TW200803872A - Compositions comprising fucoidan or a fucoidan hydrolysate and an immuno-stimulating material - Google Patents

Description

200803872 (1) 九、發明說明 【發明所屬之技術領域】 本發明係以含有岩藻依聚醣或岩藻依聚醣水解生成物 與免疫賦活原料之免疫力增強、免疫功能之調節等爲目的 之可利用於飮食品、醫藥品、健康食品、功能性食品、化 粧品等組成物。 【先前技術】 免疫賦活原料 近年來健康食品之領域中，具有免疫賦活作用之原料 受到注目’已開發出多數含有彼等之健康食品。這些使用 於因高齡或壓力、疾病等之免疫力降低的回復等之目的 上。作爲如此原料，例如可含有乳酸菌（乳酸球菌、乳酸 桿菌）、酵母菌、真菌類之微生物；香菇、舞菇、靈芝、 巴西磨菇等覃類；海藻類；中藥等。 乳酸菌 上述免疫賦活原料之中，乳酸菌之免疫賦活作用受到 注目’有關一部份的乳酸菌，已有NK( Natural Killer ) 活性之增強作用或Thl/Th2平衡之改善作用等之報告。 又’乳酸菌於過去即提供於飮食用上且已知其安全性亦 高。因此’乳酸菌可望使用於免疫力下降之回復手段上。 欲提高乳酸菌之免疫賦活作用的效果，僅增加飮食品 中之乳酸菌含量即可。然而，若將多量的乳酸菌添加於飲 -5- 200803872 (2) 料時會有產生沈澱之問題。因此，作爲至今使用於乳酸菌 飲食品，幾乎大部份爲如醃漬物的固體物質、或產生沈殿 亦可之飮食品（例如優格或乳飲料）。又，例如如優格， 藉由發酵來增加乳酸菌時，乳酸菌的數目達到一定量時則 '無法再增加，故飲食品中的乳酸菌含量之增加有著極限。 -且，製造發酵食品以外不僅功能，其發酵的程度、發酵後 之香味、發酵後之乳酸菌數等皆爲必須考慮的因素。因 此，使用乳酸菌之功能性飲食品，特別爲開發免疫功能調 節爲目的之功能性發酵飲食品時，必須使用發酵特性優 良，且免疫功能調節作用亦優良之乳酸菌。然而，乳酸菌 之發酵特性與免疫功能調節作用完全無關，故探索乳酸菌 並非容易的事。 近年來欲提高乳酸菌等之免疫賦活原料的活性，已有 數種方法之報告。例如，已有混合培養3〜8種之乳酸菌 或酵母時可增強免疫賦活作用之報告（專利文獻i)、或 並用乳酸菌與蕈類可增強免疫賦活作用之方法（專利文獻 2)等報告。 岩藻依聚醣及岩藻依聚醣水解生成物 ' 已有岩藻依聚醣爲含於藻類之硫酸化多醣，抗血液凝 固作用、脂血澄清作用（除去血中膽固醇或過氧化脂質之 作用）、抗腫瘤作用、癌轉移抑制作用、抗愛滋病病毒感 染作用等種種活性之報告。其中，活體的免疫功能之正常 化作用受到注目，可適用於具有免疫功能調節作用之醫藥 -6 - 200803872 (3) 品或健康食品的原料。然而，岩藻依聚醣爲分子量極大之 硫酸化多醣’直接使用於飲食品或醫藥品等時，有著吸收 性、抗原性、均一性、抗凝血活性等之相關問題。 欲解決這些問題，已嘗試由岩藻依聚醣得到低分子化 合物。例如’至今已有藉由化學合成之含有岩藻糖的寡糖 (非專利文獻1、2及3 )，這些因由有機合成反應所調製 出’故不適合使用於食品等上。 另一方面’已有報告指出水解岩藻依聚醣使岩藻依聚 醣低分子化之方法。例如可舉出專利文獻3中揭示酸水解 岩藻依聚醣之方法，所得之低分子岩藻依聚醣具有5xl03 以下的分子量分布，專利文獻4中記載，無須由外部添加 酸而水解岩藻依聚醣得到寡糖之方法。又，藉由如專利文 獻5中記載之酵素水解岩藻依聚醣之方法。 〔專利文獻1〕特開2005-6 8092 〔專利文獻2〕特開2004-5 1 504 〔專利文獻3〕特開平7-2 1 5990 〔專利文獻4〕特開2002-226496 〔專利文獻5〕特開2000-23 68 89 〔非專利文獻 1〕Carbohydrate research 4，189-195 (1967) 〔非專利文獻 2〕Carbohydrate research 3 7，75-79 (1974) 〔非專利文獻 3〕 Carbohydrate research 41， 3 0 8-3 1 2 (1975) 200803872 ⑷ 【發明內容】 〔解決發明之課題〕 然而，專利文獻1及2之方法係爲組合任一不溶性原 料之方法，但無法防止沈澱產生。又，對於可提高乳酸菌 以外之免疫賦活原料的活性之原料，至今尙未被檢討。 因此，僅爲免疫賦活原料或可相乘性提高乳酸菌活性 之水溶性原料，可開發具有較強效能之免疫功能調節劑或 飮食品，維持活性下亦可減少免疫賦活原料或乳酸菌之使 用量，結果可推廣免疫賦活原料或含有乳酸菌之食品的開 發範圍。且，亦減輕探索兼具良好發酵特性與免疫功能調 節作用之乳酸菌之負擔。又，考慮到食品或醫藥品之用途 時，該物質必須爲安全性高且簡便下可製造者。 因此，本發明的目的爲藉由組合免疫賦活原料提供一 種可增強彼等免疫功能調節作用之物質。 且，所謂免疫功能調節作用，例如其並非如木寡糖可 改善腸内細菌叢善而間接地調整免疫功能，係如數種岩藻 依聚醣所示可直接活化免疫擔當細胞。 本發明的另一目的爲，提供一種以正確的效果量添加 於飮食品或醫藥組成物中之組成物。 〔解決課題之方法〕 本發明者發現組合岩藻依聚醣或岩藻依聚醣之酸水解 生成物，較佳爲組合寡糖與任意之乳酸菌或免疫賦活原料 -8- 200803872 (5) 時可相乘性地增強免疫功能調節或免疫賦活活性，而完成 本發明。本發明中來自岩藻依聚醣之這些寡糖亦稱爲岩藻 依寡糖。 即，本發明爲， (1) 一種組成物，其特徵爲含有岩藻依聚醣或岩藻 依聚醣水解生成物與免疫賦活原料者。 (2 )如（1 )之組成物，其中該水解生成物由將岩藻 依聚醣以0.1〜6.0N的酸，於25〜100 °C下進行0.25〜2.5 小時之水解所得者。 (3 )如（2 )之組成物，其中該水解生成物由將岩藻 依聚醣以〇·5〜4.0N的酸，於30〜90°C下進行0·5〜2.0小 時之水解所得者。 (4 )如（1 )至（3 )中任一項之組成物，其中該水 解於鹽酸或硫酸下進行。 (5 )如（1 )至（4 )中任一項之組成物，其中該水 解生成物爲寡糖。 (6 )如（5 )之組成物，其中該寡糖爲至少一種選自 ， 岩藻糖、硫酸化岩藻糖、乙醯化岩藻糖、及葡糖醛酸所成 群之糖所構成的雙糖至五糖之寡醣。 (7 )如（6 )之組成物，其中作爲該寡醣含有至少一 種選自下述結構式（I ) 、 （ II ) 、 （ III ) 、 （ IV )、 (V) 、 （VI) 、 （VII) 、 （VIII) 、 （IX) 、 （X)及 (XI)所示化合物； 200803872 (6)

[化1] COOH

OH HO ⑴ (分子量3 4 0)

[化2] COOH

(分子量4 8 6)

OH (II) [化3]

(III) HOgSO^*^

OH (分子量3 9 0 ) [化4]

COOH

(分子量4 2 0) 200803872 (7) [化5]

COOH

OH (V) (分子量5 6 6 )

(分子量7 5 4) (VII) 200803872 (8) [化8]

OH (VIII) (分子量8 0 8) [化9]

(分子量8 5 0) (IX) [化 ίο]

(分子量8 5 8) -12-

200803872 (9) OH

(XI) (8 )如（1 )至（7 )中任一項之組成物，其中該免 疫賦活原料爲至少一種選自如乳酸菌、酵母菌、真菌類之 微生物；香薛、舞薛（Maitake )、靈芝、巴西磨蘇 (agaricus)等蕈類；如含有CpGmotif之免疫原性寡脫氧 核酸（CpG-ODN) 、Pol yI:C之來自核酸的物質；酯多醣 (LPS )、卢-葡聚醣；海藻糖；中藥；如MM46癌抗原之 癌症疫苗；伴刀豆球蛋白 A ( conA );如Churesten (註 冊商標）、〇K-432 (Picibanil、註冊商標）、Lentinan 註 冊商標）之BRM (生物反應調節劑）。 (9 )如（8 )之組成物，其中該免疫賦活原料爲乳酸 菌。 (1 〇 ) —種免疫功能調節劑，其特徵爲含有如（1 ) 至（9 )中任一項之組成物。 (1 1 ) 一種飮食品，其特徵爲添加如（1 )至（9 )中 任一項之組成物。 (12) —種飮食品，其特徵爲含有如（1)至（9)中 -13- 200803872 do) 任一項之組成物，附有記載含免疫功能調節作用之主旨的 飮食品。 (1 3 ) —種醫藥組成物，其特徵爲含有如（1 )至 (9 )中任一項之組成物。 (14 ) 一種化粧品，其特徵爲含有如（1 )至（9 )中 -任一項之組成物。 〔發明的效果〕 本發明的岩藻依聚醣或其水解生成物與免疫賦活原料 之組合、與單獨使用彼等時作比較，其具有相乘性增強之 免疫功能調節或免疫賦活作用。因此，可開發出比使用至 今的免疫賦活原料之飲食品或醫藥品更高效果之製品。 又’因其有較高效果，故可減少對免疫賦活原料的飮食 品、醫藥品、化粧品之添加量。 這些優點爲，作爲免疫賦活原料使用乳酸菌時特別重 要。例如可舉出水溶性之較低乳酸菌，僅可減少其添加量 即可防止其沈澱。又，可省略兼具免疫賦活活性與較佳發 酵特性之乳酸囷之飾選過程。作爲結果，有利推動含乳酸 菌之製品的開發。 又’本發明的組成物構成要件之岩藻依聚醣或其水解 生成物因係由食品原料所分離者，故作用緩和作用，安全 性極高。 因此，本發明組成物非常有用，其應用範圍不僅於飲 食品上，亦適用於醫藥品及化粧品上。 14- 200803872 (11) 又，作爲寡糖可藉由使用含有至少一種選自上述結構 式（I) 、（ II) 、( III) 、( IV) 、( V) 、( VI )、 (VII) 、（VIII) 、（IX) 、（ X)及（XI)所示的化合 物可簡便且正確地品質管理。又，這些來自岩藻依聚醣之 寡糖爲低分子故容易處理且可簡單地製造，安全性亦高， • 將這些寡糖與免疫賦活原料組合之組成物可使用於飮食品 或醫藥品等種種用途上。 免疫賦活原料 免疫賦活原料係爲具有增強動物之免疫反應力之原 料，亦稱爲免疫強化原料。本發明所使用的免疫賦活原料 並無特別限定，但可舉出如乳酸菌（乳酸球菌、乳酸桿 菌）、酵母菌、真菌類之微生物；香菇、舞菇、靈芝、巴 西磨菇等覃類；含有如CpGmotif之免疫原性寡脫氧核酸 (CpG-ODN ) 、Polyl : C之來自核酸之物質；脂多醣 (LPS ) •，海藻類；中藥；癌疫苗（例如可舉出MM46癌 抗原）；伴刀豆球蛋白 ConA );如Churesten (註冊商 標）、OK-43 2 ( Picibanil、註冊商標）、Lentinan (註冊 商標）之BRM (生物學應答修飾劑）等公知的免疫賦活 劑。

CpG-ODN爲含有非甲基化胞嘧啶-鳥嘌呤二核酸 (CpG )之（較短）寡脫氧核酸（ODN )，含有如此 CpGmotif之CpG-ODN可直接活化抗原顯示細胞。結果藉 由CpG-ODN之NK細胞等的活化可促進Thl型應答之誘 200803872 (12) 發及細胞障害性T細胞之發生（特表2004-5 1 9453 )。

Polyl : C爲肌苷酸與胞啶酸所成之聚核酸共聚物，亦 可稱爲聚肌苷酸聚胞啶酸。一般已知具有於靈長類中提高 干擾素之體液中濃度的作用。脂多醣已知爲誘導自然免疫 系統之主要物質。 MM46爲乳癌或腫瘤的一種。對MM46癌之抗原等癌 疫苗爲使用於賦活壞攻擊癌細胞之免疫功能的癌的予防或 治療上。

ConA爲來自矮性刀豆（Jack bean )種子之凝集素。 已知其具有種種免疫賦活作用。 BRM爲癌治療中藉由增強、調節宿主之免疫功能等而 修飾腫瘤與宿主之相互關係，進而達到治療效果之藥劑或 治療法。如此藥劑中含有OK-432或Churesten (註冊商 標）、Lentinan (註冊商標）等。 OK-432 爲，含有鏈球菌（Streptococcus pyogenes A 群3型）Su株盤尼西林處理處理冷凍乾燥粉末、乾燥菌 體作爲主要成分之抗惡性腫瘤劑·淋巴管腫瘤治療劑°C huresten爲，含有瓦菇之菌絲體所得之與蛋白質結合的多 醣類作爲主要成分，可使用於癌治療之藥劑。Lentinan係 由香菇所得之0-1，3-葡聚醣。 乳酸菌 本發明所使用的乳酸菌並未限定爲特定菌株，但較佳 爲乳桿菌屬（Lactobacillus屬），其中已可發酵植物原料 -16- 200803872 (13) 之植物性乳酸菌爲佳。更佳爲胚芽乳酸才 (Lactobacillus plantarum )或 Lactobacillus pentosus 發明中與岩藻依聚醣或其水解生成物組合使用時，乳 可爲活體或死亡體。 岩藻依聚醣 作爲本發明的組成物原料所使用之岩藻依聚醣可 一結構者，又可由任一藻類取得。藻類的例子含有黑 目（Sphacelariales)、索藻目（Chordariales)、萱 (Scytosiphonales )、網管藻目（Dictyosiphonales) 鞭藻目（Cutleriales )、褐藻目（S p o r o chn al e s )、 藻目（Dictyotales )、海帶目（Laminariales )、墨 目（ Fucales)之褐藻綱（Phaeophyceae)的海藻。較 使用髮菜，更佳爲來自沖繩髮菜之岩藻依聚醣。 岩藻依聚醣的萃取方法 已知有多數種由藻類萃取岩藻依聚醣之方法被 (例如可舉出如特開平1 0-2453 3 4所記載之使用水 法、如特開平1 0-1 95 1 06所記載之使用酸的方法、如 於特開2002-26278 8之使用鹼水性溶媒的方法等）。 明中’作爲原料使用的岩藻依聚醣可由這些公知方 得。本發明中例如可使用下述所舉之方法所取得者。 即’於澡類（例如沖繩髮菜）中加入5〜1 0倍量 餾水後於50〜l〇〇°C下萃取數分鐘〜5小時，較佳爲 旱菌 。本 酸菌 爲任 頂藻 藻目 、馬 網地 角藻 佳爲 檢討 的方 記載 本發 法取 之蒸 6 0〜 -17- 200803872 (14) 9 0 °C下萃取〇 . 5〜2.0小時，更佳爲8 0〜9 0 °C下萃取約1小 時。如此所得之藻類萃取物經冷卻、吸引過濾、脫鹽及乾 燥後，可得到容易溶解於水的岩藻依聚醣部份。如此所得 之岩藻依聚醣部份無須再經純化而使用於下步驟中，或可 再經純化後使用。 岩藻依聚醣較佳爲使用由上述藻類所萃取者，亦可使 用含於藻類之狀態者。岩藻依聚醣或含其之藻類經下述水 解步驟可得到岩藻依聚醣水解生成物。 岩藻依聚醣水解生成物 岩藻依聚醣水解生成物爲，包含藉由水解硫酸化多醣 之岩藻依聚醣所得的單糖及多醣類之糖衍生物、以及這些 混合物。 岩藻依聚醣水解生成物較佳爲多醣類，較佳爲2〜10 個之單糖所成的寡糖，更佳爲2〜5個的單糖所成之寡 糖。本發明中’水解岩藻依聚醣所得之如上述的寡糖亦可 稱爲岩藻依寡糖。構成寡糖之單糖，較佳爲岩藻糖、硫酸 化岩藻糖、乙醯化岩藻糖、及/或葡糖醛酸。特佳之寡糖 爲上述式（I )〜（XI )的化合物。 岩藻依聚醣水解生成物係如下述製造出。 岩藻依聚醣水解生成物的製造 (1 )岩藻依聚醣的水解 洋：發明的構成要件之岩藻依聚醣水解生成物爲如專利 -18- 200803872 (15) 文獻3〜5所記載，將岩藻依聚醣藉由使用酸或酵素的方 法進行水解而得。進行酸水解時可使用鹽酸、硫酸、磷 酸、硝酸等無機酸，亦可使用乙酸、檸檬酸、草酸、號拍 酸、甲酸、丙酸等有機酸。較佳的酸爲鹽酸及硫酸。較佳 爲使用如下的酸水解條件。即，將如上述由藻類所得之含 岩藻依聚醣的部份或岩藻依聚醣使用酸，較佳爲使用鹽 酸，含有〇·1〜6.0N’較佳爲0.5〜4·0Ν，更佳爲0.5〜 2.0Ν之HC1，於25〜100°C下，較佳爲30〜9(TC下，更佳 爲5 0〜8 0 °C之水性溶媒中，進行〇 · 1〜3小時，較佳爲 0 · 2 5〜2 · 5小時，更佳爲0 · 5〜2 · 〇小時的水解。將所得之 反應物以鹼，例如約1N的NaOH下進行中和後，以電透 析或凝膠過濾等適當方法進行脫鹽、乾燥（例如可舉出冷 凍乾燥），可得到含有岩藻依寡糖混合物之水解生成物。 如此所得之水解生成物可直接作爲岩藻依聚醣水解生 成物使用，或可經純化提高其活性。 (2 )水解生成物的純化及寡糖的分離 岩藻依聚醣水解生成物之純化可單獨或組合使用層 析、再結晶、透析、醇類沈澱等方法進行。例如可依據以 下操作而進行純化。 首先，將含有寡糖混合物之岩藻依聚醣水解生成物放 入使用陰離子交換樹脂之色譜法，分離出含有未吸著而通 過的未含硫酸基之寡糖部份（中性•酸性糖部份）、與藉 由酸性溶離液溶離出含有包含多數硫酸基之寡糖的部份 -19- 200803872 (16) (硫酸化糖部份）。 本發明中，如此所得之各部份作爲岩藻依聚醣水解生 成物使用爲佳，或使用如下述經純化而分離出之寡糖。 中性·酸性糖部份再經凝膠過濾後可得到式（I )所 示雙糖與式（II)所示雙糖。 另一方面，將硫酸化糖部份經色譜法時可分離出硫酸 化寡糖（III) 、（IV) 、 （V) 、（VI) 、（VII)、 (VIII) 、（IX) 、（X)、或（XI)各成分。 若要使各寡糖可容易地純化、結構解析，可經適宜標 識化或衍生物化。例如，寡糖可使用如4-胺基安息香酸乙 酯（ABEE )之試藥進行螢光標識化，藉此可容易進行寡 糖之檢測。分離經標識化的各寡糖後，藉由除去該標識化 部分，可取得純粹的寡糖。 岩藻依聚醣或其水解生成物與免疫賦活原料之組合 本發明係爲含有如上述所得之岩藻依聚醣或其水解生 成物與免疫賦活原料之組合的組成物。該組合可相乘性地 增強岩藻依聚醣或其水解生成物與免疫賦活原料之免疫功 能調節作用及/或免疫賦活作用。 該組成物中，作爲岩藻依聚醣水解生成物可使用單一 岩藻依寡糖與免疫賦活原料（例如乳酸菌）之組合。又， 亦可使用複數或3種類以上的岩藻依寡糖與免疫賦活原料 之組合。 將乳酸菌使用於本發明的組合時，其可爲活體或死亡 -20- 200803872 (17) 體。相對於此，如木寡糖之益生素（prebiotics )的寡糖， 其爲主要爲促進乳酸菌的增殖而增強免疫功能調節作用 者。本發明的水解生成物即使爲死菌亦可增強免疫功能調 節作用，故比過去使用益生素的寡糖更優良。 對於所使用的岩藻依聚醣或其水解生成物之免疫賦活 原料的較佳比率爲，重量1: 1〜10000: 1，較佳爲250: 1 〜1 0 0 0 ·· 1 〇 又’本發明亦包含使用岩藻依聚醣或其水解生成物與 免疫賦活原料之組合時，可相乘性地增強其免疫功能調節 及/或免疫賦活作用之方法。 本發明之組合可使用於例如飮食品、醫藥品及化粧品 等，而可賦予這些免疫功能調節作用。 免疫功能調節劑 本說明書之免疫功能調節作用係提高活體中已降低的 免疫反應，及/或抑制亢進的免疫反應之作用。因此，該 作用含有免疫賦活作用及免疫抑制作用。 本說明書之免疫功能調節作用可由該技術領域中已知 的方法進行測定。例如可將誘發具有免疫功能調節作用之 胞質分裂素的作用作爲指標進行測定。使用該目的之胞質 分裂素中含有IL- r、IL-10、12等。又，免疫功能調節作 用爲將與免疫反應相關之樹狀細胞的成熟化或細胞障礙性 T細胞（CTL )活性作爲進行測定。 本發明的免疫功能調節劑可使用於健康增進上，亦對 -21 - 200803872 (18) 腫瘤、癌細胞的轉移、病毒性疾病（例如感冒、愛滋病、 病毒性肝炎）、過敏性疾病（例如花粉症、過敏性鼻炎、 異位性皮膚炎、氣喘）、自身免疫疾病（例如風濕性關節 炎）、發炎性疾病、如糖尿病之疾病或狀態上有效。 含有岩藻依聚醣或其水解生成物與免疫賦活原料之食品添 加物及飲食品 將本發明的岩藻依聚醣或其水解生成物與免疫賦活原 料之組合使用於飮食品時，使用於含有此之免疫功能調節 作用的食品添加物及飮食品，以及將此添加於具有免疫功 能調節作用之健康食品爲佳。這些可與公知的甜味料、酸 味料、維他命等各種成分進行混合後成爲配合使用者嗜好 之製品。飲食品可例如以錠劑、膠囊劑、清涼飮料、茶飲 料、飲料劑、優格或乳酸菌飮料等乳製品、調味料、加工 食品、點心類、餅乾（例如可舉出口香糖、糖果、果凍） 等形態提供。本發明的飮食品亦包含將具有免疫功能調節 作用之內容表示附於容器上或説明書之功能性食品（含有 特定保健用食品或附有條件之特定保健用食品）。表示處 可舉出容器或其所附有的指示書等，但並限定於此。容器 含有瓶、罐子、保特瓶、塑膠瓶、紙包裝等，但並不限定 於此。 又，表示的方法含有印刷、刻印、膠帶等，但不限定 於此。又，飮食品可爲經加工的寵物飼料或動物飼料等。 22- 200803872 (19) 含有岩藻依聚醣或其水解生成物與免疫賦活原料之組合的 醫藥組成物 本發明的組成物作爲醫藥品使用時，例如可舉出免疫 功能調節劑、免疫賦活劑、抗過敏劑及免疫抑制劑。因 此，其中一型態爲，本發明爲含有岩藻依聚醣或其水解生 成物與免疫賦活原料，且具有免疫功能調節作用、免疫賦 活作用、抗過敏作用及/或免疫抑制作用之醫藥組成物。 醫藥組成物爲可於主藥中使用稀釋劑、載體、賦形 劑、結合劑、崩壞劑、滑澤劑、矯味矯臭劑、溶解補助 劑、懸浮劑、塗佈劑等醫藥之製劑技術領域中一般使用的 公知補助劑進行製劑化。作爲劑型可舉出錠劑、膠囊劑、 顆粒劑、散劑、液劑、糖漿劑、塞劑、乳霜劑、軟膏劑、 乳化劑、貼付劑、注射劑等，並無特別限定。作爲本醫藥 品之投予途徑，例如可舉出經口投予、直腸投予、經腸投 予等，並無特別限定。 含有岩藻依聚醣或其水解生成物與免疫賦活原料之組合的 化粧品 藉由使用本發明的組合可製造出具有免疫功能調節作 用之化粧品。 含有本發明組合之化粧品，例如可舉出臉用、皮膚 用、頭髮用之乳霜、乳液、凝膠、慕絲、洗髮精、潤髮乳 等。 -23· 200803872 (20) 與其他成分並用 含有本發明的組合之組成物爲，飲食品、醫藥組成物 及化粧品中可單獨使用，但與具有其他免疫功能調節作用 或免疫賦活作用之食品原料或物質合倂使用爲佳。作爲如 此食品原料或物質可舉出乳酸菌、覃類、岩藻依聚醣等。 本發明之飮食品或組成物中，除這些活性成分以外， 可配合具體之型態添加一般成分，例如可舉出載體、稀釋 劑、賦形劑或添加劑等成分。其中作爲稀釋劑、載體、賦 形劑，僅爲不會妨礙岩藻依聚醣或其水解物及免疫賦活原 料之生理活性者即可，並無特別限定，例如可舉出蔗糖、 葡萄糖、果糖、麥芽糖、海藻糖、乳糖、澱粉、水飴、異 性化液糖等糖類、乙醇、丙醇、甘油等醇類、山梨糖醇、 甘露糖醇、赤蘚糖醇、乳糖醇、木糖醇、麥芽糖醇、還元 巴拉金糖醇、還元澱粉分解物等糖醇類、三乙酸甘油酯等 溶劑、阿拉伯橡膠、角叉菜、咕噸膠、瓜耳膠、結冷膠 (Gellan Gum )、果膠等多醣類、或水。又，作爲添加劑 可舉出螯合劑等之助劑、香料、香辛料萃取物、防腐劑 等。稀釋劑、載體、添加劑等以不妨害本發明之效果的前 提下可添加。 飲食品、醫藥組成物及化粧品之岩藻依聚醣或其水解 物及免疫賦活原料之添加量，可依據其與所選擇的其他添 加成分之關係而作適當選擇，並無特別限定。然而，一般 岩藻依聚醣或其水解生成物與免疫賦活原料之合計量爲， 飮料或食品中、添加於醫藥組成物中時，對體重60kg之 -24- 200803872 (21) 個體而言爲o.oig〜log/日，較佳爲〇.〇5g〜lg/日，特佳爲 0.05g〜0.5g/日。化粧品中爲 0.01〜20重量％，較佳爲 0.05〜1 5重量％。 本發明的岩藻依聚醣或其水解生成物及寡糖可單獨將 萃取純化品或合成製品使用於飲食品、醫藥組成物或化粧 品上。 且，本發明並非限定於上述各實施形態者，如申請專 利範圍所示者可作種種變更。如申請專利範圍所示範圍下 可作種種變化，於不同實施形態下所揭示的種種技術手段 經適宜組合所得的實施形態皆包含於本發明的技術範圍 中。 【實施方式】 〔實施例〕 以下，依據實施例對本發明作具體説明，但本發明的 範圍並未限定於此實施例中。 以下實施例中，若無特別限定可使用ECA-6 00型核磁 共鳴裝置（日本電子股份有限公司）進行NMR分析。作 爲測疋彳谷媒可使用重水（D 2 〇 )。構成糖之結合樣式可使 用2 D - N M R進行。 〔實施例1〕 岩藻依聚醣部份之調製 沖繩髮菜藻體l〇〇g中加入蒸餾水1 000ml，100°C下萃 -25- 200803872 (22) 取1小時。所得之萃取物經冷卻後，吸引過濾 析（脫鹽）後使其冷凍乾燥，得到岩藻依聚醣 該岩藻依聚醣以含有2N H2S〇4之1 〇〇°C水溶 小時，將所得之水溶液使用2N NaOH進行中 ABEE進行螢光標識化調製出單糖分析樣品。 組成爲SFuc (硫酸化岩藻糖）：GlcA (葡糖j (岩藻糖）·· Xyl (木糖）二 49.3 : 4·9 : 1 管柱：Cosmosil C1 8 AR- II ( 4.6mm φ

移動相：含10%乙腈之0.2Μ硼酸鉀緩衝 流速：1.0ml/分 溫度：45°C 檢測：螢光檢測器（股份有限公司島津 EX: 305nm、Em: 3 6 Onm 〔實施例2〕 岩藻依聚醣水解生成物之製造與免疫功能調節 下述各種條件下得到岩藻依聚醣水解生拭 這些與乳酸菌之組合之免疫功能調節作用進行 水解之酸濃度對免疫功能調節活性之影響 實施例1所得之岩藻依聚醣以0」、0.2 0.5、1.0、2.0、4.0、5·0、6.0N 的 HC1(8(TC 時水解後’各添加 〇·1、〇·2、0·3、0.4、0·5 :，再經電透 部份2g。將 液中水解1 和’藉由以 該構成糖之 謹酸）：Fuc 2.1 : 1 (圖 X 2 5 0mm ) 製作所） 作用之測定 f物，對使用 檢討。 、0.3 、 0.4 、 )進行1小 • 1·0 、 2.0 、 -26- 200803872 (23) 4.0、5.0、6. ON之NaOH使其中和後、藉由電透析脫鹽， 經冷凍乾燥得到岩藻依聚醣水解生成物。此1 0 0 # g/ml濃 度添加於由C57BL/6老鼠（8週齢之雄鼠，日本加路斯巴 股份有限公司）分離之脾細胞（5x l〇6cells/ml )中。30分 鐘後添加 0.1 Vg/ml 之乳酸菌（Lactobacillus pentosus; FERM ABP-1 0028 )，進行 24小時培養，回收培養澄清 液，IFN- r之産生量使用 ELISA套組（OptEIA、BD Pharmingen )進行測定（圖2A )。又，亦檢討岩藻依聚 醣水解生成物單獨之效果，未使用乳酸菌進行與上述相同 操作（白色柱狀圖）。作爲對照組，使用未添加任何成分 者（白色柱狀圖中的”n〇ne”），僅添加乳酸菌者（黑色柱 狀圖之”none”）。其結果，經水解所得之生成物與乳酸菌 並用時’與單獨使用彼等之結果作比較時顯示相乘性地增 強IFN- 7之產生。該相乘性效果被確認爲以〇.5〜4· on之 H C1進行水解所得之生成物。 又’僅使用水解前之岩藻依聚醣進行上述實驗，與其 他樣品之效果作比較（圖2 Β )。結果爲以0.5〜4 · 0Ν的 HC1進行水解所得之水解生成物（圖2B、白色柱狀圖）僅 顯示與水解前之岩藻依聚醣（圖2B”岩藻依聚醣，，）同程 • 度之活性’但若加入乳酸菌時（圖2B，黑色柱狀圖）可 顯示比岩藻依聚醣所得活性更高之活性。 反應溫度之影_ 岩澡依聚醣以 25、30、40、50、60、70、80、90、 -27- 200803872 (24) 100°C之IN HC1進行1小時水解後，添加IN的NaOH進 行中和後，藉由電透析脫鹽，再經冷凍乾燥後得到岩藻依 聚醣水解生成物。此100/z g/ml濃度添加於由C57BL/6老 鼠（8週齡之雄鼠，日本加路斯巴股份有限公司）分離之 脾細胞（5xl06cells/ml)中。30分鐘後添加0.1/z g/ml之 乳酸菌(Lactobacillus pentosus *» FERM ABP- 1 0028 )，進 行24小時培養，回收培養澄清液，IFN- r之産生量使用 ELISA 套組（OptEIA、BD Pharmingen )進行測定（圖 3 A )。又，亦檢討岩藻依聚醣水解生成物單獨之效果，未 使用乳酸菌進行與上述相同操作（白色柱狀圖）。作爲對 照組，使用未添加任何成分者（白色柱狀圖中的none)， 僅添加乳酸菌者（黑色柱狀圖之none)。其結果，經HC1 水解所得之岩藻依聚醣水解生成物與乳酸菌並用時，與單 獨使用彼等之結果作比較時顯示相乘性地增強IFN- r之產 生。該相乘性效果爲25〜100 °C下水解所得之所有生成物 皆被確認，但特別以30〜90 °C (較佳爲50〜80 °C )下水 解時爲優良。 又，僅使用水解前之岩藻依聚醣進行上述實驗，與其 他樣品之效果作比較。結果爲以50〜100°C的HC1進行水 解所得之水解生成物與乳酸菌並用時，顯示與水解前的岩 藻依聚醣之相同程度以上的活性（圖3 B )。 反應時間之影響 將岩藻依聚醣以1N之HC1 ( 80°C )進行30、60、120 -28- 200803872 (25) 分鐘的水解後，添加IN之NaOH進行中和後，以電透析 脫鹽’經冷凍乾燥得到岩藻依聚醣水解生成物。此1 00 // g/ml濃度添加於由C57BL/6老鼠（8週齡之雄鼠，日本加 路斯巴股份有限公司）分離之脾細胞（5xl06cellS/ml ) 中。30分鐘後添力卩0.1 //g/ml之乳酸菌（Lactobacillus pentosus; FERM ABP- 1 0028 )，進行 24 小時培養，回收 培養澄清液，IFN- r之産生量使用 ELISA 套組 (OptEIA、BD Pharmingen)進行測定（圖 4)。又，亦 檢討岩藻依聚醣水解生成物單獨之效果，未使用乳酸菌進 行與上述相同操作。作爲對照組，使用未添加任何成分 者，僅添加乳酸菌者。其結果，經3 0〜1 20分鐘水解所得 之所有生成物與乳酸菌並用時，與單獨使用彼等之結果作 比較時顯示相乘性地增強IFN- 7之產生。 因此，可得知岩藻依聚醣水解生成物因與乳酸菌組合 時可具有相乘性增強的免疫功能調節或免疫賦活作用。。 〔實施例3〕 純化之岩藻依聚醣水解生成物的免疫功能調節作用 岩藻依聚醣lg中加入100ml的2N HC1，於80°C下 酸水解1小時，再以1N NaOH中和。所得之反應液經凝膠 過濾（生化凝膠P-6 ( Bio-Rad))進行脫鹽，再進行冷凍 乾燥而得到含有岩藻依寡糖混合物之部份（寡糖部份）。 將所得之岩藻依寡糖混合物供於使用甲酸活化之陰離子交 換樹脂（東曹股份有限公司）之層析儀。其結果，寡糖部 -29 - 200803872 (26) 份分離成含有以水溶離所得之未含硫酸基的寡糖部份 (Fr.B )、與含有多數經2NHC1溶離而得到之含有硫酸基 的寡糖部份（硫酸化糖部份）。硫酸化糖部份提供於凝膠 過濾（生物凝膠P-6)，分成分子量未達500之Fr.A與 500以上的Fr.C。如上述進行純化之岩藻依聚醣水解生成 物各部份各以l〇〇//g/ml之濃度添加於C57BL/6隻老鼠 (8週齢之雄鼠，日本加路斯巴股份有限公司）所分離之 脾細胞（5xl06 cell s/ml) 。3 0分鐘後添加0.1 // g/m 1之乳 酸菌(Lactobacillus pentosus ； FERM ABP-10028)，進行 24小時培養，回收培養澄清液，IFN- r之産生量使用 ELISA 套組（OptEIA、BD Pharmingen)進行測定（表 1 )。其結果，於岩藻依聚醣之濃度低時顯示活性，但濃 度高時活性會消失。另一方面，所有水解生成物（寡糖各 部份，Fr.A〜C、硫酸化糖各部份）爲濃度依賴性地提高 免疫賦活能，且比岩藻依聚醣之活性強。特別得知藉由純 化寡糖可增強活性。作爲比較對照組所使用的單糖（岩藻 糖、硫酸化岩藻糖）或益菌素而廣泛被使用的木寡糖亦無 如此作用。 -30- 200803872 (27) [表1] + 〇· 1 // g/ml 乳酸菌 3 10 30 (β g/ml) 100 岩藻衣聚醣 9.8 10.2 5.2 n. d . 岩藻糖 1.2 1.9 — 2.9 硫酸岩藻糖 1.3 0.5 — n. d. 寡糖部份 n. d. η. d. 5.5 9.6 Fr. A 10.5 17.2 21.2 15.8 Fr.B 4.6 6.7 11.0 21.2 Fr.C 5.0 11.5 19.3 21.0 硫酸化糖部份 0.0 19.8 — 21.3 木寡糖 η. d . n. d. _ n. d . 乳酸菌 0 0.1 ^ g/ml η. d. n . d . 〔實施例4〕 岩藻依寡糖的製造 a)岩藻依聚醣的水解及寡糖混合物之分離 實施例1所得之岩藻依聚醣部份lg中加入l〇〇ml的 2NHC1，進行50〜100°C之1小時酸水解，再以1N NaOH 中和。所得之反應液經凝膠過濾（生物凝膠P-6 ( Bio-Rad) ) 脫鹽， 進行冷 凍乾燥 後得到 895mg 的岩藻 依寡糖 混合物。所得之岩藻依寡糖混合物供於使用甲酸活化之陰 離子交換樹脂（東曹股份有限公司）之層析儀。結果，作 -31 - 200803872 (28) 爲寡糖混合物分離成不含經水溶離所得ί 糖部份（中性·酸性糖部份）28 0mg、與 離所得之含有多數硫酸基之寡糖部份（ 4 2 5 m g ° b)化合物（I)及（II)之分離 a)所得之中性·酸性糖部份l〇〇mg 物凝膠 P-4 ( Bio-Rad )、溶離溶媒 (k2b4o7)水溶液），由該部份分離出分 與分子量486之三糖（化合物I、II:圖 子量由FAB-MS求得（化合物（I) 〔 M· 合物（II) 〔Μ-Η〕·：485·0)。這些化巧 水1ml、ΑΒΕΕ ( 4-胺基安息香酸乙酯） (氫化氰硼酸鈉）350mg、甲醇3.5ml、酉 下攪拌4小時。將反應液以氯仿與水分离 識化之約7〜9mg的上述雙糖及雙糖。築 糖進行測定，W-NMR及13C-NMR之柱狀 示，彼等解析結果如表2、3所示。 由這些結果得知，所得之分子量 (I)所示之 a-D-GlcA-(l— 2) -L-Fuc， 糖爲式（II)所示之a-D-GlcA-(l— 2) 3) -L-Fuco :未含硫酸基的寡 含有經2N HC1溶 硫酸化糖部份） 以凝膠過濾（風 :0.2M硼酸鉀 子量340之雙糖 5、6 )。這些分 _ Η〕- ·· 3 3 9.2、化 今物5 m g中添加 1.6g > NaBHsCN P 酸 4 1 0 // 1，6 5〇C t，得到經螢光標 f於這些標識化寡 :圖如圖7〜1 0所 340的雙糖爲式 分子量486之三 -a -L-Fuc- ( 1 -> •32- 200803872 (29) 表2 :對經螢光標識之化合物（I)的1 H-NMR及13C-NMR解 析結果

Position Ή -NMR (D20) δ -JTC -NMR (D20)~ (5 ABEE-1 — 117. 0 -2, 6 7. 74 (2H, d, /= 7. 6Hz) 131. 7 -3, 5 6. 63(2H, d, /= 7. 6Hz) 111. 8 -4 - 152. 8 -〇〇 - 169. 6 -(¾ 4. 21 (2H，q, /=14.3, 7.0, 1.5Hz) 61. 6 -CH, 1. 24 (3H, td, /=7.1, 1.6Hz) 13. 6 Fuc-1 (CH,) 3. 4H2H, m) 44. 3 - 2 4. 07 (1H, t, /= 6.4Hz) 77. 1 -3 3. 56(1H, m) 72. 7 -4 3.51(1¾ m) 72. 8 -5 3. 99(1H, d, /=8. 6Hz) 66. 0 - (¾ 1. 12(3H, d, /= 6. 5Hz) 18. 8 GlcA-1 5. 00 (1H, d: /= 3.4Hz) 100. 2 - 2 3. 48UH, m) 71. 6 -3 3. 63UH, m； 70. 5 -4 3. 38C1H, m) 72. 0 - 5 4. 00 (1H, t, 1= 6. 4Hz) 72. 4 -C00H - 176. 3 -33- 200803872

(30) 表3 :對經螢光標識之化合物（II)的iH-NMR及13C-NMR 解析結果

Position Έ -NMR (ϋ2ϋ) δ 1¾ -NMR (D20) δ ABEE-1 — 117. 6 -2, 6 7. 746 (2H, d, / = 8. 9 Hz) 131. 6 -3，5 —~6. 655 (2H, d, / = 8. 6 Hz) 112. 4 - 4 一 152· 9 - C=0 一 169.4 - CH, 4. 191 (2H, q, 7 = 7. 1 Hz) 61. 7 -巩 1. 220 (3Ht t, / = 7. 0 Hz) 13. 6 Fuc-1 (CH2) 3. 396 UH, q, / = 6. 2 Hz) 3. 223 (1H, q, / = 6. 9 Hz) 45. 2 - 2 4.1113-4.089 UH, in) 69. 8 -3 3. 713 (1H, Q, / = 2. 4 Hz) 75. 9 - 4 S. 654 (1H, t, / = 4. 6 Hz) 73· 9 -5 3. 86b (1H, dt, 7 = 12. 3, 5. 2 Hz) 67· 0 -(¾ 1. 103 (3¾ d, 7 = 6. 5 Hz) 18. 9 Fuc-1 5· 061 (1H，d: /— = 4. 1 Hz) 97. 0 - 2 3. 812 (1H, dd, J = lu. 3. 3. 8 Hz) 74. 9 -3 3. 960 (1H, dd, 7 = lu. 7, 3. 4 Hz) 69. 4 一 4 3. 506 (1H, t, / = 4. 1 Hz) 72. 2 -5 3. 760 (1H, q, J = 6. 5 Hz) 67. 4 -CH, 0. 876 (3H, d, 6. 5 Hz) 15· 1 GlcA-1 5. 187 (1H, d, y = 3. 8 Hz) 100-3 -2 3· 495 Uti, dd, / = hj. ϋ, 4. 1 Hz) 71. 5 -3 3. 624 (lH, t, Γ= 9. 5 Hz) 72. 9 一 4 3. 380 (1H, t, 9. 6 Hz) 72. 0 - 5 3. 903 UH, d, 10. 〇 Hz) 72. 8 -C00H — 176. 6 c)化合物（III)〜（XI)之製造 其次，將硫酸化糖部份經凝膠過濾（生物凝膠P-6 (Bio-Rad ))進行脫鹽。所得之硫酸化糖部份i〇〇mg中 加入水1ml、ABEE ( 4-胺基安息香酸乙酯）l.6g、 NaBH3CN(氫化氰硼酸鈉）350mg、甲醇3.5ml、酢酸410 # 1，65 °C下攪拌4小時。所得之生成物以真空乾燥，再 以水與氣仿分離’水層以逆相管柱（載體：Lichroprep RP-8 ( 25-40 // m) ( Merck) 、φ 10 x220mm ;溶媒條件：

5 % CH3CN/0.1 % TFA ( 100ml ) 、8 % C H 3 C N/0 · 1 % T F A -34- 200803872 (31) (100ml ) 、15 % CH3CN/O.I % TFA ( 100ml ) 、20 % CH3CN/O.I % TFA ( l〇〇ml ))處理後得到經螢光標識化之 寡糖混合物。所得之螢光標識化合物以HPLC (管柱： cosmosil 5C18-AR-II、φ 1 0.0 x25 0mm;溶媒條件：12.5% CH3CN/0.1% TFA ( 5 分鐘）、12.5-27.5% CH3CN/0.1% TFA (50分鐘）：流速：3ml/分）下將乙腈：0.1% TFA水溶 液以 5〜30%之濃度梯度進行溶離，將分子量爲53 9,、 715、861、9 03、957、999之具有硫酸基的6個標識化岩 藻依寡糖由混合物分離（分子量由ESI-MS決定）。對於 所得之標識化寡糖測定其NMR光譜，並分析其結果。標 識化寡糖之1H-NMR及13C-NMR之柱狀圖如圖11〜22所 示，彼等經解析之結果如表4〜7所示。由這些結果得 知，分子量 539、715、861、903、957、999之化合物各 爲化合物（III) 、（V) 、（VI) 、（VII) 、（VIII)、 (IX )之標識體。除去結合於各寡糖上之ABEE，得到經 再生之寡糖純品。即，這些經分離之各標識化寡糖10mg (100^1)中加入各10//1之過氧化氫、酢酸，放置一晚 後乾燥固化。所得之再生寡糖之中，將分子量903的化合 物所得者以 Η-NMR (圖23 ) 、TOF-MS (裝置 Voyager DE-STR ( Applied Biosystems ) 、Ion mode : negative、

Mode of operation ·· reflector、 Accelerating voltage : 20kV、Matrix ： 2，5 - d ihy d r o xy b enz o i c acid )(圖 24 )、 ESI-MS/MS (圖25 )解析之結果，卻時爲式（VII )之結 構0 -35- 200803872 (32) 又’有關上述方法無法分離之分子量420、858、900 之化合物（各爲（IV ) 、( X ) 、( XI))、將反應混合 物以 FAB-MS/MS (裝置：HX110A/HX110A ( JEOL) 、Ion mode . MS 5 MS/MS ( negative) 、Xe atom beam : 5kV、 Ion source accelerating potential : 10 k V 、 Collision energy ： 2keV、Matrix ： Glycerol )、及 ESI-MS-MS 分析 確認其存在。圖26表示（IV)之FAB-MS柱狀圖，圖27 表示 MS/MS柱狀圖。又，圖 28表示（X)及（XI)之 FAB-MS柱狀圖，圖29、30各表示MS/MS柱狀圖。 由這些結果得知，分子量390之雙糖爲化學式（III) 所示之 α -L-Fuc-4-O-SOr- ( 1—3) -L-Fuc、分子量 420 之 雙糖爲化學式（IV )所示之a -D-GlcA- ( 1—2 ) -L-Fuc、 分子量 5 66之三糖爲化學式（V)所示之以-1^?1^-4-0-S Ο 3 - ( 1 ~^ 3 ) -〔 〇L -D-GlcA- ( 1 —^2) 〕-L-Fuc、分子重 712之四糖爲化學式（VI )所示之α -L-Fnc-4-O-SOr-(1 —^3) -〔 a -D-GlcA- ( 1 —^2) 〕-cl -L-Fuc- (1 —^3) -L-Fuc、而分子量754之四糖爲化學式（VII)所示之a-L-Fuc-4-0-S〇3 - ( 1 —^3) -〔 〇ί -D-GlcA- ( 1 >2 ) 〕- 〇i -L-

Fuc-4-O-乙醯基-(1—3) -L-Fuc、分子量808之5糖爲化 學式（VIII )所示之〔a-D-GlcA- ( 1—2 ) - a -L-Fuc- (1—3) ] - [ a -D-GlcA- ( 1—2) 〕- a -L-Fuc- ( 1—3)- L-Fuc、分子量850之5糖爲化學式（IX)所示之〔〇1-0-G1 c A - ( 1 —>2 ) - ci -L-Fuc- ( 1 —>3 ) 〕 · 〔 a-D-GlcA-(1—2) 〕-4-0-乙醯基- a -L-Fuc- ( 1—3) -L-Fuc、分子 -36- 200803872 (33) 量8 5 8之5糖爲化學式（X)所示之a-L-Fuc-4-(1—3) - a -L-Fuc- ( 1—3) -〔 α-D-GlcA- ( 1—2) L-Fuc ( 1 — 3) -L-Fuc、分子量900之5糖爲化學另 所示之 a -L-Fuc-4-0-S〇r- ( 1—3 ) - a -L-Fuc-( 〔α-D-GlcA- ( 1 > 2) 〕- a -L-Fuc-4-O -乙釀基-( L-Fuc。 表4 :對經螢光標識之化合物（III)的1 H-NMR及 解析結果 o-so3- 〕_ α - -(xi)

3c-nmr

Position Ή -NMR (D20) δ UC -NMR CD20) δ ABEE-1 117. 3 -2, 6 7. 956 (2H, d, / = 8. 9 Hz) 131. 8 -3, 5 6. 997 (2H, d, / = 8. 7 Hz) 115. 9 -4 149. 2 一 C=0 168. 9 -CH, 4. 331 (2H, q, / - 7. 2 Hz) 62. 1 -CH, 1. 343 C3H, t, / = 7. 1 Hz) 13. 6 Fuc-1 (CH2) 3. 530 (1H, dd, / = 13. 4, 4. 9 Hz) 3. 456 (1H, dd, / = 13. 5, 8. 2 Hz) 47. 8 - 2 4. 113 (1H, dq, / = 12. 0, 3. 1 Hz) 68. 7 -3 3. 774 (1H, dd, / = 6. 8, 1. 5 Hz) 78. 4 -4 3. 709 UH, dd, / = 6. 2, 2. 7 Hz) 73. 8 -5 4. 113 (1H, dq, J = 12. 0, 3. 1 Hz) 66. 1 1. 194 m, d, / = 6. 4 Hz) 18. 7 SFuc-1 5. 081 UH, d, / = 3. 9 Hz) 99. 2 -2 3. 823 (1H, dd, / = 10. 8, 4. 1 Hz) 68. 3 -3 3. 909 (1H, dd, /= 10. 5, 3. 4 Hz) 68. 6 -4-S0q- 4. 455 (1H, d, / = 2. 7 Hz) 80. 3 -5 3. 959 (1H, q, / = 6. 3 Hz) 66. 8 1. 081 (3H, d, / = 6. 6 Hz) 15. 9 -37- 200803872 (34)

表5:對經螢光標識之化合物（V)的1H-NMR及13C-NMR 解析結果

Position ΐ -NMR (D20) δ l6C -NMR (D20) δ ABEE-1 一 117.8 -2, 6 7. 794 (2Η, d, / = 8. 5 Hz) 131. 8 -3, 5 6. 699 (2H, d, / = 8. 2 Hz) 112.4 -4 一 152. 3 -〇〇 一 169.4 -ch9 4. 257 (2H, q, J = ΊΑ Hz) 61. 8 -CH, 1. 285 (3H, t, / = 7. 1 Hz) 13. 7 Fuc-1 (CH2) 3. 595 C1H, dd, J = 14. 8, 4. 7 Hz) 3. 557 (1H, t, / = 3. 5 Hz) 43. 6 -2 4. 076-4. 055 UH, m) 77. 0 -3 3. 860 UH, d, / = 8. 7 Hz) 77. 3 -4 3· 729 (1H，d, / = 8. 5 Hz) 73. 2 -5 4. 109 UH, q, / = 6. 5 Hz) 65. 6 -¾ 1. 173 (3H, d, / = 6. 4 Hz) 18· 6 GlcA-1 5. Ill UH, d, / = 3. 4 Hz) 98. 5 - 2 3. 556-3. 526 UH, in) 70. 9 - 3 3. 644 (1H, t, / = 9. Z Hz) 72· 6 -4 3. 489 UH, t, / = 9. 5 Hz) 71. 3 一 5 4. 165 (1H, d, / = 10. 3 Hz) 71. 2 -C00H - 172. 8 SFuc-l 5. 036 (1H, d, / = 3. 7 Hz) 100. 6 - 2 3. 768 (1H, dd, J = 10. 8, 3. 7 Hz) 68. 2 -3 3. 843 (1H, t, / = 5. 5 Hz； 68. 6 -4-S0,- 4.371 (1H, m) 80. 3 -5 3. 911 (1H, q, / = 6. 4 Hz) 66. 9 一 CH, 1. 038 (3H, d, / = 6. 4 Hz) 15. 8 -38- 200803872 (35)

表6 :對經螢光標識之化合物（VI)的1 H-NMR及13C-NMR 解析結果

Position Ή -NMR (D20) δ HC -NMR (D20) δ ABEE-1 一 123. 8 -2, 6 7· 952 (2H，dd，/ = 6· 9, 2· 1 Hz) 131.4 -3, 5 7. 087 (2Η, dd, / = 6. 9, 1. S Hz) 117. 3 -4 一 146.6 -〇〇 - 168. 5 - ch9 4. 286 (2H, Q, / = 7· 0 Hz) 62. 7 - (¾ 1· 292 (3H, t, / = 7. 1 Hz) 13. 6 Fuc-1 (CH2) 3. 526 C1H, dd, J = 13.4, 8. 6 Hz) 3.572-3.556 (1H, m) 48. 9 -2 4. 009-3. 985 UH, m) 68. 6 -3 3. 783 (1H, d, / = 2. 7 Hz) 76. 8 -4 3. 708 UH, dd, / = 6. 0, 3. 7 Hz) 74. 4 -5 4. 009-3. 985 (1H, m) 66. 6 -CH, 1. 185 (3H, d, / = 6. 4 Hz) 18. 9 Fuc-1 5. 049 (1H, d, / = 3. 7 Hz) 97. 7 -2 4. 117 UH, d, / = 9. 8 Hz) 70. 9 -3 4. 033 (1H, dd, / = 10. 6, 2. 9 Hz) 72. 5 -4 3. 792 (1H, d, / = 2. 7 Hz) 66. 8 -5 3. 430 (1H, q, / = 6. 7 Hz) 67. 2 -CH, 0. 900 (3H, d, / = 6. 6 Hz) 15· 3 SFuc-1 5. 069 (1H, d, / = 3. 9 Hz) 93· 2 - 2 3. 821 (1H, dd, / = 10. 4, 3. 8 Hz) 68. 1 -3 3. 970 (1H, dd, / = 10. 4, 3. 1 Hz) 68. 9 -4-S0,- 4. 512 (1H, d, / = 3. 0 Hz) 80. 8 -5 4. 455 (1H, q, / = 6. 6 Hz) 66. 6 -CH, 1. 232 (3H, d, / = 6. 4 Hz) 16. 2 GlcA-1 5. 266 UH, d, / = 3. 7 Hz) 99. 6 - 2 3. 602 (1H, dd, / = 9. 7, 4. 0 Hz) 70. 6 -3 3. 643 (1H, t, / = 9. 4 Hz) 72. 7 -4 3.587-3.556 (1H, m). 71. 2 - 5 4. Ϊ08 (1H, t, / = 5. 4 Hz) 71. 6 -c_ 一 172. 92 -39 - 200803872 (36)

表7:對經螢光標識之化合物（vh)的iH-NMR及13C-NMR 解析結果

Position ΤΓ^ΝΜΓΤϋ^- δ ^^NMR (D20)' δ ABEE-1 — Γ22Γ4- -2, 6 二」·巧3 _ι· 7 Hz) Γ3Τ79 -3，5 7.021 (2Η, dT7^~g；9 Hz) 116.4 一 4 一 148. 2 -C=0 — 168. 5 - CH, 丄290 (H’ = 14· 3，7· 1，1· 3 Hz) 62. 2 - CHa ~——1¾9 gH 7·1·Ηζ) 13. 6 Fuc -1 (CH2) 3. 604-3. 57ΤΤΓΗ m) 3.488 (1Η, dd, 13；S) r π Η7Λ 48. 0 -2 3. 977-3. 95ΤΤΓΗΓιή) —_ 68. 9 -3 3. 766 (1H, q, / = \ ¢) 70 -4 3. 713 (1H, td, / = b. 8. 3. 8 Hz) 74. 3 - 5 3. 977~ό. yb3 (1H, m) 66.7 -(¾ 1. 191 (3H, d, / = fi. 4 Hz) 18. 8 FucAc-1 5. 078 (1H, d, / = 2. 7 Hz) 97. 5 -2 〇 4. 120 (1H, d, / = l. 8 Hz) TLT ' - 3 4. 120 UH, d, / = l. 8 Hz) 69. 9 -4 Γ^ιτητΗ~7)- 60 - 5 3. 319 C1H, d, / = 6. 6 Hz) 60 - ¢0(¾ 2. ut)8 (3H. s) 173. 5/20. 1 ~ ~CHa 0. 7 04 WH, d, / = fi. 4 Ηζϊ 15. 1 GlcA-1 5. 231 (1H, d, / = 3. 7 Hz) 99, 7 -2 3. 604-3·ΤΓΓΤΠΓ m) 70· 5 - 3 _ 3. 644 C1H, t, /=9. 4 Hz) 72. 8 -4 — 3. 5bt) UH, d, / = 8. 9 Hz) 71. 2 - 5 — 4. 102 (1H, t, / = 4. 9 Hz) 71. 5 - C00H 一 173. 0 SFuc-1 4. 947 (1H, d, y = 4. 1 Hz) 93. 1 -2 3. 740 (1H, d. / = 3. 9 Hz) rrs - 3 3. 858 UH, dd, \Q, 5, 3. 2 Hz) B8. 9 -4 - SOf 4. 501 UH, d. / = 3. 9 Hz) 80. 8 - 5 4. 48o uh, t. / = 7. 4 Hz) 66. 2 -(¾ 1.Z67 (3H, 一6H)— 15. 1 〔實施例5〕 沖繩髮菜藻體100g中放入l〇〇〇ml的2NHC1，進行1 小時，50〜100 °C之酸水解。所得之萃取物經冷卻後，進 行吸引過濾、電透析（脫鹽）後冷凍乾燥得到2g的岩藻 依聚醣部份。所得之岩藻依聚醣部份經ABEE之螢光標識 化者再以 ESI-MS ( 4000Q TRAP LC/MS/MS 系統（Applied -40- 200803872 (37)

Biosystems )分析條件 Polarity : Negative ion mode ; Declustering Potential: -50v ； Collision energy ： -lOeV; Temperature : 550°C )進行分析之結果得到圖3 1所示之柱 狀圖，確認式（I )〜（XI )所示岩藻依寡糖之存在。 〔實施例6〕 岩藻依寡糖化合物與乳酸菌之組合的相乘效果 對老鼠脾細胞之IFN- r誘導作用 於與實施例3相同下調製之脾細胞5xl06cells/ml中 添加分子量340之岩藻依寡糖（化合物（I))至每格1〇〇 μ g/ml。作爲比較對照組使用等量岩藻糖與硫酸化岩藻糖 (各MW164、244 )、木寡糖（XOS ) 。30分鐘後將各乳 酸菌(Lactobacillus pentosus ； FERM ABP-10028 )(死 菌）以0.1 // g /ml之量添加於各格子中。經24小時培養 後，回收培養澄清液，將IFN- 7之産量以 ELISA套組 (OptEIA、BD Pharmingen )測定（圖 32A)。又，欲確 定糖單獨時的效果，不使用乳酸菌下進行與上述相同之操 作。 又，有關化合物（II )，進行與化合物（Ο相同之實 驗。所使用的化合物（II )的量爲，各格子中爲10、100 及 3 00 // g /ml (圖 32B )。 有關化合物（1 )，將此與乳酸菌並用時可得到顯著 強之IFN- 7誘導能（圖 32A )。該作用無法由化合物 (I )與乳酸菌各單獨使用時所得之結果（圖32A中自左 -41 - 200803872 (38) 第2個及自右第5個）來預測之其強度，此歸功於組合兩 者使用時之相乘性效果。又，有關化合物（11 )亦同樣地 確認出與乳酸菌之相乘效果（圖3 2B )。構成成分之岩藻 糖或硫酸化岩藻糖並無如此活性，作爲益菌素廣泛被使用 的木寡糖亦無如此之作用。因此，本發明的岩藻依寡糖與 乳酸菌並用時可相乘性地活化脾細胞，於活體之免疫功能 調節上非常有用。 又，於同樣地調製出的脾細胞中將均等混合化合物 (I)〜（VII)之化合物任意3種類者以50// g /ml濃度 添加後，30 分後將乳酸菌（Lactobacillus pentosus; FERM ABP-10028)(死菌）以 0.1//g /ml各添加於各格子中。 經24小時培養後，培養澄清易經回收並測定其IFN- r之 産量（圖33 )。如圖所示，使用（V ) 、 （ VI )及 (VII )之混合物、（I ) 、（ V )及（VI )之混合物、及 (I ) 、（ V )及（VII )之混合物時，觀測到較高IFN- r 産量。因此，化合物（I )〜（XI )混時與乳酸菌並用時 亦可提高免疫功能調節活性。 〔實施例7〕 藉由岩藻依寡糖對來自老鼠之樹狀細胞的IL-10、12誘導 作用、及CTL活性增強作用 自BALB/c老鼠（8週齡之雄鼠、日本SLC股份有限 公司）之大腿骨分離出骨髓細胞，於含有10% FBS、 20ng/ml GM-CSF ( Peprotec ) 、20ng/ml IL-3 ( Peprotec ) _42- 200803872 (39) 之RPMI 1640培養基中懸浮至ixi〇6ceiis/mi，於24格子 培養皿中進行培養。培養開始第3、5天進行培養基交 換，得到附著性未成熟樹狀細胞。所得之樹狀細胞以化合 物（〇 、（ 11 ) ' ( HI ) 、( V ) 、( VI )、及（VII ) • 各以g 之濃度進行前處理。前處理30分後，將乳 酸菌(Lactobacillus pentosus ； FERM ABP- 1 0028 )(死 菌）各以〇 . 1 // g /rn 1添加於各格子中。經2天培養後，回 收培養澄清液與細胞。又，欲確認糖化合物單獨時的效 果，未添加乳酸菌下進行與上述相同之操作。 經回收之培養澄清液使用EL1SA套組測定IL-12與 IL-10。各結果如圖34、35所示。化合物（I )因與乳酸菌 並用而可相乘性地誘導IL-12 (圖 34 )。又，化合物 (II) 、 （ΠΙ)及（V)因與乳酸菌並用而可誘導IL-I0 (圖35 )。由此得知，本發明所發現的岩藻依寡糖對活體 之免疫功能具有正負調節（活化降低之免疫或抑制過剩的 免疫反應）之功能。但木寡糖中並無被確認此作用。 且，計算經回收的細胞，調節成lxl〇5cells/ml後， lml的細胞懸浮液中以絲裂黴素C ( 50 // g/ml )處理，於 3 7°C下反應30分鐘。反應終了後，藉由PBS的洗淨除去 絲裂黴素C，添加lml的依據一般方法調製出之C57BL/6 隻老鼠的脾細胞（5xl06cells/ml)，經4天之混合培養。 培養後回收細胞，將具有C57BL/6隻老鼠之異體抗原的 P-8 15 細胞（5000cells/100 // 1 )作爲標的，E : T 比爲 40 : 1及80 : 1之比率下反應4小時，將殺死的P-8 15數 -43- 200803872 (40) 目以流動細胞計算儀計算，求得CTL活性（圖3 6 )。化 合物（I) 、 （III) 、 （V) 、（VI) 、（VII)因與乳酸 菌並用可增強C T L活性。 實施例7的結果亦顯示，本發明的岩藻依聚醣水解生 成物與乳酸菌組合時，可得到相乘性地增強之免疫功能調 節或免疫賦活作用。 〔實施例8〕 與幾乎無具有免疫功能調節活性之乳酸菌並用時的IL -1 2 産生之相乘性增強 對BALB/c老鼠（8週齢之雄鼠，日本SLC股份有限 公司）進行 4.05%Thioglyc oil ate Medium ( Difco)之腹腔 内投予，經4天後使用l〇ml的PBS，回收浸潤於腹腔内 之細胞。其調製成lxl〇6cellS/mI後，以24格培養皿進行 培養。培養開始後3小時，藉由培養基的交換而除去浮遊 細胞，得到巨噬細胞。各格子中添加化合物（I )及實施 例3所記載之寡糖部份100// g/ml濃度，經30分鐘後， 添加免疫功能調節活性強之乳酸菌（Lactobacillus pentosns DS84 C菌株；獨立行政法人産業技術總合硏究 所專利生物寄託中心於2004年5月26曰寄存之FERM ABP-10028)、或幾乎於免疫功能調節活性之0.1// g/ml濃 度的乳酸菌（販賣之Lactobacillus pen to sus (以下稱爲乳 酸菌A))(販賣之Lactobacillus plantarum (以下稱爲 乳酸菌B ))，經2 4小時培養。其後回收培養澄清液， -44 - 200803872 (41) 測定IL-12之産量（圖37 )。欲比較，單獨使用各彼等3 種類菌株下進行與上述相同之操作。乳酸菌A及乳酸菌B 自身皆未顯示可檢測出之程度的IL-12誘導活性，但將這 些菌株與化合物（I )或寡糖部份並用時可得到顯著增大 之IL-12誘導活性。因此得知，本發明所得之岩藻依聚醣 水解生成物與不具有免疫功能調節活性之乳酸菌並用時， 亦可發揮相乘性強之免疫功能調節作用。 〔實施例9〕 與乳酸菌以外之物質的相乘效果 自C57BL/6老鼠（8週齡之雄鼠，日本加路斯巴股份 有限公司）分離出脾細胞，調製出5xl06cells/ml，於24 格培養皿進行培養。實施例3之Fr.C部份添加於各格子 至各成30// g/ml後30分鐘，作爲具有免疫賦活作用或免 疫功能調節作用之物質，將 5 // g/ml之 Polyl : C (SIGMA ) 、2ng/ml 的 LPS ( SIGMA ) 、3 μ g /ml 之

CpG-ODN ( 55-TCCATGACGTTCCTGATGCT-3, : 白

Integrated DN A Technologies ， Inc.入手） 、5 Ong protein/ml的MM46癌抗原（將MM46乳癌細胞於HANK ’ s液（那佳來帝司塔）中均質化，由此經萃取之蛋白質： 由帝京大學醫真菌硏究中心提供）、0.25 // g/ml之ConA (和光純藥）各添加於格子中。經24小時培養後回收培 養澄清液，IFN- r之産量使用 ELISA套組（OptEIA、BD Pharmingen )進行測定（圖3 8 )。欲比較未使用 Fr.C下 -45- 200803872 (42) 進行與上述相同操作。各免疫功能調節物質於本次實驗所 使用之濃度下幾乎無又導出IFN- r 。然而將這些與 Fr.C，換言之與岩藻依聚醣水解生成物（寡糖）並用時可 得到強之1FN_ 7誘導能。因此得知，岩藻依聚醣水解生成 物及由此所得之寡糖不僅與乳酸菌並用時，與其他免疫賦 活原料並用時，亦可相乘性地提高免疫賦活或免疫功能調 節作用。 〔實施例1 〇〕 NK活性增強效果（體內） 將C5 7BL/6老鼠（8週齡之雄鼠，日本加路斯巴股份 有限公司）分成4群，，將單獨之岩藻依聚醣水解生成物 (實施例3所記載的硫酸化糖部份500mg/kg、圖39之 「岩藻依寡糖」）、乳酸菌單獨（〇.2mg/kg)、岩藻依聚 醣加水解生成物+乳酸菌（圖39之『乳酸菌+岩藻依寡 糖」）各混入飲水中，讓老鼠自由攝取。對照組則攝取自 來水。開始攝取後1星期，以一般方法由老鼠分離出脾細 胞，Yac-Ι細胞（500 0cells/100 // 1 )作爲標的，並測定 NK活性。NK活性爲，E : T比爲20 : 1、40 : 1之比例反 應4小時，將殺傷的Yac-Ι數目以流動細胞計算儀算出 (圖39)。藉由攝取由岩藻依聚醣所得之岩藻依寡糖而增 強NK活性。且，藉由並用岩藻依寡糖與乳酸菌可提高 NK活性。因此，因攝取岩藻依聚醣水解生成物與乳酸菌 之組合可活化免疫功能可由體內作確定。 -46- 200803872 (43) 〔實施例1 1〕 藉由岩藻依聚醣與酸菌之組合的相乘效果 對老鼠脾細胞之IFN- 7誘導作用 與實施例3相同下所調製出的脾細胞5xl06cells/ml 中各以1、1〇、1〇〇 # g/ml之岩藻依聚醣A (股份有限公 司撒司部落達司）、岩藻依聚醣B(股份有限公司沖繩發 酵化學）、岩藻依聚醣C (實施例1所調製者）添加於各 格子中。岩藻依聚醣添加30分後，將ο·〗" g/ml的乳酸菌 (Lactobacillus pentosus ; FERM ABP-10028 )(死菌）添 加於各格子。培養24小時後，回收培養澄清液，IFN_ r 座里以 ELISA 套組（OptEIA、BD Pharmingen)測定（圖 4 0)。又’欲確認岩藻依聚醣單獨時的效果，未使用乳酸 菌下進行與上述相同之操作。 3種岩藻依聚藶各單獨使用時，確認出IFN_ ^誘導 能。且，將此與乳酸菌並用時達到預測以上之強度。因 此，岩藻依聚醣因與乳酸菌並用而可相乘性地活化脾細 胞，對於活體之免疫功能的調節非常有用。 【圖式簡單說明】 〔圖1〕圖1表示由沖繩髮菜經熱水萃取所得之岩藻 依聚醣的糖組成分析之HP LC圖。 〔圖2A〕圖2A表示水解岩藻依聚醣時所使用的酸濃 度對免疫賦活活性之影響。 -47- 200803872 (44) [Η 2Β] Η 2B表示水解岩藻依聚醣時所使用的酸濃 度對免疫賦活活性之影響。 [ffl 3Α]圖3Α表示水解岩藻依聚醣時所使用的溫度 對免疫賦活活性之影響。 〔圖3Β〕圖3Β表示水解岩藻依聚醣時所使用的溫度 對免疫賦活活性之影響。 〔圖4〕圖4表7Κ水解岩藻依聚醣時所使用的小時對 免疫賦活活性之影響。 〔圖5〕圖5表不式（1 )所示分子量爲3 40的岩藻依 寡醣之MS光譜。 〔圖6〕圖6表不式（π)所示分子量爲486的岩藻 依寡醣之MS光譜。 〔圖7〕圖7表示式（；[)所示分子量爲34〇的岩藻依 寡醣之W-NMR光譜。 〔圖8〕圖8表示式（：[)所示分子量爲34〇的岩藻依 寡醣之13C-NMR光譜。 〔圖9〕圖9表示式（Π)所示分子量爲480的岩藻 依寡糖之1H-NMR光譜。 〔圖10〕圖10表示式（π)所示分子量爲486的岩 . 藻依寡糖之13C-NMR光譜。 〔圖11〕圖11表示式（ΠΙ)所示分子量爲390的岩 藻依寡糖之1H-NMR光譜。 〔圖12〕圖12表示式（ΙΗ)所示分子量爲39〇的岩 藻依寡糖之13C-NMR光譜。 -48- 200803872 (45) 〔圖13〕圖13表示式（V)所示分子量爲566的岩 藻依寡糖之1H-NMR光譜。 〔圖14〕圖14表不式（V)所不分子量爲566的岩 藻依寡糖之13C-NMR光譜。 〔圖15〕圖15表示式（VI)所示分子量爲712的岩 藻依寡糖之1H-NMR光譜。 〔圖16〕圖16表示式（VI)所示分子量爲712的岩 藻依寡糖之13C-NMR光譜。 〔圖17〕圖17表示式（VII)所示分子量爲754的岩 藻依寡糖之1H-NMR光譜。 〔圖18〕圖18表示式（VII)所示分子量爲754的岩 藻依寡糖之13C-NMR光譜。 〔圖19〕圖19表示式（VIII)所示分子量爲808的 岩藻依寡糖之W-NMR光譜。 〔圖20〕圖20表示式（VIII)所示分子量爲8 08的 岩藻依寡糖之13c-nmr光譜。 〔圖21〕圖21表示式（IX)所示分子量爲850的岩 藻依寡糖之1H-NMR光譜。 〔圖22〕圖22表示式（IX)所示分子量爲850的岩 藻依寡糖之13C-NMR光譜。 ♦ 〔圖23〕圖23表示式（VII)所示分子量爲754的岩 藻依寡糖經再生後之iH-NMR光譜。 〔圖24〕圖24表示式（VII)所示分子量爲754的岩 藻依寡糖經再生後之TOG-MS光譜。 -49- 200803872 (46) 〔圖25〕圖25表示式（VII)所示分子量爲7 54的岩 藻依寡糖經再生後之ESI-MS/MS光譜。 〔圖26〕圖26表示式（IV)所示分子量爲42〇的岩 藻依寡糖經再生後之FAB-MS光譜。 〔圖27〕圖27表示式（IV)所示分子量爲420的岩 藻依寡糖經再生後之MS/MS光譜。 〔圖28〕圖28表示式（X)所示分子量爲858及式 (XI)所示分子量900的岩藻依寡糖之faB-MS光譜。 〔圖29〕圖29表示式（X)所示分子量爲858的岩 藻依寡糖之FAB-MS/MS光譜。 〔圖30〕圖30表示式（XI)所示分子量爲9〇〇之岩 藻依寡糖的FAB-MS/MS光譜。 〔圖31〕圖31表示沖繩髮菜經水解後以ABEE進行 螢光標識化之ESI-MS圖。 〔圖32A〕圖32A表示式（I)所示岩藻依寡糖與乳 酸菌並用時可相乘性地提高脾細胞之IFN - 7誘導效果。 〔圖3 2B〕圖32B表示式（II)所示岩藻依寡糖與乳 酸菌並用時可相乘性地提高脾細胞之IFN- r誘導效果。 〔圖33〕圖33表示岩藻依寡糖混合物與乳酸菌並用 時可相乘性地提高脾細胞的IFN- r誘導效果。 〔圖34〕圖34表示岩藻依寡糖與乳酸菌並用時可相 乘性地提高樹狀細胞的IL-12誘導效果。 〔圖35〕圖35表示岩藻依寡糖與乳酸菌並用時可相 乘性地提高樹狀細胞1L-10誘導效果。 -50· 200803872 (47) 〔圖36〕圖36表示岩藻依寡糖與乳酸菌丙用時可相 乘性地提高CTL活性。 〔圖37〕圖37表示藉由幾乎無活性的乳酸菌與岩藻 依聚醣水解生成物之IL-12產生的相乘性增強。 〔圖3 8〕圖3 8表示乳酸菌以外之免疫賦活劑與岩藻 依聚醣水解生成物之IFN- 7産生的相乘性增強。 〔圖39〕圖39表示乳酸菌與岩藻依聚醣水解生成物 之相乘性增強NK活性以in vivo證明。 〔圖40〕圖40表示岩藻依聚醣與乳酸菌並用時，相 乘性地提高脾細胞的IFN- r誘導效果。 -51 -

Claims (1)

1. 200803872 十、申請專利範圍 i一種組成物，其特徵爲含有岩藻依聚醣或岩藻依聚 醣水解生成物與免疫賦活原料者。 2 ·如申請專利範圍第1項之組成物，其中該水解生成 物係由將岩藻依聚醣以0.1〜6·〇ν的酸，於25〜1〇(rCT 進行0.2 5〜2·5小時之水解所得者。 3 ·如申請專利範圍第2項之組成物，其中該水解生成 物係由將岩藻依聚醣以0.5〜4.0Ν的酸，於30〜下進 行0.5〜2.0小時之水解所得者。 4·如申請專利範圍第1項至第3項中任一項之組成 物，其中該水解於鹽酸或硫酸下進行。 5. 如申請專利範圍第1項至第4項中任一項之組成 物，其中該水解生成物爲寡糖。 6. 如申請專利範圍第5項之組成物，其中該寡糖爲至 少一種選自岩藻糖、硫酸化岩藻糖、乙醯化岩藻糖、及葡 糖醛酸所成群之糖所構成的雙糖至五糖之寡醣。 7 .如申請專利範圍第6項之組成物，其中作爲該寡糖 含有至少一種選自下述結構式（I) 、 （Π) 、（III)、 (IV) 、（V) 、（VI) 、（VII) 、（VIII) 、（IX)、 (X)及（XI)所示化合物； COOH 〇ίΤ°'

   ⑴ -52- (II) 200803872 (2)

   OH

   OH COOH (III)

   HO (IV) COOH

   OH

   OH (V) v/〇H H03S0 (VI) -53 200803872 (3)

   -54 200803872 ⑷

   ο

   (XI) ο 8. 如申請專利範圍第1項至第7項中任一項之組成 物，其中該免疫賦活原料爲至少一種選自如乳酸菌、酵母 菌、真菌類之微生物；香菇、舞菇（Mai take )、靈芝、 巴西磨菇（agaricus)等蕈類；如含有CpGmotif之免疫原 性寡脫氧核酸（CpG-ODN )、如P〇lyi : C之來自核酸的 物質；酯多醣（LPS )、冷-葡聚醣；海藻糖；中藥；如 MM46癌抗原之癌症疫苗；伴刀豆球蛋白 A( ConA ); BRM (生物反應調節劑）。 9. 如申請專利範圍第8項之組成物，其中該免疫賦活 原料爲乳酸菌。 1 〇 · —種免疫功能調節劑，其特徵爲含有如申請專利 範圍第1項至第9項中任一項之組成物。 1 1 · 一種飲食品，其特徵爲添加如申請專利範圍第1 項至第9項中任一項之組成物。 1 2 · —種醫藥組成物，其特徵爲含有如申請專利範圔 第1項至第9項中任一項之組成物。 1 3 · —種化粧品，其特徵爲含有如申請專利範圍第1 項至第9項中任一項之組成物。 -55- 200803872 序列表 <110> Suntory limited, Tropical Technology Center limited 〈120〉含有岩藻依聚醣或岩藻依聚醣水解生成物與免疫賦活原料 之組成物 〈130〉 S-38-325 〈150> JP 2005-222254 <151> 2005-07-29 <160> 1 <170> Patentln version 3.1 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213〉人造序列 <220> <223〉 CpG-ODN <400〉 1 tccatgacgt tcctgatgct 20