CN101977935A

CN101977935A - 用于治疗和监测il-13相关病症的方法和组合物

Info

Publication number: CN101977935A
Application number: CN2008800213299A
Authority: CN
Inventors: Y·瓦格梅斯特; X·许; X·田; D·G·莱布勒; Y·S·周; B·德恩
Original assignee: Wyeth LLC
Current assignee: Wyeth LLC
Priority date: 2007-04-23
Filing date: 2008-04-22
Publication date: 2011-02-16
Also published as: PA8778101A1; AR066240A1; CA2685123A1; MX2009011366A; JP2010527916A; WO2008131376A2; US20090068195A1; EP2137215A2; BRPI0810561A2; CL2008001182A1; RU2009140134A; WO2008131376A3; PE20090154A1; TW200848429A

Abstract

本发明系有关于使用IL-13结合剂以减少或抑制或预防或延缓与IL-13相关疾病或病症之早期及/或晚期有关的一或多种症状之发作的方法及组合物。本发明亦公开用于评估IL-13结合剂在治疗或预防患者，例如人类患者之IL-13相关疾病或病症之动力学及/或效力的方法。

Description

用于治疗和监测IL-13相关病症的方法和组合物

相关申请的交叉参考

本申请案要求2007年4月23日申请之美国专利申请案序号第60/926,078号及第60/925,932号之优先权。前述申请案之全文皆在此并入本案作为参考。

序列表

随本文附上以pdf和txt格式之序列表的电子拷贝。

发明背景

白介素-13(IL-13)为一种由T淋巴细胞和肥大细胞分泌的细胞因子(McKenzie等(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.美国90：3735-39；Bost等(1996)Immunology 87：663-41)。IL-13与IL-4共有数种生物学活性。例如，IL-4或IL-13引起B细胞中IgE同种型转换(Tomkinson等(2001)J.Immunol.166：5792-5800)。再者，已有哮喘患者中细胞表面CD23和血清CD23(sCD23)水平增加的报导(Sanchez-Guererro等(1994)Allergy 49：587-92；DiLorenzo等(1999)Allergy Asthma Proc.20：119-25)。另外，IL-4或IL-13可增量调节B细胞和单核细胞上II类MHC和低亲和力IgE受体(CD23)的表达，其导致增加抗原呈递，并调节巨噬细胞的功能(Tomkinson等，如上述)。重要地，IL-4或IL-13可增加内皮细胞上VCAM-1的表达，其可有利于嗜酸性粒细胞(及T细胞)优先募集至呼吸道组织(Tomkinson，等人，如上述)。IL-4或IL-13也可增加呼吸道黏液的分泌，这可加重呼吸道反应性(Tomkinson等，如上述)。这些观察结果提示：虽然IL-13对诱导Th2发育并非必要的，或者其甚至不能诱导Th2发育，但IL-13在呼吸道嗜酸性粒细胞增多和AHR的发展中可能扮演着关键角色(Tomkinson等，如上述；Wills-Karp等(1998)Science 282：2258-61)。

发明概要

本发明公开用于治疗及/或监测IL-13相关疾病或病症之治疗的方法及组合物。在一实施方案中，申请人已发现相对于未经治疗之患者，IL-13拮抗剂，例如IL-13抗体分子之施用可减轻患者，例如人类之经变应原诱发的早期及/或晚期哮喘反应之至少一症状。在该患者接触变应原后数分钟内、及在早期哮喘反应期间(例如接触该变应原后至高约3小时)，已检测出一或多种哮喘症状之减轻。症状之减轻在晚期哮喘反应(例如变应原接触后约3至24小时期间)仍可维持。在其它实施方案中，系公开评估抗-IL13抗体分子及/或与该抗体分子有关之治疗法的方法。该等评估方法包括检测该患者体内之抗-IL13抗体分子的至少一药物动力学/药效学(PK/PD)参数。因此，亦公开IL-13结合剂或拮抗剂用于减少或抑制、及/或预防或延缓患者之与IL-13相关之疾病或病症的早期及/或晚期有关之一或多种症状之发作的用途。在另外实施方案中，亦公开用于评估IL-13结合剂或拮抗剂在治疗或预防患者之该IL-13相关疾病或病症之动力学及/或效力的方法。

因此，本发明之一方面系描述治疗或预防患者之IL-13相关疾病或病症之早期及/或晚期症状的方法。该方法包括对该患者施用IL-13结合剂或拮抗剂，其施用量能有效减少该疾病或病症之一或多种症状(例如其施用量能有效减少以下症状之一或多种：呼吸症状(例如支气管收缩)、该患者体内之IgE水平、组胺或白三烯之释放或水平、或嗜酸细胞活化趋化因子(eotaxin)水平)。就预防用途(例如用于预防、减少或延缓该疾病或病症之一或多种症状的发作或复发)而言，该患者可或可不罹患该疾病或病症之一或多种症状。例如可在接触危害前或该等症状之任何可检测显现之发作前，或在可检测至少部份，但是并非所有该等症状后，施用该IL-13结合剂或拮抗剂。就治疗用途而言，该治疗法可改善、治愈、保持或降低患者之该疾病或病症之持续时间。在治疗用途中，该患者可具有该等症状之部分或完全显现。在典型的情况下，治疗法可改善患者之疾病或病症至医生可检测之程度或可预防该疾病或病症之恶化。

在一实施方案中，该IL-13结合剂或拮抗剂抑制或减少一或多种与该IL-13相关疾病之早期有关的症状，例如“早期哮喘反应”或“EAR”。例如该IL-13结合剂或拮抗剂在危害(例如变应原接触)后，例如约0.25、约0.5、约1、约1.5、约2、约2.5或约3小时直到危害(例如变应原接触)后约3小时为止，可减轻一或多种与EAR有关之症状。该IL-13结合剂或拮抗剂可降低或预防该EAR之一或多种症状，其包括但不限于以下之一或多种：自例如呼吸道巨大细胞或嗜碱性粒细胞释放至少一种过敏性介质，诸如白三烯(例如LTA₄、LTB₄、LTC₄、LTD₄、LTE₄及/或LTF₄)及/或组胺；至少一种过敏性介质，诸如白三烯及/或组胺之水平增加；支气管收缩；及/或呼吸道水肿。与例如未施用该IL-13结合剂或拮抗剂之患者的该症状之水平或程度比较，该IL-13结合剂或拮抗剂可导致该患者之这些EAR症状之一或多种的减轻。或者，例如与未施用该IL-13结合剂或拮抗剂之患者的该症状之水平或程度比较，该IL-13结合剂或拮抗剂可预防该症状之大增加。

在其它实施方案中，该IL-13结合剂或拮抗剂可抑制或减轻一或多种与IL-13相关疾病之晚期有关的症状，例如“晚期哮喘反应”或“LAR”，方例如在危害(例如变应原接触)后至少约3、约3.5、约4、约4.5、约5、约5.5、约6、约6.5、约7、约8、约9、约10、约11、约12或约13小时至高达危害(例如变应原接触)后约24小时，该IL-13结合剂或拮抗剂可减轻一或多种与LAR有关之症状。例如该IL-13结合剂或拮抗剂可减少或预防LAR之一或多种症状，例如以下症状之一或多种：呼吸道反应性及/或炎症细胞，诸如淋巴细胞、嗜酸性粒细胞及/或巨噬细胞在该等呼吸道及/或支气管黏膜内之流入及/或活化作用。例如，与未施用该IL-13结合剂或拮抗剂之患者的该症状之大小或程度比较，该IL-13结合剂或拮抗剂可导致患者之LAR的这些症状之一或多种的减少。或者，例如与未施用该IL-13结合剂或拮抗剂之患者的该症状之水平或程度比较，该IL-13结合剂或拮抗剂或预防该症状之大增加。

可以在一或多种与该IL-13疾病或病症有关之症状发作或复发前，但是在与该疾病或病症有关之症状完全显现前施用该IL-13结合剂或拮抗剂。在特定实施方案中，系在接触可引发或恶化IL-13相关疾病或病症之介质，例如变应原、污染物、毒性剂、感染物及/或压力前，对患者施用该IL-13结合剂或拮抗剂。在某些实施方案中，可在接触引发及/或恶化该IL-13相关疾病或病症之介质前，期间或其后不久，施用该IL-13结合剂或拮抗剂。例如可在接触该引发或恶化剂前或后1、5、10、25或24小时；2、3、4、5、10、20或30天；或4、5、6、7或8周或更久施用该IL-13结合剂或拮抗剂，典型地，可在接触该引发或恶化剂之前或后24小时与两天之间施用该IL-13结合剂或拮抗剂。在接触该药剂后才进行施用之实施方案中，该患者可未罹患症状或可罹患该等症状之部分显现。例如该患者可具有该疾病或病症之早期阶段的症状。可藉吸入或注射(例如皮下注射)施用各约0.5-10毫克/千克(例如约0.7-5毫克/千克、约0.9-4毫克/千克、约1-3毫克/千克、约1.5-2.5毫克/千克或约2毫克/千克)之剂量。在一实施例中，该单一治疗间隔包括相隔至少4、7、9或14天施用约1-3毫克/千克、约1.5-2.5毫克/千克或约2毫克/千克之两次皮下剂量的抗-IL13抗体分子。例如该单一治疗间隔可包括相隔7天施用约2毫克/千克之两皮下剂量的抗-IL13抗体分子。在某些实施方案中，系对该患者施用固定剂量之抗-IL13抗体分子，例如以下之固定剂量：在约50毫克与500毫克之间、在约60毫克与490毫克之间、在约70毫克与480毫克之间、在约75毫克与460毫克之间、约80毫克至450毫克之间、在约100毫克与约450毫克之间、约150毫克至约400毫克、约200毫克至约300毫克、约200毫克至约250毫克；或约60毫克、65毫克、70毫克、75毫克、80毫克、90毫克、100毫克、125毫克、150毫克、175毫克、200毫克、225毫克或250毫克。可以以约每周一次、每两周一次、每三周一次或每四周一次或其任何组合之计划或如由临床医师决定施用该固定剂量(例如约75毫克、200毫克或225毫克该抗IL-13抗体分子)(或该固定剂量之任何组合)。该抗IL-13抗体之固定剂量的计划实例如下：于第1天之初剂量，继而于约第8、28、42、56、70及84天之剂量。

在一实施方案中，系于单一治疗间隔下施用该IL-13结合剂或拮抗剂，例如以单一剂量施用或以在单一治疗间隔期间不超过2或3次剂量之重复剂量施用，例如在自该初剂量之施用算起一周或更短的时间内施用该重复剂量。

可对罹患或有罹患IL-13相关疾病或病症之危险的患者施用该IL-13拮抗剂或结合剂。典型地，该患者为哺乳动物，例如罹患或有罹患IL-13相关疾病或病症之危险的人类(例如儿童、青少年或成年)。IL-13相关疾病或病症之实例包括，但不限于选自以下之一或多种之疾病：IgE相关疾病，其包括但不限于异位性疾病，例如得自对IL-13之敏感性增加的异位性疾病(例如异位性皮炎、荨麻疹、湿疹、及过敏性病症，诸如过敏性鼻炎及过敏性肠胃炎)；呼吸疾病，例如哮喘(例如过敏性及非过敏性哮喘(例如发生在幼童之由于感染，例如呼吸道合胞病毒(RSV)所致之哮喘))、慢性阻塞性肺病(COPD)、及其它疾病，其包括呼吸道炎症、嗜酸性粒细胞增多、纤维变性及过量黏液产生，例如纤维囊泡症及肺纤维变性；炎性及/或自体免疫疾病或病症，例如皮肤炎性疾病或病症(例如异位性皮炎)、胃肠疾病或病症(例如发炎性肠病(IBD)、溃疡性结肠炎及/或克隆病(Crohn’s disease))、肝疾病或病症(例如肝硬化、肝细胞癌)、及硬皮症；肿瘤或癌(例如软组织或实体肿瘤)，诸如白血病、成胶质细胞瘤、及淋巴瘤，例如霍奇金淋巴瘤(Hodgkin’s lymphoma)；病毒感染(例如得自HTLV-1之病毒感染)；其它器官之纤维变性，例如肝之纤维变性(例如由乙型肝炎及/或丙型肝炎病毒引起之纤维变性)；及保护性第1型免疫反应之表现性的抑制作用(例如在进行接种期间)。

在特定实施方案中，该患者为罹患轻度、中度或重度哮喘，例如特异反应性哮喘之人类。可在变应原接触前、期间或其后进行文中公开之治疗方法及预防方法。例如该患者可以是对季节性变应原，例如豚草过敏之人类或接触普通感冒或流行感冒病毒后或在普通感冒或流行感冒季节期间之哮喘病人者。在该等症状发作前(例如过敏性或哮喘性症状或在过敏反应或普通感冒或流行感冒季节前或期间)，可对该患者施行单一剂量间隔之该抗IL-13结合剂或拮抗剂，藉此可减轻该等症状及/或延缓该疾病或病症之发作。类似地，当治疗其特征为该疾病或病症之复发性潮红或发作之慢性疾病时，可在与一或多种该疾病或病症有关之症状显现前(例如在该等症状完全显现前)进行该IL-13结合剂或拮抗剂之施用。用于治疗过敏性鼻炎或其它过敏性疾病之方法实例可包括在接触变应原，例如在季节性接触变应原之前，例如在变应原大量出现之前，首先以IL-13结合剂或拮抗剂进行治疗。此种治疗法可包括单一治疗间隔，例如单一剂量之该IL-13结合剂或拮抗剂。在其它实施例中，该IL-13结合剂或拮抗剂系与过敏反应免疫治疗法一起施用。例如该IL-13结合剂或拮抗剂系与过敏反应免疫剂，例如含一或多种变应原，诸如豚草、尘螨、及黑麦草之疫苗一起施用。可重复该IL-13结合剂或拮抗剂之施用，直到在患者体内获得预定之免疫水平为止。

在其它实施方案中，系施用能有效减少或预防或延缓该IL-13相关疾病或病症之一或多种症状之发作的数量之该IL-13结合剂或拮抗剂。例如可施用该IL-13结合剂或拮抗剂，其施用量能降低以下之一或多种：(i)IL-13(例如游离态IL-13)在患者体内之水平；(ii)嗜酸细胞活化趋化因子在患者体内之水平；(iii)组胺或白三烯在患者体内之水平；(iv)藉肥大细胞或嗜碱性粒细胞(例如血液嗜碱性粒细胞)而释放之组胺或白三烯的数量；(v)该IgE在患者体内之滴度；及/或(vi)患者之呼吸症状的一或多种变化(例如支气管收缩，例如呼吸困难、喘鸣、咳嗽、呼吸短促及/或难以进行正常日常活动)。

在其它实施方案中，该IL-13结合剂或拮抗剂可抑制或减少IL-13或IL-13受体(例如IL-13受体α1或IL-13受体α2)之一或多种活性。可使用文中所述之IL-13结合剂或拮抗剂减少之生物活性实例包括，但不限于以下之一或多种：CD23表达之诱发；藉人类B细胞而产生IgE；转录因子，例如STAT蛋白质(例如STAT6蛋白质)之磷酸化反应；经抗原诱发之体内嗜酸性粒细胞增多；经抗原诱发之活体内支气管收缩；及/或经药物诱发之活体内呼吸道机能亢进。使用IL-13/IL-13R之拮抗剂所进行之拮抗作用未必显示该IL-13/IL-13R多肽之生物活性的总消除。

在一个实施方案中，用于治疗及预防方法中之该抗IL-13抗体分子系描述在文中。在其它实施方案中，用于该等方法中之该抗IL-13抗体分子系描述在2005年12月29日公开之WO 05/123126及其美国同族专利U.S.06/0063228(这两种申请案之全文在此皆并入本案作为参考)中。例如该抗体分子为可干扰(例如抑制、阻断或降低)IL-13对IL-13Rα1或IL-13Rα2中之表位的结合。在其它实施方案中，该抗体分子可结合至包括IL-13及IL-13Rα1的复合体。在实施方案中，该抗体分子可结合至IL-13并干扰(例如抑制、阻断或降低)IL-13及IL-13Rα1之复合体与IL-4Rα的结合。在其它实施方案中，在注射后至少6周，于羊模型中该抗体分子可，例如提供抗接触蛔虫属抗原之注射后保护作用。

在一个实施方案中，该IL-13结合剂或拮抗剂系与另一治疗剂一起施用。该组合疗法可包括可以与一或多种另外治疗剂，例如一或多种如文中更具体描述之细胞因子及生长因子抑制剂、免疫抑制剂、消炎剂(例如全身性消炎剂)、代谢抑制剂、酶抑制剂、及/或细胞毒性剂或细胞生长抑制剂共配制及/或共施用之IL-13结合剂，例如抗IL-13抗体分子。该IL-13结合剂及另一治疗剂亦可分别施用。

可以与IL-13结合剂共施用及/或共配制之优选的另外治疗剂的实例包括：吸入性类固醇；β-激动剂，例如短效或长效β-激动剂；白三烯或白三烯受体的拮抗剂；组合药物诸如

IgE抑制剂，例如抗IgE抗体(例如，

)；磷酸二酯酶抑制剂(例如，PDE4抑制剂)；黄嘌呤；抗胆碱能药物；肥大细胞稳定剂，诸如色甘酸；IL-4抑制剂(例如IL-4抑制剂抗体、IL-4受体融合物或IL-4突变蛋白)；IL-5抑制剂；嗜酸细胞活化趋化因子/CCR3抑制剂；和抗组胺剂。这类组合可用来治疗哮喘和其他呼吸病症。其他可与IL-13结合剂共同施用和/或一起配制的治疗剂的实例包括下列一种或多种治疗剂：TNF拮抗剂(如：TNF受体的可溶性片段，如：p55或p75人TNF受体或其衍生物，如：75kd TNFR-IgG(75kD TNF受体-IgG融合蛋白，ENBREL^TM))；TNF酶拮抗剂，如：TNFα转化酶(TACE)抑制剂；毒蕈碱性受体拮抗剂；TGF-β拮抗剂；干扰素γ；普非尼酮(perfenidone)；化疗剂，如：氨甲蝶呤、来氟米特(leflunomide)，或西罗莫司(sirolimus)(雷帕霉素(rapamycin))或其类似物，如：CCI-779；COX2和cPLA2抑制剂；NSAID；免疫调节剂；p38抑制剂、TPL-2、Mk-2和NFPB抑制剂等。

本申请案另一方面系提供包括药学上可接受载体及至少一种IL-13结合剂，例如抗IL-13抗体分子之组合物，例如药学组合物。在一个实施方案中，该等组合物，例如药物组合物包含2或多种IL-13结合剂，例如2或多种抗IL-13抗体分子之组合。亦可使用该IL-13结合剂(例如抗-IL-13抗体分子)及药物，例如文中所述之治疗剂(例如抗组胺药物、抗白三烯药物、细胞因子或生长因子抑制剂、免疫抑制剂、消炎剂(例如全身性消炎剂)、代谢抑制剂、酶抑制剂、及/或细胞毒性剂或细胞生长抑制剂中之一或多种)的组合。

在又一实施方案中，文中所述之方法进一步包括：评估IL-13结合剂(例如如文中或WO 15/123126中所述之抗IL-13抗体分子)在患者，例如人类或非人类患者体内之效力。除了文中所述之治疗及/或诊断方法外，还可仅进行该评估IL-13结合剂之效力的方法。在实施方案中，系藉评估以下参数之一或多种而评估该IL-13结合剂在减少肺症状(例如嗜酸性粒细胞增多、黏液产生、支气管收缩、支气管痉挛)之效力：(i)检测该IL-13在样品中之水平(例如检测与如文中所述之抗IL-13抗体未结合及/或结合之该IL-13的水平)；(ii)测定嗜酸细胞活化趋化因子在样品中之水平；(iii)检测组胺及/或白三烯之水平或释放；(iv)检测IgE-滴度(全部及/或变应原特异性IgE)；(v)检测半胱氨酸基白三烯受体1或2蛋白质或mRNA水平之任何变化；(vi)评估患者之症状(例如支气管收缩，例如呼吸困难、喘鸣、咳嗽、呼吸短促及/或难以进行正常日常活动)之变化；(vii)评估患者之肺机能(例如在1秒内之用力呼气流量(FEV1)；(viii)评估一或多种细胞因子(例如MCP-1、TNFα及/或白介素-6(IL-6))水平之变化；(ix)评估得自患者之样品的炎症细胞及/或标记之变化；及/或(x)评估该IL-13结合剂之至少一药物动力学/药效学(PK/PD)参数，例如如文中所述之PK/PD参数。可在对患者施用该IL-13结合剂前及/或后(在单一或多次施用后)(例如于开始治疗后每隔特定时间)进行参数(i)-(x)之评估。可藉临床医师或支持人员而进行该评估。该样品可以是生物样品，诸如血清、血浆、血液或痰或组织样品。相对于预定水平(例如治疗前及后之比较值)，在(i)-(x)中之一或多项内的变化，例如减少，表示该IL-13结合剂能有效减少该患者之肺炎症。在实施方案中，该患者为人类患者，例如成人或儿童。

在实施方案中，以计算机可读取介质记录或记忆不论是否符合预选之效力标准之效力值或表示。可将符合预选之效力标准之此等数值或表示值列示在产品插页、手册(例如美国药典(U.S.Pharmacopeia)或任何其它材料上，例如可分配供，例如商业用途或提交至美国或外国管理机构之标签。

本发明之另一方面系表示评估或选用IL-13结合剂或拮抗剂，例如抗IL-13抗体分子(例如如文中或WO 05/123126中所述之IL-13抗体)之方法。该方法包括：

提供该IL-13结合剂在患者，例如人类或动物患者中之至少一药物动力学/药效学(PK/PD)参数的试验值，例如平均试验值；并

比较所提供之试验值，例如平均试验值，及至少一参考值以评估或选择该IL-13结合剂。

可使用非区室(non-compartmental)法、区室法(例如双区室模型法)、及/或PK/PD模型以估计该PK/PD参数。该PK/PD参数可选自以下之一或多种：该抗IL-13抗体分子之活体内浓度(例如在血液、血清、血浆及/或组织中之浓度)；该抗IL-13抗体分子之清除率(CL)；该抗体IL-13抗体分子之稳定体积分布(V_dss)；该抗IL-13抗体分子之半衰期(t_1/2)；该抗IL-13抗体分子之生物利用率；该抗IL-13抗体分子之剂量标准化最大血液、血清或血浆浓度；该抗IL-13抗体分子之剂量标准化暴露；或该抗IL-13抗体分子之组织对血清比。

在一相关实施方案中，可自该双区室或PK-PD模型估计该PK/PD参数。该PK/PD参数可选自以下之一或多种：自中央区室之清除率(CL_Ab)；该中央区室与周边区室间之分布清除率(CL_d，Ab)；结合速率常数(K_on)；解离速率常数(K_off)；该Ab-IL-13复合体之血清清除率(CL_复合体)；IL-13产生之内源性速率常数除以IL-13之血清清除率(Ksyn/CL_IL-13)；抗IL-13抗体-IL-13复合体在血液、血清、血浆或组织内之活体内浓度(C_Ab-1L-13及C(_Ab-1L-13)₂)；或游离态IL-13(C_IL-13)在血液、血清、血浆或组织中之活体内浓度。

该比较法可包括测定该试验值是否与该参考值具有预选之关系，例如测定其是否在该参考值之范围内(该范围之端点包括在内或不包括)；等于或大于该参考值。在实施方案中，若该试验值符合预选之关系，例如在该参考值之范围内，则选择该IL-13结合剂。

在该IL-13结合剂包括全长抗体之实施方案中，该参考值，例如平均参考值，包括以下之一或多种：在对患者静脉内施用该IL-13结合剂后，在约0.05至0.9、0.06至0.5、0.065至0.3、或0.067至0.2毫升/小时/千克范围内之清除率(CL)平均值(例如对人类静脉内施用后，在约0.05至0.5、0.06至0.1、或0.065至0.15毫升/小时/千克范围内之平均CL值)；对患者(例如对照组或病人)静脉注射后，小于约150、130、120、110、100、90、80或70毫升/千克之平均稳态分布体积(V_dss)值(例如对患者静脉内、皮下、腹膜内施用后，约50-800、70-750、100至600、400-800、500-700、550至750、552至696、576至720、600至800、650至750、670至725、或670至710小时之平均半衰期(t_1/2)(例如对人类静脉或皮下注射后，约400-800、480-780、或500-700之平均值t_1/2)；对患者施用，例如皮下或腹膜内施用后，约50至100、60至90、或70至85％之平均生物利用率；对患者静脉内施用后，约2至40、4至25、5至22、10至20、20至40、或11至15微克/毫升之剂量标准化(一参数值除以剂量)平均最大血清或血浆浓度，或对患者皮下施用后，约0.1至30、0.5至15、0.75至12、1至10、或3至8微克/毫升之剂量标准化平均最大血清或血浆浓度、对患者皮下施用后，约或6-200、6-40、20-50、或40-120小时之平均Tmax；对患者静脉内施用后，约800至18,000、600至15,000、500至12,000、300至10,000、150至5,000(微克小时/毫升)/(毫克/千克)之平均剂量标准化暴露量(亦即自零至无限时间之浓度-时间分析曲线下的面积除以剂量的平均值)，或对患者皮下施用后，400至18000、500至15,000、600至12,000、800至10,000、1,000至5,000(微克小时/毫升)/(毫克/千克)之平均剂量标准化暴露量；小于约0.8、0.6、0.5、0.4之平均组织对血清比；或抗体分子在一选自由肺、肾脏、肝脏、心脏及脾脏所组成之群组的组织内之平均优先暴露量(例如于特定时间点下，暴露量或组织浓度大于50％、60％、70％或大于其它器官)。

在该IL-13结合剂包括抗体分子之抗原结合部位(例如单链抗体、Fab片段、(Fab)’2、V_H、V_HH)、Fv、单链Fv片段或含该抗体分子之抗原结合部位的融合蛋白质)的实施方案中，该参考值，例如平均参考值，包括以下之一或多种：对患者施用，例如皮下施用、静脉内施用、腹膜内注射后，约0.1至100、0.2至75、0.3至50、0.4至45、0.5至30、0.5至15、0.5至10、或0.5至5小时之平均半衰期(t_1/2)。

在该IL-13结合剂系与IL-13复合之实施方案中，该参考值，例如平均参考值，包括对非人类灵长类动物或人类患者施用，例如皮下施用、静脉内施用、腹膜内施用后，小于0.02毫升/小时/千克、0.009毫升/小时/千克、0.004毫升/小时/千克、0.003毫升/小时/千克或0.002毫升/小时/千克之平均清除率。在其它实施方案中，系使用如文中所述之双区室整合之PK-PD模型评估该IL-13结合剂(例如“连续结合性”)。该模型包括中央区室(C_Ab，V)及周边区室(C_2，Ab，V₂)。在此等实施方案中，系评估以下PK/PD参数之一或多种：该抗IL-13抗体分子之活体内浓度(例如在血清、血浆、血液、及/或组织内之浓度)(C_Ab)；从该中央区室之清除率(CL_Ab)；在该中央区室与周边区室间之分布清除率(CL_d，Ab)；结合速率常数(K_on)；解离速率常数(K_off)；该Ab-IL-13复合体之清除率(CL_复合体)；或IL-13产生之内源性速率常数除以IL-13之清除率(例如血清清除率)(Ksyn/CL_IL-13)。

使用其中该IL-13结合剂为全长抗体之双区室模型所评估之IL-13结合剂的代表性参考值，例如平均参考值包括以下之一或多种：对患者静脉内施用该IL-13结合剂后，从该中央区室之清除率(CL_Ab)平均值在约0.05至0.9、0.06至0.5、0.065至0.3、或0.67至0.2毫升/小时/千克之范围内(例如对人类静脉内施用后，平均CL_Ab值在约0.05至0.5、0.06至0.1、或0.065至0.15毫升/小时/千克之范围内)；对患者静脉内施用后，在该中央区室内之分布体积小于约150、130、120、110、90、80或70毫升/千克(例如对人类静脉内施用后，小于约120、90、80或70毫升/千克)；对患者静脉内施用后，在该中央区室与周边区室间之分布清除率(CL_d，Ab)平均值在约0.0001-6.0、0.0005至5.0、0.00067至4.5、0.001至4.0毫升/小时/千克之范围内(例如对人类静脉内施用后，0.0002至5.7、或0.0005至4.6毫升/小时/千克)；对患者静脉内施用后，该周边区室之体积分布(V₂)平均值小于150、130、120、110、90、80或70毫升/千克(例如对人类静脉内施用后，小于约120、90、80或70毫升/千克)；结合速率常数(K_on)平均值在约0.9至0.001、0.5至0.01、0.3至0.02、或0.026至0.06nM^-1天^-1之范围内，解离速率常数(K_off)平均值在约0.4至0.00001、0.3至0.0001、0.2至0.001、或0.19至0.01之范围内；该Ab-IL-13复合体之血清清除率(CL_复合体)平均值为约0.40至0.00083、0.25至0.0042、0.17至0.0083、0.15至0.0125毫升/小时/千克，或IL-13产生之内源性速率常数除以IL-13之血清清除率(Ksyn/CL_IL-13)平均值为约0.09至0.0001、0.06至0.001、0.05至0.003、0.045至0.005nM。

在实施方案中，系以，例如计算机可读介质记录或记忆不论是否符合预选之关系之试验值或显示值。可将符合预选之关系的此等试验值或显示值列示在产品插页、手册(例如美国药典)或任何其它材料上，例如可分配供，例如商业用途或提交至美国或外国管理机构之标签。

在实施例中，提供试验值之步骤包括获得该抗体分子之样品，例如抗体培养物之样品批，并测试文中所述药物动力学参数中之至少一种。自方法观点，例如用以监测或确保批次一致性或质量之方法而言，文中所述之方法很有效。

在实施方案中，系根据该试验值是否符合所预选之关系(例如在所提供该参考值之范围内)而作出决定或采取步骤。例如该抗IL-13结合剂，例如，抗IL-13抗体分子可经分类、选择、接受、释放(进行交易)或保留、加工成药物产品、装运、移至新地点、配制、标记、包装、出售或许诺销售。

在其它实施方案中，系在以约1至100毫克/千克、1至10毫克/千克或1至2毫克/千克之剂量进行该抗体分子之一或多次施用后，获得所提供之该试验值。

在其它实施方案中，该患者为人类或非人类动物，例如啮齿类动物或灵长类动物。例如该患者可选自以下之一或多种：例如啮齿类动物(例如小鼠、大鼠)、灵长类动物(例如猴子或人类，例如病人)。该人类病人可具有约45-130千克或约50-80千克之体重。通常为60千克。

本发明另一方面系提供决定用于患者之经IL-13介导疾病之IL-13结合剂(例如抗IL-13抗体分子，例如如文中或WO 05/123126中所述之IL-13抗体)的治疗方式(例如剂量、时间选择或用药方式)之方法。该方法包括：

提供该IL-13结合剂在，例如人类或动物患者体内之至少一种药物动力学/药效学(PK/PD)参数的试验值，例如平均试验值；

比较所得到该试验值，例如平均试验值，与至少一参考值，例如平均参考值；并

根据至少一试验值对该参考值之比较而选择剂量、时间选择或用药模式中之一或多种。

在一相关实施方案中，可自该双区室或PK-PD模式估计该PK/PD参数。该PK/PD参数可选自以下之一或多种：得自中央区室之清除率(CL_Ab)；该中央区室与周边区室间之分布清除率(CL_d，Ab)；结合速率常数(K_on)；解离速率常数(K_off)；该Ab-IL-13复合体之血清清除率(CL_复合体)；IL-13产生之内源性速率常数除以IL-13之血清清除率(Ksyn/CL_IL-13)；抗IL-13抗体-IL-13复合体在血液、血清、血浆或组织内之活体内浓度(C_Ab-1L-13及C(_Ab-1L-13)₂)；或游离态IL-13(C_IL-13)在血液、血清、血浆或组织中之活体内浓度。

在该IL-13结合剂包括全长抗体之实施方案中，该参考值，例如平均参考值，包括以下之一或多种：在对患者静脉内施用该IL-13结合剂后，在约0.05至0.9、0.06至0.5、0.065至0.3、或0.067至0.2毫升/小时/千克范围内之清除率(CL)平均值(例如对人类静脉内施用后，在约0.05至0.5、0.06至0.1、或0.065至0.15毫升/小时/千克范围内之平均CL值)；对患者(例如对照组或病人)静脉内施用后，小于约150、130、120、110、100、90、80或70毫升/千克之平均稳态分布体积(V_dss)值(例如对患者静脉、皮下、腹膜内施用后，约50-800、70-750、100至600、400-800、500-700、550至750、552至696、576至720、600至800、650至750、670至725、或670至710小时之平均半衰期(t_1/2)(例如对人类静脉或皮下施用后，约400-800、480-780、或500-700之平均值t_1/2)；对患者施用，例如皮下或腹膜内施用后，约50至100、60至90、或70至85％之平均生物利用率；对患者静脉内施用后，约2至40、4至25、5至22、10至20、20至40、或11至15微克/毫升之剂量标准化(一参数值除以剂量)平均最大血清或血浆浓度，或对患者皮下施用后，约0.1至30、0.5至15、0.75至12、1至10、或3至8微克/毫升之剂量标准化平均最大血清或血浆浓度、对患者皮下施用后，约6-200、6-40、20-50、或40-120小时之平均Tmax；对患者静脉内施用后，约800至18,000、600至15,000、500至12,000、300至10,000、150至5,000(微克小时/毫升)/(毫克/千克)之平均剂量标准化暴露量(亦即自零至无限之浓度-时间分析曲线下的面积除以剂量的平均值)，或对患者皮下施用后，400至18000、500至15,000、600至12,000、800至10,000、1,000至5,000(微克小时/毫升)/(毫克/千克)之平均剂量标准化暴露量；小于约0.8、0.6、0.5、0.4之平均组织对血清比；或抗体分子在一选自由肺、肾脏、肝脏、心脏及脾脏所组成之群组的组织内之平均优先暴露量(例如于特定时间点下，暴露量或组织浓度大于50％、60％、70％或大于其它器官)。

可部分根据该试验值与参考值之比较而选择治疗形式(例如剂量、时间选择或用药方式)。该比较可包括测定该试验值是否与参考值具有预选的关系，例如确定该试验值是否在参考值之范围内(包括在该范围之端点内或不包括)；等于或大于该参考值。例如若该结合剂之半衰期在该参考值所指定之范围内，开业医师可决定施用频率可减至，例如每月一次或两次。组合或独立施用，可施用，例如小于5、4、3、2、1毫克/千克之一的低剂量该结合剂。基于该比较而选用之治疗形式可根据争议中之该IL-13相关疾病而不同。就呼吸疾病，例如哮喘而言，可藉吸入、皮下或静脉内施用方式递送该IL-13结合剂。

在实施方案中，该患者为人类或非人类动物，例如啮齿类动物或灵长类动物。例如该患者可选自以下之一或多种：例如啮齿类动物(例如小鼠、大鼠)、灵长类动物(例如猴子或人类，例如病人)。该人类可具有约45-130千克或约50-80千克之体重，通常为60千克。该人类可以是对照或病人。

本发明另一方面之特征为提供治疗患者，例如如文中所述之患者之IL-13相关疾病(例如如文中所述之IL-13疾病)的方法，其包括对罹患或有罹患该IL-13相关疾病之危险的患者施用有效量之该IL-13结合剂，例如使用文中所述PK/PD参数之一或多种所评估或选择之该抗IL-13抗体分子。

本发明另一方面之特征为指示或转移有关于使用IL-13结合剂，例如抗IL-13抗体分子以治疗IL-13相关疾病之信息给接受者(例如病人、药剂师、看护者、临床医师、医疗人员之成员、制造商或批发商)的方法。该方法包括指示或发送信息给该接受者使其了解，该IL-13结合剂具有PK/PD参数之至少一试验值，例如平均试验值，该PK/PD参数系选自以下所组成之群组：

对患者静脉内施用该IL-13结合剂后，清除率(CL)平均值在约0.05至0.9、0.06至0.5、0.065至0.3、或0.067至0.2毫升/小时/千克之范围内(例如人类静脉内施用后，平均CL值在约0.05至0.5、0.06至0.1、或0.065至0.15毫升/小时/千克之范围内)，其中该IL-13结合剂包括全长抗体；对该患者(例如对照组或病人)静脉内施用后，平均稳态分布体积(V_dss)值小于约150、130、120、110、100、90、80或70毫升/千克，其中该IL-13结合剂包括全长抗体；对该患者施用，例如静脉内、皮下、腹膜内施用后，平均半衰期(t_1/2)为约50至800、70至750、100至600、400至800、500至700、550至750、552至696、576至720、600至800、650至750、670至725、或670至710小时(例如对人类静脉内或皮下施用后，平均t_1/2为约400至800、480至780、或500至700小时)；对患者施用，例如皮下或腹膜内施用后，平均生物利用率为约50至100、60至90、或70至85％；对该患者静脉内施用后，剂量标准化(一参数值除以该剂量)平均最大血清或血浆浓度为约2至40、4至25、5至22、10至20、20至40、或11至15微克/毫升，或对该患者皮下施用后，约0.1至30、0.5至15、0.75至12、1至10、或3至8微克/毫升；对该患者皮下施用后，平均Tmax为约或6至200、6至40、20至50、或40至120小时；对该患者静脉内施用后，平均剂量标准化暴露量(亦即在自时间零至无限之浓度-时间分布曲线下的面积除以该剂量之平均值)为约800至18,000、600至15,000、500至12,000、300至10,000、150至5,000(微克小时/毫升)/(毫克/千克)，或对该患者皮下施用后，400至18000、500至15,000、600至12,000、800至10,000、1,000至5,000(毫克小时/毫升)/(毫克/千克)；平均组织对血清比小于约0.8、0.6、0.5、0.4；或抗体分子在一选自由肺、肾脏、肝脏、心脏及脾脏所组成之群组的组织内之平均优先暴露量(例如于特定时间点下之暴露量或组织浓度大于50％、60％、70％或大于其它器官)，其中该IL-13结合剂包括全长抗体；对该患者施用，例如皮下、静脉、腹膜内施用后，平均半衰期(t_1/2)为约0.1至100、0.2至75、0.3至50、0.4至45、0.5至30、0.5至15、0.5至10、0.5至5小时，其中该IL-13结合剂包括该抗体分子(例如单链抗体、Fab片段、(Fab)’2、V_H、V_HH)、Fv、单链Fv片段、或含该抗体分子之抗原结合部位之融合蛋白质)之抗原结合部位；对该患者施用后，平均清除率小于0.004毫升/小时/千克、0.003毫升/小时/千克、或0.002毫升/小时/千克，其中该IL-13结合剂系与IL-13复合。

在其它实施方案中，系使用如文中所述之双区室(例如“连续结合性”)模式评估该IL-13结合剂之PK/PD参数。该双区室模型包括中央区室(C_Ab，V)及周边区室(C_2，Ab，V₂)。在此等实施方案中，系评估以下PK/PD参数中之一或多种：该抗体IL13抗体分子之活体内浓度(例如在血清、血浆、及/或组织中之浓度)(CL_Ab)、在该中央区室与周边区室间之分布清除率(CL_d，Ab)、结合速率常数(K_on)、解离速率常数(K_off)、该Ab-IL-13复合体之血清清除率(CL_复合体)或IL-13产生的内源性速率常数除以IL-13之血清清除率(Ksyn/CL_IL-13)。

在实施方案中，该方法包括，例如以计算机可读介质记录或记忆该等试验值中之一或多种。可将此等试验值列示在产品插页、手册(例如美国药典)或任可其它数据上，例如可分配供，例如商业用途或提交至美国或外国管理机构之标签。

在实施方案中，该方法进一步包括对患者施用该IL-13结合剂。在实施方案中，剂量、时间选择或该结合剂(例如抗体分子)之施用方式中之一或多种系至少部分根据该试验值(该抗体分子之至少一PK/PD参数)与参考值，例如文中所述之参考值之比较。

本发明另一方面之特征为治疗罹患或有罹患该IL-13相关疾病之危险的患者之IL-13相关疾病的方法。该方法包括：

向护理照料者或患者说明IL-13结合剂，例如抗IL-13抗体具有PK/PD参数之至少一试验值，例如平均试验值，该PK/PD参数系选自以下所组成之群组：

对患者静脉内施用该IL-13结合剂后，清除率(CL)平均值在约0.05至0.9、0.06至0.5、0.065至0.3、或0.067至0.2毫升/小时/千克之范围内(例如人类静脉内施用后，平均CL值在约0.05至0.5、0.06至0.1、或0.065至0.15毫升/小时/千克之范围内)，其中该IL-13结合剂包括全长抗体；对该患者(例如对照组或病人)静脉内施用后，平均稳态分布体积(V_dss)值小于约150、130、120、110、100、90、80或70毫升/千克，其中该IL-13结合剂包括全长抗体；对该患者施用，例如静脉内、皮下、腹膜内施用后，平均半衰期(t_1/2)为约50至800、70至750、100至600、400至800、500至700、550至750、552至696、576至720、600至800、650至750、670至725、或670至710小时(例如对人类静脉内或皮下施用后，平均t_1/2为约400至800、480至780、或500至700小时)；对患者施用，例如皮下或腹膜内施用后，平均生物利用率为约50至100、60至90、或70至85％；对该患者静脉内施用后，剂量标准化(一参数值除以该剂量)平均最大血清或血浆浓度为约2至40、4至25、5至22、10至20、20至40、或11至15微克/毫升，或对该患者皮下施用后，约0.1至30、0.5至15、0.75至12、1至10、或3至8微克/毫升；对该患者皮下施用后，平均Tmax为约或6至200、6至40、20至50、或40至120小时；对该患者静脉内施用后，平均剂量标准化暴露量(亦即在自时间零至无限之浓度-时间分布曲线下的面积除以该剂量之平均值)为约800至18,000、600至15,000、500至12,000、300至10,000、150至5,000(微克小时/毫升)/(毫克/千克)，或对该患者皮下施用后，400至18000、500至15,000、600至12,000、800至10,000、1,000至5,000(毫克小时/毫升)/(毫克/千克)；平均组织对血清比小于约0.8、0.6、0.5、0.4；或抗体分子在一选自由肺、肾脏、肝脏、心脏及脾脏所组成之群组的组织内之平均优先暴露量(例如于特定时间点下之暴露量或组织浓度大于50％、60％、70％或大于其它器官)，其中该IL-13结合剂包括全长抗体；对该患者施用，例如皮下、静脉、腹膜内施用后，平均半衰期(t_1/2)为约0.1至100、0.2至75、0.3至50、0.4至45、0.5至30、0.5至15、0.5至10、0.5至5小时，其中该IL-13结合剂包括该抗体分子(例如单链抗体、Fab片段、(Fab)’2、V_H、V_HH)、Fv、单链Fv片段、或含该抗体分子之抗原结合部位之融合蛋白质)之抗原结合部位；对该患者施用后，平均清除率小于0.004毫升/小时/千克、0.003毫升/小时/千克、或0.002毫升/小时/千克，其中该IL-13结合剂系与IL-13复合；并

对患者施用该IL-13结合剂，例如该抗IL-13抗体分子。可直接藉该患者而进行该施用步骤(例如自施用)或藉另一参与者，例如护理照料者而进行该施用步骤。

在其它实施方案中，系使用如文中所述之双区室模型评估该IL-13结合剂之PK/PD参数。该双区室模型包括中央区室(C_Ab，V)及周边区室(C_2，Ab，V₂)。在此等实施方案中，系评估以下PK/PD参数中之一或多种：该抗体IL13抗体分子之活体内浓度(例如在血清、血浆、及/或组织中之浓度)(CL_Ab)、在该中央区室与周边区室间之分布清除率(CL_d，Ab)、结合速率常数(K_on)、解离速率常数(K_off)、该Ab-IL-13复合体之血清清除率(CL_复合体)或IL-13产生的内源性速率常数除以IL-13之血清清除率(Ksyn/CL_IL-13)。

使用其中该IL-13结合剂为全长抗体之双区室模型所评估之IL-13结合剂的代表性参考值，例如平均参考值包括以下之一或多种：对患者静脉内施用该IL-13结合剂后，得自该中央区室之清除率(CL_Ab)平均值在约0.05至0.9、0.06至0.5、0.065至0.3、或0.67至0.2毫升/小时/千克之范围内(例如对人类静脉内施用后，平均CL_Ab值在约0.05至0.5、0.06至0.1、或0.065至0.15毫升/小时/千克之范围内)；对患者静脉内施用后，在该中央区室内之分布体积小于约150、130、120、110、90、80或70毫升/千克(例如对人类静脉内施用后，小于约120、90、80或70毫升/千克)；对患者静脉内施用后，在该中央区室与周边区室间之分布清除率(CL_d，Ab)平均值在约0.0001-6.0、0.0005至5.0、0.00067至4.5、0.001至4.0毫升/小时/千克之范围内(例如对人类静脉内施用后，0.0002至5.7、或0.0005至4.6毫升/小时/千克)；对患者静脉内施用后，该周边区室之体积分布(V₂)平均值小于150、130、120、110、90、80或70毫升/千克(例如对人类静脉内施用后，小于约120、90、80或70毫升/千克)；结合速率常数(K_on)平均值在约0.9至0.001、0.5至0.01、0.3至0.02、或0.026至0.06nM^-1天^-1之范围内，解离速率常数(K_off)平均值在约0.4至0.00001、0.3至0.0001、0.2至0.001、或0.19至0.01之范围内；该Ab-IL-13复合体之血清清除率(CL_复合体)平均值为约0.40至0.00083、0.25至0.0042、0.17至0.0083、0.15至0.0125毫升/小时/千克，或IL-13产生之内源性速率常数除以IL-13之血清清除率(Ksyn/CL_IL-13)平均值为约0.09至0.0001、0.06至0.001、0.05至0.003、0.045至0.005nM。

在实施方案中，剂量、时间选择或该结合剂(例如抗体分子)之施用方式中之一或多种系至少部分根据该试验值(该抗体分子之至少一PK/PD参数)与参考值，例如如文中所述之参考值的比较。

本发明另一方面之特征为包括IL-13结合剂，例如如文中或WO05/123126中所述之抗IL-13抗体分子或其药学组合物、及使用说明之药盒或包装。在实施方案中，该药盒所包含之IL-13结合剂至少根据试验值与如文中所述之参考值的比较而经或业经评估或选择。在其它实施方案中，该IL-13结合剂具有至少一适于如文中所述之PK/PD参数的试验值。在实施方案中，该药盒包括经包装而适于以固定剂量，例如如文中所述之固定剂量施用之IL-13抗体分子、及以固定剂量施用之说明。

本发明之又另一方面的特征为藉比较药物动力学参数之一试验值与如文中所述之参考值而选择或评估的IL-13结合剂，例如抗IL-13分子。在实施方案中，该结合剂不同于13.2、MJ2-7及C65(或其人源化形式)。

本发明另一方面之特征为使用包括中央区室(C_Ab，V)及周边区室(C_2，Ab，V₂)之双区室PK-PD模型以评估药物-配体复合体在患者体内之数量的方法。该方法包括：

于预定时间间隔下提供该药物-配体浓度在患者体内之至少一药物动力学或药效学参数值，该值系选自以下PK/PD参数中之一或多种：该药物，例如抗IL-13抗体分子之活体内浓度(例如在血液、血清、血浆及/或组织内之浓度)(CL_Ab)；未结合IL-13、抗IL-13结合的IL-13或总IL-13之活体内浓度(例如在血液、血清、血浆及/或组织内之浓度)；在该中央区室与周边区室间之分布清除率(CL_d，Ab)；；结合速率常数(K_on)；解离速率常数(K_off)；该药物-配体(例如Ab-IL-13)复合体之血清清除率(CL_复合体)；或配体(例如IL-13)产生之内源性速常数除以该配体(例如IL-13)之血清清除率(Ksyn/CL_IL-13)；

使用如第33图表示之双区室PK-PD模型以评估患者之该至少一药物动力学参数。

在实施方案中，该双区室模型如下文所示：

d C_{Ab} / dt = [In (t) + {CL}_{d, Ab} \cdot C_{2, Ab} - (C L_{d, Ab} + {CL}_{Ab}) \cdot C_{Ab}] / V

- K_{on} \cdot C_{Ab} \cdot (C_{IL - 13} - C_{Ab - (IL - 13)} - C_{Ab - {(IL - 13)}_{2}}) + K_{off} \cdot C_{Ab - (IL - 13)}

当t＝0时，

C_{Ab}^{0} = In (0) / V - - - (1)

d C_{{2,}_{Ab}} / dt = ({CL}_{d, Ab} \cdot C_{Ab} - {CL}_{d, Ab} \cdot C_{2, Ab}) / V_{2}

当t＝0时，

C_{2, Ab}^{0} = 0 - - - (2)

{dC}_{Ab - (IL - 13)} / dt = K_{on} \cdot C_{Ab} \cdot (C_{IL - 13} - C_{Ab - (IL - 13)} - C_{Ab - {(IL - 13)}_{2}})

- K_{on} \cdot C_{Ab - (IL - 13)} \cdot (C_{IL - 13} - C_{Ab - (IL - 13)} - C_{Ab {- (IL - 13)}_{2}})

当t＝0时，

C_{Ab - (IL - 13)}^{0} = 0 - - - (3)

d C_{Ab - {(IL - 13)}_{2}} / dt = K_{on} \cdot C_{Ab - (IL - 13)} \cdot (C_{IL - 13} - C_{Ab - (IL - 13)} - C_{Ab - {(IL - 13)}_{2}})

当t＝0时，

C_{Ab - {(IL - 13)}_{2}}^{0} = 0 - - - (4)

d C_{IL - 13} / dt = [K_{syn} - {CL}_{IL - 13} \cdot (C_{IL - 13} - C_{Ab - (IL - 13)} - C_{Ab - {(IL - 13)}_{2}})] / V

- K_{on} \cdot C_{Ab} \cdot (C_{IL - 13} - C_{Ab - (IL - 13)} - C_{Ab - {(IL - 13)}_{2}})

- K_{on} \cdot C_{Ab - (IL - 13)} \cdot (C_{IL - 13} - C_{Ab - (IL - 13)} - C_{Ab - {(IL - 13)}_{2}})

+ K_{off} \cdot C_{Ab - (IL - 13)} + K_{off} \cdot C_{Ab - {(IL - 13)}_{2}}

当t＝0时，

C_{II - 13}^{0} = K_{syn} / {CL}_{IL - 13} - - - (5)

对于静脉内快速浓注剂量：

In(t)＝剂量 (6)

对于皮下剂量：

In(t)＝K_a·F·剂量 (7)

其中

C_Ab为抗体(结合剂)之浓度；

In(t)为所施用之剂量(就快速浓注剂量而言)，且In(t)为适于皮下施用剂量之K_a＊F＊剂量，其中K_a为一级速率常数，而F为生物利用率之估计值；

CL_d，Ab为在该中央区室与周边区室间之分布清除率；

C_2，Ab为在该周边区室中之配体结合剂的浓度；

V为在中央组成部分中之体积分布；

K_on为二级速率常数；

C_配体(或C_IL-13)为配体之浓度；

C_Ab-(配体)(或C_Ab-(IL-13))为配体结合剂/配体复合体之浓度；

K_off为一级解离速率常数，V₂为在周边区室内之分布体积；

CL_复合体为该配体结合剂/配体复合体之血清清除率；且

K_syn为内源性配体之零级速率常数。

在特定实施方案中，该方法可评估选自由配体-抗体复合体及配体可溶性受体复合体所组成之群组之药物-配体复合体的数量。例如该配体可以是细胞因子，例如IL-5、IL-6、IL-12、IL-13、IL-21、IL-22；或生长因子，例如VEGF、TNFα；且该药物可以是抗该配体之抗体或可溶性受体。

在特定实施方案中，该方法评估IL-13抗体复合体在患者体内之数量。例如用于该等方法之两区室模型包括适于以下之一的药物动力学/药效学值：

该配体为IL-13，而该配体结合剂(Ab)为药物列如抗体分子(例如hMJ2-7v.2-11HMJ2-7v.2-11))；

复合体为药物-配体复合体(例如hMJ2-7v.2-11 HMJ2-7v.2-11/IL-13复合体)；

CL_d，Ab及CL_Ab分别为该药物(例如抗体分子(例如hMJ2-7v.2-11HMJ2-7v.2-11))之分布清除率及血清清除率；

CL_复合体及CL_配体(或CL_IL-13)分别为该复合体及配体之血清清除率。

K_syn为零阶配体，例如IL-13合成速率常数；

K_on为二级结合速率常数；

K_off为一级解离速率常数；且V及V₂分别为该药物(例如hMJ2-7v.2-11HMJ2-7v.2-11)在血清(中央)及第二区室内之分布体积。

本发明之某些方面的特征为，例如使用固定剂量之抗IL-13抗体以治疗患者之IL-13相关疾病的方法，该方法包括对罹患或有罹患该IL-13相关疾病之患者施用固定剂量之抗IL-13抗体分子(例如hMJ2-7v.2-11HMJ2-7v.2-11或13.2v2)。

在某些实施方案中，该固定剂量为以下剂量之抗IL-13抗体分子(例如hMJ2-7v.2-11 HMJ2-7v.2-11或13.2v2)：介于约50毫克与500毫克之间、介于约60毫克与490毫克之间、约70毫克至480毫克、约75毫克至460毫克、约80毫克至450毫克、约100毫克至约450毫克、约150毫克至约400毫克、约200毫克至约300毫克、约200毫克至约250毫克；或约60毫克、65毫克、70毫克、75毫克、80毫克、90毫克、100毫克、125毫克、、150毫克、175毫克、200毫克、225毫克或250毫克。

在某些实施方案中，该固定剂量为约75、200或250毫克抗IL-13抗体分子(例如hMJ2-7v.2-11 HMJ2-7v.2-11或13.2v2)。

在某些实施方案中，系约每周一次、约每2周一次、约每3周一次或约每4周一次对患者施用该固定剂量。

为了清楚明了起见，如文中使用之术语“IL-13拮抗剂”通常系指可减少、抑制或阻断IL-13及IL-13R之一或多种生物活性的化合物，诸如蛋白质(例如多链多肽、多肽)、肽、小分子或抑制性核酸。在一个实施方案中，该IL-13拮抗剂可以与IL-13或IL-13R多肽相互作用，例如结合(文中亦称为“拮抗性IL-13结合剂”)。例如该IL-13拮抗剂可以与IL-13或IL-13受体，优选为哺乳动物，例如人类IL-13或IL-13R相互作用，例如结合(文中亦分别称为“IL-13拮抗剂”及“IL-13R拮抗剂”)，并可减少或抑制一或多种IL-13-及/或IL-13R-相关生物活性。拮抗剂以高亲和力结合至IL-13或IL-13R，例如其亲和力常数为至少约10⁷M^-1、优选约10⁸M^-1、且更佳约10⁹M^-1至10¹⁰M^-1或更强。应注意该名词“IL-13拮抗剂”包括可抑制或减少文中所述该等生物活性之一或多种，但是可不直接结合至IL-13之物质。

该等名词“抗IL-13结合剂”及“IL-13结合剂”在文中可互换使用。文中所使用之这些名词系指包括一可结合至IL-13蛋白质，例如哺乳动物IL-13，特别为人类IL-13之界面的任何化合物，诸如蛋白质(例如多链多肽、多肽)或肽。该结合剂通常以小于5×10^-7M之Kd进行结合。代表性IL-13结合剂为包括一抗原结合部位，例如抗体分子之蛋白质。该抗IL-13结合剂或IL-13结合剂可以是能结合至IL-13之IL-13拮抗剂或亦可包括能简单地结合至IL-13，但是不会诱发活性或实际上可激动IL-13活性之IL-13结合剂。例如可结合并抑制一或多种IL-13生物活性之特定IL-13结合剂，例如抗IL-13抗体分子，诸如抗体13.2、MJ2-7及C65，在文中亦称为拮抗性IL-13结合剂。并非如文中定义之IL-13结合剂的IL-13拮抗剂实例包括，例如上游或下游IL-13信号转导之抑制剂(例如STAT6抑制剂)。

文中所公开该等方法之另外实施方案可包括以下特征中之一或多种：

在某些实施方案中，该IL-13拮抗剂可以是能结合至IL-13或IL-13R之抗体分子。该IL-13亦可以是单独或融合至另一部分(例如免疫球蛋白Fc区域)之该IL-13R的可溶形式(例如IL-13Rα2或IL-13Rα1)或呈亚单体之异二聚体形式。在其它实施方案中，该拮抗剂为细胞因子突变蛋白(例如可结合至对应受体，但是不会实质上活化该受体之IL-13突变蛋白)。

在一个实施方案中，该IL-13拮抗剂或结合剂(例如该抗体分子、可溶性受体、细胞因子突变蛋白或肽抑制剂)可结合至IL-13或IL-13R并抑制或减少IL-13与IL-13受体，例IL-13Rα1、IL-13Rα2、及/或IL-4RI间之相互作用(例如结合作用)，藉此减少或抑制信号转导。例如该IL-13拮抗剂可结合至选自，例如IL-13及IL-13Rα1(“IL-13/IL-13Rα1”)；IL-13及IL-4Rα(“IL-13/IL-4Rα”)；IL-13、IL-13Rα1、及IL-4Rα(“IL-13/IL-13Rα1/IL-4Rα”)；与IL-13及IL-13Rα2(“IL-13/IL-13Rα2”)之复合体的一或多种组分。在实施方案中，该IL-13拮抗剂可结合至IL-13或IL-13R并干扰(例如抑制、阻断或减少)IL-13与IL-13受体复合体(例如含IL-13Rα1与IL-4Rα之复合体)间之相互作用，例如结合作用。在其它实施方案中，该IL-13拮抗剂可结合至IL-13并干扰(例如抑制、阻断或减少)IL-13与该IL-13受体复合体(例如分别为IL-13Rα1或IL-4Rα)之亚单位间之相互作用，例如结合作用。在又一实施方案中，该IL-13拮抗剂，例如该抗IL-13抗体或其片段可结合至IL-13，并干扰(例如抑制、阻断或V2.5减少)IL-13/IL-13Rα1与IL-4Rα间之相互作用，例如结合作用。在另一实施方案中，该IL-13拮抗剂可结合至IL-13并干扰(例如抑制、阻断或减少)IL-13/IL-4Rα与IL-13Rα1间之相互作用，例如结合作用。典型地，该IL-13拮抗剂可干扰(例如抑制、阻断或减少)IL-13/IL-13Rα1与IL-4Rα间之相互作用，例如结合作用。代表性抗体可抑制或防止三元复合体，IL-13/IL-13Rα1/IL-4Rα之形式。

在一个实施方案中，该IL-13/IL-13R拮抗剂或结合剂为可结合至IL-13/IL-13R之抗体分子(例如抗体或其抗原结合性片段)。例如该抗体分子可以是能结合至IL-13或IL-13受体之全长单克隆或单特异性抗体(例如包括至少一个且通常两个完全重链、及至少一个且通常两个完全轻链之抗体分子)；或其抗原结合性片段(例如重或轻链可变结构域单体或二聚体(例如V_H、V_HH)、Fab、F(ab’)₂、Fv或单链Fv片段))。典型地，抗体分子为针对人类IL-13或人类IL-13受体之人类、骆驼科动物、鲨、人源化、嵌合型或活体外产生之抗体。在特定实施方案中，该抗体分子包括一选自，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD、及IgE之重链恒定区的重链恒定区；特别为一选自，例如IgG1、IgG2、IgG3、及IgG4之重链恒定区的重链恒定区，更特定地，该等重链恒定区IgG1(例如人类IgG1或其修饰形式)。在另一实施方案中，该抗体分子具有一选自，例如κ或λ(优选κ，例如人类κ)之轻链恒定区的轻链恒定区。在一个实施方案中，该恒定区可经改变，例如突变，以修饰该抗体分子之性质(例如增加或减少以下之一或多种：Fc受体结合性、抗体糖基化作用、半胱氨酸残基之数目、效应细胞功能或补体功能)。例如如实施例5所述，该人类IgG1恒定区可以于一或多个残基，例如残基234及237中之一或多个处发生突变以减少以下之一或多种：Fc受体结合性、抗体糖基化作用、半胱氨酸残基之数目、效应细胞功能或补体功能。在实施方案中，该抗体分子包括SEQ IDNO：193之一或多个残基发生突变，例如于SEQ ID NO：193之位置116及119发生突变之人类IgG1恒定区。

在一个实施方案中，该抗体分子为抑制或中和性抗体分子。例如该抗IL-13抗体分子可具有相当于IL-13Rα2之功能活性(例如该抗IL13抗体分子可减少或抑制IL-13与IL-13Rα1之相互作用。该抗IL13抗体分子可防止IL-13与IL-13Rα1之间复合体形成，或可破坏或去稳定化IL-13与IL-13Rα1之复合体。在一个实施方案中，该抗IL-13抗体分子可抑制三元复合体形成，例如IL-13、IL-13Rα1及IL4-R之复合体的形成。在一个实施方案中，该抗体分子可以在注射后至少6周，提供可抗接触抗原，例如在羊模型中之蛔虫抗原之注射后保护作用。在其它实施方案中，该IL-13抗体分子可抑制一或多种IL-13相关生物活性，其IC₅₀为约50nM至5pM、通常约100至250pM或较低(例如更佳抑制作用)。在一个实施方案中，该抗IL-13抗体分子可以与IL-13结合，其动力学值在10³至10⁸M^-1s^-1、通常10⁴至10⁷M^-1s^-1之范围内。在一个实施方案中，该抗IL-13抗体分子可结合至人类IL-13，其k_on在约5×10⁴与8×10⁵M^-1s^-1之间。在又一实施方案中，该抗IL-13抗体分子之解离动力学值在10^-2至10^-6s^-1、通常10^-2至10^-5s^-1之范围内。在一个实施方案中，该抗IL-13抗体分子可结合至IL-13(例如人类IL-13)，其亲和力及/或动力学类似(例如在20、10或5之系数内)单克隆抗体13.2、MJ2-7或C65，或其修饰形式，例如其嵌合形式或人源化形式。可使用，例如生物传感器技术(BIACORE^TM)以测试IL-13结合剂之亲和力及结合动力学。

在又一实施方案中，该抗IL-13抗体分子可特异结合至IL-13，例如哺乳动物，例如人类IL-13之表位，例如线性或构象表位。例如抗体分子可结合至由与人类IL-13结合之IL-13Rα1所定义之表位或由与人类IL-13结合之IL-13Rα2所定义之表位或经此等表位重叠之表位中的至少一种氨基酸。该抗IL-13抗体分子可以与IL-13Rα1及/或IL-13Rα2竞争对IL-13，例如人类IL-13之结合性。该抗IL-13抗体分子可竞争性抑制IL-13Rα1及/或IL-13Rα2与IL-13之结合作用。该抗IL-13抗体分子可以与IL-13上之表位进行相互作用，其当结合时可立体上防止与IL-13Rα1及/或IL-13Rα2进行相互作用。在实施方案中，该抗IL-13抗体分子可特异性结合至人类IL-13并竞争性抑制第二抗体对该人类IL-13之结合性，其中该第二抗体系选自可以与IL-13，例如人类IL-13结合之13.2、MJ2-7及/或C65(或文中所述之任何其它抗IL-13抗体)。该抗体IL-13抗体分子可竞争性抑制13.2、MJ2-7及/或C65对IL-13之结合性。该抗IL-13抗体分子可特异性结合由与人类IL-13结合之13.2、MJ2-7所定义之表位或由与人类IL-13结合之C65所定义之表位中的至少一个氨基酸。在一个实施方案中，该抗IL-13抗体分子可结合至与13.2、MJ2-7或C65之表位重叠(其共同包括至少1、2、3或4个氨基酸)之表位或当结合时可立体上防止与13.2、MJ2-7或C65进行相互作用之表位。例如该抗体分子可接触一或多个得自IL-13之残基，例如选自人类IL-13(SEQ ID NO：194)之残基81-93及/或114-132中之一或多种，或选自以下之一或多种：于SEQ ID NO：194[在成熟序列中之位置；SEQ ID NO：195]之位置68[49]的谷氨酸、于位置72[53]之天冬酰胺、于位置88[69]之甘氨酸、于位置91[72]之脯氨酸、于位置92[73]之组氨酸、于位置93[74]之赖氨酸、及/或于位置105[86]之精氨酸。在其它实施方案中，该抗体分子可接触得自IL-13之一或多种氨基酸残基，其选自SEQ ID NO：24或SEQ ID NO：178之残基116、117、118、122、123、124、125、126、127、及/或128中之一或多种。在一个实施方案中，不考虑存在于SEQ ID NO：24中之位置130的多态性，该抗体分子可结合至IL-13。

在一个实施方案中，该抗体分子包括1、2、3、4、5或所有6个得自mAb13.2、MJ2-7、C65或文中所述之其它抗体的CDR或密切相关的CDR，例如相同或具有至少一氨基酸变化但是不超过2、3或4个变化(例如取代(保守取代)、缺失或插入)的CDR。该抗体分子可任选包括文中所述之任何CDR。在实施方案中，该重链免疫球蛋白可变结构域包含重链CDR3，其与单克隆抗体MJ2-7(SEQ ID NO：17)、mAb 13.2(SEQ ID NO：196)或C65(SEQ ID NO：123)之重链CDR3相差少于3个氨基酸取代。在其它实施方案中，该轻链免疫球蛋白可变结构域包含轻链CDR1，其与单克隆抗体MJ2-7(SEQ ID NO：18)、mAb 13.2(SEQ ID NO：197)或C65(SEQ IDNO：118)之对应轻链CDR相差少于3个氨基酸取代。该MJ2-7重链可变结构域的氨基酸序列具有如SEQ ID NO：130所示之氨基酸序列。该MJ2-7之轻链可变结构域的氨基酸序列具有如SEQ ID NO：133所示之氨基酸序列。该单克隆抗体13.2之重链可变结构域的氨基酸序列具有如SEQ IDNO：198所示之氨基酸序列。该单克隆抗体13.2之轻链可变结构域的氨基酸序列具有如SEQ ID NO：199所示之氨基酸序列。

在特定实施方案中，该抗体分子之重链可变结构域包括以下之一或多种：

在CDR1中，G-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-(MI)-H(SEQ ID NO：48)

在CDR2中，(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-(SD)-(PQ)

-K-F-Q-G(SEQ ID NO：49)、及/或

在CDR3中，SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：17)

在CDR1中，GFNIKDTYIH(SEQ ID NO：15)

在CDR2中，RIDPANDNIKYDPKFQG(SEQ ID NO：16)、及/或

在CDR3中，SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：17)

在其它实施方案中，该抗体分子之轻链可变结构域包括以下之一或多种：

在CDR1中，(RK)-S-S-Q-S-(LI)-(KV)-H-S-(ND)-G-N-(TN)

-Y-L-(EDNQYAS)(SEQ ID NO：25)、

在CDR2中，K-(LVI)-S-(NY)-(RW)-(FD)-S(SEQ ID NO：27)、及/或

在CDR3中，Q-(GSA)-(ST)-(HEQ)-I-P(SEQ ID NO：28)；或

在CDR1中，RSSQSIVHSNGNTYLE(SEQ ID NO：18)、

在CDR2中，KVSNRFS(SEQ ID NO：19)、及

在CDR3中，FQGSHIPYT(SEQ ID NO：20)。

在其他实施方案中，该抗体分子包括一个或多个这样的CDR，即所述CDR包括选自氨基酸序列EQ ID NO：197、SEQ ID NO：200、SEQ IDNO：201、SEQ ID NO：202、SEQ ID NO：203和SEQ ID NO：196的氨基酸序列。

在另一实施方案中，所述抗体包括至少1、2或者3个Chothia高变环，其来自选自例如mAb13.2、MJ2-7、C65或本文公开的任何其他抗体之抗体的重链可变区，或者尤其包括至少来自那些高变环的接触IL-13的氨基酸。在另一实施方案中，所述抗体或者其片段包括至少1、2或者3个高变环，其来自例如选自例如mAb13.2、MJ2-7、C65或本文公开的其他抗体之抗体的轻链可变区，或者至少包括来自那些高变环的接触IL-13的氨基酸。在另一实施方案中，所述抗体或者其片段包括至少1、2、3、4、5或者6个高变环，其来自选自例如mAb13.2、MJ2-7、C65或本文公开的其他抗体之抗体的重链和轻链的可变区。

在一个实施方案中，所述蛋白质包括来自mAb13.2、MJ2-7、C65或本文公开的其他抗体的所有6个高变环或者密切相关的高变环，例如，与本文公开的序列同一或者具有至少一个氨基酸改变，但是不超过2、3、或者4个改变的高变环。任选地，该蛋白质包括本文描述的任一高变环。

在另一实例中，所述蛋白质包括至少1、2或者3个高变环，其具有与mAb13.2、MJ2-7、C65或本文公开的其他抗体的对应的高变环相同的标准结构(canonical structure)，例如，与mAb13.2、MJ2-7、C65或本文公开的其他抗体的重和/或轻链可变区的至少环1和/或环2相同的标准结构。关于高变环标准结构的描述，见，例如，Chothia等(1992)J.Mol.Biol.227：799-817；Tomlinson等(1992)J.Mol.Biol.227：776-798。通过检查这些参考文献中描述的表格可以确定这些结构。

在一个实施方案中，该抗体分子的重链框架(例如，各个FR1、FR2、FR3，或包括FR1、FR2和FR3，但排除CDR的序列)包括与以下种系V片段序列之一的重链框架至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或更高同一的氨基酸序列：DP-25、DP-1、DP-12、DP-9、DP-7、DP-31、DP-32、DP-33、DP-58或DP-54，或其他可与1-3类标准结构相容的V基因(例如参见Chothia等(1992)J.Mol.Biol.227：799-817；Tomlinson等(1992)J.Mol.Biol.227：776-798)。其他可与1-3类标准结构相容的框架包括具有一个或多个以下根据Kabat编号之残基的框架：位置26的Ala、Gly、Thr或Val；位置26的Gly；位置27的Tyr、Phe或Gly；位置29的Phe、Val、Ile或Leu；位置34的Met、Ile、Leu、Val、Thr、Trp或Ile；位置94的Arg、Thr、Ala、Lys；位置54的Gly、Ser、Asn或Asp；以及位置71的Arg。

在一个实施方案中，该抗体分子的轻链框架(例如，各个FR1、FR2、FR3，或包括FR1、FR2和FR3，但排除CDR的序列)包括与VκII亚群种系序列或以下种系V片段序列之一的轻链框架至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或更高同一的氨基酸序列：A17、A1、A18、A2、A19/A3或A23，或可与4-1类标准结构相容的另一V基因(Tomlinson等(1995)EMBO J.14：4628)。其他可与4-1类标准结构相容的框架包括具有一个或多个以下根据Kabat编号之残基的框架：位置2的Val或Leu或Ile；位置25的Ser或Pro；位置29的Ile或Leu；位置31d的Gly；位置33的Phe或Leu；以及位置71的Phe。

在另一实施方案中，该抗体分子的轻链框架(例如，各个FR1、FR2、FR3，或包括FR1、FR2和FR3，但排除CDR的序列)包括与VκI亚群种系序列(例如，DPK9序列)轻链框架至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或更高同一的氨基酸序列。

在另一实施方案中，该抗体分子的重链框架(例如，各个FR1、FR2、FR3，或包括FR1、FR2和FR3，但排除CDR的序列)包括与VH I亚群种系序列(例如，DP-25序列)或VH III亚群种系序列(例如，DP-54序列)轻链框架至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或更高同一的氨基酸序列。

在某些实施方案中，该抗体分子的重链免疫球蛋白可变区包括由下述核苷酸序列编码的氨基酸序列，所述核苷酸序列在高严格条件下与以下核苷酸序列的互补序列杂交：编码V2.1的重链可变区(SEQ ID NO：71)、V2.3的重链可变区(SEQ ID NO：73)、V2.4的重链可变区(SEQ ID NO：74)、V2.5的重链可变区(SEQ ID NO：75)、V2.6的重链可变区(SEQ ID NO：76)、V2.7的重链可变区(SEQ ID NO：77)、V2.11的重链可变区(SEQ ID NO：80)、ch13.2的重链可变区(SEQ ID NO：204)、h13.2v1的重链可变区(SEQ IDNO：205)、h13.2v2的重链可变区(SEQ ID NO：206)或h13.2v3的重链可变区(SEQ ID NO：207)的核苷酸序列；或包括与V2.1的重链可变区(SEQ IDNO：71)、V2.3的重链可变区(SEQ ID NO：73)、V2.4的重链可变区(SEQ IDNO：74)、V2.5的重链可变区(SEQ ID NO：75)、V2.6的重链可变区(SEQ IDNO：76)、V2.7的重链可变区(SEQ ID NO：77)、V2.11的重链可变区(SEQ IDNO：80)；ch13.2的重链可变区(SEQ ID NO：208)，h13.2v1的重链可变区(SEQ ID NO：209)、h13.2v2的重链可变区(SEQ ID NO：210)或h13.2v3的重链可变区(SEQ ID NO：211)氨基酸序列至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或更高同一的氨基酸序列。在实施方案中，该重链免疫球蛋白可变区包括SEQ ID NO：80的氨基酸序列，其可以进一步包括包含SEQ ID NO：116或SEQ ID NO：117氨基酸序列的重链可变区构架区4(FR4)。

在其他实施方案中，该抗体分子的轻链免疫球蛋白可变区包括由下述核苷酸序列编码的氨基酸序列，所述核苷酸序列在高严格杂交条件下与编码V2.11(SEQ ID NO：36)或h13.2v2(SEQ ID NO：212)轻链可变区的核苷酸序列的互补序列杂交；或包括与V2.11(SEQ ID NO：36)或h13.2v2(SEQ ID NO：212)的轻链可变区至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或更高同一的氨基酸序列。在实施方案中，该轻链免疫球蛋白可变区包括SEQ ID NO：36的氨基酸序列，其可以进一步包括包含SEQ ID NO：47氨基酸序列的轻链可变区构架区4(FR4)。

在另一实施方案中，该抗体分子包括重链可变区构架区序列，其包含：

在对应于49的位置上，Gly；

在对应于72的位置上，Ala；

在对应于48的位置上，Ile，以及对应于49的Gly；

在对应于48的位置上，Ile，对应于49的Gly；以及对应于72的Ala；

在对应于67的位置上，Lys，对应于68的Ala；以及对应于72的Ala；和/或

在对应于48的位置上，Ile，对应于49的Gly；对应于72的Ala；以及对应于79的Ala。

在一个实施方案中，抗-IL-13抗体分子包括至少一个包含SEQ IDNO：177的氨基酸序列(或与SEQ ID NO：177至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或更高同一的氨基酸序列)的轻链以及至少一个包含SEQID NO：176的氨基酸序列(或与SEQ ID NO：176至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或更高同一的氨基酸序列)的重链。

在一个实施方案中，该抗-IL-13抗体分子包括两个免疫球蛋白链：轻链，其包括SEQ ID NO：199、213、214、212或215；重链，其包括SEQ IDNO：198、208、209、210或211(或与SEQ ID NO：199、213、214、212或215，或SEQ ID NO：198、208、209、210或211至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或更高同一的氨基酸序列)。该抗体分子还可在重链中包括SEQ ID NO：193的氨基酸序列，以及在轻链中包括SEQ IDNO：216的氨基酸序列(或与SEQ ID NO：193或SEQ ID NO：216至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或更高同一的氨基酸序列)。

在另一实施方案中，该IL-13结合剂，例如抗IL-13抗体分子可干扰IL-13与该受体IL-13RI1之相互作用。在一个实施方案中，该IL-13结合剂可干扰IL-13(SEQ ID NO：124；第13A图)之Phe107与由残基Leu319、Cys257、Arg256、及Cys320之侧链所形成之IL-13Rα1疏水性口袋(SEQ IDNO：125；第13B图)的相互作用，例如藉直接结合至这些残基或位阻。在另一实施方案中，该IL-13结合剂可干扰IL-13Rα1(SEQ ID NO：125)之氨基酸残基Ile254、Ser255、Arg256、Lys318、Cys320、及Tyr321与IL-13(SEQ IDNO：124)之氨基酸残基Arg11、Glu12、Leu13、Ile14、Glu15、Lys104、Lys105、Leu106、Phe107、及Arg108间之范德华相互作用，例如藉直接结合至这些残基或位阻。

本文应用的冠词“一”是指一或超过一(例如至少一)个该冠词的文法对象。

本文所使用的术语“或”意思是“和/或”，并可与术语“和/或”互换使用，除非上下文清楚的以其他方式指明。

术语“蛋白质”或“多肽”在文中可互换使用。

“约”和“大约”是指鉴于测量的性质或精度，对于测量量的可接受的误差度。示例性误差度是在给定数值或数值范围的20％内，一般在10％之内，更一般在5％之内。

在本申请中引用的所有出版物、未决专利申请、公开的专利申请(包括US 06/0073148和US 06/0063228)、以及公开的专利均在此全文引入作为参考。

根据下面的详细描述、附图和权利要求，本发明的其他特征和优点将是显而易见的。

附图简述

图1A是人类和猕猴IL-13全长(分别为SEQ ID NO：178和SEQ IDNO：24)的比对。通过阴影框出残基表示氨基酸不同。R至Q取代(对应于变应性患者中检测到的多态性)的位置是框出的130位。通过箭头显示切割位点的位置。

图1B是来自猕猴IL-13的示例性肽列表(分别为SEQ IDNO：179-188)，所述肽可用于产生抗IL-13抗体。

图2是表示通过CD23⁺单核细胞(y轴)百分比测量的通过多种IL-13结合剂中和NHP IL-13活性的图表。在x轴上标出了MJ2-7(△)、C65(◆)和sIL-13RI2-Fc(●)的浓度。

图3是描述通过MJ2-7(鼠；●)或人源化MJ2-7 v2.11(○)(文中可互换地称为“hMJ2-7v.2-11”或“MJ2-7v.2-11”)中和NHP IL-13活性的图表。通过作为抗体浓度(x轴)函数的STAT6磷酸化(y轴)测量NHP IL-13活性。

图4是描述通过MJ2-7v2.11(○)或sIL-13RI2-Fc(▲)中和NHP IL-13活性的图。通过作为拮抗剂浓度(x轴)函数的STAT6磷酸化(y轴)测量NHPIL-13活性。

图5是描述通过MJ2-7(△)、C65(◆)或sIL-13RI2-Fc(●)中和NHPIL-13活性的图表。通过作为拮抗剂浓度(x轴)函数的STAT6磷酸化(y轴)测量NHP IL-13活性。

图6A是描述通过天然人IL-13(x轴)诱导生腱蛋白产生(y轴)的图表。

图6B是描述通过MJ2-7中和NHP IL-13活性的图表，其通过作为抗体浓度(x轴)的函数测量生腱蛋白产生(y轴)的抑制来测量。

图7是描述MJ2-7或对照抗体与结合至sIL-13RI2-Fc的NHP-IL-13结合的图表，其中所述的sIL-13RI2-Fc耦联至SPR芯片。

图8是描述各种浓度(0.09-600nM)的NHP IL-13与捕获的hMJ2-7V2-11抗体结合的图表。

图9是描述通过小鼠MJ2-7(●)、或人源化形式1(○)、人源化形式2(◆)或人源化形式3(△)抗体中和NHP IL-13活性的图表。通过作为抗体浓度(x轴)函数的STAT6磷酸化(y轴)测量NHP IL-13活性。

图10是描述通过包括小鼠MJ2-7 VH和VL的抗体(●)、包括小鼠VH和人源化形式2VL的抗体(△)、或包括人源化形式2VH和VL的抗体(◆)中和NHP IL-13活性的图表。通过作为抗体浓度(x轴)函数的STAT6磷酸化(y轴)测量NHP IL-13活性。

图11A和11B是描述通过MJ2-7抗体抑制IL-13与固定的IL-13受体结合的图表，如通过ELISA所测量的那样。作为在450nm处的吸光度描述结合(y轴)。在x轴上描述了MJ2-7抗体的浓度。图11A描述与IL-13Rα1的结合。图11B描述与IL-13Rα2的结合。

图12是DPK18种系氨基酸序列(SEQ ID NO：126)和人源化MJ2-7形式3VL(SEQ ID NO：190)的比对。

图13A是成熟、经加工的人IL-13氨基酸序列(SEQ ID NO：124)。

图13B显示了人IL-13Rα1的氨基酸序列(SEQ ID NO：125)。

图14A-14D显示了与攻击前(基线)样本相比较，在蛔虫攻击后BAL液体中存在的总细胞数/ml和炎性细胞百分比的增加。

图15A-15D显示了在用蛔虫攻击前和攻击后的对照和经抗体处理的猕猴的BAL液体中的总BAL细胞/ml。对照(明圆圈(○))；MJ2-7v.2-11处理的样本(明三角形(△))和mAb 13.2v2处理的样本(暗三角形(▲))(在该研究中应用了MJ2-7的人源化形式(MJ2-7v.2-11)和mAb 13.2v2)。

图16A-16B显示了在从蛔虫攻击后的经抗体处理的猕猴中收集的浓缩BAL液体中嗜酸细胞活化趋化因子水平相对于对照的改变。图16A描述了柱状图，其显示蛔虫攻击后的嗜酸细胞活化趋化因子水平(pg/ml)相对于基线、攻击前数值的升高。图16B描述了与对照(暗圆圈)相比较，来自用mAb 13.2-(灰色圆圈)或MJ2-7-(灰色三角形)抗体处理的猕猴的浓缩BAL液体中嗜酸细胞活化趋化因子水平的降低。(在该研究中应用了MJ2-7的人源化形式(MJ2-7v.2-11)和mAb 13.2v 2)。

图17A-17B描述了在攻击后8周在对照和经抗体处理的样本中蛔虫特异性IgE滴度的变化。图17A描述了代表性实例，其显示在用无关Ig(IVIG；动物20-45；上排)处理的各个猴子中蛔虫特异性IgE滴度没有改变，以及在用人源化MJ2-7v.2(动物120-434；下排)处理的各个猴子中蛔虫特异性IgE滴度降低。图17B描述了在蛔虫攻击后8周，mAb13.2或MJ2-7(黑圆圈)处理的猕猴相对于无关Ig处理的猕猴(IVIG(灰色圆圈))中蛔虫特异性IgE滴度的降低。

图18A-18B显示了攻击后24小时或8周，在对照和经抗体处理的样本中蛔虫特异性嗜碱性粒细胞组胺释放的变化。图18A描述了在用盐水(左)或人源化mAb13.2v.2(右)处理的代表性各只猴子中的以下样本：抗体处理前或蛔虫攻击的样本(圆圈)；抗体处理后48小时，蛔虫攻击后24小时的样本(三角形)；和蛔虫攻击后8周的样本(菱形)。图18B描述了柱状图，其显示在对照(实心黑色条形)、人源化mAb13.2-(白色条形)和人源化MJ2-7v.2-11-(影线条形)处理的猕猴中蛔虫攻击前和攻击后8周归一化组胺水平的变化。

图19描述了在对照(明圆圈)和抗IL-IL-13或地塞米松处理的样本(暗圆圈)中蛔虫特异性组胺释放和组胺特异性IgE水平之间的关联。

图20是系列柱状图，其描述了在用人源化MJ2-7(hMJ2-7v.2-11)处理的各只猕猴中血清IL-13水平的变化。在每一柱中的标签(例如，120-452)相应于猴识别号。“前”样本是在施用抗体前收集的。时间“0”在施用抗体后24小时，但在蛔虫攻击前收集。其余的时间点是蛔虫攻击后。

图21是柱状图，其描述了不存在血清(“无血清”)；存在来自盐水或IVIG处理的动物的血清(“对照”)；或存在来自抗-IL-13抗体处理的动物的血清(在施用抗体前(“前”)、或施用所示的抗体后1-2周)时，0、1或10ng/ml的非人灵长类IL-13的STAT6磷酸化活性。以1∶4稀释测试血清。(在这一研究中应用了MJ2-7的人源化形式(MJ2-7v.2-11)和mAb 13.2v2)。

图22A-22C是线性图，其显示了在猕猴血清中通过人源化MJ2-7(hMJ2-7v.2-11)捕获的非人灵长类IL-13水平与蛔虫攻击后BAL液体中测得的炎性水平相关联。

图23A-23B是线图，其显示了应答人重组R110Q IL-13气管内施用的小鼠肺功能中的改变；图23A显示了应答递增剂量的雾状乙酰甲基胆碱的气道阻力(RI)的改变；图23B显示了应答递增剂量的雾状乙酰甲基胆碱的动态肺顺应性(Cdyn)的改变。

图24A-24B是柱状图，其显示了应答人重组R110Q IL-13气管内施用的鼠肺炎和细胞因子产生的增加。在图24A中，通过不同的细胞计数确定支气管肺泡灌洗物(BAL)中的嗜酸性粒细胞和中性粒细胞的百分比。在图24B中，通过细胞计数柱阵列确定BAL中细胞因子、MCP-1、TNF-I和IL-6的水平。数据是每群10只动物的中值±s.e.m.。

图25A-25B是散点图，其显示在气管内和静脉内施用后，在BAL和血清中的人源化MJ2-7-11(hMJ2-7v.2-11)抗体水平。动物用人重组R110QIL-13或等体积(20TL)的盐水在1、2和3天气管内处理。在0天和每一人重组R110Q IL-13施用之前2小时施用人源化MJ2-7v.2-11抗体。图25A描述了当在0天静脉内施用和在1、2、和3天腹膜内施用抗体；或在0、1、2、3天鼻内施用抗体(显示于图25B)的结果。通过ELISA分析BAL和血清中的总人IgG水平。

图26A-26C显示了在鼻内施用诱导改变肺功能的人重组R110Q IL-13后人源化MJ2-7v.2-11抗体的效果。(A)图26A显示了表示为从基线变化的肺阻力(RI；cm H₂O/ml/秒)。图26B显示了表示为消除对应于从基线的2.5ml H₂O/cm/秒变化的肺阻力所需乙酰甲基胆碱剂量的数据。对于每一处理组显示了中值。通过双尾t-测试计算p值。图26C显示了在BAL和血清中的中值人IgG水平。

图27A-27D显示了气管内施用人重组R110Q IL-13和鼻内施用人源化MJ2-7v.2-11抗体后，BAL的改变和单独施用的人重组R110Q IL-13(图27A-27B)或与人源化MJ2-7v.2-11联合施用的人重组R110Q IL-13(图27C-27D)血清水平的改变。对每一组标出了中值。n.d.是未检测到。

图28A-28B是点图，其显示了在鼻内施用人重组R110Q IL-13和鼻内施用500、100和20Tg人源化MJ2-7v.2-11和人源化13.2v.2、盐水或500Tg IVIG后，浸润至BAL的嗜酸性粒细胞(图28A)和嗜中性粒细胞(图28B)的水平。通过不同的细胞计数确定嗜酸性粒细胞和嗜中性粒细胞百分比。对于每一处理组显示了中值。通过双尾测试确定p值，并与IVIG相比较指出每一抗体处理组的p值。

图29A-29C是点图，其分别显示了鼻内施用人重组R110Q IL-13和鼻内施用500Tg人源化MJ2-7v.2-11、人源化13.2v.2、或IVIG或盐水后，细胞因子水平、MCP-1、TNF-I和IL-6的变化。短划线指出测试敏感度的极限。数据表示每一组的中值。根据双尾t-测试，P值≤0.0001。

图30A-30B是点图，其显示了人重组R110Q IL-13水平与肺炎直接相关，如通过嗜酸性粒细胞增多所测得的那样；并且在鼻内施用人重组R110Q IL-13和鼻内施用500、100和20μg剂量的人源化MJ2-7v.2-11抗体后，其与人源化MJ2-7v.2-11 BAL水平呈反比。通过ELISA测量人源化MJ2-7v.2-11抗体BAL水平。通过细胞计数珠测试法确定人重组R110QIL-13 BAL水平。通过不同的细胞计数确定％嗜酸性粒细胞。显示了％嗜酸性粒细胞炎症水平和人重组R110Q IL-13之间的关系(图30A)，包括来自盐水对照动物、单独用人重组R110Q IL-13处理的小鼠、和用类重组R110Q IL-13及500、100和20μg人源化MJ2-7v.2-11抗体或500μg IVIG处理的小鼠的数据；以及人源化MJ2-7v.2-11和IL-6之间的关系(图30B)，包括来自用500、100和20μg人源化MJ2-7v.2-11抗体处理的小鼠的数据。通过线性回归分析确定r²和p值。

图31A-31B为表示分别在各种小鼠及大鼠组织内之[¹²⁵I]-标记之人源化13.2v.2抗IL-13抗体及[¹²⁵I]-标记之人源化MJ2-7v.2-11抗体的浓度之线图。静脉内施用抗IL-13抗体后，于1、24、168、及336小时下(图31A)或1、48、168、336、及840小时下(图31B)收集组织样品。

图32A-32B为表示经过一段时间后，实测及预测之IL-13及抗IL-13抗体水平的线图。在图32A中，系对首次用于实验之猕猴施用1毫克/千克之人源化MJ2-7v.2-11抗体。使用特异性ELISA在0-45天内定量总IL-13及人源化MJ2-7v.2-11血清水平。根据图40中所示模型之预测IL-13及人源化MJ2-7v.2-11抗体水平系用于比较。在图32B中，系于第0天对猕猴施用人源化13.2v.2及人源化MJ2-7v.2-11抗体并于第1天进行蛔虫攻击。使用特异性ELISA在至多120天之时间内定量总IL-13血清水平。

图33为人源化MJ2-7v.2-11之PK-PD模型的图式。Ab为hMJ2-7v.2-11。复合体为hMJ2-7v.2-11/IL-13复合体。CL_d，Ab及CL_Ab分别为hMJ2-7v.2-11之分布清除率及血清清除率。CL_复合体及CL_IL-13分别为该复合体及IL-13之血清清除率。K_syn为零阶IL-13合成速率常数，K_on为二级结合速率常数，且K_off为一级解离速率常数。V及V₂分别为hMJ2-7v.2-11在该血清(中央)及第二区室中之分布体积。

图34A-34C表示在猕猴内之平均hMJ2-7v.2-11及总IL-13浓度时间图。对首次用于实验之猕猴施用单一1毫克/千克IV或2毫克/千克SC剂量之hMJ2-7v.2-11并对经蛔虫攻击之猕猴施用单一10毫克/千克IV剂量之hMJ2-7v.2-11。该hMJ2-7v.2-11施用后24小时，使用0.75微克猪蛔虫抗原进行该攻击。使用定量ELISAs测定hMJ2-7v.2-11(A，B)和总IL-13(C)浓度。数据点表示个别动物值(A)或平均值(B及C)。就该等平均值而言，在该等平均值之计算不包括SC群组内之第5号猴子的情况下，1毫克/千克-IV群组之N＝3，2毫克/千克-SC群组之N＝2，而10毫克/千克-IV群组之N＝8。误差线表示该等平均值之标准差。M＝猴子。

第35图为一系列表示使用图33中所述之经整合PK-PD模型拟合的单一剂量之hMJ2-7v.2-11后，hMJ2-7v.2-11(实心圆圈)及总IL-13(开心圆圈)浓度的拟合优度(goodness-of-fit)标绘图。显示了5只首次用于实验(N＝3,1毫克/千克IV及N＝2,2毫克/千克SC)及8只经蛔虫攻击的猕猴(10毫克/千克，IV)在施用单一剂量hMJ2-7v.2-11后之实测对预测之个别浓度(A)及个别称重之残留物及个别预测之浓度(B)。与本研究之其它首次用于实验之猴子比较，由于末期中之hMJ2-7v.2-11及总IL-13水平之急剧下降，所以自这些分析排除该SC群组中之一个动物。表示一首次用于实验(C)及一经蛔虫攻击之猴子(D)在IV施用hMJ2-7v.2-11后之代表性个体发作，且预测之hMJ2-7v.2-11及总IL-13水平系分别由实线及虚线表示。

图36A及36B为描述对猕猴单次IV施用hMJ2-7v.2-11后之模拟的游离IL-13与总IL-13浓度-时间分析之图解。就首次用于实验之猴子(图36A)而言，在研究1中使用10毫克/千克，而就经蛔虫攻击之猴子(图36B)而言，在研究2中使用10毫克/千克剂量且在hMJ2-7v.2-11施用(第1天)后24小时进行蛔虫攻击。游离态IL-13系由实线表示，而总IL-13系由虚线表示。

图37A及37B为表示对猕猴进行hMJ2-7v.2-11之不同施用方案后，模拟的游离态IL-13浓度-时间分析之图解。首次用于实验之猴子(图37A)及经蛔虫攻击之猴子(图37B)之hMJ2-7v.2-11(如所示)的单一IV快速浓注剂量为1、5、10、20或50毫克/千克。假定于施用前(第0天)进行蛔虫攻击以模拟“建立的呼吸道炎症”情况。

图38为自表示人源化MJ2-7v.2-11在正常猕猴及经蛔虫攻击之猕猴内之浓度-时间分析的PK数据所作之线图。

图39为自表示人源化13.2v.2在正常猕猴及经蛔虫攻击之猕猴组织内之浓度-时间特性的PK数据所作之线图。

图40为IL-13及抗IL-13抗体在猕猴组织内沉积之化学计量PK-PD模型，其中：Ab为抗IL-13抗体；复合体为Ab及IL-13复合体；Comp为区室；CLd_Ab及CL_Ab分别为Ab之分布清除率及血清清除率；CL_复合体为该复合体之血清清除率；K_SYN为零阶IL-13合成速率常数；K_DEG为一级IL-13降解常数；K_on为第三阶结合速率常数；K_off为一级解离速率常数；V_Ab及V2_Ab分别为在该血清及第二区室内之分布的表观体积；而该模型系基于以下假定：K_on为第3阶；抗IL-13及IL-13具有1∶2摩尔结合比；且V_抗IL-13＝V_复合体＝V_IL-13＝V。

图41为表示对首次用于实验之猕猴IV施用1毫克/千克之人源化MJ2-7v.2-11后，游离态及人源化MJ2-7v.2-11-结合的IL-13的预测血清浓度之线图。使用得自表8所述之研究及图34所述之浓度-时间图谱、及图40所提供之模型以预测数据，且其代表至多50天时间。

图42为表示对经蛔虫攻击之猕猴IV注射1毫克/千克之人源化MJ2-7v.2-11后，游离态及人源化MJ2-7v.2-11-结合IL-13之预测血清浓度的线图。使用得自表8所述之研究及图34所示之浓度-时间分析图、及图40所提供之模型以预测数据，且其代表至多150天时间。

图43为一系列表示人源化MJ2-7v.2-11之3种PK参数(CL、V_dss及t_1/2)之异速标度之线图。实线代表使用得自小鼠、大鼠及猴子之数据基于线性回归的拟合曲线。虚线代表95％置信区间。

图44为表示经抗IL-13抗体治疗(空心圆圈)或安慰剂治疗(实心圆圈)之人类患者在经变应原攻击后之于各时间点(变应原攻击后之时间(h)下的FEV1之变化百分比(FEV1变化％)的线图)。所示之结果为最初施用抗IL-13抗体或安慰剂前两周之筛检日当天进行变应原攻击之结果。(h)：小时；EAR：早期哮喘反应；LAR：晚期哮喘反应。

图45为表示经抗IL-13抗体治疗(空心圆圈)或安慰剂治疗(实心圆圈)之人类患者在经变应原攻击后于各时间点(变应原攻击后之时间(h))下的FEV1之变化百分比(FEV1变化％)的线图。所示结果为最初施用抗IL-13抗体或安慰剂后，在第14天进行变应原攻击之结果。(h)：小时；EAR：早期哮喘反应；LAR：晚期哮喘反应。

图46为表示经抗IL-13抗体治疗(空心圆圈)或安慰剂治疗(实心圆圈)之人类患者在变应原攻击后于各时间点(变应原攻击后之时间(h))下，FEV1之变化百分比(FEV1变化％)的线图。所示结果为最初施用抗IL-13抗体或安慰剂后在第35天进行变应原攻击之结果。(h)：小时；EAR：早期哮喘反应；LAR：晚期哮喘反应。

图47为表示在第14及35天之血清浓度(纳克/毫升)的曲线图。

图48表示初施用抗体(或安慰剂)后，在第14及35天于该EAR(早期)及LAR(晚期)期间之最大下降百分比(最大下降％)及该下降百分比曲线下之面积(下降％AUC)的表。亦显示P值(P-val)。

图49为表示施用后一段时间(天数)，在人类患者内之该13.2v2抗体血清浓度(纳克/毫升)的线图。细线系描述以4毫克/千克之单一渐增剂量施用13.2v2抗体之该PK特性分析。粗线系描述以两次2毫克/千克剂量施用之13.2v2抗体的PK特性分析。这两次剂量之施用间隔一周。

图50为表示得自试验A及B之藉毫克/千克剂量对81个受试者之各体重而标准化的各AUC之曲线图。

图51为表示得自试验A及B之藉总剂量(体重＊毫克/千克剂量)对81个受试者之个别体重而标准化之个别AUC的曲线图。

图52为表示藉实际剂量(体重＊毫克/千克剂量)而标准化之13.2v2 AUC暴露量的曲线图。

详述

本文公开用于治疗IL-13相关疾病或病症及/或监测IL-13相关疾病或病症之治疗的方法及组合物。在一个实施方案中，申请人已发现相对于未经治疗之受实验，IL-13拮抗剂，例如IL-13抗体分子之施用减少了受试者，例如人类受试者之经变应原诱发的早期及/或晚期哮喘反应之至少一种症状。该受试者接触危害(例如变应原)后数分钟内及在早期哮喘反应期间(例如接触该危害后至多约3小时)检测出一或多种哮喘病症状减轻。在晚期哮喘反应期间(例如危害接触后约3至24小时)可维持症状之减轻。在其它实施方案中，系公开评估抗IL-13抗体分子及/与该抗体分子有关之治疗方式的方法。该等评估方法包括检测该受试者内之抗IL-13抗体分子之至少一种药物动力学/药效学(PK/PD)参数。因此，系公开IL-13结合剂或拮抗剂用于减少或抑制、及/或预防或延缓一或多种与受试者之早及/或晚期IL-13相关疾病或病症有关之症状的发作之用途。在其它实施方案中，亦公开用于评估IL-13结合剂或拮抗剂在治疗或预防受试者之IL-13相关疾病或病症的动力学及/或效力之方法。

定义

为了方便，本文定义了某些术语。可在本说明书中找到补充的定义。

术语“IL-13”包括本领域称为IL-13(不管物种来源，并且包括哺乳动物例如人或非人灵长类IL-13)的细胞因子的全长未加工形式，及其此类细胞因子的成熟、加工的形式和任何片段(至少5个氨基酸)或其变体。可根据全长、未加工的人IL-13序列的编号指定IL-13序列内的位置。对于示例性的全长猴IL-13，参见SEQ ID NO：24，对于成熟、经加工的猴IL-13，参见SEQ ID NO：14；对于全长人IL-13，参见SEQ ID NO：178；对于成熟、经加工的人IL-13，参见SEQ ID NO：124(图1)。示例性序列列举如下：

MALLLTTVIALTCLGGFASPGPVPPSTALRELIEELVNITQNQKAPLCNGSMVWSI

NLTAGMYCAALESLINVSGCSAIEKTQRMLSGFCPHKVSAGQFSSLHVRDTKIEV

AQFVKDLLLHLKKLFREGRFN(SEQ ID NO：178)

由于8种氨基酸序列，人类与猕猴IL-13序列之氨基酸序列的同一性为约94％。这些差异之一，R130Q代表通常在哮喘病人者表达之共同人类多态性(Heinzmann等人(2000)Human Mol Genet.9：549-559)。

IL-13受体蛋白质及其可溶性形式(例如IL-13Rα1及IL-13Rα2或其融合物)之代表性序列系描述在以下数据中：例如Donaldson等人(1998)JImmunol.161：2317-24；美国专利6,214,559；美国专利6,248,714；及美国专利6,268,480。

IL-13/IL-13R多肽的“生物活性”是指对应于成熟IL-13的一种或多种生物活性，包括但不限于：(1)与IL-13R多肽(例如，人IL-13R)相互作用，例如与之结合；(2)与信号转导分子(例如γ共有分子)相关联；(3)刺激stat蛋白(例如，STAT6)的磷酸化和/或活化；(4)诱导CD23表达；(5)通过人B细胞产生IgE；(6)体内诱导由抗原诱导的嗜酸性粒细胞增多；(7)体内诱导由抗原诱导的支气管缩窄；(8)体内诱导由药物诱导的呼吸道反应过度；(9)体内诱导eotoxin水平；和/或(10)诱导由嗜碱性粒细胞释放的组胺。

“IL-13相关疾病或病症”是其中IL-13对该疾病或病症的病理或症状具有作用的疾病或病症。因此，可应用IL-13结合剂，例如是一种或多种IL-13相关活性拮抗剂的IL-13结合剂来治疗或预防该疾病。

本文所用的“治疗有效量”的IL-13/IL-13R拮抗剂是指当单或多剂量施用受试者(例如，人类患者)时，在以下当中有效的试剂量：治愈、减轻其严重程度、改善、或预防疾病的一种或多种症状；或延长该受试者的生存期超过不存在该治疗时预期的生存期。

本文所用的“预防有效量”的IL-13/IL-13R拮抗剂是指当单或多剂量施用受试者(例如，人类患者)时，在预防、减轻其严重程度、或延缓IL-13相关疾病或病症(例如本文所描述的疾病或病症)发作或复发中有效的L-13/IL-13R拮抗剂的量。

本文所使用的“单一治疗间隔”是指当作为单剂量、或作为有限次数重复剂量施用时，施用IL-13/IL-13R拮抗剂的量和/或次数减少其严重程度、改善、预防或延缓IL-13相关疾病或病症(例如本文所描述的疾病或病症)的一种或多种症状的发作或复发。在实施方案中，在单一治疗间隔期间，将施用的频率限制为不超过2或3剂量，例如从开始剂量的一周或更少之内施用该重复剂量。

术语“分离的”是指基本上在其自然环境外的分子。例如，分离的蛋白质基本上没有来自其衍生自其中的细胞或组织来源的细胞材料或其他蛋白质。该术语是指其中分离的蛋白基本上纯的以作为治疗组合物施用的制备物，或至少70％至80％(w/w)纯，更优选地至少80％至90％(w/w)纯，甚至更优选地90％至95％(w/w)纯，以及至少95％、96％、97％、98％、99％或100％(w/w)纯。“分开的”化合物是指这样的化合物，即从该化合物从其中获得的样本中移出至少一种化合物的至少90％。本文描述的任何化合物均可作为分离的或分开的化合物提供。

本文所用的“在低严格、中严格、高严格或极高严格条件下杂交”描述杂交和洗涤的条件。进行杂交反义的指引可以在Current Protocols inMolecular Biology，John Wiley & Sons，N.Y.(1989)，6.3.1-6.3.6中找到。在该参考书中描述了水性和非水性方法，并且都可以使用。在本文中指出的特定杂交条件如下：1)在约45℃在6X氯化钠/柠檬酸钠(SSC)中的低严格杂交条件，随后在至少50℃(对于低严格条件，洗涤温度可升高至55℃)在0.2X SSC、0.1％SDS中洗涤两次；2)在约45℃在6X SSC中的中严格杂交条件，随后在60℃在0.2X SSC、0.1％SDS中洗涤一或多次；3)在约45℃在6X SSC中的高严格杂交条件，随后在65℃在0.2X SSC、0.1％ SDS中洗涤一或多次；以及优选4)极高严格杂交条件是在65℃的0.5M磷酸钠、7％ SDS，随后在65℃在0.2X SSC、0.1％ SDS中洗涤一或多次。极高严格条件(4)是优选的条件，并且是所使用的一个，除非另外指明。

本发明的方法和组合物包括多肽和核酸，其具有指定的序列，或与指定的序列基本上同一或类似的序列，例如，与该指定序列至少85％、90％、95％同一或更高的序列。在氨基酸序列的情况下，本文所使用的术语“基本上同一”是指第一氨基酸序列含有充足的或最小数量的这样的氨基酸残基：i)与之同一；或ii)与第二氨基酸序列的比对的氨基酸残基是保守取代，因此该第一和第二氨基酸序列可以具有共同的结构结构域和/或共同的功能活性。例如，与特定序列含有共同结构结构域，具有至少约85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列称为基本上同一。

在核苷酸序列的情况下，本文所使用的术语“基本上同一”是指第一核酸序列含有充足的或最小数量的与第二核酸序列中所比对的核苷酸同一的核苷酸，因此该第一和第二核酸序列编码具有共同的功能活性的多肽，或编码共同的结构多肽结构域或共同的功能多肽活性。例如，与特定序列具有至少约85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列称为基本上同一。

术语“功能变体”是指与天然存在的序列具有基本上同一的氨基酸序列，或由基本上同一的核苷酸序列编码，并且能够具有天然存在的序列的一种或多种活性的多肽。

两序列之间的同源性或序列同一性(该术语可在本文中互换使用)的计算如下进行：

为确定两氨基酸序列、或两核酸序列的百分比同一性，以最优比较目的比对该序列(例如，对于最优比较目的，可在第一和第二氨基酸或核苷酸序列之一或两者中引入空位，以及为比较目的，可以忽略非同源序列)。在优选的实施方案中，为比较目的比对的参照序列长度至少是该参照序列长度的至少30％，优选至少40％，更优选至少50％、60％，以及甚至更优选至少70％，80％、90％、100％。然后比较在相应氨基酸位置或核苷酸位置上的氨基酸残基或核苷酸。当第一序列中的位置由与第二序列中相应位置上相同的氨基酸残基或核苷酸占据，则该分子在这一位置上同一(本文所使用的氨基酸或核酸“同一”与氨基酸或核酸“同源”等价)。

两序列之间的百分比同一性是该序列共有的同一位置数目的函数，考虑到为最优比对该两个序列的目的需要引入的空位数量，以及每一空位的长度。

可以应用数学算法完成两序列之间序列的比较和百分比同一性的确定。在优选的实施方案中，应用Needleman和Wunsch((1970)J.Mol.Biol.48：444-453)算法确定两氨基酸序列间的百分比同一性，其已被整合至GCG软件包(可从http://www.gcg.com获得)的GAP程序中，其应用Blossum 62矩阵或PAM250矩阵，以及16、14、12、10、8、6或4的空位权重和1、2、3、4、5或6的长度权重。在另一优选的实施方案中，应用GCG软件包(可从http://www.gcg.com获得)的GAP程序确定两核苷酸序列间的百分比同一性，其应用NWSgapdna.CMP矩阵和40、50、60、70或80的空位权重和1、2、3、4、5或6的长度权重。特别优选的参数设置(以及是应当使用的参数设置，除非另外指出)是Blossum 62记分矩阵，其具有12的空位罚分、4的空位延伸罚分以及5的框移空位罚分。

可应用E.Meyers和W.Miller((1989)CABIOS，4：11-17)的算法确定两氨基酸或核苷酸序列之间的百分比同一性，其已被整合至ALIGN程序(版本2.0)中，应用PAM120权重残基表格，12的空位长度罚分和4的空位罚分。

本文描述的核酸和蛋白质序列可以用作“查询序列”以针对公共数据库进行检索，例如以鉴定其他家族成员或相关序列。可以应用Altschul等(1990)J.Mol.Biol.215：403-10的NBLAST和XBLAST程序(版本2.0)进行此类检索。可用NBLAST程序、得分＝100、字长＝12，进行BLAST核苷酸检索，以获得与本发明的核酸分子同源的核苷酸序列。可用XBLAST程序、记分＝50、字长＝3，进行BLAST蛋白质检索，以获得与本发明的蛋白质分子同源的氨基酸序列。为获得为比较目的的有空位的比对，可如Altschul等，(1997)Nucleic Acids Res.25：3389-3402描述的那样应用空位BLAST(Gapped BLAST)。当应用BLAST和空位BLAST程序时，可应用各程序(例如，XBLAST和NBLAST)的缺省参数。参见http://www.ncbi.nlm.nih.gov。

术语“早期哮喘反应”或“EAR”系指受试者接触变应原后之反应初期。例如接触变应原后在前3小时(例如约2.5、约2.75、约2.9、约3.25、约3.5小时)内发生之反应被视为EAR。例如最大呼吸道缩小可发生在接触后之约15-30分钟内。于该EAR期间发生之事件可包括自呼吸道肥大细胞释放介体，诸如白三烯(例如LTA₄、LTB₄、LTC₄、LTD₄、LTE₄、及/或LTF₄)及/或组胺，例如导致支气管收缩及/或呼吸道水肿，及/或增加白三烯及/或组胺之水平(例如高于接触变应原前该受试者内之白三烯及/或组胺水平)。用于EAR之治疗法包括以下药剂之施用：抗IL-13抗体(例如文中所述之抗体)、抗组胺(例如氯雷他定((例如

)、西替利嗪(cetirizine)(例如

)、苯海拉明(diphenhydramine))、抗白三烯(例如扎鲁司特(zafirlukast)、孟鲁司特(montelukast)(例如

))、IL-4变体(例如品托吉拉(pintrakinra))或这些药剂中之2或多种的组合。

术语“晚期哮喘反应”或“LAR”系指于该EAR后发生之受试者接触变应原后的反应期或在受试者接触变应原后约3小时开始之反应。作为另一实例，该LAR系在约3-5小时后开始，于约6-12小时最大，且可持续至多约24小时。与该EAR不同，该LAR包括炎症细胞及/或黏液增加。例如该LAR可以与呼吸道反应性之增加及/或与例如该等呼吸道及/或支气管黏膜内之流入物及炎症细胞(诸如淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、及巨噬细胞)的活化作用有关(例如高于接触变应原前，该受试者之，例如呼吸道及/或支气管黏膜内之炎症细胞(诸如淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、及巨噬细胞)水平)。LAR之治疗法包括以下药剂量之施用：抗体IL-13抗体(例如文中所述之抗体)、类固醇(例如吸入性类固醇)、β-激动剂(例如沙丁胺醇(albuterol)(例如

)、美它丙肾上腺素(metaproteronol)(例如)、特布他林(terbutaline)(例如

或

))或这些药剂之2或多种之组合。

治疗剂(例如抗IL-13抗体)之“固定(flat)”剂量系指不需考虑患者之体重或身体表面积，对该患者施用之剂量。该固定剂量并非以毫克/千克之剂量提供，而是以该治疗剂之绝对数量提供。

抗体分子

IL-13拮抗剂和/或结合剂的实例包括抗体分子。本文所使用的术语“抗体分子”是指包含至少一个免疫球蛋白可变区序列的蛋白质。术语抗体分子包括，例如，全长、成熟的抗体和抗体的抗原结合片段。例如，抗体分子可以包括重(H)链可变区序列(本文简写为VH)、和轻(L)链可变区序列(本文简写为VL)。在另一实例中，抗体分子包括一或两个重(H)链可变区序列和/或一或两个轻(L)链可变区序列。抗原结合片段的实例包括：(i)Fab片段，其为由VL、VH、CL和CH1结构域所组成的单价片段；(ii)F(ab′)₂片段，其为包含在绞链区由二硫键连接的二个Fab片段的二价片段；(iii)Fd片段，其由VH和CH1结构域所组成；(iv)Fv片段，其由抗体单臂的VL和VH结构域所组成；(v)VH或VHH结构域；(iv)dAb片段，其由VH结构域所组成；(vii)骆驼科抗体，以及骆驼化(camelized)可变区；以及(viii)单链Fv(scFv)。

VH和VL区还可进一步分为高变区域，术语为“互补决定区”(CDR)，其散步有更保守的术语为“构架区”(FR)的区域。已通过许多方法精确的定义了构架区和CDR的范围(参见Kabat，E.A.，等(1991)Sequences ofProteins of Immunological Interest，第五版，U.S.Department of Healthand Human Services，NIH Publication No.91-3242；Chothia，C.等(1987)J.Mol.Biol.196：901-917；以及由Oxford Molecular的AbM抗体建模软件使用的AbM定义。一般参见，例如Protein Sequence and StructureAnalysis of Antibody Variable Domains.In：Antibody Engineering LabManual(编辑Duebel，S.和Kontermann，R.，Springer-Verlag，Heidelberg)。一般地，除非特别说明，应用以下定义：重链可变区CDR1的AbM和其他CDR的Kabat定义。此外，针对Kabat或AbM CDR描述的本发明的实施方案也可以应用Chothia高变环实施。每一VH和VL一般包括3个CDR和四个FR，以以下顺序从氨基端至羧基端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。

本文所使用的“免疫球蛋白可变区序列”是指可以形成免疫球蛋白可变区结构的氨基酸序列。例如，该序列可以包括天然存在的可变区的所有或部分氨基酸序列。例如，该序列可以或可以不包括一个、两个或多个N-或C-端氨基酸，或可以包括与该蛋白质结构的形成相容的其他改变。

术语“抗原结合部位”是指IL-13结合剂的包含决定簇的部分，其形成与IL-13(例如哺乳动物IL-13，例如人或非人灵长类IL-13)或其表位结合的界面。就蛋白质(或蛋白质模拟物)而言，抗原结合部位一般包括一个或多个形成与IL-13结合界面的环(至少四个氨基酸或氨基酸模拟物)。一般地，抗体分子的抗原结合部位包括至少一个或两个CDR，或更一般地至少3、4、5或6个CDR。

“表位”是指靶化合物上被结合剂(例如抗体)结合的部位。表位可以是线性或构象表位，或其组合。在靶化合物是蛋白质的情况下，例如，表位可以指被结合剂结合的氨基酸。重叠表位包括至少一个共有的氨基酸残基。

本文所使用的术语“单克隆抗体”或“单克隆抗体组合物”是指单分子组合物的抗体分子的制备物。单克隆抗体组合物展示出对特定表位的单结合特异性和亲和力。可通过杂交瘤技术或通过不应用杂交瘤的方法(例如，重组方法)制备单克隆抗体。

“有效地人的”蛋白质是不引起中和抗体应答(例如，人抗鼠抗体(HAMA)应答)的蛋白质。HAMA在许多情况下是有问题的，例如，如果反复施用抗体，例如，在慢性或者复发性疾病状况的治疗中。HAMA应答可以使得反复抗体施用由于抗体从血清清除加快(见例如，Saleh等，Cancer Immunol.Immunother.，32：180-190(1990))以及还因为潜在的变应性反应(见，例如，LoBuglio等.，Hybridoma，5：5117-5123(1986))而可能变得无效。有许多方法可以获得抗体分子。

产生抗体分子的一个示例性方法包括筛选蛋白质表达文库，例如，噬菌体或核糖体展示文库。噬菌体展示例如描述于Ladner等，美国专利号5,223,409；Smith(1985)Science 228：1315-1317；WO 92/18619；WO91/17271；WO 92/20791；WO 92/15679；WO 93/01288；WO 92/01047；WO 92/09690和WO 90/02809。除了应用展示文库外，还可以应用其他方法获得抗-IL-13抗体分子。例如，IL-13蛋白或其肽可用作非人动物(例如，啮齿类动物，例如小鼠、仓鼠或大鼠)中的抗原。

在一个实施方案中，该非人动物包括至少一部分人类免疫球蛋白基因。例如，可以用大片段的人Ig座位操纵在小鼠抗体产生中有缺陷的小鼠品种。应用杂交瘤技术，可以产生并选择衍生自具有期望特异性的基因的抗原特异性单克隆抗体。参见，例如，XENOMOUSE^TM、Green等(1994)Nature Genetics 7：13-21，US 2003-0070185，WO 96/34096，公开于1996年10月31日、以及1996年4月29日提交的PCT申请号PCT/US96/05928。

在另一实施方案中，从非人动物获得单克隆抗体，并随后进行修饰，例如人源化或去免疫化。Winter描述了可用于制备本文所描述的人源化抗体的示例性CDR-嫁接方法(美国专利号5,225,539)。可以用非人CDR的至少一部分取代特定人抗体的全部CDR，或可用非人CDR仅取代一些CDR。仅需要取代对于人源化抗体与预定抗原结合所需的CDR数量。

可通过用来自人Fv可变区的等价序列取代不直接参与抗原结合的Fv可变区序列从而产生人源化抗体。Morrison(1985)Science 229：1202-1207；Oi等(1986)BioTechniques 4：214；以及US 5,585,089、US 5,693,761、US5,693,762、US 5,859,205和US 6,407,213提供了用于产生人源化抗体分子的示例性方法。这些方法包括分离、操作和表达编码全部或部分来自重或轻链至少之一的免疫球蛋白Fv可变区的核酸序列。此类核酸可以从产生针对如上所述预定靶的抗体的杂交瘤获得，或从其他来源获得。然后可将编码人源化抗体分子的重组DNA克隆至合适的表达载体。

还可通过特异性缺失人T细胞表位或通过公开于WO 98/52976和WO00/34317的方法“去免疫性”修饰抗体分子。简而言之，可针对与II类MHC结合的肽分析抗体的重和轻链可变区；这些肽代表潜在的T-细胞表位(如在WO 98/52976和WO 00/34317中所定义)。为检测潜在的T细胞表位，可应用术语为“肽穿线(peptide threading)”的计算机建模方法，并且此外还在人II类MHC结合肽数据中检索V_H和V_L序列上存在的基序，如在WO98/52976和WO 00/34317所描述的那样。这些基序与18个主要的II类MHC DR配模标本的任意一个结合，并且因此构成潜在的T细胞表位。可通过取代可变区中少量的氨基酸残基，或优选地通过单氨基酸取代消除检测到的潜在的T-细胞表位。一般地，进行保守取代。通常，但非排它的，可以应用在人类种系抗体序列的位置中共同的氨基酸。

人类种系序列例如公开于Tomlinson等(1992)J.Mol.Biol.227：776-798；Cook，G.P.等(1995)Immunol.Today卷16(5)：237-242；Chothia，D.等(1992)J.Mol.Biol.227：799-817和Tomlinson等(1995)EMBO J.14：4628-4638。V BASE目录提供了人免疫球蛋白可变区序列的广泛的目录(由Tomlinson，I.A.等汇编，MRC蛋白质工程中心，Cambridge，UK)。这些序列可以用作人类序列例如构架区和CDR的来源。还可以应用一致的人构架区，例如描述于US6,300,064。

此外，可以应用标准重组DNA技术产生嵌合、人源化和单链抗体分子(例如，包括人和非人部分的蛋白质)。例如，还可以应用表达人重和轻链基因，但不能表达内源小鼠免疫球蛋白重和轻链基因的转基因小鼠产生人源化抗体。

此外，本文描述的抗体分子还包括与IL-13结合，干扰功能性IL-13信号转导复合物形成并且在重链恒定区具有突变的那些。有时期望突变或失活恒定区的某些片段。例如，可以制造重链恒定区中的突变以产生具有降低的与Fc受体(FcR)和/或补体结合的抗体；此类突变是本领域公知的。SEQ ID NO：128提供了IgG重链恒定区氨基酸序列上的此类突变的实例。CL和CH亚单位的某些活性片段(例如，CH1)彼此共价连接。其他方面提供了获得对IL-1表面特异的抗原结合部位的方法，所述IL-13表面参与功能的IL-13信号转导复合物的形成。

示例性的抗体分子可以包括SEQ ID NO：30-46所示的VL链序列，和/或SEQ ID NO：50-115所示的VH链序列，但还可以包括这些序列的保持有IL-13结合能力的变体。可以应用本领域公知的技术从所提供的序列衍生此类变体。可以在FR中或CDR中制造氨基酸取代、缺失或添加。在构架区中的改变通常用于改善稳定性及减少该抗体分子的免疫原性，而在CDR中的改变通常用于增加该抗体分子对其靶的亲和力。通常通过改变CDR区并测试该抗体分子根据经验确定此类亲和力增加的改变。可根据Antibody Engineering，第二版(1995)，编辑Borrebaeck，Oxford UniversityPress中描述的方法制造此类改变。

本文描述了获得重链可变区序列是重链可变区序列的变体的示例性方法，其包括在本文描述的重链可变区序列中添加、缺失、取代或插入一个或多个氨基酸，任选地将该重链可变区序列与一个或多个轻链可变区序列结合，并测试包括经修饰的重链可变区序列的蛋白质与IL-13的特异结合，并且(优选地)测试此类抗原结合结构域调节一种或多种IL-13相关活性的能力。可以应用本文描述的轻链可变区序列的一种或多种序列变体来实施类似的方法。

可通过产生具有一种或多种不同CDR的文库，并筛选该文库以寻找与IL-13结合(例如，具有改进的亲和力)的成员，以制备抗体分子的变体。例如，Marks等(Bio/Technology(1992)10：779-83)描述了产生抗体可变区库集(repertorires)的方法，其中联合应用指向或靠近可变区区域5’端的通用引物和人VH基因第三构架区的通用引物，以提供缺乏CDR3的VH可变区的集库。这些集库可与特定抗体的CDR3结合。此外，可以用缺乏CDR3的VH或VL结构域的集库改组CDR3衍生的序列，并且该改组的完整的VH或VL结构域与关联的VL或VH结构域联合以提供特定的抗原结合片段。然后可以在合适的宿主系统(诸如WO 92/01047的噬菌体展示系统)中展示该集库，由此可以选择合适的抗原结合片段。Stemmer(Nature(1994)370：389-91)也公开了类似的改组或组合技术。其他备选方法是使一个或多个选定的VH和/或VL基因进行随机诱变，以在整个可变区内产生突变，而产生改变的VH或VL区。参加，例如Gram等Proc.Nat.Acad.Sci.美国(1992)89：3576-80。

另一种可使用的方法是VH或VL基因CDR区的定向诱变。这类技术公开于，例如Barbas等(Proc.Nat.Acad.Sci.美国(1994)91：3809-13)和Schier等(J.Mol.Biol.(1996)263：551-67)中。类似地，可将一个或多个，或所有三个CDR移植入VH或VL结构域之集库，或甚至一些其他支架(诸如纤连蛋白结构域)。对所得蛋白质评估结合IL-13的能力。

在一个实施方案中，经由例如诱变来修饰结合靶标的结合剂，以提供经修饰的结合剂的库。然后，评估该经修饰的结合剂以鉴定具有改变的功能性质(例如，改良的结合力，改良的稳定性，延长在体内的稳定性)的一种或多种经改变的结合剂。在一种实施方法中，使用展示文库技术来选择或筛选经修饰的结合剂库。然后，从第二个文库鉴定(例如使用较高的严格性或更竞争性的结合及清洗条件)出具较高亲和力的结合剂。亦可使用其他筛选技术。

在一些实施方案中，该诱变靶向已知或可能在结合界面的区域。例如：如果鉴定出的结合剂为抗体分子，则可将诱变针对如本文所描述的重或轻链的CDR区。此外，诱变可针对靠近或邻接CDR的构架区，例如尤其是在CDR接点之10、5或3个氨基酸内的构架区。在抗体的情况中，亦可将诱变限制在一或更少的CDR，例如，以进行逐步改良。

在一个实施方案中，使用诱变来使抗体更类似于一种或多种种系序列。一种示例性的种系化方法可包括：鉴定类似于(例如在特定数据库中最类似)经分离的抗体的序列的一种或多种种系序列。然后，可在经分离的抗体中，以增量或组合或以此二种方式产生突变(在氨基酸水平上)。例如，可产生包括编码一些或所有可能的种系突变的序列的核酸文库。然后，评估突变的抗体，例如鉴定那些相对于该分离出的抗体而言具有一种或多种额外种系残基，且仍可用(例如具功能性活性)的抗体。在一个实施方案中，将尽可能多的种系残基引入分离出的抗体内。

在一个实施方案中，使用诱变来将一个或多个种系残基替代或插入CDR区中。例如，种系CDR残基可来自类似(例如最类似)于被修饰的可变区的种系序列。在诱变之后可评估抗体的活性(例如结合或其他功能性活性)，以确定该一个或多个种系残基是否为可耐受的残基。在构架区中亦可进行类似的诱变。

选择种系序列时可以不同方式进行。例如：若一种系序列符合选择性或类似性的预定标准，例如至少达某种百分比的同一性，例如至少75、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或99.5％的同一性，则可将其选出。选择时可使用至少2、3、5或10种种系序列来进行。在CDR1和CDR2的情况下，鉴定类似的种系序列时可包括选择一种这类序列。在CDR3的情况下，鉴定类似的种系序列时可包括选择一种这类序列，但可包括使用二种分别造就氨基-端部分和羧基-端部分之种系序列。在其他实行方法，使用超过一或二种种系序列，例如以形成共有序列。

在其他实施方案中，该抗体可经修饰以具有改变的糖基化模式(即，从原始或天然的糖基化模式改变)。此处所使用之“改变”意指有一个或多个糖类部分缺失和/或有一个或多个糖基化位点加入原始抗体。将糖基化位点加入目前所公开的抗体中可经由改变氨基酸序列以使其包含糖基化位点共有序列来实现；这类技术为本领域公知。另一种增加抗体上之糖类部分的数目的方法为将糖苷以化学或酶方法偶联至抗体的氨基酸残基上。这些方法描述于，如WO 87/05330，以及Aplin和Wriston((1981)CRC Crit.Rev.Biochem.22：259-306)中。去除存在于抗体上的任一碳水化合物部分可依本领域中的描述以化学或酶的方法来实现(Hakimuddin等(1987)Arch.Biochem.Biophys.259：52；Edge等(1981)Anal.Biochem.118：131和Thotakura等(1987)Meth.Enzymol.138：350)。参见，例如，U.S.5,869,046中的经由提供补救受体结合表位来增加体内的半衰期的修饰方法。

在一个实施方案中，抗-IL-13抗体分子包括至少一个、两个且优选三个来自本文公开的抗体(例如MJ 2-7)的轻或重链可变区的CDR。例如，该蛋白质包括一个或多个以下CDR区内的序列：

GFNIKDTYIH(SEQ ID NO：15)，

RIDPANDNIKYDPKFQG(SEQ ID NO：16)，

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：17)，

RSSQSIVHSNGNTYLE(SEQ ID NO：18)，

KVSNRFS(SEQ ID NO：19)，和

FQGSHIPYT(SEQ ID NO：20)，或这样的CDR，其具有相对于上面所列序列，每10个氨基酸不超过4、3、2.5、2、1.5、1或0.5个改变(例如，取代、插入或缺失)(例如，与CDR长度呈比例的不同的数字)，例如每CDR至少一个改变，但不超过2、3、或4个改变的氨基酸序列。

例如，抗-IL-13抗体分子在轻链可变区序列中可以包括至少1、2或3个以下CDR区内的序列：

RSSQSIVHSNGNTYLE(SEQ ID NO：18)、

KVSNRFS(SEQ ID NO：19)和

FQGSHIPYT(SEQ ID NO：20)，或具有相对于上面所列序列，每10个氨基酸不超过4、3、2.5、2、1.5、1或0.5个取代、插入或缺失的不同的氨基酸序列。

抗-IL-13抗体分子在重链可变区序列中可以包括至少1、2或3个以下CDR区内的序列：

GFNIKDTYIH(SEQ ID NO：15)、

RIDPANDNIKYDPKFQG(SEQ ID NO：16)和

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：17)，或具有相对于上面所列序列，每10个氨基酸不超过4、3、2.5、2、1.5、1或0.5个取代、插入或缺失的不同的氨基酸序列。重链CDR3区可以少于13或少于12个氨基酸长，例如，11个氨基酸长(应用Chothia或Kabat定义之一)。

在另一实施方案中，抗-IL-13抗体分子在轻链可变区序列中可以包括至少1、2或3个以下CDR区内的序列(括号内的氨基酸表示特定位置的备选方案)：

(i)(RK)-S-S-Q-S-(LI)-(KV)-H-S-(ND)-G-N-(TN)-Y-L-(EDNQYAS)(SEQ ID NO：25)或(RK)-S-S-Q-S-(LI)-(KV)-H-S-(ND)-G-N-(TN)-Y-L-E(SEQ ID NO：26)或(RK)-S-S-Q-S-(LI)-(KV)-H-S-N-G-N-T-Y-L-(EDNQYAS)(SEQ ID NO：21)，

(ii)K-(LVI)-S-(NY)-(RW)-(FD)-S(SEQ IDNO：27)或K-(LV)-S-(NY)-R-F-S(SEQ ID NO：22)以及

(iii)Q-(GSA)-(ST)-(HEQ)-I-P(SEQ ID NO：28)、F-Q-(GSA)-(SIT)-(HEQ)-(IL)-P(SEQ ID NO：23)或Q-(GSA)-(ST)-(HEQ)-I-P-Y-T(SEQ ID NO：194)或F-Q-(GSA)-(SIT)-(HEQ)-(IL)-P-Y-T(SEQ ID NO：29)。

在一个优选的实施方案中，抗-IL-13抗体分子包括所有6个来自MJ2-7的CDR或极相关CDR，例如，同一的CDR或具有至少一个氨基酸改变，但不超过2、3或4个改变(例如，取代、缺失或插入)的CDR。IL-13结合剂可以包括至少2、3、4、5、6或7个MJ2-7的与IL-13接触的氨基酸残基。

在另一实例中，抗-IL-13抗体分子包括至少1、2、或3个具有相同的标准结构的CDR以及MJ 2-7的相应CDR区，例如，至少MJ2-7的重链和/或轻链可变区CDR1和CDR2。

在另一实例中，抗-IL-13抗体分子在重链可变区序列中可以包括至少1、2或3个以下CDR区内的序列(括号内的氨基酸表示特定位置的备选方案)

(i)G-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-(MI)-H(SEQ ID NO：48)，

(ii)(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-G(SEQ IDNO：49)和

(iii)SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：17)。

在一个实施方案中，抗-IL-13抗体分子包括至少1、2且优选3个来自本文公开之抗体(例如，C65)的轻或重链可变区的CDR。例如，抗-IL-13抗体分子包括一个或多个以下CDR区内的序列：

QASQGTSINLN(SEQ ID NO：118)、

GASNLED(SEQ ID NO：119)和

LQHSYLPWT(SEQ ID NO：120)

GFSLTGYGVN(SEQ ID NO：121)、

IIWGDGSTDYNSAL(SEQ ID NO：122)和

DKTFYYDGFYRGRMDY(SEQ ID NO：123)，或这样的CDR，其具有相对于上面所列序列，每10个氨基酸不超过4、3、2.5、2、1.5、1或0.5个取代、插入或缺失的不同(例如，与CDR长度呈比例的不同的数字)，例如每CDR至少一个改变，但不超过2、3、或4个改变。例如，该蛋白质在轻链可变区序列中可以包括至少1、2或3个以下CDR区内的序列：

QASQGTSINLN(SEQ ID NO：118)、

GASNLED(SEQ ID NO：119)和

LQHSYLPWT(SEQ ID NO：120)，或相对于上面所列序列，每10个氨基酸不超过4、3、2.5、2、1.5、1或0.5个取代、插入或缺失的不同的氨基酸序列。

GFSLTGYGVN(SEQ ID NO：121)、

IIWGDGSTDYNSAL(SEQ ID NO：122)和

DKTFYYDGFYRGRMDY(SEQ ID NO：123)，或相对于上面所列序列，每10个氨基酸不超过4、3、2.5、2、1.5、1或0.5个取代、插入或缺失的不同的氨基酸序列。

在一个实施方案中，IL-13抗体分子可以包括以下序列之一：

■DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSP

QLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC

FQGSHIPYT(SEQ ID NO：30)

■DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWFQQRPGQSP

RRLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC

FQGSHIPYT(SEQ ID NO：31)

■DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSP

QLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC

FQGSHIPYT(SEQ ID NO：32)

■DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQPP

QLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC

FQGSHIPYT(SEQ ID NO：33)

■DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSP

QLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC

FQGSHIPYT(SEQ ID NO：34)

■DIVMTQTPLSSPVTLGQPASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWLQQRPGQPP

RLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGAGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC

FQGSHIPYT(SEQ ID NO：35)

■DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQSIVHSNGNTYLEWYQQKPGKAP

KLLIYKVSNRFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC

FQGSHIPYT(SEQ ID NO：36)

■DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLVYSDGNTYLNWFQQRPGQSP

RRLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC

FQGSHIPYT(SEQ ID NO：37)

■DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSP

KLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYC

FQGSHIPYT(SEQ ID NO：38)

或具有少于8、7、6、5、4、3、2个改变的序列(例如，取代，插入或缺失，例如，在MJ 2-7相应位置上氨基酸残基的保守性多个或一个取代)。示例性取代是在以下Kabat位置之一：2、4、6、35、36、38、44、47、49、62、64-69、85、87、98、99、101和102。例如，将来自MJ2-7相应位置上的氨基酸替代至人构架区中。

IL-13抗体分子还可以包括以下序列之一：

■DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISC-(RK)-S-S-Q-S-(LI)-(KV)-H-

S-(ND)-G-N-(TN)-Y-L-(EDNQYAS)WYLQKPGQSPQLLIYK-

(LVI)-S-(NY)-(RW)-(FD)-

SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC F-Q-(GSA)-

(SIT)-(HEQ)-(IL)-P(SEQ ID NO：39)

■DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISC-(RK)-S-S-Q-S-(LI)-(KV)-H-

S-(ND)-G-N-(TN)-Y-L-(EDNQYAS)WFQQRPGQSPRRLIYK-

(LVI)-S-(NY)-(RW)-(FD)-

SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCF-Q-(GSA)-(SIT)-

(HEQ)-(IL)-P(SEQ ID NO：40)

■DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISC-(RK)-S-S-Q-S-(LI)-(KV)-H-

S-(ND)-G-N-(TN)-Y-L-(EDNQYAS)WYLQKPGQSPQLLIYK-

(LVI)-S-(NY)-(RW)-(FD)-

SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCF-Q-(GSA)-(SIT)-

(HEQ)-(IL)-P(SEQ ID NO：41)

■DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISC(RK)-S-S-Q-S-(LI)-(KV)-H-

S-(ND)-G-N-(TN)-Y-L-(EDNQYAS)WYLQKPGQPPQLLIYK-

(LVI)-S-(NY)-(RW)-(FD)-

SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCF-Q-(GSA)-(SIT)-

(HEQ)-(IL)-P(SEQ ID NO：42)

■DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISC(RK)-S-S-Q-S-(LI)-(KV)-H-

S-(ND)-G-N-(TN)-Y-L-(EDNQYAS)WYLQKPGQSPQLLIYK-

(LVI)-S-(NY)-(RW)-(FD)-

SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCF-Q-(GSA)-(SIT)-

(HEQ)-(IL)-P(SEQ ID NO：43)

■DIVMTQTPLSSPVTLGQPASISC(RK)-S-S-Q-S-(LI)-(KV)-H-

S-(ND)-G-N-(TN)-Y-L-(EDNQYAS)WLQQRPGQPPRLLIYK-

(LVI)-S-(NY)-(RW)-(FD)-

SGVPDRFSGSGAGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCF-Q-(GSA)-(SIT)-

(HEQ)-(IL)-P(SEQ ID NO：44)

■DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(RK)-S-S-Q-S-(LI)-(KV)-H-

S-(ND)-G-N-(TN)-Y-L-(EDNQYAS)WYQQKPGKAPKLLIYK-

(LVI)-S-(NY)-(RW)-(FD)-

SGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCF-Q-(GSA)-(SIT)-

(HEQ)-(IL)-P(SEQ ID NO：45)

■DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISC(RK)-S-S-Q-S-(LI)-(KV)-H-

S-(ND)-G-N-(TN)-Y-L-(EDNQYAS)WYLQKPGQSPKLLIYK-

(LVI)-S-(NY)-(RW)-(FD)-

SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCF-Q-(GSA)-(SIT)-

(HEQ)-(IL)-P(SEQ ID NO：46)

或在构架区中具有少于8、7、6、5、4、3、2个改变的序列(例如，取代，插入或缺失，例如，在MJ 2-7相应位置上氨基酸残基的保守性多个或一个取代)。示例性取代是一个或多个以下Kabat位置：2、4、6、35、36、38、44、47、49、62、64-69、85、87、98、99、101和102。该取代例如可以将来自MJ2-7相应位置上的氨基酸替代至人构架区中。该序列之后还可以是Tyr-Thr二肽。FR4区可以包括，例如序列FGGGTKVEIKR(SEQ ID NO：47)。

在其他实施方案中，IL-13抗体分子可以包括以下序列之一：

■QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFNIKDTYIHWVRQAPGQGLEWMG

RIDPANDNIKYDPKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：50)

■QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFNIKDTYIHWVRQAPGQRLEWMG

RIDPANDNIKYDPKFQGRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：51)

■QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFNIKDTYIHWVRQATGQGLEWMG

RIDPANDNIKYDPKFQGRVTMTRNTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：52)

■QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFNIKDTYIHWVRQAPGQGLEWMG

RIDPANDNIKYDPKFQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：53)

■QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWMG

RIDPANDNIKYDPKFQGRVTMTEDTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCAT

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：54)

■QMQLVQSGAEVKKTGSSVKVSCKASGFNIKDTYIHWVRQAPGQALEWMG

RIDPANDNIKYDPKFQGRVTITRDRSMSTAYMELSSLRSEDTAMYYCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：55)

■QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFNIKDTYIHWVRQAPGQGLEWMG

RIDPANDNIKYDPKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：56)

■QMQLVQSGPEVKKPGTSVKVSCKASGFNIKDTYIHWVRQARGQRLEWIG

RIDPANDNIKYDPKFQGRVTITRDMSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAA

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：57)

■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVA

RIDPANDNIKYDPKFQGRFTI SRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：58)

■EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVS

RIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAK

DSEENWYDFFDY(SEQ ID NO：59)

■QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWIRQAPGKGLEWVS

RIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：60)

■EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVG

RIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCTT

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：61)

■EVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVS

RIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYHCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：62)

■EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVS

RIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：63)

■EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVS

RIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAE DTAVYYCAK

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：64)

■QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVA

RIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAK

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：65)

■QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVA

RIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：66)

■EVQLVESGGVVVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVS

RIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNSKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK

DSEENWYDFFDY(SEQ ID NO：67)

■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVS

RIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRDEDTAVYYCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：68)

■EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCTASGFNIKDTYIHWFRQAPGKGLEWVG

RIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDGSKSIAYLQMNSLKTEDTAVYYCTR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：69)

■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEYVS

RIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNSKNTLYLQMGSLRAEDMAVYYCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：70)

■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWIG

RIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：71)

■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVA

RIDPANDNIKYDPKFQGKATISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：72)

■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVA

RIDPANDNIKYDPKFQGRFTISADNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：73)

■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVG

RIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：74)

■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVA

RIDPANDNIKYDPKFQGKATISADNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：75)

■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWIG

RIDPANDNIKYDPKFQGRFTISADNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：76)

■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVG

RIDPANDNIKYDPKFQGRFTISADNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：77)

■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVA

RIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNAKNSAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：78)

■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVG

RIDPANDNIKYDPKFQGRFTISADNAKNSAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：79)

■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWIG

RIDPANDNIKYDPKFQGRFTISADNAKNSAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：80)

■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTGSGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWIG

RIDPANDNIKYDPKFQGRFTISADNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：81)

■EVQLQQSGAELVKPGASVKLSCTGSGFNIKDTYIHWVKQRPEQGLEWIG

RIDPANDNIKYDPKFQGKATITADTSSNTAYLQLNSLTSEDTAVYYCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：82)

或具有少于8、7、6、5、4、3、2个改变的序列(例如，取代，插入或缺失，例如，在MJ 2-7相应位置上氨基酸残基的保守性多个或一个取代)。示例性取代是一个或多个以下Kabat位置：2、4、6、25、36、37、39、47、48、93、94、103、104、106和107。示例性的取代还可以是在一个或多个以下位置(根据序列的编号)：48、49、67、68、72和79。该取代例如可以将来自MJ2-7相应位置上的氨基酸替代至人构架区中。在一个实施方案中，该序列包括(根据序列的编号)以下一个或多个：48位的Ile、49位Gly、67位Lys、68位Ala、72位Ala和79位Ala；优选，例如48位Ile、49位Gly、72位Ala以及79位Ala。

此外，重链可变区序列的构架区可以包括：(i)在对应49的位置上的Gly；(ii)在对应72的位置上的Ala；(iii)在对应48的位置上的Ile；以及对应49的位置上的Gly；(iv)在对应48的位置上的Ile；对应49的位置上的Gly；以及对应72的位置上的Ala；(v)在对应67的位置上的Lys；对应68的位置上的Ala；以及对应72的位置上的Ala；和/或(vi)在对应48的位置上的Ile；对应49的位置上的Gly；对应72的Ala；以及对应79的位置上的Ala。

IL-13抗体分子还可以包括以下序列之一：

■QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-

(MI)-H，WVRQAPGQGLEWMG(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-

(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：83)

■QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-

(MI)-H，WVRQAPGQRLEWMG(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-

(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：84)

■QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-

(MI)-H，WVRQATGQGLEWMG(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-

(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRVTMTRNTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：85)

■QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-

(MI)-H，WVRQAPGQGLEWMG(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-

(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：86)

■QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-

(MI)-H，WVRQAPGKGLEWMG(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-

(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRVTMTEDTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCAT

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：87)

■QMQLVQSGAEVKKTGSSVKVSCKASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-

(MI)-H，WVRQAPGQALEWMG(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-

(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRVTITRDRSMSTAYMELSSLRSEDTAMYYCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：88)

■QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-

(MI)-H，WVRQAPGQGLEWMG(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-

(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：89)

■QMQLVQSGPEVKKPGTSVKVSCKASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-

(MI)-H，WVRQARGQRLEWIG(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-

(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRVTITRDMSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAA

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：90)

■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-

(MI)-H，WVRQAPGKGLEWVA(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-

(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：91)

■EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-

(MI)-H，WVRQAPGKGLEWVS(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-

(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAK

DSEENWYDFFDY(SEQ ID NO：92)

■QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-

(MI)-H，WIRQAPGKGLEWVS(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-

(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：93)

■EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-

(MI)-H，WVRQAPGKGLEWVG(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-

(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRFTISRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCTT

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：94)

■EVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-

(MI)-H，WVRQAPGKGLEWVS(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-

(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYHCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：95)

■EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-

(MI)-H，WVRQAPGKGLEWVS(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-

(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：96)

■EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-

(MI)-H，WVRQAPGKGLEWVS(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-

(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAK

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：97)

■QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-

(MI)-H，WVRQAPGKGLEWVA(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-

(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAK

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：98)

■QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-

(MI)-H，WVRQAPGKGLEWVA(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-

(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：99)

■EVQLVESGGVVVQPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-

(MI)-H，WVRQAPGKGLEWVS(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-

(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRFTISRDNSKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK

DSEENWYDFFDY(SEQ ID NO：100)

■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-

(MI)-H，WVRQAPGKGLEWVS(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-

(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRDEDTAVYYCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：101)

■EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCTASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-

(MI)-H，WFRQAPGKGLEWVG(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-

(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRFTISRDGSKSIAYLQMNSLKTEDTAVYYCTR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：102)

■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-

(MI)-H，WVRQAPGKGLEYVS(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-

(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRFTISRDNSKNTLYLQMGSLRAEDMAVYYCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：103)

■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-

(MI)-H，WVRQAPGKGLEWIG(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-

(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：104)

■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-

(MI)-H，WVRQAPGKGLEWVA(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-

(SD)-(PQ)-K-F-Q-GKATISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：105)

■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-

(MI)-H，WVRQAPGKGLEWVA(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-

(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRFTISADNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：106)

■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-

(MI)-H，WVRQAPGKGLEWVG(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-

(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：107)

■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-

(MI)-H，WVRQAPGKGLEWVA(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-

(SD)-(PQ)-K-F-Q-GKATISADNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：108)

■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-

(MI)-H，WVRQAPGKGLEWIG(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-

(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRFTISADNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：109)

■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-

(MI)-H，WVRQAPGKGLEWVG(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-

(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRFTISADNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：110)

■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-

(MI)-H，WVRQAPGKGLEWVA(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-

(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRFTISRDNAKNSAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：111)

■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-

(MI)-H，WVRQAPGKGLEWVG(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-

(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRFTISADNAKNSAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：112)

■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-

(MI)-H，WVRQAPGKGLEWIG(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-

(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRETISADNAKNSAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：113)

■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTGSG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-

(MI)-H，WVRQAPGKGLEWIG(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-

(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRFTISADNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：114)

■EVQLQQSGAELVKPGASVKLSCTGSG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-

(MI)-H，WVKQRPEQGLEWIG(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-

(SD)-(PQ)-K-F-Q-GKATITADTSSNTAYLQLNSLTSEDTAVYYCAR

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：115)

或在构架区中具有少于8、7、6、5、4、3、2个改变的序列(例如，取代，插入或缺失，例如，在MJ 2-7相应位置上氨基酸残基的保守性多个或一个取代)。示例性取代是在一个或多个以下Kabat位置上：2、4、6、25、36、37、39、47、48、93、94、103、104、106和107。该取代例如可以将来自MJ2-7相应位置上的氨基酸替代至人构架区中。FR4区可以包括，例如序列WGQGTTLTVSS(SEQ ID NO：116)或WGQGTLVTVSS(SEQID NO：117)。

其他干扰IL-13与IL-13R(例如，IL-13受体复合物)或其亚单位结合的IL-13抗体实例包括“mAb13.2”及其修饰形式，例如，嵌合或人源化形式。mAb13.2的重链可变区的氨基酸和核苷酸序列在本文分别如SEQ IDNO：198和SEQ ID NO：217所示。mAb13.2的轻链可变区的氨基酸和核苷酸序列在本文分别如SEQ ID NO：199和SEQ ID NO：218所示。示例性的嵌合形式(例如，包含mAb13.2重链和轻链可变区的形式)在本文中被称为“ch13.2”。ch13.2的重链可变区的氨基酸和核苷酸序列在本文分别如SEQID NO：208和SEQ ID NO：204所示。ch13.2的轻链可变区的氨基酸和核苷酸序列在本文分别如SEQ ID NO：213和SEQ ID NO：219所示。在本文中被称为“h13.2v1”的mAb13.2的人源化形式具有在本文分别如SEQ IDNO：209和SEQ ID NO：205所示的重链可变区氨基酸和核苷酸序列。h13.2v1的轻链可变区的氨基酸和核苷酸序列在本文分别如SEQ IDNO：214和SEQ ID NO：220所示。在本文中被称为“h13.2v2”的mAb13.2的另一人源化形式具有在本文分别如SEQ ID NO：210和SEQ ID NO：206所示的重链可变区氨基酸和核苷酸序列。h13.2v2的轻链可变区的氨基酸和核苷酸序列在本文分别如SEQ ID NO：212和SEQ ID NO：221所示。在本文中被称为“h13.2v3”的mAb13.2的另一人源化形式具有在本文分别如SEQ ID NO：211和SEQ ID NO：207所示的重链可变区氨基酸和核苷酸序列。h13.2v3的轻链可变区的氨基酸和核苷酸序列在本文分别如SEQ IDNO：35和SEQ ID NO：223所示。

在另一实施方案中，抗-IL-13抗体分子包括至少1、2、3或4个具有如下所示氨基酸序列的抗原结合区(例如，可变区)：对于VH的SEQ IDNO：198、208、209、210或211，和/或对于VL的SEQ ID NO：199、213、214、212或215，或与其基本上同一的序列(例如，与其至少约85％、90％、95％、99％或更高同一的序列，或与SEQ ID NO：199、213、214、212、198、208、209、210、215或211不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基差异的序列)。在另一实施方案中，该抗体包括由具有以下核苷酸序列的核酸编码的VH和/或VL：对于VH的SEQ ID NO：222、204、205、208或207，和/或对于VL的SEQ ID NO：218、219、220、221或223，或与其基本上同一的序列(例如，与其至少约85％、90％、95％、99％或更高同一的序列，或与SEQ ID NO：218、219、220、221、222、204、205、206、223或207不超过3、6、15、30或45个核苷酸差异的序列)。在另一实施方案中，该抗体或其片段包括至少1、2或3个来自这样的重链可变区的CDR，其中所述的重链可变区具有分别对于VH CDR 1-3所示的SEQ IDNO：202、203或196的氨基酸序列，或基本上与其同源的序列(例如，与其至少约85％、90％、95％、99％或更高同一的序列，和/或具有一个或多个取代(例如保守取代)的序列)。在另一实施方案中，该抗体或其片段包括至少1、2或3个来自这样的轻链可变区的CDR，其中所述的轻链可变区对于VL CDR 1-3分别具有SEQ ID NO：197、200或201所示的氨基酸序列，或基本上与其同源的序列(例如，与其至少约85％、90％、95％、99％或更高同一的序列，和/或具有一个或多个取代(例如保守取代)的序列)。在另一实施方案中，该抗体或其片段包括至少1、2、3、4、5或6个来自这样的重和轻链可变区的CDR，其中所述的重和轻链可变区对于VH CDR 1-3分别具有SEQ ID NO：202、203或196所示的氨基酸序列，以及对于VLCDR 1-3分别具有SEQ ID NO：197、200或201所示的氨基酸序列，或基本上与其同源的序列(例如，与其至少约85％、90％、95％、99％或更高同一的序列，和/或具有一个或多个取代(例如保守取代)的序列)。

在一个实施方案中，抗-IL-13抗体分子包括来自C65的所有6个CDR，或者极相关的CDR，例如，同一或者具有至少一个氨基酸改变，但是不超过2、3、或者4个改变(例如，替代、缺失、或者插入)的CDR。

在另一实施方案中，IL-13结合剂包括至少1、2或3个具有相同标准结构的CDR区以及C65的相应的CDR区，例如至少C65重和/或轻链可变区的CDR1和CDR2。

在一个实施方案中，重链构架区(例如，单个的FR1、FR2、FR3，或包含FR1、FR2和FR3，但排除CDR的序列)包括这样的氨基酸序列，其与以下种系V片段序列之一的重链构架区至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或更高同一：DP-71或DP-67，或另一与C65的标准结构类型相容的V基因(参见，例如，Chothia等(1992)J.Mol.Biol.227：799-817；Tomlinson等(1992)J.Mol.Biol.227：776-798)。

在一个实施方案中，轻链构架区(例如，单个的FR1、FR2、FR3，或包含FR1、FR2和FR3，但排除CDR的序列)包括这样的氨基酸序列，其与DPK-1或DPK-9种系序列或另一与C65的标准结构类型相容的V基因的轻链构架区至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或更高同一(例如，参见Tomlinson等(1995)EMBO J.14：4628)。

在另一实施方案中，轻链构架区(例如，单个的FR1、FR2、FR3，或包含FR1、FR2和FR3，但排除CDR的序列)包括这样的氨基酸序列，其与VκI亚群种系序列(例如，DPK-9或DPK-1序列)的轻链构架区至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或更高同一。

在另一实施方案中，重链构架区(例如，单个的FR1、FR2、FR3，或包含FR1、FR2和FR3，但排除CDR的序列)包括这样的氨基酸序列，其与VH IV亚群种系序列(例如，DP-71或DP-67序列)的轻链构架区至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或更高同一。

在一个实施方案中，轻或者重链可变框架(例如，包含至少FR1、FR2、FR3和任选地FR4的区域)可以选自：(a)轻或者重链可变框架，其包括至少80％、85％、90％、95％或100％的来自人轻或者重链可变框架的氨基酸残基，例如，来自本文描述的人成熟抗体、人种系序列、人共有序列，或者人抗体的轻或者重链可变框架残基；(b)轻或者重链可变框架，其包括20％-80％、40％-60％、60％-90％、或70％-95％的来自人轻或者重链可变框架的氨基酸残基，例如，来自人成熟抗体、人种系序列、人共有序列的轻或者重链可变框架残基；(c)非人框架(例如，啮齿动物框架)；或者(d)非人框架，其已经经修饰，例如以除去抗原性或者细胞毒性决定簇，例如，去免疫或者部分人源化。在一个实施方案中，重链可变区序列在一个或多个下面的位置(优选至少5个、10个、12个或者所有位置)包括人残基或者人共有序列残基：(在轻链的可变区的FR中)4L、35L、36L、38L、43L、44L、58L、46L、62L、63L、64L、65L、66L、67L、68L、69L、70L、71L、73L、85L、87L、98L、和/或(在重链的可变区的FR中)2H、4H、24H、36H、37H、39H、43H、45H、49H、58H、60H、67H、68H、69H、70H、73H、74H、75H、78H、91H、92H、93H、和/或103H(根据Kabat编号)。

在一个实施方案中，抗-IL-13抗体分子包括至少一个非人CDR，例如，鼠CDR，例如，来自例如mAb13.2、MJ2-7、C65的CDR和/或其修饰形式(例如，其人源化或嵌合变体)，和与例如mAb13.2、MJ2-7、C65和或其修饰形式(例如，其人源化或嵌合变体)的框架有至少1个氨基酸，例如，至少5、8、10、12、15或者18个氨基酸不同的至少一个框架。例如，所述蛋白质包括1、2、3、4、5、或者6个此类非人CDR，并且在HC FR1、HC FR2、HC FR3、LC FR1、LC FR2和LC FR3的至少三种中包括至少一个氨基酸差异。

在一个实施方案中，抗-IL-13抗体的重或者轻链可变区包括氨基酸序列，该氨基酸序列与本文描述抗体(例如，mAb13.2、MJ2-7、C65和/或其修饰形式(例如，其人源化或嵌合变体))的可变区序列有至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或者更高的同一性；或者与本文描述的抗体(例如，mAb13.2、MJ2-7、C65和/或其修饰形式(例如，其人源化或嵌合变体))的可变区序列有至少1或5个残基差异，但是小于40、30、20或者10个残基的差异。在一个实施方案中，所述蛋白质的重或轻链可变区序列包括由本文描述的核酸序列或例如在低严格、中严格、高严格或极高严格条件下与本文描述的核酸序列或其互补分子杂交的核酸编码的氨基酸序列。

在一个实施方案中，可变区序列的一个或两个包括构框架中的氨基酸位置，其不同地来自非人抗体(例如，鼠抗体，诸如mAb13.2)和人抗体或者种系序列。例如，可变区可包括许多位置，在所述位置上氨基酸残基与非人抗体和人抗体(或者人种系序列)同一，因为这两种抗体在该位置同一。在非人和人抗体不同的剩余框架位置中，可变区的至少50、60、70、80或者90％的位置优选与人抗体(或人种系序列)同一而不是与非人抗体同一。例如，没有或者有至少1、2、3或者4个这种剩余的框架位置可以与非人抗体而不是人抗体同一。例如在HC FR1中，一个或两个这种位置可以是非人的；在HC FR2中，一个或两个这种位置可以是非人的；FR3中，1、2、3或者4个这种位置可以是非人的；在LC FR1中，1、2、3或者4个这种位置可以是非人的；在LC FR2中，一个或两个这种位置可以是非人的；在LC FR3中，一个或两个这种位置可以是非人的。该构架区可以包括其他非人位置。

在一个实施方案中，抗体分子所具有的CDR序列与MJ 2-7、C65或13.2的那些仅有非实质之差异。非实质之差异包括小的氨基酸改变，诸如：在CDR(例如Chothia或Kabat CDR)序列中之任一一般的5-7个氨基酸中有1或2个氨基酸替代。一般地，氨基酸被具有类似电荷、疏水性或立体化学特征的相关氨基酸所替代。这类替代在技术人员的一般技术范围内。与在CDR中的情况不同，可在结构构架区(FR)内制造更实质的改变，但不会对抗体的结合性质有不利影响。FR的改变包括，但不限于：将从非人来源的框架人源化或将某些对抗原接触而言重要或用来稳定结合部位的构架残基进行基因工程化改变，例如，改变恒定区的类别或亚类，改变可能改变效应子功能(诸如Fc受体结合)的特定氨基酸残基(Lund等(1991)J.Immun.147：2657-62；Morgan等(1995)Immunology 86：319-24)，或改变衍生该恒定区的物种。抗体可在重链的CH2区中具有能降低或改变效应子功能(例如，Fc受体结合及补体活化)的突变。例如，抗体可具有如美国专利号5,624,821和5,648,260中所描述的突变。例如，在IgG1或IgG2重链中，可产生使其相似于SEQ ID NO：17中所列之氨基酸序列的这类突变。抗体还可具有可稳定免疫球蛋白二个重链之间的二硫键的突变，诸如本领域中所公开的在IgG4绞链区中的突变(例如，Angal等(1993)Mol，Immunol 30：105-08)。

抗IL-13抗体分子之另外实例系公开在以下参考文献中：US07/0128192或WO 05/007699及Blanchard，C.等人(2005)Clinical andExperimental Allergy 35(8)：1096-1103，公开了CAT-354；WO 05/062967，WO 05/062972及Clinical Trials Gov.Identifier：NCT00441818，公开了TNX-650；Clinical Trials Gov.Identifier：NCT532233，公开了QAX-576；US 06/0140948或WO 06/055638，以Abgenix之名义申请；转让给AMGEN之US 6,468,528；以Centocor，Inc.为申请人之WO 05/091856；及Yang等人(2004)Cytokine 28(6)：224-32与Yang等人(2005)J Pharmacol Exp Ther：313(1)：8-15；及如以Glaxo之名义申请之WO 07/080174及以Novartis之名义申请之WO 07/045477中所公开的抗IL-13抗体。

抗-IL-13抗体分子可为完整抗体、抗体的抗原结合片段(例如Fab、F(ab′)₂、Fd、dAb及scFv片段)和在其恒定和/或可变区发生突变(例如，用来产生嵌合型、部分人源化或完全人源化的抗体，以及用来产生具有所需特性，例如增强IL-13结合力和/或降低FcR结合力的突变)的完整抗体和片段的形式。

抗-IL-13抗体分子可衍生或者连接到另一功能性分子，例如另一种肽或蛋白质(例如Fab片段)。例如，该结合剂可功能性地连接(如：通过化学偶联、遗传融合、非共价性结合或其他方式)一个或多个其他分子实体，诸如另一抗体分子(例如，以形成双特异性或多特异性抗体分子)、毒素、放射性同位素、细胞毒剂或细胞抑制剂等。

其他IL-13/IL-13R结合剂

除了抗体分子外，还提供了结合至IL-13多肽或核酸、或者IL-13R多肽或核酸上的其他结合剂。在实施方案中，本文所述的其他结合剂是拮抗剂，从而降低、抑制或另外减少IL-13的一种或多种生物活性(例如一种或多种本文所述的IL-13的生物活性)。

可通过多种方法来鉴别结合剂，所述方法包括修饰本文所述的可变区或将本文所述可变区的一种或多种CDR移植至其他支架区上。结合剂也可通过多种文库来鉴别，例如通过筛选。用于筛选蛋白质文库的一种方法使用噬菌体展示。蛋白质的特定区域是不同的，与IL-13或者其受体相结合的蛋白质通过例如在固相支持物上的滞留或通过其他物理缔合而得以鉴别。例如，为鉴别结合至IL-13上与MJ2-7、C65或mAb 13.2相同的表位或重叠表位的特定结合剂，可通过加入MJ2-7、C65或mAb 13.2(或相关抗体)来洗脱结合剂，或可在与MJ2-7、C65或mAb 13.2(或相关抗体)的竞争实验中评估结合剂。还可能通过将文库与含有IL-13和MJ2-7、C65或mAb 13.2(或相关抗体)的复合体相接触来消耗结合至其他表位的物质的文库。然后可将消耗的文库与IL-13接触以获得结合至IL-13、而不是与受到MJ2-7、C65或mAb 13.2结合的IL-13的结合剂。还可利用含有MJ2-7、C65表位或以mAb 13.2作为靶标的来自IL-13的多肽。

例如在美国专利号5,223,409、Smith(1985)Science 228：1315-1317、WO 92/18619、WO 91/17271、WO 92/20791、WO 92/15679、WO 93/01288、WO 92/01047、WO 92/09690、WO 90/02809、WO 94/05781、Fuchs等(1991)Bio/Technology 9：1370-1372、Hay等(1992)Hum Antibod Hybridomas3：81-85、Huse等(1989)Science 246：1275-1281、Griffiths等(1993)EMBO J12：725-734、Hawkin等(1992)J Mol Biol 226：889-896、Clackson等(1991)Nature 352：624-628、Gram等(1992)PNAS 89：3576-3580、Garrard等(1991)Bio/Technology 9：1373-1377、Rebar等(1996)Methods Enzymol.267：129-49、以及Barbas等(1991)PNAS 88：7978-7982中对噬菌体展示有所描述。酵母表面展示描述于例如Boder和Wittrup(1997)Nat.Biotechnol.15：553-557。展示的另一形式是核糖体展示。参见，例如Mattheakis等(1994)Proc.Natl.Acad.Sci.美国91：9022和Hanes等(2000)Nat Biotechnol.18：1287-92；Hanes等(2000)Methods Enzymol.328：404-30.以及Schaffitzel等(1999)J Immunol Methods.231(1-2)：119-35。

结合至IL-13或其受体的结合剂可具有一个支架蛋白质的结构特征，例如折叠微区。基于抗体的示例性的支架区是“minibody”支架，已通过从单克隆抗体的重链可变区缺失3条β链而设计出来(Tramontano等，1994，J.Mol.Recognit.7：9；和Martin等，1994，EMBO J.13：5303-5309)。该结构域包括61个残基并可用于呈现两个高变环，例如本文所述的可变区或本文所述变体的一个或多个高变环。在另一方法中，结合剂包括V样结构域的支架区(Coia等WO 99/45110)。V样结构域指的是具有与抗体的可变重链(VH)或可变轻链(VL)区类似结构特征的结构域。另一支架区衍生自tendamistatin(通过两个二硫键连接在一起的74残基、六股β折叠多层结构(McConnell和Hoess，1995，J.Mol.Biol.250：460))。该母蛋白包括三个环。环可经修饰(例如，利用本文所述的CDR或高变环)或改变，例如以便选择结合至IL-13或其受体的结构域。WO 00/60070描述了衍生自可用作支架区的天然存在的CTLA-4胞外结构域的β-多层结构结构。

IL-13/13R结合剂的另一支架区是基于纤连蛋白III型结构域或相关纤连蛋白样蛋白质的结构域。纤连蛋白III型(Fn3)结构域的全部折叠是与最小的功能性抗体片段、抗体重链可变区的全部折叠紧密相关的。Fn3是与抗体VH区的β-多层结构相类似的β-多层结构，除了Fn3具有七条β-链而不是九条。在Fn3的末端有三个环，BC、DE和FG环的位置大约对应于抗体的VH区CDR1、2和3的位置。由于没有二硫键Fn3是便利的。因此，Fn3在还原性环境下是稳定的，不同于抗体及其片段(参见WO98/56915、WO 01/64942、WO 00/34784)。Fn3结构域可经修饰(例如，利用本文所述的CDR或高变环)或改变，例如以便选择结合至IL-13或其受体的结构域。

另外其他的示例性支架区包括：T细胞受体、MHC蛋白质、胞外结构域(例如，纤连蛋白III型重复、EGF重复)、蛋白酶抑制剂(例如，Kunitz结构域、ecotin、BPTI等)、TPR重复、三叶结构域、锌指结构域、DNA结合蛋白、特定的单体DNA结合蛋白、RNA结合蛋白、酶(例如蛋白酶(特别是失活的蛋白酶)、RNA酶)、侣伴蛋白(例如硫氧还蛋白和热激蛋白)，以及细胞内信号转导结构域(例如SH2和SH3结构域)。US 20040009530描述了一些备选支架的实例。

小的支架结构域的实例包括：Kunitz结构域(58个氨基酸，3个二硫键)、南瓜胰蛋白酶抑制剂(31个氨基酸，3个二硫键)、鸟苷素相关结构域(14个氨基酸，2个二硫键)、来自革兰氏阴性细菌的热稳定肠毒素IA相关的结构域(18个氨基酸，3个二硫键)、EGF结构域(50个氨基酸，3个二硫键)、三环域(60个氨基酸，3个二硫键)、真菌糖类结合结构域(35个氨基酸，2个二硫键)、内皮缩血管肽结构域(18个氨基酸，2个二硫键)、和链球菌G IgG结合结构域(35个氨基酸，无二硫键)。小的胞内支架区的实例包括SH2、SH3和EVH结构域。通常，可使用任何胞内或胞外的模式结构域。

用于评价支架区的示例性标准可包括：(1)氨基酸序列，(2)几个同源结构域的序列，(3)3-维结构，和/或(4)在pH、温度、盐度、有机溶剂、氧化剂浓度范围内的稳定性数据。在一项实施方案中，支架区是小的、稳定的蛋白结构域，例如少于100、70、50、40或30个氨基酸的蛋白质。结构域可包括一个或多个二硫键或可螯合金属，例如锌。

另外其他的结合剂基于肽，例如具有少于30、25、24、20、18、15或12个氨基酸的氨基酸序列的蛋白质。可将肽并入更大的蛋白质，但通常是可独立结合IL-13，例如结合至本文所述表位的区域。可通过噬菌体展示来鉴定肽，参见例如US 20040071705。

结合剂可包括非肽连接或其他化学修饰。例如，可将结合剂合成为肽模拟物，例如拟肽(参见例如Simon等(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.美国89：9367-71和Horwell(1995)Trends Biotechnol.13：132-4)。结合剂可包括一种或多种(例如全部)非水解键。本领域已知许多非水解肽键，以及用于合成含有此类键的肽的方法。示例性的非水解键包括--[CH₂NH]-还原性酰胺肽键、--[COCH₂]-酮亚甲基肽键、--[CH(CN)NH]-(氰亚甲基)氨基肽键、--[CH₂CH(OH)]-羟乙烯基肽键、--[CH₂O]-肽键、和--[CH₂S]-硫亚甲基肽键(参见，例如美国专利号6,172,043)。

在其他实施方案中，IL-13拮抗剂衍生自脂笼蛋白，例如人脂笼蛋白支架。

变异的IL-13结合分子

在又一实施方案中，该IL-13结合剂(拮抗剂)为变异分子或小分子。变异分子之实例通常包括融合或连接至铰链或铰链作用区多肽的结合结构域多肽，所述铰链或铰链作用区多肽又融合或连接至含一或多个得自重链之非CH1的天然或经改造之恒定区的区域，例如IgG及IgA之CH2及CH3区、或IgE之CH3及CH4区(为了更详细说明，见例如Ledbetter，J.等人之US.05/0136049)。该结合结构域-融合蛋白质可进一步包括包含融合或连接至该铰链区域多肽之天然或经改造之重链CH3恒定区多肽(或就全部或局部衍生自IgE之构建体而言，系为CH4)，其接着融合或连接至该CH2恒定区多肽(或就全部或局部衍生自IgE之构建体而言，系为CH3)之天然或经改造之重链CH2恒定区多肽(或就全部或局部衍生自IgE之构建体而言，系为CH3)的区域。典型地，此等结合性结构域-融合蛋白质可具有至少一选自以下所组成之群组的活性：融合蛋白质-依赖的细胞-介导之细胞毒性、补体固定、及/或结合至标靶，例如IL-13。

IL-13结合性变体之另一实例为IL-13受体或其融合物之可溶形式。例如，修饰的可溶性受体形式可单独使用或功能性地连接(例如，通过化学偶联、遗传或多肽融合、非共价结合或其他)至第二部分，例如免疫球蛋白Fc区、血清白蛋白、加入聚乙二醇、GST、Lex-A或MBP多肽序列。如本文所用，“融合蛋白”指的是含有两个或多个有效结合的(例如连接的)的部分，例如蛋白质部分。通常，各部分是共价结合的。各部分可直接结合或通过间隔区或接头连接。融合蛋白可另外包括将第一部分连接至第二部分的接头序列。例如，融合蛋白可包括肽接头、例如长度为大约4至20、更优选5至10个氨基酸的肽接头；肽接头长度是8个氨基酸。肽接头中的每个氨基酸选自Gly、Ser、Ash、Thr和Ala；肽接头包括Gly-Ser元件。在其他实施方案中，融合蛋白包括肽接头，且肽接头包括具有式(Ser-Gly-Gly-Gly-Gly)y的序列，其中y是1、2、3、4、5、6、7或8。

在其它实施方案中，可添加额外氨基酸序列至该融合蛋白质之N-或C-末端以促进表达、立体灵活性、检测及/或分离或纯化。该第二多肽优选具可溶性。在某些实施方案中，该第二多肽可增强该连接多肽之半衰期(例如血清半衰期)。在某些实施方案中，该第二多肽包括可促使该融合多肽与第二受体多肽结合之序列。在实施方案中，该第二多肽包括免疫球蛋白多肽之至少一区域。免疫球蛋白融合多肽在本领域中已知且描述在以下专利案中：例如美国专利第5,516,964号、第5,225,538号、第5,428,130号、第5,514,582号、第5,714,147号、及第5,455,165号。例如受体之可溶形式或配体结合性融合物可融合至各种同种型之重链恒定区，其包括：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD、及IgE。

Fc序列可在一个或多个氨基酸上有所突变以便降低效应子细胞功能、Fc受体结合和/或补体活性。改变抗体恒定区的方法是本领域已知的。具有改变的功能(例如，对效应子配体例如细胞上的FcR或补体的C1成分的改变的亲和力)的抗体可通过用不同的残基取代抗体恒定区中的至少一个氨基酸残基来产生(参见例如EP 388,151 A1、美国专利号5,624,821和美国专利号5,648,260)。可描述类似类型的改变，如果将所述改变应用于鼠或其他种类的免疫球蛋白将降低或消除这些功能。例如，通过用具有合适功能性的残基取代其侧链上的特定残基、或通过引入带电功能基团例如谷氨酸或天冬氨酸、或可能是芳香的非极性残基例如苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸或丙氨酸可能改变抗体(例如，IgG，例如人IgG)Fc区对FcR(例如FcγR1)、或C1q结合的亲和性(参见例如美国专利号5,624,821)。

在实施方案中，第二多肽具有比野生型免疫球蛋白重链Fc区的效应子功能更低的效应子功能。Fc效应子功能包括例如，Fc受体结合、补体结合和T细胞消耗活性(参见例如美国专利号6,136,310)。用于测定T细胞消耗活性、Fc效应子功能和抗体稳定性的方法是本领域已知的。在一项实施方案中，第二多肽具有对Fc受体很低的或无可检测的亲和力。在备选的实施方案中，第二多肽具有对补体蛋白C1q很低的或无可检测的亲和力。

将可以理解，可将本文所述的抗体分子和可溶性受体或融合蛋白功能性地连接(例如，通过化学偶联、遗传融合、非共价结合或其他)至一种或多种其他分子实体，例如抗体(例如，双特异性或多特异性抗体)、毒素、放射性同位素、细胞毒素或细胞静止剂等。

核酸拮抗剂

在另一实施方案中，拮抗剂抑制编码IL-13或IL-13R的核酸的表达。此类拮抗剂的实例包括杂交至编码IL-13或IL-13R或转录调节区域的核酸，并阻断或降低IL-13或IL-13R表达的核酸分子，例如，反义分子、核酶、RNAi、三股螺旋分子。

在实施方案中，核酸拮抗剂用于降低编码IL-13或IL-13R的内源性基因的表达。在一项实施方案中，核酸拮抗剂是靶向编码IL-13或IL-13R的mRNA的siRNA。也可使用其他类型的拮抗性核酸，例如dsRNA、核酶、三股螺旋模型、或反义核酸。因此，提供了作为核酸抑制剂的针对IL-13或IL-13R编码核酸分子的分离的核酸分子，例如反义、RNAi。

通常对受试者施用本发明之反义核酸分子(例如直接注射于组织部位)，或原位产生，藉此其可以与细胞mRNA及/或编码受体蛋白质之基因组DNA杂交或结合藉以抑制该蛋白质之表达，例如藉抑制转录及/或翻译。或者，反义核酸分子可经修饰以靶定所选细胞，然后全身性施用。就全身性施用而言，反义分子可经修饰，藉此其可特异性结合至在所选细胞表面上表达之受体或抗原，例如藉使该等反义核酸分子与结合至细胞表面受体或抗原之肽或抗体连接。亦可使用文中所述载体将该等反义核酸分子递送至细胞。为了获得该等反义分子之足够细胞内浓度，优选这样的构建体，其中该反义核酸分子受强pol II或pol III启动子控制下。

在又一实施方案中，本发明该反义核酸分子为α-异头核酸分子。α-异头核酸分子可以与互补性RNA形成特异性双链杂交物，与一般β-单位不同，各该链彼此平行(Gaultier等人(1987)Nucleic Acids.Res.15：6625-6641)。该反义核酸分子亦可包含2’-邻-甲基核糖核苷酸(Inoue等人(1987)Nucleic Acids Res.15：6131-6148)或嵌合型RNA-DNA类似物(Inoue等人(1987)FEBS Lett.215：327-330)。

siRNAs为任选包括突出端之小的双链RNAs(dsRNAs)。例如siRNA之双链体区域为长约18至25个核苷酸，例如长约19、20、21、22、23或24个核苷酸。典型地，该等siRNA序列系完全与该标靶mRNA互补。尤其可使用dsRNAs及siRNAs以沉默哺乳动物细胞(例如人类细胞)内之基因表达。siRNAs亦包括具有29个碱基对茎及2-核苷酸3’突出端之短发夹RNAs(shRNAs)。见，例如Clemens等人(2000)Proc.Natl.Acad.Sci.USA97：6499-6503；Billy等人(2001)Proc.Natl.Sci.USA 98：14428-14433；Elbashir等人(2001)Nature.411：494-8；Yang等人(2002)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 99：9942-9947；Siolas等人(2005)，Nat.Biotechnol.23(2)：227-31；20040086884；U.S.20030166282；20030143204；20040038278；及20030224432。

在又一实施方案中，本发明之反义核酸为核酶。对IL-13或IL-13R或IL-4或IL-4R编码性核酸具特异性之核酶可包括一或多个与文中公开之IL-13或IL-13R或IL-4或IL-4R cDNA之核苷酸序列互补的序列及具有已知为mRNA切割之主因的催化性序列之序列(见美国专利第5,093,246号或Haselhoff and Gerlach(1988)Nature 334：585-591)。例如可建构四膜虫属(Tetrahymena)L-19 IVS RNA之衍生物，其中该活性部位之核苷酸序列系与欲在受体编码的mRNA内切割之核苷酸序列互补。见，例如Cech等人之美国专利第4,987,071号及第5,116,742号。或者，可使用mRNA以自一批RNA分子选择具有特异性核糖核酸酶活性之催化性RNA。见，例如Bartel，D.and Szostak，J.W.(1993)Science 261：1411-1418。

可藉以下步骤而抑制IL-13或IL-13R基因表达：靶定与该IL-13或IL-13R之调节区(例如IL-13或IL-13R启动子及/或增强子)互补的核苷酸序列以形成可防止IL-13或IL-13R基因在标细胞内之转录的三螺旋结构。一般而言，见Helene，C.(1991)Anticancer Drug Des.6：569-84；Helene，C.(1992)Ann.N.Y.Acad.Sci.660：27-36；及Maher，L.J.(1992)Bioassays14：807-15。可被靶向促使三股螺旋形成的潜在序列可通过产生称为“switchback”的核酸分子来增加。以交替的5′-3′、3′-5′方式来合成switchback分子以便它们与双链体的第一条链以及随后与另一条链碱基配对，降低在双链体的一条链上出现大段嘌呤或嘧啶的必要性。

本发明还提供了可检测的标记寡核苷酸引物和探针分子。通常，此类标记是化学发光的、荧光的、放射性的或比色的。

可在碱基部分、糖部分或磷酸骨架上对IL-13或IL-13R核酸分子进行修饰，从而促进例如稳定性、杂交或分子的可溶性。合成具有修饰的寡核苷酸的非限制性实例参见Toulmé(2001)Nature Biotech.19：17 andFaria等(2001)Nature Biotech.19：40-44。此类亚磷酰胺寡核苷酸可为有效的反义试剂。例如，核酸分子的脱氧核糖磷酸骨架可经修饰产生肽核酸(参见Hyrup B.等人(1996)Bioorganic & Medicinal Chemistry 4：5-23)。如本文所用的，术语“肽核酸”或“PNA”指的是核酸模拟物，例如DNA模拟物，其中脱氧核糖磷酸骨架被假肽骨架取代并仅保留了四个天然的核酸碱基。PNA的中性骨架可允许在低离子强度条件下对DNA和RNA的特异杂交。可利用如Hyrup B.等(1996)见上文、和Perry-O′Keefe等Proc.Natl.Acad.Sci.93：14670-675中所述的标准固相肽合成方案来完成PNA寡聚体的合成。

在其他实施方案中，寡核苷酸可包括其他附加基团例如肽(例如，用于体内靶向宿主细胞受体)、或促进转运穿过细胞膜的物质(参见，例如Letsinger等(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.美国86：6553-6556；Lemaitre等(1987)Proc.Natl.Acad.Sci.美国84：648-652；W088/09810)、或穿过血-脑屏障的物质(参见例如W089/10134)。另外，可用引发杂交的切割剂(参见例如Krol等(1988)Bio-Techniques 6：958-976)或插入剂(参见例如Zon(1988)Pharm.Res.5：539-549)来修饰寡核苷酸。为此，可将寡核苷酸与其他分子缀合(例如，肽、引发杂交的交联剂、转运剂、引发杂交的切割剂)。

结合剂产生

一些抗体分子例如Fabs、或结合剂可在细菌细胞例如大肠杆菌细胞中产生。例如，如果Fab由在展示实体和噬菌体蛋白(或其片段)之间包含可抑制终止密码子的噬菌体展示载体中的序列编码，则可将载体核酸转移进不能抑制终止密码子的细菌细胞。在此情况下，Fab不与基因III蛋白融合，并分泌到周质和/或培养基中。

还可以在真核细胞中产生抗体分子。在一项实施方案中，在酵母细胞如毕赤酵母属(Pichia)(参阅如Powers等(2001)J Immunol Methods.251：123-35)、汉逊酵母属(Hansenula)或酵母属(Saccharomyces)中表达抗体(如scFv’)。

在一项实施方案中，在哺乳动物细胞中产生抗体分子。用于表达克隆抗体或其抗原结合片段的典型的哺乳动物宿主细胞包括中国仓鼠卵巢(CHO细胞)(包括Urlaub和Chasin(1980)Proc.Natl.Acad.Sci.美国77：4216-4220中描述的与DHFR选择标记一起使用的dhfr^- CHO细胞，例如如Kaufman和Sharp(1982)Mol.Biol.159：601-621中所述)、淋巴细胞系如NS0骨髓瘤细胞和SP2细胞、COS细胞和来自转基因动物(如转基因哺乳动物)的细胞。例如，细胞为哺乳动物上皮细胞。

除了编码抗体分子的核酸序列以外，重组表达载体还可以带有其他序列，如调节载体在宿主细胞中复制的序列(如复制起点)和选择标记基因。选择标记基因便于选择其中引入了载体的宿主细胞(参阅如美国专利号4,399,216、4,634,665和5,179,017)。例如，选择标记基因通常赋予其中引入了载体的宿主细胞对药物例如G418、潮霉素或氨甲喋呤的抗性。

在用于重组表达抗体分子的示例系统中，通过磷酸钙介导的转染将编码抗体重链和轻链的重组表达载体引入dhfr^- CHO细胞。在重组表达载体内，抗体重链和轻链基因各自与增强子/启动子调节元件(如来自SV40、CMV、腺病毒等，如CMV增强子/AdMLP启动子调节元件或SV40增强子/AdMLP启动子调节元件)有效连接，以驱动基因的高水平转录。重组表达载体还带有DHFR基因，它使用氨甲喋呤选择/扩增来选择转染了载体的CHO细胞。可以培养选择的转化体宿主细胞以表达抗体重链和轻链，并从培养基中回收完整抗体。可以使用标准分子生物学技术制备重组表达载体、转染宿主细胞、选择转化体、培养宿主细胞和从培养基中回收抗体分子。例如，一些抗体分子可以用A蛋白或G蛋白偶联基质通过亲和层析分离。

对于包含Fc结构域的抗体分子，抗体产生系统优选合成Fc区被糖基化的抗体。例如，IgG分子的Fc结构域在CH2结构域中天冬酰胺297处被糖基化。此天冬酰胺是用双触角型寡糖修饰的位点。已经证明Fcγ受体和补体C1q介导的效应子功能需要这种糖基化(Burton和Woof(1992)Adv.Immunol.51：1-84、Jefferis等(1998)Immunol.Rev.163：59-76)。在一个实施方案中，在使天冬酰胺297对应的残基被正确糖基化的哺乳动物表达系统中产生Fc结构域。Fc结构域还可以包括其他真核翻译后修饰。

还可以在转基因动物中产生抗体分子。例如，美国专利号5,849,992描述了在转基因哺乳动物的乳腺中表达抗体的方法。构建包含乳特异性启动子和编码抗体分子的核酸和用于分泌的信号序列的转基因。这些雌性转基因哺乳动物产生的乳中包含分泌到其中的目的抗体。可以从乳中纯化抗体分子或者在一些应用中直接使用。

结合剂的表征

可以通过任何方法测定结合剂的结合特性，例如通过以下方法之一：BIACORE^TM分析、酶联免疫吸附测定(ELISA)、x射线晶体学、序列分析和扫描诱变。可以通过以下方法测定蛋白质中和和/或抑制一种或多种IL-13相关活性的能力：用于测量IL-13依赖性细胞系的增殖的测定，如TFI；用于测量IL-13介导的多肽的表达的测定，如CD23表达的流式细胞术分析；评估下游信号分子(如STAT6)活性的测定；评估生腱蛋白产生的测定；测试相关动物模型(如猕猴)中本文所述抗体预防哮喘的效力的测定以及其他测定。IL-13结合剂(特别是IL-13抗体分子)可以在一种或多种这些测定中具有统计学显著的效应。结合特性的示例测定包括以下的测定。

可以使用表面等离振子共振(SPR)分析IL-13或IL-4结合剂和靶标(如IL-13)的结合相互作用。SPR或生物分子相互作用分析(BIA)实时检测生物特异性相互作用而不标记任何相互作用者。结合在BIA芯片表面质量的变化(指示结合事件)引起靠近表面的光折射率的改变。折射率的变化产生可检测的信号，所述信号测量为生物分子间实时反应的指标。使用SPR的方法描述于例如美国专利号5,641,640；Raether(1988)SurfacePlasmons Springer Verlag；Sjolander和Urbaniczky(1991)Anal.Chem.63：2338-2345；Szabo等(1995)Curr.Opin.Struct.Biol.5：699-705和BIAcore International AB(Uppsala，Sweden)提供的在线资源中。

来自SPR的信息可用于提供分子与靶标结合的平衡解离常数(K_d)和动力学参数(包括K_on和K_off)的准确的定量测量结果。此类数据可以用于比较不同的分子。来自SPR的信息还可用于开发结构-活性关系(SAR)。例如，可以评估不同抗体分子的动力学和平衡结合参数。可以鉴定给定位置处与特定的结合参数例如高亲和力和缓慢的K_off相关的变体氨基酸。此信息可以与结构建模(例如，使用同源性建模、能量最低化，或通过x射线晶体学或NMR测定结构)组合。结果，可以得到对蛋白质与其靶标之间物理相互作用的理解，并用于指导其他设计过程。

呼吸系统病症

IL-13结合剂或拮抗剂可用于治疗或预防呼吸疾病，包括但不仅限于哮喘(例如，变应性和非变应性哮喘(例如幼儿中呼吸道合胞病毒(RSV)感染引起的哮喘))、支气管炎(例如慢性支气管炎)、慢性阻塞性肺疾病(COPD)(例如肺气肿(例如吸烟引发的肺气肿))、与呼吸道炎症相关的病症、嗜酸粒细胞增多、纤维化和粘液产生过度，如囊性纤维化、肺纤维化和变应性鼻炎。例如，可以以有效治疗或预防病症或改善病症的至少一种症状的量施用IL-13结合剂(例如抗IL-13抗体分子)。

很多条件都可以引发哮喘，如吸入变应原、存在上呼吸道或耳感染等(Opperwall(2003)Nurs.Clin.North Am.38：697-711)。变应性哮喘的特征在于对多种特异性和非特异性刺激的呼吸道反应过度(AHR)、升高的血清免疫球蛋白E(IgE)、呼吸道粘液产生过度、水肿和支气管上皮损伤(Wills-Karp，见上文)。当变应原激发立即早期呼吸道应答时(若干小时后常跟随延迟的晚期呼吸道应答(LAR))，则变应性哮喘发作(Henderson等(2000)J.Immunol.164：1086-95)。在LAR期间在整个呼吸道壁和支气管液中流入嗜酸性粒细胞、淋巴细胞和巨噬细胞(Henderson等，见上文)。肺嗜酸粒细胞增多是变应性哮喘的标志，并是呼吸上皮损伤的主要原因(Li等(1999)J.Immunol.162：2477-87)。

CD4⁺T辅助(Th)细胞对于与哮喘相关的慢性炎症是很重要的(Henderson等，见上文)。一些研究已经显示CD4⁺细胞定型为2类T辅助(Th2)细胞和其后2型细胞因子(例如，IL-4、IL-5、IL-10和IL-13)的产生的行为对导致AHR的变应性炎症应答是很重要的(Tomkinson等(2001)J.Immunol.166：5792-5800及其引用的参考文献)。首先，已经显示CD4⁺T细胞对小鼠模型中变态反应诱导的哮喘是必要的。其次，产生2型细胞因子的CD4⁺T细胞不仅在这些动物模型中增殖，而且在患有变异性哮喘的患者中增殖。第三，2型细胞因子的水平在动物模型和哮喘患者的呼吸道组织中提高。第四，在变应性哮喘的小鼠模型中已经发现Th2细胞因子在嗜酸性粒细胞募集中发挥中心作用，并且过继转移(adoptivelytransferred)的Th2细胞与肺中嗜酸细胞活化趋化因子(潜在嗜酸性粒细胞的化学引诱物)的水平提高和肺嗜酸粒细胞增多相关(Wills-Karp等，见上文；Li等，见上文)。

本文所述治疗或预防哮喘的方法包括用于外源性哮喘(也称为变应性哮喘或特应性哮喘)、内源性哮喘(也称为非变应性哮喘或非特应性哮喘)或其二者组合(称为混合性哮喘)的方法。外源性或变应性哮喘包括由例如变应原如花粉、孢子、草或杂菜、宠物皮屑、粉尘、螨等引起或与其相关的事件。由于变应原和其他刺激物自身在一年中不同的时间点出现，因此这些类型的事件也称为季节性哮喘。外源性哮喘组中还包括支气管哮喘和变应性支气管肺曲霉病。

可用本文所述的治疗剂治疗或缓解的病症包括由传染物质引起的呼吸系统病症和哮喘，所述传染原为如病毒(例如，感冒和流感病毒、呼吸道合胞病毒(RSV))、副粘叶病毒、鼻病毒和流感病毒。RSV、鼻病毒和流感病毒感染在儿童中很普遍，并且是婴儿和幼儿呼吸道疾病的主要原因。患病毒性细支气管炎的儿童可能发展为慢性哮鸣和哮喘，它们可以使用本文描述的方法进行治疗。还包括一些哮喘患者中可以由锻炼和/或冷空气引起的哮喘疾病。该方法可用于与烟接触(例如吸烟引起的或工业烟)以及工业和职业性接触相关的哮喘，所述接触为如烟、臭氧、有毒气体、二氧化硫、氧化亚氮、烟尘，包括来自油漆、塑料、聚氨基甲酸酯、清漆等的异氰酸盐、木材、植物或其他有机粉尘等。该方法还可用于与食品添加剂、防腐剂或药剂相关的哮喘事件。还包括用于治疗、抑制或缓解称为沉默性哮喘或咳嗽变异哮喘的哮喘类型。

本文公开的方法还可用于治疗和缓解与可刺激支气管缩窄的胃食管反流(GERD)相关的哮喘。GERD与保留的身体分泌物、被抑制的咳嗽和接触卧室中的变应原和刺激物可以促成哮喘疾病，统称为夜间哮喘或夜间发生的哮喘。在治疗、抑制或缓解与GERD相关的哮喘的方法中，可以如本文所述使用药学有效量的IL-13拮抗剂与药学有效量的治疗GERD的物质的组合。这些物质包括但不仅限于质子泵抑制剂如商标为的缓释泮托拉唑钠片剂、商标为

的奥美拉唑缓释胶囊剂、商标为

的利贝拉唑钠(rebeprazole sodium)缓释片剂或商标为

的缓释兰索拉唑胶囊剂。

特应性病症及其症状

已观察到来自特应性患者的细胞对IL-13具有增强的敏感性。因此，可施用有效量的IL-13和/或IL-14拮抗剂来治疗或预防特应性病症。“特应性”指的是一组疾病，其中通常有发展变态反应的遗传倾向。

特应性疾病的实例包括变态反应、变应性鼻炎、特应性皮炎、哮喘和花粉症。哮喘是与间歇性呼吸症状(如：支气管反应过度和可逆的气流阻塞)相关的表型异质病症。哮喘的免疫组织病理学特性包括，如：呼吸道上皮剥落、胶原沉淀于基底膜下；水肿；肥大细胞活化；及炎症细胞浸润(如：由嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和淋巴细胞浸润)。呼吸道炎症还可进一步造成呼吸道反应过度、气流限制、急性支气管缩窄、粘液栓形成、呼吸道壁重塑和其他呼吸症状。可施用有效量的IL-13结合剂(例如，IL-13结合剂，如本文描述的抗体或分子)来缓和一种或多种这些症状。

变应性鼻炎(花粉症)的症状包括：鼻子痒、流鼻涕、打喷嚏或鼻塞，和眼睛痒。可施用IL-13拮抗剂来缓和一种或多种这些症状。特应性皮炎是一种影响皮肤的慢性(长期持续)疾病。关于特应性皮炎的资料可从，如：NIH公布号03-4272中取得。在特应性皮炎中，皮肤可变得非常痒而导致发红、肿胀、开裂、流出透明液体，最后结痂且蜕皮。在许多情况中，具有有时疾病恶化(称为加剧或突发)然后皮肤再改善或完全无瑕(称为缓解)的周期。特应性皮炎通常称为″湿疹″，其为数种皮肤炎症类型的通称。特应性皮炎为多种湿疹类型中最常见的一种。特应性皮炎的实例包括：变应性接触性湿疹(皮炎：发红、痒、渗液反应(weepy reaction)，其中皮肤与被免疫系统视为外来物的物质，如：毒常春藤，或乳膏和乳剂中的某些防腐剂接触)；接触性湿疹(包括发红、痒和灼烧的局部反应，其中皮肤与变应原(引起过敏的物质)或刺激剂，如：酸、清洁剂或其他化学物质接触)；汗疱湿疹(手掌和脚底皮肤的刺激，其特征为：痒且灼烧的透明、位于深处的水泡)；神经性皮肤炎(因局部发痒(如：昆虫咬)引起的头部、下肢、腕或前臂皮肤上的鳞斑，其在抓伤时被强烈刺激)；钱币状湿疹(受刺激的皮肤的钱币形斑块-最常出现在手臂、背部、屁股和下肢，其可能结痂、蜕皮且非常痒)；脂溢性湿疹(头皮、脸，有时在身体其他部分的皮肤上的浅黄色、油性、鳞状斑块)。其他特定症状包括：淤滞性皮炎、特应性褶(丹-摩二氏皱襞)、唇炎、掌纹增多、眼睑色素沉着过度(眼睑因炎症或花粉症而颜色加深)、鱼鳞癣、毛发角化症、苔藓化、丘疹和荨麻疹。可施用IL-13拮抗剂来缓和一种或多种这些症状。

用于治疗变应性鼻炎或者其他变应性病症的示例性方法可以包括在暴露于变应原，例如，季节性暴露于变应原之前，例如，变应原旺盛之前用IL-13拮抗剂进行最初治疗。此类治疗可以包括一次或多次剂量，例如，以常规间隔施用的剂量。

癌症

IL-13及其受体涉及至少一些癌症类型的发展，如：从造血细胞衍生的癌症或从脑或神经元细胞衍生的癌症(如：成胶质细胞瘤)。例如：阻断IL-13信号传递途径(如：经由使用可溶性IL-13受体或STAT6-/-缺失小鼠)可分别延迟肿瘤发作和/或霍奇金淋巴瘤细胞系或转移的乳癌生长。(Trieu等(2004)Cancer Res.64：3271-75；Ostrand-Rosenberg等(2000)J.Immunol.165：6015-6019)。文中所描述的IL-13抗体可特异靶向表达IL-13R(2的癌症(Husain和Puri(2003)J.Neurooncol.65：37-48；Mintz等(2003)J.Neurooncol.64：117-23)。IL-13拮抗剂可用来抑制癌细胞增殖或其他癌细胞活性。癌症是指对正常生长控制失去反应，且通常相对于对应的正常细胞而言，对其增殖的调节减少的一种或多种细胞。

可使用IL-13拮抗剂(例如，IL-13结合剂，如本文描述的抗体或抗原结合片段)治疗的癌症实例包括白血病，如：B-细胞慢性淋巴细胞白血病、急性髓性白血病和人T-细胞白血病1型病毒(HTLV-1)转化的T细胞；淋巴瘤，如：T细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤；成胶质细胞瘤；胰腺癌；肾细胞癌；卵巢癌；AIDS-卡波西肉瘤，和乳腺癌(如Aspord，C.等(2007)JEM204：1037-1047中所述)。例如，可施用有效量的IL-13结合剂(例如抗-IL-13抗体分子来治疗或预防病症，例如，来减少细胞增殖、或缓解该病症的至少一种症状。

纤维变性

IL-13和/或IL-4拮抗剂也可用来治疗炎症和纤维变性，例如肝脏纤维变性。IL-13的产生与朝向硬化、及可能的肝细胞癌的肝脏炎症(如病毒性肝炎)的进展相关(de Lalla等.(2004)J.Immunol.173：1417-1425)。纤维变性在例如当正常组织被疤痕组织替代时发生，通常在炎症后发生。乙型肝炎和丙型肝炎病毒二者均引起肝脏中的纤维变性反应，此纤维变性反应可进展成硬化。接着，硬化可发展为严重的并发症，如：肝衰竭或肝细胞癌。利用如此文所述的IL-13和/或IL-4拮抗剂阻断IL-13活性可减少炎症和纤维变性，例如与肝病、尤其是乙型和丙型肝炎相关的炎症、纤维变性和硬化。例如，可施用有效量的一种或多种拮抗剂来治疗或预防病症或缓解炎症、和/或纤维变性病症的至少一种症状。

炎症性肠病

炎症性肠病(IBD)是引起肠炎症的疾病通称。炎症性肠病的两个实例是克隆病和溃疡性结肠炎。现已发现IL-13/STAT6信号转导涉及由炎症引起的小鼠平滑肌的过度收缩，一种炎症性肠病的模型(Akiho等.(2002)Am.J.Physiol.Gastrointest.Lievr Physiol.282：G226-232)。例如，可施用有效量的IL-13拮抗剂来治疗或预防病症或缓和炎症性肠病的至少一种症状。

药物组合物

可在体外、离体或体内使用IL-13拮抗剂(例如本文所述的那些)。可将它们掺入药物组合物中，例如通过将IL-13结合剂与可药用载体组合。除了IL-13结合剂和载体以外，此类组合物还可含有多种稀释剂、填充剂、盐、缓冲剂、稳定剂、增溶剂和本领域公知的其他物质。可药用物质一般是不干扰IL-13结合剂生物活性的效力的无毒物质。载体的特征可以取决于给药途径。

本文所述的药物组合物还可以含有其他因子，例如，但不仅限于下文更详细描述的其他抗细胞因子抗体分子或其他抗炎剂。药物组合物中可以包含这些额外的因子和/或物质，以产生与本文所述的IL-13和/或IL-4拮抗剂的协同效应。例如，在变应性哮喘的治疗中，本文所述的药物组合物可以包含抗IL-4抗体分子或已知减轻变应性应答的药物。

本文所述的药物组合物可以是脂质体形式，其中除了其他可药用载体以外，IL-13拮抗剂(例如本文所述的拮抗剂)与两亲性物质如脂质组合，所述两亲性物质在水溶液中以微粒、不溶单层、液态晶体或片状层的聚集形式存在。用于脂质体制剂的合适脂质包括但不仅限于甘油单酯、甘油二酯、硫苷脂、溶血卵磷脂、磷脂类、皂苷、胆汁酸等。制备这些脂质体制剂的示例方法包括美国专利号4,235,871、4,501,728、4,837,028和4,737,323中所述的方法。

本文使用的术语“治疗有效量”指药物组合物或方法中每种活性成分足以显示对患者有意义的益处(如这些疾病症状的改善、治愈或治愈率的提高)的总量。当应用于单独施用的单一活性成分时，该术语仅指该成分。当应用于组合时，该术语指引起疗效的活性成分的组合量，无论是组合、顺次或同时施用。

可以以多种常规方式施用药物组合物中使用的IL-13拮抗剂，如口服、吸入或皮肤、皮下或静脉内施用。当通过静脉、皮肤或皮下施用治疗有效剂量的IL-13拮抗剂时，结合剂可以制备为无热原的肠胃外可接受的水性溶液。可以考虑如pH、等渗性、稳定性等因素调整这些肠胃外可接受的蛋白质溶液的组成，例如优化生理条件、结合剂稳定性等组成。用于静脉、皮肤或皮下施用的药物组合物可以含有如等渗载体如氯化钠注射液、林格注射液、葡萄糖注射液、葡萄糖和氯化钠注射液、乳酸化的林格注射液或本领域已知的其他载体。药物组合物还可以含有稳定剂、防腐剂、缓冲剂、抗氧化剂或其他添加剂。

药物组合物中IL-13拮抗剂的量可取决于受治疾病的性质和严重性，以及患者先前经受的治疗的性质。可以对正常患者或未显示症状的患者施用药物组合物，例如以预防模式。主治医师可以决定治疗每个个体患者的IL-13和/或IL-4拮抗剂的量。例如，主治医师可以施用低剂量的拮抗剂并观察患者的反应。可以施用更高剂量的拮抗剂，直至得到对患者最佳的疗效，在这个点上一般不再提高剂量。例如，药物可含有每kg体重约0.1mg至50mg的抗体，如每kg体重约0.1mg至5mg，或约8mg至50mg抗体。在以不超过每月两次的频率例如隔周一次或每月一次皮下递送抗体的一项实施方案中，组合物包含约0.7-3.3，如1.0-3.0mg/kg，如约0.8-1.2、1.2-2.8或2.8-3.3mg/kg的量。在其它实施方案中，可藉吸入法或注射(例如皮下施用)而施用约0.5-10毫克/千克(例如约0.7-5毫克/千克、0.9-4毫克/千克、1-3毫克/千克、1.5-2.5毫克/千克、2毫克/千克)之剂量。在一个实施方案中，单次治疗间隔包括至少相隔4、7、9或14天之约1-3毫克/千克、1.5-2.5毫克/千克、2毫克/千克之抗IL-13抗体分子的两次皮下剂量。例如该单次治疗间隔可包括相隔7天之约2毫克/千克之抗IL-13抗体分子的两次皮下剂量。

使用药物组合物的疗法的持续时间可以变化，取决于待治疗疾病的严重性和每个个体患者的条件和潜在的特应性应答。在一项实施方案中，也可以以例如每周一次、每24、48、96小时一次或不超过这些间隔的频率通过皮下途径施用IL-13和/或IL-4拮抗剂。示例剂量可以在0.1-20mg/kg、更优选1-10mg/kg的范围内。可以例如通过速率小于20、10、5或1mg/分钟的静脉输注施用药剂(agent)以达到约1至50mg/m²或约5至20mg/m²的剂量。

在一项实施方案中，对患者施用IL-13拮抗剂包括多种蛋白质的剂量，例如用以使副作用降低或最小化的剂量。例如，可对受试者施用第一次剂量，如小于治疗有效剂量的剂量。在其后的间隔(如至少6、12、24或48小时后)，可以对患者施用第二次剂量，如至少超过第一次剂量的25％、50％、75％或100％的剂量。例如，第二次剂量和/或相当的第三、第四和第五次剂量可以是治疗有效剂量的至少约70％、80％、90％或100％。

吸入

可以将包括IL-13拮抗剂的组合物配制为用于吸入或其他的肺递送模式。本文使用的术语“肺组织”指呼吸道的任何组织，并包括上呼吸道和下呼吸道，除非另有说明。可以与一种或多种用于治疗肺疾病的现有形式相组合来施用IL-13和/或IL-4拮抗剂。

在一个实例中，将IL-13结合剂拮抗剂配制为用于喷雾器。在一项实施方案中，可以以冻干的形式储存IL-13拮抗剂(如在室温下)，并在吸入前在溶液中重构。还可以将IL-13拮抗剂配制为用于使用医学装置如吸入器吸入。参阅如U.S.6,102,035(干粉吸入器)和6,012,454(干粉吸入器)。吸入器可以包括用于在适于储存的pH下的IL-13拮抗剂的分开的隔室和中和缓冲液的另一隔室和用于刚好在喷雾前组合IL-13拮抗剂与中和缓冲液的结构。在一项实施方案中，吸入器是定量吸入器。

用于局部递送药物至肺气道的三个常用系统包括干粉吸入器(DPI)、定量吸入器(MDI)和喷雾器。MDI，吸入给药最常用的方法，可用于递送可溶形式或作为分散体的药物。一般MDI包括氟利昂或其他相对高蒸汽压的推进剂，其通过装置激活将雾化的药物推入呼吸道。与MDI不同，DPI一般完全依赖患者的吸入将干粉形式的药物引入肺。喷雾器通过对液体溶液传递能量形成可吸入的药物气雾剂。已经探索出使用含氟化学介质(fluorochemical medium)在液体通气或肺灌洗中直接递送药物至肺的方法。这些及其他方法可用于递送IL-13拮抗剂。在一项实施方案中，IL-13拮抗剂与聚合物例如稳定化合物或提高化合物半衰期的聚合物结合。

例如，对于通过吸入给药而言，以来自压力容器或含有适当的推进剂或喷雾器的分散器的气雾剂喷雾的形式递送IL-13拮抗剂。IL-13拮抗剂可以是干微粒形式或液体形式。如通过喷雾干燥、用电荷中和剂干燥IL-13拮抗剂的水溶液并接着从干粉产生微粒来制备含有IL-13拮抗剂的微粒，或者通过干燥有机改性剂中水溶液并接着从干粉产生微粒来制备含有IL-13拮抗剂的微粒。

可以使用合适的推进剂如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他合适的气体来自增压包装或喷雾器的气雾剂喷雾形式，以便利地递送IL-13拮抗剂。在增压气雾剂的情况下，可以通过提供阀以递送测定的量来测定剂量单位。如果微粒是配制的微粒，则用于吸入器或吹入器的胶囊和药筒可以配制为含有IL-13拮抗剂和合适的粉剂基质(例如乳糖或淀粉)的粉剂混合物。除了配制或非配制的化合物以外，可以将其他物质例如100％DPPC或其他表面活性剂与IL-13拮抗剂混合，以促进配制或非配制化合物的递送和分散。制备干微粒的方法描述于例如WO02/32406。

IL-13拮抗剂可为了用于气雾剂递送而配制，例如作为干气溶胶粒子，以便在施用时它可被快速吸收并产生快速的局部或全身治疗结果。可以修改施用以提供在施用2分钟、5分钟、1小时或3小时内可检测的活性。在一些实施方案中，甚至可以更快地获得峰值活性，例如在半小时或甚至在10分钟内。IL-13拮抗剂可以配制为更长的生物半衰期(例如，通过与聚合物如PEG结合)以用作其他施用方式的备选，例如从而使IL-13拮抗剂从肺进入循环并分布到其他器官或特定的靶器官。

在一项实施方案中，以使至少5％的多肽质量递送到下呼吸道或肺深处的量递送IL-13拮抗剂。肺部深处具有及其丰富的毛细血管网。分开毛细血管腔和肺泡空气腔的呼吸膜非常薄(≤6μm)并且渗透性极高。此外，肺泡表面的薄液层富含肺表面活性剂。在其他实施方案中，至少2％、3％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％或80％IL-13拮抗剂组合物递送到下呼吸道或肺部深处。递送到这些组织的一种或两种引起IL-13拮抗剂的有效吸收和高生物利用率。在一项实施方案中，使用吸入器或喷雾器以测定的剂量提供IL-13拮抗剂。例如，可以以至少约0.02、0.1、0.5、1、1.5、2、5、10、20、40或50mg/次或更高的剂量单位形式递送IL-13结合剂。可按如下计算生物利用率百分比：生物利用率百分比＝(AUC_非侵入/AUC_{静脉内或皮下})×(剂量_{静脉内或皮下}/剂量_非侵入)×100。

尽管不是必要的，但仍可使用递送增强剂如表面活性剂进一步增强肺递送。本文使用的“表面活性剂”指具有亲水和亲脂部分的IL-13拮抗剂，其通过与两个不混合相至间界面的相互作用促进药物的吸收。有若干原因可将表面活性剂用于干微粒，如减少微粒团聚、减少巨噬细胞的吞噬作用等。当与肺表面活性剂偶联时可以得到对IL-13拮抗剂更有效的吸收，因为表面活性剂如DPPC大幅促进化合物的扩散。表面活性剂是本领域所熟知的，包括但不仅限于磷酸甘油酯，如磷脂酰胆碱类、二棕榈酰L-α-磷脂酰胆碱(DPPC)和双磷脂酰甘油(DPPG)；十六醇；脂肪酸类；聚乙二醇(PEG)；聚氧化乙烯-9-；月桂醚(auryl ether)；棕榈酸；油酸；失水山梨醇三油酸酯(Span 85)；甘胆酸盐；表面活性肽；泊洛沙姆(poloxomer)；脱水山梨醇脂肪酸酯；失水山梨醇三油酸酯；泰洛沙泊及磷脂类。

稳定化

在一项实施方案中，将IL-13拮抗剂与改善其稳定性和/或在循环例如血、血清、淋巴、支气管肺灌洗或其他组织中的滞留(如至少1.5、2、5、10或50倍)的部分物理结合。

例如IL-13拮抗剂可以与聚合物例如基本上非抗原性的聚合物如聚环氧烷或聚氧化乙烯结合。合适的聚合物在重量上可显著变化。可以使用平均分子量范围从约200至约35000(或约1000至约15000和2000至约12500)的聚合物。

例如，IL-13拮抗剂可以与水溶性聚合物例如亲水聚乙烯聚合物如聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮缀合。这些聚合物的非限制性列表包括聚环氧烷均聚物，例如：聚乙二醇(PEG)或聚丙二醇，聚氧乙烯化的多元醇，其共聚物及其嵌段共聚物，其先决条件为维持该嵌段共聚物的水溶性。其他有用的聚合物包括聚氧化烯如聚氧乙烯、聚氧丙烯和聚氧乙烯和聚氧丙烯的嵌段共聚物(普流罗尼克)、聚甲基丙烯酸酯、卡波姆、含有糖单体D-甘露糖、D-和L-半乳糖、岩藻糖、果糖、D-木糖、L-阿拉伯糖、D-葡糖醛酸、唾液酸、D-半乳糖醛酸、D-甘露糖醛酸(例如聚甘露糖醛酸或海藻酸)、D-葡糖胺、D-半乳糖胺、D-葡萄糖和神经氨酸的支链或非支链多糖，包括同多糖和杂多糖如乳糖、支链淀粉、淀粉、羟乙基淀粉、直链淀粉、硫酸葡聚糖、葡聚糖、糊精类、糖原或酸性粘多糖类如透明质酸的多糖亚单位、糖醇类的聚合物如聚山梨醇和聚甘露醇、肝素或类肝素。

可以(例如通过凝胶过滤或离子交换层析如HPLC)将未反应的起始材料和IL-13拮抗剂与聚合物的缀合物分开。以相同的方式从彼此中纯化缀合物的异质种类。还能够由于未反应氨基酸的离子特性的差异而分离不同的种类(例如，含有一个或两个PEG残基)。参阅如WO 96/34015。

IL-13 拮抗剂的其他用途

在另一方面，本发明描述了通过以足以抑制其活性的量施用本文所述的IL-13拮抗剂以体内调节(如减小、中和和/或抑制)一种或多种IL-13相关活性的方法。IL-13拮抗剂还可以施用于需要抑制其IL-13介导的炎性应答的受试者。这些疾病包括例如呼吸道炎症、哮喘、纤维变性、嗜酸粒细胞增多和增加的粘液产生。

可以例如通过评估暴露于猪蛔虫(Ascaris suum)变应原的猕猴中拮抗剂调节呼吸道炎症的能力来评估本文所述的IL-13拮抗剂的效力。IL-13拮抗剂可用于中和或抑制一种或多种IL-13相关活性，如在体内降低IL-13介导的炎症，如用于治疗或预防IL-13相关的病理学、包括哮喘和/或其相关症状。

在一项实施方案中，在组合疗法中施用IL-13拮抗剂或其药物组合物，即与其他物质如用于治疗病理状况或病症例如变应性或炎性病症的治疗剂组合。此上下文中“组合”指基本在同一时间同时或顺次给予药剂。如果顺次给予，则在开始施用第二种化合物时，优选两种化合物的第一种在治疗部位仍可检测到的有效浓度。

例如，组合疗法可以包括将能够结合IL-13并干扰功能性IL-13信号发放复合体形成的一种或多种IL-13结合剂与一种或多种其他的治疗剂(例如，下文更详细描述的一种或多种细胞因子或生长因子抑制剂、免疫抑制剂、抗炎剂、代谢抑制剂、酶抑制剂和/或细胞毒性剂或细胞生长抑制剂)共配制和/或共施用。另外，一种或多种IL-13结合剂(例如，单独的IL-13拮抗剂或与IL-4拮抗剂组合)可以与两种或更多本文所述的治疗剂组合使用。这些组合疗法可以有利地使用所施用的治疗剂的较低剂量，从而避免可能的毒性或与多种单一疗法相关的并发症。此外，本文公开的治疗剂作用于与IL-13/IL-13受体途径不同的途径，从而预期可以增强和/或协同IL-13结合剂的效力。

干扰哮喘或呼吸道炎症的不同触发的治疗剂例如用于治疗变态反应、上呼吸道感染或耳感染的治疗剂可以与IL-13结合剂组合使用。在一项实施方案中，一种或多种IL-13结合剂(例如，单独的IL-13拮抗剂或与IL-4拮抗剂组合)可以与一种或多种其他试剂共配制和/或共施用，所述其他试剂为例如其他细胞因子或生长因子拮抗剂(例如可溶性受体、肽抑制剂、小分子、粘附素)、与其他靶标结合的抗体分子(例如与其他细胞因子或生长因子、其受体或其他细胞表面分子结合的抗体)、抗炎细胞因子或其激动剂。可以与IL-13结合剂组合使用的物质的非限制性实例包括但不仅限于吸入性类固醇、β-激动剂如短效或长效β-激动剂、白三烯或白三烯受体的拮抗剂、组合药物如

IgE抑制剂如抗IgE抗体(如

)、磷酸二酯酶抑制剂(如PDE4抑制剂)、黄嘌呤、抗胆碱能药物、肥大细胞稳定剂如色甘酸、IL-5抑制剂、嗜酸细胞活化趋化因子/CCR3抑制剂和抗组胺剂。

在其它实施方案中，该等IL-13结合剂可以与IL-4拮抗剂组合施用。IL-4拮抗剂之实例包括，但不限于：抗IL-4之抗体分子(例如公开在Hart，T.K等人(2002)Clin Exp Immunol.130(1)：93-100；Steinke，J.W.(2004)Immunol.Allergy Clin North Am 24(4)：599-614；及Ramanthan等人U.S.6,358,509中之pascolizumab及相关抗体)、IL-4Ra(例如公开在US05/0118176、US 05/0112694及Clinical Trials Gov.Identifier：NCT00436670中之AMG-317及相关IL-4R抗体)、IL-13Rα1(例如在WO03/080675(其申请人为AMRAD)中之抗-13Rα1抗体)、及结合至IL-4及/或IL-13之单-或双-特异性抗体分子(例如公开在WO 07/085815中)。

在其它实施方案中，该IL-13或IL-4拮抗剂为IL-13或IL-4突变蛋白(例如可结合至该IL-13R或IL-4受体但不会显著增加该受体之活性的该细胞因子之截短或变体形式)或缀合至毒素之细胞因子。IL-4突变蛋白系由Weinzel等人在Lancet(2007)370：1422-31中公开。IL-13/IL-4抑制性肽之另外实例系公开在Andrews，A.L.等人(2006)J.Allergy and Clin Immunol118：858-865中。细胞因子-毒素缀合物之实例系公开在以文参考文献中：WO 03/047632、Kunwar，S.等人(2007)J.Clin Oncol 25(7)：837-44及Husain，S.R.等人(2003)J.Neurooncol 65(1)：37-48。

在其它实施方案中，该IL-13拮抗剂或IL-4拮抗剂为IL-13受体多肽(例如IL-13Rα2或IL-13Rα1)或IL-4受体多肽(例如IL-4Rα)之全长或片段或修饰形式。例如该拮抗剂可以是IL-13受体或IL-4受体之可溶形式(例如含细胞因子结合性结构域之哺乳动物(例如人类)IL-13Rα2、IL-13Rα1或IL-4Rα的可溶形式，例如哺乳动物(例如人类)IL-13Rα2、IL-13Rα1或IL-4Rα之细胞外结构域的可溶形式)。代表性受体拮抗剂包括，例如如以下参考文献中所述之IL-4R-IL-13R结合性融合物：WO 05/085284及Economides，A.N等人(2003)Nat Med 9(1)：47-52、与Borish，L.C.等人(1999)Am J Respir Crit Care Med 160(6)：1816-23。

可单独使用IL-13受体或IL-4受体、或IL-13或IL-4突变蛋白的可溶形式或功能性连接(例如藉化学偶联、遗传或多肽融合、非共价结合或其它方法)至第二部分以促进例如免疫球蛋白Fc结构域、血清白蛋白、聚乙二醇化反应、GST、Lex-A或MBP多肽序列之表达、立体柔性、检测及/或分离或纯化。该等融合蛋白质可另外包括使该第一部分与第二部分连接之接头序列。例如可溶性IL-13受体或IL-4受体、或IL-13或IL-4突变蛋白可融合至各种同种型的重链恒定区，包括：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD、及IgE。典型地，该融合蛋白质可包括，例如融合至人类免疫球蛋白Fc链，例如人类IgG(例如人类IgG1或人类IgG2或其突变形式)之人类可溶性IL-13受体或IL-4受体、或IL-13或IL-4突变蛋白(或其同源性序列)之细胞外结构域。该Fc序列可以于一或多个氨基酸发生突变以减少效应细胞功能、Fc受体结合及/或补体活性。

应了解文中所述之该等抗体分子及可溶性或融合蛋白质可功能性连接(例如藉化学偶联、遗传融合、非共价结合或其它方法)至一或多种其它分子实体，诸如抗体(例如双特异性或多特异性抗体)、毒素、放射性同位素、细胞毒性或细胞生长抑制剂。

在另一实施方案中，该IL-13或IL-4拮抗剂可抑制将IL-13或IL-13R、或IL-4或IL-4R编码之核酸的表达。此等拮抗剂的实例包括核酸分子，例如反义分子、核酶、RNAi、siRNA、可以与将IL-13或IL-13R、或IL-4或IL-4R或转录调节区编码之核酸进行杂交反应且可阻断或减少IL-13或IL-13R、或IL-4或IL-4R之mRNA表达的三股螺旋结构分子。ISIS-369645提供可抑制IL-4R之表达的反义核酸之实例，其系由ISIS Pharmaceuticals研发并公开在，例如Karras，J.G.等人(2007)Am J Respir Cell Mol Biol.36(3)：276-86中。可干扰将IL-4或IL-13编码之RNA的代表性短干扰型RNAs(siRNAs)系公开在WO 07/131274。

在又一实施方案中，该IL-13或IL-4拮抗剂为上游或下游IL-13信号转导之抑制剂，例如小分子抑制剂(例如STAT6抑制剂)。STAT6抑制剂之实例公开在以下参考文献中：WO 04/002964、加拿大专利申请案：CA2490888及Nagashima，S.等人(2007)Bioorg Med Chem 15(2)：1044-55；及美国专利6,207,391与WO 01/083517。

在其他实施方案中，单独或与一种或多种IL-4拮抗剂结合的一种或多种IL-13拮抗剂可以与一种或多种抗炎药、免疫抑制剂或代谢或酶抑制剂共配制和/或共施用。可以与IL-13结合剂组合使用的药物或抑制剂的实例包括但不仅限于以下一种或多种：TNF拮抗剂(例如，TNF受体如p55或p75人TNF受体的可溶性片段或其衍生物，如75kd TNFR-IgG(75kDTNF受体-IgG融合蛋白，ENBREL^TM))、TNF酶拮抗剂如TNFα转化酶(TACE)抑制剂、毒蕈碱性受体拮抗剂、TGF-β拮抗剂、干扰素γ、perfenidone、化学治疗剂如氨甲喋呤、来氟米特、或西罗莫司(雷帕霉素)或其类似物如CCI-779、COX2和cPLA2抑制剂、NSAID、免疫调节剂、p38抑制剂、TPL-2、Mk-2和NFκB抑制剂。

疫苗制剂

在另一方面中，本发明描述了改变与免疫接种相关的免疫应答的方法。单独或与IL-4拮抗剂组合的IL-13拮抗剂可用于通过抑制IL-13活性而提高免疫接种效力。可以在递送免疫原例如施用疫苗之前、其中或之后施用结合剂。在一项实施方案中，通过接种产生的免疫是细胞免疫，如针对癌细胞或病毒感染的(例如逆转录病毒感染的，如HIV感染的)细胞免疫。在一项实施方案中，疫苗制剂含有一种或多种拮抗剂和抗原例如免疫原。在一项实施方案中，将IL-13和/或IL-4拮抗剂与免疫疗法组合施用(例如，与用一种或多种选自豚草、黑麦草、粉尘螨等的免疫原进行的变应性免疫相组合)。在另一实施方案中，分别施用拮抗剂和免疫原，例如彼此在1小时、3小时、1天或2天内。

IL-13的抑制可以提高例如细胞疫苗(如针对如癌症和病毒感染(如逆转录病毒感染，如HIV感染)等疾病的疫苗)的效力。CD4⁺T细胞可能是通过细胞因子IL-13下调疫苗对CD8⁺细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的诱导。已经显示IL-13的抑制增强CTL应答的疫苗诱导(Ahlers等(2002)Proc.Natl.Acad.Sci.美国99：13020-10325)。IL-13拮抗剂可以与疫苗结合使用以提高疫苗效力。癌症和病毒感染(如逆转录病毒(如HIV)感染)是细胞疫苗应答可以有效的示例性病症。通过在接种时阻断IL-13信号发放增强了疫苗效力(Ahlers等(2002)Proc.Nat.Acad.Sci.美国99：13020-25)。可以以药物组合物或治疗组合物的形式对受试者施用疫苗制剂。

用于诊断、预测、及/或监测IL-13相关疾病之方法

本文所述的结合剂可通过测量生物样品中IL-13的水平用于例如诊断、预后和监测IL-13相关疾病，例如哮喘发展的方法中。此外，此发现使得可以鉴定IL-13信号发放的新抑制剂，它们也可用于IL-13相关疾病，例如哮喘的治疗。此类诊断变应性和非变应性哮喘的方法可以包括检测生物样品例如血清、血浆、支气管肺泡灌洗物、痰等中IL-13的改变(如下降或上升)。“诊断的”或“诊断”指鉴定病理状况的存在与否。诊断方法涉及通过测定来自受试者(人或非人哺乳动物)的生物样品(如支气管肺泡灌洗物)中IL-13多肽的测试量并将测试量与IL-13多肽的正常量或范围(即已知不患有哮喘的个体的量或范围)进行比较。尽管具体的诊断方法也许不能提供哮喘的确定诊断，但是如果该方法提供辅助诊断的阳性指征，那么则是足够的

哮喘和/或特异性病症的预后方法可包括检测IL-13在mRNA或蛋白质水平的上调。“预后的”或“预后”指预测病理病症可能的发展和/或严重性。预后方法涉及测定来自受试者的生物样品中IL-13的测试量并将测试量与IL-13预后量或范围(即具有不同严重性哮喘的个体的量或范围)进行比较。测试样品中IL-13的多种量与哮喘的某些预后一致。检测具体预后水平的IL-13量提供了对受试者的预后。

本申请还提供通过检测IL-13的上调来监测哮喘病程的方法。监测方法包括第一次和第二次测定来自受试者的生物样品中IL-13的测试量，并比较所述量。在第一次和第二次之间IL-13量的变化可指示哮喘和/或特异性病症中病程的变化，量的降低指示哮喘的缓解，而量的提高指示哮喘和/或特应性病症的发展。这些监测测定还可用于评估该治疗IL-13相关病症的患者中具体治疗介入的效力(如疾病减弱和/或逆转)。

可以制备用荧光团和生色团标记的结合剂。可以选择荧光部分以在大于310nm、优选大于400nm波长处具有显著的吸收。Stryer(1968)Science，162：526和Brand，L.等(1972)Annual Review of Biochemistry，41：843-868描述了多种合适的荧光剂和生色团。可以通过常规方案例如美国专利号3,940,475、4,289,747和4,376,110中公开的那些，用荧光生色团标记结合剂。具有许多上文所述目的特性的一组荧光剂是呫吨染料，其包括荧光素和罗丹明。另一组荧光化合物为萘胺。一旦以荧光团或发色团标记后，可使用结合剂来检测样品中是否存在IL-13或其定位，例如利用荧光显微术(例如共聚焦显微术或去褶合显微术)。

组织学分析.可以使用本文所述的结合剂进行免疫组织化学。例如，就抗体的情况而言，可以和标记物(如纯化或表位标签)一起合成抗体，或者例如通过缀合标记物或标记物结合基团可检测地标记抗体。例如，可以在抗体上附着螯合剂。接着使抗体接触组织学制备物，如载玻片上的固定组织切片。在温育从而结合后，洗涤制备物以去除未结合的抗体。然后例如使用显微镜分析制备物以鉴定抗体是否与制备物结合。结合时抗体(或其他多肽或肽)可以是未标记的。结合和洗涤之后，标记抗体以使其可检测。

蛋白质阵列.还可以将IL-13结合剂(如是IL-13结合剂的蛋白质)固定在蛋白质阵列上。蛋白质阵列可用作诊断工具，如用于筛选医学样品(如分离的细胞、血、血清、活检物等)。蛋白质阵列还可包括其他结合剂，如与IL-13或其他靶分子结合的结合剂。

产生蛋白质阵列的方法描述于例如De Wildt等(2000)Nat.Biotechnol.18：989-994、Lueking等(1999)Anal.Biochem.270：103-111；Ge(2000)Nucleic Acids Res.28，e3，I-VII、MacBeath和Schreiber(2000)Science289：1760-1763、WO 01/40803和WO 99/51773A1。可以高速点样(例如使用如来自Genetic MicroSystems或BioRobotics的市售机器人装置)用于阵列的多肽。阵列基质可以是例如硝酸纤维素、塑料、玻璃(表面进行了修饰的玻璃)。阵列还可以包括多孔基质，如丙烯酰胺、琼脂糖或其他聚合物。例如，阵列可以是抗体阵列，如De Wildt中所述，见上文。可以以阵列形式在滤器上培养产生蛋白质的细胞。诱导蛋白质产生，并将表达的蛋白质固定在滤器上细胞的位置。

可以使蛋白质阵列接触样品以测定样品中IL-13的程度。如果样品是未标记的，可以使用夹层方法例如使用已标记的探针检测IL-13的结合。关于阵列每个地址结合程度的信息可以作为图谱储存，例如在计算机数据库中。可以一式二份产生蛋白质阵列并用于比较例如不同样品的结合谱。

流式细胞术.IL-13结合剂可用于标记细胞，如样品(如患者样品)中的细胞。结合剂可以附着(或可附着)在荧光化合物上。接着可以通过流式细胞术对细胞进行分析和/或使用荧光激活细胞分选(如使用可得自Becton Dickinson Immunocytometry Systems，San Jose CA的分选仪，还参阅美国专利号5,627,037、5,030,002和5,137,809)分选。当细胞通过分选仪时，激光束激发荧光化合物，同时探测器计数通过的细胞并通过检测荧光测定荧光化合物是否附着于细胞。可以定量并分析与每个细胞结合的标记的量以表征样品。分选仪还可以使细胞转向(deffect)并使与结合剂结合的细胞与未结合结合剂的细胞分开。可以培养和/或表征分开的细胞。

体内成像.在另一实施方案中，本发明提供体内检测受试者中IL-13存在的方法。该方法包括(i)对受试者(例如患IL-13相关病症的患者)施用与可检测标记物缀合的抗IL-13抗体分子；(ii)使患者暴露于检测可检测标记物的手段。例如，通过NMR或其他断层照影方法使受试者成像。

可用于诊断成像的标记物的实例包括放射性标记物如¹³¹I、¹¹¹In、¹²³I、^99mTc、³²P、³³P、¹²⁵I、³H、¹⁴C和¹⁸⁸Rh、荧光标记物如荧光素和罗丹明、核磁共振活性标记物、可被正电子成像术(“PET”)扫描器检测的正电子发射同位素、化学发光剂如萤光素以及酶标记物如过氧化物酶或磷酸酶。还可以使用可被短程探测器探头检测的短程辐射体，如同位素。可以使用已知的技术用此类试剂标记结合剂。例如涉及放射标记抗体的技术参阅Wensel和Meares(1983)Radioimmunoimaging and Radioimmunotherapy，Elsevier，New York和Colcher等(1986)Meth.Enzymol.121：802-816。放射性标记的结合剂还可用于体外的诊断测试。同位素标记的结合剂的比活性取决于放射性标记物的半衰期、同位素纯度和标记物掺入抗体的方式。用放射性同位素(如¹⁴C、³H、³⁵S、¹²⁵I、^99mTc、³²P、³³P和¹³¹I)标记多肽的方案是广泛已知的。参阅如U.S.4,302,438、Goding，J.W.(Monoclonalantibodies：principles and practice：production and application ofmonoclonal antibodies in cell biology，biochemistry，and immunology第二版.London；Orlando：Academic Press，1986.124-126页)及其引用的参考文献以及A.R.Bradwell等，“Developments in Antibody Imaging”，Monoclonal Antibodies for Cancer Detection and Therapy，R.W.Baldwin等编辑，65-85页(Academic Press 1985)。

本文所述的IL-13结合剂可以与磁共振成像(MRI)造影剂(contrastagent)缀合。这些MRI技术概述于EP-A-0 502 814。通常使用不同环境中水质子弛豫时间常数T1和T2的差异产生影像。然而，这些差异可能不足以提供清晰的高分辨率影像。这些弛豫时间常数的差异可以通过造影剂增强。这些造影剂的实例包括大量磁性物质顺磁性物质(主要改变T1)和铁磁性或超顺磁性物质(主要改变T2响应)。螯合剂(如EDTA、DTPA和NTA螯合剂)可用于附着一些顺磁物质(如Fe³⁺、Mn²⁺、Gd³⁺)(并降低其毒性)。其他物质可以是微粒，例如直径小于10μm至约10nm的形式，并具有铁磁性、反铁磁性或超顺磁性特性。还可以用如Pykett(1982)Scientific American，246：78-88所述含有NMR活性¹⁹F原子的指示基团标记IL-13结合剂，以定位和成像IL-13的分布。

用于诊断用途的包含IL-13结合剂和说明书的试剂盒也在本发明范围内，例如使用IL-13结合剂(如抗体分子或其他多肽或肽)在体外(如样品，如来自患IL-13相关病症的患者的活检物或细胞)或体内(如通过使受试者成像)检测IL-13。试剂盒还可以含有至少一种额外的试剂，如标记物或额外的诊断剂。对于体内用途，结合剂可以配制为药物组合物。

试剂盒

可以在试剂盒中提供IL-13结合剂，例如抗IL-13抗体分子和/或IL-4拮抗剂，例如作为试剂盒的组分。例如，试剂盒包括(a)IL-13结合剂，例如抗IL-13抗体分子，和/或IL-4拮抗剂，和任选地(b)信息材料。信息材料可以是与方法，例如本文所述的方法相关的描述性、说明性、销售的或其他材料。试剂盒的信息材料不限制于其形式。在一项实施方案中，信息材料可包括关于化合物的产生、化合物的分子量、浓度、有效期、批次或产地信息等的信息。在一项实施方案中，信息材料涉及使用IL-13结合剂治疗、预防、诊断、预后或监测本文所述的病症。在一项实施方案中，信息材料包括关于以单一治疗间隔施用IL-13结合剂的说明书。

在一项实施方案中，信息材料可包括以合适的方式例如合适的剂量、剂型或给药方式(如本文所述的剂量、剂型、给药方式、药动学/药效学性质)施用IL-13结合剂例如抗IL-13抗体分子以实施本文所述的方法的说明书。在另一实施方案中，信息材料可以包括对合适的受试者例如人，例如患有或有风险患有变应性哮喘、非变应性哮喘或IL-13介导的病症(如变应性和/或炎性病症)或HTLV-1感染施用IL-13结合剂(如抗IL-13抗体分子)的说明书。已经将IL-13的产生与HTLV-1感染相联系(Chung等，(2003)Blood 102：4130-36)。

例如，材料可以包括对患者、患有或有风险患有变应性哮喘、非变应性哮喘或IL-13介导的病症(如变应性和/或炎性病症)或HTLV-1感染的患者施用IL-13结合剂(如抗IL-13抗体分子)的说明书。

试剂盒可以包括用于含有IL-13结合剂(如抗IL-13抗体分子)的组合物的一个或多个容器。在一些实施方案中，试剂盒包含用于组合物和信息材料的分开的容器、分隔器或隔室。例如，组合物可以装在瓶、管形瓶(vial)或注射器中，信息材料可以装在塑料套或包中。在另一实施方案中，试剂盒的独立元件装在单个不分开的容器中。例如，组合物装在以标签形式附上信息材料的瓶、管形瓶或注射器中。在一些实施方案中，试剂盒包括多个(如一包)单个容器，每个含有IL-13结合剂(如抗IL-13抗体分子)的一个或多个单位剂型(如本文所述的剂型)。例如，试剂盒包括多个注射器、安瓿、箔包、喷雾器或吸入设备，每个含有IL-13结合剂(如抗IL-13抗体分子)的单个单位剂量或多个单位剂量。

试剂盒任选地包括适于施用组合物的设备，如注射器、吸入器、移液管、镊子、量匙、滴管(如滴眼管)、拭子(如棉头拭子或木拭子)或任何这样的递送设备。在优选的实施方案中，设备是分配结合剂的测定剂量的植入性装置。

公开以下实施例以帮助理解本发明，但并不意在且不应当理解为以任何方式限制其范围。

实施例

实施例1：MJ 2-7抗体

使用QIAGEN RNEASY^TM小量试剂盒(Qiagen)从MJ-7杂交瘤细胞制备总RNA。使用SMART^TM PCR Synthesis试剂盒(BD BiosciencesClontech)将RNA逆转录为cDNA。通过PCR外推MJ 2-7的重链可变区，所述PCR使用SMART^TM寡核苷酸作为正向引物，与编码小鼠IgG1恒定区CH1结构域N端部分的DNA退火的mIgG1引物作为反向引物。使用SMART^TM和小鼠κ特异性引物产生编码MJ 2-7轻链可变区的DNA片段。使用DEEP VENT^TM DNA聚合酶(New England Biolabs)和25nM dNTP进行24个循环(94℃1分钟、60℃1分钟、72℃1分钟)的PCR反应。将PCR产物亚克隆入pED6载体，并通过DNA测序鉴定插入片段的序列。纯化的小鼠MJ 2-7抗体的N端蛋白质测序用于证实对应于观察到的蛋白质序列的翻译的序列。

与NHP IL-13相互作用并具有提示可能与人IL-13相互作用的特征的小鼠单克隆抗体MJ 2-7的示例核苷酸和氨基酸序列如下：

编码重链可变区的示例核苷酸序列包括：

GAG GTTCAGCTGC AGCAGTCTGG GGCAGAGCTT GTGAAGCCAG

GGGCCTCAGT CAAGTTGTCC TGCACAGGTT CTGGCTTCAA CATTAAAGAC

ACCTATATAC ACTGGGTGAA GCAGAGGCCT GAACAGGGCC TGGAGTGGAT

TGGAAGGATT GATCCTGCGA ATGATAATAT TAAATATGAC CCGAAGTTCC

AGGGCAAGGC CACTATAACA GCAGACACAT CCTCCAACAC AGCCTACCTA

CAGCTCAACA GCCTGACATC TGAGGACACT GCCGTCTATT ACTGTGCTAG

ATCTGAGGAA AATTGGTACG ACTTTTTTGA CTACTGGGGC CAAGGCACCA

CTCTCACAGT CTCCTCA (SEQ ID NO：129)

重链可变区的示例氨基酸序列包括：

EVQLQQSGAELVKPGASVKLSCTGSGFNIKDTYIHWVKQRPEQGLEWIGRIDPA

NDNIKYDPKFQGKATITADTSSNTAYLQLNSLTSEDTAVYYCARSEENWYDFF

DYWGQGTTLTVSS(SEQ ID NO：130)

CDR带有下划线。可变区之前可任选地存在前导序列，如MKCSWVIFFLMAVVTGVNS(SEQ ID NO：131)。编码轻链可变区的示例核苷酸序列包括：

GAT GTTTTGATGA CCCAAACTCC ACTCTCCCTG CCTGTCAGTC

TTGGAGATCA AGCCTCCATC TCTTGCAGGT CTAGTCAGAG CATTGTACAT

AGTAATGGAA ACACCTATTT AGAATGGTAC CTGCAGAAAC CAGGCCAGTC

TCCAAAGCTC CTGATCTACA AAGTTTCCAA CCGATTTTCT GGGGTCCCAG

ACAGGTTCAG TGGCAGTGGA TCAGGGACAG ATTTCACACT CAAGATTAGC

AGAGTGGAGG CTGAGGATCT GGGAGTTTAT TACTGCTTTC AAGGTTCACA

TATTCCGTAC ACGTTCGGAG GGGGGACCAA GCTGGAAATA AAA (SEQ ID NO：132)

轻链可变区的示例氨基酸序列包括：

DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSP

KLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHIPYTFG

GGTKLEIK(SEQ ID NO：133)

CDR带有下划线。氨基酸序列之前可任选地存在前导序列，如MKLPVRLLVLMFWIPASSS(SEQ ID NO：134)。本文中术语“MJ 2-7”与术语“mAb 7.1.1”可互换使用。

实施例2：C65抗体

与NHP IL-13相互作用并具有提示可能与人IL-13相互作用的特征的小鼠单克隆抗体C65的示例核苷酸和氨基酸序列如下：

重链可变区的示例核苷酸序列包括：

1 ATGGCTGTCC TGGCATTACT CTTCTGCCTG GTAACATTCC CAAGCTGTAT

51 CCTTTCCCAG GTGCAGCTGA AGGAGTCAGG ACCTGGCCTG GTGGCGCCCT

101 CACAGAGCCT GTCCATCACA TGCACCGTCT CAGGGTTCTC ATTAACCGGC

151 TATGGTGTAA ACTGGGTTCG CCAGCCTCCA GGAAAGGGTC TGGAGTGGCT

201 GGGAATAATT TGGGGTGATG GAAGCACAGA CTATAATTCA GCTCTCAAAT

251 CCAGACTGAT CATCAACAAG GACAACTCCA AGAGCCAAGT TTTCTTAAAA

301 ATGAACAGTC TGCAAACTGA TGACACAGCC AGGTACTTCT GTGCCAGAGA

351 TAAGACTTTT TACTACGATG GTTTCTACAG GGGCAGGATG GACTACTGGG

401 GTCAAGGAAC CTCAGTCACC GTCTCCTCA(SEQ ID NO：135)

重链可变区的示例氨基酸序列包括：

QVQLKESGPGL VAPSQSLSIT CTVSGFSLTG YGVNWVRQPP GKGLEWLGII

WGDGSTDYNS ALKSRLIINK DNSKSQVFLK MNSLQTDDTA RYFCARDKTF

YYDGFYRGRM DYWGQGTSVT VSS(SEQ ID NO：136)

CDR带有下划线。氨基酸序列之前可任选地含有前导序列，如MAVLALLFCL VTFPSCILS(SEQ ID NO：137)。

编码轻链可变区的示例核苷酸序列包括：

1 ATGAACACGA GGGCCCCTGC TGAGTTCCTT GGGTTCCTGT TGCTCTGGTT

51 TTTAGGTGCC AGATGTGATG TCCAGATGAT TCAGTCTCCA TCCTCCCTGT

101 CTGCATCTTT GGGAGACATT GTCACCATGA CTTGCCAGGC AAGTCAGGGC

151 ACTAGCATTA ATTTAAACTG GTTTCAGCAA AAACCAGGGA AAGCTCCTAA

201 GCTCCTGATC TTTGGTGCAA GCAACTTGGA AGATGGGGTC CCATCAAGGT

251 TCAGTGGCAG TAGATATGGG ACAAATTTCA CTCTCACCAT CAGCAGCCTG

301 GAGGATGAAG ATATGGCAAC TTATTTCTGT CTACAGCATA GTTATCTCCC

351 GTGGACGTTC GGTGGCGGCA CCAAACTGGA AATCAAA(SEQ ID NO：138)

轻链可变区的示例氨基酸序列包括：

DVQMIQSP SSLSASLGDI VTMTCQASQG TSINLNWFQQ KPGKAPKLLI

FGASNLEDGV PSRFSGSRYG TNFTLTISSL EDEDMATYFC LQHSYLPWTF

GGGTKLEIK(SEQ ID NO：139)

CDR带有下划线。氨基酸序列之前可任选地含有前导序列，如MNTRAPAEFLGFLLLWFLGARC(SEQ ID NO：140)。

实施例3：Fc序列

SEQ ID NO：128位置#1处的丝氨酸代表第一个示例全长抗体编号方案中的氨基酸残基#119，在所述方案中丝氨酸之前是重链可变区的残基#118。在第一个示例全长抗体编号方案中，突变的氨基酸在编号234和237，并对应于SEQ ID NO：128的位置116和119。因此根据第一个示例全长抗体编号方案，以下序列代表具有两个突变：L234A和G237A的Fc结构域。

小鼠(SEQ ID NO：128)

下面是另一个示例性人Fc结构域序列：

STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV

LQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPP

CPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVE

VHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTIS

KAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY

KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP

GK(SEQ ID NO：141) 。

可用于降低效应子功能的其他示例改变包括(L234A；L235A)、(L235A；G237A)和N297A。

实施例4：IL-13和特应性病症

在STAT6磷酸化的测定中评估MJ2-7抑制天然人IL-13(1ng/ml)生物活性的能力。在此测定中MJ2-7以约0.293nM的IC50抑制天然人IL-13的活性。在此测定中具有MJ2-7小鼠重链和人源化轻链的抗体以约0.554nM的IC50抑制天然人IL-13的活性。

在CD23表达的测定中评估MJ2-7抑制非人灵长类IL-13(1ng/ml)的能力。在此测定中MJ2-7以约0.242nM的IC50抑制非人灵长类IL-13的活性。在此测定中具有MJ2-7小鼠重链和人源化轻链的抗体以约0.308nM的IC50抑制非人灵长类IL-13的活性。

实施例5：小鼠MJ2-7抗体的核苷酸和氨基酸序列

编码(任选地带有前导序列的)重链可变区的核苷酸序列如下：

1 ATGAAATGCA GCTGGGTTAT CTTCTTCCTG ATGGCAGTGG TTACAGGGGT

51 CAATTCAGAG GTTCAGCTGC AGCAGTCTGG GGCAGAGCTT GTGAAGCCAG

101 GGGCCTCAGT CAAGTTGTCC TGCACAGGTT CTGGCTTCAA CATTAAAGAC

151 ACCTATATAC ACTGGGTGAA GCAGAGGCCT GAACAGGGCC TGGAGTGGAT

201 TGGAAGGATT GATCCTGCGA ATGATAATAT TAAATATGAC CCGAAGTTCC

251 AGGGCAAGGC CACTATAACA GCAGACACAT CCTCCAACAC AGCCTACCTA

301 CAGCTCAACA GCCTGACATC TGAGGACACT GCCGTCTATT ACTGTGCTAG

351 ATCTGAGGAA AATTGGTACG ACTTTTTTGA CTACTGGGGC CAAGGCACCA

401 CTCTCACAGT CTCCTCA (SEQ ID NO：142)

任选地带有前导序列(下划线)的重链可变区的氨基酸序列如下：

1 MKCSWVIFFL MAVVTGVNSE VQLQQSGAEL VKPGASVKLS CTGSGFNIKD

51 TYIHWVKQRP EQGLEWIGRI DPANDNIKYD PKFQGKATIT ADTSSNTAYL

101 QLNSLTSEDT AVYYCARSEE NWYDFFDYWG QGTTLTVSS

(SEQ ID NO：143)

编码轻链可变区的核苷酸序列如下：

1 ATGAAGTTGC CTGTTAGGCT GTTGGTGCTG ATGTTCTGGA TTCCTGCTTC

51 CAGCAGTGAT GTTTTGATGA CCCAAACTCC ACTCTCCCTG CCTGTCAGTC

101 TTGGAGATCA AGCCTCCATC TCTTGCAGGT CTAGTCAGAG CATTGTACAT

151 AGTAATGGAA ACACCTATTT AGAATGGTAC CTGCAGAAAC CAGGCCAGTC

201 TCCAAAGCTC CTGATCTACA AAGTTTCCAA CCGATTTTCT GGGGTCCCAG

251 ACAGGTTCAG TGGCAGTGGA TCAGGGACAG ATTTCACACT CAAGATTAGC

301 AGAGTGGAGG CTGAGGATCT GGGAGTTTAT TACTGCTTTC AAGGTTCACA

351 TATTCCGTAC ACGTTCGGAG GGGGGACCAA GCTGGAAATA AAA(SEQ ID NO：144)

任选地带有前导序列(下划线)的轻链可变区的氨基酸序列如下：

1 MKLPVRLLVL MFWIPASSSD VLMTQTPLSL PVSLGDQASI SCRSSQSIVH

51 SNGNTYLEWY LQKPGQSPKL LIYKVSNRFS GVPDRFSGSG SGTDFTLKIS

101 RVEAEDLGVY YCFQGSHIPY TFGGGTKLEI K(SEQ ID NO：145) 。

实施例6：MJ2-7抗体的第一种示例人源化变体的核苷酸和氨基酸序列

人源化抗体形式1(V1)基于最接近的人种系克隆。(带有编码任选的前导序列的序列的)hMJ 2-7 V1重链可变区(hMJ 2-7 VH V1)的核苷酸序列如下：

1 ATGGATTGGA CCTGGCGCAT CCTGTTCCTG GTGGCCGCTG CCACCGGCGC

51 TCACTCTCAG GTGCAGCTGG TGCAGTCTGG CGCCGAGGTG AAGAAGCCTG

101 GCGCTTCCGT GAAGGTGTCC TGTAAGGCCT CCGGCTTCAA CATCAAGGAC

151 ACCTACATCC ACTGGGTGCG GCAGGCTCCC GGCCAGCGGC TGGAGTGGAT

201 GGGCCGGATC GATCCTGCCA ACGACAACAT CAAGTACGAC CCCAAGTTTC

251 AGGGCCGCGT GACCATCACC CGCGATACCT CCGCTTCTAC CGCCTACATG

301 GAGCTGTCTA GCCTGCGGAG CGAGGATACC GCCGTGTACT ACTGCGCCCG

351 CTCCGAGGAG AACTGGTACG ACTTCTTCGA CTACTGGGGC CAGGGCACCC

401 TGGTGACCGT GTCCTCT(SEQ ID NO：146)

重链可变区(hMJ 2-7 V1)的氨基酸序列基于移植到DP-25的CDRVH-I，1-03。带有任选的前导序列(第一个下划线区，基于AbM定义的CDR显示在其后的下划线区)的氨基酸序列如下：

1 MDWTWRILFL VAAATGAHS-Q VQLVQSGAEV KKPGASVKVS CKASGFNIKD

51 TYIHWVRQAP GQRLEWMGRI DPANDNIKYD PKFQGRVTIT RDTSASTAYM

101 ELSSLRSEDT AVYYCARSEE NWYDFFDYWG QGTLVTVSSG ESCR(SEQ ID NO：147)

(带有编码任选的前导序列的序列的)hMJ 2-7 V1轻链可变区(hMJ2-7 VL V1)的核苷酸序列如下：

1 ATGCGGCTGC CCGCTCAGCT GCTGGGCCTG CTGATGCTGT GGGTGCCCGG

51 CTCTTCCGGC GACGTGGTGA TGACCCAGTC CCCTCTGTCT CTGCCCGTGA

101 CCCTGGGCCA GCCCGCTTCT ATCTCTTGCC GGTCCTCCCA GTCCATCGTG

151 CACTCCAACG GCAACACCTA CCTGGAGTGG TTTCAGCAGA GACCCGGCCA

201 GTCTCCTCGG CGGCTGATCT ACAAGGTGTC CAACCGCTTT TCCGGCGTGC

251 CCGATCGGTT CTCCGGCAGC GGCTCCGGCA CCGATTTCAC CCTGAAGATC

301 AGCCGCGTGG AGGCCGAGGA TGTGGGCGTG TACTACTGCT TCCAGGGCTC

351 CCACATCCCT TACACCTTTG GCGGCGGAAC CAAGGTGGAG ATCAAG

(SEQ ID NO：148)

这种形式基于移植到DPK18的CDR VκII。hMJ 2-7 V1轻链可变区(hMJ 2-7 VL V1)(带有如第一个下划线区的任选前导序列；基于AbM定义的CDR显示在其后的下划线区)的氨基酸序列如下：

1 MRLPAQLLGL LMLWVPGSSG-DVVMTQSPLS LPVTLGQPAS ISCRSSQSIV

51 HSNGNTYLEW FQQRPGQSPR RLIYKVSNRF SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI

101 SRVEAEDVGV YYCFQGSHIP YTFGGGTKVE IK(SEQ ID NO：149)

实施例7：MJ 2-7抗体的示例性第二种人源化变体的核苷酸和氨基酸序列

以下重链可变区基于移植到DP-54的CDR VH-3，3-07。(带有编码任选的前导序列的序列的)hMJ 2-7形式2(V2)重链可变区(hMJ 2-7 VHV2)的核苷酸序列如下：

1 ATGGAGCTGG GCCTGTCTTG GGTGTTCCTG GTGGCTATCC TGGAGGGCGT

51 GCAGTGCGAG GTGCAGCTGG TGGAGTCTGG CGGCGGACTG GTGCAGCCTG

101 GCGGCTCTCT GCGGCTGTCT TGCGCCGCTT CCGGCTTCAA CATCAAGGAC

151 ACCTACATCC ACTGGGTGCG GCAGGCTCCC GGCAAGGGCC TGGAGTGGGT

201 GGCCCGGATC GATCCTGCCA ACGACAACAT CAAGTACGAC CCCAAGTTCC

251 AGGGCCGGTT CACCATCTCT CGCGACAACG CCAAGAACTC CCTGTACCTC

301 CAGATGAACT CTCTGCGCGC CGAGGATACC GCCGTGTACT ACTGCGCCCG

351 GAGCGAGGAG AACTGGTACG ACTTCTTCGA CTACTGGGGC CAGGGCACCC

401 TGGTGACCGT GTCCTCT(SEQ ID NO：150)

带有任选的前导序列(第一个下划线区，基于AbM定义的CDR显示在其后的下划线区)的hMJ 2-7 V2重链可变区(hMJ 2-7 VH V2)的氨基酸序列如下：

1 MELGLSWVFL VAILEGVQC-E VQLVESGGGL VQPGGSLRLS CAASGFNIKD

51 TYIHWVRQAP GKGLEWVARI DPANDNIKYD PKFQGRFTIS RDNAKNSLYL

101 QMNSLRAEDT AVYYCARSEE NWYDFFDYWG QGTLVTVSS(SEQ ID NO：151)

hMJ 2-7 V2轻链可变区基于移植到DPK9的CDR VκI，02。hMJ 2-7V2轻链可变区(hMJ 2-7 VL V2)(带有编码任选的前导序列的序列的)的核苷酸序列如下：

1 ATGGATATGC GCGTGCCCGC TCAGCTGCTG GGCCTGCTGC TGCTGTGGCT

51 GCGCGGAGCC CGCTGCGATA TCCAGATGAC CCAGTCCCCT TCTTCTCTGT

101 CCGCCTCTGT GGGCGATCGC GTGACCATCA CCTGTCGGTC CTCCCAGTCC

151 ATCGTGCACT CCAACGGCAA CACCTACCTG GAGTGGTATC AGCAGAAGCC

201 CGGCAAGGCC CCTAAGCTGC TGATCTACAA GGTGTCCAAC CGCTTTTCCG

251 GCGTGCCTTC TCGGTTCTCC GGCTCCGGCT CCGGCACCGA TTTCACCCTG

301 ACCATCTCCT CCCTCCAGCC CGAGGATTTC GCCACCTACT ACTGCTTCCA

351 GGGCTCCCAC ATCCCTTACA CCTTTGGCGG CGGAACCAAG GTGGAGATCA

401 AGCGT(SEQ ID NO：152)

hMJ 2-7 V2轻链可变区(hMJ 2-7 VL V2)(任选的前导肽带有下划线；基于AbM定义的CDR显示在其后的下划线区)的氨基酸序列如下：

1 MDMRVPAQLL GLLLLWLRGA RC-DIQMTQSP SSLSASVGDR VTITCRSSQS

51 IVHSNGNTYL EWYQQKPGKA PKLLIYKVSN RFSGVPSRFS GSGSGTDFTL

101 TISSLQPEDF ATYYCFQGSH IPYTFGGGTK VEIKR(SEQ ID NO：153)

还产生了MJ 2-7 V2重链可变区的其他人源化形式。这些形式包括在选定的构架位置具有小鼠氨基酸的回复突变。

编码带有回复突变V48I、A29G的重链可变区“形式2.1”或V2.1的核苷酸序列如下：

1 GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC

51 TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA

101 TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GATCGGCCGG

151 ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCCG

201 GTTCACCATC TCTCGCGACA ACGCCAAGAA CTCCCTGTAC CTCCAGATGA

251 ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG

301 GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC

351 CGTGTCCTCT (SEQ ID NO：154)

V2.1重链可变区的氨基酸序列(基于AbM定义的CDR显示在其后的下划线区)如下：

1 EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFNIK DTYIHWVRQA PGKGLEWIGR

51 IDPANDNIKY DPKFQGRFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCARSE

101 ENWYDFFDYW GQGTLVTVSS(SEQ ID NO：155)

编码带有回复突变(R67K、F68A)的重链可变区V2.2的核苷酸序列如下：

1 GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC

51 TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA

101 TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GGTGGCCCGG

151 ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCAA

201 GGCCACCATC TCTCGCGACA ACGCCAAGAA CTCCCTGTAC CTCCAGATGA

251 ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG

301 GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC

351 CGTGTCCTCT (SEQ ID NO：156)

V2.2重链可变区的氨基酸序列(基于AbM定义的CDR显示在其后的下划线区)如下：

1 EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFNIK DTYIHWVRQA PGKGLEWVAR

51 IDPANDNIKY DPKFQGKATI SRDNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCARSE

102 ENWYDFFDYW GQGTLVTVSS(SEQ ID NO：157)

编码带有回复突变(R72A)的重链可变区V2.3的核苷酸序列：

1 GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC

51 TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA

101 TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GGTGGCCCGG

151 ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCCG

201 GTTCACCATC TCTGCCGACA ACGCCAAGAA CTCCCTGTAC CTCCAGATGA

251 ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG

301 GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC

351 CGTGTCCTCT (SEQ ID NO：158)

V2.3重链可变区的氨基酸序列(基于AbM定义的CDR显示在其后的下划线区)如下：

1 EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFNIK DTYIHWVRQA PGKGLEWVAR

51 IDPANDNIKY DPKFQGRFTI SADNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCARSE

103 ENWYDFFDYW GQGTLVTVSS (SEQ ID NO：159)

编码带有回复突变(A49G)的重链可变区V2.4的核苷酸序列如下：

1 GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC

51 TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA

101 TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GGTGGGCCGG

151 ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCCG

201 GTTCACCATC TCTCGCGACA ACGCCAAGAA CTCCCTGTAC CTCCAGATGA

251 ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG

301 GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC

351 CGTGTCCTCT (SEQ ID NO：160)

V2.4 重链可变区的氨基酸序列(基于AbM定义的CDR显示在其后的下划线区)如下：

1 EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFNIK DTYIHWVRQA PGKGLEWVGR

51 IDPANDNIKY DPKFQGRFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCARSE

104 ENWYDFFDYW GQGTLVTVSS (SEQ ID NO：161)

编码带有回复突变(R67K、F68A、R72A)的V2.5重链可变区的核苷酸序列如下：

1 GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC

51 TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA

101 TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GGTGGCCCGG

151 ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCAA

201 GGCCACCATC TCTGCCGACA ACGCCAAGAA CTCCCTGTAC CTCCAGATGA

251 ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG

301 GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC

352 CGTGTCCTCT(SEQ ID NO：162)

V2.5重链可变区的氨基酸序列(基于AbM定义的CDR显示在其后的下划线区)如下：

1 EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFNIK DTYIHWVRQA PGKGLEWVAR

51 IDPANDNIKY DPKFQGKATI SADNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCARSE

105 ENWYDFFDYW GQGTLVTVSS (SEQ ID NO：163)

编码带有回复突变(V48I、A49G、R72A)的重链可变区V2.6的核苷酸序列如下：

1 GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC

51 TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA

101 TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GATCGGCCGG

151 ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCCG

201 GTTCACCATC TCTGCCGACA ACGCCAAGAA CTCCCTGTAC CTCCAGATGA

251 ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG

301 GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC

351 CGTGTCCTCT(SEQ ID NO：164)

V2.6重链可变区的氨基酸序列(基于AbM定义的CDR显示在其后的下划线区)如下：

1 EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFNIK DTYIHWVRQA PGKGLEWIGR

51 IDPANDNIKY DPKFQGRFTI SADNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCARSE

106 ENWYDFFDYW GQGTLVTVSS(SEQ ID NO：165)

编码带有回复突变(A49G、R72A)的重链可变区V2.7的核苷酸序列如下：

1 GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC

51 TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA

101 TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GGTGGGCCGG

151 ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCCG

201 GTTCACCATC TCTGCCGACA ACGCCAAGAA CTCCCTGTAC CTCCAGATGA

251 ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG

301 GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC

351 CGTGTCCTCT(SEQ ID NO：166)

V2.7重链可变区的氨基酸序列(基于AbM定义的CDR显示在其后的下划线区)如下：

1 EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFNIK DTYIHWVRQA PGKGLEWVGR

51 IDPANDNIKY DPKFQGRFTI SADNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCARSE

107 ENWYDFFDYW GQGTLVTVSS(SEQ ID NO：167)

编码带有回复突变(L79A)的重链可变区V2.8的核苷酸序列如下：

1 GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC

51 TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA

101 TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GGTGGCCCGG

151 ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCCG

201 GTTCACCATC TCTCGCGACA ACGCCAAGAA CTCCGCCTAC CTCCAGATGA

251 ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG

301 GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC

351 CGTGTCCTCT (SEQ ID NO：168)

V2.8重链可变区的氨基酸序列(基于AbM定义的CDR显示在其后的下划线区)如下：

1 EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFNIK DTYIHWVRQA PGKGLEWVAR

51 IDPANDNIKY DPKFQGRFTI SRDNAKNSAY LQMNSLRAED TAVYYCARSE

108 ENWYDFFDYW GQGTLVTVSS(SEQ ID NO：169)

编码带有回复突变(A49G、R72A、L79A)的重链可变区V2.10的核苷酸序列如下：

1 GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC

51 TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA

101 TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GGTGGGCCGG

151 ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCCG

201 GTTCACCATC TCTGCCGACA ACGCCAAGAA CTCCGCCTAC CTCCAGATGA

251 ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG

301 GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC

351 CGTGTCCTCT (SEQ ID NO：170)

V2.10重链可变区的氨基酸序列(基于AbM定义的CDR显示在其后的下划线区)如下：

1 EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFNIK DTYIHWVRQA PGKGLEWVGR

51 IDPANDNIKY DPKFQGRFTI SADNAKNSAY LQMNSLRAED TAVYYCARSE

109 ENWYDFFDYW GQGTLVTVSS (SEQ ID NO：171)

编码带有回复突变(V48I、A49G、R72A、L79A)的重链可变区V2.11的核苷酸序列如下：

1 GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC

51 TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA

101 TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GATCGGCCGG

151 ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCCG

201 GTTCACCATC TCTGCCGACA ACGCCAAGAA CTCCGCCTAC CTCCAGATGA

251 ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG

301 GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC

351 CGTGTCCTCT (SEQ ID NO：172)

V2.11重链可变区的氨基酸序列(基于AbM定义的CDR显示在其后的下划线区)如下：

1 EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFNIK DTYIHWVRQA PGKGLEWIGR

51 IDPANDNIKY DPKFQGRFTI SADNAKNSAY LQMNSLRAED TAVYYCARSE

110 ENWYDFFDYW GQGTLVTVSS (SEQ ID NO：173)

编码带有回复突变(V48I、A49G、R72A)的重链可变区V2.16的核苷酸序列如下：

1 GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC

51 TCTGCGGCTG TCTTGCACCG GCTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA

101 TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GATCGGCCGG

151 ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCCG

201 GTTCACCATC TCTGCCGACA ACGCCAAGAA CTCCCTGTAC CTCCAGATGA

251 ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG

301 GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC

351 CGTGTCCTCT (SEQ ID NO：174)

V2.16重链可变区的氨基酸序列(基于AbM定义的CDR显示在其后的下划线区)如下：

1 EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCTGSGFNIK DTYIHWVRQA PGKGLEWIGR

51 IDPANDNIKY DPKFQGRFTI SADNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCARSE

111 ENWYDFFDYW GQGTLVTVSS(SEQ ID NO：175)

以下是带有突变的CH2结构域的人源化MH 2-7 V2.11 IgG1的氨基酸序列：

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWIGRIDPA

NDNIKYDPKFQGRFTISADNAKNSAYLQMNSLRAEDTAVYYCARSEENWYDFF

DYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW

NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDK

KVEPKSCDKTHTCPPCPAPEALGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHE

DPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKC

KVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDI

AVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHE

ALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：176) 。

可变区在氨基酸1-120，CH1在121-218，铰链在219-233，CH2在234-343，CH3在344-450。轻链包括带有1-133的可变区的以下序列。

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQSIVHSNGNTYLEWYQQKPGKAPKLLIYK

VSNRFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCFQGSHIPYTFGGGTKVEIK

RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQE

SVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

(SEQ ID NO：177)

实施例8：MJ2-7示例变体的功能性测定

在IL-13活性测定中评估了MJ2-7抗体和人源化变体抑制人IL-13的能力。

STAT6 磷酸化测定

在含有10％FBS、青霉素-链霉素、谷氨酰胺和碳酸氢钠的McCoy 5A培养基中贴壁单层培养HT-29人结肠上皮细胞(ATCC)。为进行测定，使用胰蛋白酶从瓶上移下细胞、冲洗到新鲜培养基并分配到12×75mm聚苯乙烯管中。以100-0.01ng/ml的浓度范围加入重组人IL-13(R&DSystems，Inc.)。对于测试抗体抑制IL-13应答能力的测定，与500-0.4ng/ml的抗体稀释物一起加入1ng/ml的重组人IL-13。在水浴中以37℃温育细胞30-60分钟，接着洗涤到冰冷的含有1％BSA的PBS中。通过在PBS中的1％多聚甲醛中37℃温育15分钟来固定细胞，接着洗涤到含有1％BSA的PBS中。为透化处理细胞核，在无水甲醇中以-20℃温育细胞过夜。将它们洗涤到含有1％BSA的PBS中，接着用ALEXA^TM Fluor 488标记的针对STAT6的抗体(BD Biosciences)染色。用FACSCAN^TM和CELLQUEST^TM软件(BD Biosciences)分析荧光。

人单核细胞上的CD23诱导

通过在

(Sigma)上分层从人外周血中分离单核细胞。将细胞洗涤到含有10％热灭活的FCS、50U/ml青霉素、50mg/ml链霉素、2mM L-谷氨酰胺的RPMI中，并平板接种到48孔组织培养板(Costar/Corning)中。以100-0.01ng/ml的稀释度范围加入重组人IL-13(R&D Systems，Inc.)。对于测试抗体抑制IL-13应答能力的测定，与500-0.4ng/ml的抗体稀释物一起加入1ng/ml的重组人IL-13。在5％CO₂培养箱中37℃培养细胞过夜。第二天，使用非酶细胞解离溶液(Sigma)从孔中获得细胞，接着洗涤到冰冷的含1％ BSA的PBS中。细胞与用藻红蛋白(PE)标记的针对人CD23的抗体(BD Biosciences，San Diego，CA)和Cy-Chrome标记的针对人CD11b的抗体(BD Biosciences)一起温育。基于高的正向和侧向光散射和CD11b的表达来选通(gate)单核细胞。使用FACSCAN^TM(BD Biosciences)通过流式细胞术测定单核细胞上的CD23表达，并用CELLQUEST^TM软件(BD Biosciences)分析CD23⁺细胞的百分比。

TF-1 细胞增殖

TF-1 细胞是因子依赖性人造血细胞系，其长期生长需要白介素3(IL-3)或粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)。TF-1细胞还应答多种其他细胞因子，包括白介素13(IL-13)。在含有10％热灭活FCS、50U/ml青霉素、50mg/ml链霉素、2mM L-谷氨酰胺和5ng/ml重组人GM-CSF(R&D Systems)的RPMI培养基中维持TF-1细胞(ATCC)。测定之前使细胞饥饿GM-CSF过夜。为进行测定，以5000个细胞/孔一式二份将TF-1细胞接种在96孔平底微量滴定板(Costar/Corning)中，并用100-0.01ng/ml范围的人IL-13(R&D Systems)攻击。置于含5％CO₂的37℃培养箱中72小时后，以1μCi/孔的³H-胸苷(Perkin Elmer/NewEngland Nuclear)脉冲细胞。再温育4.5小时，接着使用TOMTEK^TM收获器将细胞收获在滤纸垫上。通过液体闪烁计数评估³H-胸苷的掺入。

生腱蛋白产生测定

在含有补充物的BEGM培养基(Clonetics)中维持BEAS-2B人支气管上皮细胞(ATCC)。将细胞以每孔20000个接种在96孔平底培养板中过夜。在存在或不存在指示抗体的情况下加入含有IL-13的新鲜培养基。过夜温育后收获上清并通过ELISA测定细胞外基质组分生腱蛋白C的存在。用PBS中1μg/ml针对人生腱蛋白的小鼠单克隆抗体(IgG1，k；Chemicon International)包被ELISA平板。用含有0.05％

-20的PBS(PBS-Tween)洗涤平板，并用含有1％BSA的PBS封闭。每6分钟加入新的封闭液，共更换三次。用PBS-Tween洗涤平板三次。加入细胞上清或者人生腱蛋白标准品(Chemicon International)并在37℃温育60分钟。用PBS-Tween洗涤平板三次。用针对生腱蛋白的小鼠单克隆抗体(IgG2a，k；Biohit)检测生腱蛋白。用HRP标记的针对小鼠IgG2a的抗体和其后的TMB底物检测结合。用0.01N硫酸终止反应。在450nm处读取吸光度。

HT 29人上皮细胞系可用于测定STAT6磷酸化。将HT 29细胞在提高浓度的测试抗体存在下与1ng/ml天然人IL-13粗制备物一起在37℃温育30分钟。使用针对磷酸化STAT6的抗体对细胞裂解物的蛋白质印迹分析可用于检测剂量依赖性的IL-13介导的STAT6磷酸化。类似地，流式细胞术分析可以检测HT 29细胞中磷酸化的STAT6，所述HT 29细胞用饱和浓度的IL-13在37℃处理30分钟、固定、透化处理并用ALEXA^TM Fluor488标记的针对磷酸-STAT6的mAb染色。表1中公开了一组示例性结果。V2.11的抑制活性与sIL-13Ra2-Fc的抑制活性相当。

表1

实施例9：IL-13与IL-13Rα1之间的结合相互作用位点

通过x射线晶体学研究了IL-13、IL-13Rα1胞外结构域(SEQ IDNO：125的残基27-342)和结合人IL-13的抗体的复合体。参阅例如16163-029001。在IL-13和IL-13Rα1之间发现了两个显著相互作用点。IL-13Rα1的Ig结构域1与IL-13之间的相互作用导致形成跨越两个分子的延伸的β折叠。IL-13(SEQ ID NO：124、成熟序列[全长序列(SEQ IDNO：178)])的残基Thr88[Thr107]、Lys89[Lys108]、Ile90[Ile109]和Glu91[Glu110]形成与受体(SEQ ID NO：125)的残基Lys76、Lys77、Ile78和Ala79相互作用的β链。此外，IL-13(SEQ ID NO：124[SEQ ID NO：178])的Met33[Met52]的侧链延伸到由这些相邻链的侧链形成的疏水口袋中。

与Ig结构域3的相互作用的主要特征是IL-13(SEQ ID NO：124[SEQID NO：178])的疏水残基(Phe107[Phe 126])插入受体IL-13Rα1Ig结构域3中的疏水口袋中。IL-13Rα1的疏水口袋由残基Leu319、Cys257、Arg256和Cys 320(SEQ ID NO：125)的侧链形成。与IL-13(SEQ ID NO：124[SEQID NO：178])的Phe 107[Phe 126]的相互作用导致IL-13Rα1(SEQ IDNO：125)的氨基酸残基Ile254、Ser255、Arg256、Lys318、Cys320和Tyr321与IL-13(SEQ ID NO：124[SEQ ID NO：178])的氨基酸残基Arg11[Arg30]、Glu12[Glu31]、Leu13[Leu32]、Ile14[Ile33]、Glu15[Ile34]、Lys104[Lys123]、Lys105[Lys124]、Leu106[Leu125]、Phe107[Phe126]和Arg108[Arg 127]之间广泛的范德华相互作用。这些结果证明与涉及IL-13Rα1相互作用的IL-13区域结合的IL-13结合剂可用于抑制IL-13信号转导。

实施例10：人源化MJ 2-7抗体在COS细胞中的表达

为评估嵌合抗NHP IL13抗体在哺乳动物重组系统中的表达，将小鼠MJ 2-7抗体可变区亚克隆进含有人κ和IgG1mut恒定区的pED6表达载体中。在含有10％热灭活胎牛血清、1mM谷氨酰胺和0.1mg/ml青霉素/链霉素的DME培养基(Gibco)中培养猴肾COS-1细胞。使用TRANSITIT^TM-LT1转染试剂(Mirus)按照试剂供应商建议的方案进行COS细胞的转染。在10％CO₂的存在下37℃下温育转染的COS细胞24小时、用无菌PBS洗涤并接着在无血清培养基R1CD1(Gibco)中培养48小时，以允许抗体分泌并在条件培养基中累积。使用纯化的人IgG1/κ抗体作为标准品通过总人IgG ELISA定量chMJ 2-7抗体的表达。

嵌合MJ 2-7抗体在COS细胞中的产生显著低于对照嵌合抗体(表2)。因此在MJ 2-7人源化过程中包括了Ab表达的优化。通过将小鼠MJ 2-7重链CDR移植到最同源的人种系克隆DP 25上来构建人源化MJ 2-7 V1，所述DP 25良好表达并代表了典型的人抗体应答。将轻链CDR亚克隆到人种系克隆DPK 18上，以产生huMJ 2-7V1 VL。通过将CDR移植产生人源化MJ 2-7 V2：将MJ 2-7重链可变区CDR移植到DP 54人种系基因构架上，将MJ 2-7轻链可变区CDR移植到DPK9人种系基因构架上。DP54克隆属于人VH III种系亚组，DPK9来自人种系基因VκI亚组。包含VH III和VκI构架的抗体分子在大肠杆菌系统中具有高表达水平，并在水溶液中具有高稳定性和溶解度(参阅如Stefan Ewert等，J.Mol.Biol.(2003)，325；531-553、Adrian Auf等，Methods(2004)34：215-224)。我们已在若干重组抗体的产生中使用了DP54/DPK9人构架的组合，并在瞬时COS转染实验中实现了抗体的高表达(＞20μg/ml)。

表2

MAb	表达，μg/ml
		3D6	10.166
Ch MJ 2-7pED6(1)	2.44
		Ch MJ 2-7pED6(2)	2.035
h12A11 V2	1.639

将移植了CDR的MJ 2-7 V1和V2 VH和VL基因亚克隆进两个哺乳动物表达载体系统(pED6κ/pED6 IgG1 mut和pSMEN2κ/pSMED2IgG1mut)，并如上文所述在瞬时COS转染实验中评估人源化MJ 2-7抗体的产生。在第一组实验中评估了的huMJ 2-7VL和VH的多种组合对抗体表达的影响(表3)。将MJ 2-7 VL构架区改变为DKP9提高抗体产生8-10倍，而VL V1(CDR移植到DPK 18上)在抗体产生中仅显示中等程度的提高。在将人源化VL与嵌合MJ 2-7VH和人源化MJ2-7V1和V2组合时观察到了这种效果。在相同的测定条件下，移植了CDR的MJ 2-7 V2的表达水平比移植了CDR的MJ 2-7 V1高3倍。

表3

mAb	表达，μg/ml
		ChMJ 2-7	1.83
hVH V1/mVL	3.04
		hVH V1/h VL V1	6.34
hVH V1/h VL V2	15.4
		hVH-V2/mVL	0.2
mVH/hVL-V2	18.41
		hVH-V2/hVL-V1	5.13
hVH-V2/hVL-V2	10.79

用重链可变区中含有回复突变的hu MJ 2-7 V2进行了类似的实验(表4)。对保留小鼠MJ 2-7抗体的抗原结合和中和特性的hu MJ 2-7 V2.11检测到了最高表达水平。在位置48和49(V48I和A49G)引入回复突变提高了hu MJ 2-7 V2抗体在COS细胞中的产生，而位置23、24、67和68处氨基酸的回复突变(A23T、A24G、R67K和F68A)对抗体表达具有负面影响。

表4

实施例11：人源化MJ2-7 v.2 VH的分子建模

基于对蛋白质数据库(PDB)的BLAST同源性搜索选择用于制作人源化MJ2-7重链形式2(MJ2-7 V.2 VH)的结构模板的模型。除了从BLAST搜索结果中选择的两个结构以外，从蛋白质结构的内部数据库中选择了另一个模板。使用三个模板结构1JPS(人组织因子与人源化Fab D3h44的复合体的共结晶结构)、1N8Z(人Her2与Herceptin Fab的复合体的共结晶结构)和F13.2(IL-13与小鼠抗体Fab片段的复合体)作为模板并用InsightII(Accelrys，San Diego)同源性模块建立MJ2-7 V.2 VH的模型。基于每个分子的Cα距离矩阵测定1JPS、1N8Z和F13.2(可得自16163-029001)的结构保守区(SCR)，并基于SCR中相应原子的最小RMS偏差叠加模板结构。将靶蛋白MJ2-7 V.2 VH的序列与叠加的模板蛋白序列进行比对，并给靶蛋白的相应残基分配SCR的坐标。基于每个SCR中靶标和模板之间序列相似性的程度在不同的SCR中使用来自不同模板的坐标。通过同源性模块中应用的Search Loop或Generate Loop方法产生不包括在SCR中的环和可变区的坐标。简言之，Search Loop方法通过用预计算的矩阵比较SCR侧翼残基的Cα距离矩阵来扫描两个SCR之间正确匹配的蛋白质结构，所述预计算的矩阵来自具有相同数目的侧翼残基和给定长度的间插肽区段的蛋白质结构。在Search Loop未产生所需结果的情况下使用从头产生原子坐标的Generate Loop方法。如果模板和靶标中的氨基酸残基相同，则氨基酸侧链的构象保持与模板的构象相同。然而进行了对旋转异构体的构象搜索，对模板和靶标中不同的残基保持其能量上最有利的构象。其后是Splice Repair，它建立分子力学模拟以推导出两个SCR之间或SCR与可变区之间结合处正确的键长和键角。最后使用最速下降(Deepest Descents)算法使模型能量最小化直至得到5kcal/(mol

)的最大导数或500个循环，或使用共轭梯度(Conjugate Gradients)算法直至得到5kcal/(mol)的最大导数或2000个循环。使用ProStat/Struct_Check命令评估模型的质量。

按照所述用于人源化MJ2-7 V.2 VH的方案建立小鼠MJ2-7VH的分子模型，只是其中使用的模板为马抗细胞色素c抗体FabE8的晶体结构1QBL和1QBM。

通过模型预测CDR构架H键中的可能差异：

hMJ2-7v.2VH:G26-hMJ2-7v.2VH:A24

hMJ2-7v.2VH:Y109-hMJ2-7v.2VH:S25

mMJ2-7VH:D61-mMJ2-7VH:I48

mMJ2-7VH:K63-mMJ2-7VH:E46

mMJ2-7VH:Y109-mMJ2-7VH:R98

这些差异提示以下的任选回复突变：A23T、A24G和V48I。

基于各氨基酸的显著RMS偏差和其毗邻氨基酸残基的差异提示其他任选回复突变为：G9A、L115T和R87T。

实施例12：MJ2-7和C65的IL-13中和活性

在一系列生物测定中测试了MJ2-7和C65的IL-13中和能力。首先在单核细胞CD23表达测定中测试了这些抗体中和NHP IL-13的生物活性的能力。在渐增浓度的MJ2-7、C65或sIL-13Rα2-Fc存在下将新分离的人PBMC与3ng/ml NHP IL-13温育过夜。收获细胞，用CYCHROME^TM标记的针对单核细胞特异性标记CD11b的抗体和PE标记的针对CD23的抗体染色。在对IL-13处理的应答中，CD23在单核细胞表面上的表达被增量调节，基于CD11b的表达对单核细胞进行选通。在此测定中MJ2-7、C65和sIL13Rα2-Fc都能中和NHP IL-13的活性。MJ2-7与sIL-13Rα2-Fc的效力相当。C65的活性约为1/20(图2)。

在第二个生物测定中，在STAT6磷酸化测定中测试MJ2-7和C65对天然人IL-13的中和能力。在渐增浓度的MJ2-7、C65或sIL-13Rα2-Fc存在下将HT-29上皮细胞系与0.3ng/ml天然人IL-13在37℃温育30分钟。固定细胞、透化处理并用ALEXA^TM Fluor 488标记的针对磷酸化STAT6的抗体染色。IL-13处理刺激STAT6磷酸化。在此测定中MJ2-7、C65和sIL13Ra2-Fc都能中和天然人IL-13的活性(图3)。小鼠MJ2-7抗体和人源化形式(V2.11)的IC50分别为0.48nM和0.52nM。MJ2-7和sIL-13Rα2-Fc的效力大致相等。sIL-13Ra2-Fc的IC50为0.33nM(图4)。C65的活性约为1/20(图5)。

在第三个生物测定中，在生腱蛋白产生测定中测试了MJ2-7中和天然人IL-13的能力。在渐增浓度的MJ2-7存在下将人BEAS-2B肺上皮细胞系与3ng/ml天然人IL-13温育过夜。收获上清并通过ELISA测试细胞外基质蛋白生腱蛋白C的产生(图6A)。MJ2-7以约0.1nM的IC50抑制此应答(图6B)。

这些结果证明MJ2-7是NHP IL-13和天然人IL-13的有效中和剂。MJ2-7的IL-13中和能力与sIL-13Rα2-Fc的IL-13中和能力相等。MJ1-65也具有IL-13中和活性，但效力为MJ2-7的约1/20。

实施例13：通过SPR对MJ2-7抗体进行表位作图

通过标准胺偶联将sIL-13Rα2-Fc直接包被到CM5芯片上。注射100nM浓度的NHP-IL-13，通过BIACORE^TM检测其与固定化IL-13Rα2-Fc的结合。再注射100nM的抗IL-13抗体并监测结合的变化。当NHP-IL-3与hu IL-13Rα2形成复合体时，MJ2-7抗体不与NHP-IL-3结合，而与阳性对照抗IL-13抗体则结合(图7)。这些结果说明hu IL-13Rα2和MJ2-7结合NHP IL-13上相同或重叠的表位。

实施例14：NHP-IL-13与人源化MJ2-7 V2-11抗体之间相互作用的动力学速率常数的测量

为制备生物传感器表面，使用胺偶联将山羊抗人IgG Fc特异性抗体固定在研究级羧甲基葡聚糖芯片(CM5)上。用0.1M 1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)和0.05M N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)的混合物活化表面。以乙酸钠缓冲液(pH 5.5)中10μg/ml的浓度注射捕获抗体。用1.0M乙醇胺(pH 8.0)封闭剩余的活化基团。作为对照，用第一个流动室作为参照表面以校正总体折射率(bulk refractive index)、基质效应和非特异性结合，用捕获分子包被第2、3和4个流动室。

为进行动力学分析，通过注射40μl的1μg/ml溶液将单克隆抗体hMJ2-7 V2-11捕获至抗IgG抗体表面。注射完成30秒后的点与基线之间的净差值代表结合的靶标的量。一式三份以每分钟100μl的流速注射600、200、66.6、22.2、7.4、2.5、0.8、0.27、0.09和0nM浓度的NHP-IL-13溶液2分钟，将结合的物质的量作为时间的函数记录(图8)。以相同的流速在HBS/EP缓冲液(10mM HEPES，pH 7.4，含有150mM NaCl、3mM EDTA和0.005％(体积/体积)表面活性剂P20)中监测解离相5分钟，接着注射5μl甘氨酸(pH 1.5)两次以产生具有完全活性的捕获表面。所有动力学实验都在HBS/EP缓冲液中在22.5℃下进行。对于使用双参照的每个传感图(sensorgram)，减去空白和缓冲液效应。

使用应用于1∶1模型的BIAEVALUATION^TM软件3.0.2分析动力学数据。使用全局分析从传感图的适当区域计算表观解离(kd)和结合(ka)速率常数。通过下式从动力学速率常数计算抗体与NHP IL-13之间相互作用的亲和力常数：Kd＝kd/ka。这些结果说明huMJ2-7 V2-11具有分别为2.05x10⁷M^-1s^-1和8.89x10^-41/s的结合和解离速率，使抗体对NHP-IL-13具有43pM的亲和力。

实施例15：MJ2-7人源化中间体在生物测定中的抑制活性

通过STAT6磷酸化和生腱蛋白产生生物测定测试了人源化过程中多种中间体的抑制活性。用次最高水平的NHP IL-13或天然人IL-13粗制备物引发生物应答，测定应答的半最大抑制所需的MJ2-7人源化形式的浓度。对与人IgG1和κ恒定区一起表达的hMJ2-7V1、hMJ2-7V2、hMJ2-7V3的分析显示形式2保留了针对天然人IL-13的中和活性。天然人IL-13生物活性的半最大抑制所需的形式2人源化抗体的浓度比小鼠MJ2-7高约110倍(图9)。对半人源化形式(其中将V1或V2VL与小鼠MJ2-7VH组合)的分析证明天然人IL-13中和活性的降低不是由于人源化的VL，而是由于VH序列(图10)。而具有VL V1的半人源化MJ2-7抗体仅部分保留了中和活性，具有人源化VL V2的形式与亲本小鼠抗体活性相同。因此，在V1 VH序列中引入了一系列的回复突变以提高小鼠MJ2-7的天然人IL-13中和活性。

实施例16：MJ2-7阻断IL-13与IL-13Rα1和IL-13Rα2的相互作用

MJ2-7对NHP IL-13的C端19-单体单元(mer)具有特异性，该19-单体单元对应于未成熟蛋白(SEQ ID NO：24)的氨基酸残基114-132和成熟蛋白(SEQ ID NO：14)的残基95-113。就人IL-13而言，已经报道形成蛋白质Dα螺旋的部分的这一区域含有对与IL-13Rα1和IL-13Rα2的结合重要的残基。对人IL-13突变体的分析鉴定了A、C和D螺旋含有IL-13Rα1/IL-4Rα信号复合体的重要接触位点(Thompson和Debinski(1999)J.Biol.Chem.274：29944-50)。D螺旋的丙氨酸扫描诱变鉴定了残基K123、K124和R127(SEQ ID NO：24)负责与IL-13Rα2的相互作用，残基E110、E128和L122是IL-13Rα1的重要接触点(Madhankmuar等(2002)J.Biol.Chem.277：43194-205)。通过NMR测定的人IL-13的高分辨率溶液结构已经基于与已知结构的相关配体-受体对的相似性预测了IL-13的结合相互作用。这些NMR研究支持IL-13A和D螺旋在与IL-13Rα1的重要接触中发挥关键作用(Eisenmesser等(2001)J.Mol.Biol.310：231-241；Moy等(2001)J.Mol.Biol.310：219-230)。预期MJ2-7与位于IL-13 C端D螺旋的这一表位结合将破坏IL-13与IL-13Rα1和IL-13Rα2的相互作用。

通过ELISA测试MJ2-7抑制NHP IL-13与IL-13Rα1和IL-13Rα2的结合的能力。将重组可溶形式的人IL-13Rα1-Fc和IL-13Rα2-Fc包被在ELISA平板上。在渐增浓度的MJ2-7的存在下加入FLAG标记的NHPIL-13。结果显示MJ-27与两种可溶性受体形式都竞争结合NHP IL-13(图11A和11B)。这提供了MJ2-7中和IL-13生物活性的基础。

实施例17：MJ 2-7轻链CDR促成抗原结合

为评估MJ 2-7抗体与NHP IL-13的结合是否需要全部三个轻链CDR区，通过CDR移植构建了MJ 2-7 VL的另外两个人源化形式。基于人种系克隆DPK18设计VL形式3，其含有人种系克隆的CDR1和CDR2和来自小鼠MJ 2-7抗体的CDR3(图12)。在第二个构建体(hMJ 2-7 V4)中仅将MJ 2-7抗体的CDR1和CDR2移植到DPK18构架上，CDR3来自无关的小鼠单克隆抗体。

通过将hMJ 2-7 VH V1与hMJ 2-7 VL V3和V4组合，在COS细胞中产生人源化MJ 2-7 V3和V4。通过直接NHP IL-13结合ELISA，检查抗体的抗原结合特性。缺少MJ 2-7轻链CDR3的hMJ 2-7 V4保留了与NHP IL-13结合的能力，而轻链中含有人种系CDR1和CDR2的V3不与固定化的NHP IL-13结合。这些结果证明MJ 2-7抗体轻链的CDR1和CDR2最有可能负责此抗体的抗原结合特性。

hMJ 2-7VL V3的核苷酸序列

1 ATGCGGCTGC CCGCTCAGCT GCTGGGCCTG CTGATGCTGT GGGTGCCCGG

51 CTCTTCCGGC GACGTGGTGA TGACCCAGTC CCCTCTGTCT CTGCCCGTGA

101 CCCTGGGCCA GCCCGCTTCT ATCTCTTGCC GGTCCTCCCA GTCCCTGGTG

151 TACTCCGACG GCAACACCTA CCTGAACTGG TTCCAGCAGA GACCCGGCCA

201 GTCTCCTCGG CGGCTGATCT ACAAGGTGTC CAACCGCTTT TCCGGCGTGC

251 CCGATCGGTT CTCCGGCTCC GGCAGCGGCA CCGATTTCAC CCTGAAGATC

301 AGCCGCGTGG AGGCCGAGGA TGTGGGCGTG TACTACTGCT TCCAGGGCTC

351 CCACATCCCT TACACCTTTG GCGGCGGAAC CAAGGTGGAG ATCAAG

(SEQ ID NO：189)

hMJ 2-7 VL V3的氨基酸序列

MRLPAQLLGLLMLWVPGSSG-DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLVYSDGNTYLNW

FQQRPGQSPRRLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHIP

YTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO：190)

hMJ 2-7 VL V4的核苷酸序列

GATGTTGTGATGACCCAATCTCCACTCTCCCTGCCTGTCACTCCTGGAGAGCCAGCCTCC

ATCTCTTGCAGATCTAGTCAGAGCATTGTGCATAGTAATGGAAACACCTACCTGGAATGG

TACCTGCAGAAACCAGGCCAGTCTCCACAGCTCCTGATCTACAAAGTTTCCAACCGATTT

TCTGGGGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTCAAGATC

AGCAGAGTGGAGGCTGAGGATGTGGGAGTTTATTACTGCTTTCAAAGTTCACATGTTCCT

CTCACCTTCGGTCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAA(SEQ ID NO：191)

hMJ 2-7 VL V4的氨基酸序列

DVVMTQSPLS LPVTPGEPAS ISCRSSQSIV HSNGNTYLEW YLQKPGQSPQ LLIYKVSNRF

SGVPDRFSGS GSGTDFTLKISRVEAEDVGV YYCFQSSHVP LTFGQGTKLE IK(SEQ ID NO：192)。

实施例18：抗-IL13抗体在猕猴模型中的中和活性

可以使用对猪蛔虫天然具有变应性的猕猴中抗原诱导的呼吸道炎症模型测试IL-13结合剂(例如，抗-IL13抗体)在体内中和一种或多种IL-13的相关活性。这些测定可用于确认结合剂有效降低经变应原攻击的变应性动物中呼吸道嗜酸性粒细胞增多。在此模型中，用猪蛔虫抗原对变应性猴的攻击导致下列的一种或多种结果：(i)炎症细胞的流入，例如嗜酸性粒细胞进入呼吸道；(ii)增加的嗜酸细胞活化趋化因子水平；(iii)蛔虫特异性的嗜碱性粒细胞组胺释放增加；和/或(iv)蛔虫特异性IgE滴度增加。

为测试抗IL-13抗体阻止炎症细胞流入的能力，可在用猪蛔虫抗原攻击之前的24小时施用抗体。在攻击的当天，可以从左肺获得基线支气管肺泡灌洗(BAL)样品。可将猪蛔虫抗原气管内滴注至右肺。24小时后灌洗右肺，并将来自经抗体静脉内处理的动物的BAL液与来自未处理动物的BAL液进行比较。如果抗体减少了呼吸道炎症，则可在未处理的组观察到BAL嗜酸性粒细胞百分比的增加，而在抗体处理过的组观察不到。

图14A-14D描述了在用蛔虫攻击呼吸道的24小时后细胞整体数量和炎症细胞例如嗜酸性粒细胞(图14B)、中性粒细胞(图14C)和巨噬细胞(图14D)百分比的增加。在攻击后24小时观察到与基线值相比，炎症细胞的百分比在统计学上显著增加。

在用猪蛔虫抗原攻击之前的24小时对猕猴施用抗IL-13抗体(人源化MJ2-7v.2-11和人源化mAb13.2v.2)。(mAb 13.2及其人源化形式hmAb13.2v2在共同拥有的PCT申请WO 05/123126中有所描述，将其内容全文并入本文作为参考)。用盐水处理对照猴。静脉内施用10mg/kg的hMJ2-7v2-11、hmAb13.2v2或不相关的人Ig(IVIG)。接下来的一天，从猴的左肺中收集来自对照或处理猴(在图15A中称作“对照前”和“抗体前”)的预攻击BAL样品。用0.75微克的猪蛔虫抗原气管内进入右肺处理猴。在攻击后的24小时，从对照和处理猴的右肺中收集BAL样品，并测定细胞内浸润(在图15B中分别称为“对照后”和“抗体后”)。收集自抗体处理猴的BAL样品与对照动物相比显示出细胞浸润总数的统计学显著降低(图15A)。在图15A中对照样品用圆圈来代表，hmAb13.2v2-和hMJ2-7v2-11-处理的样品分别用黑三角和实心三角来显示。hMJ2-7v2-11和hmAb13.2v2在此模型中显示出相似的效力。图15B显示了表示hMJ2-7v2-11或hmAb13.2v2的浓度相对于蛔虫灌注后天数的线状图。对于两种抗体均检测到相当的降低的动力学。

蛔虫攻击的24小时后嗜酸细胞活化趋化因子的水平显著增加(图16A)。与用盐水处理的对照相比，hMJ2-7v2-11和hmAb13.2v2均降低了来自用猪蛔虫抗原攻击24小时后的猕猴BAL液中检测到的嗜酸细胞活化趋化因子的水平。

经猪蛔虫敏化的猕猴产生了针对猪蛔虫抗原的IgE。IgE结合至循环的嗜碱性粒细胞的FcεRI上，从而用蛔虫抗原对外周血嗜碱性粒细胞的体外攻击诱导了脱粒和组胺的释放。重复的抗原暴露促使嗜碱性粒细胞敏化，导致组胺释放应答增强。为检测hMJ2-7v2-11和hmAb13.2v2对IgE和嗜碱性粒细胞水平的影响，在蛔虫攻击后8周将如上所述经施用人源化hMJ2-7v.2、hmAb13.2v2、非相关的Ig(IVIG)或盐水的猕猴放血，并通过ELISA测定血浆中全部的和蛔虫特异性的IgE的水平。图17显示了吸光度的变化相对于样品稀释度的线状图，所述样品在经攻击之前和攻击之后的8周获得自用IVIG或hMJ2-7v2-11处理的动物。空心圈代表放血前测量值；实心圈代表处理后的测量值。在所测定的所有稀释度中，经hMJ2-7v2-11处理后的攻击后样品相对于攻击前的值均检测到吸光度的显著降低。图17A描述了代表性实例，其显示在用非相关Ig处理的各只猴中蛔虫特异性IgE滴度无改变(IVIG；动物20-45，上排)，而在用hMJ2-7v2-11处理的各只猴中蛔虫特异性IgE的滴度降低(动物120-434，下排)。

用人源化hMJ2-7v.2-11或hmAb13.2v2处理的动物显示了猕猴血清中蛔虫特异的循环IgE水平的显著降低(图17B)。任何处理组中的总IgE滴度无显著改变。图17A显示了吸光度相对于样品稀释度变化的线状图，所述样品在经攻击之前和攻击之后的8周获得自用IVIG或hMJ2-7v2-11处理的动物。空心圈代表放血前测量值；实心圈代表处理后的测量值。在所测定的所有稀释度中，经hMJ2-7v2-11处理后的攻击后样品相对于攻击前的值均检测到吸光度的显著降低。标记“20-45”和“120-434”指的是猕猴识别号码。

为评估抗-IL13抗体对嗜碱性粒细胞组胺释放的影响，在蛔虫攻击24小时和8周后将动物放血。在37℃用蛔虫抗原攻击全血30分钟，并通过ELISA(Beckman Coulter，Fullerton，CA)定量释放进入上清的组胺。如图18A-18B所示，对照动物证实了蛔虫诱导的嗜碱性粒细胞组胺释放水平的增加，特别是在抗原攻击后8周(图18A中用菱形、且图18B中用左侧条形柱来代表)。相反，用人源化hMJ2-7v.2-11或hmAb13.2v2处理的动物在攻击后的8周并未显示出响应于蛔虫的嗜碱性粒细胞敏化的此类增加(图18A-18B)。攻击后8周与攻击前或攻击后24小时相比，用人源化hMJ2-7v.2-11或hmAb13.2v2处理的个体动物的大多数显示出嗜碱性粒细胞组胺释放的降低(图18A中的实例)或无变化。因而，人源化抗-IL13抗体的单独施用在此模型中对调整组胺释放具有持续影响。

图19描述了蛔虫特异性组胺释放与蛔虫特异性IgE水平之间的相关性。相对于抗IL13抗体或地塞米松(dex)处理的样品(暗红圈)，在对照样品(盐水、或IVIG处理的样品)(淡蓝圈)中检测出较高的值。在蛔虫攻击前24小时静脉内施用人源化抗IL13抗体(人源化mAb13.2v.2)、或者每次以1mg/kg的浓度在蛔虫攻击前24小时和30分钟两次肌内注射施用地塞米松。攻击后的24小时，从右肺收集BAL灌洗物并测定组胺释放和IgE水平。

此处显示的结果证实用MJ2-7或mAb13.2预处理猕猴以相当的水平降低了由猪蛔虫抗原引起的呼吸道炎症，所述相当的水平如在体外通过响应于蛔虫攻击的BAL样品中细胞因子水平、蛔虫特异性IgE的血清水平和嗜碱性粒细胞组胺释放所检测的。

图20是一组描述经人源化MJ2-7(hMJ2-7v2-11)处理的个体猕猴中血清IL-13水平增加的条形图。每个图中的标记(例如12-452)与猴识别号码相对应。在施用抗体之前收集“pre”样品。时间“0”是收集于抗体施用24小时后但是蛔虫攻击之前。剩余的时间点是在蛔虫攻击后。用于检测IL-13水平的测定能够检测hMJ2-7v2-11或hmAb13.2v2抗体存在下的IL-13。更明确地，在4℃下用PBS中的0.5μg/ml mAb13.2过夜包被ELISA平板(MaxiSorp；Nunc，Rochester，NY)。在含有0.05％ Tween-20的PBS(PBS-Tween)中洗涤平板。加入NHP IL-13标准品或来自猕猴的血清稀释物，并在室温孵育2小时。洗涤平板，并在PBS-Tween中加入0.3μg/ml生物素化的MJ1-64(本文称作C65抗体)。室温孵育板2小时、洗涤、并利用HRP-链霉抗生物素蛋白(Southern Biotechnology Associates)和Sure Blue底物(Kirkegaard和Perry Labs)进行结合检测。对于存在mAb13.2的IL-13的检测，除了ELISA平板是用0.5μg/ml MJ2-7包被之外，遵循相同的方案。

图21显示了数据，该数据证明来自经抗IL13抗体处理的猕猴的血清在所测试的非人灵长类动物IL-13的浓度下具有残留的IL-13中和能力。图21是描述非人灵长类动物IL-13在0、1或10ng/ml时的STAT6磷酸化活性的条形图，在血清不存在下(“无血清”)、来自盐水或IVIG处理的动物的血清存在下(“对照”)；或来自抗-IL13抗体处理的动物血清存在下，在抗体施用前(“前”)、或指定抗体施用后1-2周。以1∶4的稀释度测试血清。在此研究中使用MJ2-7的人源化形式(MJ2-7v.2-11)。本文公开了检测STAT6磷酸化的测定。

图22是线状图，该图显示在1周的时间点猕猴血清中由人源化MJ2-7(hMJ2-7v2-11)捕获的非人灵长类动物IL-13水平与蛔虫攻击后BAL液中所测定的炎症水平相关。此相关性支持了血清IL-13(非结合的或结合至抗IL-13抗体的)的检测作为用于检测具有炎症的受试者的生物标记。具有更严重炎症的受试者显示出更高水平的血清IL-13。尽管非结合的IL-13水平通常很难定量，本文上面所公开的图20中的测定提供了检测结合至抗IL-13抗体的可靠测定。

实施例19：人源化抗IL-13抗体对通过向小鼠施用人IL-13所引起的呼吸道炎症、肺阻力和动态肺顺应性的效果

已证实哮喘的鼠模型是理解IL-13在此疾病中作用的宝贵工具。使用该模型在体内评价抗体系列(人源化13.2v.2和人源化MJ2-7v.2-11)的效力最初受到这些抗体不能与啮齿类动物IL-13交叉反应的阻碍。本文通过向小鼠施用人重组IL-13而突破此限制。人IL-13能够结合至小鼠IL-13受体，且当外源施用时诱导呼吸道炎症、反应过度，并其他哮喘相关。

在非人灵长类动物中，人源化MJ2-7v.2-11识别的IL-13表位包括在110位的GLN。然而在人中，110位是多态性变体，通常以ARG取代GLN(例如R110)。R110Q多态性变体与变应性疾病增加的流行普遍相关。

在此实例中，在大肠杆菌中表达重组人R100Q IL-13并再折叠。从用人IL-13免疫的BALB/c小鼠中克隆抗体13.2(IgG1，k)，并将该抗体的人源化形式称作人源化13.2v.2(或h13.2v.2)。从用非人灵长类动物IL-13的N端19个氨基酸免疫的BALB/c小鼠中克隆抗体MJ2-7(IgG1，k)，并将该抗体的人源化形式称为人源化MJ2-7v.2-11(或hMJ2-7v.2-11)。将两抗体配制于含有5％蔗糖的PH6的10mM L-组氨酸中。通过A蛋白层析法纯化静脉的Carimune NH免疫球蛋白(人IVIG)(ZLB Bioplasma Inc.，瑞士)并配制于含有5％蔗糖的PH6的10mM L-组氨酸中。

为分析小鼠肺对重组人R110Q IL-13存在的反应，用5μg的重组人R110Q IL-13(例如大约250μg/kg)、或等体积的盐水(20μL)在第1、2、和3天气管内施用处理BABL/c雌性小鼠。在第4天，测试动物应答于增加剂量的喷雾乙酰甲基胆碱的呼吸道阻力(RI)和顺应性(Cdyn)的症状。简要地，将麻醉并经气管切开的小鼠置于全身体积扫描器，每个扫描器均具有构建进入小室头板的多支管(manifold)，具有连接气管的端口、连接通风设备的吸气和呼气端口和连接压力传感器的端口，监测气管压力。每个体积扫描器的壁中的呼吸流量计监测由于通气的动物的胸运动而进入和流出小室的气流。以每分钟150次呼吸的速率和150ml的潮气量来给动物通气。阻力计算来源于气管压力和气流信号，利用协方差的算法。

如图23A-23B所示，重组人R110Q IL-13的气管内施用引起应答于乙酰甲基胆碱刺激的增加的肺阻力和降低的动态顺应性。然而这些观察并不伴有强的肺炎。

为增强小鼠中的肺炎症反应，在第1、2、和3天对C57BL/6小鼠鼻内施用5μg的重组人R110Q IL-13、或等体积(50μg)的盐水。第4天将动物处死并收集支气管肺泡灌洗(BAL)物。分析前，将BAL过滤通过70μm的细胞粗滤器(strainer)并在2000转/分钟离心15分钟以沉淀细胞。将细胞碎片用于分析总的白细胞数，旋转至显微镜载玻片(Cytospin；Pittsburgh，PA)上，并用Diff-Quick(Dade Behring，Inc.Newark DE)染色作差异分析。通过细胞计数珠测定(CBA；BD Pharmingen，San Diego，CA)检测IL-6、TNFα和MCP-1水平。测定灵敏度的极限对于IL-6是1pg/ml，而对于TNFα和MCP-1是5pg/ml。

如图24A所示，鼻内施用重组人R110Q IL-13引起了强呼吸道炎症反应，如通过浸润入BAL的嗜酸性粒细胞和中性粒细胞增加所证实的。细胞浸润主要由嗜酸性粒细胞组成(例如大约40％)。如图24B中所示的，重组人R110Q IL-13的鼻内施用也显著增加了BAL中几种细胞因子的水平，包括例如MCP-1、TNF-I和IL-6。

为确定人源化MJ2-7v.2-11的最佳递送方法，在经鼻内或气管内施用人重组R110Q IL-13处理后，在腹膜内和静脉内或鼻内施用后分析BAL和血清中的抗体水平。简要地，在第1、2、和3天对BALB/c雌性小鼠气管内施用5μg重组人R110Q IL-13或等体积的盐水。在第0天和施用每种IL-13剂量之前的2小时，用在第0天静脉施用的、以及第1、2和3天腹膜内施用的500μg人源化MJ2-7v.2处理小鼠(图25A)。备选地，在第0、1、2、和3天鼻内施用500μg人源化MJ2-7v.2-11。如下通过ELISA测定总的人IgG：在4℃用1∶1500稀释度的山羊抗人Ig(M+G+A)Fc(ICN-Cappel，Costa Mesa，CA)在25mM pH9.6的碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液中以50μl每孔过夜包被ELISA平板。用PBS中0.5％的明胶在室温下封闭平板1小时，在含有0.05％Tween-20的PBS(PBS-Tween)中进行洗涤。加入人源化MJ2-7v.2-11标准品或6x 1∶2稀释度的起始于1∶500至1∶50000的绵羊血清，并在室温孵育2小时。用PBS-Tween洗涤平板，并在室温将1∶5000稀释度的生物素化小鼠抗人IgG(Southern BiotechnologyAssociates)孵育2小时。用PBS-Tween洗涤平板，并用过氧化物酶连接的链霉抗生物素(Southern Biotechnology Associates)和Sure Blue底物(KPLInc.)检测结合。测定灵敏度是0.5ng/ml人IgG。

图25A显示腹膜内和静脉内施用人源化M J2-7v.2-11后血清中人IgG水平与BAL相比升高。如图25B所示，在鼻内施用人源化MJ2-7v.2-11抗体之后，以μg/ml计的总IgG水平在BAL中要显著高于血清水平。

为确定人源化MJ2-7v.2-11抗体是否能够调节上面观察到的肺功能和炎症反应，通过在第1、2和3天气管内施用5μg重组人R110Q IL-13或等体积(20μL)的盐水来诱导呼吸道反应过度。在第0天、和施用每种剂量的重组人R110Q IL-13之前2小时，用500μg的人源化MJ2-7v.2-11、500μg剂量的IVIG、或等体积的盐水鼻内施用处理动物。第4天如上所述测试动物应答于增加剂量的喷雾乙酰甲基胆碱的呼吸道阻力(RI)和顺应性(Cdyn)。如上所述通过ELISA分析BAL和血清中的人源化MJ2-7v.2和IVIG。如图26A-26B中所示，人源化MJ2-7v.2-11有效降低了哮喘反应，导致实现半最大程度的肺阻力所需的乙酰甲基胆碱剂量显著降低。相反，相等剂量的IVIG没有效果。在这些条件下动态肺顺应性的变化并不明显。如图26C所示，BAL IgG抗体水平大约高于血清水平10-20倍。

为测定人源化MJ2-7v.2-11抗IL-13抗体施用是否促进IL-13循环水平的增加，如下通过ELISA测定了BAL和血清的IL-13水平：简要地，如有关图26A-26B所述处理BALB/c雌性小鼠。用每孔50μl在PBS中稀释至0.5mg/ml的抗-IL-13抗体mAb13.2过夜包被ELISA平板(NuncMaxi-Sorp)。用含有0.05％ Tween-20的PBS(PBS-Tween)洗涤平板3次并在室温用PBS中0.5％的明胶封闭2小时。然后洗涤平板并加入人IL-13标准品(Wyeth，Cambridge，MA)、或小鼠血清的稀释物(从1∶4起始3×稀释系列)，在含有2％胎牛血清(FCS)的PBS-Tween中。室温下再孵育平板4小时，并洗涤。以PBS-Tween中的0.3μg/ml加入生物素化的小鼠抗人IL-13抗体MJ1-64。室温下孵育平板1-2小时，洗涤，然后用HRP-链霉抗生物素蛋白(Southern Biotechnology Associates，Birmingham，AL)室温下孵育1小时。利用Sure Blue过氧化物酶底物(KPL，Gaithersburg，MD)产生颜色，并用0.01M硫酸终止反应。在SpectraMax平板读数仪(Molecular Devices Corp.，Sunnyvale，CA)中在450nm读取吸光度。通过参考为每一平板单独建立的人IL-13标准曲线来确定血清IL-13水平。

如图27A-27B中所示，与图26C一致，在抗体处理过的小鼠的BAL中IL-13水平升高，但血清中IL-13水平不升高。另外，我们观察到从这些样品中分离的IL-13无可检测的生物学活性(数据未显示)。为确定此观察到的IL-13生物活性缺失是否是由于IL-13和人源化MJ2-7v.2-11复合体形成，开展了ELISA来特异性地检测复合体中的IL-13和人源化MJ2-7v.2-11。简要地，用每孔50μl在PBS中稀释至0.5mg/ml的抗-IL-13抗体mAb13.2过夜包被ELISA平板(Nunc Maxi-Sorp)。用含有0.05％Tween-20的PBS(PBS-Tween)洗涤平板3次并在室温用PBS中0.5％的明胶封闭2小时。然后再洗涤平板并加入人IL-13标准品(Wyeth，Cambridge，MA)、或在含有2％胎牛血清(FCS)的PBS-Tween中的小鼠血清的稀释物(从1∶4起始3×稀释系列)。随后室温下孵育平板4小时。然后加入PBS-Tween中1∶5000稀释的生物素化抗人IgG(Fc特异地)(SouthernBiotechnology Associates，Birmingham，AL)。室温下孵育平板1-2小时，洗涤，并最终在室温下用HRP-链霉抗生物素蛋白(Southern BiotechnologyAssociates，Birmingham，AL)孵育1小时。利用Sure Blue过氧化物酶底物(KPL，Gaithersburg，MD)产生颜色，并用0.01M硫酸终止反应。在SpectraMax平板读数仪(Molecular Devices Corp.，Sunnyvale，CA)中在450nm读取吸光度。

如图27C-27D所示，在此模型中从小鼠的BAL和血清中回收得到IL-13和人源化的MJ2-7v.2-11复合体。该观察表明人源化MJ2-7v.2-11能够在体内结合IL-13，并表明该反应可以抵消IL-13生物活性。

如下，在小鼠中测试了人源化MJ2-7v.2-11对人IL-13介导的肺炎和细胞因子产生的效果，并与第二种抗体——人源化13.2v.2相比较。简要地，在第1、2和3天用5μg的人重组R110Q IL-13(例如大约250μg/kg)、或等体积(50μl)的盐水鼻内施用处理C57BL/6雌性小鼠(10/组)。在第0天，和施用每种剂量的IL-13之前的2小时，给予小鼠500μg、100μg或20μg的鼻内剂量的人源化MJ2-7v.2-11或人源化13.2v.2。对照组获得500μg IVIG、或等体积的盐水。在第4天处死动物并收集BAL。通过差异细胞计数测定浸润入BAL的嗜酸性粒细胞和中性粒细胞并表示为百分比。

如图28A-28B所示，与图24A一致，重组人R110Q IL-13处理引起嗜酸性粒细胞和中心粒细胞浸润水平的增加。有趣地，与对照(例如盐水、IL-13、IVIG)相比，人源化MJ2-7v.2-11和人源化13.2v.2显著降低了嗜酸性粒细胞(图28A)和中性粒细胞(图28B)浸润。如图29A-29C所示，HMJ2-7V2-11和人源化MJ2-7v.2-11还消除了MCP-1、TNF-I和IL-6细胞水平的增加。

为确认BAL细胞因子水平精确代表炎症的程度，在第1、2和3天用5μg重组人R110Q IL-13(例如大约250μg/kg)或等体积(50μl)盐水鼻内施用处理的C57BL/6雌性小鼠。在第0天，和施用每种剂量的IL-13之前的2小时，给予小鼠500μg、100μg或20μg鼻内剂量的人源化MJ2-7v.2-11。第4天，处死小鼠并收集BAL。如上所述通过ELISA测定BAL中人源化MJ2-7v.2-11抗体水平。通过细胞计数珠测定检测BAL IL-6水平。通过差异细胞计数测定嗜酸性粒细胞百分比。

如图30A-30B所示，IL-6 BAL细胞因子水平与炎症程度相关。而且，BAL液中更高水平的人源化MJ2-7v.2-11与细胞因子浓度反相关，这强烈地暗示着治疗效果。

此模型中在体内降低IL-13生物活性所需的抗体水平是高的。在500μg抗体的剂量时可见最好效力，相应在小鼠中大约25mg/kg。这种对抗体的高剂量需求最有可能是引发肺反应所用的高水平IL-13(5μg/剂量x 3剂量)的结果。有趣地，只有当鼻内施用人源化MJ2-7v.2-11时才可看到体内IL-13生物活性的良好中和，而当经静脉或腹膜内施用该抗体时却没有。分布研究显示在静脉和腹膜内施用后，处死时在血清中回收到高水平的抗体，而在BAL中却只发现了极低水平的抗体。相反，在鼻内给药后，在血清和BAL中发现了相似水平的抗体。因此，鼻内施用在BAL液中人源化MJ2-7v.2-11的水平大约高于静脉和腹膜内施用的100倍。鼻内施用有效但静脉和腹膜内施用无效的观察结果表明在此模型中抗体作用的部位并不是肺。预期作用部位是基于IL-13的气管内或鼻内的传递途径，并通过下列观察得以确认，即抗体在BAL液中捕获IL-13，但在血清中只见到非常少的抗体/IL-13复合体。

总之，这些发现进一步支持了人源化抗体MJ2-7v.2-11在体内的IL-13中和活性。

实施例20：人源化抗IL-13抗体之药物动力学、药效学、及物种间标度

自经人类IL-13免疫之BALB/c小鼠克隆抗体13.2(IgG1，k)，且本抗体之人源化形式被命名为“人源化13.2v.2”。抗体MJ2-7(IgG1，k)系自经非人类灵长类动物IL-13之N末端19个氨基酸免疫的BALB/c小鼠克隆，且本抗体之人源化形式在文中被命名为“人源化MJ2-7v.2-11”或“hMJ2-7v.2-11”。这两种抗体系在含5％蔗糖之10mM L-组氨酸(pH 6)内配制。这两种抗IL-13抗体系与猴子IL-13交叉反应，且人源化13.2v.2系与免疫IL-13交叉反应。然而，人源化13.2v.2及人源化MJ2-7v.2-11抗体并不会与啮齿类动物(例如小鼠及大鼠)IL-13交叉反应。

为了证实抗IL-13抗体之临床前测试，在IV及SC施用后之小鼠、大鼠、绵羊、及猕猴中进行单剂量药物动力学(PK)及药效学(PD)试验。此外，使用实例21a中所述之经蛔虫攻击猴子模型、及下述之经蛔虫攻击绵羊模型以进行PK研究。使用非区室模型及WinNonLin软件(Model 201及200)以计算PK参数。最后，使用可预测人类体内之抗IL-13处理之PK-PD建模进行PK动物谱图之外推。

在小鼠(例如用于人源化13.2v.2之雄A/J及用于人源化MJ2-7v.2-11之雌BALB/c)、雄性Spraugue-Dawley大鼠、首次用于实验之雄猕猴、及实例21a中所述之经蛔虫攻击的猕猴模型中进行单剂量PK实验。根据最近预定的体重，以单次快速浓注之方式藉导管分别对小鼠、大鼠、及猴子之尾静脉、颈静脉或隐静脉施用IV剂量。

就该经蛔虫攻击之猕猴模型而言，以如上述藉短(例如约10分钟)IV输注而施用的人源化MJ2-7v.2以处理根据实例21a所述之方案所选择之动物。IV输注后24小时，以经PBS(Greer Diagnostics，Lenoir，NC)重构并藉气雾剂递送而施用之0.75微克猪蛔虫抗原攻击动物。

就该经蛔虫攻击之绵羊模型而言，使用IV快速浓注人源化13.2v.2(2毫克/千克)或IVIG(2毫克/千克)以处理已预筛选对猪蛔虫抗原具呼吸道过敏之雌性绵羊。然后使用气雾剂递送后24小时进行蛔虫攻击。

在如上述之合适处理后，于预定时间点以血清分离管收集血液样品并于室温下使其凝结15分钟，然后藉血清离心法(例如约11,000rpm，费时10分钟)而处理。预定时间点为：预测试且在人源化13.2v.2A/J小鼠研究中费时5分钟至42天；在人源化MJ2-7v.2-11 BALB/c小鼠研究中费时5分钟至21天，且每一时间点分析3-4只动物；预测试且在人源化13.2v.2及人源化MJ2-7v.2-11大鼠研究中费时5分钟至35天；预测试且在1毫克/千克人源化13.2v.2及人源化MJ2-7v.2-11首次用于实验之猕猴试验中费时5分钟至42天而在100毫克/千克之该等试验中费时5分钟至55天；在人源化13.2v.2蛔虫攻击之绵羊研究中费时5分钟至42天；且在经蛔虫攻击之猕猴研究中费时24小时至113天。

使用定量酶联免疫吸附测定法(ELISA)以测定小鼠、大鼠、及猕猴血清样品中之抗IL-13抗体浓度。在本测定法中，系藉抗-FLAG单克隆抗体在微量滴定板上捕获含FLAG八肽融合标记(Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys)之IL-13配体。封闭并清洗后，在该板上培育含抗IL-13抗体或抗IL-13标准物之血清样品以使其结合至该经FLAG标记的IL-13。使用已融合至辣根过氧化物酶(HRP)之小鼠抗人类IgG(Fc)抗体以检测结合的抗IL-13抗体或抗IL-13标准物。最后，使用HRP底物2，2’连氮基-二(3-乙基-苯并噻唑啉-6-磺酸盐(ABTS)以定量结合的抗体，且于405nm处测定光密度。

用以定量绵羊之人源化13.2v.2的该ELISA之步骤如下：简言之，在未标记之人源化13.2v.2标准物或含人源化13.2v.2之绵羊血清存在下，以重组型人类IL-13-FLAG预温育生物素化之人源化13.2v.2。将该混合物转移至已预清洗并封闭之经抗FLAG包被的ELISA平板。第二次温育后，清洗该平板并以过氧化物酶连接的链霉抗生物素蛋白检测生物素化的人源化13.2v.2。藉使用4-参数方程式(Softmax Pro)自校准曲线拟合进行内插法以测定ELISA样品浓度。

小鼠PK参数系根据于各时间点下之3至4只动物的平均浓度，然而就个别动物而言，大鼠及猴子PK参数之测定步骤如下。使用药物动力学软件包(WinNonlin(Pharsight))之非区室分析以产生所有数据。使用线性梯形模型计算血清浓度对时间曲线下之面积(AUC)。使用至少3数据点，藉对数-线性回归而估计表观末期之斜率且末期速率常数(∑)系导自该斜率。以AUC_0-t(t＝最后一次可测定浓度之时间)及C_t/∑之总和估计AUC_0-∞。该表观末期半衰期(t_1/2)系以0.693/∑计算。

可使用如下述之异速标度以预测体重为60千克之患者的人类PK参数。在对数-坐标上画出自各物种所计算之PK参数，且异速系数(a)及异速指数(b)系自以下线性回归估计：对数Y＝对数(a)+对数(w)＊b(其中对数(a)＝y截距；b＝拟合之斜率)。如表7所示，使用方程式：Y＝a.W^b(其中Y＝目的PK参数；W＝物种之体重；a＝异速系数；b＝异速指数)以标度PK参数。PK数据如表5A-5C中所示。

表5A.单次IV施用后，人源化13.2v.2及人源化MJ2-7v.2-11之平均(±SD)药物动力学参数之物种间的比较

表5B.单次IV注射后，人源化13.2v.2及人源化MJ2-7v.2-11之平均药物动力学参数之物种间的比较

表5C.单次IV施用后，人源化13.2v.2及人源化MJ2-7v.2-11之剂量标准化暴露量

如上述，测定小鼠、大鼠、绵羊、及猴子之人源化13.2v.2及人源化MJ2-7v.2-11的PK谱。如表5A-5B中所示，一般而言，所分析之所有物种的PK参数皆相当。更特别地，PK数据清楚地说明这两种抗IL-13抗体之清除作用慢，在猴子及绵羊体内之血清清除(CL)范围为自0.13毫升/小时/千克，而在小鼠中为0.81毫升/小时/千克。所有物种之稳态分布体积(Vd_ss)亦低(＜120毫升/千克)，其表明该等抗IL-13抗体主要存在于血管循环中。有趣的是，小鼠(非结合性物种)之表观末期半衰期(T_1/2)为3至6天，而猴子及绵羊(IL-13结合物种)为14至17天。在猴子体内，系以1毫克/千克及100毫克/千克之剂量测定PK参数。由于该等1与100毫克/千克剂量之CL、t_1/2、Vd_ss、及剂量标准化暴露量(AUC/剂量)并无显著不同，所以人源化13.2v.2及人源化MJ2-7v.2-11抗体之PK参数在该1-100毫克/千克之范围内为大概成剂量比例的。一般而言，首次用于实验之猴子及经蛔虫攻击之猴子的PK参数并无显著不同，其表示于该治疗性剂量水平下，该等抗IL-13抗体并无明显标靶-介导的清除。然而，特别当与经1毫克/千克之人源化MJ2-7v.2-11处理之首次用于实验的猴子比较时，可能由于血管重建而导致IL-13再分布，经蛔虫攻击之猴子体内之人源化MJ2-7v.2-11的Vd_ss较低。

IV施用后，使用异速标度以预测人类之人源化13.2v.2及人源化MJ2-7v.2-11抗体的PK。如表5A-5B及图43中所示，已预测这两种抗IL-13抗体在人类体内具有高度有利的PK图谱，具有低CL(例如约0.07-0.1毫升/小时/千克)、低Vd_ss(例如约68-90毫升/千克)、及长t_1/2(例如约27-29天)。

使用得自上述IV研究之剂量标准化暴露数据(AUC_0-∞/剂量)以计算皮下(SC)施用2毫克/千克之人源化13.2v.2及人源化MJ2-7v.2-11抗体后之生物利用率。

如表6中所示，在所测试之所有物种体内，该等抗IL-13抗体之生物利用率为60-100％。于给药后，在第1至3天所观测之最大血清浓度(C_max)，就人源化13.2v.2而言在小鼠体内为7.25微克/毫升，在猴子体内为22.6微克/千克，且就人源化MJ2-7v.2-11而言，在小鼠体内为24.2微克/毫升，在猴子体内为22.5微克/毫升。自这两种抗IL-13抗体之注射部位产生之吸收作用很慢；然而，就人源化MJ2-7v.2-11而言，吸收作用稍快。根据临床前物种中高水平的SC生物利用率，这两种抗IL-13抗体经预测在人体内皆具有≥50％生物利用率。

如上述，可使用异速标度方法以预测体重为60千克之患者的人类PK参数。简言之，使用表5中所示之小鼠、大鼠、及猴子的PK参数对体重进行回归分析(例如PK参数＝a.体重^b)以获得R²。然后在对数坐标上作出各物种之PK参数且如表7中所示，自该线性回归估计异速系数(a)及异速指数(b)。

表7.抗IL-13抗体PK参数之异速标度

表7系表示得自PK参数对体重及这两种抗IL-13抗体之CL、t_1/2与Vd_ss之回归的异速系数(a)、异速指数(b)、及R²值。

使用放射性标记的抗IL-13抗体，分别在A/J小鼠及Sprague-Dawley大鼠体内进行人源化13.2v.2及人源化MJ2-7v.2-11抗体生物分布测定法。简言之，使用Iodo-gen试剂(由Pierce供应之1，3，4，6-四氯-3，6-二苯基甘脲)以标记人源化13.2v.2。使20微升等分Iodo-gen溶液与已溶解在100TL PBS中之1mCi[¹²⁵I]及10微升人源化13.2v.2抗体组合并于室温下温育15分钟。使用NAP5柱(Pharmacia，Uppsala，Sweden)以纯化经[¹²⁵I]标记之人源化13.2v.2。类似，使用IODO-BEADS方法(Pierce，Rockford，IL)碘化人源化MJ2-7v.2，其中系使用3mCi[¹²⁵I]、IODO BEADS、及PBS以温育300微克人源化MJ2-7V2-11抗体25分钟。藉过滤(Centricon，10kD截留量)而自该IODO BEADS分离未掺入之[¹²⁵I]，并使所形成[¹²⁵I]标记之人源化MJ2-7v.2-11抗体与未标记之HMJ2-7V2-11混合。该[¹²⁵I]标记之人源化13.2v.2及[¹²⁵I]标记HMJ2-7v.2-11抗IL-13抗体之比活性分别为2.79×10⁸cpm/毫克(未掺入之碘≤5％)及2.56×10⁷cpm/毫克(未掺入之碘≤1.1％)。然后IV施用1毫克/千克剂量之[¹²⁵I]标记之人源化13.2v.2并施用2毫克/千克剂量之[¹²⁵I]标记之人源化MJ2-7v.2-11。接着于1、24、168、及336小时收集组织样品以进行该[¹²⁵I]标记之人源化13.2v.2小鼠研究并于1、48、168、及336及840小时，进行该[¹²⁵I]标记之人源化MJ2-7v.2-11大鼠研究。血液抽样并以25单位/毫升对全血灌注肝素化PBS后，立即收集包括组织，例如脾、肺、心脏、肝、肾、骨骼肌、胃、小肠、大肠、淋巴结、皮肤、及脂肪。

分别藉γ-计数三氯乙酸(TCA)可沉淀的或总的放射性、及以下公式估计血清中之抗IL-13抗体水平(微克当量/毫升)(其系以放射性当量浓度定义)及组织中之抗IL-13抗体水平(微克当量/克)，该公式如下：就血清而言，[平均TCA可沉淀cpm/EXP(0.693/60.2×(t_s-t_D))]/[比活性×样品体积]；就组织而言，[平均TCA可沉淀cpm/EXP(0.693/60.2×(t_s-t_D))]/[比活性×样品重量]，其中t_s为样品之日期，而t_D为校正[¹²⁵I]之半衰期后之给药溶液测定值。

如图31A-31B中所示，在IV施用[¹²⁵I]标记之人源化13.2v.2及[¹²⁵I]标记之人源化MJ2-7v.2-11抗体后，在血清中可检测出这两种抗体之最高水平，其证实这两种抗IL-13抗体主要存在于脉管系统中。具有高水平之这两种抗IL-13抗体的其它组织包括高灌流性组织，例如肺、肾、肝、心脏、及脾。就所分析之所有组织区室而言，于1小时点，在肺内之人源化13.2v.2及人源化MJ2-7v.2-11抗体水平最高，其表示这两种抗IL-13抗体快速递送至该组织，该组织亦为适于未来治疗应用之所欲标靶器官。最后，在本实验之持续期间内人源化13.2v.2及人源化MJ2-7v.2-11抗体水平皆下降，且于最终时间点仅检测到微量。

亦使用上述ELISA以分析人源化13.2v.2及人源化MJ2-7v.2-11抗体药效学(PD)。如图32A-B中所示，在对首次用于实验之猕猴及经蛔虫攻击之猕猴IV施用人源化13.2v.2及人源化MJ2-7v.2-11抗体后，总体IL-13水平会暂时增加。然而，重要的是，当在以基于细胞的效力测定中进行测试时，在这些动物之血清中的IL-13不具有生物活性(未显示数据)。于所有时间点下，在得自经IVIG或盐水处理之动物的血清中并未检测到IL-13(并未显示数据)。

使用如上述之异速标度以进行抗体IL-13施用后之IL-13水平的进一步分析。简言之，如图38及39中所示，分别计算在首次用于实验之猕猴及正常猕猴体内人源化MJ2-7v.2-11及人源化13.2v.2的浓度-时间图谱。本数据与表5中所示之PK数据组合并应用于图40中所描述之模型及上述方程式。首次用于实验之猕猴体内之人源化MJ2-7v.2-11的所形成异速标度数据示于图36及表8内。经蛔虫攻击之猕猴体内之人源化MJ2-7v.2-11的所形成异速标度数据示于图42及表10内。

实施例21a：在首次用于实验之猕猴及经蛔虫攻击之猕猴体内之人源化抗IL-13抗体的药物动力学及药效学建模(“顺序模型”)

本实施例讨论描述抗IL-13抗体在首次用于实验之动物及在该动物药理学研究中之药物动力学及药效学的整合模型。使用该模型以表征藉抗IL-13抗体在首次用于实验及药理学试验环境中进行IL-13中和作用的动力学。可延伸文中以IL-13例示之模型以评估其它药物-配体相互作用，特别为其中游离态细胞因子水平难以直接检测的情况下。

可研究单克隆抗体或细胞因子受体/Fc融合蛋白质的细胞因子中和作用以作为用于各种经细胞因子介导之疾病，包括自体免疫疾病，诸如类风湿性关节炎(RA)、哮喘、及系统性红斑狼疮(SLE)之治疗方法(Ichinose等人，Curr Drug Targets Inflamm Allergy 2004；3(3)：263-9；Economides等人，Nat Med 2003；9(1)：47-52；Toussirot等人，Expert Opin Pharmacother2007；8(13)：2089-107；及Anolik等人，Best Pract Res Clin Rheumatol2005；19(5)：859-98)。治疗性蛋白质之研发的一共同问题为由于测定方法并未具有可测定游离态细胞因子水平之足够灵敏性，所以在药物存在下并不能直接监测细胞因子中和作用。反倒是，总(游离态加药物-结合的)细胞因子水平通常作为药物活性之替代药效学(PD)标记。有几种可作为“细胞因子陷阱”之抗细胞因子蛋白质实例，大概由于药物-结合的循环性细胞因子之清除速率比游离态循环的细胞因子的清除速率慢，所以在药物施用后，导致总循环性细胞因子水平增加(Margolin等人，J Clin Oncol2001；19(3)：851-6；Charles等人，J Immunol 1999；163(3)：1521-8；Ito等人，Gastroenterology 2004；126(4)：989-96；discussion 947)。

当游离态细胞因子水平(在抗细胞因子蛋白质存在且通常不存在下)难以直接测定时，使用总细胞因子水平作为PD标记，PK-PD建模可作为描述配体中和作用之动力学与抗细胞因子治疗剂之浓度-时间图谱之关系的有用工具。当得自健康的受试者及患病的受试者(动物或人类)之数据有效时，这些模型特别有用，因此在这两种环境中进行治疗前后，可估计该游离态细胞因子水平。建立配体中和作用之动力学与潜在治疗剂之浓度-时间图谱间之关系并结合功效数据，可用以设计在动物药理学或在临床研究中之最佳给药方案。

白介素-13(IL-13)之中和作用为哮喘之治疗性干预的有吸引力方法，因为该Th2细胞因子在哮喘之动物模式的哮喘发病中扮演重要角色(Andrews等人，J Biol Chem 2002；277(48)：46073-8；Corry等人，Am JRespir Med 2002；1(3)：185-93；Wills-Karp等人，Curr Allergy Asthma Rep2004；4(2)：123-31；Grunig等人，Science 1998；282(5397)：2261-3；Padilla等人，J Immunol 2005；174(12)：8097-105；Taube等人，J Immunol2002；169(11)：6482-9)。此外，在IL-13基因内之多态性与人类之哮喘敏感性间有一致的相关性(Vercelli，Curr Opin Allergy Clin Immunol2002；2(5)：389-93)。以抗IL-13抗体或IL-13受体α2/Fc融合蛋白质(IL-13Rα2-Fc)进行IL-13之中和作用可防止小鼠(Taube等人；Grunig等人；Kumar，Am J Respir Crit Care Med 2004；170(10)：1043-8；Wills-Karp等人，Science 1998；282(5397)：2258-61；Yang等人，J Pharmacol Exp Ther2005；313(1)：8-15)、绵羊(Kasaian等人，Am J Respir Cell Mol Biol2007；36(3)：368-76)、及猕猴(Bree等人，J Allergy Clin Immunol2007；119(5)：1251-7)之呼吸道高反应性及其它哮喘变化。

IL-13可藉由IL-13受体α1(IL13RαR1)及白介素-4受体α(IL-4Rα)亚单位所组成之受体复合体传递信号(Andrews等人，J Biol Chem2002；277(48)：46073-8；Corry等人，Am J Respir Med 2002；1(3)：185-93)。IL-13首先与IL-13Rα1进行低亲和力相互作用，其可募集IL-4Rα以形成对IL-13具有高亲和力之活性信号复合体，因此可导致STAT6之磷酸化反应及下游细胞活化事件。

文中所述之hMJ2-7v.2-11为阻断IL-13Rα1结合至人类及非人类灵长类动物IL-13之人源化抗IL-13抗体。hMJ2-7v.2-11实质上并不会与啮齿类动物或绵羊IL-13进行交叉反应；因此非人类灵长类动物系作为药理学物种。如文中所述，已证明hMJ2-7v.2-11在猕猴体内藉蛔虫攻击而诱发的急性呼吸道炎症模型中很有效(于10毫克/千克IV剂量下)。在本实施例中，系使用对首次用于实验之猴子及经蛔虫攻击之猴子施用hMJ2-7v.2-11后所获得之PK及总IL-13(PD)数据以建立整合的PK-PD模型并表征IL-13中和作用之动力学。

该实验设计摘述在表8中。如前述，于Wyeth Research(Pearl River，NY和Andover，MA，分别进行研究1及研究2)进行已喂养无蛋白质成年猕猴之单一剂量药物动力学研究。藉对隐静脉IV注射或藉SC途径而施用hMJ2-7v.2-11。该剂量系根据给药前之最近预定体重。于预定时间点(表8)以血清分离试管收集血液样品，于室温下使其凝结约15分钟，并藉离心法(约11,000rpm，费时10分钟)处理血清。

表8.实验设计

实验编号	N，性别	hMJ2-7v.2-11HMJ2-7v.2-11	给药体积及缓冲液	PK及PD取样时间点(天数)
							剂量(毫克/千克)
实验1，首次用于实验之猴子	3，雄性	1(IV)及2(SC)	在组氨酸-蔗糖缓冲剂^b中1毫升/千克	0，0.004，0.042，0.125，0.25，1，2，3，5，7，14，20，28，35，42
					实验2，经蛔虫攻击之猴子^a	8，雄性	10(IV)	在PBS中2-3毫升/千克	0，1，2，8，15，36，57，85，113

a.hMJ2-7v.2施用后24小时以0.75毫克猪蛔虫攻击动物

b.10mM组氨酸，5％蔗糖，pH 6.0

蛔虫攻击研究方案如前述(Bree等人，J Allergy Clin Immunol2007；119(5)：1251-7)。简言之，在该实验前数个月，以猪蛔虫抗原对未经处理之猴子进行初筛攻击。选择攻击后24小时，以支气管肺泡灌洗(BAL)之嗜酸性粒细胞水平增加两倍作响应之猴子来进行该实验。藉IV途径对动物施用hMJ2-7v.2-11(10毫克/千克)或负对照(IVIG，10毫克/千克)并在hMJ2-7v.2-11或负对照施用后24小时，用0.75微克猪蛔虫抗原(得自GreerDiagnostics，Lenoir，NC并经PBS重构)攻击。

使用定量酶联免疫吸附测定法(ELISA)以测定血清样品中之hMJ2-7v.2-11的浓度。在本测定法中，系藉抗FLAG单克隆抗体而在微量滴定板上捕获含FLAG八肽融合标记(Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys)之重组人类IL-13配体。封闭并清洗后，在该板上培育含hMJ2-7v.2-11或该等hMJ2-7v.2-11标准物之血清样品以使其结合至该IL-13。使用与辣根过氧化物酶(HRP)缀合之小鼠抗人类IgG(Fc)抗体以检测结合的hMJ2-7v.2-11。添加酶底物2，2’连氮-二(3-乙基-苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)，并于405nm处测定光密度。该测定之定量下限值为约10.5纳克/毫升。

使用定量性ELISA以测定得自经hMJ2-7v.2-11处理之猴子的血清样品中总IL-13浓度。在本测定法中，系使用可在hMJ2-7v.2-11HMJ2-7v.2-11存在下结合IL-13之抗IL-13抗体(人源化13.2抗体，13.2v.2，Wyeth Research)作为捕获物。封闭并清洗后，在该板上温育含得自活体内研究之IL-13的血清样品或该等人类灵长类动物IL-13标准品以使其结合至该抗IL-13捕获抗体。以生物素化Jin2(其系为可结合至IL-13表位之不同于人源化13.2及hMJ2-7v.2-11的抗IL-13抗体)检测总IL-13。添加已缀合至HRP之链霉抗生物素蛋白及酶底物，3，3’，5，5’-四甲基联苯胺(TMB)过氧化物酶并于450纳米处测定光密度。该测定法之定量下限值为约0.15纳克/毫升。

使用WinNonlin软件V 5.1.1(Pharsight，Mountain View，CA)以形成描述所观测血清中之hMJ2-7v.2-11及总IL-13浓度间之关系的整合性药物动力学及药效学模型(图33)。以包括中央区室(C_Ab，V)及周边区室(C_2，Ab，V₂)之双区室模型评估hMJ2-7v.2-11的药物动力学。CL_d，Ab代表这两个区室间之分布清除率。仅经由该中央区室而推测hMJ2-7v.2-11之清除率(CL_Ab)。以内源性IL-13之中和作用表征hMJ2-7v.2-11之药物动力学。根据IgG之二价特性，该模型已假定各hMJ2-7v.2-11分子具有对于IL-13之两个独立结合部位，其具有相同结合速率常数(K_on)及解离速率常数(K_off)。K_on为控制hMJ2-7v.2-11/IL-13(Ab-IL-13)复合体形成之二级速率常数，而K_off为控制Ab-IL-13复合体之解离作用的一级速率常数。CL_复合体代表Ab-IL-13复合体之血清清除。假设IL-13之稳态可藉IL-13产生(零级，K_syn，)及降解作用(CL_IL-13)而调节。导自图33之模型图解的微分方程式如下：

d C_{Ab} / dt = [In (t) + {CL}_{d, Ab} \cdot C_{2, Ab} - (C L_{d, Ab} + {CL}_{Ab}) \cdot C_{Ab}] / V

- K_{on} \cdot C_{Ab} \cdot (C_{IL - 13} - C_{Ab - (IL - 13)} - C_{Ab - {(IL - 13)}_{2}}) + K_{off} \cdot C_{Ab - (IL - 13)}

当t＝0时，

C_{Ab}^{0} = In (0) / V - - - (1)

d C_{{2,}_{Ab}} / dt = ({CL}_{d, Ab} \cdot C_{Ab} - {CL}_{d, Ab} \cdot C_{2, Ab}) / V_{2}

当t＝0时，

C_{2, Ab}^{0} = 0 - - - (2)

{dC}_{Ab - (IL - 13)} / dt = K_{on} \cdot C_{Ab} \cdot (C_{IL - 13} - C_{Ab - (IL - 13)} - C_{Ab - {(IL - 13)}_{2}})

- K_{on} \cdot C_{Ab - (IL - 13)} \cdot (C_{IL - 13} - C_{Ab - (IL - 13)} - C_{Ab - {(IL - 13)}_{2}})

当t＝0时，

C_{Ab - (IL - 13)}^{0} = 0 - - - (3)

d C_{Ab - {(IL - 13)}_{2}} / dt = K_{on} \cdot C_{Ab - (IL - 13)} \cdot (C_{IL - 13} - C_{Ab - (IL - 13)} - C_{Ab - {(IL - 13)}_{2}})

当t＝0时，

C_{Ab - {(IL - 13)}_{2}}^{0} = 0 - - - (4)

d C_{IL - 13} / dt = [K_{syn} - {CL}_{IL - 13} \cdot (C_{IL - 13} - C_{Ab - (IL - 13)} - C_{Ab - {(IL - 13)}_{2}})] / V

- K_{on} \cdot C_{Ab} \cdot (C_{IL - 13} - C_{Ab - (IL - 13)} - C_{Ab - {(IL - 13)}_{2}})

- K_{on} \cdot C_{Ab - (IL - 13)} \cdot (C_{IL - 13} - C_{Ab - (IL - 13)} - C_{Ab - {(IL - 13)}_{2}})

+ K_{off} \cdot C_{Ab - (IL - 13)} + K_{off} \cdot C_{Ab - {(IL - 13)}_{2}}

当t＝0时，

C_{II - 13}^{0} = K_{syn} / {CL}_{IL - 13} - - - (5)

对于静脉内快速浓注剂量：

In(t)＝剂量 (6)

对于皮下剂量：

In(t)＝K_a·F·剂量 (7)

由于初步建模显示hMJ2-7v.2-11、IL-13及Ab-IL-13复合体在中央区室内具有类似之分布体积估计值(约0.1至-0.3升)，所以单一体积变量(V)用于最终建模中进行模型精简。使用一级吸收速率常数(K_a)以描述适于皮下剂量之吸收方法。

除了生物利用率(F)之估计值外，可藉同时将该模式拟合得自个别首次用于实验之猴子或经蛔虫攻击之猴子的血清hMJ2-7v.2-11 HMJ2-7v.2-11及总IL-13浓度-时间图而获得PK/PD参数估计值。首先以IV(n＝3)及SC(n＝3)剂量使该整合的PK/PD模型与得自首次用于实验之猴子的数据拟合。使用如实施例21b所示之非区室分析以估计该SC剂量后之抗IL-13抗体的生物利用率(F)。与IV及SC臂(图34A)中之其它首次用于实验的猴子比较，在本研究之SC臂中之一只首次用于实验的猴子(第5号猴子)在未期时hMJ2-7v.2-11 HMJ2-7v.2-11水平急剧下降(且总IL-13水平较快下降)，其可能系由于抗hMJ2-7v.2-11之抗体形成所致。因此在该首次用于实验-模型环境中之平均模式参数的计算不包括第5号猴子。已假定蛔虫攻击并不会改变K_on及K_off。因此得自首次用于实验之猴子的平均K_on及K_off估计值可用于经蛔虫攻击之猴子的模型拟合中。经蛔虫攻击之猴子的炎症发作被认为于在施用后24小时之攻击后同时发生。因此，可藉使该等数据与得自首次用于实验之猴子的平均参数拟合而对在该预攻击期(0至24小时)内之经蛔虫攻击的猴子设想幼稚状况。所有数据系以平均值±SD(就首次用于实验之猴子而言，n＝5且就经蛔虫攻击之猴子而言，n＝8)。以不成对斯氏t检验评估统计学显著性(p＜0.05)。

使用得自PK/PD建模之对应平均参数以进行hMJ2-7v.2-11之不同给药方案后在首次用于实验或蛔虫攻击环境中的hMJ2-7v.2-11、总IL-13、及游离态(非结合的)IL-13浓度之模拟。假定于第1天进行蛔虫攻击(如研究2之实验设计中所使用)，则以得自首次用于实验之环境的平均参数估计值进行该0-24小时期间之模拟，并以得自该等蛔虫攻击环境之平均参数估计值进行第1天起之模拟。假定于第0天进行蛔虫攻击体(就假定“已确定之炎症”情况而言)，以得自该等蛔虫攻击环境之平均参数估计值进行所有时间点之模拟。

首次用于实验之猕猴体内之hMJ2-7v.2-11的平均浓度-时间图谱(1毫克/千克，IV及2毫克/千克SC，研究1)如实施例21b所述。研究1中之hMJ2-7v.2-11的个体浓度-时间图谱示于图34A中。相对于研究1中之其它5只动物(3只在IV臂中，两只在SC臂中)，在该研究之SC臂中之一只动物(第5号猴子)中观测到给药后约14天后血清中之hMJ2-7v.2-11血清水平急剧下降。经蛔虫攻击之猴子体内的hMJ2-7v.2-11(10毫克/千克，IV，给药后24小时进行蛔虫攻击，研究2)及首次用于实验之猴子体内之hMJ2-7v.2-11的平均浓度-时间图谱摘述在图34B中。

开发定量性ELISA以测定在hMJ2-7v.2-11不存在或存在下之总IL-13水平。在给药前之样品或在所有得自经IVIG处理之对照动物的样品中，这些测定法并不能检测出血清中的IL-13水平(并未显示数据)。hMJ2-7v.2-11施用后，在研究1(首次用于实验之猴子；1毫克/千克IV或2毫克/千克SC)中及在研究2(10毫克/千克IV，给药后24小时进行蛔虫攻击)中总IL-13水平暂时增加(图34C)。在总IL-13之浓度-时间图谱中有高的动物间之差异性。然而，与研究1之经hMJ2-7v.2-11处理过的其它5只首次用于实验之猴子比较，在研究1之SC臂中的第5号猴子之总IL-13水平明显地急剧下降，其可能系由于在该动物体内形成抗hMJ2-7v.2-11抗体所致。在第5号猴子体内之总IL-13下降的开始与该猴子体内之hMJ2-7v.2-11水平之下降一致(并未显示数据)。

使用得自经蛔虫攻击之动物的血清所进行之前述基于细胞的测定结果显示具有可检测水平之总IL-13的样品不具有IL-13介导的生物活性(Kasaian等人，提交)，其提示在首次用于实验之猴子及经蛔虫攻击之猴子体内总IL-13水平之暂时增加系由于hMJ2-7v.2-11结合的IL-13之增加所致。然而，对首次用于实验之动物或经蛔虫攻击之动物施用hMJ2-7v.2-11后，游离态(具生物活性)IL-13之浓度-时间图谱尚得表征。

制订图33中所述之整合的药物-配体结合性PK-PD模型以描述在首次用于实验之猴子及经蛔虫攻击之猴子体内所观测之IL-13及hMJ2-7v.2-11的总血清浓度间之关系。在本模型中，系以双区室模型说明hMJ2-7v.2-11之药物动力学并以内源性IL-13之中和作用表征hMJ2-7v.2-11的药效学。根据IgG之二价特征，在假定hMJ2-7v.2-11可以以顺序方式结合1或2种IL-13分子之条件下开发该模型。已假定IL-13之稳态可藉IL-13之零级合成(K_syn)及降解作用(CL_IL-13)而调节。

就PK-PD模型而言，系使用150kDa分子量(就hMJ2-7v.2-11而言)及10kDa分子量(就IL-13而言)以将原始浓度数据(以纳克/毫升或微克/毫升测定)转化成nM单位。

表9.得自首次用于实验之猕猴及经蛔虫攻击之猕猴之个体数据拟合的hMJ2-7v.2-11药物动力学及药效学参数之摘述

a.为了估算首次用于实验之动物的平均参数，使用在该1毫克/千克IV组中之3只动物及在该2毫克/千克SC组中之2只动物。由于与本实验中之其它首次用于实验的猴子比较，在末期中hMJ2-7v.2-11水平(及总IL-13水平)急剧降低，所以平均参数之计算法不包括该SC群中之一只动物。

星号(＊或＊＊＊)表示根据非成对斯氏t检验，该等经蛔虫攻击之动物的平均参数与首次用于实验之猴子的对应值显著不同(分别为p≤0.05或≤0.001)。

一般而言，本模型可足够表征该动物数据(图35A及表9)。残差均匀地分布，无显著系统性偏差(图35B)。首次用于实验之猴子(研究1)及经蛔虫攻击之猴子(研究2)的代表性拟合分别示于图35C及图35D中。然而，本整合性PK/PD模式并不能说明得自研究1之SC臂的第5号猴子体内hMJ2-7v.2-11及总的IL-13血清水平的急剧下降。因此，在该首次用于实验之动物环境中该等平均模型参数之计算并不包括得自第5号猴子的PK参数。

得自该首次用于实验之猴子及经蛔虫攻击之猴子的模型拟合之PK及PD参数摘述在表9中。未结合hMJ2-7v.2-11(CL_Ab)从该中央区室的清除率低(约0.013-0.015升/天)且首次用于实验之猴子及经蛔虫攻击之猴子之间该清除率类似。在首次用于实验之动物中，从hMJ2-7v.2-11/IL-13复合体该中央区室的清除率(CL_复合体)比CL_Ab低约5-6倍。在经蛔虫攻击之动物中，CL_复合体与CL_Ab类似。因此，在经蛔虫攻击之动物的CL_复合体比首次用于实验之猴子高约5倍。就首次用于实验之动物及经蛔虫攻击之动物而言，已发现该中央区室内之hMJ2-7v.2-11体积(V)与猕猴体内之平均血浆体积相似。然而，该等经蛔虫攻击之猴子体内之hMJ2-7v.2-11的V及分布清除率(CL_d，Ab)比首次用于实验之猴子明显更低。本结果与先前非区室分析所获得之经蛔虫攻击的猴子体内之分布体积的较低估算值(Vugmeyster等人，提交)一致。

该IL-13之中和作用系藉K_on及K_off(其系为hMJ2-7v.2-11及游离态IL-13之偶联速率常数/解偶联的速率常数)而控制。该平均K_on及K_off估算值分别为0.0896nM^-1天^-1及0.1630天^-1。可藉内源性IL-13合成速率(K_syn)与自该中央区室之IL-13的清除率(CL_IL-13)之比率而界定基线IL-13水平(Benincosa等人，J Pharmacol Exp Ther 2000；292(2)：810-6；Ng等人，Pharm Res 2006；23(1)：95-103；Mager等人，J Pharmacokinet Pharmacodyn2001；28(6)：507-32)。在首次用于实验之猴子中，该经估算之IL-13水平为约0.0115nM，但在经蛔虫攻击之猴子中高约3倍(约0.0346nM)(p＜0.001)。

使用该整合性PK-PD模型之平均参数估算值的模型模拟以预测hMJ2-7v.2-11施用后游离态hMJ2-7v.2-11-结合的IL-13之水平。这些模拟预测研究1(首次用于实验的)及研究2(于第1天经蛔虫攻击)中之总IL-13水平的短暂增加系由于hMJ2-7v.2-11 IV注射后，hMJ2-7v.2-11-结合的IL-13的增加，而游离态IL-13减少所致(图36A及图36B)。相对于首次用于实验之猴子(1毫克/千克)，由于使用较高剂量之hMJ2-7v.2-11(10毫克/千克)，所以在经蛔虫攻击之猴子体内的游离态IL-13似乎更急剧地减少。预测在该等经蛔虫攻击之猴子(研究2)中，在单次IV注射10毫克/千克之hMJ2-7v.2-11后约35天，游离态IL-13水平可维持于在首次用于实验之猴子体内之游离态IL-13水平的估算值或低于该估算值(亦即在0.0115nM以下)。当hMJ2-7v.2-11浓度接近约160nM时，预测经蛔虫攻击之猴子体内的游离态IL-13水平高于该首次用于实验之基线平均值。连同hMJ2-7v.2-11之清除，首次用于实验之猴子及经蛔虫攻击之猴子体内的游离态IL-13水平逐渐上升至对应的基线水平(其系由K_syn/CL_IL-13定义)。

在罹患假设性已确定之呼吸道炎症(亦即假定于第0天进行蛔虫攻击)之猴子体内，以不同IV剂量hMJ2-7v.2-11(1-50毫克/千克)模拟该IL-13中和作用的动力学。单次IV施用hMJ2-7v.2-11后，在首次用于实验的猴子及罹患已确定呼吸道炎症之猴子体内的预测游离态IL-13水平系示于图37A及图37B中。在首次用于实验的猴子及罹患已确定呼吸道炎症之猴子体内，游离态IL-13水平低于基线IL-13水平时的时间会随用于模拟之hMJ2-7v.2-11剂量而增加。然而，该等首次用于实验之猴子及罹患已确定呼吸道炎症之猴子的藉hMJ2-7v.2-11而进行IL-13中和作用之程度及持续时间似乎不同。例如对首次用于实验之猴子IV施用10毫克/千克剂量之hMJ2-7v.2-11后，迟至给药后第40天，大部分IL-13似乎是hMJ2-7v.2-11-结合的，且游离态IL-13水平＜0.001nM(或＜基线之7％)。反之，对罹患已确定呼吸道炎症之猴子IV施用10-毫克/千克剂量之hMJ2-7v.2-11后，游离态IL-13先下降至接近零水平，继而于第40天稳态上升至约0.008nM或基线之21％。

在本实施例中，开发了整合性抗体-配体结合PK-PD模型，其描述了在首次用于实验之猴子、及藉对猕猴进行蛔虫攻击而诱发急性呼吸道炎症之疾病模式中的IL-13及hMJ2-7v.2-11(其系为一种抗IL-13人源化IgG1抗体)之总血清浓度间之关系。由于缺乏具有足够灵敏性之生物分析方法，不能在hMJ2-7v.2-11存在或不存在下，直接测定游离态IL-13水平。因此，由于在首次用于实验之猴子及经蛔虫攻击之猴子体内，总IL-13水平会暂时增加，所以总IL-13水平作为PD标记。在假设hMJ2-7v.2-11可以以顺序方式结合一或两种IL-13分子的条件下，开发了本报告中所提供之模型。本假设系基于抗IL-13/IL-13相互作用之生理机制且不同于用于治疗性抗体之先前公开的整合性抗体-配体结合性PK-PD模型的那些机理，其中系假设1∶1或1∶2化学计量(Benincosa等人，Pharmacol Exp Ther2000；292(2)：810-6；Mager等人，J Pharmacokinet Pharmacodyn2001；28(6)：507-32；Ng等人，Pharm Res 2006；23(1)：95-103；Hayashi等人，Br J Clin Pharmacol 2007；63(5)：548-61；Chow等人，Clin Pharmacol Ther2002；71(4)：235-45)。

本实施例所提供之该新颖PK-PD模型可合适地说明首次用于实验及蛔虫攻击环境中的数据，且本模型可用于分析藉hMJ2-7v.2-11进行IL-13之中和作用的动力学。

藉该整合性PK/PD建模而估算之hMJ2-7v.2-11 PK参数与藉实施例21b中之非区室分析而估算之彼等参数一致。在猴子体内，hMJ2-7v.2-11具有低清除率及小分布体积，其通常为其它人源化IgG1治疗性蛋白质所发现之清除率及分布体积(Adams等人，Cancer Immunol Immunother2006；55(6)：717-27；Lin等人，J Pharmacol Exp Ther 1999；288(1)：371-8；Zia-Amirhosseini等人，J Pharmacol Exp Ther 1999；291(3)：1060-7)。该整合性PK/PD建模可进一步证实与首次用于实验之猴子比较，经蛔虫攻击之猴子体内的hMJ2-7v.2-11分布体积较小，其与非区室分析之结果一致。当与首次用于实验之猴子比较时，经蛔虫攻击之猴子体内的中央区室及，就某种程度而言，周边区室内hMJ2-7v.2-11的分布体积(分别为V及V₂)，以及这两区室间之hMJ2-7v.2-11的分布清除率(CL_d，Ab)降低。由于在宽剂量范围(1-100毫克/千克)内，在首次用于实验之猴子间，该hMJ2-7v.2-11之稳态分布体积(Vd_ss)类似，所以首次用于实验之猴子与经蛔虫攻击之猴子的hMJ2-7v.2-11分布体积之差异并不可能起因于所使用hMJ2-7v.2-11剂量之不同(就首次用于实验之猴子而言，1或2毫克/千克且就经蛔虫攻击之猴子而言，10毫克/千克)(实施例21b)。

就首次用于实验之猴子及经蛔虫攻击之猴子而言，该模型亦可说明在经蛔虫攻击之猴子及首次用于实验之猴子体内总IL-13水平的暂时增加系起因于hMJ2-7v.2-11-结合的IL-13增加，而游离态IL-13减少。导致游离态IL-13水平之减少的该IL-13之中和作用为hMJ2-7v.2-11之预定生物效果且与hMJ2-7v.2-11在减少该等经蛔虫攻击之猴子(研究2)的呼吸道炎症之观测效力以及在得自这些动物之血清中缺乏经IL-13介导的生物活性之事实一致。

该等PK-PK建模及模拟之结果表明该首次用于实验及经蛔虫攻击之环境间的IL-13中和作用有许多差异。在该等经蛔虫攻击之动物中，其基线IL-13水平经估算比首次用于实验之猴子高约3倍。本估算值与藉IL-13介导而在猕猴体内进行蛔虫攻击所诱发之急性呼吸道炎症的观念一致。在人类受试者(包括正常人类志愿者及患有各种疾病之受试者)体内，有宽范围之报告的基线IL-13水平(自＜10皮克/毫升至＞150皮克/毫升)，其系部分取决于用于该等测量之测定方法(Fiumara等人，Blood 2001；98(9)：2877-8；Wang等人，J Clin Virol 2006；37(1)：47-52)。一般而言，首次用于实验之猴子体内经估算的基线IL-13水平(约10皮克/毫升或约0.01nM)似乎高于健康人类。

在经蛔虫攻击之动物(研究2)体内，在IV注射10毫克/千克之hMJ2-7v.2-11后，游离态循环IL-13水平系维持在首次用于实验之猴子体内的平均游离态IL-13水平以下，持续约一个月。建模表明就特定剂量之hMJ2-7v.2-11而言，经hMJ2-7v.2-11介导之IL-13中和作用在该等首次用于实验之猴子及经蛔虫攻击之猴子体内的程度及持续时间不同。因此，当使用得自正常人类志愿者之PK-PD数据以设计罹患呼吸道炎症患者之临床研究时，应该谨慎。

值得注意的是游离态IL-13在标靶组织(肺)内之水平可以是藉治疗性蛋白质而进行IL-13中和作用之有效性的更直接指示。然而，需要维持抑阻猴于(及哮喘病人)之经蛔虫诱发的呼吸道炎症所需之组织(及循环性)IL-13的水平，以及中和作用之所需持续时间尚未知。在研究2中，动物体内之总IL-13水平低于BAL(支气管肺泡灌洗)流体中所检测量之限值(并未显示数据)，因此不可能在该组织区室内获得PD读数。

总括地说，开发了新颖PK-PD模型，其描述了在首次用于实验之猴子及经蛔虫攻击之猴子体内IL-13与hMJ2-7v.2-11的总血清浓度间的关系。该模型对IL-13中和作用之预测结果如下：(1)在该蛔虫攻击后，经估算之循环IL-13水平增加约3倍，其符合经蛔虫诱发之急性呼吸道炎症可经IL-13介导的说法；(2)首次用于实验之猴子及经蛔虫攻击之猴子体内所观测总IL-13水平之暂时增加系起因于IV注射hMJ2-7v.2-11后，hMJ2-7v.2-11结合的IL-13之增加且游离态IL-13减少；及(3)当使用相同的hMJ2-7v.2-11给药方案以进行模拟时，在首次用于实验及呼吸道炎症环境之体内循环中IL-13中和作用的程度及持续时间不同。然而，必须小心诠释本预测结果，因为该模型并未说明IL-13在肺(亦即标靶器官)中之中和作用。在不能够直接轻易地分析游离态配体(诸如细胞因子或生长因子)但是总配体水平随药物施用方式而不同的情况下，可使用本实施例中所提供之该PK-PD模型以研究其它治疗性蛋白质之药物-配体相互作用。描述在本报告中之该等健康及药理学-模式环境间之藉治疗性蛋白质而进行的配体中和作用之差异可阐明若实际上可行，在这两种环境内进行临床前PK-PD研究的重要性。

实施例21b.人源化抗IL-13抗体在首次用于实验之猕猴及经蛔虫攻击之猕猴中的药物动力学及药效学建模(“化学计量模型”)

在使用实施例21a中所述之“顺序”整合性PK-PD模型以进行PK-PD建模前，利用“化学计量”PK-PD模型以分析对未经攻击猴子IV注射1毫克/千克之hMJ2-7v.2-11后hMJ2-7v.2-11 PK-PD的图谱(表8，研究1)。用于建模之该hMJ2-7v.2-11 PK浓度及总IL-13浓度数据组系得自表8内所述之研究1并使用实施例21a中所述之生物分析方法而获得。

该“化学计量”PK-PD模型为该IL-13-hMJ2-7v.2-11复合体假设2对1化学计量法，亦即一抗体分子结合至两个结合的IL-13分子。该化学计量模型与假设1∶1或2∶1化学计量之先前公开模型相似(Benincosa等人，JPharmacol Exp Ther 2000；292(2)：810-6；Mager等人，J PharmacokinetPharmacodyn 2001；28(6)：507-32；Ng等人，Pharm Res 2006；23(1)：95-103；Hayashi等人，Br J Clin Pharmacol 2007；63(5)：548-61；Chow等人，ClinPharmacol Ther 2002；71(4)：235-45)。

特别地，系使用WinNonlin软件V 5.1.1(Pharsight，Mountain View，CA)以开发可说明hMJ2-7v.2-11及总IL-13之观测血清浓度间之关系的整合性“化学计量”药物动力学及药效学模型(图41)。使用包括中央区室(C_Ab，V)及周边区室(C_2，Ab，V₂)之双区室模型以评估hMJ2-7v.2-11之药物动力学。CL_d，Ab代表这两区室间之分布清除率。假定hMJ2-7v.2-11之清除(CL_Ab)仅经由该中央区室。以内源IL-13之中和作用表征hMJ2-7v.2-11之药效学。基于IgG之二价特性，该模型假设各hMJ2-7v.2-11分子以结合(K_on)及解离(K_off)速率常数同时结合两个IL-13分子。K_on为控制hMJ2-7v.2-11/(IL-13)₂(Ab-IL-13)复合体形成之3级速率常数，而K_off为控制Ab-IL-13复合体之解离作用的1级速率常数。CL_复合体代表Ab-IL-13复合体之血清清除率。已假定IL-13之稳态可藉IL-13产生(零级，K_syn)及降解作用(CL_IL-13)而调节。亦使用以下假设(其与实施例21a之假设类似)：为了模型精简：V_抗-IL-13＝V_复合体＝V_IL-13＝V，使该整合性PK/PD模型与得自3只首次用于实验之动物的个别PK-PD数据拟合。该代表性拟合系示于图32A。

如来自该“化学计量”PK-PD模型，对首次用于实验(未经攻击)之猕猴IV注射1毫克/千克剂量后，hMJ2-7v.2-11之PK-PD参数示于表10内。

表10.得自未经攻击之猕猴体内之人源化MJ2-7v.2-11及IL-13处置的化学计量PK-PD模型之平均参数估算值

参数	估算值	SD	CV％
				CL_Ab(升天^-1)	0.016	0.001	8.8
V_Ab(升)	0.196	0.026	13.1
				CLd_Ab(升天^-1)	0.336	0.313	93.0
V2_Ab(升)	0.147	0.027	18.5
				K_ON(nM^-2天^-1)	0.202	0.157	77.8
CL_复合体(升天^-1)	0.000	0.000	11.7
				K_SYN(nmol天^-1)	0.097	0.025	26.1
K_deg(升天^-1)	2.405	1.028	42.8
				K_OFF(升天^-1)	0.032	0.036	113.5

利用该WinNonlin软件V 5.1.1(Pharsight，Mountain View，CA)，使用表10内所述之平均模型参数以模拟游离态IL-13及抗IL-13-结合的IL-13之水平。

一般而言，对首次用于实验之猴子IV注射单次1毫克/千克剂量后，该等游离态及抗IL-13结合的IL-13之模拟结果与“化学计量”(本实施例)及“顺序”模型(实施例21a)之彼等模拟结果类似。如第41图所示，该“化学计量”模型预测了对首次用于实验之猴子IV注射1毫克/千克之人源化MJ2-7v.2-11后，总IL-13水平之暂时增加。抗IL-13抗体施用后，大部分IL-13系与人源化MJ2-7v.2-11抗体复合。因此，该化学计量模型之结果与顺序模型之结果(实施例21a)一致且提示总IL-13所观测之暂时增加系起因于IL-13/抗IL-13抗体复合体水平增加及游离态IL-13水平减少。

也使用该化学计量模型以拟合得自经蛔虫攻击之猴子的PK-PD(表8内之研究2)，获得一组PK-PD参数，然后模拟对经蛔虫攻击之猴子IV注射1毫克/千克剂量后游离态、结合的抗IL-13、及总IL-13水平。这些模拟之结果示于图41。与首次用于实验之猴子的模拟结果类似，该“化学计量”PK-PD模型预测总IL-13所观测之暂时增加系起因于IL-13/抗IL-13抗体复合物水平增加及游离态IL-13水平减少(图42)。

实施例22：在人类受试者体内变应原攻击研究中有效的人源化13.2v2 抗体

研究设计：在多中心之双盲、安慰剂对照性平行组试验中以一周为间隔，使罹患轻度过敏性哮喘及对变应原攻击(AC)有双重呼吸道反应之受试者随机接受两次皮下施用之2毫克/千克剂量人源化抗IL-13抗体(13.2v2，(n-14))或安慰剂(n＝13)。在施用第一次剂量后2周(第14天)及5周(第35天)进行AC。于各AC下测定对乙酰甲基胆碱之经变应原诱发的早期(EAR)及晚期(LAR)哮喘反应与呼吸道高反应性。在该研究从头至尾评估安全性、耐受性及药物动力学(PK)。

结果及讨论：人源化抗IL-13抗体13.2v2具良好耐药性且不与任何其它严重的不利事件(血液学、化学或生命征象之变化)有关。在抗体13.2v2及安慰剂对照组中的不利事件频率类似。

选择罹患轻度特应性哮喘之人类受试者以进行该研究。选择14位患者以接受抗IL-13抗体，13位患者接受安慰剂。变应原攻击后，于7小时内各时间点测定各患者体内之FEV1的变化百分比。FEV1(在第一秒内之用力呼气量)为深呼吸后，在一秒内可强迫驱离之空气体积，其系为肺机能之重要度量。FEV1之负变化表示肺机能的降低。

在筛选访视(抗体之第一次施用前两周)当天使该等患者经变应原(Ag)攻击。进行该变应原攻击并在变应原攻击后，于7小时内各时间点下测定各患者之FEV1的变化百分比。结果以随时间FEV1之平均值(其包括标准误(STERR))示于图44中。在该筛选期内，这两组患者对该变应原攻击之反应类似。

两周后，对该等患者皮下施用2毫克/千克之抗体(或安慰剂对照)。一周后，再对该等患者皮下施用2毫克/千克剂量抗体。

在该研究之约第14天(第一次施用抗体后两周)达到最高血浆浓度。

在第14天，进行变应原攻击并在变应原攻击后，于7小时内各时间点下测定各患者之FEV1的变化百分比。该研究之结果以经过一段时间后，FEV1之平均值(其包括标准误(STERR))示于图45。如图中所示，于所测试之所有时间点下，已接受该13.2v2抗体之受试者的FEV1变化百分比低于经安慰剂处理之对照受试者。就早期哮喘反应(EAR；攻击后0-3小时，p＝0.042)而言，FEV1变化百分比的差异具统计学显著性且就晚期哮喘反应(LAR；攻击后3-7小时，时间点而言，几乎达到统计学显著性(p＝0.095))。亦在第14天，测定该曲线下之面积(AUC)，且与安慰剂比较，该13.2v2抗体显著地抑制EAR及LAR之面积(EAR AUC_0-3h：46.3抑制％对安慰剂，p＝0.030；LAR AUC_3-7h：49.0抑制％对安慰剂，p＝0.039)。

在第35天(相对于第一次施用抗体的当天)进行变应原攻击后，亦于7小时内各时间点测定FEV1之变化百分比。该研究之结果以经过一段时间后FEV1之平均值(其包括标准误(STERR))示于图46内。如该图中所示，与该等经安慰剂处理之对照组受试者比较，于测试之所有时间点下，接受该抗体之受试者之FEV1变化百分比较低。可发现该早期哮喘反应(EAR；攻击后0-3小时)及晚期哮喘反应(LAR；攻击后3-7小时)时间点的FEV1变化百分比有差异，且在第14天持续该差异趋势。亦在第35天测定该曲线(AUC)下之面积。于第5周(第35天)下之该EAR及LAR的面积之抑制作用有类似的趋势，然而其并未达到统计学显著性(就两者而言，p＝0.13)。

在第14天及第35天之该13.2v2抗体的血清浓度(纳克/毫升)示于图47。

于本研究之第14天及第35天，晚期(LAR)及早期(EAR)之FEV1的最大下降百分比及AUC下降百分比之重复测定及统计学分析的结果示于图48。该等差异(Diff)系以该13.2v2抗体(AB)组之测定值减该安慰剂(PBO)组之测定值(AB-PBO)表示。亦提供P值(P-Val)。统计学显著性系由星号(＊)表示。亦提供该统计学的95％置信区间(CI)。

亦于第14及35天测定该抗体影响对乙酰甲基胆碱之经变应原诱发的高反应之能力。在该第14及35天中之任一天的本参数并无影响。

结论：于第14天，经变应原诱发之EAR及LAR可藉抗体13.2v2而显著抑制，其亦符合最高血浆PK水平之事实。这些数据证明IL-13对于人类之早期及晚期经变应原诱发的支气管收缩具有重要作用。

实施例23：人类受试者体内之抗体13.2v2的PK图谱

测定人类患者体内之13.2v2的PK图谱。在一段时间(天)内测定血清抗体浓度(纳克/毫升)。皮下施用4毫克/千克单一上升剂量(SAD)之该抗体或分隔一周，施用两次2mg/千克剂量以进行变应原攻击(AC)研究。其结果示于图49。

该抗体之半衰期为约23-29天。

实施例24：人类体内之抗体13.2v2药物动力学及产物代谢作用

药物动力学数据系得自SAD研究A中之罹患轻度哮喘的非亚洲患者，及SAD研究B中之健康日本人与非亚洲志愿者。除了在研究A中另外IV注射3毫克/千克剂量不同外，这两种SAD研究具有类似设计，亦即4组SC注射0.3、1、2及4毫克/千克之13.2v2剂量。测定研究A中之轻度哮喘病非亚洲人病人及研究B中之非亚洲志愿者之13.2v2的平均(SD)血清浓度-时间图谱。两种研究中之13.2v2之药物动力学图谱一致且自0.3毫克/千克至4毫克/千克是平行的。

在日本及外国受试者体内之血清13.2v2数据的非区室分析

使用模型独立的非区室方法以分析研究A及研究B中之血清13.2v2浓度-时间数据。有关于研究A之13.2v2之非区室药物动力学参数的概括统计资料提供在表11内，而研究B之彼等数据提供在表12内。

表11：研究A中之PK参数的概括统计学资料

表12：研究B中之PK参数的概括统计学资料

由于这两种研究使用体重标准化13.2v2给药法，所以体重较重之受试者接受较高剂量之13.2v2。体重对13.2v2暴露量之影响在图50及51中之图解评估。

在图50中，藉这两种研究中之所有81位受试者的各毫克/千克剂量而标准化之AUC暴露量似乎与体重正相关，其提示暴露量之差异与体重差异有关。

在图51中，藉实际剂量而标准化之暴露量似乎在所有81位患者的所有剂量范围内是一致的，其提示体重并非影响13.2v2暴露量之重要因素。此外，当比较图52之轻度哮喘病美国受试者及健康的日本与美国受试者之藉实际剂量而标准化之暴露量时，每单位13.2v2剂量之该13.2v2 AUC独立于毫克/千克剂量且在研究A与B之间是一致的。其表明13.2v2暴露量大概会随该剂量增加而增加，且种族渊源及轻度哮喘之存在皆不会显著地影响13.2v2暴露量。此外，每单位13.2v2 SC剂量之该13.2V2 AUC接近每单位IV剂量之该13.2V2 AUC，其提示在SC施用后，13.2v2几乎完全全身性吸收。

在日本及外国受试者体内13.2v2暴露量数据的群体药物动力学分析

除了该非区室分析外，使用根据以NONMEN软件包实现之非线性混合作用药物统计学模型的群体药动力学方法，组合并分析研究A及B中之血清13.2v2浓度数据。虽然藉非区室分析而来自不同剂量水平的PK暴露量及参数系基于少量受试者(5至8位)，但是预期该平均值及变量之估算点可在剂量之间不等且容易碰巧发现试验结果。相较之下，群体分析利用该混合作用模型方法优点，提供系统性架构以检查在日本人及非亚洲人群体内13.2v2暴露量及所有剂量间的潜在重要协变量。就检测重要协变量而言，该群体方法之灵敏性高于非区室方法。

该群体PK分析系使用NONMEM VI版中NONMEN PREDD文库常规的TRANS3与ADVAN3。在该模型建构及协变量分析方法从头至尾皆使用具有η-ε之一级条件估算法。该方法可确定由双区室结构PK模型组元及组合性比例及加性误差模型组元所组成之最佳基本群体PK模型。根据该基本群体PK模型以进行协变量分析。以潜在协变量评估体重、体表面积、种族渊源及轻度哮喘之存在/健康状态，且发现这些因素皆不会以统计学上显著性方式影响13.2v2血清暴露量。该基线及最佳群体PK模型参数列示在表13中。

表13：根据该基线及最佳模型之13.2v2群体PK参数

参数	单位	典型值±SE
			CL	升/小时	0.0058±0.00056
V₁	升	2.82±0.30
			Q	升/小时	0.0239±0.0028
V₂	L	2.00±0.22
			F₁	--	0.805±0.081

			CL之协方差	--	0.076±0.012
V₁之协方差	--	0.146±0.031

Q之协方差	--	0.345±0.061
			V₂之协方差	--	0.084±0.030
比例误差(方差)	--	0.0238±0.0030
			相加误差(方差)	纳克/毫升	2390±1240

附注：该群体PK模型系根据得自研究A及研究B之13.2v2暴露量数据而制订。

如藉该13.2v2之基线及最佳群体PK模型之Postier预测检查而测定，该最终模型充分地描述了这两种研究中之血清13.2v2观测结果。而且，来自该群体分析之PK参数与来自该等非区室分析之彼等参数一致。

根据该最佳群体PK模型，进行一系列模拟以比较体重分别为50千克、75千克及130千克之典型受试者中3毫克/千克剂量对225毫克固定剂量(就75千克之受试者而言，剂量为3毫克/千克)之13.2v2暴露量及相关变异性。测定在这些典型受试者体内之预测的13.2v2暴露量的90％置信区间。在这些具不同体重之受试者体内，固定剂量可产生一致性13.2v2暴露量，而毫克/千克剂量可在体重较重之受试者体内产生较高13.2v2暴露量，在体重较轻的受试者体内产生较低13.2v2暴露量。当将这些受试者合并在一起时，如招收具各种体重之受试者之任何临床研究中所预测，该毫克/千克给药导致之变异性高于固定剂量。

·研究A及研究B中之药物动力学研究结果的摘述

·在哮喘病美国受试者及健康的日本及美国受试者体内，13.2v2暴露量随自0.3毫克至4毫克/千克之剂量增量而增加；

·种族渊源并不会影响13.2v2药物动力学特性，在日本受试者体内之13.2v2暴露量与接受相同剂量之非亚洲受试者体内之13.2v2暴露量类似；

·体重并不会影响13.2v2药物动力学特性，因此，固定剂量优于毫克/千克剂量且可得到较低暴露量变异性；

·由于健康状态或罹患轻度哮喘并不会影响13.2v2药物动力学，所以在健康的日本人及非亚洲人体内之13.2v2暴露量与在哮喘病美国患者体内之13.2v2暴露量类似。

本领域技术人员将认识到或仅使用例行实验法可确定文中所述特定实施方案之许多等同方案。其它实施方案在以下权利要求范围内。

序列表

<110>惠氏公司

<120>用于治疗和监测IL-13相关病症的方法和组合物

<130>W2023-7007WO

<150>US 60/925,932

<151>2007-04-23

<150>US 60/926,078

<151>2007-04-23

<160>224

<170>FastSEQ for Windows Version 4.0

<210>1

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<213>人工序列

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<223>合成产生的肽

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<223>合成产生的肽

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Phe Val Lys Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly

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<210>14

<211>112

<212>PRT

<213>猕猴

<400>14

Ser Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Lys Glu Leu Ile Glu Glu Leu

1 5 10 15

Val Asn Ile Thr Gln Asn Gln Lys Ala Pro Leu Cys Asn Gly Ser Met

20 25 30

Val Trp Ser Ile Asn Leu Thr Ala Gly Val Tyr Cys Ala Ala Leu Glu

35 40 45

Ser Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala Ile Glu Lys Thr Gln Arg

50 55 60

Met Leu Asn Gly Phe Cys Pro His Lys Val Ser Ala Gly Gln Phe Ser

65 70 75 80

Ser Leu Arg Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu Val Ala Gln Phe Val Lys

85 90 95

Asp Leu Leu Val His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly Gln Phe Asn

100 105 110

<210>15

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>15

Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr Ile His

1 5 10

<210>16

<211>17

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>16

Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210>17

<211>11

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>17

Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

1 5 10

<210>18

<211>16

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>18

Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu

1 5 10 15

<210>19

<211>7

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>19

Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser

1 5

<210>20

<211>9

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>20

Phe Gln Gly Ser His Ile Pro Tyr Thr

1 5

<210>21

<211>16

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>1

<223>Xaa＝Arg或Lys

<220>

<221>变体

<222>6

<223>Xaa＝Leu或Ile

<220>

<221>变体

<222>7

<223>Xaa＝Lys或Val

<220>

<221>变体

<222>16

<223>Xaa＝Glu，Asp，Asn，Gln，Tyr，Ala或ser

<400>21

Xaa Ser Ser Gln Ser Xaa Xaa His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Xaa

1 5 10 15

<210>22

<211>7

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>2

<223>Xaa＝Leu或Val

<220>

<221>变体

<222>4

<223>Xaa＝Asn或Tyr

<400>22

Lys Xaa Ser Xaa Arg Phe Ser

1 5

<210>23

<211>7

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>3

<223>Xaa＝Gly，Ser或Ala

<220>

<221>变体

<222>4

<223>Xaa＝Ser，Ile或Thr

<220>

<221>变体

<222>5

<223>Xaa＝His，Glu或Gln

<220>

<221>变体

<222>6

<223>Xaa＝Ile或Leu

<400>23

Phe Gln Xaa Xaa Xaa Xaa Pro

1 5

<210>24

<211>132

<212>PRT

<213>猕猴

<400>24

Met Ala Leu Leu Leu Thr Met Val Ile Ala Leu Thr Cys Leu Gly Gly

1 5 10 15

Phe Ala Ser Pro Ser Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Lys Glu Leu

20 25 30

Ile Glu Glu Leu Val Asn Ile Thr Gln Asn Gln Lys Ala Pro Leu Cys

35 40 45

Asn Gly Ser Met Val Trp Ser Ile Asn Leu Thr Ala Gly Val Tyr Cys

50 55 60

Ala Ala Leu Glu Ser Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala Ile Glu

65 70 75 80

Lys Thr Gln Arg Met Leu Asn Gly Phe Cys Pro His Lys Val Ser Ala

85 90 95

Gly Gln Phe Ser Ser Leu Arg Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu Val Ala

100 105 110

Gln Phe Val Lys Asp Leu Leu Val His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu

115 120 125

Gly Gln Phe Asn

130

<210>25

<211>16

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>1

<223>Xaa＝Arg或Lys

<220>

<221>变体

<222>6

<223>Xaa＝Leu或Ile

<220>

<221>变体

<222>7

<223>Xaa＝Lys或Val

<220>

<221>变体

<222>10

<223>Xaa＝Asn或Asp

<220>

<221>变体

<222>13

<223>Thr或Asn

<220>

<221>变体

<222>16

<223>Xaa＝Glu，Asp，Asn，gln，Tyr，Ala或Ser

<400>25

Xaa Ser Ser Gln Ser Xaa Xaa His Ser Xaa Gly Asn Xaa Tyr Leu Xaa

1 5 10 15

<210>26

<211>16

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>1

<223>Xaa＝Arg或Lys

<220>

<221>变体

<222>6

<223>Xaa＝Leu或Ile

<220>

<221>变体

<222>7

<223>Xaa＝Lys或Val

<220>

<221>变体

<222>10

<223>Xaa＝Asn或Asp

<220>

<221>变体

<222>13

<223>Xaa＝Thr或Asn

<400>26

Xaa Ser Ser Gln Ser Xaa Xaa His Ser Xaa Gly Asn Xaa Tyr Leu Glu

1 5 10 15

<210>27

<211>7

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>2

<223>Xaa＝Leu，Val或Ile

<220>

<221>变体

<222>4

<223>Xaa＝Asn或Tyr

<220>

<221>变体

<222>5

<223>Xaa＝Arg或Trp

<220>

<221>变体

<222>6

<223>Xaa＝Phe或Asp

<400>27

Lys Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Ser

1 5

<210>28

<211>6

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>2

<223>Xaa＝Gly，Ser或Ala

<220>

<221>变体

<222>3

<223>Xaa＝Ser或Thr

<220>

<221>变体

<222>4

<223>Xaa＝His，Glu或Gln

<400>28

Gln Xaa Xaa Xaa Ile Pro

1 5

<210>29

<211>9

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>3

<223>Xaa＝Gly，Ser或Ala

<220>

<221>变体

<222>4

<223>xaa＝Ser，Ile或Thr

<220>

<221>变体

<222>5

<223>Xaa＝His，Glu或Gln

<220>

<221>变体

<222>6

<223>Xaa＝Ile或Leu

<400>29

Phe Gln Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Tyr Thr

1 5

<210>30

<211>102

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>30

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

85 90 95

Ser His Ile Pro Tyr Thr

100

<210>31

<211>102

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>31

Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

85 90 95

Ser His Ile Pro Tyr Thr

100

<210>32

<211>102

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>32

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

85 90 95

Ser His Ile Pro Tyr Thr

100

<210>33

<211>102

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>33

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Pro

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

85 90 95

Ser His Ile Pro Tyr Thr

100

<210>34

<211>102

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>34

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

85 90 95

Ser His Ile Pro Tyr Thr

100

<210>35

<211>102

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>35

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Ser Pro Val Thr Leu Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Pro

35 40 45

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

85 90 95

Ser His Ile Pro Tyr Thr

100

<210>36

<211>102

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>36

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile

65 70 75 80

Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

85 90 95

Ser His Ile Pro Tyr Thr

100

<210>37

<211>102

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>37

Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Tyr Ser

20 25 30

Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

85 90 95

Ser His Ile Pro Tyr Thr

100

<210>38

<211>102

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>38

Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

85 90 95

Ser His Ile Pro Tyr Thr

100

<210>39

<211>100

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>24

<223>Xaa＝Arg或Lys

<220>

<221>变体

<222>29

<223>Xaa＝Leu或Ile

<220>

<221>变体

<222>30

<223>Xaa＝Lys或Val

<220>

<221>变体

<222>33

<223>Xaa＝Asn或Asp

<220>

<221>变体

<222>36

<223>Xaa＝Thr或Asn

<220>

<221>变体

<222>39

<223>Xaa＝Glu，Asp，Asn，Gln，Tyr，Ala或Ser

<220>

<221>变体

<222>56

<223>Xaa＝Leu，Val或Ile

<220>

<221>变体

<222>58

<223>Xaa＝Asn或Tyr

<220>

<221>变体

<222>59

<223>Xaa＝Arg或Trp

<220>

<221>变体

<222>60

<223>Xaa＝Phe或Asp

<220>

<221>变体

<222>96

<223>Xaa＝Gly，Ser或Ala

<220>

<221>变体

<222>97

<223>Xaa＝Ser，Ile或Thr

<220>

<221>变体

<222>98

<223>Xaa＝His，Glu或Gln

<220>

<221>变体

<222>99

<223>Xaa＝Ile或Leu

<400>39

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Xaa Ser Ser Gln Ser Xaa Xaa His Ser

20 25 30

Xaa Gly Asn Xaa Tyr Leu Xaa Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Xaa

85 90 95

Xaa Xaa Xaa Pro

100

<210>40

<211>100

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>24

<223>Xaa＝Arg或Lys

<220>

<221>变体

<222>29

<223>Xaa＝Leu或Ile

<220>

<221>变体

<222>30

<223>Xaa＝Lys或Val

<220>

<221>变体

<222>33

<223>Xaa＝Asn或Asp

<220>

<221>变体

<222>36

<223>Xaa＝Thr或Asn

<220>

<221>变体

<222>39

<223>Xaa＝Glu，Asp，Asn，Gln，Tyr，Ala或Ser

<220>

<221>变体

<222>56

<223>Xaa＝Leu，Val或Ile

<220>

<221>变体

<222>58

<223>Xaa＝Asn或Tyr

<220>

<221>变体

<222>59

<223>Xaa＝Arg或Trp

<220>

<221>变体

<222>60

<223>Xaa＝Phe或Asp

<220>

<221>变体

<222>(96)...(0)

<223>Xaa＝Gly，Ser或Ala

<220>

<221>变体

<222>97

<223>Xaa＝Ser，Ile或Thr

<220>

<221>变体

<222>98)

<223>Xaa＝His，Glu或Gln

<220>

<221>变体

<222>99

<223>Xaa＝Ile或Leu

<400>40

Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Xaa Ser Ser Gln Ser Xaa Xaa His Ser

20 25 30

Xaa Gly Asn Xaa Tyr Leu Xaa Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Lys Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Xaa

85 90 95

Xaa Xaa Xaa Pro

100

<210>41

<211>100

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>24

<223>Xaa＝Arg或Lys

<220>

<221>变体

<222>29

<223>Xaa＝Leu或Ile

<220>

<221>变体

<222>30

<223>Xaa＝Lys或Val

<220>

<221>变体

<222>33

<223>Xaa＝Asn或Asp

<220>

<221>变体

<222>36

<223>Xaa＝Thr或Asn

<220>

<221>变体

<222>39

<223>Xaa＝Glu，Asp，Asn，Gln，Tyr，Ala或Ser

<220>

<221>变体

<222>56

<223>Xaa＝Leu，Val或Ile

<220>

<221>变体

<222>58

<223>Xaa＝Asn或Tyr

<220>

<221>变体

<222>59

<223>Xaa＝Arg或Trp

<220>

<221>变体

<222>60

<223>Xaa＝Phe或Asp

<220>

<221>变体

<222>96

<223>Xaa＝Gly，Ser或Ala

<220>

<221>变体

<222>97

<223>Xaa＝Ser，Ile或Thr

<220>

<221>变体

<222>98

<223>Xaa＝His，Glu或Gln

<220>

<221>变体

<222>99

<223>Xaa＝Ile或Leu

<400>41

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Xaa Ser Ser Gln Ser Xaa Xaa His Ser

20 25 30

Xaa Gly Asn Xaa Tyr Leu Xaa Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Xaa

85 90 95

Xaa Xaa Xaa Pro

100

<210>42

<211>100

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>24

<223>Xaa＝Arg或Lys

<220>

<221>变体

<222>29

<223>Xaa＝Leu或Ile

<220>

<221>变体

<222>30

<223>Xaa＝Lys或Val

<220>

<221>变体

<222>33

<223>Xaa＝Asn或Asp

<220>

<221>变体

<222>36

<223>Xaa＝Thr或Asn

<220>

<221>变体

<222>39

<223>Xaa＝Glu，Asp，Asn，Gln，Tyr，Ala或Ser

<220>

<221>变体

<222>56

<223>Xaa＝Leu，Val或Ile

<220>

<221>变体

<222>58

<223>Xaa＝Asn或Tyr

<220>

<221>变体

<222>59

<223>Xaa＝Arg或Trp

<220>

<221>变体

<222>60

<223>Xaa＝Phe或Asp

<220>

<221>变体

<222>96

<223>Xaa＝Gly，Ser或Ala

<220>

<221>变体

<222>97

<223>Xaa＝Ser，Ile或Thr

<220>

<221>变体

<222>98

<223>Xaa＝His，Glu或Gln

<220>

<221>变体

<222>99

<223>Xaa＝Ile或Leu

<400>42

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Xaa Ser Ser Gln Ser Xaa Xaa His Ser

20 25 30

Xaa Gly Asn Xaa Tyr Leu Xaa Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Pro

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Xaa

85 90 95

Xaa Xaa Xaa Pro

100

<210>43

<211>100

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>24

<223>Xaa＝Arg或Lys

<220>

<221>变体

<222>29

<223>Xaa＝Leu或Ile

<220>

<221>变体

<222>30

<223>Xaa＝Lys或Val

<220>

<221>变体

<222>33

<223>Xaa＝Asn或Asp

<220>

<221>变体

<222>36

<223>Xaa＝Thr或Asn

<220>

<221>变体

<222>39

<223>Xaa＝Glu，Asp，Asn，Gln，Tyr，Ala或Ser

<220>

<221>变体

<222>56

<223>Xaa＝Leu，Val或Ile

<220>

<221>变体

<222>58

<223>Xaa＝Asn或Tyr

<220>

<221>变体

<222>59

<223>Xaa＝Arg或Trp

<220>

<221>变体

<222>60

<223>Xaa＝Phe或Asp

<220>

<221>变体

<222>96

<223>Xaa＝Gly，Ser或Ala

<220>

<221>变体

<222>97

<223>Xaa＝Ser，Ile或Thr

<220>

<221>变体

<222>98

<223>Xaa＝His，Glu或Gln

<220>

<221>变体

<222>99

<223>Xaa＝Ile或Leu

<400>43

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Xaa Ser Ser Gln Ser Xaa Xaa His Ser

20 25 30

Xaa Gly Asn Xaa Tyr Leu Xaa Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Xaa

85 90 95

Xaa Xaa Xaa Pro

100

<210>44

<211>100

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>24

<223>Xaa＝Arg或Lys

<220>

<221>变体

<222>29

<223>Xaa＝Leu或Ile

<220>

<221>变体

<222>30

<223>Xaa＝Lys或Val

<220>

<221>变体

<222>33

<223>Xaa＝Asn或Asp

<220>

<221>变体

<222>36

<223>Xaa＝Thr或Asn

<220>

<221>变体

<222>39

<223>Xaa＝Glu，Asp，Asn，Gln，Tyr，Ala或Ser

<220>

<221>变体

<222>56

<223>Xaa＝Leu，Val或Ile

<220>

<221>变体

<222>58

<223>Xaa＝Asn或Tyr

<220>

<221>变体

<222>59

<223>Xaa＝Arg或Trp

<220>

<221>变体

<222>60

<223>Xaa＝Phe或Asp

<220>

<221>变体

<222>96

<223>Xaa＝Gly，Ser或Ala

<220>

<221>变体

<222>97

<223>Xaa＝Ser，Ile或Thr

<220>

<221>变体

<222>98

<223>Xaa＝His，Glu或Gln

<220>

<221>变体

<222>99

<223>Xaa＝Ile或Leu

<400>44

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Ser Pro Val Thr Leu Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Xaa Ser Ser Gln Ser Xaa Xaa His Ser

20 25 30

Xaa Gly Asn Xaa Tyr Leu Xaa Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Pro

35 40 45

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Xaa

85 90 95

Xaa Xaa Xaa Pro

100

<210>45

<211>100

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>24

<223>Xaa＝Arg或Lys

<220>

<221>变体

<222>29

<223>Xaa＝Leu或Ile

<220>

<221>变体

<222>30

<223>Xaa＝Lys或Val

<220>

<221>变体

<222>33

<223>Xaa＝Asn或Asp

<220>

<221>变体

<222>36

<223>Xaa＝Thr或Asn

<220>

<221>变体

<222>39

<223>Xaa＝Glu，Asp，Asn，Gln，Tyr，Ala或Ser

<220>

<221>变体

<222>56

<223>Xaa＝Leu，Val或Ile

<220>

<221>变体

<222>58

<223>Xaa＝Asn或Tyr

<220>

<221>变体

<222>59

<223>Xaa＝Arg或Trp

<220>

<221>变体

<222>60

<223>Xaa＝Phe或Asp

<220>

<221>变体

<222>96

<223>Xaa＝Gly，Ser或Ala

<220>

<221>变体

<222>97

<223>Xaa＝Ser，Ile或Thr

<220>

<221>变体

<222>98

<223>Xaa＝His，Glu或Gln

<220>

<221>变体

<222>99

<223>Xaa＝Ile或Leu

<400>45

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Xaa Ser Ser Gln Ser Xaa Xaa His Ser

20 25 30

Xaa Gly Asn Xaa Tyr Leu Xaa Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Ser Gly Val Pro

50 55 60

Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile

65 70 75 80

Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gln Xaa

85 90 95

Xaa Xaa Xaa Pro

100

<210>46

<211>100

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>24

<223>Xaa＝Arg或Lys

<220>

<221>变体

<222>29

<223>Xaa＝Leu或Ile

<220>

<221>变体

<222>30

<223>Xaa＝Lys或Val

<220>

<221>变体

<222>33

<223>Xaa＝Asn或Asp

<220>

<221>变体

<222>36

<223>Xaa＝Thr或Asn

<220>

<221>变体

<222>39

<223>Xaa＝Glu，Asp，Asn，Gln，Tyr，Ala或Ser

<220>

<221>变体

<222>56

<223>Xaa＝Leu，Val或Ile

<220>

<221>变体

<222>58

<223>Xaa＝Asn或Tyr

<220>

<221>变体

<222>59

<223>Xaa＝Arg或Trp

<220>

<221>变体

<222>60

<223>Xaa＝Phe或Asp

<220>

<221>变体

<222>96

<223>Xaa＝Gly，Ser或Ala

<220>

<221>变体

<222>97

<223>Xaa＝Ser，Ile或Thr

<220>

<221>变体

<222>98

<223>Xaa＝His，Glu或Gln

<220>

<221>变体

<222>99

<223>Xaa＝Ile或Leu

<400>46

Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Xaa Ser Ser Gln Ser Xaa Xaa His Ser

20 25 30

Xaa Gly Asn Xaa Tyr Leu Xaa Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Xaa

85 90 95

Xaa Xaa Xaa Pro

100

<210>47

<211>11

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>47

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

1 5 10

<210>48

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>2

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>3

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>9

<223>Xaa＝Met或Ile

<400>48

Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr Tyr Xaa His

1 5 10

<210>49

<211>17

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>1

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>5

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>12

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>13

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>49

Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210>50

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>50

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>51

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>51

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>52

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>52

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asn Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>53

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>53

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>54

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>54

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>55

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>55

Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Thr Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Ala Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Arg Ser Met Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>56

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>56

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>57

<211>107

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>57

Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Thr

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Arg Gln Arg Leu Glu Trp Ile Gly Arg

35 40 45

Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe Gln Gly

50 55 60

Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Met Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu

65 70 75 80

Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala

85 90 95

Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>58

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>58

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>59

<211>110

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>59

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Asp Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105 110

<210>60

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>60

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>61

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>61

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Thr Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>62

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>62

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr His Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>63

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>63

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>64

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>64

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>65

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>65

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>66

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>66

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>67

<211>110

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>67

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Val Val Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Asp Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105 110

<210>68

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>68

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>69

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>69

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Gly Ser Lys Ser Ile Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>70

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>70

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val

35 40 45

Ser Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Gly Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>71

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>71

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>72

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>72

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Lys Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>73

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>73

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>74

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>74

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>75

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>75

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Lys Ala Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>76

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>76

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>77

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>77

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>78

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>78

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>79

<211>109

<212>PR T

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>79

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>80

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>80

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>81

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>81

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Gly Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>82

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>82

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Gly Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>83

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>83

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>84

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>84

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>85

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>85

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asn Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>86

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>86

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>87

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>87

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>88

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>88

Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Thr Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Ala Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Arg Ser Met Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>89

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>89

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>90

<211>107

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>90

Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Thr

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Arg Gln Arg Leu Glu Trp Ile Gly Xaa

35 40 45

Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe Gln Gly

50 55 60

Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Met Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu

65 70 75 80

Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala

85 90 95

Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>91

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

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<220>

<221>变体

<222>50

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<220>

<221>变体

<222>54

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<220>

<221>变体

<222>61

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<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>91

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>92

<211>110

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

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<220>

<221>变体

<222>34

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<220>

<221>变体

<222>50

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<220>

<221>变体

<222>54

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<220>

<221>变体

<222>61

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<220>

<221>变体

<222>62

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1 5 10 15

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20 25 30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Asp Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105 110

<210>93

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

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<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

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<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

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Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Xaa His Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>94

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

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<220>

<221>变体

<222>34

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<220>

<221>变体

<222>50

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<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

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<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>94

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Thr Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>95

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

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<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

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1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr His Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>96

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

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1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Xaa His Trp ValvArg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>97

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>97

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>98

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>98

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

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50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

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<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>99

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>100

<211>110

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>100

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Val Val Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

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Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Asp Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105 110

<210>101

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>101

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

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65 70 75 80

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<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>102

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Xaa His Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Gly Ser Lys Ser Ile Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>103

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>103

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val

35 40 45

Ser Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Gly Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>104

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>104

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>105

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>105

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Lys Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>106

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>106

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>107

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>107

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>108

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>108

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Lys Ala Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>109

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>109

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>110

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>110

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>111

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>111

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala ValTyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>112

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>112

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>113

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>113

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>114

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>114

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Gly Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>115

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>115

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Gly Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Xaa His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

100 105

<210>116

<211>11

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>116

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210>117

<211>11

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>117

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210>118

<211>11

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>118

Gln Ala Ser Gln Gly Thr Ser Ile Asn Leu Asn

1 5 10

<210>119

<211>7

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>119

Gly Ala Ser Asn Leu Glu Asp

1 5

<210>120

<211>9

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>120

Leu Gln His Ser Tyr Leu Pro Trp Thr

1 5

<210>121

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>121

Gly Phe Ser Leu Thr Gly Tyr Gly Val Asn

1 5 10

<210>122

<211>14

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>122

Ile Ile Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu

1 5 10

<210>123

<211>16

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>123

Asp Lys Thr Phe Tyr Tyr Asp Gly Phe Tyr Arg Gly Arg Met Asp Tyr

1 5 10 15

<210>124

<211>113

<212>PRT

<213>人

<400>124

Pro Gly Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Arg Glu Leu Ile Glu Glu

1 5 10 15

Leu Val Asn Ile Thr Gln Asn Gln Lys Ala Pro Leu Cys Asn Gly Ser

20 25 30

Met Val Trp Ser Ile Asn Leu Thr Ala Gly Met Tyr Cys Ala Ala Leu

35 40 45

Glu Ser Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala Ile Glu Lys Thr Gln

50 55 60

Arg Met Leu Ser Gly Phe Cys Pro His Lys Val Ser Ala Gly Gln Phe

65 70 75 80

Ser Ser Leu His Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu Val Ala Gln Phe Val

85 90 95

Lys Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly Arg Phe

100 105 110

Asn

<210>125

<211>427

<212>PRT

<213>人

<400>125

Met Glu Trp Pro Ala Arg Leu Cys Gly Leu Trp Ala Leu Leu Leu Cys

1 5 10 15

Ala Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Ala Ala Pro Thr Glu Thr Gln

20 25 30

Pro Pro Val Thr Asn Leu Ser Val Ser Val Glu Asn Leu Cys Thr Val

35 40 45

Ile Trp Thr Trp Asn Pro Pro Glu Gly Ala Ser Ser Asn Cys Ser Leu

50 55 60

Trp Tyr Phe Ser His Phe Gly Asp Lys Gln Asp Lys Lys Ile Ala Pro

65 70 75 80

Glu Thr Arg Arg Ser Ile Glu Val Pro Leu Asn Glu Arg Ile Cys Leu

85 90 95

Gln Val Gly Ser Gln Cys Ser Thr Asn Glu Ser Glu Lys Pro Ser Ile

100 105 110

Leu Val Glu Lys Cys Ile Ser Pro Pro Glu Gly Asp Pro Glu Ser Ala

115 120 125

Val Ile Glu Leu Gln Cys Ile Trp His Asn Leu Ser Tyr Met Lys Cys

130 135 140

Ser Trp Leu Pro Gly Arg Asn Thr Ser Pro Asp Thr Asn Tyr Thr Leu

145 150 155 160

Tyr Tyr Trp His Arg Ser Leu Glu Lys Ile His Gln Cys Glu Asn Ile

165 170 175

Phe Arg Glu Gly Gln Tyr Phe Gly Cys Ser Phe Asp Leu Thr Lys Val

180 185 190

Lys Asp Ser Ser Phe Glu Gln His Ser Val Gln Ile Met Val Lys Asp

195 200 205

Asn Ala Gly Lys Ile Lys Pro Ser Phe Asn Ile Val Pro Leu Thr Ser

210 215 220

Arg Val Lys Pro Asp Pro Pro His Ile Lys Asn Leu Ser Phe His Asn

225 230 235 240

Asp Asp Leu Tyr Val Gln Trp Glu Asn Pro Gln Asn Phe Ile Ser Arg

245 250 255

Cys Leu Phe Tyr Glu Val Glu Val Asn Asn Ser Gln Thr Glu Thr His

260 265 270

Asn Val Phe Tyr Val Gln Glu Ala Lys Cys Glu Asn Pro Glu Phe Glu

275 280 285

Arg Asn Val Glu Asn Thr Ser Cys Phe Met Val Pro Gly Val Leu Pro

290 295 300

Asp Thr Leu Asn Thr Val Arg Ile Arg Val Lys Thr Asn Lys Leu Cys

305 310 315 320

Tyr Glu Asp Asp Lys Leu Trp Ser Asn Trp Ser Gln Glu Met Ser Ile

325 330 335

Gly Lys Lys Arg Asn Ser Thr Leu Tyr Ile Thr Met Leu Leu Ile Val

340 345 350

Pro Val Ile Val Ala Asp Ala Ile Ile Val Leu Leu Leu Tyr Leu Lys

355 360 365

Arg Leu Lys Ile Ile Ile Phe Pro Pro Ile Pro Asp Pro Gly Lys Ile

370 375 380

Phe Lys Glu Met Phe Gly Asp Gln Asn Asp Asp Thr Leu His Trp Lys

385 390 395 400

Lys Tyr Asp Ile Tyr Glu Lys Gln Thr Lys Glu Glu Thr Asp Ser Val

405 410 415

Val Leu Ile Glu Asn Leu Lys Lys Ala Ser Gln

420 425

<210>126

<211>101

<212>PRT

<213>人

<400>126

Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Tyr Ser

20 25 30

Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Gly

85 90 95

Thr His Trp Pro Pro

100

<210>127

<211>20

<212>PRT

<213>猕猴

<400>127

Met Ala Leu Leu Leu Thr Met Val Ile Ala Leu Thr Cys Leu Gly Gly

1 5 10 15

Phe Ala Ser Pro

20

<210>128

<211>329

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>128

Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser

1 5 10 15

Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe

20 25 30

Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Ash Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly

35 40 45

Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu

50 55 60

Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr

65 70 75 80

Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys

85 90 95

Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

100 105 110

Ala Pro Glu Ala Leu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

115 120 125

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

130 135 140

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

145 150 155 160

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

165 170 175

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

180 185 190

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

195 200 205

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

210 215 220

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met

225 230 235 240

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

245 250 255

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

260 265 270

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

275 280 285

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

290 295 300

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

305 310 315 320

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325

<210>129

<211>360

<212>DNA

<213>小家鼠

<400>129

gaggttcagc tgcagcagtc tggggcagag cttgtgaagc caggggcctc agtcaagttg 60

tcctgcacag gttctggctt caacattaaa gacacctata tacactgggt gaagcagagg 120

cctgaacagg gcctggagtg gattggaagg attgatcctg cgaatgataa tattaaatat 180

gacccgaagt tccagggcaa ggccactata acagcagaca catcctccaa cacagcctac 240

ctacagctca acagcctgac atctgaggac actgccgtct attactgtgc tagatctgag 300

gaaaattggt acgacttttt tgactactgg ggccaaggca ccactctcac agtctcctca 360

<210>130

<211>120

<212>PRT

<213>小家鼠

<400>130

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Gly Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser

115 120

<210>131

<211>19

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>131

Met Lys Cys Ser Trp Val Ile Phe Phe Leu Met Ala Val Val Thr Gly

1 5 10 15

Val Asn Ser

<210>132

<211>336

<212>DNA

<213>小家鼠

<400>132

gatgttttga tgacccaaac tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60

atctcttgca ggtctagtca gagcattgta catagtaatg gaaacaccta tttagaatgg 120

tacctgcaga aaccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaagtttc caaccgattt 180

tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatt 240

agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tattactgct ttcaaggttc acatattccg 300

tacacgttcg gaggggggac caagctggaa ataaaa 336

<210>133

<211>112

<212>PR T

<213>小家鼠

<400>133

Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

85 90 95

Ser His Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210>134

<211>19

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>134

Met Lys Leu Pro Val Arg Leu Leu Val Leu Met Phe Trp Ile Pro Ala

1 5 10 15

Ser Ser Ser

<210>135

<211>429

<212>DNA

<213>小家鼠

<400>135

atggctgtcc tggcattact cttctgcctg gtaacattcc caagctgtat cctttcccag 60

gtgcagctga aggagtcagg acctggcctg gtggcgccct cacagagcct gtccatcaca 120

tgcaccgtct cagggttctc attaaccggc tatggtgtaa actgggttcg ccagcctcca 180

ggaaagggtc tggagtggct gggaataatt tggggtgatg gaagcacaga ctataattca 240

gctctcaaat ccagactgat catcaacaag gacaactcca agagccaagt tttcttaaaa 300

atgaacagtc tgcaaactga tgacacagcc aggtacttct gtgccagaga taagactttt 360

tactacgatg gtttctacag gggcaggatg gactactggg gtcaaggaac ctcagtcacc 420

gtctcctca 429

<210>136

<211>124

<212>PRT

<213>小家鼠

<400>136

Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln

1 5 10 15

Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Gly Tyr

20 25 30

Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu

35 40 45

Gly Ile Ile Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Leu Ile Ile Asn Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu

65 70 75 80

Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Arg Tyr Phe Cys Ala

85 90 95

Arg Asp Lys Thr Phe Tyr Tyr Asp Gly Phe Tyr Arg Gly Arg Met Asp

100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210>137

<211>124

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>137

Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln

1 5 10 15

Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Gly Tyr

20 25 30

Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu

35 40 45

Gly Ile Ile Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Leu Ile Ile Asn Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu

65 70 75 80

Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Arg Tyr Phe Cys Ala

85 90 95

Arg Asp Lys Thr Phe Tyr Tyr Asp Gly Phe Tyr Arg Gly Arg Met Asp

100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210>138

<211>387

<212>DNA

<213>小家鼠

<400>138

atgaacacga gggcccctgc tgagttcctt gggttcctgt tgctctggtt tttaggtgcc 60

agatgtgatg tccagatgat tcagtctcca tcctccctgt ctgcatcttt gggagacatt 120

gtcaccatga cttgccaggc aagtcagggc actagcatta atttaaactg gtttcagcaa 180

aaaccaggga aagctcctaa gctcctgatc tttggtgcaa gcaacttgga agatggggtc 240

ccatcaaggt tcagtggcag tagatatggg acaaatttca ctctcaccat cagcagcctg 300

gaggatgaag atatggcaac ttatttctgt ctacagcata gttatctccc gtggacgttc 360

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<210>139

<211>107

<212>PRT

<213>小家鼠

<400>139

Asp Val Gln Met Ile Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Ile Val Thr Met Thr Cys Gln Ala Ser Gln Gly Thr Ser Ile Asn

20 25 30

Leu Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Phe Gly Ala Ser Asn Leu Glu Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Arg Tyr Gly Thr Asn Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Asp

65 70 75 80

Glu Asp Met Ala Thr Tyr Phe Cys Leu Gln His Ser Tyr Leu Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210>140

<211>22

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>140

Met Asn Thr Arg Ala Pro Ala Glu Phe Leu Gly Phe Leu Leu Leu Trp

1 5 10 15

Phe Leu Gly Ala Arg Cys

20

<210>141

<211>329

<212>PRT

<213>人

<400>141

Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser

1 5 10 15

Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe

20 25 30

Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly

35 40 45

Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu

50 55 60

Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr

65 70 75 80

Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys

85 90 95

Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

100 105 110

Ala Pro Glu Ala Leu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

115 120 125

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

130 135 140

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

145 150 155 160

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

165 170 175

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

180 185 190

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

195 200 205

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

210 215 220

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met

225 230 235 240

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

245 250 255

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

260 265 270

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

275 280 285

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

290 295 300

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

305 310 315 320

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325

<210>142

<211>417

<212>DNA

<213>小家鼠

<400>142

atgaaatgca gctgggttat cttcttcctg atggcagtgg ttacaggggt caattcagag 60

gttcagctgc agcagtctgg ggcagagctt gtgaagccag gggcctcagt caagttgtcc 120

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gaacagggcc tggagtggat tggaaggatt gatcctgcga atgataatat taaatatgac 240

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cagctcaaca gcctgacatc tgaggacact gccgtctatt actgtgctag atctgaggaa 360

aattggtacg acttttttga ctactggggc caaggcacca ctctcacagt ctcctca 417

<210>143

<211>139

<212>PRT

<213>小家鼠

<400>143

Met Lys Cys Ser Trp Val Ile Phe Phe Leu Met Ala Val Val Thr Gly

1 5 10 15

Val Asn Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys

20 25 30

Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Gly Ser Gly Phe Asn Ile

35 40 45

Lys Asp Thr Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Ile Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp

65 70 75 80

Pro Lys Phe Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn

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Thr Ala Tyr Leu Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

115 120 125

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser

130 135

<210>144

<211>393

<212>DNA

<213>小家鼠

<400>144

atgaagttgc ctgttaggct gttggtgctg atgttctgga ttcctgcttc cagcagtgat 60

gttttgatga cccaaactcc actctccctg cctgtcagtc ttggagatca agcctccatc 120

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ggggtcccag acaggttcag tggcagtgga tcagggacag atttcacact caagattagc 300

agagtggagg ctgaggatct gggagtttat tactgctttc aaggttcaca tattccgtac 360

acgttcggag gggggaccaa gctggaaata aaa 393

<210>145

<211>131

<212>PRT

<213>小家鼠

<400>145

Met Lys Leu Pro Val Arg Leu Leu Val Leu Met Phe Trp Ile Pro Ala

1 5 10 15

Ser Ser Ser Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val

20 25 30

Ser Leu Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile

35 40 45

Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro

50 55 60

Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser

65 70 75 80

Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

85 90 95

Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys

100 105 110

Phe Gln Gly Ser His Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu

115 120 125

Glu Ile Lys

130

<210>146

<211>417

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>146

atggattgga cctggcgcat cctgttcctg gtggccgctg ccaccggcgc tcactctcag 60

gtgcagctgg tgcagtctgg cgccgaggtg aagaagcctg gcgcttccgt gaaggtgtcc 120

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ggccagcggc tggagtggat gggccggatc gatcctgcca acgacaacat caagtacgac 240

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aactggtacg acttcttcga ctactggggc cagggcaccc tggtgaccgt gtcctct 417

<210>147

<211>144

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>147

Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly

1 5 10 15

Ala His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys

20 25 30

Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile

35 40 45

Lys Asp Thr Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu

50 55 60

Glu Trp Met Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp

65 70 75 80

Pro Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser

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Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

115 120 125

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Glu Ser Cys Arg

130 135 140

<210>148

<211>396

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>148

atgcggctgc ccgctcagct gctgggcctg ctgatgctgt gggtgcccgg ctcttccggc 60

gacgtggtga tgacccagtc ccctctgtct ctgcccgtga ccctgggcca gcccgcttct 120

atctcttgcc ggtcctccca gtccatcgtg cactccaacg gcaacaccta cctggagtgg 180

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agccgcgtgg aggccgagga tgtgggcgtg tactactgct tccagggctc ccacatccct 360

tacacctttg gcggcggaac caaggtggag atcaag 396

<210>149

<211>132

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>149

Met Arg Leu Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Met Leu Trp Val Pro

1 5 10 15

Gly Ser Ser Gly Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro

20 25 30

Val Thr Leu Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser

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Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Phe Gln Gln Arg

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Pro Gly Gln Ser Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe

65 70 75 80

Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe

85 90 95

Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr

100 105 110

Cys Phe Gln Gly Ser His Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys

115 120 125

Val Glu Ile Lys

130

<210>150

<211>417

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>150

atggagctgg gcctgtcttg ggtgttcctg gtggctatcc tggagggcgt gcagtgcgag 60

gtgcagctgg tggagtctgg cggcggactg gtgcagcctg gcggctctct gcggctgtct 120

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ggcaagggcc tggagtgggt ggcccggatc gatcctgcca acgacaacat caagtacgac 240

cccaagttcc agggccggtt caccatctct cgcgacaacg ccaagaactc cctgtacctc 300

cagatgaact ctctgcgcgc cgaggatacc gccgtgtact actgcgcccg gagcgaggag 360

aactggtacg acttcttcga ctactggggc cagggcaccc tggtgaccgt gtcctct 417

<210>151

<211>139

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>151

Met Glu Leu Gly Leu Ser Trp Val Phe Leu Val Ala Ile Leu Glu Gly

1 5 10 15

Val Gln Cys Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln

20 25 30

Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile

35 40 45

Lys Asp Thr Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Val Ala Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp

65 70 75 80

Pro Lys Phe Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn

85 90 95

Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

115 120 125

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

130 135

<210>152

<211>405

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>152

atggatatgc gcgtgcccgc tcagctgctg ggcctgctgc tgctgtggct gcgcggagcc 60

cgctgcgata tccagatgac ccagtcccct tcttctctgt ccgcctctgt gggcgatcgc 120

gtgaccatca cctgtcggtc ctcccagtcc atcgtgcact ccaacggcaa cacctacctg 180

gagtggtatc agcagaagcc cggcaaggcc cctaagctgc tgatctacaa ggtgtccaac 240

cgcttttccg gcgtgccttc tcggttctcc ggctccggct ccggcaccga tttcaccctg 300

accatctcct ccctccagcc cgaggatttc gccacctact actgcttcca gggctcccac 360

atcccttaca cctttggcgg cggaaccaag gtggagatca agcgt 405

<210>153

<211>135

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>153

Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp

1 5 10 15

Leu Arg Gly Ala Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser

20 25 30

Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser

35 40 45

Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Gln

50 55 60

Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn

65 70 75 80

Arg Phe Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr

85 90 95

Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr

100 105 110

Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly Ser His Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly

115 120 125

Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

130 135

<210>154

<211>360

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>154

gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggctc tctgcggctg 60

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<210>155

<211>120

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>155

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

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115 120

<210>156

<211>360

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>156

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<220>

<223>合成产生的肽

<400>157

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

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<212>DNA

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<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>158

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<220>

<223>合成产生的肽

<400>159

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

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<210>160

<211>360

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>160

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<211>120

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>161

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

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65 70 75 80

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100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

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<211>360

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>162

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<211>120

<212>PRT

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<220>

<223>合成产生的肽

<400>163

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

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100 105 110

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115 120

<210>164

<211>360

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>164

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<211>120

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>165

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

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<210>166

<211>360

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>166

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cccggcaagg gcctggagtg ggtgggccgg atcgatcctg ccaacgacaa catcaagtac 180

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<211>120

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>167

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

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100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210>168

<211>360

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>168

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ctccagatga actctctgcg cgccgaggat accgccgtgt actactgcgc ccggagcgag 300

gagaactggt acgacttctt cgactactgg ggccagggca ccctggtgac cgtgtcctct 360

<210>169

<211>120

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>169

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

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Ala Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

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Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

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<210>170

<211>360

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>170

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tcttgcgccg cttccggctt caacatcaag gacacctaca tccactgggt gcggcaggct 120

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<211>120

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>171

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn lle Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

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100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210>172

<211>360

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>172

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<211>120

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>173

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

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100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

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<211>360

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>174

gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggctc tctgcggctg 60

tcttgcaccg gctccggctt caacatcaag gacacctaca tccactgggt gcggcaggct 120

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<210>175

<211>120

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>175

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Gly Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

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50 55 60

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<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>176

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

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Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys

195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp

210 215 220

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Leu Gly Ala

225 230 235 240

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

245 250 255

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

260 265 270

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

275 280 285

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

290 295 300

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

305 310 315 320

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu

325 330 335

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

340 345 350

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

355 360 365

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

370 375 380

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

385 390 395 400

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp

405 410 415

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

420 425 430

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

435 440 445

Gly Lys

450

<210>177

<211>219

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>177

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile

65 70 75 80

Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

85 90 95

Ser His Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

115 120 125

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

130 135 140

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

145 150 155 160

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

180 185 190

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

195 200 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210>178

<211>132

<212>PRT

<213>人

<400>178

Met Ala Leu Leu Leu Thr Thr Val Ile Ala Leu Thr Cys Leu Gly Gly

1 5 10 15

Phe Ala Ser Pro Gly Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Arg Glu Leu

20 25 30

Ile Glu Glu Leu Val Asn Ile Thr Gln Asn Gln Lys Ala Pro Leu Cys

35 40 45

Asn Gly Ser Met Val Trp Ser Ile Asn Leu Thr Ala Gly Met Tyr Cys

50 55 60

Ala Ala Leu Glu Ser Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala Ile Glu

65 70 75 80

Lys Thr Gln Arg Met Leu Ser Gly Phe Cys Pro His Lys Val Ser Ala

85 90 95

Gly Gln Phe Ser Ser Leu His Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu Val Ala

100 105 110

Gln Phe Val Lys Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu

115 120 125

Gly Arg Phe Asn

130

<210>179

<211>13

<212>PRT

<213>猕猴

<400>179

Met Ala Leu Leu Leu Thr Met Val Ile Ala Leu Thr Cys

1 5 10

<210>180

<211>12

<212>PRT

<213>猕猴

<400>180

Leu Gly Gly Phe Ala Ser Pro Ser Pro Val Pro Pro

1 5 10

<210>181

<211>17

<212>PRT

<213>猕猴

<400>181

Ser Pro Ser Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Lys Glu Leu Ile Glu

1 5 10 15

Glu

<210>182

<211>19

<212>PRT

<213>猕猴

<400>182

Thr Ala Leu Lys Glu Leu Ile Glu Glu Leu Val Asn Ile Thr Gln Asn

1 5 10 15

Gln Lys Ala

<210>183

<211>22

<212>PRT

<213>猕猴

<400>183

Asn Gln Lys Ala Pro Leu Cys Asn Gly Ser Met Val Trp Ser Ile Asn

1 5 10 15

Leu Thr Ala Gly Val Tyr

20

<210>184

<211>21

<212>PRT

<213>猕猴

<400>184

Ile Asn Leu Thr Ala Gly Val Tyr Cys Ala Ala Leu Glu Ser Leu Ile

1 5 10 15

Asn Val Ser Gly Cys

20

<210>185

<211>21

<212>PRT

<213>猕猴

<400>185

Ser Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala Ile Glu Lys Thr Gln Arg

1 5 10 15

Met Ile Asn Gly Phe

20

<210>186

<211>18

<212>PRT

<213>猕猴

<400>186

Gly Phe Cys Pro His Lys Val Ser Ala Gly Gln Phe Ser Ser Leu Arg

1 5 10 15

Val Arg

<210>187

<211>20

<212>PRT

<213>猕猴

<400>187

Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu Val Ala Gln Phe Val Lys Asp Leu Leu

1 5 10 15

Val His Leu Lys

20

<210>188

<211>19

<212>PRT

<213>猕猴

<400>188

Phe Val Lys Asp Leu Leu Val His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly

1 5 10 15

Gln Phe Asn

<210>189

<211>396

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>189

atgcggctgc ccgctcagct gctgggcctg ctgatgctgt gggtgcccgg ctcttccggc 60

gacgtggtga tgacccagtc ccctctgtct ctgcccgtga ccctgggcca gcccgcttct 120

atctcttgcc ggtcctccca gtccctggtg tactccgacg gcaacaccta cctgaactgg 180

ttccagcaga gacccggcca gtctcctcgg cggctgatct acaaggtgtc caaccgcttt 240

tccggcgtgc ccgatcggtt ctccggctcc ggcagcggca ccgatttcac cctgaagatc 300

agccgcgtgg aggccgagga tgtgggcgtg tactactgct tccagggctc ccacatccct 360

tacacctttg gcggcggaac caaggtggag atcaag 396

<210>190

<211>132

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>190

Met Arg Leu Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Met Leu Trp Val Pro

1 5 10 15

Gly Ser Ser Gly Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro

20 25 30

Val Thr Leu Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser

35 40 45

Leu Val Tyr Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg

50 55 60

Pro Gly Gln Ser Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe

65 70 75 80

Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe

85 90 95

Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr

100 105 110

Cys Phe Gln Gly Ser His Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys

115 120 125

Val Glu Ile Lys

130

<210>191

<211>336

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>191

gatgttgtga tgacccaatc tccactctcc ctgcctgtca ctcctggaga gccagcctcc 60

atctcttgca gatctagtca gagcattgtg catagtaatg gaaacaccta cctggaatgg 120

tacctgcaga aaccaggcca gtctccacag ctcctgatct acaaagtttc caaccgattt 180

tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc 240

agcagagtgg aggctgagga tgtgggagtt tattactgct ttcaaagttc acatgttcct 300

ctcacettcg gtcaggggac caagctggag atcaaa 336

<210>192

<211>112

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>192

Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ser

85 90 95

Ser His Val Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210>193

<211>329

<212>PRT

<213>人

<220>

<221>MUTAGEN

<222>116..

<220>

<221>MUTAGEN

<222>119

<400>193

Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser

1 5 10 15

Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe

20 25 30

Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly

35 40 45

Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu

50 55 60

Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr

65 70 75 80

Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys

85 90 95

Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

100 105 110

Ala Pro Glu Ala Leu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

115 120 125

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

130 135 140

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

145 150 155 160

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

165 170 175

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

180 185 190

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

195 200 205

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

210 215 220

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met

225 230 235 240

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

245 250 255

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

260 265 270

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

275 280 285

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

290 295 300

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

305 310 315 320

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325

<210>194

<211>132

<212>PRT

<213>人

<400>194

Met Ala Leu Leu Leu Thr Thr Val Ile Ala Leu Thr Cys Leu Gly Gly

1 5 10 15

Phe Ala Ser Pro Gly Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Arg Glu Leu

20 25 30

Ile Glu Glu Leu Val Asn Ile Thr Gln Asn Gln Lys Ala Pro Leu Cys

35 40 45

Asn Gly Ser Met Val Trp Ser Ile Asn Leu Thr Ala Gly Met Tyr Cys

50 55 60

Ala Ala Leu Glu Ser Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala Ile Glu

65 70 75 80

Lys Thr Gln Arg Met Leu Ser Gly Phe Cys Pro His Lys Val Ser Ala

85 90 95

Gly Gln Phe Ser Ser Leu His Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu Val Ala

100 105 110

Gln Phe Val Lys Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu

115 120 125

Gly Arg Phe Asn

130

<210>195

<211>113

<212>PRT

<213>人

<400>195

Pro Gly Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Arg Glu Leu Ile Glu Glu

1 5 10 15

Leu Val Asn Ile Thr Gln Asn Gln Lys Ala Pro Leu Cys Asn Gly Ser

20 25 30

Met Val Trp Ser Ile Asn Leu Thr Ala Gly Met Tyr Cys Ala Ala Leu

35 40 45

Glu Ser Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala Ile Glu Lys Thr Gln

50 55 60

Arg Met Leu Ser Gly Phe Cys Pro His Lys Val Ser Ala Gly Gln Phe

65 70 75 80

Ser Ser Leu His Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu Val Ala Gln Phe Val

85 90 95

Lys Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly Arg Phe

100 105 110

Asn

<210>196

<211>10

<212>PRT

<213>小家鼠

<400>196

Leu Asp Gly Tyr Tyr Phe Gly Phe Ala Tyr

1 5 10

<210>197

<211>15

<212>PRT

<213>小家鼠

<400>197

Lys Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr Gly Lys Ser Leu Met His

1 5 10 15

<210>198

<211>118

<212>PRT

<213>小家鼠

<400>198

Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ile Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Ser Ile Ser Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Ile Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Leu Asp Gly Tyr Tyr Phe Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Thr Val Thr Val Ser Ser

115

<210>199

<211>111

<212>PRT

<213>小家鼠

<400>199

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr

20 25 30

Gly Lys Ser Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn

65 70 75 80

Pro Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn

85 90 95

Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210>200

<211>7

<212>PRT

<213>小家鼠

<400>200

Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser

<210>201

<211>9

<212>PRT

<213>小家鼠

<400>201

Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Trp Thr

1 5

<210>202

<211>6

<212>PRT

<213>小家鼠

<400>202

Ile Ser Tyr Ala Met Ser

1 5

<210>203

<211>16

<212>PRT

<213>小家鼠

<400>203

Ser Ile Ser Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys Gly

1 5 10 15

<210>204

<211>351

<212>DNA

<213>小家鼠

<400>204

gaagtgaagc tggtggagtc tgggggaggc ttagtgaaac ctggagggtc cctgaaactc 60

tcctgtgcag cctctggatt cactttcatt agctatgcca tgtcttgggt tcgtcagact 120

ccagagaaga ggctggagtg ggtcgcatcc attagtagtg gtggtaacac ctactatcca 180

gacagtgtga agggccgatt caccatctcc agagataatg ccaggaacat cctatacctg 240

caaatgagca gtctgaggtc tgaggacacg gccatgtatt actgtgcacg acttgatggt 300

tactactttg gatttgctta ctggggccaa gggactctgg tcgctgtctc t 351

<210>205

<211>354

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>部分人源化抗体重链

<400>205

gaggtcaagc tggtggagtc agggggaggc ttagtgcaac ctggagggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt cactttcatt agctatgcca tgtcttgggt tcgtcaggct 120

ccagggaagg ggctggagtg ggtcgcatcc attagtagtg gtggtaacac ctactatcca 180

gacagcgtga agggccgatt caccatctcc agagataatg ccaagaacag cctatacctg 240

caaatgaaca gtctgagggc tgaggacacg gccgtgtatt actgtgcacg acttgatggt 300

tactactttg gatttgctta ctggggccaa gggaccctgg tcaccgtctc ctca 354

<210>206

<211>354

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>完全人源化抗体重链

<400>206

gaggtccagc tggtggagtc agggggaggc ttagtgcaac ctggagggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt cactttcatt agctatgcca tgtcttgggt tcgtcaggct 120

ccagggaagg ggctggagtg ggtcgcatcc attagtagtg gtggtaacac ctactatcca 180

gacagcgtga agggccgatt caccatctcc agagataatg ccaagaacag cctatacctg 240

caaatgaaca gtctgagggc tgaggacacg gccgtgtatt actgtgcacg acttgatggt 300

tactactttg gatttgctta ctggggccaa gggaccctgg tcaccgtctc ctca 354

<210>207

<211>354

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>完全人源化抗体重链

<400>207

gaggtccagc tggtggagtc agggggaggc ttagtgaaac ctggagggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt cactttcatt agctatgcca tgtcttgggt tcgtcaggct 120

ccagggaagg ggctggagtg ggtctcatcc attagtagtg gtggtaacac ctactatcca 180

gacagtgtga agggccgatt caccatctcc agagataatg ccaagaacag cctatacctg 240

caaatgaaca gtctgagggc tgaggacacg gccgtgtatt actgtgcacg acttgatggt 300

tactactttg gatttgctta ctggggccaa gggaccacgg tcaccgtctc ctca 354

<210>208

<211>118

<212>PRT

<213>小家鼠

<400>208

Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ile Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Ser Ile Ser Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Ile Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Leu Asp Gly Tyr Tyr Phe Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Thr Val Thr Val Ser Ser

115

<210>209

<211>118

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>部分人源化抗体重链

<400>209

Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ile Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Ser Ile Ser Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Leu Asp Gly Tyr Tyr Phe Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210>210

<211>118

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>完全人源化抗体重链

<400>210

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ile Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Ser Ile Ser Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Leu Asp Gly Tyr Tyr Phe Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210>211

<211>118

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>完全人源化抗体重链

<400>211

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ile Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Leu Asp Gly Tyr Tyr Phe Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Thr Val Thr Val Ser Ser

115

<210>212

<211>111

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>完全人源化抗体轻链

<400>212

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr

20 25 30

Gly Lys Ser Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn

85 90 95

Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210>213

<211>111

<212>PRT

<213>小家鼠

<400>213

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr

20 25 30

Gly Lys Ser Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn

65 70 75 80

Pro Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn

85 90 95

Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210>214

<211>111

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>部分人源化抗体轻链

<400>214

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr

20 25 30

Gly Lys Ser Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn

85 90 95

Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210>215

<211>111

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>完全人源化抗体轻链

<400>215

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Pro Gly

1 5 10 15

Gln Arg Ala Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr

20 25 30

Gly Lys Ser Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn

65 70 75 80

Pro Val Glu Ala Asn Asp Thr Ala Asn Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn

85 90 95

Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210>216

<211>107

<212>PRT

<213>人

<400>216

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

1 5 10 15

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

20 25 30

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

35 40 45

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

50 55 60

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

65 70 75 80

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

85 90 95

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

100 105

<210>217

<211>351

<212>DNA

<213>小家鼠

<400>217

gaagtgaagc tggtggagtc tgggggaggc ttagtgaaac ctggagggtc cctgaaactc 60

tcctgtgcag cctctggatt cactttcatt agctatgcca tgtcttgggt tcgtcagact 120

ccagagaaga ggctggagtg ggtcgcatcc attagtagtg gtggtaacac ctactatcca 180

gacagtgtga agggccgatt caccatctcc agagataatg ccaggaacat cctatacctg 240

caaatgagca gtctgaggtc tgaggacacg gccatgtatt actgtgcacg acttgatggt 300

tactactttg gatttgctta ctggggccaa gggactctgg tcgctgtctc t 351

<210>218

<211>333

<212>DNA

<213>小家鼠

<400>218

gacattgtgc tgacccaatc tccagcttct ttggctgtgt ctctagggca gagggccacc 60

atatcctgca aagccagtga aagtgttgat aattatggca aaagtttaat gcactggtac 120

cagcagaaac caggacagtc acccaaactc ctcatctatc gtgcatccaa cctagaatct 180

gggatccctg ccaggttcag tggcagtggg tctaggacag acttcaccct caccattaat 240

cctgtggagg ctgatgatgt tgcaacctat tactgtcagc aaagtaatga ggatccgtgg 300

acgttcggtg gaggcaccaa gctggaaatc aaa 333

<210>219

<211>333

<212>DNA

<213>小家鼠

<400>219

gacattgtgc tgacccaatc tccagcttct ttggctgtgt ctctagggca gagggccacc 60

atatcctgca aagccagtga aagtgttgat aattatggca aaagtttaat gcactggtac 120

cagcagaaac caggacagtc acccaaactc ctcatctatc gtgcatccaa cctagaatct 180

gggatccctg ccaggttcag tggcagtggg tctaggacag acttcaccct caccattaat 240

cctgtggagg ctgatgatgt tgcaacctat tactgtcagc aaagtaatga ggatccgtgg 300

acgttcggtg gaggcaccaa gctggaaatc aaa 333

<210>220

<211>333

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>部分人源化抗体轻链

<400>220

gacatccagc tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc 60

atcacttgca aagccagtga aagtgttgat aattatggca aaagtctgat gcactggtat 120

cagcagaaac cagggaaagc tcctaagctc ctgatctatc gtgcatccaa cctggaatct 180

ggcgtcccat caaggttcag tggcagtgga tctcgcacag atttcactct caccatcagc 240

agtctgcaac ctgaagattt tgcaacttac tactgtcagc aaagtaatga ggatccctgg 300

accttcggcg gagggaccaa ggtagagatc aaa 333

<210>221

<211>333

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>完全人源化抗体轻链

<400>221

gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc 60

atcacttgca aagccagtga aagtgttgat aattatggca aaagtctgat gcactggtat 120

cagcagaaac cagggaaagc tcctaagctc ctgatctatc gtgcatccaa cctggaatct 180

ggcgtcccat caaggttcag tggcagtgga tctggcacag atttcactct caccatcagc 240

agtctgcaac ctgaagattt tgcaacttac tactgtcagc aaagtaatga ggatccctgg 300

accttcggcg gagggaccaa ggtagagatc aaa 333

<210>222

<211>351

<212>DNA

<213>小家鼠

<400>222

gaagtgaagc tggtggagtc tgggggaggc ttagtgaaac ctggagggtc cctgaaactc 60

tcctgtgcag cctctggatt cactttcatt agctatgcca tgtcttgggt tcgtcagact 120

ccagagaaga ggctggagtg ggtcgcatcc attagtagtg gtggtaacac ctactatcca 180

gacagtgtga agggccgatt caccatctcc agagataatg ccaggaacat cctatacctg 240

caaatgagca gtctgaggtc tgaggacacg gccatgtatt actgtgcacg acttgatggt 300

tactactttg gatttgctta ctggggccaa gggactctgg tcgctgtctc t 351

<210>223

<211>333

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>完全人源化抗体轻链

<400>223

gacatcgtgc tcactcagtc tccagcttct ttggctgtgt ctccagggca gagggccacc 60

ataacctgca aagccagtga aagtgttgat aattatggca aaagtttaat gcactggtac 120

cagcagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatctatc gtgcatccaa cctagaatct 180

ggggtccctg ccaggttcag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caccattaat 240

cctgtggagg ctaatgatac tgcaaactat tactgtcagc aaagtaatga ggatccgtgg 300

acgttcggtg gagggaccaa ggtggaaata aaa 333

<210>224

<211>227

<212>PRT

<213>人

<400>224

Met Gly Trp Leu Cys Ser Gly Leu Leu Phe Pro Val Ser Cys Leu Val

1 5 10 15

Leu Leu Gln Val Ala Ser Ser Gly Asn Met Lys Val Leu Gln Glu Pro

20 25 30

Thr Cys Val Ser Asp Tyr Met Ser Ile Ser Thr Cys Glu Trp Lys Met

35 40 45

Asn Gly Pro Thr Asn Cys Ser Thr Glu Leu Arg Leu Leu Tyr Gln Leu

50 55 60

Val Phe Leu Leu Ser Glu Ala His Thr Cys Ile Pro Glu Asn Asn Gly

65 70 75 80

Gly Ala Gly Cys Val Cys His Leu Leu Met Asp Asp Val Val Ser Ala

85 90 95

Asp Asn Tyr Thr Leu Asp Leu Trp Ala Gly Gln Gln Leu Leu Trp Lys

100 105 110

Gly Ser Phe Lys Pro Ser Glu His Val Lys Pro Arg Ala Pro Gly Asn

115 120 125

Leu Thr Val His Thr Asn Val Ser Asp Thr Leu Leu Leu Thr Trp Ser

130 135 140

Asn Pro Tyr Pro Pro Asp Asn Tyr Leu Tyr Asn His Leu Thr Tyr Ala

145 150 155 160

Val Asn Ile Trp Ser Glu Asn Asp Pro Ala Asp Phe Arg Ile Tyr Asn

165 170 175

Val Thr Tyr Leu Glu Pro Ser Leu Arg Ile Ala Ala Ser Thr Leu Lys

180 185 190

Ser Gly Ile Ser Tyr Arg Ala Arg Val Arg Ala Trp Ala Gln Cys Tyr

195 200 205

Asn Thr Thr Trp Ser Glu Trp Ser Pro Ser Thr Lys Trp His Asn Ser

210 215 220

Asn Ile Cys

225

Claims

1.一种评估抗IL-13抗体分子的方法，其包括：

提供该抗IL-13抗体分子在受试者体内的至少一种药物动力学/药效学(PK/PD)参数的平均试验值；并

比较所提供的平均试验值与至少一个平均参考值，

从而评估该抗IL-13抗体分子，

其中该平均参考值选自：

对该受试者静脉内施用该抗IL-13抗体分子后，在约0.05至0.9毫升/小时/千克范围内的平均CL值；对该受试者静脉内施用后，小于约150毫升/千克的平均V_dss值；对人类静脉内施用后，约500至800小时的平均半衰期(t_1/2)；对该受试者静脉内施用后，约2至40微克/毫升或对该受试者皮下施用后，约0.1至30微克/毫升的剂量标准化平均最大血清或血浆浓度；对该受试者静脉内施用后，约800至18,000(微克小时/毫升)/(毫克/千克)或对该受试者皮下施用后，400至18,000(微克小时/毫升)/(毫克/千克)的平均剂量标准化暴露量；对该受试者皮下施用后，约60至90％的生物利用率，和小于约0.5的组织对血清比，其中该抗IL-13抗体分子包含全长抗体；

对该受试者皮下或静脉内施用后，约0.5至30小时的平均半衰期(t_1/2)，其中该抗IL-13抗体分子包含该抗体分子的抗原结合部位；且

对该受试者施用后，小于0.004毫升/小时/千克的平均清除率，其中该抗IL-13抗体分子与IL-13复合。

2.一种测定抗IL-13抗体分子用于受试者中IL-13介导的病症的治疗方式的方法，其包括：

提供该抗IL-13抗体分子在受试者体内的至少一种PK/PD参数的平均试验值；

比较所提供的平均试验值与至少一个平均参考值；

基于该至少一个平均试验值与该平均参与值的比较，选择剂量、时间安排或给药方式的一种或多种，其中该平均参考值选自：

3.权利要求1或2的方法，其中所述平均参考值包括对受试者静脉内施用后，在约0.065至0.3毫升/小时/千克的范围内的平均血清清除率(CL)值。

4.权利要求1或2的方法，其中所述平均参考值包括对所述受试者静脉内施用后，小于约110毫升/千克的平均稳态分布体积(V_dss)值。

5.权利要求1或2的方法，其中所述平均参考值包括约670至725的平均半衰期(t_1/2)。

6.权利要求1或2的方法，其中记录平均试验值或预选关系是否满足的指示值。

7.权利要求1的方法，其中提供平均试验者的步骤包括获得所述抗体分子的样品并测试至少一个所述PK/PD参数。

8.权利要求1或2的方法，其中所述受试者为啮齿类动物或灵长类动物。

9.权利要求1或2的方法，其中所述受试者为人。

10.权利要求9的方法，其中所述人具有约50-80千克的体重。

11.一种治疗受试者中IL-13相关病症的方法，其包括：

对患有该IL-13相关病症或有患该病症的危险的受试者施用有效量的通过权利要求1的方法评估的抗IL-13抗体分子。

12.一种治疗受试者中IL-13相关病症的方法，其包括：

以通过权利要求2的方法确定的剂量、时间安排或给药方式对患有该IL-13相关病症或有患该病症的危险的受试者施用抗IL-13抗体分子。

13.权利要求12或13的方法，其中所述IL-13相关病症选自哮喘性疾病、特应性疾病、慢性阻塞性肺病(COPD)、与呼吸道炎症相关的病症、嗜酸粒细胞增多、纤维化和粘液产生过度、炎性状况、自身免疫病症、肿瘤或癌、病毒感染、及保护性1型免疫反应的表现性的抑制。

14.一种指导接受者使用抗IL-13抗体分子以治疗IL-13相关病症的方法，其包括：

向该接受者教导该抗IL-13抗体分子具有选自以下组的PK/PD参数的至少一种平均试验值：

其中所述平均参考值选自以下组成的组：

15.权利要求14的方法，其中所述接受者为病人、药剂师、看护者、临床医师、医疗人员的成员、制造者或批发商。

16.权利要求14的方法，其中所述方法进一步包括记录或记忆所述抗体分子的一种或多种所述试验值。

17.一种治疗患有IL-13相关病症或有患该病症的危险的受试者的方法，其包括：

向看护者或病人教导抗IL-13抗体具有选自以下组成的组的PK/PD参数的至少一个平均试验值：

其中所述平均参考值选自：

18.权利要求1、2、11、12、14或17任一项的方法，其中所述抗IL-13抗体分子包含重链免疫球蛋白可变结构域序列和轻链免疫球蛋白可变结构域序列，它们形成抗原结合部位，其以小于10^-7M的K_D结合至IL-13，其中该抗体分子具有以下性质之一或多种：

(a)该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含重链CDR3，其与mAbMJ2-7的重链CDR3相差少于3个氨基酸取代；

(b)该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含轻链CDR，其与mAbMJ2-7的对应轻链CDR相差少于3个氨基酸取代；

(c)该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含核酸编码的序列，该核酸在高严格条件下与编码V2.1、V2.3、V2.4、V2.5、V2.6、V2.7或V2.11的重链可变结构域的核酸的互补序列杂交；

(d)该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含核酸编码的序列，该核酸在高严格条件下与编码V2.11的轻链可变结构域的核酸的互补序列杂交；

(e)该重链免疫球蛋白可变结构域序列与V2.1、V2.3、V2.4、V2.5、V2.6、V2.7或V2.11的重链可变结构域有至少90％同一性；

(f)该轻链免疫球蛋白可变结构域序列与V2.11的轻链可变结构域有至少90％同一性；

(g)该抗体分子与mAb MJ2-7竞争结合人IL-13；

(h)该抗体分子接触IL-13的一个或多个氨基酸残基，所述残基选自SEQ ID NO：24或SEQ ID NO：178的残基116、117、118、122、123、124、125、126、127和128；

(i)该重链可变结构域序列具有与高变环1、2和/或3中的mAb MJ2-7相同的正则结构；

(j)该轻链可变结构域序列具有与高变环1、2和/或3中的mAb MJ2-7相同的正则结构；和

(k)该重链可变结构域序列和/或轻链可变结构域序列具有来自分别由种系基因DP-54及DPK-9编码的VH区段的FR1、FR2及FR3构架区，或与种系基因DP-54及DPK-9编码的VH区段有至少95％同一性的序列。

19.权利要求18的方法，其中所述抗IL-13抗体分子为全长抗体或其片段。

20.权利要求18的方法，其中所述抗IL-13抗体分子降低IL-13结合至IL-13RI1或IL-13RI2的能力。

21.权利要求18的方法，其中所述抗IL-13抗体分子包含具有一以下序列的重链可变结构域序列：

(i)在CDR1中，G-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-(MI)-H(SEQ ID NO：48)，

(ii)在CDR2中，(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-G(SEQ ID NO：49)；及

(iii)在CDR3中，SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：17)；和

具有以下序列的轻链可变结构域序列；

(i)在CDR1中，(RK)-S-S-Q-S-(LI)-(KV)-H-S-(ND)-G-N-(TN)-Y-L-(EDNQYAS)(SEQ ID NO：25)；

(ii)在CDR2中，K-(LVI)-S-(NY)-(RW)-(FD)-S(SEQ ID NO：27)；和

(iii)在CDR3中，Q-(GSA)-(ST)-(HEQ)-I-P(SEQ ID NO：28)。

22.权利要求18的方法，其中所述抗IL-13抗体分子包含具有一以下序列的重链可变结构域序列：

在CRD1中，GFNIKDTYIH(SEQ ID NO：15)；

在CRD2中，RIDPANDNIKYDPKFQG(SEQ ID NO：16)；及

在CRD3中，SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：17)；及

具有以下序列的轻链可变结构域序列：

在CRD1中，RSSQSIVHSNGNTYLE(SEQ ID NO：18)；

在CRD2中，KVSNRFS(SEQ ID NO：19)；及

在CRD3中，FQGSHIPYT(SEQ ID NO：20)。

23.一种使用包括中央区室(C_Ab，V)及周边区室(C_2，Ab，V₂)的双区室模型评估药物-配体复合体在受试者中的量的方法，所述方法包括：

于预定时间间隔下，提供受试者中所述药物-配体浓度的至少一种药物动力学参数值，所述值选自以下之一或多种：从中央区室的清除率(CL_Ab)；该中央区室与周边区室间的分布清除率(CL_d，Ab)；结合速率常数(K_on)；解离速率常数(K_off)；该药物-配体复合体的血清清除率(CL_复合体)；或配体产生的内源性速率常数除以该配体的血清清除率(Ksyn/CL_IL-13)；

使用如图39中所代表的双区室模型评估所述受试者中的至少一个药物动力学参数。

24.权利要求23的方法，其中所述双区室模型如下表示：

d C_{Ab} / dt = [In (t) + {CL}_{d, Ab} \cdot C_{2, Ab} - ({CL}_{d, Ab} + {CL}_{Ab}) \cdot C_{Ab}] / V

- K_{on} \cdot C_{Ab} \cdot (C_{IL - 13} - C_{Ab - (IL - 13)} - C_{Ab - {(IL - 13)}_{2}}) + K_{off} \cdot C_{Ab - (IL - 13)}

当t＝0时，

C_{Ab}^{0} = In (0) / V - - - (1)

dC_2，Ab/dt＝(CL_d，Ab·C_Ab-CL_d，Ab·C_2，Ab)/V₂

当t＝0时，

C_{2, Ab}^{0} = 0 - - - (2)

{dC}_{Ab - (IL - 13)} / dt = K_{on} \cdot C_{Ab} \cdot (C_{IL - 13} - C_{Ab - (IL - 13)} - C_{Ab - {(IL - 13)}_{2}})

- K_{on} \cdot C_{Ab - (IL - 13)} \cdot (C_{IL - 13} - C_{Ab - (IL - 13)} - C_{Ab - {(IL - 13)}_{2}})

当t＝0时，

C_{Ab - (IL - 13)}^{0} = 0 - - - (3)

{dC}_{Ab - {(IL - 13)}_{2}} / dt = K_{on} \cdot C_{Ab - (IL - 13)} \cdot (C_{IL - 13} - C_{Ab - (IL - 13)} - C_{Ab - {(IL - 13)}_{2}})

当t＝0时，

C_{Ab - {(IL - 13)}_{2}}^{0} = 0 - - - (4)

{dC}_{IL - 13} / dt = [K_{syn} - {CL}_{IL - 13} \cdot (C_{IL - 13} - C_{Ab - (IL - 13)} - C_{Ab - {(IL - 13)}_{2}})] / V

- K_{on} \cdot C_{Ab} \cdot (C_{IL - 13} - C_{Ab - (IL - 13)} - C_{Ab - {(IL - 13)}_{2}})

- K_{on} \cdot C_{Ab - (IL - 13)} \cdot (C_{IL - 13} - C_{Ab - (IL - 13)} - C_{Ab - {(IL - 13)}_{2}})

+ K_{off} \cdot C_{Ab - (IL - 13)} + K_{off} \cdot C_{Ab - {(IL - 13)}_{2}}

当t＝0时，

C_{IL - 13}^{0} = K_{syn} / {CL}_{IL - 13} - - - (5)

对于静脉内快速浓注剂量：

In(t)＝剂量 (6)

对于皮下剂量：

In(t)＝K_a·F·剂量 (7)

其中，

C_Ab为抗体(结合剂)的浓度；

In(t)为所施用之剂量(就快速浓注剂量而言)，且In(t)为用于皮下剂量的K_a ^＊F^＊剂量，其中K_a为一级速率常数，且F为生物利用率的估计值；

CL_d，Ab为在该中央区室与周边区室间的分布清除率；

C_2，Ab为在该周边区室中的配体结合剂的浓度；

V为在中央组成部分中的体积分布；

K_on为二级速率常数；

C_ligand(或C_IL-13)为配体的浓度；

C_Ab-(ligand)(或C_Ab-(IL-13))为配体结合剂/配体复合体的浓度；

K_off为一级解离速率常数，V₂为在周边区室内的分布体积；

CL_复合体为该配体结合剂/配体复合体的血清清除率；且

K_syn为内源性配体的零级速率常数。

25.权利要求23或24的方法，其中所述药物-配体复合体为配体-抗体复合体或配体-可溶性受体复合体。

26.一种治疗或预防受试者之早期哮喘病反应(EAR)的方法，所述方法包括对患有EAR或有患有所述疾病之危险的受试者施用抗IL-13抗体分子。

27.权利要求26的方法，其中所述抗IL-13抗体分子降低或预防以下之一或多种：至少一种过敏性介质，诸如白三烯和/或组胺的释放；至少一过敏性介质，诸如白三烯和/或组胺水平的增加；支气管收缩；和/或呼吸道水肿。

28.一种治疗或预防受试者中早期哮喘病反应(EAR)的方法，所述方法包括：

以通过权利要求2的方法确定的剂量、时间安排或给药方式，对患有EAR或有患有所述疾病之危险的受试者施用抗IL-13抗体分子。

29.一种治疗或预防受试者之晚期哮喘病反应(LAR)的方法，所述方法包括对患有LAR或有患所述疾病之危险的受试者施用抗IL-13抗体分子。

30.一种治疗或预防受试者中晚期哮喘病反应(LAR)的方法，所述方法包括：

以通过权利要求2的方法确定的剂量、时间安排或给药方式，对患有LAR或有患有所述疾病之危险的受试者施用抗IL-13抗体分子。

31.权利要求26至30任一项的方法，其中所述抗IL-13抗体分子包含重链免疫球蛋白可变结构域序列和轻链免疫球蛋白可变结构域序列，它们形成抗原结合部位，其以小于10^-7M的K_D结合至IL-13，其中该抗体分子具有以下性质之一或多种：

(g)该抗体分子与mAb MJ2-7竞争结合人IL-13；

(k)该重链可变结构域和/或轻链可变结构域序列具有来自分别由种系基因DP-54及DPK-9编码的VH区段的FR1、FR2及FR3构架区，或与种系基因DP-54及DPK-9编码的VH区段的有至少95％同一性的序列。

32.一种治疗受试者中IL-13相关病症的方法，所述方法包括对患有所述IL-13相关病症或有患有所述病症之危险的受试者施用一次或多次固定剂量的抗IL-13抗体分子。

33.权利要求32的方法，其中所述固定剂量在约75毫克到约500毫克之间。

34.权利要求33的方法，其中所述固定剂量为约75毫克、100毫克、200毫克或225毫克。

35.权利要求32-34任一项的方法，其中约每周一次、约每2周一次、约每3周一次、约每4周一次或约每月一次对所述受试者施用所述固定剂量。