均組織對血清比小於約0.8、0·6、0·5、0·4 ;或抗體分子 10 在一選自由肺臟、腎臟、肝臟、心臟及脾臟所組成之群組 的組織内之平均優先曝露量（例如於特定時間點下之曝露 量或組織濃度大於50%、60%、70%或大於其它器官），其 中該IL-13結合劑包括全長抗體；對該患者投藥，例如皮 下、靜脈、腹膜内注射後，平均半衰期（t1/2)為約0.1至100、 15 〇·2至75、0.3至50、0.4至45、0.5至30、0.5至 15、0.5至 10、 0.5至5小時，其中該IL-13結合劑包括該抗體分子(例如單鏈 I. 抗體、Fab片段、（Fab)，2、VH、VHH)、單鏈Fv片段、或含該 抗體分子之抗原結合部位之融合蛋白質）之抗原結合部 位；對該患者投藥後，平均清除率小於0.004毫升/小時/公 20 斤、〇·〇03毫升/小時/公斤、或0.002毫升/小時/公斤，其中該 IL-13結合劑係與il-13複合。 在其它實施例中，係使用如文中所述之雙區室（例如 ‘‘連續結合性”)模式評估該IL_13結合劑之pk/PD參數。該雙 區室模式包括中央區室（CAb，V)及周邊區室（C2,Ab，V2)。在 29 200848429 此等實施例中，係評估以下PK/PD參數中之一或多種：該 抗體IL13抗體分子之活體内濃度（例如在血清、血漿、及/ 或組織中之濃度)(CLAb)、在該中央區室與周邊區室間之分 佈清除率（CLd，Ab)、結合速率常數(κ〇η)、解離速率常數 5 (K°ff)、該勝1L]3複合體之金清清除率（CL_plex)或IL_13 產生的内源性速率常數除以IL-13之血清清除率 (Ksyn/CLIL_13)。 使用其中該IL-13結合料全長抗體之雙區室模式所 評估之IL-13結合劑的代表性參考值，例如平均參考值包括 10以下之一或多種·對患者靜脈注射該IL-13結合劑後，得自 該中央區室之清除率（CLAb)平均值在約〇〇5至〇9、〇 〇6至 0.5、0.065至0.3、或0.67至〇·2毫升/小時/公斤之範圍内（例 如對人類靜脈注射後，平均CLAb值在約〇〇5至〇 5、〇〇6至 0.1、或0.065至0.15毫升/小時/公斤之範圍内）；對患者靜脈 15注射後，在該中央區室内之分佈體積小於約150、、 110、90、80或70毫升/公斤（例如對人類靜脈注射後，小於 約120、90、80或70毫升/公斤）；對患者靜脈注射後，在該 中央區室與周邊區室間之分佈清除率(CL_)平均值在約 0.0001-6.0、0._5至5.0、〇._67至4 5、〇 謝至4 〇毫升/ 20小時/公斤之範圍内（例如對人類靜脈注射後，0.0002至5.7、 或0.0005至4.6毫升/小時/公斤）；對患者靜脈注射後，該周 邊區至之體为佈（V2)平均值小於bo、、120、110、90、 80或70毫升/公斤（例如對人類靜脈注射後，小於約12〇、卯、 80或70毫升/公斤）；結合速率常數(κ〇η)平均值在約〇·9至 30 200848429 0.001、0.5至0.01、0.3至0.02、或〇·〇26至〇·〇6毫微莫耳濃度 (ηΜ-1)天-1之範圍内，解離速率常數(K〇ff)平均值在約〇4至 0·000(Π、0·3至0·0001、0.2至0·001、或〇.19至〇 〇1 之範圍内； 該Ab-IL-13複合體之血清清除率（CLe—x)平均值為約〇·4〇 5 至0·00083、〇·25至0.0042、0.17至〇·〇〇83、〇 15至〇 〇125 毫 升/小時/公斤，或IL-13產生之内源性速率常數除以UR 血清清除率(Ksyn/CLIL_13)平均值為約〇 〇9至〇 〇〇〇1、〇 〇6至 0.001、0_05至0.003、0.045至〇·〇〇5ηΜ。 在實施例中，該方法包括，例如以電腦可讀取媒體記 10錄或記憶該等試驗值中之一或多種。可將此等試驗值列示 在產物插頁、手冊(例如美國藥典）或任可其它資料上，例如 可分配供，例如商業用途或提交至美國或外國管理機構之 標籤。 在貫施例中，該方法進一步包括對患者投與該儿_13結 15合劑。在實施例中，劑量、時間選擇或該結合劑(例如抗體 分子）之投藥模式中之-或多種係至少部份根據該試驗值 (該抗體分子之至少-PK/PD參數)與參考值，例如文中所述 之參考值之比較。 本發明另-方面之特徵為治療罹患或有罹患該m 2〇相關疾病之危險的患者之：[L-13相關疾病的方法。該方法包 括： 向護理照料者或患者說明IL_13結合劑，例如抗IL_13 抗體具有PK/PD參數之至少—試驗值，例如平均試驗值， 該PK/PD參數係選自以下所組成之群組： 31 200848429 對患者靜脈注射該IL-13結合劑後，清除率(CL)平均值 在約0.05至0.9、0.06至0.5、0.065至0.3、或0.067至0.2毫升/ 小時/公斤之範圍内（例如人類靜脈注射後，平均CL值在約 0.05至0.5、0.06至0.1、或0.065至0.15毫升/小時/公斤之範圍 5 内），其中該IL-i3結合劑包括全長抗體；對該患者(例如對 照組或病患）靜脈注射後，平均穩態分佈體積(Vdss)值小於約 150、130、120、110、1〇〇、90、80或70毫升/公斤，其中 該IL-13結合劑包括全長抗體；對該患者投藥，例如靜脈、 皮下、腹膜内注射後，平均半衰期（tl/2)為約5〇至800、70至 10 750、100至 600、400至 800、500至700、550至750、552至 696、576至 720、600至 800、650至 750、670至 725、或 670 至710小時(例如對人類靜脈或皮下注射後，平均ti/2為約4〇〇 至800、480至780、或500至700小時）；對患者投藥，例如 皮下或腹膜内注射後，平均生體可用率為約5〇至1〇〇、60至 15 90、或70至85% ;對該患者靜脈注射後，劑量標準化（一參 數值除以該劑量）平均最大血清或血漿濃度為約2至4〇、4至 25、5至22、10至20、20至40、或11至15微克/毫升，或對 該患者皮下注射後，約〇_1至30、0.5至15、0.75至12、1至 10、或3至8微克/毫升；對該患者皮下注射後，平均Tmax 20 為約或6至200、6至40、20至50、或40至120小時；對該患 者靜脈注射後’平均劑量標準化曝露量（亦即在自時間零至 無限之濃度-時間分佈曲線下的面積除以該劑量之平均值） 為約 800至 18,000、600至 15,〇〇〇、500至 12,000、300至 1〇,〇〇〇、 150至5,000(微克小時/毫升)/(毫克/公斤），或對該患者皮下 32 200848429 注射後，400至 18000、500至 15,000、600至 12,〇〇〇、800至 10,000、1，000至5,000(毫克小時/毫升)/(毫克/公斤）；平均組 織對血清比小於約0.8、0.6、0.5、0·4 ;或抗體分子在一選 自由肺臟、腎臟、肝臟、心臟及脾臟所組成之群組的組織 5 内之平均優先曝露量（例如於特定時間點下之曝露量或組 織濃度大於50%、60%、70%或大於其它器官），其中該IL-13 結合劑包括全長抗體；對該患者投藥，例如皮下、靜脈、 腹膜内注射後，平均半衰期（t1/2)為約0.1至100、0.2至75、 0.3至50、0.4至45、0.5至30、0.5至 15、0.5至 1〇、〇·5至5小 10 時，其中該IL-13結合劑包括該抗體分子(例如單鏈抗體、Fab 片段、（Fab)’2、VH、VHH)、單鏈fv片段、或含該抗體分子 之抗原結合部位之融合蛋白質）之抗原結合部位；對該患者 投藥後，平均清除率小於0.004毫升/小時/公斤、0.003毫升/ 小時/公斤、或0.002毫升/小時/公斤，其中該il-13結合劑係 15 與IL-13複合；並 對患者投與該IL-13結合劑，例如該抗IL-13抗體分子。 可直接藉該患者而進行該投藥步驟（例如自投藥）或藉另一 參與者，例如護理照料者而進行該投藥步驟。 在其它實施例中，係使用如文中所述之雙區室模式評 20 估該1L_13結合劑ipK/pD參數。該雙區室模式包括中央區 室（CAb，V)及周邊區室（C2，Ab，％)。在此等實施例中，係評 估以下PK/PD參數中之一或多種：該抗體IL13抗體分子之活 體内濃度(例如在血清、血漿、及/或組織中之濃度）(CLAb)、 在該中央區室與周邊區室間之分佈清除率（CLd，Ab)、結合速 33 200848429 率常數(Κοη)、解離速率常數(K〇ff)、該Ab-IL_13複合體之血 清清除率（CLe()mplex)或IL-13產生的内源性速率常數除以 工乙-13之血清清除率（Ksyn/CLIL_13)。 使用其中該IL-13結合劑為全長抗體之雙區室模式所 5 "平估之IL_13結合劑的代表性參考值，例如平均參考值包括 以下之一或多種：對患者靜脈注射該IL-13結合劑後，得自 X中央區至之清除率（CLAb)平均值在約〇·〇5至0.9、0.〇6至 〇·5、0.065至0.3、或0.67至0.2毫升/小時/公斤之範圍内（例 如對人類靜脈注射後，平均CLAb值在約〇 〇5至〇 5、〇 〇6至 10 ο·1、或〇·065至0·15毫升/小時/公斤之範圍内）；對患者靜脈 '主射後，在該中央區室内之分佈體積小於約150、130、120、 U〇、9〇、80或70毫升/公斤（例如對人類靜脈注射後，小於 为120、90、80或70毫升/公斤）；對患者靜脈注射後，在該 15中央區室與周邊區室間之分佈清除率（CLd,Ab)平均值在約 〇·00〇1-6·0、0.0005至5.0、0.00067至4·5、0.001 至4.0毫升/ Υ 公斤之範圍内（例如對人類靜脈注射後，0.0002至5.7、 或0^·〇〇〇5至4.6毫升/小時/公斤）；對患者靜脈注射後，該周 邊區至之體分佈（ν2)平均值小於150、130、120、110、90、 2〇 8〇或70毫升/公斤（例如對人類靜脈注射後，小於約120、90、 0或7〇鼋升/公斤）；結合速率常數(Κϋη)平均值在約〇·9至 •〇〇1、0.5至〇.〇1、0.3至〇_〇2、或0.026至〇·〇6毫微莫耳濃度 (ηΜ )天-1之範圍内，解離速率常數(KQff)平均值在約0.4至 •〇00〇1、0.3至0.0001、0.2至〇_〇〇1、或0.19至0.01 之範圍内； 忒13複合體之血清清除率（CLe()mplex)平均值為約〇.40 34 200848429 至 0.00083、0.25至 0.0042、0.17至 〇·〇〇83、0.15至0.0125 毫 升/小時/公斤，或IL-13產生之内源性速率常數除以扎_13之 血清清除率（Ksyn/CLn^)平均值為約〇 〇9至〇 〇〇〇1、〇 〇6至 0.001、0.05至0.003、0.045至〇·〇〇5ηΜ。 5 在實施例中，劑量、時間選擇或該結合劑(例如抗體分 子）之投樂杈式中之一或多種係至少部份根據該試驗值（該 抗體分子之至少一PK/PD參數)與參考值，例如如文中所述 之參考值的比較。 本發明另-方面之特徵為包括1[_13結合劑，例如如文 10中《WO 05/^26中所述之抗IL_13抗體分子或其藥學組 成物、及使用說明之套組或包裝。在實施例中，該套組所 包含之IL-13結合劑至少根據試驗值與如文中所述之參考 值的比較而經或業經評估或選擇。在其它實施例中，該 IL-13結合劑具有至少-適於如文巾所述之叹肺參數的試 15驗值。在實施例中，該套組包括經包裝而適於·定劑量， 例如如文中所述之固定劑量投與之几_13抗體分子、及以固 定劑量投藥之說明。 本發明之又另一方面的特徵為藉比較藥物動力學參數 之-試驗值與如文中所述之參考值而選擇或評估的江七 20結合劑’例如抗IL-13分子。在實施例中，該結合劑不同於 13.2、MJ2-7及C65(或其人源化變體）。 、 本發明另一方面之特徵為使用包括中央區室（cAb，v) 及周邊區室(c2’Ab，v2)之雙區室PK_PD模式以評估藥物-配 位體複合體在患者體内之數量的方法。該方法包括· 35 200848429 於預定時間間隔下提供該藥物-配位體濃度在患者體 内之至少一動物動力學或藥理動力學參數值，該值係選自 以下PK/PD參數中之一或多種：該藥物，例如抗IL-13抗體 分子之活體内濃度（例如在血液、血清、血漿及/或組織内之 5 濃度）(CLAb);未結合IL-13、抗IL-13結合IL-13或總IL-13之 活體内濃度（例如在血液、血清、血漿及/或組織内之濃度）； 在該中央區室與周邊區室間之分佈清除率(CLd,Ab);;結合速 率常數(KQn);解離速率常數(KQff);該藥物-配位體（例如 Ab-IL-13)複合體之血清清除率（CLeQmplex);或配位體（例如 10 IL-13)產生之内源性速常數除以該配位體（例如IL_13)之血 清清除率(Ksyn/CLIL_i3); 使用如第33圖表示之雙區室PK-PD模式以評估患者之 該至少一苯物動力學參數。 在實施例中，該雙區室模式如下文所示： 15 36 200848429
dCAh/di ^[Ir7{t)^rCLd Ah ·€2Μ ~{CLd Ah +C^)«C^]/F ~ Kon · cAh ·((制- ^ Al>-{//.--! 3) ^Ab-i /L-13)2 )+[，c ⑴
當/ = 0, ⑼/F 说'αη ’出=d Ab ·CAb -CLj、4b ·C2，) f V2 ft = 〇yC0 =0 (2)
dC ,40-(//,-13) / dt 一 Kon · CAb · (C{L_n - CA^(IL—、3、一 C Ab，肩) ~~^h'〇mplexm^Ab~Ut-U) ^ ^ K〇^ 當/ = =0 ‘ (3) dCAh~{nMyh idt = Kon · C t^(/^l3) # {CHAy ^ CiM//„{3) - CAMflM3h) ^ ^complex * ^ Ah~(lL~U)7 ~ Φ ^ AfHU,-n)2 ^_{3/^=[^ -CX/W3 -c,h^53. ^cAWJhy]/v ~K〇n m(^,U %{C!L~n -CAb~{iLAy) ^ C Ah~{iL-nh) ~Kon mCAb_{UMy) -CAb_{a_n) + k · cAb-u!，+ K. · CAlHU，2 就〜團式劑量而言 劑量 (4) (5) 就％劑量而言 M/) = A^*F·劑量 ⑹ (7) 其中 cAb為抗體（結合劑）之濃度；
In⑴為所投與之劑量（就團式注射劑量 適於皮下注射劑量之Ka*F*劑量，其中κ 數，而F為生體可用率之估計值； 而言）， 為第— 且1n(t)為 階速率常 CLd，Ab為在該中央區室與周邊區室間之分佈主陕 C2，Ab為在該周邊區室中之配位體結合劑的濃戶于w 37 200848429 v為在中央組成部份中之體積分佈； 為第二階速率常數；
Cligand(或Cil-13)為配位體之濃度； CAb-(ligand)(或CAb-(IL-13))為酉己位體結合劑/酉己位體複合體 5 之濃度；
Koff為第一階非結合速率常數，V2為在周邊區室内之分 佈體積； CLCQmplex為該配位體結合劑/配位體複合體之血清清除 率；且 10 Ksyn為内源性配位體之零階速率常數。 在特定實施例中，該方法可評估選自由配位體-抗體複 合體及配位體可溶性受體複合體所組成之群組之藥物-配 位體複合體的數量。例如該配位體可以是細胞素，例如 IL-5、IL-6、IL-12、IL-13、IL-21、IL-22 ;或生長因子， 15 例如VEGF、TNFa ;且該藥物可以是能對抗該酉己位體之抗 體或可溶性受體。 在特定實施例中，該方法可評估IL-13抗體複合體在患 者體内之數量。例如用於該等方法之兩區室模式包括適於 以下之一的藥物動力學/藥理動力學值： 20 該配位體為IL-13，而該配位體結合劑(Ab)為藥物列如 抗體分子(例如111^2-712-11111^2-712-11)); 複合體為藥物-配位體複合體（例如hMJ2-7v.2-l 1 HMJ2-7v.2-ll/IL-13複合體）； CLd,Ab及CLAb分別為該藥物（列如抗體分子（例如 38 200848429 hMJ2-7v.2-11 HMJ2-7v.2-11))之分佈清除率及血清清除率； CLc_piex及CLLigand(或CLIL-13)分別為該複合體及配位 體之血清清除率。
Ksyn為零階配位體，例如IL-13合成速率常數； 5 為第二階結合速率常數；
Kd為第一階解離速率常數；且V及v2分別為該藥物(例 如hMJ2-7v.2-11 HMJ2-7V.2-11)在血清（中央）及第二區室内 之分佈體積。 本發明之某些方面的特徵為，例如使用固定劑量之抗 10 IL-13抗體以治療患者之IL-13相關疾病的方法，該方法包括 對罹患或有罹患該IL-13相關疾病之患者投與固定劑量之 抗 IL-13 抗體分子（例如 hMJ2-7v.2-ll HMJ2-7v.2-ll 或 13·2ν2)。 在某些實施例中，該固定劑量為以下劑量之抗IL-13抗 15 體分子（例如hMJ2-7v.2-ll HMJ2-7V.2-11 或 13·2ν2):介於約 50毫克與500毫克之間、介於約60毫克與490毫克之間、約 70毫克至480毫克、約75毫克至460毫克、約80毫克至450毫 克、約100毫克至約450毫克、約150毫克至約400毫克、約 200毫克至約300毫克、約200毫克至約250毫克；或約60毫 20 克、65毫克、70毫克、75毫克、80毫克、90毫克、100毫克、 125毫克、、150毫克、175毫克、200毫克、225毫克或250 毫克。 在某些實施例中，該固定劑量為約75、200或250毫克 抗 IL-13 抗體分子（例如 hMJ2-7v.2-ll HMJ2-7v.2-ll 或 39 200848429 13·2ν2)。 在某些實施例中，係約每週一次、約每2週一次、約每 3週一次或約每4週一次對患者投與該固定劑量。 為了清楚明瞭起見，如文中使用之該名詞“IL-13拮抗 5 劑”通常係指可減少、抑制或阻斷IL-13及IL-13R之一或多種 生物活性的化合物，諸如蛋白質（例如多鏈多肽、多肽）、肽、 小分子或抑制核酸。在一實施例中，該IL-13拮抗劑可以與 IL-13或IL_13R多肽相互作用，例如結合（文中亦稱為“拮抗 性IL-13結合劑”）。例如該IL-13拮抗劑可以與IL-13或IL-13 10 受體，較佳為哺乳動物，例如人類IL-13或IL-13R相互作用， 例如結合（文中亦分別稱為“IL-13拮抗劑”及“IL-13R拮抗 劑”），並可減少或抑制一或多種IL-13-及/或IL-13R-相關生 物活性。拮抗劑以高親和力結合至IL-13或IL-13R，例如其 親和力常數為至少約107M_1、較佳約108M_1、且更佳約 15 至ΙΟ^Μ」或更強。應注意該名詞“IL-13拮抗劑”包括 可抑制或減少文中所述該等生物活性之一或多種，但是可 不直接結合至IL-13之藥劑。 該等名詞“抗IL-13結合劑”及“IL-13結合劑”在文中可 交換作用。中文所使用之這些名詞係指包括一可結合至 20 IL-13蛋白質，例如哺乳動物IL-13，特別為人類IL-13之接 觸面的任何化合物，諸如蛋白質（例如多鏈多肽、多肽）或 肽。該結合劑通常以小於5χ10_7Μ之Kd進行結合。代表性 IL-13結合劑為包括一抗原結合部位，例如抗體分子之蛋白 質。該抗IL-13結合劑或IL-13結合劑可以是能結合至IL-13 40 200848429 之IL-13拮抗劑或亦可包括能簡單地結合至江_13，但是不會 誘發活性或貫際上可促進IL-13活性結合劑。例如玎 結合並抑制一或多種IL-13生物活性之特定IL-13結合劑，例 如抗IL-13抗體分子，諸如抗體13.2、MJ2-7及C65，在文中 5 亦稱為拮抗性IL-i3結合劑。並非如文中定義之IL_13、结合劑 的IL-13拮抗劑貫例包括，例如上游或下游IL_13傳訊作用之 抑制劑(例如STAT6抑制劑）。 文中所揭示該等方法之另外實施例可包括以下特徵中 之一或多種： 1〇 在某些實施例中，該IL-13拮抗劑可以是能結合至11^13 或IL-13R之抗體分子。該IL-13亦可以是單獨或融合至另〆 分子團（例如免疫球蛋白Fc區域)之該IL-13R的可溶形式（例 如IL-13Ra 2或IL-13Ra 1)或呈亞單體之異種二聚體形式。 在其它實施例中，該拮抗劑為細胞素突變蛋白（例如可結合 15 至對應受體，但是不會實質上活化該受體之IL-13突變蛋白）。 在一實施例中，該IL-13拮抗劑或結合劑（例如該抗體分 子、可溶性受體、細胞素突變蛋白或肽抑制劑）可結合至 IL-13或IL_13並抑制或減少IL-13與IL-13受體，例IL-13Ra 1、IL-13Ra2、及/或IL-4RI間之交互作用（例如結合作用）， 20 藉此減少或抑制信號傳導。例如該IL_13拮抗劑可結合至選 自，例如IL-13及IL_13Ra l(“IL-13/IL-13Ra 1”）； IL-13及 ΙΙ-4ίΙα(“ΙΙ^13/Ιί_4ΙΙα，，）； IL-13、IL-13Ra ：1、及IL-4Ra (“IL]3/IL-13R a 1/IL-4R α，，）；與 IL-13 及 IL-13R α 2(“IL-13/IL-13Ra2”)之複合體的一或多種組份。在實施例 41 200848429 中，該IL-13拮抗劑可結合至IL-13或IL-13R並干擾（例如抑 制、阻斷或減少）IL-13與IL-13受體複合體(例如1 與IL-4Ra之複合體）間之交互作用，例如結合作用。在其 它實施例中，該IL-13拮抗劑可結合至IL-13並干擾（例如抑 5 制、阻斷或減少）IL-13與該IL-13受體複合體（例如分別為 IL-13Ra 1或IL-4Ra)之亞單位間之交互作用，例如結合作 用。在又另一實施例中，該IL_13拮抗劑，例如該抗IL-13 抗體或其片段可結合至IL-13 ’並干擾(例如抑制、阻斷或減 少）IL-13/IL-13Ra 1與IL-4Ra間之交互作用，例如結合作 10 用。在另一實施例中，該IL-13拮抗劑可結合至il-13並干擾 (例如抑制、阻斷或減少）IL-13/IL-4Ra與IL-13Ral間之交 互作用，例如結合作用。典型上，該IL-13拮抗劑可干擾(例 如抑制、阻斷或減少）IL-13/IL-13Ra 1與IL-4Ra間之交互 作用，例如結合作用。代表性抗體可抑制或預防三元複合 15 體，IL-13/IL-13Ra l/IL-4Ra 之形式。 在一貫施例中’該IL-13/IL-13R拮抗劑或結合劑為可結 合至11^13/11^1311之抗體分子（例如抗體或其抗原結合性片 段）。例如該抗體分子可以是能結合至IL-13或IL-13受體之 全長單株或單專一性抗體（例如包括至少一個且典型上兩 2〇 個完全重鏈、及至少一個且典型上兩個完全輕鏈之抗體分 子）；或其抗原結合性片段(例如重或輕鏈可變結構域單體或 二聚物（例如VH、VHH)、Fab、F(ab’)2、Fv或單鏈Fv片段)）。 典变上’抗體分子為關於人類IL-13受體之人類、絡駿科動 物、鯊、人源化、嵌合型或活體外產生之抗體。在特定實 42 200848429 施例中，該抗體分子包括一選自，例如IgGl、lgG2、IgG3、 IgG4、IgM、IgAl、IgA2、IgD、及IgE之重鏈恆定區域的 重鍵怪定區域；特別為一選自，例如IgGl、IgG2、lgG3、 及IgG4之重鏈恆定區域的重鏈恆定區域，更特定地，該等 5 重鏈恆定區域IgGl(例如人類IgGl或其改質形式）。在另一 實施例中，該抗體分子具有一選自，例如κ或λ(較佳κ，例 如人類Κ)之輕鏈恆定區域的輕鏈恒定區域。在一實施例 中，該恆定區域可經改變，例如突變，以修飾該抗體分子 之性質（例如增加或減少以下之一或多種·· Fc受體結合性、 10 抗體糖基化作用、半胱胺酸殘基之數目、效應細胞機能或 補體機能）。例如如實例5所述，該人類IgGl恆定區域可以 於一或多個殘基，例如殘基234及237中之一或多個，發生 突變以減少以下之一或多種：Fc受體結合性、抗體糖基化 作用、半胱胺酸殘基之數目、效應細胞機能或補體機能。 15 在實施例中，該抗體分子包括序列辨識編號（SEQ ID NO:193)之一或多個殘基發生突變，例如於序列辨識編號： 193之位置116及119發生突變之人類IgGl恆定區域。 在一實施例中，該抗體分子為抑制或中和抗體分子。 例如該抗體IL-13抗體分子可具有相當於IL-13Ra 2之機能 20 活性(例如該抗IL13抗體分子可減少或抑制IL-13與IL-13Ra 1 之交互作用）。該抗IL13抗體分子可防止IL-13與IL_13Ra 1 之複合體形成，或可破壞或去安定化1L-13與IL-13Ra 1之複 合體。在一實施例中，該抗IL-13抗體分子可抑制三元複合 體形成，例如IL-13、IL-13Ra 1及IL4-R之複合體的形成。 43 200848429
在一實施例中，該抗體分子可以在注射後至少6週，提供可 抗接觸抗原，例如在羊核式中之虫回蟲抗原之注射後保護作 用。在其它實施例中，該IUU抗體分子可抑制一或多種 IL-13相關生物活性’其抑制濃度為約50Nm至5pM 、典型上 5約1⑻至25〇pM或較低(例如更佳抑制作用）之1(：：5()。在一實施 例中，該抗IL-13抗體分子可以與扎-；^結合，其動力學值在 1〇3至108M、-1、典型上104至之範圍内。在一實施 例中，該抗IL-13抗體分子可結合至人類几_13，其kQn在約 5xl〇4與之間。在又另一實施例中，該抗IL-13抗 10 體分子之解離動力學值在10·2至1〇·6,、典型上10_2至10-58-1 之範圍内。在一實施例中，該抗IL-13抗體分子可結合至 IL-13(例如人類IL-13)，其親和力及/或動力學類似（例如在 20、1〇或5之係數内）早株抗體13.2、MJ2_7或C65，或其改 質形式，例如其嵌合形式或人源化形式。可使用，例如生 15 物感應器科術(biacore™)以測試IL_13結合劑之親和力及結 合動力學。 在又另一實施例中，該抗IL-13抗體分子可專一性結合 至IL-13 ’例如哺乳動物，例如人類IL_13之抗原決定位，例 如線形或構形抗原決定位。例如抗體分子可結合至由與人 20 類IL-13結合之IL-13Ra 1所定義之抗原決定位或由與人類 IL-13結合之IL-13R ο: 2所定義之抗原決定位或經此等抗原 決定位重疊之抗原決定位中的至少一種胺基酸。該抗IL-13 抗體分子可以與IL-13Ra 1及/或IL-13Ra2競爭對IL-13，例 如人類IL-13之結合性。該抗IL-13抗體分子可競爭性抑制 25 IL-13Ra 1及/或lL-13Ra2與IL-13之結合作用。該抗IL-13 44 200848429 抗體分子可以與IL-13上之抗原決定位進行交互作用，其當 結合時可立體上預防與IL-13Ra 1及/或行交互 作用。在實施例中，該抗IL-13抗體分子可專一性、纟士人至人 類IL-13並競爭性抑制第二抗體對該人類比_13之結合性，其 5 中該第二抗體係選自可以與IL-13，例如人類几―^結合之 13.2、MJ2-7及/或C65(或文中所述之任何其它抗正_13抗 體）。該抗體IL-13抗體分子可競爭性抑制13 2、mj2_7&/或 C65對IL-13之結合性。該抗IL_13抗體分子可專一性結合由 與人類IL-13結合之^觀·7所定義之抗原決定位或由與 1〇人類IL-13結合之C65所定義之抗原決定位中的至少一種胺 基酸。在一實施例中，該抗IL_13抗體分子可結合至與Η 2、 MJ2-7或C65之抗原決定位（其共同包括至少i、2、3或*種胺 基酸）重疊之抗原決定位或當結合時可立體上預防與Μ、 MJ2-7或C65進行交互作用之抗原決定位。例如該抗體分子 15可接觸一或多種得自IL_13之殘基，例如選自人輒-13(序 列辨識編號：194)[在成熟序列中之位置；序列辨識編號： 195]之殘基81-93及/或114_132中之一或多種，或選自以下 之-或多種：於序列辨識編號：194之位置，的麵胺酸 根、於位置72[53]之天冬酿胺酸、於位置88[69]之甘胺酸、 2〇於位置91[72]之脯胺酸、於位置92[73]之組胺酸、於位置 93[74]之離胺酸、及/或於位置卿6]之精胺酸。在其它實 施例中，該抗體分子可接觸得自IL_13之一或多種胺基酸殘 基，例如選自序列辨識編號：24或序列辨識編號 :178之殘 基 116 117、118、122、123、124、125、126、127、及/ 45 200848429 或128中之一或多種。在一實施例中，不考慮存在於序列辨 識編號：24中之位置130的外形性，該抗體分子可結合至 IL-13。 在一實施例中，該抗體分子包括1、2、3、4、5或所有 5 6種得自mAbl3.2、MJ2_7、C65或文中所述之其它抗體的 CDR或密切相關的CDR，例如相同或具有至少一胺基酸變 化方式但是不超過2、3或4種變化方式（例如取代(保留性取 代）、刪除或插入）的CDR。該抗體分子可選擇性包括文中所 述之任何CDR。在實施例中，該重鏈免疫球蛋白可變結構 1〇 域包含重鏈CDR3，其與單株抗體MJ2-7(序列辨識編號： 17)、mAb 13.2(序列辨識編號：196)或C65(序列辨識編號·· 123)之重鏈CDR3相差少於3個胺基酸取代基。在其它實施 例中，該輕鏈免疫球蛋白可變結構域包含輕鏈CDR1，其與 單株抗體MJ2-7(序列辨識編號：18)、mAb 13.2(序列辨識編 號：197)或C65(序列辨識編號：118)之對應輕鏈CDR相差少 於3個胺基酸取代基。該MJ2-7重鏈可變結構域的胺基酸序 列具有如序列辨識編號：130所示之胺基酸序列。該MJ2-7 之輕鏈可變結構域的胺基酸序列具有如序列辨識編號：133 所示之胺基酸序列。該單株抗體13.2之重鏈可變結構域的 2〇 胺基酸序列具有如序列辨識編號：198所示之胺基酸序列。 該單株抗體13.2之輕鏈可變結構域的胺基酸序列具有如序 列辨識編號：199所示之胺基酸序列。 在特定實施例中，該抗體分子之重鏈可變結構域包括 以下之一或多種： 46 200848429 在 CDR1 中，G-(YF)-(NT)-I - K-D-T-Y-(MI)-H(序歹 ij 辨識 編號· 4 8) 在 CDR2 中，（WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-(SD)-(PQ) -K-F-Q-G(序列辨識編號：49)、及或 5 在CDR3中，SEENWYDFFDY(序歹ij辨識編號：17) • 在CDR1中，GFNIKDTYIH (序列辨識編號：15) 在CDR2中，RIDPANDNIKYDPKFQG (序歹ij劳辛識編號： 16)、及/或 f , 在CDR3中，SEENWYDFFDY(序歹ij辨識編號：π) 10 在其它實施例中，該抗體分子之輕鏈可變結構域包括 以下之一或多種： 在 CDR1 中，（RIQ-S-S-Q-S-aiHKVyH-S^NDyG-N-CTN) -Y-L-(EDNQYAS)(序列辨識編號：25)、 在 CDR2 中，K-(LVI)-S-(NY)-(RWHFD)-S(序歹ij 辨識編 15 號：27)、及/或 在CDR3 中，Q-(GSA)-(ST)-(HEQ)-I-P(序歹辨識編號： i 28);或 , 在CDR1 中，RSSQSIVHSNGNTYLE(序列辨識編號：18)、 在CDR2中，KVSNRFS(序歹ij辨識編號：19)、及 20 在CDR3中，FQGSHIPYT(序歹ij辨識編號：20)。 在其它實施例中，該抗體分子包括一或多種CDR，該 CDR包括一選自由以下所組成之群組的胺基酸序列：序列 辨識編號：197、序列辨識編號：200、序列辨識編號：201、 序列辨識編號：202、序列辨識編號：203、及序列辨識編 47 200848429 號：196之胺基酸序列。 在又另一實施例中，該抗體分子包括至少1、2或3個得 自選自，例如mAbl3.2、MJ2-7、C65或文中所述之任何其 它抗體之抗體的重鏈可變結構域的科狄亞（Chothia)超可變 5 環’或特別為至少得自可接觸IL-13之此等超可變環的胺基 酸。在又另一實施例中，該抗體或其片段包括至少丨、2或3 個得自選自，例如mAbl3.2、MJ2-7、C65或文中所述其它 抗體之抗體的輕鏈可變區域之超可變環，或至少包括得自 可接觸IL-13之此等超可變環的胺基酸。在又另一實施例 10 中’該抗體或其片段包括至少卜2、3、4、5或6個得自選 自，例如mAbl3.2、MJ2-7、C65或文中所述之其它抗體的 抗體之重及輕鏈可變區域的超可變環。 在一實施例中，該蛋白質包括所有6個得自mAbl3.2、 MJ2-7、C65或文中所述之其它抗體的超可變環、或密切相 15 關的超可變環，例如相同或具有至少一與文中所述序列不 同之胺基酸變化方式，但是不超過2、3或4種變化方式。該 蛋白質可選擇性包括文中所述之任何超可變環。 在又另一實施例中，該蛋白質包括至少1、2或3個超可 變環’其正則結構與㈤从丨^、MJ2-7、C65或文中所述之 20 其它抗體的對應超可變環相同，例如與mAbl3.2、MJ2-7、 C65或文中所述之其它抗體的重及/或輕鏈可變結構域的至 少環1及/或環2相同。見，例如Chothia等人（1992) J. Mol.
Biol· 227:799-817; Tomlinson 等人（1992) J· Mol· Biol. 227:776-798有關於超可變環正則結構之說明文。這些結構 48 200848429 可藉這些參考文獻中所述之表的查閱而測定。 在一實施例中，該抗體分子之重鏈架構（例如分別為 FR1、FR2、FR3，或包括FR1、FR2、及FR3，但是不包括 CDR之序列）包括一胺基酸序列，其與以下種系V鏈段序列 5 之一：DP-25、DP-卜 DP-12、DP-9、DP-7、DP-3卜 DP-32、 DP-33、DP-58或DP-54或可以與正則結構1-3相容之另一 V 基因的主鏈架構之相似度為至少80%、85%、90%、95%、 97%、98%、99%或更高（見，例如Chothia等人（1992) J. Mol. Biol· 227:799-817 ; Tomlinson 等人（1992) J. Mol. Biol· 10 227:776-798)。可以與該正則結構種類1-3相容之其它架構 包括具有根據卡貝特(Kabat)編號之以下殘基中的*或多種 之架構：於位置26之Ala、Gly、Thr或Val ;於位置26之Gly ; 於位置27之Tyr、Phe或Gly;於位置29之Phe、Vd、lie或Leu ; 15 I:、 20 於位置34之Met、lie、Leu、Va卜 Thr、Trp或lie ;於位置94 之 Arg、Thr、Ala、Lys ;於位置 54 之 Gly、Ser、Asn 或 Asp ; 及於位置71之Arg。 在一實施例中，該抗體分子之輕鏈架構（例如分別為 FIU、FR2、FR3、或包含FPU、FR2、及FR3但是不包括CDR 之序列）包括一胺基酸序列，其與Vk II亞型種系列或以下種 系V鏈段序列之一 ：A17、A卜A18、A2、A19/A3或A23或 可以與正則結構種類4-1相容之另一 v基因的相同度為至少 80%、85%、90%、95%、97%、98%、99%或更高（見，例 如Tomlinson等人（1995) EMBO J. 14:4628)。可以與該正則 結構種類4_1相容之其它架構包括具有根據卡貝特編號之以 49 200848429 下殘基中的一或多種之架構：於位置2之Val或Leu或Ile ;於 位置25之Set*或Pro ;於位置29之lie或Leu ;於位置31d之 Gly ;於位置33之Phe或Leu ;及於位置71之Phe。 在另一實施例中，該抗體分子之輕鏈架構(例如分別為 5 FR1、FR2、FR3，或包含FfU、FR2、及FR3，但是不包含 CDR之序列）包括一胺基酸序列，其與Vk〗亞型種系列（例如 DPK9序列）之輕鏈架構的相同度為至少80%、85%、9〇%、 95%、97%、98%、99%或更高。 在另一實施例中，該抗體分子之重鏈架構(例如分別為 10 FR1、FR2、FR3，或包含FRJ、FR2、及FR3，但是不包含 CDR之序列）包括一胺基酸序列，其與VH I亞型種系列（例如 DP-25序列）或VH III亞型種系序列（例如DP-54序列）之輕鍵 架構的相同度為至少80%、85%、90%、95%、97%、980/〇、 99%或更高。 15 在特定貫施例中，該抗體分子之重鏈免疫球蛋白可變 結構域包括一胺基酸序列，該胺基酸序列係經在高嚴厲條 件下可以與能將以下之重鏈可變結構域編碼之核酸苔序列 補體進行雜交反應的該核苔酸序列編號：V2.1(序列辨識編 號：71)、V2.3(序列辨識編號：73)、V2.4(序列辨識編號： 20 74)、V2.5(序列辨識編號：75)、V2.6(序列辨識編號：76)、 V2.7(序列辨識編號：77)、V2.11(序列辨識編號：8〇)、 也13.2(序列辨識編號：204)、1113.2¥1(序列辨識編號：2〇5)、 hl3.2v2(序列辨識編號：206)、或hl3.2v3(序列辨識編號·· 207)、或與以下之重鏈可變結構域之胺基酸序列具更高相 50 200848429 似度：V2.1(序列辨識編號：7i)、V2.3(序列辨識編號：73)、 V2.4(序列辨識編號：74)、ν2·5(序列辨識編號：75)、ν2·6(序 列辨識編號：76)、V2.7(序列辨識編號：77)、ν2·η(序列 辨識編號：80)、Chl3.2(序列辨識編號：2〇8)、hl3.2vl(序 5列辨識編號：209)、hl3>2(序列辨識編號：210)或 Μ3·2ν3(序列辨識編號：211)。在實施例中，該重鏈免疫球 蛋白可變結構域包括序列辨識編號：8〇之胺基酸序列，其 可依次進一步包括包含序列辨識編號：116或序列辨識編 號：117之胺基酸為列的重鏈可變結構域架構區域4(FR4)。 10 在其它實施例中，該抗體分子之輕鏈免疫球蛋白可變 結構域包括一胺基酸序列，該胺基酸序列可經在高嚴厲條 件下可以與將V2.11(序列辨識編號：36)、或hl3.2v2(序列 辨識編號：212)之輕鏈可變結構域編碼之核誓酸序列的補 體進行雜交反應之該核苔酸序列編碼；或包括一與 15 V2.11(序列辨識編號：36)、或hl3.2v2(序列辨識編號：212) 之輕鏈可變結構域的相同度為至少80%、85%、90%、95%、 97%、98%、99%或更高之胺基酸序列。在實施例中，該輕 鏈免疫球蛋白可變結構域包括序列辨識編號：36之胺基酸 序列，其可依次進一步包括包含序列辨識編號：47之胺基 20 酸序列的輕鏈可變結構域架構區域4(FR4)。 在又另一實施例中，該抗體分子包括包含以下之重鏈 可變結構域序列的架構： (i) Gly於相當於49之位置； (ii) Ala於相當於72之位置； 51 200848429 (iii) Ile及Gly分別於相當於48及49之位置； (iv) Ile、Gly及Ala分別於相當於48、49及72之位置； (v) Lys、Ala及Ala分別於相當於67、68及72之位置；及 /或 5 (vi)Ile、Gly、Ala及Ala分別於相當於48、49、72及79 之位置。 在一實施例中，該抗體IL-13抗體分子包括至少一包含 序列辨識編號：177之胺基酸序列（或與序列辨識編號：177 之相同度為至少 80〇/〇、85%、90%、95%、97%、98%、99% 10 或更高之胺基酸序列）的輕鏈及至少一包含序列辨識編 號：176之胺基酸序列（或與序列辨識編號：176之相同度為 至少 80%、85%、90%、95%、97%、98%、99%或更高之胺 基酸序列）的重鏈。 在一實施例中，該抗IL-13抗體分子包括兩免疫球蛋白 15 鏈：一包括序列辨識編號：199、213、214、212或215之輕 鏈及一包括序列辨識編號：198、208、209、210或211(或 與序列辨識編號：199、213、214、212或215或序列辨識編 號：198、208、209、210或211之相同度為至少80%、85%、 9〇%、95%、97%、98%、99%或更高之胺基酸序列）之重鏈。 2〇 該抗體分子可進一步包括含序列辨識編號：193之胺基酸序 列的重鏈及含序列辨識編號：216(或與序列辨識編號：193 或序列辨識編號：216之相同度為至少80%、85%、90%、 95%、97%、98%、99%或更高之胺基酸序列）的輕鏈。 在另一實施例中，該IL-13結合劑，例如抗IL-13抗體分 52 200848429 子可干擾IL-13與該受體IL-13RI1之交互作用。在一實施例 中，該IL-13結合劑可干擾IL-13之Phel07(序列辨識編號： 124 ;第 13A 圖）與由殘基 Leu319、Cys257、Arg256、及 Cys320(序列辨識編號·· 125 ;第13B圖）之側鏈所形成之疏 5 水性IL-13Ra 1袋狀物的交互作用，例如藉直接結合至這些殘基 或位阻。在另一實施例中，該IL-13結合劑可干擾lL-13Ral(序 列辨識編號：125)之胺基酸殘基Ile254、Ser*255、Arg256、 Lys318、Cys320、及Tyr*321 與IL-13(序列辨識編號：124)之 胺基酸殘基ArgH、Glul2、Leul3、Ilel4、Glul5、Lysl04、 10 Lysl〇5、Leul06、Phel07、及 Argl〇8 間之瓦得爾（van der Waals)交互作用，例如藉直接結合至這些殘基或位阻。 如文中使用’遠私一 “一”係指該冠詞的文法受詞之一 或超過一（例如至少一）。 除非文中另有清楚指定，文中使用之該名詞“或，，係意 15 指該名詞“及/或”且交換作用。 该#名詞“蛋白質”及“多肽”在文中可交換使用。 “約”及“接近，，通常意指考慮到該等測定法之性質及精 密度所測定之數量的可接受誤差程度。代表性誤差程度在 特定值或有效數值範圍之20%内，典型上在1〇%内且更佳在 20 5% 内。 本申請案從頭至尾所列舉之所有公開案，申請中之專 利申β木、已公開之專利申請案（包括us 〇6/〇〇73148及US 〇6/_咖在内）、及已公開專利_ m g _ 為參考資料。 53 200848429 自實施方式及圖示簡單說明、及申請專利範圍可知本 發明之其它特性、目標及優點。 圖式簡單說明 第1A圖分別為全長人類及獼猴IL_13，序列辨識編號： 5丨78及序列辨識編號：24之排列。胺基酸差異係由暗盒狀殘 基表示。該R對Q取代之位置（其相當於在過敏患者所檢測之 多形現象）係於位置130經加框。分裂部位之位置係由箭號 表示。 第1B圖為得自可用於產生抗il-13抗體之彌猴il-13(分 10 別為序列辨識編號：179-188)的代表性肽之列表。 第2圖為描述如藉CD23+單細胞之％(丫-軸）而測知之由 各種IL-13結合劑進行NHP 11^13活性之中和反應的曲線 圖。MJ2_7(A)、C65(·)、及Sil-13RI2-Fc(·)之濃度係標示在 X軸上。 15 第3圖為描述藉MJ2_7(鼠科動物；·）或人源化MJ2-7 ν·211(〇)(文中可交替稱為“hMj2-7v.2_ll”或“MJ2.7v.2_ll，，) 而進行NHP IL-13活性之中和反應的曲線圖。NHP IL-13活 性係藉以抗體濃度(X軸）為變數進行STAT6(y軸)之磷酸化反 應而測知。 20 第4圖為描述藉MJ2-7v.211(〇）或sIL-13RI2-Fc(a)而進 行NHP IL-13活性之中和反應的曲線圖。NHP IL-13活性係 藉以拮抗劑濃度(X軸）為變數進行STAT6(y軸）之磷酸化反應 而測知。 第 5圖為描述藉MJ2-7(A)、C65()或sIL-13RI2-Fc(·)而 54 200848429 進行NHP IL-13活性之中和反應的曲、線圖。NHp m活性 係藉以拮抗劑濃度以軸）為變數進行§1^16以軸)之磷酸化反 應而測知。 第6A圖為描述藉天然人類IL-13(x軸）而誘導生腱蛋白 5 (tenascin)產生（y轴）之曲線圖。 第6B圖為描述如藉以抗體濃度(X軸）為變數抑制生腱 蛋白產生（y軸）之誘導而測定的藉MJ2-7所進行之NHP IL-13活性之中和反應的曲線圖。 第7圖為描述MJ2-7或對照組抗體結合至已經和 10 sIL-13RI2_Fc(其係與SPR晶片耦合）結合的NHP-IL-13之曲 線圖。 第8圖為描述各種濃度（0.09-600nM)之NHP IL-13結合 至經捕捉hMJ2-7v.2-li抗體的曲線圖。 第9圖為描述藉小鼠MJ2-7(·)或人源物變體（〇)、變體(♦) 15 或變體3(Δ)抗體而進行NHP IL_13活性之中和反應的曲線 圖° NHP IL-13活性係藉以抗體濃度（X軸）為變數進行 STAT6(y軸）之磷酸化反應而測知。 第10圖為描述藉包括小鼠MJ2-7 VH及VL(·)、小鼠VH 及人源化變體2 VL(A)或變體2 VH及VL()之抗體而進行 20 NHP IL_13之中和反應的曲線圖。NHP IL-13活性係藉以抗 體濃度(x軸）為變數進行STAT6(y軸）之磷酸化反應而測知。 第U A及11B圖為描述如藉ELISa而測定之藉MJ2-7抗 體而抑制IL-13對固定化11^13受體之結合性的曲線圖。結合 性係以於45 0奈米之吸光度(y輛）表示 。MJ2-7抗體之濃度係 55 200848429 描述在X軸上。第11A圖描述對IL-13Ra 1之結合性。第11B 圖描述對IL-13Ra2之結合性。 第12圖為DPK18種系胺基酸序列（序列辨識編號·· 126) 及人源化MJ2-7變體3 VL(序列辨識編號·· 190)之排列圖。 5 第13A為成熟、已處置之人類IL_13的胺基酸序列（序列 辨識編號：124)。 第13B圖為人類IL-13Ra 1之胺基酸序列（序列辨識編 號：125)。 第14A-14D圖表示與預（基線）試樣比較，蛔蟲制抗後 10 (P〇st-Acar仏challenge)存在於BAL流體中之細胞總數/毫升 及炎症細胞％增加。 第15A-15B圖表示蛔蟲制抗前及後在對照組及經抗體 處置之獼猴中的BAL細胞/毫升在BAL流體中之總數。對照 組（明圓圈（〇)）；經MJ2-7V.2-11處置之試樣（明三角形(△))及 15 經mAb 13·2ν2處置之試樣（暗三角形（▲)> (在本研究中係使 用 MJ2-7(MJ2-7v.2-ll)及mAb 13·2ν2之人源化變體）。 第16Α-16Β圖表示相對於對照組，在蛔蟲制抗後之自經 抗體處置之獼猴所收集之濃BAL流體中的嗜伊紅趨化因子 位準變化。第16Α圖描述表示相對於基線(預制抗值），蛔蟲 20 制抗後之嗜伊紅趨化因子位準（皮克/毫升)增加的長條圖。 第16Β圖描述與對照組（暗圓圈）比較，在得自經mAb 13.2-(昏暗圓圈）或MJ2-7(昏暗三角形)抗體處置之獼猴的濃 BAL流體中之嗜伊紅趨化因子位準降低。（在本研究中係使 用MJ2-7(MJ2-7v·2-ll)及mAbl3·2v2之人源化變體）。 56 200848429 第17A-17B圖描述制抗後8週在對照組及、經抗體處置之 s式樣中的蛔**專一性IgE滴定度之變化。第17八圖描述顯示 在經不相關Ig(IVIG，動物20-45 ;最上面的一組）處置之個 別猴子中的蛔蟲專一性IgE滴定度無變化及在經人源化 5 MJ2-7V.2_11(動物120-434 ;最下面的-組)處置之個別猴子 中之蛔蟲專一性IgE滴定度降低的代表性實例。第17B圖描 述蛔蟲制抗後8週相對於經非相關Ig處置之獼猴(IVIG(昏暗 圓圈）），在mAbl3.2或hMJ2-7-ll(暗圓圈）中之蛔蟲專一性 IgE滴定度降低。 〇 第18 A ·18 B圖表示制抗後2 4小時及8週纟對照組及經抗 體處置之試驗中虫回蟲專-性嗜驗細胞組織胺釋放的變化。 第18A圖為描述在經鹽液(左）或人源^Abi32v2(右）處置 之代表性個別狼子中之下述試樣的曲線圖：經抗體或細蟲 制抗前之賴（® _);抗财置㈣小時、域制抗後24 5 ㈣之試樣(三㈣）；及域制抗後8週之試樣⑽石形）。 第18B圖描述顯不帕蟲制抗前及後8週在對照組（實心黑色 長條）、經人源化mAbl3.2_(白色長條）及人源化 MJ2-7v.2_1H影線長條)處置之_巾之鮮化組織胺位準 變化的長條圖。 〇 帛19圖描述在對照組（明圓圈）及經抗IL-13-或地塞米 松(dexamethaso時處置之試樣（暗圓圈）中之虫回蟲專一性組 織胺釋放及細蟲專-性IgE位準間的關聯性。 第20圖為-系列描述經人源化觀-冲題^工工）處 置之個別獼猴之血清IL-13位準變化的長條圖。在各組中之 57 200848429 標§己(例如12G_452)相當於該酬識編號。該“前，，試樣係在 該抗體投藥前收集。該時間“〇，，係在抗體投藥後24小時，但 在虫回蟲制抗前收集。 第21圖為描述在無血清存在(“無血清，，)下；在得自經鹽 5液或1VIG-處置之動物之血清(“對照組，，)的存在了 ；或在抗 體才又藥4 )或特定抗體投藥後1-2週在得自經抗1]:^13抗 體處置之動物的血清之存在下，於〇、Uiu〇毫微克/毫升下 之非人類靈長目動物IL-13之STAT6磷酸化活性的長條圖。 以1 : 4稀釋濃度測試血清。（在本研究中係使用人源化 10 MJ2-7(MJ2-7v.2-l 1)及mAb 13.2 v2變體）。 弟22圖為表示藉在獼猴血清内之人源化MJ2-7 (hMJ2-7v.2-ll)而截獲之非人類靈長目動物IL-13的位準與 虫回蟲制抗後在該等BAL流體中所測定之炎症程度的關聯性 之直線圖。 15 第23A-23B圖為表示回應人類重組型ri1〇q il-13氣管 内注射之小鼠肺機能的改變之直線圖；第23A圖表示回應霧 化乙醯丑甲基膽素(metacholine)劑量增加之呼吸道阻力變 化，笫23B圖表不回應務化乙丑曱基膽素劑量增加之動態 肺順應性(Cdyn)變化。 20 第24A-24B圖為表示回應人類重組型R110Q IL-13鼻内 投藥之小鼠中之肺炎症及細胞素產生增加的長條圖。在第 24A中，係藉細胞分類計數而測定嗜伊紅細胞及嗜中性白血 球在支氣管肺泡灌洗(BAL)中之百分比。在第24B圖中，係 藉細胞小粒排列計數而測定細胞素、MCP4、TNF-I、及IL-6 58 200848429 在BAL中之位準。數據為每一群組10隻動物之中位數 土s.e.m 〇 第25A-25B圖為表示支氣管内及靜脈投藥後，在BAL 及血清内之人源化MJ2-7-ll(hMJ2-7v.2-ll)抗體位準的點 5 圖。在第1、2、及3天時，以支氣管内投藥方式使動物經人 類重組型R110Q IL-13或等量(20微升）鹽液處置。在第〇天及 人類重組型R110Q IL-n之各次投藥前2小時投與人源化 MJ2-7V.2-11抗體。第25A圖描述在第〇天時以靜脈注射方式 投與該抗體及在第1、2、及3天時以腹膜内注射方式投與該 10 抗體；或在第0、1、2、及3天時以鼻内投藥方式投與該抗 體（如第25B圖所示）之結果。藉ILISA而測定BAL及血清中 之人類IgG總位準。 第26A-26C圖表示鼻内投與可誘發肺機能改變之人類 重組型R110Q IL-13後，人源化MJ2-7V.2-11抗體之效用。第 15 26八圖表示以自基線之變化表示的肺阻力（RI ;厘米H2〇/毫 升/秒）變化。第26B圖表示以誘發相當於自基線之2·5毫升 %0/厘米/秒的變化之肺阻力（ri)所需乙醯丑甲基膽素劑量 表示之數據。表示各處置群組之中位數值。藉雙尾t_檢定法 而計算P-值。第26C圖表示在BAL及血清中之人類1§(3位準 20 中位數。 第27A-27D圖表示支氣管内投與人類重組型ri IL-13及鼻内投與人源化MJ2_7v.2-ll抗體後，僅投與人類重 組型R110Q IL-13(第 27A-27B圖）或與人源化MJ2-7v.2-l& 體一起投與（第27C-27D圖）之BAL及血清位準的變化。表示 59 200848429 各群組之中位數值。n.d·為未檢測。 第28A-28B圖為表示鼻内投與人類重組型R110Q IL-13 及鼻内投與500、100、及20微克人源化MJ2-7v.2-ll與人源 化13·2ν·2、鹽液或500微克IVIG後，滲入BAL位準内的嗜伊 5 紅血球（第28Α圖）及嗜中性白血球（第28Β圖）之點圖。藉細胞 分類計數而測定嗜伊紅細胞及嗜中性白血球百分比。表示 各群組之中位數值。藉雙尾檢定法而測定ρ-值並表示各經 抗體處置之群組與IVIG之比較。 第29A-29C圖為表示鼻内投與人類重組型Rii〇Q IL-13 10 及鼻内投與500Tg之人源化MJ2-7V.2-11、人源化13·2ν·2或 IVIG或鹽液後，細胞素位準，分別為MCP-；l、TNF-I、及IL-6 位準之變化的點圖。虛線表示檢定靈敏性之極限。數據代 表各群組之中位數值。根據雙尾t_檢定法值切0001。 第30Α-30Β圖為表示如藉嗜伊紅血球增多而測定，人類 15 重組型R110QIL-13位準與肺炎症有直接關連；且與鼻内投 與人類重組型R110Q IL-13及鼻内投與5〇〇、1〇〇或20微克劑 量之人源化MJ2-7v.2-11抗體後之人源化MJ2-7v.2-11 B AL 位準成反比之點圖。藉ELISA而測定人源化MJ2-7V.2-11抗 體BAL位準。藉細胞小粒計數分析而測定人類重組型 20 R11〇Q IL_13 BAL位準。藉細胞分類計數而測定嗜伊紅血球 %。在以下之位準間表示結合性：（第3〇A圖）嗜伊紅血球性 炎症及人類重組型R110Q IL_13i%，其包括得自以下之數 據·鹽液對照組動物、僅經人類重組型Rn〇Q几_13處置之 小扒、及經人類重組型R11〇Q 、1〇〇、及2〇丁§之 60 200848429 人源化MJ2-7v.2-ll抗體或500微克IVIG處置之小鼠；及（第 30B圖）人源化MJ2-7V.2-11及IL-6i%，其包括得自以下之數 據：經500、100、及2〇微克人源化MJ2-7V.2-11處置之小鼠。 藉線性回歸分析而測定r2及p-值。 5 第31A-31B圖為表示分別在各種小鼠及大鼠組織内之 [1251]-標記之人源化13·2ν·2抗IL-13抗體及[1251]_標記之人源 化MJ2-7v_2-ll抗體的濃度之直線圖。靜脈注射抗IL_13抗體 後，於1、24、168、及336小時下（第31A圖）或1、48、168、 336、及840小時下（第31B圖）收集組織試樣。 10 第32A-32B圖為表示經過一段時間後，實測及預測之 IL-13及抗IL-13抗體位準的直線圖。在第32A圖中，係對未 作過實驗對象之獼猴投與1毫克/公斤之人源化Mj2-7v.2-ll 抗體。使用專一性ELISA在0-45天内定量總IL-13及人源化 MJ2-7V.2-11血清位準。根據第4〇圖中所示模式之預測IL-13 15 及人源化^2-7¥.2-11抗體位準係用於比較。在第KB圖 中’係於弟0天對獼猴投與人源化13·2ν·2及人源化 MJ2-7v.2_l 1抗體並於第1天進行虫回蟲制抗。使用專一性 ELISA在至高120天之時間内定量總IL_丨3血清位準。 第33圖為人源化MJ2-7V.2-11之PK-PD模式的圖式。Ab 20 為 hMJ2-7v.2-ll。複合體為 hMJ2-7v.2-ll/IL-13複合體。 CLd，Ab及CLAb刀別為hMJ2-7v.2-l 1之分佈清除率及血清清 除率。CL_plex及CLil·丨3分別為該複合體及il- 13之金清清除 率。Ksyn為零階IL-13合成速率常數，尺⑽為第二階結合速率 常數，且Kw為第一階解離速率常數。v及％分別為 61 200848429 hMJ2-7v.2-ll在該血清（中央)及第二區室中之分佈體積。 第34圖表不在獼猴組織内之平均hMJ2-7v.2-l 1及總 IL-13/辰度日守間特性。對未作過實驗對象之獼猴投與單 毫克/A斤1V或2宅克/公斤SC劑量之hMJ2-7ν·2-11並對經蛔 5蟲制抗之獼猴投與單一 Η)毫克/公斤W劑量之 hMJ2-7v.2-l卜該hMJ2_7v2-11投藥後％小時，使用〇75微 克豬蛔触抗原進行該制抗。使用定量elisAs測定總il_13(c) 辰度。數據點表示個別動物值(A)或平均值(8及〇)。就該等 平均值而έ，在該等平均值之計算不包括sc群組内之第5 1〇號猴子的情況下，1毫克/公斤-IV群組之N=3，2毫克/公斤 -SC群組之N = 2,而10毫克/公斤-IV群組之N=8。誤差長條 圖表示該等平均值之標準偏差。M=猴子。 第35圖為一系列表示使用第33圖中所述之經整合 PK-PD模式擬合單一劑量之應^^後， 15 hMJ2-7v.2-ll(閉合圓圈）及總IL-13(開式圓圈）濃度的適合 度(goodness-of_fit)標繪圖。表示5隻未作實驗對象(N=3，i 毫克/公斤IV及N=2，2毫克/公斤SC)及8隻經蛔蟲制抗的獼 猴（1 〇毫克/公斤，IV)在投與單一劑量hMJ2-7v.2-11後之實測 與預測之個別濃度(A)及個別稱重之殘留物及個別預測之 20 濃度(B)。與本研究之其它未作實驗對象之猴子比較，由於 末期中之hMJ2-7v.2-ll及總IL-13位準之急劇下降，所以自 這些分析排除該SC群組中之一動物。表示一未作實驗對象 (C)及一經蛔蟲制抗之猴子（D)在IV注射hMJ2-7ν·2-11後之 代表性個別發作，且預測之hMJ2-7v.2-ll及總IL-13位準係 62 200848429 分別由實線及虛線表示。 第36A及遍圖為描述對獼猴單—以投與賺士加 後之假性游離態IL-U與總IL_13濃度·時間分析之圖解。就 未作為實驗對象之猴子（第36A圖）而言，在研究丨中其單一 5劑量被認是1G毫克/公斤而就經始蟲制抗之猴子（第％剛 而言’在研究2中其單-劑量為1〇毫克/公斤且在 臟^丨丨投藥⑻天）後24小時進行細蟲制抗。游離態 IL-13係由實線表示，而總IL_13係由虛線表示。 第37A及37B圖為表示對獼猴進行hMJ2m i之不同 1〇投藥方式後，假性游離態IL-13濃度_時間分析之圖解。未作 實驗對象之猴子（第37八圖）及經虫回蟲制抗之猴子（第37B圖） 之hMJ2-7v.2_ll(如所示）的單一IV團式劑量為是i、5、1〇、 2〇或5〇毫克/公斤。假定於投藥前（第〇天）進行細蟲制抗以模 擬“確定的呼吸道炎症，，情況。 15 帛38圖為自表示人源化MJ2_7v.2-ll在正常獼猴及經虫回 蟲制抗之獼猴組織内之濃度-時間分析的ρΚ數據所畫出之 直線圖。 第39圖為自表示人源化13.2ν·2在正常獼猴及經蛔蟲制 抗之獼猴組織内之濃度-時間特性的ΡΚ數據所畫出之直線圖。 20 第40圖為几_13及抗IL-13抗體配置在獼猴組織内之化 學計量PK-PD模式，其中：Ab為抗IL-13抗體；複合體為Ab 及IL-13複合體；Conlp為區室；CLdAb及CLAb分別為Ab之分 佈清除率及血清清除率；CLe〇mplex為該複合體之血清清除 率；KSYn為零階IL-13合成速率常數；KDEG為第一階il-13 63 200848429 :率:數:v‘為第三階結合速率常數;K。暑階解離 視體積；為在該血清及第二區室内之分佈 及IL姆有^下假定㈣階；抗Μ 5 10 15 笛41、、耳、‘合比；且V-IL—i3=V複合雜=VlL_13=v。 «輕㈣未作實驗料之獼⑽投與丨毫克/公 、。二IL^的制血清濃度之直線®。使崎自表8所述之 及第34圖所述之濃度時間特性、及第_所提供之模 一預測數據’且其代表費時至高50天。 弟42圖為表示對經蛔蟲制抗之鞠猴…注射丨毫克/公斤 之人源化MJ2.7v.2-11後，游離態及人源化跡7ν·2_!】·結合 几七之預測血清濃度的直_。使用得自表8所述之研究 及第34圖所示之濃度.時間分析圖、及第4_所提供之模式 以預測數據’且其代表費時至高150天。 弟3圖為一糸列表示人源化MJ2-7v.2-l 1之3種ΡΚ參數 ▽如及沁2)之變異體形尺度之直線圖。實線代表使用得 自小鼠、大鼠及猴子之數據基於線性回歸的擬合曲線。虛 線代表95。/。信賴區間。 亚 第44圖為表示經抗IL-13抗體治療（開式圓圈）或安慰劑 療（閉合圓圈）而處置之人類患者在經過敏原制抗後之於 各時間點（過敏原制抗後之時間（h)下的FEV1之變化百分比 (FEVl變化％)的直線圖）。所示之結果為初投與抗IL-13抗體 或安慰劑前兩週之篩檢日當天進行過敏原制抗之結果。 (h):小時；EAR :早期氣喘反應；LAR :晚期氣喘反應。 64 200848429 第45圖為表示經抗比_13抗體治療（開式圓圈）或安慰劑 冶療（閉合圓圈）之人類患者在經過敏原制抗後於各時間點 (過敏原制抗後之時間（h))下的FEV1之變化百分比(FEVp^ • 化％)的直線圖。所示結果為初投與抗IL-13抗體或安慰劑 後，在第14天進行過敏原制抗之結果。（h):小時；ear : 早期氣喘反應；LAR :晚期氣喘反應。 第46圖為表示經抗比_13抗體治療（開式圓圈）或安慰劑 r 》療㈤合圓圈）之人類患者在過敏原制抗後於各時間點（過 敏原制抗後之時間（h))下，FEV1之變化百分比（FEV1變化 /〇)的直線圖。所示結果為初投與抗〖|^13抗體或安慰劑後在 第35天進行過敏原制抗之結果。（h):小時；EAR:早期氣 喘反應；LAR :晚期氣喘反應。 第47圖為表示在第14及35天之血清濃度（毫微克/毫升) 的曲線圖。 第48圖表示初投與抗體（或安慰劑）後，在第14及35天於 i 該EAR(早期）及LAR(晚期）期間之最大下降百分比（最大下 降％)及該下降百分比曲線下之面積（下降％AUC)的表。亦顯 ， 示 P值(P_val)。 ^ 第49圖為表示投藥後經過敏原一段時間（天數），在人類 2〇 患者組織内之該13·2ν2抗體血清濃度（毫微克/毫升）的直線 圖。細線係描述以4¾克/公斤之單一漸增劑量投與丨3·2ν2 抗體之該ΡΚ特性分析。粗線係描述以兩次2毫克/公斤劑量 投與之13·2ν2抗體的ΡΚ特性分析。這兩次劑量之投藥可分 ^ 週。 65 200848429 第50圖為表示得自試驗A&B之藉毫克/公斤劑量對81 個受實驗者之個別體重而標準化的個別Auc之曲線圖。 第51圖為表示得自試驗A&B之藉總劑量（體重*毫克/ 公斤劑$ )對81個受實驗者之個別體重而標準化之個別 5 AUC的曲線圖。 第52圖為表示藉實際劑量（體重*毫克/公斤劑量）而標 準化之13.2v2AUC曝露量的曲線圖。 【資】 較佳實施例之詳細說明 1〇 ▲本文揭示用於處置及/或監測IL-13相關疾病或病症之 /口療的方法及組成物。在—實施例中，中請者已發現相對 於未經治療之受實驗，1L·13拮抗劑，例如IL-13抗體分子之 技藥可減少文實驗者，例如人類受實驗者之經過敏原誘發 =早期及/或晚期氣喘病反應之至少_種症狀。可中請專利 5乾圍3亥文實驗者接觸危害（例如過敏原懷數分鐘内及在早 期氣，病反應期間（例如接觸該危害後至高約3小時)檢測出 或多種氣喘病症狀減少。在晚期氣喘病反應期間（例如危 害接觸後約3至24小時）可維持症狀之減少。在其它實施例 2〇卜係揭科估抗1L·13抗體分子及/與該抗體分子有關之治 20療=式的方法。該等評估方法包括檢測該受實驗者組織内 抗IL 13抗體分子之至少_種藥物動力學/藥理動力學 二K/PD)參數。因此，係揭示比_13結合劑或抬抗劑用於減 =或抑制、及/或預防或延緩—或多種與受實驗者之早及/ 或晚期IL-13相關疾病或病症有關之症狀的發作之用途。在 66 200848429 其它實施例中，亦揭示用於評估IL-13結合劑或 療或預防受實驗者之IL_13相關疾病或病症的動力及 效力之方法。 定義_ 5 $方便起見，文中定義特定名詞。本專利說明書從頭 ^ 至尾可發現另外定義。 、 該名詞“IL-H”包括本項技藝已知為IL_13之細胞素之 , 全長未處理形式（不考慮物種起源，且包括哺乳動物，例如 人類及非人類靈長目動物IL-13)以及其成熟、經處理形式、 10 及此等細胞素之任何片段(至少5種胺基酸之片段）或變體。 可根據該全長、未處理之人類IL-13序列的編號以標示該 IL-13序列内之位置。就代表性全長猴子IL-13而言，見序列 辨識編號：24 ;就成熟、經處理猴子IL_13而言，見序列辨 識編號：14;就全長人類il-13而言，見序列辨識編號：178， 15 且就成熟、經處理猴子IL-13而言，見序列辨識編號：124(第 1圖）。代表性序列之詳述如下： MALLLTTVIALTCLGGFASPGPVPPSTALRELIEELVNITQNQK APLCNGSMVWSINLTAGMYCAALESLINVSGCSAIEKTQRML SGFCPHKVSAGQFSSLHVRDTKIEVAQFVKDLLLHLKKLFRE 20 GRFN (序列辨識編號：178) 由於8種胺基酸序列，人類與獼猴IL-13序列之胺基酸 序列的相同度為約94%。這些差異之一，R130Q代表典型上 表現在氣喘病患者之人類共同多形性（Heinzmann等人 (2000) Human Mol Genet. 9:549-559) 9 67 200848429 IL-13受體蛋白質及其可溶性形式（例如IL-13Ra 1及 IL-13Ra 2或其融合物）之代表性序列係描述在以丁資料 中：例如Donaldson等人（1998) J Immunol· 161:2317-24 ;美 國專利6,214,559 ;美國專利6,248,714 ;及美國專利 5 6,268,480。 IL-13/IL-13R多肽之該短語“生物活性”係指對應成熟 IL-13多肽之一或多種生物活性，其包括，但不限於：（J) 與IL-13多肽(例如人類IL-13R多肽）交互作用，例如結合； (2)與信號傳導分子，例如7共有物；（3)激發stat蛋白質， 10 例如SATA6之磷酸化反應及/或活化反應；（4)誘導CD23表 現；（5)藉人類B細胞而產生IgE ; (6)誘導活體内經抗原誘發 之嗜伊紅血球增多；（7)誘導活體内經抗原誘發之支氣管縮 小；（8)誘導活體内經藥物誘發之呼吸道反應過敏；（9)誘導 活體内嗜伊紅趨化因子；及/或（10)藉嗜鹼細胞而誘導組織 15 胺釋放。 “IL-13相關疾病或病症’’為其中IL_13為該疾病或病症 之病理或症狀的主因之疾病。因此，可使用IL-13結合劑， 例如本身為具有一或多種IL-13相關活性之拮抗劑的IL-13 結合劑以治療或預防該疾病。 20 如文中使用，IL-13/IL-13R拮抗劑之“治療上有效量，，係 指一旦以單一或多劑量對患者，例如人類患者投與時，能 有效治療、減少疾病之嚴重性、改善或預防該疾病之一或 多種症狀或可延長該患者之存活期（該存活期優於未使用 此種療法之患者）的藥劑數量。 200848429 如文中使用，IL-13/IL· 13R拮抗劑之“預防上有效量，，係 指一旦以單一或多劑量對患者，例如人類病症投與時，能 有效預防、減少IL-13相關疾病或病患，例如如文中所述之 疾病或病症之嚴重性或延緩其發作或復發的IL-13/IL-13R 5 拮抗劑之數量。 如文中使用“單一治療間隔，，係指當以單一劑量或有限 次數之重複劑量投與時可減少IL-13相關疾病或病症，例如 如文中所述之疾病或病症之嚴重性、改善、預防或緩緩其 一或多種症狀之發作或復發的IL-13/IL-13R拮抗劑投藥之 10 數量及/或次數。在實施例中，在單一治療間隔期間，該投 藥之次數限於不超過2或3次劑量，例如自初服藥算起在一 週或更短之時間内投與該重複劑量。 該名詞“單離性”係指實質上無其自然環境之分子。例 如單離蛋白質為貫質上無得自其被衍生之細胞或組織來源 15 之細胞物質或其它蛋白質。該名詞係指其中該單離蛋白質 具足以呈治療組成物之形式投與之純度或具至少70%至 80%(w/w)純度、更佳至少80%-90%(w/w)純度、又更佳 90-95%純度的製劑。“分離性”化合物係指自可獲得該化合 物試樣的至少一種組份之至少90%所移除的化合物。文中 20 所述之任何化合物可以呈單離或分離性化合物之形式提供。 如文中使用，該名詞“在低嚴厲、中嚴厲、高嚴厲或很 高嚴厲條件下進行離交反應“係描述用於離交反應及清洗 之條件。用於進行離交反應之指導可以在以下參考文獻找 到：Current Protocols in Molecular Biology，j〇hn Wiley & 69 200848429 5 15 20
Sons，Ν·Υ. (1989)，6·3·1-6·3·6。在該參考文獻中描述水性及 非水性方法且可使用任一種方法。文中有關之專一性雜交 反應條件如下：1)於約45°C下在6χ氯化納/檸檬酸納（ssc) 内進行低嚴厲雜交反應，繼而至少於50。(：就低嚴厲（就低嚴 厲條件而言，該等清洗步驟之溫度可增至55 °C )下在0·2Χ SSC、0.1% SDS内進行兩次清洗；2)於約45°C下在6Χ SSC 内進行中嚴厲雜交反應，繼而於60°C下在0.2X SSC、0.1% SDS内進行一或多次清洗；3)於約45°C下在6X SSC内進行 高嚴厲雜交反應，繼而於6(TC下在0.2X SSC、0.1% SDS内 進行一或多次清洗；及較佳為4)於65°C下在0.5M鱗酸鈉、 SDS内進行很高嚴厲離交反應，繼而於65。〇下在0.2X SSC、1%SDS内進行一或多次清洗。很高嚴厲條件(4)為較 佳條件且除非另有指定，其係為所使用之條件。 本發明該等方法及組成物包括具有明確指定之序列或 汽貝上與其相同或類似之序列（例如與該等明確指定之序 歹J的相同度為至少85%、90%、95%或更高之序列）的多肽及 核峻。就胺基酸序列而言，文中使用之該名詞“實質上相同，， 係指含有i)與第二胺基酸序列之線列胺基酸殘基相同之 約或最少數胺基酸殘基或Π)可在該第二胺基酸序列之線 ^基酸進行保留性取代之第_胺基酸序列，藉此該第一 士 -絲酸序列可具有共同結構域及/或共同機能活性。 3有與㈣確指定之相的相同度為至少約$ 5 %、9 〇 % 技 ^ 92/°、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99% 、同結構域之胺麵相之名稱實質上相同。 70 200848429 就核苷酸序列而言，文中使用之該名詞“貫質上相同 係指含有與第一核酸序列之線列核苷酸相同之足夠或最少 數核笞酸的第一核苷酸序列，藉此該第一及第二核苷酸序 列可將具有共同機能活性之多肽編碼或可將共同結構的多 5 肽結構域或共同機能性多肽活性編碼。例如具與明確指定 之序列的相同度為至少約85%、90%、91%、92%、93%、 94%、95%、96%、97%、98%或99%之核苷酸序列的名稱 實質上相同。 該名詞“機能性變體”係指與自然發生之序列相同或可 10 藉一實質上相同核苷酸序列而編碼且可具有該自然發生之 序列的一或多種活性之胺基酸序列。 序列群(該等名詞在文中可交換作用）間之同源性或序 列相同性的計算法如下。 為了測定兩種胺基酸序列或兩種核酸序列之相同度 15 %，將該等序列排成直線以獲得最佳比較(例如為了獲得最 佳直線排列，可將空隙導入第一及第二胺基酸或核酸序列 之一或兩者中且為了比較目的，可忽略非同源性系列）。在 一較佳實施例中，用於比較目的所線列之一參考序列的長 度為該參考序列長度之至少30%、較佳至少40%、更佳至少 20 50%、60%、且又更佳至少 70%、80%、90%、100%。接著 比較於對應胺基酸位置或核苔酸位置之該等胺基酸殘基或 核苷酸。當該第一序列中之一位置由與該第二序列中之對 應位置相同的胺基酸殘基或核苷酸佔據時，則於該位置之 該等分子皆相同（如文中使用之胺基酸或核苔酸“相同性，，相 71 200848429 當於胺基酸或核酸“同源性，，）。 考慮到獲得這兩種序列之最佳直線排列必須導入之空 隙數、及各空隙長度，這兩種序列間之相同度％為藉該等 序列而共享之相同位置數的函數。 5 可使用數學演算法進行序列之比較及兩序列間之相同 度％的測定。在一較佳實施例中，係使用業經併入GCG套 裝套裝（可以於http://www.gcg.com獲得）之GAP程式中的
Needleman and Wunsch ((1970) J. Mol. Biol. 48:444-453)演 算法，利用Blossum 62矩陣或PAM250矩陣及16、14、12、 10 10、8、6或4之空隙重量及1、2、3、4、5或6之長度重量以 測定兩胺基酸序列間之相同度％。在又另一較佳實施例 中，係使用用該GCG套裝軟體（可於http://www.gcg.com獲得) 之GAP程式，利用NWSgapdna.CMP矩陣及40、50、60、70 或80之空隙重量與1、2、3、4、5或6之長度重量以測定兩 15 核苷酸序列間之相同度％。更特佳之參數值（及除非另指 定，應該使用之參數)為具有空隙罰分為12、空隙延長罰分 為4、及移碼空隙罰分為5之Blossum 62該分矩陣。 可使用業經併入ALIGN程式（第2.0版）内之E· Meyers and W· Miller ((1989) CABIOS，4:11-17)之演算法，利用 20 PAM120重量殘基表、空隙長度罰分為12及空隙罰分為4以 測定兩胺基酸或核苷酸序列間之相同度百分比。 文中所述之該等核酸及蛋白質序列可作為“質疑序列 (query sequence)，’以進行可’例如辨識其它族成貝或相關序 列之共同資料庫的調查。可使用Altschul，等人（1990) j· Mol. 72 200848429
Biol· 215:403-10之NBLAST及XBLAST程式（第 2.0版）進行 此等調查。可使用該NBLAST程式，得分=1〇〇，字長=12進 行B L A S T核苔酸調查以獲得與本發明之核酸分子同源之核 苷酸序列。可使用該XBLAST程式，得分=50，字長=3進行 5 BLAST蛋白質調查以獲得與本發明之蛋白質同源之胺基酸 序列。為了獲得適於比較用之有空隙直線排列，可使用如 Altschul等人在Nucleic Acids Res· 25:3389-3402(1997年）中 所述之有空隙BLAST。當利用BLAST及有空隙的BLAST程 式時，可使用個該程式（例如XBLAST及NBLAST)之預設參 10 數。見http://www.ncbj.nlm.nih.gov 〇 該名詞“早期氣喘病反應”或“EAR”係指受實驗者接觸 過敏原後之反應初期。例如接觸過敏原後在前3小時(例如 約2.5、約2.75、約2.9、約3.25、約3.5小時）内發生之反應被 視為EAR。例如最大呼吸道縮小可發生在接觸後之約15-30 15 分鐘内。於該EAR期間發生之事件可包括自呼吸道巨大細 胞釋放介體，諸如白三烯素(例如lta4、ltb4、ltc4、ltd4、 LTE4、及/或LTF4)及/或組織胺，例如導致支氣管縮小及/或 呼吸道水腫瘤，及/或增加白三烯素及/或組織胺之位準（例 如高於接觸過敏原前，該受實驗者組織内之白三烯素及/或 2〇 組織胺位準）。用於EAR之治療法包括以下藥劑之投藥：抗 IL-13抗體(例如文中所述之抗體）、抗組織胺(例如氣拉替定 (loratidine(例如 CLARITIN®)、西替利讲（cetirizine)(例如 ZYRTEC㊣）、苯海拉明（diphenhydramine))、抗白三烯素（例 如扎非留卡（zafirlukast)、蒙特留卡（montelukast)(例如 73 200848429 SINGULAIR®))、IL-4 變體（例如品托吉拉(Pimrakiura))或這 些藥劑中之2或多種的組合。 該名詞“晚期氣喘病反應”或“LAR”係指於該EAR後發 生之受實驗者接觸過敏原後的反應期或在受實驗者接觸過 5敏原後約3小時開始之反應。作為另一實例，該LAR係在約 3-5小時後開始，於約6_12小時最大，且可持續至高約24小 時。與該EAR不同，該“化包括炎症細胞及/或黏液增加。 例如該LAR可以與呼吸道活性之增加及/或與例如該等呼吸 道及/或支氣管黏膜内之流入物及炎症細胞（諸如淋巴細 10 胞、嗜伊紅血球、及巨兔細胞）的活化作用有關（例如面於接 觸過敏原前，該受實驗者之，例如呼吸道及/或支氣管黏膜 内之炎症細胞（諸如淋巴細胞、嗜伊紅細胞、及巨噬細胞） 位準）。LAR之治療法包括以下藥劑量之投藥：抗體IL-13 抗體(例如文中所述之抗體）、類固醇(例如吸入性類固醇）、 15 召-促效劑（例如沙丁胺醇（albuterol)(例如VENTOLIN®、 PROVENTIL②、SALBUTAMOL®)、美它丙腎上腺素 (metaproteronol)(例如ALUPENT®、METAPREL⑨）、特布汉 林（terbutaline)(例如 BRETHINE®、BRICANYL® 或 BRETHAIRE®))或這些藥劑之2或多種之組合。 2〇 治療劑（例如抗IL-13抗體)之“固定(flat)，，劑量係指不需 考慮患者之體重或身體表面積，對該患者投與之劑量。該 固定劑量並非以毫克/公斤之劑量提供，而是以該治療劑量 之絕對數量提供。 抗體分子 74 200848429 IL-13拮抗劑及/或結合劑之實例包括抗體分子。如文中 使用，該名詞“抗體分子，，係指包含至少一種免疫球蛋白可 變結構域序列之蛋白質。該名詞“抗體分子，，包括，例如全 長、成熟抗體及一抗體之抗原結合片段。例如抗體分子可 5 包括重(H)鏈可變結構域序列（文中縮寫成VH)、及輕(L)鏈 可變結構域序列（文中縮寫成VL)。在一實施例中，抗體分 子包括一或兩重(H鏈可變結構域序列及/或兩輕(L)鏈可變 結構域序列中之一。抗原結合片段之實例包括：（i)Fab片 段，其係為由VL、VH、CL及CH1結構域所組成之單價片 10 段；（ii)F(ab’)2片段，其包含兩藉於鉸鏈區之二硫橋基而連 接之Fab片段的雙價片段；（iii)由Vh及CH1結構域所組成之 Fd片段；（iv)由抗體之單臂的Vl及VH結構域所組成之Fv# 段；（v)VH或VHH結構域；（vi)dAb片段，其係由VH結構域 組成；（vii)駱駝科動物或駱駝源化可變結構域；及(viii)單 15 鏈Fv(scFv) 〇 該等VH及VL區域可進一步細分成超可變區域，其稱為 “互補決定區”(CDR)，且夾雜更具保留性之區域，亦即“框 架區”(FR)。該框架區及CDRs之範圍業經許多方法定義（見 Kabat，Ε· A·，等人（1991) Sequences of Proteins 〇f 20 Immunological Interest，Fifth Edition，U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242; Chothia，C.等人（1987) J· Mol. Biol. 196:901-917 ;及藉 Oxford Molecular’s AbM抗體模型化軟體所使用之該AbM 定義）。一般而言，見，例如Engineering Lab Manual (Ed.: 75 200848429
Ducbcl, S. and Kontermann， R·， Springer-Verlag， Heidelberg)。除非有關明確指定，通常使用以下定義：該 重鏈可變結構域之CDR1的AbM定義及用於其它cDRs之 Kabat定義。此外，亦可使用Chothia超可變環進行以Kabat 5 或AbM CDRs描述本發明之實施例。各VH及VL典型上包括 3個CDR及4個FR，其係以下述順序自胺基酸末端排列至魏 基末端。 如文中使用，“免疫球蛋白可變結構域序列，，係指可形 成免疫球蛋白可變結構域之結構的胺基酸序列。例如該序 10 列可包括一自然發生之可變結構域的所有或部份胺基酸序 列。例如該序列可或可不包括卜2或多個沁或^末端胺基 酸，或可包括其它能夠與該蛋白質結構之形成相容的變體。 該名詞“抗原結合部位，，係指包含可形成能結合至該 IL-13，例如哺乳動物IL-13，例如人類或非人類靈長目動物 15 I1"13或其抗原決定位之介面之決定子的IL-13結合劑部 份。就蛋白質（或蛋白質類似物）而言，該抗原結合部位典型 上包括一或多個可形成能結合至IL-13之介面的環（至少4種 胺基酸或胺基酸類似物之環）。典型上，-抗體分子之抗原 結合部位包括至少—或二個CDR，或更典型至少3、4、5或 20 6 個 CDR。 “抗原決定位”係指藉結合劑，例如抗體分子而結合之 心乾化。物定位可以是_或構形抗原決定位或 其組合y列如就該標乾化合物為蛋白質而言，抗原決定位 可以指藉結合劑而結合之胺基酸。重疊抗原決定位包括至 76 200848429 少一共同胺基酸殘基。 如文中使用之該等名詞“單株抗體，，或“單株抗體組成 物”係指具單一分子組成物之抗體分子的製劑。單株抗體組 成物顯示對特定抗原決定位具單一結合專一性及親和力。 5 可藉融合瘤技術或藉不使用融合瘤之方法（例如重組方法) - 而製成單株抗體。 “有效地人類”蛋白質為不會引起中和抗體反應，例如 人類抗鼠抗體(HAMA)反應之蛋白質。在許多情況下，例如 / 若重複投與該抗體分子以，例如治療慢性或復發病症時， 10 HAMA可成為問題。由於自血清之抗體清除率增加（見，例 如 Saleh 等人，Cancer Immunol. Immunother·，32:180-190 (1990))及由於潛在過敏反應（見，例如LoBuglio等人， Hybridoma, 5:5117-5123 (1986))，HAMA反應可以使重複性 抗體投藥潛在性無效。可使用許多方法以獲得抗體分子。 15 產生抗體分子之一代表性方法包括篩選蛋白質表現性 基因庫，例如噬菌體或核糖體呈現技術基因庫。噬菌體呈 、 現技術係描述在以下參考文獻中：例如Ladner等人，美國
專利第 5,223,409號；Smith (1985) Science 228:1315-1317; WO 92/18619 ； WO 91/17271 ； WO 92/20791 ； WO 92/15679 ； 20 WO 93/01288 ; WO 92/01047 ; WO 92/09690 ;及 WO 90/02809。除了使用呈現技術基因庫外，可使用其它方法 以獲得抗IL-13抗體分子。例如可使用IL-13蛋白質或其肽以 作為非人類動物，例如嗜齒目動物(例如小鼠、倉鼠或大鼠) 組織内之抗原。 77 200848429 在一實施例中，該非人類動物包括至少一部份人類免 疫球蛋白基因。例如可以使用人類ig基因座之大片段以處 理缺乏小鼠抗體產生之小鼠品系。使用該融合瘤技術，可 產生並選擇衍生自該等基因之具有所欲專一性的抗原專一 5 性單株抗體。見，例如XENOMOUSE™，Green等人（1994) Nature Genetics 7:13-21、US 2003-0070185、1996年 1〇月 31 曰公開之WO 96/34096、及1996年4月29日申請之PCT申請 案第 PCT/US96/05928 號。 在另一實施例中’早株抗體係得自該非人類動物，然 10 後經改質，例如人源化或去免疫化。Winter描述可用以製 備文中所述之人源化抗體的代表性CDR移植方法（美國專 利第5,225,539號）。特定人類類抗體之所有CDR可經至少一 部份非人類CDR取代，或僅部份該等CDR可經非人類CDRs 取代。僅需取代使該人源化抗體結合至預定抗原所需之 15 CDR 數。 可藉使用得自人類Fv可變結構域之同等序列取代未直 接涉及抗原結合作用之Fv可變結構域的序列而產生人源化 抗體。用於產生人源化抗體分子之代表性方法係由以下提 供：Morrison (1985) Science 229:1202-1207; Oi等人（1986) 20 Bio Techniques 4:214 ;及US 5,585,089 ; US 5,693,761 ; US 5,693,762 ; US 5,859,205 ;及US 6,407,213。這些方法包括 分離、操作、及表現可將得自重鏈或輕鍵中之至少一種的 所有或部份免疫球蛋白Fv可變結構域編碼的核酸序列。如 上述以及其它來源可知，此等核酸可得自能產生抗預定標 78 200848429 靶之抗體的融合瘤。然後可將能將該人源化抗體分子編碼 之重組型DNA植入合適表現性載體内。
亦可藉人類T細胞抗原決定位之專一性刪除或藉w〇 98/52976及WO 00/34317中所述之方法進行“去免疫化作 5 用”而修飾抗體分子。簡言之，可分析抗體之該重鏈及輕鏈 可變結構域的能夠結合至MHC Class II之肽；這些肽代表潛 在T細胞抗原決定位（如WO 98/52976及WO 00/34317中所 定義）。為了檢測潛在T細胞抗原決定位，可應用電腦模擬 方法（亦稱為“肽穿線法（peptide threading)”，且又如WO 10 98/52976及WO 00/34317中所述，可調查人類MHC class II 結合肽之資料庫之存在於VH及VL序列中的模序。這些模序 可結合至18種主要MHC Class II DR同種異型中之任一 種，因此可構成潛在T細胞抗原決定位。可藉取代該等可變 結構域中之少數胺基酸殘基或較佳藉單一胺基酸取代作用 15 而去除所檢測之潛在T細胞抗原決定位。典型上，係進行保 留性取代作用。通常，但非絕對，可使用與人類胚源細胞 抗體序列中之一位置共有的胺基酸。 人類胚源細胞序列係描述在以下參考文獻中：例如
Tomlinson等人（1992) J· Mol· Biol. 227:776-798; Cook，G. P. 20 等人（1992) J· Mol· Biol. 227:799-817 ;及Tomlinson等人 (1995) EMBO J· 14:4628-4638。V BASE使用手冊提供人類 免疫球蛋白可變區序列之綜合指南（由Tomlinson，Ι·Α·等人 (MRC Centre for Protein Engineering，Cambridge，UK)所編 製。這些序列可作為人類序列，例如框架區及CDRs之來 79 200848429 源。例如US 6,300,064中所述，亦可使用一致人類框架區。 另外，玎使用標準重組型DNA技術以製備嵌合型、人 源化、及單鏈抗體分子（例如兼包括人類及非人類部份之蛋 白質）。例如亦可使用能表現重鏈及輕鏈基因，但是不能表 5 現内源性小鼠免疫球蛋白重鏈及輕鏈基因之轉殖基因的小 鼠以製備人源化抗體。 另外，文中描述之抗體分子亦包括結合至IL-13、可干 擾機能性IL-13傳訊複合體形成、且在該重鏈之恆定區内發 生突變的抗體分子。有時較佳可以使該重鏈之恆定區突變 10 並失活。例如可在該重恆定區内進行突變以產生對該Fc受 體(FcR)及/或補體具低結合性之抗體；此等突變在本項技藝 中已為吾人類所熟知。IgG之該重鏈之恆定區的胺基序列之 此種突變實例係以序列辨識編號：128提供。CL及CH亞單 位（例如CH1)之特定活性片段係彼此共價鍵結。另一方面係 15 提供獲得對可參與形成機能性IL-13傳訊複合體之IL-13的 表面具專一性之抗原結合部位之方法。 代表性抗體分子可包括以如序列辨識編號：3〇_46所揭 不之VL鏈的序列及/或以如序列辨識編號 :50-115所揭示之 VH鍵的序列，但是亦可包括能保留乩_13結合性之這些序列 20的變體。此等變體可衍生自使用本項技藝中已為吾人類所 热知之技術所得到之序列。可在該等FR4CDR内進行胺基 自夂取代：刪除或添加。於該等框架區内之變化通常用以改 二省抗體刀子之安定性及免疫原性，該等内之變化通 ¥用X體分子對其標乾之親和力。典型上在經 200848429 驗上係藉改變該CDR區並測試該抗體分子而測定此等親 和增加之變化。可根據Antibody Engineering，第2版（丨"5)， ed. Borrebaeck，Oxford University Press 中所述之方法進行 此等變化方式。 5 用於獲得重鏈可變結構域序列（其係為文中所述之重 鏈可變結構域序列的變體)之代表性方法包括添加、刪除、 取代或插入文中所述之重鏈可變結構域序列内之一或多種 胺基酸，可選擇性合併該重鏈可變結構域序列與一或多種 輕鏈可變結構域序列，並測試包括適於專一性結合至IL-13 10 之經改質重鏈可變結構域序列的蛋白質，且(較佳）測試此種 抗原結合性結構域調節一或多種IL_13相關活性之能力。可 使用利用文中所述之輕鏈可變結構域序列的一或多種序列 變體之類似方法。 可藉產生具有一或多種不同CDR之基因庫並篩選該等 15 基因庫以找出可結合至IL-13之，例如具有改良親和力的成 員而製備抗體分子之變體。例如Marks等人在
Bio/Technology (1992) 10:779-83中描述產生全套抗體可變 結構域之方法’其中朝向或鄰接於該可變結構域區域之5, 端的一致引子係與人類類VH基因之第三框架區之一致引 20 子一起使用以得到缺乏CDR3之全長VH可變結構域。該等 結構域可以與特定抗體之CDR3組合。再者，該經CDR3衍 生之序列可經缺乏CDR3之全套VH或VL結構域改組，且經 改組之全部VH或VL結構域可以與一同源VL或VH結構域 組合以得到專一性抗原結合性片段。該片段接著可呈現在 81 200848429 合適宿主系統，諸如WO 92/01047之噬菌體呈現技術系統 中，因此可選擇合適的抗原結合性片段。類似的改組或組 合技術亦可藉81611111^1'^&1：11代(1994) 370:389-91)而揭示。另 一選擇方法為使用一或多種可在全部可變結構域内產生突 5 變之特定VH及/或VL基因的無規致突變以產生經改變的 VH或VL區。見，例如Gram等人Proc. Nat. Acad. Sci. USA (1992) 89:3576-80。 可使用之另一種方法為使VH或VL基因之CDR區進行 致突變。此等技術係由，例如Barbas等人(Proc. Nat. Acad. 10 Sci. USA (1994) 91:3809-13)及 Schier 等人（】.1^〇1.：61〇1· (1996) 263:551-67)揭示。類似地，可將一或多種或所有3種 CDR移植入全套VH或VL結構域内或甚至某種其它架構(諸 如纖維網蛋白（fibronectin)結構域）内。評估所形成蛋白質對 IL-13的結合力。 15 在一實施例中，係，例如藉致突變而修飾可結合至標 乾之結合劑以得到一批改質結合劑。然後評估該等改質結 合劑以鑑定一或多種具有改變的機能性質（例如改良結合 性、改良安定性、活體内延長安定性）之經改變結合劑。在 一實施法中，係使用呈現技術基因庫技術以選擇或筛選該 20 批經改質結合劑。然後，例如藉使用較高嚴厲性或更競爭 性結合及清洗條件而自該第二基因庫鑑定較高親和力結合 劑。亦可使用其它篩選技術。 在某些實施例中，係將該致突變定標在已知區域或可 能位於該結合介面。若，例如該等經鑑定結合劑為抗體分 82 200848429 子’則致突變可以於如文中所述之重鍵或輕鏈之該等cdr 區進行1且，致錢可以在接I切接料CDR之框竿 區’例如特別為在CDR接合處之10、5或3種胺基酸内之框 架區内進行。就抗體而言，為了逐步作出改進，致突變亦 5 可受限於該等CDR之一或一些。 在一實施例中，係使用致突變以使抗體更類似一或多 齡源細胞序列。—代表性歸化方法可包括：鑑定一或 夕種與口亥單離抗體之序列類似（例如在特定資料庫中最類 似）的胚源細胞序列。然後可在該單離抗體内以漸增性、一 1〇起或兩者之方式進行突變（以胺基酸層次進行）。例如製備一 包括可將部份或所有可能胚源細胞突變編碼之序列的核酸 基因庫。然後評估該等經突變抗體以，例如辨識一相對於 该單雜抗體而言，具有一或多種另外胚源細胞殘基且仍然 有用（例如具有機能活性）的抗體。在一實施例中，係儘可能 將。午多胚源細胞殘基導入一單離抗體内。 在一貫施例中，係使用致突變以取代或將一或多種胚 源細胞殘基插入CDR區内。例如該胚源細胞CDR殘基可得 自與欲經改質之該可變結構域類似（例如最類似）的胚源細 月L序列。致突變後，可評估該抗體之活性(例如結合性或其 2〇 它機能活性）以測定該胚源細胞殘基或殘基群是否具耐受 性。可在該等框架區内進行類似致突變。 可使用不同方法以選擇胚源細胞序列。例如可選擇符 石適於選擇性或類似性之預定標準，例如至少一特定相同 度％，例如相同度％為至少乃、8〇、85、90、91、92、93、 83 200848429 94、95、96、97、98、99或99.5%之胚源細胞^ 至少2、3、5或1G種胚源細胞序㈣進行 CDR2而言，辨識-類他源細胞序狀步财包括選擇一 種此序列。就CDR3而言，辨識—類似胚源細胞序列^步驟 可包括選擇-種此序列’但是可包括個兩分職成該胺 基末端部份及該羧基末端部份之胚源細胞序列。在其它# 施法中，係使用超過敏原一或兩種胚源細胞序列以:、：: 形成一致序列。
在其它實施例中，該抗體可經改質以具有—改變的糖 10 基化模式（亦即與原有或天然醣基化模式不同）。如本文中所 使用，“經改變，，意指-或多個碳水化合物分子團已被刪除 及/或一或多個醣基化部位已添加至原有抗體。可藉改變該 胺基酸序列使其含有_基化部位一致序列而添加醣基化部 位至目前揭示之抗體，此等技術在本項技藝中已為吾人類 15 所熟知。增加該等抗體上之碳水化合物分子團數的另一種 方法為措使糖甘與该抗體之胺基酸殘基進行化學或酶催偶 合反應。這些方法係描述在以下參考文獻中：例如WO 87/05330、及 Aplin and Wriston (1981) CRC Crit. Rev. Biochem. 22:259-306。如本項技藝所述，可使用化學或酶 20 催方法以移存在於該等抗體上之任何碳水化合物分子團 (Hakimuddin等人（1987) Arch· Biochem· Biophys· 259:52 ; Edge等人（1981) Anal. Biochem· 118:131 ;及Thotakura等人 (1987) Meth· Enzymol. 138:350)。見，例如U.S· 5,869,046 有關於藉提供補救受體結合性抗原決定位而增加活體内半 84 200848429 導體衰期的改質法。 在一實施例中’該抗IL-13抗體分子包括至少1、2且較 佳3個得自文中揭示之抗體（例如MJ2-7)的輕鏈或重鏈可變 結構域之CDR。例如該蛋白質之CDR區内包括以下序列之 一或多種： GFNIKDTYIH(序列辨識編號：15)、 RIDPANDNIKYDPKFQG(序列辨識編號：16)、 SEENWYDFFDY(序列辨識編號：17)、 RSSQSIVHSNGNTYLE(序列辨識編號：18)、 KVSNRFS(序列辨識編號：19)、及 FQGSHIPYT(序列辨識編號：20)，或相對於上述序列， 具有每10個胺基酸相差不超過4、3、2.5、2、1.5、1或〇.5 個變化方式（例如取代、插入或刪除）之胺基酸序列的 CDR(例如差異數與該CDR長度成比例），例如每一 CDR至少 一變化方式，但是不超過2、3或4。 例如該抗IL-13抗體分子之輕鏈可變結構域序列的 CDR區内可包括以下序列中之至少1、2或3種： RSSQSIVHSNGNTYLE(序列辨識編號：18)、 KVSNRFS(序列辨識編號：19)、及 FQGSHIPYT(序列辨識編號：20)，或相對於上述序列， 每10個胺基酸相差不超過4、3、2.5、2、1.5、1或〇·5個取 代、插入或刪除的胺基酸序列。 禮抗IL-13抗體分子之重鏈可變結構域序列的cdr區 内可包括以下序列中之至少1、2或3種： 85 200848429 GFNIKDTYIH(序列辨識編號：15)、 RIDPANDNIKYDPKFQG(序列辨識編號：16)、及 SEENWYDFFDY(序列辨識編號：17)，或相對於上述 序列，每10個胺基酸相差不超過4、3、2.5、2、1.5、1或0.5 5 個取代、插入或刪除之胺基酸序列。該重鏈CDR3區之長度 可小於13或小於12個胺基酸，例如長度為11個胺基酸(使用 Chothia或 Kabat定義）。 在另一實施例中，該抗IL-13抗體分子之輕鏈可變結構 域序列的CDR區内可包括以下序列中之至少1、2或3種(括 10 號内之胺基酸代表適於特定位置之另外選擇）： (i) (RK)-S-S-Q-S-(LI)-(KV)-H-S-(ND)-G-N-(TN)-Y-L-(EDNQYAS)(序列辨識編號：25)或(RK)-S-S-Q-S-(LI)-(KV)-H-S-(ND)-G-N-(TN)-Y-L-E(序列辨識編號：26)或(RK)-S-S-Q-S-(LI)-(KV)-H-S_N-G-N-T_Y-L-(EDNQYAS)(序列辨識 15 編號：21)、 (ii) K-(LVI)-S-(NY)-(RW)-(FD)-S(序列辨識編號：27) ’ 或K-(LV)-S-(NY)-R-F-S(序列辨識編號：22)、及 (iii) Q_(GSA)-(STHHEQH-P(序列辨識編號：28)， F_Q_(GSA)-(SIT)-(HEQ)-(IL)_P(序列辨識編號：23)，或 20 Q-(GSAHST)-(HEQ)-I-P-Y_T(序列辨識編號：194)，或 F-Q_(GSAHSITHHEQ)-(IL)-P_Y-T(序列辨識編號：29)。 在一較佳實施例中，該抗IL-13抗體分子包括所有6種 得自MJ2-7或密切相關之CDR，例如相同或具有至少一個胺 基酸變化方式，但是不超過2、3或4個變化方式（例如取代、 86 200848429 刪除或插入)之CDRs的CDR。該IL-13結合劑可包括至少2、 3、4、5、6或7個IL_13接觸性MJ2-7胺基酸殘基。 在又另一實施例中，該抗IL-13抗體分子包括至少1、2 或3個具有相同正則結構之cdR區及MJ2-7之對應CDR區， 5 例如MJ2-7之重及/或輕鏈可變結構域的至少CDR1及 CDR2。 在另一實施例中，該抗IL-13抗體分子之重鏈可變結構 域序列的CDR區内可包括以下序列中之至少1、2或3種(括 號内之胺基酸代表適於特定位置之另外選擇）： 10 (i)G-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-(MI)-H(序列辨識編號·· 48)， (ii) (WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q.G (序列辨識編號·· 49)、及 (iii) SEENWYDFFDY(序列辨識編號：17)。 在一實施例中，該抗IL-13抗體分子包括至少1、2且較 !5 佳3個得自文中揭示之抗體（例如C65)的輕鏈或重鏈可變結 構域之CDR。例如該抗IL-13抗體分子之CDR區内包括以下 序列中之一或多種： QASQGTSINLN(序列辨識編號：118)、 GASNLED(序列辨識編號：119)、及 20 LQHSYLPWT(序列辨識編號：120)、 GFSLTGYGVN(序列辨識編號：121)、 IIWGDGSTDYNSAL(序列辨識編號：122)、及 DKTFYYDGFYRGRMDY(序列辨識編號：123)，或相 對於上述序列，具有每10個胺基酸相差不超過4、3、2.5、 87 200848429 2、1·5、1或0.5個取代、插入或冊J除的胺基酸序歹ij之CDR(例 如差異數與該CDR長度成比例），列如每一個CDR至少一變 化方式’但是不超過2、3或4。例如該蛋白質之輕鍵可變結 構域序列的CDR區内可包括以下序列中之至少1、2或3種： 5 QASQGTSINLN(序列辨識編號：118)、 GASNLED(序列辨識編號：119)、及 LQHSYLPWT(序列辨識編號：120)，或相對於上述序 列，每10個胺基酸相差不超過4、3、2.5、2、1.5、1或0.5 個取代、插入或刪除之胺基酸序列。 10 該抗IL-13抗體分子之重鏈可變結構域的CDR區内可 包括以下序列中之至少1、2或3種： GFSLTGYGVN(序列辨識編號：121)、 IIWGDGSTDYNSAL(序列辨識編號：122)、及 DKTFYYDGFYRGRMDY(序列辨識編號：123)，或相 15 對於上述序列，每10個胺基酸相差不超過4、3、2.5、2、 1.5、1或0.5個取代、插入或刪除之胺基酸序列。 在實施例中，該IL-13抗體分子可包括以下序列中之一種：
• DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSIVHSNGNTYLE WYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFT 20 LKISRVEAEDVGVYYC FQGSHIPYT(序列辨識編號：30) • DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSIVHSNGNTYL EWFQQRPGQSPRRLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDF TLKISRVEAEDVGVYYC FQGSHIPYT(序列辨識編號：31)
• DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSSQSIVHSNGNTYLE 88 200848429 WYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFT LKISRVEAEDVGVYYCFQGSHIPYT(序列辨識編號：32)
• DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSSQSIVHSNGNTYLE WYLQKPGQPPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFT 5 LKISRVEAEDVGVYYC FQGSHIPYT(序列辨識編號：33) • DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSIVHSNGNTYLE WYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFT LKISRVEAEDVGVYYCFQGSHIPYT(序列辨識編號：34)
• DIVMTQTPLSSPVTLGQPASISCRSSQSIVHSNGNTYLE
10 WLQQRPGQPPRLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGAGTDF TLKISRVEAEDVGVYYC FQGSHIPYT(序歹丨機識編號：35) • DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQSIVHSNGNTYLE WYQQKPGKAPKLLIYKVSNRFSGVPSRFSGSGSGTDF TLTISSLQPEDFATYYC FQGSHIPYT(序列辨識編號：36)
15 · DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLVYSDGNTYL NWFQQRPGQSPRRLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDF TLKISRVEAEDVGVYYC FQGSHIPYT(序列辨識編號：37)
• DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVHSNGNTYL EWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDF 20 TLKISRVEAEDLGVYYC FQGSHIPYT(序歹q辨識編號：38) 或具有少於8、7、6、5、4、3或2個變化方式（例如取代、 插入或刪除，例如保留性取代或取代MJ2-7中之對應位置的 胺基酸殘基）之序列。代表性取代反應係發生在以下Kabat 位置中之一 ：2、4、6、35、36、38、44、47、49、62、64-69、 89 200848429 85、87、98、99、101、及102。該等取代反應可，例如取 代人類框架區内之得自MJ2-7的對應位置之胺基酸。 該IL-13抗體分子亦可包括以下序列中之一種： • DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISC-(RK)-S-S-Q-S-(LI)-(KV)
5 -H-S-(ND)-G-N-(TN)-Y-L-(EDNQYAS)WYLQKPGQSPQ LLIYK-(LVI)-S-(NY)-(RW)-(FD)-SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC F-Q-(GSA)-(SIT)-(HEQ)-(IL)_P(序列辨識編號：39) • DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISC-(RK)-S-S-Q-S-(LI)-
10 (KV)-H-S-(ND)-G-N-(TN)-Y-L-(EDNQYAS)WFQQRPGQ SPRRLIYK-(LVI)-S-(NY)-(RW)-(FD)-SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCF-Q-(GSA)_(SITHHEQ)-(IL)-P(序列辨識編號：40) • DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISC-(RK)-S-S-Q-S-(LI)-
15 (KV)-H-S-(ND)-G-N-(TN)-Y-L-(EDNQYAS)WYLQKPGQ SPQLLIYK-(LVI)-S-(NY)-(RW)-(FD)-SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCF - Q-(GSA)-(SIT)-(HEQ)-(IL)-P(序列辨識編號：41) • DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISC(RK)-S-S-Q-S-(LI)-(KV)-
20 H-S-(ND)-G-N-(TN)-Y-L-(EDNQYAS)WYLQKPGQPPQL LIYK-(LVI)-S-(NY)-(RW)-(FD)-SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCF-Q -(GSA)-(SIT)-(HEQHIL)-P(序列辨識編號：42) • DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISC(RK)-S-S-Q-S-(LI)-(KV)
25 -H-S-(ND)-G-N-(TN)-Y-L-(EDNQYAS)WYLQKPGQSPQ 90 200848429 LLIYK-(LVI)-S-(NY)-(RW)-(FD)- SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCF-Q-(GSA)-(SIT)-(HEQ)-(IL)-P(序列辨識編號：43)
• DIVMTQTPLSSPVTLGQPASISC(RK)-S-S-Q-S-(LI)-(KV)-5 H-S-(ND)-G-N-(TN)-Y-L-(EDNQYAS)WLQQRPGQPPRLLI YK-(LVI)-S-(NY)-(RW)-(FD)-SGVPDRFSGSGAGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCF-Q-(G SA)-(SIT)-(HEQ)-(IL)-P(序列辨識編號：44)
• DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(RK)-S-S-Q-S-(LI)-(KV 10 )-H-S-(ND)-G-N-(TN)-Y-L-(EDNQYAS)WYQQKPGKAPK LLIYK-(LVI)-S-(NY)-(RW)-(FD)-SGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCF-Q-(GSA HSIT)-(HEQHIL)-P(序列辨識編號：45)
• DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISC(RK)-S-S-Q-S-(LI)-(K 15 V)-H-S-(ND)-G-N-(TN)-Y-L-(EDNQYAS)WYLQKPGQSPK LLIYK-(LVI)-S-(NY)-(RW)-(FD)-
SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCF-Q-(G SA)-(SITHHEQHIL)-P(序列辨識編號：46) 或在該框架區内具有少於8、7、6、5、4、3或2個變化方 20 式（例如取代、插入或刪除，例如保留性取代或取代MJ2-7 中之對應位置的胺基酸殘基)之序列。代表性取代反應係發 生在以下Kabat位置中之一或多處：2、4、6、35、36、38、 44、47、49、62、64-69、85、87、98、99、1〇1、及 102。 该專取代反應可以，例如取代人類框架區内之得自MJ2-7的 91 200848429 對應位置之胺基酸。該等序列之後面之可以是二肽Tyr-Thr。該 FR4區可包括，例如序列FGGGTKVEIKR(序列辨識編號：47)。 在其它實施例中，該IL_13抗體分子可包括以下序列 中之一種：
5 · QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFNIKDTYIHWV RQAPGQGLEWMGRIDPANDNIKYDPKFQGRVTMTRDTS ISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARSEENWYDFFDY (序列 辨識編號：50)
• QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFNIKDTYIHWV
10 RQAPGQRLEWMGRIDPANDNIKYDPKFQGRVTITRDTS ASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSEENWYDFFDY (序 列辨識編號：51)
• QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFNIKDTYIHWV RQATGQGLEWMGRIDPANDNIKYDPKFQGRVTMTRNTS 15 ISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSEENWYDFFDY (序列 辨識編號：52) • QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFNIKDTYIHWV RQAPGQGLEWMGRIDPANDNIKYDPKFQGRVTMTTDTS TSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARSEENWYDFFDY (序列 20 辨識編號·· 53) • QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGFNIKDTYIHWV RQAPGKGLEWMGRIDPANDNIKYDPKFQGRVTMTEDTS TDTAYMELSSLRSEDTAVYYCATSEENWYDFFDY (序列 辨識編號：54) 92 200848429 • QMQLVQSGAEVKKTGSSVKVSCKASGFNIKDTYIHW VRQAPGQALEWMGRIDPANDNIKYDPKFQGRVTITRDR SMSTAYMELSSLRSEDTAMYYCARSEENWYDFFDY (序 列辨識編號：55)
5 · QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFNIKDTYIHWV RQAPGQGLEWMGRIDPANDNIKYDPKFQGRVTMTRDTS TSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARSEENWYDFFDY (序列 辨識編號：56)
• QMQLVQSGPEVKKPGTSVKVSCKASGFNIKDTYIHWV
10 RQARGQRLEWIGRIDPANDNIKYDPKFQGRVTITRDMST STAYMELSSLRSEDTAVYYCAASEENWYDFFDY (序列 辨識編號：57)
• EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWV RQAPGKGLEWVARIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNA 15 KNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSEENWYDFFDY (序列 辨識編號：58) • EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFNIKDTYIHWV RQAPGKGLEWVSRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNAK NSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKDSEENWYDFFDY (序列 20 辨識編號：59) • QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWIR QAPGKGLEWVSRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNAK NSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSEENWYDFFDY (序列 辨識編號：60) 93 200848429 • EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWV RQAPGKGLEWVGRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDDSK NTLYLQMNSLKTEDTAVYYCTTSEENWYDFFDY (序列 辨識編號：61)
5 · EVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWV RQAPGKGLEWVSRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNAK NSLYLQMNSLRAEDTALYHCARSEENWYDFFDY (序列 辨識編號：62)
• EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWV
10 RQAPGKGLEWVSRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNAK NSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSEENWYDFFDY (序列 辨識編號：63)
• EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWV RQAPGKGLEWVSRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNSK 15 NTLYLQMNSLRAEDTAVYYC AKSEENWYDFFDY (序 列辨識編號：64) • QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFNIKDTYIHWV RQAPGKGLEWVARIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNSK NTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKSEENWYDFFDY (序 20 列辨識編號：65) • QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFNIKDTYIHWV RQAPGKGLEWVARIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNSK NTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSEENWYDFFDY (序 列辨識編號：66) 94 200848429 • EVQLVESGGVVVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWV RQAPGKGLEWVSRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNSK NSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKDSEENWYDFFDY (序列 辨識編號：67)
5 · EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWV RQAPGKGLEWVSRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDN AKNSLYLQMNSLRDEDTAVYYCARSEENWYDFFDY (序列辨識編號：68)
• EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCTASGFNIKDTYIHWFR 10 QAPGKGLEWVGRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDGS KSIAYLQMNSLKTEDTAVYYCTRSEENWYDFFDY (序列辨識編號：69)
• EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWV RQAPGKGLEYVSRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNS
15 KNTLYLQMGSLRAEDMAVYYCARSEENWYDFFDY (序列辨識編號：70)
• EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWV RQAPGKGLEWIGRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNA KNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSEENWYDFFDY 20 (序列辨識編號：71)
• EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWV RQAPGKGLEWVARIDPANDNIKYDPKFQGKATISRDN AKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSEENWYDFFDY (序列辨識編號：72) 95 200848429
• EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWV RQAPGKGLEWVARIDPANDNIKYDPKFQGRFTISADN AKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSEENWYDFFDY (序列辨識編號：73)
5 · EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWV RQAPGKGLEWVGRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDN AKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSEENWYDFFDY (序列辨識編號：74)
• EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWV 10 RQAPGKGLEWVARIDPANDNIKYDPKFQGKATISADN AKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSEENWYDFFDY (序列辨識編號：75)
• EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWV RQAPGKGLEWIGRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISADNA
15 KNSLYLQMNSLRAEDTAVYYC ARSEENWYDFFD Y (序列辨識編號：76)
• EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWV RQAPGKGLEWVGRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISADN AKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSEENWYDFFDY 20 (序列辨識編號：77)
• EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWV RQAPGKGLEWVARIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDN AKNSAYLQMNSLRAEDTAVYYCARSEENWYDFFDY (序列辨識編號：78) 96 200848429
• EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWV RQAPGKGLEWVGRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISADN AKNSAYLQMNSLRAEDTAVYYCARSEENWYDFFDY (序列辨識編號：79)
5 · EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWV
RQAPGKGLEWIGRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISADNA KNSAYLQMNSLRAEDTAVYYCARSEENWYDFFDY (序列辨識編號：80)
• EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTGSGFNIKDTYIHWV
10 RQAPGKGLEWIGRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISADNA KNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSEENWYDFFDY (序列辨識編號：81)
• EVQLQQSGAELVKPGASVKLSCTGSGFNIKDTYIHWV KQRPEQGLEWIGRIDPANDNIKYDPKFQGKATITADTS
15 SNTAYLQLNSLTSEDTAVYYCARSEENWYDFFDY (序列辨識編號：82) 或具有少於8、7、6、5、4、3或2個變化方式（例如取代、 插入或刪除，例如保留性取代或取代MJ2-7中之對應位置的 胺基酸殘基）之序列。代表性取代反應係發生在以下Kabat 20 位置中之一或多處：2、4、6、25、36、37、39、47、48、 93、94、103、104、106、及107。代表性取代反應亦可發 生在以下位置（遵照序列的編號）中之一或多處：48、49、67、 68、72、及79。該等取代反應可，例如取代人類框架區内 之得自MJ2-7的對應位置之胺基酸。在一實施例中，該序列 97 200848429 包括（遵,¾序列的編號）以下中之一或多種：於48之ne、於 49之Gly、於67之Lys、於68之Ala、於72之Ala、及於79之 Ala ;較佳例如於48之lie、於49之Gly、於72之Ala、及於79 之Ala 〇 5 而且，該重鏈可變結構域序列之框架結構可包括：（i) 於位置49之Gly ; (ii)於位置72之Ala ; (iii)於位置48之lie、 及於位置49之Gly ; (iv)於位置48之lie、位置49之Gly、及位 置72之Ala ; (v)於位置67之Lys、位置68之Ala、及於位置72 之Ala ;及/或（vi)於位置48之lie、位置49之Gly、位置72之 10 Ala、位置79之Ala。 該IL-13抗體分子亦可包括以下序列中之一種：
• QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-(MI)-H5WVRQAPGQGLEWMG(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRVTMTRDTSISTAYM
15 ELSRLRSDDTAVYYCAR SEENWYDFFDY (序列辨識編號：83)
• QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-(MI)-H，WVRQAPGQRLEWMG(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRVTITRDTSASTAYME 20 LSSLRSEDTAVYYCAR SEENWYDFFDY(序列辨識編 號：84)
• QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASG-(YF).(NT).I-K-D-T-Y-(MI)-H，WVRQATGQGLEWMG(WR)-I-D-P-(GA) -N-D-N-I-K-Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRVTMTRNTSISTAYM 98 200848429 ELSSLRSEDTAVYYCAR SEENWYDFFDY(序歹丨J 辨識編 號：85) • QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-(MI)-H，WVRQAPGQGLEWMG(WR)-I-D-P-(GA)- 5 N-D-N-I-K-Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRVTMTTDTSTSTAYM ELRSLRSDDTAVYYCAR SEENWYDFFDY(序列辨識編 號：86) • QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-(MI)-H?WVRQAPGKGLEWMG(WR)-I-D-P-(GA)-
10 N-D-N-I-K-YKSDHPQVK-F-Q-GRVTMTEDTSTDTAYM ELSSLRSEDTAVYYCAT SEENWYDFFDY(序列辨識編 號：87)
•QMQLVQSGAEVKKTGSSVKVSCKASG-(YF)-(NTH-K-D-T-Y-(MI)-H，WVRQAPGQALEWMG(WR)-I-D-P-(GA)-15 N-D-N-I-K-Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRVTITRDRSMSTAYM ELSSLRSEDTAMYYCAR SEENWYDFFDY(序列辨識編 號：88) • QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-(MI)-H5WVRQAPGQGLEWMG(WR)-I-D-P-(GA)-
-20 N-D-N-I-K-Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRVTMTRDTSTSTVYM ELSSLRSEDTAVYYCAR SEENWYDFFDY(序列辨識編 號：89)
• QMQLVQSGPEVKKPGTSVKVSCKASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-(MI)-H，WVRQARGQRLEWIG(WR)-I-D-P-(GA)-N 99 200848429 -D-N-I-K-Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRVTITRDMSTSTAYMEL SSLRSEDTAVYYCAA SEENWYDFFDY(序列辨識編號： 90)
• EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D 5 _T-Y-(MI)-H，WVRQAPGKGLEWVA(WR)-I-D-P-(GA)-N- D.N-I-K-Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRFTISRDNAKNSLYLQM NSLRAEDTAVYYCAR SEENWYDFFDY(序列辨識編 號：91)
• EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D 10 -T-Y-(MI)-H，WVRQAPGKGLEWVS(WR)-I-D-P-(GA)-N-D- N-I-K-Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRFTISRDNAKNSLYLQMNSL RAEDTALYYCAKDSEENWYDFFDY(序列辨識編號：92)
• QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-(MI)-H，WIRQAPGKGLEWVS(WR)-I-D-P-(GA)-N-D
15 -N-I-K-Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRFTISRDNAKNSLYLQMNS LRAEDTAVYYCARSEENWYDFFDY(序列辨識編號：93)
• EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D -T-Y-(MI)-H，WVRQAPGKGLEWVG(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRFTISRDDSKNTLYLQMNSL 20 KTEDTAVYYCTT SEENWYDFFDY(序歹丨J辨識編號：94) • EVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-(MI)-H?WVRQAPGKGLEWVS(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRFTISRDNAKNSLYLQMN SLRAEDTALYHCAR SEENWYDFFDY(序列辨識編號：95) 100 200848429 • EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D -T-Y-(MI)-H，WVRQAPGKGLEWVS(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRFTISRDNAKNSLYLQMNSL RAEDTAVYYCARSEENWYDFFDY(序歹丨J辨識編號：96)
5 · EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D -T-Y-(MI)-H，WVRQAPGKGLEWVS(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRFTISRDNSKNTLYLQMNSL RAEDTAVYYCAKSEENWYDFFDY(序列辨識編號：97) • QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K- 10 d-t-y-(mi)-h，wvrqapgkglewva(wr)-i-d-p_(ga)-n- D-N-I-K-Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRFTISRDNSKNTLYLQMN SLRAEDTAVYYCAK SEENWYDFFDY(序歹丨J辨識編號：98) • QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-(MI)-H，WVRQAPGKGLEWVA(WR)-I-D-P-(GA) - N-
15 D-N-I-K-Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRFTISRDNSKNTLYLQMN SLRAEDTAVYYCAR SEENWYDFFDY(序列辨識編號：99)
• EVQLVESGGVVVQPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-(MI)-H，WVRQAPGKGLEWVS(WR)-I-D-P-(GA)-N-D ^A-K-Y-(SOy(?QyK-¥-Q-GRFTlSRmSKl<\SLYLQM^SL -20 RTEDTALYYCAKDSEENWYDFFDY(序列辨識編號：100)
• EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D -T-Y-(MI)-H?WVRQAPGKGLEWVS(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRFTISRDNAKNSLYLQM NSLRDEDTAVYYCAR SEENWYDFFDY 101 200848429 (序列辨識編號：ιοί)
• EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCTASG-(YF)-(NT)-I-K-D -T-Y-(MI)-H，WFRQAPGKGLEWVG(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRFTISRDGSKSIAYLQM
5 NSLKTEDTAVYYCTR SEENWYDFFDY (序列辨識編號：102)
• EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASG-(YF)_(NT)-I-K-D -T-Y-(MI)-H，WVRQAPGKGLEYVS(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRFTISRDNSKNTLYLQM
10 GSLRAEDMAVYYCAR SEENWYDFFDY (序列辨識編號：103)
• EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASG-(YFHNT)-I-K-D -T-Y-(MI)-H，WVRQAPGKGLEWIG(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRFTISRDNAKNSLYLQM
15 NSLRAEDTAVYYCAR SEENWYDFFDY (序列辨識編號：104)
• EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D -T-Y-(MI)-H，WVRQAPGKGLEWVA(WR)-I_D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-GKATISRDNAKNSLYLQM
20 NSLRAEDTAVYYCAR SEENWYDFFDY (序列辨識編號：105) • evqlvesggglvqpggslrlscaasg-(yf)-(nt)-i-k-d -T-Y-(MI)-H?WVRQAPGKGLEWVA(WR)-I-D-P-(GA)-N-
D-N-I-K-Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRFTISADNAKNSLYLQM 102 200848429 NSLRAEDTAVYYCAR SEENWYDFFDY (序列辨識編號：106) • EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D -T-Y-(MI)-H?WVRQAPGKGLEWVG(WR)-I-D-P-(GA)-N-
5 D-N-I-K-Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRFTISRDNAKNSLYLQM NSLRAEDTAVYYCAR SEENWYDFFDY (序列辨識編號：107) • EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D -T-Y-(MI)-H，WVRQAPGKGLEWVA(WR)-I-D-P-(GA)-N-
10 D-N-I-K-Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-GKATISADNAKNSLYLQM NSLRAEDTAVYYCAR SEENWYDFFDY (序列辨識編號：108) • EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D -T-Y-(MI)-H，WVRQAPGKGLEWIG(WR)小D-P-(GA)_N-
15 D-N-I-K-Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRFTISADNAKNSLYLQM NSLRAEDTAVYYCAR SEENWYDFFDY (序列辨識編號：109) • EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D -T-Y- (MI)-H，WVRQAPGKGLEWVG(WR)-I-D-P-(GA)-N-
20 D-N-I-K-Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRFTISADNAKNSLYLQM NSLRAEDTAVYYCAR SEENWYDFFDY (序列辨識編號：110) • EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D -T-Y-(MI)-H，WVRQAPGKGLEWVA(WR)-I-D-P-(GA)-N- 103 200848429 D-N-I-K-Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRFTISRDNAKNSAYLQM NSLRAEDTAVYYCAR SEENWYDFFDY (序列辨識編號：111)
• EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D 5 -T-Y-(MI)-H，WVRQAPGKGLEWVG(WR)-I-D-P-(GA)-N- D-N-I-K-Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRFTISADNAKNSAYLQM NSLRAEDTAVYYCAR SEENWYDFFDY (序列辨識編號：112) • evqlvesggglvqpggslrlscaasg_(yf)-(nt)-i-k-d 10 -T-Y-(MI)-H，WVRQAPGKGLEWIG(WR)-I-D-P-(GA)-N- D-N-I-K-Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRFTISADNAKNSAYLQM NSLRAEDTAVYYCAR SEENWYDFFDY (序列辨識編號：113)
• EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTGSG-(YF)-(NT)-I-K-D 15 -T-Y-(MI)-H，WVRQAPGKGLEWIG(WR)-I-D-P-(GA)-N- D-N-I-K-Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRFTISADNAKNSLYLQM NSLRAEDTAVYYCAR SEENWYDFFDY (序列辨識編號：114) • EVQLQQSGAELVKPGASVKLSCTGSG_(YF)-(NT)-I-K-
20 D-T-Y-(MI)-H，WVKQRPEQGLEWIG(WR)-I-D-P-(GA)-N -D-N-I-K-Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-GKATITADTSSNTAYLQL NSLTSEDTAVYYCAR SEENWYDFFDY (序列辨識編號：115) 或在該框架區具有少於8、7、6、5、4、3或2個變化方式（例 104 200848429 如取代、插入或刪除，例如保留性取代或取代MJ2-7中之對 應位置的胺基酸殘基)之序列。代表性取代反應發生在以下 Kabat位置中之一或多處·· 2、4、6、25、36、37、39、47、 48、93、94、103、104、106、及1〇7。該等取代反應亦可， 5 例如取代人類框架區内之得自MJ2-7的對應位置之胺基 " 酸。該FR4區可包括，例如WGQGTTLTVSS(序列辨識編號： 116)或WGQGTLVTVSS(序列辨識編號·· 117)。 可干擾IL-13對IL-13R(例如IL-13受體複合體)之結合性 的另外IL-13抗體實例或其亞單位包括“mAbi3.2”及其經改 10 質，例如嵌合或人源化形式。適於該mAb 13.2之重鏈可變區 域的胺基酸及核苷酸序列在文中分別被稱為序列辨識編 號：198及序列辨識編號：217。適於該mAbl3.2之輕鏈可變 區域的胺基酸及核菩酸序列在文中分別被稱為序列辨識編 號·· 199及序列辨識編號：218。代表性嵌合形式(例如包含 15 該mAbl3.2之重鏈及輕鏈可變區域之形式）在文中被稱為 “chl3_2”。適於該Chl3.2之重鏈可變區域的胺基酸及核苷酸 序列在文中分別被稱為序列辨識編號：208及序列辨識編 • 號·· 204。適於該chl3.2之輕鏈可變區域的胺基酸及核誓酸 _ 序列在文中分別被稱為序列辨識編號·· 213及序列辨識編 20 號：219。文中稱為“hl3.2vl”之mAbl3.2的人源化形式具有 ' 適於該重鏈可變區域之胺基酸及核苷酸序列，其在文中分 別被稱為序列辨識編號：209及序列辨識編號：205。適於 該hl3.2vl之輕鏈可變區域的胺基酸及核苷酸序列在文中 分別被稱為序列辨識編號·· 214及序列辨識編號：220。在 105 200848429 文中被稱為“hl3.2v2”之mAbl3.2的另一人源化形式具有適 於該重鏈可變區域之胺基酸及核苷酸序列，其在文中分別 被稱為序列辨識編號：210及序列辨識編號：206。適於該 Μ3·2ν2之輕鏈可變區域的胺基酸及核苷酸序列在文中分 5 別被稱為序列辨識編號：212序列辨識編號：221。在文中 被稱為“hl3.2v3”之mAbl3.2的另一人源化形式具有適於該 重鏈可變區域之胺基酸及核苷酸序列，其在文中分別被稱 為序列辨識編號：211及序列辨識編號：207。適於該hl3.2v3 之輕鏈可變區域的胺基酸及核苷酸序列在文中分別被稱為 1〇 序列辨識編號：35及序列辨識編號：223。 在另一實施例中，該抗IL-13抗體分子包含至少1、2、 3或4個抗原結合性區域(例如可變區），其具有適於VH之以 序列辨識編號：198、208、209、210或211、及/或適於VL 之以序列辨識編號：199、213、214、212或215表示之胺基 15 酸序列，或實質上與其相同之序列（例如其相同度為至少約 85%、90%、95%、99%或更高之序列，或其與序列辨識編 號：199、213、214、212、198、208、209、210、215 或211 相差不超過1、2、5、10或15個胺基酸殘基）。在另一實施 例中，該抗體包括可藉具有如以適於VH之序列辨識編號： 20 222、204、205、208或207、及/或適於VL之序列辨識編號： 218、219、220、221或223表示之核苷酸序列或實質上與其 相同之序列（例如其相同度為至少約85%、90%、95%、99% 或更高之序列，或其與序列辨識編號：218、219、220、221、 222、204、205、206、223或207相差不超過3、6、15、30 25 或45個核苷酸）的核酸編碼之VH及/或VL結構域。在又另一 106 200848429 貫施例中，該抗體或其片段包含至少1、2或3個得自具有如 刀別以適於VH CDRs 1 -3之序列辨識編號：202、203咬196 表示之胺基酸序列或實質上與其同源之序列（例如其相同 度為至少約85%、90%、95%、99%或更高、及/或具有_或 5 多個取代反應，例如保留性取代反應之序列）的重鏈可變區 域之CDR。在又另一實施例中，該抗體或其片段包含至少 1、2或3個得自具有如分別以適於VL CDRS 1-3之序列辨識 編號：197、200或201表示之胺基酸序列或實質上與其同源 之序列（例如相同度為至少約85%、90%、95%、99%或更高、 10 及/或具有一或多個取代反應，例如保留性取代反應之序列） 的輕鏈可變區域之CDR。在又另一實施例中，該抗體或其 片段包含至少1、2、3、4、5或6個得自具有如分別以適於 VH CDRs 1-3序列辨識編號：202、203、196 ;及分別以適 於VL CDRs 1_3之序列辨識編號：197、200或201表示之胺 15 基酸序列或實質上與其同源之序列（例如其相同度為至少 約85%、90%、95%、99%或更高、及/或具有一或多個取代 反應’例如保留性取代反應）的輕鏈可變區域之CDR。 在一實施例中，該抗IL-13抗體分子包含所有6種得自 C65或岔切相關之CDRs，例如相同或具有至少一胺基酸變 20 化方式，但不超過2、3或4個變化方式（例如取代、删除或 插入)之CDRS的CDRs。 在又另一實施例中，該IL-13結合劑包括至少1、2或3 個具有相同正則結構之CDr區及C65之對應CDR區，例如 C65之重鏈及/或輕鏈可變結構域之至少CDR1及CDR2。 25 在一實施例中，該重鏈框架結構（例如分別為FR1、 107 200848429 FR2、FR3或包括FRl、FR2、及FR3但不包括CDRs之序列） 包括一胺基酸序列，其與以下胚源細胞V鏈段序列中之一種 的重鏈框架結構之相同度為至少80%、85%、90%、95%、 97%、98%、99%或更高：DP-71或DP-67或可以與C65之正 5 則結構種類相容的另一 V基因（見，例如Chothia等人（1992) J.
Mol. Biol. 227:799-817 ; Tomlinson等人（1992) J. Mol· Biol. 227:776-798)。 在一實施例中，該輕鏈框架結構（例如分別為FRl、 FR2、FR3或包括FRl、FR2、及FR3但不包括CDRs之序列） 10 包括一胺基酸序列，其與DPK-1或DPK-9胚源細胞序列或可 以與C65之正則結構種類相同之另一 v基因的輕鏈框架結 構之相同度為至少 80%、85%、90%、95〇/〇、97%、98%、 99%或更高（見，例如T〇mHns〇n 等人（1995) EMBO J. 14:4628) 〇 15 在另一實施例中，該輕鏈框架結構(例如分別為FR1、 FR2、FR3或包括fiu、FR2、及FR3但不包括CDRs之序列） 包括一胺基酸序列，其與VkI亞型胚源細胞序列，例如 DPK-9或DPK-1序列之輕鏈框架結構的相同度為至少 80%、85%、9〇〇/0、95%、97%、98%、99%或更高。 20 在另一實施例中，該重鏈框架結構(例如分別為FR1、 FR2、FR3或包括FR1、FR2、及FR3但不包括CDRs之序列） 包括一胺基酸序列，其與VH IV亞型胚源細胞序列，例如 DP-71或DP-67序列之輕鏈框架結構的相同度為至少80%、 85%、90%、95%、97%、98%、99%或更高。 108 200848429 在一實施例中，該輕鏈或重鏈可變框架結構(例如包括 至少FIU、FR2、FR3、及視需要選用之服4的區域）可選自： (a)—輕鏈或重鏈可變框架結構，其包括至少8〇%、％%、 90%、95%或100%得自人類輕鏈或重鏈可變框架結構之胺 5 基酸殘基，例如得自人類成熟抗體、人類胚源細胞序列、 人類一致序列或文中所述之人類抗體的輕或重鍵可變框架 殘基；（b)—輕鏈或重鏈可變框架結構，其包括自2〇%至 80%、40%至60%、60%至90%或70%至95%得自人類輕鍵 或重鏈可變框架結構之胺基酸殘基，例如得自人類成熟抗 10 體、人類胚源細胞序列、人類一致序列之輕鏈或重鏈可變 框架殘基，（c)非人類框架結構（例如P齒齒目動物框架結 構）；或(d)業經改質（例如去免疫化或部份人源化），例如以 移除抗原性或細胞毒殺性決定子之非人類框架結構。在一 實施例中，該重鏈可變結構域序列包括於以下位置中之 15 多處(較佳至少5、10、12或所有位置）的人類殘基或人類一 致序列殘基：（在該輕鏈之可變結構域的FR中）4L、35L、 36L、38L、43L、44L、58L、46L、62L、63L、64L、65L、 66L、67L、68L、69L、70L、71L、73L、85L、87L、98L、 及/或(在該重鏈之可變結構域的FR中）2H、4H、24H、36H、 -20 37H、39H、43H、45H、49H、58H、60H、67H、68H、69H、 70H、73H、74H、75H、78H、91H、92H、93H、及/或 103H(根 據該Kabat編號）。 在一實施例中，該抗IL-13抗體分子包括至少一非人類 CDR，例如鼠科動物CDR，例如得自，例如mAbl3.2、 109 200848429 5 10 15 20 MJ2-7、C65之CDR及/或其改質形式（例如其人源化或嵌合 型變體）；及至少一與，例如mAbl3.2、MJ2-7、C65、及/ 或其改質形式（例如其人源化或嵌合型變體）之框架結構相 差至少1個胺基酸，例如至少5、8、10、12、15或18個胺基 酸之框架結構。例如該等蛋白質包括1、2、3、4、5或6個 此種非人類CDR且包括至少一在HC、FR1、HC、FR2、HC、 FR3、LC、FR1、LC、FR2、及LC FR3中之至少3種有差異 的胺基酸。 在一實施例中，該抗IL-13抗體分子之重鏈或輕鏈可變 結構域序列包括一胺基酸序列，其與文中所述之抗體，例 如mAbl3.2、MJ2-7、C65、及/或其改質形式(例如其人源化 或肷合型變體）的可變結構域序列之相同度為至少⑽〇/ 85%、90%、95%、97%、98%、99%或更高；或與文中所 述之抗體，例如mAbl3.2、MJ2-7、C65、及/或其改^… (例如其人源化或嵌合型變體）的可變結構域序列相差至，式 至5個殘基，但是少於4〇、3〇、2〇或1〇個殘基。在一徐^^ 1 中，該蛋白質之重鏈或輕鏈可變結構域序列包括一例 中所述之核酸序列或可以在，例如低嚴厲、中嚴厲 厲，很高嚴厲條件下與文中所述之核酸序列或其補=嚴 雜父反應的核酸而編碼之胺基酸序列。 _行 在一實施例中，該等可變結構域序列中之一 括該框架結構區内之不同地衍生自非人類抗：兩者包 動物抗體，諸如mAbl3.2)及人類抗 J如鼠科 A酸m / ^體或胚源細胞序列的脸 土 置。例如一可變結構域序列可包括許多位置，於其 110 200848429 中該胺基酸殘基與該非人類抗體及人類抗體（或人類胚源 細胞序列）相同，因為後兩種之位置相同。其中該非人類及 人類抗體之位置與該可變結構域之位置相差至少5〇、6〇、 70、80或90%的其餘框架位置較佳與該人類抗體（或人類胚 5 源細胞序列）’而非該非人類抗體，相同。例如此其餘框架 位置中全無或至少1、2、3或4處可以與該非人類抗體，而 非該人類抗體，相同。例如在HC FR1中，1或2個此等位置 可以是非人類；在HC FR2中，1或2個此等位置可以是非人 類；在FR3中’ 1、2、3或4個此等位置可以是非人類；在 10 LCFR1中小2、3或4個此等位置可以是非人類；在LCFR2 中，1或2個此等位置可以是非人類；在lcfrj中，1或2個 此等位置可以是非人類。該等框架結構可包括另外的另人 類位置。 在一實施例中，一抗體分子具有僅非實質上與MJ2-7、 15 C65或13·2不同之CDR序列。非實質差異包括較少的胺基酸 改變，諸如在一CDR，例如Chothia或Kabat CDR之序列中 典型上5-7個胺基酸中之任一數值之1或2的取代反應。典型 上，胺基酸係經具有類似電荷、疏水性或立體化學特性之 相關胺基酸取代。此等取代反應在一熟技術者的能力範圍 20 力。與CDRs不同，在不會不利地影響抗體之結合性的情況 下，結構框架區（FRs)可以有更實質的改變。FRs之改變包 括，但不限於：將經非人類衍化之框架結構人源化或處理 對抗原接觸或將該結合部份安定化具重要性之特定框架殘 基，例如改變該恆定區域之綱或亞綱、改變可能改變效應 111 200848429 物機能，諸如Fc受體結合性之專一性胺基酸殘基(Lund等人 (1991) J· Immunol. 147:2657-62 ; Morgan 等人（1995) Immunology 86:319-24)或改變衍生該恆定區域之物種。抗 體在該重鏈之CH2區域内可發生突變，其可減少或改變效 5 應物機能，例如Fc受體結合性及補體活化作用。例如抗體 可發生突變，諸如美國專利第5,624,821號及第5,648,260號 中所述之突。例如在IgGl或IgG2重鏈中，可進行和以序列 辨識編號：17表示之胺基酸序列相似之此等突變。抗體亦 可進行能將免疫球蛋白之兩重鏈間之二硫鍵安定化的突 10 變’諸如如該技藝（例如Angal等人（1993) Mol. Immunol. 30:105-08)中所述，在IgG4之鉸鏈區内進行突變。 抗IL-13抗體分子之另外實例係揭示在以下參考文獻 中：US 07/0128192 或 WO 05/007699及 Blanchard，C·等人 (2005) Clinical and Experimental Allergy 35(8):1096-1103 15 disclosing CAT-354 ; WO 05/062967，WO 05/062972 及 Clinical Trials Gov. Identifier ： NCT00441818 disclosing TNX-650 ； Clinical Trials Gov. Identifier: NCT532233 disclosing QAX-576 ; US 06/0140948或WO 06/055638，以 Abgenix之名義申請；指定給AMGEN之US 6,468,528 ;指定 20 Centocor，Inc·為申請者之WO 05/091856;及Yang等人(2004) Cytokine 28(6):224-32與Yang等人(2005) J Pharmacol Exp Ther: 313(1):8-15 ;及如以Glaxo之名義申請之WO 07/080174及以Novartis之名義申請之WO 07/045477中所揭 示的抗IL-13抗體。 112 200848429 該抗IL-13抗體分子可以呈以下形式：完整抗體、抗體 5 10 之抗原結合性片段，例如Fab、F(ab’)2、Fd、dAb、及scFv 片段、與在彼等之恆定及/或可變結構域中已發生突變之完 整抗體及片段(例如可產生嵌合型、部份人源化或完全人源 化之抗體以及可產生具有所欲特性，例如增強的IL_13結合 性及/或減少的FcR結合性之突變）。 该抗IL-13抗體分子可經衍生或連接至另—機能性分 子’例如另-肽或蛋白質（例如Fab片段例如該結合劑可 機能性連結(例如藉化學偶合、基因融合、非共價結合或其 15
θ或多種其它分子實體，其包括諸如另一抗體分 子(例如形成雙專-性或乡性抗體好）、毒素、放射性 冋位素、細胞毒殺劑或細跑生長抑制劑。 dAi^UZIL-13R結合劑 亦提i、可結合至IL-13多月太或核酸或^见多肽或核酸 1人體刀子的其匕結合_。在實_巾，文巾所述之其 匕、、、口合劑為拮抗劑，因此可 夕插* J減少、抑制或降低IL-13之一或 夕禋生物學活性（例如，如 學活性）。 X中所述之IL-13的一或多種生物 20 可藉許多方法，其包括 將文中所述之可變結構域中所述之可變結構域或 性結構域上而辨識結合劑。亦可^CDR移植至另一架構 因庫辨識結合劑。用於篩選蛋白；二1選而自多樣性基 用嗟菌體呈現㈣。蛋白庫之—種方法係使 而辨識態與 113 200848429 IL-13或其受體交互作用的蛋白質。例如為了辨識可結合至 相同抗原決定位或重疊抗原決定性(諸如IL-13上之MJ2-7、 C65或mAb)之特定結合劑量，可藉添加MJ2-7、C65或 mAbl3.2(或相關抗體）而溶析溶合劑，或可在使用MJ2-7、 5 C65或mAbl3.2(或相關抗體)所進行之競爭實驗中評估結合 劑。亦可藉使該基因庫接觸含IL-13及MJ2-7、C65或 mAbl3.2(或相關抗體）之複合體而刪除可結合至另外抗原 決定位之藥劑的基因庫。然後該經刪除之基因庫可接觸 IL-13以獲得能結合至IL-13但不能結合至藉MJ2-7、C65或 10 mAbl3.2而結合之IL-13的結合劑。亦可使用得自含MJ2-7、 C65抗原決定位或mAbl3.2之作為標革巴的IL-13的肽。
噬菌體呈現技術描述在以下參考文獻中：例如美國專利第 5,223,409 號；Smith (1985) Science 228:1315-1317 ； WO 92/18619 ； WO 91/17271 ； WO 92/20791 ； WO 92/15679 ； WO 15 93/01288 ； WO 92/01047 ； WO 92/09690 ； WO 90/02809 ； WO 94/05781 ; Fuchs等人（1991) Bio/Technology 9:1370-1372 ; Hay 等人（1992) Hum Antibod Hybridomas 3:81-85 ; Huse等人（1989) Science 246:1275-1281 ; Griffiths 等人（1993) EMBO J 12:725-734、； Hawkins等人（1992) J Mol Biol 226:889-896 ; 20 Clackson 等人（1991) Nature 352:624-628 ; Gram 等人（1992) PNAS 89:3576-3580 ; Garrard 等人（1991) Bio/Technology 9:1373-1377 ; Rebar等人（1996) Methods EnzymoL 267:129-49 ; 及Barbas等人（1991) PNAS 88:7978-7982。酵母表面呈現技術係 描述在以下參考文獻中：例如Boder and Wittrup(1997) Nat. 114 200848429
Biotechnol. 15:553-557。另一種呈現技術之形式為核糖體呈現 技術。見，例如Mattheakis等人（1994) Proc. Natl· Acad· Sci· USA 91:9022 and Hanes 等人（2000) Nat Biotechnol. 18:1287-92 ; Hanes等人（2000) Methods Enzymol. 328:404-30 ;及Schaffitzel 5 等人（1999) J Immunol Methods. 231(1-2):119-35。 結合至IL-13或IL-14或其受體之結合劑量可具有一架 構性蛋白質之特徵，例如摺疊結構域。根據一抗體之代表 性架構性結構域為業經刪除3個得自單株抗體之重鏈可變 結構域的股而設計之“微型抗體（minibody)”架構 10 (Tramontane)等人，1994, J· Mol. Recognit· 7:9 ;及Martin等 人，1994, EMBOJ· 13:5303-5309)。本結構域包括61個殘基 且可用以提供兩超可變環。例如文中所述可變結構域或文 中所述變體之一或多種超可變環。在另一方法中，該結合 劑包括一架構性結構域，其係為似V結構域(Coia等人，WO 15 99/45110)。似V結構域係指具有與抗體之可變重(VH)或可 變輕(VL)結構域類似的結構特性之結構域。另一架構性結 構或係衍生自添達敏塔汀(tendamistatin)，其係為由兩二硫 鍵結合在一起之6股召折璺夾層的74殘基（McConnell and Hoess，1995，J. Mol. Biol. 250:460)。該母蛋白質包括3個 20 環。該等環可經改質（例如使用文中所述之CDR或超可變環） 或改變，例如以選擇可結合至IL-13或IL-14或其受體之結構 域。WO 00/60070描述衍生自可作為架構性結構域之 CTLA-4之天然發生的細胞外結構域。 適於IL-13/13R結合劑之又另一架構性結構域為以纖維 115 200848429 網蛋白質第III型結構域或相關似纖維網蛋白之蛋白質為主 的結構域。該纖維網蛋白第III型(Fn3)結構域與最小機能性 抗體片段(該抗體重鏈之可變結構域)有密切關係。除了Fn3 具有7個/3股而非9個/3股不同外，Fn3之/3夾層類似該抗體 5 VH結構域之/3夾層。於Fn3之該末端具有3個環；BC、DE 及FG環之位置約相當於抗體之該VH結構域的CDR1、2及3 之位置。Fn3很有利，因為其不具有二硫鍵。因此，不像抗 體及其片段，在還原條件下，Fn3具安定性（見WO 98/56915 ; WO 01/64942 ; WO 00/34784)。Fn3結構域可經 10 改質（例如使用文中所述之CDR或超可變環）或改變，例如以 選擇可結合至IL-13或IL-14或其受體之結構域。 又另外代表性架構結構域包括：T細胞受體；MHC蛋 白質；細胞外結構域(例如纖維網蛋白第ΙΠ型重複單位、EGF 重複單位）；蛋白酶抑制劑（例如庫尼滋(Kunitz)結構域，依 15 可汀(ecotin)、BPTI等）；TPR重複單位；三葉形結構；鋅指 (zinc finger)結構域；DNA·結合性蛋白質；酶，例如蛋白酶 (特別為失活性蛋白酶）、RNase ;恰波S同（chaperone)，例如 硫氧化還原蛋白、及熱休克蛋白質；及細胞内傳訊結構域 (諸如SH2及SH3結構域）。US 20040009530描述某些替代架 20 構之實例。
小架構性結構域之實例包括：庫尼滋結構域(58個胺基 酉夂、3個一硫基鍵）、栗南瓜(cucuri3ida maxima)胰蛋白酶抑制 劑結構域(31個胺基酸、3個二硫鍵）、與得自草蘭氏陰性菌之熱 安定性腸毒素IA有關之結構域（18個胺基酸、3個二硫鍵）、EGF 116 200848429 結構域(50個胺基酸、3個二硫鍵）、三環結構域(60個胺基酸、3 個二硫鍵）、真菌碳水化物結合性結構域(35個胺基酸、2個二硫 鍵）、内皮素（endothelin)結構域（18個胺基酸、2個二硫鍵）及鏈 球菌G IgG-結合性結構域(35個胺基酸、無二硫鍵）。小細胞内 5 架構結構域之實例包括SH2、SH3、及EVH結構域。一般而言， 可使用任何模組結構域、細胞内或細胞外。 評估架構性結構域之代表性標準可包括：（1)胺基酸序列、 (2)幾種同源性結構域之序列、（3)3維結構、及/或(4)在pH、溫 度、鹽濃度、有機溶劑、氧化劑濃度範圍之安定性數據。在一 10 實施例中，該架構性結構域為小之安定性蛋白質結構域，例如 含有小於100、70、50、40或30個胺基酸之蛋白質。該結構域 可包括一或多個二硫鍵或可螯合金屬，例如鋅。 又其它結合劑係以肽為主，例如具有小於30、25、24、20、 18、15或12個胺基酸之胺基酸序列的蛋白質。可將肽併入較大 15 蛋白質内，但是典型上為可獨立結合至IL-13，例如文中所述之 抗原決定位。可藉噬菌體呈現技術而辨識肽。見，例如us 20040071705 。 結合劑可包括非肽鍵合物及其它化學放質物。例如可將該 結合劑合成肽類似物，例如肽妥(pept〇id)(見，例如Sim〇n等人 20 (1992) Proc· Natl· Acad. Sci· USA 89:9367-71 及（例如所有）非可 水解鍵。許多非可水解肽鍵及合成含此等鍵之肽的程序在本項 技藝中係已知。代表性非可水解鍵包括一[CH2NH] —還原之醯胺 肽鍵、--[C0CH2] —酮基亞曱基肽鍵、—[CH(CN)NH]—(氰（基亞 甲基)胺基肽鍵—[CH2CH(0H)]--經伸乙基肽鍵、一[CH20]-·肽鍵、 117 200848429 及--[CHj]—硫亞甲基肽鍵（見，例如美國專利第6,172,043號）。 在另一實施例中，該IL-13拮抗劑係衍生自脂卡林 (lipocalin)，例如人類脂卡林架構。 變異性IL-13結合性分子 5 在又另一實施例中，該IL-13結合劑（拮抗劑）為變異性 分子或小分。變異性分子之實例典型上包括融合或連接至 鉸鏈或鉸鏈作用區多肽，其接著融合或連接至含一或多個 付自重鍵之非CH1的天生或經設計之恒定區的區域，例如 IgG及IgA之CH2及CH3區、或IgE之CH3及CH4區（為了更詳 10 細說明，見例如頒予Ledbetter, J·等人之US. 05/0136049)。 該結合性結構域_融合蛋白質可進一步包括包含融合或連 接至該鉸鏈區域多肽之天生或經設計之重鏈CH3恆定區多 肽（或就全部或局部衍生自IgE之建構物而言，係為CH4)， 其接者融合或連接至該CH2丨亙定區多肤（或就全部或局部衍 15 生自1gE之建構物而言，係為CH3)之天生或經設計之重鏈 CH2恆定區多肽（或就全部或局部衍生自igE之建構物而 言，係為CH3)的區域。典型上，此等結合性結構域_融合蛋 白質可具有至少一選自以下所組成之群組的活性：蛋白質_ 依存性細胞-媒介之細胞毒害性、補體固定、及/或結合至標 20 靶，例如IL-13。 IL-13結合性變體之另一實例為受體或其融合物 之可溶形式。例如可單獨使用經改質之可溶性受體形式或 官能性連接(例如藉化學偶合、基因或多肽融合、非共價結 合或其它方法）至第二分子團，列如免疫球蛋白以結構域、 118 200848429 血清白蛋白、聚乙二醇化反應、GST、Lex-A或MBP多肽序 列。如文中使用，“融合蛋白質”係指含2或多種可實施性結 合，例如連接分子團（例如蛋白質分子團）之蛋白質。典型 上，該等分子圑係經共價結合。該等分子團可經由間隔基 ^ 5 團或交聯劑而直接結合或連接。該等融合蛋白質可另外包 - 括使第一分子團與第二分子團連接之交聯劑序列。例如該 " 融合蛋白質可包括肽交聯劑，例如長約4至20、更佳5至1〇 個胺基酸之肽交聯劑；該肽交聯劑之長度為8個胺基酸。該 肽交聯劑中之各胺基酸係選自以下所組成之群組：Gly、 10 Ser、、Asn、Thr及Ala ;該肽交聯劑包括Gly-Ser元素。在 其它實施例中，該融合蛋白質包括肽交聯劑，且該肽交聯 劑包括具有式（Ser-Gly-Gly-Gly-Gly)y之序列，其中y為1、 2、3、4、5、6、7或 8 ° 在其它實施例中，可添加額外胺基酸序列至該融合蛋 15 白質之N-或C-末端以促進表現性、立體撓性、檢測及/或分 離或純化。該第二多肽較佳具可溶性。在某些實施例中， 該第二多肽可增強該連鎖多肽之半衰期（例如血清半衰 • 期）。在某些實施例中，該第二多肽包括可促使該融合多肽 • 與第二受體多肽結合之序列。在實施例中，該第二多肽包 2〇 括至少一含有免疫球蛋白多肽之區域。免疫球蛋白融合多 • 肽在本項技藝中係已知且描述在以下專利案中：例如美國 專利第 5,516,964號、第 5,225,538號、第 5,428，130號、第 5,514,582號、第5,714，147號、及第5,455，165號。例如受體 之可溶形式或配位體結合性融合物可融合至各種同型物之 119 200848429 重鏈恆定區，其包括：IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgAb IgA2、IgD、及 IgE。 該Fc序列可以於一或多個胺基酸經突變以減少效應物 細胞機能、Fc受體結合性及/或補體活性。用於改變抗體恆 5 定區之方法在本項技藝中係已知。可藉使用不同殘基取代 該抗體之恆定區内之至少一個胺基酸殘基而製備具有已改 變機能’例如對效應物配位體（諸如在細胞之上之Fcr或補 體之C1組份）之經改變親和力的抗體（見，例如歐洲專利 388，153 A1、美國專利第5,624,821號及美國專利第 10 5,648,26〇號）。若施用於鼠科動物或其它物種時，免疫球蛋白 可減少或去除這些功用，則可說明類似的變化方式種類。例如 可藉使用具有一合適官能基在其側鏈上之殘基(群)取代特定基 (群）或藉導入帶電荷之官能基，諸如麩胺酸根或天冬胺酸根或 可能是芳香族非極性殘基，諸如苯基丙胺酸、酪胺酸、色胺酸 15 或丙胺酸，而改變抗體（例如匕0，諸如人類IgG)對FcR(例如Fc TR1)或Clq結合性之親和力（見，例如美國專利第5,624,821 號)。 5 在實施例中，該第二多肽之效應物機能低於野生型免 疫球蛋白重鏈之Fc區的效應物機能。Fc效應物機能包括， 20 例如Fc受體結合性、補體固定作用及T細胞耗乏活性（見， 例如美國專利第6，136,310號）。用於評估丁細胞耗乏活性、 &效應物機能、及抗體安定性之方法在本項技藝中係已 知。在一實施例中，該第二多肽對Fc受體之親和力低或無 可檢測量。在另一實施例中，該第二多肽對補體蛋白質ciq 120 200848429 之親和力低或無可檢測量。 應瞭解文中所述之該等抗體分子及可溶性受體或融合 蛋白質可官能性連接(例如藉化學偶合、基因融合、非共價 結合或其它方法）至一或多種其它分子實體，其包括諸如抗 5 體(例如雙專一性或多專一性抗體）、毒素、放射性同位素、 細胞毐殺或細胞生長抑制劑。 核酸拮抗劑 在又另一實施例中，該拮抗劑可抑制能將IL_13或 IL-13R編碼之核酸的表現性。此等拮抗劑之實例包括核酸 10 分子，例如反訊息分子、核酶、RNAi ;能夠與可將IL-13 或IL-13R、或轉錄調節區編碼之核酸混成且阻斷或減少 IL-13或IL-13R之mRNA表現性的三螺旋結構分子。 在實施例中，係使用核酸拮抗劑以降低可將IL-13或 IL-13R編碼之内源性基因的表現性。在一實施例中，該核 15 酸拮抗劑為可將能將IL-13或IL-13R編碼之mRNA標定的。 siRNA。亦可使用其它類型之拮抗性核酸，例如dsRNA、核 酶、三螺旋結構形成物或反訊息核酸。因此，提供單離性 核酸分子，其係為核酸抑制劑，例如IL-13或IL-13R-編碼性 核酸分子之反訊息RNAi。 20 典型上對受實驗者投與本發明之反訊息核酸分子（例 如直接注射於組織部位），或當場產生，藉此其可以與細胞 性mRNA及/或可將受體蛋白質編碼之基因組DNA混合或結 合藉以抑制該蛋白質之表現性，例如藉抑制轉錄及/或轉 譯。或者，反訊息核酸分子可經修飾以將特定細胞標定， 121 200848429 然後全身性投與。就全身性投藥而言，反訊息分子可經修 飾’藉此其可專一性結合至在特定細胞表面上表現之受體 或抗原，例如藉使該等反訊息核酸分子與可結合至細胞表 面受體或抗原之肽或抗體連接。亦可使用文中所述載體將 5 該等反訊息核酸分子遞送至細胞。為了獲得該等反訊息分 子之充份細胞内濃度，較佳為其中該反訊息核酸分子係受 強polll或polIII啟動子支配之載體建構物。 在又另一實施例中，本發明該反訊息核酸分子為變 旋異構性核酸分子。α-變旋異構性核酸分子可以與互補性 10 RNA形成專一性雙股性雜化物，與一般單位不同，各該 股之伸展係彼此平行（Gaultier等人（1987) Nucleic Acids. Res· 15:6625-6641)。該反訊息核酸分子亦可包含2，-鄰·曱基 核糖核苷酸（Inoue 等人（1987) Nucleic Acids Res. 15:6131-6148)。或嵌合型RNA-DNA類似物（Inoue等人（1987) 15 FEBS Lett. 215:327-330)。 siRNAs為可選擇性包括懸突物之小雙股rnAs (dsRNAs)。例如siRNA之雙股區域為長約18至25個核苔 酸，例如長約19、20、21、22、23或24個核苷酸。典型上， 該等siRNA序列係完全與該標起mRNA互補。尤其可使用 20 dsRNAs及siRNAs以制止哺乳動物細胞（例如人類細胞）内之 基因表現性。siRNAs亦包括具有29個鹼基對幹莖及2-核苔 酸3’懸突物之短髮夾RNAs(shRNAs)。見，例如Clemens等 人(2000) Proc· Natl· Acad. Sci. USA 97:6499-6503; Billy等 人(2001) Proc. Natl· Sci· USA 98:14428-14433; Elbashir等 122 200848429 人（2001) Nature· 411:494-8; Yang 等人（2002)?〇)(：.他1:1· Acad. Sci. USA 99:9942-9947; Siolas 等人（2005)，Nat. Biotechnol. 23(2):227-31; 20040086884; U.S. 20030166282; 20030143204; 20040038278;及20030224432。 ' 5 在又另一實施例中，本發明之反訊息核酸為核酶。對 • IL-13或IL-13R或IL-4或IL-4R編碼性核酸具專一性之核酶 可包括一或多種與文中揭示之IL-13或IL-13R或IL-4或 IL-4R cDNA之核苷酸序列互補的序列及具有已知為mDNA 分裂之主因的催化性序列之序列（見美國專利第5,093,246 10 號或Haselhoff and Gerlach (1988) Nature 334:585-591)。例 如可建構四膜蟲屬（Tetrahymena L-19 IVS RNA之衍生物， 其中該活性部位之核苷酸序列係與欲在受體編碼性mRNA 内分裂之核苷酸序列互補。見，例如Cech等人之美國專利 第4,987,071號及第5，116,742號。或者，可使用mRNA以自 15 一批RNA分子選擇具有專一性核糖核酸酶活性之催化性 RNA。見，例如Bartel，D_ and Szostak，J.W. (1993) Science 、 261:1411-1418。 . 可藉以下步驟而抑制IL-13或IL-13R基因表現性：標定
與該IL-13或IL-13R之調節區（例如IL-13或IL-13R啟動子及/ ，2〇 或增強子）互補的核苷酸序列以形成可防止IL-13或IL-13R - 基因在標乾細胞内之轉錄的三螺旋結構。一般而言，見
Helene, C. (1991) Anticancer Drug Des. 6:569-84; Helene, C. (1992) Ann· N.Y. Acad· Sci· 660:27-36 ;及Maher，L.J· (1992) Bioassays 14:807-15。可藉產生所謂“曲折的（Switchback)，， 123 200848429 核酉夂刀子而日加可為二螺旋結構形成標定之該等潛在序 列以乂曰5 3、3、5,方式合成曲折的分子，藉此其可以 先後，、又月又$成驗對，不需相當大的延伸欲存於雙股結構 中之一股上的嘌呤或，淀。 5 本發明亦提供可檢測標純S核㈣；I子及探針分 子，、里上典型上此等標記具化學發光性、榮光性、放 射性或比色性。 可以修飾IL-13或IL-13R核酸分子之鹼分子團、糖分子 團或磷酸鹽主鏈以改良該分子之，例如安全性、雜交反應 10或溶解性。就具修飾體之合成寡核答酸的非限制性實例而 言，見Τοιιίπιέ (2001) Nat騰 Biotech· 19:17及Faria等人(2001)
Nature Biotech. 19:40-44。此等磷醯胺酸化寡核答酸可以是 有效反訊息劑。例如該等核酸分子之脫氧核醣鱗酸鹽主鏈 可經修飾以產生肽核酸（見Hyrup B等人（1996) Bioorganic 15 & Medicinal Chemistry 4: 5-23)。如文中使用，該等名詞“肽 核酸”或“PNA”係指核酸類似物，例如DNA類似物，其中該 脫氧核醣構酸鹽主鏈係經擬肽主鏈取代且僅保留4個自然 核驗基。在低離子強度之條件下，PNA之自然主鍵可以使 DNA與RNA進行專一性雜交反應。可使用如Hyrup B.等人 20 (1996) supra及Perry-O’Keefe等人Proc· Natl· Acad. Sci· 93: 14670-675中所述之標準固相肽合成程序以進行該等PNA 寡聚物之合成法。 在其它實施例中，該募核苔酸可包括其它附加基團， 諸如肽（例如於活體内標定宿主細胞受體之肽）或加速通過 124 200848429 細胞膜之藥劑（見，例如Letsinger等人（1989) Proc. Natl. Acad. Sci· USA 86:6553-6556; Lemaitre 等人（1987) Proc. Natl. Acad. Sci· USA 84:648-652; W088/09810)或血腦屏障 物（見，例如WO 89/10134)。此外，寡核苷酸可經能引發雜 化反應之分裂劑改質（見，例如Krol等人（1988)
Bio-Techniques 6:958-976)或經插層劑改質（見，例如Zon (1988) Pharm. Res. 5:539-549)。為此目的，該寡核苷酸可以 結合至另一分子（例如肽、引發雜交反應之交聯劑、傳輸劑 或引發雜交反應之分裂劑）。 10 15 K . -20 結合劑製法 某些抗體分子，例如Fabs或結合劑可以在細菌細胞， 例如大腸桿菌細胞内製成。例如若該Fab係藉噬菌體呈現技 術載體（其在該呈現技術實體與噬菌體蛋白質（或其片段)之 間包括可抑制性終端止密碼子）内之序列而編碼，則該載體 核酸可被送入細菌細胞内，因此不能抑制終止密碼子。在 該情況下，該Fab並未與基因且蛋白質融合且係在核外漿及 /或介面質内分泌。 抗體分子亦可以在真核細胞内製成。在一實施例中， 該等抗體（例如scFv’s)係在酵母細胞，諸如比齊酵母菌 (Pichia)(見，例如Powers等人（2001) J immunol Meth〇ds 251:123-35)、漢遜酵母(Hanseula)或酵母菌屬（Sacchar〇myces) 内表現。 在一實施例中’抗體分子係在哺乳動物細胞内製成。 適於表現該等純糸抗體或其抗原結合片段之一般哺乳動物 125 200848429 宿主細胞包括中國倉鼠印巢(CHO細胞）(其包括Urlaub and Chasin (1980) Proc· Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-4220 中所 述之dhfr CHO細胞；使用如Kaufman and Sharp (1982) Mol. Biol· 159:601-621中所述之DHFR可選擇標記）、淋巴細胞 5 株，例如NS0骨髓瘤細胞及SP2細胞、COS細胞、及得自轉 殖基因的動物，例如轉殖基因的哺乳動物之細胞。例如該 細胞為哺乳動物上皮細胞。 除了將該抗體分子編碼之核酸序列外，該等重組型表 現性載體可具有額外序列，諸如可調節該載體在宿主細胞 10 (例如複製源）及可選擇性標記基因内之複製的序列。該可選 擇性標記基因可加速其中業經導入該載體之宿主細胞的選 擇（見，例如美國專利第4,399,216號、第4,634,665號及第 5，179,017號）。例如典型上，該可選擇性標記基因可以使其 中該載體業經導入之宿主細胞對藥物，諸如G418、潮黴素 15 或阿美蘇嗓呤(methotrexate)具抗性。 在用於抗體分子之重組型表現性的代表性系統内，係 藉磷酸鈣媒介之轉移感染而將可將該抗體重鏈及抗體輕鏈 編碼之重組型表現性載體導入dhfr- CHO細胞内。在該重組 型表現性載體内，該抗體重鏈基因及輕鏈基因各可合適地 2〇 連接至增強子/啟動子調節元素(例如衍生自SV40、CMV、 腺病毒等，諸如CMV增強子/AdMLP啟動子調元素或SV40 增強子/ A d M L P啟動子調節元素）以使該等基因產生高程度 之轉錄作用。該重組型表現性載體亦具有DHFR基因，其可 以使用阿美蘇喋呤選擇法/擴增作用以選擇業經該載體轉 126 200848429 移感染之CHO細胞。可培養該特定轉形體宿主細胞以表現 該抗體重鏈及輕鏈且自該培養基回收完整抗體。可使用標 準分子生物學技術以製備該重組型表現性載體，轉移感染 該等宿主細胞’選擇轉形體，培養該等宿主細胞並自該培 5 養基回收該抗體分子。例如可藉具有蛋白質A或蛋白質g偶 合基質之親和力層析法而離析某些抗體分子。 10 15 就包括Fc結構域之抗體分子而言，該抗體製造系統較 佳可合成其中該Fc區經_基化之抗體。例如igG分子之該fc 結構域係在其CH2結構域内之天冬醯胺酸29.7經醣基化。本 天冬醯胺酸為適於經雙型募醣改質之部位。業經證明藉Fcr 受體及補體Clq而媒介之效應物機能需要本醣基化作用 (Burton and Woof (1992) Adv· Immunol· 51:1-84; Jefferis等 人（1998) Immunol. Rev· 163:59-76)。在一實施例中，該fc 結構域係在哺乳動物表現性系統内製成，該系統可適當地 將相當於天冬醯胺酸297之殘基醣基化。該Fc結構域亦可包 括其它真核性轉譯後改質物。 亦可藉轉殖基因的動物而製成抗體分子。例如美國專 利第5,849,992號描述在轉殖基因的哺乳動物之乳腺内表現 抗體之方法。建構包括乳汁專一性啟動子及可將該抗體分 編碼之核酸與用於分泌之訊號序列的轉基因。由此等轉殖 基因的哺乳動物之雌性動物所產生之乳汁包括自其分泌之 相關抗體。該抗體分子可自該乳汁純化該抗體分子或就某 些應用而言，可直接使用。 127 200848429 可藉任何方法，例如以下方法中之一種而測定結合力 的結合性質：BIACORE™分析法、酶聯免疫吸附分析法 (ELISA)、X射線結晶學、序列分析法及掃描式致突變法 可藉以下方法而測定蛋白質中和及/或抑制一或多種1]：^13 5 相關活性之能力：用於測定IL-13依存性細胞株，例如Τρι 之增生的檢測法；用於測定經IL-13媒介之多肽的表現性之 檢測法，例如CD23表現性之流式細胞測定分析法；評估下 游傳訊分子，例如STAT6之活性的檢測法；評估生腱蛋白 製造之檢測法；測試文中所述抗體在相關動物模式(例如铜 10 猴）中預防氣喘之效率的檢測法、及其它檢測法。在—或多 種這些檢測法中，IL-13結合劑，特別為IL-13抗體分子可具 有統計學上顯著效用。用於結合性質之代表性檢測法包括 下述。 可使用表面細胞質基因組共振（SPR)以分析IL-13或 15 IL-4結合劑及標靶(例如IL-13)之結合性交互作用。SPR或生 物分子交互作用分析（BIA)可在未標記任何交互作用劑下 偵測實時雙專一性交互作用。於該BIA晶片之結合表面之質 量的變化（結合事件之標示）可導致接近該表面之光折射率 的改變。該折射率之變化會產生可檢測信號，該等變化係 20 以生物分子間之實時反應的標示測定。使用SPR之方法描述 在以下參考文獻中··例如美國專利第5,641，640號；Raether (1988) Surface Plasmons Springer Verlag; Sjolander and Urbaniczky (1991) Anal. Chem· 63:2338-2345; Szabo等人 (1995) Curr. Opin. Struct. Biol. 5:699-705 及由 BIAcore 128 200848429
International AB (Uppsala，Sweden)提供之線上資料。 可使用得自SPR之資訊以提供適於使分子結合至標革巴 之平衡解離常數(Kd)及動力學參數，其包括UKoff之精準 且定量性測定法。可使用此等數據以比較不同分子。亦可 5 使用得自SPR之資訊以形成結構-活性關係（SAR)。例如可評 估不同抗體分子之該等動力學及平衡結合參數。可辨識與 特定結合參數，例如高親和力及低KQff有關之於特定位置的 變異性胺基酸。本資訊可以與結構模擬(例如使用同源性模 擬、能量最小化或藉X射線結晶學或NMR而進行之結構測 10 定）組合。因此，該蛋白質與其標靶間之物理交互作用的理 解可以以公式表示並用以引導其它設計方法。 呼吸疾病 可使用IL-13結合劑或拮抗劑以治病或預防吸收疾 病，其包括，但不限於：氣喘（例如過敏性及非過敏性氣喘 15 (例如起因於感染，例如幼童之經呼吸融合細胞病毒(rsv) 感染）；支氣管炎（例如慢性支氣管炎）；慢性阻塞性肺病 (COPD)(例如肺氣腫(例如香煙誘發之肺氣腫)）；包括呼吸道 炎症、嗜伊紅血球增多、纖維變性及過量黏液產生之病症， 例如囊性纖維變性、肺纖維變性、及過敏性鼻炎。例如可 20 投與IL-13結合劑(例如抗1抗體分子），其投藥量能有效 治療或預防該疾病或改善該疾病之至少一症狀。 可藉許多狀況，例如吸入過敏原、上呼吸道或耳感染 等而引發氣喘（OpperwaU (2〇〇3) Nurs· Clin. North Am· 38··697-711)。過敏性氣喘之特徵為對各種專一性及非專一 129 200848429 性刺激物具呼吸道過度反應（AHR)、高血清免疫球蛋白 E(IgE)、過量呼吸道黏液產生、水腫、及支氣管上皮受傷 (Wills-Karp，supra)。當過敏原導致立即早期呼吸道反應時 即發生過敏性氣喘，其通常在數小時後發生延發性晚期呼 5 吸道反應（LAR)(Henderson 等人（2000) J. immun〇1 164:1086-95)。在LAR期間，該呼吸道壁及支氣管流體内到 處都有嗜伊紅血球、淋巴細胞、及巨嗤細胞之流入物 (Henderson等人，supra)。肺嗜伊紅血球增多為過敏性氣喘 之特徵且為對該呼吸上皮造成許多損害的主因（Li等人 10 (1999) J. Immunol. 162··2477-87)。 CD4+ Τ輔助細胞(Th)對與氣喘有關之慢性炎症具重要 性(Henderson等人，supra)。有幾項試驗已證明CD4+細胞至 第2型T輔助細胞（Th2)與後續產生之第2型細胞素（例如 IL-4、IL-5、IL-10、及IL-13)在導致AHR之過敏性炎症反應 15 中具重要性（Tomkinson 等人（2001) J. Immunol· 166:5792-5800、及文中列舉之參考文獻）。首先已證明鼠科 動物模式之經過敏誘發的氣喘需要CD4+ T細胞。第二， CD4+ T細胞產生的第2型細胞素不僅在這些動物模式中進 行擴增，而且在過敏性氣喘之患者體内亦擴增。第三，在 20 動物模式及氣喘病患者之呼吸道組織内，第2型細胞素位準 增加。第四，Th2細胞素已被認為在過敏性氣喘之鼠科動物 模式之嗜伊紅血球募集中扮演重要角色，且可採用之轉移 性Th2細胞與肺以及嗜伊紅血球增多中之嗜伊紅趨化因子 (其為一種有效的嗜伊紅血球化學誘質）的增加位準有關 130 200848429 (Wills-Karp等人，supra ; Li等人，supra)。 用於治療或預防文中所述之氣喘的方法包括用於治療 或預防外因性氣喘（亦稱為過敏性氣喘或特異反應性氣 喘）、内因性氣喘（亦稱為非過敏性氣喘或非特異反應性氣喘) 5 或兩者之組合（亦即混合型氣喘）的方法。外因性或過敏性氣 喘包括由，例如過敏原，諸如花粉、孢子、牧草或雜草、 寵物皮屑、灰塵、蟎等所引起或相關之事件。由於過敏原 及其它刺激物本身在整年内存在於各種地點，所以這些事 件之種類亦稱為季節性氣喘。外因性氣喘之群組亦包括支 10 氣管氣喘及過敏性支氣管肺麴菌病。 可藉文中所述之藥劑而治療或緩解的疾病包括由感染 媒介，諸如病毒(例如普通感冒及流行性感冒病毒、呼吸融 合細胞病毒(RSV)、副黏病毒(paramyxovirus)、鼻病毒及流 行性感冒病毒)所引起的呼吸疾病及氣喘、RSV、鼻病毒及 15 流行性感冒病毒感染普遍發生在兒童身上，且係為嬰兒及 幼童之呼吸道疾病的主因。病毒性細支氣管炎之兒童可罹 患慢性喘鳴及氣喘，其可經文中所述方法治療。亦包括某 些氣喘病患者由於運動及/或冷空氣而發生的該等氣喘病 症。該等方法適用於與下述有關之氣喘：二手菸曝露(例如 20 經香煙誘發及工業煙氣）；以及工業與職業曝露，諸如煙、 臭氣、有毒氣體、二氧化硫、一氧化二氮、煙氣，其包括 得自油漆、塑膠、聚胺基甲酸酯、清漆等之異氰酸鹽；及 木材、植物或其它有機性灰塵等。該等方法亦可用於與食 物添加劑、防腐劑或藥劑有關之氣喘病事件。亦包括用於 131 200848429 治療、抑制或緩解與沈默性氣喘或咳嗽變異性氣喘種類。 文中揭示之方法亦可用於治療及緩解與胃食道逆流 (GERD)(其可刺激支氣管縮小）有關之氣喘。GERD連同滯留 性身體分泌物、壓抑性咳嗷、及在寢室内接觸過敏原與刺 5 激物皆可導致氣喘病症且業經統稱為夜間氣喘或液夜發性 氣喘。在治療、抑制或緩解與GERD有關之氣喘的方法中， 可用藥學上有效量之如文中所述的IL-13拮抗劑及藥學上 有效量之藥劑以治療GERD。這些藥劑包舌，但不限於：質 子泵抑制劑’例如延緩釋放之泮托拉σ坐(pant〇prazole)納錠 10 (PRILOSEC0)、奥美拉ϋ坐（omepraz〇ie)延緩釋放型膠囊 (PRILOSEC⑧）、雷貝拉口坐(rebeprazole)鈉延緩釋放型錠劑 (ACIPHEX )或延緩釋放型能索拉峻（ians〇praz〇ie)膠囊 (PREVACID㊣）。 猹呉反應其症狀 15 業經發現得自特異反應性患者之細胞對IL-13具有增 強靈敏性。因此，可投與IL_13&/或IL-4拮抗劑，其投藥量 能有效治療或預防特異反應性疾病。“特異反應性，，係指通 常有形成過敏反應之遺傳性傾向的一些疾病。 特異反應性疾病之實例包括過敏、過敏性鼻炎、異位 20 性皮膚义、氣喘及花粉熱。氣喘為與間歇性呼吸症狀，例 如支氣官過度反應及可逆氣流阻塞有關之表現型異質疾 病。氣喘之免疫組織病理學特徵包括，諸如呼吸道上皮之 剝脫、膠原沈積在基膜下面；水腫；巨大細胞活化作用； 及炎症細胞浸潤（例如藉嗜中性白血球、嗜伊紅血球、及淋 132 200848429 巴細胞）。呼吸道炎症可進一步導致呼吸道過度反應、氣流 受限、急性支氣管縮小、黏液栓形成、呼吸道壁重塑、及 其它呼吸症狀。可投與有效量之ai_13結合劑（例如il-13結 合劑’諸如文中所述之抗體分子）以改善這些症狀中之一或 5 多種。 過敏性鼻炎（花粉熱)之症狀包括發癢、流鼻水、打喻嗓 或鼻塞、及眼睛癢。可投與比-；^拮抗劑以改善這些症狀中 之一或多種。異位性皮膚炎為可影響皮膚之慢性(長持續性） 疾病。有關於異位性皮膚炎之資訊可，例如得自NIH公開案 10 第03-4272號。在異位性皮膚炎中，皮膚會很癢。導致紅療、 腫脹、龜裂、滲出清澈流體且最後結痂並生成乾癬。在許 多情況下，有一段時期該疾病會惡化(稍為病情加重期或潮 紅期），繼而一段時間該皮膚的病情可改善或完全解除(稱為 緩解期）。異位性皮膚炎通稱為“濕疹”，其係為皮膚炎症的 15 幾種類型之一般名詞。異位性皮膚炎為許多種濕疹中之最 常見的一種。異位性皮膚炎之實例包括：過敏性接觸性濕 疹（皮膚炎：紅疹、發癢、滲出反應，其中該皮膚已接觸免 疫系統認為是外來物之物質，諸如毒常春藤或乳劑及洗液 中之某些防腐劑）；接觸性濕疹（局部化的反應，其包括紅 2〇 疹、發癢、及灼燒感，其中該皮膚已接觸過敏原（導致過敏 的物質）或刺激物，諸如酸、清潔劑或其它化學劑）；汗癌樣 濕疹（手掌及腳底上之皮膚的刺激，其特徵為會發癢並有灼 燒感之清澈深水疱）；神經性皮膚炎（由局部性癢（諸如昆蟲 咬)所導致之頭、下腿、腕或前臂上之皮膚的乾癬斑，當搔 133 200848429 癢時其會劇痛）；錢幣形濕療（手臂、背、臀、及下腿上最常 見之發炎皮膚的錢幣形斑，其可結痴、形成乾癬並轉）； 脂溢性濕療(頭皮、臉、及偶爾在身體的其它部位上之皮膚 的乂 η色’由丨生、乾癖斑）。另外特殊症狀包括淤滯性皮膚 5炎、異位性糟（登尼摩根氏權（Dennie-M〇rgan fold))、唇炎、 多線樣掌、色素沈著過度之騎(由於炎症或花粉熱而導致 眼臉之顏色變得更暗）、魚鱗癖、毛角化病、苔癬化、丘療、 及蓴麻疹。可投與亿-13拮抗劑以改善這些症狀中之一或多種。 用於治療過敏性鼻炎其它過敏性疾病之代表性方法可 1〇包括在接觸過敏原前，例如在季節性接觸過敏原前，例如 在過敏原激增前，先以IL-13拮抗劑進行治療。此種治療法 可包括一或多次給藥，例如於固定間隔下給藥。 轰 IL-13及其受體可涉及至少某些癌種類之形成，例如衍 15 生自造血細胞之癌或衍生自腦或神經元細胞之癌（例如神 經膠質母細胞瘤）。例如藉使用可溶性IL_13受體或STAT6_/_ 缺損小鼠而阻斷該IL-13傳訊路徑可分別導致延緩的腫瘤 發作及/或霍吉金氏(Hodgkins)淋巴瘤細胞株或轉移性乳房 癌瘤之生長（Trieu等人（2004) Cancer Res. 64: 3271-75; 20 Ostrand-Rosenberg等人（2000) J_ Immunol· 165: 6015-6019) 。可藉文中所述之抗IL-13抗體而專一性地標定可表現 IL-13R之癌（Husain and Puri (2003) J· Neurooncol· 65:37-48;
Mintz等人(2003) J. Neurooncol· 64:117-23)。IL-13拮抗劑可 用以抑制癌細胞增生或其它癌細胞活性。癌係指一或多種 134 200848429 對正常生長對照物無反應性且相對於對應正常細胞，其典 型上以減少的調節作用增生之細胞。 可經IL-13拮抗劑（例如IL-13結合劑，諸如文中所述之 抗體或抗原結合片段）治療之癌實例包括白血病，例如B細 5 胞慢性淋巴細胞白血病、急性骨趙性白血病、及人類T細胞 白血病病毒第1型（HTLV-1)轉形之T細胞；淋巴瘤，例如T 細胞淋巴瘤、霍吉金氏淋巴瘤；神經膠質母細胞瘤；胰腺 癌；腎細胞癌瘤；卵巢癌瘤；AIDS-卡波西氏内瘤（Kaposi’s sarcoma)、及乳癌（如Aspord，C.等人(2007) JEM 204:1037-1047 10 中所述）。例如可投與有效量之IL_13結合劑（例如抗IL-13抗 體分子）以治療或預防該疾病，例如降低細胞增生或改善該 疾病之至少一症狀。 纖維變性 IL-13及/或IL-4拮抗劑亦可用以治療炎症及纖維變 15 性，例如肝之纖維變性。IL-13產生與肝炎症（例如病毒性肝 炎）演變為肝硬化、及可能是肝細胞癌瘤有關（de Lalla等人 (2004) J. Immunol· 173:1417-1425)。例如當瘢痕組織取代正 系組織時(其通常發生在炎症後），發生纖維變性。B型及◦ 型肝炎皆會導致肝内之纖維變性反應，其可演變成肝硬 20 化。接著，肝硬化可演變成嚴重併發症，諸如肝衰竭或肝 細胞癌瘤。使用文中所述之IL_13及/或比-4拮抗劑以阻斷 IL-13活性可降低炎症及纖維變性，例如與肝病，特別為b 型及C型肝炎，有關之炎症、纖維變性、及肝硬化。例如可 才又與有效5:之该拮抗劑（群）以治療或預防該疾病或改盖节 135 200848429 炎症及/或纖維變性疾病之至少一症狀。 發炎性腸病 發炎性腸病為導致腸炎之疾病的一般名稱。發炎性腸 病之兩貫例為克隆氏病（Crohn’s disease)及潰瘍性結腸炎。 5 IL_13/STAT6傳訊業經認為涉及小鼠平滑肌之經炎症誘發 的收縮過度，其係為發炎性腸病的一種模式（Akiho等人 (2002) Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 282:G226-232)。例如可投與有效量之IL_丨3拮抗劑以治療或 預防该疾病或改善該發炎性腸病之至少一症狀。 1〇 樂學組成物 可活體外或活體内使用該等IL-13拮抗劑（如文中所 述）。其可併入藥學組成物内，例如藉使該IL-13結合劑與藥 學上可接受體載劑組合。除了該IL-13結合劑及載劑外，此 種組成物可含有各種稀釋劑、填料、鹽、緩衝劑、安定劑、 15 增溶劑、及本項技藝中已熟知之其它物質。藥學上可接受 物質通常為不會干擾IL-13結合劑之生物活性的效率之非 毒性物質。該載劑之特徵可取決於投藥方式。 文中所述之藥學組成物亦可含有其它要素，諸如但不 限於··如下文更詳細述之其它抗細胞素抗體分子或其它消 20 炎劑。此等額外要素及/或藥劑可包括在該藥學組成物内以 與文中所述之IL-13及/或IL-4拮抗劑一起產生增效作用。例 如，在過敏性氣喘之治療法中，文中所述之藥學組成物可 包括已知可減少過敏反應之抗IL-4抗體分子或藥物。 文中所述之該藥學組成物可以呈微脂體形式，其中 136 200848429 中所述之拮抗劑，除了其它藥學上可 IL-13拮抗劑，諸如又 二4如合雨性藥劑，諸如以聚集形式存在之 接受載劑外，當玎錤 。^ c β溶性單層、液日日粒或仍在水溶液内 脂質，諸如膠束、+ 此辦形成之脂質包括’但不限於單酸甘油 之薄層。適於微脂體y '
* 溶如卵石粦脂、石粦脂、皂角苷（saponin)、 酉旨、甘油二S旨、；L 制/法也等微脂體形成物之代表性方法包括美 膽汁等。用於製備此 ^ 、第 4,501，728號、第 4,837,028號、及 國專利第4,235,871旅^ 第4,737,323號中所述之方/矢 如文中使用，該名詞“治療上有效量”意指足以顯示有 10 15 意的病患利益，例如改善此等疾病之症狀、此等疾病之座 癒或增加此等疾病之痊癒率’該藥學組成物或方法之各活 性組份的總位準。當施用單獨投與個別活性成份時，該名 詞係指單獨成份。當施用至一組合時，該名詞係指不管一 起、連續或同時投予’該名詞係指會導致療效之各該活性 成份之合併量。 可以以各種習知方法，諸如口服、吸入或經皮、皮下 或靜脈注射進行用於該藥學組成物之IL-13拮抗劑的投 藥。當藉靜脈、經皮或皮下注射而投與治療有效量之IL-13 拮抗劑時，可將該結合劑製成無熱原之非經腸性可接受的 水溶液。可根據，諸如pH、等滲性、安定性等以調整此等 非經腸性可接受體的蛋白質溶液之組成以使適於生理條 件、結合劑安定性等之組成最佳化。適於靜脈、經皮或皮 下注射之藥學組成物可含有，例如等滲媒劑，諸如氯化鈉 射夜林格氏注射液(Ringer，s hjati⑽）、右旋糖注射液、 137 200848429 右旋糖及氯化鈉注射液、乳酸化林格氏注射液或本I員彳支t 已知之其它媒劑。該藥學組成物亦可含有安定劑、防腐^ 緩衝劑、抗氧化劑或其它添加劑。 5 10 15 20 該藥學組成物中之Ιί·13拮抗劑位準可取決於欲、、八療 病症之性質及嚴重性、及患者已進行之先前療法的性巧、 可對一般患者或尚未顯示症狀之患者投與該藥風、植成^ 物，例如以預防模式投與。巡診醫生可決定用以户療個別 患者之該IL-13及/或IL-4拮抗劑的用量。例如巡診醫生可& 與低劑量之拮抗劑並觀察該患者之反應。可投與較古添丨旦 之拮抗劑，直到該患者獲得最佳療效且該劑量通常並未進 一步增加為止。例如藥劑可含有約0·1毫克至5〇α ^毛見抗體/ 公斤體重，例如介於約〇·1毫克與5毫克或介於約8毫克與5〇 毫克抗體/公斤體重。在其中該抗體係以每一個月不超過之 次的頻率，例如每週或每月一次經皮投與之實施例中，节 組成物包括約0.7-3.3，例如1.0-3.0毫克/公斤，例如約 0·8·1·2、1.2-2.8或2.8-3.3毫克/公斤之劑量。在其它實施例 中，可藉吸入法或注射（例如皮下注射）而投與約〇·5_1〇毫克 /公斤（例如約0.7-5毫克/公斤、0.9-4毫克）公斤、1_3毫克/公 斤、1.5-2.5毫克/公斤、2毫克/公斤）之劑量。在一實施例中， 單一治療間隔包括至少分隔4-7、9或14天之約1-3毫克/公 斤、L5_2.5毫克/公斤、2毫克/公斤之抗IL-13抗體分子的兩 次皮下給藥。例如該單一治療間隔可包括分隔7天之約2毫 克/公斤之抗IL-13抗體分子的兩次皮下給藥。 使用該藥學組成物之治療持續時間可根據欲治療之疾 138 200848429 病的嚴重性及各別患者之病況及潛在特異體質的反應而不 同。在一實施例中，亦可，例如每週—二欠、每24、48、恥 小時-次或通常不超過敏原此等間隔，藉皮下注射方式而 投與該IL-13及/或IL-4拮抗劑。代表性劑量可以在〇㈣毫 5克/公斤之範圍内、更佳wo毫克/公斤。可以以每分鐘小於 20、1〇、5或1毫克之速率，藉靜脈注射而投與該藥劑以達 到約1至50毫克/米2或5至20毫克/米2之劑量。 在一貫施例中，對該患者投與IL-13拮抗劑可包括改變 蛋白質之劑量，例如以減少副作用或使其減至最低。例如 10 可對该受貫驗者投與第一劑量，例如小於治療上有效量之 劑量。在一後續間隔内，例如至少6、12、24或48小時後，〆 了對4患者投與弟一劑量，例如至少比該第一劑量大至少 25、50、75或100%之劑量。例如該第二及/或以下類推之第 三、第四及第五劑量可以是治療上有效劑量之至少約7〇、 15 80、90 或 100%。 一吸入法 可調配適於吸入或其它肺傳遞之模式的含IL-13拮抗 劑之組成物。如文中使用，該名詞“肺組織，，係指呼吸道之 任何組織且除非另有指定，兼包括上及下呼吸道。:^—^及 2〇 /或1L-4拮抗劑可以與適用於治療肺病之現有用藥方式一起 使用。 在一實施例中，該IL-13拮抗劑被調配適於霧化器使 用。在一實施例中，該IL_13拮抗劑可以以凍乾形式貯存(例 如貯存於室溫下）且在吸入前在溶液内重組。亦可調配適於 139 200848429 使用西用叙f，例如吸入為進行吸入之該U 3括抗劑。見 美國專利6，102,035(散劑吸入器）及6,〇12,454(乾散劑吸入 态）。该吸入器可包括於適於貯存之？11下適於該几―^拮抗 劑之各別區室及另-用於中和型緩衝劑之區室與可在霧化 5 箣立即合併5亥IL-13拮抗劑與中和型緩衝劑之機制。在一實 施例中，該吸入器為定量吸入器。 用於局部性傳遞藥物至肺空氣通道的3種常用系統包 括乾散劑吸入器（DPI)、定量吸入器（MDI)及霧化器。可使 用MDI(其係為吸入投藥之最常使用的方法）以傳遞呈溶解 10 开》式或分散液形式之藥物。典型上，MDI包括氟里昂（Freon) 或可一旦啟動該裝置時可迫使氣溶膠化藥物進入呼吸道的 其它相當高蒸氣壓推進劑。不像DM1，DPI通常完全依賴該 患者將呈乾散劑形式之藥物導入肺部之吸氣努力。霧化器 可藉提供能量至液體溶液而形成欲經吸入之藥物氣溶膠。 15 亦已研究在使用氟化學介質進行液體通氣或肺灌洗期間的 藥物直接肺傳遞。可使用這些及其它方法以傳遞IL_13拮抗 劑。在一實施例中，該IL_13拮抗劑係與聚合物，例如可溶 解或增加該化合物之半衰期的聚合物結合。 例如就吸入投藥而言，IL-13拮抗劑係以氣溶膠喷霧形 20 式自含合適推進劑或霧化劑之加壓容器或分配器傳遞。該 IL-13拮抗劑可以呈乾粒或液體形式。可藉以下方法而製成 包括該IL-13拮抗劑之顆粒，例如藉喷霧乾燥法、藉使用電 何中和劑乾無该IL-13拮抗劑之水 >谷液，然後自經乾燥散劑 產生顆粒或藉在有機改質劑内乾燥水溶液，然後自經乾燥 140 200848429 散劑產生顆粒。 借助於合適推進劑’例如二氯二氣甲燒、三氯氣甲烧、 二氣四氟乙烧、二氧化碳或其它合適氣體，飢·13拮抗劑 可最好減_噴射彡式自加壓包切化轉遞。就加壓 氣溶劑而言’可II提供-閥以遞送―計算量而測定該劑量 單位。適用於吸人器及吸藥器之膠囊或藥配以含 有几-⑽㈣及合祕末基#u諸如㈣或_)之散劑混 合物，其巾_㈣經概之雜。除了軸娜或未經 調配之化合物外，可以使其它物質（諸如1〇〇%Dppc)或其它 10 表面活化劑與該IL -13拮抗劑混合以促進該調配或未經調 配化合物之傳遞及分散。製備乾顆粒之方法係描述在，例 如 WO 02/32406 中。 可調配適於氣溶膠傳遞之IL-13拮抗劑，例如呈乾氣溶 膠顆粒，藉此當投與時，其可快速吸收並可得到快速的局 15 部性或全身性治療結果。可調整投藥方法以在投藥之2分 鐘、5分鐘、1小時或3小時内可檢測活性。在某些實施例中， 可甚至更快，例如在一個半小時時或甚至10分鐘内獲得最 高活性。可調配具更長生物半衰期（例如藉與聚合物，諸如 PEG結合）之扎-13拮抗劑以作為其它投藥方式之另一選 2〇 擇，例如藉此該IL-13拮抗劑可自肺進入循環且分配至其它 器官或特定標靶器官。 在一實施例中，該IL-13拮抗劑之傳遞量可致使至少5% 該多肽之質量能傳遞至下呼吸道或該深肺部。深肺部具有 極繁茂的毛細管網狀結構。該使毛細管腔與肺泡氣空間分 141 200848429 離之呼吸膜很薄片（鳥)且具極可滲透性。此外，作為該 肺泡表面之襯裏的液體層富含肺表面活化劑。在立它實施 例中，至少2% ' 3%、5%、10%、2〇%、3〇%、4〇%、5〇%、 60%、70%或80% IL_13拮抗劑之組成物遞送至下呼吸道或 5該深肺部。遞送至這些組織中之任一種或兩者可有效吸收 狐-13拮抗劑且得到高生體可用率。在—實施例中，係使 用，例如吸入器或霧化器提供固定劑量之該IL_n括抗劑。 例如該IL-13結合劑係以每一次喷量至少約〇 〇2、〇1、〇 5、 卜1.5、2、5、10、20、40或50毫克或更多的劑量單位形 10 式傳遞。生體可用率百分比之計算法如下：生體可用率 %=(AUC非侵入性/AUC靜脈或皮下注射)χ(劑量靜脈或皮下注射/劑量非侵入性)χ^ 雖未必’可使用傳遞增強劑，諸如表面活化劑以進一 步增強肺傳遞。如文中使用，“表面活化劑，，係指具有親水 性及親脂性分子團之IL-13拮抗劑，其可藉與兩不互溶相間 15 之介面相互作用而促進藥物之吸收。基於幾個原因，例如 顆粒凝聚之減少、巨噬細胞呑噬作用等，表面活化劑可用 於該等乾顆粒中。當與肺表面活化劑偶合時，由於表面活 化劑，諸如DPPC可大大地加速該化合物之擴散，所以更能 有效吸收該IL-13拮抗劑。表面活化劑在本項技藝人已為吾 20 人所熟知且包括，但不限於：磷酸甘油酯，例如磷脂醯膽 鹼、L- α -磷脂醯膽鹼二棕櫚醯基物（DPPC)及二磷脂醯甘油 (DPPG);十六醇；脂肪酸；聚乙二醇(PEG);聚氧化乙烯-9-; 月桂醚；棕櫚酸；油酸；山梨糖醇酐三油酸酯（Span 85); 甘膽酸酯；索發亭（surfactin);泊洛少姆(P〇l〇x〇mer);山梨 142 200848429 山梨糖醇酐三油酸酯；四丁酚醛 糖醇酐脂肪酸酯； (tyloxap〇D;及磷月旨 5 如在血液、苑例中’ IL-13拮抗劑係與可改善其在循環，例 安定化作血π、淋巴、支氣管肺灌洗液或其它組織中之 或50倍。用及/或滞留作用，例如改善至少h5、2、5、10 聚合拮抗劑可以與聚合物，例如實質上非抗原性 10之*旦Μ氧化伸U聚氧化⑽)結合 。合適的聚合物 U 里里可實郎'卜 約細至約35貝〇ηΛ不问。可使用具有數量平均分子量範圍自 人 （或約丨,000至約丨5,〇〇〇、及2,000至約12,500) 例如IL_l3：Mri丄兔丨 ίσ抗劑可以與水溶性聚合物（例如親水性聚 取土 Κ口物例如聚乙烯醇及聚乙烯吡咯咬酮）結合。此 '久:物之非限制性群組包括聚氧化伸烧均聚物，諸如聚 乙-，(PEG)或聚丙二醇、聚氧化乙稀化多元醇、其共聚物 及其肷&共承物’但其限制為可維持該等欲段共聚物之水 /合I·生另外有用的聚合物包括聚氧化烯類諸如聚氧化乙 稀、聚氧化丙稀、及聚氧化乙烯與聚氧化丙婦之嵌段共聚 20物(pi_ies);聚甲基丙烯酸_;卡波姆㈣_亦分支 鍵或非分支鏈多酿，其包含以下醣類單體；D_甘露糖、D· 及L-半乳糖、炭藻糖、果糖、D_木糖、以阿拉伯糖 (ambinose)、D-葡萄糖酿酸、唾液酸、D·半乳糖酸酸、D_甘露 糖路酸(例如聚甘露祕酸或藻酸）、D_葡萄糖胺、〇_葡萄糖及 143 200848429 神經胺酸，其包栝均質多醣類及異質多醣類，諸如乳糖、士 澱粉、澱粉、羥乙基澱粕、直鏈澱粉、聚葡萄糖硫酸鹽、聚〜 萄糖、糊精、肝醣、或酸式黏多醣之多醣亞單位，例如遷明: 酸；糖醇之聚合物，諸如聚山梨糖醇及聚甘露醇；肝素或、 5 言亥 趣 含 可藉，例如凝朦過;慮法或離子交換層析法，例如 自未經反應之起始物質分離IL_13拮抗劑與聚合物之綴合物。 10 15 20 等綴合物之異種物種係以相同方式自彼此純化。由於該等未 反應之胺基酸的離子性質不同，所以亦可進行不同物種（例令 一或兩PEG殘基）的拆分。見，例如WO 96/34015。 IL-13拮抗劑之其它
本發明又一方面之特徵為藉投與位準足以抑制IL 之相關活性的文中所述IL-13拮抗劑而活體内調節（例如 低、中和及/或抑制）IL-13之一或多種相關活性的方法。 > 亦 可對文需要抑制劑IL-13媒介性炎症反應之受實驗者々喪 織 IL-13括抗劑。這些病症包括，例如呼吸道炎症、氣喘、、 維變性、嗜伊紅血球增多及增加的黏液產生。 例如’可藉評估拮抗劑調整已接觸豬蛔蟲過敏原之铜 猶之呼吸道炎症的能力而評估文中所述IL-13拮抗劑之效 力。可使用1L-13拮抗劑以中和或抑制一或多種IL-13相關活 性’例如減少活體内IL-13媒介之炎症，例如用以治療或預 防IL-13相關病症，其包括氣喘及/或其相關症狀。 在〜實施例中，IL-13拮抗劑或其藥學組成物係與治療 物一起投與，例如合併其它藥劑，例如可用於治療病症或 144 200848429 疾病，諸如過敏性及炎性疾病之治療劑。本文中之該名、 病一起’’意指實質上同時，同時或連續投與該等藥劑。若: 、夷才又舁，則於第二種化合物投藥開始時，於治療之部位\ $佳仍可檢測有效濃度之這兩種化合物的第一種。 立車又 例如該組合治療物可包括一或多種能結合至江_13且 :擾機能性IL·13傳訊複合物之形成、與-或多種另外治^ 刻（如下文更詳述之細胞素及生長因子抑制劑、免疫抑制 劑、消炎劑、代謝抑制劑、酶抑制劑、及/或細胞毒害性或 ι〇細胞生長抑制劑）共調配及/或共投與之IL-13結合劑。^ 且，一或多種1L-13結合劑（例如該IL-13拮抗劑單獨或與該 IL-4抬抗劑-起)可以與2或多種文中所述之治療劑併用。此 等組5 /口療物最好可利用較低劑量之該等投與治療劑，因 此可避免與各種單一治療物有關之可能毒性或併發症。此 外，文中所揭示之治療劑可對不同於IL-13/IL-13受體路徑 15之路徑作用，因此預期可增強該U3結合劑之作用及/或赴 增效作用。 會干擾氣喘或呼吸道炎症之不同觸發劑的治療劑，例 如用以治療過敏、上呼吸道感染或耳感染之治療劑可併用 IL-13結合劑。在一實施例中，一或多種IL_13結合劑（例如 2〇 該11^13拮抗劑單獨或與該IL-4拮抗劑一起）可以與一或多 種另外藥劑’諸如其它細胞素或生長因子拮抗劑（例如可溶 性受體、肽抑制劑、小分子、黏附素）、可結合至其它標挺 至其它標靶之抗體分子（例如可結合至其它細胞素或生長 因子、其受體或其它細胞表面分子之抗體）、及消炎細胞素 145 200848429 或其促欵劑共調配及/或共投與。可以併用IL-13結合劑之該 等藥劑的非限制性實例包括，但不限於：吸入性類固醇； 石-促政劑，例如短效性或長效性yS -促效劑；白三稀素或白 二稀素党體之拮抗劑；組合藥物，諸如ADVAIR® ; IgE抑制 5 劑’例如抗IgE抗體(例如XOLAIR®);磷酸二酯酶抑制劑（例 如PDE4抑制劑）；黃嘌呤素；抗膽素激素導性藥劑；巨大細 胞女疋劑，諸如色甘酸(cromolyn) ; IL-5抑制劑；嗜伊紅趨 化因子/CCR3抑制劑；及抗組織胺。
在其它實施例中，該等IL-13結合劑可以與IL-4拮抗劑 10 一起投與。IL-4拮抗劑之實例包括，但不限於··抗IL-4之抗 體分子（例如揭示在Hart，T.K等人(2002) Clin Exp Immunol. 130(1):93-1〇〇； Steinke, J.W. (2004) Immunol. Allergy Clin North Am 24(4):599_614 ;及Ramanthan等人U.S. 6,358,509 中之帕斯可里朱麻(pascolizumab)及相關抗體）、IL-4Ra(例 15 如揭示在US 05/0118176、US 05/0112694及Clinical Trials Gov. Identifier: NCT00436670中之AMG-317及相關IL-4R抗 體）、IL-13R α 1(例如在WO 03/080675(其命以申請者 AMRAD命名）中之抗-13Ra 1抗體）、及可結合至IL-4及/或 IL-13之單-或雙-專一性抗體分子（例如揭示在WO 20 07/085815 中）。 在其它實施例中，該IL-13或IL-4拮抗劑為IL-13或IL-4 突變蛋白（例如可結合至該IL-13R或IL-4受體但不會顯著增 加該受體之活性的該細胞素之截斷或變體形式）或結合至 毒素之細胞素。IL-4突變蛋白係由Weinzel等人在Lancet 146 200848429 (2007)370:1422-31中揭示。IL-13/IL_4抑制性肽之另外實例 係揭示在 Andrews，A.L.等人（2006) J. Allergy and Clin Immunol 118:858-865中。細胞素-毒素綴合物之實例係揭示 在以文參考文獻中：WO 03/047632、Kunwar，S.等人(2007) 5 J· Clin Oncol 25(7):837-44及 Husain，S· R.等人（2003) J· Neurooncol 65(1):37-48。 在又其它實施例中，該IL-13拮抗劑或IL-4拮抗劑為 IL-13受體多肽（例如IL-13Ra 2或IL-13Ra 1)或IL-4受體多 肽(例如IL-4Ra)之全長或片段或改質形式。例如該拮抗劑 10 可以是IL-13受體或IL-4受體之可溶形式（例如含細胞素結 合性結構域之哺乳動物（例如人類）IL-13Ra2、IL-13Ra 1 或IL-4Ra的可溶形式，例如哺乳動物（例如人類）iL-13Ra 2、IL-13Ra 1或IL-4Ra之細胞外結構域的可溶形式）。代表 性受體拮抗劑包括，例如如以下參考文獻中所述之 15 IL-4R-IL-13R結合性融合物：w〇 05/085284及Economides， Α·Ν 等人（2003) Nat Med 9(1):47-52、與Borish，L.C·等人 (1999) Am J Respir Crit Care Med 160(6):1816-23。 可單獨使用IL-13受體或IL-4受體、或IL-13或IL-4突變 蛋白或官能性連接(例如藉化學偶合、基因或多肽融合、非 20 共價結合或其它方法）至第二分子團以促進例如免疫球蛋 白Fc結構域、血清白蛋白、聚乙二醇化反應、GST、Lex-A 或MBP多肽序列之表現性、立體撓性、檢測及/或離析或純 化。該等融合蛋白質可另外包括使該第一分子團與第二分 子團連接之交聯劑序列。例如可溶性IL-13受體或IL-4受 147 200848429 體、或IL-13或il-4突變蛋白可融合至重鏈恆定區或各種同 型物其包括：IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgAl、 IgA2、IgD、及igE。典型上，該融合蛋白質可包括，列如 融合至人類免疫球蛋白Fc鏈，例如人類IgG(例如人類IgGl 5 或人類IgG2或其突變形式）之人類可溶性IL-13受體或IL-4 又體、或IL-13或IL-4突變蛋白（或其同源性序列）之細胞外 結構域。该Fc序列可以於一或多個胺基酸發生突變以減少 效應細胞機能、Fc受體結合性及/或補體活性。 應瞭解文中所述之該等抗體分子及可溶性或融合蛋白 10 質可官能性連接(例如藉化學偶合、基因融合、非共價結合 或其它方法）至一或多種其它分子實體，諸如抗體(例如雙專 一性或多專一性抗體）、毒素、放射性同位素、細胞毒殺或 細胞成長抑制劑。 在其它實施例中，該IL_13或IL-4拮抗劑可抑制將il-13 15 或1L_13R、或IL-4或IL-4R編碼之核酸的表現性。此等拮抗 劑的實例包括核酸分子，例如反訊息分子、核酶、RNAi、 siRNA、可以與將IL-13或IL-13R、或IL-4或IL-4R或轉錄調 節區編碼之核酸進行雜交反應且可阻斷或減少IL-13或 IL-13R、或IL-4或IL-4R之mRNA表現性的三股螺旋結構分 20 子。ISIS-369645提供可抑制IL-4R之表現性的反訊息核酸之 實例，其係由ISIS Pharmaceuticals研發並揭示在，例如 Karras，J.G.等人（2007) Am J Respir Cell Mol Biol. 36(3)··276-86中。可干擾將IL-4或IL-13編碼之RNA的代表性 短干擾型RNAs(siRNAs)係揭示在WO 07/131274。 148 200848429 在又另一實施例中，該IL-13或IL-4拮抗劑為上游或下 游IL_ 13傳訊之抑制劑，例如小分子抑制劑（例如STAT6抑制 劑）。STAT6抑制劑之實例揭示在以下參考文獻中：Wq 04/002964、加拿大專利申請案：CA 2490888及Nagashima，S. 5 等人(2007) Bioorg Med Chem 15(2):1044-55 ;及美國專利 6,207,391 與WO 01/083517。 在其它實施例中，一或多種IL-13拮抗劑單獨或與一或 多種IL-4拮抗劑一起可以與一或多種消炎藥、免疫抑制劑 或代謝或酶催抑制劑共調配及/或共投與。可併用該等IL-13 10 結合劑之藥物或抑制劑實例包括，但不限於以下之一或多 種：TNF拮抗劑（例如TNF受體，例如p55或ρ75人類TNF受 體或其衍生物，例如75kdTNFR-IgG(75kDTNF受器-IgG融 合蛋白質，ENBREL™)的可溶性片段）；TNF酶拮抗劑，例 如TNF α轉化酶(TACE)抑制劑；毒簟驗受體拮抗劑；TGF_〇 15 拮抗劑；T干擾素；波芬酮(perfenidone);化療劑，例如阿 美蘇喋呤、雷夫米德(lefUmomide)或西羅里莫（sir〇iimus)(雷 帕黴素（rapamycin))或其類似物，例如cci-779 ; COX2及 cPLA2抑制劑，NSAIDs ;免疫調節劑；p38抑制劑、TPL-2、 Mk-2及NFPB抑制劑。 20 疫苗配方 本發明另一方面之特徵為修飾與免疫化作用有關之免 疫反應的方法。IL-13拮抗劑單獨或與IL-4拮抗劑一起可用 以增加免疫作用之效力，其係藉抑制IL-13活性。可在遞送 免疫原，例如疫苗之投與前、期間或其後投與拮抗劑。在 149 200848429 -實施例中，藉該接種法而上升之免疫性為細胞免疫性， 例如抗癌細胞或經病毒錢（例如經逆轉錄酶病毒感染，例 如經爾錢）之細胞的免疫性。在—實施射，該疫苗配 方含有-或多種拮抗劑及-種抗原，例如免疫原。在一實 5施射，該飢_13及/或IL_4^_與免錢法—起投與 (例如與具有-❹種選自豬豕草、黑麥草、塵瞒等之免疫 原所進行之過敏免疫化作用併用）。在另一實施例中，該拮 抗劑及免疫原係分開投與，例如彼此相隔一小時内、3小時 内、一天内或兩天内。 10 IL-13之抑制作用可改善，例如細胞性疫苗之效力，例 如疫苗抗，諸如癌及病毒感染，例如逆轉錄酶病毒感染， 例如HIV感染的效力。可藉CD4+ T細胞而下調藉疫苗進行 之CD8+細胞毒殺性Τ淋巴細胞(CTL)的誘導作用，其可能係 經由該細胞素IL-13而作用。IL-13之抑制作用業經證明可增 15 強CTL反應之疫苗誘導作用（Ahlers等人(2002) proc. Natl
Acad. Sci· USA 99:13020-10325)。IL_13拮抗劑可併用疫苗 以增加疫苗效力。癌及病毒感染（諸如逆轉錄晦病毒（例如 HIV)感染）為細胞性疫苗反應可以有效之代表性疾病。可以 於接種時，藉阻斷IL-13傳訊而增強疫苗效力（Ahlers等人 20 (2002) Proc· Nat. Acad. Sci. USA 99:13020_25)。可對受實驗 者投與呈藥學或治療組成物形式之疫苗配方。 用於診斷、預測、及/戒監沏1IL-13相關炎病之方$ 可在，例如藉測定IL-13在生物試樣中之位準而診斷、 預測、及監測IL-13相關疾病（例如氣喘）之演變的方法中使 150 200848429 用文中所述之結合劑。此外，本發明可辨識IL-13傳訊之新 抑制劑，其亦可用以治療IL-13相關疾病，例如氣喘。此等 用於診斷過敏性及非過敏性氣喘之方法可包括檢測IL-13 在生物試樣，例如血清、血漿支氣管肺泡灌洗流體、痰等 5 中之變化(例如減少或增加）。“診斷性”或“診斷”意指確認病 症之存在或不存在。診斷方法包括藉測定IL-13多肽在生物 試樣，例如得自受實驗者（人類或非人類哺乳動物）之支氣管 肺泡灌洗流體中之試驗量，並比較該IL-13多肽之試驗量及 正常位準或範圍（亦即得自不會罹患氣喘之已知個人(群）的 10 位準或範圍）而檢測IL-13之存在。雖然特定診斷方法可不提 供氣喘之確定性診斷，但是若該方法可提供有助於診斷之 建設性指示，則該方法就足夠。 用於預測氣喘及/或特應性疾病之方法可包括於該 mRNA或蛋白質位準下檢測IL-13之上調。“預測性”或“預 15 測”意指預測一病症之可能演變及/或嚴重性。預測方法包括 測定IL-13在得自受實驗者之生物試樣中的試驗量並比較 IL-13之試驗量及預測量或範圍（亦即得自罹患不同嚴重程 度之氣喘的個人之位準或範圍）。該IL_13在一試樣中的各種 數量係與用於氣喘之特定預測值一致，於特定預測位準 20 下，IL-13位準之檢測可提供該受實驗者之預測。 本專利申請案亦提供藉檢測IL -13之上調而監測氣喘 之過程的方法。監測方法包括於第一及第二時間下測定 IL-13在取自受實驗者之生物試樣中的試驗量並比較該等 數量。在第一與第二時間内之IL-13位準的變化可表示氣喘 151 200848429 及/或特應性疾病之過程的變化，位準減少表示氣喘緩解， 而位準增加表示氣喘及/或特異性疾病之加劇。此等監測分 析法亦適用於評估欲經治療IL-13相關疾病之患者體内之 特殊治療干預之效力（例如疾病減弱及/或逆轉）。 5 可製備螢光團及發色基-標記之結合劑。可選擇於310 奈米以上且較佳4〇〇奈米以上之波長下具有大量吸收性之 螢光分子團。各種合適的螢光劑及發色基係由Stryer (1968) Science，162:526及Brand，L·等人（1972) Annual Review of Biochemistry，41:843-868描述。該等結合劑可藉習知方法， 10 諸如美國專利第3,940,475號、第4,289,747號、及第4,376，110 號中所揭示之方法而經螢光發色基標記。具有一些上述所 欲性質之螢光劑種類為二苯并哌喃染料，其包括螢光素及 若丹明（rhodamines)。另一種螢光化合物為萘胺。一旦經螢 光團或發色基標記，可利用，例如螢光顯微術(諸如共焦或 15 反摺積顯微術），使用該結合劑以檢測該IL-13在試樣内之存 在或定位。 組織分析。可使用文中所述之結合劑以進行免疫組織 化學分析。例如就抗體而言，可使用標記物（諸如純化或抗 原決定位標記)合成該抗體，或可，例如藉綴合標記物或標 20 記-結合基團而檢測性標記該抗體。例如螯合劑可連接至該 抗體。然後使該抗體接觸一組織學製劑，例如在顯微鏡載 物玻片上之組織的固定斷面。進行結合性之培育後清洗該 製劑以移除未結合之抗體。然後，例如使用顯微術以分析 該製劑以確認該抗體是否已結合至該製劑。於結合期間， 152 200848429 該抗體（或其它多肽或肽)可未經標記。結合並清洗後，該抗 體經標記以使其方便檢測。 蛋白質檢測。亦可將IL-13結合劑（例如蛋白質，其係為 IL-13結合劑）固定在蛋白質陣列上。該蛋白質陣列可作為， 5 例如篩檢醫學試樣(諸如單離細胞、血液、血清、活體切片 等）之診斷工具。該蛋白質陣列亦可包括其它結合劑，例如 可結合至IL-13或其它標乾分子之結合劑。 製備蛋白質陣列之方法描述在以下參考文獻中：例如 De Wildt等人(2000) Nat· Biotechnol. 18:989-994; Lueking等 10 人(1999) Anal. Biochem. 270:103-111; Ge (2000) Nucleic Acids Res. 28? e3, I-VII; MacBeath and Schreiber (2000)
Science 289:1760-1763; WO 01/40803及WO 99/51773A1。例 如可使用得自，例如Genetic Microsystems或BioRobotics之 市售機械式儀器以高建設置適於該陣之多肽。該陣基板可 15 以是，例如硝基纖維素、塑膠、玻璃，例如表面經改質之 玻璃。該陣列亦可包括多孔基質，例如丙烯醯胺、洋菜糖 或另一聚合物。例如該陣列可以是，例如如上述De Wildt 中所述之抗體陣列。可產生該蛋白質之細胞可在以排列方 式在濾器上生長。蛋白質產生經誘發’且該表現性蛋白質 20 係於該細胞之位置固定在該濾器上。 蛋白質陣列經試樣接觸以測定該IL-13在試樣内之位 準。若該試樣未經標記，可使用夾層方法’例如使用標記 探針以檢測該IL-13之結合性。有關於該陣列之各位址的結 合程度之資訊可以以數據圖表，貯存在，例如電腦資訊庫 153 200848429 内。可重複製備該蛋白質陣列且用以比較不同試樣之’例 如結合特性。 流式細胞測定法。該IL-13結合劑可用以標記細胞，例 如試樣(例如病患試樣）内之細胞。該結合劑可連接至螢光化 合物。然後可藉流式細胞測定法而分析該等細胞及/或使用 螢光活化細胞揀選法揀選（例如使用得自Becton Dickinson 10 15 20
Immunocytometry Systems，San Jose CA之揀選器；亦見美 國專利第 5,627,037號、第 5,030,002號、及第 5，137,809號）。 當細胞通過敏原該揀選器時，雷射光束可激發該螢光化合 物’且檢測器可計算細胞通過數並藉檢測螢光而測定螢光 化合物是否連接至該細胞。可定量並分析已結合至各細胞 之標記數量以表示該試樣之特性。該揀選器亦可偏轉該細 胞並使藉該結合劑而結合之細胞與未經該結合劑結合之細 胞分離。可培養該等經分離之細胞及/或表示其特性。 活體内成像法。在又另一實施例中，本發明提供一種 用於在受實驗者體内活體内檢測IL_13之存在的方法。該方 法包括⑴對受實驗者(例如罹患几_13相關疾病之患者)投與 抗IL-13抗體分子，其係與可檢測標記綴合；（π)使該患者與 用於檢測該可檢測標記之裝置接觸。例如藉NMR或其它層 析X射線照相法而將該受實驗者影像化。 適用於0 Wf性成像法之標記的實例包括放射性標記， 諸如 131I、1UIn、％、99mTc、32p、33p、125i、3h、％及18 8灿· 榮純記’諸如螢光素及若丹明；核磁共振活性標記；可 藉陽電子發射層析X射線照相法(“PET”)掃描劑；化學發光 154 200848429 劑，諸如蟲螢光素(luciferin);及酶催標記，諸如過氧化物 酶或構酸酶。亦可使用短程輻射發射體，諸如可藉短程檢 測器探針而檢測之同位素。可使用已知技術使該結合劑經 此等試劑標記。例如見Wensel and Meares (1983) 5 Radioimmunoimaging and Radioimmunotherapy, Elsevier, New York有關於抗體之放射性標記化之技術及c〇icher等人 (1986) Meth· Enzymol· 121: 802-816。同位素標記之結合劑 的專一性活性係取決於該標記之半衰期、同位素純度、及 該標記併入抗體内之方式。以該等放射性同位素（諸如14C、 10 3H、35S、1251、99mTc、32P、33P、及 1311)將多肽標記之程序 係習知。見，例如美國專利4,302,438; Goding，J.W. (Monoclonal antibodies : principles and practice : production and application of monoclonal antibodies in cell biology， biochemistry, and immunology 第 2 版，London; Orlando: 15 Academic Press, 1986· pp 124-126)及文中列舉之參考文 獻·，與 A.R. Bradwell 等人，“Developments in Antibody Imaging’’，Monoclonal Antibodies for Cancer Detection and Therapy，R.W· Baldwin等人，（eds·)，pp 65-85 (Academic Press 1985) o 20 文中所述之IL-13結合劑可綴合至磁共振影像化(MRI) 對比劑。一些MRI技術係摘述在ΕΡ-Α-0 502 814中。一般而 言，係使用在不同環境中之水質子的鬆弛時間常數T1及T2 之差異以產生影像。然而，這些差異不足以提供清晰的高 解析度影像。這些鬆弛時間常數之差異可藉對比劑而增 155 200848429 強。此等對比劑之實例包括許多磁性劑、順磁性劑（其主要 可改變Tl)與鐵磁性或超順磁性劑（其主要可改變T2反應）。 可使用螯合劑（例如EDTA、DTPA及ΝΤΑ螯合劑）以連接（並 減少毒性）某些順磁性物質（例如Fe3+、Mn2+、Gd3+)。其它藥 5 劑可以呈顆粒（例如直徑小於1〇微米至約1〇奈米）形式且具 有鐵磁性、抗鐵磁性或超順磁性。如Pykett (1982)在 Scientific American，246:78-88 中戶斤述，該IL]3結合劑亦可 經含有NMR活性19f原子之指示恭團標記以定位並影像化 IL-13分佈。 10 文中所述之範圍亦包括含IL-13結合劑及診斷用途，例 如使用該IL-13結合劑（例如抗體分子或其它多肽或肽)藉， 例如將受實驗者影像而活體外檢測一試樣，例如得自罹患 IL-13相關疾病之患者的活體切片戒細胞内之IL-13的用途 之說明的套組。該套組可進一步含有至少另一試劑’諸如 15 標記或另外診斷劑。就活體内使用而言，可將該結合劑調 配成藥學組成物。 奢組 套組可包含IL-13結合劑，例如抗1L_13抗體分子、及/ 或該IL-4拮抗劑，例如作為套組之組份。例如該套組包括 20 (a)IL-13結合劑，例如抗il-13抗體分子、及/或該1L_4拮抗 劑、及視需要選用之(b)訊息資料。該訊息資料可以是與一 方法，例如文中所述之方法有關的描寫性、教學性、銷售 或其它資料。該等套組之訊息資科並不限於其形式。在一 實施例中，該訊息資料可包括有關於該化合物之製法，該 156 200848429 化合物之分子量、濃度、到期日、批次或製造地點等之資 訊。在一實施例中，該訊息資料係有關於使用該IL-13結合 劑以治療、預防、診斷、預測或監測文中所述之疾病的訊 息。在一實施例中，該訊息資料包括以單一治療間隔投與 5 該IL-13結合劑的用藥說明。 在一實施例中，該訊息資料可包括以合適方式投與 IL-13結合劑，例如抗IL_13抗體分子以進行文中所述之方 法，例如合適劑量、劑型或用藥方式（例如文中所述之劑 量、劑塑、用藥方式、藥物動力學/藥理動力學性質）的說明。 10 在另一實施例中，該訊息資料可包括對合適受實驗者，例 如人類，例如罹患過敏性氣喘、非過敏性氣喘、或IL-13媒 介之疾病，例如過敏性及/或炎性疾病或HTLV-1感染之人類 或有罹患該等疾病之危險的人類投與IL-13結合劑，例如抗 IL-13抗體分子的說明。IL-13產生係與HTLV-1產生有關 15 (Chung等人(2003) Blood 102: 4130-36)。 例如該資料可包括對患者、罹患過敏性氣喘、非過敏 性氣喘、或IL-13媒介之疾病，例如過敏性及/或炎性疾病或 HTLV-1感染之患者或有罹患該等疾病之危險的患者投與 IL-13結合劑，例如抗亿-^抗體分子之說明。 20 $套組可包括一或多個適於含IL-13結合劑，例如抗 IL-13抗體分子之組成物的容器。在某些實施例中，該套組 含有適於該組成物及訊息資料之各職器、分隔器或區 室。例如該組成物可裝在瓶子、小玻瓶或注射 器内，而該 訊息資料可裝在塑膠套或小袋子内。在其它實施例中，該 157 200848429 套組之各別兀件係裝在單一、未分隔之容器内。例如該組 成物係裝在已附加呈標戴形式之該訊息資料的瓶子、小玻 瓶或注射器内。在某些實施例中，該套組包括多個（例如一 箱）各別容器，其各含有一或多種單位劑型（例如文中所述之 5 劑型）之1L-13結合劑，例如抗11-1〗抗體分子。例如該套組 包括多個注射器、安瓶、箔小袋、霧化器或吸入裝置，其 各含有單一單位劑量之IL-13結合劑，例如抗几_13抗體分 子、或多單位劑量。 該套組可選擇性包括適於該組成物之投與的裝置，例 10 如注射器、吸入器、吸管、鉗、測量匙、滴管（例如眼滴管）、 水刷（例如棉刷或羊毛刷）或任何此種傳遞裝置。在一較佳實 施例中，該裝置為可分配固定量之該結合劑的可植入裝置。 揭示以下之實例以幫助瞭解本發明，但無論如何，其 並無意且不應該被推斷為限制本發明之範圍。 15 實例 膏例1 : MJ2-7抗體 使用 QIAGEN RNEASY3 Mini Kit (Qiagen)自 MJ2-7融 合瘤細胞製備總成RNA。使用SMART3 PCR Synthesis Kit (BD Biosciences Clontech)將 RNA逆轉錄成 CDNA。使用 2〇 SMART3寡核苷酸作為正向引子、及與可將小iIgG1恆定 區之CH1結構域的N-末端部份編碼之DNA黏接之mIgG131 子作為逆引子，藉PCR以進行該MJ2-7重鏈之可變區域的外 延法。使用SMART3及小鼠κ專一性引子以產生可將mJ2_7 輕鏈可變區域編碼之DNA片段。使用DEEP VENT3 DNA聚 158 200848429 合酶(New England Biolabs)及25nM之dNTP進行該PCR反 應，共24次循環（於94t下費時1分鐘，於60°C下費時1分 鐘，於72°C下費時1分鐘）。將該等PCR產物選殖入pED6載 體内，並藉DNA篩選而辨識該等插入物之序列，使用該純 5 化小鼠MJ2-7抗體之N-末端蛋白質序列分析以證實該等經 轉譯序列相當於所觀測蛋白質序列。 可以與NHP IL-13交互作用並具有表示可以與人類 IL-13交互作用之特性之小鼠單株抗體MJ2-7的代表性核苷 酸及胺基酸序列如下： 10 可將該重鏈可變結構域編碼之代表性核苷酸序列包括：
GAG GTTCAGCTGC AGCAGTCTGG GGCAGAGCTT GTGAAGCCAG
GGGCCTCAGT CAAGTTGTCC TGCACAGGTT CTGGCTTCAA CATTAAAGAC
ACCTATATAC ACTGGGTGAA GCAGAGGCCT GAACAGGGCC TGGAGTGGAT TGGAAGGATT GATCCTGCGA ATGATAATAT TAAATATGAC CCGAAGTTCC 15
AGGGCAAGGC CACTATAACA GCAGACACAT CCTCCAACAC AGCCTACCTA CAGCTCAACA GCCTGACATC TGAGGACACT GCCGTCTATT ACTGTGCTAG
ATCTGAGGAA AATTGGTACG ACTTTTTTGA CTACTGGGGC CAAGGCACCA CTCTCACAGTCTCCTCA(序歹丨J 辨識編號：129) 適於該重鏈可變結構域之代表性胺基酸序列包括： 20 EVOLOQSGAELVKPGASVKLSCTGSGFNIKDTYIHWVKORPFOrT LEWIGRIDPANDNIKYDPKFOGKATITADTSSNTAYLOLNSTTSRD TAVYYCARSEENWYDFFDYWGOGTTLTVSS(庠列辨謐編號.:130) 在CDRs下面劃線。該可變結構域可選擇在前導序列之 後，例如MKCSWVIFFLMAVVTGVNS(序列辨識編號：131)。 159 200848429 可將該輕鏈可變結構域編碼之代表性核苔酸序列包括： GAT GTTTTGATGA CCCAAACTCC ACTCTCCCTG CCTGTCAGTC TTGGAGATCA AGCCTCCATC TCTTGCAGGT CTAGTCAGAG CATTGTACAT AGTAATGGAA ACACCTATTT AGAATGGTAC CTGCAGAAAC CAGGCCAGTC 5 TCCAAAGCTC CTGATCTACA AAGTTTCCAA CCGATTTTCT GGGGTCCCAG ACAGGTTCAG TGGCAGTGGA TCAGGGACAG ATTTCACACT CAAGATTAGC AGAGTGGAGG CTGAGGATCT GGGAGTTTAT TACTGCTTTC AAGGTTCACA TATTCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAA(序列辨識編號：132) 適於該輕鏈可變結構域之代表性胺基酸序列包括：
10 DVLMTQTPLSLPVSLGDOASISCRSSOSIVHSNGNTYLEWYL QKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDL GVYYCFOGSHIPYTFGGGTKLEIK(庠列辨镞編號:133), 在CDRs下面劃線。該胺基酸序列可選擇性在前導序列 之後，例如MKLPVRLLVLMFWIPASSS(序列辨識編號： 15 134)。文中該名詞“MJ2-7”可以與該名詞“mAb7.1,l”變換使用。 實例2 : C65抗體 可以與NHP IL-13交互作用且具有表示可以與人類 IL-13交互作用之特性之小鼠單株抗體C65的代表性核苷酸 及胺基酸序列如下： 20 適於該重鏈可變結構域之代表性核酸序列包括：
1 ATGGCTGTCC TGGCATTACT CTTCTGCCTG GTAACATTCC CAAGCTGTAT
51 CCTTTCCCAG GTGCAGCTGA AGGAGTCAGG ACCTGGCCTG GTGGCGCCCT 101 CACAGAGCCT GTCCATCACA TGCACCGTCT CAGGGTTCTC ATTAACCGGC 151 TATGGTGTAA ACTGGGTTCG CCAGCCTCCA GGAAAGGGTC TGGAGTGGCT 160 200848429 201 GGGAATAATT TGGGGTGATG GAAGCACAGA CTATAATTCA GCTCTCAAAT 251 CCAGACTGAT CATCAACAAG GACAACTCCA AGAGCCAAGT TTTCTTAAAA 301 ATGAACAGTC TGCAAACTGA TGACACAGCC AGGTACTTCT GTGCCAGAGA 351 TAAGACTTTT TACTACGATG GTTTCTACAG GGGCAGGATG GACTACTGGG 5 401 GTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCA(序列辨識編號：135) 適於該重鏈可變結構域之代表性胺基酸序列包括：
QVQLKESGPGL VAPSQSLSIT CTVSGFSLTG YGVNWVRQPP GKGLEWLGII WGDGSTDYNS ALKSRLIINK DNSKSQVFLK /
4 MNSLQTDDTA RYFCARDKTF YYDGFYRGRM DYWGOGTSVT 10 VSS(序列辨識編號：136) 在CDRs下面劃線。該胺基酸序列可選擇性在前導序列 之後，例如MAVLALLFCL VTFPSCILS(序列辨識編號：137)。 1 可將該輕鏈可變結構域編碼之代表性核苔酸序列包括： ATGAACACGA GGGCCCCTGC TGAGTTCCTT GGGTTCCTGT TGCTCTGGTT 15 51 TTTAGGTGCC AGATGTGATG TCCAGATGAT TCAGTCTCCA TCCTCCCTGT 101 CTGCATCTTT GGGAGACATT GTCACCATGA CTTGCCAGGC AAGTCAGGGC 151 ACTAGCATTA ATTTAAACTG GTTTCAGCAA AAACCAGGGA AAGCTCCTAA 201 GCTCCTGATC TTTGGTGCAA GCAACTTGGA AGATGGGGTC CCATCAAGGT 251 TCAGTGGCAG TAGATATGGG ACAAATTTCA CTCTCACCAT CAGCAGCCTG - 20 301 GAGGATGAAG ATATGGCAAC TTATTTCTGT CTACAGCATA GTTATCTCCC . 351 GTGGACGTTC GGTGGCGGCACCAAACTGGAAATCAAA(序列辨識編號：138) 適於該輕鏈可變結構域之代表性胺基酸序列包括··
DVQMIQSP SSLSASLGDI VTMTCOASOG TSINLNWFOO KPGKAPKLLI FGASNLEDGV PSRFSGSRYG TNFTLTISSL 161 200848429 EDEDMATYFC LDHSYLPWTF GGGTKLEIia庠列辨織編號:139) 在CDRs下面劃線。該胺基酸序列可選擇性在前導序列 之後，例如MNTRAPAEFLGFLLLWFLGARC(序列辨識編 號：140)。 5 實施3 : Fc序列 於序列辨識編號：128之位置#1的Ser代表第一代表性 全長抗體編號圖表中之胺基酸殘基#119，其中該Ser係在重 鏈可變結構域之殘基#118之後。在該第一代表性全長抗體 編號圖表中，已突變之胺基酸係位於編號234及237，且相 10 當於序列辨識編號·· 128之位置116及119。因此，根據該第 一代表性全長抗體編號圖表，以下序列代表具有兩突變體 (L23A4及G237A)之Fc結構域。 小家鼠(序列辨識編號：128) 以下為另一代表性人類Fc結構域序列： 15 STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALT SGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTK VDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRT PEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNST YRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPR 20 EPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPEN NYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHN HYTQKSLSLSPGK(序列辨識編號：141) 可用以減少效應物機能之其它代表性替代物包括 L234A ; L235A)、（L235A ; G237A)、及N297A。 162 200848429 實例土丄Jki13及異位彳4底轰 在用於STAT6石粦酸化反應之檢定法中評估m如抑制 人類夫生的1L·13之生物活性的能力（以1毫微克/毫升之濃 度進行）。在本檢定法中，MJ2-7可抑制人類天生的江_13之 5活性的IC5G為約θ·293ηΜ。在本檢定法中具有鼠科動物 Mj2刀之重鏈及人源化輕鏈之抗體可抑制未作實驗對象之 人類，13的活性之1C50為約〇·554ηΜ。 在用於CD23表現性之檢定法中評估]^;2_7抑制非人類 靈長目動物IL-13之能力（以丨毫微克/毫升之濃度進行）。在 10 本檢定法中，該MJ2_7可抑制非人類靈長目動物IL-13之活 性的lC5〇為約〇·242ηΜ。具有鼠科動物而2-7之重鏈及人源 化輕鍵的抗體可抑制非人類靈長目動物IL-13的活性之 IC50為約 〇·3〇8ηΜ ° :小鼠MJ2-7抗體之核苷酸及胺某醢庠列 15 玎將該重鏈可變區域編碼之核苷酸序列（具有一可視 需要選用之前導序列）如下：
1 ATGAAATGCA GCTGGGTTAT CTTCTTCCTG ATGGCAGTGG TTACAGGGGT 51 CAATTCAGAG GTTCAGCTGC AGCAGTCTGG GGCAGAGCTT GTGAAGCCAG 101 GGGCCTCAGT CAAGTTGTCC TGCACAGGTT CTGGCTTCAA CATTAAAGAC 20 151 ACCTATATAC ACTGGGTGAA GCAGAGGCCT GAACAGGGCC TGGAGTGGAT
201 TGGAAGGATT GATCCTGCGA ATGATAATAT TAAATATGAC CCGAAGTTCC 251 AGGGCAAGGC CACTATAACA GCAGACACAT CCTCCAACAC AGCCTACCTA 301 CAGCTCAACA GCCTGACATC TGAGGACACT GCCGTCTATT ACTGTGCTAG 351 ATCTGAGGAA AATTGGTACG ACTTTTTTGA CTACTGGGGC CAAGGCACCA 163 200848429 401 CTCTCACAGT CTCCTCA(序歹|J 辨識編號：142) 具有一可視需要選用之前導序列（下面有劃線）的該重 鏈可變區域之胺基酸序列如下：
1 MKCSWVIFFL MAVVTGVNSE VQLQQSGAEL VKPGASVKLS CTGSGFNIKD 5 51 TYIHWVKQRP EQGLEWIGRI DPANDNIKYD PKFQGKATIT ADTSSNTAYL 101 QLNSLTSEDT AVYYCARSEE NWYDFFDYWG QGTTLTVSS (序列辨識編號：143) 可將該輕鏈可變區域編碼之核苷酸序列如下：
1 ATGAAGTTGC CTGTTAGGCT GTTGGTGCTG ATGTTCTGGA TTCCTGCTTC 1〇 51 CAGCAGTGAT GTTTTGATGA CCCAAACTCC ACTCTCCCTG CCTGTCAGTC
101 TTGGAGATCA AGCCTCCATC TCTTGCAGGT CTAGTCAGAG CATTGTACAT 151 AGTAATGGAA ACACCTATTT AGAATGGTAC CTGCAGAAAC CAGGCCAGTC 201 TCCAAAGCTC CTGATCTACA AAGTTTCCAA CCGATTTTCT GGGGTCCCAG 251 ACAGGTTCAG TGGCAGTGGA TCAGGGACAG ATTTCACACT CAAGATTAGC 15 301 AGAGTGGAGG CTGAGGATCT GGGAGTTTAT TACTGCTTTC AAGGTTCACA 351 TATTCCGTAC ACGTTCGGAG GGGGGACCAA GCTGGAAATA AAA (序列辨識編號：144) 具有一可視需要選用之前導序列（下面有劃線）的該輕 鏈可變區域之胺基酸序列如下：
20 1 MKLPVRLLVL MFWIPASSSD VLMTQTPLSL PVSLGDQASI SCRSSQSIVH 51 SNGNTYLEWY LQKPGQSPKL LIYKVSNRFS GVPDRFSGSG SGTDFTLKIS 101 RVEAEDLGVY YCFQGSHIPY TFGGGTKLEI K (序歹'J 辨識編號：145) 實例6 :該MJ2-7抗體之代表性第一人源化變體的核菩酸及 胺基酸序列 164 200848429 人源化抗體變體1(V1)係基於最接近的人類胚源細胞 純系。hMJ2-7 VI重鏈可變區域((hMJ2-7 VH VI)之核苷酸 系歹彳（具有可將一視需要選用之前導序列編碼的序列）如下： 1 ATGGATTGGA CCTGGCGCAT CCTGTTCCTG GTGGCCGCTG CCACCGGCGC 51 TCACTCTCAG GTGCAGCTGG TGCAGTCTGG CGCCGAGGTG AAGAAGCCTG 101 GCGCTTCCGT GAAGGTGTCC TGTAAGGCCT CCGGCTTCAA CATCAAGGAC 151 ACCTACATCC ACTGGGTGCG GCAGGCTCCC GGCCAGCGGC TGGAGTGGAT 201 GGGCCGGATC GATCCTGCCA ACGACAACAT CAAGTACGAC CCCAAGTTTC 251 AGGGCCGCGT GACCATCACC CGCGATACCT CCGCTTCTAC CGCCTACATG 301 GAGCTGTCTA GCCTGCGGAG CGAGGATACC GCCGTGTACT ACTGCGCCCG 351 CTCCGAGGAG AACTGGTACG ACTTCTTCGA CTACTGGGGC CAGGGCACCC 401 TGGTGACCGT GTCCTCT(序列辨識編號：146) 10 15 \ 該重鏈可變區域(hMJ 2-7 VI)之胺基酸序列係基於移 植至DP-25、VH-IL-13、1-03之CDR。具有一可視需要選用 之前導序（第一下面劃線區；基於後續下面劃線區中所示之 AbM定義的CDRs)的胺基酸序列如下： 1 MDWTWRILFL VAAATGAHS - Q VQLVQSGAEV KKPGASVKVS CKASGFNIKD 51 TYIHWVRQAP GQRLEWMGR1 DPANDNIKYD PKFOGRVTIT RDTSASTAYM 101 ELSSLRSEDT AVYYCARSEE NWYDFFDYWG QGTLVTVSSG ESCR (序列辨識編號：147) 該hMJ 2-7 VI輕鏈可變區（hMJ 2-7 VL VI)之核苷酸序 列（具有可將一視需要選用之前導序列編碼的序列）如下·
1 ATGCGGCTGC CCGCTCAGCT GCTGGGCCTG CTGATGCTGT GGGTGCCCGG 51 CTCTTCCGGC GACGTGGTGA TGACCCAGTC CCCTCTGTCT CTGCCCGTGA 165 200848429 101 CCCTGGGCCA GCCCGCTTCT ATCTCTTGCC GGTCCTCCCA GTCCATCGTG 151 CACTCCAACG GCAACACCTA CCTGGAGTGG TTTCAGCAGA GACCCGGCCA 201 GTCTCCTCGG CGGCTGATCT ACAAGGTGTC CAACCGCTTT TCCGGCGTGC 251 CCGATCGGTT CTCCGGCAGC GGCTCCGGCA CCGATTTCAC CCTGAAGATC 301 AGCCGCGTGG AGGCCGAGGA TGTGGGCGTG TACTACTGCT TCCAGGGCTC 351 CCACATCCCT TACACCTTTG GCGGCGGAAC CAAGGTGGAG ATCAAG (序列辨識編號：148) 本變體係基於CDR移植至DPK18, VkII。該hMJ 2-7 VI 輕鏈可變區(hMJ 2-7 VL VI)之胺基酸序列（具有作為第一 10 下面劃線區之可視需要選用的前導序列；CDRs係基於後續 下面劃線區中之AbM定義）如下： 1 MRLPAOLLGL LMLWVPGSSG -DVVMTQSPLS LPVTLGQPAS ISCRSSOSIV 51 HSNGNTYLEW FQQRPGQSPR RLIYKVSNRF SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI 101 SRVEAEDVGV YYCFOGSHIP YTFGGGTKVE IK(序列辨識編號:149) 15 f例7 :該MJ2-7抗體之代表性第二人源化變體的核菩酸及 整基酸序列 以下重鏈可變區係基於CDR移植至DP-54、VH-3、 3-07。該hMJ 2-7變體2(V2)重鏈可變區(hMJ 2-7 VH V2)之 核苷酸序列（具有可將一視需要選用之前導序列編碼的序 20 列）如下：
1 ATGGAGCTGG GCCTGTCTTG GGTGTTCCTG GTGGCTATCC TGGAGGGCGT 51 GCAGTGCGAG GTGCAGCTGG TGGAGTCTGG CGGCGGACTG GTGCAGCCTG 101 GCGGCTCTCT GCGGCTGTCT TGCGCCGCTT CCGGCTTCAA CATCAAGGAC 151 ACCTACATCC ACTGGGTGCG GCAGGCTCCC GGCAAGGGCC TGGAGTGGGT 166 200848429 201 GGCCCGGATC GATCCTGCCA ACGACAACAT CAAGTACGAC CCCAAGTTCC 251 AGGGCCGGTT CACCATCTCT CGCGACAACG CCAAGAACTC CCTGTACCTC 301 CAGATGAACT CTCTGCGCGC CGAGGATACC GCCGTGTACT ACTGCGCCCG 351 GAGCGAGGAG AACTGGTACG ACTTCTTCGA CTACTGGGGC CAGGGCACCC 5 401 TGGTGACCGTGTCCTCT(序列辨識編號：150) 具有一可視需要選用之前導序列（第一下面劃線區； CDRs係基於後續下面劃線區中所示之AbM定義）的該hMJ 2-7 V2重鏈可變區（hMJ 2-7 VH V2)之胺基酸序列如下： s 1 MELGLSWVFL VAILEGVOC- E VQLVESGGGL VOPGGSLRLS CAASGFNIKD 10 51 TYIHWVROAP GKGLEWVARI DPANDNIKYD PKFOGRFTIS RDNAKNSLYL 101 OMNSLRAEDT AVYYCARSEE NWYDFFDYWG OGTLVTVSSrSEO TD Ν0:15Π 該hMJ 2-7 VH V2輕鏈可變區係基於CDR移植至DPK9，
VkI、02。該hMJ 2-7 V2輕鏈可變區（hMJ 2-7 VL V2)之核苷 酸序列（具有可將一視需要選用之前導序列編碼之序列)如下： 15 1 ATGGATATGC GCGTGCCCGC TCAGCTGCTG GGCCTGCTGC TGCTGTGGCT 51 GCGCGGAGCC CGCTGCGATA TCCAGATGAC CCAGTCCCCT TCTTCTCTGT 101 CCGCCTCTGT GGGCGATCGC GTGACCATCA CCTGTCGGTC CTCCCAGTCC 151 ATCGTGCACT CCAACGGCAA CACCTACCTG GAGTGGTATC AGCAGAAGCC 201 CGGCAAGGCC CCTAAGCTGC TGATCTACAA GGTGTCCAAC CGCTTTTCCG ' 20 251 GCGTGCCTTC TCGGTTCTCC GGCTCCGGCT CCGGCACCGA TTTCACCCTG . 301 ACCATCTCCT CCCTCCAGCC CGAGGATTTC GCCACCTACT ACTGCTTCCA 351 GGGCTCCCAC ATCCCTTACA CCTTTGGCGG CGGAACCAAG GTGGAGATCA 401 AGCGT(序列辨識編號：152) 該hMJ 2-7 VH V2輕鏈可變區（hMJ 2_7 VL V2)之輕鏈 167 200848429 可變區的胺基酸序列（具有下面有劃線之視需要選用的前導 肽且CDRs係基於後續下面劃線區中所示之AbM定義）如下： 1 MDMRVPAOLL GLLLLWLRGA RC -DIQMTQSP SSLSASVGDR VTITCRSSOS 51 IVHSNGNTYL EWYOOKPGKA PKLLIYKVSN RFSGVPSRFS GSGSGTDFTL 101 TISSLQPEDF ATYYCmS^illEXXFGGGTK VEIKR(序列辨識編號：153) 製備MJ2-7 V2重鏈可變區之另外人源化變體。這些變 體包括於特定框架結構位置具有鼠科動物胺基酸之回復突 變。 10 15 20 可將該具有回復突變V48I、A29G之重鏈可變區“變體 2.1”或V2.1編碼的核苷酸序列如下： 1 GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC 51 TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA 101 TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GATCGGCCGG 151 ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCCG 201 GTTCACCATC TCTCGCGACA ACGCCAAGAA CTCCCTGTAC CTCCAGATGA 251 ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG 301 GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC 351 CGTGTCCTCT(序歹丨J辨識編號：154) 該V2.1之重鏈可變區的胺基酸序列（CDRs係基於後續 下面劃線區中所示之AbM定義）如下： 1 EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFNIK DTYIHWVROA PGKGLEWIGR 51 IDPANDNIKY DPKFQGRFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCARSE 101 ENWYDFFDYW GOGTLVTVSS(庠列辨識總號:155) 可將具有該等回復突變（R67K ; F68A)之重鏈可變區 168 200848429 V2.2編碼之核苷酸序列如下： 1 GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC 51 TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA 101 TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GGTGGCCCGG _ 5 151 ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCAA 201 GGCCACCATC TCTCGCGACA ACGCCAAGAA CTCCCTGTAC CTCCAGATGA 251 ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG r 301 GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC 351 CGTGTCCTCT(序歹ij辨識編號：156) 10 該V2.2之重鏈可變區（CDRs係基於後續下面劃線區中 所示之AbM定義）的胺基酸序列如下 1 EVOLVESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFNIK DTYIHWVROA PGKGLEWVAR 51 IDPANDNIKY DPKFOGKATI SRDNAKNSLY LOMNSLRAED TAVYYCARSE 102 ENWYDFFDYWGOGTLVTVSSi庠列辨謐編號.：157) 15 可將具有該等回復突變(R72 A)之重鏈可變區V2 · 3編碼 的核苔酸序列如下： 1 GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC • 51 TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA . 101 TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GGTGGCCCGG 20 151 ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCCG 201 GTTCACCATC TCTGCCGACA ACGCCAAGAA CTCCCTGTAC CTCCAGATGA 251 ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG 301 GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC 351 CGTGTCCTCT(序列辨識編號：158) 169 200848429 該V2.3之重鏈可變區（CDRs係基於後續下面劃線區中 所示之AbM定義）的胺基酸序列如下： 1 FVOT VFSrTGrT T VOPGGSLRL SCAASGFNIK DTYIHWVROA PGKGLEWVAR 51 IDPANDNIKY DPKFOGRFTI SADNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCARSE 5 ιοί. .ENWYDFFDYWGOGTLVTVSS(序列辨識編號：159) 可將具有該等回復突變(A49G)之重鏈可變區V2.4編碼 的核苷酸序列如下： 1 GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC 51 TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA 10 ιοί TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GGTGGGCCGG 151 ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCCG 201 GTTCACCATC TCTCGCGACA ACGCCAAGAA CTCCCTGTAC CTCCAGATGA 251 ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG 301 GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC 15 351 CGTGTCCTCT(序歹丨J辨識編號：160) 該V2.4之重鏈可變區（CDRs係基於後續下面劃線區中 所示之AbM定義）的胺基酸序列如下： 1 EVOLVESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFNIK DTYIHWVROA PGKGLEWVGR 51 IDPANDNIKY DPKFOCwRFTI SRDNAKNSLY LOMNSLRAED TAVYYCARSE 20 1〇4 ENWYDFFDYWGOGTLVTVSSi庠列辨謐編號：16Π 可將具有該等回復突變(R67K; F68A; R72A)之重鏈可 變區V2.5編碼的核苷酸序列如下：
1 GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC 51 TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA 170 200848429 101 TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GGTGGCCCGG 151 ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCAA 201 GGCCACCATC TCTGCCGACA ACGCCAAGAA CTCCCTGTAC CTCCAGATGA 251 ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG 5 301 GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC - 352 CGTGTCCTCT(序歹丨J辨識編號：162) 該V2.5之重鏈可變區（CDRs係基於後續下面劃線區中 所示之AbM定義）之胺基酸序列如下：
1 EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFNIK DTYIHWVRQA PGKGLEWVAR 10 51 IDPANDNIKY DPKFOGKATI SADNAKNSLY LOMNSLRAED TAVYYCARSE 105 ENWYDFFDYWGOGTLVTVSS(庠列辨謐編號：1631 可將具有該等回復突變(V48I ; A49G ; R72A)之重鏈可 變區V2.6的核苷酸序列如下： 1 GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC 15 51 TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA 101 / TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GATCGGCCGG 151 ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCCG 201 GTTCACCATC TCTGCCGACA ACGCCAAGAA CTCCCTGTAC CTCCAGATGA 251 ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG * 20 3〇1 GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC - 351 CGTGTCCTCT(序列辨識編號：164) 該V2.6之重鏈可變區（CDRs係基於後續下面劃線區中 所不之AbM定義）的胺基酸序列如下：
1 EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFNIK DTYIHWVRQA PGKGLEWIGR 171 200848429 51 IDPANDNIKY DPKFOGRFTI SADNAKNSLY LOMNSLRAED TAVYYCARSE 106 ENWYDFFDYWGOGTLVTVSSi庠列辨销.編號：165) 可將具有該等回復突變（A49G ; R72A)之重鏈可變區 V2.7編碼的核苷酸序列如下： 5 1 GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC 51 TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA 101 TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GGTGGGCCGG 151 ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCCG 201 GTTCACCATC TCTGCCGACA ACGCCAAGAA CTCCCTGTAC CTCCAGATGA 10 251 ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG 301 GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC 351 CGTGTCCTCT(序歹丨J辨識編號：166) 該V2.7之重鏈可變區（CDRs係基於後續下面劃線區中 所示之AbM定義）的胺基酸序列如下： 15 1 EVOLVESGGG LVOPGGSLRL SCAASGFNIK DTYIHWVROA PGKGLEWVGR 51 IDPANDNIKY DPKFOGRFTI SADNAKNSLY LOMNSLRAED TAVYYCARSE 107 ENWYDFFDYWGOGTLVTVSSi庠列辨識編號：167) 可將具有該等回復突變（L79A)之重鏈可變區V2.8編碼 的核苷酸序列如下：
20 1 GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC 51 TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA 101 TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GGTGGCCCGG 151 ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCCG 201 GTTCACCATC TCTCGCGACA ACGCCAAGAA CTCCGCCTAC CTCCAGATGA 172 200848429 251 ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG 301 GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC 351 CGTGTCCTCT(序歹ij 辨識編號：168) 該V2.8之重鏈可變區（CDRs係基於後續下面劃線區中 所示之AbM定義）的胺基酸序列如下：
1 EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFNIK DTYIHWVRQA PGKGLEWVAR 51 IDPANDNIKY DPKFOGRFTT SRDNAKNSAY LQMNSLRAED TAVYYCARSE 108 ENWYDFFDYW GOGTLVTVSSi庠列辨識編號:169) 10 15 \ 20 可將具有該等回復突變（A49G; R72A; L79A)之重鏈可 變區V2.10編碼的核苷酸序列如下： 1 GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC 51 TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA 101 TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GGTGGGCCGG 151 ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCCG 201 GTTCACCATC TCTGCCGACA ACGCCAAGAA CTCCGCCTAC CTCCAGATGA 251 ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG 301 GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC 351 CGTGTCCTCT(序歹丨J辨識編號：170) 該V2.10之重鏈可變區（CDRs係基於後續下面劃線區中 所示之AbM定義）的胺基酸序列如下：
1 EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFNIK DTYIHWVRQA PGKGLEWVGR 51 IDPANDNIKY DPKFOGRFTT SADNAKNSAY LQMNSLRAED TAVYYCARSE 109 ENWYDFFDYW GOGTLVTVSSi庠列辨謐編號:171) 可將具有該等回復突變（V48I ; A49G ; R72A ; L79A) 173 200848429 之重鏈可變區V2.ll編碼竹核苔酸序列如下： 1 GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC 51 TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA 101 TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GATCGGCCGG 5 151 ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCCG 201 GTTCACCATC TCTGCCGACA ACGCCAAGAA CTCCGCCTAC CTCCAGATGA 251 ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG 301 GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC 351 CGTGTCCTCT(序列辨識編號：172) 10 該V2· 11之重鏈可變區（CDRs係基於後續下面劃線區中 所示之AbM定義）的胺基酸序列如下： 1 EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFNIK DTYIHWVROA PGKGLEWIGR 51 IDPANDNIKY DPKFOGRFTT SADNAKNSAY LOMNSLRAED TAVYYCARSE 110 ENWYDFFDYWGOGTLVTVSSi庠列辨謐編號：173) 15 可將具有該等回復突變(V48I; A49G; R72A)之重鏈可 變區V2.16編碼的核苷酸序列如下： 1 GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC 51 TCTGCGGCTG TCTTGCACCG GCTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA 101 TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GATCGGCCGG 20 151 ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCCG 201 GTTCACCATC TCTGCCGACA ACGCCAAGAA CTCCCTGTAC CTCCAGATGA 251 ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG 301 GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC 351 CGTGTCCTCT(序歹丨J辨識編號：174) 174 200848429 該V2.16之重鏈可變區（CDRs係基於後續下面劃線區中 所示之AbM定義）的胺基酸序列如下： 1 EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCTGSGFNIK DTYIHWVRQA PGKGLEWIGR 51 IDPANDNIKY DPKFOGRFTI SADNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCARSE. 5 111 ENWYDFFDYW GOGTLVTVSS(序列辨識編號：175) 以下為具有經突變之CH2結構域的人源化MH2-7 V2.ll IgGl之胺基酸序列： EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGL EWIGRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISADNAKNSAYLQMNSLRAED 10 TAVYYCARSEENWYDFFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSS KSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS GLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDK THTCPPCPAPEALGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSH EDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQD 15 WLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREE MTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDG SFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (序列辨識編號：176) 該可變結構域位於胺基酸1-120 ; CH1位於121-218 ;鉸 20 鏈位於219-233 ; CH2位於234-343 ;而CH3位於344-450。該
輕鏈包括具有可變結構域位於1-133之序列。 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQSIVHSNGNTYLEWYQQKPG KAPKLLIYKVSNRFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC FQGSHIPYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCL 175 200848429 LNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLT LSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(序列辨識編號：177) 實例8 : MJ2-7之代表性蠻體的機能性檢定 在用於IL-13活性之檢定法中，我們評估該MJ2-7抗體 5 及人源化變體抑制人類IL-13之能力。 STST6磷酸化檢定 使HT-29人類大腸上皮細胞(ATCC)以黏連單層形式在 含10%FBS、Pen、Strep、麩醢胺酸、及碳酸氫鈉之McCoy，s 5A培養基内生長。為了進行檢定，使用胰蛋白酶自燒瓶取 10 出該等細胞，在新培養基内進行清洗並送入12x75毫米聚苯 乙烯試管内。以範圍100-0.01毫微克/毫升之濃度添加重組 型人類IL-13(R&D Systems，Inc·)。為了進行測試抗體抑制 該IL-13反應之能力的檢定，添加1毫微克/毫升重組型人類 IL-13及範圍自500-0.4毫微克/毫升之抗體稀釋液。在37°C水 15 浴中培育細胞，費時30-60分鐘，然後在含1% BSA之冰冷 PBS内清洗。藉於37°C下在1%聚曱醛之PBS溶液内培育15 分鐘而固定細胞，然後在含1%BSA之PBS内清洗。為了滲 透該等核，於-20°C下在絕對甲醇内培育細胞，費時一夜。 在含1% BSA之PBS内清洗該等細胞，然後經STAT6之經 20 ALEXA3 Fluor 488標記的抗體（BD Biosciences)染色。以 FACSCAN3 及 CELLQUEST3 軟體（BD Biosciences)分析螢 光。 CD23對人類單核細胞之誘導作用 藉在HISTOPAQUE® (Sigma)上進行層化而自人類周邊 176 200848429 血分離單核細胞。在含10%熱失活FCS、50單位/毫升青黴 素、50毫克/毫升鏈黴素及2mM L-麵醯胺酸之RPMI内清洗 細胞，並在48井組織培養平板(Costar/Corning)内接種。以 範圍自100-0.01毫微克/毫升之稀釋濃度添加重組型人類 5 IL-13(R&D Systems，Inc.)。為了進行測試抗體抑制該IL-13 反應之能力的檢定。添加1毫微克/毫升重組型人類IL-13及 範圍自500_0.4毫微克/微升之抗體稀釋液。於37t下在5% C02恆溫箱内培育細胞，費時一夜。隔天，使用非酶催性細 胞解離溶液(Sigma)自各井採集細胞，然後在含1% BSA之冰 10 冷PBS内清洗。使用人類CD23之經藻紅素(PE)標記的抗體 (BD Biosciences，San Diego，CA)、及人類 CD1 lb 之經 Cy-Chrome標記之抗體（BD Biosciences)培育細胞。根據 CD1 lb高前向及側散佈、與表現性控單核細胞。使用 FACSCANS (Biosciences)，藉流動細胞計婁丈法而涓4定單核 15 細胞上之CD23表現性並使用CELLQUEST3軟體（BD Biosciences)分析cd23+細胞百分比。 TF-1細胞增生 TF-1細胞為需要介百素3(IL-13)或適於其長期生長之 粒性細胞/巨噬細胞菌落刺激因子（GM-CSF)的因子依存性 20 人類造血細胞株。TF-1細胞亦可回應各種其它細胞素，其 包含介百素13(IL-13)。在含10%熱失活FCS、50單位/毫升 青黴素、50毫克/毫升鏈黴素、2 mM L-麩醯胺酸、及5毫微 克/¾升重組型人類GM-CSF (R&D Systems)之RPMI培養基 内維持TF-1細胞(ATCC)。檢定前’使細胞缺乏gm-CSF， 177 200848429 費％仪。為了進行檢定，以5000細胞/井之速率，兩次將 TF-1細胞接種在96井平底微量滴定盤(c〇star/c〇rning)内並 經範圍自loo-o.oi毫微克/毫升之人類IL13 (R&D Systems) 制抗。5% C〇2下在37°C恆溫箱内72小時後，使該等細胞經 5 1 TCi/井 Η 胸腺核甘（perkin Elmer/New England Nuclear) 脈衝。再培育一小時，然後在濾墊上使用T〇MTEK3採集器 採集細胞。藉液體閃爍計數而評估3H_胸腺核苷併入。 生腱蛋白製造檢定 以具有補充物之BEGM培養基（Clonetics)維持 10 BEAS_2B人類支氣管上皮細胞(ATCC)。以每井20,000個之 速率將細胞接種在96井平底培養平孤内，費時一夜。在該 指定抗存存在或不存在下，添加含IL-13之新培養基。培育 一夜後，採集上澄清液，並藉ELISA而評估該細胞外基質 組份（生腱蛋白C)之存在。以1微克/毫升人類生腱蛋白（igGl， 15 k; Chemicon International)之鼠科動物單株抗體在PBS中之 溶液塗覆ELISA平板。以含〇.〇5%TWEEN®_20 (PBS-Tween) 之PBS清洗平板並經含1%BSA之PBS阻隔。每隔6分鐘添加 新阻隔溶液，共3次交換。使平板經PBS-Tween清洗3次。添 加細胞上澄清液或人類生腱蛋白標準物（Chemicon 20 International)並於37°C下培育60分鐘。使平板經PBS-Tween 清洗3次。使用生腱蛋白（IgG2a，k ; Biohit)之鼠科動物單株 抗體檢測生鍵蛋白。先後使用小鼠IgG2a之HRP標記抗體及 TMB基質檢測結合性。以0.01N硫酸中止該反應。於450奈 米處讀取吸光度。 178 200848429 可使用HD29人類上皮細胞株以測定STAT6磷酸化反 應。於37°C下在漸增濃度之該試驗抗體存在下以1毫微克/ 毫升人類天生IL-13精製劑培育HT29細胞，費時30分鐘。可 使用以磷酸化STAT6之抗體進行細胞溶解產物的西方墨汁 5 點分析法以檢測經劑依存性IL13-媒介的STAT6之磷酸化反 應。類似地，流動細胞計數分析法可檢測HT29細胞中之磷 酸化STAT6，其中該等HT29細胞係於37°C下經飽和濃度之 IL-13處理，費時30分鐘，固定，滲透化，並經磷酸-STAT6 之八1^乂八顶卩111〇1*488標記之111八13染色。代表性結果係描述 10 在表1中。該V2.ll之抑制活性相當於siL-13Ra2-Fc之抑制活 性。 表1 構造 VH VL 回復突變 VH 表現性 微克/毫升/ COS ; 48小時 天生hIL-13 STAT6檢定 IC50，nM V2.0 V2移植物 無，CDR經移植 8-10 >100 V2.1 V2 V48I; A49G 9-14 2.8 V2.2 V2 R67K; F68A 5-6 >100 V2.3 V2 R72A 8-9 1.67-2.6 V2.4 V2 A49G 10 17.5 V2.5 V2 R67K; F68A; R72A 4-5 1.75 V2.6 V2 V48I; A49G: R72A 11-12 1.074-3.37 V2.7 V2 A49G; R72A 10-11 1.7 V2.ll V2 V48I; A49G: R72A:L79A 24 0.25-0.55 f例9 : IL-13與IL-13RI1間之結合性交互作用部位 15 藉X射線結晶學而研究IL-13、IL-13RI1之細胞外結構 179 200848429 域（序列辨識編號：125之殘基27-342)、及可結合人類 IL-13之抗體之複合體，見，例如16163-〇29〇〇1。在il-13 與IL-13Ra 1之間發現兩實質交互作用點。該iL-13Ra; 1之Ig 結構域1與IL-13間的交互作用可形成可橫跨兩分子之延長 5 召摺板(beta sheet)。IL-13(序列辨識編號·· 124，成熟序列[全 長序列（序列辨識編號：178)])之殘基Thr88[Thrl07]、 Lys89[Lysl08]、Ile90[Ilel09]、及Glu91 [Glul 10]可形成能夠 與該受體(序列辨識編號:125)之殘基Lys76、Lys77、Ile78及 Ala79相互作用之/3股。另外，該IL-13(序列辨識編號： 10 124[序列辨識編號：178])之Met33 [Met52]的側鏈可延伸入 藉這些®比連股之側鏈而產生之疏水性袋狀物内。 與Ig結構域3所進行之交互作用的主要特徵為將 IL-13(序列辨識編號：124[序列辨識編號：178])之疏水性殘 基(Phel07[Phel26])插入該受體IL-13Ra 1之Ig結構域3的疏 15 水性袋狀物内。該IL-13R α 1之疏水性袋狀物係藉殘基 Leu319、Cys257、Arg256、及Cys320(序列辨識編號：125) 之側鏈而形成。與IL-13(序列辨識編號：124[序列辨識編 號：178])之Phel07 [Phel26]進行之交互作用可導致IL-13R α 1(序列辨識編號·· 125)之胺基酸殘基Ile254、Ser255、 20 Arg256、Lys318、Cys320、及Tyr321 與IL-13(序列辨識編號： 124[序列辨識編號：178])之胺基酸殘基Argll[Arg30]、 Glul2[Glu31]、Leul3 [Leu32]、Ilel4[Ile33]、Glul5[Ile34]、 Lysl04[Lysl23]、Lysl05[Lysl24]、Leul06[Leul25]、 Phel07[Phel26]、及Argl08[Arg 127]之廣泛的凡得瓦爾（van 180 200848429 der Waals)互相作用。這些結果證明IL-13結合劑可結合至涉 及與可用以抑制IL-13傳訊之IL-13RI1進行相互作用的 IL-13區域。 f例10 :人源化MJ2-7抗體在COS細胞内之砉規柹 5 為了評估嵌合型抗NHP IL13抗體在哺乳動物重組系統 内之產生，將小鼠MJ2-7抗體之可變區選殖入含人類κ及 IgGl mut恆定區之pED6表現載體内。使猴子腎臟COS-1細 胞在含10%熱失活胎牛血清、ImM麩醯胺酸及0.1毫克/毫升 青黴素/鏈黴素之DME培養基(Gibco)内生長。根據試劑供應 10 商所建議之程序，使用TRANSITIT3-LT1轉移感染劑(Mirus) 進行COS細胞之轉移感染。於37°c在10%CO2存在下，培育 經轉移COS細胞，費時24小時，經無菌PBS清洗，然後在無 血清培養基RlCDl(Gibco)内生長48小時以使抗體在該調理 培養基内分泌並蓄積。藉總人類IgG ELISA使用純化人類 15 匕01/^抗體作為標準物以定量chMJ2-7抗體之表現性。 嵌合型MJ2-7抗體在COS細胞内之產生量明顯低於該 對照物嵌合型抗體（表2)。因此，在該MJ2-7人源化方法中 包括Ab表現性之最佳化。藉將小鼠MJ2-7重鏈CDRs移植至 最具同源性的人類胚源細胞純系（DP25)上而建構該人源化 20 ΜΠ_7 VI，其中該DP25在典型人類抗體反應中具良好表現 性及代表性。將輕鏈之該等CDR選殖入人類胚源細胞純系 DPK18内以產生huMJ 2-7 VI VL。藉將CDRs MJ2-7重鏈可 變區移植至DP54人類胚源細胞基因框架結構及將MJ2-7輕 鏈可變區之CDRs移植至DPK9人類胚源細胞基因框架結構 181 200848429 上而製成該人源化MJ2-7 V2。該DP54純系屬於人類VH III 胚源細胞亞型，且DPK9係選自人類胚源細胞基因之該VkI 亞型，包括VH III及Vk框架結構之抗體分子在大腸桿菌（E. c〇li)系統内具有高表現性程度且在水性溶液内具高安定性 5 及溶解性（見，例如Stefan Ewert等人，J· Mol· Biol· (2003)， 325; 531-553, Adrian Auf 等人，Methods (2004) 34:215-224)。我們已使用DP54/DPK9人類框架結構之組合 以製備幾種重組型抗體，且在暫態COS轉移感染實驗中已 獲得具高表現性之抗體(>20 Tg/毫升）。 10 表2 MAb 表現性，微克/毫升 3D6 10.166 Ch MJ 2-7 pED6(l) 2.44 Ch MJ 2-7pED6(2) 2.035 hl2All V2 1.639 將已移植CDR之MJ2-7 VI及V2 VH與VL基因選殖入兩 哺乳動物表現性載體系統（pED6kappa/pED6 IgG 1 mut及 pSMEN2K/pSMED2IgGlmut)内，並在如上述之暫態COS轉 15 移感染實驗中評估人源化MJ2-7抗體之產生。在第一組實驗 中，係評估huMJ2-7 VL及VH之各種組合對該抗體表現性之 影響（表3)。將MJ2-7 VL框架區改變成DKP9可增加該抗體 產生量8至10倍，然而VL VI (CDR已移植至DPK 18)顯示抗 體產生僅適度增加。當人源化VL與嵌合型MJ2-7 VH及人源 20 化MJ 2-7 VI與V2組合時，可發現該影響。在相同測定條件 182 200848429 下，該經CDR移植之MJ2-7 V2之表現性程度比經CDR移植 之MJ2-7 VI高3倍。 表3 mAb 表現性，微克/毫升 ChMJ 2-7 1.83 hVH Vl/mVL 3.04 hVH Vl/hVL VI 6.34 hVH Vl/hVL V2 15.4 hVH-V2/mVL 0.2 mVH/hVL-V2 18.41 hVH-V2/hVL_Vl 5.13 hVH-V2/hVL-V2 10.79 ί 5 使用在該等重鏈可變區内含有回復突變之huMJ2_7 V2 進行類似實驗（表4)。就保有小鼠MJ2-7抗體之抗原結合性 及中和性質的huMJ2-7 V2· 11而言，可檢測出最高表現性程 度。將回復突變導至位置48及49(V481及A49G)可增加C0S 細胞内huMJ 2-7 V2抗體之產生’然而該等胺基酸於位置 23、24、67及68之回復突變（A23T ; A24G ; R67K及F68A) 對抗體表現性具有不利影響。 表4 mAb 表現性，微克/毫升 V2 8.27 V2.1 12.1 V2.2 5.29 hi 9.60 VIA 8.20 V2.5 6.05 V2.6 11.3 V2.10 9.84 183 200848429 V2.ll 14.85 V2.16 1.765 實例11 :人源化MJ2-7 v.2 VH之分孑模擬 根據BLAST對Protein Data Bank(PDB)之同源性搜尋， 選擇用於模擬人源化MJ2-7重鏈變體2(MJ2_7 V.2VH)之結 構模板。除了選自該BLAST搜尋信息之兩結構外，另一模 5 板係選自蛋白質結構之機構内資料庫。使用作為模板以下3 種模板結構，及InsightII(Accelrys，San Diego)之同源性模數 以建構MJ2-7v.2VH之模型：1JPS(與人源化FabD3h44複合 之人類組織因子的共結晶結構）、1N8Z(與賀癌平 (Herceptin)Fab複合之人類Her2的共結晶結構)及F13.2(與小 10 鼠抗體Fab片段複合之IL-13)。根據各分子之C α距離矩陣 列以測定1JPS、1Ν8Ζ及F13.2(得自WO05/121177)之結構性 保留區（SCR)並根據對應原子在SCRs内之最低RMS偏差以 疊層置該等模板結構。使該標靶蛋白質MJ2-7 v.2 VH之序列 與該等疊置模板蛋白質之序列對齊並將該等SCR之坐標指 15 定給該標靶蛋白質對應殘基。根據各該SCR中之標靶及模 板間之序列相似度’不同的SCR可使用得自不同模板之坐 標。藉如在同源性模數中所進行之Search Loop或Generate Loop方法而產生適於不包含在該等SCR内之環形區及可變 區的坐標。簡言之，藉比較側接SCR殘基之Ca距離矩陣列 20 與衍生自具有相同側接殘基數及特定長度之插入肽鏈段的 蛋白質結構之預先計算的矩陣列，該Search Loop方法可掃 描能合適地插入於兩SCR之間的號蛋白質結構。在Search Loops並未能產生所欲結果之情況下，使用能重新原子座標 184 200848429 之Generate Loop方法。若該模板及標靶中之胺基酸殘基相 同，則維持和在該模板内一樣的胺基酸側鏈構形。然而， 已進行旋轉異構體之構形搜尋並保留在該模板及標把内並 不相同之殘基的能量上最佳構形。接著進行可產生能於兩 5 SCR間或SCR與可變區之間的接合處導出合適鍵長及鍵角 的分子力學模擬之Splice Repair。最後，使用Steepest Descents演算法使該模型進行能量最小化算法，直到獲得5 千卡/(莫耳埃（m〇l A)或500次循環之最大導數及使用 Conjugate Gradients演算法獲得5千卡/(莫耳埃）或2〇〇〇次循 10 J衣之隶大導數為止。使用ProStat/Struct一Check指令以評估 該模型之品質。 除了所使用模板為1QBL及1QBM(馬抗細胞色素c抗體 FabE8之結晶結構）不同外，藉遵照用於人源MJ2-7 ν·2Η所述 之程序列而建構小鼠MJ2-7VH之分子模型。 15 可藉以下模型而預測CDR-框架結構H-鍵中之電位差： hMJ2-7 v.2VH:G26-hMJ2-7 v.2VH:A24 hMJ2-7 v.2VH:Y109-hMJ2-7 v.2VH:S25 mMJ2-7 VH:D61-mMJ2-7 VH:I48 mMJ2-7 VH:K63-mMJ2-7 VH:E46 20 mMJ2-7 VH:Y109-mMJ2-7 VH:R98
這些差異表示以下可視需要選用之回復突變：A23T、A24G 及 V48I。
根據各該胺基酸之顯著RMS偏差及與其鄰接之胺基殘基的 差異而表示之其它視需要選用之回復突變為：G9A、L115T 185 200848429 及R87T 〇 實例12 : MJ2-7及C65之IL-Π中和活柹 在一系列生物檢定法中測試MJ2-7及C65之IL-13中和 能力。首先在單核細胞CD23表現性檢定法中測試這些抗體 5 中和NHP IL-13之生物活性的能力。在漸增濃度之MJ2-7、 C65或sIL-13RI2-Fc的存在下，以3毫微克/毫升NHPIL-13培 育新分離的人類PBMC，費時一夜。採集細胞，經該單核細 胞專一性標記(CD 11 b)之C YCHROME3 -標記之抗體及CD23 之PE標記的抗體染色。回應IL-13處置，在單核細胞（其係 10 根據CD1 lb之表現性而控制）之表面上進行CD23細胞之上 調。在本檢定法中，MJ2_7、C65、及sIL13RI2-Fc全部皆可 中和NHP IL-13之活性。該MJ2-7及sIL-13RI2-Fc之效力相 同。C65之活性20倍（第2圖）。 在第二生物檢定法中，係在STAT6磷酸化測定法中測 15 試MJ2-7及C65對於人類天生IL-13之中和能力。於37°C在漸 增濃度之MJ2-7、C65或sIL-13RI2-Fc的存在下以0.3毫微克/ 毫升人類天生IL-13培育該HT_29上皮細胞株，費時30分 鐘。使細胞固定，滲透化並經磷酸化STAT6之ALEXA3 Fluor 488_標記之抗體染色。IL_13處置可激發STAT6磷酸化反 20 應。在本檢定法中，MJ2_7、C65、及sIL13Ra2-Fc全部皆可 中和人類天生IL-13之活性（第3圖）。該鼠科動物MJ-27抗體 及人源化形式（V2.ll)之IC50分為為0·48ηΜ及0.52nM。該 MJ2-7 及 sIL-13RI2-Fc之效力大約相同。siL-13Ra2-Fc 之 IC50為0·33ηΜ(第4圖）。C65之活性小於20倍（第5圖）。 186 200848429 在第三生物檢定法中，係在生鍵蛋白產生測定法中測 試MJ2-7中和人類天生IL_13之能力。在漸增濃度之題_7存 在下以3毫微克/毫升人類天生il]3培育人類beas_2b肺上 皮細胞株’ f日守-夜。採集上澄清液並藉elisa而測試該 5細胞外基質蛋白質（生腱蛋白C)之產生（第6關）。題-7抑 制本反應之IC5〇為約O.lnM(第6B圖）。 這些結果證明MJ2-7為NHP IL-13及人類天生IL-13之 有效中和劑。該IL-13之MJ2-7中和能力與對sIL-i3Ra2-Fc 之中和能力相同。MJ1-65亦具有IL-13中和活性，但是比 10 MJ2-7 小於 20 倍。 實_例13 :藉SPR而逡行MJ2-7抗體之決原決宗付宗付 藉標準胺偶合而將sIL· 13Ra2-Fc直接塗覆在CM5晶片 上。注入ΙΟΟηΜ濃度之NHP-IL-13，並藉BIAC0RE3而檢測 其對固定化IL-13RI2_Fc之結合性。再添加ΙΟΟηΜ之抗IL-13 15 抗體，並監測結合性之變化。當與huIL-13RI2複合時，MJ2_7 抗體並未結合至NHP-IL-13，然而正對照物抗IL-13抗體可 以結合至NHP-IL-13(第7圖）。這些結果表示huIL-13RI2及 MJ2-7可結合至NHP IL-13之相同或重疊抗原決定位。 實例14 :測定NHP-IL-13輿人源化MJ2-7 v.2-11抗體間之交 20 互作用的動力速率常數 為了製備生物傳感器表面，使用胺偶合將山羊抗人類 IgG Fc專一性抗體固定在研究級羧基曱基聚葡萄醣晶片 (CM5)上。以0.1M 1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基）碳化二醯亞 胺（EDC)及0.05M N-羥基琥珀醯亞胺（NHS)之混合物活 187 200848429 化該表面。將l〇Tg/毫升濃度之該捕獲抗體注入乙酸鈉緩 衝劑（pH 5.5)内。以1·〇μ乙醇胺（pH 8.0)阻隔殘留活化基 團。作為對照物，使用第一流動細胞作為可校正總體折射 率、基質效應、及非專一結合性之參考表面，以該捕獲分 5 子塗覆第二、第三及第四個流動細胞。 為了進行動力分析，藉注入40T1之1 Tg/毫升溶液而在 該抗IgG抗體表面上捕獲單株抗體hMJ2-7 ν·2-11。使用該基 線與注入完成後約3 〇秒之時間點間的淨差異以代表標靶結 合量。以每分鐘100T1之流率，分子次注入600、200、66.6、 10 22·2、7·4、2.5、0.8、0.27、0.09及OnM濃度之NHP-IL-13 溶液’並記錄以時間為變數之結合物質量（第8圖）。於相同 流率下’在HBS/EP緩衝劑（含l50mM NaQ、3 mM EDTA及 〇·005%(ν/ν)表面活化劑P2〇21〇niM HEPES，pH 7.4)中監 測該解離相，費時5分鐘，繼而注射兩次5T1甘胺酸(pHl.5) 以再產生完全活性捕獲表面。於22.5°C下在HBS/EP緩衝劑 内進行所有動力實驗。使用雙參考法減掉各感應圖之空白 及緩衝劑效應。 使用適用於1 : 1模式之BIAEVALUATION3軟體3.0.2分 ^ 析該動力資料。使用綜合分析自該等感圖之合適區域計算 視解離(kd)及結合(ka)速率常數。藉下式·· Kd=kd/ka而自該 等動力速率常數計算抗體與NHP IL-13間之交互作用的親 和力常數。這些結果表示huMJ2-7 v.2-11分別具有 及8.89x1(T41/s之開-關速率，可得到對 具有43pM親和力之抗體。 188 200848429 列15 :在生物檢定中MJ2-L人潘化中間產物制爷忡 藉STAT6磷酸化反應及生腱蛋白製造生物檢定法而測 試該人源化方法中各種中間產物之抑制活性。使用亞最大 量之NHP IL-13或人類天生IL-13粗製劑以引起生物反廣並 5 測定該反應之半最大抑制作用所需之MJ2-7人源化變體的 濃度。分析可經人類IgGl及κ恆定區表現之、 hMJ2-7 V2及hMJ2-7 V3，顯示變體2保有抗人類天生^-^ 之中和活性。人類天生IL-13生物活性之半最大抑制作用所 需之該變體2人源化抗體的濃度比鼠科動物MJ2-7所需之該 1〇 抗體濃度大110倍。半人源化形式，其中該VI或V2VL係與 鼠科動物MJ2-7 VH組合，之分析證明人類天生IL-13中和活 性之減少並非由於該人源化VL所致，而是由於該VH序列所 致（第10圖）。然而該具有VL VI半人源化MJ2-7抗體僅部份 保有該中和活性，而該具有人源化VLV2之變體的活性如同 15 親代小鼠抗體。因此，將一系列回復突變導入該VI VH序 列内以改善鼠科動物MJ2_7之人類天生IL-13中和活性。 實例16 : MJ2-7可阻斷il-13與IL-13RI1及IL-13RI2之交互作用 MJ2-7對NHP IL-13之C_末端19-mer(其相當於未成熟 蛋白質（序列辨識編號：24)之胺基酸殘基114-132、及成熟 20 蛋白質（序列辨識編號·· 14)之殘基95-113)具專一性。就人 類IL-13而言，可形成該蛋白質之dq；-螺旋結構之一部份的 本區經報告含有可結合至IL_13RI1及IL_13RI2之必要殘 基。人類IL-13突變體之分析已確認該a、C、D-螺旋結構含 有適於該IL-13RI1/IL-4RI傳訊複合體之重要接觸部位 189 200848429 (Thompson and Debinski (1999) J. Biol. Chem. 274: 29944-50)。該D-螺旋結構之丙胺酸掃描致突變已確認 K123、K124、及R127殘基(序列辨識編號：24)為與IL-13RI2 進行交互作用之主因，並確認E110、E128、及L122殘基為 5 適於IL-13RI1之重要接觸部位（Madhankmuar等人(2002) J. Biol· Chem· 277: 43194—205)。藉NMR而測定之人類IL-13 之高解析度溶液結構已預測該等IL-13結合性交互作用係 基於與具已知結構之相關配位體-受體對的相似度。這些 NMR研究已證實該等IL-13A及D-螺旋結構在與IL_13RI1進 10 行重要接觸的重要作用（Eisenmesser等人（2001) J. Mol. Biol· 310:231-241; Moy 等人（2001) J· Mol· Biol. 310:219-230)。已預測MJ2-7結合至位於IL-13之該C-末端， D-螺旋結構内之本抗原決定位可破壞IL-13與IL-13RI1及 IL-13RI2之交互作用。 15 藉 ELISA 而測試 MJ2-7 抑制 NHP IL-13 對 IL-13RI1 及 IL-13RI2之結合性的能力。將人類iL_13RI1_Fc及 IL-13RI2-FC之重組型可溶形式塗覆至ELISA平板上。在漸 增濃度之MJ2-7存在下，添加經FLAG標記之NHP IL-13。結 果顯示MJ2-7可以與這些可溶性受體形式競爭對nhp IL-13 20 之結合性（第11A及11B圖）。其提供藉MJ2-7而中和IL_13生 物活性之基礎。 例17 :有助於_抵原結合性之MJ2-7輕鏈CDRs 為了評估所有3種輕鏈CDR區是否為MJ2-7抗體結合至 NHP IL-13所必需，藉CDR移植而建構MJ2-7 VL之兩另外人 190 200848429 源化變體。該VL變體3係根據人類胚源細胞純系DPK18而設 計，其含有該人類胚源細胞純系之CDR1及CDR2、與得自 小鼠MJ2-7抗體之CDR3(第12圖）。在第二結構體(hMJ2-7 V4) 中，僅MJ2-7抗體之CDR1及CDR2移植至DPK18框架結構 5 上，且CDR3係衍生自不相關之小鼠單株抗體。 藉使hMJ2-7 VH VI與hMJ2-7 VL V3及V4組合而在 COS細胞内製成該人源化MJ2-7 V3及V4。藉直接NHP IL-13 結合ELISA而檢查該等抗體之原結合性。其中不含MJ2-7輕 鏈CDR3之該hMJ2-7 V4可保有結合NHPIL-13之能力，然而 10 在該輕鏈中含有人類胚源細胞CDR1及CDR2之V3並不能結 合至固定化NHP IL-13。這些結果證明MJ2-7抗體輕鏈之 CDR1及CDR2為本抗體之抗原結合性之最可能原因。 hMJ2_7 VL V3之核苷酸系列
1 ATGCGGCTGC CCGCTCAGCT GCTGGGCCTG CTGATGCTGT GGGTGCCCGG 15 51 CTCTTCCGGC GACGTGGTGA TGACCCAGTC CCCTCTGTCT CTGCCCGTGA
101 CCCTGGGCCA GCCCGCTTCT ATCTCTTGCC GGTCCTCCCA GTCCCTGGTG 151 TACTCCGACG GCAACACCTA CCTGAACTGG TTCCAGCAGA GACCCGGCCA 201 GTCTCCTCGG CGGCTGATCT ACAAGGTGTC CAACCGCTTT TCCGGCGTGC 251 CCGATCGGTT CTCCGGCTCC GGCAGCGGCA CCGATTTCAC CCTGAAGATC 20 301 AGCCGCGTGG AGGCCGAGGA TGTGGGCGTG TACTACTGCT TCCAGGGCTC 351 CCACATCCCT TACACCTTTG GCGGCGGAAC CAAGGTGGAG ATCAAG (序列辨識編號：189) hMJ2-7 VL V3之胺基酸系列
MRLPAQLLGLLMLWVPGSSG-DVVMTOSPLSLPVTLGOPASISCRSSOSLVYSDGNTYLNW 191 200848429
FQORPGQSPRRLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHIP YTFGGGTKVEIK(序列辨識編號：190) hMJ2-7 VL V3之苷胺酸系列 GATGTTGTGATGACCCAATCTCCACTCTCCCTGCCTGTCACTCCT 5 GGAGAGCCAGCCTCCATCTCTTGCAGATCTAGTCAGAGCATTGT GCATAGTAATGGAAACACCTACCTGGAATGGTACCTGCAGAAAC CAGGCCAGTCTCCACAGCTCCTGATCTACAAAGTTTCCAACCGA TTTTCTGGGGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGA CAGATTTCACACTCAAGATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATGT 10 GGGAGTTTATTACTGCTTTCAAAGTTCACATGTTCCTCTCACCTT CGGTCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAA(序列辨識編號：191) hMJ2-7 VL \^4之苔胺基酸系列 DVVMTQSPLS LPVTPGEPAS ISCRSSQSIV HSNGNTVI.FW YLQKPGQSPQ LLIYKVSNRF _SGVPDRFSGS GSGTDFTLKISRVEAEDVGV YYCFOSSHVP 15 LXFGQGTKLE IK(序列辨識編號：192) 實例18 ··以獼猴模式進行抗IL-13抗體之中釦任拇 可使用在對豬蛔蟲具天生過敏性之獼猴組織内之抗原 誘發呼吸道炎症的模式測試IL-13結合劑（例如抗比_13抗體) 活體内中和一或多種IL-13相關活化的效力。可使用這些檢 20 定法以確說该結合劑能有效減少經抗原制抗之過敏性動物 的呼吸道嗜伊紅血球增多。在本模式中，對豬蛔蟲抗原過 敏之猴子的制抗可導致以下之一或多種：⑴炎症細胞，例 如嗜伊紅血球流入呼吸道内；（Π)增加的嗜伊紅趨化因子位 準；（iii)蛔蟲專一性嗜鹼細胞組織胺基釋放之增加；及/或(iv) 192 200848429 蛔蟲專一性IgE滴定度增加。 為了測試抗IL-13抗體預防炎症細胞流入的能力，可在 經豬蛔蟲抗原制抗前24小時投與該抗體。在制抗當天，基 線支氣管肺泡灌洗(BAL)試樣可得自左肺。可將豬蛔蟲抗原 5 以支氣管内滴注方式導入右肺内。24小時後，灌洗該右肺， ' 並比較得自經該抗體以靜脈注射方式處置之動物的BAL流 體及得自未經處置之動物的BAL流體。若該抗體可減少呼 , 吸道炎症，則在該未經處置之群組可發現BAL嗜伊紅血球％ 增加，但是在該經抗體處置之群組並未發現此增加。 10 第14A_14D圖描述呼吸道經蛔蟲制抗後24小時，總細胞 數及炎症細胞，例如嗜伊紅血球（第14B圖）、嗜中性白血球 (第14C圖）及巨噬細胞（第14D圖）之百分比增加。與該等基線 值比較，制抗後24小時可發現炎症細胞百分比之統計學上 顯著增加。 15 在經豬細蟲制抗前24小時，對彌猴投與抗IL-13抗體（人 , 源化 MJ2-7v·2·11 及人源化 mAb 13.2v.2)(mAb 13.2及其人源 化形式hmAbl3.2v.2係描述共同指定之PCT公開案WO • 0W123126中，其全文在此併入本案以為參考資料）。以鹽液 ‘ 處置對照組猴子。以靜脈注射方式投與10毫克/公斤之 20 hMJ2·7%2·11、hmAbl3.2v2或不相關的人類匕（IVig)。隔 - 天，自群組猴子之左肺收集得自對照組及經處置猴子之預 制抗BAL試樣(在第15A圖中稱為前對照組“及，，“前Ab”）。藉 將0.75微克豬蛔蟲抗原以氣管内投藥方式導入右肺而處置 該群猴子。制抗後24小時，自對照組及經處置猴子之右肺 193 200848429 收集BAL試樣，並評估細胞浸潤滑物（在第15B圖中分別稱 為“後對照組，，及“後Ab，，。與對照組動物比較，自經抗體處 置之猴子所收集的B A L試樣顯示細胞浸潤滑物之總數在統 計學上顯著減少（第15A圖）。對照組試樣在第15A圖中以圓 5 圈表示，經hmAbl3.2v2-及hMJ2-7v.2_ll_處置之試樣分別以 暗及明三角形表示。hMJ2-7v.2-ll及hmAbl3.2v2在本模式 中顯示類似效力。第15B圖表示描述相對於蛔蟲輸注後之天 數，hMJ2-7v.2-ll或hmAbl3.2v2之濃度的直線圖。發現這 兩種抗體之動力性減少類似。 10 對豬蛔蟲具敏感性之獼猴可以研製抗蛔蟲抗原之
IgE。該IgE可結合至循環性嗜驗細胞上之FcsRI，因此周邊 血液嗜驗細胞經細蟲抗原活體外制抗可誘發組織胺之去粒 化及釋放。重複的抗原接觸可增強嗜鹼細胞之敏化作用， 導致增強的組織胺釋放反應。為了測試樣hMJ2-7v.2-ll及 15 hmAbl3.2v2對1gE-及嗜鹼細胞位準之影響，在蛔蟲制抗後8 週，使如前述已投與hMJ2-7v.2、hmAbl3.2v2、不相關的ig (IVIG)或鹽液之獼猴流血，並藉ELISA而測定蛔蟲專一性 IgE在血漿中之總位準。弟17A圖表示相鄰於得自經ivig或 hMJ2-7v.2-ll處置之動物在制抗後及制抗後8週所獲得之試 20樣的稀釋液，吸光度之變化的直線圖。開式圓圈代表流金 鈾測疋值，填滿之圓圈代表處置後之測定值。相對於所檢 定之所有稀釋液中之制抗前值，在經hMJ2_7v 2-11處置之制 抗後試樣中發現吸光度顯著減少。第17A圖描述表示在經不 相關Ig處置之個別猴子的蛔蟲專性IgE滴定度無變化 194 200848429 (IVIG ;動物2〇-45 ;上面的一組），及在經11]^2-712]1處 置之個別猴子的蛔蟲專一性IgE之滴定度降低（動物 120-434 ;下面的一組)之代表性實例。 經人源化hM J2 - 7 V. 2 -11或hm Ab 13 · 2 v2處置之獼猴顯示 5 在其血清中對蛔蟲具專一性之循環性IgE位準顯著減少（第 17B圖）。就該等處置群組中之任何動物而言，總IgE滴定度 並無顯著變化。第17A圖表示相對於自經IVIG或 hMJ2-7v.2-ll處置之動物在制抗前及後8週所獲得之試樣稀 釋液，吸光度之變化的直線圖。開式圓圈代表流血前之浪j 10 定值；填滿之圓圈代表處置後之測定值。相對於在所有檢 測之稀釋液中之制抗前值，發現經hMJ2-7v.2-ll處置之制抗 後試樣的吸光度顯著減少。該等命名“20-45”及“120-434” 係指獼猴辨別編號。 為了評估抗IL-13抗體對嗜鹼細胞組織胺釋放之影 15 響，於蛔蟲制抗後24小時及8週，使該等動物流血。於37°C 下使全血經蛔蟲抗原制抗，費時30分鐘，並藉 ELISA(Beckman Coulter，Fullerton, CA)而定量進入該上澄 清液内之組織胺。如第18A-18B圖中所示，該等對照組動物 證明特別在抗制抗後8週，經蛔蟲誘發之嗜鹼細胞組織胺釋 20 放量增加(在第18A圖中由鑽石形代表。在第18B圖中由左手 邊之長條代表）。反之，該等經人源化hMJ2-7v.2-ll或 hmAbl3.2v2處置之動物在回應蛔蟲制抗後8週之嗜鹼細胞 敏化反應並無增加（第18A-18B圖）。與制抗前或後24小時比 較，大部份經人源化hMJ2-7v.2-ll或hmAbl3.2v2處置之動 195 200848429 物顯不制抗後8週，嗜鹼細胞組織胺之釋於減少（第i8A圖之 實例）或並無變化。因此，在本模式中，該人源化抗[-13 抗體之單一投藥對修飾組織胺釋放有持續影響。 第19圖描述蛔蟲專一性組織胺釋放與蛔蟲專一性^£ 5位準間之關聯性。與經抗IL-13抗體-或地塞米松(和分處置 之動物（暗紅圓圈）比較，發現對照組試樣（經鹽液-或ivig_ 處置之試樣)(淺藍圓圈）之值較高。在蛔蟲制抗前24小時靜 脈注射人源化抗IL-13抗體（人源，或在蛔蟲 制抗前24小時及30分鐘，兩次肌内注射濃度為1毫克/公斤 10 之地塞米松。制抗後24小時，自右肺收集BAL灌洗物並分 析組織胺釋放及IgE位準。 文中顯示之結果證明如藉BAL試樣中之細胞素位準、 血清中蛔蟲專一性IGE的位準及回應活體外蛔蟲制抗的嗜 鹼細胞組織胺釋放而檢測，以預處置獼猴 15 可相當程度地減少藉豬蛔蟲抗原而誘發之呼吸道炎症。 第20圖為一系列描述經人源化MJ2_7(Hmj2-7V.2-ll)處 置之各該獼猴之血清IL-13位準增加的長條圖。各組中之標 記(例如120-452)相當於該猴子辨識編號。該“前，，試樣在該 抗體投藥前收集。該時間“〇，，係在抗體投藥後24小時，但在 2〇 蛔蟲制抗前收集。用以檢測IL-13位準之該等檢定法可在 hMJ2-7v.2-ll或hmAbl3.2v2抗體存在下檢測IL-13。更明確 地，於4°C下以mAbl3.2在PBS中之0.5微克/毫升溶液塗覆 ELISA平板（MaxiSorp; Nunc，Rochester，NY)，費時一夜。在 含0.05% Tween-20之PBS(PBS-Tween)内清洗平板。添加得 196 200848429 自獼猴之NHP IL-13標準物或血清稀釋液並於室溫下培育2 小時。清洗平板並添加0.3微克/毫升物素化MJl-64(文中稱 為C65抗體）至PBS-Tween内。於室溫下培育平板，費時2小 時，清洗並使用HRP-鍵徽素印蛋白（Southern Biotechnology 5 Associates)及 Sure Blue受質（Kirkegaard and Perry Labs)檢 - 測結合性。除了以0.5微克/毫升MJ2-7塗覆ELISA平板外， ' 遵照相同程序列以進行mAbl3.2存在下之IL-13檢測。 第21圖表示證明於所測試非人類靈長目動物IL-13之 r" 濃度下，得自經抗IL-13抗體處置之獼猴的血清具有殘留 10 IL-13中和能力的數據。第21圖為描述在無血清存在(“無血 清”)下；在得自經鹽液或IVIG·處置之動物之血清(“對照組，，) 的存在下；或在抗體投藥前(“前”)或特定抗體投藥後1-2週 在得自經抗IL-13抗體處置之動物的血清之存在下，於〇、1 或10毫微克/毫升下之非人類類靈長目動物IL-13之STAT6 15 磷酸化活性的長條圖。以1 : 4稀釋濃度測試血清。在本研 究中使用人源化MJ2-7變體(MJ2-7 ν·2-11)。文中揭示用於測 1 定STAT6磷酸化反應之檢定法。 . 第22圖為表示藉於1週時間點下在獼猴血清内之人源 化MJ2-7 (hMJ2-7v.2-ll)而截獲之非人類靈長目動物IL-13 20 的位準與蛔蟲制抗後，在該等BAL流體中所測定之炎症程 - 度的關聯性之直線圖。此關聯性證實血清IL-13(未結合或結 合至抗IL-13抗體）之檢測可作為用於檢測罹患炎症之患者 的生物標記。罹患更嚴重炎症之患者顯示血清IL-13之較高 位準。雖然典型上難以定量未結合IL-13之位準，但是上文 197 200848429 之第20圖中所揭示之該等檢定法可提供用於測定已結合至 抗比_13抗體之扎_13的可靠檢定法。
對人鼠投與人類IL-13M 肺動熊順應性的影響 5 氣％之鼠科動物模式已提供用於瞭解IL-13在該疾病 之角色的非常寶貴的方法。用於評估該等抗體系列（人源化 13.2 V.2及人源化MJ2_7v.2_n)之活體内效力之本模式的用 迷原先受到這些抗體不能與嚙齒目動物IL_13交錯反應的 阻礙。可藉對小鼠投與人類重組型IL-13而避免該限制。人 1〇 類1L-13可結合至該鼠科動物IL-13受體，且當投與時，會外 源性誘發呼吸道炎症、過度反應、及氣喘之其它相關病症。 在非人類靈長目動物中，可藉人源化MJ2-7V.2-11而辨 識之IL-13抗原決定位包括於位置11〇之GLN。然而，在人 類中，位置110為多形性變體，典型上為ARG取代GLN(例 15 如11110) °該R11〇Q多形性變體與異位性疾病之流行程度大 有關聯。 在本實例中，重組型人類R110QIL-13係表現在大腸桿 菌中且經再摺疊。抗13.2 (IgGl，k)係自經人類IL-13免疫之 BALB/c小鼠選殖，且本抗體之人源化變體被命名為人源化 20 13·2ν.2(或Μ3.2ν·2)。抗體MJ2-7(IgGl，k)係自經非人類靈長 目動物IL-13之N末端19種胺基酸免疫之BALB/c小鼠選 殖，且本抗體之人源化變體被命名為MJ2-7v.2-ll(或 hMJ2-7v.2-ll)。這兩種抗體係在含5%蔗糖之10mM L-組胺 酸(pH 6)内調配。藉蛋白質A層析法而純化Carimime NH免 198 200848429 疫球蛋白靜脈内（人類IVIG)(ZLB Bioplasma Lie·， Switzerland)並在含5%蔗糖之1〇mM L_組胺酸(pH 6)中調配。 為了分析小鼠肺對重組型人類Rl1〇Q IL-13之存在的 反應’在第1、2、及3天，使用支氣管内投藥方式投與5微 5 克重组型人類R1i〇Q江-13(例如約25〇Tg/公斤）或等量鹽液 (20微升）以處置BABL/c雌小鼠。在第4天，測試動物回應增 加劑量之霧化乙酿丑曱基膽素的呼吸道阻力（ri)及順應性 (Cdyn)之體徵。簡言之，將經麻醉並經氣管造口之小鼠放 入全身體積描記器内，其各具有固定於該處理室之頂板内 10 的歧管，具有連接到氣管、通風機之吸氣及排氣口、及壓 力轉換器以監測氣管壓力之通口。在各身體體積描記器之 器壁内的呼吸氣速度描記器可藉該經輸氧動物之胸活動而 監測進出該處理室之氣流。以150次呼吸/分鐘之速率及15〇 毫升之潮氣量對動物輸氧。可使用協力差的演算法自氣管 15 壓力及氣流信號導出阻力計算值。 如第23A-23B圖所示重組型人類rii〇q il-13之氣管投 藥在回應乙醯丑甲基膽素制抗時可引起增加的肺阻力及降 低的動態順應性。然而這些觀測資料並未伴有強烈肺炎。 為了增強小鼠體内之肺炎反應，在第1、2及3天，對 20 C57BL/6小鼠鼻内投與5微克重組型人類r11〇q几_13或等 量（50微升）鹽液。在第4天宰殺動物並收集支氣管肺泡的灌 洗(BAL)流體。進行預分析，使BAL經由70微米細胞濾器過 濾並於2,000rpm下離心處理15分鐘以得到細胞小粒。分析 細胞溶離份之總白血球計算’旋轉送至顯微鏡載物玻片 199 200848429 (Cytospin; Pittsburgh，PA)上，且經Diff-Quick(Dade Behring，
Inc. Newark DE)染色以進行示差分析。藉細胞小粒排列計 數(CBA; BD Pharmingen，San Diego, CA)而測定IL-6、TNF α、及MCP-1位準。就檢定靈敏性之限值而言，IL-6為1皮 5 克/毫升，而TNFa及MCP-1為5皮克/毫升。 如第24A圖所示，如藉增加的嗜伊紅血球及嗜伊紅血球 滲入BAL内可知重組型人類R110Q IL-13之鼻内投藥可誘 發強烈呼吸道炎症反應。細胞浸潤物主要由嗜伊紅血球(例 如約40%)所組成。如第24B圖所示，重組型人類R110Q IL-13 10 之鼻内投藥亦可顯著地增加BAL中之幾種細胞素（例如 MCP-1、TNF-I、及IL-6)之位準。 為了確定用於人類MJ2-7V.2-1之最佳傳遞方法，在經鼻 内或氣管内投與重組型R110QIL-13處置後，在腹膜内及靜 脈或鼻内投藥後分析BAL及血清中之抗體位準。簡言之， 15 在第1、2、及3天對BALB/c雌小鼠氣管内投與5微克重組型 人類R110Q IL-13或等量鹽液，在第0天及投與各IL-13劑量 前2小時，在第〇天靜脈注射500微克人源化MJ2-7V.2以處置 小鼠，而在第1、2、及3天藉IP方式進行處置（第25A圖）。 或者，在第0、1、2、及3天鼻内投與500微克人源化 20 MJ2-7v.2-ll。藉ELISA而測定人類總IgG，其步驟如下：於 4°C下以50微升/井之速率，使用山羊抗人類ig((M+G+A) Fc (ICN-Cappel，Costa Mesa, CA)在25mM碳酸鹽-碳酸氫鹽緩 衝劑(ρΗ9·6)中之1 : 1500稀釋液塗覆ELISA平板(MaxiSorp; Nunc，Rochester，NY)。於室溫下以明膠在PBS中之0.5%溶 200 200848429 液阻隔平板，在含〇·〇5% Tween-20之PBS(PBS-Tween)内清 洗。添加人源化MJ2-7v.2_ll標準物或以1 : 500·1 : 50,000 開始之羊血清的6x1 : 2稀釋液並於室溫下培育2小時。以 PBS-Tween清洗平板，並於室溫下培育生物素化小鼠抗人類 5 IgG(Southern Biotechnology Associates)之 1 : 5000稀釋液， 費時2小時。以PBS-Tween清洗平板，並使用過氧化酶連接 之鏈黴菌卵蛋白（Southern Biotechnology Associates)及Sure Blue受質（KPL Inc·)檢測結合性。人類IgG之檢定靈敏性為 0.5毫微克/毫升。 10 第25A圖表示在腹膜内及靜脈注射人源化MJ2-7V.2-11 抗體後’與BAL比較，血清中之人類IgG位準增加。如第25B 圖中所示，在鼻内投與人源化MJ2-7v.2-ll抗體後，BAL中 之總成IgG位準（微克/毫升）比血清中之位準明顯高。 為了測定該人源化MJ2-7V.2-11抗體是否可調節上述肺 15 機能及炎症反應，在第1、2、及3天，藉氣管内投與5微克 重組型人類R110Q IL-13或等量(20微升）鹽液而誘發呼吸道 過度反應。在第0天、及投與各劑量之重組型人類以11〇〇 IL-13前，算内投與500微克人源化MJ2-7V.2-11，500微克劑 量之IVIG或等量鹽液以處置動物。在第4天，如上述，測試 20 樣動物回應漸增劑量之霧化乙醯丑甲基膽素竹呼吸道阻力 (RI)及順應性(Cdyn)。如上述，藉ELISA而分析Bal及血清 中之人源化MJ2-7V.2及IVIG而分析B AL及血清中之人源化 MJ2_7v.2及IVIG位準。如第26A-26B圖中所示，人源化 MJ2-7v.2-ll能有效源減少氣喘病反應，所以可導致獲得肺 201 200848429 阻力之半最大度所需之乙醯丑甲基膽素劑量顯著減少。反 之，同等劑量之IVIG並無作用。在這些條件下，動態肺順 應性之變化並不明顯。如第26C圖所示，BALIgG抗體位準 比血清位準高約10-20倍。 5 為了測定人源化MJ2-7V.2-11抗IL-13抗體投藥是否可 促進IL-13之循環位準的增加，藉ELISA而檢測BAL及血清 之IL-13位準，其步驟如下：簡言之，如第26A-B圖所述之 方法處置BALB/c雌小鼠。以在PBS中稀釋至0.5毫克/毫升之 50毫升/井的小鼠抗IL-13抗體(mAbl3.2，）塗覆ELISA平板 10 (Nunc Maxi-Sorp)，費時一夜。以含 0.05% Tween-20 之 PBS(PBS-Tween)清洗平板共3次並於室溫下經明膠在PBS 中之0.5%溶液阻隔2小時。然後清洗平板並添加人類IL-13 標準化(Wyeth，Cambridge，MA)或小鼠血清稀釋液（以1 : 4 開始之連續3X稀釋液）至含2%胎牛血清(FCS)之PBS-Tween 15 内。再於室溫下培育平板，費時4小時，並清洗。以0.3微 克/毫升之速率添加生物素化小鼠抗人類IL-13抗體(MJ1-64) 至PBS-Tween内。於室溫下培育平板，費時1-2小，清洗， 然後於室溫下經HRP-鏈黴菌卵蛋白（Southern
Biotechnology Associates，Birmingham，AL)培育一小時。使 20 用 Sure Blue過氧化酶受質（KPL，Gaithersburg，MD)顯色，並 經0.01M硫酸中止反應。在；§pectraMax平板讀數器 (Molecular Devices Corp·，Sunnyvale，CA)内讀取450奈米之 吸光度。藉參考人類IL-13標準曲線(其係為各平板獨立制定） 而測定血清IL-13位準。 202 200848429 如第27A_27B圖中如示，其與第26C圖一致，在經抗體 處置之小鼠的BAL中IL-13位準增加，但是在血清中並未增 加。此外，我們發現自這些試樣所分離之IL_13並無可檢測 之生物活性（未顯示數據）。為了測定所發現扎_13生物活性 5 之缺乏是否由於1L-13及人源化MJ2-7v.2-11複合體形成所 致，使ELISA顯影以明確地檢測複合體中之IL-13及人源化 MJ2-7V.2-11。簡言之，以在PBS内經稀釋至0.5毫克/毫升之 50微升/井的小鼠抗IL-13抗體（mAbl3.2)塗覆ELISA平板 (Nunc Maxi-Sorp)，費時一夜。以含0·05% Tween清洗平板 10 共3次並於室溫下經明膠在PBS中之0.5%溶液阻隔。然後再 清洗平板’並添加人類IL_ 13標準物(Wyeth, Cambridge，MA) 或小鼠血清稀釋液（以1 : 4開始之連續3X稀釋液）至含2%胎 牛血清(FCS)之PBS-Tween内。接著於室溫下培育平板，費 時4小時。然後添加在PBS-Tween内以1 : 5000稀釋之生物素 15 化抗人類IgG(Fc專一性）(Southern Biotechnology Associates，
Birmingham，AL)。於室溫下培育平板，費時1-2小時，清洗， 並最後於室溫下經HRP-鍵徽菌印蛋白（Southern Biotechnology Associates, Birmingham，AL)培育一小時。使 用Sure Blue過氧化酶受質（KPL，Gaithersburg，MD)顯色，並 20 經0.01M硫酸中止反應。在SpectraMax平板讀數器 (Molecular Devices Corp·，Sunnyvale，CA)内讀取450奈米之 吸光度。 如第27C-27D圖中所示，自在本模式中之小鼠的BAL 及血清回收IL-13及人源化MJ2-7V.2-11複合體。本觀測結果 203 200848429 顯示人源化MJ2-7v.2-ll可活體内結合IL_13，且本交互作用 可以使IL· 13生物活性失效。
在小鼠體内測試人源化MJ2-7v.2-11對經人類IL-13媒 介肺炎及細胞素產生之影響並與第二抗體（人源化13212) 5 進行比較，其步驟如下：簡言之，在第1、2、3天，鼻内投 與5微克重組型人類Rl 1 〇Q IL_丨3(例如約25〇微克/公斤）或 等量（50微升）鹽液以處置C57BL/6雌小鼠（10隻/每組）。在第 0天、及投與各劑量之IL-13前2小時，對小鼠以鼻内投藥方 式投與劑量為500微克、1〇〇微克或2〇微克人源化 10 MJ2_7v.2-ll或人源化13·2ν·2。使對照組接受5〇〇微克IVIG 或等量鹽液。在第4天宰殺動物並收集BAL。藉示差細胞計 數而測疋嗜伊紅血球及滲入BAL内之嗜伊紅血球並以百分 比表示。 如第28Α-28Β圖中所示，其係與第24Α圖一致，重組型 15 人類R11〇Q il_13處置可導致嗜伊紅細胞及嗜伊紅細胞浸 潤物位準增加。有趣的是，與對照組(例如鹽液、IL_丨3、IVIG) 比較’人源化MJ2_7v.2-ll或人源化ΐ3·2ν·2可顯著減少嗜伊 紅血球（第28Α圖）及嗜中性白血球（第28Β圖）浸潤物。如第 29A-29C圖中所示，人源化MJ2-7V.2-11亦可中止MCP-1、 20 TNF-1、及IL-6細胞素位準之增加。 為了證實BAL細胞素位準可準確地代表炎症程度，在 第1、2、及3天，鼻内投與5微克重組型人類Ri1〇q IL_13(例 如約250微克/公斤）或等量（50微升）鹽液以處置C57BL/6雌 小鼠。在第0天、及投與各劑量之IL-13前2小時，對小鼠鼻 204 200848429 内投與劑量為500、100或20微克之人源化MJ2-7v.2_ll。在 第4天，宰殺動物並收集BAL。如上述，藉ELISA測定BAL 中之人源化MJ2-7v.2-ll抗體位準。藉細胞小粒排列計數而 測定BAL IL_6位準。藉示差細胞計數法而測定嗜伊紅血球 5 百分比。 如第30A-30B圖中所示’ IL-6 BAL細胞素位準與炎症程 度有關。而且，BAL流體中人源化MJ2-7v.2-ll之位準愈高， 則細胞素濃度愈低，其強烈地表示治療效用。 減少本模式内之活體内IL-13生物活性所需之抗體位 10 準高。500微克抗體劑量之效力最佳，其相當於在小鼠體内 約25毫克/公斤。對高劑量抗體之需求很可能是需要使用高 位準之IL-13(5微克/劑量x3次劑量）才能引起肺反應所致。 有趣的是’僅當鼻内投與人源化MJ2-7v.2-ll才能發現活體 内IL-13生物活化之良好中和反應，當藉靜脈或腹膜内投與 15 抗體時，則未發現該良好中和反應。分佈試驗顯示就以下 靜脈及腹膜内投藥而言，於宰殺時在血清中可回收高位準 抗體，但是在BAL中發現之抗體位準很低。反之，在鼻内 投藥後，在血清及BAL中可發現相同位準之抗體。因此， 鼻内投藥後在BAL涑體中之人源化MJ2-7v.2-11位準比使用 20 靜脈及腹膜内投藥高約100倍。該觀測結果表示在本模式中 鼻内投藥有效且不需要靜脈及腹膜内投藥，該抗體作用之 部位為肺。本作用部位係根據IL-13之氣管内或鼻内傳遞路 線而預測，且藉抗體可在BAL流體内截獲IL-13，但是在血 清中僅發現極少抗體/IL-13複合體之觀測結果而證實。 205 200848429 最後，這些研究結果進一步證實人源化之 活體内IL-13中和活性。 貫例20 ·人源化抗IL-13抗體之樂物動〜力學、举理動力學、 及動物間之關聯性預測 5 自經人類1L_13免疫之BALB/c小鼠選殖抗體 13.2(IgGl，k)，且本抗體之人源化變體被命名為“人源化 13·2ν·2”。抗體MJ2-7(IgGl，k)係自經非人類靈長目動物 IL-13之N末端19種胺基酸免疫的BALB/C小鼠選殖，且本抗 體之人源化變體在文中被命名為“人源化MJ2_7v 2_u，，或 10 “hMJ2-7^2-11”。這兩種抗體係在含5%蔗糖之1〇mM L_細胺 酸(pH 6)内调配。這兩種抗IL-13抗體係與猴子il-13交錯反 應，且人源化13·2ν·2係與羊IL-13交錯反應。然而，人源化 13·2ν·2及人源化MJ2-7v.2_ll抗體並不會與嚙齒目動物（例 如小鼠及大鼠)IL-13交錯反應。 15 為了證實抗抗體之臨床前測試，在iv及SC投藥後 之小鼠、大鼠、羊、及獼猴中進行單―劑量藥物動力學(ρκ) 及藥理動力學(PD)試驗。此外，使用實例21a中所述之經虫回 虫虫制抗猴子模式、及下述之經蛔蟲制抗羊模式以進rPK試 驗。使用非區室模式及WinNonLin軟體(Model 2〇丨及2〇〇)以 20計算PK參數。最後，使用可預測人類體内之抗il_i3配置之 PK-PD模擬法進行PK動物特性分析之外推法。 在小氣（例如用於人源化13.2ν·2之雄A/J及 用於人源化 MJ2-7V.2-U之雌BALB)、雄史泊格多利大白鼠（滅 Spraugue-Dawley rats)、未作實驗對象之雄獼猴、及 實例21a 25巾所述之經域概__式巾進行單—鮮ρκ實驗。 206 200848429 根據最近預定的體重，以團式注射之方式藉導管分別對小 鼠、大鼠、及猴子之尾靜脈、頸靜脈或隱靜脈投與以劑量。 就該經細蟲制抗之_模式而言，以如上述藉短(例如
約10分鐘)IV輸注而投與人源化MJ2_7v2以處置根據實例 5 21a所述之程度所選擇之動物。IV輸注後24小時，以經pBS (Greer Diagnostics，Lenoir, NC)重組並藉霧化劑傳遞而投與 之〇·75微克豬i回蟲抗原制抗動物。 就該經蛔蟲制抗之羊模式而言，使用IV團式注射人源 化13·2ν·2(2毫克/公斤）或IVIG(2毫克/公斤）以處置已預篩選 10 對豬蛔蟲抗原具呼吸道過敏之雌羊。然後使用霧化劑傳遞 後24小時進行蛔蟲制抗。 在如上述之合適處置後，於預定時間點以血清分離管 收集血液試樣於室溫下使其凝結15分鐘，然後藉血清離心 法(例如約ll，〇〇〇rpm，費時1〇分鐘）而處理。預定時間點為： 15 預測試且在人源化13·2ν·2 A/J小鼠試驗中費時5分鐘至42 天；在人源化MJ2-7v.2-ll BALB/c小鼠試驗中費時5分鐘至 21天’且每一時間點分析3_4隻動物；預測試且在人源化 及人源化MJ2-7V.2-11大鼠試驗中費時5分鐘至35 天，預測試且在1毫克/公斤人源化MJ2-7v.2-ll未作實驗對 20 象之獼猴試驗中費時5分鐘至42天而在100毫克/公斤之該 等試驗中費時5分鐘至55天；在人源化13·2ν·2蛔蟲制抗之羊 試驗中費時5分鐘至42天；且在經蛔蟲制抗之獼猴試驗中費 時24小時至113天。 使用定量性酶聯免疫吸附分析法（ELISA)以測定小 207 200848429
鼠、大鼠、及獼猴血清試樣中之抗體IL-13抗體濃度。在本 分析法中，係藉抗體-FLAG單株抗體在微量滴定盤上截獲 含 FLAG 八肽融合標記（Asp_Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys) 之IL-13配位體。阻隔並清洗後，在該盤上培育含抗IL-13 5 抗體或抗IL-13標準物之血清試樣以使其結合至該經FLAG 標記的IL-13。使用已融合至辣根過氧化物酶(HRP)之小鼠 抗人類IgG(Fc)抗體以檢測結合性抗IL-13抗體或抗IL-13標 準物。最後，使用該HRP受質，2,2,次偶氮基-二(3-乙基苯 并嗔嗤啉-6-磺酸酯（ABTS)以定量結合性抗體，且於405奈 1〇 米處測定光密度。 用以定量羊之人源化13·2ν·2的該ELISA之步驟如下·· 簡言之’在未標記之人源化13·2ν·2標準物或含人源化 13·2ν·2之羊血清存在下，以重組型人預培育 生物素化之人源化13·2ν·2。將該混合物移至已預清洗並阻 15隔之經塗覆的elisa平板。第二次培育後，清洗該 平板並以過氧化物酶聯鏈黴菌卵蛋白檢測生物素化的人源 化13·2ν·2。藉使用4_參數方程式(s〇ftmax Pr〇)自校準曲線擬 合進行内插法以測定EUSA試驗濃度。 小氛PK參數係根據於各時間點下之3至*隻動物的平均 ，辰度、然而就個別動物而言，大鼠及猴子ρκ參數之測定步 驟如下·使用藥物動力學套裝軟體⑽如⑽⑽㈣) 之非區至刀析以產生所有數據。使用線性梯形模式以計算 ? /辰度對吟間曲線下之面積⑽。使用至少3數據點， 猎對數-線性回％而估計視末期之斜率且末期速率常數⑺ 208 200848429 係導自該斜率。以AUC〇_t(t=最後一次可測定濃度之時間）及 Q/Σ之總和估計AUCo-oo。該視末期半衰期（t1/2)係以0.693/Σ 計算。 可使用如下述之變異體形尺度以預測體重為60公斤之 5 患者的人類PK參數。在對數-座標上晝出自各動物所計算之 PK參數，且變異體形係數(a)及變異體形指數(b)係自以下線 性回歸估計：對數Y=對數(a)+對數(w)*b(其中對數(a) = y 截距離；b =擬合之斜率）。此後如表7所示，使用方程式： Y=a · Wb(其中Y=相關之PK參數；W=動物之體重；a = 10 變異體形係數；b=變異體形指數)以測定PK參數。PK數據 如表5A-5C中所示。 表5A.單一IV注射後，人源化13·2ν·2及人源化MJ2-7V.2-11 之平均(土 S D)藥物動力學參數之物種間的比較 人源化13.2v.2 物種 劑量 (毫克/公斤） 平均CL (毫升/小時/公斤） 平均Vdss (毫升/公斤） 平均Τι/2 (小時） 小鼠 1 0.813 60 78 大鼠 (N=4) 2 0.418 士 0.050 115土18 207土23 猴子 (N=3) 1 0.134 士 0.034 54 土 12 341土47 猴子 蟲 (N=7) ND ND ND ND 猴子 (N=#3) 100 0.172±0.030 61 士 12 245士70 羊 虫回蟲 (N=2) 2 0.131 61 330 經預測 之人類 (60公斤） N/A 0.067 68 708 209 200848429 表5Β·單一IV注射後，人源化13·2ν.2及人源化MJ2-7v.2-ll 之平均藥物動力學參數之物種間的比較 人源化 MJ2-7v.2-11 物種 劑量 (毫克/公斤） 平均CL (毫升/小時/公斤） 平均Vdss (毫升/公斤） 平均Τι/2 (小時） 小鼠 2 0.35 65 78 大鼠 (Ν-4) 2 0.276士 0.090 86 士 15 138士87 猴子 (Ν=3) 1 0.134 土 0.012 77 土 7 396士25 猴子 虫回蟲 (Ν=8) 10 0.100 士 0.033 45士 11 359士115 猴子 (Ν 二 3) 100 0.17U0.046 63±4 299士187 經預測 之人類 (60公斤） Ν/Α 0.104 94 663 表5C·單一IV注射後，人源化13·2ν.2及人源化MJ2-7v.2-ll 之劑量標準化曝露量 hl3.2v.2 hMJ2-7v.2-ll 物種 劑量 (單一劑量 IV，毫克/公斤） 平均AUC/劑量 [(微克*小時/毫升） /(毫克/公斤)] 劑量 (單一劑量IV， 毫克/公斤） 平均AUC/劑量 [(微*小時/毫升） /(毫克/公斤)] 小鼠 1 1231 2 3226 大鼠 2 2418 2 3867 猴子 1 7877 1 7410 經預測 之人類 1 14886 1 9628 10 如上述，測定小鼠、大鼠、羊、及猴子之人源化13.2ν.2 及人源化MJ2-7v.2-ll的ΡΚ特性。如表5Α-5Β中所示，一般 而言，所分析之所有物種的ΡΚ參數皆類似。更時瞭地，ΡΚ 210 200848429 數據清楚地說明這兩種抗IL-13抗體之消除作用慢，在猴子 及羊體内之血清清除率（CL)範圍為自013毫升/小時/公 斤，而在小鼠中為0.81毫升/小時/公斤。所有物種之穩態分 佈體積(Vdss)亦低(<120毫升/公斤），其表示該等抗比-^抗 5體主要存在於血管循環中。有趣的是，小鼠（非結合性物種) 之視末期半衰期（Tm)為3至6天，而猴子及羊(11^13結合性 物種）為14至17天。在猴子體内，係以1毫克/公斤及1〇〇毫克 /公斤之劑篁測定PK參數。由於該等丨與丨丨毫克/公斤劑量之 CL、、Vdss、及劑量標準化業露量(AUC/劑量）並無顯著 10不同，所以人源化13·2ν·2及人源化MJ2-7V.2-11抗體之PK參 數按劑量比例計算在崎克/公斤之範_。一般而 吕，未作實驗對象之猴子及經蛔蟲制抗之猴子的ρκ參數並 無顯著不同，其表示於該治療性劑量下，該等抗正_13抗體 並無明顯標.媒介性清除率。然而，㈣#與經以克/公 15斤之人源化MJ2-7V.2]i處置之未作實驗對象的猴子比較 時，可能由於血管重建而導致il]3再分佈，所以經虫回蟲制 抗之猴子體内之人源化MJ2-7ν·2_丨丨的Vdss較低。 IV注射後，使用變異體形尺度以_人類之人源化 13.2V.2及人源化Μ】2_7ν·2·11抗體的PK。如表5Α·5Β及第43 20圖中所示，已預測這兩種抗IL_13抗體在具低cl(例如約 0.07-0.1毫升/小時/公斤）、低νΜ例如約6m〇毫升/公斤）、 及長t1/2(例如約27-29天）之人類體内具有高所欲叹特性。 使用付自上述IV試驗之劑量標準化曝露量數據 (AUC“/劑量）以計算皮下（sc)投與2毫克/公斤之人源化 25 13·2ν·2及人源化MJ2-7v.2-ll抗體後之生體可用率。 211 200848429 碱4N^dwn^n-dlr¥?趣镰詔US9< 人源化 MJ2-7V.2-11 S <N Ό r—* ND 280士 147 AUC “ (pg h/mL) 5535 ND 11，283士5343 ND 40 土 14 1 (pg/mL) 24.2 ND 丨 22.6士6.4 g VO 00 g 74 土 33 人源化13.2ν·2 Ξ w 206±45 272土 59 AUC〇.〇〇 (pg h/mL) 1065 4385士766 9584±1230 (小時） 54士 12 80±14 X J (μ^ΐϊΐί) m 11.3 士 1.2 22·6 士 5.5 g ss 1 91 士 16 61 士 8 物種 Mouse3 Λ c< Monkeyb 0wife')i<=azi^v8wi.^*SE^^^IT3nv:s£*v^Hw\?FHIi
QlI-(N.AZrCNfs-lJK^^^T>raJJK^n<^^#¥i#usl^wNt<<T^7^is^^Tirllr^<^^ 。碱砵 wcrr#礙^φΗ+τεΙΚΤΝ -錄猓)屮幾寸=N * ㈣疝¥^^^«>5Y^q 。(七<</<«(N) 11-Γ>Ζ/·(ΝΓ2^( <<</T«l)r>rn^^V^K^^#rf,f、u/CQlva^f/v0^^^dH+fvtwir^«#«l^^rn>ss:^l#*inIi5sITMI&1H、^ 212 200848429 如表6中所示，在所測試之所有物種體内，該等抗几… 抗體之生物可用率為6CM00%。於投藥後，在第丨至3天於小 鼠體内所觀測之最大A清濃度(Cmax)，就人源化13 ^.2而言 在小鼠體内為7.25微克/毫升，在猴子體内為以微克/公 5斤，且尽尤人源化腸2-7〃·2]1而言，在小鼠體内為24.2微克/ 宅升，在猴子體内為22.5微克/毫升。自這兩種抗IL-13抗體 之注射部位產生之吸收作用慢；然而，就人源化MJ2_7V.2-11 而吕’吸收作用補快。根據臨床前物種中sc高生體用率， 這兩種抗IL-13抗體經預測在人體内皆具有sq%生體可用率。 10 如上述，可使用變異體形尺度方法以預測體重為60公 斤之患者的人類PK參數。簡言之，使用表5中所示之小鼠、 大鼠、及猴子的PK參數對體重進行回歸分析（例如ρκ參數 =a·體重b)以獲得R2。然後在對數座標上晝出各物種之PK 參數且如表7中所示，自該線性回歸估計變異體形係數(a) 15 及變異體形指數(b)。 表7.抗IL-13抗體PK參數之變異體形尺度 人源化13.2v.2 人源化 MJ2_7v.2-ll a b R2 a b R2 CL 0.2524 0.6767 0.991 0.1931 0.8485 0.993 Vdss 71.051 0.9882 0.978 78.15 1.0327 0.999 tl/2 235.69 0.2687 0.982 295.5 0.1974 0.999 表7係表示得自PK參數對體重之回歸及這兩種抗IL-13 抗體之CL、t1/2與Vdss的變異體形係數(a)、變異體形指數 20 (b)、及 R2值。 使用放射性標記的抗IL-13抗體，分別在A/J小鼠及史泊 213 200848429 格利大白鼠體内進行人源化13.2ν·2及人源化MJ2_7v.2-11抗 體生物分佈檢定法。簡言之，使用Iodo-gen試劑（由Pierce 供應之1，3,4,6-四氯-3,6-二苯基甘脲）以標記人源化 13·2ν·2。使20微升整份Iodo-gen溶液與已溶解在100TLPBS 5 中之lmCi[125I]及10微升人源化13·2ν·2抗體組合並於室溫下
培育 15分鐘。使用 NAP5柱(Pharmacia，Uppsala，Sweden)以 純化經[1251]標記之人源化13·2ν·2。類似，使用IODO-BEADS 方法(Pierce，Rockford，IL)以蛾化人源化MJ2-7v.2，其中係 使用3mCi[125I]、IODO BEADS、及PBS以培育300微克人源 10 化MJ2-7V2-11 抗體，費時25分鐘。藉過濾(Centricon，10kD 截留量）而自該IODO BEADS分離未合併之[125I]，並使所形 成[1251]標記之人源化MJ2-7V.2-11抗體與未標記之 HMJ2-7V2-11混合，該[1251]標記之人源化ΐ3·2ν·2及[1251]標 記HMJ2-7v.2-ll抗IL-13抗體之專一活性分別為 15 2.79xl〇8Cpm/毫克(未合併之碘$5%)及2.56xl07cpm/毫克(未 合併之碘幻.1%)。然後IV投與1毫克/公斤劑量之[125η標記 之人源化13·2ν·2並投與2毫克/公斤劑量之[1251]標記之人源 化MJ2-7v.2· 11。接者於1、24、168、及336小時收集組織試 樣以進行該[1251]標記之人源化13·2ν·2小鼠試驗並於卜48、 20 I68、及336及840小時，進行該[125η標記之人源化 MJ2-7v.2-ll大鼠試驗。血液抽樣並以25單位/毫升對全血灌 /主肝素化PBS後’立即收集包括，例如脾、肺、心臟、肝、 腎、骨絡肌、胃、小腸、大腸、淋巴結、皮膚、及脂肪之 組織。 214 200848429 分別藉r -計數三氯乙酸(tca)可沈澱粉或總放射性、 及以下配方而估計血清中之抗虬-13抗體位準（微克當量/毫 升）(其係以放射性當量濃度定義）及組織中之抗^43抗體 位準（微克當量/克），該等配方如下：就血清而言，[平均TCA 5 可沈澱cPm/EXP(〇.693/60.2x(ts-tD))]/[專一活性X試樣體積];就 組織而言，[平均TCA可沈澱cpm/EXP(0.693/60.2x(ts-tD))]/[專 一活性x試樣重量]，其中ts為試樣之日期，而tD為校正[12¾之 半衰期後之給藥溶液測定值。 如第31A-31B圖中所示，在IV投與[1251]標記之人源化 10 13.2v.2及Γ5Ι]標記之人源化MJ2-7V.2-11抗體後，在血清中 可檢測出這兩種抗體之最高位準，其證實這兩種抗几_13抗 體主要存在於血管分佈中。具有高位準之這兩種抗抗 體的其它組織包括高灌流性組織，例如肺、腎、肝、心臟、 及脾。就所分析之所有組織區室而言，於1小時點，在肺内 15 之人源化13·2ν·2及人源化MJ2-7v.2-l 1抗體位準最高，其表 示這兩種抗IL-13抗體很快傳遞至該組織，該組織亦為適於 未來治療應用之所欲標靶器官。最後，在本實驗之持^期 間内人源化13·2ν·2及人源化MJ2-7V.2-11抗體位準皆下p 且於最終端時間點僅檢測到微量。 20 亦使用上述ELISA以分析人源化13·2ν·2及人、原化 MJ2-7v.2-ll抗體。如第32Α-Β圖中所示，在對未—_ 戸貫驗對 象之獼猴及經蛔蟲制抗之獼猴1v投與人源化13·2ν2及人原 化MJ2-7v.2-ll抗體後，總成位準會暫時增加。 Ά而， 重要的是，當在以細胞為主之效力檢定中進行測★式時 215 200848429 IL 13在這些動物之血清中不具有生物活性（並未顯示數 據）。於所有時間點下，在得自經IVK}或鹽液處置之動物的 血清中並未檢測到IL_13(並未顯示數據）。 使用如上述之變異體形尺度以進行抗體IL-13抗體後 之1L 13位準的進一步分析。簡言之，如第38及39圖中所 不，7刀別在未作實驗對象之獼猴及正常獼猴體内計算人源 化MJ2-7V.2-11及人源化13 2¥.2的濃度。時間特性分析。本 數據可合併表5中所示之PK數據並適用於第40圖中所描述 之模式及上述方程式。未作實驗對象之獼猴體内之人源化 1〇 MJ2.7v.2-ll的所形成變異體形尺度數據示於第％及表8 内。經蛔蟲制抗之獼猴體内之人源化所形成 全異體形尺度數據示於第42圖及表内。 i例21a·在未作實命及經蛔蟲制抗之糨猴體肉 U源化抗IL-13抗體力學模縣卜德 15 續的模擬”) 20 本實例討論描述抗！L-U抗體在未作實驗對象之動物 及在該動物藥理學試驗中之藥物動力學及藥理動力學的整 合模式。使用該模式以表示藉抗抗體在未作實驗對象 及藥理學試驗環境巾進行IL_13巾作用的動力學特性。可擴 大文中以IL-13例不之模式以評估其它藥物_配位體相互作 用，特別為其巾_態細胞素位準難以直接檢測的情況。 可研究東單株抗體或細胞素受體/Fc融合蛋白質而進 行之細胞素巾和作心作為料各觀細胞素媒介之疾 病’其包括自體免疫疾病，諸如風濕性關節炎(ra)、氣喘、 216 200848429 及全身性紅斑性狼瘡（SLE)之治療方法（Ichinose等人，Curr Drug Targets Inflamm Allergy 2004;3(3):263-9; Economides 等人，Nat Med 2003;9(l):47-52; Toussirot等人，Expert Opin Pharmacother 2007;8(13):2089-107 ;及 Anolik 等人，Best 5 Pract Res Clin Rheumatol 2005;19(5):859-98)。治療性蛋白 質之研發的一共同問題為由於檢定方法並未具有可測定游 離態細胞素位準之充份靈敏性，所以在藥物存在下並不能 直接監測細胞素中和作用。反倒是，總（游離態加藥物_結合 性）細胞素位準通常可作為藥物活性之代用藥理動力性(pD) 10 標記。有幾種可作“細胞素截獲物”之抗細胞素蛋白質實 例，大概由於藥物-結合性循環性細胞素之消失反應速率比 游離態循環性細胞素的消失反應速率慢，所以在藥物投與 後，該等細胞素截獲物可導致總循環性細胞素位準增加 (Margolin等人，j Clin 〇nc〇1 2〇〇U9(3):8516; ^^㈡等 15 人，J 1腿imol 1999;163(3):1521·8; Ito等人，Gastroenter〇1〇gy 2004，126(4):989-96; discussion 947)。 當游離態細胞素位準（在抗細胞素蛋白質存在且通常 不存在下）難以直接檢定時，使用總細胞素位準作為標 記，PK-PD模擬可作為描述配位體中和作用之動力學與抗 2〇細胞素治療劑之濃度-時間特性間之關係的有用方法。當得 自健康的受實驗者及患病的受實驗者(動物或人類）之數據 有放日守，這些杈式特別有用，因此在這兩種環境中進行治 療前及後’可估計該游離態細胞素位準。 確定配位體中和作用之動力學與潛在治療劑之濃度- 217 200848429 時間特性間之關係並合併效力數據可用以設計在動物藥理 學或在臨床研究中之最佳給藥方案。 介百素-13(IL-13)之中和作用為氣喘之治療性干涉的 有吸引力方法，因為該Th2細胞素在氣喘之動物模式的氣喘 5 發病中扮演重要角色（Andrews等人，J Biol Chem 2002;277(48):46073-8; Corry 等人，Am J Respir Med 2002;1(3):185-93; Wills-Karp 等人，Curr Allergy Asthma Rep 2004;4(2):123-31; Grunig等人，Science 1998;282(5397):2261-3; Padilla等人，J Immunol 2005;174(12):8097-105;Taube等人，J 10 Immunol 2002;169(ll):6482-9)。此外，在IL-13基因内之多形 性與人類之氣喘敏感染性間有一致性相互關係（Vercelli， Curr Opin Allergy Clin Immunol 2002;2(5):389·93)。以抗 IL-13抗體或IL-13受體a 2/Fc融合蛋白質（IL-13R a 2-Fc)進 行IL-13之中和作用可防止小鼠（Taube等人；Grunig等人； 15 Kumar, Am J Respir Crit Care Med 2004;170(10):1043-8; Wills-Karp等人，Science 1998;282(5397):2258,61; Yang等 人，J Pharmacol Exp Ther 2005;313(1):8-15)、羊（Kasaian等 人，Am J Respir Cell Mol Biol 2007;36(3):368-76)、及獼猴 (Bree等人，J Allergy Clin Immunol 2007;119(5):1251-7)之呼 20 吸道過度反應及其它氣喘病變化。 IL-13可藉由IL-13受體a l(IL13Ra R1)及介百素-4受 體a (IL-4R α )亞單位所組成之受體複合體而傳訊息(Andrews 等人，J Biol Chem 2002;277(48):46073-8; Corry等人，Am J Respir Med 2002;1(3):185-93)。IL-13首先與IL-13Ra 1 進行低 218 200848429 親和力交互作用，其可招募IL-4Ra以形成對IL-13具有高親 和力之活性傳訊複合體，因此可導致STAT6之磷酸化反應 及下游細胞活化事件。 文中所述之hMJ2-7v.2-ll為阻斷IL-13Ra 1結合至人類 5 及非人類靈長目動物IL-13之人源化IL-13抗體。 hMJ2-7v.2-ll實質上並不會與嚙齒目動物或羊il-13進行交 錯反應；因此非人類靈長目動物係作為藥理學物種。如文 中所述，已證明hMJ2-7v.2-ll在獼猴體内藉蛔蟲制抗而誘發 的急性呼吸道炎症模式中很有效（於10毫克/公斤IV劑量 10 下），在本實例中，係使用對未作實驗對象之猴子及經蛔蟲 制抗之猴子投與hM J2-7 ν·2-11後所獲得之PK及總IL-13 (PD) 數據以設立整合性PK-PD模式表示il-13中和作用之動力學 特性。 15 20 石亥貝驗ό又δ十摘述在表8中。如前述，於Wyeth Research (Pead River，NY and Andover，分別在實驗1及實驗2中進行 ΜΑ)進行已餵養無蛋白質長成的獼猴之單一劑量藥物動力 學貫驗。藉對隱靜脈IV注射或藉SC方式而投與 hMJ2-7v.2-ll。该劑量係根據服藥前之最近預定體重。於預 定時間點（表8)以血清分離試管收集血液試樣，於室溫下使 其凝結約15分鐘，並藉離心法（約u，〇〇〇rpm，費時1〇分鐘) 而處理血清。 219 200848429 表8 ·實驗設計 實驗編號 N，性別 hMJ2-7v.2-ll HMJ2-7v.2-l 1劑量 (毫克/公斤） 給藥體積 及緩衝劑 ----^ PK及PD取樣 時間點（天數） 實驗1，未作實 驗對象之猴子 3，雄性 ι(ιν)及 2(SC) 在組胺酸-蔗 糖緩衝劑"^中 1毫升/公斤 0, 0.004, 0.042,0.125,0.25, 1 2, 3, 5, 7, 14, 20, 28’ 35,42 ’ 實驗2,經蛔蟲 制抗之猴子3 8，雄性 10 (IV) 在PBS中2-3 毫升/公斤 0, 1,2, 8, 15, 36, 57^ 85,113 ’ a.hMJ2-7v.2投藥後24小時以〇·75毫克豬4回蟲制抗動物 b· lOmM組胺酸，5%蔗糖，pH6.0 5 經蛔蟲制抗體之實驗程序如前述(Bree等人，J Allergy
Clin Immun〇l 2007;119(5):1251_7)。簡言之，在該實驗前數 個月，以豬蛔蟲抗原對未經處置之猴子進行初篩檢制抗。 選擇制抗後24小時，以支氣管肺泡灌洗物(BAL)之嗜伊紅血 球位準增加兩倍作回應之猴子來進行該實驗。藉IV方式對 10動物投與hMJ2-7v.2-ll(l〇毫克/公斤）或負對照物(ινι〇，1〇 耄克/公斤）並在hMJ2-7v.2-ll或負對照物投與後24小時，經 〇·75彳政克豬細蟲抗原（得自Greer Diagnostics, Lenoir，NC並 經PBS重組）制抗。
使用定量性酶聯免疫吸附檢定法（EUSA)以測定血清 15 "式樣中之hMj2_7v·2 -11的濃度。在本檢定法中，係藉抗FLAG 單株抗體而在微量滴定盤上截獲含FLAG八肽融合標記物 (Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys)之重組型人類 IL-13 配 位體。阻隔並清洗後，在該盤上培育含hMJ2-7v.2-ll或該 等hMJ2-7v.2-l 1標準物之血清試樣以使其結合至該扎—丨3。 2〇使用與辣根過氧化物酶(册)綴合之小鼠抗人類IgG(Fc)抗 220 200848429 體以檢測結合性hMJ2-7v.2-ll。添加酶受質，2,2’次偶氮基-二(3-乙基-苯并噻唑啉-6-磺酸酯（ABTS)，並於405奈米處測 定光密度。該檢定之定量下限值為約10·5毫微克/毫升。 使用定量性ELISA以測定得自經hMJ2-7v.2-ll處置之 5 猴子的血清試樣中總IL-13濃度。在本檢定法中，係使用可 在 hMJ2-7ν·2-11 HMJ2-7v_2-11 存在下結合 IL-13 之抗 IL-13 抗體（人源化13.2抗體，13·2ν·2，Wyeth Research)作為捕獲 物。阻隔並清洗後，在該盤上培育含得自活體内實驗之 IL-13或該等人類靈長目動物IL-13標準物的血清試樣以使 10 其結合至該抗IL-13捕獲抗體。以生物素化jin2(其係為可結 合至IL-13抗原決定位之不同於人源化丨3.2及hMJ2-7v.2-ll 的抗IL-13抗體）檢測總IL-13。添加已綴合至HRP之鏈黴菌 卵蛋白及酶受質，3,3’，5,5’-四甲基聯苯胺(TMB)過氧化物酶 並於450奈米處測定光密度。該檢定法之定量下限值為約 15 〇·15毫微克/亳升。 使用 WinNonlin車人體V 5.1.1(Pharsight，Mountain View， CA)以形成可描述所觀測血清中之匕以v.2_丨丨及總j 3 /辰度間之關係的整合性藥物動力學及藥理動力學模式（第 33圖以包括中央區室“，V)及周邊區室(c2, Ab，v2)之雙 20區室模式評估hMJ2-7v·2·11的藥物動力性。CLd Ab代表這兩 種區室間之分佈清除率。僅經由該中央區室而推測 J2 7v.2 11之,月除率似仙)。以内源性m之中和作用描 述hMJ2-7v.2-ll之藥理動力性。根據妙之二價特性，該模 弋已飯定各hMJ2-7v.2-ll分子具有兩適於工卜^之獨立結合 221 200848429 部位，其具有相同結合速率常數（κ^)及解離速率常數 (Koff)°Kon為管理hMJ2-7v.2-ll /IL_13 (Ab-IL_13)複合體形 成之第二階速率常數，而KQff為管理Ab_IL-13複合體之解離 作用的第一階速率常數。CLcomplex代表Ab-IL-13複合體之血 5 清清除率。已假設IL_13之穩態可藉IL-13產生（零階，Ksyn,) 及降解作用（CLil_13)而調節。導自第33圖中之模式圖解的微 分方程式如下：
dCJdt -{ln{t)^CLdAb .CXAh ~{CLd^ +CLAh)·CAb]/V ^ ^on %^Ah # (^7/.-13 ^Ah-iJLAy)^ ^ ^off # ^.4^-(//,-13) 當kO, cl二知⑼乃， (2) (3) dCliM idt ^ (CLtUb ^CAh-CLiUb *CXAb)iV2 #r = 0. C° =0 C^Ab~ULAT) = 9^Ab # ^^ Ah~(JL~n) ^ ^Αδ·~(η,~ί^)ζ ) ~CLampkx^CA^n_n) ^^off m^Ah~<ji-nh ^ K〇n · „ 13) · (^//,-..13 ^ Ah-iJL-n) ^ ^ Ah-iiL-iy^) 當/=〇，C0 =0 dC,
Ab-iIL-U)2 = ^^Ab-ilL-iy) # (Q/,-13 ^^Αί^(ΙΙΜ3)2 ) 〔丄complex · C Ab'mh 匕· CAb… •(//.Li) 2 ---complex Λϋ-\ΐί-\^)2 C° 二0 田 ' Ab {!i η~)2 (4) (⑼/泣；[尺-一 α關·(〔制-ς伽)-αη/_2)]/κ ~ K〇n mCAh m(CIL_u -Kon mCAh_i!LAJ} φ(€π_η ^CA^(IIM3) ^CAMIiM3h) + 9^ Ab-{H-\y) off (5) 當，=〇, Cl 'KsyrJCL㈣ 就/v團式劑量而言 MO =劑量 ⑹ 就％劑量而言 /</) = Α；·.Ρ·劑量 ⑺ 222 200848429 由於預備性模擬顯示hMJ2_7v.2-ll、IL-13及Ab-IL-13 複合體在中央區室内具有類似之分佈體積估計值（約〇1至 -0.3升），所以單一體積變數(v)可用於適於模式精簡之最終 杈式中。使用第一階吸收速常數(Ka)以描述適於皮下用途之 5 吸收方法。 除了生體可用率(F)之估計值外，可藉同時使該模式與 知自個別未作貫驗對象之猴子或經蛔蟲制抗之猴子的血清 hMJ2-7v.2-11 HMJ2-7v.2-11及總IL_ 13濃度-時間分析圖擬 合而獲得PK/PD參數估計值。首先& ιν(η=3)及sc(n=3)劑量 10使该整合性PK/PD模式與得自未作實驗對象之猴子的數據 擬合。使用如貫例21b所示之非區室分析以估計該sc劑量後 之抗IL-13抗體的生體可用率（F)。與1¥及3(：臂（第34圖）中之 其匕未作貫驗對象的猴子比較，在本實驗之臂中之一隻 未作實驗對象的猴子（第5號猴子）在未期時hMJ2-7v.2-ll 15 HMJ2-7v.2-ll位準急劇下降(且總IL_13位準快速下降），其 可能係由於抗hMJ2-7ν·2-11之抗體形成所致。因此在該未作 實驗對象-模式環境中之平均模式參數的計算不包括第5號 猴子。已假定蛔蟲制抗並不會改變KDn及Κ—。因此得自未 作實驗實驗對象之猴子的平均KQn&KQff估計值可用於適於 20 經蛔蟲制抗之猴子的模式中。經蛔蟲制抗之猴子的炎症發 作被認為於在投藥後24小時之制抗後立即發生。因此，可 藉使該等數據與得自未作實驗對象之猴子的平均參數擬合 而預測適於在該預制抗期（〇至24小時）内之經蛔蟲制抗的猴 子之天生狀況。所有數據係以平均值士SD(就未作過實驗對 223 200848429 象之猴子而言，n=5且就經相蟲制抗之猴子而丄 :::史丢登_〜 抗環境中的hMJ2_7v.2_u、總IL_i3 /驗對象或虫回蟲制 性)IL_13濃度之模擬。假定於第1天進行 10 :::設計_用)，得自未作實驗對象:環:::平2 y數估計錢行· 2 4小時之贿，如 二抗環境之平均參數估計值進行幻天起之模擬。=二 〇·天進行鮰蟲制抗體(就假定“已確定之炎症”情況而言），、以 細蟲制抗環境之平均參數估計值進行所有時間點 擬。 未作實驗對象之獼猴體内之hMJ2_7v2_u的平均曲戶 時間特性分佈（1毫克/公斤，_毫克/公㈣， 實例21b所述。實驗丨中之咖咖加的個別濃度-時間特 性分佈示於第34A圖中。相對於實驗i中之其它5隻動物(3 隻在該IV臂中，兩隻在該Sc臂中在該研究之冗臂中之一隻 動物（第5號猴子）發現給藥後約14天後血清中2 hMJ2-7v.2-ll位準急劇下降。經蛔蟲制抗之猴子體内的 hMJ2-7v.2-ll(10毫克/公斤，IV，給藥後24小時進行蛔蟲制 抗，實驗2)及未作實驗對象之猴子體内之的平 均濃度-時間特性分佈摘述在第34B圖中。 制玎疋里性ELISA以測定在hMJ2-7v.2-ll不存在或存 224 200848429 在下之總IL-13位準。在給藥前之試樣或在所有得自妳屬 處置之對照組動物的試樣中，這些檢定法並不能檢測出血 清中的IL-13位準(並未顯示數據）。投與後，在 • 貫驗1(未作貫驗對象之猴子；1毫克/公斤IV或2毫克/公斤SC) 5巾及在實驗2(10毫克/公斤IV，給藥後24小時進行虫回蟲制抗） 巾總IL-13位準暫時增加（第34CgI)。在總IL_13之濃度-時間 特性分佈中有高動物間之變異性。然而，與實驗丨之經 f hMJ2-7v·2-11處置過的其它5隻未作實驗對象之猴子比較， 在實驗1之SC臂中的第5號猴子之總几—^位準明顯地急劇 10下降，其可能係由於抗hMJ2-7v.2-ll抗體在該動物體内形成 所致。在第5號猴子體内之總几-^之上降與該猴子體内之 hMJ2-7v.2-ll位準之下降一致(並未顯示數據）。 使用得自經4回蟲制抗之動物的血清所進行之前述以細 胞為主的檢定結果顯示具有可檢測量之總IL_13的試樣不 15 具有1L-13媒介的生物活性(Kasaian等人，提交），其表示在 / 未作實驗對象之猴子及經蛔蟲制抗之猴子體内總IL-13位 \ 準之暫時增加係由於hMJ2-7v.2-ll結合IL-13之增加所致。 • 然而，對未作實驗對象之動物或經蛔蟲制抗之動物投與 _ hMJ2-7v.2_ll後，游離態（具生物活性)n3之濃度-時間特 2〇 性分佈尚得描述。 • 制訂第33圖中所述之整合性藥物-配位體結合性PK-pD 模式以描述在未作實驗對象之猴子及經細為制抗之猴子體 内所觀測之IL-13及hMJ2-7v.2-11的總血清濃度間之關係。 在本模式中，係以雙區室模式說明hMJ2_7v>1l之藥物動力 225 200848429 性並以内源性IL-13之中和作用描述hMJ2-7v.2-ll的藥理動 力學特性。根據IgG之二價特性，在假定hMJ2-7v.2-ll可以 以連續方式結合1或2種IL-13分子之條件下制訂該等模 式。已假定IL-13之穩態可藉IL-13之零階合成(Ksyn)及降解 5 作用（CLil-13)而調節。 就PK-PD模擬而言，係使用i5〇kDa分子量（就 hMJ2-7v.2-ll而言）及l〇kDa分子量（就IL-13而言）以使原始 濃度數據(以毫微克/毫升或微克/毫升測定)轉化成nM單位。 10 表9_得自未作實驗對象之獼猴及經蛔蟲制抗之獼猴之個別 數據擬合的hMJ2-7v.2-ll藥物動力學及藥理動力學參數之 摘述 未作實驗對象之狼子 經蟲制抗之; 候子 平均值土SD (N=5)a %cv 平均值±SD (N=8) %cv CLAb (升/天） 0.0148±0.0022 15 0.0130±0.0046 35 V (L) 0.222±0.045 20 0.145+0.048* 33 CLd,Ab (升/天） 0.1877±0.1840 98 0.0238±0.0192* 81 V2 (L) 0.136±0.071 53 0.111±0·058 22 K〇n nM·1 day1 0.0896±0.0917 102 fixed NA K〇ff (1/天） 0.1630±0.0959 59 fixed NA CLc〇mplex (升/天） 0·0024±0·0006 23 0.0097±0.0073* 75 KSyn/CLlL-l 3 (nM) 〇.〇115±0.0055 47 0.0346±0.0101*** 29 實對气之動物的平均參數，使用在該1毫克7公斤，W組中之3隻動物 ίϊ期、斤7 9 物。由於與本實.驗中之其它未作實驗對象的猴子 1 匕幸 立準(及心11"13位準)急劇降低’所以平均參數之計算法不包括 15 226 20 200848429 一般而言’本模式可適當地描述該動物數據（第35A圖 及表9)之特性。在無顯著系統性偏差下，均勻地分佈殘留 物（第35B圖）。未作實驗對象之猴子（實驗丨)及經蛔蟲制抗之 猴子（實驗2)的代表性擬合分別示於第35C及35D圖中。然 5 而’本整合性PK/pD模式並不能說明得自實驗1之SC臂的第 5號猴子體内hMJ2-7v.2_l 1及總IL-13血清位準的急劇下 降。因此，在該未作實驗對象之動物環境中該等平均模式 參數之計算並不包括得自第5號猴子的PK參數。 得自該適於未作實驗對象之猴子及經細蟲制抗之猴子 10 的模式之ρΚ及PD參數摘述在表9中。得自該中央區室之未 結合hMJ2_7v.2-ll(CLAb)的清除率低（約 〇·〇ΐ3_〇·〇ι5升/天） 且這兩種猴子之該清除率類似。在未作實驗對象之動物 中’得自該中央區室之hMJ2-7v.2-ll/IL-13複合體的清除率 (CLeQmplex)比CLAb低約5-6倍。在經虫回蟲制抗之動物中， 15 CLcompiex 與CLAb類似。因此’在經虫回蟲制抗之動物的cLc()mplex 比未作實驗對象之狼子高約5倍。就未作實驗對象之動物及 經蛔蟲制抗之動物而言，已發現該中央區室内之 hMJ2-7v_2-ll體積(V)與獼猴體内之平均血漿體積類似。然 而，該等經蛔蟲制抗之猴子體内之hMJ2-7v.2-ll的v及分佈 20 清除率（CLd，Ab)比未作實驗對象之猴子明顯低。本結果與先 前非區室分析所獲得之經蛔蟲制抗的猴子體内之分佈體積 的低估算值(Vugmeyster等人，提交）一致。 該IL-13之中和作用係藉K01^K0ff(其係為hMJ2-7v.2-ll 及游離態IL-13之偶合/未偶合的速率常數）而控制。該平均 227 200848429 Κοη及K^f估算值分別為0.0896ΠΜ-1天_1及0.1630天-1。可藉内 源性IL-13合成速率（Ksyn)與得自該中央區室之IL-13的清除 率（CLil_13)之比率而界定基線IL-13位準（Benincosa等人，J Pharmacol Exp Ther 2000;292(2):810-6; Ng等人，Pharm Res 5 2006;23(1):95-103; Mager等人，J Pharmacokinet Pharmacodyn 2001;28(6):507-32)。在未作實驗對象之猴子中，該經估算之 IL-13位準為約0·0115ηΜ，但在經蛔蟲制抗之猴子(ρ<〇.〇〇ι) 中高約3倍（約〇·〇346ηΜ)。 使用具有該整合性PK-PD模式之平均參數估算值的模 10 式模擬以預測hMJ2-7v.2-l 1投與後游離態hMJ2_7v 2]丨_結 合IL-13之位準。這模擬預測實驗丨（未作實驗對象的）及實驗 2(於第1天經蛔蟲制抗）中之總江_13位準的短暫增加係由於 hMJ2-7v.2-ll IV注射後，hMJ2-7v.2-ll-結合il-13的增加， 且游離態IL-13減少所致（第36A及36B圖）。相對於未作實驗 15對象之猴子（1耄克/公斤），由於使用較高劑量之 hMJ2-7v.2-ll(l〇毫克/公斤），所以在經细蟲制抗之猴子體内 的游離態IL-U似乎更急劇地減少。在該等經虫回蟲制抗之猴 子（實驗2)中。在單-IV注㈣毫克/公斤之聽❿加後 約35，已預測游離態IL_13位準可維持於在未作實驗對象之 20猴子體内之游離態几_13位準的估算值或低於該估算值（亦 即在〇.〇115囊以下）。當hMJ2_7v.2_u濃度為㈣讀時， 已預測經细蟲制抗之猴子體内的游離態il_u位準高於該 未作貫驗對象之基線平均值。連同乜贿士⑽之消去反 應’未作實驗對象之猴子及經虫回蟲制抗之猴子體内的游離 25態、IL- i 3位準可逐漸上升至對應基線位準（其係由 228 200848429
Ksyn/CLiL-i3界定）。 在惟患假设性已確定之呼吸道炎症（亦即假定於第〇天 進行蛔蟲制抗)之猴子體内，以不同以劑量11]^^2_712_11(1-5〇 I克/公斤）模擬该IL-13中和作用的動力學。單一 jv注射 hMJ2-7v.2-l 1後，在未作實驗對象的猴子及罹患已確定呼吸 道炎症之猴子體内的預測游離態jLq3位準係示於第37A及 37B圖中。在未作貫驗對象的猴子及罹患已確定呼吸道炎症 之猴子體内，使游離態IL-13位準低於基線IL_l3位準所需之 時間會隨用於該等模擬之hMJ2-7v.2-ll劑量而增加。然而， 该等未作實驗對象之猴子及罹患已確定呼吸道炎症之猴子 的藉hMJ2-7v.2-ll而進行IL-13中和作用之程度及持續時間 似乎不同。例如對未作實驗對象之猴子以投與1〇_毫克/公斤 劑量之hMJ2-7v.2-ll後，遲至給藥後第4〇天，大部份几_13 似乎具hMJ2-7v.2-ll-結合性，且游離態IL_13位準 <0·001πΜ(或<基線之7%)。反之，對罹患已確定呼吸道炎症 之猴子IV投與10-毫克/公斤劑量ihMj2_7v2_u，游離態 IL-13先下降至幾乎零位準，繼而於第4〇天穩態上升至約 0·008ηΜ或基線之21%。 在本實例中，係制訂可說明在未作實驗對象之猴子、 及藉對獼猴進行細蟲制抗而誘發急性呼吸道炎症之疾病模 式中的IL-13及hMJ2-7v.2-ll(其係為一種抗IL_13人源化 IgGl抗體）之總血清濃度間之關係的整合性抗體_配位體結 合性PK-PD模式。由於缺乏具有充份靈敏性之生物分析方 法，可以在hMJ2-7v.2-ll存在或不存在下，直接測定游離態 229 200848429 IL-13位準。因此，由於在未作實驗對象之猴子及經蛔蟲制 抗之猴子體内，總IL-13位準會暫時增加，所以總IL-13位準 可作為PD標記。在假設hMJ2-7v.2-ll可以以連續方式結合 一或兩種IL-13分子的條件下制訂本報告中所提供之模 5 式。本假設係基於抗IL-13/IL-13交互作用之生理機制且不 同於用於治療性抗體之先前公開的整合性抗體-配位體結 合性PK-PD模式，其中係假設1 ·· 1或1: 2化學計量(Benincosa 等人，Pharmacol Exp Ther 2000;292(2):810-6; Mager等人， J Pharmacokinet Pharmacodyn 2001;28(6):507-32; Ng等人， 10 Pharm Res 2006;23(1):95-103; Hayashi 等人，Br J Clin Pharmacol 2007;63(5):548-61; Chow等人，Clin Pharmacol Ther 2002;71(4) :235-45)。 本實例所提供之該新穎PK-PD模式可合適地說明未作 15 實驗對象及蛔蟲制抗環境中的數據，且本模式可用於分析 藉hMJ2-7v.2-ll而進行IL-13之中和作用的動力學。 藉該整合性PK/PD模擬而估算之該等hM J2-7 ν·2· 11 PK 參數與藉實例21b中之非區室分析而估算之彼等參數一 致。在猴子體内，hMJ2-7v.2-ll具有低清除率及小分佈體 2〇 積，其典型上為其它人源化IgGl治療性蛋白質所發現之清 除率及分佈體積(Adams等人，Cancer Immunol Immunother 2006;55(6):717_27; Lin 等人，J Pharmacol Exp Ther 1999;288(l):371-8; Zia-Amirhosseini等人，J Pharmacol Exp Ther 1999;291 (3): 1060-7)。該整合性PK/PD模擬可進一步證 230 200848429 實與未作實驗對象之猴子比較，經蛔蟲制抗之猴子體内的 1ιΜ^7ν·2-11分佈體積較小，其與非區室分析之結果一致。 當與未作實驗對象之猴子比較時，經蛔蟲制抗之猴子體内 的中央S至及’就某種程度而言，周邊區室溫内 5 h爾2_7vHi的分佈體積（分別為V&v2)，以及這兩區室間 之hMJ2-7v.2-li的分佈清除率（CLd，Ab)較少。由於在廣劑量 範圍（1-100毫克/公斤）内，在未作實驗對象之猴子間，該 hMJ2-7v.2_ll之穩態分佈體積(Vdss)類似，所以未作實驗對 象之狼子與經蛔蟲制抗之猴子的hMJ2-7v.2-ll分佈體積之 10 差異並不可能起因於所使用hMJ2-7v.2-ll劑量之不同（就未 作實驗對象之猴子而言，丨或2毫克/公斤且就經蛔蟲制抗之 猴子而言，10毫克/公斤）。 就未作實驗對象之猴子及經蛔蟲制抗之猴子而言，該 模式亦可說明在經蛔蟲制抗之猴子及未作實驗對象之猴子 15 體内總IL_13位準的暫時增加係起因於hMJ2-7v.2-ll-結合 IL-13增加且游離態IL-13減少。可導致游離態乩_13位準之 減少的該IL_13之中和作用為hMJ2-7v.2-ll之預定生物效用 且與hMJ2-7v.2-l 1在減少該等經蛔蟲制抗之猴子（實驗2)的 呼吸道炎症之觀測效力以及在得自這些動物之血清中缺乏 20 經1L-13媒介的生物活性之事實一致。 該等PK-PK模式及模擬之結果表示該未作實驗對象及 經虫回蟲制抗之環境間的IL-13中和作用有許多差異。在該等 經蛔蟲制抗之動物中，其基線IL_13位準經估算比未作實驗 對象之猴子高約3倍。本估算值與藉IL-13媒介而在獼猴體 231 200848429 内進行jfe回蟲制抗所誘發之急性呼吸道炎症的觀念一致。在 人類受實驗者（其包括正常人類自願者及患有各種疾病之 受體實驗者)體内，有廣範圍之已報告基線IL_13位準（自<1〇 皮克/毫升至）150皮克/毫升），其係部份根據用於該等測定 5 之檢定方法(Fiumara等人，Blood 2001;98(9):2877-8; Wang 等人 ’ J Clin Virol 2006;37(1):47-52)。一般而言，未作實驗 對象之猴子體内經估算的基線IL-13位準（約1〇皮克/毫升或 約O.OlnM)似乎高於健康人類。 在經鮰蟲制抗之動物（實驗2)體内，在IV注射10毫克/ 10 公斤ihlV[J2-7v.2-ll後，游離態循環il-13位準係維持在未 作實驗對象之猴子體内的平均游離態IL-13位準以下，費時 約一個月。模擬顯示就特定劑量之hMJ2-7v.2-ll而言，經 hMJ2-7v.2-l 1媒介之IL-13中和作用在該等未作實驗對象之 猶子及經虫回蟲制抗之猴子體内的程度及持續時間係不同。 15 因此，當使用得自正常人類志願者之PK-PD數據以設計罹 患呼吸道炎症患者之臨床實驗時，應該謹慎。 值得注意的是游離態IL_13在標靶組織（肺）内之位準可 以是藉治療性蛋白質而進行IL-13中和作用之效力的更直 接才a示。然而，可維持抑阻猴子（及氣喘病患）之經鮰蟲誘發 20 的呼吸道炎症所需之組織（及循環性)IL-13的位準，以及中 和作用之所需持續時間尚未知。在實驗2中，動物體内之總 IL-13位準低於BAL(支氣管肺泡灌洗）流體中所檢測量之限 值(並未顯示數據），因此不可能在該組織區室内獲得？]〇讀數。 總括地說，係制訂可說明在未作實驗對象之猴子及經 232 200848429 虫回蟲制抗之猴子體内IL_lmhMJ2 士训的總血清濃度間 的關係之新穎PK-PD模式。該模式對IL_13中和作用之預測 、、口果如下·（1)在该蛔蟲制抗後，經估算之循環比_13位準增 力、力3乜，其付合經虫回蟲誘發之急性呼吸道炎症可經几_13 某w的^兒法，（2)未作實驗對象之猴子及經蛔蟲制抗之猴子 體内所觀測總IL-13位準之暫時增加係起因於w注射 _2_7ν·2·11後’ hMmm結合IL_n之增加且游離態 IL-13減少；及(3)當使用相同的給藥方案以進行模擬時，在 未作μ驗對象及呼吸道炎症環境之體内循環中和的IL-13 10巾和作用的程度及持續時間不同。然而，必須小心證釋本 預测結果，因為該模式並未說明IL-13在肺（亦即標靶器官） 之中和作用。在不能夠直接輕易地分析游離態配位體(諸 如細胞素或生長因子）且總配位體位準隨投藥方式而不同 ι的情況下，可使用本實例中所提供之該PK-PD模式以研究 15 =物·配位體與其它治療性蛋白質之交互作用。描述在本報 告中之該等健康及藥理學-模式環境間之藉治療性蛋白質 而進行的配位體中和作用之差異可闡明若實際上可行，在 這兩種環境内進行臨床前PK_PD實驗的重要性。 2〇 13 选簠在未作 0 體的藥物動力學及藥八 在使用實例21a中所述之“連續，，整合性PK-PD模式以 進行PK_PD模擬前，利用“化學計量，，PK_PD模式以分㈣ 未經制抗猴子IV注射1毫克/公斤之hMJ2_7HH後 233 200848429 hMJ2-、7v.2-ll PK-PD特性分佈（表8，實驗1)。用於模擬之該 hMJ2-7v.2-ll PK濃度及總IL-13濃度數據組係得自表8内所 述之實驗1並使用實例21a中所述之生物分析方法而獲得。 該“化學計算”PK-PD模式採用適於該IL-13 -hMJ2-7v.2-11 5 複合體之2對1化學計量法，亦即一抗體分子結合至兩IL-13 分子的結合法。該化學計量模式與採用1 : 1或2 : 1化學計 量之先前公開模式(Benincosa等人，J Pharmacol Exp Ther 2000;292(2):810-6; Mager等人，J Pharmacokinet Pharmacodyn 2001;28(6):507-32; Ng等人，Pharm Res 2006;23(1):95-103; 10 Hayashi等人，Br J Clin Pharmacol 2007;63(5):548-61; Chow 等人，Clin Pharmacol Ther 2002;71(4):235-45)類似。 明確地，係使用 WinNonlin軟體 V 5.1.1 (Pharsight， Mountain View，CA)以制訂可說明 hMJ2-7v.2-ll及總il-13 之觀測血清濃度間之關係的整合性“化學計量”藥物動力學 15 及藥理動力模式（第41圖）。使用包括中央區室（CAb，V)及周 邊區室（C2, Ab，V2)之雙區室模式以評估hMJ2-7ν·2-11之藥物 動力學。CLd，Ab代表這兩區室間之分佈清除率。僅經由該中 央區室而假定hMJ2_7ν·2-11之清除率（CLAb)。以内源化IL_ j 3 之中和作用說明hMJ2-7v.2-ll之藥理動力學特性。基於IgG 20 之二價特性，該模式設假各hMJ2-7v.2-ll分子在結合(KQn) 及解離(Koff)速率常數下可同時結合兩IL-13分子。Κ〇η為控 制 hMJ2-7v.2-l 1/(ΙΙ^13)2(Α1>Ιί_13)複合體形成之第 3 階速 率常數，而Koff為控制Ab-IL-13複合體之解離作用的第1階 速率常數。CLec)mplex代表Ab-IL-13複合體之血清清除率。已 234 200848429
假定1L_13之穩態可藉1L-13產生（零階，Ksyn)及降解作用 (CL1L.13)而調節。亦使用以下假設（其與實例2ia之假設類 似）：為了模式精簡：ν^13=ν—χ=ν_=ν，使該整合 性PK/PD模式與得自3隻未作實驗對象之動物的個別pK_pD 5 數據擬合。該代表性擬合係示於第32圖内。 如導自該“化學計量”PK-PD模式，對未作實驗對象（未 經制抗）之獼猴iv注射丨毫克/公斤劑量後，hMJ2_7v.2-U之 PK-PD參數示於表10内。 表10.付自未經制抗之獼猴體内之人源化MJ2_7v 2-11及 10 IL-13分佈的化學計量PK_PD模式之平均參數估算值 參數 估算值 SD CV% CLAb(升，天_1) 0.016 0.001 8.8 VAb(升） 0.196 0.026 13.1 CLdAb(升，天_1) 0.336 0.313 93.0 V2Ab(升） 0.147 0.027 18.5 K0N(nM-2，天]) 0.202 0.157 77.8 CLc〇mpiex(升’天 1) 0.000 0.000 11.7 Ksyn(毫莫耳，天’ 0.097 0.025 26.1 Kdeg(升，天-1) 2.405 1.028 42.8 K〇FF(升，天_1) 0.032 0.036 113.5 利用該 WinNonlin 軟體 V 5.1.l(Pharsight，Mountain View, CA)，使用表1〇内所述之平均模式參數以模擬游離態 15 IL-13及抗IL-13-結合IL-13之位準。 一般而言，對未作實驗對象之猴子IV注射單一 1毫克/ 公斤劑量後，該等游離態及抗IL-13結合IL-13之模擬結果與 “化學計量”(本實例）及“連續”模式（實例21a)之彼等模擬結 果類似。如第41圖所示，該“化學計量”模式可預測對未作 235 200848429 實驗對象之猴子IV注射1毫克/公斤之人源化MU-7%2—11 後，總IL-13位準之暫時增加。抗IL-13抗體投藥後，大部份 IL-13係與人源化MJ2-7v.2-ll抗體複合。因此，該化學計量 模式之結果與連續模式之結果（實例21a) —致真表示總 5 IL-13所觀測之暫時增加係起因於il-13/抗體IL-13抗體複合 體位準增加及游離態IL-13位準減少。 以使用該化學計量模式以擬合得自經蛔蟲制抗之猴子 的PK-PD(表8内之實驗2)，獲得一組ρκ-PD參數，然後模擬 對經蛔蟲制抗之猴子IV注射1毫克/公斤劑量後游離態、抗 10 體IL-13結合性、及總IL-13位準。這些模擬之結果示於第41 圖。與未作實驗對象之猴子的模擬結果類似，該“化學計 量’’PK-PD模式預測總IL-13所觀測之暫時增係起因於IL· 13/ 抗IL-13抗體複合物位準增加及游離態IL-13位準減少（第42圖）。 宜_例22 :能在人類免复麼主體内有效進行過斂原制抗實驗 15 之人源化13.2v2抗體 實驗設計：在多中心之雙盲、安慰劑對照性平行-組試 驗中以-週為間隔，隨機使罹患輕度過敏性氣喘及對過敏 原制抗(AC)有雙重呼吸道反應之受實驗者接受雙皮下注射 之2毫克/公斤劑量人源化抗IL_1S抗體⑴·〜2，㈣叫或安 20慰劑(n=13)。在投與第一次劑量後2週（第14天）及5週（第35 天）進行AC。於各AC下測定對乙酿丑甲基膽素之經過敏原 誘發的早期（EAR)及晚期（LAR)氣喘病反應與呼吸道過度 反應。在該試驗從頭至尾評估安全性、耐藥性及藥物^ 學(PK)。 勒力 236 200848429 結臬及討論··人源化抗IL-13抗體（13·2ν2)具良好耐藥 性且與任何其它嚴重的副作用（血液學、化學或生命徵象之 變化）無關。在該等抗體13·2ν2及安慰劑對照組中的觀測的 副作用頻率類似。 5 選擇罹患輕度特異、反應性氣喘之人類患者以進行該 試驗。選擇14位患者以接受抗il-13抗體，13位患者接受安 慰劑。過敏原制抗後，於各時間點以7小時測定各患者體内 之FEV1的變化百分比。FEvi(在第一秒内之用力呼氣容量） 為深呼吸後，在一秒内可強迫驅離之空氣體積，其係為肺 1〇 機能之重要测定法。FEV1之負變化表示肺機能的降低。 在篩選訪視(抗體之第一次投藥前兩週）當天使該等患 者經過敏原（Ag)制抗。進行該過敏原制抗並在過敏原制抗 後’於各時間點下以7小時測定各患者之FEV1的變化百分 比。結果以經過一段時間後FEV1之平均值（其包括標準誤差 (STERR))示於第44圖中。在該篩選期内，這兩組患者對該 過敏原制抗之反應類似。 兩週後，對該等患者皮下注射2毫克/公斤之抗體（或安 〜副對照物）。一週後，再對該等患者皮下注射2毫克/公斤 劑量。 20 ^ 在4試驗之第14天（第一次投與抗體後兩週)達到最高 血漿濃度。 士在第14天，進行過敏原制抗並在過敏原制抗後，於各 吩間點下以7小時測定各患者之FEV1的變化百分比。該試 驗之結果以經過一段時間後，FEV12平均值（其包括標準誤 237 200848429 差（STERR))示於第幻圖。如圖中所示，於所測試之所有時 間點下’已接受該13.2v2抗體之患者的FEV1變化百分比低 於經女慰劑處置之對照組患者。就早期氣喘病反應(EAR ; 制抗後〇_3小時，Ρ=0·042)而言，FEV1變化百分比的差異具 5 Ί十子顯著性且就晚期氣喘病反應(LAR;制抗後3-7小時， 日$間點(ρ-〇.〇95))而言，幾乎達到統計學顯著性。亦在第14 天，測疋该曲線下之面積(AUC) ，且與安慰劑比較，該13·2ν2 抗體可頒著地抑制EAR及LAR之面積（EAR AUC〇_3h : 46·3 抑制％對安慰劑，ρ=0·030 ; LAR AUC3_7h : 49.0抑制％對安 10 慰劑，ρ=0·039)。 在第35天（相對於第一天投與抗體的當天）進行過敏原 制抗後’亦於各時間點下以7小時測定FEV1之變化百分 比。該試驗之結果以經過一段時間後FEVl之平均值（其包括 標準誤差（STERR))示於第46圖内。如該圖中所示，與該等 15 經安慰劑處置之對照組患者比較，於測試之所有時間點 下，接受該抗體之患者之FEV1變化百分比較低。可發現該 早期氣喘病反應(EAR ;制抗後0-3小時)及晚期氣喘病反應 (LAR;制抗後3-7小時）時間點的FEV1變化百分比有差異， 且在第14天持續該差異趨勢。亦在第35天測定該曲線(AUC) 20 下之面積。於第5週（第35天）下之該EAR及LAR的面積之抑 制作用有類似的趨勢’然而其並未達到統計學顯著性(就兩 者而言’ Ρ=〇· 13)。 在第14天及第35天之該13.2V2抗體的血清濃度（毫微克 /毫升)示於第47圖。 238 200848429 於本試驗之第14天及第35天，晚期（LAR)及早期（EAR) 之FEV1的最大下降百分比及AUC下降百分比之重複測定 及統計學分析的結果示於第48圖。該等差異（Diff)係以該 13·2ν2抗體(AB)組之測定值減該安慰劑（PBO)組之測定值 5 (ΑΒ-ΡΒΟ)表示。亦提供Ρ值(P_Val)。統計學的顯著性係由 星號（*)表示。亦提供該統計學的95%信賴區間（CI)。 亦於第14及35天測定該抗體影響對乙醯丑甲基膽素之 經過敏原誘發的過度反應之能力。在該第14及35天中之任 一天的本參數並無影響。 10 結論：於第14天，經過敏原誘發之EAR及LAR可藉抗 體13·2ν2而顯著抑制，其亦符合最高血漿pK位準之事實。 這些數據證明IL-13對於人類之早期及晚期經過敏原誘發 的支氣管縮小具有重要作用。 貫例23 ·人遲患產遭色之抗體13.2ν2的ΡΚ特性分析 15 測定人類患者體内之13·2ν2的PK特性。在一段時間（天） 内測定血清抗體濃度（毫微克/毫升）。皮T注射4毫克/公斤 早一上升劑罝（SAD)之該抗體或分隔一週，投與兩次2毫/ a斤?|丨i以進行過敏原制抗(Ac)試驗。其結果示於第奶圖。 該抗體之半衰期為約23-29天。 20貫」列24 ·人颏體物動力學及產物新唓讲 謝作用 藥物動力學數據係得自SAD試驗A中之罹患輕度氣喘 的非亞H &SAD試驗B中之健康日本人與非亞洲志願 者除了在试驗中另外IV注射3毫克/公斤劑量不同外，這 239 兩種SAD試驗具有類似設計，亦即4次SC注射〇·3、i、2及4 笔克/公斤之13·2ν2劑量。測定試驗a中之輕度氣喘病非亞 洲人病患及試驗B中之非亞洲志願者之ι3·2ν2的平均（SD) 血β》辰度-時間特性。兩種試驗中之13·2ν2之藥物動力學特 性一致且相當於自〇·3毫克/公斤至4毫克/公斤。
使用模式獨立性非區室方法以分析試驗Α及試驗Β中 之血清Ι3·2ν2濃度-時間數據。有關於試驗a之13.2v2之非區 室藥物動力學參數的概括統計資料提供在表11内，而試驗B 之彼等資料提供在表12内。 表U :試驗A中之PK參數的概括統計學資料 方案 〇·3亳克/公斤sc NObs C最大值 (微克/毫 升） 7 T最大值 (天） 7 AUClast (微克*小 時/毫升） 7 AUCINF (微克*小 時/毫升） 7 末期 T1/2 (天） 7 Vz F m 7 Cl F i升/不時) 7 平均值 2.962 4.290 2744.179 3079.906 25.473 6.613 0.00783 SD 0.706 1.782 725.566 950.083 6.647 1.150 0.00179 分 2.19 2.47 1407.76 1443.88 14.91 5.62 0.00598 中位數 2.71 4.43 2984.78 3025.30 27.41 5.98 0.00797 最大值 3.85 6.08 3712.43 4637.12 33.22 8.18 0.01089 1亳克/公斤sc NObs 8 8 8 8 8 8 8 平均值 9.494 9.157 10601.482 11286.634 27.550 7.268 0.00773 SD 2.679 8.250 2778.987 3047.617 4.642 1.546 0.00167 分 6.66 2.00 7199.59 7317.11 21.24 4.39 0.00421 中位數 8.92 5.95 9935.09 10445.92 26.95 8.00 0.00807 最大值 13.88 27.28 16604.72 17038.97 36.10 8.45 0.00932 2亳克/公斤SC NObs 7 7 7 7 7 7 7 平均值 23.144 5.985 26552.669 27105.914 29.014 6.541 0.00664 SD 6.848 3.535 9100.027 9490.247 4.015 1.626 0.00190 分 17.20 2.42 17664.64 17829.23 24.25 4.07 0.00362 中位數 20.48 5.98 23940.64 24202.41 27.84 6.72 0.00599 最大值 34.90 13.06 45009.15 46251.10 35.97 9.09 0.00894 3亳克/公斤IV NObs 8 8 8 8 8 8 8 平均值 103.551 0.151 44420.523 44985.712 24.757 5.197 0.00621 SD 22.486 0.188 11509.118 11959.224 4.040 1.414 0.00204 分 77.50 0.01 28144.17 28176.71 17.30 3.51 0.00434 240 200848429 中位數 99.80 0.07 44243.83 44849.68 25.48 5.09 0.00551 最大值 150.14 0.51 63902.13 65307.96 29.23 8.16 0.01029 4毫克/公斤SC NObs 7 7 7 7 7 7 7 平均值 52.399 5.759 48679.068 49617.936 26.110 6.195 0.00697 SD 14.869 3.416 10865.726 11590.949 3.435 1.810 0.00217 分 30.73 2.34 36616.59 37058.24 21.37 4.68 0.00442 中位數 50.80 4.93 46964.71 47249.23 26.63 5.29 0.00650 最大值 80.45 13.05 64245.18 66774.68 30.57 9.45 0.01025 表12 :試驗B中之PK參數的概括統計學資料 方案 Cmax (微克/毫 升） Tmax (天） AUClast (微克*小 時/毫升） AUCINF (微克*小 時/毫升） 末期 T1/2 (天） Vz F m Cl F i升"T、時) 0.3毫克/公斤SC NObs 8 8 8 8 8 8 8 曰本人 平均值 3.119 6.627 2873.661 2933.902 24.578 6.235 0.00766 SD 1.279 4.071 1009.677 1022.128 4.738 2.792 0.00408 分 0.97 3.00 1104.57 1138.54 18.88 3.45 0.00439 中位數 2.98 5.00 3032.36 3078.17 23.28 5.19 0.00593 最大值 5.62 13.06 4082.37 4133.51 34.49 12.53 0.01660 非曰本人 NObs 5 5 5 5 5 5 5 平均值 3.379 5.617 3211.327 3256.416 24.029 6.437 0.00785 SD 0.413 0.553 634.790 645.507 2.033 1.045 0.00193 分 2.95 5.00 2254.42 2284.98 20.63 5.02 0.00569 中位數 3.36 6.00 3380.78 3432.64 24.79 6.68 0.00756 最大值 3.83 6.04 3914.05 3972.80 25.52 7.84 0.01098 1毫克/公斤SC NObs 7 7 7 7 7 7 7 曰本人 平均值 11.654 5.257 9698.563 10246.867 25.448 6.048 0.00679 SD 3.463 3.624 1757.734 2055.584 2.430 1.969 0.00175 分 5.99 2.00 7512.15 7751.11 22.02 3.88 0.00489 中位數 11.92 3.96 9913.16 10563.57 25.65 5.32 0.00677 最大值 16.65 12.94 11923.06 12625.13 28.52 9.43 0.00955 非曰本人 NObs 6 6 6 6 6 6 6 平均值 12.379 5.500 11188.010 11482.734 25.754 6.097 0.00691 SD 2.084 4.059 1733.946 1832.206 5.624 1.320 0.00110 分 8.54 2.00 9561.01 9904.13 19.43 4.84 0.00553 中位數 12.80 4.96 11013.06 11298.43 23.79 5.70 0.00678 最大值 14.44 13.05 14411.62 14897.91 34.44 8.38 0.00880 2毫克/公斤SC NObs 7 7 7 7 7 7 7 曰本人 平均值 20.144 3.856 18116.575 18344.994 24.858 6.086 0.00725 SD 3.966 1.472 3786.057 3926.702 3.643 0.977 0.00186 分 15.88 2.00 13941.93 14000.69 20.15 5.00 0.00539 中位數 17.83 4.00 16655.30 16863.10 25.22 5.80 0.00687 最大值 26.67 6.06 23495.70 23840.76 29.80 7.46 0.01066 241 200848429 非曰本人 NObs 5 平均值 34.530 SD 9.900 分 22.21 中位數 37.34 最大值 46.73 5 5 5 4.420 24798.285 25067.707 1.534 3388.686 3394.688 3.00 21735.42 21880.10 4.03 23290.71 23597.80 6.04 30354.34 30646.46 5 5 5 23373 4.798 0.00590 2.581 0.834 0.00046 20.58 3.73 0.00523 23.56 4.68 0.00589 27.22 5.88 0.00640 4毫克/公斤SC NObs 6 曰本人 平均值 31.495 SD 8.777 分 19.02 中位數 31.52 最大值 44.94 6 6 6 6 7.094 35990.823 36770.423 26.492 2.937 8573.982 8846.049 2.938 4.97 27405.02 28128.08 21.92 6.09 35366.17 36121.76 26.16 13.01 50408.70 51707.05 30.39 6 6 8·016 0.00897 L753 0.00282 542 0.00515 8·40 0.00895 1029 0.01355 由於這兩種試驗使用體重標準13·2ν2給藥法，所以體 重較重之患者接受較高劑量之13·2ν2。體重對13·2ν2暴露量 之影在第50及51圖中之圖解評估。 在第50圖中，藉這兩種試驗中之所有81位患者的個別 5 毫克/公斤劑量而標準化之AUC暴露量確實與體重有關，其 表示暴露量之差異與體重差異有關。 在第51圖中，藉實際劑量而標準化之暴露量似乎在所 有81位患者的所有劑量範圍内是一致的，其表示體重並非 影響13·2ν2暴露量之重要因素。此外，當比較第52圖之輕 10 度氣喘病美國患者及健康的曰本與美國受實驗者之藉實際 劑量而標準化之暴露量時，每單位13·2ν2劑量之該13.2V2 AUC與毫克/公斤劑量無關且在試驗A與B之間是一致的。其 表示13·2ν2暴露量大概會隨該劑量增量而增加，且種族淵 源及輕度氣喘之存在皆不會顯著地影響13·2ν2暴露量。此 15 外，每單位13·2ν2 SC劑量之該13.2V2 AUC接近每單位IV劑 量之該13.2V2 AUC，其表示在SC投藥後，13·2ν2幾乎完全 全身性吸收。 在日本及外國受實驗者霞_内13·2ν2暴霞晉數攄的群體藥物 242 200848429 動力學分折 除了該非區室分析外，使用根據以NONMEN套裝軟體 進行之非線法混合作用藥物統計學模式的群體藥動力學方 法以合併並分析試驗A及B中之血清13·2ν2濃度數據。雖然 5 藉非區室分析而導自不同劑量的該等Ρ Κ暴露量及參數係根 據少量受實驗者(5至8位），但是已預期該平均值及變數之估 异點可在劑量庆間不等且容易碰巧發現試驗結果。相較之 下，運用該混合作用模式方法之該等群體分析可提供系統 性架構以檢查在日本人及非亞洲人群體内之所有劑量的 1 θ 13·2ν2暴露量及潛在重要共變數。就檢測重要共變數而 言，該群體方法之靈敏性高於非區室方法。 該等體ΡΚ分析係使用NONMEN PREDD基因庫例行步 驟(在ΝΟΝΜΕΜ版VI中具有TRANS3之ADVAN3)。在該模式 建構及共變數分析方法從頭至尾皆使用具有θ - ε之第_ 15 階條件估算法。該方法可確定由雙區室結構ΡΚ模式組元及 、、且a性比例及加性决差模式組元所組成之最佳基線群體ΡΚ 模式。根據該基線群體ΡΚ模式以進行共變數分析。以潛在 共變數評估體重、身體表面積、種族淵源及輕度氣喘之存 在/健康狀態，且發現這些因素皆不會以統計學上顯著性方 2 〇 式影響13·2ν2血清暴露量。該基線及最佳群體ρκ模式參數 列示在表13中。 243 200848429 表··根據該基線及最佳模式之13 2v2群體PK參數 參數 單位 一般值 ± SE CL 升/小時 0.0058 ± 0.00056 V, 升 2.82 ±0.30 Q 升/小時 0.0239 ± 0.0028 ν2 L 2.00 士 0.22 Fi — 0.805 ±0.081 CL之共變數 — 0.076 土 0.012 νι之共變數 0.146 土 0.031 Q之共變數 — 0.345 ±0.061 V2之共變數 — 0.084 ± 0.030 比例誤差(變數） — 0.0238 ± 0.0030 加性誤差(變數） 毫微克/毫升 2390± 1240 附註：該群體ΡΚ模式係根據得自試驗a及試驗Β之 13·2ν2暴露量數據而制訂。 如藉該13 ·2 ν2之基線及最佳群體ΡΚ模式之p〇stier預測 5 檢查而測定，該最低模式可適當地描述這兩種試驗中之血 清13·2ν2觀測結果。而且，導自該等群體分析2PK參數與 導自該等非區室分析之彼等參數一致。 根據该最佳群體ΡΚ模式，進行一系列模擬以比較體重 分別為50公斤、75公斤及130公斤之一般體實驗者的3毫克/ 10 公斤劑量對225毫克固定劑量（就75公斤之受實驗者而言， 劑量為3毫克/公斤）之13.2¥2暴露量及相關變異性。測定在 這些一般受實驗者體内之預測丨3 · 2 ν 2暴露量的9 〇 %信賴區 間。在這些具不同體重之受實驗者體内，固定劑量可產生 一致性13·2ν2暴露量，而毫克/公斤劑量可在體重較重之受 15 實驗者體内產生較高13·2ν2暴露量，在體重較輕的受實驗 者體内產生較低13·2ν2暴露量。當將這些受實驗者匯集在 244 200848429 一起時，如招收具各種體重之受實驗者之任何臨床試驗中 所預測，該毫克/公斤劑量可導致之變異性言於固—劑旦 驗A及試％^之藥物動力學研^ •在氣喘病美國患者及健康的日本及美时實驗者體 5内，13·2ν2暴露量隨自〇.3毫克至4毫克/公斤之劑量增量而 增加； •種族淵源並；ρ會影響13.2ν2藥物動力學特性，在日 本受實驗者體内之13.2v2暴露量與收受柏同劑量之非亞洲 受貫驗者體内之13.2v2暴露量類似； 10 •體重並不會影響13·2ν2藥物動力學特性，因此，固 疋劑1優於毫克/公斤劑量且可得到較低暴露量變異性； •由於健康狀態或罹患輕度氣喘並不會影響1 3 ·2ν2藥 物動力學特性，所以在健康的日本人及非亞洲人體内之 13·2ν2暴露量與在氣喘病美國患者體内之13·2ν2暴露量類 15 似。 熟悉本項技藝者可瞭解或可確定僅使用例行實驗法及 文中所述特定實施例之許多同等物。其它實施例在以下申 請專利範圍内。 【S3式簡單說明】 第1Α圖分別為全長人類及獼猴IL-13，序列辨識編號： 178及序列辨識編號：24之排列。胺基酸差異係由暗盒狀殘 基表示。該R對Q取代之位置（其相當於在過敏患者所檢測之 多形現象）係於位置130經加框。分裂部位之位置係由箭號 表示。 245 200848429 第1B圖為得自可用於產生抗il-13抗體之獼猴IL-13(分 別為序列辨識編號：179-188)的代表性肽之列表。 第2圖為描述如藉CD23+單細胞之％(y-軸）而測知之由 各種IL-13結合劑進行NHP IL-13活性之中和反應的曲線 5 圖。Μ】2-7(Δ)、C65()、及Sil-13RI2-Fc〇)之濃度係標示在 X軸上。 第3圖為描述藉MJ2-7(鼠科動物；·）或人源化MJ2-7 ν·2ΐ1(〇)（文中可交替稱為“hMJ2_7v.2-ll，，或“MJ2-7V.2-11”) 而進行NHP IL-13活性之中和反應的曲線圖。NHP IL-13活 10 性係藉以抗體濃度(X軸）為變數進行STAT6 (y軸)之磷酸化反 應而測知。 第 4 圖為描述藉 MJ2-7v.211(〇)或 sIL_13RI2-Fc〇)而進 行NHP IL-13活性之中和反應的曲線圖。NHP IL-13活性係 藉以拮抗劑濃度(X軸）為變數進行STAT6(y軸）之磷酸化反應 15 而測知。 第 5圖為描述藉MJ2-7(A)、C65()或sIL-13RI2-Fc(·)而 進行NHP IL-13活性之中和反應的曲線圖。nhP IL-13活性 係藉以拮抗劑濃度匕軸）為變數進行STAT6(y，)之磷酸化反 應而測知。 2 0 户卜 第6A圖為描述藉天然人類IL-13(x軸）而誘導生腱蛋白 (tenasdn)產生（y軸）之曲線圖。 第6B圖為描述如藉以抗體濃度(X軸）為變數抑制生腱 蛋白產生（y軸）之誘導而測定的藉MJ2-7所進行之NHP IL-13活性之中和反應的曲線圖。 246 200848429 第7圖為描述MJ2-7或對照組抗體結合至已經和 sIL-13RI2-FC(其係與spR晶片耦合）結合的NHp—IL-丨3之曲 線圖。 第8圖為描述各種濃度（0.09-600nM)之NHP IL-13結合 5至經捕捉hM[J2-7 ν·2-ΐΐ抗體的曲線圖。 第9圖為描述藉小鼠MJ2-7(·)或人源物變體(〇)、變體（） 或變體3 (△)抗體而進行nhp IL_丨3活性之中和反應的曲線 圖。NHP IL-13活性係藉以抗體濃度&軸）為變數進行 STAT6(y軸）之磷酸化反應而測知。
10 第10圖為描述藉包括小鼠MJ2-7 VH及VL(·)、小鼠VH 及人源化變體2 VL(A)或變體2 VH及VL()之抗體而進行 NHP IL-13之中和反應的曲線圖。nhP IL-13活性係藉以抗 體濃度(X軸）為變數進行STAT6(y軸）之磷酸化反應而測知。 第11A及11B圖為描述如藉ELISA而測定之藉MJ2-7抗 15 體而抑制11^13對固定化1L-13受體之結合性的曲線圖。結合 性係以於450奈米之吸光度(y軸）表示。MJ2_7抗體之濃度係 描述在X軸上。第11A圖描述對iL-13Ra 1之結合性。第11B 圖描述對IL-13Ra2之結合性。 第12圖為DPK18種系胺基酸序列（序列辨識編號：126) 20 及人源化奶2_7變體3 VL(序列辨識編號：190)之排列圖。 第13A為成熟、已處置之人的胺基酸序列（序列 辨識編號：124)。 第13B圖為人類IL-13R〇: 1之胺基酸序列（序列辨識編 號：125)。 247 200848429 第14A-14D圖表示與預（基線)試樣比較，虫回蟲制抗後存 在於BAL流體中之細胞總數/毫升及炎症細胞％增加。 第15A-15B圖表示蛔蟲制抗前及後在對照組及經抗體 處置之獼猴中的BAL細胞/毫升在BAL流體中之總數。對照 5 組（明圓圈（〇));經MJ2-7V.2-11處置之試樣（明三角形（△))及 經mAb 13·2ν2處置之試樣(暗三角形在本研究中係使 用 MJ2-7(MJ2-7v.2-ll)及mAb 13·2ν2之人源化變體）。 第16Α-16Β圖表示相對於對照組，在蛔蟲制抗後之自經 抗體處置之獼猴所收集之濃BAL流體中的嗜伊紅趨化因子 10 位準變化。第16Α圖描述表示相對於基線(預制抗值），蛔蟲 制抗後之嗜伊紅趨化因子位準（皮克/毫升)增加的長條圖。 第16Β圖描述與對照組（暗圓圈）比較，在得自經mAb 13.2-(昏暗圓圈）或MJ2-7(昏暗三角形)抗體處置之獼猴的濃 BAL流體中之嗜伊紅趨化因子位準降低。（在本研究中係使 15 用 MJ2-7(MJ2-7v.2-ll)及mAb 13.2 v2之人源化變體）。 第17A-17B圖描述制抗後8週在對照組及經抗體處置之 試樣中的蛔蟲專一性IgE滴定度之變化。第17A圖描述顯示 在經不相關Ig(IVIG，動物20-45 ·，最上面的_組）處置之個 別猴子中的蛔蟲專一性IgE滴定度無變化及在經人源化 20 (動物120-434 ;最下面的一組）處置之個別狼子 中之蛔蟲專一性IgE滴定度降低的代表性實例。第17B圖描 述蛔蟲制抗後8週相對於經非相關ig處置之獼狼(IVIG(昏暗 圓圈）），在mAbl3.2或hMJ2-7-ll(暗圓圈）中之蛔蟲專一性 IgE滴定度降低。 248 200848429 第18A-⑽圖表示制抗後24小時及8週在對照組及經抗 體處置之試驗中虫回蟲專-性嗜驗細胞組織胺釋放的變化。 第18A圖為描述在經鹽液(左）或人源化111八1313以·^右）處置 之代表性個別猴子中之下述試樣的曲線圖：經抗體或虫回蟲 5制抗前之試樣（圓圈）；抗體處置後似小時、虫回蟲制抗後24 小時之試樣（三角形）；及蛔蟲制抗後8週之試樣(鑽石形）。 第18B圖描述顯示蛔蟲制抗前及後8週在對照組（實心累色 長條）、經人源化mAbl3.2-(白色長條）及人源化 MJ2-7v.2-ll-(影線長條)處置之獼猴中之標準化組織胺位準 10 變化的長條圖。 第19圖描述在對照組（明圓圈）及經抗正_13_或地塞米 松(dexamethasone)-處置之試樣（暗圓圈）中之蛔蟲專一性組 織胺釋放及蛔蟲專一性IgE位準間的關聯性。 第20圖為一系列描述經人源化MJ2-7(hMJ2-7v.2-11)處 15 置之個別獼猴之血清IL_13位準變化的長條圖。在各組中之 標記（例如120-452)相當於該猴辨識編號。該“前，，試樣係在 該抗體投藥前收集。該時間“〇，，係在抗體投藥後24小時，但 在虫回蟲制抗前收集。 第21圖為描述在無血清存在(“無血清，，)下；在得自經鹽 20液或1VIG_處置之動物之血清(“對照組，，）的存在下；或在抗 體投藥前(“前”)或特定抗體投藥後丨_2週在得自經抗乩_13抗 體處置之動物的血清之存在下，於〇、1或1〇毫微克/毫升下 之非人類靈長目動物IL-13之STAT6磷酸化活性的長條圖。 以1 ·· 4稀釋濃度測試血清。（在本研究中係使用人源化 249 200848429 MJ2-7(MJ2-7v.2-ll)及mAb 13·2 v2變體）。 第22圖為表示藉在獼猴血清内之人源化MJ2-7 (hMJ2-7v.2-l 1)而截獲之非人類靈長目動物IL-13的位準與 蛔蟲制抗後在該等BAL流體中所測定之炎症程度的關聯性 5 之直線圖。 第23A-23B圖為表示回應人類重組型R110Q IL-n氣管 内注射之小鼠肺機能的改變之直線圖；第23A圖表示回應霧 化乙St丑甲基膽素(metacholine)劑量增加之呼吸道阻力變 化；第23B圖表示回應霧化乙醯丑甲基膽素劑量增加之動態 1〇 肺順應性(Cdyn)變化。 第24 A-24B圖為表示回應人類重組型R110QIL_13鼻内 投藥之小鼠中之肺炎症及細胞素產生增加的長條圖。在第 24A中，係藉細胞分類計數而測定嗜伊紅細胞及嗜中性白血 球在支氣管肺泡灌洗(BAL)中之百分比。在第24B圖中，係 15 藉細胞小粒排列計數而測定細胞素、MCP- ：l、TNF-I、及IL-6 在BAL中之位準。數據為每一群組10隻動物之中位數 ±s.e.m ° 第25A-25B圖為表示支氣管内及靜脈投藥後，在BAL 及血清内之人源化MJ2-7-11 (hMJ2-7v.2-11)抗體位準的點 20 圖。在第1、2、及3天時，以支氣管内投藥方式使動物經人 類重組型R110Q IL-13或等量(20微升）鹽液處置。在第0天及 人類重組型R110Q IL-13之各次投藥前2小時投與人源化 MJ2-7V.2-11抗體。第25A圖描述在第〇天時以靜脈注射方式 投與該抗體及在第1、2、及3天時以腹膜内注射方式投與該 250 200848429 抗體；或在第〇、1、2、及3天時以鼻内投藥方式投與該抗 體（如第25Β圖所示）之結果。藉1LISA而測定BAL及血清中 之人類IgG總位準。 第26A-26C圖表示鼻内投與可誘發肺機能改變之人類 5 重組型R110Q IL-13後，人源化MJ2-7V.2-11抗體之效用。第 26A圖表示以自基線之變化表示的肺阻力（RI ;厘米H20/毫 升/秒）變化。第26B圖表示以誘發相當於自基線之2.5毫升 H20/厘米/秒的變化之肺阻力（RI)所需乙醯丑甲基膽素劑量 表示之數據。表示各處置群組之中位數值。藉雙尾t-檢定法 10 而計算p-值。第26C圖表示在BAL及血清中之人類IgG位準 中位數。 第27A-27D圖表示支氣管内投與人類重組型Rl 10Q IL-13及鼻内投與人源化MJ2-7V.2-11抗體後，僅投與人類重 組型R11OQ IL-13(第27A-27B圖）或與人源化MJ2-7V.2-11抗 15 體一起投與（第27C-27D圖）之BAL及血清位準的變化。表示 各群組之中位數值。n.d.為未檢測。 第28A-28B圖為表示鼻内投與人類重組型rii〇q IL-13 及鼻内投與500、1〇〇、及20微克人源化MJ2-7V.2-11與人源 化13·2ν·2、鹽液或500微克IVIG後，滲入BAL位準内的嗜伊 20 紅血球（第28A圖）及嗜中性白血球（第28B圖）之點圖。藉細胞 分類计數而測定嗜伊紅細胞及嗜中性白血球百分比。表示 各群組之中位數值。藉雙尾檢定法而測定p-值並表示各經 抗體處置之群組與IVIG之比較。 第29A-29C圖為表示鼻内投與人類重組型r11〇q il-13 251 200848429 及鼻内投與500Tg之人源化MJ2-7v.2-ll、人源化13·2ν·2或 IVIG或鹽液後，細胞素位準，分別為MCP-hTNF-I、及IL-6 位準之變化的點圖。虛線表示檢定靈敏性之極限。數據代 表各群組之中位數值。根據雙尾t-檢定法p-值切.0001。 5 第30A-30B圖為表示如藉嗜伊紅血球增多而測定，人類 重組型R110Q IL-13位準與肺炎症有直接關連；且與鼻内投 與人類重組型R110Q IL-13及鼻内投與500、100或20微克劑 量之人源化MJ2-7v.2-11抗體後之人源化MJ2-7v.2-11 B AL 位準成反比之點圖。藉ELISA而測定人源化MJ2-7V.2-11抗 10 體BAL位準。藉細胞小粒計數分析而測定人類重組型 R110Q IL-13 BAL位準。藉細胞分類計數而測定嗜伊紅血球 %。在以下之位準間表示結合性：（第30A圖）嗜伊紅血球性 炎症及人類重組型R110Q IL-13i%，其包括得自以下之數 據：鹽液對照組動物、僅經人類重組型R110Q IL-13處置之 15 小鼠、及經人類重組型R110Q IL-13與500、100、及20Tg之 人源化MJ2-7V.2-11抗體或500微克IVIG處置之小鼠；及（第 30B圖）人源化MJ2-7V.2-11及IL-6之％，其包括得自以下之數 據：經500、100、及20微克人源化MJ2-7V.2-11處置之小鼠。 藉線性回歸分析而測定r2及p-值。 20 第31A-31B圖為表示分別在各種小鼠及大鼠組織内之 [1251]-標記之人源化13·2ν·2抗IL-13抗體及[1251]-標記之人源 化MJ2-7v.2_ll抗體的濃度之直線圖。靜脈注射抗IL-13抗體 後，於卜24、168、及336小時下（第31A圖）或卜48、168、 336、及840小時下（第31B圖）收集組織試樣。 252 200848429 第32A-32B圖為表示經過一段時間後，實測及預測之 IL-13及抗IL-13抗體位準的直線圖。在第32a圖中，係對未 作過實驗對象之獼猴投與1毫克/公斤之人源化MJ2-7v2_n 抗體。使用專一性ELISA在0-45天内定量總IL_13及人源化 5 MJ2-7V.2-11血清位準。根據第4〇圖中所示模式之預測il_i3 及人源化MJ2-7v_2-ll抗體位準係用於比較。在第32B圖 中，係於第〇天對獼猴投與人源化13>.2及人源化 MJ2-7V.2-11抗體並於第！天進行蛔蟲制抗。使用專一性 ELISA在至高120天之時間内定量總IL_13血清位準。 10 第33圖為人源化MJ2-7V.2-11之PK_PD模式的圖式。Ab 為 hMJ2-7v.2-ll。複合體為 hMj2_7v2_u/IL_13複合體。 CLd，Ab及CLAb分別為hMJ2_7v 2_丨丨之分佈清除率及血清清 除率。CLe()mplex及CLil_i3分別為該複合體及丨3之血清清除 率。KsyA零階ΐι13合成速轉數，κ〇η為第二階結合速率 15常數，且K°ff為第一階解離速率常數。V及v2分別為 hMJ2-7v.2-ll在該血清（中央)及第二區室中之分佈體積。 第34圖表不在獼猴組織内之平均hMJ2-7v.2-l 1及總 IL-13/辰度日守間特性。對未作過實驗對象之獼猴投與單一工 笔克/公斤1乂或2毫克/公斤SC劑量之hMJ2-7v.2_ll並對經蛔 20蟲制抗之獼猴投與單一 1〇毫克/公斤IV劑量之 hMJ2 7ν·2 11。该投藥後小時，使用〇·乃微 克豬虫回触抗原進行該制抗。使用定量elisAs測定總3(c) 濃度。數據點表示個別動物值(A)或平均值(B及C)。就該等 平均值而。’在该等平均值之計算不包括SC群組内之第5 253 200848429 號猴子的情況下，丨毫克/公斤_IV群組之N=3，2毫克/公斤 -SC群組之N = 2,而1〇毫克/公斤_IV群組之N=8。誤差長條 圖表示該等平均值之標準偏差。M=猴子。 第35圖為一系列表示使用第33圖中所述之經整合 5 PK-PD模式擬合單一劑量之hMJ2-7v.2-ll後， hMJ2 7ν·2-11⑽合圓圈）及總m(開式圓圈）濃度的適合 度(goodness-of_fit)標繪圖。表示5隻未作實驗對象(N=3，1 *克/公斤IV及N=2，2毫克/公斤Sc)及8隻經蛔蟲制抗的獼 猴（10¾克/公斤，IV)在投與單一劑量之實測 10與預測之個別濃度（A)及個別稱重之殘留物及個別預測之 濃度(B)。與本研究之其它未作實驗對象之猴子比較，由於 末期中之hMJ2_7v.2-ll及總IL-13位準之急劇下降，所以自 這些分析排除該SC群組中之一動物。表示一未作實驗對象 (c)及一經蛔蟲制抗之猴子（D)在χ v注射hM j2_7 ν· 2_丨丨後之 15代表性個別發作，且預測之_2-7ν·2-11及總IL-13位準係 i別由貫線及虛線表示。 第36A及36B圖為描述對獼猴單一 IV投與應仏》] j 後之假性游離態IL_13與總IL-13濃度-時間分析之圖解。就 未作為實驗對象之猴子（第36A圖）而言，在研究丨中其單一 20劑量被認是10毫克/公斤而就經虫回蟲制抗之狼子（第湖圖） 而吕，在研究2中其單一劑量為1〇毫克/公斤且在 hMJ2-7v.2-ll投藥（第⑻後以小時進行虫回蟲制抗。游離態 IL-13係由實線表示，而總乩_13係由虛線表示。 第37A及37B圖為表示對獼猴進行之不同 254 200848429 投藥方式後，假性游離態IL-13濃度-時間分析之圖解。未作 實驗對象之猴子（第圖）及經細蟲制抗之猴子（第圖） 之hMJ2-7v.2-ll(如所示）的單一IV團式劑量為是j、5、1〇、 20或50毫克/公斤。假定於投藥前（第〇天）進行蛔蟲制抗以模 5 擬“减定的呼吸道炎症”情況。 第38圖為自表示人源化MJ2-7V.2-11在正常獼猴及經虫回 蟲制抗之獼狼組織内之濃度•時間分析的PK數據所書出之 直線圖。 第39圖為自表示人源化丨3.2¥.2在正常獼猴及經蛔蟲制 10 抗之獼猴組織内之濃度-時間特性的PK數據所晝出之直線圖。 第40圖為IL-13及抗IL-13抗體配置在獼猴組織内之化 學計量PK-PD模式，其中：Ab為抗IL-13抗體；複合體為八]3 及IL-13複合體；〇01111)為區室；CLdAb&CLAb分別為Ab之分 佈清除率及血清清除率；該複合體之血清清除 15率；KsYN為零階IL_13合成速率常數；KDEG為第一階比_13 降解常數；κοη為第三階結合速率常數；K〇ff為第一階解離 速率#數，VAb&V2Ab*別為在該血清及第二區室内之分佈 視體積，而该模式係基於以下假定·· κ〇η為第3階；抗虬-^ 及IL 13/、有1 2莫耳結合比；且v^IL_n=v複合體=vIL_n=v。 20 第41圖為表示對未作實驗對象之獼猴IV投與1毫克/公 斤之人源化MJ2-7v.2-11後，游離態及人源化MJ2_7v 2_u_ 結合IL-13的預測血清濃度之直線圖。使用得自表8所述之 研究及第34圖所述之濃度_時間特性、及第4〇圖所提供之模 式以預測數據，且其代表費時至高50天。 255 200848429 第42圖為表示對經蛔蟲制抗之獼猴ιν注射1毫克/公斤 之人源化MJ2-7v.2-ll後，游離態及人源化ΜΠ·7ν·2-11-結合 1匕13之預測血清濃度的直線圖。使用得自表8所述之研究 及第34圖所示之濃度-時間分析圖、及第4〇圖所提供之模式 5 以預蜊數據，且其代表費時至高150天。 弟43圖為一糸列表示人源化MJ2-7v.2-l 1之3種PK參數 (CL、^.及“2)之變異體形尺度之直線圖。實線代表使用得 自小鼠、大鼠及猴子之數據基於線性回歸的擬合曲線。虛 線代表95%信賴區間。 1〇 第44圖為表示經抗IL-13抗體治療（開式圓圈）或安慰劑 /0療（閉合圓圈）而處置之人類患者在經過敏原制抗後之於 t間點（過敏原制抗後之時間⑻下的fev 1之變化百分比 $^^1變化％)的直線圖）。所示之結果為初投與抗几_13抗體 或安慰劑前兩週之篩檢日當天進行過敏原制抗之結果。 (h) ·小時；EAR :早期氣喘反應；；lAR :晚期氣喘反應。 第45圖為表示經抗IL-13抗體治療（開式圓圈）或安慰劑 冶療（閉合圓圈）之人類患者在經過敏原制抗後於各時間點 (過敏原制抗後之時間（h))下的FEV1之變化百分比(FEv i變 加 /°)的直線圖。所示結果為初投與抗IL-13抗體或安慰劑 2〇 後，在第14天進行過敏原制抗之結果。（h):小時；EAR : 早期氣喘反應；LAR :晚期氣喘反應。 第46圖為表示經抗IL-13抗體治療（開式圓圈）或安慰劑 治療（閉合圓圈）之人類患者在過敏原制抗後於各時間點（過 敏原制抗後之時間⑻)下，FEV1之變化百分比(吨^變化 256 200848429 %)的直線圖。所示結果為初投與抗几―^抗體或安慰劑後在 第35天進行過敏原制抗之結果。（h):小時；EAR :早期氣 喘反應，LAR :晚期氣喘反應。 第47圖為表示在第14及35天之血清濃度（毫微克/毫升) 5 的曲線圖。 第48圖表示初投與抗體（或安慰劑)後，在第14及35天於 該EAR(早期）及LAR(晚期）期間之最大下降百分比（最大下 降％)及该下降百分比曲線下之面積（下P%AUC)的表。亦顯 示 P值(P-val)。 10 第49圖為表示投藥後經過敏原一段時間（天數），在人類 患者組織内之該13·2ν2抗體血清濃度（毫微克/毫升）的直線 圖。細線係描述以4毫克/公斤之單一漸增劑量投與13·2ν2 抗體之該ΡΚ特性分析。粗線係描述以兩次2毫克/公斤劑量 投與之13·2ν2抗體的ρκ特性分析。這兩次劑量之投藥可分 15 隔一週。 弟50圖為表示得自試驗a及Β之藉毫克/公斤劑量對81 個受貫驗者之個別體重而標準化的個別AUC之曲線圖。 弟51圖為表不得自試驗A及B之藉總劑量（體重*宅克/ 公斤劑量）對81個受實驗者之個別體重而標準化之個別 20 AUC的曲線圖。 弟52圖為表示错實際劑量（體重*毫克/公斤劑量）而標 準化之13.2v2AUC曝露量的曲線圖。 【主要元件符號說明】 (無） 257

Claims (1)

  1. 200848429 十、申請專利範圍： 1·種坪估抗IL-13抗體分子之方法，其包括： 提供該抗IL-13抗體分子在受實驗者體内之至少一 藥物動力學/藥理動力學(PK/PD)參數的平均試驗值；並 比較所得到之平均試驗值與至少一平均參考值； 藉此評估該抗IL-13抗體分子， 其中該平均參考值係選自以下所組成之群組： 對該受實驗者靜脈注射該抗IL-13抗體分子後，平 均CL值在約〇·〇5至0.9毫升/小時/公斤之範圍内；對該受 實驗者靜脈注射後，平均Vdss值小於約150毫升/公斤； 對人類靜脈注射後，平均半衰期（t1/2)為約500至800小 時；對該受實驗者靜脈注射後，劑量標準化平均最佳血 清或血漿濃度為約2至40微克/毫升或對該受實驗者皮 下注射後，約〇_1至30微克/毫升；對該受實驗者靜脈注 射後，平均劑量標準化暴露量為約800至18,000(微克小 時/毫升)/(毫克/公斤）或對該受實驗者皮下注射後，400 至18,〇〇〇(微克小時/毫升)/(毫克/公斤）；對該受實驗者皮 下注射後，生體可用率為約60至90%，且組織對血清比 小於約〇·5，其中該抗IL-13抗體分子包含全長抗體； 對該受實驗者皮下或靜脈注射後，平均半衰期(t1/2) 為約0·5至30小時’其中該抗IL-13抗體分子包含該抗體 分子之抗原結合部位；且 對該受實驗者投藥後，平均清除率小於0.004毫升/ 小時/公斤，其中該抗1L-13抗體分子係與IL-13複合。 200848429 2·種測定抗1L-13抗體分子用於受實驗者之經IL_13媒介 的疾病之治療方式的方法，其包括： k供該抗IL-13抗體分子在受實驗者體内之至少一 PK/PD參數的平均試驗值； 比較所得到之平均試驗值與至少一平均參考值； 根據该至少一平均試驗值與該平均參與值之比 較，每:擇劑3：、時間安排或用藥模式，其中該平均參考 值係選自以下所組成之群組： 對該受實驗者靜脈注射該抗IL_13抗體分子後，平 均CL值在約〇.〇5至0.9毫升/小時/公斤之範圍内；對該受 實驗者靜脈注射後，平均Vdss值小於約150毫升/公斤； 對人類靜脈注射後，平均半衰期（tl/2)為約5〇〇至800小 時；對該受實驗者靜脈注射後，劑量標準化平均最佳血 清或血漿濃度為約2至40微克/毫升或對該受實驗者皮 下注射後，約〇·1至30微克/毫升；對該受實驗者靜脈注 射後，平均劑量標準化暴露量為約800至18,000(微克小 時/毫升)/(毫克/公斤）或對該受實驗者皮下注射後，400 至18,000(微克小時/毫升)/(毫克/公斤）；對該受實驗者皮 下注射後，生體可用率為約60至90%，且組織對血清比 小於約0.5，其中該抗IL-13抗體分子包含全長抗體； 對該受實驗者皮下或靜脈注射後，平均半衰期(t1/2) 為約0.5至30小時，其中該抗il-13抗體分子包含該抗體 分子之抗原結合部位；且 對該受實驗者投藥後，平均清除率小於0.004毫升/ 2 200848429 小時/公斤，其中該抗IL-13抗體分子係與IL-13複合。 3. 如申請專利範圍第1或2項之方法，其中該平均參考值包 括對該受實驗者靜脈注射後，在約0.065至0.3毫升/小時 /公斤之範圍内的平均血清清除率（CL)。 4. 如申請專利範圍第1或2項之方法，其中該平均參考值包 括對該受實驗者靜脈注射後，小於約110毫升/公斤之平 均穩態分佈體積(Vdss)值。 5. 如申請專利範圍第1或2項之方法，其中該平均參考值包 括約670至725之平均半衰期（t1/2)。 6. 如申請專利範圍第1或2項之方法，其中該平均試驗值或 不論是否符合預定關係之指示值可經記憶。 7. 如申請專利範圍第1項之方法，其中該提供平均試驗者 之步驟包括獲得該抗體分子之試樣並測試該等PK/PD 參數中之至少一個。 8. 如申請專利範圍第1或2項之方法，其中該受實驗者為嚙 齒目動物或靈長目動物。 9. 如申請專利範圍第1或2項之方法，其中該受實驗者為人 類。 10. 如申請專利範圍第9項之方法，其中該人類具有約50-80 公斤之體重。 11. 一種治療受貫驗者之IL-13相關疾病的方法’其包括· 對惟患該IL-13相關疾病或有惟患該疾病的危險之 受實驗者投與藉申請專利範圍第1項之方法而評估之有 效量的抗IL-13抗體分子。 3 200848429 12· —種治療受實驗者之虬_13相關疾病的方法，其包括： 以藉申請專利範圍第2項之方法而測定之劑量、時 間安排或用藥模式對罹患該IL_13相關疾病或有罹患該 疾病的危險之受實驗者投與抗IL-13抗體分子。 13·如申明專利範圍第12或13項之方法，其中該IL-13相關 疾病係選自以下所組成之群組：氣喘性疾病、特應性疾 病、慢性阻塞性肺病（COPD)、包括呼吸道炎症、嗜伊 紅血球增多、纖維變性及過量黏液產生之病症、炎症、 自體免疫病症、腫瘤或癌、病毒感染、及保護性第1型 免疫反應之表現性的抑制。 14· 一種指引接受者使用抗IL-13抗體分子以治療IL-13相關 疾病之方法，其包括： 向該接受者說明該抗IL-13抗體分子之選自以下所 組成之群組的PK/PD參數具有至少一平均試驗值： 其中该平均參考值係選自以下所組成之群組： 對该受實驗者靜脈注射該抗IL-13抗體分子後，平 均CL值在約〇·05至〇·9毫升/小時/公斤之範圍内；對該受 實驗者靜脈注射後，平均vdss值小於約15〇毫升/公斤； 對人類靜脈注射後，平均半衰期（ti/2)為約5〇〇至8〇〇小 日寸，對该又：貫驗者靜脈注射後，劑量標準化平均最佳血 清或血漿濃度為約2至4〇微克/毫升或對該受實驗者皮 下/主射後，約〇·1至3〇微克/毫升；對該受實驗者靜脈注 射後，平均劑量標準化暴露量為約800至18,000(微克小 時/毫升)/(毫克/公斤）或對該受實驗者皮下注射後，4〇〇 4 200848429 至18,〇〇〇(微克小時/毫升)/(毫克/公斤）；對該受實驗者皮 下注射後，生體可用率為約60至90%，且組織對血清比 小於約0.5，其中該抗IL-13抗體分子包含全長抗體； 對該受實驗者皮下或靜脈注射後，平均半衰期（t1/2) 為約0.5至30小時，其中該抗IL-13抗體分子包含該抗體 分子之抗原結合部位；且 對該受實驗者投藥後，平均清除率小於0.004毫升/ 小時/公斤，其中該抗IL-13抗體分子係與IL-13複合。 15.如申請專利範圍第14項之方法，其中該接受者為病患、 藥劑師、照顧者、臨床醫師、醫療人員之成員、製造者 或批發商。 •如申請專利範圍第14項之方法，其中該方法進一步包括 冗錄或記憶該抗體分子之該等試驗值中之一或多種。 γη 一 種治療罹患該IL-13相關疾病或罹患該疾病之危險的 又實驗者之方法，其包括： 向照顧者或病患說明抗IL-13抗體之選自以下所組 成之群組的PK/PD參數具有至少一平均試驗值： 其中該平均參考值係選自以下所組成之群組： 對該受實驗者靜脈注射該抗IL-13抗體分子後，平 均CL值在約0·05至〇·9毫升/小時/公斤之範圍内；對該受 實驗者靜脈注射後，平均vdss值小於約15〇毫升/公斤； 對人類靜脈注射後，平均半衰期（ti2)為約5〇〇至8〇〇小 日守’對该文貫驗者靜脈注射後，劑量標準化平均最佳血 清或血製濃度為約2至40微克/毫升或對該受實驗者皮 5 200848429 下注射後，約〇·1至30微克/毫升；對該受實驗者靜脈注 射後，平均劑量標準化暴露量為約800至18,000(微克小 時/毫升)/(毫克/公斤）或對該受實驗者皮下注射後，400 至18,000(微克小時/毫升)/(毫克/公斤）；對該受實驗者皮 下注射後，生體可用率為約60至90%，且組織對血清比 小於約0.5，其中該抗IL-13抗體分子包含全長抗體； 對該受實驗者皮下或靜脈注射後，平均半衰期（t 1/2) 為約0.5至30小時，其中該抗IL-13抗體分子包含該抗體 分子之抗原結合部位；且 對該受實驗者投藥後，平均清除率小於0.004毫升/ 小時/公斤，其中該抗IL-13抗體分子係與IL-13複合。 18·如申請專利範圍第1、2、11、12、14或17項中任一項之 方法，其中該抗IL-13抗體分子包括可形成能在KD小於 10_7M下結合至IL-13之抗原結合部份的重鏈免疫球蛋白 可變結構域序列及輕鏈免疫球蛋白可變結構域序列，其 中該抗體分子具有以下性質中之一或多種： (a) 該重鏈免疫球蛋白可變結構域序列之重鏈 CDR3與mAb MJ2-7之重鏈CDR3相差少於3個胺基酸取 代物； (b) 該輕鏈免疫球蛋白可變結構域序列之輕鏈cdr 與mAb MJ2-7之對應輕鏈CDR相差少於3個胺基酸取代 物； (c) 該重鏈免疫球蛋白可變結構域序列包括一可藉 核酸編碼之序列，於高嚴厲條件下該核酸可以與能將 6 200848429 V2.1、V2.3、V2.4、V2.5、V2.6、V2.7或V2.ll之重鏈可 變結構域編碼的核酸之補體進行雜交反應； (d) 該輕鏈免疫球蛋白可變結構域序列包含一可藉 核酸編碼之序列，於高嚴厲條件下該核酸可以與能將 V2.11之輕鏈可變結構域編碼的核酸之補體進行雜交反 應， (e) 該重鏈免疫球蛋白可變結構域序列與V2.1、 V2.3、V2.4、V2.5、V2.6、V2.7或V2.ll之重鏈可變結 構域的相同度為至少90% ; (f) 該輕鏈免疫球蛋白可變結構域序列與V2.11之 輕鏈可變結構域之相同度為至少90% ; (g) 該抗體分子可以與mAb MJ2-7競爭對人類 IL_13之結合性； (h) 該抗體分子可接觸得自選自由序列辨識編號： 24或序列辨識編號：178之殘基116、117、118、122、 123、124、125、126、127及 128所組成之群組的IL-13 之一或多種胺基酸殘基； (i) 該重鏈可變結構域序列具有與超可變環1、2及/ 或3中之mAbMJ2-7相同的正則結構； (j) 該輕鏈可變結構域序列具有與超可變環1、2及/ 或3中之mAb MJ2-7相同之正則結構；及 (k) 該重鏈可變結構域及/或輕鏈可變結構域序列 具有得自可分別藉胚源細胞系基因DP-54及DPK-9而編 碼之VH鏈段的FR1、FR2及FR3框架結構區，或一與可 7 200848429 藉胚源細胞系基因DP-54及DPK-9而編碼之VH鏈段的 相同度為至少95%之序列。 19. 如申請專利範圍第18項之方法，其中該抗IL-13抗體分 子為全長抗體或其片段。 20. 如申請專利範圍第18項之方法，其中該抗IL-13抗體分 子可減少IL-13結合至IL-13RI1或IL-13RI2之能力。 21. 如申請專利範圍第18項之方法，其中該抗IL-13抗體分 子包括具有一以下序列之重鏈可變結構域序列： ⑴在 CDR1 中，G-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-(MI)-H (序 列辨識編號：48) (ii) 在 CDR2 中，（λΥίΟ-Ι-ϋ-Ρ-βΑρΝ-Ο-Ν-Ι-Κ-Υ-βΟΗΡί^-Κ-Ρ-Ρ-ΟΙ 序列辨識編號 ： 49) ; 及 (iii) 在CDR3 中，SEENWYDFFDY(序歹ij 辨識編號： 17);及 具有以下序列之輕鏈可變結構域序列； ⑴在CDR1 中，（RK)-S-S-Q-S-(LI)-(KV)-H-S-(ND)-G-N-(TN)-Y-L-(EDNQYAS)(序列辨識編號：25); (ii) 在 CDR2 中，K-(LVI)-S-(NY)-(RW)-(FD)-S(序列 辨識編號：27);及 (iii) 在 CDR3 中，Q-(GSA)-(ST)-(HEQ)-I_P (序歹 辨識 編號：28)。 22. 如申請專利範圍第18項之方法，其中該抗IL-13抗體分 子包含具有一以下序列之重鏈可變結構域序列： 在CRD1中，GFNIKDTYIH(序歹J辨識編號：15); 200848429 在 CRD2 中，RIDPANDNIKYDPKFQG (序列辨識編 號：16);及 在CRD3中，SEENWYDFFDY (序歹ij辨識編號：17);及 具有以下序列之輕鏈可變結構域序列： 在 CRD1 中，RSSQSIVHSNGNTYLE (序歹 ij 辨識編 號·· 18); 在CRD2中，KVSNRFS (序歹ij辨識編號：19);及 在CRD3中，FQGSHIPYT (序歹辨識編號：20)。 23. —種使用包括中央區室（CAb，V)及周邊區室（C2,Ab，V2)之 雙區室模式評估藥物-配位體複合物在受實驗者體内之 數量的方法，該方法包括： 於特定時間間隔下’提供該樂物-配位體濃度在該 體實驗者體内之至少一藥物動力學參數值，該值係選自 以下之一或多個：得自該中央區室之藥物的清率（CLAb): 在該中央區室與周邊區室間之分佈清除率（CLd,Ab);結合 速率常數(K。。）；解離速率常數(Kf);該藥物-配位體複 合體之血清清除率（CLec)mplex);或配位體產生之内源性速 率常數除以該配位體之血清清除率（Ksyn/CLIL_13); 使用如第39圖所代表之雙區室模式以評估該受實 驗者體内之至少一藥物動力學參數。 24. 如申請專利範圍第23項之方法，其中該雙區室模式如 200848429 dCAh fdt^[m^CLJJh.C2M ~(CLdtAh ^CLAh).CAb\!V ^Ab * ^ Αί>~·{ίΙ····Π) //---13)2 ) + Ab-UL-n) 當/ = 0, 4=/續⑴ dC2Jdt ^(CL,Jh *C：Ab ~~CLdJh ^C\Ah)/V2 當，= 0，CL=0 (2) ^c_3)m = K，(c -CL mC Λ il-n ^ ^ Ab~{H,~\y\ ^^ ,46-(//.-13)2 ^complex w ^ Ab~(IL-\3)人q _ · CAb、fL—'3) · (CU，A3 -當— =0 (/备(//.-，3) + 尺(# · (/4M "-")2 c 勝(m)2J (3) dCAb 偶」dt = Kon.CA^，(C //,-13 ~ ^ AhAJL-\ 3) ^ ^ Ah-iJLA 3)2 , ^ ^complex ^ ^ Ah~(JL~l3)2 ^ Λh--{JL~ 13)2 (4) (5) 當，二 o，c0 =0 ^ ) Ah \Η Λ\\λ ^7/.-13 = [^yV« ^^//-13 # (Qa-13 ~ "~ ^Ab-{IL-m2 )]7 ^ —Km · c M · (C fI 一'3 Ί? · c 务⑶ _B) · ((?"_ + + K()# # (JAIHn，u)2 當⑽，Ct—n=K-/CL㈣ 就/v團式劑量而言 /吨)=劑量 ⑹ 就*^劑量而言 /冲) = &·/τ·劑量 (7) 25.如申請專利範圍第23或24項之方法，其中該藥物-配位 體複合體為配位體-抗體複合體或配位體-可溶性體複合 物。 26. —種治療或預防受實驗者之早期氣喘病反應（EAR)的方 法，該方法包括對罹患EAR或有罹患該疾病之危險的受 實驗者投與抗IL-13抗體分子。 27. 如申請專利範圍第26項之方法，其中該抗IL-13抗體分 10 200848429 付降低或預防以下之—或多種：至少-過敏性介體， 諸如白三烯素及/或組織胺之釋放；至少一過敏性介 體，諸如白三烯素及/或組織胺之位準的增加；支氣管 縮小；及/或呼吸道水腫。 28· -種治療或預时實驗者之早#錢喘狀馨ar)的方 法，該方法包括： 以藉申請專利範圍第2項之方法而測定的劑量、時 間安排或賴模式，對罹患EAR·罹患該疾病之危險 的受實驗者投與抗IL-13抗體分子。 29. —種治療或預防受實驗者之晚期氣喘病反應(ear)的方 法，该方法包括對罹患LAR或有罹患該疾病之危險的受 實驗者投與抗IL-13抗體分子。 30. —種治療或預防受實驗者之晚期氣喘病反應(EAR)的方 法，該方法包括： 以措申晴專利範圍弟2項之方法而測定之劑量、時 間女排或用樂方式對惟患LAR或有羅患該疾病之危險 的受實驗者投與抗IL-13抗體分子。 31·如申請專利範圍第26至30項中任一項之方法，其中該抗 IL-13抗體分子包括 < 形成能在Kd小於10 7M下結合至 IL-13之抗原結合部份的重鏈免疫球蛋白可變結構域序 列及輕鏈免疫球蛋白玎變結構域序列，其中該抗體分子 具有以下性質中之〆或多種： (a)該重鏈免疾球蛋白可變結構域序列之重鏈 CDR3與mAb MJ2-7之重鏈CDR3相差少於3個胺基酸取 200848429 代物； (b) 該輕鏈免疫球蛋白可變結構域序列之輕鏈cdR 與mAb MJ2-7之對應輕鏈CDR相差少於3個胺基酸取代 物； (c) 該重鏈免疫球蛋白可變結構域序列包括一可藉 核酸編碼之序列’於高嚴厲條件下該核酸可以與能將 V2]、V2.3、V2.4、V2.5、V2.6、V2.7或V2.ll之重鏈可 變結構域編碼的核酸之補體進行雜交反應； (d) 該輕鏈免疫球蛋白可變結構域序列包含一可藉 核酸編碼之序列’於高嚴厲條件下該核酸可以與能將 V2· 11之輕鏈可變結構域編碼的核酸之補體進行雜交反 應； (e) 該重鏈免疫球蛋白可變結構域序列與V2.1、 V2.3、V2.4、V2.5、V2.6、V2.7或V2.ll之重鏈可變結 構域的相同度為至少90% ; (f) 該輕鏈免疫球蛋白可變結構域序列與V2.11之 輕鏈可變結構域之相同度為至少90% ; (g) 該抗體分子可以與mAb MJ2-7競爭對人類 IL-13之結合性； (h) 該抗體分子可接觸得自選自由序列辨識編號： 24或序列辨識編號：178之殘基116、117、118、122、 123、124、125、126、127及 128所組成之群組的il-13 之一或多種胺基酸殘基； (i) 該重鏈可變結構域序列具有與超可變環1、2及/ 12 200848429 或3中之mAb MJ2-7相同的正則結構； ⑴該輕鏈可變結構域序列具有與超可變環1、2及/ 或3中之mAb MJ2-7相同之正則結構；及 (k)該重鏈可變結構域及/或輕鏈可變結構域序列 具有得自可分別藉胚源細胞系基因DP-54及DPK-9而編 碼之VH鏈段的FR1、FR2及FR3框架結構區，或一與可 藉胚源細胞系基因DP-54及DPK-9而編碼之VH鏈段的 相同度為至少95%之序列。 32. —種治療受實驗者之IL-13相關疾病的方法，該方法包 括對罹患該IL-13相關疾病或有罹患該疾病之危險的受 實驗者投與一或多固定劑量之抗IL-13抗體分子。 33. 如申請專利範圍第32項之方法，其中該固定劑量在約75 毫克與約500毫克之間。 34. 如申請專利範圍第33項之方法，其中該固定劑量為約 75、200或225毫克。 35. 如申請專利範圍第32-34項中任一項之方法，其中係約 每週一次、約每2週一次、約每3週一次或約每4週一次 對該受實驗者投與該固定劑量。 13
TW097114612A 2007-04-23 2008-04-22 Methods and compositions for treating and monitoring treatment of IL-13-associated disorders TW200848429A (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US92607807P 2007-04-23 2007-04-23
US92593207P 2007-04-23 2007-04-23

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW200848429A true TW200848429A (en) 2008-12-16

Family

ID=39689094

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW097114612A TW200848429A (en) 2007-04-23 2008-04-22 Methods and compositions for treating and monitoring treatment of IL-13-associated disorders

Country Status (14)

Country Link
US (1) US20090068195A1 (zh)
EP (1) EP2137215A2 (zh)
JP (1) JP2010527916A (zh)
CN (1) CN101977935A (zh)
AR (1) AR066240A1 (zh)
BR (1) BRPI0810561A2 (zh)
CA (1) CA2685123A1 (zh)
CL (1) CL2008001182A1 (zh)
MX (1) MX2009011366A (zh)
PA (1) PA8778101A1 (zh)
PE (1) PE20090154A1 (zh)
RU (1) RU2009140134A (zh)
TW (1) TW200848429A (zh)
WO (1) WO2008131376A2 (zh)

Families Citing this family (34)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AR049390A1 (es) 2004-06-09 2006-07-26 Wyeth Corp Anticuerpos contra la interleuquina-13 humana y usos de los mismos
US7501121B2 (en) * 2004-06-17 2009-03-10 Wyeth IL-13 binding agents
GB0509512D0 (en) * 2005-05-10 2005-06-15 Novartis Ag Organic compounds
US20100260668A1 (en) * 2008-04-29 2010-10-14 Abbott Laboratories Dual Variable Domain Immunoglobulins and Uses Thereof
SG190572A1 (en) * 2008-04-29 2013-06-28 Abbott Lab Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
RU2010153578A (ru) * 2008-06-03 2012-07-20 Эбботт Лэборетриз (Us) Иммуноглобулины с двойными вариабельными доменами и их применение
CA2726087A1 (en) * 2008-06-03 2009-12-10 Tariq Ghayur Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
RU2011104348A (ru) * 2008-07-08 2012-08-20 Эбботт Лэборетриз (Us) Иммуноглобулины с двойным вариабельным доменом против простагландина е2 и их применение
GB0905972D0 (en) 2009-04-06 2009-05-20 Medical Res Council Antibodies against IL-17BR
UY32808A (es) * 2009-07-29 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas como dominio variable dual y usos de las mismas
KR20120060877A (ko) * 2009-09-01 2012-06-12 아보트 러보러터리즈 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도
US8691522B2 (en) * 2009-10-08 2014-04-08 Aeon Medix Inc. Composition comprising extracellular membrane vesicles derived from indoor air, and use thereof
AU2010306677B2 (en) * 2009-10-15 2013-05-23 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
UY32979A (es) 2009-10-28 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
KR20130100118A (ko) 2010-08-03 2013-09-09 아비에 인코포레이티드 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도
CA2809433A1 (en) 2010-08-26 2012-03-01 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
CA2816803A1 (en) * 2010-11-02 2012-05-10 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
SG190938A1 (en) * 2010-12-06 2013-07-31 Seattle Genetics Inc Humanized antibodies to liv-1 and use of same to treat cancer
AU2011343570B2 (en) * 2010-12-16 2016-11-03 Genentech, Inc. Diagnosis and treatments relating to TH2 inhibition
CA2831732C (en) * 2011-03-31 2019-12-31 Genentech, Inc. Use of a monoclonal anti-beta7 antibody for treating gastrointestinal inflammatory disorders
EP2734236A4 (en) * 2011-07-13 2015-04-15 Abbvie Inc METHOD AND COMPOSITIONS FOR TREATING ASTHMA WITH ANTI-IL-13 ANTIBODIES
TW201333035A (zh) 2011-12-30 2013-08-16 Abbvie Inc 針對ｉｌ－１３及／或ｉｌ－１７之雙特異性結合蛋白
RU2014139546A (ru) * 2012-03-27 2016-05-20 Дженентек, Инк. Методы прогнозирования, диагностики и лечения идиопатического легочного фиброза
CA2875683A1 (en) * 2012-06-05 2013-12-12 The Australian National University Vaccination with interleukin-4 antagonists
CA2890263C (en) 2012-11-01 2020-03-10 Abbvie Inc. Anti-vegf/dll4 dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
WO2014144280A2 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Abbvie Inc. DUAL SPECIFIC BINDING PROTEINS DIRECTED AGAINST IL-1β AND / OR IL-17
US10093733B2 (en) 2014-12-11 2018-10-09 Abbvie Inc. LRP-8 binding dual variable domain immunoglobulin proteins
TW201710286A (zh) 2015-06-15 2017-03-16 艾伯維有限公司 抗ｖｅｇｆ、ｐｄｇｆ及／或其受體之結合蛋白
PE20180778A1 (es) 2015-08-07 2018-05-07 Alexo Therapeutics Inc Construcciones con un dominio sirp-alfa o sus variantes
MA45324A (fr) 2016-03-15 2019-01-23 Seattle Genetics Inc Polythérapie utilisant un adc-liv1 et un agent chimiothérapeutique
CN109705217B (zh) * 2017-10-25 2020-09-11 北京智仁美博生物科技有限公司 抗il-13抗体及其用途
MA53493A (fr) * 2018-08-31 2021-07-07 Alx Oncology Inc Polypeptides leurres
US20210277131A1 (en) * 2019-03-26 2021-09-09 Aslan Pharmaceuticals Pte Ltd TREATMENT EMPLOYING ANTI-IL-l3R ANTIBODY OR BINDING FRAGMENT THEREOF
WO2020243338A1 (en) 2019-05-31 2020-12-03 ALX Oncology Inc. Methods of treating cancer with sirp alpha fc fusion in combination with an immune checkpoint inhibitor

Family Cites Families (59)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5225539A (en) * 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
EP0307434B2 (en) * 1987-03-18 1998-07-29 Scotgen Biopharmaceuticals, Inc. Altered antibodies
US5359037A (en) * 1988-09-12 1994-10-25 Yeda Research And Development Co. Ltd. Antibodies to TNF binding protein I
WO1990005183A1 (en) * 1988-10-31 1990-05-17 Immunex Corporation Interleukin-4 receptors
US5530101A (en) * 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5011778A (en) * 1989-05-23 1991-04-30 Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. Monoclonal antibodies directed to IL-1 activated endothelial cells and medicaments employing the monoclonal antibodies
US5859205A (en) * 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
US5246701A (en) * 1990-10-05 1993-09-21 Ludwig Institute For Cancer Research Method for inhibiting production of IgE by using IL-9 inhibitors
DE69206301T2 (de) * 1991-03-29 1996-06-13 Sanofi Sa Protein mit der Aktivität vom Typ von Cytokin, dafür kodierende rekombinante DNS, transformierte Zellen und Mikroorganismen.
ES2206447T3 (es) * 1991-06-14 2004-05-16 Genentech, Inc. Anticuerpo humanizado para heregulina.
US5397703A (en) * 1992-07-09 1995-03-14 Cetus Oncology Corporation Method for generation of antibodies to cell surface molecules
US5596072A (en) * 1992-08-21 1997-01-21 Schering Corporation Method of refolding human IL-13
NZ273207A (en) * 1993-09-02 1997-09-22 Dartmouth College Igg antibodies gp39 (cd40)
US5928904A (en) * 1993-09-07 1999-07-27 Smithkline Beecham Corporation DNA encoding recombinant IL4 antibodies useful in treatment of IL4 mediated disorders
GB9415379D0 (en) * 1994-07-29 1994-09-21 Smithkline Beecham Plc Novel compounds
US5696234A (en) * 1994-08-01 1997-12-09 Schering Corporation Muteins of mammalian cytokine interleukin-13
US5705154A (en) * 1995-03-08 1998-01-06 Schering Corporation Humanized monoclonal antibodies against human interleukin-4
US6911530B1 (en) * 1995-10-23 2005-06-28 Amrad Operations, Pty., Ltd. Haemopoietin receptor and genetic sequences encoding same
FR2742156A1 (fr) * 1995-12-06 1997-06-13 Sanofi Sa Polypeptide recepteur de l'il-13
US5710023A (en) * 1996-03-01 1998-01-20 Genetics Institute, Inc. IL-13 cytokine receptor chain
US6664227B1 (en) * 1996-03-01 2003-12-16 Genetics Institute, Llc Treatment of fibrosis by antagonism of IL-13 and IL-13 receptor chains
US7078494B1 (en) * 1996-03-01 2006-07-18 Genetics Institute, Llc Antibodies to human IL-13bc and methods of their use in inhibiting IL-13 binding
GB9625899D0 (en) * 1996-12-13 1997-01-29 Glaxo Group Ltd Substances and their uses
US6387615B2 (en) * 1997-04-11 2002-05-14 Isis Innovation Limited Methods and materials for the diagnosis or prognosis of asthma
GB9723553D0 (en) * 1997-11-07 1998-01-07 Duff Gordon W Prediction of the risk of chronic obstructive airway disease
ATE531812T1 (de) * 1997-12-05 2011-11-15 Scripps Research Inst Humanisierung von nager-antikörpern
US6746839B1 (en) * 1998-01-12 2004-06-08 Interleukin Genetics, Inc. Diagnostics and therapeutics for an obstructive airway disease
US6576232B1 (en) * 1998-04-03 2003-06-10 The Penn State Research Foundation IL13 mutants
US7083950B2 (en) * 1998-09-25 2006-08-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. High affinity fusion proteins and therapeutic and diagnostic methods for use
US7553487B2 (en) * 1998-12-14 2009-06-30 Genetics Institute, Llc Method and compositions for treating asthma
MXPA01006006A (es) * 1998-12-14 2004-08-12 Genetics Inst Cadena receptora de citocina.
US6737056B1 (en) * 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
GB0004016D0 (en) * 2000-02-22 2000-04-12 Royal Brompton Hospital Biological material and uses thereof
EP1268794A2 (en) * 2000-04-07 2003-01-02 Heska Corporation Compositions and methods related to canine igg and canine il-13 receptors
AU8867501A (en) * 2000-09-01 2002-03-13 Biogen Inc Co-crystal structure of monoclonal antibody 5c8 and cd154, and use thereof in drug design
KR20030074693A (ko) * 2000-12-28 2003-09-19 알투스 바이올로직스 인코포레이티드 전항체 및 이의 단편의 결정과 이의 제조 및 사용 방법
GB0105360D0 (en) * 2001-03-03 2001-04-18 Glaxo Group Ltd Chimaeric immunogens
AUPR544401A0 (en) * 2001-06-04 2001-06-28 Bischof, Robert Juergen Animal model for allergy
US20030013851A1 (en) * 2001-06-07 2003-01-16 Robert Powers Solution structure of IL-13 and uses thereof
US7321026B2 (en) * 2001-06-27 2008-01-22 Skytech Technology Limited Framework-patched immunoglobulins
US20040234499A1 (en) * 2001-10-26 2004-11-25 David Shealy Asthma-related anti-IL-13 immunoglobulin derived proteins, compositions, methods and uses
US20040248260A1 (en) * 2001-10-26 2004-12-09 Heavner George A. IL-13 mutein proteins, antibodies, compositions, methods and uses
CA2468950A1 (en) * 2001-11-27 2003-06-05 Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. Anti-il13 receptor .alpha.1 neutralizing antibody
AU2002258011B2 (en) * 2001-12-04 2009-01-08 The Government Of The United States, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services National Institutes Of Health Chimeric molecule for the treatment of TH2-like cytokine mediated disorders
EP1576013A4 (en) * 2002-03-22 2008-08-13 Amrad Operations Pty Ltd MONOCLONAL ANTIBODY AGAINST THE INTERLEUKIN-13 RECEPTOR ALPHA 1 (IL-13RA1)
WO2003086451A1 (en) * 2002-04-05 2003-10-23 Centocor, Inc. Asthma-related anti-il-13 immunoglobulin derived proteins, compositions, methods and uses
EP1499354A4 (en) * 2002-05-01 2007-07-25 Regeneron Pharma METHOD OF USE OF CYTOKINE ANTAGONISTS FOR THE TREATMENT OF HIV INFECTION AND AIDS
JP4689268B2 (ja) * 2002-06-14 2011-05-25 ザ ガバメント オブ ザ ユナイテッド ステイツ オブ アメリカ アズ リプレゼンテッド バイ ザ セクレタリー オブ ザ デパートメント オブ ヘルス アンド ヒューマン サービシーズ Ｉｌ−１３およびｎｋ−ｔ細胞に関する、結腸炎を処置および予防する方法
JP2004121218A (ja) * 2002-08-06 2004-04-22 Jenokkusu Soyaku Kenkyusho:Kk 気管支喘息または慢性閉塞性肺疾患の検査方法
GB0407315D0 (en) * 2003-07-15 2004-05-05 Cambridge Antibody Tech Human antibody molecules
JP4943161B2 (ja) * 2003-12-23 2012-05-30 ジェネンテック， インコーポレイテッド 新規抗ｉｌ１３モノクローナル抗体での癌の処置
US20050164323A1 (en) * 2003-12-24 2005-07-28 Wyeth Methods of treating asthma
EP1713441A2 (en) * 2004-02-12 2006-10-25 Nektar Therapeutics Interleukin-13 antagonist powders, spray-dried particles, and methods
CA2557724A1 (en) * 2004-02-27 2005-10-06 Centocor, Inc. Methods and compositions for treating il-13 related pathologies
US7501121B2 (en) * 2004-06-17 2009-03-10 Wyeth IL-13 binding agents
AR049390A1 (es) * 2004-06-09 2006-07-26 Wyeth Corp Anticuerpos contra la interleuquina-13 humana y usos de los mismos
US20090098142A1 (en) * 2004-06-09 2009-04-16 Kasaian Marion T Methods and compositions for treating and monitoring treatment of IL-13-associated disorders
US20070048785A1 (en) * 2004-06-09 2007-03-01 Lin Laura L Anti-IL-13 antibodies and complexes
BRPI0720280A2 (pt) * 2006-12-11 2014-01-28 Wyeth Corp Métodos e composições para tratar e monitorar tratamento de desordens associadas à il-13

Also Published As

Publication number Publication date
PA8778101A1 (es) 2008-11-19
CN101977935A (zh) 2011-02-16
AR066240A1 (es) 2009-08-05
CA2685123A1 (en) 2008-10-30
MX2009011366A (es) 2009-11-05
JP2010527916A (ja) 2010-08-19
WO2008131376A2 (en) 2008-10-30
US20090068195A1 (en) 2009-03-12
EP2137215A2 (en) 2009-12-30
BRPI0810561A2 (pt) 2019-09-24
CL2008001182A1 (es) 2009-01-16
RU2009140134A (ru) 2011-05-27
WO2008131376A3 (en) 2009-02-05
PE20090154A1 (es) 2009-03-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TW200848429A (en) Methods and compositions for treating and monitoring treatment of IL-13-associated disorders
AU2005327240B2 (en) IL-13 binding agents
US7943342B2 (en) Nucleic acids encoding IL-13 binding agents
KR101299073B1 (ko) 사람 인터루킨-13에 대한 항체 및 이의 용도
US20090098142A1 (en) Methods and compositions for treating and monitoring treatment of IL-13-associated disorders
TWI740384B (zh) 抗cd40抗體及其用途
EP2089057A2 (en) Methods and compositions for treating and monitoring treatment of il-13-associated disorders
CN101600456A (zh) 治疗il-13相关疾病和监测il-13相关疾病治疗的方法和组合物