TW200813095A - N-terminally modified GLP-1 receptor modulators - Google Patents

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TW200813095A TW096118798A TW96118798A TW200813095A TW 200813095 A TW200813095 A TW 200813095A TW 096118798 A TW096118798 A TW 096118798A TW 96118798 A TW96118798 A TW 96118798A TW 200813095 A TW200813095 A TW 200813095A
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Claudio Mapelli
Douglas James Riexinger
Ving G Lee
Richard B Sulsky
Yeheng Zhu
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Bristol Myers Squibb Co
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Description

200813095 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本文所揭示及主張之標的物係提供新穎的人胰高血糖素 樣肽-1 (GLP-1)肽受體調節劑、促效劑或部分促效劑，其 展現出與天然肽GLP-1類似或優於天然肽GLP-1之生物學 特性，且亦展現出與GLP-1天然序列相比對於蛋白水解裂 解增加之穩定性，且因此可用於改善糖尿病病況。 【先前技術】 GLP-1係一種對於葡萄糖代謝及胃腸分泌及代謝具有調 控功能的重要腸激素。人GLP-1為一種來源於例如在回腸 末端L細胞及腦中合成之前原胰高血糖素的具有3〇個胺基 酸之肽。加工前原胰高血糖素得到Glp_ 1(7-36)醯胺及 GLP-2主要出現於L細胞中。（}1^_1通常因對食物攝取起反 應而分泌，尤其碳水化合物及脂質將刺激Glpj分泌。已 將GLP-1鑑別為極其有力且有效之胰島素釋放刺激劑。 (,glp·1會降低血漿胰高血糖素濃度，減緩胃排空，刺激胰 島素之生物合成及增強胰島素敏感性（Nauck，1997，
Metab· Res· 47:1253_1258)。GUM亦增強 β細胞感知葡萄 糖耐又性異常之受檢者體内之葡萄糖並對其起反應的能力 (Byrne’ Eur· J· Clin· lnvest，28:72 78，1998)。在人 體中之促騰島素作用會部分因胰島素含量增加且部分因胰 島素敏感性增強而增加葡萄糖代謝的速率（D,Alessi^ Eu^ J· Clm· lnvest·，28:72_78, 1994卜上述沉卩」之藥理學特性 使，、成為/口療II型糖尿病之特別合乎需要之治療劑。 120897.doc 200813095 此外，近期之研究表明，輸注略微超生理量之GPL-1會 顯著增強正常受檢者之飽腹感並減少食物攝取（Flint，A.， Raben，A·，Astrup，A及 Holst，J_J·，J. Clin. Invest，101:515-520， 1998 ; Gutswiller, J.P·， Goke， B·， Drewe， J·，
Hildebrand，P·, Ketterer，S·，Handschin，D·，Winterhaider， R·, Conen，D 及 Beglinger，C. Gut 44:81-86，1999)。亦已報 導對於食物攝取及飽腹感之作用將在肥胖受檢者體内得以 保持（Naslund，E·，Barkeling，B·，King，N·，Gutniak，M.， Blundell，J.E·，Holst，J.J·，Rossner，S.及 Hellstrom，P.M.，Int· JL Obes. Relat. Metab. Disord·，23:304-31 1，1999) o 在上文所引用之研究中，懷疑亦存在GLP-1對胃排空之 顯著抑制作用。胃排空將引起餐後葡萄糖波動。亦已證 實，除刺激胰島素分泌外，GLP-1亦在刺激β細胞新生之同 時刺激轉錄因子胰島-十二指腸同源盒-l(IDX-l)之表現， 且由此其可為糠尿病的有效治療劑及/或預防劑（Stoffers， D.A., Kieffer, T.J. Hussain, M.A., Drucker, D.J., Bonner-Weir，S·，Habener，J.F·及 Egan，J.M. Diabetes，40:741-748, 2000)。亦已證實，GLP -1會抑制胃酸分泌（Wettergren，A·， Schjoldager，B.，Mortensen，P.E.，Myhre，J.，Christiansen，J·， Holst，J.J·，Dig. Dis. Sci·，38:665-673，1993)，其能夠提供 對胃潰瘍之預防。 GLP-1係一種内分泌激素，例如為增強膳食誘導之胰島 素分泌的腸激素（Holst，J.J·，Curr. Med· Chem.，6:1005-1017，1999)。其為編碼胰高血糖素原之胰高血糖素基因的 120897.doc 200813095
產物。此基因不僅在胰腺A細胞中表現且亦在腸黏膜之内 分泌L細胞中表現。胰高血糖素原為一種含有16〇個胺基酸 之肽（蛋白貝）。進一步加工胰高血糖素原將導致產生：a) 胰高血糖素；b)N終端，可能為無活性片段；及勾大的c終 端片^又，通常稱為”主要胰高血糖素原片段"。認為此片段 在生物予上無活性。即使此片段存在於胰腺與消化道l細 胞中，亦僅在腸中觀察到產生兩種高度同源之肽（通常稱 為GLP 1及GLP-2)之主要胰高血糖素原片段"的斷裂產 物。此等兩種肽具有重要的生物學活性。因此，存在於L 細胞中之GLP4的胺基酸序列與胰高血糖素原之78_1〇7部 分相同。 目前’涉及使用GUM型分子進行之療法已由於該等狀 之血清半衰期相當短而存在較大問題。舉例而言， (7-37)具有+於5 min之血清半衰期。因此，迫切需要具有 擴大之藥效概況具生物活性之GLPq受體調節劑、促效劑
或拮抗劑。本文所揭示及主張之標的物即針對此需求及其 他需求。 本文揭示充當GUM受體調節劑、促效劑或部分促效劑 之新顆肽’其展現出與天然肽⑽]類似或優於天然肽 GLP-1之生物特性，且因此對改盖 U此對改善糖尿病及相關病況有 益0 【發明内容】 本文所述之It分離之合成肽㈣合乎需要地作為⑽ 受體促效劑或部分促效劑調節犯]受體。此等合成狀展 120897.doc 200813095 現出相對於GLP-1類似之活體内功效及優良之藥效特性， 包括餐後血糖降低且伴隨增加血漿胰島素含量，從而使其 成為用於皮下、肺部、鼻、口腔或持續釋放調配物之理想 的治療候選物。 在本文所述之標的物之第一實施例中，該標的物為一種 經分離多肽，其包含式I之序列：
Xaal-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9"Xaal〇-Xaall P其中： "
Xaal為包含咪峻或噻唾環之天然存在或非天然存在的胺 基酸，諸如組胺酸或噻唑基丙胺酸；其中該胺基酸之任一 石厌原子係均視情況經氫或一或多個烷基或一或多個_基取 代；其中該胺基酸之游離胺基可經羥基或烷氧基置換，戍 視情況經氫、烷基、醯基、苯甲醯基、烧氧羰基（例如， 曱氧基羰基）、芳氧基羰基、芳烷氧基羰基、雜環基氧基 罗厌基、雜方基烧氧魏基、烧基胺甲酿基、芳基胺甲醯基、 (, 芳烧基胺甲醯基、雜環基磺醯基、烷基磺醯基、芳基績酿 基、芳基烧基績醯基、雜芳基烧基續醯基或雜芳基確醯基 取代； 且其中xaal之胺基視情況不存在，使得xaal為組胺酸或 噻唑基丙胺酸之脫胺基酸，其中任一碳原子係任一碳原子 係視情況經烷基、齒基或羥基取代；
Xaa2為選自由以下組成之群之天然存在或非天然存在的 胺基酸：α-胺基-異丁酸（Aib)、（D)_丙胺酸、（1〇_丙胺酸、 N-甲基-L-丙胺酸、N_甲基_D_丙胺酸、（L)·脯胺酸、⑻_α_ 120897.doc 200813095 甲基-脯胺酸、（L)_吖丁啶（Azt)、⑻I甲基_吖丁啶卜Me_ Azt)、（L)·顯胺酸及（R)_或⑻異線胺酸，且其中該胺基酸 中之碳原子視情況經一或多個烷基或鹵基取代；
Xaa3為包含含有羧酸之胺基酸側鏈之天然存在或非天然 存在的胺基酸，諸如天冬胺酸或麵胺酸；且其中該胺基酸 中之任一碳原子係均視情況經一或多個烷基或齒基取代； Xaa4為甘胺酸； c Xaa5為選自由以下組成之群之天然存在或非天然存在的 胺基酸：（L)-蘇胺酸、（L)_別蘇胺酸、斤兴絲胺酸、（L)_正 纈胺酸、（L)-正白胺酸；且其中該胺基酸中之任一碳原子 係視情況經一或多個烷基或鹵基取代；
Xaa6為包含經雙取代之α碳之天然存在或非天然存在的胺 基酸；其中該胺基酸之側鏈中的一者含有芳環或雜芳環， 例如CC-甲基-苯丙胺酸、α_甲基·八氟苯丙胺酸及心甲基· 2,6-二氟苯丙胺酸，其中該胺基酸之任一碳原子係均視情 C ^ 況、、二或夕個烧基取代；且其中該胺基酸中之任一碳原子 係視情況經一或多個_基取代；
Xaa7為包含經羥基取代之胺基酸側鏈之天然存在或非天 然存在的胺基酸，諸如L_蘇胺酸或乙-別蘇胺酸；其中該胺 基酸中之任一碳原子係視情況經一或多個烷基或鹵基取 代；
Xaa8為選自由L-絲胺酸、L-組胺酸及L-天冬醯胺酸組成 之群之天然存在或非天然存在的胺基酸；其中該胺基酸中 之一或多個碳原子視情況經一或多個烷基或鹵基取代； 120897.doc 200813095
Xaa9為包含含有羧酸之胺基酸側鏈之天然存在或非天然 存在的胺基酸，諸如L_天冬胺酸或^麵胺酸；其中該胺基 酸中之一或多個碳原子視情況經一或多個烷基或齒基取 代；
XaalG為天然存在或非天然存在之式π、川或a之胺基 酸：
其中R3、114及R6各自獨立地選自由以下組成之群：氯、 甲基、乙基、縣、芳基、雜環基、雜芳基、_素、魏 基、㈣基、氰基、胺基、胺基烧基、緩基、叛基燒基、 曱氧基、烧氧基、芳氧基、羧醯胺、經取代致醯胺、燒基 酯、芳基酯、烷基磺醯基及芳基磺醯基； 其限制條件 其中 Xi、x2、x3、x4&x5各自為 CSN， 為：Xi、X2、X3、X4及x5中至少一者為N ; 120897.doc • 11 · 200813095
Xaall為天然存在或非天然存在之SHa、nia或IVa之胺基 酸：
式 Ilia
式IVa 其中該胺基酸之C終端羰基碳與氮連接形成羧醯胺 (NH2)、烷基羧醯胺(NHR。或二烷基羧醯胺(NH); 其中Ri及R〗之母一者為烧基或芳基烧基； 其中R：3a、及R6a各自獨立地選自由以下組成之群： 氫、烷基（例如甲基、乙基）、芳基、雜環基、雜芳基、鹵 素、羥基、羥烷基、氰基、胺基、胺基烷基、羧基、羧基 烧基、烧氧基、芳氧基、叛醯胺、經取代魏醯胺、烧基 酯、芳基酯、烷基磺醯基及芳基磺醯基； 其中R7係選自由氫、曱基及乙基組成之群；且 其中Xi、X2、X3、x4&x5各自為c或N，其限制條件 為·· Χι、X2、X3、X4及X5中至少一者為N ; 其中當Xaai〇為式II之胺基酸時’ Xaall不為式Ila之胺基 120897.doc -12- 200813095 天然存在或非天然存在之式ιι之胺基酸可另外包含一個 以上之R3、心或心基團。天然存在或非天然存在之式m的 胺基酸可另外包含—個以上之R3、R4R6基團。天然存在 或非天然存在的式IV之胺基酸可另外包含一個以上之I、 R4或R6基團。天然存在或非天然存在的式V之胺基酸可另 外包含一或多個心或心基團。 天^存在或非天然存在的式na之胺基酸可另外包含一個 以上之、尺“或尺“基團。天然存在或非天然存在的式 叫之胺基酸可另夕卜包含一個以上之心、或r“基團。 天…、存在或非天然存在的式IVa之胺基酸可另外包含一個 以上之R3a、R4a或R6a基團。 弋之第一實施例中的XaaiG亦可為式乂〗之化合物：
# + ’ R3係選自由烷 如’敦、氣）組成之群， 之群。 R3係選自由烧基（例如， 氣）組成之群，且汉6係遁 备如，曱基、乙基）及_素（例 且R6係選自由羥基及甲氧基組成
式1之第一實施例中的X aa"亦可為式Via之化合物： 120897.doc -13- 200813095
式Via 其中R3a係選自由甲基、乙基及銳組成之群；且其中r 係選自由氫及甲基組成之群。 式I之第一實施例中的Xaal^^可為式VIIa之化合物：
式 Vila 其中Rh為甲氧基；且其中R?係選自由氫及甲基組成之 群。 在另一實施例中，
Xaal係選自由 L-His、D-His、L-N-甲基-His、D-N·甲基-
His、L-4-噻唑基Ala、D-4·噻唑基Aia、脫胺基·His、脫胺 基_噻唑基Ala、3-(1Η-咪唑-4-基）-2-甲基丙醯基、（S)_3_ (1H-咪唑-4-基）-2-羥基丙醯基（L-β-咪唑乳醯基）、（s卜或 (R)-3_(li/-咪唑_4-基）-2-甲氧基丙醯基（IMe〇p)組成之 群，且 其中若存在終端胺基，則該終端胺基視情況經氫、烷 基、二烷基、醯基、苯曱醯基、烷氧羰基（例如，甲氧基 幾基）、芳氧基羰基、芳烷氧基羰基、雜環基氧基羰基、 120897.doc -14- 200813095 雜芳基烷氧羰基、烷基胺曱醯基、芳基胺甲醯基、芳燒基 胺甲醯基、雜環基磺醯基、烷基磺醯基、芳基績醯基、芳 基烧基績醯基、雜芳基烧基確醯基或雜芳基項醯基取代； Xaa2係選自由 L-Ala、D-Ala、N-甲基-L-Ala、N-甲基-D_ Ala、L-Pro、（S)-a_ 甲基-L-Pro、（L)_ 吖丁咬（Azt)、（s)_a· 曱基-吖丁啶（a-Me-Azt)及a-胺基異丁酸（Aib)組成之群。 Xaa3係選自由L-Glu、L-Asp及L-Gla組成之群。 (' Xaa4為 Gly。
Xaa5係選自由 L-Thr、L-Nle、L-Nva、L_A〇c及 L-別蘇胺 酸組成之群。
Xaa6 係選自由 L-a-Me-Phe、L-a-Et-Phe、L_a-Me-2-氣 Phe、L-a-Me-3-氟 Phe、L-a-Me_2,3-二敗 Phe、L_a_Me_2 6_ 一氟Phe、L-cx-Me-Phe(五-氟）組成之群；且 Xaa7為L-Thr或L_別蘇胺酸。
Xaa8係選自由L-Ser、L-His及L-Asn組成之群。 ( Xaa9 為 L-Asp。
Xaal〇為天然存在或非天然存在的式„之胺基酸。 天然存在或非天然存在的式π之胺基酸係選自由以下各 物質組f之群：4·[(4，.甲氧基·2··乙基)·苯基]苯丙胺酸、4_ [(4’-乙乳基-2’-乙基）苯基]苯丙胺酸、4_[(4，_甲氧基_2._甲基 苯基]苯丙胺酸、4-[(4丨-乙惫其9丨田 U G虱基-2 -甲基）本基]苯丙胺酸、4_ (2’·乙基苯基)苯丙胺酸、4_(2，_甲基苯基)苯丙胺酸、心 [(3’’5’_二甲基）苯基]苯丙胺酸、4_[(3，，4，_二甲氧基）苯基]苯 丙胺酸、4-[(2，-乙基本經基）苯基]苯丙胺酸； 120897.doc -15- 200813095 X a a1 G為天然存在或非天然存在的式III之胺基酸。 天然存在或非天然存在的式III之胺基酸係選自由以下各 物質組成之群：4_[2，-(4，-甲氧基-6，-乙基）吡啶基]苯丙胺 4-[2 _(4 -甲氧基-6’-甲基）吡啶基]-4·苯丙胺酸、4-[2，-(6 -乙基）吡啶基]苯丙胺酸、4_卩、心甲基）吡啶基]苯丙胺 酉夂、4-[2 _(3’，5’_二曱基）吼啶基]苯丙胺酸、4_[2，_(4，甲氧 基―6 _乙基比咬基]苯丙胺酸、4-[3，_(4，-甲氧基-6，_甲基）吡 p 义基]苯丙胺酸、4_[3，_(2，-乙基）吡啶基]苯丙胺酸及4-[3，-(6’-甲基）吡啶基）苯丙胺酸；
XaalG為天然存在或非天然存在的式IV之胺基酸。 天然存在或非天然存在的式IV之胺基酸係選自由以下各 物質組成之群：4_[(4，·曱氧基-2，-乙基）-苯基]-3-吼啶基丙 胺酉欠心[(4 —甲氧基-2，-甲基）苯基]-3-吡啶基丙胺酸、4-(2 -乙基苯基>3^比啶基丙胺酸、4-(2，_甲基苯基）吼啶基 丙胺8夂、4_[(3’，5·-二甲基）苯基卜3-吡啶基丙胺酸及4-[(2，-1/乙基-4 -.基）苯基]_3_吡啶基丙胺酸；
Xaaii為天然存在或非天然存在的SIIa之胺基酸。 天然存在或非天然存在的式Ila之胺基酸係選自由以下各 物貝組成之群：4_(2，-甲基苯基）苯丙胺酸、4-(2，-氟苯基） 本丙胺酸及4-[(3，，5，·二曱基）苯基]苯丙胺酸；
Xaall為天然存在或非天然存在的式nia之胺基酸。 天然存在或非天然存在的式Ilia之胺基酸係選自由以下 各物貝組成之群：4_[(6，_曱基）_2，-吡啶基]苯丙胺酸、4_ [(6 _甲基>3匕°比啶基]苯丙胺酸、4-[(6，-乙基）-2，-吼啶基）] 120897.doc -16- 200813095 笨丙胺酸及4-[(6’-乙基）-3 ’-吼咬基）]苯丙胺酸；
Xaau為天然存在或非天然存在的式IVa之胺基酸。 天然存在或非天然存在的式lva之胺基酸係選自由以下 各物貝組成之群：4-(2^甲基苯基）·3-吡啶基丙胺酸、4-(2’-氟苯基）·3-吡啶基丙胺酸、4_[(3，，5，_二甲基）苯基]比 咬基丙胺酸、4-(4，-三氟甲基苯基）·3_吡啶基丙胺酸及4_ (2'-乙基苯基）-3^比啶基丙胺酸； 且其中該胺基酸之C終端羰基碳與氮連接形成羧醯胺 (nh2)、烷基缓醯胺（NHRi)或二烧基叛酿胺（NRiR2)，其中 Ri及R2之每一者為烷基或芳基烷基。 在另一態樣中，Xaal為選自由以下組成之群之胺基酸： L-His、D-His、L-N-曱基-His、D-N-甲基-His、L-4_ 噻唑 基Ala、D-4_噻唑基Ala、脫胺基_His、脫胺基-噻唑基 Ala、3-(1Η-咪唑-4·基）-2-甲基丙醯基、（S)-3-(lH_ 咪唑-4-基）-2-經基丙醯基（L_p—咪唑乳醯基）及咪 嗤-4-基）-2-甲氧基丙醯基（IMe〇p); 其中若存在終端胺基，則該終端胺基視情況經氫、烷 基 '醯基、苯甲醯基、烷氧羰基（例如，甲氧基羰基）、芳 氧基羧基、芳烷氧基羰基、雜環基氧基羰基、雜芳基烷氧 罗炭基、烧基胺甲醯基、芳基胺甲醯基、芳烷基胺甲醯基、 雜環基續醯基、烷基磺醯基、芳基磺醯基、芳基烷基磺醯 基、雜芳基烷基磺醯基或雜芳基磺醯基取代；
Xaa2為選自由以下組成之群之胺基酸：L-丙胺酸、D-丙 胺酸、N•曱基_L-丙胺酸、N-甲基-D-丙胺酸、L·脯胺酸、 120897.doc •17- 200813095 (S)-a-甲基-L-脯胺酸、（L)-吖丁啶（Azt)、（S)-a-甲基吖丁 啶（a-Me-Azt)及 a_ 胺基異丁酸（Aib);
Xaa3為選自由L-Glu、L-Asp及L-Gla組成之群之胺基酸； Xaa4 為 Gly，
Xaa5 為選自由 L-Thr、L_Nle、L-Nva、L-Aoc及 L-別蘇胺 酸組成之群之胺基酸； X a a 6 為選自由 L - a - M e - P h e、L - a - E t> P h e、L - ex - M e - 2 -氟 Phe、L-a-Me_3-氟 Phe、L_a-Me-2,3·二氟 Phe、L-a_Me_2,6- 一氟Phe及L-a-Me-Phe(五-氟）組成之群之胺基酸；
Xaa7為選自由L-Thr及L·-別蘇胺酸組成之君f之胺基酸；
Xaa8為選自由L-Ser、L-His及L-Asn組成之群之胺基酸； Xaa9 為 L_Asp，
XaalG為選自由式II、III、IV及V組成之群之天然存在或 非天然存在的胺基酸； 其中式II為選自由以下組成之群之胺基酸：4_[(2，_乙基-41-羥基）苯基]苯丙胺酸、4-[(4，·曱氧基-2，-乙基）苯基]苯丙 胺酸、4-[(4，-甲氧基-2，-甲基）苯基]苯丙胺酸、4-(2，-乙基 苯基）苯丙胺酸、4-(2，-甲基苯基）苯丙胺酸、4-[(3，，5，-二甲 基）苯基]苯丙胺酸及4-[(3’，4，-二曱氧基）苯基]苯丙胺酸； 其中式III為選自由以下組成之群之胺基酸：4 —[2，_(4，•甲 氧基-6’-乙基）吡啶基]苯丙胺酸、4_[2，_(4，_甲氧基_6，_甲基） 咄啶基]-4-苯丙胺酸、4·[2，-(6，-乙基）吡啶基]苯丙胺酸、4-[2^(6^甲基）吡啶基]苯丙胺酸、4_[2，_(3，，5，_二曱基）吡啶基] 苯丙胺酸、4-[2’-(4’-曱氧基-6，-乙基比啶基]苯丙胺酸、4- 120897.doc -18- 200813095 [3*-(4’_甲氧基- 6*-甲基）吼唆基]苯丙胺酸、4-[3，-(2，-乙基） 吡啶基]苯丙胺酸及4-[3，-(6，_甲基）吡啶基）苯丙胺酸； 其中式IV為選自由以下各物質組成之群之胺基酸：4-[(2’-乙基-4’-羥基）苯基]-3-吼啶基丙胺酸、4-[(4，-甲氧基_ 2*-乙基）苯基]·3-σ比咬基丙胺酸、4-[(4·-甲氧基-2，-甲基）苯 基]-3-吡啶基丙胺酸、4-(2，-乙基苯基）-3-吡啶基丙胺酸、 4-(2^甲基苯基）-3-吡啶基丙胺酸及4-[(3f，5，-二甲基）苯基]_ 3- 吡啶基丙胺酸； 且
Xaaii為選自由式Ila、Ilia及IVa之胺基酸組成之群之天然 存在或非天然存在的胺基酸； 其中式Ila為選自由以下組成之群之胺基酸：4-(2，-甲基 苯基）苯丙胺酸、4-(2^氟苯基）苯丙胺酸及4-[(3，，5，-二甲基） 苯基]苯丙胺酸； 其中式Ilia為選自由以下組成之群之胺基酸：4-[2f-(6，-甲基）吼唆基]•苯丙胺酸、4-[2’-(6，-甲基）°比唆基]苯丙胺 酸、4-[2’_(6’·乙基户比啶基]苯丙胺酸及4-[3，-(6，-乙基）。比啶 基]苯丙胺酸； 其中式IVa為選自由以下組成之群之胺基酸：4-(2，-甲基 苯基）-3-吨啶基丙胺酸、4-(2，_氟苯基）-3-咕啶基丙胺酸、 4- [(3’，5’-二甲基）苯基]-3-吡啶基丙胺酸、4-(4，-三氟甲基苯 基）-3-吡啶基丙胺酸及4-(2，-乙基苯基）_3_吡啶基丙胺酸； 其中當XaalG為式Π之胺基酸時，Xaall不為式Ha之胺基 酸； 120897.doc -19- 200813095 其中c終端羰基碳與氮連接形成羧醯胺、烷基羧醯胺 (NHRO或二烷基羧醯胺（NRiRJ，其中1及112之每一者為 烧基或芳基烧基；且 其中Xaa 10及Xaa 11不同時為式II之胺基酸。 其他實施例包括包含以下序列之任一者之經分離多肽： SEQID No. Xaa Xaa 2 Xaa 3 Xaa4 Xaa5 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 10 XaairNH2 1 Η Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2'-Me) 4-(2'-吡啶基)苯 丙胺酸-NH2 2 Η Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(3'，5’-二-Me) 4·(2’_吼啶基)苯 丙胺酸-ΝΗ2 3 Η Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2'-OBu) 4-(2’-吡啶基)苯 丙胺酸-νη2 4 Η Aib E G T L-a-Me-Phe(2·氟） T s D Bip(2'-Me) 4-(4·-η比啶基)苯 丙胺酸-νη2 5 Η Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2，-Cl) 4-(4’-吼啶基)苯 丙胺酸-νη2 6 Η Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2’-甲氧基-5’-異丙 基） 4-(4·-α比咬基)苯 丙胺酸-ΝΗ2 7 Η Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D 4-(2’-乙基苯基)-3-口比 啶基丙胺酸 Bip(2'-Me)-NH2 8 Η Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D 4-[(2，-乙基-4，-甲氧基） 苯基]-3-吡啶基丙胺酸 Bip(2'-Me)-NH2 9 Η Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2，-Et-4，-OMe) 4-(2’-曱基苯 基)-3-αΛσ定基丙 胺酸-ΝΗ2 10 Η Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D Bip(2,-Et-4'-OMe) 4-(2’-甲基苯 基)-3-°比咬基丙 胺酸-νη2 11 脫 NHrHis Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2’-Et-4’-OMe) 4-(2’-曱基苯 基)-3-°比啶基丙 胺酸-νη2 12 脫 NH2-His Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D Bip(2’-Et-4'-OMe) 4-(2’-甲基苯 基)-3-°比咬基丙 胺酸-νη2 13 Η Aib E G T L-a-Me-Phe(2·氟） T s D 4-(2’-乙基苯基)·3-α比 啶基丙胺酸 4-(2’-曱基苯 基)-3-°比咬基丙 胺酸-ΝΗ2 14 Η Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6·二 氟） T s D 4-(2’-乙基苯基)-3-σ比 啶基丙胺酸 4-(2’-甲基苯 基)-3-°比咬基丙 胺酸-νη2 15 Η Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2'-Et-4f-OMe) 4·[3-(4-甲基)啦 啶基)]苯丙胺 酸-νη2 -20- 120897.doc 200813095 SEQID No. Xaa Xaa Xaa 3 Xaa4 Xaa5 Xaa 6 Xaa Xaa Xaa 9 Xaa 10 Xaall-NH2 16 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D Bip(2’-Et-4’-OMe) 4-[3-(4-曱基户比 啶基)]苯丙胺 酸-NTI2 17 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2’-Et-4’-OMe) 4-(3-噠嗪基)苯 丙胺酸-NH2 18 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6_ 二 氟） T s D Bip(2’-Et-4’-OMe) 4-(3_噠嗪基)苯 丙胺酸-nh2 19 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2，-Et_4，-OMe) 4-[3-(4-Me,6-OMe)吼啶基)] 苯丙胺酸-nh2 20 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D 4-[3·(4，-甲基)吼啶基)] 苯丙胺酸 Bip(2’-Me)-NH2 21 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D 4-[(4，-Me-6，-OMe)-3- 吡啶基]苯丙胺酸 Bip(2,-Me)-NH2 22 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D 4-[(4'-Me-6,-OMe)-3- 吡啶基]苯丙胺酸 Bip(2,-Me)-NH2 23 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6_ 二 氟） T s D Bip(2，-Et-4，-OMe) 4-P(lH)abh^_ 基]苯丙胺酸- nh2 24 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) Bip(8-喹琳)- nh2 25 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) Bip(3-喹琳)- nh2 26 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2’-Et-4'-OMe) Bip(6-喹琳)- nh2 27 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2'-Et-4,-OMe) Bip(5-喹琳)- nh2 28 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,氟） T s D Bip(2'-Et-4,-OMe) 4-(3-(6-OMe) 口比 啶基)苯丙胺 酸ΉΗ〗 29 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2·氟） T s D Bip(2,-Et-4'-OMe) 4-(3-(2-甲氧基） 吡啶基)苯丙胺 酸-nh2 30 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(3’-吼啶基)苯 丙胺酸-nh2 31 脫 NH2-His Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6·二 氟） T s D 4-(2’-乙基苯基)-3-吡 啶基丙胺酸 4-(2’-甲基苯 基)-3-°bLn定基丙 胺酸-nh2 32 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2·氟） T s D 4-(5-喹啉)苯丙胺酸 Bip(2'-Me)-NH2 33 H Aib E G T L-a-Me- Phe(2-^) T s D 4-[3-(2’-OMe)吼啶基] 苯丙胺酸 Bip(2'-Me)-NH2 34 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2·氟） T s D 4-(6-喹啉)苯丙胺酸 Bip(2,-Me)-NH2 35 H Aib E G T L-a-Me· Phe(2-氟） T s D 4-(4’-吡啶基)苯丙胺酸 Bip(2’-Me)-NH2 36 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D 4·[4’-(3’，5’-二曱基異噁 唑)]苯丙胺酸 Bip(2,-Me)-NH2 -21 - 120897.doc 200813095 SEQ ID No. Xaa 1 Xaa 2 Xaa 3 Xaa4 Xaa5 Xaa Xaa 7 Xaa 8 Xaa Xaa 10 XaairNH2 37 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2’-Et-4’-OMe) 4-(2-三氟曱基 苯基)-3-。比啶基 丙胺酸-nh2 38 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(2-曱基-5-氟 苯基)-3-σ比咬基 丙胺酸-ΝΗ2 39 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(4-甲烷磺醯 基苯基)-3-α比°定 基丙胺酸-ΝΗ2 40 H Aib E G T L-a-Me-Phe T s D Bip(2，-Et-4，-OMe) 4-(2’-甲基苯 基)-3-°比°定基丙 胺酸-νη2 41 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2，_Et) 4-(2’-甲基苯 基)-3-°比。定基丙 胺酸-νη2 42 H Aib E G Nle L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4'-OMe) 4-(2’-甲基苯 基)-3-。比啶基丙 胺酸-ΝΗ2 43 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2'-Et-4'-OMe) 4-[(2^Cl，4’-CF3)-3’-吡啶基] 苯丙胺酸-nh2 44 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-[3，-(2'-CN-6，-Me)吼啶基]苯 丙胺酸-NH2 45 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D Bip(2'-Cl) 4·(2’_甲基苯 基)·3·η比啶基丙 胺酸·νη2 46 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D Bip(2’，4’-二-OMe) 4-(2’-甲基苯 基)-3-°比唆基丙 胺酸-ΝΗ2 47 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D 4-(3’-吼啶基)苯丙胺酸 4-(2’-甲基苯 基)-3-°比°定基丙 胺酸-ΝΗ2 48 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D 4-(4··°比啶基)苯丙胺酸 4-(2’-甲基苯 基)-3-°比咬基丙 胺酸-νη2 49 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D Bip(2,-Me-3,-F) 4-(2’-甲基苯 基)-3-°比°定基丙 胺酸-ΝΗ2 50 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2'-F) 4-(2’-甲基苯 基)-3-°比唆基丙 胺酸_νη2 51 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D 4-[3，-(2，-Cl-6，-CF3) 口比 啶基]苯丙胺酸 4-(2’-甲基苯 基)-3-°比咬基丙 胺酸-νη2 52 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6·二 氟） T s D 4-(2’-乙基苯基 啶基丙胺酸 Bip(2,-Cl)-NH2 53 H Aib E G T. L-a-Me-Phe(2,6-二 1氟） T s D 4-(2f-乙基苯基)-3·α比 啶基丙胺酸 BipiS'-CM'-F)- nh2 -22- 120897.doc 200813095 SEQID No. Xaa 1 Xaa 2 Xaa 3 Xaa4 Xaa5 Xaa Xaa 7 Xaa 8 Xaa 9 .Xaa 10 XaairNH2 54 H Aib E G Nva L-a-Me-Phe(2_ 氟） T s D Bip(2’-Et-4'-OMe) 4-(2’-曱基苯 基)·3·°比啶基丙 胺酸-νη2 55 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D 4-(2’-乙基苯基)-3-n比 啶基丙胺酸 Bip(3’,5，·^· Me)-NH2 56 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D 4-(2’-乙基苯基)-3 -σ比 啶基丙胺酸 4-(2’，噠嗪基） 苯丙胺酸-nh2 57 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2f-Et-4’-OMe) 4-(2’-乙基苯 基)-3-°比咬基丙 胺酸-nh2 58 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D 4-(2*·乙基苯基)-3-α比 啶基丙胺酸 4-[3，-(2，-Cl-6'- CF3)吼啶基]苯 丙胺酸·νη2 59 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D 4-(2·-乙基苯基)-3-吼 啶基丙胺酸 4-[3 丨-(2 丨-CN-6，-Me)吡啶基]苯 丙胺酸-nh2 60 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D 4-[3’-(4’-Me)吼啶基]苯 丙胺酸 Bip(2’-Cl)-NH2 61 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6_ 二 氟） T s D 4-[3’-(4’-Me)«比啶基]笨 丙胺酸 Bip(3，-Cl-4，-F)- nh2 62 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6·二 氟） T s D 4-[3*-(4’-Me户比啶基]苯 丙胺酸 Bip(3，，5，-二-Me)-NH2 63 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D 4-[3'-(4’-Me户比啶基]苯 丙胺酸 Bip(2，-Me-4，- OMe)-NH2 64 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D 4-[3’-(4'-Me)° 比啶基]苯 丙胺酸 F)-NH2 65 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D 4-[3’-(4’-Me)。比啶基]苯 丙胺酸 Bip(2'-F)-NH2 66 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D 4-[(4 丨-Me-6，-OMe)-3- 0比唆基]苯丙胺酸 Bip(2,-Cl)-NH2 67 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D 4-[(4'-Me-6'-OMe)-3- °比咬基]苯丙胺酸 Bip(3，，4，-二-OMe)-NH2 68 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D 4-[(4，-Me-6，-OMe)-3-吡啶基]苯丙胺酸 4-(2’-吼啶基)苯 丙胺酸-nh2 69 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D 4-[(4'-Me-6,-OMe)-3- σ比咬基]苯丙胺酸 Bip(2，-Me-4，- OMe)-NH2 70 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6_ 二 氟） T s D 4-[(4,-Me-6'-OMe)-3- 吡啶基]苯丙胺酸 4-(2’-甲基苯 基)-3-°比咬基丙 胺酸-nh2 71 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D Bip(2'-Et) 4-(2··乙基苯 基)-3-°比唆基丙 胺酸-nh2 120897.doc -23- 200813095 SEQID No. Xaa Xaa 2 Xaa 3 Xaa4 Xaa5 Xaa 6 Xaa 7 Xaa Xaa Xaa 10 XaairNH2 72 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D 4-[3，-(4，-甲基户比啶基] 苯丙胺酸 4-(2’-曱基苯 基)-3-°比〇定基丙 胺酸-NH2 73 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D Bip(2'-Et-4'-OMe) 4-(4·-吼啶基)-苯丙胺酸-nh2 74 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2，_Et-4，-OMe) 4-(3’-喹啉)苯丙 胺酸-nh2 75 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(3H2’-曱氧 基)°比啶基)苯 丙胺酸-nh2 76 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-苯基-3-π比咬 基丙胺酸-νη2 77 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4'-OMe) 4-(3’，5’-二曱基 苯基定基 丙胺酸-nh2 78 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-[(3丨-氣-4·-氟） 苯基]-3-吼啶基 丙胺酸-nh2 79 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(3’，4·-二曱氧 基)苯基]-3-吼 啶基丙胺酸- νη2 80 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-[(2·-乙基-4·- 甲氧基)苯基)]-3-吡啶基丙胺 酸-νη2 81 L-β-咪唑-乳 醯基 Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4'-OMe) 4-(2’-甲基苯 基)-3-°比啶基丙 胺酸-ΝΗ2 82 Η Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 2-(5-鄰甲苯基） σ塞吩基丙胺酸- νη2 83 Η Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 2-[(5-(3’·曱氧 基)苯基]噻吩 基丙胺酸-νη2 84 Η Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 2-[(5-(3·，5，-二-甲基)苯基]噻 吩基丙胺酸- νη2 85 Η Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 2-[(5-(3'-α55'-F)苯基]噻吩基 丙胺酸-NH2 86 Η Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4_(3’_異丙氧基 苯基)-3-°比咬基 丙胺酸-nh2 87 Η Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(2·-曱基，5丨· 敗)苯基)-3_σ比 啶基丙胺酸· νη2 88 Η Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2’-Et-4’-OMe) 4·(2’_異丙氧基 苯基)-3-吼啶基 丙胺酸-nh2 120897.doc •24- 200813095
|SEQ ID No. Xaa Xaa Xaa 3 Xaa4 Xaa5 Xaa 6 Xaa 7 Xaa 8 Xaa 9 Xaa 10 XaairNH2 89 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2’-Et-4’-OMe) 3-(4-Br)吡啶基 丙胺酸-nh2 90 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2，-Et-4，-OMe) 4-(4’-甲氧基苯 基)-3-abb淀基丙 胺酸-nh2 91 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2·氟） T s D Bip(2?-Et-4'-OMe) 4-(2，-甲基，4·-氟)苯基)·3-吡 啶基丙胺酸- nh2 92 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2，-Et) 4-(2’-曱基苯 基)-3-σ比咬基丙 胺酸-νη2 93 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2'-Et-4，-OMe) 4-(2f-三氟曱氧 基苯基)-3-°比咬 基丙胺酸-nh2 94 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4'-OMe) 4-(4’-三氟曱氧 基苯基>3-°比啶 基丙胺酸-nh2 95 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2’-Et-4’-OMe) 3·吡啶基丙胺 酸·νη2 96 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2'-Et-4?-OMe) 4-(2丨-甲基，4，-氯)苯基)-3-吼 啶基丙胺酸- nh2 97 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2'-Me-4,-OMe) 4-(2'-甲基苯 基)-3-°比0定基丙 胺酸-NH2 98 H Aib E G T L-a-Me- Phe(2-a) T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(3’-三氣甲基 苯基)-3-°比咬基 丙胺酸·νη2 99 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(4’-氣苯基)- 3·0比咬基丙胺 酸-νη2 100 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2_ 氟） T s D Bip(2’-Et-4’-OMe) 4-(2’-三氟曱基 苯基>3-吼啶基 丙胺酸-ΝΗ2 101 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4'-OMe) 4-(2’-氣苯基)-3-吡啶基丙胺 酸 _νη2 102 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2'-Et-4,-OMe) 4-(3’-氣苯基)· 3-吡啶基丙胺 酸-νη2 103 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2'-Et-4,-OMe) 4-(4’-異丙基苯 基)-3-°比咬基丙 胺酸-νη2 104 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2·氟） T s D Bip(2’-Et-4'-OMe) 4-(3’,5，-二曱基 異噁唑-4’-基)- 3-吡啶基丙胺 酸-νη2 120897.doc -25- 200813095 SEQID No. Xaa Xaa Xaa 3 Xaa4 Xaa5 Xaa Xaa Xaa 8 Xaa Xaa 10 XaairNH2 105 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2'-Et-4'-OMe) 4-[(2’-曱基-4，- 甲氧基)苯基)-3-吡啶基丙胺 酸·νη2 106 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4'-OMe) 4-(4’-三氟曱基 苯基)-3-°比°定基 丙胺酸-νη2 107 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 1(4’_氣苯基)-3-吡啶基丙胺 酸-νη2 108 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2'-Et-4'-OMe) 4-(4’-吼啶基)- 3·吡啶基丙胺 酸-νη2 109 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2'-Et-4,-OMe) 4-(3’-曱氧基苯 基)-3-°比咬基丙 胺酸-νη2 110 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(6··曱氧基吼 0定-3’-基)-3-°比 咬基丙胺酸- νη2 111 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(2’-異丙基苯 基)-3-°比咬基丙 胺酸-ΝΗ2 112 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2·氟） T s D Bip(2,-Et-4'-OMe) 4W-曱氧基苯 基)-3-吡啶基丙 胺酸-NH2 113 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2’-Et-4’-OMe) 4-[(3’，5f-二氟· 2’-甲氧基)苯 基]咬基丙 胺酸-NH2 114 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(3'-甲基苯 基)-3-吡啶基丙 胺酸-NH2 115 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(2'-氟苯基)-3-°比唆基丙胺 酸-nh2 116 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D Bip(2’-Et-4’-OMe) 4-(2’-氟苯基)_ 3-吡啶基丙胺 酸-nh2 117 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(3'_甲氧基苯 基)-3-°比咬基丙 胺酸_NH；2 118 H (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2·氟） T s D Bip(2,-Et-4'-OMe) 4-(2’-甲基苯 基)-3-atL咬基丙 胺酸-nh2 119 H N- Me- ⑼· Ala E G T L-a-Me-Phe(2·氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(2’-甲基苯 基)-3-0比鳴基丙 胺酸-nh2 120 H (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T H D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(2’-曱基苯 基)-3-σ比咬基丙 胺酸-νη2 120897.doc -26- 200813095 SEQ ID No. Xaa 1 Xaa 2 Xaa 3 Xaa4 Xaa5 Xaa Xaa Xaa 8 Xaa Xaa 10 XaairNH2 121 H ⑸- α· Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2_ 氟） T s D Bip(2，-Et-4，-OMe) (S)-4-(2’_ 甲基 苯基-吡啶基丙胺酸- nh2 122 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2'-Et-4?-OMe) (S)-4-(2’_ 甲基 苯基)-a-Me-3- 吡啶基丙胺酸- nh2 123 H (s)_ a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D Bip(2,-Et-4'-OMe) 4-(2’-曱基苯 基)-3-°比咬基丙 胺酸-nh2 124 H ⑶- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T H D Bip(2’-Et-4’-OMe) 4-(2’-曱基苯 基)-3-°比咬基丙 胺酸-nh2 125 H (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(3’-曱氧基苯 基)-3-°比咬基丙 胺酸-nh2 126 H (s)_ a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D Bip(2’-Et-4’-OMe) 4-(3’-曱氧基苯 .基)-3-0比咬基丙 胺酸_nh2 127 H ⑸· a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(2’-氟苯基)-3-吡啶基丙胺 酸-nh2 128 H ⑸- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(2丨-氟苯基)-3-吡啶基丙胺 酸-nh2 129 H N- Me- (L)- Ala E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(2’-甲基苯 基)-3-ntba定基丙 胺酸-nh2 130 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(2·-曱基苯 基)-3,5-嘧啶基 丙胺酸·νη2 131 H (S)- a- Me- Pro D G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(2’·曱基苯 基)-3-°比唆基丙 胺酸_νη2 132 H (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2'-Et) 4-(2’-乙基苯 基)-3-°比咬基丙 胺酸-νη2 133 脫 NHrHis (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(2’-曱基苯 基)-3-π比咬基丙 胺酸-νη2 134 脫 NH2-His (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D Bip(2，-Et-4 丨-OMe) 4·(2’_曱基苯 基)-3·σ比咬基丙 胺酸-νη2 -27- 120897.doc 200813095 |SEQ ID No. Xaa 1 Xaa Xaa 3 Xaa4 Xaa5 Xaa Xaa Xaa 8 Xaa Xaa 10 XaairNH2 135 脫 NH2-His (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2'-Et-4,-OMe) 4-(2'-氟苯基)· 3-°比咬基丙胺 酸-nh2 136 脫 NH2-His ⑸- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2’-Et-4’-OMe) 4-(3’-甲氧基苯 基)·3-σ比咬基丙 胺酸-ΝΗ2 137 (R)-Imp Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2'-Et-4’-OMe) 4-(2’-曱基苯 基)-3-°比唆基丙 胺酸_νη2 138 (S)-Imp Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4'-OMe) 4-(2^甲基苯 基)-3-α比咬基丙 胺酸-νη2 139 CH3O-CO- His (S)_ a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2’-Et-4’-OMe) 4-(2'_曱基苯 基咬基丙 胺酸-nh2 140 CH3O-CO- His ⑸- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(2’·曱基苯 基)-3-°比咬基丙 胺酸-NH2 141 CH3O-CO- His N-Me-(D)-Ala E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4'-OMe) 4-(2’-甲基苯 基)-3-°比咬基丙 胺酸-nh2 142 CH3O-CO- His N- Me- (D)- Ala E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(2’-曱基苯 基)-3-°比唆基丙 胺酸-nh2 143 ch3 S02-His (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2·氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(2’-曱基苯 基)-3-°比咬基丙 胺酸_nh2 144 ch3 S02-His (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(2’-曱基苯 基咬基丙 胺酸-nh2 145 L-乳醯基-His (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2_ 氟） T s D Bip(2,-Et-4'-OMe) 4-(2’-甲基苯 基)-3-°比咬基丙 胺酸-NH2 146 L-乳醯基-His (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D Bip(2'-Et-4'-OMe) 4-(2’-曱基苯 基)-3-°比咬基丙 胺酸-nh2 147 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2_ 氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4·(3，，5'_ 二-Me) 苯基-3-11比唆基 丙胺酸-nh2 148 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2·氟） T H D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(2’-曱基苯 基)-3-atb唆基丙 胺酸-nh2 149 H D- Ala E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(2’-曱基苯 基)-3-σ比淀基丙 胺酸-νη2 -28 - 120897.doc 200813095 SEQ ID No. Xaa Xaa 2 Xaa 3 Xaa4 Xaa5 Xaa 6 Xaa Xaa 8 Xaa Xaa 10 XaairNH2 150 H Aib H G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2'-Et-4,-OMe) 4-(2’-甲基苯 基)-3-°比咬基丙 胺酸-nh2 151 L-β-咪唾·乳 醯基 (S)_ a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T H D Bip(2,-Et-4,-0-Me) 4-(2’-甲基苯 基)-3-0比°定基丙 胺酸-nh2 152 L-β-味。坐-乳 醯基 (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4'-0-Me) 4-(2’-甲基苯 基)-3-°比咬基丙 胺酸·νη2 153 L-β-咪唑-乳 醯基 (s)_ a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T H D Bip(2’-Et-4’-OH) 4-(2’-曱基苯 基)-3-°比。定基丙 胺酸-NH2 154 L-β-味°坐·乳 醯基 ⑸- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T S D Bip(2’-Et-4’-OH) 4-(2’-甲基苯 基)-3-°比淀基丙 胺酸-NH2 155 L-β·咪。坐-乳 醯基 N- Me- D- Ala E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T H D Bip(2^Et-4’-0-Me) 4-(2’-甲基苯 基)-3-°比。定基丙 胺酸-NH2 156 L-β-咪σ坐-乳 醯基 N- Me- D- Ala E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T S D Bip(2，-Et-4，-0-Me) 4-(2’-曱基苯 基)-3-°比°定基丙 胺酸-NH2 157 ch3o-co- His (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2_ 氟） T H D Bip(2,-Et-4,-OH) 4-(2’-曱基苯 基)-3-0比咬基丙 胺酸-NH2 158 CH3O-CO- His (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T S D Bip(2,-Et-4,-OH) 4-(2’·曱基苯 基)-3-°比°定基丙 胺酸-nh2 159 CH3O-CO- His N- Me- D- Ala E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T H D Bip(2,-Et-4'-OH) 4-(2·-甲基苯 基)-3-°比唆基丙 胺酸-νη2 160 CH3O-CO- His N- Me- D- Ala E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T S D Bip(2'-Et-4'-OH) 4-(2’-曱基苯 基)-3-°比咬基丙 胺酸-ΝΗ2 161 CH3O-CO- His Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T H D Bip(2’-Et-4’-OH) 4_(2’_甲基苯 基)-3·σΛσ定基丙 胺酸-νη2 162 CH3O-CO- His Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T S D Bip(2’-Et-4’-OH) 4-(2’-甲基苯 基)-3-°比咬基丙 胺酸·νη2 163 L-β-咪嗤-乳 醯基 N- Me_ D- Ala E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T H D Bip(2，-Et-4，-OH) 4-(2’-曱基苯 基)-3-°比咬基丙 胺酸-νη2 164 ch3o-co- His (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T S D Bip(2’-Et-4，-OH-5，-I) 4-(2’-曱基苯 基)-3-°比咬基丙 胺酸_νη2 -29- 120897.doc 200813095
SEQID No. Xaa Xaa Xaa 3 Xaa4 Xaa5 Xaa Xaa 7 Xaa 8 Xaa Xaa 10 XaairNH2 165 脫 NHrHis (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4'-OH) 4-(2’-甲基苯 基)-3-°比σ定基丙 胺酸-ΝΗ2 166 脫 NH2-His (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T H D Bip(2’-Et-4’-OH) 4-(2’-甲基苯 基)-3-σ比咬基丙 胺酸-νη2 167 (R)-Imp ⑶· a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2’-Et-4'-OH) 4-(2'·甲基苯 基)-3-π比淀基丙 胺酸-ΝΗ2 168 (S)-Imp ⑸· a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OH) 4-(2’-曱基苯 基)-3-0比。定基丙 胺酸-NH2 169 (R)-Imp (s)_ a- Me- Pro E G T L-a-Me- Phe(2-^) T H D Bip(2,-Et-4l-OH) 4-(2’-曱基苯 基)-3-°比°定基丙 胺酸-NH2 170 (S)-Imp (s)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T H D Bip(2，-Et-4，-OH) 4-(2’-曱基苯 基)-3-°比。定基丙 胺酸-NH2 171 (R)-IMeOp (s)_ a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T H D Bip(2，-Et-4’-OMe) 4-(2’-曱基苯 基)-3-α比咬基丙 胺酸-ΝΗ2 172 (S)-IMeOp (s)· a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T H D Bip(2，-Et-4，-OMe) 4-(2’-曱基苯 基)-3-°比咬基丙 胺酸-νη2 173 (R)-IMeOp (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2·氟） T S D Bip(2,-Et-4,-OH) 4-(2'-曱基苯 基)-3-°比唆基丙 胺酸-νη2 174 (S)-IMeOp (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T S D Bip(2,-Et-4,-OH) 4-(2’-曱基苯 基)-3-abb咬基丙 胺酸-nh2 175 (R)-IMeOp (s)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T H D Bip(2’-Et-4’-OH) 4_(2’·甲基苯 基)-3-atba定基丙 胺酸-nh2 176 (S)-IMeOp (S)， a- Me- Pro E G T L-a-Me- Phe(2-^) T H D Bip(2'-Et-4’-OH) 4-(2’-曱基苯 基)-3-atb淀基丙 胺酸-NH2 177 T S D Bip(2'-Et-4-OH) 4W-甲基苯 基)-3-°比°定基丙 胺酸-nh2 178 (S)- a- Me- Pro T s D Bip(2'-Et-4-OH) 4-(2’-曱基苯 基)-3·°比咬基丙 胺酸-νη2 179 T H D Bip(2'-Et-4-OH) 4·(2’_曱基苯 基)-3-α比唆基丙 胺酸-νη2 120897.doc -30- 200813095 其他實施例包括包含以下結構之經分離多肽：
120897.doc -31 - 200813095
f
其他實施例包括包含序列Thr_Ser-Asp-Bip (2-Et-4，_〇H)-吡啶基丙胺酸（SEQ ID NO: 177)或Thr-Ser-Asp-Bip (2-Et-4’-OH)吡啶基丙胺酸（SEQ ID NO: 179)的多肽，其中該多 肽結合並活化GLP-1受體。此等肽可另外包含：來自胺基 終端殘基之第二個殘基之脯胺酸（例如，α甲基脯胺酸）； 經取代吼啶基丙胺酸（例如，4-(2’甲基苯基）3_吡啶基丙胺 酸）；及胺基終端胺基甲酸酯。 上述SEQ ID NO: 177或179序列可分別在包含該序列之 肽的第七位、第八位、第九位及第十位殘基處。此類肽可 另外包含第2位之脯胺酸（例如，α甲基脯胺酸）之位。包含 SEQ ID NO: 177之序列之示範性肽為SEQ m Ν〇: 158之 肽。包含SEQIDNO:179之序列之示範性肽為SEQIDNo: 157之肽。 另一實施例為一種醫藥組合物，其包含式工之 肽或包含SEQ ID NO: 1-179中之至少一者之狀。 另-實施例係針對-種醫藥組合，其包含式工之經分離 多肽或包含SEQ ID N〇: M79中之任一者之狀，及至少一 種選自由以下組成之群之治療劑：抗糖尿病劑、抗肥胖 劑、抗尚血壓劑、抗動脈粥樣硬化劑及降脂質劑。 120897.doc • 32 - 200813095 另一實施例係針對一種式I之經分離多肽或包含SEQ ID NO: 1-179中之任一者之肽的醫藥組合，其中抗糖尿病劑 係選自由以下組成之群：雙胍、磺醯脲、葡糖苷酶抑制 劑、PPAR γ促效劑、PPAR α/γ雙重促效劑、P2抑制劑、 DPP4抑制劑、SGLT-2抑制劑、胰島素增敏劑、胰高血糖 素樣肽-l(GLP-l)、GPR119調節劑、胰島素及美格列奈 (meglitinide) 〇 另一實施例係針對一種式I之經分離多肽或包含SEQ ID NO: 1-179中之任一者之肽的醫藥組合，其中抗糖尿病劑 係選自由以下組成之群：二甲雙脈（metformin)、格列本脲 (glyburide)、格列美脲（glimepiride)、格列比脲 (glipyride)、 格列。比唤（glipizide)、 氯石黃丙脲 (chlorpropamide)、格列齊特（gliclazide)、阿卡波糖 (acarbose)、 米格列醇 （miglitol) 、 ϋ比格列酮 (pioglitazone)、曲格列酮（troglitazone)、羅格列酮 (rosiglitazone)、莫格他嗤（muraglitazar)、胰島素、G1-262570、伊沙列酮（isaglitazone)、JTT-501、NN-2344、 L895645、YM-440、R-119702、AJ9677、瑞格列奈 (repaglinide)、那格列奈（1^168111^(^)、1^人01129、八11-H039242、GW-409544、KRP297、AC2993、LY315902 及 NVP-DPP-728A 〇 另一實施例係針對一種式I之經分離多肽或包含SEQ ID NO: 1-179中之任一者之肽的醫藥組合，其中抗肥胖劑係 選自由以下組成之群：CB-1拮抗劑（或反向促效劑）、 120897.doc -33- 200813095 MCHR-1拮抗劑、DGAT抑制劑、β3腎上腺素能促效劑、月旨 肪酶抑制劑、血清素（及多巴胺）再吸收抑制劑、曱狀腺受 體β化合物及減食慾劑。 另一實施例係針對一種式I之經分離多肽或包含SEQ ID NO: 1-179中之任一者之肽的醫藥組合，其中抗肥胖劑係 選自由以下組成之群：奥利司他（orlistat)、ATL-962、 AJ9677 ^ L750355 > CP3 3 1648 > % ^ iji (acomplia) > MK- 0364、SLV-319、西布曲明（sibutramine)、托 σ比酉旨 (topiramate)、 阿索開（axokine)、 右旋安非他明 (dexamphetamine)、芬特明（phentermine)、苯基丙醇胺 (phenylpropanolamine)及馬 σ引口朵（mazindol)。 另一實施例係針對一種式I之經分離多肽或包含SEQ ID NO: 1-179中之任一者之肽的醫藥組合，其中降脂質劑係 選自由以下組成之群：MTP抑制劑、膽固醇酯轉移蛋白、 HMG CoA還原酶抑制劑、角鯊烯合成酶抑制劑、纖維酸 衍生物、LDL受體活性上調劑、脂肪加氧酶抑制劑及 ACAT抑制劑。 另一實施例係針對一種式I之經分離多肽或包含SEQ ID NO: 1-179中之任一者之肽的醫藥組合，其中降脂質劑係 選自由以下組成之群：普伐他汀（pravastatin)、洛伐他汀 (lovastatin)、辛伐他汀（simvastatin)、阿托伐他汀 (atorvastatin)、西立伐他汀（cerivastatin)、氟伐他汀 (fluvastatin)、尼伐他汀（nisvastatin)、維塞他汀 (visastatin)、非諾貝特（fenofibrate)、吉非貝齊 120897.doc -34- 200813095 ㈣mfibrozil)、氯貝酸鹽（cl〇fibrate)、阿伐麥布 (aVaSimibe)、TS·962、MD-700、CP_529414及 LY295427。 另κ施例係針對—種治療以下疾病或延緩其進程或發 作的方法·糖尿病、糖尿病性視網膜病變、糖尿病神經病 變、糠尿病腎病、創傷癒合、胰島素抵抗、高灰糖症高 胰島素丘症、X症候群、糖尿病併發症、升高之游離脂肪 酸或甘油血液含量、；日匕所1十 网月曰貝血症、肥胖症、高甘油三酯血 症、動脈粥樣硬化或高血壓，該方法包含向需要治療之哺
乳動物物種投與治療有效量之式J之經分離多肽或包 ID NO: 1-179中之任—者之肽。 Q 另一實施例係針對-種此類治療以下疾病或延緩其進程 或發作的方法·糖尿病、糖尿病性視網膜病變、糖尿病神 經病變、糖尿病腎病、創傷癒合、胰島素抵抗、高血糖 症、高騰島素血症、X症候群、糖尿病併發症、升高之游 離脂肪酸或甘油血液含量、高脂質血症、肥胖症、高甘油 三醋血症、動脈粥樣硬化或高血壓，該方法包含同：或依 序投與治療有效量之-或多種選自由以下組成之群的、;Λ療 劑：抗糖尿病劑、抗肥胖劑、抗高血壓劑及抗動脈粥二 化劑及降脂質劑及式I之經分離多狀或包含SEQ ID紙^ 179中之任一者之肽。 · 另-實施例係針對-種治療以下疾病或延緩其進程或發 作的方法：糖尿病、糖尿病性視網膜病變、糖尿病神經病 變、糖尿病腎病、創傷癒合、胰島素抵抗、高血糖症、、： 胰島素血症、X症候群、糖尿病併發症、升高之游=脂: 120897.doc -35- 200813095 酸或甘油血液含量、高脂質血症、肥胖症、高甘油三醋血 症、動脈粥樣硬化或高血壓，該方法包含向需要治療之哺 乳動物物種投與治療有效量之上述醫藥組合中之任一者。 本文所述之標的物之另一態樣為將所揭示之肽用作放射 性標記用於配位體結合檢定研發。舉例而言，可使用放射 性同位素製備SEQ ID NO:164之肽，且所得經放射性標 記之肽可用於研發結合檢定。另外且出於相同目的，可藉 由使用熟習此項技術者已知之方法進行催化氣化將剛m NO:164之肽轉化成經放射性標記形式之seq 的 肽。 【實施方式】 本文所述之合成經分離肽能夠合乎需要地作為（}〇>_1受 體促效劑或部分促效劑調節GLIM受體。此 出相對於GUM類似之活體内功效及優良之藥效特性，包 括餐後血糖降低且伴隨增加企漿胰島素含量，從而使其成 ( 為用於皮下、肺部、[口腔或持續釋放之理想的治療候 選物。 本文所述及主張之標的物包括一種經分離多肽，其包含 式I之序列：
Xaal-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaal〇-Xaan 式I， 其中： 乂…為包含咪唑或噻唑環之天然存在或非天然存在的胺 基酸，諸如組胺酸或噻唑基丙胺酸；其中該胺基酸之任一 120897.doc 36- 200813095 碳原子係均視情況經氫、一或多個烷基或一或多個齒基取 代，其中該胺基酸之游離胺基視情況經氫、經基、烧基、 醯基、苯甲醯基、烷氧基、烷氧羰基（例如，甲氧基羰 基）、芳氧基羰基、芳烷氧基羰基、雜環基氧基羰基、雜 芳基烷氧羰基、烷基胺甲醯基、芳基胺甲醯基、芳烷基胺 甲醯基、雜環基績醯基、烷基續醯基、芳基磺醯基、芳基 烷基磺醯基、雜芳基烷基磺醯基或雜芳基磺醯基取代； 且其中xaal之胺基視情況不存在，使得Xaai為組胺酸或 噻唑基丙胺酸之脫胺基酸，其中任一碳原子係任一碳原子 係視情況經烷基、_基或羥基取代；
Xaa2為選自由以下組成之群之天然存在或非天然存在的 胺基酸：α-胺基-異丁酸、L-丙胺酸、D-丙胺酸、N·甲基_ L_丙胺酸、Ν-曱基-D-丙胺酸、L-脯胺酸、（S)_a_甲基_脯 胺酸、L-。丫丁啶（Azt)、（L)-a-甲基丫丁啶（a_Me_Azt)、L_ 類胺酸及（R)-或（S)-異纈胺酸，且其中該胺基酸中之碳原 子視情況經一或多個烧基或_基取代；
XaU為包含含有羧酸之胺基酸側鏈之天然存在或非天然 存在的胺基酸，諸如天冬胺酸或麩胺酸；且其中該胺基酸 中之任一碳原子係視情況經一或多個烷基或_基取代；
Xaa4為甘胺酸；
Xaa5為選自由以下組成之群之天然存在或非天然存在的 胺基酸：L-蘇胺酸、L-別蘇胺酸、L-絲胺酸、L-正纈胺 酸、L-正白胺酸；且其中該胺基酸中之任一碳原子係視情 況經一或多個烷基或鹵基取代； 120897.doc -37· 200813095
Xaa6為包含經雙取代之α碳之天然存在或非；姑、— 尺非天然存在的胺 基酸；其中該胺基酸之側鏈中的一者含有芳产 —四 々衣攻雜方環， 例如α-甲基-苯丙胺酸、α-曱基-2-氟笨丙胺酸、心曱基_ 2,6-二I苯丙胺酸’其中該胺基酸之任一碳原子係均視^青 況經一或多個烷基取代；且其中該胺基酸中之任一碳原子 係視情況經一或多個_基取代；
Xaa7為包含經羥基取代之胺基酸側鏈之天然存在或非天 / 然存在的胺基酸，諸如L-蘇胺酸或L-別蘇胺酸；其中該胺 基&L中之任一碳原子係視情況經一或多個烷基或_基取 代；
Xaa8為選自由L-絲胺酸、L-組胺酸及L-天冬醯胺酸組成 之群之天然存在或非天然存在的胺基酸；其中該胺基酸中 之一或多個碳原子視情況經一或多個烷基或鹵基取代；
Xaa9為包含含有羧酸之胺基酸側鏈之天然存在或非天然 存在的胺基酸’諸如天冬胺酸或乙_麩胺酸；其中該胺基 义之一或多個碳原子視情況經一或多個烷基或鹵基取 代；
XaalG為天然存在或非天然存在的式II、III或IV之胺基 酸：
式II χΛΧ2χ3
120897.doc -38- 200813095
其中R3、R4及R6各自獨立地選自由以下基團組成之群： 氫、烧基、芳基、雜環基、雜芳基、_素、經基、經燒 基、氰基、胺基、胺基烧基、烧氧基、芳氧基、致基、鲮 基烧基、魏醯胺、經取代叛醯胺、烧基酯、芳基酯、烧基 磺醯基及芳基磺醯基； 其中 X!、X2、Χ3、 為：X!、Χ2、χ3、 X4及X5各自為C或N，其限制條件 χ4及χ5中之一者為Ν ;
Xaall為天然存在或非 酸： 或非天然存在的式Ila、Ilia或IVa之胺基
式丨丨a 式 Ilia
式IVa 120897.doc -39- 200813095 其中該胺基酸之c終端羰基碳與氮連接形成羧醯胺 (NH2)、烷基羧醯胺（NHR。或二烷基羧醯胺（皿水2); 其中1及112之每一者為烷基或芳基烷基； 其中Rn、Rh及R&各自獨立地選自由以下基團組成之 群：氫、烧基、芳基、雜環基、雜芳基、鹵素、經基、經 烷基、氰基、胺基、胺基烷基、烷氧基、芳氧基、羧基、 羧基烷基、羧醯胺、經取代羧醯胺、烷基酯、芳基酯、燒 , 基磺醯基及芳基磺醯基； 其中R7係選自由氫、曱基及乙基組成之群；且 其中Xi、X2、X3、x4&x5各自為c或N，其限制條件 為：Xi、X2、X3、X4及X5中之一者為N ; 其中當Xaai〇為式II之胺基酸時’ Xaall不為式Ha之胺基 酸。 較佳實施例為包含序列Thr_Ser-Asp-Bip (2-Et-4，-〇H)“比 咬基丙胺酸（SEQ ID NO: 177)或 Thr-Ser-Asp-Bip (2-Et-4,- U 0H)°比啶基丙胺酸（SEQ ID NO: 179)的多肽，其中該多肽 結合並活化GLP-1受體。此等肽可另外包含：來自胺基終 端殘基之第二個殘基處之脯胺酸（例如，α甲基脯胺酸）； 經取代吡啶基丙胺酸（例如，4_(2，甲基苯基）3_吡啶基丙胺 酸）；及胺基終端胺基甲酸酯。 較佳的肽包括SEQ ID NO: 157及158之肽，且此等肽可 包括在醫藥組合物及組合中。 除非在特定情況中另作限制，否則本文所提供之定義適 用於（但不限於）如本說明書通篇所使用之術語。 120897.doc 200813095 彼等一般熟習胺基酸及肽化學技術者應知道胺基酸包括 由通用結構所表示之化合物：
COOH m H2N 一 £
Rf L·或Skx-胺基酸 (若 R=H)
COOH R·! _nh2 R* D-或胺基酸 (若 R=H) 其中R及R’如本文所討論。 除非另作指示，否則如本文中單獨或作為另一基團之部 分使用之術語"胺基酸”包括（但不限於）連接至相同^碳^ ”α”碳）之胺基及羧基，其中r及/戋 ''' Τ汉/及Κ可為天然或非天然側 鏈，包括氫。通常將"α"碳處之絕對"s ”構型稱為"l"或，，天 然"構型。在"R”與"R，"（撇號）取代基為氫之情況下，胺基 酸為甘胺酸且不具對掌性。 土 除非另作指示，否則如本文中單獨或作為另一基團之部 分使用之術語"胺基-醇"包括（但不限於）竣基經置換（還原） 成甲基醇之天然或非天然胺基酸，諸如類胺醇、甘胺醇、 丙胺醇、芳基丙胺醇、雜芳基丙胺醇。 除非另作指示’否則如本文中單獨或作為另一基團之部 t使用之術語，，絲，，包括（但不㈣）在正鏈中含有140個 石反、較佳1至2G個碳、更佳⑴個碳之直鏈與 如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、第三丁基、里ΐ ^戍基、一己基、、異己基、庚基、4，心二甲基戊基：辛 土 2’2’4-二甲基戊基、壬基、癸基、十—烷基、十二浐 基、其各種支鏈異構體及其類似基團。另夕卜，如本文所^ 120897.doc -41 - 200813095 f
V 義，烧基可視情況在任何可用碳原子上經一或多個通常與 此等鏈連接之官能基取代形成諸如三氟甲基、3-羥己基、 2-羧基丙基、2-氟乙基、羧甲基、氰基丁基及其類似基團 之烧基，該或該等官能基諸如（但不限於）烷基、芳基、烯 基、炔基、羥基、芳基烷基、環烷基、環烷基烷基、烷氧 基、芳基烷氧基、雜芳氧基、雜芳基烷氧基、烷醯基、鹵 基、羥基、硫基、硝基、氰基、羧基、羰基（ί )、羧醯胺 基、胺基、烧基胺基、二烧基胺基、醯胺基、烧基胺基、 芳基醯胺基、雜芳基醯胺基、疊氮基、胍基、甲脎基、磷 酸基、膦酸基、磺酸基、磺醯胺基、_芳基、d、 OCF2、OCF3、芳氧基、雜芳基、環烷基烷氧基烷基、環 雜烷基及其類似基團。 除非另作說明，否則如本文中單獨或作為另一基團之部 分使用之術語’，稀基’’包括（但不限於）在正鏈中含有2至4〇個 碳及一或多個雙鍵、較佳2至20個碳及i個至3個雙鍵、更 佳2至8個碳及i個至2個雙鍵之直鏈與支鏈烴，因此，任何 碳均可視情況如上文關於，，烧基”所述經取代。 除非另作說明，否則如本文中單獨或作為另一基團之部 分使用之術語”炔基”包括（但不限於）在正鏈中含有2至4〇個 碳及一或多個參鍵、較佳2至20個碳及丨個至3個參鍵、更 佳2至8個碳及1個至2個參鍵之直鏈與支鏈烴，因此，任何 碳均可視情況如上文關於”烧基”所述經取代。 另一基團之部 1至3個附加環 除非另作指示，否則如本文中單獨或作為 为使用之術# ” ί哀烧基’’包括（但不限於）含有 120897.doc -42- 200813095 1至2個雙鍵）環烴基，
二烷基、環己烯基、 或稠合環之飽和或部分不飽和（含有j至 包括單環烷基、雙環烷基及三環烷基， 個形成環之碳、較佳4至7個裉a々，甚> 該等基團中之任一者均可視情況經由任何可用碳原子經一 或多個選自以下基團之基團取代：氫、鹵基、鹵烷基、烷 基、齒烷基、烷氧基、_烷氧基、烯基、三氟甲基、三氟 甲氧基、炔基、環烧基烧基、苐基、雜環烧基、雜環烧基 烷基、芳基、雜芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、 芳基院氧基、芳基硫基、芳基偶氮基、雜芳基烷基、雜芳 基烯基、雜芳基雜芳基、雜芳氧基、羥基、硝基、側氧 基、氰基、羧基、羰基（II)、羧醯胺基、胺基、經取代胺 基（其中該胺基包括1或2個取代基（其為烷基、芳基或定義 中所提及之其他芳基化合物之任一者））、醯胺基、疊氮 基、胍基、甲脒基、磷酸基、膦酸基、磺酸基、磺醯胺 基、硫醇、烷基硫基、芳基硫基、雜芳基硫基、芳基硫基 烷基、烷氧基芳基硫基、烷基羰基、芳基羰基、烷基胺基 羰基、芳基胺基羰基、烷氧羰基、胺基羰基、烷基羰氧 基、芳基羰氧基、烷基羰基胺基、芳基羰基胺基、芳基亞 120897.doc -43 - 200813095 磺醯基、芳基亞磺醯基烷基、芳基磺醯基胺基或芳基磺醯 基胺基羰基，或如上文所述之烷基取代基之任一者。 如本文單獨或作為另一基團之部分使用之術語”芳基”係 指（但不限於）在環部分（諸如苯基或萘基）中含有6至10個碳 之單環及雙環芳族基團，且可視情況包括1至3個稠合至 ’’芳基’’之額外環（諸如芳基、環烷基、雜芳基或雜環烷基 環），且可視情況經由任何可用碳原子經一或多個選自以 下基團之基團取代：氫、烧基、_基、ifi烧基、烧氧基、 鹵烷氧基、烯基、三氟甲基、三氟甲氧基、炔基、環烷基 烷基、苐基、雜環烷基、雜環烷基烷基、芳基、雜芳基、 芳基烧基、芳氧基、芳氧基烧基、芳基烧氧基、芳基硫 基、芳基偶氮基、雜芳基烷基、雜芳基烯基、雜芳氧基、 雜芳基烷氧基、雜芳基烷氧基烷基、羥基、硝基、側氧 基、氰基、胺基、經取代胺基（其中該胺基包括1或2個取 代基（其為烷基、環烷基、雜環烷基、雜芳基或芳基，或 定義中所提及之其他芳基化合物之任一者））、硫醇、烷基 硫基、芳基硫基、雜芳基硫基、芳基硫基烷基、烷氧基芳 基硫基、烧基幾基、芳基魏基、烧基胺基幾基、環烧基胺 基羰基、芳基胺基羰基、雜芳基胺基羰基、雜芳基烷基胺 基幾基烧氧幾基、胺基魏基、烧基魏氧基、芳基幾氧基、 烷基羰基胺基、芳基羰基胺基、芳基亞磺醯基、芳基亞磺 醯基烷基、芳基磺醯基胺基或芳基磺醯基胺基羰基，或如 上文所述之院基取代基中之任一者。 如本文單獨或作為另一基團之部分使用之術語”芳基烷 120897.doc -44- 200813095 基”係指（但不限於）具有芳基取代基之如上文所定義的烷 基’諸如苯甲基、苯乙基或萘丙基，其中該等芳基及/或 該等烷基可如上文所定義視情況經取代。 如本文單獨或作為另一基團之部分使用之術語，，烧氧 基、’’方氧基”、"雜芳氧基”、”芳基烷氧基"或，，雜芳基烷 氧基”包括（但不限於）經由氧原子連接之如上文所定義的烷 基或芳基。 Γ 如本文所使用之術語”雜環基”、，，雜環”或，，雜環的”表示 (但不限於）未經取代或經取代之穩定4員、5員、6員或7員 單環系統，其可為飽和或不飽和，且其係由碳原子及丨至4 個L自氮、氧及/或so或S〇2基團之雜原子組成，其中 氮及硫雜原子可視情況經氧化，且氮雜原子可視情況經季 銨化。雜環可在導致產生穩定結構之任何雜原子或碳原子 處連接。該等雜環基團之實例包括（但不限於）四氫呋喃 基、四氫噻吩基、吡咯啶基、哌啶基、哌嗪基、側氧基吡 I 咯啶基、側氧基哌嗪基、側氧基哌啶基及噁二唑基。雜環 基可視情況經一或多個官能基（諸如，關於"燒基，，或"芳基” 中所述之基團）取代。 如本文單獨或作為另一基團之部分使用之術語”雜環烷 基"係指（但不限於）具有雜環烷基取代基之如上文所定義的 烷基，其中該等”雜環基"及/或該等烷基可如上文所定義視 情況經取代。 如本文所使用之術語"雜芳基"係指（但不限於）含有_或 多個選自氮、硫、氧及/或80或802基團之雜原子之5員、6 120897.doc -45· 200813095 員或7員芳族雜環。 且包括可能之N氧化物=稠一芳基或雜芳基環 ’匕專雜芳基之實例包括（但不限於） 〇夫喃"比洛、嗟吩…比咬、哺咬"比嗅、料、異喔嗤、 嗯Ί唾及其類似物。雜芳基可視情況經一或多個通常 ”等鍵連接之s能基（諸如關於，，燒基"或"芳基"所述之基 團）取代。 —如本文單獨或作為另_基團之部分使用之術語，，雜芳基
烧基”係指（但不限於）具有雜芳基取代基之如上文所定義的 烷基，其中该等雜芳基及/或該等烷基可如上文所定義視 情況經取代。 術語’’受體調節劑”係指對GLp—丨受體起作用以改變其調 控下游信號轉導事件能力之化合物。受體調節劑之實例包 括如標準藥理學教科書（例如，Ε Μ· R〇ss&T.p.
Kenakin in
Goodman and Gilman’s The Pharmacological Basis of Therapeutics，第 l〇 版（2001) McGraw Hill，第 2章，第 31- 43頁）中所定義之促效劑、拮抗劑、部分促效劑、反向促 效劑、異位拮抗劑及異位增效劑。 熟習此項技術者將易於瞭解如本情形及此項技術中所提 供之此等術語的含義。 術语’糖尿病及相關疾病或相關病況係指（但不限於）11 型糖尿病、I型糖尿病、葡萄糠耐量低減、肥胖症、高血 糖症、X症候群、代謝異常症候群、糖尿病併發症及高胰 島素企症。 如本文所使用之術語，，脂質調節”劑或”降脂質"劑係指（但 120897.doc -46- 200813095 不限於）降低LDL及/或升高HDL及/或降低甘油三酯及/或降 低總膽固醇及/或用於治療性治療脂質病症之其他已知機 制的藥劑。 才又與本文所述之治療劑包括（但不限於）投與治療有效量 之治療劑。如本文所使用之術語”治療有效量，，係指（但不限 於）治療或預防藉由投與本文所述之GLP-1受體調節劑組合 物可治療之病況的治療劑之量。該量為足以展現可偵測之 治療或預防或改善作用的量。該作用可包括（例如但不限 於）治療或預防本文所列之病況。用於受檢者之精確有效 量將視受檢者之體格及健康情況、所治療之病況之性質及 程度、治療醫師之推薦及進行投與所選擇之療法或療法組 合而定。因此，預先指定確切有效量無益。 如所提供之表及圖式中所述，本文所揭示及主張之肽在 降糖功效模型（〇b/〇b小鼠模型）中展示出具有可比較之曝露 的優良之效力及優良之藥效特性（如藉由在狗體内皮下注 射所量測）。
120897.doc -47- 200813095
SEQ ID NO: 9
SEQ ID NO: 139 120897.doc •48- 200813095
表1 化合物/ SEQ ID NO: 對ob/ob小鼠之效力 於ob/ob小鼠體内 ipGTT期間曝露/劑量 (nM*h/nmol/kg) 狗體内曝露*(以 67 pg/kg皮下注 射） 化合物I ED50=50 nmol/kg 22 89 nM*h 9 ED50=5 nmol/kg 18 452 nM*h 118 ED50=2.5 nmol/kg 4.4 4020 nM*h 151 ED50=1 nmol/kg 16 1566 nM*h 158 ED5 0=2 nmol/kg 11 1467 nM*h *化合物I及SEQ ID NO: 11 8之化合物係在丙二醇/pH 7.4磷 酸鹽緩衝液（1:1)中給藥；SEQ ID NO: 9、151及158之化合 物係在0.2 M Tris緩衝液（pH 8.0)中給藥。 120897.doc -49- 200813095 表2 化合物/SEQ ID No. 對ob/ob小鼠之效力：皮下注射化合物*後於IP 葡萄糖耐受性測試中血糖AUC%降低 狗體内曝露***(以67 pg/kg皮下注射） 」 化合物I -15% (p=0.247? NS) (10 nmol/kg) 89 nM*h 9 -68% (p<0.0001) (10 nmol/kg) 1230 nM*h 118 -70% (p<0.001) (10 nmol/kg) 4020 nM*h 130 1 -72% (p<0.0001) (10 nmol/kg) 541 nM*h 149 -54% (p<0.0001) (10 nmol/kg) 940 nM*h 140 -73% (p<0.001) (10 nmol/kg) 283 nM*h 120 -68% (p<0.0001) (10 nmol/kg) 1116 nM*h 139 -63% (p<0.01) (10 nmol/kg) 1603 nM*h 119 -61% (p<0.0001) (5 nmol/kg) 1257 nM*h 150 -38% (p<0.05) (10 nmol/kg) 979 nM*h AUC=曲線下之面積。AUC值係使用禁食血糖值作為每 一個別動物之基線計算。AUC改變之百分含量係相對於相 同研究中媒劑治療組的AUC計算得到。所得p值係藉由使 用方差分析（ANOVA)隨後使用Fisher事後比較測試（post-hoc test)與媒劑 治療組 進行比 較加以 測定； **NS=非統計 學顯著。***給藥媒劑：丙二醇/pH 7.4磷酸鹽缓衝液 (1:1) 〇 表3a及3b
在表現人類或小鼠GLP-1受艎之CHO細胞中刺激cAMP 合成之效力及功效 表3a-人類GLP-1受體 EC5G平均 值(_ Emax(%) 平均值 Hill 平均值 SEQ ID NO: 158之化合物 0.018±0.004 100.8土6.7 1.5 n=10 SEQ ID NO: 157之化合物 0.026 99.4 1.9 n=l SEQ ID NO: 164之化合物 0.010 97.2 1.5 n=l SEQ ID NO: 173 (或 174) *之化合物 0.018 95.6 2.6 n=l SEQIDNO:174 (或 173) *之化合物 0.024 103.7 2.7 n=l SEQ ID NO: 175 (或 176) *之化合物 0.030 105.3 2.8 n=l SEQIDNO:176 (或 175) *之化合物 0.030 95.8 3.1 n=l 120897.doc -50- 200813095 ec5〇平均 值(_ Emax(%) 平均值 Hill 平均值 GLP-1 0.010土0.002 108.5 土 5.8 1.6 n=10 表3b-小鼠GLP-1受艎 EC5G平均 值(_ Emax (%) 平均值 Hill 平均值 SEQ ID NO: 158之化合物 0.191土0.058 100·9±7·2 1.5 η=10 SEQ ID NO: 157之化合物 0.046 106.4 2.9 η=1 SEQ ID NO: 164之化合物 0.055 103.0 2.7 n=l SEQ ID NO: 173 (或 174) *之化合物 0.114 99.7 1.4 n=l SEQ ID NO: 174 (或 173) *之化合物 0.273 105.0 2.1 n=l SEQ ID NO: 175 (或 176) *之化合物 0.084 100.2 2.7 n=l SEQ ID NO: 176 (或 175) *之化合物 0.126 104.7 1.9 n=l GLP-1 0.041±0.015 106.4±14.5 1·9 n=10 就表 3a 及 3b而言，SEQ ID NChl73 及 SEQ ID ΝΟ··174 之 化合物及SEQ ID NO:175及SEQ ID NO:176之化合物均製 備為非對映異構體之混合物，且藉由HPLC分離為異構體A 及B(實例31)。咪唑-4-基）-2-甲氧基丙醯基 (IMeOp)Xaa!基團之絕對構型尚未測定。 可使用各種固相技術（諸如G. Barany及R.B· MerriHeld， ’’The Peptides: Analysis，Synthesis，Biology” ；第 2 卷-’’Special Methods in Peptide Synthesis，Part Απ，第 3-284 頁，E. Gross 及 J. Meienhofer，編輯，Academic Press，New York，1980 ;及 J· M. Stewart及 J· D. Young，’’Solid-Phase Peptide Synthesis"，第 2版，Pierce Chemical Co·，Rockford， IL，1984中所述者）藉由化學合成製造本文所述之肽及其類 似物。所需策略係基於用於臨時保護α-胺基之Fmoc(9-苐 基甲基曱基-氧基羰基）基團與用於臨時保護胺基酸側鏈之 第三丁基之組合（例如參看E_ Atherton及R· C. Sheppard， 120897.doc -51 · 200813095 ’’The Fluorenylmethoxycarbonyl Amino Protecting Group' in ’’The Peptides: Analysis，Synthesis, Biology’’ ；第 9卷-"Special Methods in Peptide Synthesis，Part Cn，第 1-38 頁 ’ S· Undenfriend 及 J. Meienhofer，編輯，Academic Press，San Diego，1987) o 可由肽的C端起始，於不溶性聚合物支撐物（也稱為，，樹 脂π)上逐步合成肽。合成係藉由經由形成醯胺鍵或酯鍵將 肽之C端胺基酸附加至樹脂上起始。此使得所得肽最終分 別以C端醯胺或緩酸形式釋放。另外，在存在c端胺基醇 之情況下’可將C端殘基連接於如本文所述之2-甲氧基-4-烧氧基本甲基醇樹脂（SASRIN™，Bachem Bioscience，Inc.， King of prussia，pa)，且在完成肽序列組合後，以thf中 之LiBH4釋放所得肽（參看j· μ· Stewart及J· D· Young，同上 文，第92頁）。 需要合成中所使用之C端胺基酸及所有其他胺基酸之以胺 基及側鏈官能基（若存在）係經差別保護，從而可在合成過 耘中選擇性移除α胺基保護基。藉由將胺基酸之羧基活化 為活性酿且使其與附加至樹脂之N-終端胺基酸之未阻斷的 α-胺基反應進行胺基酸之偶合。重複α_胺基去保護及偶合 之順序直至已組合整個肽序列。隨後，通常在限制側鏈反 應之適當淨化劑存在下，將肽自樹脂釋放並伴隨側鏈官能 基之去保護。最後藉由逆相HPLC純化所得肽。 將所而作為前驅體之肽基樹脂合成為最終肽將利用市售 父耳外聚笨乙烯聚合物樹脂Dieg〇，cA; 120897.doc -52- 200813095
Applied Bi〇systems，Foster City，CA)。用於C端魏醯胺之 較佳固體支撐物為：4_(2，，4，_二甲氧基苯基-Fmoc-胺基曱 基）_苯氧基乙醯基-對-曱基二苯曱基胺樹脂（Rink醯胺 MBHA樹脂）；9-Fmoc-胺基-口山-3-基氧基-Merrifield樹脂 (Sieber醯胺樹脂）；4-(9-Fmoc)胺基甲基-3,5-二甲氧基苯氧 基）戊醯基-胺基曱基-Merrifield樹脂（PAL樹脂）。第一個胺 基酸與隨後之胺基酸的偶合可使用分別由DIC/HOBT、 HBTU/HOBT、BOP、PyBOP或由 DIC/HOAT、HATU/HOAT 產生之HOBT或HOAT活性酯實現。用於經保護之肽片段之 較佳固體支撐物為：2-氣三苯甲基氯化物樹脂及9-Fmoc_ 胺基山-3-基氧基-Merrifield樹脂（Sieber醯胺樹脂）。最佳 藉由使經Fmoc保護之胺基酸與2-氯三苯甲基氣化物樹脂在 二氣甲烷及DIEA中反應來達成將第一個胺基酸裝載於該 樹脂上。視需要，可添加少量DMF以促進胺基酸之解離。 可藉由使用肽合成儀（諸如Advanced Chemtech Multiple 肽合成儀（MPS396)或 Applied Biosystems Inc.肽合成儀 (ABI 433a))進行本文所述之肽類似物的合成。若使用 MPS396，則同時合成多達96個肽。若使用ABI 433a合成 儀，則依序合成個別肽。在兩種情況下，逐步的固相肽合 成係利用本文所述之Fmoc/第三丁基保護策略進行。 以兩種方法中之一種將XaalG位及Xaall位之非天然非商業 性胺基酸併入肽鏈中。在第一種方法中，經B〇c或Fmoc保 護之非天然胺基酸係使用適當之有機合成程序於溶液中製 備。隨後，將所得衍生物用於肽之逐步合成中。或者，直 120897.doc -53- 200813095 接使用合成有機化學程序將所需非天然胺基酸構建於樹脂 上。當需要將非天然非商業性胺基酸併入xaa6位或任何其 他Xaa位時，在溶液中合成所需的經Fmoc保護之非天然胺 基酸。隨後，將該衍生物用於逐步固相肽合成中。 有用之Fmoc胺基酸衍生物展示於下。 固相合成中所使用之經正交保護之胺基酸的實例
!rt
Fmoc-His (Trt)
Fmoc-AspiBu1)
Fmoc-GluiBu1) Fmoc-SeriBu1)
Fmoc-Thr-iBu^ 固相合成中所使用之經保護胺基酸
Fm〇C 一 K
Fmoc-Aib-α-胺基異丁酸
Fmoc-Gly
Fmoc-Nle-正白胺酸
Fmoc-L-Nva-正繼安酸
•〇H JV -，9t〇h 〇 °
Fmoc-LPro Fmoc-(S)-a-甲基-Pro -54- 120897.doc 200813095
式IV 可使用任何標準程序裂解用於其各別肽之肽基-樹脂前 驅體並使其去保護（例如參看，D. S. King等人Int. J. Peptide Protein Res. 36，1990, 255-266)。所需方法為在作 為淨化劑之水及TIS存在下使用TFA。通常，在室溫下於 TFA/水/TIS(94:3:3, v:v:v; 1 mL/100 mg 肽樹脂）中攪拌肽 基樹脂2-6 h。隨後，濾除廢樹脂且在減壓下濃縮或乾燥 TFA溶液。沈澱所得粗肽並用Et20肽洗滌或直接將所得粗 肽再溶於DMSO或5 0%乙酸水溶液中供由製備型HPLC進行 之純化。 可藉由使用例如於 Waters Model 4000 或 Shimadzu Model LC-8A液相層析儀上進行之製備型HPLC進行純化來獲得具 有所需純度之肽。將粗肽溶液注入YMC S5 ODS(2〇xlOO mm)管柱中且使用14-20 mL/min之流動速率用線性梯度之 水中之MeCN(二者皆經0.1% TFA缓衝）溶離，且藉由在220 nm下之UV吸光度監測流出物。經純化肽之結構可藉由電 120897.doc -55- 200813095 喷霧MS分析予以確定。 在實例及本文中其他地方使用以下縮寫： Ph=苯基 Bn=苯曱基 i-Bu=異丁基 i-Pr=異丙基 Me=甲基 Et=乙基 /
Pr=正丙基 Bu=正丁基 t-Bu=農三丁基 Trt=三苯甲基 TMS =三甲基矽烷基 TIS =三異丙基矽烷 EtsO^乙鍵 / HOAc 或 AcOH=乙酸 V -
MeCN或AcCN=乙腈 DMF=N，N-二甲基甲醯胺 EtOAc=乙酸乙酉旨 THF=四氫吱喃 TFA =三氟乙酸 TFE = a，a,a-三 I 乙醇 Et2NH=二乙胺 NMM=N-曱基嗎啉 120897.doc -56- 200813095 NMP=N-曱基口比洛咬:酮 DCM=二氣甲烷 n-BuLi =正丁基鐘 P d / C =碳載雀巴
Pt〇2=氧化顧 TEA=三乙胺 min. =分鐘 h或hr=小時 L=公升 mL或毫升 μί =微升 g=公先 mg=毫克 mol33莫耳 mmol=毫莫耳 meq=毫當量 rt或RT=室溫 sat或sat’d=飽和 aq. =水溶液 mp =溶點
Bip =聯苯丙胺酸
LiBH4=棚氫化鋰
Mg， Β Ο P試劑=苯幷二。坐-1 -基氧基-參-二甲基胺基-鱗六氣攝酸 120897.doc -57- 200813095 鹽（卡特試劑（Castro’s reagent))
PyBOP試劑=苯幷三唑-1 基氧基-三咐^咯啶基鱗六氟磷酸鹽 HBTU=2-(1H-苯幷三唑-1-基）-1，1，3,3-四甲錁六氟磷酸鹽 HATU=0-(7-氮雜苯幷三唑-1-基）-1，1，3,3-四甲錁六氟磷酸 鹽 HCTU=2-(6-氯_1-H-苯幷三唑-1-基）_1，1，3,3-四曱錁六氟磷 酸鹽 TFFH=六氟石粦酸四甲基-氟甲脉 f DMAP=4-(二曱基胺基）吡啶 DIEA=二異丙基乙胺 EDAC = 3-乙基-3’-(二甲基胺基）丙基-碳化二醯亞胺鹽酸鹽 (或1-[(3-(二甲基）胺基）丙基])_3_乙基碳化二醯亞胺鹽酸鹽） Fmoc或FMOO葬基甲氧基羰基 Boc或BOC=第三丁氧獄基 Cbz=苯甲氧羰基或苄氧羰基 , HOBT或Η0ΒΤ·Η20=1 -羥基苯幷三唑水合物
V
Cl-HOBt=6-氣-苯幷三唑 ΗΟΑΤ=1-羥基-7·氮雜苯幷三唑 TLC=薄層層析 HPLO高效液相層析 LC/MS=高效液相層析/質譜 MS 或 Mass Spec=質譜 NMR=核磁共振 Sc或SC=皮下 120897.doc -58- 200813095 IP或ip =腹膜内 GTT=葡萄糖耐受性測試 熟習肽化學技術者將瞭解，胺基酸存在D與L異構體， 且本文所揭示及主張之標的物（包括序列表中所提供之標 的物）包括使用已併入本文所述之肽合成中之胺基酸的異 構體之任一者或其混合物。 合成式IVa之胺基酸之通用程序 ί
可藉由若干方法製備經保護之式IVa之胺基酸。舉例而 吕（流程A) ’可以標準文獻之方法經由鈀介導之催化使碘 漠-雜環i(其中XpN)與硼酸偶合，從而提供芳基雜環溴化 物ii ’藉由將其鋰化及與醯化劑（諸如二甲基甲醯胺）之反 應提供駿iii。藉由硼氫化鈉或類似試劑將醛還原成醇w， 且藉由在48。/。氫溴酸中使“長時間回流製備相應之溴化物 v。0’Donnell(7>ira/zdr⑽ Leiiers 39 8775 (1998))之方法 後，使用對掌性催化劑以v使2 —(二苯基亞甲胺基）乙酸第三 丁酯烷基化產生對掌性酯vi，此後，用強無水酸使其去保 護並用Fm〇c_Cl處理提供主要為一種對掌性形式之Fm〇c第 三丁酯vii。由常用有機溶劑使vU再結晶將提供對映異構 體過量>95%之viii。使用強無水酸移除酯提供式IVa之化合 物0 或者，可藉由自由基誘導之甲基雜環ix溴化（流程B)得到 溴甲基雜環X來製備式IVa之化合物。藉由上文所述之 〇’D〇nnell方法使x烷基化且類似再結晶產生高對映異構體 過量之對掌性酯xiii。如流程A中所述之硼酸偶合將產生式 120897.doc -59- 200813095 IVa之化合物。
流程A
a) R3aR6aC6H3B(OH)29 Pd(Ph3P)4,甲苯/10% Na2C03 b) s-BuLi，DMF/甲苯 c)NaBH4/MeOH d)48%HBr，回流 e)PhC=NCH2C02tBu，對掌性催化劑，2-第三丁基亞胺基-2-二乙基胺基-1，3-二甲基-全氫-1，3,2-二氮雜磷雜苯/THF f) i. 15°/。檸檬酸 ii. FmocCl，Na2C03/THF-H20 g)再結晶 h) TFA
流程B
-60- 120897.doc 200813095
a) NBS，ΛΕΒΝ/(Χ14 b) PhC=NCH2C02tBu，對掌性催化劑，2-第三丁基亞胺基-2-二乙基胺基-1，3-二甲基-全氫-1，3,2-二氮雜磷雜苯/THFc)i.l5%棒檬酸ii.FmocCl，
Na2C03/THF-H20 d)再結晶 e)R3aR6aC6H3B(OH)2，Pd(Ph3P)4/ 甲苯-10%Na2CO3 f)TFA 可藉由用NBS處理由經基雜環xiv製備化合物ix(流程 c) 〇
流程C
ix R4a a) NBS, AIBN/CC14 中間體ix之另一合成法使用xv(3-蛾-丙胺酸甲酯）及i藉由 鋅-銅偶合進行（流程D)。
流程D
,Br Γ NHBoc vx i R4a
a) Zn-Cu (Ph3P)2PdCl2,苯，DMA 芳基嘧啶基甲基溴化物xxiii(X2，X3=N，Xi，X4=CR4a)可 由芳腈xv製備（流程E)。 -61 - 120897.doc 200813095
流程E
羥基噹啶1¥1係由XV藉由用羥胺鹽酸鹽處理腈製備。嘧 啶XVii係由XVi氫化得到。用烯醇亞曱基丙二酸酯使^“縮 合產生嘧啶xix，用磷醯氣使xix氯化得到以。經由催化氫 化脫鹵產生XXI並用DiBAl還原提供醇xxii。用磷醯溴處理 / k. 醇得到不穩定溴化物xxiii，必須立即將其用於流程A中以 提供經保護之胺基酸vi。 式 IVa之化合物（R7=Me)係藉由 Kapadia，丄（9rg. C/zem. 66 1903 (2001)之方法由噁唑啶xxiv製備（流程F)。因此，使用 雙（二甲基砍燒）胺基奸或其他強驗以V使χχίν烧基化將提供 。強酸水解xxv隨後保護（用Fmoc-Cl或Fmoc-OSu或其類 似物）胺得到式IVa型化合物。 120897.doc -62- 200813095
流程F
以下實例說明本文所述及主張之本發明之各種方法及特 定實施例。熟習此項技術者應瞭解，該等實例不限制本發 明之範’，而用於引導熟習此項技術者實踐本發明之實施 例。本發明内容及申請專利範圍預期並涵蓋其他實施例。 實例1 狀之同時固相肤合成 使用以下人工程序以分批模式製備在XaaiG位及Xaa"位 含有胺基酸之二肽基樹脂，隨後在MPS_396肽合成儀上利 用自動同時合成#案持續延長肽鍵。上述通用冑驗及實例 10-19中描述人工偶合中所使用之經N_α_Fmoc保護之聯苯 基丙胺酸或苯基-雜芳基-丙胺酸衍生物的合成。 藉由用DMF(4 X 10 mL/g，5 min)洗務使足以合成若干肽類 似物之量之9-Fmoc-胺基，山_3_基氧基·心仙⑽樹脂 醯胺樹脂’·裝載：〇.5至〇·7 膨脹。隨後，使用以 爾（10 mL/g)中之2〇%娘咬進行兩次處理（各自分別5論 120897.doc -63· 200813095 及15 min)移除 Fmoc基團。用 DMF(4xlO mL/g)及 ΝΜΡ(4χ10 πι L / g)洗務樹脂。將Fmoc-L-4-(2* -曱基苯基）-3-σΛσ定基丙胺 酸-OH(HCl鹽）（1.1當量）（或由式IVa表示之任何其他胺基 酸）、PyBOP(l.l當量）及DIEA(3.3當量）於NMP中之0.5 Μ溶 液添加至樹脂中。隨後，振盪或渦旋樹脂16-24小時。使 用定量寧海準測試（ninhydrin test)監測偶合完成。抽乾樹 脂，用 NMP(3xl0 mL/g)及 DMF(3xl0 mL/g)洗滌並用 DCM(10 mL/g)中之10%乙酸酐處理90 min。DCM洗滌 (4x10 mL/g)後，接著由用DMF中之20%哌啶移除Fmoc基團 起始，且在偶合步驟中使用如式II所表示之經Fmoc保護的 聯苯基丙胺酸類似物進行使用DIC-HOAt介導之第二次人 工偶合循環。此合成流程產生所需經Fmoc保護之二肽基-Sieber酸胺樹脂。 隨後，將合成一組經設計類似物所需之此等二肽基-樹 脂以下列方式用於每回合多達96肽之自動MPS合成中。將 二肽基-樹脂於二氯曱烷/DMF(60:40)中之懸浮液以對應於 每反應器孔0.01-0.025 mmol(20-50 mg)樹脂之體積裝載於 Advanced ChemTech MPS 396合成儀之96孔反應器中。將 反應器置放於儀器上並抽乾。接著，用DMF(0.5-1.0 mL， 3x2 min)洗滌各孔，且使其經歷如藉由預先程式設計之序 列合成表所確定之組合各別肽序列所需數量的自動偶合循 環。 下文將描述用於典型每孔0.025 mmol同時合成96種化合 物之詳細逐步合成方案。此方案適於每個別回合同時合成 在12至96範圍内的大量類似物。通用合成方案描述於流程 1中0 120897.doc -64- 200813095 流程1 GLP-1受體調節劑肽類似物之自動合成
1) 哌啶/DMF(移除Fmoc) 2) U 當量，Fmoc-⑸-4·(2'-甲基苯基)-3-吡啶基丙胺酸/PyBOP/DEA/NMP (16 h); 3) ⑻重複步驟 1; (b) 2-4 當量，Fmoc-(S)-Bip(2，-Et-4，-OMe)/DIC/HOAt/NMP (16 hr); 4) ⑻重複步驟l;(b)5 當量，Fmoc-Xaa9/DIC/HOBt(2hr); 5) 使用Fmoc-X^重複步驟4; 6) 使用Fmoc-X^重複步驟4; 7) ⑻重複步驟 1; (b)Xaa6/HOAt/DIC (6 hr) 8) ⑻重複步驟 1; (b) 10 當量，Fmoc-Xaa5/HOAt/DIC (4 hr); (c) 10% Ac2OZDCM (30 min)[封端未經反應之胺的步驟】； 9) 重複步驟 1; (b) 10 當量，Fmoc-Xaa4/HOAt/DIC (2 hr)·， 10) 使用卩!110^333重複步驟9·， 11) 重複步驟l ;(b)5 當量，Fm〇c-Xaa2/HOAt/DIC(16hr); 12) 使用Fmoc-X^/HOAt/DIC重複步驟 11; 13) ⑻重複步驟1; (b)用NMP及DCM洗條·，⑹真空乾燥； 14) TFA/7}C/三異丙基矽烷(2 hr);
15) RP-HPLC 純化
Xaal-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaal0-Xaall 在起始合成之前，視需要製備以下試劑溶液並將其置放 於儀器上：DMF中之1_5 M(15%)派啶；NMP中之0.5 Μ DIEA ; ΝΜΡ 中之 0.36 M DIC ; DMF 中之 1 M(10%)乙酸 酐。將所需經Fmoc保護之胺基酸製備為於〇·36 Μ HOAt/NMP中之0.36 Μ溶液，且將其置放於32位胺基酸架 -65- 120897.doc 200813095 中之適當位置中。 藉由用DMF(1.0 mL; 1x5 min·; 1x15 min·)中之 20% 哌啶 處理使上文所製備之經Fmoc保護之二肽基-樹脂去保護。 接著，用NMP(8xl.O mL)洗滌樹脂。 藉由將適當Fmoc-胺基酸（0.075 mmol，3.0當量）、 HCTU(0.075 mmol，3.0 當量）及 DIEA(0.15 mmol，6.0 當量） 於NMP(1 mL)中之溶液人工添加至所有孔中來進行下一個 胺基酸（通常為Fmoc-Asp(OtBu)-OH或另一 Fmoc胺基酸）與 (視需要）適當正交保護基之偶合。使偶合進行3 h。此後， 以氮壓力（3-5 psi)抽乾反應器並用NMP(4xl.O mL)洗滌 孔。 下一偶合循環係以移除如上文所述之Fmoc基團開始， 且涉及藉由在此位置處所需之序列取代視需要偶合^㈤。^ Ser(tBu)-OH或不同之Fmoc胺基酸。偶合係以與關於Fmoc-Asp(OtBu)-OH所述之方式相同之方式進行。以相同方式進 行下一個偶合步驟以視需要將Fmoc-Thr(tBu)-OH或任何其 他所選擇之Fmoc-胺基酸併入此序列中。 如下偶合下一個Fmoc-胺基酸（例如Fmoc-α·曱基-Phe-OH 或其類似物）：以常用方式Fmoc去保護後，人工添加Fmoc-胺基酸（1-5當量）、HOAt(l-5當量）及DIC(l-5當量）於 ΝΜΡ(1·0 mL)中之溶液且使偶合進行16-24小時。在此情況 下不重複進行偶合。在進行常見之偶合後洗滌後，如本文 所述用乙酸酐將肽基-樹脂封端。 下一個偶合步驟涉及如在此位置處序列置換所需之 120897.doc -66- 200813095
Fmoc-Thr(tBu)-OH或取代類似物。如關於最初Fm〇e_ Asp(〇tBi〇-OH及其類似物之MPS偶合所述進行偶合，但使 用10當量Fmoc-Thr(tBu)-OH或取代類似物，並使偶合進行 16 hr，且所使用之偶合試劑為NMP中之DIC/HOAt。進行 常見之偶合後洗務後，以DCM(1 X 1 mLx60 min)中之10%乙 酸酐使肽基·樹脂封端。 使用關於偶合Fmoc-Asp(OtBu)-OH所述之相同偶合方 案’並將其重複用於接下來之三個胺基酸殘基。如上一段 所述之 Fmoc-Thi*(tBu)-OH 殘基偶合 Fmoc-His(Trt)-OH 以便 完成所需肽類似物之序列組合。為偶合在某些序列位置處 所需之市售及非市售非天然胺基酸，使用與上文關於第6 位（Xaa6)之新穎胺基酸所述之偶合方案類似的單一偶合方 案。 最後’如上文所述，用DMF中之20%哌啶移除Fmoc基 團’且用DMF(4xl.O mL)及DCM(4xl.〇 mL)洗滌肽基-樹 月曰。接著，藉由施加恆定氮氣壓力（5 pSi) 10—15 min於反應 器室上對其進行乾燥。 裂解/去保護 如下藉由用TFA裂解混合物處理將所需肽自其各別肽基_ 樹脂裂解/去保護。將TFA/DCM/三異丙基矽烷（7〇:28:2) (1 · 0 mL) /谷液添加至反應器室中之每一孔中，隨後渴旋1 〇 min。將此步驟又重複兩次，且藉由正壓將孔中之TFA溶 液收集於位於反應器底部上96小瓶匹配室加叫96_ vial block)中的預稱瓶重之小瓶中。封蓋小瓶且再輕柔渦 120897.doc -67- 200813095 旋90 min。打開小瓶且在SpeedVac™(Savant)中將其濃縮至 約0_2 mL之體積。接著，藉由添加二異丙基醚（3 mL)並簡 單進行渦漩使粗肽沈澱。藉由離心使沈澱物成球狀，並傾 析上清液。於SpeedVacTM(savant)中乾燥小瓶得到粗肽， 產率通常>100%(20-40 mg)。將粗肽直接溶解於2 mL 0.6% 之氫氧化銨中以供如下製備型HPLC進行之純化。 粗肽之製備型HPLC純化 於 Waters Model 4000 或 Shimadzu Model LC-8A液相層析 儀上進行製備型HPLC。將各粗肽溶液注入YMC S5 ODS(2〇xlOO mm)管柱中，且使用線性梯度之水中之 MeCN(二者經0_1% TFA緩衝）溶離。所使用之典型梯度為 以 14 mL/min 流速於 0.1% TFA/水中之 20% 至 50% 0.1% TFA/MeCN歷時15 min且在220 nm下UV偵測流出物。通常 在10-11 min後，將各孔溶離之所需產物與雜質分離，且通 常以10-15 mL單一溶離份將其收集於溶離份收集器上。藉 由凍乾其HPLC溶離份獲得呈無定形白色粉末狀之所需 肽。 純化肽之HPLC分析 如上文所述藉由製備型HPLC純化後，於由以下器件組 成之Shimadzu LC-10AD或LC-10AT分析型HPLC系統上藉 由分析型RP-HPLC分析各肽：SCL-10A系統控制器、SIL-10A自動注射器、SPD10AV或SPD-M6A UV/VIS偵測器或 SPD-M10A二極體陣列偵測器。使用YMC ODS S3(4.6x50 mm)管柱，並使用一種以下梯度進行溶離：A中之10-70% 120897.doc -68- 200813095 B歷時 8 min，2·5 mL/min(方法 A) ; A 中之 5-80% B歷時 8 min，2·5 mL/min(方法 B) ; A 中之 5-70% B歷時 8 min，2·5 mL/min(方法 C) ; A 中之 25-75% B 歷時 8 min，2.5 mL/ min(方法 D) ; A 中之 20-75% B歷時 8 min，2.5 mL/min(方法 E) ; A 中之 1 5_70% B歷時 8 min，2·5 mL/min(方法 F) ; A 中 之 10-90% B歷時 8 min，2.5 mL/min(方法 G) ; A中之20-65% B歷時 8 min，2.5 mL/min(方法 H) ; A 中之 5-90% B歷 時 8 min，2.0 mL/min(方法 I) ; A 中之 5-90% B歷時 8 min， 2.5 mL/min(方法 J) ; A 中之 20-80% B歷時 8 min，2·5 mL/ min(方法 K); A中之 10-100% B歷時 8 min，2.5 mL/min(方 法 L); A中之 10-75% B歷時 8 min，2.5 mL/min(方法 M)。 移動相 A : 0.1% TFA/水；移動相 B : 0.1% TFA/AcCN。純 度通常>90%。 質譜特徵 藉由電噴霧質譜（ES-MS)以流動注射或LC/MS模式表徵 各肽。在所有分析中使用陽離子及陰離子電喷霧模式之 Finnigan SSQ7000 單一四極質譜計（ThermoFinnigan，San Jose，CA)。在300至2200 amu之質量範圍内歷時1.0秒之掃 描時間獲取全掃描資料。以單位解析度操作四極。對於流 動注射分析而言，使質譜儀與Waters 616 HPLC泵（Waters Corp·，Milford, ΜΑ)連接並裝備有HTS PAL自動取樣器 (CTC Analytics，Zwingen，Switzerland)。將樣本注入含有 50:50水：AcCN及0.1%氫氧化銨之移動相中。分析用流速為 0.42 mL/min 且注射體積為 6 μΐ。將 ThermoSeparations 120897.doc •69- 200813095
Constametric 3500液相色譜儀（ThermoSeparation Products， San Jose，CA)及HTS PAL自動取樣器用於LC/MS分析。使 用 Luna Cu，5微米管柱，2x30 mm(Phenomenex，Torrance， CA)達成色譜分離。分析用流速為1 ·〇 mL/min並分離管柱 流出物，從而使進入電喷霧界面之流速為400 μΐ/min。執 行A中0°/〇至100%之B的線性梯度歷時4 min，其中移動相A 為98:2水：AcCN及10 mM乙酸銨且移動相B為10:90水：AcCN 及10 mM乙酸銨。在220 nm下監測UV反應。將樣本溶解於 200 μΐ 5 0:50 H2ChMeCN(0.05% TFA)中。注射體積為 5 μΐ。 在所有情況下，實驗量測之分子量與經計算之單同位素 分子量相差不超過〇·5道爾頓（Dalton)。 實例2 A.合成N醯基化肽類似物之通用程序（流程2) 如流程2所示，由如本文所述進行製備的經保護之肽基-樹脂中間體（丨）（0·015 mm〇i)起始N醯基化肽類似物之合 成。使用本文所述之程序移除Fmoc基團，且使用本文所述 之通用方法中所述的偶合方案使所得樹脂中間體2與相關 經Fmoc保護之胺基酸或羧酸偶合。在可用適當酸酐之情況 下，使用NMP中之5當量酸酐進行N醯基化。裂解/去保護 所得N醯基化肽類似物（3)並藉由製備型HPLC用本文所述 之通用方法加以純化。 120897.doc -70- 200813095 流程2 1位殘基經取代/經衍生化之肽類似物的合成
Ri
Fm〇c—HN^ii~Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaal0-Xaall-Sieber Amide Resin 1 移除Fmoc基 啶 TDMF 、rDCM洗滌
Ri ▼ H2N/|i~Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaal0-Xaall-Sieber Amide Resin ° 2
1. Fmoc-AA/竣酸 DIC, HOAt, NMP;
或(R-C0)20, NMP 2. 移除Fmoc 3) TFA/H20/三異丙基矽烷 Ri R>wn/||~Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaal0-Xaall-NH2 B. 合成肽類似物之N胺基曱酸酯衍生物的通用程序
可由如本文所述進行製備的經保護之肽基-樹脂中間體 (1)(0.015 mmol)起始肽類似物N胺基甲酸酯衍生物之合 成。使用本文所述之程序移除Fmoc基團，且使所得樹脂中 間體2在適當鹼（諸如三級胺）存在下與相關氯甲酸烷酯/氯 甲酸芳酯反應，或與二-碳酸酯或活性碳酸酯（諸如，碳酸 對硝基苯酯或碳酸苯酯或碳酸羥基琥珀醯亞胺基酯）反 應。 C. 合成肽類似物之N·脲衍生物的通用程序 可由如本文所述進行製備的經保護之肽基-樹脂中間體 •71 - 120897.doc 200813095 (1)(0.025 mmol)起始肽類似物冰脲衍生物（例如，n聚體） 之e成使用本文所述之程序移除Fmoc基團，且使所得樹 脂中間體2與（例如）如Κ· Burgess等人，j· Am· chem. Soc. 1997，119，1556-1 564中所製備之相關異氰酸酯反應；或 者，可使樹脂中間體2與相關胺甲醯基氯反應。類似地， 可由經保護之1〇聚體肽基-樹脂中間體起始、移除Fm〇c及 使所得肽基-樹脂中間體與相關異氰酸酯或胺甲醯基氯反 應製備10聚體肽類似物的N -腺衍生物。 D·合成肽類似物之N-磺醯胺的通用程序 可由如本文所述進行製備的經保護之肽基-樹脂中間體 (1)(0.025 mmol)起始肽類似物磺醯胺（例如，11聚體）之 合成。使用本文所述之程序移除Fmoc基團，且使所得樹脂 中間體2與相關續醯氯反應。類似地，可由經保護之1 〇聚 體肽基-樹脂中間體起始、移除Fmoc及使所得肽基·樹脂中 間體與相關磺醯氯反應製備10聚體肽類似物的N-磺醯胺。 E·合成肽類似物之N-磺醯胺衍生物的通用程序 可由如本文所述進行製備的經保護之肽基-樹脂中間體 (1)(0.025 mmol)起始肽類似物N-磺醯脲衍生物（例如，11聚 體）之合成。使用本文所述之程序移除Fmoc基團，且使所 得樹脂中間體2與相關胺磺醯氯R4R5N-S02-C1反應得到磺 醯胺中間體（例如參看P· Davern等人J· Chem· Soc·，Perkin Trans. 2，1994 (2)，381-387)。類似地，可由經保護之10聚 體肽基-樹脂中間體起始、移除Fmoc及使所得肽基-樹脂中 間體與相關胺磺醯氣HN-SOyCl反應製備10聚體肽類似 120897.doc -72- 200813095 物的N-磺醯胺衍生物。 實例3 使用Applied Biosystems Model 433A肽合成儀固相合成 肽類似物 下文為有關使用升級版Applied Biosystems Model 433A 肽合成儀固相合成典型肽類似物的基本描述。已升級之合 成儀硬體及軟體使得能夠以偶合之反饋控制電導監測Fmoc 之去保護步驟。該等方案允許在0.05至ι·〇 mmol範圍内的 合成規模。 上文已結合狀類似物之同時合成描述兩個非天然C端胺 基酸之併入。將該經Fmoc保護之二肽基-樹脂用於此ABI 合成中。將經Fmoc保護之二肽基-樹脂（〇·ι mmol)置放於儀 器上適當尺寸的容器中，用NMP洗務6次並使用以22 %旅 σ定/NMP(分別為2 min及8 min)進行之兩次處理去保護。又 進行一或兩次經監測去保護步驟，直至監測選擇之條件令 人滿意（最後兩個基於電導率之去保護峰之間的差異<1〇%) 為止。總的去保護時間為1 〇 -12 min。用NMP洗條已去保護 之二肽基·樹脂6次，且隨後使其與下一個胺基酸偶合。將 藉助下一步驟中所使用之實例說明該程序。 因此’接下來使用以下方法偶合Fmoc-Asp(〇tBu)_〇H :
將 Fmoc-Asp(OtBu)-OH(l mmol，10 當量）溶解於 2 mL NMP 中’並藉由隨後添加DMF(2.2 mL)中之0.45 M HBTU/HOBt 及2 M DIEA/NMP(1 mL)進行活化。接著，將經活化之經 Fmoc保護的胺基酸溶液轉移至反應容器中，且使偶合進行 120897.doc -73- 200813095 30至60 min，此視來自去保護步驟之反饋而定。隨後，用 NMP洗滌樹脂6次，且使其經歷8個如上文所述之額外去保 護/偶合循環，以便完成所需序列之組合。依序使用之 Fmoc-胺基酸如下：Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-α-曱基-Phe(2-氟）-OH 或其類似物、Fmoc-Thr (tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Aib-OH及Fmoc-His(Trt)-OH。最後，如上文所述以NMP中 之22%哌啶移除Fmoc基團，且用NMP及DCM洗滌肽基-樹 脂6次，並於真空中進行乾燥。 或者，使用經修改之偶合方案，其中藉由隨後添加 DMF(0.52 mL)及 DIC(40 μΙ〇 中之 0·5 M HOAt 活化經 Fmoc 保護之胺基酸（0.26 mmol)，人工將其轉移至反應容器中並 使其偶合14-18 hr。 裂解/去保護 藉由用TFA/水/三-異丙基矽烷（96上2)(3.0 mL)溶液處理 2 hr將所需肽自其各別肽基-樹脂中裂解/去保護。濾除樹 脂，用TFA(1.0 mL)漂洗，且將已合併之TFA濾液添加至35 mL Et20中。藉由離心收集所得沈澱且最後乾燥，得到232 g呈白色固體狀之粗肽產物。藉由如本文所述之製備型 HPLC純化此粗肽產物。所使用之梯度為0.1% TFA/水中之 15%至45% 0.1% TFA/MeCN歷時40 min。彙集含有純產物 之溶離份並將其凍乾，得到28.4 mg(l 8%回收率）純產物。 實例4 由式II-IV及IIa_IVa表示之Xaal〇位及Xaall位處聯苯基丙 120897.doc -74- 200813095 胺酸類似物之合成 _對於第xaal〇位及第xaall位殘基係以由式叫乂及na_iva表 示之經取代胺基酸類似物（亦即，聯苯基丙胺酸類似物（Bip 類似物）或雜-聯苯基丙胺酸類似物）表示的類似物而言，用 下文兩種方法中之一者將其併入肽鏈中。 方法A :固相Suzuki縮合 在方去A中，實行固相Suzuki縮合以適於進行隨後之固 f 相肽合成以獲得目標肽之方式製備所需經修飾之聯苯基丙 胺酸或雜-聯苯基丙胺酸殘基。當目標肽中第心川位之胺 基酸係以經修飾聯苯基丙胺酸或雜_聯苯基丙胺酸殘基表 示時，如流程3所示製備該胺基酸。移除B〇c心胺基保護 基後，使用如前文中所述之多種肽合成法繼續鏈延長以獲 得所需肽或其衍生物。當經修飾之聯苯基丙胺酸或雜_聯 苯基丙胺酸類似物處於目標肽之第Xaai〇位時，如流程4中 所示，使用適當二肽於固體支撐物上製備所需胺基酸。 L, 接著，使用含有所需經修飾聯苯基丙胺酸或雜-聯苯基 丙胺酸衍生物之所得二肽基區段進行目標肽或其衍生物之 合成。當第XaalG位與第XaalHi均需要新穎之聯苯基丙胺酸 或雜-聯苯基丙胺酸殘基時，如流程6(下文）所示進行兩次 連續之固相Suzuki反應。 製備在第Xaall位含有由式Π_Ιν及11心1化表示之胺基酸之 SynPhase™ Lanterns的通用程序（Suzuki偶合） 120897.doc -75- 200813095 流程3
Pd⑼催化劑 r-b(oh)2
1.20% 哌 D定 /DMF 2. Boc-Phe(4-l)-OH /DIC/ HOBt/D旧A 於1:1 CH2CL2/DMF 中
:SynPhaseTM Lantern,接枝 聚苯乙烯表面
R_B(OH)2 =芳基或雜芳基g朋酸
K3P〇4水溶液 DMA 80eC
通用程序A
將經直接經由Knorr鍵（Boc-胺基酸-樹脂）連接或經由胺 基酸-Knorr鍵（Boc_二肽-樹脂）連接之N-a-Boc-4-埃代苯丙 胺酸殘基衍生化的SynPhaseTM Lanterns(A系列（0.075 mmol/lantern)或 D 系列（0.035 mmol/lantern)，來自 M imo topes)置放於具有螺紋蓋之13x100 mm玻璃培養管 中。（對D系列lantern使用以下程序。對涉及A系列lantern 之反應使用類似反應物比率。）將芳基或雜芳基·硼酸 (0.140 mmol，4當量）溶解於0.30 ml Ν,Ν-二甲基乙醯胺 中0 將攝酸鉀（0.280 mmol，8當量，0.14 ml 2 Μ水溶液）添加 120897.doc -76· 200813095 至芳基或雜芳基-硼酸溶液中，隨後添加含有4〇 mg_(三 苯基膦）鈀（0)催化劑（約 10 mole %，0 0035 mm〇1)2〇 1〇 ml N，N-二甲基乙醯胺溶液。以氮氣流覆蓋所得混合物，且緊 禮、封盖反應容器’且在置放於回旋振盪器上之同時於8〇。〇 下保持17-20小時。用3xl ml N，N_二甲基乙醯胺及3χ；ι如 二氯甲烷洗滌（每個洗滌循環最少3 min)lantern，然後裂解 Boc基團（參見以下通用程序）。
通用程序B 遵循通用程序A進行該等反應，但使用不同催化劑。對 於此程序而言，所使用之催化劑為二氣雙（三苯基膦）鈀 (II)。對於D系列lantern級別反應而言，使用約1〇 m〇1 ο/〇(0·0035 mol)催化劑。
裂解Boc基困之程序 方法A (以下程序適用於D系列lantern，0.035 mmol/lantern。對 於A系列lantern使用類似的適當比例的程序，〇 〇75 mmol/lantern)。用0.5 ml由三氟甲烷石黃酸三甲基矽烷酯、 2,6·二曱基吡啶及二氯曱烷（體積比1:1:3)組成之試劑溶液 處理如通用程序A或B中所述製備的經Boc保護之lantern。 各自在溫和攪拌下以該等試劑進行2次處理歷時1小時後， 用4x1.0 ml二氣甲烷、3x1.0 ml N，N-二曱基甲醯胺及 3x 1 ·0 ml二氯甲烧洗務樹脂。接著，使lantern在肽合成序 列中經歷隨後之醯基化反應（偶合反應）。
方法B 120897.doc -77- 200813095 室溫下，在溫和攪拌下用無水1，4-二噁烷中之0.5 ml 1 N HC1處理如通用程序A或B中所述製備的經Boc保護的 lantern。用 2x1.0 ml 1，4-二口惡烧、2xl_0 ml N，N-二甲基乙 醯胺中之10% N，N-二異丙基乙胺（體積：體積）、3x1 ·0 ml N，N-二甲基乙醯胺及3x1.0 ml二氯甲烷洗滌lantern提供準 備用於隨後之醯基化反應（偶合反應）步驟之游離胺基-lantern 〇 實例6 製備在XaalG位含有經修飾之聯苯基丙胺酸殘基之 lan tern的通用程序 如流程4所示，利用上文關於Suzuki偶合所述之通用程 序（A或B)以結合至SynPhase™ Lantern之胺基酸（第Xaall位） 起始獲得在第Xaal〇位含有經修飾Phe之所需二肽基 lantern 〇 流程4
FmocHN
pCH3 Λ 1.20% 哌啶/DMF 2.1:1 DMF/CHA中之Fi 胺基 4 I 3.20%_1®/DMF _ 4.1:1 DMF/C^A 中之 Boc- 胺基酸-OliSld/HOBt 'moc- OCH3
醯胺-連接基-lantern “醯胺·連接基-lantern” Pd⑼催化劑 4當量R5-B(〇H)2 8當量K3P〇4 t DMA, 80°C, 17 -20 h
醯胺-連接基-lantern 1·二噁烷中之丁]^-0^/2,6-二甲基吡x； U$/CH2C12 (1:1:3)或1NHC1 2.DMA 中之 10%DIEA_^ R係以式II-V中所述之側鏈表示； R5=芳基或雜芳基 實例7 120897.doc -78- 200813095 製備在第Xaal❹位與第Xaall位含有由式II-IV及Ila-IVa表 示之胺基酸之lan tern的通用程序 如下述流程6所述，利用上文關於第Xaali位經修飾類似 物所述之程序（流程1)並進行Suzuki偶合程序連續兩次來製 造在第XaalG位與第Xaall位含有經修飾苯丙胺酸殘基之二肽 基 lantern 〇 實例8 醯声化/延長SynphaseTM Lantern上之肽之通用程序 Fmoc去保護程序 將 D 系列 SynPhase™ Lantern(每 lantern裝載 0.035 mmol) 添加至0.5 ml 8:2 N，N-二甲基甲醯胺/哌啶（體積：體積）中。 施加溫和攪拌。1 h後，用3x1.0 ml Ν,Ν-二甲基甲醯胺及 3χ 1 ·0 ml二氯甲烧洗務lantern，每次洗務使lantern浸泡至 少 3 min 〇 醢基化/偶合胺基酸之程序（流程5) 將側鏈及α-胺經保護之胺基酸（〇·ι〇5 mmol)溶解於0.5 ml 1 · 1 N，N-二甲基甲醯胺/二氯甲烧中。向此溶液中添加經 基苯幷三嗤（0·105 mmol)、N，N-二異丙基乙胺（0.3 15 mmol) 及N，N - 一異丙基碳化二醢亞胺（nos mmol)。使胺基酸溶 液靜置10 min，此後，將含有心胺去保護之肽（每lantern 〇·〇35 mmol)之D系列lantern添加至該溶液中。封蓋小瓶， 並輕柔攪拌16-20 h。接著，用3x1.0 ml N，N_二曱基甲醯胺 及3 X 1 .〇 mi二氯甲炫洗滌iantern，每次洗滌循環均使 lantern浸泡 3-5 min。 120897.doc •79- 200813095 流程5 ο
DIC, HOBt, DIEA 1:1 DMF/CH2CI2> 16-20 h "連接基+丨antern"
Ji〇H
FmocHN 丫足 連接基 + lantern" R9 Η 〇 ku Η
Rl0SRu係由式II-IV及Ila-IVa中所述之側鏈表示
流程3 流程6
“醯胺連接基-lantern” 1. 二噁烷中之TMS-OTf/2,6·二甲基吡啶 ICKfl2 (1:1:3) ^lNHCl
2. DMA*；^10%DIEA 3. 4.1:1 DMF/CH2C12中之BooPhe (4-I)-〇H/DIC/H0Bt
_ “醯胺連接基-lantern” /
，胺連接基-lantern”
“醯胺連接基-lantern”
Pd (0)催化劑 4當量R5-B(〇H)2 _8當量K3P〇4_ DMA, 80 °C, 17 - 20 h R-B(OH)2 =芳基或雜芳基酉朋酸 1. 二噁烷中之TMS-OTf / 2,6-二甲基吡啶 /CH2C12 (1:1:3)或1NHC1
2. DMA‘之 10% DIEA K。及Rn係由式II-IV及na-IVa中所述之胺基酸側 實例9 經由片段縮合製備肽之通用程序 120897.doc -80 - 200813095 在方法A中’如實例7中所述，實行固相Suzuki縮合製備 在弟Xaaio位與第Xaai 1位處由式II-IV及Ila-IVa表示之所需胺 基酸。將Boc α-胺保護基自第Xaal(^i胺基酸移除後，自支 樓物中裂解二肽。接著，使二肽與所有側鏈均經保護之具 9個胺基酸的肽偶合（參看下文）。隨後去保護側鏈並純化得 到所需肽產物。在上述程序之變化中，如流程10B中所 述，當在固體支撐物上時，可將併入第Xaal0位及第1川位 胺基酸之二肽與所有側鏈均經保護之具9個胺基酸的肽偶 C ' 合。 方法A :液相片段縮合 在方法A中，進行固相Suzuki縮合及醯基化反應（如實例 7中所述）以經B〇c保護或經Fmoc保護之N-終端α-胺來製備 結合至SynPhase™ Lantern之所需二肽。在酸性條件下， 將二肽自Lantern支撐物上裂解。在經Boc保護之N-終端a- 胺之情況下，如流程7所示酸性裂解同時提供對α_胺之去 ◎ 保護，且純化此等胺或直接將其帶入片段偶合序列中。 如流程8所示’在酸性條件下，裂解含有經Fmoc保護之 N-終端α-胺的二肽，且在溶液中使N-終端α-胺去保護。純 化此專二狀’隨後將其帶入片段偶合序列中。 自SynphaseTM Lantern裂解二肽之程序 程序A(經Boc保護之二肽；參看流程7) 將D系列SynPhaseTM Lantern置放於1打蘭（dram)玻璃小 瓶中。將1:1 TFA/^一氟甲烧（〇 · 5 m 1)溶液添加至該小瓶中。 封蓋該小瓶’並於回旋振盪器上溫和授拌（1〇〇 rpm)2 h。 120897.doc -81 - 200813095 將裂解溶液轉移至新小瓶中，並將0.5 ml 1:1 TFA/二氯曱 烧又添加至lantern中。再次封蓋該小瓶，並於回旋振盪器 上溫和攪拌（100 rpm)2 h。將第二次之裂解溶液添加至第 一次之溶液中，且用二氯甲烧漂洗lantern。將漂洗液添加 至裂解溶液中，且蒸發溶劑得到呈α-胺之TFA鹽形式的二 肽。 流程7
連接基+ lantern
TFA- +Η3Ν^Τ^ΝΗ2 O Rn 1:1 TFA/CH2CI2, 2h;重複 R10RRn 係由式Π-IV 及 na-IVa 中所述之胺基酸側鏈表示 程序B(經Fmoc保護之二肽；參看流程8)
如上文程序A中所述，將經Fmoc保護之二肽自 SynPhaseTM Lantern裂角举。用二氯甲烧漂洗該等lantern，且 蒸發已合併之漂洗液/裂解溶液中之溶劑。向所得殘餘物 (在1打蘭小瓶中）中添加0.40 ml 8:2二曱基甲醯胺/哌啶（體 積：體積）。封蓋該小瓶，且使其反應45 min。蒸發去除剩 餘溶劑，且藉由HPLC使用C-18管柱及CH3CN/H20/TFA溶 劑系統純化所得產物得到（蒸發溶劑後）呈α-胺之TFA鹽形 式之二肽。 120897.doc -82- 200813095 流程8
!l 1.8:2DMF/哌啶 2.5^ch3cn/h2o 系統中進行Η ί/ΗρΑΡΑ 溶劑 I行HPLC純化 1:1 TFA/CH2CI2, 2h，金複
係由式Π-IV及 Ila-IVa中所述之胺基酸側鏈
固相合成侧鏈經保護之9聚體肽C端羧酸的程序（流程9Α) 在室溫下，使 Fmoc-(L)-Ser(tBu)-OH(5 當量）、〇·5 Μ HOAt/DMF(5當量）及DIC(5當量）於NMP(5 mL)中之溶液與 (L)-Asp(OtBu)-2-氣氯三苯甲基樹脂（3.0 g，2.16 mmol)—起 渦漩18 hr。用NMP洗滌若干次後，藉由用ι·5 Μ哌啶/DMF 處理2次（5 min及10 min)來移除Fmoc基團。重複此等偶合 及去保護步驟七次以組合所需序列，但對其偶合而言，分 別使用 1·1 當量及 1.5 當量 Fmoc-a-Me-Phe(2_R-6-R")-OH及 Boc-(L)-His(Trt)-OH，且對於將 Fmoc_Thr(tBu)-OH偶合至 (S)-a-Me-Phe(2-R-6_R’’）-肽基-樹脂上而言，使用 HATU/ HOAt及 DIEA(4 當量）。 組合完成後，用DCM洗滌肽基-樹脂，且隨後在室溫下 藉由用DCM/AcOH/TFE(8:l:l，v:v:v)處理1 h將經保護之9 聚體肽C端羧酸自樹脂釋放。濾除樹脂，且蒸發濾液至 乾，將其再溶解於AcCN/水（2:1)中並凍乾兩次，得到2.777 120897.doc • 83 - 200813095 g純度為81%之產物，無需進一步純化即將其用於隨後之 片段偶合步驟中。
流程9A
i) 哌啶/DMF (移除Fmoc) ii) Fmoc-AA/DIC/HOAt/NMP/DMF (4-5 當星）
Hi)重複上述步驟2次，視需要改變Fmoc-AA
iv) 哌 D定/DMF v) Fmoc-(S>a-Me-Phe(2-R-6-R")-OH, DIC/HOAt/NMP/DMF (1.1#S)
vi) 哌啶/DMF vii) Fmoc-Thr(tBu)-OH/HATU/DIEA/HOAt/NMP/DMF (4當量）
viii) 峨卩定/DMF ix) Fmoc-Gly-OH/DIC/HOAt/NMP/DMF (4 當量）
x) i摄步驗viii-ix2次，ill需要改_moc-AA xi) Boc-HisCTrO-OH/DIC/HOAt/NMP/DMF (1.5當量） xii) DCM/HOAc/TFE (8:1:1, v:v:v) vi)真空_心_練乾
固相合成侧鏈經保護之N -甲氧基羰基9聚體肽C端羧酸的程 序（流程9B) 如上文所述製備N-Fmoc側鏈經保護8聚體肽基-(鄰-C1)-三苯曱基樹脂（3.5 mmol)(流程9A)。移除Fmoc且以DMF洗 滌後，用 DMF(9.8 mL，5.3 3 mmol)中 0.546 M HOAt 中之 Να-甲氧基羰基-Ν-ζ·. 三苯甲基-L· 組胺酸 （2.4 g， 5.33 mmol) 120897.doc -84- 200813095 處理肽基-樹脂（3.5 mmol)，隨後添加DMF( 10 mL)及 DIC(0.633 mL，5.33 mmol)。攪拌 72 小時後，用 DMF(4x50 mL)及DCM(2x50 mL)洗滌N衍生化9聚體肽基-樹脂，且在 室溫下藉由用DCM/AcOH/TFE(8:l:l，v:v:v)處理3 h將經保 護之9聚體肽C端羧酸自樹脂中釋放。濾除樹脂，且蒸發濾 液至乾，將其再溶解於AcCN/水（1:1.4)中並凍乾兩次，得 到4.05 g純度為71%之產物，無需進一步純化即將其用於 隨後之片段偶合步驟中。
流程9B
在1打蘭小瓶中以單化合物格式且在2 ml 96孔培養盤中 120897.doc -85- 200813095 以一批平行化合物進行此等反應。以下描述（如流程1 〇所 示）適用於單化合物之情形，但與在96孔培養盤中進行之 反應完全類似。 在1.5 ml玻璃小瓶中，將二肽之TFA鹽（0.01 mmol)溶解 於含有0.5% N，N-二異丙基乙胺之0.25 ml THF中。將大孔 碳酸醋樹脂（MP-碳酸酿，0.03 mmol，Argonaut Technologies) 添加至該小瓶中。封蓋小瓶，並在室溫下攪拌2 h。過濾 溶液，並藉由蒸發移除過量溶劑。 / · ' 將含有側鏈經保護9聚體肽C端羧酸（0.008 mmol)及N·羥 基苯幷三唑（HOBt，0_008 mmol)之 0.15 ml 9:1 氯仿/N，N-二 曱基曱醯胺溶液添加至含有二肽胺之小瓶中。將二異丙基 碳化二醢亞胺（DIC，0.08 mmol)添加至0.05 ml 9:1氣仿/ N，N-二甲基甲醯胺溶液中。封蓋小瓶，且在室溫下於回旋 振盪器上攪拌反應16 h。蒸發小瓶中之剩餘溶劑。 用0.40 ml 97.5:2.5 TFA/三異丙基矽烷（TFA/TIS)使肽側 I 鏈及N-終端α-胺去保護1 h。蒸發去除剩餘溶劑，且隨後藉 由HPLC使用CH3CN/H20/TFA溶劑系統且藉由偵測所需產 物質量觸發流出物收集來純化肽產物。 120897.doc 86- 200813095
流程10A
@HNEt3+(C〇32-)〇.5
THF + 0.5%DIEA
R3、R4、R6、R3a及R6a係由式Π及IVa中所述之側鏈表示 120897.doc -87- 200813095
流程10B
方法B :使用溶液中之Suzuki偶合合成由式II-IV及Ila-IVa 表示之Fmoc-胺基酸類似物 下述實例說明若干由式II-IV及Ila-IVa表示之Fmoc-胺基 酸類似物的合成，隨後如本文所述將其用於固相合成肽及 其他肽類似物。 實例10 合成Fmoc-(S)-2’_乙基-4’-曱氧基-聯苯基丙胺酸[罗111〇卜 (S)_Bip(2，-Et-4，-OMe)] 流程11描述Fmoc-(S)-2’ -乙基-41 -甲氧基-聯苯基丙胺酸之 合成。 120897.doc -88- 200813095
流程11
Boc-L-酪胺酸-Ο-三氟甲磺酸酯
向在Ν2下保持於-40°C之25 g(85 mmol)Boc-L_酪胺酸曱 酯及36.25 g(339 mmol，4當量）2,6-二甲基吡啶於200 mL無 水DCM中之溶液中經30 min緩慢添加DCM(100 ml)中之 47.74 mg(169.5 mmol，2當量）三氟甲磺酸酐。在-40°C下將 溶液再攪拌2小時。HPLC分析指示反應完成。藉由添加20 mL水中止反應。分離各層，且用3x200 ml 1 N HC1、200 ml飽和Na2C〇3、200 ml水及200 mL鹽水洗務有機層。用硫 酸鎂乾燥有機層，過濾並真空乾燥得到呈紅色油狀之粗產 物。使其經歷矽膠急驟層析（300 g矽膠，己烷中0至50°/〇 EtOAc之梯度）。真空濃縮含有產物之溶離份得到呈白色固 體狀之所需化合物（27 g，產率75%)。 2-乙基-4-甲氧基-苯基_酸 120897.doc •89- 200813095
方法A 將甲基三苯基溴化鎮（199.5 g，0.465 mol)於無水 THF(800 ml)中之懸浮液淨化1 〇 min，並將其冷卻至1 〇。〇。 經30 min緩慢添加正丁基鐘（169 ml，0.465 mol，2.75 Μ溶 液）並攪拌1 h。經30 min之時間緩慢添加無水thF(300 ml) 中之2-/臭-5-甲氧基苯甲酸（loo g，0.465 mol)。添加後，攪 拌反應混合物1 h。添加石油醚（2 L)且再攪拌反應混合物 3 0 m i η。使反應混合物濾、過碎膠塾。用乙鱗洗條該塾。在 低於30°C之溫度下濃縮已合併之有機洗滌液，並藉由使用 100%石油醚作為溶離劑進行之6042〇矽膠層析純化粗產 物。產量：92 g，90%，淺黃色液體。 將乙酸乙酯（650 ml)中之2,2，-聯吡啶（24.3 g，0.15 mol)及 2-溴-5 -甲氧基苯乙浠（65 g，〇·3 1 mol)冷卻至0°C。淨化溶 液，且在氮氣流下添加10%碳載鈀（16.25 g，25%)。在Parr 振盪器中在2 kg氩氣壓力下攪拌反應混合物3天。藉由 HPLC監測反應進程。使反應混合物濾過矽藻土並用5%硫 酸氫鉀溶液洗滌濾液，經硫酸鈉乾燥並於低於30°C之溫度 下濃縮。產量·· 6 0 g，91 %，淺黃色液體。 將 4-溴-3-乙基苯曱醚（94 g，0.437 mol)於 THF(900 ml)中 之溶液冷卻至-78°C。在相同溫度下逐滴添加正丁基鋰（249 ml，0.5 5 mol)。在-78°C下持續攪拌1 h。在_78°C下緩慢添 加硼酸三正丁酯（177 ml，0.655 mol)。移除冷卻浴，使反 應混合物溫至0°C且在〇°C下用1.5 N鹽酸中止。分離有機 層。用乙酸乙酯萃取水層，且用鹽水洗滌已合併之有機層 120897.doc -90- 200813095 並濃縮。在石油_中攪拌所獲 獲得的固體並在真空下乾燥。 體。 得的殘餘物30 min。過濾所 產量：65 g，82%，白色固 方法B(參看流程12) 向 3_ 乙基苯酚（50 g，〇·4 m〇h 98%純，Fluka)及 k2C〇3 (2 83 g，2.05 mol)於無水丙酮（500 ml)之混合物中添加甲基 碘（290 g，2.05 mol)。將反應混合物轉移至高壓釜中並在 7(TC下回流隔夜。使反應混合物濾過矽藻土墊。用丙酮洗 務違墊且;辰細已合併之濾液及洗滌液。將產物溶解於dcm 中’過濾並蒸發至乾。產量：50 g，90%，棕色液體。 室溫下，在黑暗中將AcCN(l L)中之3_乙基苯曱醚（5〇 g， 0.3676 mol)及N-溪代號拍醯亞胺（72 g，0.4 mol)攪;拌8 h。 在低於4 0 C之溫度下農縮反應混合物，且將所獲得的殘餘 物再溶解於CCI4中並過滤、。濃縮遽液且藉由分餾純化產 物。產量：35 g，43%，淺黃色液體。
如方法A中所述，將4-溴-3-乙基苯曱醚轉化成相應之酉朋 酸。 出於按比例擴大反應之目的，可使用格林納法（Grignard method)實現4-溴-3 -乙基苯曱醚向2-乙基-4 -甲氧基-麵酸之 轉化。此方法涉及藉由使溴-3 -乙基苯甲鱗與Mg(l. 1當量） 於THF中反應隨後使所得格林納中間體與如方法A中所述 之爛酸三正丁酯或_酸三甲酯反應來形成格林納試劑。 120897.doc -91 - 200813095 流程12
Fmoc-(S)_2’_乙基_4’_甲氧基-聯苯基丙胺酸 用氮氣將無水甲苯（600 ml)中之Boc-L-酪胺酸-0-三氟甲 石黃酸酉旨（81 g，0.19 mol)淨化10 min。添加200 ml水中之 K2C〇3(36 g，0.26 mol) ’隨後添加2-乙基-4-曱乳基-苯基酬 酸（3 6 g，0.2 mol)且使用氮氣將反應混合物淨化1〇 min。添 加 Pd(PPh3)4(16.18 g，0.014 mol)、乙醇（200 ml)及 THF(400 ml)並在攪拌下將反應混合物加熱至i〇〇°c歷時4 h。真空濃 縮反應混合物，且將殘餘物溶解於DCM(1.0 L)中。用1〇〇/0 氫氧化鈉溶液、15%擰檬酸溶液洗滌有機層，經硫酸鈉乾 燥並濃縮。精由6 0 -12 0網目石夕膠管柱層析及石油鱗中之 10%乙酸乙酯純化粗產物。產量：50 g，65%，黃色液 體。 向Boc-(S)-2’-乙基-4，-甲氧基-聯苯基丙胺酸曱酯（6〇 g， 0.146 mol)於THF(450 ml)及甲醇（85 ml)之混合物中添加85 ml水中之氫氧化納（24 g，0.58 mol)。在室溫下挽拌反應混 合物隔夜，濃縮並將殘餘物溶解於水（1〇〇 ml)中，且用乙 醚洗滌。使用20%檸檬酸將水層酸化至pH i且用乙酸乙酯 加以萃取。用鹽水洗滌萃取物，經硫酸鈉乾燥並蒸發至 乾。產量：55 g，94%，無色液體。 將Boc-(S)-2’-乙基_4，-曱氧基-聯苯基丙胺酸（55 g，〇.138 120897.doc 200813095 mol)溶解於無水DCM(1公升）中且在室溫下將無水HC1氣體 淨化6 h。過濾所獲得的固體產物並在真空下乾燥。產 量：46 g，100%。 向THF(700 ml)中之游離胺基酸鹽酸鹽（30 g，0.089 mol) 中添加 NaHC03(29 g，0.358 mol)水溶液（240 ml)。經一段 30 min之時間逐份添加 Fmoc-OSu(30 g，0.089 mol)。在室 溫下攪拌反應混合物隔夜。真空下移除THF且添加水（2.0 L)。用乙醚萃取澄清溶液以移除任何雜質。將水溶液酸化 至pH 1且用乙酸乙酯進行萃取。用水及鹽水洗滌有機層， 且蒸發至乾。產量：37 g，80%。 實例11 合成Fmoc-(S)-2’-乙基-4’-羥基-聯苯基丙胺酸[Fmoc-(S)-
Bip(2f-Et-4，_OH)] 以下流程13描述Fmoc-(S)-2f -乙基- 基-聯苯基丙胺酸 [Fmoc-(S)_Bip(2’-Et-4，_OH)]之合成。 流程13
經20 min之時間向-12°C氬氣下經攪拌之4.46 g(8.55 mrnol)(S)-2-(((9H-苐-9 -基）甲乳基）癸炭基胺基乙基_ 4’-甲氧基聯苯-4-基）丙酸[Fmoc-Bip(2’_Et-4’-OMe)-OH]於 二氣甲烷（34 mL)中之溶液中添加21.4 mL 1 Μ三溴化硼於 二氯曱烧（21.2 mmol)中之溶液。擾拌反應混合物，且當形 120897.doc -93- 200813095 成灰色漿液時，使其於原位溫至室溫。3 h後，室溫下， 將反應混合物緩慢添加至3 0 0 mL經快速攪拌之水中。1 h 後，用二氯甲烷（每份100 mL)萃取反應混合物2次。合併 有機萃取物，乾燥（MgSCU)，過濾並蒸發得到棕褐色發泡 體 4.65 g。藉由逆相 HPLC(Luna 5μ C18 30x100 mm管柱， 50% 至 100% 梯度（i〇 min)(9〇〇:i〇〇:i 至 1〇〇:9〇〇:1 水 /
AcCN/TFA)作為溶離劑；流速為40 mL/min;在220 nm下 進行UV偵測）純化所需產物。部分蒸發所彙集之溶離份得 到黏性物質，將其自剩餘溶液中傾析出來，用水洗務，將 其再/谷解於一氣甲烧中’乾燥（MgS〇4)，過濾並蒸發以提 供呈白色無定形固體狀之產物，3.50 g，產率81 %。 HPLC/MS .滯留時間=5.52 min [Zorbax SB C18(4.6><75 mm)管柱；〇% 至 100% 梯度（8 min)(90:10:0.1 至 1〇:9〇:〇·ι 水 / AcCN/TFA作為溶離劑）。流速為2.5 mL/min;在220 nm下 進行 UV偵測];[M+H]+=508。4 NMR (DMSO-d6): δ 12.77 (br s，1Η)，9.29 (s，1Η)，7·86 (d，J=7.7 Ηζ，1Η)，7.78 (d， J=8.8 Hz，1H)，7.65 (t，J=7.1 Hz，2H)，7.38 (m，2H)，7.28 (m，4H)，7·11 (d，J=7.7 Hz，2H)，6.85 (d，J=8.2 Hz，1H)， 6.65 (d，J=2.2 Hz，1H)，6.57 (dd，J=2.2, 8.3 Hz，1H)，4.20 (m，5H)，3·32 (br s，1H)，3·10 (dd，J=4.4，13.8 Hz，1H)， 2.90 (dd，J=10」，13.2 Hz, 1H)，2·37 (q，J=7.7 Hz，2H)，0.91 (t，J=7.7 Hz，3H)。 藉由對掌性 HPLC(CHIRALPAK® AD，10 μιη，50x500 mm管柱，等度溶離（正庚烷/AcCN/甲醇/TFA，839:80:80: 120897.doc -94- 200813095 1);流速為60 mL/min ;在217 nm下進行UV偵測）進一步純 化2.28 g上述產物。蒸發所彙集之溶離份隨後與氯仿（3x20 mL)—起再蒸發提供呈灰白色無定形固體狀之產物，2.17 g，產率 95%。逆相 HPLC :滯留時間=21.42 min。[YMC ODS-A C18 3 μηι(4.6χ150 mm)管柱；梯度為 10%至 100%之 B(3 0 min)(緩衝液A :水中之0.1% TFA ;緩衝液B : AcCN 中之0.1% TFA);流速為1 mL/min ;在217 nm下進行U\M貞 測]。MS 分析：[Μ+ΝΗ3]+=525·3 且[Μ-Η]-=506·2。對掌性 / 、 HPLC分析：>99% ee，滯留時間=12.17 min [CHIRALPAK® AD，10 μιη，4.6x250 mm管柱，等度溶離（正庚烷/AcCN/ 甲醇/TFA，799:100:100:1);流速為 1 mL/min ;在217 nm 下進行 UV偵測]。[a]25D = -12.6(DMF中 c=1.0)。 實例12 合成（2S)-2-(((9H-苐-9-基）甲氧基）羰基胺基）-3-(6-鄰甲 苯基批啶-3-基）丙酸鹽酸鹽[Fmoc-(S)-4-(2’_甲基苯基）-3_ ^ 吡啶基丙胺酸鹽酸鹽] 以下流程14描述（2S)-2-(((9H-苐-9-基）曱氧基）羰基胺 基）-3-(6-鄰甲苯基吼啶-3-基）丙酸鹽酸鹽之合成。 流程14
NaBH4, EtOH 0-5°C,2h
120897.doc -95- 200813095 1. Ph2C=NCH2CO2tBu，0-烯丙基-N-(9-蒽基 甲基)溴化辛可尼丁鹽，2-第三丁基-2-二
乙基胺基-1，3-二甲基-全氬-1，3,2-二氮雜憐 CH2C12, -78 °C 2.15%檸檬酸 3. FmocCl, Na2C03, 1:1 THF/H20 自CHp/己烷再結晶且分離母液
5- 溴-2-鄰甲苯基啦啶 向經氣氣淨化且經抽空之910 mg(3.21 mmol)5-溴-2-峨°比 17定及436 mg(3.21 mmol，1.0當量）2 -鄰曱苯基酬酸於8 mL甲 苯及3.2 mL 2 Μ碳酸鈉水溶液中之漿液中添加36 mg(0.032 mmol，0·01當量）肆（三-苯基膦）把。用氬氣將反應混合物再 淨化並抽空2次且隨後使其在氬氣下回流15 h。冷卻反 應，且使其於水與EtOAc之間分溶。分離各層，並再次用 EtOAc萃取水層。合併有機萃取物，用硫酸鎂乾燥，過 濾，濃縮並真空乾燥得到呈橙色油狀之粗產物。藉由矽膠 層析（7:3 CH2C12/己烷）純化提供呈黃色油狀之標題化合 物，666 mg，產率 84%。 6- 鄰甲苯基煙醛 經5 min向-74°C氬氣下經攪拌之125 mg上述化合物（0.50 mmol)於THF(2.0 mL)中之溶液中添加220 μί nBuLi己烧溶 液（2.5 Μ，0_55 mmol，1.1當量），不允許使溫度高於 -71°C。形成淡綠色溶液，30 min後顏色變成深綠色。45 120897.doc -96- 200813095 min後，添加49 4 μΕ(〇·61 mmo卜1.2當量）DMF且使反應溫 至_40°C。14 h後，形成鮮橙色溶液。用10%檸檬酸中止反 應且在室溫下迅速攪拌混合物2〇 min。用EtOAc將所得鮮 黃色溶液萃取兩次。合併有機萃取物，用MgS〇4乾燥，過 濾並濃縮得到黃色油狀物。藉由使用乙酸乙酯/二氯曱烷 (1:24)作為溶離劑（2·5χ 10 ctn管柱）進行之矽膠層析純化所 獲得的粗混合物得到白色固體，熔點82-84°C，90.3 mg， 產率91%。 (6-鄰甲苯基π比啶基）甲醇 0-5°C下，向 1.070 g(5.43 mmol)6-鄰甲苯基煙醛於 19 mL 乙醇中之溶液中添加287 mg(7.5 mmol，1.4當量）硼氫化 鈉。2 h後，用飽和碳酸氫鈉溶液中止反應混合物，且於 3 0 min後，使其於二氯甲烷與鹽水之間分溶。以硫酸鎂乾 燥有機萃取物，並濃縮得到呈無色油狀之所述產物，丨.08 g，產率 1 〇〇%。 5-(溴甲基）-2-鄰甲苯基”比啶氫溴酸鹽
將4·49 g(22.5 mmol)(6-鄰甲苯基吡啶-3-基）甲醇於75 mL 4 8%氫溴酸中之溶液加熱至回流歷時64 h。使反應混合物 部分冷卻，且藉由真空蒸餾（2托（Tori〇110°C)移除過量的氫 溴酸直至燒瓶中剩餘棕褐色固體殘餘物。使用置放於蒸镏 裝置與真空泵之間之大型KOH丸粒收集器進行蒸餾。在乙 醚中將固體殘餘物研磨成漿，過濾並在氮氣流下乾燥得到 7.38 g產物，產率95%。 (2S)_2_(二苯基亞甲胺基）-3-(6-鄰甲苯基β比咬_3_基）_丙睃第 120897.doc -97- 200813095 三丁酯 -78 C下於氬氣下，經5 min向經擾拌之800 mg(2.33 mmol)5-(溴曱基）-2-鄰甲苯基咄啶氫溴酸鹽、689 mg(2.33 mmol ’ 1.0當量）2-(二苯基亞甲胺基）乙酸第三丁酯及ι41 mg(0.23 3 mmo卜0.1當量）〇-烯丙基_N^9_蒽基甲基）漠、化辛 可尼丁鹽（cinchonidinium)於14 mL二氯甲烷中之混合物中 添加1.687 mL(5.83 mmol，2.5當量）2-第三丁基亞胺基-2-一乙基胺基-1，3-二甲基-全氫-ΐ，3,2·二氮雜填。在- 78°C下 攪拌反應混合物10 h且隨後使其於原位溫至室溫。藉由使 用乙酸乙酯/二氯甲烷（1:4)作為溶離劑（5xi〇 crn管柱）進行 之矽膠層析直接純化混合物得到棕褐色油狀物，1 ·丨〇 g， 產率100%。 (2S)-2-(((9H-苐-9-基）曱氧基）羰基胺基）_3-(6_鄰曱苯基批 啶基）丙酸第三丁酯 室溫下’在氩氣下向經攪拌之11〇 g(233 mmol)(2S)-2-(一苯基亞甲胺基）_3-(6-鄰曱苯基π比啶基）丙酸第三丁酯 於9 mL THF中之溶液中添加9 mL水中之2·795 g(14.54 mmol，6.5當量）擰檬酸。20 h後，用水（5 mL)稀釋反應混 合物且用乙醚（10 mL)洗滌兩次。接著，用固體碳酸鈉使 水相達到pH 9且用二氯甲烷萃取兩次。 合併二氯甲烷萃取物，用硫酸鈉乾燥並濃縮。室溫下， 將所得油狀物溶解於10 mL THF中且用7.2 mL· 10%碳酸鈉 /谷液且隨後703 mg(2.56 mmol，1.1當量）9_苐基曱氧基碳 醯氣加以處理。14 h後，用二氯甲烷萃取反應混合物兩 120897.doc -98- 200813095 j，用硫酸納乾燥，過遽，濃縮並藉由使用乙酸乙輯/二 氣甲院（1:19)作為溶離劑（2·5χ1〇 cm管柱）進行之石夕膠層析 加以純化得到無色油狀物，g，產率91%。由⑼曰灿 7:1己烷：二氯甲烷再結晶得到白色固體，287 。濃縮母 液得到無定形白色固體狀標題化合物，779 mg，產率 63〇/。。對掌性 HPLC 分析（4.6x25〇 mm AD 管柱，38:ι:ι 庚燒: 甲醇：乙酵作為溶離劑，流速為j mL/min)指示98% α。 f (2S)_2-(((9H|9_基）甲氧基）幾基胺基）_3_(6鄰甲苯基〇比 咬-3-基）丙酸鹽酸鹽 在室溫下，將經填充有氯化鈣之乾燥管保護不受大氣影 響之I·75 g(3」9麵〇1)(28)_2_(_·苐冬基）甲氧基）幾: 胺基）-3-(6-鄰甲苯基吼啶_3_基）丙酸第三丁酯於tfa(5 〇 mL)中的溶液攪拌2小時。真空中在小於4(Γ(：之溫度下濃縮 反應混合物，並將所得橙色油狀物溶解於1〇 mL添加有5 mL 1 M HC1/乙醚溶液之乙醚中。過濾所得白色固體，並 ( 用乙醚洗滌得到呈白色粉末狀之所需化合物，1.65 g，產 率 100%。 實例13 合成（2S)-2-(((9H-苐_9_基）甲氧基）羰基胺基卜4_(6_溴吼 啶_3_基）丙酸鹽酸鹽 以下流程15描述3-(((9H-苐-9-基）甲氧基）羰基胺基）-3-(6-溴°比咬-3-基）丙酸鹽酸鹽之合成。 120897.doc -99- 200813095 流程15
N-溴代琥珀醯亞胺 AIBN, CCI4 回流，1_5h
1· Ph2C=NCH2C02tBu，〇-燃丙基-N-(9- 蒽基甲基)溴化辛可尼丁鹽，2-第 三丁基-2-二乙基胺基-1，3-二甲基 -全氫-1，3,2-二氮雜憐 CH2CI2, -78eC 2.15%檸檬酸 3. FmocCI, Na2C03,1:1 THF/H2〇 自CHp/己烷再結晶且分離母液
TFA 室溫,5h HCI/Et2〇
98% ee 2 -演-5·(演曱基）σ比咬 1.. 向經攪拌之10.320 g(60.0 mmol)5-曱基-2-溴吡啶及5.3 39 g(30.0 mmol，0.5當量）經再結晶之N-溴代琥珀醯亞胺於 150 mL四氯化碳中之漿液中添加200 mg AIBN。用氬氣將 反應混合物再淨化2次並抽空且隨後使其在氬氣下回流。 90 min後，將反應混合物冷卻至室温，過濾並濃縮濾液得 到黃色油狀物。質子NMR表明，混合物含有53%(mol)未經 反應之5-甲基-2-溴吡啶、43%標題產物及4% 2_溴-5-(二溴 曱基）吼啶。無需進一步純化即將混合物迅速用於以下程 序中。 (S)-2-(((9H-苐·9·基）曱氧基）羰基胺基）-3-(6-溴吼啶-3-基） 丙酸第三丁酯 -78°C下於氬氣下，經5 min向經攪拌之2·溴-5-(溴曱基） 吡啶（通常 26.4 mmol)、7.798 mg(26.4 mmol，1.0 當量）2-(二苯基亞甲胺基）乙酸第三丁酯及1.60 mg(2.64 mmol，0.1 120897.doc -100- 200813095
當量）〇-烯丙基-N-(9-蒽基曱基）溴化辛可尼丁鹽 (cinchonidinium)於100 mL二氯曱烧中之混合物中添加 11.46 mL(39.6 mmol，1·5 當量）2-第三丁基亞胺基-2·"二乙 基胺基-1，3-二曱基-全氫-ΐ，3,2-二氮雜磷。在-78°C下攪拌 反應混合物7 h且隨後使其於原位溫至室溫。接著，濃縮 反應混合物，將其再溶解於75 mL THF中且用75 mL水中 之檸檬酸（22 g)加以處理。用力攪拌7 h後，用乙醚（75 mL) 萃取混合物2次。合併有機萃取液並用水（25 mL)洗滌1 次。合併水性萃取液並用固體碳酸鈉使其達到pH 8。無需 進一步處理即將水溶液用於下一反應中。 (S)-2-(((9H-苐_9_基）甲氧基）羰基胺基溴吡啶基） 丙酸第三丁酯 室溫下’將上述水溶液添加至7.545 g(275 mmoi，1()4 當量）9-薙基甲氧基碳醯氯於75 mL THF中之溶液中。μ匕 後，用乙酸乙酯萃取反應混合物兩次，用硫酸鎂乾燥，過 滤，濃縮並藉由使用乙酸乙醋/二氯甲院（1:24)作為溶離^ (12x25 Cm管柱）進行之矽膠層析加以純化得到無色油狀 物y.25g，產率91%412〇mL5:1己院/二氯甲院再結 曰曰仔到少置白色固體，將其濾除。濃縮母液得到無定形 色固體狀標題化合物’ 4.96 g ’產率62%。對掌性二八 :(4.Γ=mm AD管柱，38:1:1庚燒：曱醇：乙醇作為溶離 片J ’ /瓜逮為 1 mL/min)指示 97.2% ee 〇 -(6-溴吡啶_3_基）丙酸 2-(((9H-苐-9-基）甲氧基）羰基胺基）_3 鹽酸鹽 120897.doc 200813095 在室溫下，將經填充有氯化鈣之乾燥管保護不受大氣影 響之 1·〇2 g(1.95 mm〇l)(2S)-2-(((9H-第-9-基）甲氧基）羰基 胺基）-3-(6-溴吡啶-3-基）丙酸第三丁酯於TFA(3.〇 mL)中的 溶液攪拌2小時。真空中在小於35它之溫度下濃縮反應混 合物’並將所得橙色油狀物溶解於3 mL添加有6 mL丨M HC1/乙醚溶液之二氯甲烷中。過濾所得白色固體，並用乙 鱗洗滌得到呈白色粉末狀之標題化合物，845 mg，產率 86% 〇 實例14 合成（2S) 2-(((9H-苐-9-基）甲氧基）羰基胺基）-3-(6_(2-乙 基苯基）°比淀-3-基）丙酸鹽酸鹽[Fmoe-(S)-4-(2，-乙基苯基）- 3-吡啶基丙胺酸] 以下流程16描述（2S)-2-(((9H-苐-9-基）甲氧基）羰基胺 基）-3-(6-(2-乙基苯基）吡啶-3-基）丙酸鹽酸鹽之合成。 流程16
f〇i25〇h 2-乙基-4-甲氧基.本 甲苯，iPr0H/H20 N32CO3 PdCI2 (PCy3)2
120897.doc -102- 200813095 (S)_2_(((9H-苐-9-基）甲氧基）羰基胺基）-3-(6-(2-乙基苯基） °比啶_3_基）丙酸第三丁酯 向經攪拌之 1·75 g(3.35 mmol)(S)-2-(((9H-苐-9-基）甲氧 基）幾基胺基）-3-(6-溴-吡啶-3-基）丙酸第三丁酯及1.005 g(6.70 mmol，2當量）2-乙基苯基關酸於50 mL 1:1異丙醇/ 甲苯中之漿液中添加25 ·0 mL 2 Μ碳酸鈉水溶液。用氬氣 淨化反應混合物2次並抽空，且隨後添加124 mg(0.167 mmol ’ 〇·〇5當量）雙（三環己基膦）氣化鈀（π)且再次用氬氣 淨化混合物並抽空。氬氣下，在8〇°c下加熱經快速攪拌之 混合物。20 h後，將反應混合物冷卻至室溫，且部分濃縮 以移除異丙醇。使殘餘物於乙酸乙酯與水之間分溶，且再 -人用乙酸乙酯萃取水相。合併有機萃取物，用硫酸鎮乾 燥’過濾並濃縮得到褐色油狀物。藉由使用乙酸乙酯/二 氣甲烧（1:9)作為溶離劑（5xl5 cm管柱）進行之矽膠層析純 化付到呈無色油狀之所需化合物，1 · 2 5 g，產率7 7 %。 (2S)2-(((9H-葬-9-基）甲氧基）羰基胺基）_3_(6-(2-乙基苯基） 吡啶-3-基）丙酸鹽酸鹽 在室溫下，將經填充有氣化鈣之乾燥管保護不受大氣影 響之 1.53 g(2.79 mm〇l)(2S)-2-(((9H-苐-9-基）甲氧基）羰基 胺基）-4-(6-(2-乙基苯基）吨啶_3_基）丙酸第三丁酯於 TFA(5.0 mL)中的溶液攪拌2小時。真空中在小於^它之溫 度下濃縮反應混合物，並將所得橙色油狀物溶解於添加有 6 mL 1 M HC1/乙_溶液之乙_中。過濾所得白色固體，並 用乙醚洗滌得到呈白色粉末狀之所需產物，l 38 g，產率 120897.doc -103- 200813095 93%。 實例15 合成（2S)2_(((9H_苐-9-基）甲氧基）羰基胺基）-3-(6-(2-乙 基4-甲氧基）苯基户比啶-3_基）丙酸鹽酸鹽[Fmoc_(S)-4-[(2’_ 乙基-4’·曱氧基）苯基]_3_吡啶基丙胺酸] 以下流程17描述（2S)-2-(((9H·苐-9-基）曱氧基）羰基胺 基）-3-(6-(2-乙基-4-甲氧基）苯基）吼啶-3-基）丙酸鹽酸鹽之 合成。 流程17
2-乙基-4-甲氧基苯基晒酸 甲苯/iPr0H/H20 Na2〇〇3 PdCI2 (PCy3)2
OMe
TFA 室溫，5h HCI/Et2〇 FmocHN
OMe (S)_2-(((9H-苐-9-基）甲氧基）羰基胺基）-3-(6-(2-乙基·4-甲 氧基苯基）°比啶-3-基）丙酸第三丁酯 向經攪拌之 613 mg(1.17 mmol)(S)-2-(((9H-苐-9-基）甲氧 基）援基胺基）-3-(6->臭-σ比咬-3-基）丙酸第二丁 S旨及422 mg(2.34 mmol，2當量）2 -乙基苯基_酸於20 mL 1:1異丙醇/ 曱苯中之漿液中添加10.0 mL 2 Μ碳酸鈉水溶液。用氬氣 120897.doc -104- 200813095 淨化反應混合物2次並抽空，且隨後添加43.2 mg(0.059 mmol ’ 0.05當量）雙（三環己基膦）氯化鈀（π)且再次用氬氣 淨化混合物並抽空。氬氣下，在8〇°c下加熱經快速攪拌之 混合物。9 h後，將反應混合物冷卻至室溫，且部分濃縮 以移除異丙醇。使殘餘物於乙酸乙酯與水之間分溶，且再 次用乙酸乙酯萃取水相。合併有機萃取物，用硫酸鎂乾 無’過濾並濃縮得到褐色油狀物。藉由使用乙酸乙酯/二 ( 氣甲烧（3:17)作為溶離劑（5x15 cm管柱）進行之矽膠層析純 化得到呈無色油狀之預期化合物，4〇1 mg，產率59%。 (2S)2-(((9H_苐-9-基）甲氧基）羰基胺基乙基甲 氧基苯基）吡啶-3-基）丙酸鹽酸鹽 在室溫下，將經填充有氯化約之乾燥管保護不受大氣影 響之 401 mg(0.69 mmol)(2S)-2-(((9H-苐基）甲氧基）羰基 胺基）-3-(6-(2-乙基-4-甲氧基苯基）吼啶-3-基）丙酸第三丁 醋於TFA(2.0 mL)中的溶液攪拌2小時。真空中在小於3〇t： 〇 之溫度下濃縮反應混合物，並將所得橙色油狀物溶解於添 加有2 mL 1 M HC1/乙醚溶液之乙醚中。過濾所得白色固 體’並用乙鱗洗滌得到呈白色粉末狀之所需產物，336 mg，產率 84%。 實例16 (S)-2_(((9H-苐-9-基）曱氧基）幾基胺基）-3_(Μ2-甲基苯 基）响咬-3-基）丙酸第三丁酯之替代合成法 以下流程1 8描述（S)-2_(((9H-第-9-基）曱氧基）羰基胺基）_ 3 (6-(2·曱基笨基）吼。定_3_基）丙酸第三丁酯之替代合成 120897.doc -105- 200813095 法0 流程18
FmocHN^^C°2^Bu 2-甲基苯基蝴酸 FmocHN C02iBu 屮苯，iPrOH/H20 Ν32〇〇3
PdCI2 (PCy3)2 (S)-2-(((9H-苐-9-基）曱氧基）羰基胺基）-3_(6_(2_甲基苯基） 吡啶-3-基）丙酸第三丁酯 向經搜拌之 1.75 g(3.35 mmol)(S)-2-(((9H-第-9_基）甲氧 基）羰基胺基）-3-(6-溴-吡啶-3-基）丙酸第三丁酯及913 mg(6.70 mmol，2當量）2-甲基苯基關酸於50 mL 1:1異丙醇/ 甲苯中之漿液中添加25.0 mL 2 Μ碳酸鈉水溶液。用氯氣 淨化反應混合物2次並抽空，且隨後添加124 mgdigy mmol，〇·〇5當量）雙（三環己基膦）氯化鈀（II)且再次用氣氣 淨化混合物並抽空。 氬氣下，使得經快速攪拌之混合物在80°C下加熱。2〇 h 後，將反應混合物冷卻至室溫，且部分濃縮以移除異丙 醇。使殘餘物於乙酸乙酯與水之間分溶，且再次用乙酸乙 賴萃取水相。合併有機萃取物，用硫酸鎂乾燥，過渡:濃 縮得到褐色油狀物。藉由使用乙酸乙醋/二氯甲烷㈣作 為溶離劑(5X15 cm管柱)進行之矽膠層析純化得到呈無色 油狀之所需化合物，181 g，產率9〇%。 …、 實例17 120897.doc 200813095 合成（2S)-2-(((9H-苐-9-基）甲氧基）羰基胺基）-3-(6-(2-乙 基苯基）噠嗪-3-基）丙酸第三丁酯[Fmoc-(S)-4-(2’_乙基苯 基）-2,3-噠嗪基丙胺酸] 以下流程19描述（2S)-2-(((9H-苐-9-基）曱氧基）羰基胺 基）-3-(6-(2 -乙基苯基）°達嗓-3-基）丙酸第三丁 S旨之合成。 流程19
N-溴代琥珀醯亞胺 AIBN, CCI4 回流， 1. Ph2C=NCH2C02伯u，〇-燃丙基-N-(9- 蒽基甲基)溴化辛可尼丁鹽，2-第三 丁基-2-二乙基胺基-1，3-二甲基-全 氫-1，3,2-二氮雜磷 CH2CI2, -78 °C 2.15%檸檬酸 3. FmocCI, Na2C03,1:1 THF/H2〇 自/己烷再結晶且分離母液
40% ee
FmocHN^C〇2iBu 2-甲基苯基S朋酸 甲苯 /iPrOH/H20
Na2〇〇3
PdCI2 (PCy3)2
3-溴-6-甲基建嗓 攪拌2.20 g 3-甲基-6-噠嗪醇（20.0 mmol)及13.06 g磷醯溴 (45.6 mmol，2.3當量）之混合物並將其加熱至攝氏130度 (經油浴預熱）歷時50 min。在冰浴中冷卻固體反應混合物 並添加約20 g碎冰。在冰浴中冷卻所得溶液，並添加50% KOH進行中和。收集所得固體，用水洗滌且空氣乾燥1 5 h。藉由使用乙醚/二氣甲烷（3:17)作為溶離劑（5x15 cm管 柱）進行之矽膠層析純化得到呈淡黃色固體狀之標題化合 物，1.37 g，產率 39%。 120897.doc -107- 200813095 3->臭_6-(溴曱基）〇比咬 向 1·〇〇 g(5.78 mm〇l)3.漠 _6·甲基噠嗪及 i 〇3 g(5 79 mmol 1.0當1 )經再結晶之溴代琥珀醯亞胺於2〇 mL四 氣化碳中之溶液中添加95mgAIBN。用氬氣將反應混合物 淨化2次並抽空且隨後使其在氬氣下回流。3 h後，將反應 混合物冷卻至室溫，過濾並濃縮濾液得到黃色油狀物。藉 由使用己烷/二氣甲烷（1:9)作為溶離劑（5xl2 cm管柱）進行 之矽膠層析直接純化混合物得到無色油狀物，444 mg，產 率 3 0% 〇 (S)-2-(((9H-苐-9-基）甲氧基）羰基胺基溴噠嗪_3_基） 丙酸第三丁酯 •78 C下於氬氣下，經5 min向經授拌之374 mg(1.48 mmol)3-溴-6-(溴甲基）噠嗪、439 mg(1.48 mmol，1.0 當 量二苯基亞甲胺基）乙酸第三丁酯及112 mg(0.186 mmol ’ 0.12當量）〇_烯丙基_；^(9_蒽基曱基）溴化辛可尼丁 鹽於4 mL二氣甲烷中之混合物中添加0.645 mL(2.23 mmol，1.5當量）2-第三丁基亞胺基-2-二乙基胺基-1，3-二甲 基·全氫-1，3,2-二氮雜磷。在_78°C下攪拌反應混合物1 h且 隨後使其於原位溫至-40°C。16 h後，藉由使用乙酸乙酯/ 二氣甲烷（1:9)作為溶離劑（5x10 cm管柱）進行之矽膠層析 直接純化混合物得到黃色油狀物，540 mg，產率78〇/〇。 室溫下，於氬氣下向經攪拌之上述產物於10 mL THF中 之溶液中添加10 mL 15%檸檬酸水溶液。16 h後，用水（5 mL)稀釋反應混合物且用乙醚（1〇 mL)洗務兩次。 120897.doc -108- 200813095 接著’用固體碳酸鈉使水相達到pH 9且用二氯曱烧萃取 兩次。合併二氯甲烷萃取物，用硫酸鈉乾燥並濃縮。室溫 下’將所得油狀物溶解於5 mL THF中且用5 mL 10〇/〇碳酸 鈉溶液且隨後480 mg(1.86 mmol，1.3當量）9-苐基甲氧基 碳醯氯加以處理。6 h後，用二氯甲烷萃取反應混合物兩 次，用硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮並藉由使用乙酸乙酯/二 氣甲烷（1:5)作為溶離劑（5x15 cm管柱）進行之矽膠層析加 以純化得到無色油狀物，507 mg，產率65%。對掌性HPLC 分析（4.6x250 mm AD管柱，38十1庚烷··甲醇：乙醇作為溶 離劑，流速為1 mL/min)指示40% ee。 (2S)-2-(((9H-苐-9_基）甲氧基）羰基胺基）_3_(6_(2_乙基苯基） 噠嗪_3_基）丙酸第三丁酯 向經攪拌之 507 mg(0.967 mmol)(S)-2-(((9HU-基）甲 氧基）魏基胺基）-3-(6-溴噠嗪-3-基）丙酸第三丁酯及290 mg( 1.93 mmol ’ 2當1)2-乙基苯基_酸於16 mL 1:1異丙醇/ 甲苯中之漿液中添加8 · 0 mL 2 Μ碳酸納水溶液。用氬氣淨 化反應混合物2次並抽空，且隨後添加35 7 mg(〇 〇48 mmol，0.05當量）雙（三環己基膦）氣化鈀（π)且再次用氬氣 淨化混合物並抽空。氬氣下，在9〇°C下加熱經快速檀拌之 混合物。 8 h後’將反應混合物冷卻至室溫，且部分濃縮以移除 異丙醇。使殘餘物於乙酸乙酯與水之間分溶，且再次用乙 酸乙酯萃取水相。合併有機萃取物，濃縮並將殘餘物再溶 解於2 mL THF中。向此溶液中添加3〇〇 mg(1.17 mmol)氣 120897.doc -109- 200813095 甲酸9-苐基甲醋及100吣三乙胺。2i h後，用乙酸乙酉旨稀 釋反應混合物且用鹽水洗滌一次。用硫酸鎂乾燥有機相， 過滤並濃縮。藉由使用乙酸乙酯/二氣甲烷〇:2)作為溶離 劑（2·5 X 15 cm管柱）進行之矽膠層析純化得到呈無色油狀之 所需化合物，428 mg，產率81%。 實例18
合成（2S)-2-(第三丁氧羰基胺基>3_(5_鄰甲苯基。比啶_2_ 基）丙酸【B〇c-(S)-4-(2，-甲基苯基）_2_0比啶基丙胺酸）】 以下流程20描述（2S)-2-(第三丁氧羰基胺基）_3_(5_鄰甲苯 基°比唆· 2 -基）丙酸之合成。 流程20 祖
NHBoc
(S)-2-(第三丁氧羰基胺基）-3-(5-溴吡啶-2-基）丙酸甲酯 將經鼠氣淨化並抽空之21 〇 mg鋅銅偶（根據Organic
Synthesis Collective 第 5 卷，第 855 頁製備）與 580 mg(1.76 mmol)3-碘丙胺酸之漿液溶解於7 添加有0·5 mL N，N-二 甲基乙醯胺之苯中。在密封燒瓶中以超音波處理該漿液40 120897.doc -110- 200813095 mm，且隨後添加500 mg(i 76 mm〇i，1〇當量）5-溴_2_碘吡 啶及82 mg(0.ll mm〇l，0·06當量）雙（三苯基膦）二氣化鈀。 用氬氣將反應此合物再淨化並抽空2次且隨後使其在 7〇°C下於氬氣下加熱15 h。冷卻反應，且使其於水與 EtOAc之間分溶。分離各層，並再次用Et〇Ac萃取水層。 合併有機萃取物，用硫酸鎂乾燥，過濾，濃縮並真空乾燥 得到呈黃色色油狀之粗產物。藉由己烷（3:丨）作為 溶離劑（2.5x15 cm管柱）進行之矽膠層析純化得到呈黃色油 狀之預期化合物，288 mg，產率46%。 (2S) 2-(第二丁氧幾基胺基鄰甲苯基〇比唆_2_基）_ 丙酸 向經攪拌之285 mg(0.79 mmol)(S)-2-(第三丁氧羰基胺 基）-3-(5-溴吡啶-2-基）丙酸甲酯及162 mg(i.19mm〇1，1 5當 $ )2-甲基苯基_酸於7 mL 1，2-二甲氧基乙烷中之漿液中添 加168 mg(1.59 mmol ’ 2.0當重）碳酸納及〇·5 niL水。用氮 氣將反應混合物淨化2次並抽空，且隨後添加29 mg(〇.〇4〇 mmol ’ 0.05當量）雙（三環己基膦）氯化鈀（π)且再次用氬氣 淨化混合物並抽空。氬氣下，在80°C下加熱經快速攪拌之 混合物。 14 h後’將反應混合物冷卻至室溫，且添加4 mL 1 N氫 氧化納溶液。歷時1 h將反應混合物加熱至70°C。冷卻至室 溫後，用乙醚萃取混合物1次。用1 〇%硫酸氫鈉溶液將水 相酸化至pH 3且接著用DCM萃取兩次。合併DCM萃取物， 用硫酸鎂乾燥，過濾並濃縮得到黃色半固體狀物。藉由製 120897.doc -111 - 200813095 備型逆相 HPLC(YMC ODS S5 3 0x 100 mm管柱，10%至 90% AcCN/水梯度[10 min]，0.1% TFA)得到（濃縮後）呈白色無 定形固體狀之所需產物，46.5 mg，產率17%。 實例19 以下流程21描述（2S)-2-(((9H-苐-9-基）甲氧基）羰基胺 基）-3-(6-苯基）吡啶-3-基）丙酸酯類似物之通用合成法。 流程21
FmocNH
2.當量，R-B(OH)2 4當量2M碳酸鈉 ο.1 當量，PdC丨2(PCy)3)2 1:1二甲苯:g丙醇 80。。，4h，氬氣_ 藉由矽膠層析純化 產率70-85% R-B(OH>2 =芳基或雜芳基麵酸
FmocNH
TFA/CH2CI2 室溫 3hrs 丨產率> 90%
(2S)_2-(((9H-苐_9_基）甲氧基）羰基胺基）-3-(6-[(3-氣-4·氟） 苯基）吡啶-3-基）丙酸第三丁酯 \ 向圓底燒瓶中添加300 mg Fmoc-L-溴-3-°比咬基丙胺酸 (0.573 mmol)、200 mg 3·氯-4-敗苯基酬酸（1.145 mmol，2 當量）、1.145 mL 2 Μ碳酸鈉溶液（2.29 mmol，4當量）、5 mL 甲苯、5mL 異丙醇及 42 mg PdCl2(PCy)3)2(0.0573 mmol，0· 1當量）。用氬氣淨化反應溶液，隨後歷時5 h使其 達到80°C。將反應冷卻至室溫，且用50 mL EtOAc加以稀 釋。用水（30 mL)及鹽水（20 mL)洗滌溶液，用硫酸鎂乾 燥，過濾並濃縮。使粗油狀物經歷矽膠層析（12 gm矽膠， 0-40% EtOAc/己烷梯度）得到245 mg呈油狀物之所需化合 120897.doc -112- 200813095 物（產率75%)。 (2S)-2-(((9H-苐-9-基）甲氧基）羰基胺基）·3-(6·[(3-氣-4-氟） 苯基）吡啶-3·基）丙酸 向（2S)-2-(((9H-苐-9-基）甲氧基）羰基胺基）-3·(6-[(3-氣-4-氣）苯基）σ比咬-3-基）丙酸第三丁酯（240 mg，0.429 mmol) 及3 mL二氯曱烷之溶液中添加TFA(3 mL)。在室溫下攪拌 反應5 h。蒸發溶劑至乾且使殘餘物經歷製備型HPLC(甲 醇-水梯度，0.1% TFA)。濃縮含有產物之溶離份得到200 mg(產率93%)TFA鹽形式之所需化合物。 實例20 由在第10位及第11位含有非天然非商業性胺基酸之二肽 基樹脂起始合成肽之通用方法 使用以下程序於Advanced Chemtech ACT 90合成儀上以 分批模式製備在第10位及第11位含有非天然非商業性胺基 酸之二肽基樹脂，隨後利用自動同時合成方案於MPS-396 肽合成儀上持續肽鏈延長。 藉由用DMF(2xlO mL/g，1 min)洗滌使足以合成若干肽類 似物之量之9-Fmoc-胺基咕-3_基氧基-Merrifleld樹脂（Sieber 醯胺樹脂；裝載：0.5 mmol/g ; Novabiochem)膨脹。隨 後，使用DMF(10 mL/g)中之20%哌啶進行兩次處理（各自 分別5 min 及 15 min)移除 Fmoc基團。用 DMF(2><10 mL/g)及 NMP(4xlO mL/g)洗滌樹脂。將Fmoc-(S)-4-(2’-甲基苯基）-3-吡啶基丙胺酸-OH(HCl鹽）（1_2當量）或其類似物、 PyBOP(1.07 當量）、HOBt(1.07 當量）及 DIEA(3.6 當量）於 120897.doc -113 - 200813095 NMP中之溶液添加至樹脂中。隨後，振盪或渦漩樹脂18小 時。使用定量寧海準測試監測偶合完成。抽乾樹脂，用 NMP(3xlO mL/g)及 DCM(3xl0 mL/g)洗滌，且用 DCM 中之 2.6%乙酸酐、2.4% DIEA(v/v)使任何未經反應之胺封端歷 時30 min。DMF洗滌（3x10 mL/g)後，用DCM中之10%乙酸 酐、2% DIEA(v/v)重複封端方案30 min。定量Fmoc測定檢 定指示0.39 mmol/g取代。 接著，如上文所述，由用DMF中之20%哌啶移除Fmoc基 團起始，且在若干次DMF洗滌後藉由向去保護之樹脂中添 加Fmoc-L-(2’-乙基-4’-甲氧基）聯苯基丙胺酸-ΟΗ(1·27當量） 或其類似物及HOBt(1.29當量）於NMP(4 mL)中之溶液、渦 漩5 min來進行第二次人工偶合循環。接著，將DIC(1.27當 量）添加至樹脂漿液中且振盈或渴旋樹脂15小時。抽乾樹 脂，用 NMP(3xl.0mL/g)及 DCM(3xlO mL/g)洗滌並隨後用 DCM(10 mL)中之5.0%乙酸酐、1.0% DIEA封端 30 min。最 後用DCM(3x 10 mL/g)洗滌樹脂。此合成流程產生所需經 Fmoc保護之二肽基-Sieber醯胺樹脂。 如前文所述移除Fmoc基團。將Fmoc-L-Asp(OtBu)-OH(3 當量）及HOBt(3當量）於NMP(2 mL)中之溶液渦漩5 min且隨 後添加DIC(3當量）。將所得溶液添加至樹脂中。隨後，振 盪或渦漩樹脂2小時。抽乾樹脂，且用NMP(3x 10 mL/g)及 DCM(3x 10 mL/g)加以洗滌。使用定量寧海準測試 (ninhydrin test)監測偶合完成。 使樹脂再經歷2次如上文所述之去保護/偶合循環，以便 120897.doc -114- 200813095 將xaa7至xaall之所需序列組合於樹脂上。依序使用之 Fmoc-胺基酸如下：Fmoc-L_Ser(tBu)-OH 及 Fmoc-L-Thr(tBu)-OH。使用以下方案偶合 Fmoc-[(S)-2-氟-a-Me-Phe]_OH。將 Fmoc-[(S)-2-氟-a-Me-Phe]-OH(1.5 當量）、 PyBOP(1.5 當量）、HOBt(1.5 當量）及 DIEA(3.0 當量）於 NMP 中之溶液添加至樹脂中。隨後，振盪或渦漩樹脂2小時。 抽乾樹脂，且用NMP(3xlO mL/g)及DCM(3xl0 mL/g)加以 洗務。 為偶合殘基Xaa5，如前文所述移除Fmoc基團。短暫渴旋 Fmoc-The(tBu)_OH(5 當量）及 2_Cl-HOBt(5 當量）及 DIC(5 當 量）於NMP(4 mL)中之溶液，隨後將其添加至樹脂中。隨 後，振盪或渦漩樹脂18小時。抽乾樹脂，且用NMP(3xlO mL/g)及 DCM(3xl0 mL/g)加以洗滌。用 DCM(10 mL/g)中之 10.0%乙酸酐封端樹脂30 min。DCM洗滌（3 xlO mL/g)後， 如前文所述移除Fmoc基團，且如關於Fmoc-L-Asp(OtBu)-OH所述偶合/去保護Fmoc-Gly-OH(殘基Xaa4)。使用所得 Xaa4-Xaall肽基-樹脂合成如下不同肽類似物。 合成SEQ ID NO: 118之化合物 使上文所述之Xaa4-Xaall肽基-樹脂（0.067 mmol)樣本與經 預先渦旋 5 min之 Fmoc_L-Glu(OtBu)-OH(5 當量）（殘基 Xaa3) 及0·5 M HOAt(5當量）於DMF中之溶液及DIC(5當量）一起渦 漩18小時。抽乾樹脂，用DMF(4x3 mL)洗滌。使結合樹脂 之肽（0.034 mmol)去保護，且使其與如前文關於殘基xaa3 所述之Fmoc-[(S)-a-Me-Pro]-OH(5當量）偶合得到結合樹脂 120897.doc -115- 200813095 之 Fmoc-[Xaa2-Xaaii]·^;^。 使樹脂（0.017 mmol)去保護且使其與如關於殘基Xaa2所 述之Boc-L-His(Trt)-OH(5當量）偶合。藉由用TFA/水/三-異 丙基矽烷（94:3 :3)(5 ·0 mL)處理3 hr將所需肽自其各別肽基-樹脂中裂解/去保護。濾除樹脂，用TFA(1.0 mL)漂洗，且 蒸發已合併之TFA濾液得到39 mg呈油狀固體之粗肽產 物。藉由使用0.1% TFA/水中5%至65%梯度之0.1% TFA/AcCN進行之製備型HPLC經20 min純化該粗肽產物。 彙集含有純產物之溶離份並將其凍乾，得到5·4 mg(18.9% 回收率）SEQIDNO:118之化合物。 合成SEQ ID NO: 119之化合物 使前文合成法中所述之Fmoc-[Xaa3-Xaall]-肽基- Sieber樹 脂（0·0 1 5 mmol)樣本與經預先滿旋5 min之Fmoc-[N_甲基-(D)-Ala]-OH(5當量）及0.5 M HOAt(5當量）於DMF中之溶液 及DIC(5當量）一起渦漩4小時。抽乾樹脂且用DMF(4x3 mL) 加以洗條。藉由用DMF(3 mL)中之20%旅σ定處理5 min及1 5 min移除Fmoc基團。用DMF(8x3 mL)洗滌樹脂，且隨後使 其與如前文合成中所述之Boc-L-His(Trt)-OH(5當量）偶 合。藉由用TFA/水/三-異丙基矽烷（94:3:3)(5·0 mL)溶液處 理3 hr將所需肽自其各別肽基-樹脂中裂解/去保護。濾除 樹脂，用TFA(1.0 mL)漂洗，且蒸發已合併之TFA濾液。將 所得油狀固體溶解於（l:l)AcCN/水（2 mL)中，且籍由使用 所使用之0.1% TFA/水中5%至65%梯度之0.1% TFA/MeCN 進行的製備型HPLC經20 min加以純化。彙集含有純產物 120897.doc -116- 200813095 之溶離份並將其凍乾，得到5.2 mg(18.5%回收率）SEQ ID NO: 119之化合物。 合成SEQ ID NO: 133之化合物 使先前合成中所述之Fmoc去保護[Xaa2-Xaall]·肽基-Sieber樹脂（0·0 17 mmol)樣本與脫胺基-His(Trt)_OH(5 當量） 及0.5 HOAt中之HATU(5當量）於DMF(5當量）中之溶液及2 M DIEA於NMP(5當量）中之溶液一起渦漩18小時。抽乾樹 脂，且用DMF(6x2 mL)及DCM(3x2 mL)加以洗滌。藉由用 TFA/水/三-異丙基矽烷（94:3:3)(5.0 mL)溶液處理3 hr將所 需肽自其各別肽基-樹脂中裂解/去保護。濾除樹脂，用 TFA(1.0 mL)漂洗，且蒸發已合併之TFA濾液。將所得油狀 固體（32 mg)溶解於（l:l)AcCN/水（2 mL)中，且藉由使用 0.1% TFA/水中5%至65%梯度之0.1% TFA/MeCN進行的製 備型HPLC經20 min加以純化。彙集含有純產物之溶離份 並將其凍乾，得到7.4 mg(24.6%回收率）SEQ ID NOM33之 化合物。 合成SEQ ID NCh 120之化合物 使如前文所述製備之Fmoc去保護的[Xaai〇-Xaaii]-二狀基-Sieber樹脂（0.05 mmol)樣本經歷如實例3中所述使用 Applied Biosystems 433a肽合成儀之FastMoc™方案進行的 9個額外偶合循環。 將經Fmoc保護之二肽基-樹脂（0.05 mmol)置放於儀器上 適當尺寸的容器中，用NMP洗滌6次並使用以20%哌啶/ NMP(分別為2 min及8 min)進行之兩次處理去保護。又進 120897.doc •117- 200813095 行一次經監測之去保護步驟直至監測選擇之條件令人滿意 為止。總的去保護時間為10-12 min。用NMP將已去保護之 二肽基-樹脂洗滌6次，且隨後使其與下一胺基酸偶合。將 藉助下一步驟中所使用之實例說明該程序。 接下來使用以下方法偶合Fmoc-L-Asp(OtBu)-OH ··將 Fmoc_L-Asp(OtBu)_OH(l mmol，20 當量）溶解於 2 mL NMP 中，並藉由隨後添加DMF(2.2 mL)中之0.45 M HBTU/HOBt 及2 M DIEA/NMP(1 mL)進行活化。接著，將經活化之經 Fmoc保護的胺基酸溶液轉移至反應容器中，且使偶合進行 3 0-60 min，此視來自去保護步驟之反饋而定。接著，用 NMP洗條樹脂6次且重複偶合方案。使樹脂再經歷5次如上 文所述之去保護/偶合循環，以便完成所需Xaa4至Xaall序列 的組合。依序偶合之Fmoc·胺基酸如下：Fmoc-(L)-His (Trt)-OH、Fmoc-(L)-Thr(tBu)-OH、Fmoc-(S)-2-氟-a-Me-Phe-OH、Fmoc-(L)-Thr(tBu)-OH 及 Fmoc-Gly-OH。最後，
用NMP及DCM洗滌肽基-樹脂6次。將Fmoc保護之二肽基_ 樹脂（0.025 mmol)添加至act 396多肽合成儀N，N_二甲基 甲醯胺/二氣甲烷（55:45)中。用DMF洗滌樹脂2次且如實例
1中所述使用以1.5 Μ哌啶/DMF進行之2次處理使其去保 護。藉由隨後添加DMF(4.〇當量）及DIC(40當量）中之〇 5 M H〇At活化Fm〇C-L-G1U(〇tBU)-〇H(4.0當量），人工將其轉移 至反應容器中且使其偶入？ i 巧° 2 hr。在渦漩下，用ΝΜΡ(4χ〇·5 mL)漂洗樹脂1 min。如益 引文偶合所述使Fmoc基團去保護 後，如下偶合Fmoc-[(s)_n λ>Γ )a_Me-Pro]_〇H :藉由隨後添加經 120897.doc -118 - 200813095 ΝΜΡ(0·12 mL)稀釋之 DMF(2_4當量）中之0.5 M HOAt 及 DIC(2.4 當量）使 Fmoc-[(S)-a-Me-Pro]_OH(2.4 當量）活化。 人工將溶液轉移至反應容器中且使其偶合18 hr。用NMP漂 洗樹脂。去保護Fmoc基團後，藉由將經NMP(0.2 mL)稀釋 之0.5 M HOAt中之胺基酸（4當量）於DMF(4當量）中的溶液 及DIC(4當量）添加至反應容器中來偶合Fmoc-(L)-His(Trt)-OH。使偶合反應偶合18 hr。用NMP漂洗樹脂。如前文偶 合所述移除Fmoc基團。如實例1中所述進行肽之TFA裂解/ 去保護。藉由使用0.1% TFA/水中10%至60%梯度之0.1% TFA/MeCN進行之製備型HPLC經20 min使其純化。彙集含 有純產物之溶離份並將其凍乾，得到21.7 mg(42%回收 率）SEQ ID NO: 120之化合物。 實例21 合成SEQ ID NO: 151之化合物 在Advanced ChemTech Model 90合成儀上50 ml反應器中 以 2.67 g(CL56 mmol/g，1.5 mmol)Sieber醯胺樹脂起始開始 合成。用於逐步組合之通用去保護/偶合重複循環如下： 1· DMF洗滌 1x20 mlxl min ; 2. DMF 中之 20%旅咬 1 x20 mix5 min ; 3· DMF 中之20%旅咬 1 x20 mix 1 5 min ; 4· DMF洗條 3x20 mlxl min ; 5 · NMP洗滌 4x20 mlxl min ; 6·偶合步驟（參看下文）； 7. DMF洗條 4x15 mlxl min ; 120897.doc -119- 200813095 8· Kaiser寧海準測試或裂解/去保護及HPLC及質譜分析。 使用上述步驟1至5將Fmoc基團自Sieber酸胺樹脂中移 除。將N-a-Fmoc-4-(2’-甲基苯基）-3·吡啶基丙胺酸（0.73 g， 1.50 mmol)、PyBOP(0.78 g，1.50 mmol)及 HOBt(0.39 g， 1.50 mmol)溶解於ΝΜΡ(5 ml)中，且隨後將該溶液添加至 樹脂中，隨後添加DIEA(0.39 g，3.05 mmol)。渦旋偶合混 合物16小時。用DCM(1><50 mL><60 min)中之10%乙酸酐處 理樹脂，用DCM(4x50 mLxl min)洗條且真空乾燥隔夜。 Fmoc測定測試得到 0.456 mmol/g取代。用 3.11 g(1.42 mmol) 樹脂持續合成。樹脂去保護後，將义〇1-?111〇〇(1〇-：6丨？(21-Et-4，-OMe)-OH(0.98 g，1.9 mmol)、HCTU(0.78 g，1.9 mmol) 於NMP(5 ml)中之溶液添加至樹脂中，隨後添加DIEA(0.48 g，3.80 mmol)且渴旋混合物16 hr。用NMP洗務後，Kaiser 寧海準測試呈陰性。去保護樹脂後，使用NMP( 10 ml)中之 HCTU(1.03 g，2·49 mmol)及 DIEA(0.65 g，5.03 mmol)將 N-α-Fmoc-L-天冬胺酸β-第三丁酉旨（0.6487 g，1.24 mmol)偶合 48 hr。去保護樹脂後，使用DMF(11.5 mL，6.3 mmol)及 DIC(0.96 mL，6.3 mmol)中之 0.546 M HOAt將 Ν-α-Fmoc-N-z·，三苯甲基-L-組胺酸（3.85 g，6.25 mmol)偶合16小時。重 複該方案以使Ν-α-Fmoc-O-第三丁基蘇胺酸（2.5 g，6·30 mmol)與樹脂偶合。樹脂去保護後，將DMF(3.4 mL，1.87 111111〇1)中 0.546]\4 110八1:中之]^-〇1-?111〇(：-〇1-甲基-2-氟-1^-苯丙 胺酸（0.78 g，1.86 mmol)添加至樹脂中，隨後添加 DMF(3.5 ml)中之 DIC(0.24 g，1.87 mmol)，且使偶合進行 4 120897.doc -120· 200813095 小時。去保護樹脂後，使用0.546 M HOAt於DMF(25 mL， 12.50 mmol)及 DIC(1.58 mL，12.52 mmol)中之溶液將 Ν-α-Fmoc-O-第三丁基-L-蘇胺酸（4.97 g，12.50 mmol)偶合 16 小 時。用DMF(20 mL)中之10%乙酸酐使樹脂封端1小時且用 DMF(4x20 mL)加以洗滌。移除Fmoc基團，且如先前Ν_α-Fmoc-L-天冬胺酸β-第三丁酯偶合步驟所述，偶合N-Fmoc- 甘胺酸（1.11 g，3.75 mmol)90 min，隨後以相同方式偶合N-α-Fmoc-L-麩胺酸 γ-第三丁酯（1.60 g，3·75 mmol)。使一部 分肽基-樹脂（0.030 mmol)去保護，且使用DMF(0.110 ml， 0·83 mmol)中之 0.546 M HOAt及 DMF(0.1 ml)中之 DIC(7.6 mg，0.06 mmol)偶合 N-a_Fmoc_a-曱基-L-脯胺酸（21·2 mg， 0.06 mmol)16小時。最後，將 NMP(0.9 mL)中之 L-P-(N-1-三苯甲基）咪唑乳酸（39.8 mg，0·10 mmol)及 HATU(38 mg， 0.10 mmol)添加至一部分肽基-樹脂（0·01 mmol)中’隨後添 加DIEA(17.4 mL，0_10 mmol)。渦漩1小時且用NMP洗滌 後，重複如上所述之偶合且使其進行48小時。用TFA/TIS/ 水（94:3:3)(2 mL)處理結合樹脂之肽，隨後以TFA/TIS/水 (94:3:3)漂洗兩次（2次，各1 mL)。真空濃縮已合併之濾液 得到18.1 mg(92%)粗肽。將其溶解於2 mL(l:l)AcCN/水 中，並將溶液裝載於Luna [C18(2)，5 μηι] Phenomenex管柱 (25 0x21.2 mm I.D)上。用溶劑A中梯度為15%至5 5%之溶劑 B以15 ml/min之流速經50 min溶離管柱。溶劑A :水中之 0_1% TFA。溶劑B : AcCN中之0.1% TFA。彙集含有純產 物之溶離份並將其凍乾，得到4.2 mg SEQ ID NO:151之化 120897.doc -121 - 200813095 合物。 實例22 合成⑻-3#·1-三苯甲基-味唾-4·基）·2-經基丙酸（L-P-(Ν·ΐ-三苯甲基）咪嗤乳酸）
將（S)-3-(lH-咪唑 _4·基）-2_ 羥基丙酸（〇·5265 g，3·〇 mm〇1) 及一本甲基氣化物（1·2991 g，4.7 mmol)裝入100 mL燒瓶
中。攪拌下，添加吡啶/AcCN
1:1(20 mL)。在 50°C 至 55°C 下’於油浴中加熱燒瓶4小時。在離心蒸餾器上移除溶劑 至接近乾燥。向殘餘物中添加等體積之水及乙酸乙酯（各 30 mL)。攪拌混合物約20 min。過濾收集所得固體，用水 (2x10 mL)隨後用乙酸乙酯（2x10 mL)洗滌，並於真空中進 行乾燥。產量：0.6953 g(58%)。 實例23 〇成（S)-3-(N-l-(2,4_«—基苯基）哺嗤-4-基）-2-經基丙酸 (Ι^β-(Ν-1-(2,4·二硝基苯基）咪唑乳酸） 以下流程23描述（S)-3-(N-l-(2,4-二硝基苯基）·咪唑-4_ 基）-2-經基丙酸之合成： 流程23 120897.doc -122- 200813095
HO Λη
+ o2n N〇2
AcCN DIEA 〇
N〇2 02N
\ 將一水合（S)-3-(lH-咪唑-4-基）-2-羥基丙酸（0.8971 g，5.2 mmol)、AcCN(60 mL)、DIEA(1.3438g，10.4 mmol)及 l-氟-2,4-二硝基苯（0.9564 g，5.1 mmol)裝入圓底燒瓶中，用在呂 箔覆蓋並攪拌隔夜。過濾反應混合物並在減壓下移除溶 劑。用二異丙基醚（2x20 mL)濕磨油狀殘餘物，且隨後將 其溶解於氣仿（20 mL)中並自氯仿及AcCN再蒸發。添加 DCM(60 mL)產生沈澱，添加更多DCM(30 mL)後在室溫下 進行攪拌。收集固體產物，用DCM(2xlO mL)洗滌並在真 空中乾燥隔夜。產量：1.37 g(83%)。 實例24 合成SEQ ID NO: 158之化合物 方法A.片段偶合（流程10A及10B) 在 8 ml 之反應器中，以 0.1896 g(0.56 mmol/g，0.11 mmol)Sieber醯胺樹脂起始，人工進行合成。使用以下循 環將Fmoc基團自樹脂中移除： 1 · DMF洗滌 1 x2 mix5 min ; 2.DMF$i20%^^lx2mlx5min; 3 · DMF 中之 20%哌啶 1x2 mix 15 min ; 4. DMF洗滌 8 x2 mix 1 min。 將N-a-Fmoc-4-(2’-曱基苯基）-3-吡啶基丙胺酸HC1鹽 (0.0549 g，0.11 mmol)及 PyBOP(0.0667 g，0·13 mmol)溶解 120897.doc -123 - 200813095 於DMF(1 ml)中。將此溶液添加至已去保護之樹脂中，隨 後添加 DMF(1 mL)中之 DIEA(0.0423 g，0.33 mmol)。渦漩 樹脂3.5小時，用DMF及DCM(4x2 mLxl min)洗滌。用 DCM(2 mL)中之10%乙酸酐將樹脂處理隔夜，用DCM(6x2 mLxl min)洗滌且真空乾燥1小時。產量：0.2508 g。Fmoc 測定測試得到0·35 mmol/g取代。將0.083 g(0.029 mmol)樹 脂用於下一步驟中。 使用上述循環1至4使樹脂去保護後，將N-a-Fmoc-(L卜 Bip(2f-Et-4f-OH)-OH(0.0251 g? 0.049 mmol) > HOBt(0.0084 g，0.055 mmol)及 DIC(0.0067 g，0.053 mmol)於DMF(1 ml) 中之溶液添加至樹脂中。渦旋16小時後，用DMF接著 DCM(4xl mLxl min)洗滌肽基-樹脂。使用步驟1至3移除 Fmoc基團，隨後以DMF接著DCM加以洗滌（4x1 mLxl min.) 〇 用TFA/三異丙基矽烷/水96:2:2(2x1 mLxlO mins.)處理 肽-樹脂。收集濾液並於真空中濃縮成殘餘物，用二異丙 基醚濕磨該殘餘物並離心得到固體產物。用二異丙基醚洗 滌該產物並於真空中乾燥得到0.0244 g二肽。將二肽溶解 於THF(1 mL)中之0.2% DIEA中，並用大孔三乙銨曱基聚 苯乙烯碳酸酉旨樹脂（0.0682 g，0.211 mmol，Argonaut Technologies)處理2小時。移除樹脂珠粒並用THF(2><1 mL) 中之0.2% DIEA洗滌。真空乾燥已合併之濾液及洗滌液。 向所得殘餘物中添加侧鏈經保護之N-甲氧基羰基Xaal-Xaa9 9 聚體肽（55.8 mg，0.035 mmol)、HOBt(5.47 mg， 120897.doc -124- 200813095 0.036 mmol)及 DIC(6 pL，0_035 mmol)於 CHCI3/DMF 9:1(1 mL)中之溶液。渦漩所得溶液隔夜。真空移除溶劑，用 TFA(1 mL)中之2%三異丙基矽烷處理所得殘餘物90 min， 此後添加二異丙基醚（20 mL)。乾燥已沈澱之固體並將其 溶解於2 mL 1.5%氫氧化銨中。用乙酸將pH值調至約9.5。 將此溶液裝載於Luna [C18(2)，5 μηι] Phenomenex管柱 (250x21.2 mm I.D.)上。用梯度為20%至50%之溶劑B以15 ml/min之流速經60 min溶離管柱。溶劑A :水中之0· 1 % TFA。溶劑B : AcCN中之0.1% TFA。彙集含有純產物之溶 離份並將其凍乾，得到5.5 mg SEQ ID NO: 15 8之化合物。 遵循流程10B中所述之方法以不同的片段偶合程序合成 SEQ ID NO: 158之化合物。如此實例中先前所述，在8 ml 反應器中以0.1182 g(0.47 mmol/g，0.056 mmol)N-a-Fmoc-4-(2f-曱基苯基）_3_吡啶基丙胺醯基-Sieber醯胺樹脂起始， 人工進行合成。用於將Fmoc基團自樹脂移除之循環與上述 循環相同。如上文所述，使义〇1-卩111〇(：-(1〇-：81卩（2’414’· OH)-OH(0.0419 g，0.0 83 mmol)與樹脂偶合。用 DCM(2 mL) 中之10%乙酸酐處理樹脂30 min、DCM洗務（6x2 mix 1 min) 及移除Fmoc基團後，將側鏈經保護之N-甲氧基羰基Xaal-Xaa9 9聚體肽（0.1347 g，0.084 mmol)、HOBt(0.0130 g， 0.085 mmol)及 DIC(0.0118 g，0.94 mmol)於 DCM(0.1 mL)及 DMF(0.45 mL)中之溶液添加至經去保護之二肽基-樹脂中 並渦旋混合物4.5小時。用DMF及DCM(4x2 mLx 1 min)洗 滌樹脂，且隨後用TFA(5xl mLx3 min)中之2%三異丙基矽 120897.doc -125- 200813095 燒、2%水處理；收集濾液並使其靜置75 min。真空中移除 溶劑並用二異丙基醚（20 mL)濕磨所得殘餘物得到呈固體 狀之粗肽（0.0818 g)。如上文所述純化此粗肽，但所使用 之梯度為溶劑A中之25%至35%溶劑B，歷經120 min，流速 為15 ml/min。溶劑A :水中之0.1% TFA ;溶劑B : AcCN中 之0.1% TFA。彙集含有純產物之溶離份並將其凍乾，得到 19 mg SEQ ID NO:158之化合物。 方法Β·逐步延長（流程1) 在Advanced ChemTech Model 90合成儀上50 ml反應器中 以 1.46 g(0.72 mmol/g，1.05 mmol)Sieber醯胺樹脂起始進行 合成。用於逐步組合之通用去保護/偶合重複循環如下： 1 · DMF洗務 1 X 15 mix 1 min ; 2· DMF 中之 20%哌啶 1x15 mix5 min ; 3· DMF 中之 20%哌啶 1x15 mix 15 min ; 4. DMF 洗條 4x15 mlxl min ; 5. NMP 洗滌 4x15 mlxl min ; 6·偶合步驟（參看下文）； 7. DMF洗務 4x15 mlxl min ; 8· DCM 洗條 4x15 mlxl min ; 9. Kaiser寧海準測試或裂解/去保護及HPLC及質譜分析。 使用上述步驟1至5將Fmoc基團自Sieber酿胺樹脂中移 除。將N-a_Fmoc-4-(2-甲基苯基）-3-吡啶基丙胺酸HC1鹽 (1.0977 g，2.13 mmol)、PyBOP(l.〇972 g，2.11 mmol)及一 水合 HOBt(0.3228 g，2.11 mmol)溶解於 DMF(8 ml)中。將 -126- 120897.doc 200813095 DIEA(0.8052 g，6.23 mmol)添加至溶液中，隨後將其添加 至樹脂中。渦漩偶合混合物16小時。用DCM(lxl5 mLx60 min)中之10%乙酸酐處理樹脂，用DCM(6xl5 mLxl min)洗 滌且真空乾燥6小時。產量：1·6816 g。Fmoc測定測試得 到 0.48 mmol/g取代。用 0.8602 g(0.41 mmol)樹脂持續合 成。使樹脂去保護後’將1^-〇1-?111〇〇(1^)4丨口(2’-£1>4’-011)-OH(0.2660 g，0.524 mmol)、HOBt(0.0796 g，0.520 mmol) 及DIC(0.0647 g，0.513 mmol)於DMF(8 ml)中之溶液添加至 樹脂中且滿旋混合物16 hr。用DMF及DCM洗滌後，Kaiser 寧海準測試呈陰性。去保護樹脂後，使用DMF/DCM (1:1)(6 ml)中之 HOBt(0.1893 g，1.24 mmol)及 DIC(0.1566 g， 1.24 mmol)偶合 Ν-α-Fmoc-L-天冬胺酸 β-第三丁酯（0.6487 g， 1_24 mmol)45 min。以 Ν-α-Fmoc-O-第三丁基絲胺酸 (0.4750 g，1.24 mmol)及 Ν-α-Fmoc-O-第三丁基-L-蘇胺酸 (0.4924 g，1.24 mmol)重複相同偶合循環。去保護樹脂 後，使用 DMF/DCM(1:1)(6 ml)中之 HOBt(0.1271 g，0.830 mmol)及 DIC(0.1044 g，0.827 mmol)偶合 N-cx-Fmoc-a-甲基-2-氟-L-苯丙胺酸（0.3497 g，0.834 mmol)l小時。去保護樹 脂後，使用 0.5 M HOAt 於 DMF(8.3 mL，4.15 mmol)及 DIC(0.5240 mL，4.15 mmol)中之溶液偶合 N_a-Fmoc-0-第 三丁基-L-蘇胺酸（1.6413 g，4.14 mmol)16小時。DMF及 DCM洗滌後，用1 ml TFA/TIS/水（96:2:2)處理3 mg濕樹脂 1.5小時。濾除樹脂，且在真空離心乾燥機（speed-vac)中移 除溶劑。將殘餘物溶解於2 ml水/AcCN(l:l)中。HPLC及 120897.doc -127· 200813095 MS分析表明無未偶合之肽。移除Fmoc基團，且如先前N-a_Fmoc-L_天冬胺酸β_第三丁酯偶合步驟所述，偶合N-Fmoc-甘胺酸（0.3691 g，1.24 mmol)l hr，隨後以相同方式 偶合N-a-Fmoc-L-麩胺酸γ-第三丁酉旨（0.5297 g， 1.24 mmol)。隨後，使用 DMF/DCM( 1:1)(6 ml)中之 HOBt(0.1271 g，0.83 mmol)及 DIC(0.1042 g，0.83 mmol)偶合N-a-Fmoc-a-曱基-L·脯胺酸（0.2902 g，0.83 mmol)3.5小時。最後，如關 於與N-a-Fmoc-a-甲基-2-氟-L-苯丙胺酸偶合之N-a-Fmoc-〇·第三丁基-L-蘇胺酸所述，使N-a-Fmoc-N-im-三苯曱基-L-組胺酸（2.5564 g，4.13 mmol)偶合12小時。自如上文所 述之肽基-樹脂釋放之去保護肽樣本經MS證實具有部分未 偶合之肽。人工移除Fmoc基團，且DMF及DCM洗滌後， 添加N-(甲氧基羰基氧基）琥珀醯亞胺（0.2 163 g，1.25 mmol) 於DCM(6 mL)中之溶液並渦旋混合物16小時。用 DCM(4xlO mlxl min)洗務肽-樹脂。Kaiser ninhyrin測試呈 陰性。用TFA/TIS/水（96:2:2)(10 mL)處理N-甲氧基羰基衍 生之肽基-樹脂10 min，隨後又用各5 mL進行兩次處理。 使已合併之濾液在室溫下再靜置2小時。真空濃縮至約4 mL後，攪拌下，將溶液逐滴添加至乙醚（50 ml)中。過濾 收集所得固體，用乙醚（2x5 ml)洗滌且真空乾燥得到0.691 g(92%)粗肽。使用本實例方法A中所述之程序藉由製備型 HPLC純化此粗肽。 實例25 合成N_(甲氧基羰基氧基）琥珀醯亞胺[碳酸2,5-(二侧氧基 120897.doc • 128 - 200813095 吡咯啶-1-基）甲酯] 以下流程24描述N-(曱氧基羰基氧基）琥珀醯亞胺[碳酸 2,5-( 一側氧基各唆基）甲酯]之合成。 流程24
-5 C下’在氬氣下，以使溫度保持在+3〇c以下之速率向 經擾掉之64.61 g(0.561 m〇1)N_羥基琥珀醯亞胺及58 95 g(0.624 mol)氯甲酸甲酯於THF(9〇() mL)中之溶液中添加 82·6 mL(0.593 m〇i)三乙胺。攪拌反應混合物，且使其溫 至室溫。15 h後，過濾所得漿液且用THF(100 mL)洗滌固 體。減壓蒸發濾液得到白色固體。由Et〇Ac/己烷（2:1，i50 mL)再結晶得到呈白色結晶之所需產物，熔點84_86艺， 79·4 g，產率 82%。 實例26 合成（心8)-3-(1-(2,4-二硝基苯基）-咪唑_4-基）-2_甲基丙 酸[α-甲基二硝基苯基兴咪唑_4_基】丙酸，
Imp(DNP)] 1·甲笨磺醯基-4(5)-羥甲基咪唑 以下程序係自 Agr. Biol. Chem·，38 (5)，1097-1099，1974 t改向Na2C03(8.4 g，0.08莫耳）於水（4〇 mL)中之溶液中 添加4-(羥甲基）咪唑鹽酸鹽（2·7 g，〇〇2莫耳）。溶解完成 後’經5分鐘之時間逐滴添加對甲苯磺醯氯（4 58 g，〇.〇24 120897.doc -129- 200813095 莫耳）於乙酸乙酯（30 mL)中之溶液。攪拌反應混合物5小 時。分離各層並添加更多乙酸乙酯（2〇 mL)。用0.1 Μ
Na2CO3(2x20 mL)、水（1x20 mL)且隨後飽和 NaCl(lx20 mL) 洗滌有機相。用2 g MgS04及1 g活性炭處理乙酸乙酯ι〇 min。藉由濾過矽藻土墊移除固體並在離心蒸餾器上移除 溶劑。殘餘物開始結晶。添加新鮮乙酸乙酯（1〇 mL)並用 熱風槍使溶液加溫以再溶解固體。使產物在室溫下結晶隔 夜。收集結晶物質，用乙酸乙酯（5 mL)且隨後乙醚（1〇 mL) 洗滌’且真空乾燥至3.59 g之恆重。 1-甲苯續醯基-4(5)-乙醯氧基曱基咪唑 將1_甲苯磺醯基-4(5)-羥甲基咪唑（2.52 g，10 mmol)溶解 於氣仿（10 ml)中。室溫下向其中逐滴添加三乙胺（2.02 g， 20 mmo1)，隨後逐滴添加乙酸酐（1.33 g，13 mmol)歷經15 min。室溫下攪拌混合物，且以lc/mS監測4天。減壓移除 氣仿且將殘餘物溶解於乙酸乙酯（60 mL)中。依序用〇.1 μ 碳酸氫納、水且隨後飽和氯化鈉均各丨x4〇 ml洗滌有機 層。同時用活性炭及硫酸鎂處理有機層且隨後使其濾過石夕 藻土塾。減壓移除溶劑且將所得殘餘物溶解於溫乙酸乙醋 (10 mL)中。向此溶液中緩慢添加2〇 mi乙醚。在室溫下使 溶液結晶隔夜。收集結晶，用乙醚（2xl〇 ml)洗滌且真空乾 燥隔夜得到1.55 g。 甲氧羰基-a·甲基-p-4-(l-甲苯磺醯基咪唑卜丙酸甲酯 以下程序係自 Synthetic Communications，19(7&8)，1157-1165，1989修改。將1-甲苯磺醯基_4(5)-乙醯氧基甲基咪唑 120897.doc -130- 200813095 (0.3516 g，1·2 mmol)及甲基丙二酸二甲酯（〇 1485 g，1〇 mmol)於AcCN(2 ml)中之溶液添加至粉末狀k〇h(〇.i694 g， 3.0 mmol)及四丁基溴化銨（0.0496 g，0.15 mm〇1)於 AcCN(1 ml)中之攪拌懸浮液中。如藉由HPLC分析測定，4〇 min後 反應元成。將反應混合物傾入乙鍵（1 0 〇 m 1)中，使盆淚過 矽藻土墊且藉由減壓蒸發移除溶劑。將殘餘油狀物溶解於 30 ml乙酸乙酯中並用〇·ι μ NaHC03(lxi5 ml)、飽和 f NaCl(l χ 15 ml)洗務且以MgS〇4乾燥。減壓移除溶劑且將所 得油狀物置於乾燥器中在真空中乾燥3天得到〇·2〇7 g。 (X-甲基-β-4-味丙酸 將α-甲氧幾基-α-甲基- β_4_(1 -甲苯石黃醢基口米唾）_丙酸曱酯 (0.186 g，0.5 mmol)溶解於2 ml甲醇中。向其中添加i 5 ml 1·0 N NaOH且攪拌反應隔夜。藉由製備型hPLC進行純化 後’將凍乾獲得的產物（0.1366 g)溶解於5 ml 1.0 N NaOH 中並在經PTFE襯裏之蓋密封的16x100 mm螺旋蓋管中於 《 100t：下加熱2小時，隨後添加2 ml濃HC1且在145它下加熱 6小時。形成所需已脫羧基之產物。過濾整個溶液並將其
裝載於 YMC G-340-10P ODS 50x20 mm製備型 HPLC 管柱 上。用 0.1% TFA/水中梯度為 0% 至 60% 之 〇.1〇/0 TFA/MeCN 經60 min溶離產物。彙集梯度中與丨丨至^ min對應之溶離 份，冷凍並凍乾得到32 mg產物。 α-甲基- β-[1-(2,4 -二确基苯基）-味嗤-4·基]丙酸 向α-甲基-β·4_ 口米唆丙酸（0.0305 g，0.114 mmol)及碳酸氫 鈉（0.0617 g，0.734 mmol)於水（1 mL)(pH 8.04)中之溶液中 120897.doc -131 - 200813095 添加2,4-二硝基氟苯（0.0323 g，0.174 mmol)於 MeCN(1.0 mL)中之溶液。满旋反應混合物隔夜。減壓移除MeCN， 且將殘餘物再溶解於2 mL水中，過濾並將其以兩份各1.5 mL與 0.5 mL之等分試樣裝載於Phenomenex Luna C18(2) 5 μηι 100x21.2 mm製備型HPLC管柱上。用0.1% TFA/水中梯 度為0%至80%之0·1% TFA/MeCN經40 min溶離產物。彙集 梯度中與12.5至14.5 min對應之溶離份並於Savant SpeedVac™中乾燥隔夜。藉由將水不溶性產物溶解於 DMSO中來回收額外產物，隨後如上文所述進行製備型 HPLC。凍乾後，已合併之溶離份得到3 1 mg純產物。 實例27 合成SEQ ID NO: 137及138之化合物 如下文所述使（尺，8)-3-(1-(2,4-二硝基苯基）-咪唑-4-基）-2-曱基丙酸與相關Xaa2-Xaall-肽基-Sieber樹脂偶合。 向（11，8)-3-(1-(2,4-二硝基苯基）-咪唑-4-基）-2-甲基丙酸 (0.0267 g5 0.083 mmol) ^ 6-Cl-HOBt(0.015 1 g? 0.089 mmol) 及 HCTU(0.0360 g，0.087 mmol)於 1 mL NMP/DCM(3:1)中 之溶液中添加DIEA(0.0315 g，0.244 mmol);短暫渦漩溶液 且隨後將其添加至如實例19中所述之相關Fmoc去保護之 Xaa2-Xaall-肽基-Sieber樹脂中。使偶合進行16小時。用 NMP隨後DCM(3xl.5 mLxl min)洗滌肽基-樹脂，且隨後用 DCM中之10%乙酸酐（1x2 mLx90 min)處理，隨後用DCM 接著〇]\^洗滌（3><1.5 1111^111^11)。用〇]^卩（1.5 1111〇中之10% 噻吩處理肽基-樹脂1 hr，且用DMF及DCM(4xl.5 mLxl 120897.doc -132- 200813095 min)洗滌。隨後，用 TFA/DCM/TIS(3:1.9:0.1)(1 mL)處理肽 基-樹脂10 min並過濾。收集濾液且再輕柔渦漩1小時。在 真空離心機中將TFA混合物濃縮至約0.5 mL並將其添加至4 mL MTBE中。1 hr後，離心收集沈澱產物，洗滌且隨後乾 燥得到0.0841 g粗產物。如下藉由製備型HPLC純化此粗產 物：溶解粗肽且將其注入Phenomenex Luna C 18(2)(5 μπι， 250x30 mm)管柱中，並使用0.1% TFA/水中線性梯度為 20% 至 50% 之 0.1% TFA/MeCN 以 15 mL/min 之流速經 40 min 加以溶離，且在217 nm下以UV偵測流出物。彙集含有所 需產物之溶離份並凍乾得到26.7 mg純度為97.5%之產物。 製備型對掌性Η P L C純化肽 將非對映異構體肽混合物（10 mg)溶解於MeCN/MeOH 中。將溶液裝載於Chirobiotic V 2·2χ50 cm，5 μπι管柱上並 用 MeCN/MeOH/N(CH2CH3)3/CH3COOH: 65/35/0.5/0.5 以 20 mL/min之流速進行溶離。在29 min與35 min之間收集異構 體A。在36 min與44 min之間收集異構體B。如上文所述進 行第二輪純化。合併含有異構體A之溶離份，將其濃縮至 約5 mL，用水/MeCN(4:l)稀釋並使溶液凍乾。以相同方式 處理異構體B。藉由製備型HPLC將所得殘餘物轉化成TFA 鹽。將各肽注入Phenomenex Luna C18(2) 5 μιη，100χ21·2 mm管柱中，並使用0.1% TFA/水中線性梯度為20%至50% 之0· 1 % TFA/MeCN以10 mL/min之流速經40 min加以溶 離，且在217 nm下以UV偵測流出物。彙集含有所需產物 之溶離份，冷凍並凍乾得到6.0 mg純肽異構體A及4.9 mg 120897.doc -133 - 200813095 純肽異構體B。 實例28 合成（+)-及㈠二本曱基_1ΛΓ-味唾-4-基）_2_曱基丙酸 [α-甲基-β-(1-三苯甲基-1及-咪唑_4_基）丙酸，Imp(Trt)】（l- 三苯甲基-1好-味嗤-4-基）甲醇 流程25
將4-羥甲基咪唑（4.53 g，34 mmol)及三苯甲基氯化物 (10·54 g，38 mmol)溶解於DMF(50 mL)中。授拌下，向其 中添加DIEA( 13.46 g，104 mmol)且攪拌反應混合物14 hr。 將反應混合物傾入水（750 mL)中並攪拌約30 min。收集所 得固體，用水（3x25 mL)及二異丙基醚（3x25 mL)洗滌，且 真空乾燥得到11.55 g(99%)(l-三苯甲基咪唑-4-基）甲 醉。純度（HPLC) · 93%，滯留時間：6.37 min ;管柱：
Phenomenex Luna C18(2)(5 μηι，50x4.6 mm);梯度：A中 之10%至100% B以1.25 mL/min歷時1〇 min。溶劑A:水中 之 0.1% TFA ;溶劑 B : AcCN 中之 〇·1〇/0 TFA。ES-MS : (Μ+Η)+=341·1 〇 4_(氣甲基）_1·三苯甲基-1及-咪唑 120897.doc -134- 200813095 流程26
經6 min向經冰/水冷卻之4-羥甲基-1-三苯曱基咪唑（613 g，18 mmol)於二氯甲烷（75 mL)中之懸浮液中逐滴添加亞 硫醯氣（5.0 g，42 mmol)。移除冰/水浴且再攪拌反應3〇 f , min。減壓移除DCM及S0C12。用二異丙基醚（2〇〇 mL)濕磨 所得固體，藉由過濾進行收集並真空乾燥得到7.37 8(>100%)83%純4-(氣甲基）-1-三苯甲基-17/_味唾；滯留時 間：7.33 min ;管柱：YMC ODS-A (3 μηι，50x4.6 mm);梯 度：A中之10%至100% B以1.25 mL/min歷時1〇 min。溶劑 A :水中之 0.1% TFA ;溶劑 B : AcCN 中之 〇·ι〇/0 tfa。 LC/MS : ESI (Μ+Η)+=359·2。 2 -甲基-2-((1•三苯甲基_1/Γ-味嗤-4-基）甲基）丙二酸二甲醋 流程27
將4·(氣甲基）-1-三苯甲基_17/_ 口米唾（2.73 g，7.6 mmol)及 2-甲基丙二酸二甲酯（2·22 g，15·2 mmol)溶解於AcCN(30 ml)中。經6 min將此溶液添加至在AcCN(2 mL)中搜拌之新 粉碎之 ΚΟΗ(0·89 g，15.9 mmol)及四丁基溴化銨（0.25 g，0.8 120897.doc •135- 200813095 mmol)中。攪拌3小時後，添加更多經粉碎之k〇h(〇.89 g， 15.9 mmol)並攪拌混合物隔夜。 藉由過渡移除固體並減壓移除溶劑。將殘餘物溶解於 EtOAc(40 mL)中並用水（2x20 mL)且隨後飽和NaC1(lx2〇 mL)洗滌。減壓移除EtOAc得到3·46 g油狀殘餘物。藉由在 石夕膠 60(250 g ’ 0.040 至 0.063 mm 之粒徑）管柱（5〇x3〇 cm) 上使用CHCl3/EtOAc(9:l)作為溶離劑進行之急驟層析純化 ( 此殘餘物。收集25 mL溶離份且於溶離份53至72中發現純 產物。彙集這些溶離份並減壓移除溶劑。自CHC13〇q 15 mL)將所得殘餘物再蒸發兩次，且隨後乾燥得到l 72 g 98%純2-甲基-2-((1-三苯甲基-；[//·咪唑基）甲基）丙二酸 二甲酯；滯留時間：13_02 min ;管柱：yMC 〇DS-A (3 μιη， 5 0x4.6 mm)，梯度：Α中之 10%至 100% β以 1·25 mL/min歷 時20 min。溶劑A :水中之〇·ι〇/0 TFA ;溶劑B : AcCN中之 0.1% TFA。LC/MS : ESI (Μ+Η)+=469·3。kNMR (CDC13, C, 400 MHz): δ 1.42 (s5 3H)? 3.15 (s5 2H), 3.63 (s, 6H)? 6.48 (s? 1H)，7.05-7.15 (m，6H)，7.26 (s，1H) 7.28-7.37 (m，9H)。 2 -甲基-3-(1·三苯甲基_1及·味峻-4-基）丙酸甲酯 流程28
向2-曱基-2-((1-三苯甲基·1/7_咪唑-4_基）甲基）丙二酸二 甲酯（0.7344 g，1.5 7 mmol)於NMP(5 mL)中添加 NaCl(0.2 12 120897.doc -136- 200813095 g)及水（0.3 mL)且將混合物加熱至回流（202°C)歷時4.5 hr。 在分液漏斗中使反應混合物於水（20 mL)與EtOAc(20 mL) 之間分溶。用EtOAc(2x20 mL)萃取水相並用水（2x20 mL)、飽和NaCl(lx20 mL)洗滌已合併之有機層並用MgS04 乾燥。減壓移除EtOAc得到0.8 g油狀殘餘物。藉由使用 CHC13(5x20 mL)隨後 CHC13(8x20 mL)中之 20% EtOAc 經由 矽膠墊（13.5 g矽膠60，0.040至0.063 mm粒徑）進行之溶離 純化此殘餘物。乾燥含有產物之溶離份得到0.45 g 79%純 2-甲基-3-(1-三苯曱基-1//-咪唑-4-基）丙酸甲酯；滯留時 間·· 7.35 min ;管柱：YMC 0DS-A (3 μιη，50x4.6 mm);梯 度：A中之10%至100% B以1·25 mL/min歷時10 min。溶劑 A ：水中之 0.1% TFA ；溶劑 B : AcCN 中之 0.1% TFA。 LC/MS : ESI (Μ+Η)+=411·3。 對掌性分離2-曱基-3-(1-三苯甲基-1J7-咪唑-4-基）丙酸甲酯 之對映異構體 以一次1-2_5 mL將外消旋2-甲基-3-(1-三苯曱基-1//-咪 唑-4-基）丙酸甲酯（0·45 g)於乙丙醇（2 mL)及N-庚烷（16 mL) 中之溶液裝載於Chiralcel OD管柱（20 mm I.D.x500 mm， Chiral Technologies Inc.)上並用庚烧中之3%異丙醇以10 mL/min溶離。收集58至70 min時之溶離份中較快溶離之對 映異構體；收集75至100 min時之溶離份中較晚溶離之對 映異構體。藉由減壓移除溶劑並真空乾燥獲得各對映異構 體。此得到0.205 g較快溶離之對映異構體的純度為98%產 物；滯留時間：9.28 min ;管柱：Phenomenex Luna C18(2) 120897.doc -137- 200813095 (5 μηι，5 0x4·6 mm);梯度：A 中之 10% 至 100% B 以 1.25 mL/min歷時1 5 min。溶劑A :水中之〇. 1% TFA ;溶劑B : AcCN 中之 〇·1〇/0 TFA。LC/MS : ESI (Μ+Η)+=411·3 ;旋光 性：[a]D=+12.9°(CHCl3 中之 c=l.〇5)。 較晚溶離之對映異構體的產量為〇·2〇3 g(98%純）；RT， 9.27 min。使用與關於較快溶離異構體所述之管柱及梯度 相同之管柱及梯度。LC/MS ·· ESI (Μ+Η)+=411·3 ;旋光 性：[a]D=-13.5〇(CHCl3 中之 c=i.i6)。 (+)-及（_)-2-甲基_3_(1_三苯甲基^丑·咪唑基）丙酸 流程29
藉由在THF(2 mL)及1 N LiOH(0.45 mL)中擾拌2小時使 較快/谷離之2 -曱基- 3-(1•三苯甲基- if味嗤基）丙酸甲酯 對映異構體（0.186 g5 0.453 mmol)皂化。HPLC分析表明 50%純化成產物。接近完全轉化（97·5%)需要再添加兩次1 N LiOH(各〇·1 mL)及攪拌總共36 hr。減壓濃縮並添加水 (20 mL)後，用DCM(3x20 mL)萃取水相並用水、飽和氯化 納（各1x20 mL)洗滌已合併之DCM萃取物，且以MgS〇4乾 燥。移除DCM且真空乾燥所得固體得到〇 1728 g 97%純 (+)-2-甲基-3-(1-二本甲基仏口米嗤-心基）丙酸；滞留時 間·· 9.36 min ;管柱·· YMC 0DS_A (3 陶，5〇χ4 6 随）；梯 120897.doc -138- 200813095 度：A中之10%至100% B以1.25 mL/min歷時15min。溶劑 A :水中之 0.1% TFA ;溶劑 B : AcCN 中之 0.1% TFA。 LC/MS ： ESI (Μ+Η)+=397·30，（Μ-Η)·=395·30。旋光性： [a]D=+12.8。（CHC13 中之 c=1.03)。iH-NMR (CD3OD，500 MHz): δ 1·13 (d，3H)，2.57-2.65 (m，1H)，2.67-2.80 (m，1H)， 2.82- 2.92 (m，lH)，6.75(s，lH)，7.10-7.17(m，6H)，7.34-7.41 (m，9H)，7.58 (s，1H)。 如上文關於較快溶離之對映異構體所述，使較晚溶離之 2- 曱基-3-(1-三苯曱基-lH-u米嗤-4-基）丙酸甲g旨（0.181 g， 0. 442 mmol)對映異構體皂化得到〇·163 g 97%純㈠-2-甲基- 3- (1_三苯甲基-1//-咪唑-4-基）丙酸；滯留時間：9.32 min ; (與關於（ + )-異構體所述者具有相同管柱及梯度）。 LC/MS : ESI (Μ+Η)+=397·24，（Μ-Η)-=395·26。旋光性： [a]D = -12.2。（CHC13 中之 c=1.03)。-NMR (CD3OD，500 MHz): δΐ.12 (d，3H)，2.56-2.64 (m，1H)，2.68-2.78 (m，1H)， 2.82- 2.90 (m，lH)，6.69(s，lH)，7.10-7.16(m，6H)，7.34- 7.39 (m，9H)，7.45 (s，1H)。 實例29 合成 SEQ ID NO:167、168、169及 170之化合物 由 Sieber醯胺樹脂（9.56 g，0.72 mmol/g，6·88 mmol)起 始，將經保護之 SEQ ID NO: 167、168、169 及 170 之 Xaa2-Xaan肽序列組合於Advanced ChemTech Model 90合成儀 上，使用以下洗滌及去保護方案： 1. DMF洗務 1 χ85 mix 1 min ; 120897.doc -139- 200813095 2· DMF 中之 20%口底咬 1 x 85 mix 5 min ; 3 · DMF 中之 20%哌啶 1x85 mix 15 min ; 4. DMF 洗務 3x85 mlxl min ; 5· NMP洗條 3 x85 mix 1 min。 將（S)-2-(((9H-苐-9-基）甲氧基）魏基胺基）-3-(6 -鄰曱苯基 吡啶-3_基）丙酸HC1鹽（6.70 g，13.0 mmol)、PyBOP(7.29 g， 14.0 mmol)及一水合 HOBt(2.14 g，14.0 mmol)於 NMP(70 ml) 中之溶液添加至已去保護之樹脂中，隨後添加DIEA(7.28 g，5 6.3 mmol)並滿旋混合物直至對樹脂樣本進行之Kaiser 寧海準測試呈陰性（4.5 hr)。用DMF(3x85 mLxl min)隨後 DCM(7x85 mLxl min)洗滌樹脂，且在真空中乾燥得到 11.344 g。Fmoc測定得到0.53 mmol/g取代。以上述步驟1 至4使樹脂去保護及6次DMF洗滌後，將（S)-2-(((9H-苐-9-基）曱氧基）被基胺基）-3-((2’ -乙基- 4’-經基）聯苯-4-基）丙酸 [Fmoc-(S)-(2，-乙基-4，-羥基）-Bip-OH](3.79 g，7.47 mmol)及 一水合 HOBt(1.14 g，7.44 mmol)於 DMF(50 ml)及 DIC(0.94 g，7.45 mmol)中之溶液添加至樹脂中且滿旋混合物20 hr。 樹脂樣本在Kaiser寧海準測試中略呈陽性後，用DMF及 DCM(均為4x85 mLxl min.)洗滌肽基-樹脂，且隨後用DCM 中之10%乙酸酐（1x100 mLx30 min)加以處理。用 DCM(4x85 mLxl min)洗務肽基-樹脂並移除約1 mmol且在 真空中乾燥。 將二肽基-樹脂（2.50 g，1 _0 mmol)裝載於 ChemTech Model 90合成儀上之50 mL反應器中。使用以下循環移除 120897.doc -140- 200813095
Fmoc基團： 1 · DMF洗務 1 x25 mix 1 min ; 2. DMF 中之 20%略唆 1 x25 mix 5 min ·， 3. DMF 中之 20%哌啶 1x25 mix 15 min ; 4. DMF洗務 8x25 mix 1 min。 將 Ν-α-Fmoc-L-天冬胺酸 β-第三丁酯（1.2345 g，3.00 mmol)及一水合 HOBt(0.4599 g，3.00 mmol)於 DMF(5 ml)及 DIC(0.3829 g，3.03 mmol)中之溶液添加至已去保護之肽 基-樹脂中且渦漩混合物2小時得到呈陰性之Kaiser寧海準 測試結果。用DMF隨後DCM(4x25 mLxl min)洗滌肽-樹脂 並將其等分於Model 90合成儀之2個反應器中。隨後如下 文所述繼續進行合成。使用以下循環移除Fmoc基團： 1. DMF洗務 1 X 12 mix 1 min ; 2· DMF 中之 20%哌啶 1x12 mix 5 min ; 3 · DMF 中之 20%哌啶 1x12 mlxl 5 min ; 4. DMF洗務 8x 12 mix 1 min。 將N-a-Fmoc-N-/m-三苯甲基-L-組胺酸或Ν-α-Fmoc-O -第 三丁基-L-絲胺酸（0.9282 g，1.50 mmol)及一水合 HOBt(0.2296 g，1.50 mmol)於 DMF/DCM(1:1)(10 ml)及 DIC(0.1995 g，1.58 mmol)中之溶液添加至去保護之樹脂 中。90 min後，用 DMF 及 DCM(均為 4x12 mLxl min)洗滌 肽-樹脂，並得到呈陰性之Kaiser*寧海準測試結果。如所述 移除Fmoc基團後，如前一步驟所述偶合Ν-α-Fmoc-O-第三 丁基-L-蘇胺酸（0.6006 g，1.51 mmol)隨後移除Fmoc基團。 120897.doc • 141 - 200813095 藉由將胺基酸及一水合HOBt(0.1529 g，0.998 mmol)於1:1 之 DMF/DCM(10 ml)及 DIC(0.1260 g，0·998 mmol)中之溶液 與去保護之肽基-樹脂混合4小時來進行N-a-Fmoc-a-甲基-2-氟-L-苯丙胺酸（0.4167 g，0.993 mmol)之偶合。用DMF及 DCM(均為4x12 mLxl min)洗滌後，肽-樹脂之樣本得到呈 陰性之Kaiser寧海準測試結果。進行上述步驟1至4以移除 Fmoc基團。 移除Fmoc基團後，藉由將〇·5 M HOAt中之胺基酸於 DMF(10.0 mL，5.00 mmol)及 DIC(0.6360 g，5·04 mmol)中之 溶液與去保護之肽基-樹脂混合1 6小時來偶合Ν-α-Fmoc-O-第三丁基-L_蘇胺酸（1_9880 g，5.00 mmol)。DMF及 DCM(均 為4x12 mLxl min)洗滌後，使用1 ml TFA/三異丙基矽烷/ 水（96:2:2)裂解濕肽基-樹脂樣本1.5小時，且HPLC及MS分 析後表明僅存在極少量未偶合之肽。用DCM(lx 12 mLxl hr)中之10%乙酸酐處理肽-樹脂，且隨後用DCM(6x 12 mLxl min)洗滌。移除Fmoc基團後，依序使N-Fmoc-甘胺 酸（0.8941 g，3.01 mmol)及 Ν-α-Fmoc-L·麩胺酸 β-第三丁酯 (1.2765 g，3.00 mmol)與一水合 HOBt(0.4604 g，3.01 mmol) 及 DIC(0.3885 g，3.08 mmol)於 DMF/DCM(1:1)(20 ml)中以 溶液形式偶合2 hr。各偶合步驟後均獲得呈陰性之Kaiser 寧海準測試。將由此獲得的兩種肽基-樹脂各自轉移至配 有玻璃料過濾器板（frit)之單獨35 mL注射器中並於真空中 乾燥。接著用0.28 mmol各肽基-樹脂持續合成。移除Fmoc 基團後，將經額外8 mL DMF稀釋之0·5 M HOAt中之Ν-α- 120897.doc -142- 200813095
Fmoc-α-甲基-L-脯胺酸（0.3943 g，1.12 mmol)於 DMF(2.24 mL，1.12 mmol)及 DIC(0.1413 g，1.12 mmol)中之溶液分成 相等體積的兩份，將其各自添加至去保護之肽-樹脂中。 渦漩12 hr且用DMF及DCM(均為3x8 mLxl min.)洗滌後， 將0.02 mmol肽基-樹脂等分試樣置放於Advanced ChemTech Ω396合成儀上之3-4個反應孔中。如下移除 Fmoc基團： 1 · DMF 中之 20%派唆 1 X 1 ml><5 min ; 2. DMF 中之 20%旅咬 1 x 1 mix 1 5 min ; 3· NMP 洗滌 8x1 mlxl min。 將分成等體積2份之（+)-2-甲基-3-(1-三苯甲基-ΙΗ-咪唑-4-基）丙酸（79.9 mg, 0.202 mmol)、TFFH(0.0538 g，0.204 mmol)及 DIEA(0.0532 g，0.412 mmol)於 DMF(2 mL)中之溶 液添加至相關之去保護肽-樹脂中，混合12 hr後，用 NMP(2xl mLxl min)且隨後 DCM(3xl mLxl min.)加以洗 滌。使用TFA/TIS/水（96么2)裂解小樹脂樣本，隨後HPLC 及MS分析產物表明幾乎完全偶合。用DCM中之10%乙酸 酐（lxl mLxl hr)處理肽-樹脂，且隨後用DCM(6xl.5 mLxl min)洗條。 用丁卩人/118/水96:2:2(3><11111>3〇11^11)處理肽-樹脂且收集 濾液並在真空離心機中濃縮至接近乾燥。藉由添加二異丙 基醚（5 mL)使粗肽沈澱，用二異丙基鱗洗條並乾燥。藉由 使用YMC ODS-A(10 μιη，250x20 mm)管柱進行之如本文所 述之製備型HPLC純化粗肽。所使用之梯度為A中之25%至 120897.doc -143 - 200813095 5 5% B歷經60 min。溶劑A :水中之0.1% TFA ;溶劑B : AcCN中之0.1% TFA ;流速為15 mL/min。彙集含有純產物 之溶離份並凍乾。獲得純度為95%之產物之SEQ ID NO: 169(或170)的化合物；滯留時間：22·0 min ;(管柱： YMC ODS-AQ 3 μπι(4·6χ150 mm);梯度：A中之15-45% B 以 1 mL/min歷時 60 min)。ES-MS 分析：（Μ+Η)+=1590·0, (Μ+2Η)+/2 = 795·9 ° 獲得純度為96%之產物之SEQ ID ΝΟ:167(或168)的化合 物（72 mg，9%回收率）；滯留時間：22·7 min(管柱：YMC ODS-AQ 3 μπι(4.6χ150 mm);梯度：A中之 15-45% B以 1 mL/min 歷時 60 min)。ES-MS 分析：（Μ+Η)+=1539·8, (Μ+2Η)+/2 = 770·9 〇 實例30 合成SEQ ID NO: 157之化合物
將 Fmoc-His(Trt)-OH(0.1278 g，0.206 mmol)、TFFH (0.0542 g，0.205 mmol)及 DIEA(0.0533 g，0.412 mmol)於 DMF(1 mL)中之溶液添加至如實例29中所述製備之相關去 保護肽-樹月旨中。使用〇·5 M HOAt *iFmoc-His(Trt)-ΟΗ(0·1257 g，0.20 mmol)及 DIC(0.0262 g，0.21 mmol)於 DMF(0.40 mL)及DMF(0.40 mL)中之溶液重複偶合。如下 使肽-樹脂去保護： 1 · DMF 中之 20%旅咬 1 X 1 mix5 min ; 2. DMF 中之20%哌啶 lxl mix 15 min ; 3. DMF洗務 8x1 mlxl min ; 120897.doc -144- 200813095 4· DCM 洗條 3x1 mlxl min。 將碳酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基曱酯（〇·〇241 g，0_14 mmol)溶解於DCM(0.5 mL)中，將其添加至去保護之樹脂 中並渦漩混合物14 hr。用DCM(4xl mlxl min)洗滌後，樹 脂樣本得到呈陰性之Kaiser寧海準測試結果。如實例29中 所述將粗產物自樹脂中裂解並沈澱，得到40 mg產物。藉 由如實例29中所述之製備型HPLC純化此產物，但所使用 之梯度為A中之20%至55% B歷經60 min。彙集含有純產物 之溶離份並將其凍乾，得到12·0 mg(30%回收率）純度為 97%之產物；滯留時間：33.3 min(管柱：YMC ODS-AQ 3 μιη(4·6χ150 mm);梯度：A中之 15-55% B以 1 mL/min歷時 60 min) 。 ES-MS 分 析 ： （Μ+Η)+=1648·8, (Μ+2Η)+/2 = 824·9。 實例31 合成SEQ ID ΝΟ:175及176之化合物 將0.5 M HOAt中之2-甲氧基-3-(1-三苯甲基-1Η-咪唑-4-基）丙酸（0.0417 g，0.101 mmol)、HATU(0.0390 g，0.103 mmol)及 DIEA(0.0284 g，0.220 mmol)於 DMF(0.202 mL， 0.101 mmol)及DMF(0.2 mL)中之溶液添加至如實例29中所 述製備之Fmoc去保護之Xaa2-Xaau肽基·樹脂（0.010 mmol) 中，其中Xaa8=His。渦漩14 hr後，用DMF及DCM(均為3x1 mLxl min)洗滌肽-樹脂，且隨後用DCM中之10%乙酸酐 (lxlmL><30 min)處理，隨後 DCM(6xlmLxl min)洗滌。如 實例29中所述，使用TFA/TIS/水（96:2:2)將肽產物自樹脂 120897.doc -145- 200813095 中釋放並使其去保護。 藉由使用A中梯度為30%至40%之B歷經60 min進行之如 本文所述之製備型HPLC純化粗肽。溶劑A :水/AcCN(95:5) 中之10 mM磷酸鈉pH 7 ;溶劑B :水/AcCN(20:80)中之1 mM 石粦酸鈉 pH 7 ;管柱：Phenomenex Luna C18(2)(5 μπι， 25〇x21 ·2 mm);流速：15 mL/min。彙集含有早期溶離非 對映異構體（異構體A)之溶離份，並將其濃縮至約5 mL。 藉由使用A中梯度為0%至100%之B於Phenomenex Luna C18(2)管柱（5 μπι，100x21.2 mm)中歷經20 min進行之溶離 使此溶液脫鹽。溶劑A :水中之0· 1 % TFA ;溶劑B : AcCN 中之0.1% TFA;流速為15 mL/min。彙集含有產物之溶離 份並將其凍乾，得到1.2 mg純度為93%之SEQ ID NO: 175(或176)的化合物；滯留時間：40.4 min ;管柱： YMC ODS-AQ 3 μιη(4·6χ150 mm);梯度·· A中之 15-45% B 以 1 mL/min 歷時 60 min。ES-MS分析：（Μ+Η)+=1605·6, (Μ+2Η)+/2 = 803·5。 如上文所述，由第一個製備型HPLC步驟自含有較晚溶 離之非對映異構體的溶離份中獲得SEQ ID Νο:176(或175) 之化合物。產量：3.0 mg純度為96%之產物；在與上述相 同之分析型HPLC條件下，滯留時間：40.7 min。ES-MS分 析：（M+H)+=1605.7，（M+2H)+/2=803.7。 實例32 合成2-甲氧基-3-(1•三苯甲基-1H-咪唑-4-基）丙酸 2_甲氧基-2-((1-三苯甲基-1丑-咪唑-4-基）曱基）丙二酸二 120897.doc •146- 200813095 甲酯
流程30
將4-(氯甲基）_：μ三苯曱基^汉_咪唑（〇 3655 g，ι·〇2 mm〇1) 及 2 -甲氧基丙一酸二甲酯（01822 g，1.25 mmol)於 AcCN(l〇 mL)中之溶液迅速添加至經攪拌之新粉碎之氫氧化鉀 (0.1760 g，3.14 mmol)及四丁基溴化銨（0·0521 g，〇」6 mmol) 於AcCN(2 mL)中之漿液中。16 hr後，用乙酸乙酯（20 mL) 稀釋反應並使其濾過矽藻土墊，用EtOAc(2x5 mL)加以洗 滌。用水（2xl〇 mL)、飽和NaCl(lxlO mL)洗滌已合併之有 機層且用MgS〇4乾燥。藉由使用CHCl3/EtOAc(9:l)作為溶 離劑進行之矽膠60(42 g，0.040至0.063 mm粒徑）2·5χ30 cm
管柱層析並收集72x25 mL溶離份來純化移除溶劑時獲得的 油狀殘餘物（0.41 g)。彙集溶離份28至72並乾燥得到〇.1628 g(33%)純度為89.5%之2-曱氧基-2-((1-三苯甲基-1H-咪唑_ 4_基）曱基）丙二酸二曱酯；滯留時間：7.52 min ;管柱： YMC ODS-A (3 μπι，5〇x4.6 mm);梯度：A中之 1〇〇/0 至 100% B 以 1.25 mL/min歷時 10 min。溶劑 A :水中之 〇.1〇/。 TFA ;溶劑 B : AcCN 中之 0.1% TFA。LC/MS : ESI (Μ+Η)+=485·3。W-NMR (CDC13, 500 MHz): δ 3.39 (s，3H)， 3.49 (s，2H)，3.69 (s5 6H)，6.70 (s，1H)，6·99-7.03 (m，6H)， 120897.doc •147- 200813095 7.30-7.35 (m，9H)，7·92 (s，1H)。 2-甲氧基-3-(1-三苯甲基-iη-咪唑-4-基）丙酸甲酯 流程31
將2-甲氧基_2_((1•三苯曱基-1Η-口米嗤-4-基）甲基）丙二酸
二甲酉旨（0.1520g，0.31 mmol)及氯化鈉（0.0398 g，0.68 mmol) 於NMP(2 mL)及水（〇·3 mL)中之溶液加熱至20TC歷時1 hr。冷卻至室溫後，添加乙酸乙酯（丨5爪乙）且用水（2x10 mL)、飽和氯化鈉（ΐχ10 mL)洗滌有機層且隨後以^以〇4乾 燥。移除溶劑得到0.1030 g粗產物。藉由在矽膠60(n g， 0-040 至 0.063 mm 之粒徑）管柱（2.5x10 cm)上使用 CHC13/ MeOH(98:2)作為溶離劑進行之層析且收集12 mL溶離份來 純化此粗產物。彙集溶離份2至1〇並乾燥，且如上所述再 純化殘餘物，但使用5 g矽膠且溶離劑為 CHCl3/MeOH(99:l)。彙集溶離份1〇至16並乾燥後得到 0.0592 g(45%)純度為94.5%之2_甲氧基- 3-(1-三苯甲基-1H_
味唆-4-基）丙酸曱酯；滯留時間：7·29 min;管柱：yMC ODS-A (3 μιη，50x4.6 mm);梯度：a中之 1〇〇/0 至 1〇〇〇/0 B 以 1.25 mL/min歷時 10 min。溶劑 A :水中之 〇· i〇/。TFA ;溶劑 B : AcCN 中之 〇·1〇/0 TFA。LC/MS : ESI (Μ+Η)+=427·1。 2 -甲氧基-3-(1-二苯甲基-1Η-喃嗤·4-基）丙酸 120897.doc •148- 200813095 流程32
向2-甲氧基-3-(1-三笨甲基]H_咪唑基）丙酸甲酯 (0.0592 g，0.139 mmol)於四氫呋喃（1 mL)、甲醇（1 mL)及 水（0.5 mL)中之溶液中添加2 N NaOH(0.278 mL)且攪拌反 ( ' 應混合物i·75 hr。移除有機溶劑且添加1 N KHS〇4(5 mL) 及乙酸乙酯（10 mL)。用水（2x5 mL)隨後飽和氣化鈉（lx5 mL)洗滌有機相且用MgS04乾燥。用DCM(2xlO mL)再萃取 已合併之水層且以MgSCU乾燥。移除溶劑並真空乾燥後得 到0.05 52 g(96%)純度為92.6%之2-甲氧基-3-(1 -三苯甲基-1H_咪唑-4-基）丙酸；滯留時間：6.80 min ;管柱： Phenomenex Luna C18(2)(5 μπι，5〇χ4·6 mm);梯度：Α 中 之10%至1 00% B以1.25 mL/min歷時1 〇 min。溶劑A :水中 v 之 〇·1% TFA ;溶劑 B : AcCN 中之 0.1% TFA。LC/MS : ESI (M+H)+=413•卜1H-NMR (CDC13，500 MHz): δ 3.10-3.18 (m，1Η)，3.31-3.38 (m，1Η)，3·45 (s，3Η)，4.26-4.31 (m (1Η)， 6.86 (s，1H)，7.04-7.11 (m，6H)，7.37-7.47 (m，9H)，8.16 (s， 1H) 〇 實例33 合成SEQ ID NO:164之化合物 流程33 120897.doc -149- 200813095
向 SEQ ID NO:158之化合物（0.0211 g，0.0132 莫耳）於 AcCN(0.610 mL)及碘化鈉水溶液（3.93 mg/mL，0.610 mL， 0·016 mmol)中之溶液中添加氯胺 T( 10.05 mg/mL，0.540 mL， 0.016莫耳）於水/AcCN(l :1)中之溶液。渦漩所得溶液35 min並過濾，且藉由如本文所述之製備型HPLC純化產物。 管柱：Phenomenex Luna C18(2)(5 μιη，25〇x21.2 mm);梯 度：A中之15°/〇至75% B歷經60 min。溶劑A :水中之0.1% TFA ;溶劑 B : AcCN 中之 0.1% TFA ;流速為 15 mL/min。 彙集含有純產物之溶離份並將其凍乾，得到11.6 mg純度 為99%之碘化肽；滯留時間：30.41 min ;管柱：YMC ODS-AQ(3 μπι，4.6x15 0 mm);梯度：A中之 15-75% B以 1 mL/min 歷時 60 min。溶劑 A:水/AcCN(95:5)中之 10 mM 構 酸鈉pH 7·5 ;溶劑B :水/AcCN(20:80)中之1 mM磷酸鈉pH 7·5 ; ES-MS分析：（Μ+Η)+=1725·0,（Μ+2Η)+/2 = 863·0 〇 120897.doc -150- 200813095 實例34 示範性肽描述於表3C中。
表3C |SEQ ID No. Xaa 1 Xaa 2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa 10 XaairNH2 1 Η Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2'-Me) 4-(2’-吡啶基)苯丙 胺酸-nh2 2 Η Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(3、5’-二-Me) 4-(2^比啶基)苯丙 胺酸-nh2 3 Η Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2，-OBu) 4-(2’-吡啶基)苯丙 胺酸-nh2 4 Η Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2 丨-Me) 4-(4，-吡啶基)苯丙 胺酸-NH2 5 Η Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2，-Cl) 4·(4'_吼啶基)苯丙 胺酸-νη2 6 Η Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2’-曱氧基-5’-異丙基） 4·(4·-吼啶基)苯丙 胺酸-ΝΗ2 7 Η Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D 4-(2’·乙基苯基)-3-吡啶基丙胺酸 Bip(2'-Me)-NH2 8 Η Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氣） T s D 4-[(2’-乙基-4’-曱 氧基)苯基]-3-吼 啶基丙胺酸 Bip(2’_Me)-NH2 9 Η Aib E G T L-a-Me-Phe(2·氟） T s D Bip(2,-Et-4'-OMe) 4-(2’-曱基苯基)-3-吡啶基丙胺酸- nh2 10 Η Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6·二 氟） T s D Bip(2'-Et-4’-OMe) 4-(2'-曱基苯基)-3-吡啶基丙胺酸- nh2 11 脫 νη2- His Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2'-Et-4,-OMe) 4-(2’-曱基苯基)-3-吡啶基丙胺酸- nh2 12 脫 νη2- His Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(2’-曱基苯基)-3-吡啶基丙胺酸- nh2 13 Η Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D 4-(2^乙基苯基)_ 3-吡啶基丙胺酸 4-(2’-曱基苯基)-3-σ比咬基丙胺酸· νη2 14 Η Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D 4-(2^乙基苯基)· 3-吡啶基丙胺酸 4-(2’-曱基苯基)-3-吡啶基丙胺酸· νη2 15 Η Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2'-Et-4'-OMe) 4-[3-(4-曱基)吡啶 基)]苯丙胺酸· νη2 16 Η Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D Bip(2'-Et-4,-OMe) 4-[3-(4-甲基)吨啶 基)]苯丙胺酸- νη2 17 Η Aib E G T L-a-Me-Phe(2·氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4·(3-噠嗪基)苯丙 胺酸-νη2 -151 - 120897.doc 200813095 SEQ ID No. Xaa 1 Xaa 2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa 10 XaairNH2 18 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D Bip(2'-Et-4,-OMe) 4-(3-嗅°秦基)苯丙 胺酸-nh2 19 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2'-Et-4'-OMe) 4-[3-(4-Me，6-OMe)吡啶基)] 苯丙胺酸-NH2 20 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D 4-[3-(4·-曱基)吡 啶基)]苯丙胺酸 Bip(2，-Me)-NH2 21 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D 4-[(4’-Me-6’-OMe)-3-°比啶基] 苯丙胺酸 Bip(2，-Me)-NH2 22 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D 4-[(4,-Me-6,-OMe)-3-吡啶基] 苯丙胺酸 Bip(2'-Me)-NH2 23 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-[2(lH)吼啶酮 基]苯丙胺酸·νη2 24 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4'-OMe) Bip(8-喹啉)-ΝΗ2 25 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2，-Et-4’-OMe) Bip(3-喹啉)-ΝΗ2 26 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2，-Et-4’-OMe) Bip(6-喹啉)-ΝΗ2 27 H Aib E G T L-a-Me- Phe(2-^) T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) Bip(5-喹啉)-ΝΗ2 28 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(3-(6-OMe)0tL 口定 基)苯丙胺酸·νη2 29 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2’-Et-4，-OMe) 4-(3-(2-曱氧基)口比 啶基)苯丙胺酸- nh2 30 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,>OMe) 4-(3·-α比啶基)苯丙 胺酸~ΝΗ2 31 脫 nh2- His Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D 4-(2^乙基苯基)· 3-吡啶基丙胺酸 4-(2’-曱基苯基)-3·吡啶基丙胺酸- νη2 32 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D 4-(5·喹啉)苯丙胺 酸 Bip(2'-Me)-NH2 33 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D 4-[3-(2，-OMe) 口比 唆基]苯丙胺酸 Bip(2’-Me)-NH2 34 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D 4-(6-喹啉)苯丙胺 酸 Bip(2'-Me)-NH2 35 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D 4-(4’-吡啶基)苯丙 胺酸 Bip(2’-Me)-NH2 36 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-敗） T s D 4-[4’-(3·，5·-二曱基 異噁唑)]苯丙胺 酸 Bip(2，-Me)-NH2 37 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2'-Et-4'-OMe) 4-(2-三氟甲基苯 基)-3-吡啶基丙胺 酸-nh2 38 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2_ 氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(2-曱基-5_氟苯 基)-3-σ比咬基丙胺 酸-νη2 -152- 120897.doc 200813095 SEQ ID No. Xaa 1 Xaa 2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa 10 XaairNH2 39 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2'-Et-4,-OMe) 4-(4-甲烷磺醯基 苯基)-3-°比啶基丙 胺酸-nh2 40 H Aib E G T L-a-Me-Phe T s D Bip(2’-Et-4'-OMe) 4-(2’-曱基苯基)-3-°比咬基丙胺酸· nh2 41 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2，-Et) 4-(2’_甲基苯基)-3-0比咬基丙胺酸- nh2 42 H Aib E G Nle L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2，-Et-4，-OMe) 4-(2^曱基苯基)-3-吡啶基丙胺酸- nh2 43 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2'-Et-4'-OMe) 4-[(2，-Cl，4，-CF3)-3’-吡啶基]苯丙胺 酸·νη2 44 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D Bip(2'-Et-4'-OMe) 4-[3,-(2,-CN-6,-Me)吡啶基]苯丙 胺酸-nh2 45 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D Bip(2，-Cl) 4-(2’-曱基苯基)-3-吡啶基丙胺酸- nh2 46 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6·二 氟） T s D Bip(2，，4，-二-OMe) 4-(2^甲基苯基)-3·吡啶基丙胺酸· nh2 47 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D 4-(3’-°比啶基)苯丙 胺酸 4-(2’-曱基苯基)· 3-吡啶基丙胺酸- nh2 48 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D 4-(4’-°比啶基)苯丙 胺酸 4-(2’-曱基苯基)-3-吡啶基丙胺酸- nh2 49 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D Bip(2'-Me-3'-F) 4·(2’·曱基苯基)-3-吡啶基丙胺酸- νη2 50 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2'-F) 4-(2’-曱基苯基)-3-0比咬基丙胺酸- νη2 51 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6_ 二 氟） T s D 4-(3^(2^01-6^ CF3)吡啶基]苯丙 胺酸 4-(2·-甲基苯基)-3-吡啶基丙胺酸- νη2 52 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D 4-(2'-乙基苯基)- 3-吡啶基丙胺酸 Bip(2'-Cl)-NH2 53 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6·二 氟） T s D 4-(2’-乙基苯基)-3-吡啶基丙胺酸 BipP’-CW-F)- nh2 54 H Aib E G Nva L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4'-OMe) 4-(2’·甲基苯基)-3-σ比咬基丙胺酸- νη2 55 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D 4-(2*-乙基苯基)-3-吼咬基丙胺酸 Bip(3，，5'-二-Me)- nh2 56 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D 4-(2’-乙基苯基)-3-吡啶基丙胺酸 4-(2·，3，-噠嗪基)苯 丙胺酸-nh2 -153 - 120897.doc 200813095 SEQ ID No. Xaa 1 Xaa 2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa 10 XaairNH2 57 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2'-Et-4,-OMe) 4-(2^乙基苯基)-3-吡啶基丙胺酸- nh2 58 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D 4-(2'-乙基苯基)· 3-0比咬基丙胺酸 4^3^(2^01-6^ CF3)吡啶基]苯丙 胺酸-nh2 59 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D 4-(2’-乙基苯基)_ 3-吡啶基丙胺酸 4-[3，-(2，-CN-6，-Me)n比咬基]苯丙 胺酸-nh2 60 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D 4-[3，-(4，-Me 户比啶 基]苯丙胺酸 Bip(2'-Cl)-NH2 61 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D 4-[3，-(4，-1^)。比啶 基]苯丙胺酸 Bip(3，-Cl-4，-F)- nh2 62 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D 4-[3，-(4，-Me 户比啶 基]苯丙胺酸 Bip(3’，5’-二-Me)- nh2 63 H Aib E G T L>a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D 4-[3’-(4f，Me)吡啶 基]苯丙胺酸 Bip(2，-Me-4 丨-OMe)-NH2 64 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6·二 氟） T s D 4-[3，-(4’-1^)。比啶 基]苯丙胺酸 Bip(2，-Me-3，-F)- nh2 65 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D 4-[3’-(4'-Me”比咬 基]苯丙胺酸 Bip(2'-F)-NH2 66 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D 4-[(4，-Me-6，-OMe)-3』比啶基] 苯丙胺酸 Bip(2，-Cl)-NH2 67 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6·二 氟） T s D 4-[(4，-Me-6，-OMe)-3-吡啶基] 苯丙胺酸 Bip(3，，4，·二-OMe)-NH2 68 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D 4-[(4，-Me-6，-OMe)-3-吡啶基] 苯丙胺酸 4-(2’-吼啶基)苯丙 胺酸-nh2 69 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D 4-[(4，-Me_6，-OMe)-3-吡啶基] 苯丙胺酸 Bip(2,-Me-4,- OMe)-NH2 70 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D 4-[(4，-Me-6’· OMe)-3-吡啶基] 苯丙胺酸 4-(2’-甲基苯基)-3-°比唆基丙胺酸- nh2 71 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D Bip(2'-Et) 4-(2^乙基苯基)-3·吡啶基丙胺酸- nh2 72 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D 4-[3’-(4’-甲基)吡 啶基]苯丙胺酸 4<2’-曱基苯基)-3-吡啶基丙胺酸· nh2 73 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D Bip(2’-Et-4’-OMe) 4-(4'-吼啶基)-苯 丙胺酸-nh2 74 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2，-Et-4，-OMe) 4-(3’-喹啉)苯丙胺 酸-nh2 -154- 120897.doc 200813095
SEQ ID No. Xaa 1 Xaa 2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa 10 Xaan-NH2 1 75 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(3’-(2’-甲氧基） 吡啶基)苯丙胺 酸-nh2 76 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4'-OMe) 4-苯基-3·η比啶基 丙胺酸-νη2 77 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2’-Et-4’-OMe) 4-(3’，5’-二甲基苯 基)-3-°比咬基丙胺 酸-νη2 78 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2，-Et-4，-OMe) 4-[(3·-氣-4’-氟)苯 基]-3-σ比咬基丙胺 酸-νη2 79 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2，-Et_4，-OMe) 4-(3*，4·-二甲氧基） 苯基]-3-e比咬基丙 胺酸-nh2 80 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2，-Et-4，-OMe) 4-[(2’-乙基-4'-曱 氧基)苯基)]-3-吼 啶基丙胺酸·νη2 81 L-β-口米 唑-乳 醯基 Aib E G T L-a-Me- Phe(2-^) T s D Bip(2’-Et-4'-OMe) 4-(2’-曱基苯基)-3-吼啶基丙胺酸- νη2 82 Η Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2'-Et-4'-OMe) 2-(5-鄰曱苯基)噻 吩基丙胺酸-nh2 83 Η Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4'-OMe) 2-[(5-(3’-曱氧基） 苯基]噻吩基丙胺 酸-nh2 84 Η Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 2-[(5-(3，，5_-二-曱 基)苯基]噻吩基 丙胺酸-nh2 85 Η Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2'-Et-4'-OMe) 2-[(5-(3，-Cl，5，-F) 苯基]11塞吩基丙胺 酸·νη2 86 Η Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4_(3’_異丙氧基苯 基)·3·σ比咬基丙胺 酸·νη2 87 Η Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(2’-甲基，5*-氟） 苯基)-3-°比咬基丙 胺酸_νη2 88 Η Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4'-OMe) 4-(2’-異丙氧基苯 基)-3-吡啶基丙胺 酸-nh2 89 Η Aib E G T L-a-Me-Phe(2,氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 3-(4-Br)°比啶基丙 胺酸-nh2 90 Η Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2’-Et-4’-OMe) 4-(4’-甲氧基苯 基)-3-°比咬基丙胺 酸-nh2 91 Η Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(2’-曱基，4’-氟） 苯基)-3-吼啶基丙 胺酸·νη2 92 Η Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2，-Et) 4-(2’-曱基苯基)· 3-吡啶基丙胺酸- νη2 120897.doc -155 - 200813095 SEQ ID No. Xaa 1 Xaa 2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa 10 XaairNH2 1 93 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2，-Et-4，-OMe)- 4-(2’-三氟曱氧基 苯基)-3-°比咬基丙 胺酸-nh2 94 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2，-Et-4，-OMe) 4-(4’-三氟曱氧基 苯基)-3-咣啶基丙 胺酸-nh2 95 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2，-Et-4，-OMe) 3·吡啶基丙胺酸- nh2 96 H Aib E G T L-a-Me- Phe(2-^) T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(2·-曱基，4·-氣） 苯基)-3-abh咬基丙 胺酸-NH2 97 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2'-Me-4'- OMe) 4-(2’-曱基苯基)-3-吡啶基丙胺酸- nh2 98 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2·氟） T s D Bip(2,-Et-4,- OMe) 4-(3三氟4曱基苯 基)-3-。比咬基丙胺 酸-nh2 99 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(4’-氟苯基)-3- 吡啶基丙胺酸· nh2 100 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(2’-三氟曱基苯 基)-3-吡啶基丙胺 酸-nh2 101 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2，-Et-4，-OMe) 4-(2’-氣苯基)-3-吡啶基丙胺酸- nh2 102 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(3’-氣苯基)-3- 吡啶基丙胺酸- nh2 103 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(心異丙基苯 基)-3-°比咬基丙胺 酸-nh2 104 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2'-Et-4f-OMe) 4-(3^-二甲基異 噁唑-4’-基)-3-吡 咬基丙胺酸-NH2 105 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2·氟） T s D Bip(2，-Et-4’-OMe) 4-[(2·-甲基-4’·曱 氧基)苯基)-3-吼 咬基丙胺酸·ΝΗ2 106 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2'-Et-4,-OMe) 4-(4·-三氟曱基苯 基)-3·ρ比咬基丙胺 酸-νη2 107 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2，-Et-4，-OMe) 4-(4’-氣苯基)-3- 吡啶基丙胺酸- nh2 108 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2，-Et-4’-OMe) 4-(4’·η 比啶基)-3-0比咬基丙胺酸- nh2 109 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(3’-曱氧基苯 基)-3-吡啶基丙胺 酸 _nh2 110 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4'-OMe) 4-(6·-曱氧基吡啶-3’-基)-3-°比咬基丙 胺酸-νη2 -156- 120897.doc 200813095 SEQ ID No. Xaa 1 Xaa 2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa 10 XaairNH2 Ill H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2'-Et-4'-OMe) 4-(2'-異丙基苯 基)-3-σ比咬基丙胺 酸-νη2 112 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2·氟） T s D Bip(2，-Et-4，_OMe) 4-(2’-曱氧基苯 基)-3-°比咬基丙胺 酸-νη2 113 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2’-Et-4’-OMe) 4-[(3，，5，·二氟-2，-曱氧基)苯基]-3- 吡啶基丙胺酸- νη2 114 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2，-Et-4，-OMe) 4-(3’-曱基苯基)-3-吡啶基丙胺酸- νη2 115 H Aib E G 丁 L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(2’-氟苯基)-3_ 吡啶基丙胺酸· νη2 116 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(2’-氟苯基)-3· 吡啶基丙胺酸- νη2 117 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(3’-曱氧基苯 基)-3-D比咬基丙胺 酸-nh2 118 H (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氣） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(2’-甲基苯基)-3-吡啶基丙胺酸- nh2 119 H N- Me- (D)- Ala E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2，-Et-4，-OMe) 4-(2’_曱基苯基)-3-0比咬基丙胺酸- nh2 120 H (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T H D Bip(2，-Et_4，-OMe) 4-(2’-曱基苯基)-3-吡啶基丙胺酸- nh2 121 H (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2，-Et-4，-OMe) ⑸-4·(2’-甲基苯 基)-a-Me-3-° 比咬 基丙胺酸-nh2 122 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2’-Et-4’-OMe) (S)-4-(2’-甲基苯 基)-a-Me-3-a 比咬 基丙胺酸-nh2 123 H (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D Bip(2’-Et-4’-OMe) 4-(2’-甲基苯基)-3-吡啶基丙胺酸- nh2 124 H (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T H D Bip(2，-Et-4，-OMe) 4-(2’-曱基苯基)-3·σ比咬基丙胺酸- νη2 125 H (S)_ a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(3’-曱氧基苯 基)-3-吡啶基丙胺 酸-nh2 -157- 120897.doc 200813095 SEQ ID No. Xaa Xaa 2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa 10 XaallW~1 126 H (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D Bip(2，-Et-4，-OMe) 4-(3’-甲氧基苯 基基丙胺 酸-νη2 127 H (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2'-Et-4'-OMe) 4-(2’-氟苯基)-3- 吡啶基丙胺酸- nh2 128 H (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(2’-氟苯基)-3-0比咬基丙胺酸- nh2 129 H N- Me- (L)_ Ala E G T L-a-Me-Phe(2·氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(2’-曱基苯基)- 3-吡啶基丙胺酸- nh2 130 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(2’-甲基苯基)-3,5-嘧啶基丙胺 酸·νη2 131 H (s)- a- Me- Pro D G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2，-Et-4，-OMe) 4-(2’·曱基苯基)-3-吡啶基丙胺酸- νη2 132 H (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2，-Et) 4-(2’·乙基苯基)-3-吡啶基丙胺酸- νη2 133 脫 nh2- His (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2·氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(2’-甲基苯基)-3-吡啶基丙胺酸- νη2 134 脫 nh2- His (S)- a- Me- Pro E、 G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D Bip(2'-Et-4'-OMe) 4-(2^曱基苯基)-3-吡啶基丙胺酸· nh2 135 脫 nh2- His (S)· a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2，-Et-4，-OMe) 4-(2·-氟苯基)-3- 吡啶基丙胺酸- nh2 136 脫 NHr His (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2，-Et-4，-OMe) 4-(3’-甲氧基苯 基咬基丙胺 酸-nh2 137 (R)-Imp Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(2’-曱基苯基)-3-吡啶基丙胺酸- nh2 138 (S)-Imp Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(2’-甲基苯基)· 3-吡啶基丙胺酸- nh2 139 ch3o- CO-His (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(2’-甲基苯基)-3-吡啶基丙胺酸- nh2 140 ch3o- CO-His (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D Bip(2，-Et-4’-OMe) 4-(2’-甲基苯基)-3-吡啶基丙胺酸- nh2 -158 - 120897.doc 200813095 SEQ ID No. Xaa 1 Xaa 2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa 10 XaairNH2 141 ch3o- CO-His N- Me- (D)- Ala E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(2’-曱基苯基)- 3-吡啶基丙胺酸- nh2 142 ch3o- CO-His N- Me- (D)- Ala E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(2^甲基苯基)-3-吡啶基丙胺酸- nh2 143 CH3 S02- His (S)- a_ Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2'-Et-4'-OMe) 4-(2’-曱基苯基)- 3-吡啶基丙胺酸- nh2 144 ch3 S02- His (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(2’-曱基苯基)- 3-吡啶基丙胺酸- nh2 145 L-乳醯 基-His (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2'-Et-4，-OMe) 4-(2'-曱基苯基)- 3-吡啶基丙胺酸- nh2 146 L·乳醯 基-His (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2,6-二 氟） T s D Bip(2，-Et-4，-OMe) 4-(2’-曱基苯基)-3-吡啶基丙胺酸- nh2 147 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4·(3'，5’·二-Me)苯 基-3-σ比咬基丙胺 酸-νη2 148 H Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T H D Bip(2,-Et-4,-OMe) 4-(2^曱基苯基)-3-吡啶基丙胺酸- nh2 149 H D- Ala E G T L-a-Me- Phe(2-l) T s D Bip(2'-Et-4’-OMe) 4-(2'-曱基苯基)-3-吡啶基丙胺酸- nh2 150 H Aib H G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2，-Et-4，-OMe) 4-(2’·曱基苯基)_ 3-吡啶基丙胺酸- nh2 151 L-β-口米 唑-乳 醯基 (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T H D Bip(2’-Et-4，-0- Me) 4-(2’-曱基苯基)-3-°比咬基丙胺酸- nh2 152 L-β-咪 唑-乳 醯基 (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2,-Et-4,-0- Me) 4-(2’-曱基苯基)-3-吡啶基丙胺酸- nh2 153 L-β-口米 唑·乳 醯基 (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T H D Bip(2'-Et-4,-OH) 4-(2’-曱基苯基)-3-吡啶基丙胺酸- nh2 154 L-β-咪 唑-乳 醯基 (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2’-Et-4'-OH) 4-(2’-甲基苯基)· 3-吡啶基丙胺酸- nh2 155 L-β-味 唑-乳 醯基 N- Me- D- Ala E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T H D Bip(2,-Et-4,-0- Me) 4-(2’-曱基苯基)-3-σ比咬基丙胺酸- νη2 -159- 120897.doc 200813095 SEQ ID No. Xaa 1 Xaa 2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 T Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa 10 XaairNH2 156 L-β-咪 唑-乳 醯基 N- Me- D- Ala E G L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2'-Et-4'-0- Me) 4-(2’_曱基苯基)-3-吡啶基丙胺酸- nh2 157 ch3o- CO-His (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T H D Bip(2'-Et-4'-OH) 4-(2’-曱基苯基)-3-吡啶基丙胺酸- nh2 158 ch3o- CO-His (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2’-Et-4’-OH) 4-(2’-曱基苯基)- 3-吡啶基丙胺酸- nh2 159 ch3o- CO-His N- Me- D- Ala E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T H D Bip(2，-Et-4，-OH) 4-(2^曱基苯基)_ 3-吡啶基丙胺酸- nh2 160 CH3〇- CO-His N- Me- D- Ala E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2’-Et-4’-OH) 4-(2’-曱基苯基)· 3-吡啶基丙胺酸- nh2 161 ch3o- CO-His Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氣） T H D Bip(2，-Et-4，-OH) 4-(2’·曱基苯基)- 3-吡啶基丙胺酸- nh2 162 ch3o- CO-His Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氣） T S D Bip(2,-Et-4,-OH) 4·(2’-曱基苯基)-3-吡啶基丙胺酸- νη2 163 唑-乳 醯基 N- Me- D- Ala E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T H D Bip(2’-Et-4’-OH) 4-(2^曱基苯基)-3-吡啶基丙胺酸- nh2 164 ch3o_ CO-His (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T S D Bip(2'-Et-4，-OH- 5，-I) 4-(2’-曱基苯基)-3-吡啶基丙胺酸- nh2 165 脫 nh2- His (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-敗） T S D Bip(2’-Et-4’-OH) 4-(2’-曱基苯基)- 3-吡啶基丙胺酸- nh2 166 脫 nh2- His (s)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2·氟） T H D Bip(2’-Et-4，_OH) 4-0-曱基苯基)-3-吡啶基丙胺酸- νη2 167 (R)-Imp (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T S D Bip(2,-Et-4,-OH) 4-(2’-曱基苯基)-3-吡啶基丙胺酸- νη2 168 (S)-Imp (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2,氟） T s D Bip(2,-Et-4,-OH) 4-(2’-曱基苯基)-3-吡啶基丙胺酸· νη2 169 (R)-Imp (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T H D Bip(2,-Et-4'-OH) 4·(2’_曱基苯基)-3-吡啶基丙胺酸- νη2 170 (S)-Imp (S)- a- Me- Pro E G T . L-a-Me-Phe(2-氟） T H D Bip(2,-Et-4,-OH) 4·(2’_曱基苯基)-3-吡啶基丙胺酸- νη2 -160- 120897.doc 200813095 / \ SEQ ID No. Xaa 1 Xaa 2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa 10 XaairNH2 171 ⑻- IMeOp (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T H D Bip(2，-Et-4，_OMe) 4-(2’-曱基苯基)- 3-吡啶基丙胺酸- nh2 172 (s)- IMeOp (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T H D Bip(2，-Et-4，-OMe) 4-(2’-甲基苯基)-3-0tb咬基丙胺酸- nh2 173 (R)_ IMeOp (S)- a- Me_ Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T S D Bip(2，-Et-4，-OH) 4-(2^曱基苯基)-3-吡啶基丙胺酸- nh2 174 (S> IMeOp ⑸· a· Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T S D Bip(2'-Et-4’-OH) 4-(2’-曱基苯基)-3-吡啶基丙胺酸· nh2 175 (R)- IMeOp (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T H D Bip(2'-Et-4,-OH) 4-(2’-曱基苯基)· 3-吡啶基丙胺酸· nh2 176 (s)- IMeOp (S)- a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T H D Bip(2’-Et-4’-OH) 4-(2’-曱基苯基)-3-吡啶基丙胺酸- nh2 177 T S D Bip(2'-Et-4-OH) 4-(2’-曱基苯基)-3-吡啶基丙胺酸- nh2 178 (S)- a- Me- Pro T s D Bip(2’-Et-4-OH) 4-(2’-曱基苯基)-3-吡啶基丙胺酸- nh2 179 T H D Bip(2'-Et-4-OH) 4-(2’-曱基苯基)-3-吡啶基丙胺酸- nh2 胺基酸縮寫及結構 A = L-Ala; ala = D-Ala Aib=cx-胺基異丁酸 宫iP:L-4,4·-聯苯基丙胺酸; D = L-Asp E = L-Glu G = Gly H = L-His Nle =L-正白肢酸 Nva=L-正纈fe酸 F = L-Phe S = L-Ser; T = L-Thr.
a-甲基苯3丙胺酸 (a-Me-Phe) 環碳之編號
4' 3'
SliSI號 蠢纖溫?
(L)-a-Me-phe (L)-a-Me_Phe(2-氣）（L)-a-Me-Phe(2,6-二氟） Bip(2'-Me) BiP(2'-〇Bu) 120897.doc -161 - 200813095
C
啶基丙胺酸
4-[(Z-乙基-4·-甲氧基)-苯基】-3-吡啶基丙胺酸
4-(4·-氯苯基)-3-吡啶基丙胺酸
-3-吡啶基丙胺酸
4-(2'-甲氧基苯基) -3-吡啶基丙胺酸
4-(2，-異丙基苯基) -3-吡啶基丙胺酸 ☆ 4-(2’-氟苯基)-3-吡纖丙胺酸 4-(3’-甲基苯基)-3-吡啶基丙胺酸
苯基]-3-吡啶基丙胺酸 120897.doc -162- 200813095
4-(4’-三氟甲基苯基) -3-吡啶基丙胺酸
4-(2·-甲基，4-氯)苯基) -3-吡啶基丙胺酸
43-(U麗S基)
4-(2·-三氟甲基苯基) -3-吡啶基丙胺酸
4-(3*-氯苯基)-3-吡啶基丙胺酸
F
-3-吡啶基丙胺酸 4-[(2·-甲基·5·-氟)苯基)] -3-吡啶基丙胺酸
4-[(3·-氯丰氟)苯基] -3-吡啶基丙胺酸 / 4-(4·-氟苯基)-3
4-(3'，5'-二甲基苯基) -3-吡啶基丙胺酸
4W-異丙氧基苯基) •3-吡陡滅每胺—
SiitS壽 S蠢)
4-(2^甲基苯基)_ 3-吡啶基丙胺酸
4-。異丙氧基苯基) -3-吡啶基丙胺酸 ⑸-4-(2 -甲基本基)-<χ-Me-3-吡啶基丙胺酸
4W-甲基苯基)-3,5-嘧啶基丙胺酸 4-(4·-甲氧基苯基)-
120897.doc -163- 200813095
熟習胺基酸及肽化學技術者應瞭解，在第4位或對位具 有苯基取代基之苯丙胺酸胺基酸可另外定義為4-(苯基）苯 丙胺酸或4,4，-聯苯基丙胺酸，且因此可縮寫為”Bip"。出於 ▼’胺基酸縮寫與結構”章節及本文中之表格中所示之縮寫的 目的，例如可將聯苯基丙胺酸胺基酸縮寫為”Bip(2，_ Me)” ’其擬表示在其4位經2，-曱基苯基取代之苯丙胺酸， 其中2’-甲基相對於苯環連接點處於鄰位。 實例35 環AMP測定 GLP-1受體為g蛋白偶合受體。生物活性形式之glp-1 (7-3 6)-醯胺與GLP-1受體結合且經由信號轉導引起腺苷醯 基裱化酶之活化且使細胞内c AMp濃度增加。為監測肽對 於刺激GLP-1受體之促效作用，藉由檢定細胞内cAMp含量 來監測腺苦酿基環化酶之活性。全長人胰高血糖素樣肽4 文體在CHO-K1細胞中得以穩定表現且得以建立無性繁殖 系。篩選對飽和劑罝之GLpq起反應而最大增加cAMp含量 120897.doc * 164 - 200813095 的純系，且對純系CHO-GLP1R-19加以選擇。 將細胞培養於Ham’s F12營養培養基（0比(：〇#11765-054)、10% FBS、lxL-麩酿胺酸、lxPen/Strep 及 0.4 mg/ml G418 中。CHO-GLP-1R-19 細胞（100 μΐ 培養基中 20,000 個） 塗佈於96孔組織培養微量滴定盤中的各個孔中且在37°C下 於5% C02氣氛下隔夜培育。檢定當天，用100 μΐ經磷酸鹽 緩衝之生理鹽水（PBS)洗滌細胞一次。在開始檢定前，使 用Biomek 2000連續稀釋所有肽。連續稀釋係在1〇〇% DMSO中進行。產生肽培養盤，隨後使用piatemate Plus起 始檢定；將1·5 μί化合物轉移至V型底之培養盤中，且將 補充有100 μΜ 3-異丁基-1-曱基黃嘌呤（一種非選擇性磷酸 二酯酶抑制劑）之1 50 pL檢定緩衝液添加至培養盤中得到 1:100之稀釋及最終濃度為1%之DMSO。 為產生cAMP標準曲線，在溶解試劑i(Amersham cAMP SPA套組）中形成在0.2-25.6皮莫耳/孔範圍内之cAMP之連 續稀釋。手工添加50 μΐ各CAMP標準品並使用多分支分液 器（multidrop)添加 70 μΐ混合試劑（Amersham cAMP SPA套 組）。隨後，密封培養盤且在15小時後於Trilux計數器上計 數。使用此標準曲線將CPM轉化成cAMP之皮莫耳數。 Piatemate Plus上進行之CAMP檢定的方案 將細胞培養盤及肽培養盤裝載於Plateniate上。自孔中抽 吸出培養基並丟棄。接著，以每孔1 〇〇 μΕ添加來自肽培養 盤之肽/緩衝液混合物以起始檢定。培育3 〇 min後，移除 肽/缓衝液且每孔添加50 pL溶解試劑1溶液。若冷凍且密 120897.doc -165- 200813095 封，則將培養盤在室溫下保持1小時或隔夜。使用多分支 分液器添加70 pL cAMP偵測試劑（預混合與SPA珠粒接合之 125I-cAMP類似物、抗cAMP抗體及抗兔抗體-均來自 Amersham cAMP SPA套組）並密封培養盤。15小時後，在 Trilux計數器上對培養盤進行計數。 測定半對數濃度下化合物之劑量依賴性，一式兩份。在 各96孔培養盤中，在七種半對數劑量下執行GLP-1(對照） 及五種化合物（一式兩份）。將10 nM GLP-1又塗佈於10個 孔中以用作測定最大活性之參考標準。使用已知量之環 AMP確定標準曲線。由環AMP標準曲線測定由經處理細胞 合成之cAMP的量，且計算所刺激之最大GLP-1活性的百分 比並對對數化合物濃度繪圖。藉由非線性回歸曲線擬合（4 參數S形劑量反應曲線）分析資料以測定化合物之EC50。舉 例而言，本文所述之肽的EC50值在0.0005 nM至10 nM之範 圍内，更佳在0.0005 nM至0.200 nM之範圍内。 另外，以每孔10,000個細胞將表現GLP-1受體之CHO細 胞塗佈於384孔培養盤中，並如上文所述在37°C下於5% C02中培養隔夜。用肽基GLP-1受體促效劑處理後，遵循 製造商之方案用HithunterTM XS cAMP套組（DiscoveRx®)量 測細胞内cAMP含量。 實例36 活艎内研究 以一定濃度（nmol/ml)將肽溶解於適當媒劑中，該濃度與 使各小鼠接收相同體積/重量給藥溶液而投與的劑量 120897.doc -166- 200813095 (nmol/kg)相等。基於餐後血糖及體重將雄性C57BL/6J_ ob/ob小鼠（10週齡）隨機分組，每組6隻小鼠。禁食隔夜 後，對小鼠稱重並將其置放於實驗室中。在該環境中3〇 min後，在第30 min時經由尾尖對小鼠抽血，且迅速經皮 下（sc)注入媒劑或溶解於媒劑中之肽（每1〇〇 g體重〇1…溶 液）。開始時對小鼠抽血且隨後經腹膜内注入5〇%葡萄糖（2 g/kg)以起始腹膜内葡萄糖耐受性測試（^〇ττ)。注射葡萄 糖後30 min、60 min、120 min及180 min時對小鼠抽血。 將血液樣本取至EDTA鉀中，研究期間將其置放於冰上且 P通後在4C下以3000 rpm離心1〇分鐘。將血漿樣本稀釋n 倍以供於Cobas系統中進行之葡萄糖分析。用2〇 μ1樣本稀 釋劑（Sample Diluent)(Insulin ELISA檢定套組，Crystal
Chem Inc·)將另一份5 μι血漿樣本稀釋5倍且在_2〇它下儲存 以 i、P现後使用 Ultra Sensitive Mouse Insulin ELISA套組 (Crystal Chem Inc·)進行之分析。 化合物I及SEQ ID NO·· 9、118、151及158之化合物在 〇b/〇b小鼠（胰島素抵抗之小鼠模型）體内之活體内降糖特性 描述如下。在腹膜内葡萄糖耐受性測試（ipGTT)中，皮下 投與化合物I使餐後葡萄糖漂移曲線變窄，且曲線下血糖 面積（AUC)在〇與180 min之間以劑量依賴之方式降低（圖 1)。測定化合物I之ED50為50毫莫耳/千克。在此等動物體 内存在餐後血漿胰島素含量之伴隨且統計學顯著之劑量依 賴性增加（圖2)。在經化合物I治療之動物體内血糖與胰島 素的改變之間的相關性（圖丨及圖2)表明，降糖作用係由該 120897.doc -167- 200813095 化合物刺激胰島素釋放所介導。 更明顯且出人意料的是，在向ob/ob小鼠皮下投與SEQ ID NO: 9、118、151及158之化合物後，其對於餐後血糖 產生時間依賴性（0與180 min或210 min之間）統計學顯著降 低（圖3、5、6及7)。SEQ ID NO: 9對餐後葡萄糖之作用在 1-100 nmol/kg之間為劑量依賴性且血糖AUC在100 nmol/kg 劑量時降低85.8%(圖3)。SEQ ID NO: 9化合物之ED50經測 定為5毫莫耳/千克。SEQ ID NO: 9之化合物對血糖之作用 亦係藉由顯著增加該等動物體内之餐後胰島素實現（圖4)。 對胰島素之作用可能具劑量依賴性，且在30 nmol/kg劑量 下AUC具有最大187.7%之增加（圖4)。 SEQ ID NO·· 118對餐後葡萄糖之作用在1_30 nmol/kg之 間為劑量依賴性且血糖AUC在30 nmol/kg劑量時降低 81%(圖5)。SEQ ID NO: 118化合物之ED50經測定為2.5毫 莫耳/千克。 SEQ ID NO: 151對餐後葡萄糖之作用在0_03與3 nmol/kg 之間為劑量依賴性且血糖AUC在3 nmol/kg劑量時降低 67%(圖6)。SEQ ID NO: 1 5 1化合物之ED50經測定為1毫莫 耳/千克。 SEQ ID NO: 158對餐後葡萄糖之作用在0.1與10 nmol/kg 之間為劑量依賴性且血糖AUC在10 nmol/kg劑量時降低 66%(圖7)。SEQ ID NO: 151化合物之ED50經測定為2毫莫 耳/千克。 實例37 120897.doc -168· 200813095 犬藥效研究 測定雄性米格魯犬（beagle dog)(n=3-4, 14±1 kg)體内SEQ ID NO: 9、118、151及158之化合物之藥效參數。禁食隔 夜後，經由股靜脈以靜脈内團注（67 pg/kg)或藉由在接近 肩胛骨處皮下注射（67 pg/kg)使各動物接收SEQ ID NO: 9、118、151及158之化合物。各動物接收靜脈内與皮下劑 量且在遵循交叉設計給藥之間具有1週之洗脫期。兩種投 藥途徑之給藥媒劑均為丙二醇：pH 7.4磷酸鹽緩衝液（50:50) 或0.2 M Tris(pH 8.0)。將給藥前、靜脈内投藥後0.083、 0·25、0.5、0.75、1、2、4、ό、8、24及 30小時給藥後； 給藥前、皮下投藥後0.25、0.5、0.75、1、2、4、6、8、 24及30小時給藥後的連續血液樣本收集於含有EDTA之微 量離心管中。在各時間點時收集約〇·3 mL血液。在4°C下 迅速離心血液樣本。以乾冰冷凍所獲得的企漿且在_2〇。〇 下儲存。使用下文所述之LC-MS/MS檢定測定血漿藥物含 量。 藉由1^-]\18/]\18定量8£()1〇1^0:158之化合物 藉由以兩體積含有内部標準品之AcCN沈澱血漿蛋白來 製備來自活體内犬研究之血漿樣本供分析用。渦漩混合樣 本且藉由離心移除已沈澱之蛋白。將所得上清液轉移至96 孔培養盤中並注入10 pL供TFC-LC/MS/MS分析用。 TFC-HPLC 系統（Cohesive TX-1 Flux，Aria 2300 System) 係由裝載泵、溶離泵及CTC PAL自動取樣器（Cohesive Technologies，Franklin，ΜΑ)組成。線上樣本處理所使用之 120897.doc •169- 200813095 管柱為作為分析管柱之 Phenomenex Synergi Fusion-RP(C 18, 2.0x50 mm, 4 p)(Phenomenex，Torrance，CA)及作為萃取管 柱之 Turbo-Flow (TF) HTLC Cyclone 管柱（0.5><50mm) (Cohesive Technologies，Franklin，MA)。移動相 A係由 10 mM甲酸銨及0.1%甲酸水溶液組成且移動相B係由AcCN中 之0.1%甲酸組成。使用Turbo-Flow層析獲得較為澄清之樣 本。使用快速梯度溶離作分析物分離用。將樣本注入 Turbo-Flow HTLC Cyclone管柱上且使用 100% H20以 1.5 mL/min將分析物與生物流體組份分離。反沖TF管柱且使 用經2 min快速上升至60%之B將來自TF之分析物溶離回 HPLC分析型管柱中，且以0.3 mL/min使其在此保持30 s以 使分析物與HPLC管柱分離並溶離至質譜儀中。再洗滌兩 種管柱1分鐘且隨後在初始條件下再平衡兩種管柱。 使 HPLC 與 Sciex API 4000 質譜儀（Applied Biosystems， Foster City，CA)相接，且裝備有Turbolonspray電離源。將 超高純度之氮氣用作喷霧及渦流氣體。渦流氣體之溫度設 定為300°C且界面加熱器設定為60°C。使用選擇反應監測 (SRM)用於資料獲取。在Q1中選擇SEQ ID NO·· 158化合物 中之多電荷離子物質（亦即，（M+2H)2—)，且在Q2中於 3.5xl(Γ3托（torr)之壓力下以高純度氮氣碰撞解離該等物質 以形成特定產物離子，隨後在Q3中進行監測。離子轉換及 電壓概述於下（表4)。 120897.doc -170- 200813095 表4 用於LC-MS/MS樣本分析所監測之轉換及質譜儀設定 SRM 轉換（mz) 800.0—152.0 去簇電壓（V) 100 碰撞能量（V) 91 一式兩份分析在1至1000 nM之範圍内之標準曲線濃度。 將曲線與以濃度之倒數加權之線性回歸（1/x2)擬合。亦在 各分析設定中分析在空白基質中製備的與標準品具相同濃 度的品控（QC)樣本。對於分析SEQ ID NO: 15 8之化合物而 言，大於80%之經計算QC濃度與標稱濃度相差不超過 20%，表明檢定效能為可接受的。 資料分析 藉由無房室方法（noncompartmental method)使用 KINETICATM軟體程式分析SEQ ID NO: 158化合物之血漿 濃度比時間之資料。直接記錄實驗觀察得到之Cmax及 Tmax值。使用線性及對數梯形求和之組合計算AUCO-η及 AUCtot值。靜脈内投藥後計算總血漿清除率（CLP)、終端 半衰期（tl/2)、平均滯留時間（MRT)及穩態分布體積 (Vss)。使用總血漿清除率及血液比血漿濃度之比率計算總 血液清除率（CLB)。將CLB及Vss值分別與文獻中所報導之 標準肝血流及身體水份總量值相比較。藉由取得皮下給與 SEQ ID NO: 158化合物之後劑量標準化AUC值與靜脈内給 藥後之值的比率估計皮下絕對生物利用度（以％表示）。 犬藥效結果 靜脈内（IV)及皮下（SC)投藥後，將雄性米格魯犬體内 120897.doc -171 - 200813095 SEQ ID NO: 9、151及158之化合物的藥效參數分別概述於 表5A、5B及5C中。 SEQ ID NO: 158之化合物展現低全身清除率（0.51 士 0.08 mL/min/kg)。穩態分布體積（Vss)為 0.15土0.02 L/kg，表明 有限之血管外分布。據估計去除半衰期為4.4士0.4 h，且平 均滯留時間為4.9 土 0.7 h。皮下給與67 pg/kg後達到峰濃度 之時間（Tmax)出現在1·4 士 0.7 h。皮下投藥後之最大血漿濃 度（Cmax)為279 土 82 nM。SEQ ID NO: 158之化合物於犬體 内之皮下生物利用度為11〇±49%。
表5A SEQ ID NO: 9之化合物於犬體内之藥效參數 (給藥媒劑：〇·2 M Tris，pH 8.0) 參數 靜脈内（n=3) 皮下（η=3，平均值 士 SD) 劑量（Kg/kg) 67 67 Cmax (nM) - 116士 34 Tmax (h) - 1.1 士 0.6 AUCtot (nMxh) 529士 125 452±153 CLp (mL/min/kg) 1.4 士 0·4 - Vss (L/kg) 0.21 士 0.07 - tl/2 (h) 7.1 士 2.1 2.6 土 1.2 MRT⑻ 2·4 土 0.5 3.6 士 1.0 生物利用度（％) - 93 士 22
表5B SEQ ID NO: 151之化合物於犬艘内之藥效參數 參數 靜脈内（n=3，平均值 士 SD) 皮下（n=3，平均值：tSD) 劑量（pg/kg) 67 67 Cmax (nM) - 252士15 Tmax (h) - 1·8±0·5 AUCtot (nMxh) 1519土424 1566士235 120897.doc -172- 200813095 參數 靜脈内（n=3，平均值 士 SD) 皮下（n=3，平均值±SD) CLp (mL/min/kg) 0.49 士 0.16 - Vss (L/kg) 0.13±0.05 - tl/2 (h) 4.0 土 0.2 4.4 士 1.4 MRT⑻ 4.4 土 0.1 5.8±1.0 生物利用度（％) 110 士 41
表5C SEQ ID NO: 158之化合物於犬體内之藥效參數 參數 靜脈内（n=3，平均值 土 SD) 皮下（η=3，平均值 士 SD) 劑量（pg/kg) 67 67 Cmax (nM) - 279士 82 Tmax (h) - 1.4 士 0.7 AUCtot (nMxh) 1385± 227 1467士563 CLp (mL/min/kg) 0.5U0.08 - Vss (L/kg) 0.15±0.018 - tl/2 (h) 4.4 士 0.4 3.9 士 1.3 MRT⑻ 4·9±0·7 5.2 土 1.5 生物利用度（％) - 110士 49 實例38 非經腸投藥途徑 如下所述製備具有以下組成的肺部/吸入或經鼻傳遞之 液體調配物。 成分 量 肽藥物 10 mg HC1 或 NaOH 用於將pH值調至5-8之間 SBE-環糊精（Captisol) 50 mg 純水 足量至1ml 在最佳pH值下，將經稱重之肽溶解於一部分水中。將 Captiso卜添加至藥物溶液中且檟;拌約5 min。添加NaOH及 HC1以將pH值調至所需值（介於5-8之間）。添加純化水以使 最終體積達到1 ml。在調節pH值前，視需要可添加其他無 活性成分，諸如防腐劑、抗氧化劑、緩衝鹽及共溶劑。添 120897.doc -173 - 200813095 加水直至所需目標體積。 可用注射器微型噴射器或喷氣或超音喷霧器將上述溶液 調配物以精細喷霧之形式投至肺部。可用定計量鼻喷射泵 或注射器微型喷射器將上述溶液傳遞至鼻腔中。 如下所述製備具有以下組成的肺部/吸入或經鼻傳遞之 乾粉調配物。 |成分 量 肽藥物 10 mg 乳糖 90 mg 在Turbula®混合器中，將較佳具有小於5微米之質量平均 空氣動力直徑（MMAD)的經稱重肽與吸入級乳糖30-100 pm(Respitose，DMV International)摻合 5 min。可藉由粉末 吹入器或乾粉吸入器將上述乾粉摻合物傳遞至肺部。 如下所述製備具有以下組成的肺部/吸入或經鼻傳遞之 懸浮液調配物。 成分 量 丨1 肽藥物 10 mg 卵磷脂 0.1% 推進劑氣體 1 ml 將微米尺寸化之肽均勻懸浮於卵磷脂與推進劑氣體（諸 如氫氟碳化合物（HFA))之混合物中。將懸浮液轉移至加壓 定計量吸入器中。 大鼠體内自溶液調配物之肽吸收 藥效參數 氣道内 鼻内 劑量（mg/kg) 1 0.6 AUC (nM-h) 918.9 士 103 177±77 Cmax (nM) 359土 50.9 236土125 Tmax (h) 0.03 0.17 120897.doc -174- 200813095 將溶液形式（上文所述）之肽投與經腹膜内注射戊巴比妥 (pentobarbital)而麻醉之雄性Sprague-Dawley大鼠。用注射 器微型噴射器將藥物引入氣道内以評估肺傳遞，或以移液 管將其灌輸至各鼻孔内以供鼻内傳遞。歷經4 hr之時間將 對頸動脈插管得到之血液樣本收集於經肝素化之真空採血 官中。離心血液樣本，將所分離之血漿儲存於-8〇。〇下直 至LC/MS分析。由血漿-時間濃度曲線計算藥效參數並將 其報導於表中。對各投藥途徑使用三隻大鼠。以平均值土 標準偏差之形式提供資料。所報導之Tmax為平均值。 效用及組合 A·效用 本文所述之標的物提供具有優良特性且充當GLP·〗受體 調節劑例如因此肽對GLP4受體具有促效劑活性的新穎 另外如與GLp_ 1天然序列相比較，本文所述之肽展 現出對於蛋白水解裂解增加之穩定性。 因此，可將本文所述之化合物投與哺乳動物（較佳人類） 用於冶療多種病況及病症，包括(但不限於”台療以下疾病 或，緩其進程或發作：糖尿病（較佳_型糖尿病；葡萄糖 耐量減低；胰島素抵抗；及糖尿病併發症，諸如腎 網膜：變、神經病變及白内障)、高血糖症、高胰島素血 高膽固醇血症、升高之游離脂肪酸或甘油血液含量、 间月曰質血症、㊉甘油三s旨血症、肥胖症、創傷癒合、組 缺血：動脈粥樣硬化、高血壓、aids、腸疾病(諸如壞死 性腸炎、微絨毛包涵體病m病）、發炎性腸症候群、 120897.doc -175- 200813095 化療誘導之腸黏膜萎縮或損傷、神經性食慾缺乏、骨質疏 鬆症、代謝紊亂症候群以及發炎性腸病（諸如克羅恩病 (Crohn、disease)及潰瘍性結腸炎）。亦可利用本文所述之 化合物增加高密度脂蛋白（HDl)之血液含量。 此外，如 Johannsson J· Clin. Endocrinol. Metab·，82, 727-34 (1997)中詳述統稱為”χ症候群”或代謝症候群之病 況、疾病及病可使用本文所述之化合物治療。 Β.組合 本文所述及主張之標的物包括醫藥組合物，其包含單獨 作為活性成分之治療有效量之式合物的至少一者或該 活性成分與醫藥載劑或稀釋劑之組合。視情況，本文所述 之化合物可單獨使用、與本文所述之其他化合物組合使用 或與一或多種其他治療劑（例如，抗糖尿病劑或其他醫藥 活性材料）組合使用。 本文所述之化合物可與其他GLP-1受體調節劑（例如，促 效劑或部分促效劑，諸如肽促效劑）或可用於治療上文所 提及之病症之其他適當治療劑組合使用，該等其他適當治 療劑包括：抗糖尿病劑；抗高血糠劑；降血脂劑/降脂質 劑，抗肥胖劑（包括食慾抑制劑/調節劑）及抗高血壓劑。此 外，本文所述之化合物可與一或多種以下治療劑組合使 用：不孕劑、用於治療多囊卵巢症候群之藥劑、用於治療 生長病症之藥劑、用於治療虛弱之藥劑、用於治療關節炎 之藥劑、用於防止移植時同種異體排斥的藥劑、用於治療 自體免疫疾病之藥劑、抗AIDS藥劑、抗骨質疏鬆劑、用 120897.doc -176- 200813095 於治療免疫調節疾病之藥劑、抗血栓形成劑、用於治療心 血管疾病之藥劑、抗生劑、抗精神病劑、用於治療慢性發 炎性腸病或症候群之藥劑及/或用於治療神經性食慾缺乏 之藥劑。 與本文所述之化合物組合使用之適當抗糖尿病劑的實例 包括雙脈（例如，二甲雙脈或苯乙雙脈（phenformin))、葡糠 苷酶抑制劑（例如，阿卡波糖或米格列醇）、胰島素（包括促 胰島素分泌素或胰島素增敏劑）、美格列奈（例如，瑞格列 奈）、磺醯脲（例如，格列美脲、格列本脲、格列齊特、氯 石黃丙腺及格列σ比嗓）、雙胍/格列本脲組合（例如 Glucovance®)、噻唑啶二酮（例如曲格列酮、羅格列酮及吡 格列酮）、PPAR-α促效劑、PPAR-γ促效劑、PPAR α/γ雙重 促效劑、糖原磷酸化酶抑制劑、脂肪酸結合蛋白（aP2)抑制 劑、DPP-IV抑制劑、GPR119調節劑及SGLT2抑制劑。 其他適當之111 塞唾σ定二S同包括Mitsubishi之MCC-555(揭示 於美國專利第 5,594,016 號中）、Glaxo-Wellcome 之 GL-262570、恩格列酮（CP-68722，Pfizer)或達格列酮（CP-86325，Pfizer)、伊沙列酮（MIT/J&J)、JTT-501(JPNT/P&U) L-895645(Merck) > R-119702(Sankyo/WL) > NN-2344(Dr. Reddy/NN)或 YM-440(Yamanouchi)。 適當之PPAR α/γ雙重促效劑包括莫格他嗤（Bristol-Myers Squibb)、AR-H039242(Astra/Zeneca)、GW-409544(Glaxo-Wellcome)、KRP297(Kyorin Merck)以及 Murakami 等人之 ”A Novel Insulin Sensitizer Acts As a Coligand for 120897.doc -177- 200813095
Peroxisome Proliferation-Activated Receptor Alpha (PPAR alpha) and PPAR gamma ； Effect on PPAR alpha Activation on Abnormal Lipid Metabolism in Liver of Zucker Fatty Rats，，，Diabetes 47, 1841-1847 (1998)及 2000年 9 月 18 曰申請 之美國申請案第〇9/644,598號中所揭示者，該等專利文獻 之揭示内容係以引用之方式併入本文，採用如其中所述之 劑量，較佳將稱為較佳之化合物用於本文中。 適當aP2抑制劑包括1999年9月7日申請之美國申請案第 09/391,053號及2000年3月6日申請之美國申請案第 09/519,079號中所揭示者，採用如其中所述之劑量。 可與本文所述之化合物組合使用之適當DPP4抑制劑包括 WO 99/38501、WO 99/46272、WO 99/67279 (PROBIODRUG)、 WO 99/67278(PROBIODRUG) > WO 99/6143l(PROBIODRUG) 中所揭示者；如 Hughes 等人，Biochemistry，38(36)， 11597-11603, 1999 中所揭示之NVP-DPP728A(l-[[[2-[(5-氰 基。比啶-2-基）胺基]乙基]胺基]乙醯基]-2-氰基-(S)-吼咯 啶）（Novartis) ; LAF237 ； saxagliptin ； MK043 1 ； TSL-225 (色胺醯基-1，2,3,4-四氫異喹啉-3-曱酸（揭示於Yamada等 人，Bioorg· & Med. Chem. Lett. 8 (1998) 1537-1540 中）； 如 Ashworth等人，Bioorg. & Med. Chem· Lett·，第 6卷，第 22期，第1163_1166頁及第2745-2748頁（1996)中所揭示之 2-氰基吡咯啶化物及4-氰基吡咯啶化物；採用如上述參考 文獻中所述之劑量。 適當美格列奈包括那格列奈（Novartis)或KAD1229 120897.doc -178- 200813095 (PF/Kissei)。 可與本文所述之GLP-1受體調節劑（例如促效劑或部分促 效劑）組合使用之其他適當胰高血糖素樣肽化合 物的實例包括GLP-l(l-36)醯胺、GLP-l(7-36)醯胺、GLP-1(7-37)(如Habener之美國專利第5,614,492號中所述）以及 AC2993(Amyhn) 、LY-315902(Lilly)及 NN2211(Novo
Nordisk) ° 與本文所述之化合物組合使用之適當降血脂劑/降脂質 劑的實例包括一或多種MTP抑制劑、HMG CoA還原酶抑制 劑、角鯊烯合成酶抑制劑、纖維酸衍生物、ACAT抑制 劑、脂肪加氧酶抑制劑、膽固醇吸收抑制劑、回腸Na+/膽 汁酸共運輸體抑制劑、LDL受體活性上調劑、膽汁酸錯隔 劑、膽固醇醋轉移蛋白抑制劑（例如cp_529414(pfizer))及/ 或煙酸及其衍生物。 可如上述使用之MTP抑制劑包括美國專利第5,595,872 號、美國專利第5,739，135號、美國專利第5,712,279號、美 國專利第5,760,246號、美國專利第5,827,875號、美國專利 第5,885,983號及美國專利第5,962,44〇號中所揭示者，所有 該等專利均係以引用之方式併入本文。 可與一或多種式I之化合物組合使用之HMG CoA還原酶 抑制劑包括如美國專利第3,983，14〇號中所揭示之美伐他汀 及相關化合物；如美國專利第4,231，938號中所揭示之洛伐 他>丁（莫維諾林（mevinolin))及相關化合物；諸如美國專利 第4,346,227號中所揭示之普伐他汀及相關化合物；如美國 120897.doc -179- 200813095 專利第4,448,784號及第4,450，171號中所揭示之辛伐他汀及 相關化合物。可用於本文中之其他HMG CoA還原酶抑制 劑包括（但不限於）美國專利第5,354,772號中所揭示之氟伐 他江·’如美國專利第5,006,530號及第5，177,〇8〇號中所揭示 之西立伐他汀（cerivastatin);如美國專利第4,681，893號、 第5,273,995號、第5,385,929號及第5,686，104中所揭示之 阿托伐他汀（atorvastatin);如美國專利第5,011，930號中所 揭示之阿特伐他汀（atavastatin)(Nissan/Sankyo之尼伐他、汀 (nisvastatinKNK-104));如美國專利第 5,260,440號中所揭 示之維塞他汀（visastatin)(Shi〇n〇gi-Astra/Zeneca(ZD· 4522));及美國專利第5,753,675號中所揭示之相關他汀類 化合物；如美國專利第4,613,610號中所揭示之曱基二羥戊 酮衍生物之吼唑類似物；如PCT申請案w〇 86/〇3488中所 揭示之甲基二羥戊酮衍生物之茚類似物；如美國專利第 4,647,576號中所揭示之6_[2_(經取代·比咯小基）_烧基）派 喃-2-酮及其衍生物；如pCt申請案w〇 86/07054中所揭示 之Searle之SC_453 5 5(3-經取代戊二酸衍生物）二氯乙酸g旨、 甲基二羥戊酮之咪唑類似物；如法國專利第2,596,393號中 所揭示之3-叛基-2-羥基-丙烧-填酸衍生物；如歐洲專利申 清案弟〇 2 2 10 2 5號中所揭示之2，3 ·雙取代π比Ϊ7各、咬喃及σ塞吩 衍生物；如美國專利第4,686,237號中所揭示之曱基二羥戊 酮之萘基類似物；諸如美國專利第4,499,289號中所揭示之 八氫萘；如歐洲專利申請案第0142146 Α2號中所揭示之莫 維諾林（洛伐他汀（lovastatin))之酮基類似物；及如美國專 120897.doc -180- 200813095 利第WOMB號及第5,691，322號中所揭示咬衍 生物。 所需降血脂劑為普夜他 J勹日仪他/Γ、洛伐他汀、辛伐他汀、阿托 伐他、汀、氟伐他汀、 曲立伐他>丁、阿特伐他汀及ZD_ 4522 〇 1用於抑制HMG CoA還原酶之一元膦酸（諸如GB 2205837中所揭示者）適於與本文所述之化合物組合使用。
適用於本文中之角驚稀合成酶抑制劑包括（但不限於）美 國專利第5,712,396旎中所揭示之α_膦酸基_磺酸酯； 等人 J· Med· Chem·，1988，第 31卷，第 10期，第 1869- 頁中所揭示者，包括類異戊二烯（氧鱗基-甲基）鱗酸 酯；以及其他已知之角鯊烯合成酶抑制劑，例#，如美國 專利第 4,871，721 號及第 4,924,024 號及 Biller，S.A·，
NeUenSChWander，K·，Ponpipom，Μ·Μ·及 Poulter，c.D·，
Current Pharmaceutical Design，2,㈣（1"6)中所揭示 者0 此外，適用於本文中之其他角鯊烯合成酶抑制劑包括p.
Ortiz de Montellano等人，J. Med. Chem.，1977，20，243_ 249中所揭示之類萜焦磷酸酯；如c〇rey及v〇lante，j. Am. Chem· Soc·，1976, 98, 1291-1293中所揭示之二磷酸法呢基 酉旨類似物A及前角鯊烯焦磷酸酯（PSq-PP)類似物；McClard， R.W.等人，J.A.C.S·，1987，109，H44中報導之氧膦基膦酸 酉旨及 Capson，T.L·，PhD dissertation, 1987年 6月，Dept· Med. Chem. U of Utah，Abstract，Table of Contents，第 16、17、 120897.doc -181 - 200813095 40-43、48-5 1頁，Summary中所報導之環丙烧。 可與一或多種式I之化合物組合使用之纖維酸衍生物包 括非語貝特（fenofibrate)、吉非貝齊（gemfibrozil)、氣貝酸 鹽（cloHbrate)、苯紮貝特（bezafibrate)、環丙貝特 (ciprofibrate)、克利貝特（clinofibrate)及其類似物、普羅 布考（probucol)及相關化合物，如美國專利第3,674,836號 所揭示，普羅布考及吉非貝齊較佳；膽汁酸錯隔劑，諸如 考來稀胺（cholestyramine)、考來替泊（colestipol)及 DEAE-葡聚糖凝膠（Secholex®、Policexide®);以及融脂劑 (lipostabil)(Rhone-Poulenc) ; Eisai E-5050(N-經取代乙醇 胺衍生物）；伊馬昔爾（imanixil)(HOE-402);四氫利潑斯汀 (tetrahydrolipstatin)(THL) ; istigmastanylphos-phorylcholine (SPC，Roche);胺基環糊精（Tanabe Seiyoku) ; Ajinomoto AJ-814(甘菊環衍生物）；甲基油醯胺（melinamide) (Sumitomo) ; Sandoz 58-035 ; American Cyanamid CL-277,082及CL-283,546(雙取代脲衍生物）；煙酸；阿昔莫司 (acipimox);阿昔咬喃（acifran);新黴素（neomycin);對胺 基水楊酸；阿司匹林（aspirin);聚（二烯丙基曱基胺）衍生 物，諸如美國專利第4,759,923號所揭示者；四級胺聚（二 烯丙基二甲基氣化銨）及紫羅烯（ionene)，諸如美國專利第 4,027,009號中所揭示者；及其他已知之降低血清膽固醇的 藥劑。 可與一或多種式I之化合物組合使用之ACAT抑制劑包括 Drugs of the Future 24，9-15 (1999)，（Avasimibe) ; "The 120897.doc -182 - 200813095 ACAT inhibitor，Cl-1011 is effective in the prevention and regression of aortic fatty streak area in hamsters”，Nicolosi 等人，Atherosclerosis (Shannon，Irel). (1998)，137(1)，77-85 ； ’’The pharmacological profile of FCE 27677: a novel ACAT inhibitor with potent hypolipidemic activity mediated by selective suppression of the hepatic secretion of ApoB 100-containing lipoprotein”， Ghiselli, Giancarlo， Cardiovasc· Drug Rev. (1998)，16(1)，16-30 ;，，RP 73 163: a bioavailable alkylsulfinyl-diphenylimidazole ACAT inhibitor11, Smith，C.等人，Bioorg. Med. Chem. Lett. (1996)，6(1)，47-50 ; ’’ACAT inhibitors: physiologic mechanisms for hypolipidemic and anti-atherosclerotic activities in experimental animals’’，Krause等人，編者：Ruffolo，Robert R·，Jr. ； Hollinger，Mannfred A.，Inflammation: Mediators
Pathways (1995)，173-98, Publisher: CRC, Boca Raton, Fla. ； ’’ACAT inhibitors: potential anti-atherosclerotic agents"， Sliskovic等人，Curr· Med. Chem. (1994)，1(3)，204-25 ; ’’Inhibitors of acyl-CoA: cholesterol O-acyl transferase (ACAT) as hypocholesterolemic agents. 6. The first water-soluble ACAT inhibitor with lipid-regulating activity. Inhibitors of acyl-CoA: cholesterol acyltransferase (ACAT). 7. Development of a series of substituted N-phenyl-N,-[( 1-phenylcyclopentyl)methyl]ureas with enhanced hypocholesterolemic activity’’，Stout等人，Chemtracts: Org. Chem. (1995)，8(6)， 120897.doc -183 - 200813095 359-62或 TS-962 (Taisho Pharmaceutical Co. Ltd)中所揭示 降血脂劑可為LD2受體活性上調劑，諸如MD-700(Taisho Pharmaceutical Co· Ltd)及 LY295427(Eli Lilly)。 與本文所述之化合物組合使用之適當膽固醇吸收抑制劑 的實例包括 SCH48461(Schering-Plough)以及 Atherosclerosis 1 15, 45-63 (1995)及 J· Med. Chem· 41，973 (1998)中所揭示 者。 與本文所述之化合物組合使用之適當回腸Na+/膽汁酸共 運輸體抑制劑之實例包括如Drugs of the Future，24，425-430 (1999)中所揭示之化合物。 可與一或多種式I之化合物組合使用之脂肪加氧酶抑制 劑包括15-脂肪加氧酶（15-LO)抑制劑，諸如苯幷咪唑衍生 物（如WO 97/12615中所揭示）、15-LO抑制劑（如WO 97/12613中所揭示者）、異噻唑啉酮（WO 96/38 144中所揭示 者）及 15-LO 抑制劑（Sendobry 等人 ’’Attenuation of diet-induced atherosclerosis in rabbits with a highly selective 15-lipoxygenase inhibitor lacking significant antioxidant properties’’，Brit. J. Pharmacology (1997) 120，1199-1206及
Cornicelli 等人，n 15-Lipoxygenase and its Inhibition: A
Novel Therapeutic Target for Vascular Disease，，，Current Pharmaceutical Design，1999，5，11-20 中戶斤揭示者）。 與本文所述之化合物組合使用之適當抗高血壓劑之實例 包括β腎上腺素能阻斷劑、鈣通道阻斷劑（L型及T型，例如 120897.doc -184- 200813095 地爾硫卓（diltiazem)、維拉帕米（verapamil)、硝苯地平 (nifedipine)、胺氣地平（amlodipine)及美伯法地 (mybefradil))、利尿劑（例如、氯售嗓（chlorothiazide)、氫 氣售 σ秦（hydrochlorothiazide)、氟 °塞 ϋ秦（flumethiazide)、氫 氣 口塞嗓（hydroflumethiazide)、苄氟嗟嗪（bendroflumethiazide)、 甲基氣0塞嗓（methylchlorothiazide)、 三氯17塞口秦 (trichloromethiazide)、泊利 °塞 σ秦（polythiazide)、苄嗟嗓 (benzthiazide)、依他尼酸替尼酸（ethacrynic acid tricrynafen)、氯 11 塞酉同(chlorthalidone)、吱塞米 (furosemide)、musolimine、布美他尼（bumetanide)、 triamtrenene、amiloride、螺内醋（spironolactone))、腎素 抑制劑、ACE抑制劑（例如卡托普利（captopril)、佐芬普利 (zofenopril)、福辛普利（fosinopril)、依那普利 (enalapril)、 色諾普利（ceranopril)、 西拉嗤普利 (cilazopril)、地拉普利（delapril)、喷托普利（pentopril)、喧 那普利（quinapril)、雷米普利（ramipril)、賴諾普利 (lisinopril))、AT-1 受體拮抗劑（例如，氣沙坦（losartan)、 厄貝沙坦（irbesartan)、結員沙坦（valsartan))、ET受體拮抗劑 (例如，塞塔生坦（sitaxsentan)、奥绰生坦（atrsentan)及美 國專利第5,612,359號及第6,043,265號中所揭示之化合 物）、ET/ΑΠ雙重拮抗劑（例如，WO 00/01389中所揭示之 化合物）、中性内肽酶（NEP)抑制劑、vasopepsidase抑制劑 (NEP-ACE雙重抑制劑）（例如，奥帕曲拉（omapatrilat)及吉 莫曲拉（gemopatrilat))及确酸鹽類。 120897.doc -185 - 200813095 與本文所述之化合物組合使用之適當抗肥胖劑的實例包 括NP Y受體拮抗劑、ΝΡ Υ-Y2或ΝΡ Υ· Y4受體促效劑、胃泌 酸調節素（Oxyntomodulin)、MCH拮抗劑、GHSR拮抗劑、 CRH拮抗劑、β；3腎上腺素能促效劑、月旨肪酶抑制劑、血清 素（及多巴胺）再吸收抑制劑、曱狀腺受體β藥物、CB-1拮 抗劑及/或減食慾劑。 可視情況與本文所述之化合物組合使用的β 3腎上腺素 能促效劑包括 AJ9677(Takeda/Dainippon)、L750355(Merck) 或CP33 1648(PHzer)或其他已知之β 3促效劑，如美國專利 第 5,541，204 號、第 5,770,615 號、第 5,491，134 號、第 5,776,983號及第5,488,064號中所揭示，且AJ9677、 L750,355及 CP331648較佳。 可視情況與本文所述之化合物組合使用之脂肪酶抑制劑 的實例包括奥利司他或ATL-962(Alizyme)，且奥利司他較 佳。 可視情況與式I之化合物組合使用的血清素（及多巴胺）再 吸收抑制劑可為西布曲明（sibutramine)、托ϋ比酉旨 (top iramate)( Johns on & Johnson)或阿索開（axokine) (Regeneron)，且西布曲明及托吡酯較佳。 可視情況與本文所述之化合物組合使用之甲狀腺受體β 化合物的實例包括甲狀腺受體配位體，諸如WO 97/21993(U. Cal SF)、WO 99/00353(KaroBio)及 WO 00/ 039077(KaroBio)中所揭示者，且KaroBio申請案中之化合 物較佳。 120897.doc 186- 200813095 可視情況與本文所述之化合物組合使用之抗劑的 實例包括CB-1拮抗劑及利莫納班（rim〇nabant) (SR141716A) 〇 NPY-Y2及NPY-Y4受體促效劑之實例分別包括ργγ(3 ·3 6) 及胰腺多肽（PP)。 可視情況與本文所述之化合物組合使用之減食慾劑包括 右旋安非他明（dexamphetamine)、笨丁胺（phentemine)、 苯丙醇胺（phenylpropan〇iamine)或馬吲哚（mazind〇l)，且右 旋安非他明較佳。 適當抗精神病劑的實例包括氣氮平（clozapine)、氟哌啶 醇（halopendol)、奥氮平（olanzapine)(Zyprexa,、扣⑧ 及阿立哌唑（aripipraz〇le)(Abilify(D)。 上文所提及之專利及專利申請案均係以引用之方式併入 本文中。 當與本文所述之化合物組合使用時，上述其他治療劑可 如上述專利中例如以醫師桌上手冊（physieian，s以呔
Reference)所指示之量或一般熟習此項技術者另外確定之 量使用。 劑量及調配物 可向患者投與作為單獨化合物或與可接受之載劑混合成 醫藥調配物形式之式I的適當肽或更尤其包含犯卩NO 任-者的肽以治療糖尿病及其他相關疾病。二· 糖尿病治療技術者可易於確定向需要此治療之哺乳動^ (包括人類）投與化合物之劑量及途徑。投藥途徑可包括（但 120897.doc -187- 200813095 不限於）經口、口内、直腸、經皮、口腔、鼻内、肺、皮 下、肌内、皮内、舌下、結腸内、眼内、靜脈内或經腸投 藥。化合物係基於可接受之醫藥實踐根據投藥途徑調配 (Fingl專人，"The Pharmacological Basis of Therapeutics，，， 第 1 早’第 1 頁’ 1975 ; HRemington，s Pharmaceutical
Sciences ，弟 18 版，Mack Publishing Co，Easton，PA， 1990)。 本文所述之醫藥學上可接受之肽組合物可以多劑量形式 投與’諸如旋劑、膠囊（各膠囊均包括持續釋放或定時釋 放之調配物）、丸劑、散劑、顆粒劑、酏劑、原位凝膠、 微球體、結晶複合物、脂質體、微乳液、酊劑、懸浮液、 糖漿、氣霧劑噴霧及乳液。本文所述之組合物亦可以經 口、靜脈内（團注或輸注）、腹膜内、皮下、經皮或肌内形 式投與，均使用一般熟習醫藥技術者熟知之劑型。可單獨 投與組合物，但一般將與基於所選投藥途徑及標準醫藥實 踐而選擇之醫藥載劑一起投與。 /於本文所述之組合物之劑量方案當然將視已知因素而 定’諸如特定藥劑之藥效特徵及其投藥模式及途徑；接受 者之物種、年齡、性別、健康情況、醫療條件及體重；症 狀之性質及程度；同步治療之種類；治療頻率；投藥途 \患者之腎臟及肝臟功能；及所需作用。醫師或獸醫可 確定並處方預防、對抗或 乂|止疾病狀態之進程所需的藥物 有效量。 根據一般服藥指引，當用於所指 田用％尸/Γ才日不之作用時，活性成分 120897.doc 200813095 之每曰口服劑量將在每公斤體重約〇 〇〇1至1〇〇〇 mg之範圍 内，較佳介於每天每公斤體重約〇 〇1至1〇〇 mg之間，且最
佳介於約0.6至20 mg/kg/day之間。當經靜脈内投與用於所 指不之作用時，活性成分之每日劑量在恆定輸注速率期間 將在每分鐘每公斤體重介於〇·〇〇1 ng至1〇〇 〇 ng之間之範圍 内。此恆定靜脈内輸注可較佳以每分鐘每公斤體重〇.〇1 % 至50 ng之速率且最佳以每分鐘每公斤體重〇〇ι叫至1〇〇 mg之速率投與。本文所述之組合物可以單一每日劑量投 :，或可以每日兩次、三次或四次分劑量投與總每日劑 s °本文所述之組合物亦可藉由將視需要允許經數天/數 週/數月持續釋放藥物的儲槽式調配物投與。 本文所述之組合物可經由使用適當鼻内媒劑以鼻内形式 或使用經皮皮膚貼片經由經皮途徑投與。#以經皮傳遞系 =之形式投與時，劑量投與在整個劑量方案中當然將為持 、’、貝而非間歇投與。 、，且5物通常係以與針對敎投藥形式（即，經口錠劑、 2糖=有或無推進劑之情況下所產生的氣霧劑喷 稀釋Π醫藥實踐相符而適當選擇之適當醫藥 混合物形式投與。 轉為醫樂载劑）形成的 舉例而言，對於以錠劑或膠囊形式經 藥物組份可與經口、無毒、醫藥.學上 活性 :編如(但不限於)乳糖、搬粉、蔗糖、葡萄糖、 甲基纖維素、硬脂酸鎂、磷酸氫 硫酸鈣、甘露糖醇及 120897.doc 200813095 山梨糖醇；對於以液體开 可與任何經σ、無毒、：:：投與而言，經口藥物組份 該載劑料㈣二ΓΓ 受之™彳組合， 必要時，亦可將適當之黏二甘油及水。此外，當需要或 併入混合物中。適==、潤滑劑、崩解劑及著色劑 ^ . 田、D角丨丨包括（但不限於）澱粉、明膠、 天=(=(但不限於）葡萄糖或β_乳糖）、玉米甜味劑、
( 船:切㈣（諸如’阿拉伯膠、黃箸膠或海藻酸 f基纖維素、聚乙二醇及蠟。用於此等劑型中之 賴㈣括油酸納、硬脂酸鈉、硬脂酸鐫、苯甲酸納、乙 I鈉及虱化鈉。崩解劑包括(但不限於)澱粉、甲基纖維 素、瓊脂、膨潤土及三仙膠。 /本文斤述之組合物亦可以混合微胞或脂質體傳遞系統之 化式投與諸如單層小微脂粒、單層大微脂粒及多層微脂 粒。脂質體可由多種磷脂（諸如膽固醇、硬脂酿基胺或構 月曰4k膽驗）形成。可添加滲透增強劑以增強藥物吸收。 由於已知前藥可增強醫藥之多_ f品質（即，溶解 f生生物利用度、製造等），故本文所述之化合物可以前 藥形式傳遞。因此，本文所述之標的物擬涵蓋當前所主張 之化合物之前藥、傳遞該等前藥之方法及含有該等前藥之 組合物。 本文所述之組合物亦可與作為可靶向之藥物載劑之水溶 性聚合物偶合。此等聚合物可包括聚乙烯基·吡咯啶酮、 旅喃共聚物、聚說基丙基-甲基丙婦醯胺-紛、聚經基乙基 天冬醯fe紛或經軟脂醯基殘基取代之聚氧化乙烯_聚離胺 120897.doc -190- 200813095 酸。此外，本文所述之組合物可與用於達成藥物之控制釋 放之-類生物可降解聚合物組合，例如聚乳酸、聚乙醇 酸、聚乳酸與聚乙醇酸之共聚物、聚ε己内酯、聚羥基丁 酸、聚原酸酯、聚縮醛、聚二氫哌喃、聚氰基丙烯酸醋及 水凝膠之交聯或兩性嵌段共聚物。 一適於投藥之劑型(醫藥組合物)可含有每劑量單位約〇〇1 宅克至約500毫克活性成分。在此等醫藥組合物中，活性 成分通常以該組合物之總重量計約〇 5_95重量。乂的量存 明膠膠囊可含有活性成分及粉末狀載劑，諸如乳糖、澱 粉、纖維素衍生物、硬脂酸鎮及硬脂酸。可使用類似稀釋 劑，造壓縮鍵劑。鍵劑與膠囊均可製為持續釋放之產物以 勺=物持:釋放達數小時。壓縮鍵劑可經糖包覆或經薄膜 匕覆以掩蔽任何令人不摘岐 塑，十甘_ 未k，並防止錠劑受空氣影 β 5 〃可經腸包覆以在胃腸道中選擇性崩解。 或=投與之液體劑型可含有增加患者接受度之著色劑 溶液1:二;Γ油、生理鹽水、右旋糖(葡萄糖)水 久和關糖〉谷液及二醇類（諾 _ 於非經腸溶液之適當载劑 ：5聚乙二醇)為用 有活性成分之水溶2適:腸投與之溶液較佳含 抗氧化劑(諸如單獨或組合之二且:要時緩衝物質。 壞血酸)為適當之穩定… 亞硫酸鈉或抗
鈉。此外 β ’、使用檸檬酸及其鹽及EDTA ’非經腸溶液可含有防腐劑，諸如氯化苯甲烴 120897.d〇( 200813095 錢、對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯及氯丁醇。 適當之醫藥載劑描述於Remington:，，The Science and Practice of Pharmacy’，，Nineteenth Edition，Mack Publishing Company，1995，即此領域之標準參考文獻中。 用於投與本文所述之化合物之代表性有用醫藥劑型可描 述如下： 膠囊 /
大$單位膠囊可藉由用1〇〇毫克粉末狀活性成分、15〇亳 克礼糖、50毫克纖維素及6毫克硬脂酸鎂填充標準兩件式 硬明膠膠囊來製備。 軟明膠膠囊 可製備活性成分於可消化油(諸如大豆油、棉籽油或撖 欖油）中之混合物，且藉助正排量泵將其注入明膠中以步 成含㈣〇毫克活性成分之軟明膠膠囊。該等膠囊應” 滌及乾燥。 錠劑 狄劑可藉由習知棄呈& ; m 一 私序予以製備，因此劑量單位例如 1 〇〇毫克活性成分、〇.2毫克 、、、 糕、W ^ $驗狀—乳切、5¾克硬脂酸 、、 笔克微晶纖維素、1 1毫克澱伞、；5 Q 8 8古士 ^ 1兄版粉及98.8耄克乳糖。 …、敷適虽包衣以增加可口性或延緩吸收。 可注射物 本文所述之肽組合物的可注射調 (諸如已經管理機構批准者)” ”…吏用賦形劑 包括㈣限於)溶:丨及:^或:不需要使用。此等賦形劑 “洛劑、增溶劑、乳化劑或增铜 120897.doc •192· 200813095 劑、餐合劑、抗氧化劑及還原劑、抗菌防腐劑、緩衝劑及 pH值調節劑、增積劑、保護劑及毒性調節劑及特殊添加 劑。可注射調配物須無菌、無熱原質且在溶液之情況下無 顆粒狀物質。 適於注射投與之非經腸組合物可藉由例如在醫藥學上可 接受之緩衝劑中攪拌1>5重量％活性成分來製備，該緩衝劑 可含有共溶劑或其他賦形劑或可不含有共溶劑或其他賦形 劑。應使該溶液與氯化鈉等滲且將其滅菌。 懸浮液 :製備經口及/或非經腸投與之水性懸浮液，從而例如 使每5机含有100 mg細粉狀活性成分、20 mg羧甲基纖維 素鈉、5 mg苯甲酸鈉、1〇 g山梨糖醇溶液（usp)及〇〇25 mL香蘭素或其他可口調味劑。 生物可降解微粒 可例如藉由將適當生物可降解聚合物溶解於溶劑中，將 待併入之活性成分添加至該聚合物溶液中且將溶劑自基質 中移除從而形成活性劑分布於整個基質中的聚合物基質來 製備適於經注射投與的持續釋放非經腸組合物。 根據上述教示，可能對本文所述及主張之標的物進行多 種修改及變更n應瞭解在隨时請專利範圍之範嘴 内’可實行除本文特別描述外之中請專利範圍中所述之標 的物。 主 習 申請專利範圍中所述之樟的必脸丁 a 張 铩的物將不會限制意欲作為所 之標的物之單一實施例你： J所述的特定實施例之範疇。熟 120897.doc -193 - 200813095 此項技術者將自前文描述及隨附圖式中對除本文所示及描 述之方法及組份外之功能等價的方法及組份顯而易見。預 期此等修改在隨附申請專利範圍之範疇内。本文所引用之 所有參考文獻均係以其全文引用之方式併入本文中。 【圖式簡單說明】 圖1描述皮下注射化合物I對〇b/〇b小鼠於ipGTT中之血糖 之作用。 圖2描述皮下注射化合物1對〇b/〇b小鼠於ipGTT中之血漿 胰島素之作用。 圖3描述皮下注射SEQ ID NO: 9之化合物對ob/ob小鼠於 ipGTT中之血糖之作用。 圖4描述皮下注射SEQ ID NO: 9之化合物對〇b/〇b小鼠於 ipGTT中之血漿胰島素之作用。 圖5描述皮下注射SEQ m NO: 118之化合物對〇b/〇b小鼠 於ipGTT中之血糖之作用。 圖6描述皮下注射SEq ID N〇: 151之化合物對〇b/〇b小鼠 於ipGTT中之金糖之作用。 圖7描述皮下注射SEQ ID NO: 151之化合物對〇b/ob小鼠 於ipGTT中之血漿胰島素之作用。 圖8描述皮下注射SEQ ID NO·· 15 8之化合物對ob/ob小氣 於ipGTT中之血糖之作用。 圖9描述皮下注射SEQ ID NO·· 15 8之化合物對ob/ob小氣 於ipGTT中之企漿騰島素之作用。 120897.doc • 194-

Claims (1)

  1. 200813095 十、申請專利範圍： 1· 一種經分離之多肽，其包含式I之序列： Xaal-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaal〇-Xaall 式I 其中： Xaal為包含咪唑或噻唑環之天然存在或非天然存在的 胺基酸，諸如組胺酸或噻唑基丙胺酸；其中該胺基酸之 任一碳原子係視情況經氫及一或多個烷基或一或多個鹵 基取代；其中該胺基酸之游離胺基可經羥基或烧氧基置 換’或視情況經烷基、醯基、苯甲醯基、烷氧羰基、曱 氧基羰基、芳氧基羰基、芳烷氧基羰基、雜環基氧基羰 基、雜芳基烷氧羰基、烷基胺甲醯基、芳基胺甲醯基、 芳烷基胺甲醯基、雜環基磺醯基、烷基磺醯基、芳基磺 醯基、芳基烷基磺醯基、雜芳基烷基磺醯基或雜芳基磺 醯基取代； 且其中xaal之胺基視情況不存在，使得Xaai為組胺酸或 噻唑基丙胺酸之脫胺基酸，其中任一碳原子係任一碳原 子係視情況經烷基、齒基或羥基取代； Xaa2為選自由以下組成之群之天然存在或非天然存在 的胺基酸：α_胺基-異丁酸（Aib)、（1〇_丙胺酸、D_丙胺 酉文N-甲基丙胺酸、N-甲基丙胺酸、（l)_脯胺 酸、⑻-α-曱基-脯胺酸[a-Me-Pro]、（L)_吖丁啶（Azt)、 (S)-a-甲基_吖丁啶（心M卜Azt)、（L)_纈胺酸及（^_或 異纈胺酸，且其中該胺基酸中之碳原子視情況經一或多 120897.doc 200813095 個烧基或_基取代； Xaa3為包含有含叛酸之胺基酸側鏈之天然存在或非天 然存在的胺基酸’諸如天冬胺酸或麵胺酸；且其中該胺 基酸中任一碳原子係視情況經一或多個烷基或齒基取 代； Xaa4為甘胺酸； Xaa5為選自由以下組成之群之天然存在或非天然存在 的胺基酸：（L)-蘇胺酸、（L)-別蘇胺酸、（L)_絲胺酸、 (L)-正纟領胺酸、（L)-正白胺酸；且其中該胺基酸中之任一 石反原子係視情況經一或多個烧基或_基取代； Xaa6為包含經雙取代之(X碳之天然存在或非天然存在的 胺基酸；其中該胺基酸之側鏈中的一者含有芳族或雜芳 族環，例如α-甲基苯丙胺酸、α_甲基_2-氟苯丙胺酸及α_ 甲基-2,6-二氟苯丙胺酸； 其中该胺基酸中之任一碳原子係視情況經一或多個烷 基取代；且其中該胺基酸中之任一碳原子係視情況經一 或多個鹵基取代； Xaa7為包含經羥基取代之胺基酸侧鏈之天然存在或非 天」存在的胺基酸，諸如L-蘇胺酸或別蘇胺酸；其中 該胺基酸中之任-碳原子係視情況經—或多個烧基或函 基取代； Xaa8為選自由L-絲胺酸、L_組胺酸及^天冬醯胺酸組 成之群之天然存在或非天然存在的胺基酸；其中該胺基 酸中之—或多個碳原子視情況經—或多個燒基或齒基取 120897.doc 200813095 代； Xaa9為包含含有羧酸之胺基酸側鏈之天然存在或非天 然存在的胺基酸，諸如L_天冬胺酸或^麩胺酸；其中該 胺基&C中之一或多個碳原子視情況經一或多個烷基或鹵 基取代； XaalG為天然存在或非天然存在的式II、III或IV之胺基 酸；
    其中R3、R4及R0各自選自由以下組成之群：氫、烷 基、甲基、乙基、芳基、雜環基、雜芳基、齒素、經 基、㈣基、氰基、胺基、胺基烧基、㈣n = 基、烷氧基、甲氧基、芳氧基、羧醯胺、經取代羧醯 胺、烷基酯、芳基酯、烷基磺醯基及芳基磺醯基； 且 其中Xl、X2、X3、X4及χ5各自為C或N，其限制條件 120897.doc , 200813095 為·· Χι、X2、χ3、 Xaal 基酸； X4及X5中至少一者為n ; 1為天然存在岑 4并天然存在的式Ila、Ilia或iva之胺
    其中該胺基酸之C終端羰基碳與氮連接形成羧醯胺 (NH2)、烷基羧醯胺（NHD或二烧基羧醯胺（NRiR2); 其中心及化2之每一者為烷基或芳基烷基；
    其中Rh、R々a及R6a各自選自由以下組成之群：氫、燒 基、芳基、雜環基、雜芳基、鹵素、羥基、羥烷基、氛 基、胺基、胺基炫基、叛基、魏基烧基、烧氧基、甲氧 基、芳氧基、羧醯胺、經取代羧醯胺、烷基酯、芳基 酯、烷基磺醯基及芳基磺醯基； 其中R7係選自由氫、曱基及乙基組成之群； 其中Xi、X2、X3、X4及X5各自為C或N，其限制條件 為：Χι、X2、X3、X4及X5中至少一者為N ;且 120897.doc 200813095 其中當xaalG為式π之胺基酸時’ Xaau不為式ιι&之胺基 酸。 土 2·如請求们之經分離多肽’其中Xaai。為天然存在或非天 然存在之式II之胺基酸。 3. 如請求項丨之經分離多肽，其中Xaal0為天然存在或非天 然存在之式ΠΙ之胺基酸。 4. 如請求項丄之經分離多肽，其中Xaall為天然存在或非天 然存在之式ZVa之胺基酸。 5·如凊求項i之經分離多肽，其中該χ…係選自由、 D-HiS、L-N-曱基 _His、D-N_f 基_仙、L4 噻唑基 “a、 D-4-噻唑基Ala、脫胺基_His、脫胺基·噻唑基八丨&、3_ (1^咪唑_4_基）-2-甲基丙醯基及（8)_3_(111-咪唑_4_基）-2-經基丙醯基（L-β-咪唑乳醯基）組成之群；且 其中若存在終端胺基，則該終端胺基視情況經氫、烧 基、一烧基、醯基、苯曱醯基、烧氧幾基、甲氧基罗炭 : 基、芳氧基羰基、芳烷氧基羰基、雜環基氧基羰基、雜 方基燒氧幾基、烧基胺甲酿基、芳基胺甲酿基、芳烧基 月女甲醯基、雜環基石黃醢基、烧基續醯基、芳基續酿基、 芳基烷基磺醯基、雜芳基烷基磺醯基或雜芳基磺醯基取 代。 6.如請求項1之經分離多肽，其中該xaa2係選自由L-Ala、 D-Ala、N-甲基-L-Ala、N-甲基-D-Ala、L-Pro、（s)-a-甲 基-L_Pro(a-Me_Pro)、（L)-吖丁啶（Azt)、（S)_a_ 甲基 _口丫丁 啶（a-Me_Azt)及a-胺基異丁酸（Aib)組成之群。 120897.doc 200813095 如明求項1之經分離多肽，其中該Xaa3係選自由L-Glu、 L-Asp和L-Gla組成之群。 8·如明求項丨之經分離多肽，其中該Xau為。 9·如明求項！之經分離多肽，其中該係選自由二_丁心、 L Nle、L-Nva、L-A〇c和 L-別 _Thr組成之群。 10·如明求項i之經分離多肽，其中該Xaa6係選自由L_a_Me_ phe、L-a-Et_Phe、 Phe、L-a-Me-2,3-二
    L-a_Me_2_ 氟-Phe、L-a-Me-3-氟-氟-Phe、L-a-Me-2,6-二氟-Phe和 L-a· Me_Phe(五-氟）組成之群。 11·如睛求項1之經分離多肽，其中該別蘇 胺酸。 12.如請求項1之經分離多肽，其中該Xaa8係選自由 L-His和L-Asn組成之群。 13·如請求之經分離多肽，其中該 14·如請求項丄之經分離多肽，其中χ^〇為天然存在或非天 然存在之式II之胺基酸，其另外經式VI定義：
    其中’ R3係選自由烧基及鹵素組成之群；且 R6係選自由羥基及曱氧基組成之群。 1 5 ·如請求項2之經分離多肽，其中該天然存在 ^丄、 隹或非天然存 在之式11之胺基酸係選自由以下組成之群·、 崎· H(4，-曱氧 120897.doc 200813095 4-[(4’-曱氧基-2’-甲基）苯基]苯 基- 2’ -乙基）-苯基]苯丙胺酸 苯丙胺酸 4_[(4匕乙氧基_2，_乙基）苯基] 丙胺酸、4- [(4’-乙氧基-2’-曱基）苯基]笨丙胺酸、4·(2，·乙基苯基）苯 丙胺酸' 4-(2’-甲基苯基）苯丙胺酸、4_[(3，，5，_二甲基）苯 基]苯丙胺酸 4-[(3*，4’-二甲氧基）苯基]苯丙胺酸及4· [(2、乙基-4’-經基）苯基]苯丙胺酸。 16.如請求項1之經分離多肽，其中X ，、T人以11為天然存在或非天
    然存在之式IVa之胺基酸，其另外經式VIa定義：
    其中係選自由甲基、乙基及氟組成之群；且其中^ 係選自由氫及甲基組成之群。 ‘
    17.如請求項1之經分離多肽，其中Xaan為天然存在或非天 然存在之式IVa之胺基酸，其另外經式VHa定義：
    其中為甲氧基；且 R7係選自由氫及甲基組成之群。 18·如請求項3之經分離多肽，其中該天然存在或非天然存 120897.doc 200813095 在之式πι之胺基酸係選自由以下組成之群：4_[2、4，_甲 氧基-6’-乙基）_吡啶基]苯丙胺酸、4_[2，_(4，·甲氧基曱 吡啶基]-4-苯丙胺酸、4_[2，_(6，_乙基）吡啶基]苯丙胺 酸、Μ2’_(6，-甲基）π比啶基]苯丙胺酸、4_[2，_(3，，5，_二甲其） 吡啶基]苯丙胺酸、4-[2，-(4，-甲氧基-6，_乙基）吡啶基]苯2 胺酸、4-[3，-(4，-曱氧基-6，-甲基）吼啶基]苯丙胺酸、4_[3,_ (2’-乙基）吡啶基]苯丙胺酸及4-[3，_(6，_甲基）π比啶基）苯丙 胺酸。 19. 如請求項1之經分離多肽，其中該心㈣為天然存在或非 天然存在之式IV之胺基酸。 20. 如請求項19之經分離多肽，其中該天然存在或非天然存 在之式iv之胺基酸係選自由以下組成之群：4_[(4，_甲氧 基- 2’ -乙基）_苯基]比唆基丙胺酸、4-[(4，-甲氧基_2，-甲 基）苯基]-3-吼啶基丙胺酸、4-(2，-乙基苯基）_3-„比咬基丙 胺酸、4-(2’·甲基苯基定基丙胺酸、4-[(3，，5，-二甲 基）苯基比啶基丙胺酸及4-[(2，-乙基-4，-羥基）苯基卜3_ 巧匕σ定基丙胺酸。 21. 如請求項1之經分離多肽，其中該xaall為天然存在或非 天然存在之該式Ila之胺基酸。 22·如請求項21之經分離多肽，其中該天然存在或非天然存 在之式Ila之胺基酸係選自由以下組成之群·· 4-(2，-甲基 苯基:l·苯丙胺酸、4-(2’-氟苯基）苯丙胺酸、4-(2，-氯苯基） 苯丙胺酸及4·[(3·，4^二曱氧基）苯基]苯丙胺酸及4-[(3，，5，-二甲基）苯基]苯丙胺酸； 120897.doc 200813095 其中該胺基酸之c終端羰基碳與氮連接形成羧醯胺、 烷基羧醯胺（NHR〗）或二烷基羧醯胺（NR!R2)，其中及 R2之每一者為烷基或芳基烷基； 且其中尺7係選自由氫及甲基組成之群。 23·如請求項1之經分離多肽，其中該Xaali為天然存在或非 天然存在之該式Ilia之胺基酸。 24·如請求項23之經分離多肽，其中該天然存在或非天然存 在之式Ilia之胺基酸係選自由以下組成之群：4-[(6，_甲 基）-2’-吡啶基]苯丙胺酸、4-[(6，-曱基）-3，-吡啶基]苯丙胺 酸、4-[(6，-乙基）-2，-吡啶基）]笨丙胺酸及4-[(6，-乙基）_3，_ 吡啶基）]笨丙胺酸； 其中該胺基酸之C終端幾基碳與氮連接形成緩醯胺、 烧基羧醯胺（NHRO或二烷基羧醯胺（NH)，其中Ri及 R2之每一者為烷基或芳基烷基； 且其中117係選自由氫及曱基組成之群。 25·如請求項4之經分離多肽，其中該天然存在或非天然存 在之式IVa之胺基酸係選自由以下組成之群：4·(2，_甲基 苯基）-3-吡啶基丙胺酸、4-(2，-氟苯基吡啶基丙胺 酸、4-[(3’，5’-二曱基）苯基]-3-°比淀基丙胺酸、(4，-:氣 甲基苯基）-3-处啶基丙胺酸及4-(2，-乙基笨基）_3_n比咬基 丙胺酸。 26.如請求項1之經分離多肽，其中： xaai 為選自由 L-His、D-His、L-N-甲基-His、D-N-甲 基-His、L_a-甲基·Ηίδ、D —心甲基-His、L_4_噻唑基丙胺 120897.doc 200813095 酸、D-4-噻唑基丙胺酸、脫胺基七。、脫胺基_噻唑基丙 胺酸、3-(1Η-咪唑-4-基）-2·甲基丙醯基、（s)-3-(lH-咪唑-4·基）-2-餐基丙醯基（L_p_咪唑乳醯基）、（R)·及（s)-3-(1/f_ 咪唑-4-基）-2-曱氧基丙醯基組成之群的胺基酸； 其中若存在終端胺基，則該終端胺基視情況經氫、烷 基、醯基、苯甲醯基、烷氧羰基（例如，甲氧基羰基）、 芳氧基幾基、芳烷氧基羰基、雜環基氧基羰基、雜芳基 烧氧幾基、烷基胺甲醯基、芳基胺甲醯基、芳烷基胺甲 醯基、雜環基磺醯基、烷基磺醯基、芳基磺醯基、芳基 烧基磺酸基、雜芳基烷基磺醯基或雜芳基磺醯基取代； Xaa2 為選自由 L-Ala、D-Ala、N-甲基-L-Ala、N-甲基· D-Ala、L-Pro、（S)-a-甲基-脯胺酸[a-Me-Pro]、（L)-吖丁 口定（Azt)、（S)-a-甲基吖丁口定（a-Me-Azt)及α·胺基異丁酸 (Aib)組成之群的胺基酸； Xaa3為選自由L-Glu、L-Asp及L-Gla組成之群之胺基 酸； Xaa4為選自由Gly組成之群的胺基酸； X*a5 為選自由 L-Thr、L-Nle、L-Nva、L-Aoc 及 L-別-Thr組成之群之胺基酸； Xa“為選自由 L-cx-Me-Phe、L-a-Et-Phe、L-a-Me-2-氟-Phe、L-a-Me_3-氟 _Phe、L-a_Me-2,3_二氟-Phe、L-a-Me_ 2,6·二氟-Phe及L-a-Me-Phe(五-氟）組成之群之胺基酸； Xaa7為選自由L-Thr及L-別蘇胺酸組成之群之胺基酸； Xaa8為選自由L-Ser、L-His及L-Asn組成之群之胺基 120897.doc -10- 200813095 酸； Xaa9 為 L-Asp ; XaalO為選自由式II、III及IV之胺基酸組成之群之天然 存在或非天然存在的胺基酸； 其中式II為選自由以下組成之群之胺基酸：4_[(4，_甲 氧基-2f-乙基）苯基]苯丙胺酸、4-[(2，-乙基_4，_羥基）苯基] 苯丙胺酸、4-[(4，·乙氧基-2，-乙基）苯基]苯丙胺酸、仁 [(V-曱氧基-2’-曱基）苯基]苯丙胺酸、4-[(4，_乙氧基-2，·甲 基）苯基]苯丙胺酸、4-(2，-乙基苯基）苯丙胺酸、4-(2，-甲 基苯基）苯丙胺酸、4-[(3，，5，-二曱基）苯基]苯丙胺酸及4-[(3’，4’-二甲氧基）苯基]苯丙胺酸； 其中式III為選自由以下組成之群之胺基酸：4-[2，-(4，-曱氧基-6’-乙基）吡啶基]苯丙胺酸、4-[2，-(4，-甲氧基-6，-甲基）σ比啶基]-4-苯丙胺酸、4-[2’-(6，-乙基）吼啶基]苯丙 胺酸、4-[2匕（6’-甲基）吡啶基]苯丙胺酸、4-[2，-(3，，5，-二甲 基）吡啶基]苯丙胺酸、4-[2，-(4，-曱氧基-6，-乙基）吼啶基] 苯丙胺酸、4-[3’-(4*-曱氧基-6’-甲基）吡啶基]苯丙胺酸、 4-[3’·（2’-乙基户比啶基]苯丙胺酸及4_[3，-(6，-甲基）吼啶基） 苯丙胺酸； 其中式IV為選自由以下組成之群之胺基酸：4-[(4匕曱 氧基-2’-乙基）苯基]-3-吼啶基丙胺酸、4-[(4·-甲氧基-2·-甲基）苯基]-3-咕啶基丙胺酸、4-(2*-乙基苯基）-3-π比啶基 丙胺酸、4-(2^曱基苯基）_3-吡啶基丙胺酸及4-[(3’，5’-二 甲基）苯基]-3-吡啶基丙胺酸； 120897.doc 200813095 且 Xaaii為選自由式Ila、IIIa>^IVa之胺基酸組成之群之天 然存在或非天然存在的胺基酸； 其中式Ila為選自由以下組成之群之胺基酸·· 4，_(2_甲 基苯基）苯丙胺酸、4，-(2，-氟苯基）苯丙胺酸及4-[(3，，5，-二 曱基）苯基]苯丙胺酸； 其中式Ilia為選自由以下組成之群之胺基酸：4_(6，_甲 基-2’-吡啶基）苯丙胺酸、4_(6，_甲基_2，-吡啶基）苯丙胺 酸、4-(6’-乙基-2’-吡啶基）苯丙胺酸及4-(6，-乙基_3, ·吡啶 基）苯丙胺酸； 其中式IVa為選自由以下組成之群之胺基酸：甲 基苯基）-3-吼啶基丙胺酸、4_(2，_氟苯基）_3_π比啶基丙胺 酸、4-[(3，，5，_二甲基）苯基]-3_吡啶基丙胺酸、仁（4，_三氟 甲基苯基）-3-吼啶基丙胺酸及4-(2，-乙基苯基）-3-吨啶基 丙胺酸； 其中該C終端羰基碳與氮連接形成竣醯胺（Nh2)、烧基 魏醯胺（NHR!)或二烧基緩醯胺（NRA2)，其中r〗及以2之 每一者為烷基或芳基烷基； 且其中R7係選自由氳及甲基組成之群；且 其中當Xaal〇為式II之胺基酸時’ Xaal丨不為式Ha之胺基 酸。 27.如請求項i之經分離多肽，其係選自由以下組成之群： 120897.doc -12- 200813095 SEQID No. Xaa 1 Xaa 2 Xaa 3 Xaa 4 Xaa 5 Xaa 6 Xaa 7 Xaa 8 Xaa 9 Xaa 10 Xaall-NH2 133 脫 nh2 -His (S)-a- Me- Pro E G T L-a-Me- Phe(2- 氟） T s D Bip(2'-Et- 4，-OMe) 4-(2f-甲基苯基)-3- 吡啶基丙胺酸- nh2 134 脫 nh2 -His (S)-ct- Me- Pro E G T L-a-Me- Phe(2,6- 二氟） T s D Bip(2f-Et- 4’-OMe) 4-(2’-曱基苯基)-3-吡啶基丙胺酸- nh2 135 脫 nh2 -His (S)-a- Me- Pro E G T L-a-Me- Phe(2- 氟） T s D Bip(2，-Et-4 丨-OMe) 4-(2’-氣苯基)-3-外匕 咬基丙胺酸-NH2 136 脫 nh2 -His (S)-a- Me- Pro E G T L-a-Me- Phe(2- 氟） T s D Bip(2 丨-Et-4，-OMe) 4-(3’-曱氧基苯基)-3-吡啶基丙胺酸· nh2 137 (R)- Imp Aib E G T L-a-Me- Phe(2- 氟） T s D Bip(2'-Et- 4f-OMe) 4-(2’-甲基苯基)-3- 吡啶基丙胺酸- nh2 138 (S)- Imp Aib E G T L-a-Me- Phe(2- 氟） T s D Bip(2，-Et- 4'-OMe) 4-(T-曱基苯基)-3- 吡啶基丙胺酸- nh2 139 ch3 0- CO- His (S)-a- Me- Pro E G T L-a-Me- Phe(2- 氟） T s D Bip(2'-Et- 4’-OMe) 4-(2^曱基苯基)-3-吡啶基丙胺酸- nh2 140 ch3 0- CO- His (S)-ot- Me- Pro E G T L-a-Me- Phe(2,6- 二氟） T s D Bip(2，-Et- 4’-OMe) 4-(2’-曱基苯基)-3-°比咬基丙胺酸- nh2 141 ch3 0- CO- His N-Me- (D)- Ala E G T L-a-Me- Phe(2- 氟） T s D Bip(2’-Et-4 丨-OMe) 4-(2’-曱基苯基)-3-°比咬基丙胺酸- nh2 142 ch3 0- CO- His N-Me- (D)- Ala E G T L-a-Me- Phe(2,6- 二氟） T s D Bip(2’-Et-4 丨-OMe) 4-(2·-曱基苯基)-3-吡啶基丙胺酸- nh2 143 ch3 S02- His (S)-oc- Me- Pro E G T L-a-Me- Phe(2- 氟） T s D Bip(2 丨-Et-4'-OMe) 4-(Τ-曱基苯基)-3· 吡啶基丙胺酸- νη2 144 ch3 S02- His (S)-a- Me- Pro E G T L-a-Me- Phe(2?6- 二氟） T s D Bip(2，-Et-4 丨-OMe) 4-0-曱基苯基)-3-°比咬基丙胺酸- nh2 145 L-乳 醯 基- His (S)-ot- Me- Pro E G T L-a-Me- Phe(2- 氟） T s D Bip(2'-Et- 4，-OMe) 4-(2^曱基苯基)-3-°比咬基丙胺酸- nh2 120897.doc -13- 200813095 SEQID No. Xaa 1 Xaa 2 Xaa 3 Xaa 4 Xaa 5 Xaa 6 Xaa 7 Xaa 8 Xaa 9 Xaa 10 Xaall-NH2 146 L-乳 醯 基- His (S)-a- Me- Pro E G T L-a-Me- Phe(2,6- 二氟） T S D Bip(2，-Et- 4，-OMe) 4-(2’-曱基苯基)-3- 吡啶基丙胺酸- nh2 151 L-β· 咪 口坐_ 乳醯 基 (S)-a- Me- Pro E G T L-a-Me- Phe(2- 氟） T H D Bip(2，-Et- 4’-OMe) 4_(2’-曱基苯基)-3- °比唆基丙胺酸- nh2 152 L-β- 咪 口坐- 乳醯 基 (S)-a- Me_ Pro E G T L-a-Me- Phe(2- 氟） T S D Bip(2 丨-Et-4，-OMe) 4-(2’-曱基苯基)-3-吡啶基丙胺酸- nh2 153 L-β- 咪 口坐- 乳醯 基 (S)-a- Me- Pro E G T L-a-Me- Phe(2- 氟） T H D Bip(2，-Et- 4'-OH) 4-(2’·甲基苯基)-3-°比咬基丙胺酸- nh2 154 L-β- 咪 〇坐_ 乳醯 基 (S)-a- Me- Pro E G T L-a-Me- Phe(2- 氟） T S D Bip(2 丨-Et-4，-OH) 4-(2’_甲基苯基θα 比咬基 丙胺酸- νη2 155 L-β- 咪 口坐_ 乳醯 基 N-Me- D-Ala E G T L-a-Me- Phe(2- 氟） T H D Bip(2 丨-Et-4’_OMe) 4-(2’-曱基苯基)-3- ^比咬基丙胺酸- nh2 156 L-β- 咪 口坐_ 乳醯 基 N-Me· D-Ala E G T L-a-Me- Phe(2- 氟） T S D Bip(2’-Et-4 丨-OMe) 4-(2f-曱基苯基)-3-°比咬基丙胺酸- nh2 157 ch3 0- CO- His (S)-a- Me- Pro E G T L-a-Me- Phe(2- 氟） T H D Bip(2，-Et- 4’-OH) 4-(2'-曱基苯基)-3-吡啶基丙胺酸- nh2 158 ch3 0- CO- His (S)-a- Me- Pro E G T L-a-Me- Phe(2- 氟） T S D Bip(2，-Et-4 丨-OH) 4-(2·-曱基苯基)-3-π比咬基丙胺酸- νη2 120897.doc .14- 200813095 SEQID No. Xaa 1 Xaa 2 Xaa 3 Xaa 4 Xaa 5 Xaa 6 Xaa 7 Xaa 8 Xaa 9 Xaa 10 Xaall-NH2 159 ch3 0- co- His N-Me- D-Ala E G T L-oi-Mc- Phe(2_ 氟） T H D Bip(2'-Et-4 丨-OH) 4-(T-甲基苯基)-3-吡啶基丙胺酸- nh2 160 ch3 0- CO- His N-Me- D-Ala E G T L-a-Me- Phe(2- 氟） T s D Bip(2，-Et- 4f-OH) 4-(2·-曱基苯基)-3- 吼°定基丙胺酸- nh2 161 ch3 0- CO- His Aib E G T L-a-Me- Phe(2- 氟） T H D Bip(2f-Et- 4f-OH) 4-(2’-曱基苯基)-3-σ比咬基丙胺酸-ΝΗ2 ;及 162 ch3 0- CO- His Aib E G T L-a-Me- Phe(2- 氟） T s D Bip(2，-Et- 4，-OH) 4-(2，-曱基苯基)-3-吡啶基丙胺酸- nh2 163 L-β- 咪 口坐_ 乳醯 基 N-Me- D-Ala E G T L-a-Me- Phe(2- 氟） T H D Bip(2，-Et-4 丨-OH) 4-(2’-曱基苯基)-3-吼°定基丙胺酸- nh2 164 ch3 0- co- His (S)-a- Me- Pro E G T L-a-Me- Phe(2- 氟） T S D Bip(2，-Et- 4-(2’-曱基苯基)-3- 吼σ定基丙胺酸- νη2 165 脫 nh2 -His (S)-a- Me- Pro E G T L-a-Me- Phe(2- 氟） T S D Bip(2，-Et- 4'-OH) 4-(2’-曱基苯基)-3- 吼咬基丙胺酸- nh2 166 脫 nh2 -His (S)-a- Me- Pro E G T L-a-Me- Phe(2- 氟） T H D Bip(2，-Et- 4'-OH) 4-(2’-甲基苯基)-3-°比咬基丙胺酸- nh2 167 (R)_ Imp (S)-a- Me- Pro E G T L-a-Me- Phe(2- 氟） T S D Bip(2f-Et- 4'-OH) 4-(2’-甲基苯基)-3-°比咬基丙胺酸· nh2 168 (S)· Imp (S)-a- Me- Pro E G T L-a-Me- Phe(2- 氟） T S D Bip(2'-Et-4 丨-OH) 4-(2’-甲基苯基)-3-吡啶基丙胺酸· nh2 169 (R)- Imp (S)-a- Me- Pro E G T L-a-Me- Phe(2- 氟） T H D Bip(2'-Et- 4’-OH) 4-(2f-甲基苯基)-3-°比咬基丙胺酸- nh2 170 (S)- Imp (S)-a- Me- Pro E G T L-a-Me- Phe(2- 氟） T H D Bip(2 丨-Et-4’-OH) 4-(2’-甲基苯基)-3-°比咬基丙胺酸- nh2 171 (R)- IMe 〇P (S)-a- Me- Pro E G T L-a-Me- Phe(2- 氟） T H D Bip(2’-Et- 4'-OMe) 4-(2f-曱基苯基θα 比咬基 丙胺酸- νη2 120897.doc -15- 200813095 SEQID No. Xaa 1 Xaa 2 Xaa 3 Xaa 4 Xaa 5 Xaa 6 Xaa 7 Xaa 8 Xaa 9 Xaa 10 Xaall-NH2 172 (S)- IMe 〇P (S)_a- Me- Pro E G T L-a-Me- Phe(2- 氟） T H p Bip(2，-Et- 4'-OMe) 4-(2’-曱基苯基)-3- σ比咬基丙胺酸· νη2 173 (R)_ IMe 〇P (S)-a_ Me- Pro E G T L-a-Me- Phe(2- 氟） T S D Bip(2，-Et- 4’-OH) 4-(2’-曱基苯基)-3-°比咬基丙胺酸- nh2 174 (S)- IMe 〇P (S)-a- Me- Pro E G T L-a-Me- Phe(2- 氟） T S D Bip(2'-Et- 4，-OH) 4-(2’-曱基苯基)-3-°比咬基丙胺酸- nh2 175 (R)- IMe 〇P (S)-a- Me- Pro E G T L-a-Me- Phe(2- 氟） T H D Bip(2，-Et-4 丨-OH) 4-(2^曱基苯基)-3-σ比咬基丙胺酸-ΝΗ2，及 176 (S)- IMe 〇P (S)-a- Me- Pro E G T L-a-Me- Phe(2- 氟） T H D Bip(2，-Et-4 丨-OH) 4-(2’-甲基苯基)-3- 吡啶基丙胺酸- nh2 28. —種選自由以下物質組成之群之經分離多肽： SEQID N〇.——. Xaal Xaa2 Xaa 3 Xaa 4 Xaa 5 Xaa6 χΓ 7 xl 8 xl 9 Xaa 10 Xaall-NH2 151. L-β-咪 。坐-乳酿 基 (S)-a- Me- Pro E G T L-ot-Me-Phe(2-氟） T H O~ Bip(2'-Et- 4'-OMe) 4-(2’-曱基苯 基)-3-ϋ比σ定基丙 胺酸-ΝΗ2 152. L-β-咪 唑-乳醯 基 (S)-a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T s D Bip(2'-Et- 4’-OMe) 4-(2’-甲基苯 基)-3-σΐίΐ咬基丙 胺酸-νη2 153. L-β-咪 唾-乳醯 基 (S)-a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T H D Bip(2'-Et- 4'-OH) 4-(2’-甲基苯 基)-3-σΛσ定基丙 胺酸-νη2 154. L-β-咪 唾-乳醢 基 (S)-a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T S D Bip(2'-Et-4 丨-OH) 4-(2’-甲基苯 基)-3-σ比咬基丙 胺酸-νη2 155. L-β-咪 唾·乳醯 基 N-Me- D-Ala E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T H D Bip(2f-Et- 4f-OMe) 4-(2’·曱基苯 基)-3-吼咬基丙 胺酸-νη2 156. L-β-咪 唑-乳醯 基 N-Me- D-Ala E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T S D Bip(2'-Et- 4'-OMe) 4-(2·-甲基苯 基)-3·ϋ比咬基丙 胺酸-ΝΗ2 157. ch3o- CO-His (S)-a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2,氟） T H D Bip(2f-Et- 4，-OH) 4W-甲基苯 基)-3-^比咬基丙 胺酸-ΝΗ2 158. ch3o- CO-His (S)-a- Me- Pro E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T S D Bip(2 丨-Et-4，-OH) 4-(2^甲基苯 基)-3-nit咬基丙 胺酸-nh2 120897.doc -16- 200813095 SEQ ID No. Xaal Xaa2 Xaa 3 Xaa 4 Xaa 5 Xaa6 Xaa 7 Xaa 8 Xaa 9 Xaa 10 Xaall-NH2 | 159. ch3o- CO-His N-Me- D-Ala E G T L-a-Me- T H D Bip(2，-Et-4 丨-OH) 4-(2’-甲基苯 基)-3-ntb咬基丙 胺酸-nh2 160. ch3o- CO-His N-Me- D-Ala E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T S D Bip(2’-Et-4 丨-OH) 4-(2^甲基苯 基)-3-°比咬基丙 胺酸-NH2 161. ch3o_ CO-His Aib E G T L-a-Me-Phe(2·氟） T H D Bip(2'-Et- 4，-OH) 4-(2’-曱基苯 基)-3-吡啶基丙 胺酸-NH2 ;且 162. ch3o- CO-His Aib E G T L-a-Me-Phe(2-氟） T S D Bip(2'-Et-4 丨-OH) 4-(2’-甲基苯 基)-3-°比唆基丙 胺酸-NH2 ( 29. —種經分離多肽，其中該經分離多肽包含：
    3 0. —種醫藥組合物，其包含式I之經分離多肽或包含SEQ ID NO: 1-1 57及159-179中任一肽的多肽及其醫藥學上可 接受之載劑。 31. —種醫藥組合，其包含式I之經分離多肽或包含SEQ ID NO: 1-1 57及159-179中任一肽的多肽，及至少一種選自 120897.doc -17- 200813095 由以下組成之群之治療劑： _ ^ 抗糖尿病劑、抗肥胖劑、抗 高血星劑、抗動脈粥樣硬化劑及降脂質劑。 32.如請求項31之組合，其中該抗糖尿病劑為至少一種選自 由以下組成之群的藥劑：雙胍、磺醯脲、葡糖苦酶抑制 刈PPAR γ促效劑、ppAR α/γ雙重促效劑、？2抑制劑、 DPP4抑制劑、騰島素增敏劑、姨高血糖素樣肽聯ρ_ 1)胰島素、SGLT-2抑制劑、GPR119調節劑及美格列奈 (meglitinide) 〇 33·如請求項32之組合，其中該抗糖尿病劑為至少一種選自 由以下組成之群的藥劑：二曱雙胍（metf〇rmin)、格列本 脲（glyburide)、格列美脲（giimepiride)、格列比脲 (glipyride) 格列σ比嗪（glipizide)、氯石黃丙腺 (chlorpropamide)、格列齊特（gliclazide)、阿卡波糖 (acarbose)、 米格列醇（miglitol)、 吡格列酮 (pioglitazone)、曲格列 _ (troglitazone)、羅格列酮 (rosiglitazone)、胰島素、法吉利他（farglitizar)、伊沙列 酮（isaglitazone)、瑞吉利他（reglitizar)、巴拉列酮 (balaglitazone)、CAS RN: 335 149·08_1、（Ζ)·1，4-雙{4-[(3,5-二側氧基-1，2,4-噁二唑啶-2-基）曱基]笨氧基}丁-2-稀、瑞沃列酮（Hvoglitazone)、rafaegron、瑞格列奈 (repaglinide)、那格列奈（nateglinide)、（S)-2-苯甲基-4-側氧基-4-(順-全氫異吲哚-2-基）丁酸鈣鹽、替格利他 (tesaglitizar)、L-苯丙胺酸、Ν_[(1Ζ)-1·曱基-3·側氧基- 3-苯基-1-丙烯基]-4-[3-(5-甲基-2-苯基-4-噁唑基）丙基]、 120897.doc -18 - 200813095 苯甲醯胺、5-[(2,4-二側氧基-5-噻唑啶基）甲基]_2_甲氧 基N [[4-(二氟甲基）本基]曱基]、依克那肽、 ^了-胰高血糖素樣肽…人類卜义^七^咪唑-心基^· 側氧基丙基]-26-L-精胺酸-34-[Ν6-(1-側氧基辛基）-L-離 胺酸]、8-36-胰高血糖素相關肽丨（灌叢八齒鼠（〇ct〇d〇n 心gus))、Ν·[3-(1Η-咪唑-4_基）-卜側氧基丙基]_26_L精胺 酸-34-|^6-(1-側氧基辛基）-1^離胺酸]-36&及維格列汀 (vildagliptin) 〇 34.如請求項3 !之組合，其中該抗肥胖劑為至少一種選自由 以下組成之群的藥劑：CB-1拮抗劑或反向促效劑、¥2受 體促效劑、Y4受體促效劑、β3腎上腺素能促效劑、脂肪 酶抑制劑、血清素再吸收抑制劑、多巴胺再吸收抑制 劑、血清素及多巴胺再吸收抑制劑、甲狀腺受體β化合 物及減食慾劑。 3 5.如請求項34之組合，其中該抗肥胖劑為至少一種選自由 以下組成之群的藥劑：利莫納班卜化⑽^⑽^；)、]^!^ 0364、SLV-319、奥利司他（oriistat)、西替利斯他 (cetilistat)、瑞法瑞吉（rafabregon)、苯石黃醯胺、N-[4_[2-[[(2S)-3-[(6_胺基-3-吼啶基）氧基]-2-羥丙基]胺基]乙基] 苯基]-4_(1_甲基乙基）、苯磺醯胺、n-[4-[2-[[3-[(6-胺基_ 3-啦啶基）氧基]-2-羥丙基]胺基]乙基]苯基]_4-(1_甲基乙 基）-(S)CAS RN:335149-25-2、西布曲明（sibutramine)、 托吡酯（topiramate)、阿索開（ax〇kine)、右旋安非他明 (dexamphetamine)、芬特明（phentermine)、苯基丙醇胺 120897.doc -19- 200813095 (phenylpropan〇iamine)及馬吲哚（mazind〇i)。 36.如請求項31之組合，其中該降脂質劑為至少-種選自由 以下組成之群的藥劑：Μτρ抑制劑、膽固醇酯轉移蛋 白、HMGCoA還原酶抑制劑、角諸合成酶抑制劑、纖 維酸衍生物、LDL㈣活性上調劑、脂肪加氧酶抑制劑 或AC AT抑制劑。 37·如請求項36之組合，其中該降脂質劑為至少一種選自由 以下組成之群的藥劑：普伐他汀（pravastatin)、洛伐他汀 (lovastatm)、辛伐他汁（simvastatin)、阿托伐他汀 (atorvastatin)、西立伐他汀、氟伐他汀 (fluvastatin)、尼伐他汀（nisvastatin)、維塞他汀 (visastatin)、非諾貝特、吉非貝齊 (gemflbr〇Zll)、氯貝酸鹽（clofibrate)、阿伐麥布 (avaS1mibe)、乙醯胺、义[2,6_雙（1_甲基乙基）苯基卜2-(十四烷基硫基）-、1(311)_異苯幷呋喃酮、3_(13 -羥基-10- 側氧基十四燒基）_5,7-二甲氧基、托徹普（t〇rcetrapib)及 (3 α，4 α，5 α)-4-(2-丙烯基膽留烷醇）。 38· —種式I之經分離多肽或包含SEq m NO 1-179中任一者 之狀的用途’其係用於製造供治療需要治療之哺乳動物 物種的以下疾病或延緩其進程或發作的藥物··糖尿病、 糖尿病性視網膜病變、糖尿病神經病變、糖尿病腎病、 創傷癒合、胰島素抵抗、高血糖症、高胰島素血症、χ 症候群、糖尿病併發症、升高之游離脂肪酸或甘油血液 含ϊ、尚脂質血症、肥胖症、高甘油三酯血症、動脈粥 120897.doc 200813095 樣硬化或高血壓。 39.如請求項38之用途，其另 效量之一或多種選自由以 病劑、抗肥胖劑、抗高血 脂質劑。 外包含同時或依序投與治療有 下組成之群的治療劑：抗糖尿 壓劑及抗動脈粥樣硬化劑及降 40·如請求項39之用途，其中·· 該抗糖尿病劑為至少一種選自由以下組成之群的藥 劑：雙胍、4醯腺、葡糖苦酶抑制劑、PPAR 7促效劑、 PPAR α/γ雙重促效劑、p2抑制劑、Dpp4抑制劑、騰島素 增敏劑、騰高血糖素樣肽-1(GUM)、胰島素、犯叫抑 制劑、GPR119調節劑及美格列奈； 其中該抗糖尿病劑進一步定義為至少一種選自由以下 組成之群的藥劑：二甲雙脈、格列本脲、格列美脲、格 列比脲、格列吡嗪、氯磺丙脲、格列齊特、阿卡波糖、 米格列醇、呢格列酮、曲格列酮、羅格列酮、胰島素、 法吉利他、伊沙列酮、瑞吉利他、巴拉列酮、cAS RN: 335149-08-1、（z)-l，4-雙{4-[(3,5_二側氧基-^，肛噁二唑 啶-2-基）甲基]苯氧基}丁 烯、瑞沃列酮、rafaegr〇n、 瑞格列奈、那格列奈、（S)_2_苯甲基_4_側氧基_4_(順_全 氫異叫卜朵-2-基）丁酸鈣鹽、替格利他、L_苯丙胺酸、N_ [(1Z)-1-曱基-3-侧氧基·3·苯基-1-丙烯基]_4-[3-(5·曱基-2-苯基-4-噁唑基）丙基])、苯甲醯胺、5_[(2,4-二側氧基 噻嗅咬基）曱基]-2-曱氧基-Ν-[[4-(三氟甲基）苯基]曱基]、 依克那肽、8-37-胰高血糖素樣肽_；[(人類）、Ν-[3-(1Η-咪 120897.doc -21 - 200813095 坐基）-l-侧氧基丙基]_26-L-精胺酸-34-[Ν6·(Κ側氧美 辛基）-L-離胺酸]、8-36-胰高血糖素相關肽丨（灌叢八齒 鼠）、Ν-[3·(1Η-咪唑·4-基）-卜側氧基丙基卜26虬_精胺酸· 34-[Ν6-(1-側氧基辛基）_L_離胺酸>36a及維格列汀； 其中該抗肥胖劑為至少一種選自由以下組成之群的藥 劑·· CB-1拮抗劑或反向促效劑、γ2受體促效劑、γ4受 體促效劑、β3腎上腺素能促效劑、脂肪酶抑制劑、血清 素再吸收抑制劑、多巴胺再吸收抑制劑、血清素及多巴 胺再吸收抑制劑、甲狀腺受體β化合物及減食慾劑；其 中該抗肥胖劑進一步定義為至少一種選自由以下組成之 •群的藥劑：利莫納班、ΜΚ-0364、SLV-319、奥利司他、 西替利斯他、瑞法瑞吉、苯磺醯胺、Ν-[4-[2吖[(2s>_3_ [(6-胺基-3-吼啶基）氧基]-2-羥丙基]胺基]乙基]苯基]_4· (1-曱基乙基）、苯磺醯胺、Ν_[4·[2_[[3·[(6_胺基_3_d比啶 基）氧基]-2-羥丙基]胺基]乙基]苯基]_4_(1_曱基乙基）·（8) CAS RN:335 149-25-2、西布曲明、托π比g旨、阿索開、右 旋安非他明、芬特明、苯基丙醇胺及馬吲哚； 其中該降脂質劑為至少一種選自由以下組成之群的藥 劑：MTP抑制劑、膽固醇酯轉移蛋白、HMG CoA還原酶 抑制劑、角鯊烯合成酶抑制劑、纖維酸衍生物、LDL受 體活性上調劑、脂肪加氧酶抑制劑或ACAT抑制劑；且 其中該降脂質劑進一步定義為至少一種選自由以下組成 之群的藥劑：普伐他汀、洛伐他汀、辛伐他汀、阿托伐 他汀、西立伐他汀 '氟伐他汀、尼伐他汀、維塞他汀、 120897.doc -22- 200813095 非忐貝特、吉非貝齊、氯貝酸鹽、阿伐麥布、乙醯胺、 [2’6_雙（1^甲基乙基）苯基]·2-(十四烷基硫基）-、1(3H)· 異笨幷呋喃酮、3-(13-羥基-10-側氧基十四烷基）-5,7•二 氧基托祕普及（3α，4α，5α)-4·(2-丙烯基膽留院_3_ 醇）。 41· 一種包含以下結構之化合物：
    中Ρ為氣或苐基曱氧基幾基或第三丁氧基罗炭 基（t-BocO;且其中Rsa係選自由甲基、乙基及氟組成之 群；且其中R?係選自由氫及甲基組成之群。 42. —種包含以下結構之化合物：
    八中p為氫或苐基甲氧基羰基（Fm〇c)或第三丁氧基羰 基（t-B0C)，且其中為甲氧基；且其中&係選自由氫及 甲基組成之群。 43·如請求項1之經分離多肽，其中： Xaal為L-組胺酸且其中Xw之胺基未經取代； Xaa2係選自由以下組成之群： 120897.doc -23- 200813095
    Xaa3為L-麩胺酸或組胺酸； Xaa4為甘胺酸； Xaa5為L-蘇胺酸； X—係選自由以下組成之群：
    X a a 7為L -穌^胺酸； XaaS係選自由以下組成之群：
    Xaa8 =：、〜 Ο Xaa9為L-天冬胺酸； XaalG為天然存在或非天然存在之式II之胺基酸，其中 该天然存I或非天然存在之式狀胺基酸係冑自由以下 組成之群：
    其中Xaa11為天然存在或非天然存在之式IVa之胺基 酉夂其中該天然存在或非天然存在之式Μ之胺基酸係選 自由以下組成之群： 120897.doc -24- 200813095
    且
    Ri及I係選自由氫及甲基組成之群。 44·如請求項丨之經分離多肽，其中乂…係選自以下群組
    Xaa2係選自以下群組： 玢如％ — Xaa3為L·麩胺酸或L_組胺酸；為甘胺酸；為l_ 蘇胺酸；xaa0係選自以下群組：
    Xaa7為L·蘇胺酸 Xaa8係選自以下群組：
    Xaa9為L-天冬胺酸； XaalG為天然存在或非天然存在之式13[之胺基酸，其中 5亥天然存在或非天然存在之式II之胺基酸係選自以下群 120897.doc -25 - 200813095
    把”中Xaa11為天然存在或非天然存在之式IVa之胺基 酉夂其中該天然存在或非天然存在之式IVa之胺基酸係選 自以下群組： U
    45·如請求項1之經分離多肽，其中Xaal為： Rg—HN
    0 且 R8係選自由以下組成之群 .ch3 -ch3 -ch2ch3 ch3 ο Xaa2係選自由以下組成之群 Xaa2 A HN
    ¥ Xaa3為L·麵胺酸或L-組胺酸； 120897.doc -26 - 200813095 Xaa4為甘胺酸； Xaa5為L-鍊胺酸； Xaa6係選自由以下組成之群：
    XaaS係選自由以下組成之群
    Ο
    Xaa9為L-天冬胺酸； XaalG為天然存在或非天然存在之式π之胺基酸，其中
    "亥天存在或非天然存在之式II之胺基酸係選自由以下 組成之群： Λ
    XaaU為天然存在或非天然存在之式IVa之胺基酸，其 …$存在或非天然存在之式IVa之胺基酸係選自由以 下組成之群： 120897.doc -27- 200813095
    且其中1^及117係選自由氫及甲基組成之群。 46.如請求項1之經分離多肽，其中Xaal為
    且R9係選自由以下組成之群：氫及甲基； a a 2 係選自由以下組成之群： Xaa2 HN
    Xaa3 為L-麩胺酸或L-組胺酸； Xaa4為甘胺酸； Xaa5為L-鍊胺酸；
    Xaa6係選自由以下組成之群：
    Xaa7為L'l束胺酸； Xaa8係選自由以下組成之群： 120897.doc -28- 200813095
    Xaa9為L-天冬胺酸； XaalG為天然存在或非天然存在之式Η之胺基酸，其中 該天然存在或非天然存在之式胺基酸係選自以下群
    Xaan為天然存在或非天然存在之式之胺基酸，其 中/天八、丨存在或非天然存在之式IVa之胺基酸係選自以下 群組：
    且其中心及汉7係選自由氫及甲基組成之群。 47· — 種多肽’其包含序列 Thr_Ser-Asp_Bip(2-Et_4，_〇H)-吡 啶基丙胺酸（SEQ Π) N〇: 177)，其中該多肽結合並活化 GLP-1受體。 48.如清求項47之多肽，其中該多肽另外包含脯胺酸。 49·如請求項48之多肽，其中該脯胺酸為來自胺基終端殘基 120897.doc •29- 200813095 之第二個殘基且其為α甲基脯胺酸。 5〇·如明求項47之多肽，其中該吡啶基丙胺酸為4_(2，_甲基苯 基）3-%啶基丙胺酸。 51·如睛求項47之多肽，其中該多肽另外包含胺基終端胺基 甲酸酯。 52·如凊求項47之多肽，其中該Thr-Ser-Asp -Bip(2-Et-4-OH)_ 比ϋ疋基丙胺酸殘基分別在該多肽之第七位、第八位、第 九位及第十位’且其中第二位包含α甲基脯胺酸。 53· 士明求項47之多肽，其中該多肽為包含SEq 1〇 no: ι58 之肽。 54· —種包含SEQIDN〇: 158之多肽。 55· -種醫藥組合物’其包含聊m慨158之經分離多肽 及其醫藥學上可接受之載劑。 56.種w藥組合，其包含SEQ ID NO: 158之經分離多肽及 至夕種選自由以下組成之群之治療劑：抗糠尿病劑、 抗肥胖劑、抗高血壓劑、抗動脈粥樣硬化劑及降脂質 劑。 57_ 士叫求項56之組合，其中該抗糖尿病劑為至少一種選自 由以下組成之群的藥劑：雙胍、磺醯脲、葡糠苷酶抑制 hJ PPAR γ促效劑、ppAR α/γ雙重促效劑、抑制劑、 DPP4抑制劑、騰島素增敏劑、胰高血糖素樣肽-1(GLP- U胰島素、SGLT-2抑制劑、GPRU9調節劑及美格列 奈。 5 8·如吻求項57之組合，其中該抗糖尿病劑為至少一種選自 120897.doc •30- 200813095 由以下組成之群的藥劑··二甲雙胍、格列本脲、格列美 脲、格列比脲、格列吡嗪、氯磺丙脲、格列齊特、阿卡 波糖、米格列醇、吡格列酮、曲格列酮、羅格列_、胰 島素、法吉利他、伊沙列酮、瑞吉利他、巴拉列酮、 CAS RN: 335U9-H、（2)]，4_雙{心[(3,5_二側氧基· 1，2,4-噁二唑啶-2_基）甲基]苯氧基丨丁-2-烯、瑞沃列酮、 rafaegron、瑞袼列奈、那格列奈、（s)_2_苯甲基_4_侧氧 基-4·(順-全氫異吲哚_2_基）丁酸鈣鹽、替格利他、^苯 丙胺酸、N_[(1Z)_1-甲基-3-側氧基_3·苯基丙烯基]_4· [3-(5-甲基-2-苯基-4-噁唑基）丙基；|、苯甲醯胺、5-[(2,4_ 二側氧基-5-噻唑啶基）曱基]_2_甲氧基_n_[[4_(三氟甲基） 苯基]曱基]、依克那肽、8-3 7-胰高血糖素樣肽“（人類）、 Ν-[3-(1Η-咪嗤-4-基）小側氧基丙基卜26_^精胺酸_34_ [N6-(l-側氧基辛基）-L_離胺酸]、8_36_胰高血糖素相關肽 1(灌叢八齒鼠）、义[3-(111-咪唑-4-基）-1_侧氧基丙基]_26-L-精胺酸·34-[Ν6-(1-側氧基辛基離胺酸]_36a及維格 列汀。 59·如請求項56之組合，其中該抗肥胖劑為至少一種選自由 以下組成之群的藥劑：CB-丨拮抗劑或反向促效劑、¥2受 體促效劑、Y4受體促效劑、β3腎上腺素能促效劑、脂肪 _抑制劑、血清素再吸收抑制劑、多巴胺再吸收抑制 劑、血清素及多巴胺再吸收抑制劑、甲狀腺受體β化合 物及減食慾劑。 60·如請求項59之組合，其中該抗肥胖劑為至少一種選自由 120897.doc •31 - 200813095 以下組成之群的藥劑··利莫納班、MK_〇364、sLv_m 奥利司他、西替利斯他、瑞法瑞吉、苯磺醯胺、N_[4 [2-[[(2S)-3-[(6_胺基·34啶基）氧基]_2_經丙基]胺基]乙 基]苯基]-4-(1-甲基乙基）、苯磺醯胺、ν_[4_[2_[[3_[(6_胺 基-3-吼°疋基）氧基]_2_羥丙基]胺基]乙基]苯基]—‘（I·甲基 乙基Hs)cASRN:335149_25_2、西布曲明、托心旨、阿 索開、右旋安非他明、芬特明、苯基丙醇胺及馬吲哚。 “.如請求項56之組合，其中該降脂質劑為至少一種選自由 以下組成之群的藥劑：Μτρ抑制劑、膽固醇醋轉移蛋 白、HMG CoA還原酶抑制劑、角驚稀合成酶抑制劑 '纖 、准西夂何生物、LDL受體活性上調劑、脂肪加氧酶抑制劑 或AC AT抑制劑。 62.如吻求項61之組合，其中該降脂質劑為至少一種選自由 以下組成之群的藥劑：普伐他汀、洛伐他〉、丁、辛伐他 江、阿托伐他汀、西立伐他>、了、氟伐他>、T、尼伐他;丁、
    維塞他汀、非諾貝特、士 & θ^ 、口非貝背、氣貝酸鹽、阿伐麥 布、乙酿胺、Ν-[2,6·雙（1_甲基乙基）苯基]_2_(十四貌其 硫基）-、1(3Η)-異苯幷咬喃明、3_(13_經基_1〇_側 四烷基）-5,7-二甲氧基、托 土十 基膽留烷-3-醇）。 ^ 120897.doc -32-
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