CN101600456A - 治疗il-13相关疾病和监测il-13相关疾病治疗的方法和组合物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了用于治疗和/或监测IL－13相关疾病或病症治疗的方法和组合物。

Description

治疗IL-13相关疾病和监测IL-13相关疾病治疗的方法和组合物

相关申请的交互参考

本申请要求2006年12月11日提交的美国专利申请序列号60/874,333和2007年4月23日提交的美国专利申请序列号60/925,932的优先权。其全部内容并入本文作为参考。

序列表

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发明背景

白介素-13(IL-13)为一种由T淋巴细胞和肥大细胞分泌的细胞因子(McKenzie等(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.美国90：3735-39；Bost等(1996)Immunology 87：663-41)。IL-13与IL-4共有数种生物学活性。例如，IL-4或IL-13引起B细胞中IgE同种型转换(Tomkinson等(2001)J.Immunol.166：5792-5800)。再者，已有哮喘患者中细胞表面CD23和血清CD23(sCD23)水平增加的报导(Sanchez-Guererro等(1994)Allergy 49：587-92；DiLorenzo等(1999)Allergy Asthma Proc.20：119-25)。另外，IL-4或IL-13可增量调节B细胞和单核细胞上II类MHC和低亲和力IgE受体(CD23)的表达，其导致增加抗原呈递，并调节巨噬细胞的功能(Tomkinson等，如上述)。重要地，IL-4或IL-13可增加内皮细胞上VCAM-1的表达，其可有利于嗜酸性粒细胞(及T细胞)优先募集至呼吸道组织(Tomkinson，等人，如上述)。IL-4或IL-13也可增加呼吸道黏液的分泌，这可加重呼吸道反应性(Tomkinson等，如上述)。这些观察结果提示：虽然IL-13对诱导Th2发育并非必要的，或者其甚至不能诱导Th2发育，但IL-13在呼吸道嗜酸性粒细胞增多和AHR的发展中可能扮演着关键角色(Tomkinson等，如上述；Wills-Karp等(1998)Science 282：2258-61)。

发明概述

本申请公开了治疗IL-13相关疾病或病症和/或监测IL-13相关疾病或病症治疗的方法和组合物。一方面，申请人发现在IL-13相关疾病和病症发作之前单独对受试者施用IL-13拮抗剂或IL-4拮抗剂能相对于未处理的受试者而言减轻该疾病或病症的一种或多种症状。相对于在施用单个试剂后检测到的症状减轻，共施用IL-13拮抗剂及IL-4拮抗剂后检测到所述疾病或病症症状减轻的增强。因此，本申请公开了单独应用或与IL-4拮抗剂联合应用IL-13拮抗剂以减轻或抑制、或预防或延缓IL-13相关疾病或病症的一种或多种症状发作的方法。在其他实施方案中，还公开了在受试者(例如，人类受试者)中评估IL-13拮抗剂在治疗或预防IL-13相关疾病或病症中的效力的方法。

因此，一方面，本发明描述了在受试者中治疗或预防IL-13相关疾病或病症的方法。该方法包括以有效减轻该疾病或病症的一种或多种症状的量(例如，以有效降低受试者中以下一种多种的量：IgE水平、组胺释放、嗜伊红粒细胞趋化蛋白水平或呼吸症状)对受试者施用IL-13拮抗剂和/或IL-4拮抗剂。在预防应用(例如，预防、减轻或延缓该疾病或病症的一种或多种症状的发作或复发)的情况下，该受试者可能具有或可能没有所述疾病的一种或多种症状。例如，可在症状任何可检测的表现之前，或在检测到至少一些、但非全部症状后施用IL-13拮抗剂和/或IL-4拮抗剂。在治疗应用的情况下，该治疗可以在受试者中改善、治愈、维持该疾病或病症、或降低该疾病或病症的持续时间。在治疗应用的情况下，该受试者可能具有该症状的部分或全部表现。在一般情况下，治疗以医师可检测的程度改善受试者的疾病或病症，或预防该疾病或病症的恶化。

在一个实施方案中，以单一治疗间隔(single treatment interval)施用IL-13拮抗剂和/或IL-4拮抗剂，例如，作为单剂量、或作为单个治疗间隔期间内的不超过2个或3个剂量的重复剂量，例如，在开始剂量后一周或更少时间之内施用该重复剂量。例如，可以在与IL-13疾病或病症相关的一种或多种症状发作或复发之前，但在与该疾病或病症相关的症状完全显现之前，以单一治疗间隔施用IL-13拮抗剂和/或IL-4拮抗剂。在某些实施方案中，在暴露于触发或加重IL-13相关疾病或病症的物质(例如，变态反应原、污染物、有毒物质或感染和/或胁迫)之前，对受试者施用IL-13拮抗剂和/或IL-4拮抗剂。在一些实施方案中，在暴露于触发和/或加重IL-13相关疾病或病症的物质之前、期间或之后不久施用IL-13拮抗剂和/或IL-4拮抗剂。例如，可以在暴露于该触发和/或加重物质之前或之后1、5、10、25或24小时；2、3、4、5、10、15、20或30天；或4、5、6、7或8周或更久施用IL-13拮抗剂和/或IL-4拮抗剂。一般地，可以在暴露于该触发和/或加重物质之前或之后24小时至2天之间的任何时间施用IL-13拮抗剂和/或IL-4拮抗剂。在这些在暴露于该物质之后发生施用的实施方案中，受试者可能没有体验症状或可能体验了部分该症状的表现。例如，受试者可能具有该疾病或病症的早期阶段症状。可通过吸入或注射(例如，皮下)约0.5-10mg/kg的量(例如，约0.7-5mg/kg，0.9-4mg/kg、1-3mg/kg、1.5-2.5mg/kg、2mg/kg)施用每一剂量。

可对患有或有风险患有IL-13相关疾病或病症的受试者施用IL-13拮抗剂和/或IL-4拮抗剂。一般地，该受试者是患有或有风险患有IL-13相关疾病或病症的哺乳动物，例如人类(例如，儿童、青少年或成人)。IL-13相关疾病或病症的实例包括但不限于选自以下的一种或多种疾病：IgE-相关疾病，其包括但不限于特应性疾病，例如，产生自对IL-13或IL-4敏感性增加(例如，特应性皮炎、荨麻疹、湿疹、和变应性病症诸如变应性鼻炎或变应性肠胃炎)；呼吸病症，例如哮喘(例如变应性和非变应性哮喘(如：例如在较小的儿童中由于感染例如呼吸道合胞病毒(RSV)导致的哮喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD))，以及涉及呼吸道炎症的其他病症、嗜酸性粒细胞增多、纤维变性和黏液生成过量(如：囊性纤维化和肺纤维化)；炎性和/或自身免疫疾病或病症，例如皮肤炎性疾病或病症(如：特应性皮炎)、胃肠疾病或病症(如：炎症性肠病(IBD)、溃疡性结肠炎和/或克隆病)、肝脏疾病或病症(如：硬化、肝细胞癌)、以及硬皮病；肿瘤或癌(例如，软组织瘤或实体瘤)，诸如白血病、成胶质细胞瘤和淋巴瘤(例如霍奇金淋巴瘤)；病毒感染(如：来自HTLV-1)；其他器官的纤维变性，例如肝脏纤维变性(例如，由乙肝病毒和/或丙肝病毒引起的纤维变性)；以及保护性1型免疫反应表达的抑制(例如，在接种期间)。

例如，受试者可以是对季节性变应原(例如豚草)过敏的人类，或暴露于感冒或流感病毒或在感冒或流感季节期间的哮喘患者。在症状发作之前(例如，变应性或哮喘症状、或在变态反应之前或期间、或感冒或流感季节)，可将抗-IL-13拮抗剂和/或IL-14拮抗剂的单剂量间隔施用受试者，由此减轻该症状和/延缓该疾病或病症的发作。类似地，当治疗由疾病或病症循环突发或发作表征的慢性疾病时，IL-13和/或IL-14拮抗剂的施用可在与该疾病或病症相关的一种或多种症状显现之前(例如，在该症状完全显现之前)起作用。用于治疗变应性鼻炎或其他变应性疾病的一个示例性方法可包括：在暴露于变应原之前，例如在季节性暴露于变应原之前，例如，在变应原开花之前，用IL-13和/或IL-14拮抗剂。此类治疗可以包括IL-13和/或IL-14拮抗剂的单个治疗间隔，例如单剂量。在其他实施方案中，与变态反应免疫治疗联合施用该IL-13和/或IL-14拮抗剂的单一治疗间隔。例如，与变态反应免疫接种(例如，含有一种或多种变应原的疫苗，诸如豚草、粉尘和黑麦草)联合施用该IL-13和/或IL-14拮抗剂的单一治疗间隔。可以重复该单一治疗间隔，直到在该受试者中获得期望的免疫水平。

在其他实施方案中，以有效减轻或抑制、或预防或延缓IL-13相关疾病或病症的一种或多种症状发作的量施用IL-13拮抗剂和/或IL-4拮抗剂。例如，可以以降低以下一种或多种的量施用IL-13拮抗剂和/或IL-4拮抗剂：(i)受试者中的IL-13水平；(ii)受试者中嗜伊红粒细胞趋化蛋白的水平；(iii)通过嗜碱性粒细胞(例如，血液嗜碱性粒细胞)释放的组胺水平；(iv)受试者中的IgE-滴度；和/或(v)受试者中呼吸症状的一种或多种改变(例如，呼吸困难、喘鸣、咳嗽、呼吸短促和/或难以完成日常活动)。

在其他实施方案中，该IL-13拮抗剂和/或IL-4拮抗剂抑制和/或降低IL-13或IL-4或IL-13受体(例如，IL-13受体α1或IL-13受体α2)或IL-4受体(例如，IL-4受体α，或与其亚单位，例如γ链相关的受体)的一种或多种生物学活性。可用本文公开的IL-13或IL-14拮抗剂降低的示例性生物学活性包括，但不限于以下一种或多种：诱导CD23表达；由人B细胞产生IgE；转录因子，如：STAT蛋白质(如：STAT6蛋白质)的磷酸化；活体内由抗原诱导的嗜酸性粒细胞增多；体内由抗原诱导的支气管缩窄；和/或体内由药物诱导的呼吸道反应过度等。应用IL-13/IL-13R或IL-4/IL-4R拮抗剂的拮抗不必然表现为IL-13/IL-13R多肽和/或IL-4/IL-4R多肽生物学活性的全部消失。

为清楚的目的，本文应用的术语“IL-13拮抗剂”或“IL-4拮抗剂”共同地表示这样的化合物，即分别减少、抑制或以其他方式阻断IL-13及IL-13R、或IL-4及IL-4R生物学活性的化合物，诸如蛋白质(例如，多链多肽、多肽)、肽、小分子或抑制性核酸。在一个实施方案中，IL-13拮抗剂与IL-13或IL-13R多肽相互作用，例如与之结合(本文也称为“拮抗的IL-13结合剂”)。例如，IL-13拮抗剂可以与如IL-13或IL-13受体(优选哺乳动物，例如人IL-13或IL-13R)相互作用，例如与之结合(本文也分别称为“IL-13拮抗剂”和“IL-13R拮抗剂”)，并减少或抑制一种或多种IL-13和/或IL-13R相关生物学活性。在另一实施方案中，IL-4拮抗剂与IL-4或IL-4受体(例如哺乳动物，例如人IL-4或IL-4R(本文也分别称为“IL-4拮抗剂”和“IL-4R拮抗剂”))相互作用，例如与之结合，并减少或抑制一种或多种IL-4和/或IL-4R活性。拮抗剂以高亲和力与IL-13或IL-4、或IL-13R或IL-4R结合，例如，以至少约10⁷M^-1、优选约10⁸M^-1、以及更优选约10⁹M^-1至10¹⁰M^-1或更强的亲和力常数结合。应当注意，术语“IL-13拮抗剂”或“IL-4拮抗剂”包括抑制或减少本文公开的一种或多种生物学活性的物质，但是可以不直接与IL-13或IL-4结合。

术语“抗-IL13结合剂”和“IL-13结合剂”在本文中可以相互交换使用。在本文中使用的这些术语是指包括与IL-13蛋白质(例如，哺乳动物IL-13，尤其是人IL-13)结合的界面的任何化合物，诸如蛋白质(例如多链多肽、多肽)或肽。该结合剂一般以少于5×10^-7M的Kd结合。示例性的IL-13结合剂是包括抗原结合部位的蛋白质，例如，抗体分子。抗-IL-13结合剂或IL-13结合剂可以是与IL13结合的IL-13拮抗剂，或也可以包括简单地与IL-13结合，但不诱发活性或可以实际上拮抗-IL-13活性的物质。例如，某些结合并抑制一种或多种IL-13生物活性的IL-13结合剂，如抗-IL-13抗体分子，例如抗体3.2、MJ2-7和C65，也在本文中被称为拮抗-IL-13结合剂。不是本文所定义的IL-13结合剂的IL-13拮抗剂的实例例如包括：IL-13信号通路上游或下游的抑制剂(例如，STAT6抑制剂)。

其他实施方案可以包括一个或多个以下特征：

在一些实施方案中，IL-13拮抗剂或IL-4拮抗剂可以是与IL-13或IL-13R、或IL-4或IL-4R结合的抗体分子。IL-13或IL-4拮抗剂还可以是可溶形式的IL-13R(例如，可溶的IL-13Rα2或IL-13Rα1)或IL-4R(例如IL-4Rα)，单独的或与另一部分(例如，免疫球蛋白Fc区域)融合，或作为亚单位的异源二聚体(例如，可溶的IL-13R-IL-4R异源二聚体或可溶的IL-4R-γ共同异源二聚体)。在其他实施方案中，拮抗剂是细胞因子突变蛋白(例如，与相应受体结合，但基本上不活化该受体的IL-13或IL-4突变蛋白)，或与毒素缀合的细胞因子。在其他实施方案中，IL-13或IL-4拮抗剂是小分子抑制剂，例如，STAT6的小分子抑制剂，或肽抑制剂。在其他实施方案中，IL-13或IL-4拮抗剂是核酸表达抑制剂。例如，该拮抗剂是阻断或减少IL-13或IL-13R、或IL-4或IL-4R基因表达的反义RNA或siRNA。

在一个实施方案中，IL-13拮抗剂或结合剂(例如，抗体分子、可溶性受体、细胞因子突变蛋白、或肽抑制剂)结合IL-13或IL-13R并抑制或减少IL-13及IL-13受体(例如，IL-13Rα1、IL-13Rα2和/或IL-4RI)之间的相互作用(例如，结合)，由此减少或抑制信号转导。例如，IL-13拮抗剂能够结合选自以下复合物的一个或多个组分：例如，IL-13和IL-13Rα1(″IL-13/IL-13αR1″)；IL-13和IL-4Rα(″IL-13/IL-4Rα″)；IL-13、IL-13Rα1和IL-4Rα(″IL-13/IL-13Rα1/IL-4Rα″)；以及IL-13和IL-13Rα2(“IL-13/IL13Rα2”)。在实施方案中，IL-13拮抗剂与IL-13或IL-13R结合并干扰(例如，抑制、阻断或以其他方式减少)IL-13和IL-13受体复合物(例如，包括IL-13Rα1和IL-4Rα的复合物)之间的相互作用(例如结合)。在其他实施方案中，IL-13拮抗剂与IL-13分别结合并干扰(例如，抑制、阻断或以其他方式减少)IL-13和IL-13受体复合物的亚单位(例如，IL-13Rα1或IL-4Rα)之间的相互作用(例如结合)。在另一实施方案中，IL-13拮抗剂(例如，抗-IL-13抗体或其片段)结合IL-13，并干扰(例如，抑制、阻断或以其他方式减少)IL-13/IL-13Rα1和IL-4Rα之间的相互作用(例如结合)。在另一实施方案中，IL-13拮抗剂结合IL-13，并干扰(例如，抑制、阻断或以其他方式减少)IL-13/IL-4Rα和IL-13Rα1之间的相互作用(例如结合)。一般地，IL-13拮抗剂干扰(例如，抑制、阻断或以其他方式减少)IL-13/IL-13Rα1和IL-4Rα的相互作用(例如结合)。示例性的抗体抑制或阻止三元复合物IL-13/IL-13Rα1/IL-4Rα的形成。

在另一实施方案中，IL-4拮抗剂(例如，抗体分子、可溶性受体、细胞因子突变蛋白、或肽抑制剂)结合IL-4或IL-4R并抑制或降低IL-4及IL-4受体(例如，IL-4Rα和/或γ共有分子(common))之间的相互作用(例如，结合)，由此减少或抑制信号转导。例如，IL-4拮抗剂能够结合选自以下复合物的一个或多个组分：例如，IL-4和IL-4Rα(“IL-4/IL-4Rα”)；IL-4和γ共有(“IL-4/γ共有分子”)；或IL-4、IL-4Rα和γ共有分子(“IL-4/IL-4Rα/γ共有分子”)。在示例性实施方案中，IL-4拮抗剂与IL-4分别结合并干扰(例如，抑制、阻断或以其他方式减少)IL-4和IL-4受体复合物的亚单位(例如，IL-4α或γ共有分子)之间的相互作用(例如结合)。在另一实施方案中，IL-4拮抗剂结合IL-4，并干扰(例如，抑制、阻断或以其他方式减少)IL-4/IL-4Rα和γ共有分子之间的相互作用(例如结合)。

在其他实施方案中，IL-13/IL-13R或IL-4/IL-4R拮抗剂或结合剂是与IL-13/IL-13R或IL-4/IL-4R结合的抗体分子(例如，抗体、或其抗原结合片段)。例如，该抗体分子可以是与IL-13或IL-4、或IL-13受体或IL-4受体结合的全长单克隆或单特异性抗体(例如，包括至少一个(且一般为2个)完整重链，且至少一个(且一般为2个)完整轻链的抗体分子)；或其抗原结合片段(例如，重链或轻链变区结构域单体或二体(例如，V_H、V_HH、Fab，F(ab′)₂、Fv或单链Fv片段)。一般地，抗体分子是人类、骆驼、鲨鱼、人源化、嵌合或体外产生的针对人IL-13或IL-4或人IL-13受体或IL-4受体的抗体。在某些实施方案中，该抗体分子包括选自例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD和IgE的重链恒定区，尤其是选自例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的重链恒定区，更特别的是重链恒定区IgG1(例如人IgG1或其修饰形式)。在另一实施方案中，该抗体具有选自例如κ或λ轻链恒定区，优选κ(例如人κ)的轻链恒定区。在一个实施方案中，该恒定区经过改变，例如突变，以修改该抗体分子的性质(如：增加或减少下列之一项或多项：Fc受体结合、抗体糖基化、半胱氨酸残基数目、效应细胞功能或补体功能)。例如：人IgG1恒定区可在一个或多个残基上发生突变，例如如实施例5所描述的残基234和237之一个或多个，以减少下列之一或多项：Fc受体结合、抗体糖基化、半胱氨酸残基数目、效应细胞功能或补体功能。在实施方案中，抗体分子包括在SEQ ID NO：193之一个或多个残基上突变的人IgG1恒定区，例如在SEQ ID NO：193的116和119位突变。

在一个实施方案中，该抗体分子是抑制或中和抗体分子。例如，该抗-IL-13抗体分子可以具有可与IL-13Rα2相当的功能活性(例如，抗-IL-13抗体分子减少或抑制IL-13与IL-13Rα1的相互作用)。抗-IL-13抗体分子可以阻止IL-13和IL-13Rα1之间复合物的形成，或破裂或去稳定化IL-13和IL-13Rα1之间的复合物。在一个实施方案中，该抗-IL-13抗体分子抑制三元复合物的形成，例如，IL-13、IL-13Rα1和IL4-R间复合物的形成。在一个实施方案中，该抗体分子赋予注射后针对暴露于抗原的保护效果，例如，在注射至少6周后在绵羊模型中的蛔虫(Ascaris)抗原。在一个实施方案中，该抗-IL-13抗体分子能够以约50nM至5pM、通常约100至250pM或更少(例如，更好抑制)的IC₅₀抑制一种或多种IL-13相关生物学活性。在一个实施方案中，该抗-IL-13抗体分子可以以在10³至10⁸M^-1s^-1(通常为10⁴至10⁷M^-1s^-1)范围内的动力学(kinetics)与IL-13结合。在一个实施方案中，抗-IL-13抗体分子以在5×10⁴至8×10⁵M^-1s^-1范围内的k_on与人IL-13结合。而在另一个实施方案中，抗-IL-13抗体分子具有在10^-2至10^-6s^-1(通常为10^-2至10^-5s^-1)范围内的解离动力学。在一个实施方案中，抗-IL-13抗体分子以类似于(例如，在因子20、10或5之内)单克隆抗体13.2、MJ 2-7或C65、或其修饰形式(例如，其嵌合或人源化形式)的亲和力和/或动力学结合IL-13，例如人IL-13。IL-13结合剂的亲和力和结合动力学可利用例如生物传感器技术(BIACORE^TM))测试。

在另一实施方案中，抗-IL-13抗体分子特异性结合IL-13，例如哺乳动物(例如人类)IL-13的表位，例如，线性或构象表位。例如，该抗体分子结合由与人IL-13结合的IL-13Rα1限定的表位、或由与人IL-13结合的IL-13Rα2限定的表位、或与此类表位重叠的表位中的至少一个氨基酸。抗-IL-13抗体分子可与IL-13Rα1和/或IL-13Rα2竞争与IL-13(例如，人IL-13)的结合。抗-IL-13抗体分子可完全抑制IL-13Rα1和/或IL-13Rα2与IL-13的结合。该抗-IL-13抗体分子可与IL-13上的表位相互作用，当结合时，其空间性阻止与IL-13Rα1和/或IL-13Rα2的相互作用。在一个实施方案中，该抗-IL-13抗体分子特异性地结合人IL-13并完全抑制第二抗体与所述人IL-13的结合，其中所述的第二抗体选自与IL-13(例如，人IL-13)结合的13.2、MJ 2-7和/或C65(或本文公开的任何其他抗-IL-13抗体)。抗-IL-13抗体分子可以完全抑制13.2、MJ 2-7和/或C65与IL-13的结合。抗-IL-13抗体分子可以特异性地结合由与人IL-13结合的13.2、MJ 2-7限定的表位、或由与人IL-13结合的C65限定的表位中的至少一个氨基酸。在一个实施方案中，该抗-IL-13抗体分子可以结合覆盖13.2、MJ 2-7或C65的表位，例如，包括至少一个、两个、三个或四个共有的氨基酸，或结合这样的表位，即当结合时，空间性阻止与13.2、MJ 2-7或C65的相互作用。例如，抗体分子可以接触以下的来自IL-13的一个或多个残基：选自人IL-13(SEQ ID NO：194)残基81-93和/或114-132的一个或多个残基，或选自以下的一个或多个：在SEQ ID NO：194位置68[49]处的谷氨酸、在位置72[53]处的天冬酰胺、在位置88[69]处的甘氨酸、在位置91[72]处的脯氨酸、在位置92[73]处的组氨酸、在位置93[74]处的赖氨酸和/或在位置105[86]处的精氨酸[在成熟序列中之位置；SEQ ID NO：195]。在其他实施方案中，该抗体分子接触以下的来自IL-13的一个或多个残基：选自SEQID NO：24或SEQ ID NO：178的残基116、117、118、122、123、124、125、126、127和/或128的一个或多个残基。在一个实施方案中，抗体分子与IL-13结合，这与在SEQ ID NO：24位置130上存在的多态性无关。

在一个实施方案中，该抗体分子包括一个、两个、三个、四个、五个或所有六个来自mAb13.2、MJ2-7、C65或本文公开的其他抗体的CDR，或极相关的CDR，例如，同一的CDR，或具有至少一个氨基酸改变，但不超过两个、三个或四个改变(例如，取代(例如，保守取代)、缺失或插入)的CDR。任选地，该抗体分子可以包括本文公开的任意CDR。在一个实施方案中，重链免疫球蛋白可变区包含与单克隆抗体MJ2-7(SEQ IDNO：17)、mAb 13.2(SEQ ID NO：196)或C65(SEQ ID NO：123)的重链CDR3少于3个氨基酸取代之区别的重链CDR3。在其他实施方案中，轻链疫球蛋白可变区包含与单克隆抗体MJ2-7(SEQ ID NO：18)、mAb 13.2(SEQ ID NO：197)或C65(SEQ ID NO：118)相应的轻链CDR少于3个氨基酸取代之区别的轻链CDR1。MJ2-7重链可变区的氨基酸序列具有SEQ IDNO：130所示的氨基酸序列。MJ2-7轻链可变区的氨基酸序列具有SEQ IDNO：133所示的氨基酸序列。单克隆抗体13.2重链可变区的氨基酸序列具有SEQ ID NO：198所示的氨基酸序列。单克隆抗体13.2轻链可变区的氨基酸序列具有SEQ ID NO：199所示的氨基酸序列。

在某些实施方案中，该抗体分子的重链可变区包括以下一个或多个：

CDR1中：G-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-(MI)-H(SEQ ID NO：48)；

CDR2中：(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-G(SEQID NO：49)；和/或

CDR3中：SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：17)；或

CDR1中：GFNIKDTYIH(SEQ ID NO：15)；

CDR2中：RIDPANDNIKYDPKFQG(SEQ ID NO：16)；和/或

CDR3中：SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：17)。

在其他实施方案中，该抗体分子的轻链可变区包括以下一个或多个：

CDR1中：(RK)-S-S-Q-S-(LI)-(KV)-H-S-(ND)-G-N-(TN)-Y-L-(EDNQYAS)(SEQ ID NO：25)；

CDR2中：K-(LVI)-S-(NY)-(RW)-(FD)-S(SEQ ID NO：27)；和/或

CDR3中：Q-(GSA)-(ST)-(HEQ)-I-P(SEQ ID NO：28)，或

CDR1中：RSSQSIVHSNGNTYLE(SEQ ID NO：18)；

CDR2中：KVSNRFS(SEQ ID NO：19)和

CDR3中：FQGSHIPYT(SEQ ID NO：20)。

在其他实施方案中，该抗体分子包括一个或多个这样的CDR，即所述CDR包括选自氨基酸序列EQ ID NO：197、SEQ ID NO：200、SEQ IDNO：201、SEQ ID NO：202、SEQ ID NO：203和SEQ ID NO：196的氨基酸序列。

在另一实施方案中，所述抗体包括至少1、2或者3个Chothia高变环，其来自选自例如mAb13.2、MJ2-7、C65或本文公开的任何其他抗体之抗体的重链可变区，或者尤其包括至少来自那些高变环的接触IL-13的氨基酸。在另一实施方案中，所述抗体或者其片段包括至少1、2或者3个高变环，其来自例如选自例如mAb13.2、MJ2-7、C65或本文公开的其他抗体之抗体的轻链可变区，或者至少包括来自那些高变环的接触IL-13的氨基酸。在另一实施方案中，所述抗体或者其片段包括至少1、2、3、4、5或者6个高变环，其来自选自例如mAb13.2、MJ2-7、C65或本文公开的其他抗体之抗体的重链和轻链的可变区。

在一个实施方案中，所述蛋白质包括来自mAb13.2、MJ2-7、C65或本文公开的其他抗体的所有6个高变环或者密切相关的高变环，例如，与本文公开的序列同一或者具有至少一个氨基酸改变，但是不超过2、3、或者4个改变的高变环。任选地，该蛋白质包括本文描述的任一高变环。

在另一实例中，所述蛋白质包括至少1、2或者3个高变环，其具有与mAb13.2、MJ2-7、C65或本文公开的其他抗体的对应的高变环相同的标准结构(canonical structure)，例如，与mAb13.2、MJ2-7、C65或本文公开的其他抗体的重和/或轻链可变区的至少环1和/或环2相同的标准结构。关于高变环标准结构的描述，见，例如，Chothia等(1992)J.Mol.Biol.227：799-817；Tomlinson等(1992)J.Mol.Biol.227：776-798。通过检查这些参考文献中描述的表格可以确定这些结构。

在一个实施方案中，该抗体分子的重链框架(例如，各个FR1、FR2、FR3，或包括FR1、FR2和FR3，但排除CDR的序列)包括与以下种系V片段序列之一的重链框架至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或更高同一的氨基酸序列：DP-25、DP-1、DP-12、DP-9、DP-7、DP-31、DP-32、DP-33、DP-58或DP-54，或其他可与1-3类标准结构相容的V基因(例如参见Chothia等(1992)J.Mol.Biol.227：799-817；Tomlinson等(1992)J.Mol.Biol.227：776-798)。其他可与1-3类标准结构相容的框架包括具有一个或多个以下根据Kabat编号之残基的框架：位置26的Ala、Gly、Thr或Val；位置26的Gly；位置27的Tyr、Phe或Gly；位置29的Phe、Val、Ile或Leu；位置34的Met、Ile、Leu、Val、Thr、Trp或Ile；位置94的Arg、Thr、Ala、Lys；位置54的Gly、Ser、Asn或Asp；以及位置71的Arg。

在一个实施方案中，该抗体分子的轻链框架(例如，各个FR1、FR2、FR3，或包括FR1、FR2和FR3，但排除CDR的序列)包括与VκII亚群种系序列或以下种系V片段序列之一的轻链框架至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或更高同一的氨基酸序列：A17、A1、A18、A2、A19/A3或A23，或可与4-1类标准结构相容的另一V基因(Tomlinson等(1995)EMBO J.14：4628)。其他可与4-1类标准结构相容的框架包括具有一个或多个以下根据Kabat编号之残基的框架：位置2的Val或Leu或Ile；位置25的Ser或Pro；位置29的Ile或Leu；位置31d的Gly；位置33的Phe或Leu；以及位置71的Phe。

在另一实施方案中，该抗体分子的轻链框架(例如，各个FR1、FR2、FR3，或包括FR1、FR2和FR3，但排除CDR的序列)包括与VκI亚群种系序列(例如，DPK9序列)轻链框架至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或更高同一的氨基酸序列。

在另一实施方案中，该抗体分子的重链框架(例如，各个FR1、FR2、FR3，或包括FR1、FR2和FR3，但排除CDR的序列)包括与VH I亚群种系序列(例如，DP-25序列)或VH III亚群种系序列(例如，DP-54序列)轻链框架至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或更高同一的氨基酸序列。

在某些实施方案中，该抗体分子的重链免疫球蛋白可变区包括由下述核苷酸序列编码的氨基酸序列，所述核苷酸序列在高严格条件下与以下核苷酸序列的互补序列杂交：编码V2.1的重链可变区(SEQ ID NO：71)、V2.3的重链可变区(SEQ ID NO：73)、V2.4的重链可变区(SEQ ID NO：74)、V2.5的重链可变区(SEQ ID NO：75)、V2.6的重链可变区(SEQ IDNO：76)、V2.7的重链可变区(SEQ ID NO：77)、V2.11的重链可变区(SEQID NO：80)、ch13.2的重链可变区(SEQ ID NO：204)、h13.2v1的重链可变区(SEQ ID NO：205)、h13.2v2的重链可变区(SEQ ID NO：206)或h13.2v3的重链可变区(SEQ ID NO：207)的核苷酸序列；或包括与V2.1的重链可变区(SEQ ID NO：71)、V2.3的重链可变区(SEQ ID NO：73)、V2.4的重链可变区(SEQ ID NO：74)、V2.5的重链可变区(SEQ ID NO：75)、V2.6的重链可变区(SEQ ID NO：76)、V2.7的重链可变区(SEQ ID NO：77)、V2.11的重链可变区(SEQ ID NO：80)；ch13.2的重链可变区(SEQ IDNO：208)，h13.2v1的重链可变区(SEQ ID NO：209)、h13.2v2的重链可变区(SEQ ID NO：210)或h13.2v3的重链可变区(SEQ ID NO：211)氨基酸序列至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或更高同一的氨基酸序列。在实施方案中，该重链免疫球蛋白可变区包括SEQ ID NO：80的氨基酸序列，其可以进一步包括包含SEQ ID NO：116或SEQ ID NO：117氨基酸序列的重链可变区框架区4(FR4)。

在其他实施方案中，该抗体分子的轻链免疫球蛋白可变区包括由下述核苷酸序列编码的氨基酸序列，所述核苷酸序列在高严格杂交条件下与编码V2.11(SEQ ID NO：36)或h13.2v2(SEQ ID NO：212)轻链可变区的核苷酸序列的互补序列杂交；或包括与V2.11(SEQ ID NO：36)或h13.2v2(SEQID NO：212)的轻链可变区至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或更高同一的氨基酸序列。在实施方案中，该轻链免疫球蛋白可变区包括SEQ ID NO：36的氨基酸序列，其可以进一步包括包含SEQ ID NO：47氨基酸序列的轻链可变区框架区4(FR4)。

在另一实施方案中，该抗体分子包括重链可变区框架区序列，其包含：

(i)在对应于49的位置上，Gly；

(ii)在对应于72的位置上，Ala；

(iii)在对应于48的位置上，Ile，以及对应于49的Gly；

(iv)在对应于48的位置上，Ile，对应于49的Gly；以及对应于72的Ala；

(v)在对应于67的位置上，Lys，对应于68的Ala；以及对应于72的Ala；和/或

(vi)在对应于48的位置上，Ile，对应于49的Gly；对应于72的Ala；以及对应于79的Ala。

在一个实施方案中，抗-IL-13抗体分子包括至少一个包含SEQ IDNO：177的氨基酸序列(或与SEQ ID NO：177至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或更高同一的氨基酸序列)的轻链以及至少一个包含SEQID NO：176的氨基酸序列(或与SEQ ID NO：176至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或更高同一的氨基酸序列)的重链。

在一个实施方案中，该抗-IL-13抗体分子包括两个免疫球蛋白链：轻链，其包括SEQ ID NO：199、213、214、212或215；重链，其包括SEQ IDNO：198、208、209、210或211(或与SEQ ID NO：199、213、214、212或215，或SEQ ID NO：198、208、209、210或211至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或更高同一的氨基酸序列)。该抗体分子还可在重链中包括SEQ ID NO：193的氨基酸序列，以及在轻链中包括SEQ IDNO：216的氨基酸序列(或与SEQ ID NO：193或SEQ ID NO：216至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或更高同一的氨基酸序列)。

抗-IL-13抗体分子的其他实例包括在以下文献中公开的那些：公开了CAT-354的US 07/0128192或WO 05/007699以及Blanchard，C.等(2005)Clinical and Experimental Allergy 35(8)：1096-1103；公开了TNX-650的WO 05/062967、WO 05/062972和Clinical Trials Gov.Identifier：NCT00441818；公开了QAX-576的Clinical Trials Gov.Identifier：NCT532233；以Abgenix的名义提交的US 06/0140948或WO 06/055638；指定AMGEN的US 6,468,528；以Centocor，Inc.作为申请人的WO05/091856；以及Yang等(2004)Cytokine 28(6)：224-32和Yang等(2005)JPharmacol Exp Ther：313(1)：8-15；以及如在以Glaxo的名义提交的WO07/080174中公开的和以Novartis名义的WO 07/045477中公开的抗-IL-13抗体。

IL-13或IL-4拮抗剂的其他实例包括但不限于：针对IL-4的抗体分子(例如，在Hart，T.K.等(2002)Clin Exp Immunol.130(1)：93-100；Steinke，J.W.(2004)Immunol.Allergy Clin North Am 24(4)：599-614以及在Ramanthan等U.S.6,358,509中公开的帕考珠单抗(pascolizumab)以及相关抗体)，针对IL-4Ra的抗体(例如，在US 05/0118176、US 05/0112694和在Clinical Trials Gov.Identifier：NCT00436670中公开的AMG-317和相关抗-IL-4R抗体)；针对IL-13Rα1的抗体(例如，在以AMRAD作为申请人的WO 03/080675中公开的抗13Rα1的抗体)；以及与IL4和/或IL-13结合的单或双特异性抗体分子(例如公开于WO 07/085815)。

在其他实施方案中，所述IL-13或IL-4拮抗剂是IL-13或IL-4突变蛋白(例如，与IL-13R或IL-4受体结合，但不显著增加该受体活性的细胞因子的截短或变体形式)，或与毒素缀合的细胞因子。Weinzel等(2007)Lancet 370：1422-31公开了IL-4突变蛋白。IL-13/IL-4抑制肽的其他实例公开于Andrews，A.L等(2006)J.Allergy and Clin Immunol 118：858-865。细胞因子-毒素缀合物的实例公开于WO 03/047632、Kunwar，S.等(2007)J.Clin Oncol 25(7)：837-44以及Husain，S.R.等(2003)J.Neurooncol65(1)：37-48。

在另一实施方案中，IL13拮抗剂或IL-4拮抗剂是IL-13受体多肽(例如IL-13Rα2或IL13Rα1)、或IL-4受体多肽(例如，IL-4α)的全长或片段或修饰形式。例如，该拮抗剂可以是IL-13受体或IL-4受体的可溶形式(例如，包含细胞因子结合结构的哺乳动物(例如人)IL-13Rα2、IL13Rα1或IL-4α的可溶形式；例如，哺乳动物(例如人)IL-13Rα2、IL13Rα1或IL-4α的细胞外结构域可溶形式)。示例性受体拮抗剂包括，例如在WO 05/085284和Economides，A.N.等(2003)Nat Med 9(1)：47-52以及在Borish，L.C.等(1999)Am J Respir Crit Care Med 160(6)：1816-23中公开的IL-4R-IL-13R结合融合物。

IL-13受体或IL-4受体的可溶形式、或IL-13或IL-4突变蛋白可以单独使用，或与第二部分功能地连接(例如，通过化学偶联、遗传或多肽融合，非共价结合或以其他方式)，以促进表达、空间柔性、检测和/或分离或纯化，所述第二部分例如，免疫球蛋白Fc结构域、血清白蛋白、加入聚乙二醇、GST、Lex-A或MBP多肽序列。该融合蛋白还可以包括使第一部分和第二部分连接的接头序列。例如，可溶的IL-13受体或IL-4受体、或IL-13或IL-4突变蛋白可以与多种同种型的重链恒定区融合，所述同种型包括IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD和IgE。一般地，该融合蛋白可以包括人可溶IL-13受体或IL-4受体、或IL-13或IL-4突变蛋白的胞外结构域(或与其同源的序列)，以及例如，与人类免疫球蛋白Fc链(例如，人IgG(例如，人IgG1或人IgG2，或其突变形式))融合。可以在一个或多个氨基酸上突变该Fc序列，以降低效应细胞功能，Fc受体结合和/或补体活性。

应当理解，本文描述的抗体分子和可溶或融合蛋白可以与一个或多个其他分子实体功能地连接(例如，通过化学偶联、遗传融合，非共价结合或以其他方式)，诸如抗体(例如，双特异性或多特异性抗体)、毒素、放射性同位素、细胞毒素或细胞静止剂。

在另一实施方案中，所述IL-13或IL-4拮抗剂抑制编码IL-13或IL-13R，或IL-4或IL-4R的核酸的表达。此类拮抗剂的实例包括核酸分子，例如，与编码IL-13或IL-13R，或IL-4或IL-4R的核酸或转录调控区杂交的反义分子、核酶、RNAi、siRNA、三股螺旋分子，并阻碍或减少IL-13或IL-13R，或IL-4或IL-4R的mRNA表达。ISIS-369645提供抑制IL-4Rα表达的反义核酸的实例(由ISIS Pharmaceuticals开发，并公开于，例如Karras，J.G.等(2007)Am J Respir Cell Mol Biol.36(3)：276-86)。干扰编码IL-4或IL-13的RNA的示例性短干扰RNA(siRNA)公开于WO07/131274。

在其他实施方案中，IL-13或IL-4拮抗剂是IL-13信号上游或下游的抑制剂，例如，小分子抑制剂(例如，STAT6抑制剂)。STAT6抑制剂的实例公开于WO 04/002964、加拿大专利申请CA 2490888和Nagashima，S.等(2007)Bioorg Med Chem 15(2)：1044-55以及公开于US 6,207,391和WO01/083517。

在另一实施方案中，将一种或多种IL-13拮抗剂与一种或多种IL-4拮抗剂联合施用。该联合治疗可以包括与IL-4拮抗剂一起配制和/或与其一起施用的IL-13拮抗剂。可以同时或顺次施用IL-13拮抗剂和IL-4拮抗剂。如果顺次施用，医师可以选择与IL-4拮抗剂联合施用IL-13拮抗剂的合适顺序。该联合治疗还可以包括选自以下一种或几种的其他治疗剂：吸入性类固醇；β-激动剂，例如短效或长效β-激动剂；白三烯或白三烯受体的拮抗剂；组合药物诸如

IgE抑制剂，例如抗IgE抗体(例如，

)；磷酸二酯酶抑制剂(例如，PDE4抑制剂)；黄嘌呤；抗胆碱能药物；肥大细胞稳定剂，诸如色甘酸；IL-5抑制剂；嗜伊红粒细胞趋化蛋白/CCR3抑制剂；和抗组胺剂。这类组合可用来治疗哮喘和其他呼吸病症。其他可与IL-13结合剂共同施用和/或一起配制的治疗剂的实例包括下列一种或多种治疗剂：TNF拮抗剂(如：TNF受体的可溶性片段，如：p55或p75人TNF受体或其衍生物，如：75kd TNFR-IgG(75kD TNF受体-IgG融合蛋白，ENBREL^TM))；TNF酶拮抗剂，如：TNFα转化酶(TACE)抑制剂；毒蕈碱性受体拮抗剂；TGF-β拮抗剂；干扰素γ；普非尼酮(perfenidone)；化疗剂，如：氨甲蝶呤、来氟米特(leflunomide)，或西罗莫司(sirolimus)(雷帕霉素(rapamycin))或其类似物，如：CCI-779；COX2和cPLA2抑制剂；NSAID；免疫调节剂；p38抑制剂、TPL-2、Mk-2和NFκB抑制剂等。

在其他方面，本申请提供了评估IL-13拮抗结合剂(例如，本文描述的抗-IL-13抗体分子)在治疗(例如，减轻)受试者(例如人或非人受试者)肺炎的效率的方法。

在另一实施方案中，本文公开的方法还包括以下步骤：

在施用IL-13拮抗剂和/或IL-4拮抗剂后，评估(例如检测)受试者的一个或多个以下参数的变化：(i)如本文体外检测方法中描述的那样检测样本，例如生物样本(例如血清、血浆、血液)中未结合和/或结合至IL13结合剂的IL-13水平；(ii)检测样本，例如生物样本(例如血清、血浆、血液)中嗜伊红粒细胞趋化蛋白水平；(iii)检测由嗜碱性粒细胞释放的组胺；(iv)检测IgE滴度；和/或(v)评估受试者症状的改变(例如，呼吸困难、喘鸣、咳嗽、呼吸短促和/或难以完成日常活动)。在实施方案中，可在IL-13拮抗结合剂施用(在单或多次施用后)于受试者之前或之后(例如，在选择的开始治疗后的间隔)进行参数(i)-(v)的检测。可通过临床医生或支持人员进行(i)-(v)之一个或多个改变的检测和/或评估。相对于预确定水平(例如，比较治疗前和后)的(i)-(v)之一个或多个的改变(例如，减少)表明该IL-13拮抗剂在受试者中有效地减轻了肺炎。在实施方案中，该受试者是人类患者，例如成人或儿童。

在其他方面，本发明提供了组合物(例如药物组合物)或剂型，其包括可药用载体和与IL-4拮抗剂一起配制的至少一种IL-13拮抗结合剂，例如抗-IL-13抗体。还可以应用前述拮抗剂和本文描述的其他药物，例如治疗剂(例如，一种或多种细胞因子和生长因子抑制剂、免疫抑制剂、抗炎剂(例如，系统性抗炎剂))、代谢抑制剂、酶抑制剂和/或细胞毒素或细胞静止剂的组合。

在另一方面，本发明描述了用于本文所公开方法的包括IL-13拮抗剂和/或IL-4拮抗剂的试剂盒，其具有作为单一治疗间隔施用该拮抗剂以治疗或预防IL-13相关疾病或病症的(例如，本文所描述的疾病或病症)的说明书。

在另一方面，本发明描述了包括IL-13拮抗剂和/或IL-4拮抗剂的的组合物，其用于本文公开的方法。

在另一方面，本发明描述了包括IL-13拮抗剂和/或IL-4拮抗剂的组合物在制备治疗或预防IL-13相关疾病或病症的(例如，本文所描述的疾病或病症)的药物中的用途。

在另一方面，本申请提供了检测体外样本(例如，生物样本，诸如血清、血浆、组织、活检物)中IL-13之存在的方法。该方法可用于诊断疾病，例如，IL-13相关疾病，或用于监测治疗的效力。该方法包括：(i)使该样本与IL-13结合剂接触，所述试剂例如是第一IL-13结合剂或本文描述的抗-IL-13抗体分子；以及(ii)检测样本中第一IL-13结合剂和IL-13(例如，基本上游离的IL-13和/或与第二抗-IL-13结合剂或抗体分子结合的IL-13)之间复合物的形成。样本中与第一抗-IL-13结合剂或抗体分子结合的IL-13的水平相对于参照值或样本(例如，对照样本)的统计学显著改变表明样本中存在IL-13。

在某些实施方案中，该第一抗-IL-13结合剂或抗体分子固定在支持物上(例如，固体支持物，诸如ELISA板、珠子)。

在其他实施方案中，该方法还包括在将该受试者暴露于第二抗-IL-13结合剂或抗体分子之前和/或之后从该受试者获得样本。该样本可以含有基本上游离的IL-13和/或与第二抗-IL-13结合剂或抗体分子结合的IL-13。使该样本与固定的第一抗-IL-13结合剂或抗体分子在这样的条件下接触，所述条件允许IL-13与固定的第一抗-IL-13结合剂或抗体分子发生结合。

在实施方案中，所述检测步骤包括检测与固定的第一抗-IL-13结合剂或抗体分子结合的IL-13(例如，基本上游离的IL-13和/或与第二抗-IL-13结合剂或抗体分子结合的IL-13)的存在，例如，应用标记的第三抗-IL-13结合剂或抗体分子，或经标记的识别IL-13第一或第二结合剂或抗体分子的试剂。可将标记直接或间接地连接至抗-IL-13结合剂或抗体分子上，所述标记例如，本文所述的荧光、放射性、生物素-抗生物素蛋白。例如，用可检测的物质直接或间接标记抗-IL13结合剂或抗体分子，以帮助检测结合或未结合的抗体。合适的可检测物质包括各种酶、辅基、荧光材料、发光材料和放射材料。

在一个实施方案中，所述第一抗-IL-13结合剂或抗体分子与基本上游离的IL-13结合，但基本上不与结合至第二抗-IL-13结合剂或抗体分子的IL-13结合。在其他实施方案中，所述第一抗-IL-13结合剂或抗体分子与基本上游离的IL-13及结合至第二抗-IL-13结合剂或抗体分子的IL-13结合。

在另一实施方案中，所述第一、第二和/或第三抗-IL-13结合剂或抗体分子与IL-13上不同的表位结合。例如，第一抗-IL-13抗体分子是mAb13.2或其人源化形式(version，公开于本文和US 06/0063228)，或可与mAb13.2竞争结合IL-13的IL-13结合剂；第二抗-IL-13抗体分子是MJ2-7或其人源化形式；和/或第三抗-IL-13抗体分子是C65抗体或其人源化形式(公开于本文及US 06/0073148)(或可与MJ2-7或C65竞争结合IL-13的IL-13结合剂)。在所述检测方法中，可以以任意顺序应用抗-IL-13抗体分子。

在实施方案中，通过使固定的复合物与Fc结合剂(例如，抗-Fc抗体分子)接触以检测固定在第一IL-13结合剂上的与第二IL-13结合剂结合的IL-13复合物，由此确定样本中与第二IL-13结合剂结合的IL-13的量。

在实施方案中，受试者样本(例如，生物样本，诸如血清、血浆、组织、活检物)中IL-13水平相对于预确定水平的升高表明肺中炎症的增加。

在另一方面，本发明提供了体内检测IL-13存在的方法(例如，受试者中体内成像)。该方法可用于诊断疾病，例如IL-13相关疾病，或用于检测治疗的效力。该方法包括：(i)在允许第一IL-13结合剂与IL-13发生结合的条件下，对受试者施用第一IL-13结合剂，例如如本文所描述的第一抗-IL-13抗体分子；以及(ii)应用可检测性标记的第二IL-13结合剂体内检测IL-13(例如，检测IL-13和第一IL-13结合剂间复合物的形成)，其中相对于对照受试者受试者IL-13水平的统计学显著改变表明存在IL-13。在实施方案中，受试者中IL-13水平相对于预确定水平的升高表明肺中炎症的增加。

在一个实施方案中，所述IL-13结合剂和IL-13拮抗剂与基本上游离的IL-13和/或结合至第二抗-IL-13结合剂的IL-13结合。在一个实施方案中，所述IL-13拮抗剂和IL-13结合剂识别IL-13上不同的表位。例如，IL-13拮抗剂可以是mAb13.2或其人源化形式(公开于本文和US06/0063228)，或可与mAb13.2竞争结合IL-13的IL-13拮抗剂；IL-13结合剂是MJ2-7或其人源化形式；或该结合剂是C65抗体或其人源化形式(公开于本文及US 06/0073148)(或可与MJ2-7或C65竞争结合IL-13的IL-13结合剂)。在所述检测方法中，可以以任意顺序应用抗-IL-13拮抗剂或结合剂。

在另一方面，本申请提供了评估IL-13拮抗结合剂(例如，本文描述的抗-IL-13抗体分子)在治疗(例如，减轻)受试者(例如，人或非人受试者)肺炎中的效力的方法。该方法包括：

对该受试者施用IL-13拮抗剂和/或IL-4拮抗剂；

检测一个或多个以下参数的改变：(i)如本文体外检测方法中所描述的那样，检测样本，例如生物样本(例如，血清、血浆、血液)中未结合和/或与IL-13结合剂结合的IL-13的水平，其中未结合和/或结合的IL-13水平相对于参照值(例如，对照样本)的改变是该试剂效力的指标。

在实施方案中，该方法还包括：(i)检测样本，例如生物样本(例如，血清、血浆、血液)中嗜伊红粒细胞趋化蛋白水平；(ii)检测例如通过嗜碱性粒细胞释放的组胺；(iii)检测IgE滴度；和/或(iv)评估受试者症状的改变(例如，呼吸困难、喘鸣、咳嗽、呼吸短促和/或难以完成日常活动)。可在将IL-13拮抗结合剂施用(在单或多次施用后)给受试者之前或之后(例如，在选择的开始治疗后的间隔)进行参数(i)-(iv)的检测。可通过临床医生或支持人员进行(i)-(iv)之一个或多个改变的检测和/或评估。相对于预确定水平的(i)-(iv)之一个或多个的改变(例如，减轻)(例如，比较治疗前和后)表明该IL-13拮抗剂在受试者中有效地减少了肺炎。在实施方案中，该受试者是人类患者，例如成人或儿童。

在实施方案中，可在受试者，例如非人受试者，诸如绵羊、啮齿类动物、非人灵长类动物(例如，对抗原，例如对猪蛔虫(Ascaris suum)天然过敏的食蟹猴)中评估IL-13结合剂(例如，所描述的抗-IL13抗体分子)在体内中和一种或多种IL-13相关活性的效力。例如，可通过在IL-13结合剂存在或不存在下用蛔虫抗原攻击之前或之后，在对猪蛔虫天然过敏的食蟹猴中测量以下一种或多种来评估IL-13结合剂的效力：(i)检测进入气道的炎性细胞(例如，嗜酸性粒细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞)；(ii)测量嗜伊红粒细胞趋化蛋白水平；(iii)检测抗原特异性(例如，蛔虫特异性)嗜碱性粒细胞组胺释放；和/或(iv)检测抗原特异性(例如，蛔虫特异性)IgE滴度。相对于预定水平的(i)-(iv)中一或多项水平的改变(例如，减少)(例如，比较处理前和后)表明该IL-13结合剂有效地减轻了受试者中的气道嗜酸粒细胞增多。

本文还公开了应用IL-13结合剂，例如本文公开的抗-IL-13抗体分子诊断IL-13相关疾病的方法。

本文应用的冠词“一”是指一或超过一(例如至少一)个该冠词的文法对象。

本文所使用的术语“或”意思是“和/或”，并可与术语“和/或”互换使用，除非上下文清楚的以其他方式指明。

术语“蛋白质”或“多肽”在文中可互换使用。

“约”和“大约”是指鉴于测量的性质或精度，对于测量量的可接受的误差度。示例性误差度是在给定数值或数值范围的20％内，一般在10％之内，更一般在5％之内。

在本申请中引用的所有出版物、未决专利申请、公开的专利申请(包括US 06/0073148和US 06/0063228)、以及公开的专利均在此全文引入作为参考。

根据下面的详细描述、附图和权利要求，本发明的其他特征和优点将是显而易见的。

附图简述

图1A是人类和食蟹猴IL-13全长(分别为SEQ ID NO：178和SEQ IDNO：24)的比对。通过阴影框出残基表示氨基酸不同。R至Q取代(对应于变应性患者中检测到的多态性)的位置是框出的130位。通过箭头显示切割位点的位置。

图1B是来自食蟹猴IL-13的示例性肽列表(分别为SEQ IDNO：179-188)。

图2是表示通过CD23⁺单核细胞(y轴)百分比测量的通过多种IL-13结合剂中和NHP IL-13活性的图表。在x轴上标出了MJ2-7(△)、C65(◆)和sIL-13RI2-Fc(●)的浓度。

图3是描述通过MJ2-7(鼠；●)或人源化MJ2-7v2.11(○)中和NHPIL-13活性的图表。通过作为抗体浓度(x轴)函数的STAT6磷酸化(y轴)测量NHP IL-13活性。

图4是描述通过MJ2-7v2.11(○)或sIL-13RI2-Fc(▲)中和NHP IL-13活性的图表。通过作为拮抗剂浓度(x轴)函数的STAT6磷酸化(y轴)测量NHP IL-13活性。

图5是描述通过MJ2-7(△)、C65(◆)或sIL-13RI2-Fc(●)中和NHP IL-13活性的图表。通过作为拮抗剂浓度(x轴)函数的STAT6磷酸化(y轴)测量NHP IL-13活性。

图6A是描述通过天然人IL-13(x轴)诱导生腱蛋白产生(y轴)的图表。

图6B是描述通过MJ2-7中和NHP IL-13活性的图表，其通过作为抗体浓度(x轴)的函数测量生腱蛋白产生(y轴)的抑制来测量。

图7是描述MJ2-7或对照抗体与结合至sIL-13RI2-Fc的NHP-IL-13结合的图表，其中所述的sIL-13RI2-Fc耦联至SPR芯片。

图8是描述各种浓度(0.09-600nM)的NHP IL-13与捕获的hMJ2-7V2-11抗体结合的图表。

图9是描述通过小鼠MJ2-7(●)、或人源化形式1(○)、人源化形式2(◆)或人源化形式3(△)抗体中和NHP IL-13活性的图表。通过作为抗体浓度(x轴)函数的STAT6磷酸化(y轴)测量NHP IL-13活性。

图10是描述通过包括小鼠MJ2-7VH和VL的抗体(●)、包括小鼠VH和人源化形式2VL的抗体(△)、或包括人源化形式2VH和VL的(◆)抗体中和NHP IL-13活性的图表。通过作为抗体浓度(x轴)函数的STAT6磷酸化(y轴)测量NHP IL-13活性。

图11A和11B是描述通过MJ2-7抗体抑制IL-13与固定的IL-13受体结合的图表，如通过ELISA所测量的那样。作为在450nm处的吸光度描述结合(y轴)。在x轴上描述了MJ2-7抗体的浓度。图11A描述与IL-13RI1的结合。图11B描述与IL-13RI2的结合。

图12是DPK18种系氨基酸序列(SEQ ID NO：126)和人源化MJ2-7形式3VL(SEQ ID NO：190)的比对。

图13A是成熟、经加工的人IL-13氨基酸序列(SEQ ID NO：124)。

图13B显示了人IL-13Rα1的氨基酸序列(SEQ ID NO：125)。

图14A-14D显示了与攻击前(基线)样本相比较，在蛔虫攻击后BAL液体中存在的总细胞数/ml和炎性细胞百分比的增加。

图15A-15D显示了在用蛔虫攻击前和攻击后的对照和经抗体处理的食蟹猴的BAL液体中的总BAL细胞/ml。对照(圆圈(○))；MJ2-7处理的样本(空三角形(△))和mAb 13.2处理的样本(黑三角形(▲))(在该研究中应用了MJ2-7的人源化形式(MJ2-7v.2)和mAb 13.2v 2)。

图16A-16B显示了在从蛔虫攻击后的经抗体处理的食蟹猴中收集的浓缩BAL液体中嗜伊红粒细胞趋化蛋白水平相对于对照的改变。图16A描述了柱状图，其显示蛔虫攻击后的嗜伊红粒细胞趋化蛋白水平(pg/ml)相对于基线、攻击前数值的升高。图16B描述了与对照相比较，来自用mAb 13.2-(灰色圆圈)或MJ2-7-(灰色三角形)抗体处理的食蟹猴的浓缩BAL液体中嗜伊红粒细胞趋化蛋白水平的降低。(在该研究中应用了MJ2-7的人源化形式(MJ2-7v.2)和mAb 13.2v 2)。

图17A-17B描述了在攻击后8周在对照和经抗体处理的样本中蛔虫特异性IgE滴度的变化。图17A描述了代表性实例，其显示在用无关Ig(IVIG；动物20-45；上排)处理的各个猴子中蛔虫特异性IgE滴度没有改变，以及在用人源化MJ2-7v.2(动物120-434；下排)处理的各个猴子中蛔虫特异性IgE滴度降低。图17B描述了在蛔虫攻击后8周，mAb13.2或MJ2-7(黑圆圈)处理的食蟹猴相对于无关Ig处理的食蟹猴(IVIG(灰色圆圈))中蛔虫特异性IgE滴度的降低。

图18A-18B显示了攻击后24小时或8周，在对照和经抗体处理的样本中蛔虫特异性嗜碱性粒细胞组胺释放的变化。图18A描述了在用盐水(左)或人源化mAb13.2v.2(右)处理的代表性各只猴子中的以下样本：抗体处理前或蛔虫攻击的样本(圆圈)；抗体处理后48小时，蛔虫攻击后24小时的样本(三角形)；和蛔虫攻击后8周的样本(菱形)。图18B描述了柱状图，其显示在对照(黑色)、人源化mAb13.2-(白色)和人源化MJ2-7v.2-(阴影)处理的食蟹猴中蛔虫攻击前和攻击后8周归一化组胺水平的变化。

图19描述了在对照(空心圈)和抗IL-IL-13或地塞米松处理的样本(黑色圈)中蛔虫特异性组胺释放和组胺特异性IgE水平之间的关联。

图20是系列柱状图，其描述了在用人源化MJ2-7(hMJ2-7v2)处理的各只食蟹猴中血清IL-13水平的变化。在每一柱中的标签(例如，120-452)相应于猴识别号。“前”样本是在施用抗体前收集的。时间“0”在施用抗体后24小时，但在蛔虫攻击前收集。其余的时间点是蛔虫攻击后。

图21是柱状图，其描述了不存在血清(“无血清”)；存在来自盐水或IVIG处理的动物的血清(“对照”)；或存在来自抗-IL-13抗体处理的动物的血清(在施用抗体前(“前”)、或施用所示的抗体后1-2周)时，0、1或10ng/ml的非人灵长类IL-13的STAT6磷酸化活性。以1∶4稀释测试血清。(在这一研究中应用了MJ2-7的人源化形式(MJ2-7v.2)和mAb 13.2v2)。

图22A-22C是线性图，其显示了在食蟹猴血清中通过人源化MJ2-7(hMJ2-7v2)捕获的非人灵长类IL-13水平与蛔虫攻击后BAL液体中测得的炎性水平相关联。

图23A-23B是线图，其显示了应答人重组R110Q IL-13气管内施用的小鼠肺功能中的改变；图23A显示了应答递增剂量的雾状乙酰甲胆碱的气道阻力(RI)的改变；图23B显示了应答递增剂量的雾状乙酰甲胆碱的动态肺顺应性(Cdyn)的改变。

图24A-24B是柱状图，其显示了应答人重组R110Q IL-13气管内施用的鼠肺炎和细胞因子产生的增加。在图24A中，通过不同的细胞计数确定支气管肺泡灌洗物(BAL)中的嗜酸性粒细胞和中性粒细胞的百分比。在图24B中，通过细胞计数柱阵列确定BAL中细胞因子、MCP-1、TNF-I和IL-6的水平。数据是每群10只动物的中值±s.e.m.。

图25A-25B是点图，其显示在气管内和静脉内施用后，在BAL和血清中的人源化MJ2-7-11(hMJ2-7v.2-11)抗体水平。动物用人重组R110QIL-13或等体积(20TL)的盐水在1、2和3天气管内处理。在0天和每一人重组R110Q IL-13施用之前2小时施用人源化MJ2-7v.2-11抗体。图25A描述了当在0天静脉内施用和在1、2、和3天腹膜内施用抗体；或在0、1、2、3天鼻内施用抗体(显示于图25B)的结果。通过ELISA分析BAL和血清中的总人IgG水平。

图26A-26C显示了在鼻内施用诱导改变肺功能的人重组R110Q IL-13后人源化MJ2-7v.2-11抗体的效果。(A)图26A显示了表示为从基线变化的肺阻力(RI；cm H₂O/ml/秒)。图26B显示了表示为消除对应于从基线的2.5ml H₂O/cm/秒变化的肺阻力所需乙酰甲胆碱剂量的数据。对于每一处理组显示了中值。通过双尾t-测试计算p值。图26C显示了在BAL和血清中的中值人IgG水平。

图27A-27D显示了气管内施用人重组R110Q IL-13和鼻内施用人源化MJ2-7v.2-11抗体后，BAL的改变和单独施用的人重组R110Q IL-13(图27A-27B)或与人源化MJ2-7v.2-11联合施用的人重组R110Q IL-13(图27C-27D)血清水平的改变。对每一组标出了中值。n.d.是未检测到。

图28A-28B是点图，其显示了在鼻内施用人重组R110Q IL-13和鼻内施用500、100和20Tg人源化MJ2-7v.2-11和人源化13.2v.2、盐水或500TgIVIG后，浸润至BAL的嗜酸性粒细胞(图28A)和嗜中性粒细胞(图28B)的水平。通过不同的细胞计数确定嗜酸性粒细胞和嗜中性粒细胞百分比。对于每一处理组显示了中值。通过双尾测试确定p值，并与IVIG相比较指出每一抗体处理组的p值。

图29A-29C是点图，其分别显示了鼻内施用人重组R110Q IL-13和鼻内施用500Tg人源化MJ2-7v.2-11、人源化13.2v.2、或IVIG或盐水后，细胞因子水平、MCP-1、TNF-I和IL-6的变化。短划线指出测试敏感度的极限。数据表示每一组的中值。根据双尾t-测试，P值≤0.0001。

图30A-30B是点图，其显示了人重组R110Q IL-13水平与肺炎直接相关，如通过嗜酸性粒细胞增多所测得的那样；并且在鼻内施用人重组R110Q IL-13和鼻内施用500、100和20μg剂量的人源化MJ2-7v.2-11抗体后，其与人源化MJ2-7v.2-11BAL水平呈反比。通过ELISA测量人源化MJ2-7v.2-11抗体BAL水平。通过细胞计数珠测试法确定人重组R110QIL-13BAL水平。通过不同的细胞计数确定％嗜酸性粒细胞。显示了％嗜酸性粒细胞炎症水平和人重组R110Q IL-13之间的关系(图30A)，包括来自盐水对照动物、单独用人重组R110Q IL-13处理的小鼠、和用类重组R110Q IL-13及500、100和20μg人源化MJ2-7v.2-11抗体或500μgIVIG处理的小鼠的数据；以及人源化MJ2-7v.2-11和IL-6之间的关系(图30B)，包括来自用500、100和20μg人源化MJ2-7v.2-11抗体处理的小鼠的数据。通过线性回归分析确定r²和p值。

图31显示了在OVA攻击前一天或后一天施用sIL-13Ra2的时间表(时间表1)；或在OVA攻击前一天施用sIL-13Ra2、抗-IL-4(抗体)或其两者的时间表(时间表2)。

图32A-32C显示了在OVA攻击前一天及后一天用sILRa2.Rc处理后，总的血清IgE(图32A)、OVA特异性IgE(图32B)，以及OVA特异性IgG1(图32C)。图32B中的短划线表明该测试法敏感度极限。n＝20只小鼠/组。

图33A-33C显示了在OVA攻击前一天用sILRa2.Fc单处理后，总的血清IgE(图33A)、OVA特异性IgE(图33B)，以及OVA特异性IgG1(图33C)。图33B中的短划线表明该测试法敏感度极限。n＝20只小鼠/组。

图34A-34B显示了在OVA攻击前一天用sIL-13Ra2.Fc或抗-IL-4(抗体)单处理后，总的血清IgE(图34A)和OVA特异性IgE(图34B)。图34B中的短划线表明该测试法敏感度极限。n＝20只小鼠/组。

图35A-34B显示了在OVA攻击前一天用sIL-13Ra2.Fc和抗-IL-4(抗体)联合单处理后，OVA特异性IgG1(图35A)和OVA特异性IgG3(图35B)。

发明详述

本文公开了治疗和/或监测IL-13相关疾病或病症治疗的方法和组合物。一方面，申请人发现在IL-13相关疾病和病症发作之前单独对受试者施用IL-13拮抗剂或IL-4拮抗剂能相对于未处理的受试者而言减轻该疾病或病症的一种或多种症状。相对于在施用单个试剂后检测到的症状减轻，共施用IL-13拮抗剂及IL-4拮抗剂后检测到增强的所述疾病或病症症状的减少。因此，本文公开了单独应用或与IL-4拮抗剂联合应用IL-13拮抗剂以减少或抑制、或预防或延缓IL-13相关疾病或病症的一种或多种症状发作的方法。在其他实施方案中，还公开了在受试者(例如，人或非人受试者)中评估IL-13拮抗剂。

定义

为了方面，本文定义了某些术语。可在本说明书中找到补充的定义。

术语“IL-13”包括本领域称为IL-13(不管物种来源，并且包括哺乳动物例如人或非人灵长类IL-13)的细胞因子的全长未加工形式，及其此类细胞因子的成熟、加工的形式和任何片段(至少5个氨基酸)或其变体。可根据全长、未加工的人IL-13序列的编号指定IL-13序列内的位置。对于示例性的全长猴IL-13，参见SEQ ID NO：24，对于成熟、经加工的猴IL-13，参见SEQ ID NO：14；对于全长人IL-13，参见SEQ ID NO：178；对于成熟、经加工的人IL-13，参见SEQ ID NO：124。示例性序列列举如下：

MALLLTTVIALTCLGGFASPGPVPPSTALRELIEELVNITQNQKAPLCNGSMVWSI

NLTAGMYCAALESLINVSGCSAIEKTQRMLSGFCPHKVSAGQFSSLHVRDTKIEV

AQFVKDLLLHLKKLFREGRFN(SEQ ID NO：178)

例如，位置130是常见多态性的位点。

IL-13受体蛋白及其可溶形式(例如，IL-13Rα1和IL-13Rα2或其融合蛋白)的示例性序列描述于，例如Donaldson等(1998)J Immunol.161：2317-24；U.S.6,214,559；U.S.6,248,714；以及U.S.6,268,480。

IL-4，例如人IL-4的示例性序列和特征公开于Strober等(1988)Pediatr.Res.24：549；以及Ramanthan等U.S.6,358,509。

IL-4受体蛋白、其可溶形式或融合蛋白的示例性序列描述于，例如Stahl等U.S.7,083,949；Seipelt，I.等(1997)Biochem and Biophys ResComm 239：534-542；Stahl，N.等(1999)FASEB Journal Abstract，1457；以及Harada，N.等(1990)Proc Natl Acad Sci美国87：857-861。人IL-4受体的示例性分泌形式列举如下：

MGWLCSGLLFPVSCLVLLQVAS SGNMKVLQEPTCVSDYMSISTCEWKMNGPTN

CSTELRLLYQLVFLLSEAHTCIPENNGGAGCVCHLLMDDVVSADNYTLDLWAG

QQLLWKGSFKPSEHVKPRAPGNLTVHTNVSDTLLLTWSNPYPPDNYLYNHLTY

AVNIWSENDPADFRIYNVTYLEPSLRIAASTLKSGISYRARVRAWAQCYNTTWSE

WSPSTKWHNSNIC(SEQ ID NO：224)

IL-13/IL-13R多肽和/或IL-4/IL-4R多肽的“生物活性”是指对应于成熟IL-13或IL-4多肽的一种或多种生物活性，包括但不限于：(1)与IL-13R或IL-4R多肽(例如，人IL-13R或IL-4R多肽)相互作用，例如与之结合；(2)与信号转导分子(例如γ共有分子)相关联；(3)刺激stat蛋白(例如，STAT6)的磷酸化和/或活化；(4)诱导CD23表达；(5)通过人B细胞产生IgE；(6)体内诱导由抗原诱导的嗜酸性粒细胞增多；(7)体内诱导由抗原诱导的支气管缩窄；(8)体内诱导由药物诱导的呼吸道反应过度；(9)体内诱导eotoxin水平；和/或(10)诱导由嗜碱性粒细胞释放的组胺。

“IL-13相关疾病或病症”是其中IL-13对该疾病或病症的病理或症状具有作用的疾病或病症。因此，可应用IL-13结合剂，例如是一种或多种IL-13相关活性拮抗剂的IL-13结合剂来治疗或预防该疾病。

本文所用的“治疗有效量”的IL-13/IL-13R拮抗剂或IL-4/IL-4R是指当单或多剂量施用受试者(例如，人类患者)时，在以下当中有效的试剂量：治愈、减轻其严重程度、改善、或预防疾病的一种或多种症状；或延长该受试者的生存期超过不存在该治疗时预期的生存期。

本文所用的“预防有效量”的IL-13/IL-13R拮抗剂或IL-4/IL-4R是指当单或多剂量施用受试者(例如，人类患者)时，在预防、减轻其严重程度、或延缓IL-13相关疾病或病症(例如本文所描述的疾病或病症)发作或复发中有效的L-13/IL-13R拮抗剂或IL-4/IL-4R的量。

本文所使用的“单一治疗间隔”是指当作为单剂量、或作为有限次数重复剂量施用时，施用IL-13/IL-13R拮抗剂和/或IL-4/IL-4R拮抗剂的量和/或次数减少其严重程度、改善、预防或延缓IL-13相关疾病或病症(例如本文所描述的疾病或病症)的一种或多种症状的发作或复发。在实施方案中，在单一治疗间隔期间，将施用的频率限制为不超过2或3剂量，例如从开始剂量的一周或更少之内施用该重复剂量。

术语“分离的”是指基本上在其自然环境外的分子。例如，分离的蛋白质基本上没有来自其衍生自其中的细胞或组织来源的细胞材料或其他蛋白质。该术语是指其中分离的蛋白基本上纯的以作为治疗组合物施用的制备物，或至少70％至80％(w/w)纯，更优选地至少80％至90％(w/w)纯，甚至更优选地90％至95％(w/w)纯，以及至少95％、96％、97％、98％、99％或100％(w/w)纯。“分开的”化合物是指这样的化合物，即从该化合物从其中获得的样本中移出至少一种化合物的至少90％。本文描述的任何化合物均可作为分离的或分开的化合物提供。

本文所用的“在低严格、中严格、高严格或极高严格条件下杂交”描述杂交和洗涤的条件。进行杂交反义的指引可以在Current Protocols inMolecular Biology，John Wiley & Sons，N.Y.(1989)，6.3.1-6.3.6中找到。在该参考书中描述了水性和非水性方法，并且都可以使用。在本文中指出的特定杂交条件如下：1)在约45℃在6X氯化钠/柠檬酸钠(SSC)中的低严格杂交条件，随后在至少50℃(对于低严格条件，洗涤温度可升高至55℃)在0.2X SSC、0.1％SDS中洗涤两次；2)在约45℃在6X SSC中的中严格杂交条件，随后在60℃在0.2X SSC、0.1％SDS中洗涤一或多次；3)在约45℃在6X SSC中的高严格杂交条件，随后在65℃在0.2X SSC、0.1％SDS中洗涤一或多次；以及优选4)极高严格杂交条件是在65℃的0.5M磷酸钠、7％SDS，随后在65℃在0.2X SSC、0.1％SDS中洗涤一或多次。极高严格条件(4)是优选的条件，并且是所使用的一个，除非另外指明。

本发明的方法和组合物包括多肽和核酸，其具有指定的序列，或与指定的序列基本上同一或类似的序列，例如，与该指定序列至少85％、90％、95％同一或更高的序列。在氨基酸序列的情况下，本文所使用的术语“基本上同一”是指第一氨基酸序列含有充足的或最小数量的这样的氨基酸残基：i)与之同一；或ii)与第二氨基酸序列的比对的氨基酸残基是保守取代，因此该第一和第二氨基酸序列可以具有共同的结构结构域和/或共同的功能活性。例如，与特定序列含有共同结构结构域，具有至少约85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列称为基本上同一。

在核苷酸序列的情况下，本文所使用的术语“基本上同一”是指第一核酸序列含有充足的或最小数量的与第二核酸序列中所比对的核苷酸同一的核苷酸，因此该第一和第二核酸序列编码具有共同的功能活性的多肽，或编码共同的结构多肽结构域或共同的功能多肽活性。例如，与特定序列具有至少约85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列称为基本上同一。

术语“功能变体”是指与天然存在的序列具有基本上同一的氨基酸序列，或由基本上同一的核苷酸序列编码，并且能够具有天然存在的序列的一种或多种活性的多肽。

两序列之间的同源性或序列同一性(该术语可在本文中互换使用)的计算如下进行：

为确定两氨基酸序列、或两核酸序列的百分比同一性，以最优比较目的比对该序列(例如，对于最优比较目的，可在第一和第二氨基酸或核苷酸序列之一或两者中引入空位，以及为比较目的，可以忽略非同源序列)。在优选的实施方案中，为比较目的比对的参照序列长度至少是该参照序列长度的至少30％，优选至少40％，更优选至少50％、60％，以及甚至更优选至少70％，80％、90％、100％。然后比较在相应氨基酸位置或核苷酸位置上的氨基酸残基或核苷酸。当第一序列中的位置由与第二序列中相应位置上相同的氨基酸残基或核苷酸占据，则该分子在这一位置上同一(本文所使用的氨基酸或核酸“同一”与氨基酸或核酸“同源”等价)。

两序列之间的百分比同一性是该序列共有的同一位置数目的函数，考虑到为最优比对该两个序列的目的需要引入的空位数量，以及每一空位的长度。

可以应用数学算法完成两序列之间序列的比较和百分比同一性的确定。在优选的实施方案中，应用Needleman和Wunsch((1970)J.Mol.Biol.48：444-453)算法确定两氨基酸序列间的百分比同一性，其已被整合至GCG软件包(可从http://www.gcg.com获得)的GAP程序中，其应用Blossum 62矩阵或PAM250矩阵，以及16、14、12、10、8、6或4的空位权重和1、2、3、4、5或6的长度权重。在另一优选的实施方案中，应用GCG软件包(可从http://www.gcg.com获得)的GAP程序确定两核苷酸序列间的百分比同一性，其应用NWSgapdna.CMP矩阵和40、50、60、70或80的空位权重和1、2、3、4、5或6的长度权重。特别优选的参数设置(以及是应当使用的参数设置，除非另外指出)是Blossum 62记分矩阵，其具有12的空位罚分、4的空位延伸罚分以及5的框移空位罚分。

可应用E.Meyers和W.Miller((1989)CABIOS，4：11-17)的算法确定两氨基酸或核苷酸序列之间的百分比同一性，其已被整合至ALIGN程序(版本2.0)中，应用PAM120权重残基表格，12的空位长度罚分和4的空位罚分。

本文描述的核酸和蛋白质序列可以用作“查询序列”以针对公共数据库进行检索，例如以鉴定其他家族成员或相关序列。可以应用Altschul等(1990)J.Mol.Biol.215：403-10的NBLAST和XBLAST程序(版本2.0)进行此类检索。可用NBLAST程序、得分＝100、字长＝12，进行BLAST核苷酸检索，以获得与本发明的核酸分子同源的核苷酸序列。可用XBLAST程序、记分＝50、字长＝3，进行BLAST蛋白质检索，以获得与本发明的蛋白质分子同源的氨基酸序列。为获得为比较目的的有空位的比对，可如Altschul等，(1997)Nucleic Acids Res.25：3389-3402描述的那样应用空位BLAST(Gapped BLAST)。当应用BLAST和空位BLAST程序时，可应用各程序(例如，XBLAST和NBLAST)的缺省参数。参见http://www.ncbi.nlm.nih.gov。

抗体分子

IL-13或IL-4拮抗剂和/或结合剂的实例包括抗体分子。本文所使用的术语“抗体分子”是指包含至少一个免疫球蛋白可变区序列的蛋白质。术语抗体分子包括，例如，全长、成熟的抗体和抗体的抗原结合片段。例如，抗体分子可以包括重(H)链可变区序列(本文简写为VH)、和轻(L)链可变区序列(本文简写为VL)。在另一实施例中，抗体分子包括一或两个重(H)链可变区序列和/或一或两个轻(L)链可变区序列。抗原结合片段的实例包括：(i)Fab片段，其为由VL、VH、CL和CH1结构域所组成的单价片段；(ii)F(ab′)₂片段，其为包含在绞链区由二硫键连接的二个Fab片段的二价片段；(iii)Fd片段，其由VH和CH1结构域所组成；(iv)Fv片段，其由抗体单臂的VL和VH结构域所组成；(v)VH或VHH结构域；(iv)dAb片段，其由VH结构域所组成；(vii)骆驼抗体，以及骆驼化(camelized)可变区；以及(viii)单链Fv(scFv)。

VH和VL区还可进一步分为高变区域，术语为“互补决定区”(CDR)，其散步有更保守的术语为“框架区”(FR)的区域。已通过许多方法精确的定义了框架区和CDR的范围(参见Kabat，E.A.，等(1991)Sequences ofProteins of Immunological Interest，第五版，U.S.Department of Healthand Human Services，NIH Publication No.91-3242；Chothia，C.等(1987)J.Mol.Biol.196：901-917；以及由Oxford Molecular的AbM抗体建模软件使用的AbM定义。一般参见，例如Protein Sequence and Structure Analysisof Antibody Variable Domains.In：Antibody Engineering Lab Manual(编辑Duebel，S.和Kontermann，R.，Springer-Verlag，Heidelberg)。一般地，除非特别说明，应用以下定义：重链可变区CDR1的AbM和其他CDR的Kabat定义。此外，针对Kabat或AbM CDR描述的本发明的实施方案也可以应用Chothia高变环实施。每一VH和VL一般包括3个CDR和四个FR，以以下顺序从氨基端至羧基端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。

本文所使用的“免疫球蛋白可变区序列”是指可以形成免疫球蛋白可变区结构的氨基酸序列。例如，该序列可以包括天然存在的可变区的所有或部分氨基酸序列。例如，该序列可以或可以不包括一个、两个或多个N-或C-端氨基酸，或可以包括与该蛋白质结构的形成相容的其他改变。

术语“抗原结合部位”是指IL-13结合剂的包含决定簇的部分，其形成与IL-13(例如哺乳动物IL-13，例如人或非人灵长类IL-13)或其表位结合的界面。就蛋白质(或蛋白质模拟物)而言，抗原结合部位一般包括一个或多个形成与IL-13结合界面的环(至少四个氨基酸或氨基酸模拟物)。一般地，抗体分子的抗原结合部位包括至少一个或两个CDR，或更一般地至少3、4、5或6个CDR。

“表位”是指靶化合物上被结合剂(例如抗体)结合的部位。表位可以是线性或构象表位，或其组合。在靶化合物是蛋白质的情况下，例如，表位可以指被结合剂结合的氨基酸。重叠表位包括至少一个共有的氨基酸残基。

本文所使用的术语“单克隆抗体”或“单克隆抗体组合物”是指单分子组合物的抗体分子的制备物。单克隆抗体组合物展示出对特定表位的单结合特异性和亲和力。可通过杂交瘤技术或通过不应用杂交瘤的方法(例如，重组方法)制备单克隆抗体。

“有效地人的”蛋白质是不引起中和抗体应答(例如，人抗鼠抗体(HAMA)应答)的蛋白质。HAMA在许多情况下是有问题的，例如，如果反复施用抗体，例如，在慢性或者复发性疾病状况的治疗中。HAMA应答可以使得反复抗体施用由于抗体从血清清除加快(见例如，Saleh等，Cancer Immunol.Immunother.，32：180-190(1990))以及还因为潜在的变应性反应(见，例如，LoBuglio等.，Hybridoma，5：5117-5123(1986))而可能变得无效。有许多方法可以获得抗体分子。

产生抗体分子的一个示例性方法包括筛选蛋白质表达文库，例如，噬菌体或核糖体展示文库。噬菌体展示例如描述于Ladner等，美国专利号5,223,409；Smith(1985)Science 228：1315-1317；WO 92/18619；WO91/17271；WO 92/20791；WO 92/15679；WO 93/01288；WO 92/01047；WO 92/09690和WO 90/02809。除了应用展示文库外，还可以应用其他方法获得抗-IL-13抗体分子。例如，IL-13蛋白或其肽可用作非人动物(例如，啮齿类动物，例如小鼠、仓鼠或大鼠)中的抗原。

在一个实施方案中，该非人动物包括至少一部分人类免疫球蛋白基因。例如，可以用大片段的人Ig座位操纵在小鼠抗体产生中有缺陷的小鼠品种。应用杂交瘤技术，可以产生并选择衍生自具有期望特异性的基因的抗原特异性单克隆抗体。参见，例如，XENOMOUSE^TM、Green等(1994)Nature Genetics 7：13-21，US 2003-0070185，WO 96/34096，公开于1996年10月31日、以及1996年4月29日提交的PCT申请号PCT/US96/05928。

在另一实施方案中，从非人动物获得单克隆抗体，并随后进行修饰，例如人源化或去免疫化。Winter描述了可用于制备本文所描述的人源化抗体的示例性CDR-嫁接方法(美国专利号5,225,539)。可以用非人CDR的至少一部分取代特定人抗体的全部CDR，或可用非人CDR仅取代一些CDR。仅需要取代对于人源化抗体与预定抗原结合所需的CDR数量。

可通过用来自人Fv可变区的等价序列取代不直接参与抗原结合的Fv可变区序列从而产生人源化抗体。Morrison(1985)Science 229：1202-1207；Oi等(1986)Bio Techniques 4：214；以及US 5,585,089、US 5,693,761、US5,693,762、US 5,859,205和US 6,407,213提供了用于产生人源化抗体分子的示例性方法。这些方法包括分离、操作和表达编码全部或部分来自重或轻链至少之一的免疫球蛋白Fv可变区的核酸序列。此类核酸可以从产生针对如上所述预定靶的抗体的杂交瘤获得，或从其他来源获得。然后可将编码人源化抗体分子的重组DNA克隆至合适的表达载体。

还可通过特异性缺失人T细胞表位或通过公开于WO 98/52976和WO00/34317的方法“去免疫性”修饰抗体分子。简而言之，可针对与II类MHC结合的肽分析抗体的重和轻链可变区；这些肽代表潜在的T-细胞表位(如在WO 98/52976和WO 00/34317中所定义)。为检测潜在的T细胞表位，可应用术语为“肽穿线(peptide threading)”的计算机建模方法，并且此外还在人II类MHC结合肽数据中检索V_H和V_L序列上存在的基序，如在WO98/52976和WO 00/34317所描述的那样。这些基序与18个主要的II类MHC DR配模标本的任意一个结合，并且因此构成潜在的T细胞表位。可通过取代可变区中少量的氨基酸残基，或优选地通过单氨基酸取代消除检测到的潜在的T-细胞表位。一般地，进行保守取代。通常，但非排它的，可以应用在人类种系抗体序列的位置中共同的氨基酸。

人类种系序列例如公开于Tomlinson等(1992)J.Mol.Biol.227：776-798；Cook，G.P.等(1995)Immunol.Today卷16(5)：237-242；Chothia，D.等(1992)J.Mol.Biol.227：799-817和Tomlinson等(1995)EMBO J.14：4628-4638。V BASE目录提供了人免疫球蛋白可变区序列的广泛的目录(由Tomlinson，I.A.等汇编，MRC蛋白质工程中心，Cambridge，UK)。这些序列可以用作人类序列例如框架区和CDR的来源。还可以应用一致的人框架区，例如描述于US6,300,064。

此外，可以应用标准重组DNA技术产生嵌合、人源化和单链抗体分子(例如，包括人和非人部分的蛋白质)。例如，还可以应用表达人重和轻链基因，但不能表达内源小鼠免疫球蛋白重和轻链基因的转基因小鼠产生人源化抗体。

此外，本文描述的抗体分子还包括与IL-13结合，干扰功能性IL-13信号传导复合物形成并且在重链恒定区具有突变的那些。有时期望突变或失活恒定区的某些片段。例如，可以制造重链恒定区中的突变以产生具有降低的与Fc受体(FcR)和/或补体结合的抗体；此类突变是本领域公知的。SEQ ID NO：128提供了IgG重链恒定区氨基酸序列上的此类突变的实例。CL和CH亚单位的某些活性片段(例如，CH1)彼此共价连接。其他方面提供了获得对IL-1表面特异的抗原结合部位的方法，所述IL-13表面参与功能的IL-13信号传导复合物的形成。

示例性的抗体分子可以包括SEQ ID NO：30-46所示的VL链序列，和/或SEQ ID NO：50-115所示的VH链序列，但还可以包括这些序列的保持有IL-13结合能力的变体。可以应用本领域公知的技术从所提供的序列衍生此类变体。可以在FR中或CDR中制造氨基酸取代、缺失或添加。在框架区中的改变通常用于改善稳定性及减少该抗体分子的免疫原性，而在CDR中的改变通常用于增加该抗体分子对其靶的亲和力。通常通过改变CDR区并测试该抗体分子根据经验确定此类亲和力增加的改变。可根据Antibody Engineering，第二版(1995)，编辑Borrebaeck，Oxford UniversityPress中描述的方法制造此类改变。

本文描述了获得重链可变区序列是重链可变区序列的变体的示例性方法，其包括在本文描述的重链可变区序列中添加、缺失、取代或插入一个或多个氨基酸，任选地将该重链可变区序列与一个或多个轻链可变区序列结合，并测试包括经修饰的重链可变区序列的蛋白质与IL-13的特异结合，并且(优选地)测试此类抗原结合结构域调节一种或多种IL-13相关活性的能力。可以应用本文描述的轻链可变区序列的一种或多种序列变体来实施类似的方法。

可通过产生具有一种或多种不同CDR的文库，并筛选该文库以寻找与IL-13结合(例如，具有改进的亲和力)的成员，以制备抗体分子的变体。例如，Marks等(Bio/Technology(1992)10：779-83)描述了产生抗体可变区库集(repertorires)的方法，其中联合应用指向或靠近可变区区域5’端的通用引物和人VH基因第三框架区的通用引物，以提供缺乏CDR3的VH可变区的集库。这些集库可与特定抗体的CDR3结合。此外，可以用缺乏CDR3的VH或VL结构域的集库改组CDR3衍生的序列，并且该改组的完整的VH或VL结构域与关联的VL或VH结构域联合以提供特定的抗原结合片段。然后可以在合适的宿主系统(诸如WO 92/01047的噬菌体展示系统)中展示该集库，由此可以选择合适的抗原结合片段。Stemmer(Nature(1994)370：389-91)也公开了类似的改组或组合技术。其他备选方法是使一个或多个选定的VH和/或VL基因进行随机诱变，以在整个可变区内产生突变，而产生改变的VH或VL区。参加，例如Gram等Proc.Nat.Acad.Sci.美国(1992)89：3576-80。

另一种可使用的方法是VH或VL基因CDR区的定向诱变。这类技术公开于，例如Barbas等(Proc.Nat.Acad.Sci.美国(1994)91：3809-13)和Schier等(J.Mol.Biol.(1996)263：551-67)中。类似地，可将一个或多个，或所有三个CDR移植入VH或VL结构域之集库，或甚至一些其他支架(诸如纤连蛋白结构域)。对所得蛋白质评估结合IL-13的能力。

在一个实施方案中，经由例如诱变来修饰结合靶标的结合剂，以提供经修饰的结合剂的库。然后，评估该经修饰的结合剂以鉴定具有改变的功能性质(例如，改良的结合力，改良的稳定性，延长在体内的稳定性)的一种或多种经改变的结合剂。在一种实施方法中，使用展示文库技术来选择或筛选经修饰的结合剂库。然后，从第二个文库鉴定(例如使用较高的严格性或更竞争性的结合及清洗条件)出具较高亲和力的结合剂。亦可使用其他筛选技术。

在一些实施方案中，该诱变靶向已知或可能在结合界面的区域。例如：如果鉴定出的结合剂为抗体分子，则可将诱变针对如本文所描述的重或轻链的CDR区。此外，诱变可针对靠近或邻接CDR的构架区，例如尤其是在CDR接点之10、5或3个氨基酸内的构架区。在抗体的情况中，亦可将诱变限制在一或更少的CDR，例如，以进行逐步改良。

在一个实施方案中，使用诱变来使抗体更类似于一种或多种种系序列。一种示例性的种系化方法可包括：鉴定类似于(例如在特定数据库中最类似)经分离的抗体的序列的一种或多种种系序列。然后，可在经分离的抗体中，以增量或组合或以此二种方式产生突变(在氨基酸水平上)。例如，可产生包括编码一些或所有可能的种系突变的序列的核酸文库。然后，评估突变的抗体，例如鉴定那些相对于该分离出的抗体而言具有一种或多种额外种系残基，且仍可用(例如具功能性活性)的抗体。在一个实施方案中，将尽可能多的种系残基引入分离出的抗体内。

在一个实施方案中，使用诱变来将一个或多个种系残基替代或插入CDR区中。例如，种系CDR残基可来自类似(例如最类似)于被修饰的可变区的种系序列。在诱变之后可评估抗体的活性(例如结合或其他功能性活性)，以确定该一个或多个种系残基是否为可耐受的残基。在构架区中亦可进行类似的诱变。

选择种系序列时可以不同方式进行。例如：若一种系序列符合选择性或类似性的预定标准，例如至少达某种百分比的同一性，例如至少75、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或99.5％的同一性，则可将其选出。选择时可使用至少2、3、5或10种种系序列来进行。在CDR1和CDR2的情况下，鉴定类似的种系序列时可包括选择一种这类序列。在CDR3的情况下，鉴定类似的种系序列时可包括选择一种这类序列，但可包括使用二种分别造就氨基-端部分和羧基-端部分之种系序列。在其他实行方法，使用超过一或二种种系序列，例如以形成共有序列。

在其他实施方案中，该抗体可经修饰以具有改变的糖基化模式(即，从原始或天然的糖基化模式改变)。此处所使用之“改变”意指有一个或多个糖类部分缺失和/或有一个或多个糖基化位点加入原始抗体。将糖基化位点加入目前所公开的抗体中可经由改变氨基酸序列以使其包含糖基化位点共有序列来实现；这类技术为本领域公知。另一种增加抗体上之糖类部分的数目的方法为将糖苷以化学或酶方法偶联至抗体的氨基酸残基上。这些方法描述于，如WO 87/05330，以及Aplin和Wriston((1981)CRC Crit.Rev.Biochem.22：259-306)中。去除存在于抗体上的任一碳水化合物部分可依本领域中的描述以化学或酶的方法来实现(Hakimuddin等(1987)Arch.Biochem.Biophys.259：52；Edge等(1981(Anal.Biochem.118：131和Thotakura等(1987)Meth.Enzymol.138：350)。参见，例如，U.S.5,869,046中的经由提供补救受体结合表位来增加体内的半衰期的修饰方法。

在一个实施方案中，抗-IL-13抗体分子包括至少一个、两个且优选三个来自本文公开的抗体(例如MJ 2-7)的轻或重链可变区的CDR。例如，该蛋白质包括一个或多个以下CDR区内的序列：GFNIKDTYIH(SEQ IDNO：15)，

RIDPANDNIKYDPKFQG(SEQ ID NO：16)，

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：17)，

RSSQSIVHSNGNTYLE(SEQ ID NO：18)，

KVSNRFS(SEQ ID NO：19)，和

FQGSHIPYT(SEQ ID NO：20)，或这样的CDR，其具有相对于上面所列序列，每10个氨基酸不超过4、3、2.5、2、1.5、1或0.5个改变(例如，取代、插入或缺失)(例如，与CDR长度呈比例的不同的数字)，例如每CDR至少一个改变，但不超过2、3、或4个改变的氨基酸序列。

例如，抗-IL-13抗体分子在轻链可变区序列中可以包括至少1、2或3个以下CDR区内的序列：

RSSQSIVHSNGNTYLE(SEQ ID NO：18)、

KVSNRFS(SEQ ID NO：19)和

FQGSHIPYT(SEQ ID NO：20)，或具有相对于上面所列序列，每10个氨基酸不超过4、3、2.5、2、1.5、1或0.5个取代、插入或缺失的不同的氨基酸序列。

抗-IL-13抗体分子在重链可变区序列中可以包括至少1、2或3个以下CDR区内的序列：

GFNIKDTYIH(SEQ ID NO：15)、

RIDPANDNIKYDPKFQG(SEQ ID NO：16)和

SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：17)，或具有相对于上面所列序列，每10个氨基酸不超过4、3、2.5、2、1.5、1或0.5个取代、插入或缺失的不同的氨基酸序列。重链CDR3区可以少于13或少于12个氨基酸长，例如，11个氨基酸长(应用Chothia或Kabat定义之一)。

在另一实施方案中，抗-IL-13抗体分子在轻链可变区序列中可以包括至少1、2或3个以下CDR区内的序列(括号内的氨基酸表示特定位置的备选方案)：

(i)(RK)-S-S-Q-S-(LI)-(KV)-H-S-(ND)-G-N-(TN)-Y-L-(EDNQYAS)(SEQ ID NO：25)或(RK)-S-S-Q-S-(LI)-(KV)-H-S-(ND)-G-N-(TN)-Y-L-E(SEQ ID NO：26)或

(RK)-S-S-Q-S-(LI)-(KV)-H-S-N-G-N-T-Y-L-(EDNQYAS)(SEQ IDNO：21)，

(ii)K-(LVI)-S-(NY)-(RW)-(FD)-S(SEQ ID NO：27)或

K-(LV)-S-(NY)-R-F-S(SEQ ID NO：22)以及

(iii)Q-(GSA)-(ST)-(HEQ)-I-P(SEQ ID NO：28)、

F-Q-(GSA)-(SIT)-(HEQ)-(IL)-P(SEQ ID NO：23)或

Q-(GSA)-(ST)-(HEQ)-I-P-Y-T(SEQ ID NO：194)或

F-Q-(GSA)-(SIT)-(HEQ)-(IL)-P-Y-T(SEQ ID NO：29)。

在一个优选的实施方案中，抗-IL-13抗体分子包括所有6个来自MJ2-7的CDR或极相关CDR，例如，同一的CDR或具有至少一个氨基酸改变，但不超过2、3或4个改变(例如，取代、缺失或插入)的CDR。IL-13结合剂可以包括至少2、3、4、5、6或7个MJ2-7的与IL-13接触的氨基酸残基。

在另一实施例中，抗-IL-13抗体分子包括至少1、2、或3个具有相同的标准结构的CDR以及MJ 2-7的相应CDR区，例如，至少MJ2-7的重链和/或轻链可变区CDR1和CDR2。

在另一实施例中，抗-IL-13抗体分子在重链可变区序列中可以包括至少1、2或3个以下CDR区内的序列(括号内的氨基酸表示特定位置的备选方案)

(i)G-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-(MI)-H(SEQ ID NO：48)，

(ii)(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-G(SEQ IDNO：49)和

(iii)SEENWYDFFDY(SEQ ID NO：17)。

在一个实施方案中，抗-IL-13抗体分子包括至少1、2且优选3个来自本文公开之抗体(例如，C65)的轻或重链可变区的CDR。例如，抗-IL-13抗体分子包括一个或多个以下CDR区内的序列：

QASQGTSINLN(SEQ ID NO：118)、

GASNLED(SEQ ID NO：119)和

LQHSYLPWT(SEQ ID NO：120)

GFSLTGYGVN(SEQ ID NO：121)、

IIWGDGSTDYNSAL(SEQ ID NO：122)和

DKTFYYDGFYRGRMDY(SEQ ID NO：123)，或这样的CDR，其具有相对于上面所列序列，每10个氨基酸不超过4、3、2.5、2、1.5、1或0.5个取代、插入或缺失的不同(例如，与CDR长度呈比例的不同的数字)，例如每CDR至少一个改变，但不超过2、3、或4个改变。例如，该蛋白质在轻链可变区序列中可以包括至少1、2或3个以下CDR区内的序列：

QASQGTSINLN(SEQ ID NO：118)、

GASNLED(SEQ ID NO：119)和

LQHSYLPWT(SEQ ID NO：120)，或相对于上面所列序列，每10个氨基酸不超过4、3、2.5、2、1.5、1或0.5个取代、插入或缺失的不同的氨基酸序列。

抗-IL-13抗体分子在重链可变区序列中可以包括至少1、2或3个以下CDR区内的序列：

GFSLTGYGVN(SEQ ID NO：121)、

IIWGDGSTDYNSAL(SEQ ID NO：122)和

DKTFYYDGFYRGRMDY(SEQ ID NO：123)，或相对于上面所列序列，每10个氨基酸不超过4、3、2.5、2、1.5、1或0.5个取代、插入或缺失的不同的氨基酸序列。

在一个实施方案中，IL-13抗体分子可以包括以下序列之一：

■DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHIPYT(SEQ ID NO：30)

■DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWFQQRPGQSPRRLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHIPYT(SEQ ID NO：31)

■DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHIPYT(SEQ ID NO：32)

■DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQPPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHIPYT(SEQID NO：33)

■DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHIPYT(SEQID NO：34)

■DIVMTQTPLSSPVTLGQPASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWLQQRPGQPPRLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGAGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHIPYT(SEQ ID NO：35)

■DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQSIVHSNGNTYLEWYQQKPGKAPKLLIYKVSNRFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCFQGSHIPYT(SEQ ID NO：36)

■DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLVYSDGNTYLNWFQQRPGQSPRRLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHIPYT(SEQID NO：37)

■DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHIPYT(SEQ ID NO：38)

或具有少于8、7、6、5、4、3、2个改变的序列(例如，取代，插入或缺失，例如，在MJ 2-7相应位置上氨基酸残基的保守性多个或一个取代)。示例性取代是在以下Kabat位置之一：2、4、6、35、36、38、44、47、49、62、64-69、85、87、98、99、101和102。例如，将来自MJ2-7相应位置上的氨基酸替代至人框架区中。

IL-13抗体分子还可以包括以下序列之一：

■DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISC-(RK)-S-S-Q-S-(LI)-(KV)-H-S-(ND)-G-N-(TN)-Y-L-(EDNQYAS)WYLQKPGQSPQLLIYK-(LVI)-S-(NY)-(RW)-(FD)-

SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC F-Q-(GSA)-(SIT)-(HEQ)-(IL)-P(SEQ ID NO：39)

■DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISC-(RK)-S-S-Q-S-(LI)-(KV)-H-S-(ND)-G-N-(TN)-Y-L-(EDNQYAS)WFQQRPGQSPRRLIYK-(LVI)-S-(NY)-(RW)-(FD)-

SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCF-Q-(GSA)-(SIT)-(HEQ)-(IL)-P(SEQ ID NO：40)

■DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISC-(RK)-S-S-Q-S-(LI)-(KV)-H-S-(ND)-G-N-(TN)-Y-L-(EDNQYAS)WYLQKPGQSPQLLIYK-(LVI)-S-(NY)-(RW)-(FD)-

SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCF-Q-(GSA)-(SIT)-(HEQ)-(IL)-P(SEQID NO：41)

■DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISC(RK)-S-S-Q-S-(LI)-(KV)-H-S-(ND)-G-N-(TN)-Y-L-(EDNQYAS)WYLQKPGQPPQLLIYK-(LVI)-S-(NY)-(RW)-(FD)-

SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCF-Q-(GSA)-(SIT)-(HEQ)-(IL)-P(SEQ ID NO：42)

■DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISC(RK)-S-S-Q-S-(LI)-(KV)-H-S-(ND)-G-N-(TN)-Y-L-(EDNQYAS)WYLQKPGQSPQLLIYK-(LVI)-S-(NY)-(RW)-(FD)-

SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCF-Q-(GSA)-(SIT)-(HEQ)-(IL)-P(SEQ ID NO：43)

■DIVMTQTPLSSPVTLGQPASISC(RK)-S-S-Q-S-(LI)-(KV)-H-S-(ND)-G-N-(TN)-Y-L-(EDNQYAS)WLQQRPGQPPRLLIYK-(LVI)-S-(NY)-(RW)-(FD)-

SGVPDRFSGSGAGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCF-Q-(GSA)-(SIT)-(HEQ)-(IL)-P(SEQ ID NO：44)

■DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(RK)-S-S-Q-S-(LI)-(KV)-H-S-(ND)-G-N-(TN)-Y-L-(EDNQYAS)WYQQKPGKAPKLLIYK-(LVI)-S-(NY)-(RW)-(FD)-

SGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCF-Q-(GSA)-(SIT)-(HEQ)-(IL)-P(SEQ ID NO：45)

■DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISC(RK)-S-S-Q-S-(LI)-(KV)-H-S-(ND)-G-N-(TN)-Y-L-(EDNQYAS)WYLQKPGQSPKLLIYK-(LVI)-S-(NY)-(RW)-(FD)-

SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCF-Q-(GSA)-(SIT)-(HEQ)-(IL)-P(SEQ ID NO：46)

或在框架区中具有少于8、7、6、5、4、3、2个改变的序列(例如，取代，插入或缺失，例如，在MJ 2-7相应位置上氨基酸残基的保守性多个或一个取代)。示例性取代是一个或多个以下Kabat位置：2、4、6、35、36、38、44、47、49、62、64-69、85、87、98、99、101和102。该取代例如可以将来自MJ2-7相应位置上的氨基酸替代至人框架区中。该序列之后还可以是Tyr-Thr二肽。FR4区可以包括，例如序列FGGGTKVEIKR(SEQID NO：47)。

在其他实施方案中，IL-13抗体分子可以包括以下序列之一：

■QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFNIKDTYIHWVRQAPGQGLEWMGRIDPANDNIKYDPKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARSEENWYDFFDY(SEQ ID NO：50)

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■QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFNIKDTYIHWVRQATGQGLEWMGRIDPANDNIKYDPKFQGRVTMTRNTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSEENWYDFFDY(SEQ ID NO：52)

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或具有少于8、7、6、5、4、3、2个改变的序列(例如，取代，插入或缺失，例如，在MJ 2-7相应位置上氨基酸残基的保守性多个或一个取代)。示例性取代是一个或多个以下Kabat位置：2、4、6、25、36、37、39、47、48、93、94、103、104、106和107。示例性的取代还可以是在一个或多个以下位置(根据序列的编号)：48、49、67、68、72和79。该取代例如可以将来自MJ2-7相应位置上的氨基酸替代至人框架区中。在一个实施方案中，该序列包括(根据序列的编号)以下一个或多个：48位的Ile、49位Gly、67位Lys、68位Ala、72位Ala和79位Ala；优选，例如48位Ile、49位Gly、72位Ala以及79位Ala。

此外，重链可变区序列的框架区可以包括：(i)在对应49的位置上的Gly；(ii)在对应72的位置上的Ala；(iii)在对应48的位置上的Ile；以及对应49的位置上的Gly；(iv)在对应48的位置上的Ile；对应49的位置上的Gly；以及对应72的位置上的Ala；(v)在对应67的位置上的Lys；对应68的位置上的Ala；以及对应72的位置上的Ala；和/或(vi)在对应48的位置上的Ile；对应49的位置上的Gly；对应72的Ala；以及对应79的位置上的Ala。

IL-13抗体分子还可以包括以下序列之一：

■QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-(MI)-H，WVRQAPGQGLEWMG(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRVTMTRDTS I STAYMELSRLRSDDTAVYYCARSEENWYDFFDY(SEQ ID NO：83)

■QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-(MI)-H，WVRQAPGQRLEWMG(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSEENWYDFFDY(SEQ ID NO：84)

■QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-(MI)-H，WVRQATGQGLEWMG(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRVTMTRNTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSEENWYDFFDY(SEQ ID NO：85)

■QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-(MI)-H，WVRQAPGQGLEWMG(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARSEENWYDFFDY(SEQ ID NO：86)

■QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-(MI)-H，WVRQAPGKGLEWMG(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRVTMTEDTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCATSEENWYDFFDY(SEQ ID NO：87)

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■QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-(MI)-H，WVRQAPGQGLEWMG(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARSEENWYDFFDY(SEQ ID NO：89)

■QMQLVQSGPEVKKPGTSVKVSCKASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-(MI)-H，WVRQARGQRLEWIG(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRVTITRDMSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAASEENWYDFFDY(SEQ ID NO：90)

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■QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-(MI)-H，WIRQAPGKGLEWVS(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSEENWYDFFDY(SEQ ID NO：93)

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■EVQLQQSGAELVKPGASVKLSCTGSG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-(MI)-H，WVKQRPEQGLEWIG(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-GKATITADTSSNTAYLQLNSLTSEDTAVYYCARSEENWYDFFDY(SEQ ID NO：115)

或在框架区中具有少于8、7、6、5、4、3、2个改变的序列(例如，取代，插入或缺失，例如，在MJ 2-7相应位置上氨基酸残基的保守性多个或一个取代)。示例性取代是在一个或多个以下Kabat位置上：2、4、6、25、36、37、39、47、48、93、94、103、104、106和107。该取代例如可以将来自MJ2-7相应位置上的氨基酸替代至人框架区中。FR4区可以包括，例如序列WGQGTTLTVSS(SEQ ID NO：116)或WGQGTLVTVSS(SEQ IDNO：117)。

其他干扰IL-13与IL-13R(例如，IL-13受体复合物)或其亚单位结合的IL-13抗体实例包括“mAb13.2”及其修饰形式，例如，嵌合或人源化形式。mAb13.2的重链可变区的氨基酸和核苷酸序列在本文分别如SEQ IDNO：198和SEQ ID NO：217所示。mAb13.2的轻链可变区的氨基酸和核苷酸序列在本文分别如SEQ ID NO：199和SEQ ID NO：218所示。示例性的嵌合形式(例如，包含mAb13.2重链和轻链可变区的形式)在本文中被称为“ch13.2”。ch13.2的重链可变区的氨基酸和核苷酸序列在本文分别如SEQID NO：208和SEQ ID NO：204所示。ch13.2的轻链可变区的氨基酸和核苷酸序列在本文分别如SEQ ID NO：213和SEQ ID NO：219所示。在本文中被称为“h13.2v1”的mAb13.2的人源化形式具有在本文分别如SEQ IDNO：209和SEQ ID NO：205所示的重链可变区氨基酸和核苷酸序列。h13.2v1的轻链可变区的氨基酸和核苷酸序列在本文分别如SEQ IDNO：214和SEQ ID NO：220所示。在本文中被称为“h13.2v2”的mAb13.2的另一人源化形式具有在本文分别如SEQ ID NO：210和SEQ ID NO：206所示的重链可变区氨基酸和核苷酸序列。h13.2v2的轻链可变区的氨基酸和核苷酸序列在本文分别如SEQ ID NO：212和SEQ ID NO：221所示。在本文中被称为“h13.2v3”的mAb13.2的另一人源化形式具有在本文分别如SEQ ID NO：211和SEQ ID NO：207所示的重链可变区氨基酸和核苷酸序列。h13.2v3的轻链可变区的氨基酸和核苷酸序列在本文分别如SEQ IDNO：35和SEQ ID NO：223所示。

在另一实施方案中，抗-IL-13抗体分子包括至少1、2、3或4个具有如下所示氨基酸序列的抗原结合区(例如，可变区)：对于VH的SEQ IDNO：198、208、209、210或211，和/或对于VL的SEQ ID NO：199、213、214、212或215，或与其基本上同一的序列(例如，与其至少约85％、90％、95％、99％或更高同一的序列，或与SEQ ID NO：199、213、214、212、198、208、209、210、215或211不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基差异的序列)。在另一实施方案中，该抗体包括由具有以下核苷酸序列的核酸编码的VH和/或VL：对于VH的SEQ ID NO：222、204、205、208或207，和/或对于VL的SEQ ID NO：218、219、220、221或223，或与其基本上同一的序列(例如，与其至少约85％、90％、95％、99％或更高同一的序列，或与SEQ ID NO：218、219、220、221、222、204、205、206、223或207不超过3、6、15、30或45个核苷酸差异的序列)。在另一实施方案中，该抗体或其片段包括至少1、2或3个来自这样的重链可变区的CDR，其中所述的重链可变区具有分别对于VH CDR 1-3所示的SEQ IDNO：202、203或196的氨基酸序列，或基本上与其同源的序列(例如，与其至少约85％、90％、95％、99％或更高同一的序列，和/或具有一个或多个取代(例如保守取代)的序列)。在另一实施方案中，该抗体或其片段包括至少1、2或3个来自这样的轻链可变区的CDR，其中所述的轻链可变区对于VL CDR 1-3分别具有SEQ ID NO：197、200或201所示的氨基酸序列，或基本上与其同源的序列(例如，与其至少约85％、90％、95％、99％或更高同一的序列，和/或具有一个或多个取代(例如保守取代)的序列)。在另一实施方案中，该抗体或其片段包括至少1、2、3、4、5或6个来自这样的重和轻链可变区的CDR，其中所述的重和轻链可变区对于VH CDR 1-3分别具有SEQ ID NO：202、203或196所示的氨基酸序列，以及对于VLCDR 1-3分别具有SEQ ID NO：197、200或201所示的氨基酸序列，或基本上与其同源的序列(例如，与其至少约85％、90％、95％、99％或更高同一的序列，和/或具有一个或多个取代(例如保守取代)的序列)。

在一个实施方案中，抗-IL-13抗体分子包括来自C65的所有6个CDR，或者极相关的CDR，例如，同一或者具有至少一个氨基酸改变，但是不超过2、3、或者4个改变(例如，替代、缺失、或者插入)的CDR。

在另一实施方案中，IL-13结合剂包括至少1、2或3个具有相同标准结构的CDR区以及C65的相应的CDR区，例如至少C65重和/或轻链可变区的CDR1和CDR2。

在一个实施方案中，重链框架区(例如，单个的FR1、FR2、FR3，或包含FR1、FR2和FR3，但排除CDR的序列)包括这样的氨基酸序列，其与以下种系V片段序列之一的重链框架区至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或更高同一：DP-71或DP-67，或另一与C65的标准结构类型相容的V基因(参见，例如，Chothia等(1992)J.Mol.Biol.227：799-817；Tomlinson等(1992)J.Mol.Biol.227：776-798)。

在一个实施方案中，轻链框架区(例如，单个的FR1、FR2、FR3，或包含FR1、FR2和FR3，但排除CDR的序列)包括这样的氨基酸序列，其与DPK-1或DPK-9种系序列或另一与C65的标准结构类型相容的V基因的轻链框架区至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或更高同一(例如，参见Tomlinson等(1995)EMBO J.14：4628)。

在另一实施方案中，轻链框架区(例如，单个的FR1、FR2、FR3，或包含FR1、FR2和FR3，但排除CDR的序列)包括这样的氨基酸序列，其与VκI亚群种系序列(例如，DPK-9或DPK-1序列)的轻链框架区至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或更高同一。

在另一实施方案中，重链框架区(例如，单个的FR1、FR2、FR3，或包含FR1、FR2和FR3，但排除CDR的序列)包括这样的氨基酸序列，其与VH IV亚群种系序列(例如，DP-71或DP-67序列)的轻链框架区至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或更高同一。

在一个实施方案中，轻或者重链可变框架(例如，包含至少FR1、FR2、FR3和任选地FR4的区域)可以选自：(a)轻或者重链可变框架，其包括至少80％、85％、90％、95％或100％的来自人轻或者重链可变框架的氨基酸残基，例如，来自本文描述的人成熟抗体、人种系序列、人共有序列，或者人抗体的轻或者重链可变框架残基；(b)轻或者重链可变框架，其包括20％-80％、40％-60％、60％-90％、或70％-95％的来自人轻或者重链可变框架的氨基酸残基，例如，来自人成熟抗体、人种系序列、人共有序列的轻或者重链可变框架残基；(c)非人框架(例如，啮齿动物框架)；或者(d)非人框架，其已经经修饰，例如以除去抗原性或者细胞毒性决定簇，例如，去免疫或者部分人源化。在一个实施方案中，重链可变区序列在一个或多个下面的位置(优选至少5个、10个、12个或者所有位置)包括人残基或者人共有序列残基：(在轻链的可变区的FR中)4L、35L、36L、38L、43L、44L、58L、46L、62L、63L、64L、65L、66L、67L、68L、69L、70L、71L、73L、85L、87L、98L、和/或(在重链的可变区的FR中)2H、4H、24H、36H、37H、39H、43H、45H、49H、58H、60H、67H、68H、69H、70H、73H、74H、75H、78H、91H、92H、93H、和/或103H(根据Kabat编号)。

在一个实施方案中，抗-IL-13抗体分子包括至少一个非人CDR，例如，鼠CDR，例如，来自例如mAb13.2、MJ2-7、C65的CDR和/或其修饰形式(例如，其人源化或嵌合变体)，和与例如mAb13.2、MJ2-7、C65和或其修饰形式(例如，其人源化或嵌合变体)的框架有至少1个氨基酸，例如，至少5、8、10、12、15或者18个氨基酸不同的至少一个框架。例如，所述蛋白质包括1、2、3、4、5、或者6个此类非人CDR，并且在HC FR1、HC FR2、HC FR3、LC FR1、LC FR2和LC FR3的至少三种中包括至少一个氨基酸差异。

在一个实施方案中，抗-IL-13抗体的重或者轻链可变区包括氨基酸序列，该氨基酸序列与本文描述抗体(例如，mAb13.2、MJ2-7、C65和/或其修饰形式(例如，其人源化或嵌合变体))的可变区序列有至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或者更高的同一性；或者与本文描述的抗体(例如，mAb13.2、MJ2-7、C65和/或其修饰形式(例如，其人源化或嵌合变体))的可变区序列有至少1或5个残基差异，但是小于40、30、20或者10个残基的差异。在一个实施方案中，所述蛋白质的重或轻链可变区序列包括由本文描述的核酸序列或例如在低严格、中严格、高严格或极高严格条件下与本文描述的核酸序列或其互补分子杂交的核酸编码的氨基酸序列。

在一个实施方案中，可变区序列的一个或两个包括构框架中的氨基酸位置，其不同地来自非人抗体(例如，鼠抗体，诸如mAb13.2)和人抗体或者种系序列。例如，可变区可包括许多位置，在所述位置上氨基酸残基与非人抗体和人抗体(或者人种系序列)同一，因为这两种抗体在该位置同一。在非人和人抗体不同的剩余框架位置中，可变区的至少50、60、70、80或者90％的位置优选与人抗体(或人种系序列)同一而不是与非人抗体同一。例如，没有或者有至少1、2、3或者4个这种剩余的框架位置可以与非人抗体而不是人抗体同一。例如在HC FR1中，一个或两个这种位置可以是非人的；在HC FR2中，一个或两个这种位置可以是非人的；FR3中，1、2、3或者4个这种位置可以是非人的；在LC FR1中，1、2、3或者4个这种位置可以是非人的；在LC FR2中，一个或两个这种位置可以是非人的；在LC FR3中，一个或两个这种位置可以是非人的。该框架区可以包括其他非人位置。

在一个实施方案中，抗体分子所具有的CDR序列与MJ 2-7、C65或13.2的那些仅有非实质之差异。非实质之差异包括小的氨基酸改变，诸如：在CDR(例如Chothia或Kabat CDR)序列中之任一一般的5-7个氨基酸中有1或2个氨基酸替代。一般地，氨基酸被具有类似电荷、疏水性或立体化学特征的相关氨基酸所替代。这类替代在技术人员的一般技术范围内。与在CDR中的情况不同，可在结构框架区(FR)内制造更实质的改变，但不会对抗体的结合性质有不利影响。FR的改变包括，但不限于：将从非人来源的框架人源化或将某些对抗原接触而言重要或用来稳定结合部位的构架残基进行基因工程化改变，例如，改变恒定区的类别或亚类，改变可能改变效应子功能(诸如Fc受体结合)的特定氨基酸残基(Lund等(1991)J.Immun.147：2657-62；Morgan等(1995)Immunology 86：319-24)，或改变衍生该恒定区的物种。抗体可在重链的CH2区中具有能降低或改变效应子功能(例如，Fc受体结合及补体活化)的突变。例如，抗体可具有如美国专利号5,624,821和5,648,260中所描述的突变。例如，在IgG1或IgG2重链中，可产生使其相似于SEQ ID NO：17中所列之氨基酸序列的这类突变。抗体还可具有可稳定免疫球蛋白二个重链之间的二硫键的突变，诸如本领域中所公开的在IgG4绞链区中的突变(例如，Angal等(1993)Mol，Immunol30：105-08)。

抗-IL-13抗体分子可为完整抗体、抗体的抗原结合片段(例如Fab、F(ab′)₂、Fd、dAb及scFv片段)和在其恒定和/或可变区发生突变(例如，用来产生嵌合型、部分人源化或完全人源化的抗体，以及用来产生具有所需特性，例如增强IL-13结合力和/或降低FcR结合力的突变)的完整抗体和片段的形式。

抗-IL-13抗体分子可衍生或者连接到另一功能性分子，例如另一种肽或蛋白质(例如Fab片段)。例如，该结合剂可功能性地连接(如：通过化学偶联、遗传融合、非共价性结合或其他方式)一个或多个其他分子实体，诸如另一抗体分子(例如，以形成双特异性或多特异性抗体分子)、毒素、放射性同位素、细胞毒剂或细胞抑制剂等。

其他IL-13/IL-13R or IL-4/IL-4R结合剂

除了抗体分子外，还提供了结合至IL-13或IL-4多肽或核酸、或者IL-13R或IL-4R多肽或核酸上的其他结合剂。在实施方案中，本文所述的其他结合剂是拮抗剂，从而降低、抑制或另外减少IL-13和/或IL-4的一种或多种生物活性(例如一种或多种本文所述的IL-13和/或IL-4的生物活性)。

可通过多种方法来鉴别结合剂，所述方法包括修饰本文所述的可变区或将本文所述可变区的一种或多种CDR移植至其他支架区上。结合剂也可通过多种文库来鉴别，例如通过筛选。用于筛选蛋白质文库的一种方法使用噬菌体展示。蛋白质的特定区域是不同的，与IL-13或IL-4或者其受体相结合的蛋白质通过例如在固相支持物上的滞留或通过其他物理缔合而得以鉴别。例如，为鉴别结合至IL-13上与MJ2-7、C65或mAb 13.2相同的表位或重叠表位的特定结合剂，可通过加入MJ2-7、C65或mAb 13.2(或相关抗体)来洗脱结合剂，或可在与MJ2-7、C65或mAb 13.2(或相关抗体)的竞争实验中评估结合剂。还可能通过将文库与含有IL-13和MJ2-7、C65或mAb 13.2(或相关抗体)的复合体相接触来消耗结合至其他表位的物质的文库。然后可将消耗的文库与IL-13接触以获得结合至IL-13、而不是与受到MJ2-7、C65或mAb 13.2结合的IL-13的结合剂。还可利用含有MJ2-7、C65表位或以mAb 13.2作为靶标的来自IL-13的多肽。

例如在美国专利号5,223,409、Smith(1985)Science 228：1315-1317、WO 92/18619、WO 91/17271、WO 92/20791、WO 92/15679、WO 93/01288、WO 92/01047、WO 92/09690、WO 90/02809、WO 94/05781、Fuchs等(1991)Bio/Technology 9：1370-1372、Hay等(1992)Hum Antibod Hybridomas3：81-85、Huse等(1989)Science 246：1275-1281、Griffiths等(1993)EMBO J12：725-734、Hawkin等(1992)J Mol Biol 226：889-896、Clackson等(1991)Nature 352：624-628、Gram等(1992)PNAS 89：3576-3580、Garrard等(1991)Bio/Technology 9：1373-1377、Rebar等(1996)Methods Enzymol.267：129-49、以及Barbas等(1991)PNAS 88：7978-7982中对噬菌体展示有所描述。酵母表面展示描述于例如Boder和Wittrup(1997)Nat.Biotechnol.15：553-557。展示的另一形式是核糖体展示。参见，例如Mattheakis等(1994)Proc.Natl.Acad.Sci.美国91：9022和Hanes等(2000)Nat Biotechnol.18：1287-92；Hanes等(2000)Methods Enzymol.328：404-30.以及Schaffitzel等(1999)J Immunol Methods.231(1-2)：119-35。

结合至IL-13或IL-4或其受体的结合剂可具有一个支架蛋白质的结构特征，例如折叠微区。基于抗体的示例性的支架区是“minibody”支架，已通过从单克隆抗体的重链可变区缺失3条β链而设计出来(Tramontano等，1994，J.Mol.Recognit.7：9；和Martin等，1994，EMBO J.13：5303-5309)。该结构域包括61个残基并可用于呈现两个高变环，例如本文所述的可变区或本文所述变体的一个或多个高变环。在另一方法中，结合剂包括V样结构域的支架区(Coia等WO 99/45110)。V样结构域指的是具有与抗体的可变重链(VH)或可变轻链(VL)区类似结构特征的结构域。另一支架区衍生自tendamistatin(通过两个二硫键连接在一起的74残基、六股β折叠多层结构(McConnell和Hoess，1995，J.Mol.Biol.250：460))。该母蛋白包括三个环。环可经修饰(例如，利用本文所述的CDR或高变环)或改变，例如以便选择结合至IL-13或IL-4或其受体的结构域。WO 00/60070描述了衍生自可用作支架区的天然存在的CTLA-4胞外结构域的β-多层结构结构。

IL-13/13R或IL-4/IL-4R结合剂的另一支架区是基于纤连蛋白III型结构域或相关纤连蛋白样蛋白质的结构域。纤连蛋白III型(Fn3)结构域的全部折叠是与最小的功能性抗体片段、抗体重链可变区的全部折叠紧密相关的。Fn3是与抗体VH区的β-多层结构相类似的β-多层结构，除了Fn3具有七条β-链而不是九条。在Fn3的末端有三个环，BC、DE和FG环的位置大约对应于抗体的VH区CDR1、2和3的位置。由于没有二硫键Fn3是便利的。因此，Fn3在还原性环境下是稳定的，不同于抗体及其片段(参见WO 98/56915、WO 01/64942、WO 00/34784)。Fn3结构域可经修饰(例如，利用本文所述的CDR或高变环)或改变，例如以便选择结合至IL-13或IL-4或其受体的结构域。

另外其他的示例性支架区包括：T细胞受体、MHC蛋白质、胞外结构域(例如，纤连蛋白III型重复、EGF重复)、蛋白酶抑制剂(例如，Kunitz结构域、ecotin、BPTI等)、TPR重复、三叶结构域、锌指结构域、DNA结合蛋白、特定的单体DNA结合蛋白、RNA结合蛋白、酶(例如蛋白酶(特别是失活的蛋白酶)、RNA酶)、侣伴蛋白(例如硫氧还蛋白和热激蛋白)，以及细胞内信号传导结构域(例如SH2和SH3结构域)。US20040009530描述了一些备选支架的实例。

小的支架结构域的实例包括：Kunitz结构域(58个氨基酸，3个二硫键)、南瓜胰蛋白酶抑制剂(31个氨基酸，3个二硫键)、鸟苷素相关结构域(14个氨基酸，2个二硫键)、来自革兰氏阴性细菌的热稳定肠毒素IA相关的结构域(18个氨基酸，3个二硫键)、EGF结构域(50个氨基酸，3个二硫键)、三环域(60个氨基酸，3个二硫键)、真菌糖类结合结构域(35个氨基酸，2个二硫键)、内皮缩血管肽结构域(18个氨基酸，2个二硫键)、和链球菌GIgG结合结构域(35个氨基酸，无二硫键)。小的胞内支架区的实例包括SH2、SH3和EVH结构域。通常，可使用任何胞内或胞外的模式结构域。

用于评价支架区的示例性标准可包括：(1)氨基酸序列，(2)几个同源结构域的序列，(3)3-维结构，和/或(4)在pH、温度、盐度、有机溶剂、氧化剂浓度范围内的稳定性数据。在一项实施方案中，支架区是小的、稳定的蛋白结构域，例如少于100、70、50、40或30个氨基酸的蛋白质。结构域可包括一个或多个二硫键或可螯合金属，例如锌。

另外其他的结合剂基于肽，例如具有少于30、25、24、20、18、15或12个氨基酸的氨基酸序列的蛋白质。可将肽并入更大的蛋白质，但通常是可独立结合IL-13，例如结合至本文所述表位的区域。可通过噬菌体展示来鉴定肽，参见例如US 20040071705。

结合剂可包括非肽连接或其他化学修饰。例如，可将结合剂的部分或全部合成为肽模拟物，例如拟肽(参见例如Simon等(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.美国89：9367-71和Horwell(1995)Trends Biotechnol.13：132-4)。结合剂可包括一种或多种(例如全部)非水解键。本领域已知许多非水解肽键，以及用于合成含有此类键的肽的方法。示例性的非水解键包括--[CH₂NH]-还原性酰胺肽键、--[COCH₂]-酮亚甲基肽键、--[CH(CN)NH]-(氰亚甲基)氨基肽键、--[CH₂CH(OH)]-羟乙烯基肽键、--[CH₂O]-肽键、和--[CH₂S]-硫亚甲基肽键(参见，例如美国专利号6,172,043)。

在其他实施方案中，IL-13或IL-4拮抗剂衍生自脂笼蛋白，例如人脂笼蛋白支架。

可溶性受体

IL-13或IL-4受体或者修饰的拮抗性细胞因子的可溶性形式可单独使用或功能性地连接(例如，通过化学偶联、遗传或多肽融合、非共价结合或其他)至第二部分，例如免疫球蛋白Fc区、血清白蛋白、加入聚乙二醇、GST、Lex-A或MBP多肽序列。如本文所用，“融合蛋白”指的是含有两个或多个有效结合的(例如连接的)的部分，例如蛋白质部分。通常，各部分是共价结合的。各部分可直接结合或通过间隔区或接头连接。

融合蛋白可另外包括将第一部分连接至第二部分的接头序列。例如，融合蛋白可包括肽接头、例如长度为大约4至20、更优选5至10个氨基酸的肽接头；肽接头长度是8个氨基酸。肽接头中的每个氨基酸选自Gly、Ser、Asn、Thr和Ala；肽接头包括Gly-Ser元件。在其他实施方案中，融合蛋白包括肽接头，且肽接头包括具有式(Ser-Gly-Gly-Gly-Gly)y的序列，其中y是1、2、3、4、5、6、7或8。

在其他实施方案中，可将其他氨基酸序列添加至融合蛋白的N-或C-端以促进表达、检测和/或分离或纯化。例如，受体融合蛋白可连接至一种或多种另外的部分，例如GST、His6标签、FLAG标签。例如，融合蛋白另外可连接至GST融合蛋白，所述GST融合蛋白中融合蛋白序列融合至GST(即，谷胱甘肽S转移酶)序列的C端。此类融合蛋白可促进受体融合蛋白的纯化。在其他实施方案中，融合蛋白包括位于其N端的异源性信号序列(即，不存在于由受体核酸编码的多肽中的多肽序列)。例如，可除去天然的受体信号序列并用来自另一蛋白质的信号序列代替。在特定的宿主细胞(例如哺乳动物宿主细胞)中，通过使用异源性信号序列可增加受体的表达和/或分泌。

本发明的嵌合或融合蛋白可通过标准的重组DNA技术来生产。例如，根据常规技术(例如使用平端的或交错端的末端用于连接，限制酶消化以提供合适的末端，随合适的、碱性磷酸酶处理而补平粘性末端从而避免不期望的连接，以及酶连接)将编码不同多肽序列的DNA片段在框内连接在一起。在另一实施方案中，可通过常规技术(包括自动化DNA合成仪)来合成融合基因。备选地，可利用在两连续基因片段之间产生互补突出端的锚定引物进行基因片段的PCR扩增，随后可将所述两连续基因片段退火及再扩增从而产生嵌合的基因序列(参见，例如，Ausubel等(eds.)Current Protocols in Molecular Biology，John Wiley & Sons，1992)。而且，编码融合部分(例如，免疫球蛋白重链的Fc区)的许多表达载体是可市售的。可将编码核酸的受体克隆进此表达载体以便融合部分框内连接至免疫球蛋白蛋白质。

在一些实施方案中，融合多肽以寡聚体例如二聚体或三聚体的形式存在。

在其他实施方案中，受体多肽部分是以在天然存在的受体序列(野生型)中具有突变的变体受体多肽的形式提供的，所述变体受体导致了受体多肽对细胞因子的更高亲和力的结合(相对于非突变的序列)。

在其他实施方案中，可在融合蛋白的N或C端添加其他的氨基酸序列以促进表达、空间柔性、检测和/或分离或纯化。第二多肽优选是可溶的。在一些实施方案中，第二多肽增强了连接的多肽的半衰期、(例如，血清半衰期)。在一些实施方案中，第二多肽包括促进融合多肽与第二BMP-10受体多肽的结合的序列。在实施方案中，第二多肽至少包括免疫球蛋白多肽的区域。免疫球蛋白融合多肽是本领域中已知的，并在例如美国专利号5,516,964、5,225,538、5,428,130、5,514,582、5,714,147和5,455,165中描述。例如，可将BMP-10受体或BMP-10拮抗性多肽的可溶形式融合至多种同种型(包括IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD和IgE)的重链恒定区。通常，融合蛋白可包括人BMP-10受体或BMP-10前肽(或与其同源的序列)的胞外结构域，且例如融合至人免疫球蛋白Fc链、人IgG(例如，人IgG1或人IgG2，或其突变形式)。

Fc序列可在一个或多个氨基酸上有所突变以便降低效应子细胞功能、Fc受体结合和/或补体活性。改变抗体恒定区的方法是本领域已知的。具有改变的功能(例如，对效应子配体例如细胞上的FcR或补体的C1成分的改变的亲和力)的抗体可通过用不同的残基取代抗体恒定区中的至少一个氨基酸残基来产生(参见例如EP 388,151A1、美国专利号5,624,821和美国专利号5,648,260)。可描述类似类型的改变，如果将所述改变应用于鼠或其他种类的免疫球蛋白将降低或消除这些功能。例如，通过用具有合适功能性的残基取代其侧链上的特定残基、或通过引入带电功能基团例如谷氨酸或天冬氨酸、或可能是芳香的非极性残基例如苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸或丙氨酸可能改变抗体(例如，IgG，例如人IgG)Fc区对FcR(例如FcγR1)、或C1q结合的亲和性(参见例如美国专利号5,624,821)。

在实施方案中，第二多肽具有比野生型免疫球蛋白重链Fc区的效应子功能更低的效应子功能。Fc效应子功能包括例如，Fc受体结合、补体结合和T细胞消耗活性(参见例如美国专利号6,136,310)。用于测定T细胞消耗活性、Fc效应子功能和抗体稳定性的方法是本领域已知的。在一项实施方案中，第二多肽具有对Fc受体很低的或无可检测的亲和力。在备选的实施方案中，第二多肽具有对补体蛋白C1q很低的或无可检测的亲和力。

将可以理解，可将本文所述的抗体分子和可溶性受体或融合蛋白功能性地连接(例如，通过化学偶联、遗传融合、非共价结合或其他)至一种或多种其他分子实体，例如抗体(例如，双特异性或多特异性抗体)、毒素、放射性同位素、细胞毒素或细胞静止剂等。

核酸拮抗剂

在另一实施方案中，拮抗剂抑制编码IL-13或IL-13R，或IL-4或IL-4R的核酸的表达。此类拮抗剂的实例包括杂交至编码IL-13或IL-13R，或IL-4或IL-4R，或转录调节区域的核酸，并阻断或降低IL-13或IL-13R或IL-4或IL-4R表达的核酸分子，例如，反义分子、核酶、RNAi、三股螺旋分子。

在实施方案中，核酸拮抗剂用于降低编码IL-13或IL-13R、或IL-4或IL-4R的内源性基因的表达。在一项实施方案中，核酸拮抗剂是靶向编码IL-13或IL-13R，或IL-4或IL-4R的mRNA的siRNA。也可使用其他类型的拮抗性核酸，例如dsRNA、核酶、三股螺旋模型、或反义核酸。因此，提供了作为核酸抑制剂的针对IL-13或IL-13R或IL-4或IL-4R编码核酸分子的分离的核酸分子，例如反义、RNAi。

“反义”核酸分子可包括与编码蛋白质的“正义”核酸互补，例如与双链cDNA分子的编码链互补或与mRNA序列互补的核苷酸序列。反义核酸可与IL-13或IL-13R或IL-4或IL-4R编码链的全部互补、或仅与其部分互补。在另一实施方案中，反义核酸分子是针对编码IL-13或IL-13R或IL-4或IL-4R的核酸序列的编码链的“非编码区域”(例如，5’和3’非翻译区)反义的。反义物质可包括，例如大约8至大约80个核酸碱基(即从大约8个核酸碱基至大约80个核酸碱基)、例如大约8至大约50个核酸碱基、或大约12至大约30个核酸碱基(nucleobase)。反义化合物包括杂交至靶核酸并调节其表达的核酶、外部指导序列(EGS)寡核苷酸(oligozymes)、或其他短的催化性RNA或催化性寡核苷酸。反义化合物可包括一段与靶基因序列互补的至少8个连续的核酸碱基。为了特异性杂交，寡核苷酸不必与其靶核酸序列100％互补。当寡核苷酸与靶标的结合干扰靶分子的正常功能，从而引起效用损失时寡核苷酸是特异结合的，且在特异性结合所期望的条件下有充足的互补程度以避免寡核苷酸与非靶序列的非特异性结合，所述期望的条件即在体内测定或治疗处理的情况时处于生理条件下，或者在体外测定情况时处于可完成测定的条件下。

反义寡核苷酸与mRNA的杂交可干扰mRNA的一种或多种正常功能。所被干扰的mRNA的功能包括所有关键功能例如，举例而言，将RNA转运至蛋白质翻译的位置、从RNA进行的蛋白质翻译、获得一种或多种mRNA种类的RNA剪接、和可被RNA使用的催化活性。一种或多种特异蛋白质对RNA的结合还可受到反义寡核苷酸与RNA杂交的干扰。

示例性的反义化合物包括特异杂交至靶核酸(例如编码BMP-10/BMP-10受体的mRNA)的DNA或RNA序列。互补区域可从大约8个核酸碱基延伸至大约80个核酸碱基。化合物可包括一种或多种的修饰的核酸碱基。修饰的核酸碱基可包括例如5-取代的嘧啶例如5-碘尿嘧啶、5-碘胞嘧啶、和C5-丙炔嘧啶例如C5-丙炔胞嘧啶和C5-丙炔尿嘧啶。其他合适的修饰核酸碱基包括N⁴--(C₁-C₁₂)烷氨基胞嘧啶和N⁴，N⁴--(C₁-C₁₂)二烷氨基胞嘧啶。修饰的核酸碱基也可包括7-取代的-8-氮杂-7-脱氮嘌呤(deazapurines)和7-取代的-7-脱氮嘌呤，例如7-碘-7-脱氮嘌呤、7-氰-脱氮嘌呤，7-氨羰基-7-脱氮嘌呤。这些的实例包括6-氨基-7-碘-7-脱氮嘌呤、6-氨基-7-氰-7-脱氮嘌呤、6-氨基-7-氨羰基-7-脱氮嘌呤、2-氨基-6-羟基-7-碘-7-脱氮嘌呤、2-氨基-6-羟基-7-氰-7-脱氮嘌呤、和2-氨基-6-羟基-7-氨羰基-7-脱氮嘌呤。另外，包括N⁶-甲基氨基腺嘌呤和N⁶，N⁶-二甲基氨基腺嘌呤的N⁶--(C₁-C₁₂)烷氨基嘌呤和N⁶，N⁶--(C₁-C₁₂)二烷氨基嘌呤也是合适的修饰核酸碱基。类似地，包括例如6-硫代鸟嘌呤的其他6-取代的嘌呤可构成合适的修饰核酸碱基。其他合适的核酸碱基包括2-硫尿嘧啶、8-溴腺嘌呤、8-溴鸟嘌呤、2-氟腺嘌呤、和2-氟鸟嘌呤。任一前述修饰的核酸碱基的衍生物也是合适的。任一前述化合物的取代基可包括C₁-C₃₀烷基、C₂-C₃₀链烯基、C₂-C₃₀炔基、芳基、芳烷基、杂芳基、卤代、氨基、酰胺基、硝基、硫代、磺酰基、羧基、烷氧基、烷羰基、烷氧羰基等。其他类型核酸物质的描述也是可获得的。参见，例如美国专利号4,987,071、5,116,742和5,093,246，；Woolf等(1992)Proc Natl Acad Sci美国；AntisenseRNA and DNA，D.A.Melton编著，Cold Spring Harbor Laboratory，ColdSpring Harbor，N.Y.(1988)；89：7305-9；Haselhoff和Gerlach(1988)Nature334：585-59；Helene，C.(1991)Anticancer Drug Des.6：569-84；Helene(1992)Ann.N.Y.Acad.Sci.660：27-36；以及Maher(1992)Bioassays 14：807-15。

通常将本发明的反义核酸分子施用于受试者(例如，通过在组织位置直接注射)、或原位产生以便它们杂交或结合至编码BMP-10/BMP-10受体的细胞mRNA和/或基因组DNA从而抑制该蛋白质的表达，例如通过抑制转录和/或翻译。备选地，可将反义核酸分子进行修饰以靶向选择的细胞，然后进行全身施用。对于全身施用，可对反义分子进行修饰以便它们特异地结合至表达于所选择的细胞表面的受体或抗原，例如，通过将反义核酸分子连接至结合细胞表面受体或抗原的肽或抗体。还可利用本文所述的载体将反义核酸分子递送至细胞。为获得充足的胞内反义分子浓度，其中将反义核酸分子置于强pol II或pol III启动子控制下的载体构建体是优选的。

在另一实施方案中，本发明的反义核酸分子是α-异头核酸分子。α-异头核酸分子与互补的RNA形成特异的双链杂化物，其中与通常的β-单元相反、链间彼此平行(Gaultier等(1987)Nucleic Acids.Res.15：6625-6641)。反义核酸分子还可包含2’-o-甲基核糖核苷酸(Inoue等(1987)Nucleic AcidsRes.15：6131-6148)或嵌合的RNA-DNA类似物(Inoue等(1987)FEBS Lett.215：327-330)。

siRNA是任选包括突出端的小的双链RNA(dsRNA)。例如，siRNA的双链体区域长度为大约18至25个核苷酸，例如长度大约19、20、21、22、23或24个核苷酸。通常，siRNA序列与靶mRNA是精确互补的。特别是dsRNA和siRNA可用于沉默哺乳动物细胞(例如，人细胞)中的基因表达。siRNA还包括具有29个碱基对主干和2-核苷酸3’突出端的短发夹RNA(shRNA)。参见，例如，Clemens等(2000)Proc.Natl.Acad.Sci.美国97：6499-6503；Billy等(2001)Proc.Natl.Sci.美国98：14428-14433；Elbashir等(2001)Nature.411：494-8；Yang等(2002)Proc.Natl.Acad.Sci.美国99：9942-9947；Siolas等(2005)，Nat.Biotechnol.23(2)：227-31；20040086884；U.S.20030166282；20030143204；20040038278；和20030224432。

在另一实施方案中，本发明的反义核酸是核酶。对IL-13或IL-13R或IL-4或IL-4R编码核酸的特异性的核酶可包括与本文公开的IL-13或IL-13R或IL-4或IL-4R cDNA的核苷酸序列互补的一条或多条序列，以及具有已知负责mRNA切割的催化序列的序列(参见美国专利号5,093,246、或Haselhoff和Gerlach(1988)Nature 334：585-591)。例如，可构建四膜虫L-19IVS RNA的衍生物，其中活性位点的核苷酸序列与BMP-10/BMP-10受体编码mRNA中所要切割的核苷酸序列是互补的。参见，例如Cech等，美国专利号4,987,071；和Cech等，美国专利号5,116,742。备选地，可使用BMP-10/BMP-10受体mRNA从RNA分子库中筛选具有特异核糖核酸酶活性的催化性RNA。参见，例如Bartel，D.和Szostak，J.W.(1993)Science 261：1411-1418。

可通过靶向与IL-13或IL-13R或IL-4或IL-4R的调节区域(例如，IL-13或IL-13R或IL-4或IL-4R启动子和/或增强子)互补的核苷酸序列从而形成阻止靶细胞中IL-13或IL-13R或IL-4或IL-4R基因转录的三股螺旋结构来抑制IL-13或IL-13R或IL-4或IL-4R基因表达。通常参见，Helene，C.(1991)Anticancer Drug Des.6：569-84；Helene，C.i(1992)Ann.N.Y.Acad.Sci.660：27-36；和Maher，L.J.(1992)Bioassays 14：807-15。可被靶向促使三股螺旋形成的潜在序列可通过产生称为“switchback”的核酸分子来增加。以交替的5′-3′、3′-5′方式来合成switchback分子以便它们与双链体的第一条链以及随后与另一条链碱基配对，降低在双链体的一条链上出现大段嘌呤或嘧啶的必然性。

本发明还提供了可检测的标记寡核苷酸引物和探针分子。通常，此类标记是化学发光的、荧光的、放射性的或比色的。

可在碱基部分、糖部分或磷酸骨架上对IL-13或IL-13R或IL-4或IL-4R核酸分子进行修饰，从而促进例如稳定性、杂交或分子的可溶性。合成具有修饰的寡核苷酸的非限制性实例参见Toulmé(2001)NatureBiotech.19：17and Faria等(2001)Nature Biotech.19：40-44。此类亚磷酰胺寡核苷酸可为有效的反义试剂。

例如，核酸分子的脱氧核糖磷酸骨架可经修饰产生肽核酸(参见Hyrup B.等人(1996)Bioorganic & Medicinal Chemistry 4：5-23)。如本文所用的，术语“肽核酸”或“PNA”指的是核酸模拟物，例如DNA模拟物，其中脱氧核糖磷酸骨架被假肽骨架取代并仅保留了四个天然的核酸碱基。PNA的中性骨架可允许在低离子强度条件下对DNA和RNA的特异杂交。可利用如Hyrup B.等(1996)见上文、和Perry-O′Keefe等Proc.Natl.Acad.Sci.93：14670-675中所述的标准固相肽合成方案来完成PNA寡聚体的合成。

PNA可用于治疗或诊断应用。例如，通过例如诱导转录或翻译捕获或抑制复制，PNA可用作序列特异性调节基因表达的反义或抗原物质。还可将核酸分子的PNA用于基因中单碱基对突变的分析中(例如，通过PNA指导的PCR发夹技术)、当与其他酶组合使用时用作‘人工限制酶’(例如，S1核酸酶(Hyrup B.等(1996)见上文))、或作为用于DNA测序或杂交的探针或引物(Hyrup B.等(1996)见上文；Perry-O′Keefe见上文)。

在其他实施方案中，寡核苷酸可包括其他附加基团例如肽(例如，用于体内靶向宿主细胞受体)、或促进转运穿过细胞膜的物质(参见，例如Letsinger等(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.美国86：6553-6556；Lemaitre等(1987)Proc.Natl.Acad.Sci.美国84：648-652；W088/09810)、或穿过血-脑屏障的物质(参见例如W089/10134)。另外，可用引发杂交的切割剂(参见例如Krol等(1988)Bio-Techniques 6：958-976)或插入剂(参见例如Zon(1988)Pharm.Res.5：539-549)来修饰寡核苷酸。为此，可将寡核苷酸与其他分子缀合(例如，肽、引发杂交的交联剂、转运剂、引发杂交的切割剂)。

结合剂产生

一些抗体分子例如Fabs、或结合剂可在细菌细胞例如大肠杆菌细胞中产生。例如，如果Fab由在展示实体和噬菌体蛋白(或其片段)之间包含可抑制终止密码子的噬菌体展示载体中的序列编码，则可将载体核酸转移进不能抑制终止密码子的细菌细胞。在此情况下，Fab不与基因III蛋白融合，并分泌到周质和/或培养基中。

还可以在真核细胞中产生抗体分子。在一项实施方案中，在酵母细胞如毕赤酵母属(Pichia)(参阅如Powers等(2001)J Immunol Methods.251：123-35)、汉逊酵母属(Hansenula)或酵母属(Saccharomyces)中表达抗体(如scFv’)。

在一项实施方案中，在哺乳动物细胞中产生抗体分子。用于表达克隆抗体或其抗原结合片段的典型的哺乳动物宿主细胞包括中国仓鼠卵巢(CHO细胞)(包括Urlaub和Chasin(1980)Proc.Natl.Acad.Sci.美国77：4216-4220中描述的与DHFR选择标记一起使用的dhfr^-CHO细胞，例如如Kaufman和Sharp(1982)Mol.Biol.159：601-621中所述)、淋巴细胞系如NS0骨髓瘤细胞和SP2细胞、COS细胞和来自转基因动物(如转基因哺乳动物)的细胞。例如，细胞为哺乳动物上皮细胞。

除了编码抗体分子的核酸序列以外，重组表达载体还可以带有其他序列，如调节载体在宿主细胞中复制的序列(如复制起点)和选择标记基因。选择标记基因便于选择其中引入了载体的宿主细胞(参阅如美国专利号4,399,216、4,634,665和5,179,017)。例如，选择标记基因通常赋予其中引入了载体的宿主细胞对药物例如G418、潮霉素或氨甲喋呤的抗性。

在用于重组表达抗体分子的示例系统中，通过磷酸钙介导的转染将编码抗体重链和轻链的重组表达载体引入dhfr^-CHO细胞。在重组表达载体内，抗体重链和轻链基因各自与增强子/启动子调节元件(如来自SV40、CMV、腺病毒等，如CMV增强子/AdMLP启动子调节元件或SV40增强子/AdMLP启动子调节元件)有效连接，以驱动基因的高水平转录。重组表达载体还带有DHFR基因，它使用氨甲喋呤选择/扩增来选择转染了载体的CHO细胞。可以培养选择的转化体宿主细胞以表达抗体重链和轻链，并从培养基中回收完整抗体。可以使用标准分子生物学技术制备重组表达载体、转染宿主细胞、选择转化体、培养宿主细胞和从培养基中回收抗体分子。例如，一些抗体分子可以用A蛋白或G蛋白偶联基质通过亲和层析分离。

对于包含Fc结构域的抗体分子，抗体产生系统优选合成Fc区被糖基化的抗体。例如，IgG分子的Fc结构域在CH2结构域中天冬酰胺297处被糖基化。此天冬酰胺是用双触角型寡糖修饰的位点。已经证明Fcγ受体和补体C1q介导的效应子功能需要这种糖基化(Burton和Woof(1992)Adv.Immunol.51：1-84、Jefferis等(1998)Immunol.Rev.163：59-76)。在一个实施方案中，在使天冬酰胺297对应的残基被正确糖基化的哺乳动物表达系统中产生Fc结构域。Fc结构域还可以包括其他真核翻译后修饰。

还可以在转基因动物中产生抗体分子。例如，美国专利号5,849,992描述了在转基因哺乳动物的乳腺中表达抗体的方法。构建包含乳特异性启动子和编码抗体分子的核酸和用于分泌的信号序列的转基因。这些雌性转基因哺乳动物产生的乳中包含分泌到其中的目的抗体。可以从乳中纯化抗体分子或者在一些应用中直接使用。

结合剂的表征

可以通过任何方法测定结合剂的结合特性，例如通过以下方法之一：BIACORE^TM分析、酶联免疫吸附测定(ELISA)、x射线晶体学、序列分析和扫描诱变。可以通过以下方法测定蛋白质中和和/或抑制一种或多种IL-13相关活性的能力：用于测量IL-13依赖性细胞系的增殖的测定，如TFI；用于测量IL-13介导的多肽的表达的测定，如CD23表达的流式细胞术分析；评估下游信号分子(如STAT6)活性的测定；评估生腱蛋白产生的测定；测试相关动物模型(如食蟹猴)中本文所述抗体预防哮喘的效力的测定以及其他测定。IL-13结合剂(特别是IL-13抗体分子)可以在一种或多种这些测定中具有统计学显著的效应。结合特性的示例测定包括以下的测定。

可以使用表面等离振子共振(SPR)分析IL-13或IL-4结合剂和靶标(如IL-13或IL-4)的结合相互作用。SPR或生物分子相互作用分析(BIA)实时检测生物特异性相互作用而不标记任何相互作用者。结合在BIA芯片表面质量的变化(指示结合事件)引起靠近表面的光折射率的改变。折射率的变化产生可检测的信号，所述信号测量为生物分子间实时反应的指标。使用SPR的方法描述于例如美国专利号5,641,640；Raether(1988)SurfacePlasmons Springer Verlag；Sjolander和Urbaniczky(1991)Anal.Chem.63：2338-2345；Szabo等(1995)Curr.Opin.Struct.Biol.5：699-705和BIAcore International AB(Uppsala，Sweden)提供的在线资源中。

来自SPR的信息可用于提供分子与靶标结合的平衡解离常数(K_d)和动力学参数(包括K_on和K_off)的准确的定量测量结果。此类数据可以用于比较不同的分子。来自SPR的信息还可用于开发结构-活性关系(SAR)。例如，可以评估不同抗体分子的动力学和平衡结合参数。可以鉴定给定位置处与特定的结合参数例如高亲和力和缓慢的K_off相关的变体氨基酸。此信息可以与结构建模(例如，使用同源性建模、能量最低化，或通过x射线晶体学或NMR测定结构)组合。结果，可以得到对蛋白质与其靶标之间物理相互作用的理解，并用于指导其他设计过程。

呼吸系统病症

IL-13和/或IL-4拮抗剂可用于治疗或预防呼吸疾病，包括但不仅限于哮喘(例如，变应性和非变应性哮喘(例如幼儿中呼吸道合胞病毒(RSV)感染引起的哮喘))、支气管炎(例如慢性支气管炎)、慢性阻塞性肺疾病(COPD)(例如肺气肿(例如吸烟引发的肺气肿))、与呼吸道炎症相关的病症、嗜酸粒细胞增多、纤维化和粘液产生过度，如囊性纤维化、肺纤维化和变应性鼻炎。例如，可以以有效治疗或预防病症或改善病症的至少一种症状的量施用IL-13结合剂(例如抗IL-13抗体分子)。

很多条件都可以引发哮喘，如吸入变应原、存在上呼吸道或耳感染等(Opperwall(2003)Nurs.Clin.North Am.38：697-711)。变应性哮喘的特征在于对多种特异性和非特异性刺激的呼吸道反应过度(AHR)、升高的血清免疫球蛋白E(IgE)、呼吸道粘液产生过度、水肿和支气管上皮损伤(Wills-Karp，见上文)。当变应原激发立即早期呼吸道应答时(若干小时后常跟随延迟的晚期呼吸道应答(LAR))，则变应性哮喘发作(Henderson等(2000)J.Immunol.164：1086-95)。在LAR期间在整个呼吸道壁和支气管液中流入嗜酸性粒细胞、淋巴细胞和巨噬细胞(Henderson等，见上文)。肺嗜酸粒细胞增多是变应性哮喘的标志，并是呼吸上皮损伤的主要原因(Li等(1999)J.Immunol.162：2477-87)。

CD4⁺T辅助(Th)细胞对于与哮喘相关的慢性炎症是很重要的(Henderson等，见上文)。一些研究已经显示CD4⁺细胞定型为2类T辅助(Th2)细胞和其后2型细胞因子(例如，IL-4、IL-5、IL-10和IL-13)的产生的行为对导致AHR的变应性炎症应答是很重要的(Tomkinson等(2001)J.Immunol.166：5792-5800及其引用的参考文献)。首先，已经显示CD4⁺T细胞对小鼠模型中变态反应诱导的哮喘是必要的。其次，产生2型细胞因子的CD4⁺T细胞不仅在这些动物模型中增殖，而且在患有变异性哮喘的患者中增殖。第三，2型细胞因子的水平在动物模型和哮喘患者的呼吸道组织中提高。第四，在变应性哮喘的小鼠模型中已经发现Th2细胞因子在嗜酸性粒细胞募集中发挥中心作用，并且过继转移(adoptivelytransferred)的Th2细胞与肺中嗜伊红粒细胞趋化蛋白(潜在嗜酸性粒细胞的化学引诱物)的水平提高和肺嗜酸粒细胞增多相关(Wills-Karp等，见上文；Li等，见上文)。

本文所述治疗或预防哮喘的方法包括用于外源性哮喘(也称为变应性哮喘或特应性哮喘)、内源性哮喘(也称为非变应性哮喘或非特应性哮喘)或其二者组合(称为混合性哮喘)的方法。外源性或变应性哮喘包括由例如变应原如花粉、孢子、草或杂菜、宠物皮屑、粉尘、螨等引起或与其相关的事件。由于变应原和其他刺激物自身在一年中不同的时间点出现，因此这些类型的事件也称为季节性哮喘。外源性哮喘组中还包括支气管哮喘和变应性支气管肺曲霉病。

可用本文所述的治疗剂治疗或缓解的病症包括由传染物质引起的呼吸系统病症和哮喘，所述传染原为如病毒(例如，感冒和流感病毒、呼吸道合胞病毒(RSV))、副粘叶病毒、鼻病毒和流感病毒。RSV、鼻病毒和流感病毒感染在儿童中很普遍，并且是婴儿和幼儿呼吸道疾病的主要原因。患病毒性细支气管炎的儿童可能发展为慢性哮鸣和哮喘，它们可以使用本文描述的方法进行治疗。还包括一些哮喘患者中可以由锻炼和/或冷空气引起的哮喘疾病。该方法可用于与烟接触(例如吸烟引起的或工业烟)以及工业和职业性接触相关的哮喘，所述接触为如烟、臭氧、有毒气体、二氧化硫、氧化亚氮、烟尘，包括来自油漆、塑料、聚氨基甲酸酯、清漆等的异氰酸盐、木材、植物或其他有机粉尘等。该方法还可用于与食品添加剂、防腐剂或药剂相关的哮喘事件。还包括用于治疗、抑制或缓解称为沉默性哮喘或咳嗽变异哮喘的哮喘类型。

本文公开的方法还可用于治疗和缓解与可刺激支气管缩窄的胃食管反流(GERD)相关的哮喘。GERD与保留的身体分泌物、被抑制的咳嗽和接触卧室中的变应原和刺激物可以促成哮喘疾病，统称为夜间哮喘或夜间发生的哮喘。在治疗、抑制或缓解与GERD相关的哮喘的方法中，可以如本文所述使用药学有效量的IL-13和/或IL-4拮抗剂与药学有效量的治疗GERD的物质的组合。这些物质包括但不仅限于质子泵抑制剂如商标为

的缓释泮托拉唑钠片剂、商标为

的奥美拉唑缓释胶囊剂、商标为

的利贝拉唑钠(rebeprazole sodium)缓释片剂或商标为

的缓释兰索拉唑胶囊剂。

特应性病症及其症状

已观察到来自特应性患者的细胞对IL-13具有增强的敏感性。因此，可施用有效量的IL-13和/或IL-14拮抗剂来治疗或预防特应性病症。“特应性”指的是一组疾病，其中通常有发展变态反应的遗传倾向。

特应性疾病的实例包括变态反应、变应性鼻炎、特应性皮炎、哮喘和花粉症。哮喘是与间歇性呼吸症状(如：支气管反应过度和可逆的气流阻塞)相关的表型异质病症。哮喘的免疫组织病理学特性包括，如：呼吸道上皮剥落、胶原沉淀于基底膜下；水肿；肥大细胞活化；及炎症细胞浸润(如：由嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和淋巴细胞浸润)。呼吸道炎症还可进一步造成呼吸道反应过度、气流限制、急性支气管缩窄、粘液栓形成、呼吸道壁重塑和其他呼吸症状。可施用有效量的IL-13结合剂(例如，IL-13结合剂，如本文描述的抗体或分子)来缓和一种或多种这些症状。

变应性鼻炎(花粉症)的症状包括：鼻子痒、流鼻涕、打喷嚏或鼻塞，和眼睛痒。可施用IL-13和/或IL-4拮抗剂来缓和一种或多种这些症状。特应性皮炎是一种影响皮肤的慢性(长期持续)疾病。关于特应性皮炎的资料可从，如：NIH公布号03-4272中取得。在特应性皮炎中，皮肤可变得非常痒而导致发红、肿胀、开裂、流出透明液体，最后结痂且蜕皮。在许多情况中，具有有时疾病恶化(称为加剧或突发)然后皮肤再改善或完全无瑕(称为缓解)的周期。特应性皮炎通常称为″湿疹″，其为数种皮肤炎症类型的通称。特应性皮炎为多种湿疹类型中最常见的一种。特应性皮炎的实例包括：变应性接触性湿疹(皮炎：发红、痒、渗液反应(weepy reaction)，其中皮肤与被免疫系统视为外来物的物质，如：毒常春藤，或乳膏和乳剂中的某些防腐剂接触)；接触性湿疹(包括发红、痒和灼烧的局部反应，其中皮肤与变应原(引起过敏的物质)或刺激剂，如：酸、清洁剂或其他化学物质接触)；汗疱湿疹(手掌和脚底皮肤的刺激，其特征为：痒且灼烧的透明、位于深处的水泡)；神经性皮肤炎(因局部发痒(如：昆虫咬)引起的头部、下肢、腕或前臂皮肤上的鳞斑，其在抓伤时被强烈刺激)；钱币状湿疹(受刺激的皮肤的钱币形斑块-最常出现在手臂、背部、屁股和下肢，其可能结痂、蜕皮且非常痒)；脂溢性湿疹(头皮、脸，有时在身体其他部分的皮肤上的浅黄色、油性、鳞状斑块)。其他特定症状包括：淤滞性皮炎、特应性褶(丹-摩二氏皱襞)、唇炎、掌纹增多、眼睑色素沉着过度(眼睑因炎症或花粉症而颜色加深)、鱼鳞癣、毛发角化症、苔藓化、丘疹和荨麻疹。可施用IL-13或IL-4拮抗剂来缓和一种或多种这些症状。

用于治疗变应性鼻炎或者其他变应性病症的示例性方法可以包括在暴露于变应原，例如，季节性暴露于变应原之前，例如，变应原旺盛之前用IL-13和/或IL-4拮抗剂进行最初治疗。此类治疗可以包括一次或多次剂量，例如，以常规间隔施用的剂量。

癌症

IL-13及其受体涉及至少一些癌症类型的发展，如：从造血细胞衍生的癌症或从脑或神经元细胞衍生的癌症(如：成胶质细胞瘤)。例如：阻断IL-13信号传递途径(如：经由使用可溶性IL-13受体或STAT6-/-缺失小鼠)可分别延迟肿瘤发作和/或霍奇金淋巴瘤细胞系或转移的乳癌生长。(Trieu等(2004)Cancer Res.64：3271-75；Ostrand-Rosenberg等(2000)J.Immunol.165：6015-6019)。文中所描述的IL-13抗体可特异靶向表达IL-13R(2的癌症(Husain和Puri(2003)J.Neurooncol.65：37-48；Mintz等(2003)J.Neurooncol.64：117-23)。IL-13拮抗剂可用来抑制癌细胞增殖或其他癌细胞活性。癌症是指对正常生长控制失去反应，且通常相对于对应的正常细胞而言，对其增殖的调节减少的一种或多种细胞。

可使用IL-13拮抗剂(例如，IL-13结合剂，如本文描述的抗体或抗原结合片段)治疗的癌症实例包括白血病，如：B-细胞慢性淋巴细胞白血病、急性髓性白血病和人T-细胞白血病1型病毒(HTLV-1)转化的T细胞；淋巴瘤，如：T细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤；成胶质细胞瘤；胰腺癌；肾细胞癌；卵巢癌；AIDS-卡波西肉瘤，和乳腺癌(如Aspord，C.等(2007)JEM204：1037-1047中所述)。例如，可施用有效量的IL-13结合剂(例如抗-IL-13抗体分子来治疗或预防病症，例如，来减少细胞增殖、或缓解该病症的至少一种症状。

纤维变性

IL-13和/或IL-4拮抗剂也可用来治疗炎症和纤维变性，例如肝脏纤维变性。IL-13的产生与朝向硬化、及可能的肝细胞癌的肝脏炎症(如病毒性肝炎)的进展相关(de Lalla等.(2004)J.Immunol.173：1417-1425)。纤维变性在例如当正常组织被疤痕组织替代时发生，通常在炎症后发生。乙型肝炎和丙型肝炎病毒二者均引起肝脏中的纤维变性反应，此纤维变性反应可进展成硬化。接着，硬化可发展为严重的并发症，如：肝衰竭或肝细胞癌。利用如此文所述的IL-13和/或IL-4拮抗剂阻断IL-13活性可减少炎症和纤维变性，例如与肝病、尤其是乙型和丙型肝炎相关的炎症、纤维变性和硬化。例如，可施用有效量的一种或多种拮抗剂来治疗或预防病症或缓解炎症、和/或纤维变性病症的至少一种症状。

炎症性肠病

炎症性肠病(IBD)是引起肠炎症的疾病通称。炎症性肠病的两个实例是克隆病和溃疡性结肠炎。现已发现IL-13/STAT6信号传导涉及由炎症引起的小鼠平滑肌的过度收缩，一种炎症性肠病的模型(Akiho等.(2002)Am.J.Physiol.Gastrointest.Lievr Physiol.282：G226-232)。例如，可施用有效量的IL-13和/或IL-4拮抗剂来治疗或预防病症或缓和炎症性肠病的至少一种症状。

药物组合物

可在体外、离体或体内使用IL-13和/或IL-4拮抗剂(例如本文所述的那些)。可将它们掺入药物组合物中，例如通过将IL-13结合剂与可药用载体组合。除了IL-13结合剂和载体以外，此类组合物还可含有多种稀释剂、填充剂、盐、缓冲剂、稳定剂、增溶剂和本领域公知的其他物质。可药用物质一般是不干扰IL-13结合剂生物活性的效力的无毒物质。载体的特征可以取决于给药途径。

本文所述的药物组合物还可以含有其他因子，例如，但不仅限于下文更详细描述的其他抗细胞因子抗体分子或其他抗炎剂。药物组合物中可以包含这些额外的因子和/或物质，以产生与本文所述的IL-13和/或IL-4拮抗剂的协同效应。例如，在变应性哮喘的治疗中，本文所述的药物组合物可以包含抗IL-4抗体分子或已知减轻变应性应答的药物。

本文所述的药物组合物可以是脂质体形式，其中除了其他可药用载体以外，IL-13和/或IL-4拮抗剂例(如本文所述的拮抗剂)与两亲性物质如脂质组合，所述两亲性物质在水溶液中以微粒、不溶单层、液态晶体或片状层的聚集形式存在。用于脂质体制剂的合适脂质包括但不仅限于甘油单酯、甘油二酯、硫苷脂、溶血卵磷脂、磷脂类、皂苷、胆汁酸等。制备这些脂质体制剂的示例方法包括美国专利号4,235,871、4,501,728、4,837,028和4,737,323中所述的方法。

本文使用的术语“治疗有效量”指药物组合物或方法中每种活性成分足以显示对患者有意义的益处(如这些疾病症状的改善、治愈或治愈率的提高)的总量。当应用于单独施用的单一活性成分时，该术语仅指该成分。当应用于组合时，该术语指引起疗效的活性成分的组合量，无论是组合、顺次或同时施用。

可以以多种常规方式施用药物组合物中使用的IL-13和/或IL-4拮抗剂，如口服、吸入或皮肤、皮下或静脉注射。当通过静脉、皮肤或皮下注射治疗有效剂量的IL-13和/或IL-4拮抗剂时，结合剂可以制备为无热原的肠胃外可接受的水性溶液。可以考虑如pH、等渗性、稳定性等因素调整这些肠胃外可接受的蛋白质溶液的组成，例如优化生理条件、结合剂稳定性等组成。用于静脉、皮肤或皮下注射的药物组合物可以含有如等渗载体如氯化钠注射液、林格注射液、葡萄糖注射液、葡萄糖和氯化钠注射液、乳酸化的林格注射液或本领域已知的其他载体。药物组合物还可以含有稳定剂、防腐剂、缓冲剂、抗氧化剂或其他添加剂。

药物组合物中IL-13和/或IL-4拮抗剂的量可取决于受治疾病的性质和严重性，以及患者先前经受的治疗的性质。可以对正常患者或未显示症状的患者施用药物组合物，例如以预防模式。主治医师可以决定治疗每个个体患者的IL-13和/或IL-4拮抗剂的量。例如，主治医师可以施用低剂量的拮抗剂并观察患者的反应。可以施用更高剂量的拮抗剂，直至得到对患者最佳的疗效，在这个点上一般不再提高剂量。例如，药物可含有每kg体重约0.1mg至50mg的抗体，如每kg体重约0.1mg至5mg，或约8mg至50mg抗体。在以不超过每月两次的频率例如隔周一次或每月一次皮下递送抗体的一项实施方案中，组合物包含约0.7-3.3，如1.0-3.0mg/kg，如约0.8-1.2、1.2-2.8或2.8-3.3mg/kg的量。

使用药物组合物的疗法的持续时间可以变化，取决于待治疗疾病的严重性和每个个体患者的条件和潜在的特应性应答。在一项实施方案中，也可以以例如每周一次、每24、48、96小时一次或不超过这些间隔的频率通过皮下途径施用IL-13和/或IL-4拮抗剂。示例剂量可以在0.1-20mg/kg、更优选1-10mg/kg的范围内。可以例如通过速率小于20、10、5或1mg/分钟的静脉输注施用药剂(agent)以达到约1至50mg/m²或约5至20mg/m²的剂量。

在一项实施方案中，对患者施用IL-13和/或IL-4拮抗剂包括多种蛋白质的剂量，例如用以使副作用降低或最小化的剂量。例如，可对受试者施用第一次剂量，如小于治疗有效剂量的剂量。在其后的间隔(如至少6、12、24或48小时后)，可以对患者施用第二次剂量，如至少超过第一次剂量的25％、50％、75％或100％的剂量。例如，第二次剂量和/或相当的第三、第四和第五次剂量可以是治疗有效剂量的至少约70％、80％、90％或100％。

吸入

可以将包括IL-13和/或IL-4拮抗剂的组合物配制为用于吸入或其他的肺递送模式。本文使用的术语“肺组织”指呼吸道的任何组织，并包括上呼吸道和下呼吸道，除非另有说明。可以与一种或多种用于治疗肺疾病的现有形式相组合来施用IL-13和/或IL-4拮抗剂。

在一个实例中，将IL-13结合剂和/或IL-4拮抗剂配制为用于喷雾器。在一项实施方案中，可以以冻干的形式储存IL-13和/或IL-4拮抗剂(如在室温下)，并在吸入前在溶液中重构。还可以将IL-13和/或IL-4拮抗剂配制为用于使用医学装置如吸入器吸入。参阅如U.S.6,102,035(干粉吸入器)和6,012,454(干粉吸入器)。吸入器可以包括用于在适于储存的pH下的IL-13和/或IL-4拮抗剂的分开的隔室和中和缓冲液的另一隔室和用于刚好在喷雾前组合IL-13和/或IL-4拮抗剂与中和缓冲液的结构。在一项实施方案中，吸入器是定量吸入器。

用于局部递送药物至肺气道的三个常用系统包括干粉吸入器(DPI)、定量吸入器(MDI)和喷雾器。MDI，吸入给药最常用的方法，可用于递送可溶形式或作为分散体的药物。一般MDI包括氟利昂或其他相对高蒸汽压的推进剂，其通过装置激活将雾化的药物推入呼吸道。与MDI不同，DPI一般完全依赖患者的吸入将干粉形式的药物引入肺。喷雾器通过对液体溶液传递能量形成可吸入的药物气雾剂。已经探索出使用含氟化学介质(fluorochemical medium)在液体通气或肺灌洗中直接递送药物至肺的方法。这些及其他方法可用于递送IL-13和/或IL-4拮抗剂。在一项实施方案中，IL-13和/或IL-4拮抗剂与聚合物例如稳定化合物或提高化合物半衰期的聚合物结合。

例如，对于通过吸入给药而言，以来自压力容器或含有适当的推进剂或喷雾器的分散器的气雾剂喷雾的形式递送IL-13和/或IL-4拮抗剂。IL-13和/或IL-4拮抗剂可以是干微粒形式或液体形式。如通过喷雾干燥、用电荷中和剂干燥IL-13和/或IL-4拮抗剂的水溶液并接着从干粉产生微粒来制备含有IL-13和/或IL-4拮抗剂的微粒，或者通过干燥有机改性剂中水溶液并接着从干粉产生微粒来制备含有IL-13和/或IL-4拮抗剂的微粒。

可以使用合适的推进剂如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他合适的气体来自增压包装或喷雾器的气雾剂喷雾形式，以便利地递送IL-13和/或IL-4拮抗剂。在增压气雾剂的情况下，可以通过提供阀以递送测定的量来测定剂量单位。如果微粒是配制的微粒，则用于吸入器或吹入器的胶囊和药筒可以配制为含有IL-13和/或IL-4拮抗剂和合适的粉剂基质(例如乳糖或淀粉)的粉剂混合物。除了配制或非配制的化合物以外，可以将其他物质例如100％DPPC或其他表面活性剂与IL-13和/或IL-4拮抗剂混合，以促进配制或非配制化合物的递送和分散。制备干微粒的方法描述于例如WO 02/32406。

IL-13和/或IL-4拮抗剂可为了用于气雾剂递送而配制，例如作为干气溶胶粒子，以便在施用时它可被快速吸收并产生快速的局部或全身治疗结果。可以修改施用以提供在施用2分钟、5分钟、1小时或3小时内可检测的活性。在一些实施方案中，甚至可以更快地获得峰值活性，例如在半小时或甚至在10分钟内。IL-13和/或IL-4拮抗剂可以配制为更长的生物半衰期(例如，通过与聚合物如PEG结合)以用作其他施用方式的备选，例如从而使IL-13和/或IL-4拮抗剂从肺进入循环并分布到其他器官或特定的靶器官。

在一项实施方案中，以使至少5％的多肽质量递送到下呼吸道或肺深处的量递送IL-13和/或IL-4拮抗剂。肺部深处具有及其丰富的毛细血管网。分开毛细血管腔和肺泡空气腔的呼吸膜非常薄(≤6μm)并且渗透性极高。此外，肺泡表面的薄液层富含肺表面活性剂。在其他实施方案中，至少2％、3％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％或80％IL-13和/或IL-4拮抗剂组合物递送到下呼吸道或肺部深处。递送到这些组织的一种或两种引起IL-13和/或IL-4拮抗剂的有效吸收和高生物利用率。在一项实施方案中，使用吸入器或喷雾器以测定的剂量提供IL-13和/或IL-4拮抗剂。例如，可以以至少约0.02、0.1、0.5、1、1.5、2、5、10、20、40或50mg/次或更高的剂量单位形式递送IL-13结合剂。可按如下计算生物利用率百分比：生物利用率百分比＝(AUC_非侵入/AUC_{静脉内或皮下})×(剂量_{静脉内或 皮下}/剂量_非侵入)×100。

尽管不是必要的，但仍可使用递送增强剂如表面活性剂进一步增强肺递送。本文使用的“表面活性剂”指具有亲水和亲脂部分的IL-13和/或IL-4拮抗剂，其通过与两个不混合相至间界面的相互作用促进药物的吸收。有若干原因可将表面活性剂用于干微粒，如减少微粒团聚、减少巨噬细胞的吞噬作用等。当与肺表面活性剂偶联时可以得到对IL-13和/或IL-4拮抗剂更有效的吸收，因为表面活性剂如DPPC大幅促进化合物的扩散。表面活性剂是本领域所熟知的，包括但不仅限于磷酸甘油酯，如磷脂酰胆碱类、二棕榈酰L-α-磷脂酰胆碱(DPPC)和双磷脂酰甘油(DPPG)；十六醇；脂肪酸类；聚乙二醇(PEG)；聚氧化乙烯-9-；月桂醚(auryl ether)；棕榈酸；油酸；失水山梨醇三油酸酯(Span 85)；甘胆酸盐；表面活性肽；泊洛沙姆(poloxomer)；脱水山梨醇脂肪酸酯；失水山梨醇三油酸酯；泰洛沙泊及磷脂类。

稳定化

在一项实施方案中，将IL-13和/或IL-4拮抗剂与改善其稳定性和/或在循环例如血、血清、淋巴、支气管肺灌洗或其他组织中的滞留(如至少1.5、2、5、10或50倍)的部分物理结合。

例如IL-13和/或IL-4拮抗剂可以与聚合物例如基本上非抗原性的聚合物如聚环氧烷或聚氧化乙烯结合。合适的聚合物在重量上可显著变化。可以使用平均分子量范围从约200至约35000(或约1000至约15000和2000至约12500)的聚合物。

例如，IL-13和/或IL-4拮抗剂可以与水溶性聚合物例如亲水聚乙烯聚合物如聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮缀合。这些聚合物的非限制性列表包括聚环氧烷均聚物，例如：聚乙二醇(PEG)或聚丙二醇，聚氧乙烯化的多元醇，其共聚物及其嵌段共聚物，其先决条件为维持该嵌段共聚物的水溶性。其他有用的聚合物包括聚氧化烯如聚氧乙烯、聚氧丙烯和聚氧乙烯和聚氧丙烯的嵌段共聚物(普流罗尼克)、聚甲基丙烯酸酯、卡波姆、含有糖单体D-甘露糖、D-和L-半乳糖、岩藻糖、果糖、D-木糖、L-阿拉伯糖、D-葡糖醛酸、唾液酸、D-半乳糖醛酸、D-甘露糖醛酸(例如聚甘露糖醛酸或海藻酸)、D-葡糖胺、D-半乳糖胺、D-葡萄糖和神经氨酸的支链或非支链多糖，包括同多糖和杂多糖如乳糖、支链淀粉、淀粉、羟乙基淀粉、直链淀粉、硫酸葡聚糖、葡聚糖、糊精类、糖原或酸性粘多糖类如透明质酸的多糖亚单位、糖醇类的聚合物如聚山梨醇和聚甘露醇、肝素或类肝素。

可以(例如通过凝胶过滤或离子交换层析如HPLC)将未反应的起始材料和IL-13和/或IL-4拮抗剂与聚合物的缀合物分开。以相同的方式从彼此中纯化缀合物的异质种类。还能够由于未反应氨基酸的离子特性的差异而分离不同的种类(例如，含有一个或两个PEG残基)。参阅如WO96/34015。

IL-13和/或IL-4拮抗剂的其他用途

在另一方面，本发明描述了通过以足以抑制其活性的量施用本文所述的IL-13和/或IL-4拮抗剂以体内调节(如减小、中和和/或抑制)一种或多种IL-13相关活性的方法。IL-13和/或IL-4拮抗剂还可以施用于需要抑制其IL-13介导的炎性应答的受试者。这些疾病包括例如呼吸道炎症、哮喘、纤维变性、嗜酸粒细胞增多和增加的粘液产生。

可以例如通过评估暴露于猪蛔虫(Ascaris suum)变应原的食蟹猴中拮抗剂调节呼吸道炎症的能力来评估本文所述的IL-13和/或IL-4拮抗剂的效力。IL-13和/或IL-4拮抗剂可用于中和或抑制一种或多种IL-13相关活性，如在体内降低IL-13介导的炎症，如用于治疗或预防IL-13相关的病理学、包括哮喘和/或其相关症状。

在一项实施方案中，在组合疗法中施用IL-13和/或IL-4拮抗剂或其药物组合物，即与其他物质如用于治疗病理状况或病症例如变应性或炎性病症的治疗剂组合。此上下文中“组合”指基本在同一时间同时或顺次给予药剂。如果顺次给予，则在开始施用第二种化合物时，优选两种化合物的第一种在治疗部位仍可检测到的有效浓度。

例如，组合疗法可以包括将能够结合IL-13并干扰功能性IL-13信号发放复合体形成的一种或多种IL-13结合剂(例如，单独的IL-13拮抗剂或与IL-4拮抗剂组合)与一种或多种其他的治疗剂(例如，下文更详细描述的一种或多种细胞因子或生长因子抑制剂、免疫抑制剂、抗炎剂、代谢抑制剂、酶抑制剂和/或细胞毒性剂或细胞生长抑制剂)共配制和/或共施用。另外，一种或多种IL-13结合剂(例如，单独的IL-13拮抗剂或与IL-4拮抗剂组合)可以与两种或更多本文所述的治疗剂组合使用。这些组合疗法可以有利地使用所施用的治疗剂的较低剂量，从而避免可能的毒性或与多种单一疗法相关的并发症。此外，本文公开的治疗剂作用于与IL-13/IL-13受体途径不同的途径，从而预期可以增强和/或协同IL-13结合剂的效力。

干扰哮喘或呼吸道炎症的不同触发的治疗剂例如用于治疗变态反应、上呼吸道感染或耳感染的治疗剂可以与IL-13结合剂(例如，单独的IL-13拮抗剂或与IL-4拮抗剂组合)组合使用。在一项实施方案中，一种或多种IL-13结合剂(例如，单独的IL-13拮抗剂或与IL-4拮抗剂组合)可以与一种或多种其他试剂共配制和/或共施用，所述其他试剂为例如其他细胞因子或生长因子拮抗剂(例如可溶性受体、肽抑制剂、小分子、粘附素)、与其他靶标结合的抗体分子(例如与其他细胞因子或生长因子、其受体或其他细胞表面分子结合的抗体)、抗炎细胞因子或其激动剂。可以与IL-13结合剂(例如，单独的IL-13拮抗剂或与IL-4拮抗剂组合)组合使用的物质的非限制性实例包括但不仅限于吸入性类固醇、β-激动剂如短效或长效β-激动剂、白三烯或白三烯受体的拮抗剂、组合药物如

IgE抑制剂如抗IgE抗体(如)、磷酸二酯酶抑制剂(如PDE4抑制剂)、黄嘌呤、抗胆碱能药物、肥大细胞稳定剂如色甘酸、IL-5抑制剂、嗜伊红粒细胞趋化蛋白/CCR3抑制剂和抗组胺剂。

在其他实施方案中，单独或与一种或多种IL-4拮抗剂结合的一种或多种IL-13拮抗剂可以与一种或多种抗炎药、免疫抑制剂或代谢或酶抑制剂共配制和/或共施用。可以与IL-13结合剂组合使用的药物或抑制剂的实例包括但不仅限于以下一种或多种：TNF拮抗剂(例如，TNF受体如p55或p75人TNF受体的可溶性片段或其衍生物，如75kd TNFR-IgG(75kDTNF受体-IgG融合蛋白，ENBREL^TM))、TNF酶拮抗剂如TNFα转化酶(TACE)抑制剂、毒蕈碱性受体拮抗剂、TGF-β拮抗剂、干扰素γ、perfenidone、化学治疗剂如氨甲喋呤、来氟米特、或西罗莫司(雷帕霉素)或其类似物如CCI-779、COX2和cPLA2抑制剂、NSAID、免疫调节剂、p38抑制剂、TPL-2、Mk-2和NFκB抑制剂。

疫苗制剂

在另一方面中，本发明描述了改变与免疫接种相关的免疫应答的方法。单独或与IL-4拮抗剂组合的IL-13拮抗剂可用于通过抑制IL-13活性而提高免疫接种效力。可以在递送免疫原例如施用疫苗之前、其中或之后施用结合剂。在一项实施方案中，通过接种产生的免疫是细胞免疫，如针对癌细胞或病毒感染的(例如逆转录病毒感染的，如HIV感染的)细胞免疫。在一项实施方案中，疫苗制剂含有一种或多种拮抗剂和抗原例如免疫原。在一项实施方案中，将IL-13和/或IL-4拮抗剂与免疫疗法组合施用(例如，与用一种或多种选自豚草、黑麦草、粉尘螨等的免疫原进行的变应性免疫相组合)。在另一实施方案中，分别施用拮抗剂和免疫原，例如彼此在1小时、3小时、1天或2天内。

IL-13的抑制可以提高例如细胞疫苗(如针对如癌症和病毒感染(如逆转录病毒感染，如HIV感染)等疾病的疫苗)的效力。CD4⁺T细胞可能是通过细胞因子IL-13下调疫苗对CD8⁺细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的诱导。已经显示IL-13的抑制增强CTL应答的疫苗诱导(Ahlers等(2002)Proc.Natl.Acad.Sci.美国99：13020-10325)。IL-13拮抗剂可以与疫苗结合使用以提高疫苗效力。癌症和病毒感染(如逆转录病毒(如HIV)感染)是细胞疫苗应答可以有效的示例性病症。通过在接种时阻断IL-13信号发放增强了疫苗效力(Ahlers等(2002)Proc.Nat.Acad.Sci.美国99：13020-25)。可以以药物组合物或治疗组合物的形式对受试者施用疫苗制剂。

诊断、预后和监测病症的方法

IL-13结合剂可以作为诊断剂在体外和体内使用。一个示例方法包括：(i)对受试者施用IL-13结合剂(例如，抗IL-13抗体分子)；和(ii)检测受试者中的IL-13结合剂。检测可以包括测定受试者中IL-13结合剂的定位。另一示例方法包括使IL-13结合剂接触样品，例如来自受试者的样品。可以测定样品中IL-13的存在与否或IL-13的水平(定性或定量)。

在另一方面中，本发明提供体外(如生物样品、如组织、活检物)或体内(如受试者中的体内成像)检测IL-13的存在的诊断方法。该方法包括：(i)使样品接触IL-13结合剂；和(ii)检测IL-13结合剂和样品间复合体的形成。该方法还可包括使参照样品(如对照样品)与结合剂接触并测定与参照样品相比，结合剂与样品间的复合体形成的程度。与对照样品或受试者相比，样品或受试者中复合体形成的变化例如统计学上的显著变化可以指示样品中IL-13的存在。

另一方法包括：(i)对受试者施用IL-13结合剂；和(ii)检测IL-13结合剂和受试者间的复合体形成。检测可以包括测定复合体的定位或形成时间。

可以用可检测物质直接或间接标记IL-13结合剂，以便于检测结合或未结合的蛋白质。合适的可检测物质包括多种酶、辅基、荧光物质、发光物质和放射性物质。

可以通过测量或可视化与IL-13结合的结合剂或未结合的结合剂来检测IL-13结合剂和IL-13之间的复合体形成。可以使用的常规检测方法如酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫测定(RIA)或组织免疫组织化学。除了标记IL-13结合剂以外，还可以使用标记了可检测物质的标准品和未标记的IL-13结合剂通过竞争性免疫测定来测定样品中IL-13的存在。在此测定的一个实例中，组合生物样品、已标记的标准品和IL-13结合剂，并测定与未标记结合剂结合的已标记标准品的量。样品中IL-13的量和与IL-13结合剂结合的已标记标准品的量成反比。

诊断、预后和/或监测哮喘的方法

本文所述的结合剂可通过测量生物样品中IL-13的水平用于例如诊断、预后和监测哮喘发展的方法中。此外，此发现使得可以鉴定IL-13信号发放的新抑制剂，它们也可用于哮喘的治疗。此类诊断变应性和非变应性哮喘的方法可以包括检测生物样品例如血清、血浆、支气管肺泡灌洗物、痰等中IL-13的改变(如下降或上升)。“诊断的”或“诊断”指鉴定病理状况的存在与否。诊断方法涉及通过测定来自受试者(人或非人哺乳动物)的生物样品(如支气管肺泡灌洗物)中IL-13多肽的测试量并将测试量与IL-13多肽的正常量或范围(即已知不患有哮喘的个体的量或范围)进行比较。尽管具体的诊断方法也许不能提供哮喘的确定诊断，但是如果该方法提供辅助诊断的阳性指征，那么则是足够的。

哮喘和/或特异性病症的预后方法可包括检测IL-13在mRNA或蛋白质水平的上调。“预后的”或“预后”指预测病理病症可能的发展和/或严重性。预后方法涉及测定来自受试者的生物样品中IL-13的测试量并将测试量与IL-13预后量或范围(即具有不同严重性哮喘的个体的量或范围)进行比较。测试样品中IL-13的多种量与哮喘的某些预后一致。检测具体预后水平的IL-13量提供了对受试者的预后。

本申请还提供通过检测IL-13的上调来监测哮喘病程的方法。监测方法包括第一次和第二次测定来自受试者的生物样品中IL-13的测试量，并比较所述量。在第一次和第二次之间IL-13量的变化可指示哮喘和/或特异性病症中病程的变化，量的降低指示哮喘的缓解，而量的提高指示哮喘和/或特应性病症的发展。这些监测测定还可用于评估该治疗IL-13相关病症的患者中具体治疗介入的效力(如疾病减弱和/或逆转)。

可以制备用荧光团和生色团标记的结合剂。可以选择荧光部分以在大于310nm、优选大于400nm波长处具有显著的吸收。Stryer(1968)Science，162：526和Brand，L.等(1972)Annual Review of Biochemistry，41：843-868描述了多种合适的荧光剂和生色团。可以通过常规方案例如美国专利号3,940,475、4,289,747和4,376,110中公开的那些，用荧光生色团标记结合剂。具有许多上文所述目的特性的一组荧光剂是呫吨染料，其包括荧光素和罗丹明。另一组荧光化合物为萘胺。一旦以荧光团或发色团标记后，可使用结合剂来检测样品中是否存在IL-13或其定位，例如利用荧光显微术(例如共聚焦显微术或去褶合显微术)。

组织学分析.可以使用本文所述的结合剂进行免疫组织化学。例如，就抗体的情况而言，可以和标记物(如纯化或表位标签)一起合成抗体，或者例如通过缀合标记物或标记物结合基团可检测地标记抗体。例如，可以在抗体上附着螯合剂。接着使抗体接触组织学制备物，如载玻片上的固定组织切片。在温育从而结合后，洗涤制备物以去除未结合的抗体。然后例如使用显微镜分析制备物以鉴定抗体是否与制备物结合。结合时抗体(或其他多肽或肽)可以是未标记的。结合和洗涤之后，标记抗体以使其可检测。

蛋白质阵列.还可以将IL-13结合剂(如是IL-13结合剂的蛋白质)固定在蛋白质阵列上。蛋白质阵列可用作诊断工具，如用于筛选医学样品(如分离的细胞、血、血清、活检物等)。蛋白质阵列还可包括其他结合剂，如与IL-13或其他靶分子结合的结合剂。

产生蛋白质阵列的方法描述于例如De Wildt等(2000)Nat.Biotechnol.18：989-994、Lueking等(1999)Anal.Biochem.270：103-111；Ge(2000)Nucleic Acids Res.28，e3，I-VII、MacBeath和Schreiber(2000)Science289：1760-1763、WO 01/40803和WO 99/51773A1。可以高速点样(例如使用如来自Genetic MicroSystems或BioRobotics的市售机器人装置)用于阵列的多肽。阵列基质可以是例如硝酸纤维素、塑料、玻璃(表面进行了修饰的玻璃)。阵列还可以包括多孔基质，如丙烯酰胺、琼脂糖或其他聚合物。例如，阵列可以是抗体阵列，如De Wildt中所述，见上文。可以以阵列形式在滤器上培养产生蛋白质的细胞。诱导蛋白质产生，并将表达的蛋白质固定在滤器上细胞的位置。

可以使蛋白质阵列接触样品以测定样品中IL-13的程度。如果样品是未标记的，可以使用夹层方法例如使用已标记的探针检测IL-13的结合。关于阵列每个地址结合程度的信息可以作为图谱储存，例如在计算机数据库中。可以一式二份产生蛋白质阵列并用于比较例如不同样品的结合谱。

流式细胞术.IL-13结合剂可用于标记细胞，如样品(如患者样品)中的细胞。结合剂可以附着(或可附着)在荧光化合物上。接着可以通过流式细胞术对细胞进行分析和/或使用荧光激活细胞分选(如使用可得自Becton Dickinson Immunocytometry Systems，San Jose CA的分选仪，还参阅美国专利号5,627,037、5,030,002和5,137,809)分选。当细胞通过分选仪时，激光束激发荧光化合物，同时探测器计数通过的细胞并通过检测荧光测定荧光化合物是否附着于细胞。可以定量并分析与每个细胞结合的标记的量以表征样品。分选仪还可以使细胞转向(deflect)并使与结合剂结合的细胞与未结合结合剂的细胞分开。可以培养和/或表征分开的细胞。

体内成像.在另一实施方案中，本发明提供体内检测受试者中IL-13存在的方法。该方法包括(i)对受试者(例如患IL-13相关病症的患者)施用与可检测标记物缀合的抗IL-13抗体分子；(ii)使患者暴露于检测可检测标记物的手段。例如，通过NMR或其他断层照影方法使受试者成像。

可用于诊断成像的标记物的实例包括放射性标记物如¹³¹I、¹¹¹In、¹²³I、^99mTc、³²P、³³P、¹²⁵I、³H、¹⁴C和¹⁸⁸Rh、荧光标记物如荧光素和罗丹明、核磁共振活性标记物、可被正电子成像术(“PET”)扫描器检测的正电子发射同位素、化学发光剂如萤光素以及酶标记物如过氧化物酶或磷酸酶。还可以使用可被短程探测器探头检测的短程辐射体，如同位素。可以使用已知的技术用此类试剂标记结合剂。例如涉及放射标记抗体的技术参阅Wensel和Meares(1983)Radioimmunoimaging and Radioimmunotherapy，Elsevier，New York和Colcher等(1986)Meth.Enzymol.121：802-816。放射性标记的结合剂还可用于体外的诊断测试。同位素标记的结合剂的比活性取决于放射性标记物的半衰期、同位素纯度和标记物掺入抗体的方式。用放射性同位素(如¹⁴C、³H、³⁵S、¹²⁵I、^99mTc、³²P、³³P和¹³¹I)标记多肽的方案是广泛已知的。参阅如U.S.4,302,438、Goding，J.W.(Monoclonalantibodies：principles and practice：production and application ofmonoclonal antibodies in cell biology，biochemistry，and immunology  第二版.London；Orlando：Academic Press，1986.124-126页)及其引用的参考文献以及A.R.Bradwell等，“Developments in Antibody Imaging”，Monoclonal Antibodies for Cancer Detection and Therapy，R.W.Baldwin等编辑，65-85页(Academic Press 1985)。

本文所述的IL-13结合剂可以与磁共振成像(MRI)造影剂(contrastagent)缀合。这些MRI技术概述于EP-A-0502814。通常使用不同环境中水质子弛豫时间常数T1和T2的差异产生影像。然而，这些差异可能不足以提供清晰的高分辨率影像。这些弛豫时间常数的差异可以通过造影剂增强。这些造影剂的实例包括大量磁性物质顺磁性物质(主要改变T1)和铁磁性或超顺磁性物质(主要改变T2响应)。螯合剂(如EDTA、DTPA和NTA螯合剂)可用于附着一些顺磁物质(如Fe³⁺、Mn²⁺、Gd³⁺)(并降低其毒性)。其他物质可以是微粒，例如直径小于10μm至约10nm的形式，并具有铁磁性、反铁磁性或超顺磁性特性。还可以用如Pykett(1982)Scientific American，246：78-88所述含有NMR活性¹⁹F原子的指示基团标记IL-13结合剂，以定位和成像IL-13的分布。

用于诊断用途的包含IL-13结合剂和说明书的试剂盒也在本发明范围内，例如使用IL-13结合剂(如抗体分子或其他多肽或肽)在体外(如样品，如来自患IL-13相关病症的患者的活检物或细胞)或体内(如通过使受试者成像)检测IL-13。试剂盒还可以含有至少一种额外的试剂，如标记物或额外的诊断剂。对于体内用途，结合剂可以配制为药物组合物。

试剂盒

可以在试剂盒中提供IL-13结合剂，例如抗IL-13抗体分子和/或IL-4拮抗剂，例如作为试剂盒的组分。例如，试剂盒包括(a)IL-13结合剂，例如抗IL-13抗体分子，和/或IL-4拮抗剂，和任选地(b)信息材料。信息材料可以是与方法，例如本文所述的方法相关的描述性、说明性、销售的或其他材料。试剂盒的信息材料不限制于其形式。在一项实施方案中，信息材料可包括关于化合物的产生、化合物的分子量、浓度、有效期、批次或产地信息等的信息。在一项实施方案中，信息材料涉及使用IL-13结合剂治疗、预防、诊断、预后或监测本文所述的病症。在一项实施方案中，信息材料包括关于以单一治疗间隔施用IL-13结合剂的说明书。

在一项实施方案中，信息材料可包括以合适的方式例如合适的剂量、剂型或给药方式(如本文所述的剂量、剂型或给药方式)施用IL-13结合剂例如抗IL-13抗体分子以实施本文所述的方法的说明书。在另一实施方案中，信息材料可以包括对合适的受试者例如人，例如患有或有风险患有变应性哮喘、非变应性哮喘或IL-13介导的病症(如变应性和/或炎性病症)或HTLV-1感染施用IL-13结合剂(如抗IL-13抗体分子)的说明书。已经将IL-13的产生与HTLV-1感染相联系(Chung等，(2003)Blood 102：4130-36)。

例如，材料可以包括对患者、患有或有风险患有变应性哮喘、非变应性哮喘或IL-13介导的病症(如变应性和/或炎性病症)或HTLV-1感染的患者施用IL-13结合剂(如抗IL-13抗体分子)的说明书。

试剂盒可以包括用于含有IL-13结合剂(如抗IL-13抗体分子)的组合物的一个或多个容器。在一些实施方案中，试剂盒包含用于组合物和信息材料的分开的容器、分隔器或隔室。例如，组合物可以装在瓶、管形瓶(vial)或注射器中，信息材料可以装在塑料套或包中。在另一实施方案中，试剂盒的独立元件装在单个不分开的容器中。例如，组合物装在以标签形式附上信息材料的瓶、管形瓶或注射器中。在一些实施方案中，试剂盒包括多个(如一包)单个容器，每个含有IL-13结合剂(如抗IL-13抗体分子)的一个或多个单位剂型(如本文所述的剂型)。例如，试剂盒包括多个注射器、安瓿、箔包、喷雾器或吸入设备，每个含有IL-13结合剂(如抗IL-13抗体分子)的单个单位剂量或多个单位剂量。

试剂盒任选地包括适于施用组合物的设备，如注射器、吸入器、移液管、镊子、量匙、滴管(如滴眼管)、拭子(如棉头拭子或木拭子)或任何这样的递送设备。在优选的实施方案中，设备是分配结合剂的测定剂量的植入性装置。

公开以下实施例以帮助理解本发明，但并不意在且不应当理解为以任何方式限制其范围。

实施例

实施例1

(a)NHP-IL-13的克隆和与人IL-13的同源性

使用杂交探针克隆食蟹猴IL-13(NHP IL-13)。图1A显示了食蟹猴IL-13氨基酸序列与人IL-13氨基酸序列的比较。由于8个氨基酸差异，在两个序列间具有94％的氨基酸同一性。这些差异之一R130Q代表了在哮喘受试者中优先表达的普遍人多态性(Heinzmann等(2000)Hum.Mol.Genet.9：549-559)。

(b)NHP-IL-13与人IL13Rα2的结合

人IL-13以高亲和力与IL-13受体的α2形式(IL13Rα2)结合。此受体的可溶性形式与人IgG1Fc尾(sIL13Rα2-Fc)一起表达。通过与IL-13结合并螯合来自细胞表面IL13Rα1-IL4R信号发放复合体的细胞因子，sIL13Rα2-Fc可以作为人IL-13生物活性的有效抑制剂。已经显示sIL13Rα2-Fc与CHO细胞或大肠杆菌产生的NHP-IL-13结合。

(c)NHP-IL-13对人单核细胞的生物活性

(i)人单核细胞上的CD23表达。在大肠杆菌中表达了编码食蟹猴IL-13的cDNA，并再折叠以保持生物活性。使用生物测定证明人细胞对食蟹猴IL-13的反应性，其中在37℃用IL-13过夜处理来自健康供体的正常外周血单核细胞。这诱导单核细胞表面CD23表达的增量调节。结果显示食蟹猴IL-13对原代人单核细胞上具有生物活性。

(ii)HT-29细胞上的STAT6磷酸化。人HT-29上皮细胞系通过经历STAT6磷酸化(通过IL-13受体信号转导的结果)应答IL-13。为测定重组NHP-IL-13诱导STAT6磷酸化的能力，在37℃用NHP-IL-13攻击HT-29细胞30分钟，其后固定、透化处理并用针对磷酸-STAT6的荧光抗体染色。结果显示食蟹猴IL-13在此人细胞系中有效诱导STAT6的磷酸化。

(d)与NHP-IL-13结合的抗体的产生

可以例如使用一种或多种以下方法用食蟹猴IL-13免疫并免疫增强(boost)小鼠或其他合适的动物。一种免疫方法可以与相同或不同的免疫增强方法组合：

(i)用大肠杆菌中表达的食蟹猴IL-13蛋白进行免疫，从包涵体中纯化所述食蟹猴IL-13蛋白并再折叠以保留生物活性。为进行免疫，用弗氏完全佐剂(CFA)乳化蛋白质，并按照标准方案免疫小鼠。为增强免疫，用弗氏不完全佐剂(IFA)乳化相同的蛋白质。

(ii)用跨越食蟹猴成熟IL-13完整序列的肽进行免疫。每种肽含有食蟹猴IL-13特有且在人蛋白质中不存在的至少一个氨基酸。见图1B。当肽具有除半胱氨酸以外的C端残基时，加入半胱氨酸用于与载体蛋白缀合。肽与免疫原性载体蛋白如KLH缀合，并按照标准方案用于免疫小鼠。为进行免疫，用弗氏完全佐剂(CFA)乳化蛋白质，并按照标准方案免疫小鼠。为增强免疫，用弗氏不完全佐剂(IFA)乳化相同的蛋白质。

(iii)用表达的NHP-IL-13编码cDNA进行免疫。将编码NHP-IL-13(包括前导序列)的cDNA克隆进适当的载体。将此DNA包裹在通过基因枪皮内注射的金珠上。

(iv)蛋白质或肽可用作筛选蛋白质文库(如噬菌体或核糖体展示文库)的靶标。例如，文库可展示不同的免疫球蛋白分子，如Fab’、scFv’或Fd’。

(e)选择与NHP和任选地人IL-13(如天然人IL-13)交叉反应的抗体克隆。

首轮筛选

抗体的首轮筛选是通过ELISA选择与重组NHP-IL-13结合的抗体。在此ELISA中，用重组NHP-IL-13包被孔。以连续稀释加入免疫血清并在室温下温育1小时。用含有0.05％

-20的PBS(PBS-Tween)洗涤孔。使用辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗小鼠IgG和四甲基联苯胺(TMB)底物检测结合的抗体。在450nm处读取吸光度。通常所有的免疫小鼠都产生针对NHP-IL-13的高抗体效价。

次轮筛选

次轮筛选通过ELISA选择对重组HNP-IL-13与sIL-13Rα1-Fc之间结合的抑制。用FLAG标记的NHP-IL-13可以结合的可溶性IL-13Rα1-Fc包被孔。用与HRP缀合的抗FLAG抗体检测这种结合。以450nm处的吸光度读出TMB底物的水解。在测定中，与提高浓度的免疫血清一起加入FLAG标记的NHP-IL-13。如果免疫血清含有与NHP-IL-13结合并阻止其与包被孔的sIL13Rα1-Fc结合的抗体，则ELISA信号会降低。所有的免疫小鼠都产生与sIL13Rα1-Fc竞争结合NHP-IL-13的抗体，但小鼠之间的效价存在差异。选择血清在最高稀释度下显示抑制sIL13Rα1-Fc与NHP-IL-13结合的动物的脾脏用于融合。

第三轮筛选

第三轮筛选测试对NHP-IL-13生物活性的抑制。可以使用若干生物测定，包括TF-1增殖测定、单核细胞CD23表达测定和HT-29细胞STAT6磷酸化测定。测试免疫血清对NHP-IL-13介导的STAT6磷酸化的抑制。在存在或不存在标明浓度的小鼠免疫血清的情况下，在37℃用重组NHP-IL-13攻击HT-29人上皮细胞系30分钟。接着固定细胞、透化处理并用缀合ALEXA^TM Fluor 488的针对磷酸-STAT6的mAb(Pharmingen)染色。通过流式细胞术测定应答经历STAT6磷酸化应答的IL-13的细胞百分比。选择(通过在高血清稀释度下最强烈抑制NHP-IL-13生物活性测定的)具有最有效中和活性的小鼠的脾脏用于产生杂交瘤。

第四轮筛选

从人脐带血单核细胞(BioWhittaker/Cambrex)产生含有人IL-13的粗制剂。在5％的CO₂、37℃培养箱中，在含有10％热灭活FCS、50U/ml青霉素、50mg/ml链霉素和2mM L-谷氨酰胺的RPMI培养基中培养细胞。用促分裂原PHA-P(Sigma)刺激细胞3天，并用重组人IL-4(R&DSystems)和抗人IL-12使其倾向于Th2。用IL-2扩增Th2细胞一周，接着用12-肉豆蔻酸13-乙酸佛波酯(PMA)和离子霉素处理活化三天以产生细胞因子。收集上清并透析除去PMA和离子霉素。为耗尽可能干扰用于IL-13的生物测定的GM-CSF和IL-4，用针对GM-CSF和IL-4的生物素化抗体(R&D Systems，Inc)处理上清，接着与包被了链霉抗生物素蛋白的磁珠(Dynal)一起温育。通过ELISA(Biosource)测定IL-13的终浓度，并通过Bradford测定法(Bio-Rad)测定总蛋白。典型制剂含有以重量计＜0.0005％的IL-13。

选择杂交瘤克隆

使用已确立的方法从与P3X63_AG8.653骨髓瘤细胞系(ATCC)融合的如上文选择的小鼠的脾产生杂交瘤。以有限稀释接种细胞并按照上文所述的筛选标准选择克隆。收集数据用于选择克隆，所述选择基于通过ELISA与NHP-IL-13竞争结合sIL13Rα1-Fc的能力。进一步测试克隆中和NHP-IL-13生物活性的能力。测试杂交瘤的上清在HT-29人上皮细胞系中对由NHP-IL-13诱导的STAT-6磷酸化的竞争。

实施例2：MJ 2-7抗体

使用QIAGEN RNEASY^TM小量试剂盒(Qiagen)从MJ 2-7杂交瘤细胞制备总RNA。使用SMART^TM PCR Synthesis试剂盒(BD BiosciencesClontech)将RNA逆转录为cDNA。通过PCR外推MJ 2-7的重链可变区，所述PCR使用SMART^TM寡核苷酸作为正向引物，与编码小鼠IgG1恒定区CH1结构域N端部分的DNA退火的mIgG1引物作为反向引物。使用SMART^TM和小鼠κ特异性引物产生编码MJ 2-7轻链可变区的DNA片段。使用DEEP VENT^TM DNA聚合酶(New England Biolabs)和25nM dNTP进行24个循环(94℃1分钟、60℃1分钟、72℃1分钟)的PCR反应。将PCR产物亚克隆入pED6载体，并通过DNA测序鉴定插入片段的序列。纯化的小鼠MJ 2-7抗体的N端蛋白质测序用于证实对应于观察到的蛋白质序列的翻译的序列。

与NHP IL-13相互作用并具有提示可能与人IL-13相互作用的特征的小鼠单克隆抗体MJ 2-7的示例核苷酸和氨基酸序列如下：

编码重链可变区的示例核苷酸序列包括：

GAG GTTCAGCTGC AGCAGTCTGG GGCAGAGCTT GTGAAGCCAG

GGGCCTCAGT CAAGTTGTCC TGCACAGGTT CTGGCTTCAA CATTAAAGAC

ACCTATATAC ACTGGGTGAA GCAGAGGCCT GAACAGGGCC TGGAGTGGAT

TGGAAGGATT GATCCTGCGA ATGATAATAT TAAATATGAC CCGAAGTTCC

AGGGCAAGGC CACTATAACA GCAGACACAT CCTCCAACAC AGCCTACCTA

CAGCTCAACA GCCTGACATC TGAGGACACT GCCGTCTATT ACTGTGCTAG

ATCTGAGGAA AATTGGTACG ACTTTTTTGA CTACTGGGGC CAAGGCACCA

CTCTCACAGT CTCCTCA(SEQ ID NO：129)

重链可变区的示例氨基酸序列包括：

EVQLQQSGAELVKPGASVKLSCTGSGFNIKDTYIHWVKQRPEQGLEWIGRIDPA NDNIKYDPKFQGKATITADTSSNTAYLQLNSLTSEDTAVYYCARSEENWYDFF DYWGQGTTLTVSS(SEQ ID NO：130)

CDR带有下划线。可变区之前可任选地存在前导序列，如MKCSWVIFFLMAVVTGVNS(SEQ ID NO：131)。编码轻链可变区的示例

核苷酸序列包括：

GAT GTTTTGATGA CCCAAACTCC ACTCTCCCTG CCTGTCAGTC

TTGGAGATCA AGCCTCCATC TCTTGCAGGT CTAGTCAGAG CATTGTACAT

AGTAATGGAA ACACCTATTT AGAATGGTAC CTGCAGAAAC CAGGCCAGTC

TCCAAAGCTC CTGATCTACA AAGTTTCCAA CCGATTTTCT GGGGTCCCAG

ACAGGTTCAG TGGCAGTGGA TCAGGGACAG ATTTCACACT CAAGATTAGC

AGAGTGGAGG CTGAGGATCT GGGAGTTTAT TACTGCTTTC AAGGTTCACA

TATTCCGTAC ACGTTCGGAG GGGGGACCAA GCTGGAAATA AAA(SEQ ID NO：132)

轻链可变区的示例氨基酸序列包括：

DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHIPYTFG

GGTKLEIK(SEQ ID NO：133)

CDR带有下划线。氨基酸序列之前可任选地存在前导序列，如MKLPVRLLVLMFWIPASSS(SEQ ID NO：134)。本文中术语“MJ 2-7”与术语“mAb 7.1.1”可互换使用。

实施例3：C65抗体

与NHP IL-13相互作用并具有提示可能与人IL-13相互作用的特征的小鼠单克隆抗体C65的示例核苷酸和氨基酸序列如下：

重链可变区的示例核苷酸序列包括：

1ATGGCTGTCC TGGCATTACT CTTCTGCCTG GTAACATTCC CAAGCTGTAT

51CCTTTCCCAG GTGCAGCTGA AGGAGTCAGG ACCTGGCCTG GTGGCGCCCT

101CACAGAGCCT GTCCATCACA TGCACCGTCT CAGGGTTCTC ATTAACCGGC

151TATGGTGTAA ACTGGGTTCG CCAGCCTCCA GGAAAGGGTC TGGAGTGGCT

201GGGAATAATT TGGGGTGATG GAAGCACAGA CTATAATTCA GCTCTCAAAT

251CCAGACTGAT CATCAACAAG GACAACTCCA AGAGCCAAGT TTTCTTAAAA

301ATGAACAGTC TGCAAACTGA TGACACAGCC AGGTACTTCT GTGCCAGAGA

351TAAGACTTTT TACTACGATG GTTTCTACAG GGGCAGGATG GACTACTGGG

401GTCAAGGAAC CTCAGTCACC GTCTCCTCA(SEQ ID NO：135)

重链可变区的示例氨基酸序列包括：

QVQLKESGPGL VAPSQSLSIT CTVSGFSLTG YGVNWVRQPP GKGLEWLGII WGDGSTDYNS ALKSRLIINK DNSKSQVFLK MNSLQTDDTA RYFCARDKTF YYDGFYRGRM DYWGQGTSVT VSS(SEQ ID NO：136)

CDR带有下划线。氨基酸序列之前可任选地含有前导序列，如MAVLALLFCL VTFPSCILS(SEQ ID NO：137)。

编码轻链可变区的示例核苷酸序列包括：

1ATGAACACGA GGGCCCCTGC TGAGTTCCTT GGGTTCCTGT TGCTCTGGTT

51TTTAGGTGCC AGATGTGATG TCCAGATGAT TCAGTCTCCA TCCTCCCTGT

101CTGCATCTTT GGGAGACATT GTCACCATGA CTTGCCAGGC AAGTCAGGGC

151ACTAGCATTA ATTTAAACTG GTTTCAGCAA AAACCAGGGA AAGCTCCTAA

201GCTCCTGATC TTTGGTGCAA GCAACTTGGA AGATGGGGTC CCATCAAGGT

251TCAGTGGCAG TAGATATGGG ACAAATTTCA CTCTCACCAT CAGCAGCCTG

301GAGGATGAAG ATATGGCAAC TTATTTCTGT CTACAGCATA GTTATCTCCC

351GTGGACGTTC GGTGGCGGCA CCAAACTGGA AATCAAA(SEQ ID NO：138)

轻链可变区的示例氨基酸序列包括：

DVQMIQSP SSLSASLGDI VTMTCQASQG TSINLNWFQQ KPGKAPKLLIFGASNLEDGV PSRFSGSRYG TNFTLTISSL EDEDMATYFC LQHSYLPWTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO：139)

CDR带有下划线。氨基酸序列之前可任选地含有前导序列，如MNTRAPAEFLGFLLLWFLGARC(SEQ ID NO：140)。

实施例4：Fc序列

SEQ ID NO：128位置#1处的丝氨酸代表第一个示例全长抗体编号方案中的氨基酸残基#119，在所述方案中丝氨酸之前是重链可变区的残基#118。在第一个示例全长抗体编号方案中，突变的氨基酸在编号234和237，并对应于SEQ ID NO：128的位置116和119。因此根据第一个示例全长抗体编号方案，以下序列代表具有两个突变：L234A和G237A的Fc结构域。

小鼠(SEQ ID NO：128)

下面是另一个示例性人Fc结构域序列：

STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV

LQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPP

CPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVE

VHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTIS

KAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY

KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP

GK(SEQ ID NO：141)

可用于降低效应子功能的其他示例改变包括(L234A；L235A)、(L235A；G237A)和N297A。

实施例5：小鼠中的IL-13和IgE

IL-13涉及IgE的产生，IgE是特应性疾病的重要介体。缺乏IL-13的小鼠具有部分降低的血清IgE和肥大细胞IgE应答，而缺乏天然IL-13结合剂IL-13Rα2-/-的小鼠具有增强的IgE水平和IgE效应子功能。

BALB/c雌性小鼠得自Jackson Laboratories(Bar Harbor，ME)。IL-13Rα2-/-小鼠描述于例如Wood等(2003)J.Exp.Med，197：703-9。缺乏IL-13的小鼠描述于例如McKenzie等(1998)Immunity 9：423-32。所有的突变品系都在BALB/c背景下。

通过ELISA测量血清IgE水平。在4℃用大鼠抗小鼠IgE(BDBiosciences，San Diego，CA)包被ELISA平板(MaxiSorp；Nunc，Rochester，NY)过夜。室温下用PBS中的0.5％明胶封闭平板1小时、用含有0.05％-20的PBS(PBS-Tween)洗涤并在室温下与作为标准品的纯化小鼠IgE(BD Biosciences)或血清稀释物温育6小时。使用小鼠IgG(Sigma-Aldrich，St.Louis，MO)作为阻断剂，用生物素化的抗小鼠IgE(BD Biosciences)检测结合。用连接链霉抗生物素蛋白的过氧化物酶(Southern Biotechnology Associates，Inc.，Birmingham，AL)和SUREBLUETM底物(KPL Inc.，Gaithersburg，MD)检测结合。

为了研究首次用于实验的(naive)小鼠中支持静息IgE水平所需的IL-13，在不存在来自野生型小鼠和来自遗传缺乏IL-13和IL-13Rα2的小鼠的特异性免疫的情况下检查血清。缺乏IL-13的小鼠具有几乎不可检测的血清IgE水平。相反，缺乏抑制性受体IL-13Rα2的小鼠显示了提高水平的血清IgE。这些结果证明阻断IL-13可用于治疗或预防特应性病症。

实施例6：IL-13和特应性病症

在STAT6磷酸化的测定中评估MJ2-7抑制天然人IL-13(1ng/ml)生物活性的能力。在此测定中MJ2-7以约0.293nM的IC50抑制天然人IL-13的活性。在此测定中具有MJ2-7小鼠重链和人源化轻链的抗体以约0.554nM的IC50抑制天然人IL-13的活性。

在CD23表达的测定中评估MJ2-7抑制非人灵长类IL-13(1ng/ml)的能力。在此测定中MJ2-7以约0.242nM的IC50抑制非人灵长类IL-13的活性。在此测定中具有MJ2-7小鼠重链和人源化轻链的抗体以约0.308nM的IC50抑制非人灵长类IL-13的活性。

实施例7：小鼠MJ2-7抗体的核苷酸和氨基酸序列

编码(任选地带有前导序列的)重链可变区的核苷酸序列如下：

1   ATGAAATGCA GCTGGGTTAT CTTCTTCCTG ATGGCAGTGG TTACAGGGGT

51  CAATTCAGAG GTTCAGCTGC AGCAGTCTGG GGCAGAGCTT GTGAAGCCAG

101 GGGCCTCAGT CAAGTTGTCC TGCACAGGTT CTGGCTTCAA CATTAAAGAC

151 ACCTATATAC ACTGGGTGAA GCAGAGGCCT GAACAGGGCC TGGAGTGGAT

201 TGGAAGGATT GATCCTGCGA ATGATAATAT TAAATATGAC CCGAAGTTCC

251 AGGGCAAGGC CACTATAACA GCAGACACAT CCTCCAACAC AGCCTACCTA

301 CAGCTCAACA GCCTGACATC TGAGGACACT GCCGTCTATT ACTGTGCTAG

351 ATCTGAGGAA AATTGGTACG ACTTTTTTGA CTACTGGGGC CAAGGCACCA

401 CTCTCACAGT CTCCTCA(SEQ ID NO：142)

任选地带有前导序列(下划线)的重链可变区的氨基酸序列如下：

1   MKCSWVIFFL MAVVTGVNSE VQLQQSGAEL VKPGASVKLS CTGSGFNIKD

51  TYIHWVKQRP EQGLEWIGRI DPANDNIKYD PKFQGKATIT ADTSSNTAYL

101 QLNSLTSEDT AVYYCARSEE NWYDFFDYWG QGTTLTVSS

(SEQ ID NO：143)

编码轻链可变区的核苷酸序列如下：

1   ATGAAGTTGC CTGTTAGGCT GTTGGTGCTG ATGTTCTGGA TTCCTGCTTC

51  CAGCAGTGAT GTTTTGATGA CCCAAACTCC ACTCTCCCTG CCTGTCAGTC

101 TTGGAGATCA AGCCTCCATC TCTTGCAGGT CTAGTCAGAG CATTGTACAT

151 AGTAATGGAA ACACCTATTT AGAATGGTAC CTGCAGAAAC CAGGCCAGTC

201 TCCAAAGCTC CTGATCTACA AAGTTTCCAA CCGATTTTCT GGGGTCCCAG

251 ACAGGTTCAG TGGCAGTGGA TCAGGGACAG ATTTCACACT CAAGATTAGC

301AGAGTGGAGG CTGAGGATCT GGGAGTTTAT TACTGCTTTC AAGGTTCACA

任选地带有前导序列(下划线)的轻链可变区的氨基酸序列如下：

1   MKLPVRLLVL MFWIPASSSD VLMTQTPLSL PVSLGDQASI SCRSSQSIVH

51  SNGNTYLEWY LQKPGQSPKL LIYKVSNRFS GVPDRFSGSG SGTDFTLKIS

101 RVEAEDLGVY YCFQGSHIPY TFGGGTKLEI K(SEQ ID NO：145)

实施例8：MJ2-7抗体的第一种示例人源化变体的核苷酸和氨基酸序列

人源化抗体形式1(V1)基于最接近的人种系克隆。(带有编码任选的前导序列的序列的)hMJ 2-7V1重链可变区(hMJ 2-7VH V1)的核苷酸序列如下：

1   ATGGATTGGA CCTGGCGCAT CCTGTTCCTG GTGGCCGCTG CCACCGGCGC

51  TCACTCTCAG GTGCAGCTGG TGCAGTCTGG CGCCGAGGTG AAGAAGCCTG

101 GCGCTTCCGT GAAGGTGTCC TGTAAGGCCT CCGGCTTCAA CATCAAGGAC

151 ACCTACATCC ACTGGGTGCG GCAGGCTCCC GGCCAGCGGC TGGAGTGGAT

201 GGGCCGGATC GATCCTGCCA ACGACAACAT CAAGTACGAC CCCAAGTTTC

251 AGGGCCGCGT GACCATCACC CGCGATACCT CCGCTTCTAC CGCCTACATG

301 GAGCTGTCTA GCCTGCGGAG CGAGGATACC GCCGTGTACT ACTGCGCCCG

351 CTCCGAGGAG AACTGGTACG ACTTCTTCGA CTACTGGGGC CAGGGCACCC

401 TGGTGACCGT GTCCTCT(SEQ ID NO：146)

重链可变区(hMJ 2-7V1)的氨基酸序列基于移植到DP-25的CDRVH-I，1-03。带有任选的前导序列(第一个下划线区，基于AbM定义的CDR显示在其后的下划线区)的氨基酸序列如下：

1   MDWTWRILFL VAAATGAHS-QVQLVQSGAEV KKPGASVKVSCKASGFNIKD

51  TYIHWVRQAP GQRLEWMGRI DPANDNIKYD PKFQGRVTIT RDTSASTAYM

101 ELSSLRSEDT AVYYCARSEE NWYDFFDYWG QGTLVTVSSG ESCR(SEQ ID NO：147)

(带有编码任选的前导序列的序列的)hMJ 2-7V1轻链可变区(hMJ2-7VL V1)的核苷酸序列如下：

1   ATGCGGCTGC CCGCTCAGCT GCTGGGCCTG CTGATGCTGT GGGTGCCCGG

51  CTCTTCCGGC GACGTGGTGA TGACCCAGTC CCCTCTGTCT CTGCCCGTGA

101 CCCTGGGCCA GCCCGCTTCT ATCTCTTGCC GGTCCTCCCA GTCCATCGTG

151 CACTCCAACG GCAACACCTA CCTGGAGTGG TTTCAGCAGA GACCCGGCCA

201 GTCTCCTCGG CGGCTGATCT ACAAGGTGTC CAACCGCTTT TCCGGCGTGC

251 CCGATCGGTT CTCCGGCAGC GGCTCCGGCA CCGATTTCAC CCTGAAGATC

301 AGCCGCGTGG AGGCCGAGGA TGTGGGCGTG TACTACTGCT TCCAGGGCTC

351 CCACATCCCT TACACCTTTG GCGGCGGAAC CAAGGTGGAG ATCAAG

(SEQ ID NO：148)

这种形式基于移植到DPK18的CDR VκII。hMJ 2-7V1轻链可变区(hMJ 2-7VL V1)(带有如第一个下划线区的任选前导序列；基于AbM定义的CDR显示在其后的下划线区)的氨基酸序列如下：

1   MRLPAQLLGL LMLWVPGSSG-DVVMTQSPLS LPVTLGQPAS ISCRSSQSIV

51  HSNGNTYLEW FQQRPGQSPR RLIYKVSNRF SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI

101 SRVEAEDVGV YYCFQGSHIP YTFGGGTKVE IK(SEQ ID NO：149)

实施例9：MJ 2-7抗体的示例性第二种人源化变体的核苷酸和氨基酸序列

以下重链可变区基于移植到DP-54的CDR VH-3，3-07。(带有编码任选的前导序列的序列的)hMJ 2-7形式2(V2)重链可变区(hMJ 2-7VHV2)的核苷酸序列如下：

1   ATGGAGCTGG GCCTGTCTTG GGTGTTCCTG GTGGCTATCC TGGAGGGCGT

51  GCAGTGCGAG GTGCAGCTGG TGGAGTCTGG CGGCGGACTG GTGCAGCCTG

101 GCGGCTCTCT GCGGCTGTCT TGCGCCGCTT CCGGCTTCAA CATCAAGGAC

151 ACCTACATCC ACTGGGTGCG GCAGGCTCCC GGCAAGGGCC TGGAGTGGGT

201 GGCCCGGATC GATCCTGCCA ACGACAACAT CAAGTACGAC CCCAAGTTCC

251 AGGGCCGGTT CACCATCTCT CGCGACAACG CCAAGAACTC CCTGTACCTC

301 CAGATGAACT CTCTGCGCGC CGAGGATACC GCCGTGTACT ACTGCGCCCG

351 GAGCGAGGAG AACTGGTACG ACTTCTTCGA CTACTGGGGC CAGGGCACCC

401 TGGTGACCGT GTCCTCT(SEQ ID NO：150)

带有任选的前导序列(第一个下划线区，基于AbM定义的CDR显示在其后的下划线区)的hMJ 2-7V2重链可变区(hMJ 2-7VH V2)的氨基酸序列如下：

1   MELGLSWVFL VAILEGVQC-E VQLVESGGGL VQPGGSLRLS CAASGFNIKD

51  TYIHWVRQAP GKGLEWVARI DPANDNIKYD PKFQGRFTIS RDNAKNSLYL

101 QMNSLRAEDT AVYYCARSEE NWYDFFDYWG QGTLVTVSS(SEQ ID NO：151)

hMJ 2-7V2轻链可变区基于移植到DPK9的CDR VκI，02。hMJ 2-7V2轻链可变区(hMJ 2-7VL V2)(带有编码任选的前导序列的序列的)的核苷酸序列如下：

1   ATGGATATGC GCGTGCCCGC TCAGCTGCTG GGCCTGCTGC TGCTGTGGCT

51  GCGCGGAGCC CGCTGCGATA TCCAGATGAC CCAGTCCCCT TCTTCTCTGT

101 CCGCCTCTGT GGGCGATCGC GTGACCATCA CCTGTCGGTC CTCCCAGTCC

151 ATCGTGCACT CCAACGGCAA CACCTACCTG GAGTGGTATC AGCAGAAGCC

201 CGGCAAGGCC CCTAAGCTGC TGATCTACAA GGTGTCCAAC CGCTTTTCCG

251 GCGTGCCTTC TCGGTTCTCC GGCTCCGGCT CCGGCACCGA TTTCACCCTG

301 ACCATCTCCT CCCTCCAGCC CGAGGATTTC GCCACCTACT ACTGCTTCCA

351 GGGCTCCCAC ATCCCTTACA CCTTTTTTGGCGG CGGAACCAAG GTGGAGATCA

401 AGCGT(SEQ ID NO：152)

hMJ 2-7V2轻链可变区(hMJ 2-7VL V2)(任选的前导肽带有下划线；基于AbM定义的CDR显示在其后的下划线区)的氨基酸序列如下：

1MDMRVPAQLLGLLLLWLRGA RC-DIQMTQSP SSLSASVGDR VTITCRSSQS

51IVHSNGNTYL EWYQQKPGKA PKLLIYKVSN RFSGVPSRFS GSGSGTDFTL

101TISSLQPEDF ATYYCFQGSH IPYTFGGGTK VEIKR(SEQ ID NO：153)

还产生了MJ 2-7V2重链可变区的其他人源化形式。这些形式包括在选定的构架位置具有小鼠氨基酸的回复突变。

编码带有回复突变V48I、A29G的重链可变区“形式2.1”或V2.1的核苷酸序列如下：

1   GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC

51  TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA

101 TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GATCGGCCGG

151 ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCCG

201 GTTCACCATC TCTCGCGACA ACGCCAAGAA CTCCCTGTAC CTCCAGATGA

251 ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG

301 GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC

351 CGTGTCCTCT(SEQ ID NO：154)

V2.1重链可变区的氨基酸序列(基于AbM定义的CDR显示在其后的下划线区)如下：

1   EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFNIK DTYIHWVRQA PGKGLEWIGR

51  IDPANDNIKY DPKFQGRFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCARSE

101 ENWYDFFDYW GQGTLVTVSS(SEQ ID NO：155)

编码带有回复突变(R67K、F68A)的重链可变区V2.2的核苷酸序列如下：

1   GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC

51  TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA

101 TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GGTGGCCCGG

151 ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCAA

201 GGCCACCATC TCTCGCGACA ACGCCAAGAA CTCCCTGTAC CTCCAGATGA

251 ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG

301 GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC

351 CGTGTCCTCT(SEQ ID NO：156)

V2.2重链可变区的氨基酸序列(基于AbM定义的CDR显示在其后的下划线区)如下：

1   EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFNIK DTYIHWVRQA PGKGLEWVAR

51  IDPANDNIKY DPKFQGKATI SRDNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCARSE

102 ENWYDFFDYW GQGTLVTVSS(SEQ ID NO：157)

编码带有回复突变(R72A)的重链可变区V2.3的核苷酸序列：

1   GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC

51  TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA

101 TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GGTGGCCCGG

151 ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCCG

201 GTTCACCATC TCTGCCGACA ACGCCAAGAA CTCCCTGTAC CTCCAGATGA

251 ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG

301 GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC

351 CGTGTCCTCT(SEQ ID NO：158)

V2.3重链可变区的氨基酸序列(基于AbM定义的CDR显示在其后的下划线区)如下：

1   EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFNIK DTYIHWVRQA PGKGLEWVAR

51  IDPANDNIKY DPKFQGRFTI SADNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCARSE

103 ENWYDFFDYW GQGTLVTVSS(SEQ ID NO：159)

编码带有回复突变(A49G)的重链可变区V2.4的核苷酸序列如下：

1   GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC

51  TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA

101 TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GGTGGGCCGG

151 ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCCG

201 GTTCACCATC TCTCGCGACA ACGCCAAGAA CTCCCTGTAC CTCCAGATGA

251 ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG

301 GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC

351 CGTGTCCTCT(SEQ ID NO：160)

V2.4重链可变区的氨基酸序列(基于AbM定义的CDR显示在其后的下划线区)如下：

1   EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFNIK DTYIHWVRQA PGKGLEWVGR

51  IDPANDNIKY DPKFQGRFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCARSE

104 ENWYDFFDYW GQGTLVTVSSSEQ ID NO：161)

编码带有回复突变(R67K、F68A、R72A)的V2.5重链可变区的核苷酸序列如下：

1   GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC

51  TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA

101 TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GGTGGCCCGG

151 ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCAA

201 GGCCACCATC TCTGCCGACA ACGCCAAGAA CTCCCTGTAC CTCCAGATGA

251 ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG

301 GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC

352 CGTGTCCTCT(SEQ ID NO：160.2)

V2.5重链可变区的氨基酸序列(基于AbM定义的CDR显示在其后的下划线区)如下：

1   EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFNIK DTYIHWVRQA PGKGLEWVAR

51  IDPANDNIKY DPKFQGKATI SADNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCARSE

105 ENWYDFFDYW GQGTLVTVSS(SEQ ID NO：163)

编码带有回复突变(V48I、A49G、R72A)的重链可变区V2.6的核苷酸序列如下：

1   GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC

51  TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA

101 TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GATCGGCCGG

151 ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCCG

201 GTTCACCATC TCTGCCGACA ACGCCAAGAA CTCCCTGTAC CTCCAGATGA

251 ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG

301 GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC

351 CGTGTCCTCT(SEQ ID NO：164)

V2.6重链可变区的氨基酸序列(基于AbM定义的CDR显示在其后的下划线区)如下：

1   EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFNIK DTYIHWVRQA PGKGLEWIGR

51  IDPANDNIKY DPKFQGRFTI SADNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCARSE

106 ENWYDFFDYW GQGTLVTVSS(SEQ ID NO：165)

编码带有回复突变(A49G、R72A)的重链可变区V2.7的核苷酸序列如下：

1   GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC

51  TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA

101 TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GGTGGGCCGG

151 ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCCG

201 GTTCACCATC TCTGCCGACA ACGCCAAGAA CTCCCTGTAC CTCCAGATGA

251 ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG

301 GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC

351 CGTGTCCTCT(SEQ ID NO：166)

V2.7重链可变区的氨基酸序列(基于AbM定义的CDR显示在其后的下划线区)如下：

1   EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFNIK DTYIHWVRQA PGKGLEWVGR

51  IDPANDNIKY DPKFQGRFTI SADNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCARSE

107 ENWYDFFDYW GQGTLVTVSS(SEQ ID NO：167)

编码带有回复突变(L79A)的重链可变区V2.8的核苷酸序列如下：

1   GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC

51  TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA

101 TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GGTGGCCCGG

151 ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCCG

201 GTTCACCATC TCTCGCGACA ACGCCAAGAA CTCCGCCTAC CTCCAGATGA

251 ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG

301 GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC

351 CGTGTCCTCT(SEQ ID NO：168)

V2.8重链可变区的氨基酸序列(基于AbM定义的CDR显示在其后的下划线区)如下：

1   EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFNIK DTYIHWVRQA PGKGL EWVAR

51  IDPANDNIKY DPKFQGRFTI SRDNAKNSAY LQMNSLRAED TAVYYCARSE

108  ENWYDFFDYW GQGTLVTVSS(SEQ ID NO：169)

编码带有回复突变(A49G、R72A、L79A)的重链可变区V2.10的核苷酸序列如下：

1   GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC

51  TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA

101 TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GGTGGGCCGG

151 ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCCG

201 GTTCACCATC TCTGCCGACA ACGCCAAGAA CTCCGCCTAC CTCCAGATGA

251 ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG

301 GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC

351 CGTGTCCTCT(SEQ ID NO：170)

V2.10重链可变区的氨基酸序列(基于AbM定义的CDR显示在其后的下划线区)如下：

1   EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFNIK DTYIHWVRQA PGKGLEWVGR

51  IDPANDNIKY DPKFQGRFTI SADNAKNSAY LQMNSLRAED TAVYYCARSE

109 ENWYDFFDYW GQGTLVTVSS(SEQ ID NO：171)

编码带有回复突变(V48I、A49G、R72A、L79A)的重链可变区V2.11的核苷酸序列如下：

1   GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC

51  TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA

101 TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GATCGGCCGG

151 ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCCG

201 GTTCACCATC TCTGCCGACA ACGCCAAGAA CTCCGCCTAC CTCCAGATGA

251 ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG

301 GAGAACTGGT ACGACTTCTTCGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC

351 CGTGTCCTCT(SEQ ID NO：172)

V2.11重链可变区的氨基酸序列(基于AbM定义的CDR显示在其后的下划线区)如下：

1   EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFNIK DTYIHWVRQA PGKGLEWIGR

51  IDPANDNIKY DPKFQGRFTI SADNAKNSAY LQMNSLRAED TAVYYCARSE

110 ENWYDFFDYW GQGTLVTVSS(SEQ ID NO：173)

编码带有回复突变(V48I、A49G、R72A)的重链可变区V2.16的核苷酸序列如下：

1   GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC

51  TCTGCGGCTG TCTTGCACCG GCTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA

101 TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GATCGGCCGG

151 ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCCG

201 GTTCACCATC TCTGCCGACA ACGCCAAGAA CTCCCTGTAC CTCCAGATGA

251 ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG

301 GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC

351 CGTGTCCTCT(SEQ ID NO：174)

V2.16重链可变区的氨基酸序列(基于AbM定义的CDR显示在其后的下划线区)如下：

1   EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCTGSGFNIK DTYIHWVRQA PGKGLEWIGR

51  IDPANDNIKY DPKFQGRFTI SADNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCARSE

111  ENWYDFFDYW GQGTLVTVSS(SEQ ID NO：175)

以下是带有突变的CH2结构域的人源化MH 2-7V2.11IgG1的氨基酸序列：

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWIGRIDPA

NDNIKYDPKFQGRFTISADNAKNSAYLQMNSLRAEDTAVYYCARSEENWYDFF

DYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW

NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDK

KVEPKSCDKTHTCPPCPAPEALGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHE

DPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKC

KVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDI

AVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHE

ALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：176)

可变区在氨基酸1-120，CH1在121-218，铰链在219-233，CH2在234-343，CH3在344-450。轻链包括带有1-133的可变区的以下序列。

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQSIVHSNGNTYLEWYQQKPGKAPKLLIYK

VSNRFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCFQGSHIPYTFGGGTKVEIK

RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQE

SVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

(SEQ ID NO：177)

实施例10：MJ2-7示例变体的功能性测定

在IL-13活性测定中评估了MJ2-7抗体和人源化变体抑制人IL-13的能力。

STAT6磷酸化测定

在含有10％FBS、青霉素-链霉素、谷氨酰胺和碳酸氢钠的McCoy 5A培养基中贴壁单层培养HT-29人结肠上皮细胞(ATCC)。为进行测定，使用胰蛋白酶从瓶上移下细胞、冲洗到新鲜培养基并分配到12×75mm聚苯乙烯管中。以100-0.01ng/ml的浓度范围加入重组人IL-13(R&D Systems，Inc.)。对于测试抗体抑制IL-13应答能力的测定，与500-0.4ng/ml的抗体稀释物一起加入1ng/ml的重组人IL-13。在水浴中以37℃温育细胞30-60分钟，接着洗涤到冰冷的含有1％BSA的PBS中。通过在PBS中的1％多聚甲醛中37℃温育15分钟来固定细胞，接着洗涤到含有1％BSA的PBS中。为透化处理细胞核，在无水甲醇中以-20℃温育细胞过夜。将它们洗涤到含有1％BSA的PBS中，接着用ALEXA^TM Fluor 488标记的针对STAT6的抗体(BD Biosciences)染色。用FACSCAN^TM和CELLQUEST^TM软件(BD Biosciences)分析荧光。

人单核细胞上的CD23诱导

通过在(Sigma)上分层从人外周血中分离单核细胞。将细胞洗涤到含有10％热灭活的FCS、50U/ml青霉素、50mg/ml链霉素、2mM L-谷氨酰胺的RPMI中，并平板接种到48孔组织培养板(Costar/Corning)中。以100-0.01ng/ml的稀释度范围加入重组人IL-13(R&D Systems，Inc.)。对于测试抗体抑制IL-13应答能力的测定，与500-0.4ng/ml的抗体稀释物一起加入1ng/ml的重组人IL-13。在5％CO₂培养箱中37℃培养细胞过夜。第二天，使用非酶细胞解离溶液(Sigma)从孔中获得细胞，接着洗涤到冰冷的含1％BSA的PBS中。细胞与用藻红蛋白(PE)标记的针对人CD23的抗体(BD Biosciences，San Diego，CA)和Cy-Chrome标记的针对人CD11b的抗体(BD Biosciences)一起温育。基于高的正向和侧向光散射和CD11b的表达来选通(gate)单核细胞。使用FACSCAN^TM(BD Biosciences)通过流式细胞术测定单核细胞上的CD23表达，并用CELLQUEST^TM软件(BD Biosciences)分析CD23⁺细胞的百分比。

TF-1细胞增殖

TF-1细胞是因子依赖性人造血细胞系，其长期生长需要白介素3(IL-3)或粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)。TF-1细胞还应答多种其他细胞因子，包括白介素13(IL-13)。在含有10％热灭活FCS、50U/ml青霉素、50mg/ml链霉素、2mM L-谷氨酰胺和5ng/ml重组人GM-CSF(R&D Systems)的RPMI培养基中维持TF-1细胞(ATCC)。测定之前使细胞饥饿GM-CSF过夜。为进行测定，以5000个细胞/孔一式二份将TF-1细胞接种在96孔平底微量滴定板(Costar/Corning)中，并用100-0.01ng/ml范围的人IL-13(R&D Systems)攻击。置于含5％CO₂的37℃培养箱中72小时后，以1μCi/孔的³H-胸苷(Perkin Elmer/NewEngland Nuclear)脉冲细胞。再温育4.5小时，接着使用TOMTEK^TM收获器将细胞收获在滤纸垫上。通过液体闪烁计数评估³H-胸苷的掺入。

生腱蛋白产生测定

在含有补充物的BEGM培养基(Clonetics)中维持BEAS-2B人支气管上皮细胞(ATCC)。将细胞以每孔20000个接种在96孔平底培养板中过夜。在存在或不存在指示抗体的情况下加入含有IL-13的新鲜培养基。过夜温育后收获上清并通过ELISA测定细胞外基质组分生腱蛋白C的存在。用PBS中1μg/ml针对人生腱蛋白的小鼠单克隆抗体(IgG1，k；Chemicon International)包被ELISA平板。用含有0.05％-20的PBS(PBS-Tween)洗涤平板，并用含有1％BSA的PBS封闭。每6分钟加入新的封闭液，共更换三次。用PBS-Tween洗涤平板三次。加入细胞上清或者人生腱蛋白标准品(Chemicon International)并在37℃温育60分钟。用PBS-Tween洗涤平板三次。用针对生腱蛋白的小鼠单克隆抗体(IgG2a，k；Biohit)检测生腱蛋白。用HRP标记的针对小鼠IgG2a的抗体和其后的TMB底物检测结合。用0.01N硫酸终止反应。在450nm处读取吸光度。

HT 29人上皮细胞系可用于测定STAT6磷酸化。将HT 29细胞在提高浓度的测试抗体存在下与1ng/ml天然人IL-13粗制备物一起在37℃温育30分钟。使用针对磷酸化STAT6的抗体对细胞裂解物的蛋白质印迹分析可用于检测剂量依赖性的IL-13介导的STAT6磷酸化。类似地，流式细胞术分析可以检测HT 29细胞中磷酸化的STAT6，所述HT 29细胞用饱和浓度的IL-13在37℃处理30分钟、固定、透化处理并用ALEXA^TM Fluor488标记的针对磷酸-STAT6的mAb染色。表1中公开了一组示例性结果。V2.11的抑制活性与sIL-13Ra2-Fc的抑制活性相当。

表1

实施例11：IL-13与IL-13Rα1之间的结合相互作用位点

通过x射线晶体学研究了IL-13、IL-13Rα1胞外结构域(SEQ IDNO：125的残基27-342)和结合人IL-13的抗体的复合体。参阅例如US07/0048785。在IL-13和IL-13Rα1之间发现了两个显著相互作用点。IL-13Rα1的Ig结构域1与IL-13之间的相互作用导致形成跨越两个分子的延伸的β折叠。IL-13(SEQ ID NO：124、成熟序列[全长序列(SEQ IDNO：178)])的残基Thr88[Thr107]、Lys89[Lys108]、Ile90[Ile109]和Glu91[Glu110]形成与受体(SEQ ID NO：125)的残基Lys76、Lys77、Ile78和Ala79相互作用的β链。此外，IL-13(SEQ ID NO：124[SEQ ID NO：178])的Met33[Met52]的侧链延伸到由这些相邻链的侧链形成的疏水口袋中。

与Ig结构域3的相互作用的主要特征是IL-13(SEQ ID NO：124[SEQID NO：178])的疏水残基(Phe107[Phe 126])插入受体IL-13Rα1Ig结构域3中的疏水口袋中。IL-13Rα1的疏水口袋由残基Leu319、Cys257、Arg256和Cys 320(SEQ ID NO：125)的侧链形成。与IL-13(SEQ ID NO：124[SEQID NO：178])的Phe 107[Phe 126]的相互作用导致IL-13Rα1(SEQ IDNO：125)的氨基酸残基Ile254、Ser255、Arg256、Lys318、Cys320和Tyr321与IL-13(SEQ ID NO：124[SEQ ID NO：178])的氨基酸残基Arg11[Arg30]、Glu12[Glu31]、Leu13[Leu32]、Ile14[Ile33]、Glu15[Ile34]、Lys104[Lys123]、Lys105[Lys124]、Leu106[Leu125]、Phe107[Phe126]和Arg108[Arg 127]之间广泛的范德华相互作用。这些结果证明与涉及IL-13Rα1相互作用的IL-13区域结合的IL-13结合剂可用于抑制IL-13信号传导。

实施例12：人源化MJ 2-7抗体在COS细胞中的表达

为评估嵌合抗NHP IL13抗体在哺乳动物重组系统中的表达，将小鼠MJ 2-7抗体可变区亚克隆进含有人κ和IgG1mut恒定区的pED6表达载体中。在含有10％热灭活胎牛血清、1mM谷氨酰胺和0.1mg/ml青霉素/链霉素的DME培养基(Gibco)中培养猴肾COS-1细胞。使用TRANSITIT^TM-LT1转染试剂(Mirus)按照试剂供应商建议的方案进行COS细胞的转染。在10％CO₂的存在下37℃下温育转染的COS细胞24小时、用无菌PBS洗涤并接着在无血清培养基R1CD1(Gibco)中培养48小时，以允许抗体分泌并在条件培养基中累积。使用纯化的人IgG1/κ抗体作为标准品通过总人IgG ELISA定量chMJ 2-7抗体的表达。

嵌合MJ 2-7抗体在COS细胞中的产生显著低于对照嵌合抗体(表2)。因此在MJ 2-7人源化过程中包括了Ab表达的优化。通过将小鼠MJ 2-7重链CDR移植到最同源的人种系克隆DP 25上来构建人源化MJ 2-7V1，所述DP 25良好表达并代表了典型的人抗体应答。将轻链CDR亚克隆到人种系克隆DPK 18上，以产生huMJ 2-7V1VL。通过将CDR移植产生人源化MJ 2-7V2：将MJ 2-7重链可变区CDR移植到DP 54人种系基因构架上，将MJ 2-7轻链可变区CDR移植到DPK9人种系基因构架上。DP54克隆属于人VH III种系亚组，DPK9来自人种系基因VκI亚组。包含VH III和VκI构架的抗体分子在大肠杆菌系统中具有高表达水平，并在水溶液中具有高稳定性和溶解度(参阅如Stefan Ewert等，J.Mol.Biol.(2003)，325；531-553、Adrian Auf等，Methods(2004)34：215-224)。我们已在若干重组抗体的产生中使用了DP54/DPK9人构架的组合，并在瞬时COS转染实验中实现了抗体的高表达(＞20μg/ml)。

表2

mAb	表达，μg/ml
		3D6	10.166
Ch MJ 2-7pED6(1)	2.44
		Ch MJ 2-7pED6(2)	2.035
h12A11V2	1.639

将移植了CDR的MJ 2-7V1和V2VH和VL基因亚克隆进两个哺乳动物表达载体系统(pED6κ/pED6IgG1mut和pSMEN2κ/pSMED2IgG1mut)，并如上文所述在瞬时COS转染实验中评估人源化MJ 2-7抗体的产生。在第一组实验中评估了的huMJ 2-7VL和VH的多种组合对抗体表达的影响(表3)。将MJ 2-7VL构架区改变为DKP9提高抗体产生8-10倍，而VL V1(CDR移植到DPK 18上)在抗体产生中仅显示中等程度的提高。在将人源化VL与嵌合MJ 2-7VH和人源化MJ 2-7V1和V2组合时观察到了这种效果。在相同的测定条件下，移植了CDR的MJ 2-7V2的表达水平比移植了CDR的MJ 2-7V1高3倍。

表3

mAb	表达，μg/ml
		ChMJ 2-7	1.83
hVH V1/mVL	3.04

hVH V1/hVLV1	6.34
		hVH V1/hVLV2	15.4
hVH-V2/mVL	0.2
		mVH/hVL-V2	18.41
hVH-V2/hVL-V1	5.13
		hVH-V2/hVL-V2	10.79

用重链可变区中含有回复突变的hu MJ 2-7V2进行了类似的实验(表4)。对保留小鼠MJ 2-7抗体的抗原结合和中和特性的hu MJ 2-7V2.11检测到了最高表达水平。在位置48和49(V48I和A49G)引入回复突变提高了hu MJ 2-7V2抗体在COS细胞中的产生，而位置23、24、67和68处氨基酸的回复突变(A23T、A24G、R67K和F68A)对抗体表达具有负面影响。

表4

mAb	表达，μg/ml
		V2	8.27
V2.1	12.1
		V2.2	5.29
V2.3	9.60
		V2.4	8.20
V2.5	6.05
		V2.6	11.3
V2.10	9.84
		V2.11	14.85
V2.16	1.765

实施例13：通过NHP IL-13FLAG ELISA评估人源化MJ 2-7抗体的抗原结合特性

通过ELISA评估完全人源化的MJ 2-7mAb(V1，V2v2)与生物素化的小鼠MJ 2-7竞争结合NHP IL-13-FLAG的能力。用1μg/ml的抗FLAG单克隆抗体M2(Sigma)包被微量滴定板(Costar)。将10ng/ml浓度的FLAGNHP IL-13蛋白与10ng/ml生物素标记的小鼠MJ 2-7抗体和多种浓度的未标记小鼠和人源化MJ 2-7抗体混合。将混合物在室温下温育2小时，接着加入到抗FLAG抗体包被的平板中。用链霉抗生物素蛋白-HRP和3，3′，5，5′-四甲基联苯胺(TMB)检测FLAG NHP-IL-13/bioMJ2-7Ab复合体的结合。人源化MJ 2-7V2显著丧失了活性，而hu MJ 2-7V2.11完全恢复了抗原结合活性并能与生物素化的MJ 2-7mAb竞争结合FLAG-NHPIL-13。BIACORE^TM分析也证实了NHP IL-13与固定化的h1u MJ 2-7V2.11快速结合并缓慢解离。

实施例14：人源化MJ2-7V2VH的分子建模

基于对蛋白质数据库(PDB)的BLAST同源性搜索选择用于制作人源化MJ2-7重链形式2(MJ2-7V2VH)的结构模板的模型。除了从BLAST搜索结果中选择的两个结构以外，从蛋白质结构的内部数据库中选择了另一个模板。使用三个模板结构1JPS(人组织因子与人源化Fab D3h44的复合体的共结晶结构)、1N8Z(人Her2与Herceptin Fab的复合体的共结晶结构)和F13.2(IL-13与小鼠抗体Fab片段的复合体)作为模板并用InsightII(Accelrys，San Diego)同源性模块建立MJ2-7V2VH的模型。基于每个分子的Cα距离矩阵测定1JPS、1N8Z和F13.2(可得自16163-029001)的结构保守区(SCR)，并基于SCR中相应原子的最小RMS偏差叠加模板结构。将靶蛋白MJ2-7V2VH的序列与叠加的模板蛋白序列进行比对，并给靶蛋白的相应残基分配SCR的坐标。基于每个SCR中靶标和模板之间序列相似性的程度在不同的SCR中使用来自不同模板的坐标。通过同源性模块中应用的Search Loop或Generate Loop方法产生不包括在SCR中的环和可变区的坐标。简言之，Search Loop方法通过用预计算的矩阵比较SCR侧翼残基的Cα距离矩阵来扫描两个SCR之间正确匹配的蛋白质结构，所述预计算的矩阵来自具有相同数目的侧翼残基和给定长度的间插肽区段的蛋白质结构。在Search Loop未产生所需结果的情况下使用从头产生原子坐标的Generate Loop方法。如果模板和靶标中的氨基酸残基相同，则氨基酸侧链的构象保持与模板的构象相同。然而进行了对旋转异构体的构象搜索，对模板和靶标中不同的残基保持其能量上最有利的构象。其后是Splice Repair，它建立分子力学模拟以推导出两个SCR之间或SCR与可变区之间结合处正确的键长和键角。最后使用最速下降(DeepestDescents)算法使模型能量最小化直至得到5kcal/(mol

)的最大导数或500个循环，或使用共轭梯度(Conjugate Gradients)算法直至得到5kcal/(mol

)的最大导数或2000个循环。使用ProStat/Struct_Check命令评估模型的质量。

按照所述用于人源化MJ2-7V2VH的方案建立小鼠MJ2-7VH的分子模型，只是其中使用的模板为马抗细胞色素c抗体FabE8的晶体结构1QBL和1QBM。

通过模型预测CDR构架H键中的可能差异：

hMJ2-7V2VH：G26-hMJ2-7V2VH：A24

hMJ2-7V2VH：Y109-hMJ2-7V2VH：S25

mMJ2-7VH：D61-mMJ2-7VH：I48

mMJ2-7VH：K63-mMJ2-7VH：E46

mMJ2-7VH：Y109-mMJ2-7VH：R98

这些差异提示以下的任选回复突变：A23T、A24G和V48I。

基于各氨基酸的显著RMS偏差和其毗邻氨基酸残基的差异提示其他任选回复突变为：G9A、L115T和R87T。

实施例15：MJ2-7和C65的IL-13中和活性

在一系列生物测定中测试了MJ2-7和C65的IL-13中和能力。首先在单核细胞CD23表达测定中测试了这些抗体中和NHP IL-13的生物活性的能力。在渐增浓度的MJ2-7、C65或sIL-13Rα2-Fc存在下将新分离的人PBMC与3ng/ml NHP IL-13温育过夜。收获细胞，用CYCHROME^TM标记的针对单核细胞特异性标记CD11b的抗体和PE标记的针对CD23的抗体染色。在对IL-13处理的应答中，CD23在单核细胞表面上的表达被增量调节，基于CD11b的表达对单核细胞进行选通。在此测定中MJ2-7、C65和sIL13Rα2-Fc都能中和NHP IL-13的活性。MJ2-7与sIL-13Rα2-Fc的效力相当。C65的活性约为1/20(图2)。

在第二个生物测定中，在STAT6磷酸化测定中测试MJ2-7和C65对天然人IL-13的中和能力。在渐增浓度的MJ2-7、C65或sIL-13Rα2-Fc存在下将HT-29上皮细胞系与0.3ng/ml天然人IL-13在37℃温育30分钟。固定细胞、透化处理并用ALEXA^TM Fluor 488标记的针对磷酸化STAT6的抗体染色。IL-13处理刺激STAT6磷酸化。在此测定中MJ2-7、C65和sIL13Ra2-Fc都能中和天然人IL-13的活性(图3)。小鼠MJ2-7抗体和人源化形式(V2.11)的IC50分别为0.48nM和0.52nM。MJ2-7和sIL-13Rα2-Fc的效力大致相等。sIL-13Ra2-Fc的IC50为0.33nM(图4)。C65的活性约为1/20(图5)。

在第三个生物测定中，在生腱蛋白产生测定中测试了MJ2-7中和天然人IL-13的能力。在渐增浓度的MJ2-7存在下将人BEAS-2B肺上皮细胞系与3ng/ml天然人IL-13温育过夜。收获上清并通过ELISA测试细胞外基质蛋白生腱蛋白C的产生(图6A)。MJ2-7以约0.1nM的IC50抑制此应答(图6B)。

这些结果证明MJ2-7是NHP IL-13和天然人IL-13的有效中和剂。MJ2-7的IL-13中和能力与sIL-13Rα2-Fc的IL-13中和能力相等。MJ1-65也具有IL-13中和活性，但效力为MJ2-7的约1/20。

实施例16：通过SPR对MJ2-7抗体进行表位作图

通过标准胺偶联将sIL-13Rα2-Fc直接包被到CM5芯片上。注射100nM浓度的NHP-IL-13，通过BIACORE^TM检测其与固定化IL-13Rα2-Fc的结合。再注射100nM的抗IL-13抗体并监测结合的变化。当NHP-IL-3与hu IL-13Rα2形成复合体时，MJ2-7抗体不与NHP-IL-3结合，而与阳性对照抗IL-13抗体则结合(图7)。这些结果说明hu IL-13Rα2和MJ2-7结合NHP IL-13上相同或重叠的表位。

实施例17：NHP-IL-13与人源化MJ2-7V2-11抗体之间相互作用的动力学速率常数的测量

为制备生物传感器表面，使用胺偶联将山羊抗人IgG Fc特异性抗体固定在研究级羧甲基葡聚糖芯片(CM5)上。用0.1M 1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)和0.05M N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)的混合物活化表面。以乙酸钠缓冲液(pH 5.5)中10μg/ml的浓度注射捕获抗体。用1.0M乙醇胺(pH 8.0)封闭剩余的活化基团。作为对照，用第一个流动室作为参照表面以校正总体折射率(bulk refractive index)、基质效应和非特异性结合，用捕获分子包被第2、3和4个流动室。

为进行动力学分析，通过注射40μl的1μg/ml溶液将单克隆抗体hMJ2-7V2-11捕获至抗IgG抗体表面。注射完成30秒后的点与基线之间的净差值代表结合的靶标的量。一式三份以每分钟100μl的流速注射600、200、66.6、22.2、7.4、2.5、0.8、0.27、0.09和0nM浓度的NHP-IL-13溶液2分钟，将结合的物质的量作为时间的函数记录(图8)。以相同的流速在HBS/EP缓冲液(10mM HEPES，pH 7.4，含有150mM NaCl、3mMEDTA和0.005％(体积/体积)表面活性剂P20)中监测解离相5分钟，接着注射5μl甘氨酸(pH 1.5)两次以产生具有完全活性的捕获表面。所有动力学实验都在HBS/EP缓冲液中在22.5℃下进行。对于使用双参照的每个传感图(sensorgram)，减去空白和缓冲液效应。

使用应用于1∶1模型的BIAEVALUATION^TM软件3.0.2分析动力学数据。使用全局分析从传感图的适当区域计算表观解离(kd)和结合(ka)速率常数。通过下式从动力学速率常数计算抗体与NHP IL-13之间相互作用的亲和力常数：Kd＝kd/ka。这些结果说明huMJ2-7V2-11具有分别为2.05×10⁷M^-1s^-1和8.89×10^-41/s的结合和解离速率，使抗体对NHP-IL-13具有43pM的亲和力。

实施例18：MJ2-7人源化中间体在生物测定中的抑制活性

通过STAT6磷酸化和生腱蛋白产生生物测定测试了人源化过程中多种中间体的抑制活性。用次最高水平的NHP IL-13或天然人IL-13粗制备物引发生物应答，测定应答的半最大抑制所需的MJ2-7人源化形式的浓度。对与人IgG1和κ恒定区一起表达的hMJ2-7V1、hMJ2-7V2、hMJ2-7V3的分析显示形式2保留了针对天然人IL-13的中和活性。天然人IL-13生物活性的半最大抑制所需的形式2人源化抗体的浓度比小鼠MJ2-7高约110倍(图9)。对半人源化形式(其中将V1或V2VL与小鼠MJ2-7VH组合)的分析证明天然人IL-13中和活性的降低不是由于人源化的VL，而是由于VH序列(图10)。而具有VL V1的半人源化MJ2-7抗体仅部分保留了中和活性，具有人源化VL V2的形式与亲本小鼠抗体活性相同。因此，在V1VH序列中引入了一系列的回复突变以提高小鼠MJ2-7的天然人IL-13中和活性。

实施例19：MJ2-7阻断IL-13与IL-13Rα1和IL-13Rα2的相互作用

MJ2-7对NHP IL-13的C端19-单体单元(mer)具有特异性，该19-单体单元对应于未成熟蛋白(SEQ ID NO：24)的氨基酸残基114-132和成熟蛋白(SEQ ID NO：14)的残基95-113。就人IL-13而言，已经报道形成蛋白质Dα螺旋的部分的这一区域含有对与IL-13Rα1和IL-13Rα2的结合重要的残基。对人IL-13突变体的分析鉴定了A、C和D螺旋含有IL-13Rα1/IL-4Rα信号复合体的重要接触位点(Thompson和Debinski(1999)J.Biol.Chem.274：29944-50)。D螺旋的丙氨酸扫描诱变鉴定了残基K123、K124和R127(SEQ ID NO：24)负责与IL-13Rα2的相互作用，残基E110、E128和L122是IL-13Rα1的重要接触点(Madhankmuar等(2002)J.Biol.Chem.277：43194-205)。通过NMR测定的人IL-13的高分辨率溶液结构已经基于与已知结构的相关配体-受体对的相似性预测了IL-13的结合相互作用。这些NMR研究支持IL-13A和D螺旋在与IL-13Rα1的重要接触中发挥关键作用(Eisenmesser等(2001)J.Mol.Biol.310：231-241；Moy等(2001)J.Mol.Biol.310：219-230)。预期MJ2-7与位于IL-13C端D螺旋的这一表位结合将破坏IL-13与IL-13Rα1和IL-13Rα2的相互作用。

通过ELISA测试MJ2-7抑制NHP IL-13与IL-13Rα1和IL-13Rα2的结合的能力。将重组可溶形式的人IL-13Rα1-Fc和IL-13Rα2-Fc包被在ELISA平板上。在渐增浓度的MJ2-7的存在下加入FLAG标记的NHPIL-13。结果显示MJ-27与两种可溶性受体形式都竞争结合NHP IL-13(图11A和11B)。这提供了MJ2-7中和IL-13生物活性的基础。

实施例20：MJ 2-7轻链CDR促成抗原结合

为评估MJ 2-7抗体与NHP IL-13的结合是否需要全部三个轻链CDR区，通过CDR移植构建了MJ 2-7VL的另外两个人源化形式。基于人种系克隆DPK18设计VL形式3，其含有人种系克隆的CDR1和CDR2和来自小鼠MJ 2-7抗体的CDR3(图12)。在第二个构建体(hMJ 2-7V4)中仅将MJ 2-7抗体的CDR1和CDR2移植到DPK18构架上，CDR3来自无关的小鼠单克隆抗体。

通过将hMJ 2-7VH V1与hMJ 2-7VL V3和V4组合，在COS细胞中产生人源化MJ 2-7V3和V4。通过直接NHP IL-13结合ELISA，检查抗体的抗原结合特性。缺少MJ 2-7轻链CDR3的hMJ 2-7V4保留了与NHP IL-13结合的能力，而轻链中含有人种系CDR1和CDR2的V3不与固定化的NHP IL-13结合。这些结果证明MJ 2-7抗体轻链的CDR1和CDR2最有可能负责此抗体的抗原结合特性。

hMJ 2-7VLV3的核苷酸序列

1   ATGCGGCTGC CCGCTCAGCT GCTGGGCCTG CTGATGCTGT GGGTGCCCGG

51  CTCTTCCGGC GACGTGGTGA TGACCCAGTC CCCTCTGTCT CTGCCCGTGA

101 CCCTGGGCCA GCCCGCTTCT ATCTCTTGCC GGTCCTCCCA GTCCCTGGTG

151 TACTCCGACG GCAACACCTA CCTGAACTGG TTCCAGCAGA GACCCGGCCA

201 GTCTCCTCGG CGGCTGATCT ACAAGGTGTC CAACCGCTTT TCCGGCGTGC

251 CCGATCGGTT CTCCGGCTCC GGCAGCGGCA CCGATTTCAC CCTGAAGATC

301 AGCCGCGTGG AGGCCGAGGA TGTGGGCGTG TACTACTGCT TCCAGGGCTC

351 CCACATCCCT TACACCTTTG GCGGCGGAAC CAAGGTGGAG ATCAAG

(SEQID NO：189)

hMJ 2-7VL V3的氨基酸序列

MRLPAQLLGLLMLWVPGSSG-DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLVYSDGNTYLNW

FQQRPGQSPRRLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHIP

YTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO：190)

hMJ 2-7VL V4的核苷酸序列

GATGTTGTGATGACCCAATCTCCACTCTCCCTGCCTGTCACTCCTGGAGAGCCAGCCTCC

ATCTCTTGCAGATCTAGTCAGAGCATTGTGCATAGTAATGGAAACACCTACCTGGAATGG

TACCTGCAGAAACCAGGCCAGTCTCCACAGCTCCTGATCTACAAAGTTTCCAACCGATTT

TCTGGGGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTCAAGATC

AGCAGAGTGGAGGCTGAGGATGTGGGAGTTTATTACTGCTTTCAAAGTTCACATGTTCCT

CTCACCTTCGGTCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAA(SEQ ID NO：191)

hMJ 2-7VL V4的氨基酸序列

DVVMTQSPLS LPVTPGEPAS ISCRSSQSIV HSNGNTYLEW YLQKPGQSPQ LLIYKVSNRF

SGVPDRFSGS GSGTDFTLKISRVEAEDVGV YYCFQSSHVP LTFGQGTKLE IK(SEQ ID NO：192)

实施例21：抗-IL13抗体在食蟹猴模型中的中和活性

可以使用对猪蛔虫天然具有变应性的食蟹猴中抗原诱导的呼吸道炎症模型测试IL-13结合剂(例如，抗-IL13抗体)在体内中和一种或多种IL-13的相关活性。这些测定可用于确认结合剂有效降低经变应原攻击的变应性动物中呼吸道嗜酸性粒细胞增多。在此模型中，用猪蛔虫抗原对变应性猴的攻击导致下列的一种或多种结果：(i)炎症细胞的流入，例如嗜酸性粒细胞进入呼吸道；(ii)增加的嗜伊红粒细胞趋化蛋白水平；(iii)蛔虫特异性的嗜碱性粒细胞组胺释放增加；和/或(iv)蛔虫特异性IgE滴度增加。

为测试抗IL-13抗体阻止炎症细胞流入的能力，可在用猪蛔虫抗原攻击之前的24小时施用抗体。在攻击的当天，可以从左肺获得基线支气管肺泡灌洗(BAL)样品。可将猪蛔虫抗原气管内滴注至右肺。24小时后灌洗右肺，并将来自经抗体静脉内处理的动物的BAL液与来自未处理动物的BAL液进行比较。如果抗体减少了呼吸道炎症，则可在未处理的组观察到BAL嗜酸性粒细胞百分比的增加，而在抗体处理过的组观察不到。

图14A-14D描述了在用蛔虫攻击呼吸道的24小时后细胞整体数量和炎症细胞例如嗜酸性粒细胞(图14B)、中性粒细胞(图14C)和巨噬细胞(图14D)百分比的增加。在攻击后24小时观察到与基线值相比，炎症细胞的百分比在统计学上显著增加。

在用猪蛔虫抗原攻击之前的24小时对食蟹猴施用抗IL-13抗体(人源化MJ2-7v.2-11和人源化mAb13.2v.2)。(mAb 13.2及其人源化形式hmAb13.2v2在共同拥有的PCT申请WO 05/123126中有所描述，将其内容全文并入本文作为参考)。用盐水处理对照猴。静脉内施用10mg/kg的hMJ2-7v2-11、hmAb13.2v2或不相关的人Ig(IVIG)。接下来的一天，从猴的左肺中收集来自对照或处理猴(在图15A中称作“对照前”和“抗体前”)的预攻击BAL样品。用0.75微克的猪蛔虫抗原气管内进入右肺处理猴。在攻击后的24小时，从对照和处理猴的右肺中收集BAL样品，并测定细胞内浸润(在图15B中分别称为“对照后”和“抗体后”)。收集自抗体处理猴的BAL样品与对照动物相比显示出细胞浸润总数的统计学显著降低(图15A)。在图15A中对照样品用圆圈来代表，hmAb13.2v2-和hMJ2-7v2-11-处理的样品分别用黑三角和实心三角来显示。hMJ2-7v2-11和hmAb13.2v2在此模型中显示出相似的效力。图15B显示了表示hMJ2-7v2-11或hmAb13.2v2的浓度相对于蛔虫灌注后天数的线状图。对于两种抗体均检测到相当的降低的动力学。

蛔虫攻击的24小时后嗜伊红粒细胞趋化蛋白的水平显著增加(图16A)。与用盐水处理的对照相比，hMJ2-7v2-11和hmAb13.2v2均降低了来自用猪蛔虫抗原攻击24小时后的食蟹猴BAL液中检测到的嗜伊红粒细胞趋化蛋白的水平。

经猪蛔虫敏化的食蟹猴产生了针对猪蛔虫抗原的IgE。IgE结合至循环的嗜碱性粒细胞的FcεRI上，从而用蛔虫抗原对外周血嗜碱性粒细胞的体外攻击诱导了脱粒和组胺的释放。重复的抗原暴露促使嗜碱性粒细胞敏化，导致组胺释放应答增强。为检测hMJ2-7v2-11和hmAb13.2v2对IgE和嗜碱性粒细胞水平的影响，在蛔虫攻击后8周将如上所述经施用人源化hMJ2-7v.2、hmAb13.2v2、非相关的Ig(IVIG)或盐水的食蟹猴放血，并通过ELISA测定血浆中全部的和蛔虫特异性的IgE的水平。图17显示了吸光度的变化相对于样品稀释度的线状图，所述样品在经攻击之前和攻击之后的8周获得自用IVIG或hMJ2-7v2-11处理的动物。空心圈代表放血前测量值；实心圈代表处理后的测量值。在所测定的所有稀释度中，经hMJ2-7v2-11处理后的攻击后样品相对于攻击前的值均检测到吸光度的显著降低。图17A描述了代表性实例，其显示在用非相关Ig处理的各只猴中蛔虫特异性IgE滴度无改变(IVIG；动物20-45，上排)，而在用hMJ2-7v2-11处理的各只猴中蛔虫特异性IgE的滴度降低(动物120-434，下排)。

用人源化hMJ2-7v.2-11或hmAb13.2v2处理的动物显示了食蟹猴血清中蛔虫特异的循环IgE水平的显著降低(图17B)。任何处理组中的总IgE滴度无显著改变。图17A显示了吸光度相对于样品稀释度变化的线状图，所述样品在经攻击之前和攻击之后的8周获得自用IVIG或hMJ2-7v2-11处理的动物。空心圈代表放血前测量值；实心圈代表处理后的测量值。在所测定的所有稀释度中，经hMJ2-7v2-11处理后的攻击后样品相对于攻击前的值均检测到吸光度的显著降低。标记“20-45”和“120-434”指的是食蟹猴识别号码。

为评估抗-IL13抗体对嗜碱性粒细胞组胺释放的影响，在蛔虫攻击24小时和8周后将动物放血。在37℃用蛔虫抗原攻击全血30分钟，并通过ELISA(Beckman Coulter，Fullerton，CA)定量释放进入上清的组胺。如图18A-18B所示，对照动物证实了蛔虫诱导的嗜碱性粒细胞组胺释放水平的增加，特别是在抗原攻击后8周(图18A中用菱形、且图18B中用左侧条形柱来代表)。相反，用人源化hMJ2-7v.2-11或hmAb13.2v2处理的动物在攻击后的8周并未显示出响应于蛔虫的嗜碱性粒细胞敏化的此类增加(图18A-18B)。攻击后8周与攻击前或攻击后24小时相比，用人源化hMJ2-7v.2-11或hmAb13.2v2处理的个体动物的大多数显示出嗜碱性粒细胞组胺释放的降低(图18A中的实例)或无变化。因而，人源化抗-IL13抗体的单独施用在此模型中对调整组胺释放具有持续影响。

图19描述了蛔虫特异性组胺释放与蛔虫特异性IgE水平之间的相关性。相对于抗IL13抗体或地塞米松(dex)处理的样品(暗红圈)，在对照样品(盐水、或IVIG处理的样品)(淡蓝圈)中检测出较高的值。在蛔虫攻击前24小时静脉内施用人源化抗IL13抗体(人源化mAb13.2v.2)、或者每次以1mg/kg的浓度在蛔虫攻击前24小时和30分钟两次肌内注射施用地塞米松。攻击后的24小时，从右肺收集BAL灌洗物并测定组胺释放和IgE水平。

此处显示的结果证实用MJ2-7或mAb13.2预处理食蟹猴以相当的水平降低了由猪蛔虫抗原引起的呼吸道炎症，所述相当的水平如在体外通过响应于蛔虫攻击的BAL样品中细胞因子水平、蛔虫特异性IgE的血清水平和嗜碱性粒细胞组胺释放所检测的。

图20是一组描述经人源化MJ2-7(hMJ2-7v2-11)处理的个体食蟹猴中血清IL-13水平增加的条形图。每个图中的标记(例如12-452)与猴识别号码相对应。在施用抗体之前收集“pre”样品。时间“0”是收集于抗体施用24小时后但是蛔虫攻击之前。剩余的时间点是在蛔虫攻击后。用于检测IL-13水平的测定能够检测hMJ2-7v2-11或hmAb13.2v2抗体存在下的IL-13。更明确地，在4℃下用PBS中的0.5μg/ml mAb13.2过夜包被ELISA平板(MaxiSorp；Nunc，Rochester，NY)。在含有0.05％Tween-20的PBS(PBS-Tween)中洗涤平板。加入NHP IL-13标准品或来自食蟹猴的血清稀释物，并在室温孵育2小时。洗涤平板，并在PBS-Tween中加入0.3μg/ml生物素化的MJ1-64(本文称作C65抗体)。室温孵育板2小时、洗涤、并利用HRP-链霉抗生物素蛋白(Southern Biotechnology Associates)和SureBlue底物(Kirkegaard和Perry Labs)进行结合检测。对于存在mAb13.2的IL-13的检测，除了ELISA平板是用0.5μg/ml MJ2-7包被之外，遵循相同的方案。

图21显示了数据，该数据证明来自经抗IL13抗体处理的食蟹猴的血清在所测试的非人灵长类动物IL-13的浓度下具有残留的IL-13中和能力。图21是描述非人灵长类动物IL-13在0、1或10ng/ml时的STAT6磷酸化活性的条形图，在血清不存在下(“无血清”)、来自盐水或IVIG处理的动物的血清存在下(“对照”)；或来自抗-IL13抗体处理的动物血清存在下，在抗体施用前(“前”)、或指定抗体施用后1-2周。以1∶4的稀释度测试血清。在此研究中使用MJ2-7的人源化形式(MJ2-7v.2-11)。本文公开了检测STAT6磷酸化的测定。

图22是线状图，该图显示在1周的时间点食蟹猴血清中由人源化MJ2-7(hMJ2-7v2-11)捕获的非人灵长类动物IL-13水平与蛔虫攻击后BAL液中所测定的炎症水平相关。此相关性支持了血清IL-13(非结合的或结合至抗IL-13抗体的)的检测作为用于检测具有炎症的受试者的生物标记。具有更严重炎症的受试者显示出更高水平的血清IL-13。尽管非结合的IL-13水平通常很难定量，本文上面所公开的图20中的测定提供了检测结合至抗IL-13抗体的可靠测定。

实施例22：人源化抗IL-13抗体对通过向小鼠施用人IL-13所引起的呼吸道炎症、肺阻力和动态肺顺应性的效果

已证实哮喘的鼠模型是理解IL-13在此疾病中作用的宝贵工具。使用该模型在体内评价IMA抗体系列(人源化13.2v.2和人源化MJ2-7v.2-11)的效力最初受到这些抗体不能与啮齿类动物IL-13交叉反应的阻碍。本文通过向小鼠施用人重组IL-13而突破此限制。人IL-13能够结合至小鼠IL-13受体，且当外源施用时诱导呼吸道炎症、反应过度，并其他哮喘相关。

在非人灵长类动物中，人源化MJ2-7v.2-11识别的IL-13表位包括在110位的GLN。然而在人中，110位是多态性变体，通常以ARG取代GLN(例如R110)。R110Q多态性变体与变应性疾病增加的流行普遍相关。

在此实例中，在大肠杆菌中表达重组人R100Q IL-13并再折叠。从用人IL-13免疫的BALB/c小鼠中克隆抗体13.2(IgG1，k)，并将该抗体的人源化形式称作人源化13.2v.2(或h13.2v.2)。从用非人灵长类动物IL-13的N端19个氨基酸免疫的BALB/c小鼠中克隆抗体MJ2-7(IgG1，k)，并将该抗体的人源化形式称为人源化MJ2-7v.2-11(或hMJ2-7v.2-11)。将两抗体配制于含有5％蔗糖的PH6的10mM L-组氨酸中。通过A蛋白层析法纯化静脉的Carimune NH免疫球蛋白(人IVIG)(ZLB Bioplasma Inc.，瑞士)并配制于含有5％蔗糖的PH6的10mM L-组氨酸中。

为分析小鼠肺对重组人R110Q IL-13存在的反应，用5μg的重组人R110Q IL-13(例如大约250μg/kg)、或等体积的盐水(20μL)在第1、2、和3天气管内施用处理BABL/c雌性小鼠。在第4天，测试动物应答于增加剂量的喷雾乙酰甲胆碱的呼吸道阻力(RI)和顺应性(Cdyn)的症状。简要地，将麻醉并经气管切开的小鼠置于全身体积扫描器，每个扫描器均具有构建进入小室头板的多支管(manifold)，具有连接气管的端口、连接通风设备的吸气和呼气端口和连接压力传感器的端口，监测气管压力。每个体积扫描器的壁中的呼吸流量计监测由于通气的动物的胸运动而进入和流出小室的气流。以每分钟150次呼吸的速率和150ml的潮气量来给动物通气。阻力计算来源于气管压力和气流信号，利用协方差的算法。

如图23A-23B所示，重组人R110Q IL-13的气管内施用引起应答于乙酰甲胆碱刺激的增加的肺阻力和降低的动态顺应性。然而这些观察并不伴有强的肺炎。

为增强小鼠中的肺炎症反应，在第1、2、和3天对C57BL/6小鼠鼻内施用5μg的重组人R110Q IL-13、或等体积(50μg)的盐水。第4天将动物处死并收集支气管肺泡灌洗(BAL)物。分析前，将BAL过滤通过70μm的细胞粗滤器(strainer)并在2000转/分钟离心15分钟以沉淀细胞。将细胞碎片用于分析总的白细胞数，旋转至显微镜载玻片(Cytospin；Pittsburgh，PA)上，并用Diff-Quick(Dade Behring，Inc.Newark DE)染色作差异分析。通过细胞计数珠测定(CBA；BD Pharmingen，San Diego，CA)检测IL-6、TNFα和MCP-1水平。测定灵敏度的极限对于IL-6是1pg/ml，而对于TNFα和MCP-1是5pg/ml。

如图24A所示，鼻内施用重组人R110Q IL-13引起了强呼吸道炎症反应，如通过浸润入BAL的嗜酸性粒细胞和中性粒细胞增加所证实的。细胞浸润主要由嗜酸性粒细胞组成(例如大约40％)。如图24B中所示的，重组人R110Q IL-13的鼻内施用也显著增加了BAL中几种细胞因子的水平，包括例如MCP-1、TNF-I和IL-6。

为确定人源化MJ2-7v.2-11的最佳递送方法，在经鼻内或气管内施用人重组R110Q IL-13处理后，在腹膜内和静脉内或鼻内施用后分析BAL和血清中的抗体水平。简要地，在第1、2、和3天对BALB/c雌性小鼠气管内施用5μg重组人R110Q IL-13或等体积的盐水。在第0天和施用每种IL-13剂量之前的2小时，用在第0天静脉施用的、以及第1、2和3天腹膜内施用的500μg人源化MJ2-7v.2处理小鼠(图25A)。备选地，在第0、1、2、和3天鼻内施用500μg人源化MJ2-7v.2-11。如下通过ELISA测定总的人IgG：在4℃用1∶1500稀释度的山羊抗人Ig(M+G+A)Fc(ICN-Cappel，Costa Mesa，CA)在25mM pH9.6的碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液中以50μl每孔过夜包被ELISA平板。用PBS中0.5％的明胶在室温下封闭平板1小时，在含有0.05％Tween-20的PBS(PBS-Tween)中进行洗涤。加入人源化MJ2-7v.2-11标准品或6×1∶2稀释度的起始于1∶500至1∶50000的绵羊血清，并在室温孵育2小时。用PBS-Tween洗涤平板，并在室温将1∶5000稀释度的生物素化小鼠抗人IgG(Southern Biotechnology Associates)孵育2小时。用PBS-Tween洗涤平板，并用过氧化物酶连接的链霉抗生物素(Southern Biotechnology Associates)和Sure Blue底物(KPL Inc.)检测结合。测定灵敏度是0.5ng/ml人IgG。

图25A显示腹膜内和静脉内施用人源化M J2-7v.2-11后血清中人IgG水平与BAL相比升高。如图25B所示，在鼻内施用人源化MJ2-7v.2-11抗体之后，以μg/ml计的总IgG水平在BAL中要显著高于血清水平。

为确定人源化MJ2-7v.2-11抗体是否能够调节上面观察到的肺功能和炎症反应，通过在第1、2和3天气管内施用5μg重组人R110Q IL-13或等体积(20μL)的盐水来诱导呼吸道反应过度。在第0天、和施用每种剂量的重组人R110Q IL-13之前2小时，用500μg的人源化MJ2-7v.2-11、500μg剂量的IVIG、或等体积的盐水鼻内施用处理动物。第4天如上所述测试动物应答于增加剂量的喷雾乙酰甲胆碱的呼吸道阻力(RI)和顺应性(Cdyn)。如上所述通过ELISA分析BAL和血清中的人源化MJ2-7v.2和IVIG。如图26A-26B中所示，人源化MJ2-7v.2-11有效降低了哮喘反应，导致实现半最大程度的肺阻力所需的乙酰甲胆碱剂量显著降低。相反，相等剂量的IVIG没有效果。在这些条件下动态肺顺应性的变化并不明显。如图26C所示，BAL IgG抗体水平大约高于血清水平10-20倍。

为测定人源化MJ2-7v.2-11抗IL-13抗体施用是否促进IL-13循环水平的增加，如下通过ELISA测定了BAL和血清的IL-13水平：简要地，如有关图26A-26B所述处理BALB/c雌性小鼠。用每孔50μl在PBS中稀释至0.5mg/ml的抗-IL-13抗体mAb13.2过夜包被ELISA平板(NuncMaxi-Sorp)。用含有0.05％Tween-20的PBS(PBS-Tween)洗涤平板3次并在室温用PBS中0.5％的明胶封闭2小时。然后洗涤平板并加入人IL-13标准品(Wyeth，Cambridge，MA)、或小鼠血清的稀释物(从1∶4起始3×稀释系列)，在含有2％胎牛血清(FCS)的PBS-Tween中。室温下再孵育平板4小时，并洗涤。以PBS-Tween中的0.3μg/ml加入生物素化的小鼠抗人IL-13抗体C65。室温下孵育平板1-2小时，洗涤，然后用HRP-链霉抗生物素蛋白(Southern Biotechnology Associates，Birmingham，AL)室温下孵育1小时。利用Sure Blue过氧化物酶底物(KPL，Gaithersburg，MD)产生颜色，并用0.01M硫酸终止反应。在SpectraMax平板读数仪(Molecular Devices Corp.，Sunnyvale，CA)中在450nm读取吸光度。通过参考为每一平板单独建立的人IL-13标准曲线来确定血清IL-13水平。

如图27A-27B中所示，与图26C一致，在抗体处理过的小鼠的BAL中IL-13水平升高，但血清中IL-13水平不升高。另外，我们观察到从这些样品中分离的IL-13无可检测的生物学活性(数据未显示)。为确定此观察到的IL-13生物活性缺失是否是由于IL-13和人源化MJ2-7v.2-11复合体形成，开展了ELISA来特异性地检测复合体中的IL-13和人源化MJ2-7v.2-11。简要地，用每孔50μl在PBS中稀释至0.5mg/ml的抗-IL-13抗体mAb13.2过夜包被ELISA平板(Nunc Maxi-Sorp)。用含有0.05％Tween-20的PBS(PBS-Tween)洗涤平板3次并在室温用PBS中0.5％的明胶封闭2小时。然后再洗涤平板并加入人IL-13标准品(Wyeth，Cambridge，MA)、或在含有2％胎牛血清(FCS)的PBS-Tween中的小鼠血清的稀释物(从1∶4起始3×稀释系列)。随后室温下孵育平板4小时。然后加入PBS-Tween中1∶5000稀释的生物素化抗人IgG(Fc特异地)(SouthernBiotechnology Associates，Birmingham，AL)。室温下孵育平板1-2小时，洗涤，并最终在室温下用HRP-链霉抗生物素蛋白(Southern BiotechnologyAssociates，Birmingham，AL)孵育1小时。利用Sure Blue过氧化物酶底物(KPL，Gaithersburg，MD)产生颜色，并用0.01M硫酸终止反应。在SpectraMax平板读数仪(Molecular Devices Corp.，Sunnyvale，CA)中在450nm读取吸光度。

如图27D-27E所示，在此模型中从小鼠的BAL和血清中回收得到IL-13和人源化的MJ2-7v.2-11复合体。该观察表明人源化MJ2-7v.2-11能够在体内结合IL-13，并表明该反应可以抵消IL-13生物活性。

如下，在小鼠中测试了人源化MJ2-7v.2-11对人IL-13介导的肺炎和细胞因子产生的效果，并与第二种抗体——人源化13.2v.2相比较。简要地，在第1、2和3天用5μg的人重组R110Q IL-13(例如大约250μg/kg)、或等体积(50μl)的盐水鼻内施用处理C57BL/6雌性小鼠(10/组)。在第0天，和施用每种剂量的IL-13之前的2小时，给予小鼠500μg、100μg或20μg的鼻内剂量的人源化MJ2-7v.2-11或人源化13.2v.2。对照组获得500μgIVIG、或等体积的盐水。在第4天处死动物并收集BAL。通过差异细胞计数测定浸润入BAL的嗜酸性粒细胞和中性粒细胞并表示为百分比。

如图28A-28B所示，与图24A一致，重组人R110Q IL-13处理引起嗜酸性粒细胞和中心粒细胞浸润水平的增加。有趣地，与对照(例如盐水、IL-13、IVIG)相比，人源化MJ2-7v.2-11和人源化13.2v.2显著降低了嗜酸性粒细胞(图28A)和中性粒细胞(图28B)浸润。如图29A-29C所示，HMJ2-7V2-11和人源化MJ2-7v.2-11还消除了MCP-1、TNF-I和IL-6细胞水平的增加。

为确认BAL细胞因子水平精确代表炎症的程度，在第1、2和3天用5μg重组人R110Q IL-13(例如大约250μg/kg)或等体积(50μl)盐水鼻内施用处理的C57BL/6雌性小鼠。在第0天，和施用每种剂量的IL-13之前的2小时，给予小鼠500μg、100μg或20μg鼻内剂量的人源化MJ2-7v.2-11。第4天，处死小鼠并收集BAL。如上所述通过ELISA测定BAL中人源化MJ2-7v.2-11抗体水平。通过细胞计数珠测定检测BAL IL-6水平。通过差异细胞计数测定嗜酸性粒细胞百分比。

如图30A-30B所示，IL-6BAL细胞因子水平与炎症程度相关。而且，BAL液中更高水平的人源化MJ2-7v.2-11与细胞因子浓度反相关，这强烈地暗示着治疗效果。

此模型中在体内降低IL-13生物活性所需的抗体水平是高的。在500μg抗体的剂量时可见最好效力，相应在小鼠中大约25mg/kg。这种对抗体的高剂量需求最有可能是引发肺反应所用的高水平IL-13(5μg/剂量×3剂量)的结果。有趣地，只有当鼻内施用人源化MJ2-7v.2-11时才可看到体内IL-13生物活性的良好中和，而当经静脉或腹膜内施用该抗体时却没有。分布研究显示在静脉和腹膜内施用后，处死时在血清中回收到高水平的抗体，而在BAL中却只发现了极低水平的抗体。相反，在鼻内给药后，在血清和BAL中发现了相似水平的抗体。因此，鼻内施用在BAL液中人源化MJ2-7v.2-11的水平大约高于静脉和腹膜内施用的100倍。鼻内施用有效但静脉和腹膜内施用无效的观察结果表明在此模型中抗体作用的部位并不是肺。预期作用部位是基于IL-13的气管内或鼻内的传递途径，并通过下列观察得以确认，即抗体在BAL液中捕获IL-13，但在血清中只见到非常少的抗体/IL-13复合体。

总之，这些发现进一步支持了人源化抗体MJ2-7v.2-11在体内的IL-13中和活性。

实施例23：在变应原攻击时IL-13和/或IL-4中和对变应原特异性IgE滴度的影响

IL-13和IL-4驱动变应性疾病的重要介质IgE的产生(Oettgen，H.C.(2000)Curr Opin Immunol 12：618-623；Wynn，T.A.(2003)Anuu Rev.Immunol.21：425-456)。检测了单独施用IL-4或IL-3拮抗剂(在攻击前24小时递送)对变应原特异性IgE水平的影响。这些问题是利用标准的鼠OVA敏化和攻击模型来解决的。

6-8周龄的雌性Balb/c小鼠购自Jackson实验室。在研究之前的两周和实验期间中将小鼠圈养在环境控制的、无病原体条件下。所有过程均得到位于Wyeth Research的动物管理与使用委员会的评审和批准。

在第0和13天，用200μl在PBS中含有20μg OVA(V级，Sigma-Aldrich，St Louis，MO)的溶液通过腹膜内注射对多组小鼠进行免疫，所述OVA经4mg氢氧化铝/氢氧化镁(ImjectAlum；Pierce，Rockford，IL)乳化(图31)。对敏化的小鼠施用200μg/剂量的可溶性鼠IL-13Rα2.IgG融合蛋白(sIL-13Rα2.Fc；Wyeth Research)或200μg/剂量的大鼠抗小鼠IL-4单克隆抗体(克隆30340，大鼠IgG1抗小鼠IL-4；R&D Systems，Minneapolis，MN)，攻击前一天通过腹膜内注射。对照动物接受小鼠IgG2a(Wyeth Research)或纯化的大鼠IgG1(Wyeth Reserach)。一些组在攻击前的一天和攻击后的一天用sIL-13Rα2.Fc或对照处理。在第21天，利用Impac6系统(VetEquip，Pleasanton，CA)用异氟烷溶液(Henry Schein，Melville，NY)将小鼠麻醉并用50μl PBS中的20μg OVA/小鼠对其进行鼻内攻击。

第28天处死小鼠并通过心脏穿刺收集血液。通过使用具有凝血激活剂导管的凝胶屏障(CapiJect；Terumo Medical，Somerset，NJ)获得血清。

为测定IgE滴度，用大鼠抗小鼠IgE(BD Biosciences，San Jose，CA)包被ELISA平板(MaxiSorp；Nunc)。用PBS中0.5％的明胶封闭平板1小时，在含有0.05％Tween-20的PBS(PBS-Tween)中洗涤，在作为阻断剂的小鼠IgG(Sigma-Aldrich，St.Louis，MO)存在下，用作为标准品的纯化的小鼠IgE(BD Biosciences)或血清稀释物在室温孵育6小时。利用过氧化物酶连接的链霉抗生物素蛋白(Southern Biotechnology Associates，Birmingham，AL)和TMB-底物溶液(SureBlue；Kirkegaard & Perry Laboratories，Gaithersberg，MD)来进行测定。为进行OVA特异性IgE或IgG亚型的测定，用OVA(Sigma-Aldrich)过夜包被平板。在小鼠IgG阻断剂(Sigma-Aldrich)存在下，用生物素化的大鼠抗小鼠IgE(BD Biosciences)对结合的IgE进行定量。用生物素化的大鼠抗小鼠IgG1或大鼠抗小鼠IgG3(BD Biosciences)对结合的IgG1进行定量。通过参考纯化的小鼠IgE(BD Biosciences)的标准曲线来确定总的IgE浓度。检测极限是2ng/ml。将OVA特异性的Ig滴度定量为相对于参考标准，达到给定吸光度值所需的血清稀释物。检测极限是0.5的相对滴度。每次测定进行血清的连续稀释，每种样品至少进行三次单独的测定。

对于每次检测，包括了来自每个动物的重复测定的平均值。每次测定进行20只动物的多组。利用GraphPad Prism软件分析数据。通过不成对的学生t检验来确定所有报告的p值。

为论述IL-13在驱动应答于变应原攻击的IgE产生中的必要性，在用抗原鼻内攻击之前的24小时和之后的24小时将IL-13拮抗剂(sIL-13Rα2.Fc)施用于OVA免疫的小鼠。如图31所概述的，在第0天用OVA/铝腹膜内免疫小鼠，第13天用OVA/铝增强，并在第21天进行鼻内攻击。在第20和22天均腹膜内施用sIL-13Rα2.Fc(200μg)。第28天处死动物并将血液收集在血清分离管中。通过ELISA对总的血清IgE进行定量。用sIL-13Rα2.Fc处理的动物与那些给予对照小鼠IgG2a的动物相比，总的IgE滴度没有差异(图32A)。在攻击之前和之后用IL-13拮抗剂处理的动物与用同种型对照处理的动物相比，降低了OVA特异性IgE滴度，但此差异并不能达到统计学显著性，因为对照组中存在几只动物无可检测的OVA特异性IgE滴度(图32B)。OVA特异性IgG1的滴度无显著差异(图32C)。

由于在用sIL-13Rα2.Fc处理的动物中在攻击前和攻击后均存在OVA特异性IgE滴度下降的趋势，我们对单独施用sIL-13Rα2.Fc的有效性进行了评估，在攻击前24小时给予。用sIL-13Rα2.Fc处理的小鼠与那些给予IgG2a对照的小鼠相比，总的血清IgE浓度有所降低(p＜0.05；图33A)。在单独施用sIL-13Rα2.Fc后，OVA特异性IgE滴度也降低了(p＜0.01；图33B)。OVA特异性IgG1的滴度无变化。

为评估IL-4中和是否能够以类似于IL-13中和的方式影响IgE对于OVA攻击的应答，在攻击前24小时腹膜内给予单独剂量的200μg抗-IL-4。另一组小鼠用sIL-13Rα2.Fc和抗-IL-4(每种200μg)的组合进行处理。IL-13(p＜0.05)或IL-4(p＜0.02)的中和均引起了总血清IgE滴度的显著降低(图34A)。在用抗-IL-4(p＜0.02)或sIL-13Rα2.Fc(p＜0.02)处理后，OVA特异性IgE滴度也显著降低了(图34B)。OVA特异性IgG1滴度未收到任何处理的影响(图35A)。此研究中还测定了OVA特异性IgG3滴度，并显示出因IL-13拮抗剂处理而显著降低(p＜0.001)，但用抗-IL-4处理未降低(图35B)。

sIL-13Rα2.Fc与抗-IL-4一起施用比单独施用任何一种产生了总血清IgE的更强的降低(p＜0.001)(图34A)。类似地，用sIL-13Rα2.Fc和抗-IL-4处理后比通过任一细胞因子单独阻断，可见OVA特异性IgE滴度降低了更大的程度(p＜0.001)(图34B)。用sIL-13Rα2.Fc与抗-IL-4组合处理小鼠与对照动物相比在OVA特异性IgG1(图35A)或OVA特异性IgG3(图35B)的滴度上无差异。

几项研究已经通过OVA免疫和/或攻击过程中的递送来研究IL-4或IL-13中和在调节IgE应答中的效用(Zhou，C.Y.等(1997)J Asthma34：195-201；Yang，G.等(2004)Cytokine 28：224-232)。尽管该治疗范例是有效的，本文所讨论的NHP模型中的研究表明有效的IL-13中和可对IgE应答具有持久影响。因此，在小鼠模型中对IL-4或IL-13中和剂的多次施用的必要性进行了论述。我们测定了在敏化和攻击的最适条件下，IL-4或IL-13中和剂的单次处理能否有效调节针对抗原的IgE应答。

sIL-13Rα2.Fc是有效的IL-13拮抗剂，已显示其可阻断哮喘的动物模型中肺炎、AHR、和粘液产生(Wills-Karp，M.等(1998)Science282：2258-2261)。在论述其对IgE产生的影响的先前研究中，小鼠在最初的攻击后10天(Wills-Karp，M.等(1998)见上文)或6周(Taube，C.等(2002)J.Immunol.169：6482-6489)受到两轮利用OVA的肺攻击。仅在第二轮抗原攻击时递送sIL-13Rα2.Fc并不改变OVA特异性IgE的血清滴度(Wills-Karp，M.等(1998)见上文，Taube，C.等(2002)见上文)。假设随第二轮攻击看到了加强的IgE反应，对IgE滴度无影响并不令人吃惊(-Karp，M.等(1998)见上文)。与此相一致，从最初攻击开始，几种剂量的IL-13拮抗剂的递送更加有效。在慢性哮喘模型中，当在5次用OVA每周一次进行鼻内攻击的每一次之前均施用针对IL-13的抗体时，变应原特异性IgE而不是IgG1的血清水平是降低的(Zhou，C.Y.等人(1997)见上文)。

为论述用IL-13中和剂单独给药的范例是否将影响小鼠中特异性IgE的产生，在用OVA鼻内攻击之前施用sIL-13Rα2.Fc。在第0天和第13天用OVA/铝对小鼠进行敏化，然后在第21天用OVA给予单独的鼻内攻击。结果显示，sIL-13Rα2.Fc的单独施用(在攻击前24小时递送)降低了第28天处死时OVA特异性IgE的滴度。OVA特异性IgG1的滴度未受到影响。在大多数实验中总的血清IgE浓度也有所降低。有趣地，在攻击前24小时和攻击后24小时递送两种剂量的sIL-13Rα2.Fc并未增强此处理的效力。

为比较IL-13和IL-4中和的效力，如上所述对多组小鼠进行敏化并用OVA攻击，并在攻击前24小时用sIL-13Rα2.Fc或针对IL-4的抗体、或sIL-13Rα2.Fc和抗-IL-4两者对其进行处理。用sIL-13Rα2.Fc或抗-IL-4处理显著降低了OVA特异性IgE的滴度。总的血清IgE浓度也显著降低。sIL-13Rα2.Fc和抗-IL-4两者的施用在OVA特异性滴度和总血清IgE浓度上比单独用二者之一处理所看到的产生了更大的改变。这些效果显示了对IgE的特异性，然而，无论是OVA特异性IgG1还是OVA特异性IgG3滴度均受到sIL-13Rα2.Fc和抗-IL-4组合处理的影响。

这些发现支持了来自NHP研究的观察，即变应原攻击前单独施用的IL-13中和剂的递送可降低针对变应原的IgE应答。IL-4中和剂可具有类似活性。IL-4和IL-13两者的中和比任一细胞因子单独的中和对降低IgE应答具有更强的效力。这些发现强调了在变应原攻击时对IL-4和IL-13的重要需求。

本领域技术人员将认识到，或能够确定利用本文所述的特定实施例的许多等效方法，而不仅仅是常规实验。其他实施方案落入下列权利要求的范围内。

序列表

<110>惠氏公司

<120>治疗IL-13相关疾病和监测IL-13相关疾病治疗的方法和组合物

<130>16158-105WO1

<150>US 60/874,333

<151>2006-12-11

<150>US 60/925,932

<151>2007-04-23

<160>224

<170>FastSEQ f或Windows版本4.0

<210>1

<211>19

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>1

Phe Val Lys Asp Leu Leu Val His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly

 1               5                  10                  15

Gln Phe Asn

<210>2

<211>19

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>2

Phe Val Lys Asp Leu Leu Val His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly

 1               5                  10                  15

Arg Phe Asn

<210>3

<211>19

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>3

Phe Val Lys Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly

 1               5                  10                  15

Gln Phe Asn

<210>4

<211>19

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>4

Phe Val Lys Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly

 1               5                  10                  15

Arg Phe Asn

<210>5

<211>16

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>5

Phe Val Lys Asp Leu Leu Val His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly

 1               5                  10                  15

<210>6

<211>16

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>6

Phe Val Lys Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly

 1               5                  10                  15

<210>7

<211>17

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>7

Lys Asp Leu Leu Val His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly Gln Phe

 1               5                  10                  15

Asn

<210>8

<211>17

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>8

Lys Asp Leu Leu Val His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly Arg Phe

 1               5                  10                  15

Asn

<210>9

<211>17

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>9

Lys Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly Gln Phe

 1               5                  10                  15

Asn

<210>10

<211>17

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>10

Lys Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly Arg Phe

 1               5                  10                  15

Asn

<210>11

<211>13

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>11

Lys Asp Leu Leu Val His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu

 1               5                  10

<210>12

<211>13

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>12

Lys Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu

 1               5                  10

<210>13

<211>8

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>13

His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu

 1               5

<210>14

<211>112

<212>PRT

<213>食蟹猴(Macaca fascicularis)

<400>14

Ser Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Lys Glu Leu Ile Glu Glu Leu

 1               5                  10                  15

Val Asn Ile Thr Gln Asn Gln Lys Ala Pro Leu Cys Asn Gly Ser Met

            20                  25                  30

Val Trp Ser Ile Asn Leu Thr Ala Gly Val Tyr Cys Ala Ala Leu Glu

        35                  40                  45

Ser Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala Ile Glu Lys Thr Gln Arg

    50                  55                  60

Met Leu Asn Gly Phe Cys Pro His Lys Val Ser Ala Gly Gln Phe Ser

65                  70                  75                  80

Ser Leu Arg Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu Val Ala Gln Phe Val Lys

                85                  90                  95

Asp Leu Leu Val His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly Gln Phe Asn

            100                 105                 110

<210>15

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>15

Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr Ile His

 1               5                  10

<210>16

<211>17

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>16

Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe Gln

 1               5                  10                  15

Gly

<210>17

<211>11

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>17

Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

 1               5                  10

<210>18

<211>16

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>18

Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu

 1               5                  10                  15

<210>19

<211>7

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>19

Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser

 1               5

<210>20

<211>9

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>20

Phe Gln Gly Ser His Ile Pro Tyr Thr

 1               5

<210>21

<211>16

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>1

<223>Xaa＝Arg或Lys

<220>

<221>变体

<222>6

<223>Xaa＝Leu或Ile

<220>

<221>变体

<222>7

<223>Xaa＝Lys或Val

<220>

<221>变体

<222>16

<223>Xaa＝Glu，Asp，Asn，Gln，Tyr，Ala或ser

<400>21

Xaa Ser Ser Gln Ser Xaa Xaa His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Xaa

 1               5                  10                  15

<210>22

<211>7

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>2

<223>Xaa＝Leu或Val

<220>

<221>变体

<222>4

<223>Xaa＝Asn或Tyr

<400>22

Lys Xaa Ser Xaa Arg Phe Ser

 1               5

<210>23

<211>7

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>3

<223>Xaa＝Gly，Ser或Ala

<220>

<221>变体

<222>4

<223>Xaa＝Ser，Ile或Thr

<220>

<221>变体

<222>5

<223>Xaa＝His，Glu或Gln

<220>

<221>变体

<222>6

<223>Xaa＝Ile或Leu

<400>23

Phe Gln Xaa Xaa Xaa Xaa Pro

 1               5

<210>24

<211>132

<212>PRT

<213>食蟹猴

<400>24

Met Ala Leu Leu Leu Thr Met Val Ile Ala Leu Thr Cys Leu Gly Gly

1                5                  10                  15

Phe Ala Ser Pro Ser Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Lys Glu Leu

            20                  25                  30

Ile Glu Glu Leu Val Asn Ile Thr Gln Asn Gln Lys Ala Pro Leu Cys

        35                  40                  45

Asn Gly Ser Met Val Trp Ser Ile Asn Leu Thr Ala Gly Val Tyr Cys

    50                  55                  60

Ala Ala Leu Glu Ser Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala Ile Glu

65                  70                  75                  80

Lys Thr Gln Arg Met Leu Asn Gly Phe Cys Pro His Lys Val Ser Ala

                85                  90                  95

Gly Gln Phe Ser Ser Leu Arg Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu Val Ala

            100                 105                 110

Gln Phe Val Lys Asp Leu Leu Val His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu

        115                 120                 125

Gly Gln Phe Asn

    130

<210>25

<211>16

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>1

<223>Xaa＝Arg或Lys

<220>

<221>变体

<222>6

<223>Xaa＝Leu或Ile

<220>

<221>变体

<222>7

<223>Xaa＝Lys或Val

<220>

<221>变体

<222>10

<223>Xaa＝Asn或Asp

<220>

<221>变体

<222>13

<223>Thr或Asn

<220>

<221>变体

<222>16

<223>Xaa＝Glu，Asp，Asn，gln，Tyr，Ala或Ser

<400>25

Xaa Ser Ser Gln Ser Xaa Xaa His Ser Xaa Gly Asn Xaa Tyr Leu Xaa

 1               5                  10                  15

<210>26

<211>16

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>1

<223>Xaa＝Arg或Lys

<220>

<221>变体

<222>6

<223>Xaa＝Leu或Ile

<220>

<221>变体

<222>7

<223>Xaa＝Lys或Val

<220>

<221>变体

<222>10

<223>Xaa＝Asn或Asp

<220>

<221>变体

<222>13

<223>Xaa＝Thr或Asn

<400>26

Xaa Ser Ser Gln Ser Xaa Xaa His Ser Xaa Gly Asn Xaa Tyr Leu Glu

 1               5                  10                  15

<210>27

<211>7

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>2

<223>Xaa＝Leu，Val或Ile

<220>

<221>变体

<222>4

<223>Xaa＝Asn或Tyr

<220>

<221>变体

<222>5

<223>Xaa＝Arg或Trp

<220>

<221>变体

<222>6

<223>Xaa＝Phe或Asp

<400>27

Lys Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Ser

 1               5

<210>28

<211>6

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>2

<223>Xaa＝Gly，Ser或Ala

<220>

<221>变体

<222>3

<223>Xaa＝Ser或Thr

<220>

<221>变体

<222>4

<223>Xaa＝His，Glu或Gln

<400>28

Gln Xaa Xaa Xaa Ile Pro

 1               5

<210>29

<211>9

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>3

<223>Xaa＝Gly，Ser或Ala

<220>

<221>变体

<222>4

<223>xaa＝Ser，Ile或Thr

<220>

<221>变体

<222>5

<223>Xaa＝His，Glu或Gln

<220>

<221>变体

<222>6

<223>Xaa＝Ile或Leu

<400>29

Phe Gln Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Tyr Thr

 1               5

<210>30

<211>102

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>30

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

 1               5                  10                  15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser

            20                  25                  30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

        35                  40                  45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

    50                  55                  60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65                  70                  75                  80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

                85                  90                  95

Ser His Ile Pro Tyr Thr

            100

<210>31

<211>102

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>31

Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly

 1               5                  10                  15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser

            20                  25                  30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser

        35                  40                  45

Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

    50                  55                  60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65                  70                  75                  80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

                85                  90                  95

Ser His Ile Pro Tyr Thr

            100

<210>32

<211>102

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>32

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

 1               5                  10                  15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser

            20                  25                  30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

        35                  40                  45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

    50                  55                  60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65                  70                  75                  80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

                85                  90                  95

Ser His Ile Pro Tyr Thr

            100

<210>33

<211>102

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>33

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

 1               5                  10                  15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser

            20                  25                  30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Pro

        35                  40                  45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

    50                  55                  60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65                  70                  75                  80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

                85                  90                  95

Ser His Ile Pro Tyr Thr

            100

<210>34

<211>102

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>34

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

 1               5                  10                  15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser

            20                  25                  30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

        35                  40                  45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

    50                  55                  60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65                  70                  75                  80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

                85                  90                  95

Ser His Ile Pro Tyr Thr

            100

<210>35

<211>102

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>35

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Ser Pro Val Thr Leu Gly

 1               5                  10                  15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser

            20                  25                  30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Pro

        35                  40                  45

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

    50                  55                  60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65                  70                  75                  80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

                85                  90                  95

Ser His Ile Pro Tyr Thr

            100

<210>36

<211>102

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>36

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

 1               5                  10                  15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser

            20                  25                  30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala

        35                  40                  45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

    50                  55                  60

Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile

65                  70                  75                  80

Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

                85                  90                  95

Ser His Ile Pro Tyr Thr

            100

<210>37

<211>102

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>37

Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly

 1               5                  10                  15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Tyr Ser

            20                  25                  30

Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser

        35                  40                  45

Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

    50                  55                  60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65                  70                  75                  80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

                85                  90                  95

Ser His Ile Pro Tyr Thr

            100

<210>38

<211>102

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>38

Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly

 1               5                  10                  15

Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser

            20                  25                  30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

        35                  40                  45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

    50                  55                  60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65                  70                  75                  80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

                85                  90                  95

Ser His Ile Pro Tyr Thr

            100

<210>39

<211>100

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>24

<223>Xaa＝Arg或Lys

<220>

<221>变体

<222>29

<223>Xaa＝Leu或Ile

<220>

<221>变体

<222>30

<223>Xaa＝Lys或Val

<220>

<221>变体

<222>33

<223>Xaa＝Asn或Asp

<220>

<221>变体

<222>36

<223>Xaa＝Thr或Asn

<220>

<221>变体

<222>39

<223>Xaa＝Glu，Asp，Asn，Gln，Tyr，Ala或Ser

<220>

<221>变体

<222>56

<223>Xaa＝Leu，Val或Ile

<220>

<221>变体

<222>58

<223>Xaa＝Asn或Tyr

<220>

<221>变体

<222>59

<223>Xaa＝Arg或Trp

<220>

<221>变体

<222>60

<223>Xaa＝Phe或Asp

<220>

<221>变体

<222>96

<223>Xaa＝Gly，Ser或Ala

<220>

<221>变体

<222>97

<223>Xaa＝Ser，Ile或Thr

<220>

<221>变体

<222>98

<223>Xaa＝His，Glu或Gln

<220>

<221>变体

<222>99

<223>Xaa＝Ile或Leu

<400>39

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

 1               5                  10                  15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Xaa Ser Ser Gln Ser Xaa Xaa His Ser

            20                  25                  30

Xaa Gly Asn Xaa Tyr Leu Xaa Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

        35                  40                  45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Ser Gly Val Pro

    50                  55                  60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65                  70                  75                  80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Xaa

                85                  90                  95

Xaa Xaa Xaa Pro

        100

<210>40

<211>100

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>24

<223>Xaa＝Arg或Lys

<220>

<221>变体

<222>29

<223>Xaa＝Leu或Ile

<220>

<221>变体

<222>30

<223>Xaa＝Lys或Val

<220>

<221>变体

<222>33

<223>Xaa＝Asn或Asp

<220>

<221>变体

<222>36

<223>Xaa＝Thr或Asn

<220>

<221>变体

<222>39

<223>Xaa＝Glu，Asp，Asn，Gln，Tyr，Ala或Ser

<220>

<221>变体

<222>56

<223>Xaa＝Leu，Val或Ile

<220>

<221>变体

<222>58

<223>Xaa＝Asn或Tyr

<220>

<221>变体

<222>59

<223>Xaa＝Arg或Trp

<220>

<221>变体

<222>60

<223>Xaa＝Phe或Asp

<220>

<221>变体

<222>(96)...(0)

<223>Xaa＝Gly，Ser或Ala

<220>

<221>变体

<222>97

<223>Xaa＝Ser，Ile或Thr

<220>

<221>变体

<222>98)

<223>Xaa＝His，Glu或Gln

<220>

<221>变体

<222>99

<223>Xaa＝Ile或Leu

<400>40

Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly

 1               5                  10                  15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Xaa Ser Ser Gln Ser Xaa Xaa His Ser

            20                  25                  30

Xaa Gly Asn Xaa Tyr Leu Xaa Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser

        35                  40                  45

Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Lys Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Ser Gly Val Pro

    50                  55                  60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65                  70                  75                  80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Xaa

                85                  90                  95

Xaa Xaa Xaa Pro

            100

<210>41

<211>100

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>24

<223>Xaa＝Arg或Lys

<220>

<221>变体

<222>29

<223>Xaa＝Leu或Ile

<220>

<221>变体

<222>30

<223>Xaa＝Lys或Val

<220>

<221>变体

<222>33

<223>Xaa＝Asn或Asp

<220>

<221>变体

<222>36

<223>Xaa＝Thr或Asn

<220>

<221>变体

<222>39

<223>Xaa＝Glu，Asp，Asn，Gln，Tyr，Ala或Ser

<220>

<221>变体

<222>56

<223>Xaa＝Leu，Val或Ile

<220>

<221>变体

<222>58

<223>Xaa＝Asn或Tyr

<220>

<221>变体

<222>59

<223>Xaa＝Arg或Trp

<220>

<221>变体

<222>60

<223>Xaa＝Phe或Asp

<220>

<221>变体

<222>96

<223>Xaa＝Gly，Ser或Ala

<220>

<221>变体

<222>97

<223>Xaa＝Ser，Ile或Thr

<220>

<221>变体

<222>98

<223>Xaa＝His，Glu或Gln

<220>

<221>变体

<222>99

<223>Xaa＝Ile或Leu

<400>41

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

 1               5                  10                  15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Xaa Ser Ser Gln Ser Xaa Xaa His Ser

            20                  25                  30

Xaa Gly Asn Xaa Tyr Leu Xaa Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

        35                  40                  45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Ser Gly Val Pro

    50                  55                  60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65                  70                  75                  80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Xaa

                85                  90                  95

Xaa Xaa Xaa Pro

            100

<210>42

<211>100

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>24

<223>Xaa＝Arg或Lys

<220>

<221>变体

<222>29

<223>Xaa＝Leu或Ile

<220>

<221>变体

<222>30

<223>Xaa＝Lys或Val

<220>

<221>变体

<222>33

<223>Xaa＝Asn或Asp

<220>

<221>变体

<222>36

<223>Xaa＝Thr或Asn

<220>

<221>变体

<222>39

<223>Xaa＝Glu，Asp，Asn，Gln，Tyr，Ala或Ser

<220>

<221>变体

<222>56

<223>Xaa＝Leu，Val或Ile

<220>

<221>变体

<222>58

<223>Xaa＝Asn或Tyr

<220>

<221>变体

<222>59

<223>Xaa＝Arg或Trp

<220>

<221>变体

<222>60

<223>Xaa＝Phe或Asp

<220>

<221>变体

<222>96

<223>Xaa＝Gly，Ser或Ala

<220>

<221>变体

<222>97

<223>Xaa＝Ser，Ile或Thr

<220>

<221>变体

<222>98

<223>Xaa＝His，Glu或Gln

<220>

<221>变体

<222>99

<223>Xaa＝Ile或Leu

<400>42

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

 1               5                  10                  15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Xaa Ser Ser Gln Ser Xaa Xaa His Ser

            20                  25                  30

Xaa Gly Asn Xaa Tyr Leu Xaa Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Pro

        35                  40                  45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Ser Gly Val Pro

    50                  55                  60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65                  70                  75                  80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Xaa

                85                  90                  95

Xaa Xaa Xaa Pro

            100

<210>43

<211>100

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>24

<223>Xaa＝Arg或Lys

<220>

<221>变体

<222>29

<223>Xaa＝Leu或Ile

<220>

<221>变体

<222>30

<223>Xaa＝Lys或Val

<220>

<221>变体

<222>33

<223>Xaa＝Asn或Asp

<220>

<221>变体

<222>36

<223>Xaa＝Thr或Asn

<220>

<221>变体

<222>39

<223>Xaa＝Glu，Asp，Asn，Gln，Tyr，Ala或Ser

<220>

<221>变体

<222>56

<223>Xaa＝Leu，Val或Ile

<220>

<221>变体

<222>58

<223>Xaa＝Asn或Tyr

<220>

<221>变体

<222>59

<223>Xaa＝Arg或Trp

<220>

<221>变体

<222>60

<223>Xaa＝Phe或Asp

<220>

<221>变体

<222>96

<223>Xaa＝Gly，Ser或Ala

<220>

<221>变体

<222>97

<223>Xaa＝Ser，Ile或Thr

<220>

<221>变体

<222>98

<223>Xaa＝His，Glu或Gln

<220>

<221>变体

<222>99

<223>Xaa＝Ile或Leu

<400>43

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

 1               5                  10                  15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Xaa Ser Ser Gln Ser Xaa Xaa His Ser

            20                  25                  30

Xaa Gly Asn Xaa Tyr Leu Xaa Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

        35                  40                  45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Ser Gly Val Pro

    50                  55                  60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65                  70                  75                  80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Xaa

                85                  90                  95

Xaa Xaa Xaa Pro

            100

<210>44

<211>100

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>24

<223>Xaa＝Arg或Lys

<220>

<221>变体

<222>29

<223>Xaa＝Leu或Ile

<220>

<221>变体

<222>30

<223>Xaa＝Lys或Val

<220>

<221>变体

<222>33

<223>Xaa＝Asn或Asp

<220>

<221>变体

<222>36

<223>Xaa＝Thr或Asn

<220>

<221>变体

<222>39

<223>Xaa＝Glu，Asp，Asn，Gln，Tyr，Ala或Ser

<220>

<221>变体

<222>56

<223>Xaa＝Leu，Val或Ile

<220>

<221>变体

<222>58

<223>Xaa＝Asn或Tyr

<220>

<221>变体

<222>59

<223>Xaa＝Arg或Trp

<220>

<221>变体

<222>60

<223>Xaa＝Phe或Asp

<220>

<221>变体

<222>96

<223>Xaa＝Gly，Ser或Ala

<220>

<221>变体

<222>97

<223>Xaa＝Ser，Ile或Thr

<220>

<221>变体

<222>98

<223>Xaa＝His，Glu或Gln

<220>

<221>变体

<222>99

<223>Xaa＝Ile或Leu

<400>44

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Ser Pro Val Thr Leu Gly

 1               5                  10                  15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Xaa Ser Ser Gln Ser Xaa Xaa His Ser

            20                  25                  30

Xaa Gly Asn Xaa Tyr Leu Xaa Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Pro

        35                  40                  45

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Ser Gly Val Pro

    50                  55                  60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65                  70                  75                  80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Xaa

                85                  90                  95

Xaa Xaa Xaa Pro

            100

<210>45

<211>100

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>24

<223>Xaa＝Arg或Lys

<220>

<221>变体

<222>29

<223>Xaa＝Leu或Ile

<220>

<221>变体

<222>30

<223>Xaa＝Lys或Val

<220>

<221>变体

<222>33

<223>Xaa＝Asn或Asp

<220>

<221>变体

<222>36

<223>Xaa＝Thr或Asn

<220>

<221>变体

<222>39

<223>Xaa＝Glu，Asp，Asn，Gln，Tyr，Ala或Ser

<220>

<221>变体

<222>56

<223>Xaa＝Leu，Val或Ile

<220>

<221>变体

<222>58

<223>Xaa＝Asn或Tyr

<220>

<221>变体

<222>59

<223>Xaa＝Arg或Trp

<220>

<221>变体

<222>60

<223>Xaa＝Phe或Asp

<220>

<221>变体

<222>96

<223>Xaa＝Gly，Ser或Ala

<220>

<221>变体

<222>97

<223>Xaa＝Ser，Ile或Thr

<220>

<221>变体

<222>98

<223>Xaa＝His，Glu或Gln

<220>

<221>变体

<222>99

<223>Xaa＝Ile或Leu

<400>45

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

 1               5                  10                  15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Xaa Ser Ser Gln Ser Xaa Xaa His Ser

            20                  25                  30

Xaa Gly Asn Xaa Tyr Leu Xaa Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala

        35                  40                  45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Ser Gly Val Pro

    50                  55                  60

Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile

65                  70                  75                  80

Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gln Xaa

                85                  90                  95

Xaa Xaa Xaa Pro

            100

<210>46

<211>100

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>24

<223>Xaa＝Arg或Lys

<220>

<221>变体

<222>29

<223>Xaa＝Leu或Ile

<220>

<221>变体

<222>30

<223>Xaa＝Lys或Val

<220>

<221>变体

<222>33

<223>Xaa＝Asn或Asp

<220>

<221>变体

<222>36

<223>Xaa＝Thr或Asn

<220>

<221>变体

<222>39

<223>Xaa＝Glu，Asp，Asn，Gln，Tyr，Ala或Ser

<220>

<221>变体

<222>56

<223>Xaa＝Leu，Val或Ile

<220>

<221>变体

<222>58

<223>Xaa＝Asn或Tyr

<220>

<221>变体

<222>59

<223>Xaa＝Arg或Trp

<220>

<221>变体

<222>60

<223>Xaa＝Phe或Asp

<220>

<221>变体

<222>96

<223>Xaa＝Gly，Ser或Ala

<220>

<221>变体

<222>97

<223>Xaa＝Ser，Ile或Thr

<220>

<221>变体

<222>98

<223>Xaa＝His，Glu或Gln

<220>

<221>变体

<222>99

<223>Xaa＝Ile或Leu

<400>46

Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly

 1               5                  10                  15

Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Xaa Ser Ser Gln Ser Xaa Xaa His Ser

            20                  25                  30

Xaa Gly Asn Xaa Tyr Leu Xaa Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

        35                  40                  45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Ser Gly Val Pro

    50                  55                  60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65                  70                  75                  80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Xaa

                85                  90                  95

Xaa Xaa Xaa Pro

            100

<210>47

<211>11

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>47

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

 1               5                  10

<210>48

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>2

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>3

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>9

<223>Xaa＝Met或Ile

<400>48

Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr Tyr Xaa His

 1               5                  10

<210>49

<211>17

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>1

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>5

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>12

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>13

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>49

Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe Gln

 1               5                  10                  15

Gly

<210>50

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>50

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

 1               5                  10                  15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

        35                  40                  45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>51

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>51

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

 1               5                  10                  15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met

        35                  40                  45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>52

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>52

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

 1               5                  10                  15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

        35                  40                  45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asn Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>53

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>53

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

 1               5                  10                  15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

        35                  40                  45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>54

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>54

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

 1               5                  10                  15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

        35                  40                  45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Thr Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>55

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>55

Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Thr Gly Ser

 1               5                  10                  15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Ala Leu Glu Trp Met

        35                  40                  45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Arg Ser Met Ser Thr Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>56

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>56

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

 1               5                  10                  15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

        35                  40                  45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65                  70                  75                  80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>57

<211>107

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>57

Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Thr

 1               5                  10                  15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Arg Gln Arg Leu Glu Trp Ile Gly Arg

        35                  40                  45

Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe Gln Gly

    50                  55                  60

Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Met Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu

65                  70                  75                  80

Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala

                85                  90                  95

Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>58

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>58

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Ala Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>59

<211>110

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>59

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Ser Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Lys Asp Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105                 110

<210>60

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>60

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Ile His Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Ser Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>61

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>61

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Thr Thr Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>62

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>62

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Ser Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr His Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>63

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>63

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Ser Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>64

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>64

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Ser Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Lys Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>65

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>65

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Ala Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Lys Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>66

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>66

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Ala Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>67

<211>110

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>67

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Val Val Val Gln Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Ser Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Lys Asp Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105                 110

<210>68

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>68

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Ser Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>69

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>69

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Ile His Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Gly Ser Lys Ser Ile Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Thr Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>70

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>70

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val

        35                  40                  45

Ser Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Gly Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>71

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>71

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

        35                  40                  45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>72

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>72

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Ala Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Lys Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>73

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>73

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Ala Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>74

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>74

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>75

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>75

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Ala Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Lys Ala Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>76

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>76

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

        35                  40                  45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>77

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>77

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>78

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>78

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Ala Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>79

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>79

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>80

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>80

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

        35                  40                  45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>81

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>81

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Gly Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

        35                  40                  45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>82

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>82

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

 1               5                  10                  15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Gly Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile

        35                  40                  45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>83

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>83

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

 1               5                  10                  15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

        35                  40                  45

Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>84

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>84

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

 1               5                  10                  15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met

        35                  40                  45

Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>85

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>85

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

 1               5                  10                  15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

        35                  40                  45

Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asn Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>86

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>86

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

 1               5                  10                  15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

        35                  40                  45

Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>87

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>87

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

 1               5                  10                  15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

        35                  40                  45

Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Thr Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>88

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>88

Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Thr Gly Ser

 1               5                  10                  15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Ala Leu Glu Trp Met

        35                  40                  45

Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Arg Ser Met Ser Thr Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>89

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>89

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

 1               5                  10                  15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

        35                  40                  45

Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65                  70                  75                  80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>90

<211>107

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>90

Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Thr

 1               5                  10                  15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Arg Gln Arg Leu Glu Trp Ile Gly Xaa

        35                  40                  45

Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe Gln Gly

    50                  55                  60

Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Met Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu

65                  70                  75                  80

Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala

                85                  90                  95

Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>91

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>91

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Ala Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>92

<211>110

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>92

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Ser Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Lys Asp Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105                 110

<210>93

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>93

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Xaa His Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Ser Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>94

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>94

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Thr Thr Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>95

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>95

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Ser Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr His Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>96

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>96

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Ser Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>97

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>97

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Ser Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Lys Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>98

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>98

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Ala Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Lys Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>99

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>99

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Ala Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>100

<211>110

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>100

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Val Val Val Gln Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Ser Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Lys Asp Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105                 110

<210>101

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>101

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Ser Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>102

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>102

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Xaa His Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Gly Ser Lys Ser IleAla Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Thr Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>103

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>103

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val

        35                  40                  45

Ser Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Gly Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

          100                 105

<210>104

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>104

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

        35                  40                  45

Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>105

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>105

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Ala Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Lys Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>106

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>106

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Ala Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>107

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>107

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>108

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>108

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Ala Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Lys Ala Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>109

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>109

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

        35                  40                  45

Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>110

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>110

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>111

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>111

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Ala Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>112

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>112

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>113

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>113

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

        35                  40                  45

Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala ValTyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>114

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>114

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Gly Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

        35                  40                  45

Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>115

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<220>

<221>变体

<222>27

<223>Xaa＝Tyr或Phe

<220>

<221>变体

<222>28

<223>Xaa＝Asn或Thr

<220>

<221>变体

<222>34

<223>Xaa＝Met或Ile

<220>

<221>变体

<222>50

<223>Xaa＝Trp或Arg

<220>

<221>变体

<222>54

<223>Xaa＝Gly或Ala

<220>

<221>变体

<222>61

<223>Xaa＝Ser或Asp

<220>

<221>变体

<222>62

<223>Xaa＝Pro或Gln

<400>115

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

 1               5                  10                  15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Gly Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Xaa His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile

        35                  40                  45

Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

            100                 105

<210>116

<211>11

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>116

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser

 1               5                  10

<210>117

<211>11

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>117

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

 1               5                  10

<210>118

<211>11

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>118

Gln Ala Ser Gln Gly Thr Ser Ile Asn Leu Asn

 1               5                  10

<210>119

<211>7

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>119

Gly Ala Ser Asn Leu Glu Asp

 1               5

<210>120

<211>9

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>120

Leu Gln His Ser Tyr Leu Pro Trp Thr

 1               5

<210>121

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>121

Gly Phe Ser Leu Thr Gly Tyr Gly Val Asn

 1          5                  10

<210>122

<211>14

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>122

Ile Ile Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu

 1               5                  10

<210>123

<211>16

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>123

Asp Lys Thr Phe Tyr Tyr Asp Gly Phe Tyr Arg Gly Arg Met Asp Tyr

 1               5                  10                  15

<210>124

<211>113

<212>PRT

<213>人(Homo sapiens)

<400>124

Pro Gly Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Arg Glu Leu Ile Glu Glu

 1               5                  10                  15

Leu Val Asn Ile Thr Gln Asn Gln Lys Ala Pro Leu Cys Asn Gly Ser

            20                  25                  30

Met Val Trp Ser Ile Asn Leu Thr Ala Gly Met Tyr Cys Ala Ala Leu

        35                  40                  45

Glu Ser Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala Ile Glu Lys Thr Gln

    50                  55                  60

Arg Met Leu Ser Gly Phe Cys Pro His Lys Val Ser Ala Gly Gln Phe

65                  70                  75                  80

Ser Ser Leu His Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu Val Ala Gln Phe Val

                85                  90                  95

Lys Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly Arg Phe

            100                 105                 110

Asn

<210>125

<211>427

<212>PRT

<213>人

<400>125

Met Glu Trp Pro Ala Arg Leu Cys Gly Leu Trp Ala Leu Leu Leu Cys

 1               5                  10                  15

Ala Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Ala Ala Pro Thr Glu Thr Gln

            20                  25                  30

Pro Pro Val Thr Asn Leu Ser Val Ser Val Glu Asn Leu Cys Thr Val

        35                  40                  45

Ile Trp Thr Trp Asn Pro Pro Glu Gly Ala Ser Ser Asn Cys Ser Leu

    50                  55                  60

Trp Tyr Phe Ser His Phe Gly Asp Lys Gln Asp Lys Lys Ile Ala Pro

65                  70                  75                  80

Glu Thr Arg Arg Ser Ile Glu Val Pro Leu Asn Glu Arg Ile Cys Leu

                85                  90                  95

Gln Val Gly Ser Gln Cys Ser Thr Asn Glu Ser Glu Lys Pro Ser Ile

            100                 105                 110

Leu Val Glu Lys Cys Ile Ser Pro Pro Glu Gly Asp Pro Glu Ser Ala

        115                 120                 125

Val Ile Glu Leu Gln Cys Ile Trp His Asn Leu Ser Tyr Met Lys Cys

    130                 135                 140

Ser Trp Leu Pro Gly Arg Asn Thr Ser Pro Asp Thr Asn Tyr Thr Leu

145                 150                 155                 160

Tyr Tyr Trp His Arg Ser Leu Glu Lys Ile His Gln Cys Glu Asn Ile

                165                 170                 175

Phe Arg Glu Gly Gln Tyr Phe Gly Cys Ser Phe Asp Leu Thr Lys Val

            180                 185                 190

Lys Asp Ser Ser Phe Glu Gln His Ser Val Gln Ile Met Val Lys Asp

        195                 200                 205

Asn Ala Gly Lys Ile Lys Pro Ser Phe Asn Ile Val Pro Leu Thr Ser

    210                 215                 220

Arg Val Lys Pro Asp Pro Pro His Ile Lys Asn Leu Ser Phe His Asn

225                 230                 235                 240

Asp Asp Leu Tyr Val Gln Trp Glu Asn Pro Gln Asn Phe Ile Ser Arg

                245                 250                 255

Cys Leu Phe Tyr Glu Val Glu Val Asn Asn Ser Gln Thr Glu Thr His

             260                 265                 270

Asn Val Phe Tyr Val Gln Glu Ala Lys Cys Glu Asn Pro Glu Phe Glu

        275                 280                 285

Arg Asn Val Glu Asn Thr Ser Cys Phe Met Val Pro Gly Val Leu Pro

    290                 295                 300

Asp Thr Leu Asn Thr Val Arg Ile Arg Val Lys Thr Asn Lys Leu Cys

305                 310                 315                 320

Tyr Glu Asp Asp Lys Leu Trp Ser Asn Trp Ser Gln Glu Met Ser Ile

                325                 330                 335

Gly Lys Lys Arg Asn Ser Thr Leu Tyr Ile Thr Met Leu Leu Ile Val

            340                 345                 350

Pro Val Ile Val Ala Asp Ala Ile Ile Val Leu Leu Leu Tyr Leu Lys

        355                 360                 365

Arg Leu Lys Ile Ile Ile Phe Pro Pro Ile Pro Asp Pro Gly Lys Ile

    370                 375                 380

Phe Lys Glu Met Phe Gly Asp Gln Asn Asp Asp Thr Leu His Trp Lys

385                 390                 395                 400

Lys Tyr Asp Ile Tyr Glu Lys Gln Thr Lys Glu Glu Thr Asp Ser Val

                405                 410                 415

Val Leu Ile Glu Asn Leu Lys Lys Ala Ser Gln

            420                 425

<210>126

<211>101

<212>PRT

<213>人

<400>126

Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly

 1               5                  10                  15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Tyr Ser

            20                  25                  30

Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser

        35                  40                  45

Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

    50                  55                  60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65                  70                  75                  80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Gly

                85                  90                  95

Thr His Trp Pro Pro

            100

<210>127

<211>20

<212>PRT

<213>食蟹猴

<400>127

Met Ala Leu Leu Leu Thr Met Val Ile Ala Leu Thr Cys Leu Gly Gly

 1               5                  10                  15

Phe Ala Ser Pro

            20

<210>128

<211>329

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>128

Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val  Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser

 1                   5                   10                  15

Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe

                20                  25                  30

Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly

        35                  40                  45

Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu

    50                  55                  60

Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr

65                  70                  75                  80

Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys

                85                  90                  95

Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

            100                 105                 110

Ala Pro Glu Ala Leu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

        115                 120                 125

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

    130                 135                 140

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

145                 150                 155                 160

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

                165                 170                 175

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

            180                 185                 190

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

        195                 200                 205

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

    210                 215                 220

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met

225                 230                 235                 240

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

                245                 250                 255

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

            260                 265                 270

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

        275                 280                 285

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

    290                 295                 300

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

305                 310                 315                 320

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

                325

<210>129

<211>360

<212>DNA

<213>小鼠(Mus musculus)

<400>129

gaggttcagc tgcagcagtc tggggcagag cttgtgaagc caggggcctc agtcaagttg     60

tcctgcacag gttctggctt caacattaaa gacacctata tacactgggt gaagcagagg    120

cctgaacagg gcctggagtg gattggaagg attgatcctg cgaatgataa tattaaatat    180

gacccgaagt tccagggcaa ggccactata acagcagaca catcctccaa cacagcctac    240

ctacagctca acagcctgac atctgaggac actgccgtct attactgtgc tagatctgag    300

gaaaattggt acgacttttt tgactactgg ggccaaggca ccactctcac agtctcctca    360

<210>130

<211>120

<212>PRT

<213>小鼠

<400>130

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

 1               5                  10                  15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Gly Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile

        35                  40                  45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

            100                 105                 110

Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser

        115                 120

<210>131

<211>19

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>131

Met Lys Cys Ser Trp Val Ile Phe Phe Leu Met Ala Val Val Thr Gly

 1               5                  10                  15

Val Asn Ser

<210>132

<211>336

<212>DNA

<213>小鼠

<400>132

gatgttttga tgacccaaac tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc     60

atctcttgca ggtctagtca gagcattgta catagtaatg gaaacaccta tttagaatgg    120

tacctgcaga aaccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaagtttc caaccgattt    180

tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatt    240

agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tattactgct ttcaaggttc acatattccg    300

tacacgttcg gaggggggac caagc tggaa ataaaa                             336

<210>133

<211>112

<212>PRT

<213>小鼠

<400>133

Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly

 1               5                  10                  15

Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser

            20                  25                  30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

        35                  40                  45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

    50                  55                  60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65                  70                  75                  80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

                85                  90                  95

Ser His Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

            100                 105                 110

<210>134

<211>19

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>134

Met Lys Leu Pro Val Arg Leu Leu Val Leu Met Phe Trp Ile Pro Ala

 1               5                  10                  15

Ser Ser Ser

<210>135

<211>429

<212>DNA

<213>小鼠

<400>135

atggctgtcc tggcattact cttctgcctg gtaacattcc caagctgtat cctttcccag     60

gtgcagctga aggagtcagg acctggcctg gtggcgccct cacagagcct gtccatcaca    120

tgcaccgtct cagggttctc attaaccggc tatggtgtaa actgggttcg ccagcctcca    180

ggaaagggtc tggagtggct gggaataatt tggggtgatg gaagcacaga ctataattca    240

gctctcaaat ccagactgat catcaacaag gacaactcca agagccaagt tttcttaaaa    300

atgaacagtc tgcaaactga tgacacagcc aggtacttct gtgccagaga taagactttt    360

tactacgatg gtttctacag gggcaggatg gactactggg gtcaaggaac ctcagtcacc    420

gtctcctca                                                            429

<210>136

<211>124

<212>PRT

<213>小鼠

<400>136

Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln

 1               5                  10                  15

Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Gly Tyr

            20                  25                  30

Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu

        35                  40                  45

Gly Ile Ile Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys

    50                  55                  60

Ser Arg Leu Ile Ile Asn Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu

65                  70                  75                  80

Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Arg Tyr Phe Cys Ala

                85                  90                  95

Arg Asp Lys Thr Phe Tyr Tyr Asp Gly Phe Tyr Arg Gly Arg Met Asp

            100                 105                 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

        115                 120

<210>137

<211>124

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>137

Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln

 1               5                  10                  15

Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Gly Tyr

            20                  25                  30

Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu

        35                  40                  45

Gly Ile Ile Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys

    50                  55                  60

Ser Arg Leu Ile Ile Asn Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu

65                  70                  75                  80

Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Arg Tyr Phe Cys Ala

                85                  90                  95

Arg Asp Lys Thr Phe Tyr Tyr Asp Gly Phe Tyr Arg Gly Arg Met Asp

            100                 105                 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

        115                 120

<210>138

<211>387

<212>DNA

<213>小鼠

<400>138

atgaacacga gggcccctgc tgagttcctt gggttcctgt tgctctggtt tttaggtgcc     60

agatgtgatg tccagatgat tcagtctcca tcctccctgt ctgcatcttt gggagacatt    120

gtcaccatga cttgccaggc aagtcagggc actagcatta atttaaactg gtttcagcaa    180

aaaccaggga aagctcctaa gctcctgatc tttggtgcaa gcaacttgga agatggggtc    240

ccatcaaggt tcagtggcag tagatatggg acaaatttca ctctcaccat cagcagcctg    300

gaggatgaag atatggcaac ttatttctgt ctacagcata gttatctccc gtggacgttc    360

ggtggcggca ccaaactgga aatcaaa                                        387

<210>139

<211>107

<212>PRT

<213>小鼠

<400>139

Asp Val Gln Met Ile Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly

 1               5                  10                  15

Asp Ile Val Thr Met Thr Cys Gln Ala Ser Gln Gly Thr Ser Ile Asn

            20                  25                  30

Leu Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

        35                  40                  45

Phe Gly Ala Ser Asn Leu Glu Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

    50                  55                  60

Ser Arg Tyr Gly Thr Asn Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Asp

65                  70                  75                  80

Glu Asp Met Ala Thr Tyr Phe Cys Leu Gln His Ser Tyr Leu Pro Trp

                85                  90                  95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

            100                 105

<210>140

<211>22

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>140

Met Asn Thr Arg Ala Pro Ala Glu Phe Leu Gly Phe Leu Leu Leu Trp

 1               5                  10                  15

Phe Leu Gly Ala Arg Cys

            20

<210>141

<211>329

<212>PRT

<213>人

<400>141

Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser

 1                   5                  10                  15

Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe

                20                  25                  30

Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly

        35                  40                  45

Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu

    50                  55                  60

Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr

65                  70                  75                  80

Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys

                85                  90                  95

Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

            100                 105                 110

Ala Pro Glu Ala Leu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

        115                 120                 125

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

    130                 135                 140

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

145                 150                 155                 160

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

                165                 170                 175

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

            180                 185                 190

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

        195                 200                 205

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

    210                 215                 220

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met

225                 230                 235                 240

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

                245                 250                 255

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

            260                 265                 270

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

        275                 280                 285

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

    290                 295                 300

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

305                 310                 315                 320

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

                325

<210>142

<211>417

<212>DNA

<213>小鼠

<400>142

atgaaatgca gctgggttat cttcttcctg atggcagtgg ttacaggggt caattcagag     60

gttcagctgc agcagtctgg ggcagagctt gtgaagccag gggcctcagt caagttgtcc    120

tgcacaggtt ctggcttcaa cattaaagac acctatatac actgggtgaa gcagaggcct    180

gaacagggcc tggagtggat tggaaggatt gatcctgcga atgataatat taaatatgac    240

ccgaagttcc agggcaaggc cactataaca gcagacacat cctccaacac agcctaccta    300

cagctcaaca gcctgacatc tgaggacact gccgtctatt actgtgctag atctgaggaa    360

aattggtacg acttttttga ctactggggc caaggcacca ctctcacagt ctcctca       417

<210>143

<211>139

<212>PRT

<213>小鼠

<400>143

Met Lys Cys Ser Trp Val Ile Phe Phe Leu Met Ala Val Val Thr Gly

 1               5                  10                  15

Val Asn Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys

            20                  25                  30

Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Gly Ser Gly Phe Asn Ile

        35                  40                  45

Lys Asp Thr Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu

    50                  55                  60

Glu Trp Ile Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp

65                  70                  75                  80

Pro Lys Phe Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn

                85                  90                  95

Thr Ala Tyr Leu Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val

            100                 105                 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

        115                 120                 125

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser

    130                 135

<210>144

<211>393

<212>DNA

<213>小鼠

<400>144

atgaagttgc ctgttaggct gttggtgctg atgttctgga ttcctgcttc cagcagtgat     60

gttttgatga cccaaactcc actctccctg cctgtcagtc ttggagatca agcctccatc    120

tcttgcaggt ctagtcagag cattgtacat agtaatggaa acacctattt agaatggtac    180

ctgcagaaac caggccagtc tccaaagctc ctgatctaca aagtttccaa ccgattttct    240

ggggtcccag acaggttcag tggcagtgga tcagggacag atttcacact caagattagc    300

agagtggagg ctgaggatct gggagtttat tactgctttc aaggttcaca tattccgtac    360

acgttcggag gggggaccaa gctggaaata aaa                                 393

<210>145

<211>131

<212>PRT

<213>小鼠

<400>145

Met Lys Leu Pro Val Arg Leu Leu Val Leu Met Phe Trp Ile Pro Ala

 1               5                  10                  15

Ser Ser Ser Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val

            20                  25                  30

Ser Leu Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile

        35                  40                  45

Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro

    50                  55                  60

Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser

65                  70                  75                  80

Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

                85                  90                  95

Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys

            100                 105                 110

Phe Gln Gly Ser His Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu

        115                 120                 125

Glu Ile Lys

    130

<210>146

<211>417

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>146

atggattgga cctggcgcat cctgttcctg gtggccgctg ccaccggcgc tcactctcag     60

gtgcagctgg tgcagtctgg cgccgaggtg aagaagcctg gcgcttccgt gaaggtgtcc    120

tgtaaggcct ccggcttcaa catcaaggac acctacatcc actgggtgcg gcaggctccc    180

ggccagcggc tggagtggat gggccggatc gatcctgcca acgacaacat caagtacgac    240

cccaagtttc agggccgcgt gaccatcacc cgcgatacct ccgcttctac cgcctacatg    300

gagctgtcta gcctgcggag cgaggatacc gccgtgtact actgcgcccg ctccgaggag    360

aactggtacg acttcttcga ctactggggc cagggcaccc tggtgaccgt gtcctct       417

<210>147

<211>144

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>147

Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly

 1               5                  10                  15

Ala His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys

            20                  25                  30

Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile

        35                  40                  45

Lys Asp Thr Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu

    50                  55                  60

Glu Trp Met Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp

65                  70                  75                  80

Pro Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser

                85                  90                  95

Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val

            100                 105                 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

        115                 120                 125

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Glu Ser Cys Arg

    130                 135                 140

<210>148

<211>396

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>148

atgcggctgc ccgctcagct gctgggcctg ctgatgctgt gggtgcccgg ctcttccggc     60

gacgtggtga tgacccagtc ccctctgtct ctgcccgtga ccctgggcca gcccgcttct    120

atctcttgcc ggtcctccca gtccatcgtg cactccaacg gcaacaccta cctggagtgg    180

tttcagcaga gacccggcca gtctcctcgg cggctgatct acaaggtgtc caaccgcttt    240

tccggcgtgc ccgatcggtt ctccggcagc ggctccggca ccgatttcac cctgaagatc    300

agccgcgtgg aggccgagga tgtgggcgtg tactactgct tccagggctc ccacatccct    360

tacacctttg gcggcggaac caaggtggag atcaag                              396

<210>149

<211>132

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>149

Met Arg Leu Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Met Leu Trp Val Pro

 1               5                  10                  15

Gly Ser Ser Gly Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro

            20                  25                  30

Val Thr Leu Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser

        35                  40                  45

Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Phe Gln Gln Arg

    50                  55                  60

Pro Gly Gln Ser Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe

65                  70                  75                  80

Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe

                85                  90                  95

Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr

            100                 105                 110

Cys Phe Gln Gly Ser His Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys

        115                 120                 125

Val Glu Ile Lys

    130

<210>150

<211>417

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>150

atggagctgg gcctgtcttg ggtgttcctg gtggctatcc tggagggcgt gcagtgcgag     60

gtgcagctgg tggagtctgg cggcggactg gtgcagcctg gcggctctct gcggctgtct    120

tgcgccgctt ccggcttcaa catcaaggac acctacatcc actgggtgcg gcaggctccc    180

ggcaagggcc tggagtgggt ggcccggatc gatcctgcca acgacaacat caagtacgac    240

cccaagttcc agggccggtt caccatctct cgcgacaacg ccaagaactc cctgtacctc    300

cagatgaact ctctgcgcgc cgaggatacc gccgtgtact actgcgcccg gagcgaggag    360

aactggtacg acttcttcga ctactggggc cagggcaccc tggtgaccgt gtcctct       417

<210>151

<211>139

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>151

Met Glu Leu Gly Leu Ser Trp Val Phe Leu Val Ala Ile Leu Glu Gly

 1               5                  10                  15

Val Gln Cys Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln

            20                  25                  30

Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile

        35                  40                  45

Lys Asp Thr Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu

    50                  55                  60

Glu Trp Val Ala Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp

65                  70                  75                  80

Pro Lys Phe Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn

                85                  90                  95

Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val

            100                 105                 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr

        115                 120                 125

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

    130                 135

<210>152

<211>405

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>152

atggatatgc gcgtgcccgc tcagctgctg ggcctgctgc tgctgtggct gcgcggagcc     60

cgctgcgata tccagatgac ccagtcccct tcttctctgt ccgcctctgt gggcgatcgc    120

gtgaccatca cctgtcggtc ctcccagtcc atcgtgcact ccaacggcaa cacctacctg    180

gagtggtatc agcagaagcc cggcaaggcc cctaagctgc tgatctacaa ggtgtccaac    240

cgcttttccg gcgtgccttc tcggttctcc ggctccggct ccggcaccga tttcaccctg    300

accatctcct ccctccagcc cgaggatttc gccacctact actgcttcca gggctcccac    360

atcccttaca cctttggcgg cggaaccaag gtggagatca agcgt                    405

<210>153

<211>135

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>153

Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp

 1               5                  10                  15

Leu Arg Gly Ala Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser

            20                  25                  30

Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser

        35                  40                  45

Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Gln

    50                  55                  60

Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn

65                  70                  75                  80

Arg Phe Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr

                85                  90                  95

Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr

            100                 105                 110

Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly Ser His Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly

        115                 120                 125

Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

    130                 135

<210>154

<211>360

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>154

gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggctc tctgcggctg     60

tcttgcgccg cttccggctt caacatcaag gacacctaca tccactgggt gcggcaggct    120

cccggcaagg gcctggagtg gatcggccgg atcgatcctg ccaacgacaa catcaagtac    180

gaccccaagt tccagggccg gttcaccatc tctcgcgaca acgccaagaa ctccctgtac    240

ctccagatga actctctgcg cgccgaggat accgccgtgt actactgcgc ccggagcgag    300

gagaactggt acgacttctt cgactactgg ggccagggca ccctggtgac cgtgtcctct    360

<210>155

<211>120

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>155

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

        35                  40                  45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

            100                 105                 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

        115                 120

<210>156

<211>360

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>156

gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggctc tctgcggctg     60

tcttgcgccg cttccggctt caacatcaag gacacctaca tccactgggt gcggcaggct    120

cccggcaagg gcctggagtg ggtggcccgg atcgatcctg ccaacgacaa catcaagtac    180

gaccccaagt tccagggcaa ggccaccatc tctcgcgaca acgccaagaa ctccctgtac    240

ctccagatga actctctgcg cgccgaggat accgccgtgt actactgcgc ccggagcgag    300

gagaactggt acgacttctt cgactactgg ggccagggca ccctggtgac cgtgtcctct    360

<210>157

<211>120

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>157

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Ala Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Lys Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

            100                 105                 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

        115                 120

<210>158

<211>360

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>158

gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggctc tctgcggctg     60

tcttgcgccg cttccggctt caacatcaag gacacctaca tccactgggt gcggcaggct    120

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ctccagatga actctctgcg cgccgaggat accgccgtgt actactgcgc ccggagcgag    300

gagaactggt acgacttctt cgactactgg ggccagggca ccctggtgac cgtgtcctct    360

<210>159

<211>120

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>159

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Ala Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

            100                 105                 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

        115                 120

<210>160

<211>360

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>160

gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggctc tctgcggctg     60

tcttgcgccg cttccggctt caacatcaag gacacctaca tccactgggt gcggcaggct    120

cccggcaagg gcctggagtg ggtgggccgg atcgatcctg ccaacgacaa catcaagtac    180

gaccccaagt tccagggccg gttcaccatc tctcgcgaca acgccaagaa ctccctgtac    240

ctccagatga actctctgcg cgccgaggat accgccgtgt actactgcgc ccggagcgag    300

gagaactggt acgacttctt cgactactgg ggccagggca ccctggtgac cgtgtcctct    360

<210>161

<211>120

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>161

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

            100                 105                 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

        115                 120

<210>162

<211>360

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>162

gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggctc tctgcggctg     60

tcttgcgccg cttccggctt caacatcaag gacacctaca tccactgggt gcggcaggct    120

cccggcaagg gcctggagtg ggtggcccgg atcgatcctg ccaacgacaa catcaagtac    180

gaccccaagt tccagggcaa ggccaccatc tctgccgaca acgccaagaa ctccctgtac    240

ctccagatga actctctgcg cgccgaggat accgccgtgt actactgcgc ccggagcgag    300

gagaactggt acgacttctt cgactactgg ggccagggca ccctggtgac cgtgtcctct    360

<210>163

<211>120

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>163

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Gl u Trp Val

        35                  40                  45

Ala Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Lys Ala Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

            100                 105                 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

        115                 120

<210>164

<211>360

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>164

gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggctc tctgcggctg     60

tcttgcgccg cttccggctt caacatcaag gacacctaca tccactgggt gcggcaggct    120

cccggcaagg gcctggagtg gatcggccgg atcgatcctg ccaacgacaa catcaagtac    180

gaccccaagt tccagggccg gttcaccatc tctgccgaca acgccaagaa ctccctgtac    240

ctccagatga actctctgcg cgccgaggat accgccgtgt actactgcgc ccggagcgag    300

gagaactggt acgacttctt cgactactgg ggccagggca ccctggtgac cgtgtcctct    360

<210>165

<211>120

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>165

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

        35                  40                  45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

            100                 105                 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

        115                 120

<210>166

<211>360

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>166

gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggctc tctgcggctg     60

tcttgcgccg cttccggctt caacatcaag gacacctaca tccactgggt gcggcaggct    120

cccggcaagg gcctggagtg ggtgggccgg atcgatcctg ccaacgacaa catcaagtac    180

gaccccaagt tccagggccg gttcaccatc tctgccgaca acgccaagaa ctccctgtac    240

ctccagatga actctctgcg cgccgaggat accgccgtgt actactgcgc ccggagcgag    300

gagaactggt acgacttctt cgactactgg ggccagggca ccctggtgac cgtgtcctct    360

<210>167

<211>120

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>167

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

            100                 105                 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

        115                 120

<210>168

<211>360

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>168

gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggctc tctgcggctg     60

tcttgcgccg cttccggctt caacatcaag gacacctaca tccactgggt gcggcaggct    120

cccggcaagg gcctggagtg ggtggcccgg atcgatcctg ccaacgacaa catcaagtac    180

gaccccaagt tccagggccg gttcaccatc tctcgcgaca acgccaagaa ctccgcctac    240

ctccagatga actctctgcg cgccgaggat accgccgtgt actactgcgc ccggagcgag    300

gagaactggt acgacttctt cgactactgg ggccagggca ccctggtgac cgtgtcctct    360

<210>169

<211>120

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>169

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Ala Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

            100                 105                 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

        115                 120

<210>170

<211>360

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>170

gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggctc tctgcggctg     60

tcttgcgccg cttccggctt caacatcaag gacacctaca tccactgggt gcggcaggct    120

cccggcaagg gcctggagtg ggtgggccgg atcgatcctg ccaacgacaa catcaagtac    180

gaccccaagt tccagggccg gttcaccatc tctgccgaca acgccaagaa ctccgcctac    240

ctccagatga actctctgcg cgccgaggat accgccgtgt actactgcgc ccggagcgag    300

gagaactggt acgacttctt cgactactgg ggccagggca ccctggtgac cgtgtcctct    360

<210>171

<211>120

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>171

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

            100                 105                 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

        115                 120

<210>172

<211>360

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>172

gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggctc tctgcggctg     60

tcttgcgccg cttccggctt caacatcaag gacacctaca tccactgggt gcggcaggct    120

cccggcaagg gcctggagtg gatcggccgg atcgatcctg ccaacgacaa catcaagtac    180

gaccccaagt tccagggccg gttcaccatc tctgccgaca acgccaagaa ctccgcctac    240

ctccagatga actctctgcg cgccgaggat accgccgtgt actactgcgc ccggagcgag    300

gagaactggt acgacttctt cgactactgg ggccagggca ccctggtgac cgtgtcctct    360

<210>173

<211>120

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>173

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

        35                  40                  45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

            100                 105                 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

        115                 120

<210>174

<211>360

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>174

gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggctc tctgcggctg     60

tcttgcaccg gctccggctt caacatcaag gacacctaca tccactgggt gcggcaggct    120

cccggcaagg gcctggagtg gatcggccgg atcgatcctg ccaacgacaa catcaagtac    180

gaccccaagt tccagggccg gttcaccatc tctgccgaca acgccaagaa ctccctgtac    240

ctccagatga actctctgcg cgccgaggat accgccgtgt actactgcgc ccggagcgag    300

gagaactggt acgacttctt cgactactgg ggccagggca ccctggtgac cgtgtcctct    360

<210>175

<211>120

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>175

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Gly Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

        35                  40                  45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

            100                 105                 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

        115                 120

<210>176

<211>450

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>176

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

 1               5                  10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

        35                  40                  45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

            100                 105                 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

        115                 120                 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala

    130                 135                 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145                 150                 155                 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

                165                 170                 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

            180                 185                 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys

        195                 200                 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp

    210                 215                 220

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Leu Gly Ala

225                 230                 235                 240

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

                245                 250                 255

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

            260                 265                 270

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

        275                 280                 285

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

    290                 295                 300

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

305                 310                 315                 320

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu

                325                 330                 335

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

            340                 345                 350

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

        355                 360                 365

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

    370                 375                 380

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

385                 390                 395                 400

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp

                405                 410                 415

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

            420                 425                 430

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

        435                 440                 445

Gly Lys

    450

<210>177

<211>219

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>177

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

 1               5                  10                  15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser

            20                  25                  30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala

        35                  40                  45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

    50                  55                  60

Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile

65                  70                  75                  80

Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

                85                  90                  95

Ser His Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

            100                 105                 110

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

        115                 120                 125

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

    130                 135                 140

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

145                 150                 155                 160

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

                165                 170                 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

            180                 185                 190

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

        195                 200                 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

    210                 215

<210>178

<211>132

<212>PRT

<213>人

<400>178

Met Ala Leu Leu Leu Thr Thr Val Ile Ala Leu Thr Cys Leu Gly Gly

 1               5                  10                  15

Phe Ala Ser Pro Gly Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Arg Glu Leu

            20                  25                  30

Ile Glu Glu Leu Val Asn Ile Thr Gln Asn Gln Lys Ala Pro Leu Cys

        35                  40                  45

Asn Gly Ser Met Val Trp Ser Ile Asn Leu Thr Ala Gly Met Tyr Cys

    50                  55                  60

Ala Ala Leu Glu Ser Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala Ile Glu

65                  70                  75                  80

Lys Thr Gln Arg Met Leu Ser Gly Phe Cys Pro His Lys Val Ser Ala

                85                  90                  95

Gly Gln Phe Ser Ser Leu His Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu Val Ala

            100                 105                 110

Gln Phe Val Lys Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu

        115                 120                 125

Gly Arg Phe Asn

    130

<210>179

<211>13

<212>PRT

<213>食蟹猴

<400>179

Met Ala Leu Leu Leu Thr Met Val Ile Ala Leu Thr Cys

 1               5                  10

<210>180

<211>12

<212>PRT

<213>食蟹猴

<400>180

Leu Gly Gly Phe Ala Ser Pro Ser Pro Val Pro Pro

 1               5                  10

<210>181

<211>17

<212>PRT

<213>食蟹猴

<400>181

Ser Pro Ser Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Lys Glu Leu Ile Glu

 1               5                  10                  15

Glu

<210>182

<211>19

<212>PRT

<213>食蟹猴

<400>182

Thr Ala Leu Lys Glu Leu Ile Glu Glu Leu Val Asn Ile Thr Gln Asn

 1               5                  10                  15

Gln Lys Ala

<210>183

<211>22

<212>PRT

<213>食蟹猴

<400>183

Asn Gln Lys Ala Pro Leu Cys Asn Gly Ser Met Val Trp Ser Ile Asn

 1               5                  10                  15

Leu Thr Ala Gly Val Tyr

            20

<210>184

<211>21

<212>PRT

<213>食蟹猴

<400>184

Ile Asn Leu Thr Ala Gly Val Tyr Cys Ala Ala Leu Glu Ser Leu Ile

 1               5                  10                  15

Asn Val Ser Gly Cys

            20

<210>185

<211>21

<212>PRT

<213>食蟹猴

<400>185

Ser Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala Ile Glu Lys Thr Gln Arg

 1               5                  10                  15

Met Ile Asn Gly Phe

            20

<210>186

<211>18

<212>PRT

<213>食蟹猴

<400>186

Gly Phe Cys Pro His Lys Val Ser Ala Gly Gln Phe Ser Ser Leu Arg

 1               5                  10                  15

Val Arg

<210>187

<211>20

<212>PRT

<213>食蟹猴

<400>187

Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu Val Ala Gln Phe Val Lys Asp Leu Leu

 1               5                  10                  15

Val His Leu Lys

            20

<210>188

<211>19

<212>PRT

<213>食蟹猴

<400>188

Phe Val Lys Asp Leu Leu Val His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly

 1               5                  10                  15

Gln Phe Asn

<210>189

<211>396

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的寡核苷酸

<400>189

atgcggctgc ccgctcagct gctgggcctg ctgatgctgt gggtgcccgg ctcttccggc     60

gacgtggtga tgacccagtc ccctctgtct ctgcccgtga ccctgggcca gcccgcttct    120

atctcttgcc ggtcctccca gtccctggtg tactccgacg gcaacaccta cctgaactgg    180

ttccagcaga gacccggcca gtctcctcgg cggctgatct acaaggtgtc caaccgcttt    240

tccggcgtgc ccgatcggtt ctccggctcc ggcagcggca ccgatttcac cctgaagatc    300

agccgcgtgg aggccgagga tgtgggcgtg tactactgct tccagggctc ccacatccct    360

tacacctttg gcggcggaac caaggtggag atcaag                              396

<210>190

<211>132

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>190

Met Arg Leu Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Met Leu Trp Val Pro

 1               5                  10                  15

Gly Ser Ser Gly Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro

            20                  25                  30

Val Thr Leu Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser

        35                  40                  45

Leu Val Tyr Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg

    50                  55                  60

Pro Gly Gln Ser Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe

65                  70                  75                  80

Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe

                85                  90                  95

Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr

            100                 105                 110

Cys Phe Gln Gly Ser His Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys

        115                 120                 125

Val Glu Ile Lys

    130

<210>191

<211>336

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>191

gatgttgtga tgacccaatc tccactctcc ctgcctgtca ctcctggaga gccagcctcc     60

atctcttgca gatctagtca gagcattgtg catagtaatg gaaacaccta cctggaatgg    120

tacctgcaga aaccaggcca gtctccacag ctcctgatct acaaagtttc caaccgattt    180

tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc    240

agcagagtgg aggctgagga tgtgggagtt tattactgct ttcaaagttc acatgttcct    300

ctcaccttcg gtcaggggac caagctggag atcaaa                              336

<210>192

<211>112

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成产生的肽

<400>192

Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

 1               5                  10                  15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser

            20                  25                  30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

        35                  40                  45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

    50                  55                  60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65                  70                  75                  80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ser

                85                  90                  95

Ser His Val Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

            100                 105                 110

<210>193

<211>329

<212>PRT

<213>人

<220>

<221>MUTAGEN

<222>116..

<220>

<221>MUTAGEN

<222>119

<400>193

Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser

1               5                   10                  15

Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe

            20                  25                  30

Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly

        35                  40                  45

Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu

    50                  55                  60

Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr

6                  570                  75                  80

Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys

                85                  90                  95

Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

            100                 105                 110

Ala Pro Glu Ala Leu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

        115                 120                 125

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

    130                 135                 140

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

145                 150                 155                 160

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

                165                 170                 175

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

            180                 185                 190

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

        195                 200                 205

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

    210                 215                 220

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met

225                 230                 235                 240

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

                245                 250                 255

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

            260                 265                 270

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

        275                 280                 285

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

    290                 295                 300

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

305                 310                 315                 320

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

                325

<210>194

<211>132

<212>PRT

<213>人

<400>194

Met Ala Leu Leu Leu Thr Thr Val Ile Ala Leu Thr Cys Leu Gly Gly

1               5                   10                  15

Phe Ala Ser Pro Gly Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Arg Glu Leu

            20                  25                  30

Ile Glu Glu Leu Val Asn Ile Thr Gln Asn Gln Lys Ala Pro Leu Cys

        35                  40                  45

Asn Gly Ser Met Val Trp Ser Ile Asn Leu Thr Ala Gly Met Tyr Cys

    50                  55                  60

Ala Ala Leu Glu Ser Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala Ile Glu

65                  70                  75                  80

Lys Thr Gln Arg Met Leu Ser Gly Phe Cys Pro His Lys Val Ser Ala

                85                  90                  95

Gly Gln Phe Ser Ser Leu His Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu Val Ala

            100                 105                 110

Gln Phe Val Lys Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu

        115                 120                 125

Gly Arg Phe Asn

    130

<210>195

<211>113

<212>PRT

<213>人

<400>195

Pro Gly Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Arg Glu Leu Ile Glu Glu

1               5                   10                  15

Leu Val Asn Ile Thr Gln Asn Gln Lys Ala Pro Leu Cys Asn Gly Ser

            20                  25                  30

Met Val Trp Ser Ile Asn Leu Thr Ala Gly Met Tyr Cys Ala Ala Leu

        35                  40                  45

Glu Ser Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala Ile Glu Lys Thr Gln

    50                  55                  60

Arg Met Leu Ser Gly Phe Cys Pro His Lys Val Ser Ala Gly Gln Phe

65                  70                  75                  80

Ser Ser Leu His Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu Val Ala Gln Phe Val

                85                  90                  95

Lys Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly Arg Phe

            100                 105                 110

Asn

<210>196

<211>10

<212>PRT

<213>小鼠

<400>196

Leu Asp Gly Tyr Tyr Phe Gly Phe Ala Tyr

1               5                   10

<210>197

<211>15

<212>PRT

<213>小鼠

<400>197

Lys Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr Gly Lys Ser Leu Met His

1               5                   10                  15

<210>198

<211>118

<212>PRT

<213>小鼠

<400>198

Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1                5                  10                  15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ile Ser Tyr

            20                  25                  30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Ala Ser Ile Ser Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys

    50                  55                  60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Ile Leu Tyr Leu

65                  70                  75                  80

Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala

                85                  90                  95

Arg Leu Asp Gly Tyr Tyr Phe Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

            100                 105                 110

Thr Val Thr Val Ser Ser

        115

<210>199

<211>111

<212>PRT

<213>小鼠

<400>199

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1               5                   10                  15

Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr

            20                  25                  30

Gly Lys Ser Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro

        35                  40                  45

Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala

    50                  55                  60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn

65                  70                  75                  80

Pro Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn

                85                  90                  95

Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

            100                 105                 110

<210>200

<211>7

<212>PRT

<213>小鼠

<400>200

Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser

<210>201

<211>9

<212>PRT

<213>小鼠

<400>201

Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Trp Thr

1               5

<210>202

<211>6

<212>PRT

<213>小鼠

<400>202

Ile Ser Tyr Ala Met Ser

1               5

<210>203

<211>16

<212>PRT

<213>小鼠

<400>203

Ser Ile Ser Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys Gly

1               5                   10                  15

<210>204

<211>351

<212>DNA

<213>小鼠

<400>204

gaagtgaagc tggtggagtc tgggggaggc ttagtgaaac ctggagggtc cctgaaactc     60

tcctgtgcag cctctggatt cactttcatt agctatgcca tgtcttgggt tcgtcagact    120

ccagagaaga ggctggagtg ggtcgcatcc attagtagtg gtggtaacac ctactatcca    180

gacagtgtga agggccgatt caccatctcc agagataatg ccaggaacat cctatacctg    240

caaatgagca gtctgaggtc tgaggacacg gccatgtatt actgtgcacg acttgatggt    300

tactactttg gatttgctta ctggggccaa gggactctgg tcgctgtctc t             351

<210>205

<211>354

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>部分人源化抗体重链

<400>205

gaggtcaagc tggtggagtc agggggaggc ttagtgcaac ctggagggtc cctgagactc     60

tcctgtgcag cctctggatt cactttcatt agctatgcca tgtcttgggt tcgtcaggct    120

ccagggaagg ggctggagtg ggtcgcatcc attagtagtg gtggtaacac ctactatcca    180

gacagcgtga agggccgatt caccatctcc agagataatg ccaagaacag cctatacctg    240

caaatgaaca gtctgagggc tgaggacacg gccgtgtatt actgtgcacg acttgatggt    300

tactactttg gatttgctta ctggggccaa gggaccctgg tcaccgtctc ctca          354

<210>206

<211>354

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>完全人源化抗体重链

<400>206

gaggtccagc tggtggagtc agggggaggc ttagtgcaac ctggagggtc cctgagactc     60

tcctgtgcag cctctggatt cactttcatt agctatgcca tgtcttgggt tcgtcaggct    120

ccagggaagg ggctggagtg ggtcgcatcc attagtagtg gtggtaacac ctactatcca    180

gacagcgtga agggccgatt caccatctcc agagataatg ccaagaacag cctatacctg    240

caaatgaaca gtctgagggc tgaggacacg gccgtgtatt actgtgcacg acttgatggt    300

tactactttg gatttgctta ctggggccaa gggaccctgg tcaccgtctc ctca          354

<210>207

<211>354

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>完全人源化抗体重链

<400>207

gaggtccagc tggtggagtc agggggaggc ttagtgaaac ctggagggtc cctgagactc     60

tcctgtgcag cctctggatt cactttcatt agctatgcca tgtcttgggt tcgtcaggct    120

ccagggaagg ggctggagtg ggtctcatcc attagtagtg gtggtaacac ctactatcca    180

gacagtgtga agggccgatt caccatctcc agagataatg ccaagaacag cctatacctg    240

caaatgaaca gtctgagggc tgaggacacg gccgtgtatt actgtgcacg acttgatggt    300

tactactttg gatttgctta ctggggccaa gggaccacgg tcaccgtctc ctca          354

<210>208

<211>118

<212>PRT

<213>小鼠

<400>208

Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1               5                   10                  15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ile Ser Tyr

            20                  25                  30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Ala Ser Ile Ser Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys

    50                  55                  60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Ile Leu Tyr Leu

65                  70                  75                  80

Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala

                85                  90                  95

Arg Leu Asp Gly Tyr Tyr Phe Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

            100                 105                 110

Thr Val Thr Val Ser Ser

        115

<210>209

<211>118

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>部分人源化抗体重链

<400>209

Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1               5                   10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ile Ser Tyr

            20                  25                  30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Ala Ser Ile Ser Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys

    50                  55                  60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu

65                  70                  75                  80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

                85                  90                  95

Arg Leu Asp Gly Tyr Tyr Phe Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

            100                 105                 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

        115

<210>210

<211>118

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>完全人源化抗体重链

<400>210

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1               5                   10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ile Ser Tyr

            20                  25                  30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Ala Ser Ile Ser Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys

    50                  55                  60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu

65                  70                  75                  80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

                85                  90                  95

Arg Leu Asp Gly Tyr Tyr Phe Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

            100                 105                 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

        115

<210>211

<211>118

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>完全人源化抗体重链

<400>211

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

 1              5                   10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ile Ser Tyr

            20                  25                  30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Ser Ser Ile Ser Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys

    50                  55                  60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu

65                  70                  75                  80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

                85                  90                  95

Arg Leu Asp Gly Tyr Tyr Phe Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

            100                 105                 110

Thr Val Thr Val Ser Ser

        115

<210>212

<211>111

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>完全人源化抗体轻链

<400>212

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

 1              5                   10                  15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr

            20                  25                  30

Gly Lys Ser Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro

        35                  40                  45

Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser

    50                  55                  60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65                  70                  75                  80

Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn

                85                  90                  95

Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

            100                 105                 110

<210>213

<211>111

<212>PRT

<213>小鼠

<400>213

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1               5                   10                  15

Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr

            20                  25                  30

Gly Lys Ser Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro

        35                  40                  45

Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala

    50                  55                  60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn

65                  70                  75                  80

Pro Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn

                85                  90                  95

Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

            100                 105                 110

<210>214

<211>111

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>部分人源化抗体轻链

<400>214

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

 1              5                   10                  15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr

            20                  25                  30

Gly Lys Ser Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro

        35                  40                  45

Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser

    50                  55                  60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65                  70                  75                  80

Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn

                85                  90                  95

Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

            100                 105                 110

<210>215

<211>111

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>完全人源化抗体轻链

<400>215

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Pro Gly

1               5                   10                  15

Gln Arg Ala Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr

            20                  25                  30

Gly Lys Ser Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

        35                  40                  45

Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala

    50                  55                  60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn

65                  70                  75                  80

Pro Val Glu Ala Asn Asp Thr Ala Asn Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn

                85                  90                  95

Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

            100                 105                 110

<210>216

<211>107

<212>PRT

<213>人

<400>216

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

1               5                   10                  15

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

            20                  25                  30

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

        35                  40                  45

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

    50                  55                  60

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

65                  70                  75                  80

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

                85                  90                  95

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

            100                 105

<210>217

<211>351

<212>DNA

<213>小鼠

<400>217

gaagtgaagc tggtggagtc tgggggaggc ttagtgaaac ctggagggtc cctgaaactc     60

tcctgtgcag cctctggatt cactttcatt agctatgcca tgtcttgggt tcgtcagact    120

ccagagaaga ggctggagtg ggtcgcatcc attagtagtg gtggtaacac ctactatcca    180

gacagtgtga agggccgatt caccatctcc agagataatg ccaggaacat cctatacctg    240

caaatgagca gtctgaggtc tgaggacacg gccatgtatt actgtgcacg acttgatggt    300

tactactttg gatttgctta ctggggccaa gggactctgg tcgctgtctc t             351

<210>218

<211>333

<212>DNA

<213>小鼠

<400>218

gacattgtgc tgacccaatc tccagcttct ttggctgtgt ctctagggca gagggccacc     60

atatcctgca aagccagtga aagtgttgat aattatggca aaagtttaat gcactggtac    120

cagcagaaac caggacagtc acccaaactc ctcatctatc gtgcatccaa cctagaatct    180

gggatccctg ccaggttcag tggcagtggg tctaggacag acttcaccct caccattaat    240

cctgtggagg ctgatgatgt tgcaacctat tactgtcagc aaagtaatga ggatccgtgg    300

acgttcggtg gaggcaccaa gctggaaatc aaa                                 333

<210>219

<211>333

<212>DNA

<213>小鼠

<400>219

gacattgtgc tgacccaatc tccagcttct ttggctgtgt ctctagggca gagggccacc     60

atatcctgca aagccagtga aagtgttgat aattatggca aaagtttaat gcactggtac    120

cagcagaaac caggacagtc acccaaactc ctcatctatc gtgcatccaa cctagaatct    180

gggatccctg ccaggttcag tggcagtggg tctaggacag acttcaccct caccattaat    240

cctgtggagg ctgatgatgt tgcaacctat tactgtcagc aaagtaatga ggatccgtgg    300

acgttcggtg gaggcaccaa gctggaaatc aaa                                 333

<210>220

<211>333

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>部分人源化抗体轻链

<400>220

gacatccagc tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc     60

atcacttgca aagccagtga aagtgttgat aattatggca aaagtctgat gcactggtat    120

cagcagaaac cagggaaagc tcctaagctc ctgatctatc gtgcatccaa cctggaatct    180

ggcgtcccat caaggttcag tggcagtgga tctcgcacag atttcactct caccatcagc    240

agtctgcaac ctgaagattt tgcaacttac tactgtcagc aaagtaatga ggatccctgg    300

accttcggcg gagggaccaa ggtagagatc aaa                                 333

<210>221

<211>333

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>完全人源化抗体轻链

<400>221

gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc     60

atcacttgca aagccagtga aagtgttgat aattatggca aaagtctgat gcactggtat    120

cagcagaaac cagggaaagc tcctaagctc ctgatctatc gtgcatccaa cctggaatct    180

ggcgtcccat caaggttcag tggcagtgga tctggcacag atttcactct caccatcagc    240

agtctgcaac ctgaagattt tgcaacttac tactgtcagc aaagtaatga ggatccctgg    300

accttcggcg gagggaccaa ggtagagatc aaa                                 333

<210>222

<211>351

<212>DNA

<213>小鼠

<400>222

gaagtgaagc tggtggagtc tgggggaggc ttagtgaaac ctggagggtc cctgaaactc     60

tcctgtgcag cctctggatt cactttcatt agctatgcca tgtcttgggt tcgtcagact    120

ccagagaaga ggctggagtg ggtcgcatcc attagtagtg gtggtaacac ctactatcca    180

gacagtgtga agggccgatt caccatctcc agagataatg ccaggaacat cctatacctg    240

caaatgagca gtctgaggtc tgaggacacg gccatgtatt actgtgcacg acttgatggt    300

tactactttg gatttgctta ctggggccaa gggactctgg tcgctgtctc t             351

<210>223

<211>333

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>完全人源化抗体轻链

<400>223

gacatcgtgc tcactcagtc tccagcttct ttggctgtgt ctccagggca gagggccacc     60

ataacctgca aagccagtga aagtgttgat aattatggca aaagtttaat gcactggtac    120

cagcagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatctatc gtgcatccaa cctagaatct    180

ggggtccctg ccaggttcag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caccattaat    240

cctgtggagg ctaatgatac tgcaaactat tactgtcagc aaagtaatga ggatccgtgg    300

acgttcggtg gagggaccaa ggtggaaata aaa                                 333

<210>224

<211>227

<212>PRT

<213>人

<400>224

Met Gly Trp Leu Cys Ser Gly Leu Leu Phe Pro Val Ser Cys Leu Val

 1               5                  10                  15

Leu Leu Gln Val Ala Ser Ser Gly Asn Met Lys Val Leu Gln Glu Pro

            20                  25                  30

Thr Cys Val Ser Asp Tyr Met Ser Ile Ser Thr Cys Glu Trp Lys Met

        35                  40                  45

Asn Gly Pro Thr Asn Cys Ser Thr Glu Leu Arg Leu Leu Tyr Gln Leu

    50                  55                  60

Val Phe Leu Leu Ser Glu Ala His Thr Cys Ile Pro Glu Asn Asn Gly

65                  70                  75                  80

Gly Ala Gly Cys Val Cys His Leu Leu Met Asp Asp Val Val Ser Ala

                85                  90                  95

Asp Asn Tyr Thr Leu Asp Leu Trp Ala Gly Gln Gln Leu Leu Trp Lys

            100                 105                 110

Gly Ser Phe Lys Pro Ser Glu His Val Lys Pro Arg Ala Pro Gly Asn

        115                 120                 125

Leu Thr Val His Thr Asn Val Ser Asp Thr Leu Leu Leu Thr Trp Ser

    130                 135                 140

Asn Pro Tyr Pro Pro Asp Asn Tyr Leu Tyr Asn His Leu Thr Tyr Ala

145                 150                 155                 160

Val Asn Ile Trp Ser Glu Asn Asp Pro Ala Asp Phe Arg Ile Tyr Asn

                165                 170                 175

Val Thr Tyr Leu Glu Pro Ser Leu Arg Ile Ala Ala Ser Thr Leu Lys

            180                 185                 190

Ser Gly Ile Ser Tyr Arg Ala Arg Val Arg Ala Trp Ala Gln Cys Tyr

        195                 200                 205

Asn Thr Thr Trp Ser Glu Trp Ser Pro Ser Thr Lys Trp His Asn Ser

    210                 215                 220

Asn Ile Cys

225

Claims (43)

1.治疗或预防受试者中IL-13相关的疾病或病症的方法，其包括以单一治疗间隔，用有效减轻或延迟所述疾病或病症的一种或多种症状发作或复发的量向受试者施用IL-13拮抗剂和/或IL-4拮抗剂。

2.权利要求1的方法，其中单一治疗间隔是单剂量的IL-13拮抗剂和/或IL-4拮抗剂。

3.权利要求1的方法，其中单一治疗间隔基本上由从初始剂量起一周或更短时间内的二次或三次剂量的IL-13拮抗剂和/或IL-4拮抗剂组成。

4.权利要求1-3中任一项的方法，其中IL-13拮抗剂和/或IL-4拮抗剂的施用发生在出现任何可检测的疾病或病症的症状之前。

5.权利要求1-3中任一项的方法，其中IL-13拮抗剂和/或IL-4拮抗剂的施用发生在出现了部分疾病或病症的症状之后。

6.权利要求1-5中任一项的方法，其中在暴露于引发或加剧IL-13相关疾病或病症的物质之前施用IL-13拮抗剂和/或IL-4拮抗剂。

7.权利要求6的方法，其中在季节性暴露于变应原之前施用IL-13拮抗剂和/或IL-4拮抗剂。

8.权利要求4或5的方法，其中在IL-13相关疾病或病症的突发或发作再发生之前施用IL-13拮抗剂和/或IL-4拮抗剂。

9.权利要求1-5中任一项的方法，其中在暴露于引发剂或加剧剂之前或之后的1至5天中的任何时间施用IL-13拮抗剂和/或IL-4拮抗剂。

10.权利要求6或9的方法，其中引发或加剧IL-13相关疾病的物质选自变应原、污染物、毒剂、感染或压力。

11.权利要求1-10中任一项的方法，其中IL-13相关疾病或病症的症状包含下列的一种或多种：IgE水平增加、组胺释放增加、嗜伊红粒细胞趋化蛋白水平增加或呼吸症状。

12.权利要求11的方法，其中呼吸症状包含下列的一种或多种：呼吸困难、喘鸣、咳嗽、呼吸短促和/或难以完成日常活动。

13.权利要求1-12中任一项的方法，其中受试者是患有IL-13相关疾病或病症，或具有IL-13相关疾病或病症风险的成人、青少年或儿童。

14.权利要求1-13中任一项的方法，其中IL-13相关疾病或病症是炎性的、呼吸的、变应性的或自身免疫性疾病或病症。

15.权利要求1-14中任一项的方法，其中IL-13相关疾病或病症选自以下一种或多种：IgE相关疾病、特应性疾病、特应性皮炎、荨麻疹、湿疹、变应性鼻炎、变应性肠胃炎、哮喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD)和/或涉及呼吸道炎症、嗜酸性粒细胞增多、纤维变性和过多粘液产生的病症。

16.权利要求1-15中任一项的方法，其中IL-13相关疾病或病症选自以下一种或多种：皮肤的自身免疫病症、特应性皮炎、炎症性肠病(IBD)、溃疡性结肠炎、克隆病、硬化、肝细胞癌、硬皮病、肿瘤、癌、白血病、成胶质细胞瘤、淋巴瘤、病毒感染和/或肝脏纤维变性。

17.权利要求1-16中任一项的方法，其中单一治疗间隔包含大约1-3mg/kg量的IL-13拮抗剂的剂量。

18.权利要求17的方法，其中通过吸入、注射或口服来施用IL-13拮抗剂。

19.权利要求1-18中任一项的方法，其中IL-13拮抗剂和/或IL-4拮抗剂抑制或降低IL-13或IL-4，或IL-13受体或IL-4受体的一种或多种生物学活性。

20.权利要求19的方法，其中生物学活性选自下列的一种或多种：诱导CD23表达、由人B细胞产生IgE、转录因子的磷酸化、STAT6蛋白质的活化、体内抗原诱导的嗜酸性粒细胞增多；体内抗原诱导的支气管缩窄和/或体内药物诱导的呼吸道反应过度。

21.权利要求1-20中任一项的方法，其中IL-13拮抗剂和/或IL-4拮抗剂是结合IL-13、IL-13R、IL-4或IL-4Rα，IL-13R或IL-4Rα的可溶形式的抗体分子；结合至相应受体但基本上不激活受体的IL-13或IL-4突变蛋白；STAT6的小分子抑制剂；肽抑制剂；或核酸表达抑制剂。

22.权利要求21的方法，其中IL-13R是IL-13Rα2或IL-13Rα1。

23.权利要求21的方法，其中IL-13拮抗剂减少选自IL-13/IL-13αR1、IL-13/IL-4Rα、IL-13、IL-13/IL-13Rα1/IL-4Rα或IL-13/IL13Rα2的复合体的形成。

24.权利要求21的方法，其中IL-4拮抗剂减少选自IL-4/IL-4Rα、IL-4/γ共有分子、或IL-4/IL-4Rα/γ共有分子的复合体的形成。

25.权利要求21的方法，其中抗体分子是结合至IL-13或IL-13R，或IL-4或IL-4R的抗体或其抗原结合片段。

26.权利要求21的方法，其中抗体分子以小于10^-7M的K_D结合至IL-13，并具有下列特性中的一种或多种：

(a)重链免疫球蛋白可变区包含此类重链CDR3，其通过少于3个氨基酸取代而不同于单克隆抗体MJ2-7的重链CDR3(SEQ ID NO：17)、mAb13.2的重链CDR3(SEQ ID NO：196)或C65的重链CDR3(SEQ IDNO：123)；

(b)轻链免疫球蛋白可变区包含此类轻链CDR1，其通过少于3个氨基酸取代而不同于单克隆抗体MJ2-7的相应轻链CDR(SEQ ID NO：18)、mAb 13.2的相应轻链CDR(SEQ ID NO：197)或C65的相应轻链CDR(SEQ ID NO：118)；

(c)重链免疫球蛋白可变区包含由下述核苷酸序列编码的氨基酸序列，所述核苷酸序列在高严格条件下与编码V2.1的重链可变区(SEQ IDNO：71)、V2.3的重链可变区(SEQ ID NO：73)、V2.4的重链可变区(SEQ IDNO：74)、V2.5的重链可变区(SEQ ID NO：75)、V2.6的重链可变区(SEQ IDNO：76)、V2.7的重链可变区(SEQ ID NO：77)、V2.11的重链可变区(SEQID NO：80)、ch13.2的重链可变区(SEQ ID NO：204)、h13.2v1的重链可变区(SEQ ID NO：205)、h13.2v2的重链可变区(SEQ ID NO：206)或h13.2v3的重链可变区(SEQ ID NO：207)的核苷酸序列的互补序列杂交；

(d)轻链免疫球蛋白可变区包含由下述核苷酸序列编码的氨基酸序列，所述核苷酸序列在高严格条件下与编码V2.11的轻链可变区(SEQ IDNO：36)或h13.2v2的轻链可变区(SEQ ID NO：212)的核苷酸序列的互补序列杂交；

(e)重链免疫球蛋白可变区包含与V2.1的重链可变区(SEQ IDNO：71)、V2.3的重链可变区(SEQ ID NO：73)、V2.4的重链可变区(SEQ IDNO：74)、V2.5的重链可变区(SEQ ID NO：75)、V2.6的重链可变区(SEQ IDNO：76)、V2.7的重链可变区(SEQ ID NO：77)、V2.11的重链可变区(SEQID NO：80)、ch13.2的重链可变区(SEQ ID NO：208)、h13.2v1的重链可变区(SEQ ID NO：209)、h13.2v2的重链可变区(SEQ ID NO：210)或h13.2v3的重链可变区(SEQ ID NO：211)的氨基酸序列至少90％同一的氨基酸序列；

(f)轻链免疫球蛋白可变区序列与V2.11(SEQ ID NO：36)或h13.2v2(SEQ ID NO：212)的轻链可变区至少90％同一；

(g)抗体分子与mAb MJ2-7、mAb13.2或C65竞争结合人IL-13；

(h)抗体分子接触来自IL-13的一个或多个氨基酸残基，所述氨基酸残基选自SEQ ID NO：24或SEQ ID NO：178的残基116、117、118、122、123、124、125、126、127和128；

(i)抗体分子接触来自IL-13的一个或多个残基，所述氨基酸残基选自人IL-13(SEQ ID NO：194)的残基81-93和114-132，或选自：在SEQ IDNO：194位置68[49]处的谷氨酸、在位置72[53]处的天冬酰胺、在位置88[69]处的甘氨酸、在位置91[72]处的脯氨酸、在位置92[73]处的组氨酸、在位置93[74]处的赖氨酸和在位置105[86]处的精氨酸[在成熟序列中的位置；SEQ ID NO：195]；

(j)重链可变区序列在高变环1、2和/或3中具有与mAb MJ2-7、mAb 13.2或C65相同的标准结构；

(k)轻链可变区结构域序列在高变环1、2和/或3中具有与mAbMJ2-7、mAb 13.2或C65相同的标准结构；和

(l)重链可变区结构域序列和/或轻链可变区结构域序列具有来自VH段的FR1、FR2和FR3框架区，所述VH段由种系基因DP-54和DPK-9分别编码；或具有与VH段至少95％同一的序列，所述VH段由种系基因DP-54和DPK-9编码；和

(m)在绵羊模型中注射后至少6周赋予注射后针对暴露于蛔虫抗原的保护效果。

27.权利要求1-26中任一项的方法，其中将IL-13拮抗剂和IL-4拮抗剂同时组合施用或顺次施用。

28.权利要求27的方法，其中IL-13拮抗剂和IL-4拮抗剂共配制。

29.权利要求27的方法，其中IL-13拮抗剂和IL-4拮抗剂与选自以下一种或多种其他治疗剂组合施用：吸入性类固醇、β-激动剂、白三烯或白三烯受体的拮抗剂、IgE抑制剂、PDE4抑制剂、黄嘌呤、抗胆碱能药物、IL-5抑制剂、嗜伊红粒细胞趋化蛋白/CCR3抑制剂和抗组胺剂。

30.包含IL-13拮抗剂和IL-4拮抗剂的组合物或剂量制剂，其中IL-4拮抗剂选自结合IL-4或IL-4Rα、IL-4Rα的可溶形式、IL-4突变蛋白的抗体分子；STAT6的小分子抑制剂；肽抑制剂；或核酸表达的抑制剂，且IL-13拮抗剂是与mAb MJ2-7、mAb13.2或C65竞争结合人IL-13或IL-13Rα2的可溶性片段的抗体分子。

31.体外检测样品中IL-13存在的方法，其包括

提供固定于支持物上第一抗-IL-13抗体分子；

提供获得自暴露于第二抗-IL-13抗体分子之后的受试者的样品；

在允许IL-13与固定的第一抗-IL-13抗体分子结合发生的条件下，将样品与第一抗-IL-13抗体接触，且

相对于参考值检测样品中的IL-13；

其中第一和第二抗-IL-13抗体结合IL-13上的不同表位。

32.权利要求31的方法，其中第一抗-IL-13抗体分子结合基本上游离的IL-13，且基本上不与结合至第二抗-IL-13抗体分子的IL-13结合。

33.权利要求31的方法，其中第一抗-IL-13抗体分子结合基本上游离的IL-13以及结合至第二抗-IL-13抗体分子的IL-13。

34.权利要求31的方法，其中利用标记的第三抗-IL-13抗体分子或识别IL-13第一或第二抗体分子复合体的标记物质来完成结合至固定的第一抗IL-13抗体分子的IL-13存在的检测。

35.权利要求31的方法，其中样品中结合至第一抗IL-13抗体分子的IL-13的水平相对于对照样品的改变是样品中存在IL-13的指示。

36.权利要求35的方法，其中改变是样品中IL-13水平相对于预定水平的升高，其中所述升高是肺中炎症增强的指示。

37.权利要求31的方法，其中样品是选自血清样品、血浆样品、组织样品和活检物中的生物样品。

38.评估IL-13拮抗性结合剂在减轻受试者肺炎中的效力的方法，其包括根据权利要求31-37中任一项的方法检测样品中未结合和/或结合至IL-13拮抗性结合剂的IL-13水平，其中未结合和/或结合的IL-13水平相对于参考样品的改变是IL-13拮抗性结合剂效力的指示。

39.权利要求38的方法，其还包括评估样品中一种或多种嗜伊红粒细胞趋化蛋白水平、嗜碱性粒细胞释放的组胺、IgE滴度的改变，或评估受试者症状的改变。

40.权利要求38或39的方法，其中未结合和/或结合至IL-13拮抗性结合剂的IL-13水平的降低、或结合至拮抗性结合剂的IL-13水平的升高是IL-13拮抗性结合剂有效减轻受试者中肺炎的指示。

41.试剂盒，其用于权利要求1-29中任一项，包含IL-13拮抗剂和/或IL-4拮抗剂，具有用于以单一治疗间隔治疗或预防IL-13相关疾病或病症的说明书。

42.组合物，其用于根据权利要求1-29中任一项的方法。

43.包含IL-13拮抗剂和/或IL-4拮抗剂的组合物在制备以单一治疗间隔治疗或预防IL-13相关疾病或病症的药物中的用途。

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