TW200539863A - 6R-(3,6-dideoxy-l-arabino-hexopyranosyloxy) heptanoic acid, preparation process for the same and dauer effect thereof - Google Patents

Description

200539863 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係有關於-種與抑制老化及緊張有關之_，卜 二脫氧-L-阿拉伯糖-六吡喃糖基氧基）庚酸的絕對立體構 型，、其製備方法與其休眠效果。尤其，本發明係指6R(3,6_ 5二脫氧阿拉伯糖-六吡喃糖基氧基)庚酸這種最先從秀麗 線蟲(Caenorhabditis elegance)分離出之費洛蒙的三維立體 化學的測定，及其合成所需的一種中間體，和該費洛蒙的 製備方法及休眠效果。 1〇【先前技術】 以生理活性物質為人所知的費洛蒙，是被定義成在動 物體内所產生和從體内分泌出，以便對相同物種的其它個 體起作用，因而誘發特定的活化作用或引起生理現象變化 的物質。 15拉依據以往的研究，從秀麗線蟲(C· elegance)分泌出的費 洛=是以不到1000道爾頓(Dalt〇n)的極低濃度存在。這費 洛蒙已知是種相當安定及不揮發的單物質或相關化合物， 具有諸如短脂肪酸氫氧化物的層析性質（Riddle, D丄.，

Science，218: 578-580, 1982)。 20 在RidcUe的論文中，雖將費洛蒙部分(moiety)予以部分 =化，但仍不知道的純費洛蒙的正確化學構型與物理性 貝。此外，由於研究人員所用的秀麗線蟲費洛蒙析取物是 種半純化的粗析取物，以致無法研究找出一種正確的生理 標把與生物機制。 6 200539863 因此，本案發明人大量培養在最大狀態時可因緊張或 生活環境惡化而誘發出休眠幼蟲階段、含有費洛蒙的秀麗 線蟲。接著，本案發明人將秀麗線蟲分泌出的費洛蒙予以 分離及純化，並確定純化費洛蒙的化學構型。結果，現已 察覺純化的費洛蒙是6-(3,5-二羥基-6-曱基-四氫-吡喃2氧 基）庚酸，且有下列的二維平面結構式（Paik等人，第 10-2002-070591號韓國專利申請案及第pcT/KR〇3/ 〇2〇59 號PCT申請案）。

體合成仍未為人所知。由於這種新穎的費洛蒙化合物具有5 個非對稱碳，所以該費洛蒙化合物的立體化學構型可能提 供36種立體異構體。因此，必須確定立體化學構型，始可 齡合成與具有正確立體化學之天然費洛蒙相同的費洛蒙化合 -15 物。 • 此外’為研究老化、緊張、新陳代謝、活體訊號傳遞 系統’以開發與抗癌和肥胖症有關的各種醫用物質以及一 種老化與緊張的抑制劑，和研究費洛蒙的活性靶蛋白體， 也無可避免地必須開發用以量產該費洛蒙的完整合成方 20法。 因此’本案發明人採用光譜技術確定了從秀麗線蟲分 離出之費洛蒙的三維立體化學構型，據以合成與天然費洛 7 200539863 蒙相同的費洛蒙。再者，本案申請人也順利實行立體定向 完整合成，因而獲得跟天然費洛蒙完全相同的費洛蒙。此 方法使費洛蒙能量產，因而克服天然費洛蒙數量有限的問 題。另外，依本發明獲得的費洛蒙在使用秀麗線蟲從事活 5體試驗時也確認具有休眠形成效果。 • 【發明内容】 # 因此’本發明之目的之一在於提供一種具有立體化學 結構式(ι_ι)的費洛蒙化合物。

10

15 化學結構式(1-1) 中X疋氣、喊或鹹土金屬，而η是個1至6的整數。 本發明的另-目的是提供一種量產費洛蒙的方法，其 具有具有高產率者。 本么月的又目的是測定一種可供精確合成費洛蒙的 三維立體化學構型。 本發明的再—目的是提供-種用以高產率量產費洛蒙 的中間體。 ' 本i月的另目的是提供費洛蒙作為治療與老化及緊 張有關疾病之醫療劑的用法。 f圖式簡單說明】 8 200539863 第一圖係本發明具有立體化學結構式(i)之費洛蒙的 HR-MS-FMB 頻譜； f =圖係轉明之費祕的IR頻譜； ，二圖係本發明之費洛蒙的b-NMR頻譜； 5 $四圖係本發明之費洛蒙的13C_NMR頻譜； • ，五圖係本發明之費洛蒙的13C-NMRDEPT頻譜； 第六圖係本發明之費洛蒙的2D-NMRHMBC頻譜； 參 第七圖係本發明之費洛蒙的2D-NMRHMQC頻譜； 第八圖係本發明之費洛蒙的2]>NMrr〇ESy頻譜； ίο 第九圖係本發明之費洛蒙的2D-NMRTOCSY頻譜； 第十圖係本發明之費洛蒙的2D-NMRNOE(l)頻譜； 第十一圖係本發明之費洛蒙的2D-NMR NOE(2)頻 譜；以及 第十二圖係本發明之費洛蒙的2d_NM[rn〇e(3)頻譜。 15 φ 【實施方式】 依據光譜分析法，例如HR-MASS，IR，DEPT，2D-NMR (HMBC，HMQC，NOE，ROESY，和 TOCSY)，來確認 6R(3,6- ' 二脫氧_L_阿拉伯糖-六吡喃糖基氧基)庚酸作為一種從秀麗 2〇 線蟲分離出之費洛蒙化合物的三維立體化學結構式⑴。 9 200539863

i

該費洛蒙，6R(3,6-二脫氧心阿拉伯糖-六吡喃糖基氧基) 庚酸的純分子量為276道爾頓(Dalton)，而該分子式則為

CnHW)6。這費洛蒙的推定高分辨質量數是276」65丨。據知 以高分辨FAB所測得的高分辨質量數為276.1652。這質量 數跟計算的質量數幾乎相同（參閱第一圖）。費洛蒙分子之相 關羰基與羥基的功能基係利用紅外線(IR)分析法予以辨識 (參閱第二圖）。 為確定結構式⑴這種嶄新費洛蒙化合物的三維立體化 學構型，係使用dutro-methanol (CD；3〇D)作為溶劑來量測二 維質子核磁共振頻譜(iH_NMR)。另也使用dutr(MTiethan〇l (CD3〇D)作為溶劑來量測c-13核磁共振頻譜(13c_nmr)。 化學位移以ppm表示。 利用1H-NMR(參閱第三圖）、"C_NMR(參閱第四圖)和 DEPT 〇閱第五圖)辨識出各個碳的位置後，即利用 ^參閱六圖）、HMQC (參閱第七圖）、⑽财（參閱第八圖） 和TOCSY (參閱第九圖）來量測仏和13c_的化學位移以 辨識H-和％的正確關係。表4所示者即為麵C光譜 15 200539863 的結果。

為了量測三維空間的立體相互關係，採用了 NOE的一 維NMR技術。第十至十二圖所示者，即為所獲得的N0E 頻譜。 該立體化學結構式(I)的6R(3,6-二脫氧-L-阿拉伯糖-六 吡喃糖基氧基)庚酸，是以結構式(II)和(III)所表示之反應物 經偶聯反應而獲得者。

OBz (11) (III) 如下列反應式1所示，結構式(II)的2,4-二-Ο-苯甲醯基 _3，&二脫氧心阿拉伯糖-六吡喃糖係由結構式(IV)的L-鼠 李糖〜水合物予以合成。

(反應式1) 15 ° ΟΗ ΟΗ

BzCI pyridine. 0°C - r.t. 24hr IV yield : 95%

10%-Pd/C, H2 BzO

EtOAc. 0°C. 3hr yield : 85%

IX ,QBz NH3 OBz

V

MeOH : THF (3:7) r.t·，12hr yield : 87%

Et3N : CHCb (1：4) r.t., I6hr

OH B^6bz VI

OBz

O

BzO VIM OBz

11 200539863 其中Bz是苯甲醯基或苄基。 結構式(V)的化合物係使用苯甲醯氯來保護结構式(IV) 之化合物的四個氫氧基，據以從該化合物(IV)產生。 化合物(VI)則是使用氨來選擇性去除化合物(V)的C-1 5 苯甲醯基而產生。 結構式（VII)的酮化合物係使用pyridinum chlorochlomate (PCC)將化合物（VI)的ΟΙ羥基氧化而產 生。結構式(νπΐ)的化合物係將結構式(VII)之化合物的C_3 苯甲醯基予以選擇性去除而產生。結構式(IX)的化合物則是 ίο在存有10%鈀/碳催化劑的情況下經由氫化而從結構式(VIII) 的化合物產生。此時，結構式(IX)之化合物的C-2 Ο苯甲醯 基具有β-方向。 最後，使用對掌性二異戊基硼氫化物來減低結構式(IX) 之化合物的C-1酮基，據以產生出2,4-二-0-苯甲醯基_3,6_ I5二脫氧-L-阿拉伯糖-六吡喃糖(II)的α-變旋異構物作為立體 定向C-1中間體。 另一反應物，即結構式(ΙΗ)的化合物，則是依據下列反 應式2而從(RM+)-l，2-環氧丙烧作為原料而產生。 (反應式2)

Mg

CuBr THF，-78°C - r.t·，0·Ν

BrMg

yield : 65% 12 20 200539863 如反應式2所示，該(职+⑷·環氧丙烧係被添加到 另行合成的1M4.鱗基·鎂’據叫得—種(2R)_ -2-醇（III)。 5

結構式(I)的化合物係經由下列的反應式3使結構式⑼ 和(III)的化合物起反應而獲得。 (反應式3)

3M-NaOH THFrHaO, r.t.f 12hr

OH

BzoO^ OBz

〇R2 XI (R2： H, benzoyl, benzyl)

Amberlite IFM20(H*) 6hr yield : 87% 讓結構式(Π)和⑽的化合物在存有路丄斯酸(Lewis acid)催化劑的情況下進行縮醛反應，即獲得(2R)_八_7_烯_2_ 基-2,4-二-0-苄基-3,6-二脫氧-a-L-阿拉伯糖_六吡喃糖苷 這種偶聯化合物。另以高猛酸鉀作為氧化劑，經由結構式(X) 之化合物末端脂肪雙鍵的單一反應，據以生產出 (6R)-6-(2,4-一 0-卞基·3,6-一脫氧阿拉伯糖-六ρ比鳴糖 基)庚酸(XI)作為一種有機酸。最後，以氫氧化鈉去除結構 式(XI)之化合物的C-2和C_4苯甲醯基，和使用離子交換 (amberlite)樹脂進行酸化，即生產出結構式⑴的化合物。 此外，結構式⑴的化合物與一鹹基起反應而形成結構 式(M)之化合物的加成鹽。作為鹹基，可用藥學上允許使 13 15 200539863 用的鹹或械土金屬鹽。

OH /C02x (CH2)n’ (Μ) 其中X是氫、鹹或鹹土金屬，而η是個1至6的整數。 _ 5 經由光譜測定法(2D-NMR，C-13 NMR，IR，HRMS， 比旋光度=[a]D2G = -81.0 (c=0.15 MeOH))，可知結構式⑴ 之全合成化合物的頻譜與天然費洛蒙的譜頻相同。 由於這種全合成是以為人熟知的一種絕對立體構型， 即L-鼠李糖開始，且結構式(I)之化合物的全頻譜測定值也 1〇跟天然費洛蒙的頻譜相同，所以可知從秀麗線蟲分離出之 天然費洛蒙的絕對立體構型即為結構式⑴。 此外，在反應式3的合成過程中，不用結構式(in)，改 φ 為偶聯另一種具有1_6碳鏈的院基有機酸，即可獲得各種結 構式(1-1)的衍生物。 15 此外，在反應式3的合成過程中，當該結構式(III)的一 7S-立體異構物反應時，該化合物⑴的6S立體異構體(1-2) 可被合成。 在反應式1以結構式(IX)之化合物來製備結構式(Π)之 化合物的過程中，當獲得的結構式(II)之化合物的C_1，P_差 2〇向異構體被使用時，就可合成具有C-1，S立體異構體之結 構式(1-3)的化合物。 14 200539863

CQX OH (1-2)

OH

5 10

(1-3) 其中n是1至6的整數，而x則是氫、鹹或鹹土金屬。 利用前述合成法，就可量產本發明的費洛蒙⑴及其衍 生物。因此’現可研究費洛蒙的活性乾蛋白體，以及有關 抑制老化與緊張的醫學效用。 其次，對於依本發明之方法而合成的6R(356-二脫氧七_ 阿拉伯糖-六吡喃糖基氧基)庚酸⑴這種化合物，使用秀麗線 蟲來量測其休眠形成效果。 也就是說，這種合成費洛蒙是在彼此不同的餵食、溫 度和群集密度(crowd density)條件下，使用秀麗線蟲來量測 其休眠形成效果。 在餵食和溫度(15至25。〇適當以及群集密度低的條件 下’雖然應從L2前半步驟或L3後半步驟進展到成蟲步驟， 但在混合這種合成費洛蒙時，步驟卻轉到休眠幼蟲階段。 休眠幼蟲的秀麗線蟲不吃也不動，形成圓形形狀。為 求比較，便以七隻休眠幼蟲的秀麗線蟲和一隻成蟲步驟的 15 200539863 秀麗線蟲從事比較性的觀察。結果，觀察到合成費洛蒙對 休眠形成效果有很大的影響。在圖片1中可看出秀^二蟲 未成長也未動。 圖片1:以合成費洛蒙(I)處理過後之秀麗線蟲的休眠幼 5 蟲與年輕成蟲。

圖片2 ··休眠幼蟲的秀麗線蟲 其次，如表3所示，若使用320 pg/plate的合成費洛蒙 時，即可獲得100%的休眠形成效果。 這結果成為進一步研究的基礎，並需大量的費洛蒙來 16 200539863 從事口式各樣的彳讀。目此，貞*丨費洛蒙很重要 就是說，因為依本發明可合成大量的費洛蒙與各式各= 衍生物，所㈣纽從事較佳的研究。 氣的 茲舉實施例將本發明詳予說明於後。 實施例1 1，2,3,4-四-〇-苯甲醯基心吡喃鼠李糖(¥)的合成 將L-鼠李糖-水合物(IV) (7 5g，41 2 _〇1)溶解於^ ㈣(100 ml)中，再於溫度降至代的狀態對其添加苯甲^ 氣(28.7 m卜0.247 mmol)。然後讓反應物的溫度逐漸增加到 ίο至’皿，再於16小時後添加水(15 ml)，完成反應。

以0¾¾ (50 ml X 2)析取所獲得的產品。接著用1M HC1 (40 ml X 2)與飽和NaHC03溶液(40 ml)清洗，再用

MgS〇4使其乾燥。將這溶液予以真空濃縮，再利用快速管 柱層析法（曱苯/EtOAc，10:1，v/v)分離出化合物(v) (22.7g， 15 95%，α:β=2:1)。

Va ; —種無定形白色固體物，Rf=0 % (曱苯/Et〇Ac， 10:1，v/v); [a]D22=+82.0 (c=1.5，CHC13) [lit· 41 [a]D=+80.0 (c= 1.5，CHC13)]; 2〇 IR(film) Vmax 3066, 3032, 2986，1730，1601，1452, 1260,1176, 1094, 1068, 1027, 965 cm.1 ; NMR (250 MHz, CDC13) δ 8.22-7.25 (m? 20H5 aromatic H)? 6.57 (d5 1H5 J=1.6 Hz5 H-l)? 6.01 (dd? 1H? J=3.45 10.2 Hz? H-3)5 5.89 (dd5 1H5 J=1.9? 3.2 Hz? H-2)? 5.82 (t? 1H5 17 200539863 J=10.0 Hz，H-4)，4.41-4.35 (m，1H，H-5)，1.42 (d5 3H，J=6.2 Hz，-CH3); 13C NMR (62.9 MHz，CDC13) δ 165.8(2)，165.4, 164.1， 134.0，133.8，133.6，133.4，130.2(2)，130.1(2)，129.8(4)， 5 129· 1(2)，129.0(2)，128.8(2)，128.7(2)，128.6(2)，128.4(2)， 94.4(C-1，α)，71.3, 70.0, 69.8, 69·4, 17.8(C-6); C34H28Na〇9 (M+ +Na) m/z 的 HRMS(FAB)計算值為 603.1631，實際測定值則為603.1637。 ίο 實施例2 2,3,4-三-〇_苯甲醯基心吡喃鼠李糖(VI)的合成 將化合物(V) (22.4g，38·6 mmol)溶解於MeOH:THF (3:7, 40〇1111)中，再於〇。(：溫度條件下讓>^3氣體起泡和在〇。€ 溫度條件下攪拌1小時。這反應過程是在重複前述過程時 15以薄層層析法予以辨識。然後將溶劑真空濃縮，再利用快 速管柱層析法（甲苯/EtOAc，10:1，v/v)分離出化合物(VI) (16g，87%，α:β=14:1) 〇

Via ; —種白色固體物，RMU8 (曱苯/EtOAc，10:1， v/v)； 2〇 [a]D23=+236.0 (c=1.0，CHC13); IR(film) Vmax 3458，3062，2985，2935，1727，1601， 1451，1348, 1264, 1102, 1069, 1027 cm]; lH NMR (250 MHz? CDC13) δ 8.12-7.22 (m5 15H, aromatic H)5 5.95 (dd5 1H? J=3.2? 10.1 Hz? H-3)? 5.74-5.62 (m? 18 200539863 2H)5 5.49-5.48 (m? 1H)? 4.54-4.43 (m5 1H5 H-5)? 4.21 (d? 1H? J二4.0 Hz，-OH), 1.37 (d，3H，J=6.2 Hz，-CH3); 13C NMR (62.9 MHz，CDC13) δ 166.0，165.9，165.8, 133.6, 133.5, 133.3, 130.0(2)，129.9(2)，129.8(2)，129.4, 129.3, 5 129.2, 128.7(2)，128.5(2)，128.4(2)，92.3(01，α)，72.1，71.5, 69·9, 66.7, 17.8 (C-6); C27H24Na08 (M+ +Na) m/z 的 HRMS(FAB)計算值為 488.1369，實際測定值則為499.1372。 1〇 實施例3 2,3,4_三_0_苯曱醯基·L-鼠李糖_1，5-内S旨(VII)的合成 在N2氣流條件下將PCC (30g, 0·139 mmol)和充分乾燥 的4A分子木質碎片（shieves)(25g)添加到一燒瓶内。接著將 乾的CHfl2 (250 ml)添加到燒瓶，於室溫條件下將燒瓶攪 15拌1小時，再冷卻到〇 °C。添加在乾的CH2C12 (250 ml)中 溶解的化合物(VI) (16g，33·6 mmol)，並於室溫條件下攪拌4 小時。然後添加冷的EbO (200 ml)並用矽凝膠過濾，完成 這反應。然後將溶劑真空濃縮，再利用快速管柱層析法（甲 笨/EtOAc, 10:1，v/v)分離出化合物(VII) (13.54g，85%)。 20 VII ; —種無定形白色固體物，Rf=〇.51 (甲苯/gt〇Ac 10:15 v/v)； [a]D22=-10.0 (c=0.5，CHC13); IR(film) Vmax 3064，3031，2983，2936，1784，1730 1601，1452, 1393, 1259, 1096, 1026 cm·1 ; ’ 19 200539863 lH NMR (250 MHz? CDC13) δ 8.10-7.29 (m5 15H? aromatic H)，6.28 (d，1H，J=3.8 Hz)，6.05 (dd，1H，J=1.4, 3.8 Hz)，5.34 (dd，1H，J=1.4, 11.0 Hz)，4.96-4.85 (m5 1H，H-5), 1.61 (d，3H，J=6.3Hz，-CH3); 13C NMR (62.9 MHz，CDC13) δ 165.9(01)，165.1，164.9, 164.8，134.0，133.9，133.8，130.1(4)，130.0(2)，128.7(5)， 128.5(3)，128·4, 74.8, 74.1，71.8, 67.6, 19·0 (C-6); C27H2308 (M+ +H) m/z 的 HRMS(FAB)計算值為 475.1393，實際測定值則為475.1393。 10 實施例4 2,4-二-0-苯甲醯基-3,6-二脫氧-L_赤-六-2-enono-l，5-内 酯(VIII)的合成 在N2氣流條件下將化合物(VII) (13.2g，27.8 mmol)溶 15解於Et3N:CHCl3(l:4，500 ml)中並於室溫條件下攪拌16小 時。等完成反應後用水洗。使用無水MgS04將一有機層乾 燥。然後將溶劑真空濃縮，再利用快速管柱層析法（甲苯 /EtOAc，10:1，v/v)分離出化合物(VIII) (6.37g，65%)。 VIII; —種晶狀白色固體物，Rf=〇.53 (甲苯/EtOAc, 10:1， 20 v/v)； mp 108-112 °C (lit.40 mp 107-110 °C)； [a]D21-93.1 (c=1.0? CHC13) [lit.43 [a]D20=-93.0 (c=1.05 CHC13)]； IR(film) Vmax 3069，3007，2936，2920，1738，1674, 20 200539863 1598, 1452, 1355, 1257, 1155, 1115, 1060 cnf1 ; lH NMR (250 MHz? CDC13) δ 8.13-7.44 (m5 10H9 aromatic H)，6.71 (d，1H，J=4.3 Hz，H，3)，5.69 (t，1H，J=4.7 Hz? H-4)? 5.00-4.90 (m5 1H? H-5)5 1.64 (d5 3H? J-6.7 Hz? 5 -CH3); 13C NMR (62.9 MHz, CDC13) δ 165.5, 164.3, 158.0(02)， 140.8, 134.3, 133.9, 130.5(2)，130.0(2)，128.7(5)，127.9, 125.6, 77.4, 68·6, 18.4(06); C2〇H17〇6 (M+ +H) m/z 的 HRMS(FAB)計算值為 ίο 353.1025，實際測定值則為353.1023。 實施例5 2,4-二-〇-苯曱醯基-3,6-二脫氧-L_阿拉伯糖 -hexono_l,5-内酯(IX)的合成 15 將化合物(VIII) (6.1g，17.31 mmol)溶解於 EtOAc (300 ml)中和添加l〇%的Pd/C (400 mg)，並在以氫氣取代後，於 室溫條件下搅拌3小時。以celite 545過濾反應物。然後將 溶液真空濃縮，再利用快速管柱層析法（甲苯/EtOAc，10:1, v/v)分離出化合物(IX) (5.2g，85%)。 2〇 IX; —種白色固體物，Rf=0.45 (甲苯/EtOAc，10:1，v/v); [oc]D21=+18.4 (c=1.0, CHC13) [lit·43 [a]D20=+18.2 (c=1.0, CHC13)]； IR(film) Vmax 3031，2982, 2939，1724，1601，1452, 1383, 1273, 1114, 1070, 1028 cm]; 21 200539863 [H NMR (250 MHz, CDC13) δ 8.11-7.43 (m? 10H? aromatic H)5 5.90 (dd? 1H? J=7.65 12.0 Hz? H-2)? 5.30-5.25 (m5 1H5 H-4), 4.87-4.77 (m5 1H? H-5)? 2.78-2.52 (m? 2H5 H-3eq? 3ax)? 1.58 (d5 3H? J=6.5 Hz? -CH3)； 5 13C NMR (62.9 MHz, CDC13) δ 168.0(01)，165.5(2)， 133.9，133.8，130.2(2)，129·9(2)，129.1，129.0，128.8(2)， 128.6(2)，76.9, 70.5, 65.0, 30.2(C_3X 19.3(06); C2〇H19〇6 (M+ +H) m/z 的 HRMS(FAB)計算值為 355·1182，實際測定值則為355.1178。 10 實施例6 2,4-二-〇_苯甲醯基-3,6-二脫氧阿拉伯糖-六吡喃糖 (II)的合成 (1) 0.5Μ二異戊基硼氫化物的製備 在Ν2氣流條件下將iM BH3-THF (65 ml)冷卻到-10 °c ’再逐漸添加2M 2,3-二甲基-2-丁烯(65 ml)。於〇 溫 度條件下攪拌2小時，和用於反應(2)中。 (2) 2,4-二_〇_苯甲醯基_3,6_二脫氧-L-阿拉伯糖-六p比喃 糖(Π)的合成 士將溶解於乾THF (15 ml)中的化合物(ιχ)添加到在反應 時所製備的〇·5Μ二異戊基硼氫化物(127 ml)。接著，於 至溫條件下攪拌20小時。等完成反應後，添加水(3 ml)， 再攪拌30分鐘。然後把反應混合物冷卻到0。〇再添加30% 2〇2 (15 ml)，另添加3N氫氧化鈉，使酸鹼值保持為pH 7 22 200539863 至8。接著將溶劑THF真空濃縮，將其溶解CH2Cl2(l〇〇ml) 中，並以水(50ml)清洗。使用無水MgS04將一有機層乾燥。 然後將溶劑真空濃縮，再利用快速管柱層析法（甲苯/Et0Ac， 10:1，v/v)分離出化合物(II) (4.72g，93.8%，α:β=4.6:1)。 5 Ηα ; — 種無色漿料，Rf=0.23 (甲苯/EtOAc，10:1，ν/ν); [a]D24-+51.4 (c=1.05 CHC13)； IR(film) Vmax 3448，3065，3027，2979，1720，1601， 1452, 1270, 1112, 1095, 1068, 1025 cm·1 ; 'H NMR (250 MHz5 CDC13) δ 8.15-7.43 (m, l〇H5 ίο aromatic H)，5.29 (s，1H，H-l)，5.25-5.15 (m5 2H，H-2, H-4)， 4.39-4.28 (m? 1H5 H-5)? 3.51 (d5 1H5 J=3.6Hz? -〇H)? 2.44 (td5 1H，J=3.8, 13.5 Hz, H-3eq)，2.29 (ddd5 1H，J= 3·1，1ι·〇, 13 7 Hz，H-3ax)，1.30 (d，3H，J=6.7 Hz，-CH3); 13C NMR (62.9 MHz, CDC13) δ 166.0，165.8, 133 5 15 133.4, 130.0(3)，129.8(3), 128.6(4)，91.1(C-1，a)，71〇(c>2)， 70.7(04)，67.0(C-5)，29.2(C-3)，18.0(C.6); ’ C2〇H21〇6 (M+ +H) m/z 的 HRMS(FAB)計算值為 357.1338，實際測定值則為357·1334。 20 實施例7 (2R)-7-辛烯-2-醇(III)的合成 (1)4_戊烯基溴化鎂的合成 將溶解於乾THF (20 ml)中的5-溴基-i_戊烯(28如 23·5 mmol)以滴流方式並用30分鐘以上的時間添加到溶解 23 200539863 於乾THF (3 ml)中的鎂懸浮液(571mg，23·5 mmol)。再於6〇 °C溫度條件下使反應混合物回流3小時，其後再冷卻到室 溫程度，即製備格林納(Grignard)溶液。 (2) (2R)-7_辛烯-2-醇(III)的合成 5 將(RH4*)·1，2·環氧丙烷(112 ml, 16.0 mm〇l)溶解於乾 THF (23 ml)中’再添加 CuBr (230 mg5 1.6 mmol)，然後將 , 溫度降到-78。0接著把反應⑴時所製備的1M‘戊稀基漠 # 化鎂溶液(23 ml5 23.5 mmol)添加到反應混合物。使溫度逐 漸增加到室溫程度，再把混合物攪拌4小時。接著以飽和 10 NH4C1溶液(10 ml)完成反應。用Et2〇 (2〇 ml χ 2)析取所獲 知的產品，並以水(10 ml)洗。使用無水MgS04將一有機層 乾燥。然後將溶液真空濃縮，再利用快速管柱層析法(Et2〇/ 正戊晞，5:1，v/v)分離出化合物(III) (1.3g，65%)。 III ; 一種無色液體，Rf=0.15 (Et20/正戊晞，5:1，v/v); 15 [a]D23=-10.7 (c=0.28? CHC13)； φ IR(film) Vmax 3357，2969，2930，2858，1641，1460, 1416, 1374, 1305, 1122 cm·1 ; 'H NMR (250 MHz5 CDC13) δ 5.89-5.73 (m? 1H? H-2)? 5.03-4.92 (m5 2H，H-1X 3.80-3.78 (m，1H，H-7)，2_07 (m5 2H， 2〇 H-3)，1.43-1.39 (m5 6H，H-4, 5, 6)，1.18 (d5 3H，J=6.1 Hz， -CH3)； 13C NMR (62.9 MHz, CDC13) δ 138.9(C-2)，114.4(01)， 68.0(C-7)，39.2(06)，33.8(03)，29.0(C-4)，25.3(05)， 23.5(C-8) 24 200539863 實施例8 (2R)_ 八 _7-en-2-基 _2,4_ 二-0_¥基_3,6_ 二脫氧 _a-L-阿拉 伯糖-六吡喃糖苷(X)的合成 5 在A氣流條件下將化合物（Π) (2·〇 g，5.61 mmol， leq)，化合物(III) (1.08g，8·42 mmol)和4 A分子木質碎片 (shieves)(200g)溶解於乾的0¾¾ (30 ml)，其後將溫度冷 卻到 0 °C，並逐漸添加 BF3-Et20 (2.85 ml5 16.8 mmol)和攪 拌10小時。然後添加EtsN (5 ml)，完成反應再過濾。然後 ίο將溶液真空濃縮，再利用快速管柱層析法(正己炫yEtOAc， 5:l，v/v)分離出化合物(X)(1.89g，72%)。 X : —種無色蒙料 ’ Rf=0.55 (正己院/EtOAc，5:1，v/v); [a]D22=+0.9 (c=0.5，CHC13); IR(film) Vmax 3069，2974，2933，2859，1723，1602, is 1451，1316, 1267, 1152, 1108, 1068, 1025 cm·1 ; lU NMR (250 MHz, CDC13) δ 8.14-7.42 (m? 10H? aromatic H)，5.93-5.76 (m，1H)，5.26-5.16 (m，2H，H_2, H_4)， 5.07-5.00 (m，3H，H-l), 4.20-4.09 (m，1H，H-5)，3.85 (m，1H)， 2.48-2.41 (m，1H，H-3，eq)，2.28-2.17 (m，1H，H-3，ax)，2.11 2〇 (m, 2H? 1.68-1.37 (m? 6H)5 1.30 (d, 3H? J=6.2 Hz)? 1.20 (d? 3H? ]=6Λ Hz)； 13C NMR (62.9 MHz, CDC13) δ 165.9，165.7，138.9, 133.3, 133.2, 129.9(3), 129.6(2), 128.5(4), 114.5, 93.8(0-Γ5 α)5 72.5, 71·3, 70.7, 67·0, 37.0, 33.8, 29.8, 28.8, 25.3, 19.2, 25 200539863 17.9 ； C28H35〇6 (M+ +H) m/z 的 HRMS(FAB)計算值為 467.2434，實際測定值則為467.2438。 5 實施例9 (6R)-6_(2,4-二苯甲醯基_3,6_二脫氧-a_L_阿拉伯糖· 六吡喃糖基)庚酸(XI)的合成 Ιί 將化合物(X) (1.8 g5 3.86 mmol)溶解於丙酮中，再對其 添加 NaHC03(972 mg，11.57 mmol)。接著，逐漸添加 KNn04 ίο (3g，19.29mmol)並攪拌12小時。等完成反應後，即使用10〇/〇 HC1 (20 ml)讓其酸化。用EtOAc (100 ml X 2)析取所獲的產 品，並用鹽水(70 ml)洗。使用無水MgS04將一有機層乾燥。 然後將溶劑真空濃縮，再利用快速管柱層析法（正己烷 /EtOAc，5:1，v/v)分離出化合物(XI) (l.51g，87%)。 15 XI ; —種無色漿料，Rf=0.13 (己烷/EtOAc, 5:1，v/v); • [a]D22=_1.9 (c=1.0，CHC13); . IR(film) Vmax 3063, 2973, 2935，1721，1602，1451， 1316, 1267, 1109, 1068, 1025 cm·1 ; ^ NMR (250 MHz? CDC13) δ 10.69 (bs? 1H? -OH)? 20 8.14-7.42 (m? 10H5 aromatic H)? 5.26-5.17 (m? 2H5 H-2\ H-4’)，4.98 (s5 1H，H-l’X 4.19-4.08 (m，1H，H-5，)，3.87 (m5 1H)? 2.47-2.36 (m? 3H)? 2.28-2.17 (m3 1H, H-35ax)? 1.72-1.45 (m3 6H)5 1.31 (d? 3H, J=6.2 Hz)? 1.21 (d5 3H? J=6.01 Hz)； 13C NMR (62·9 MHz，CDC13) δ 179.8，165.8，165.7, 26 200539863 133·35 133.2，130.0，129.9(2)，129.8，129.7(2)，128.5(4)， 93.8(C-1，，α)，72.4, 71.2, 70.7, 67.1，36.7, 34.0, 29.7, 25.2, 24.6, 19.1，17·9 ; C27H33〇8 (Μ+ +Η) m/z 的 HRMS(FAB)計算值為 5 485.2175，實際測定值則為485.2165。 實施例10 6R-(3,6-二脫氧-L-阿拉伯糖·六吡喃糖基氧基)庚酸(I) 的合成 ίο 將化合物(XI) (472.9mg，0.976 mmol)溶解於 MeOH (20 ml)中，再於〇 °C溫度條件下添加NaOMe(52.7 mg，0.976 mmol)。接著，把溫度逐漸添加到室溫程度，並對混合物攪 拌12小時。等完成反應後，將MeOH真空濃縮。接著，將 其溶解於水(20 ml)中和用CH2Cl2 (20 ml X 5)清洗，以便去 15除苯曱酸甲酯這種副產品。使用離子交換樹脂(amberlite) IR-120(H+) (500 mg)調整溶液層的PH。過濾後，以冷凍乾 燥法去除溶液層的水，再利用快速管柱層析法(EtOAc/ MeOH，11:1，v/v)分離出化合物⑴（234.6mg，87%)。 I ·· 一種無色油料，Rf=0.43 (EtOAc/MeOH，11.1，v/v); 20 [a]D20=-81.0 (c=0.1，MeOH ); IR(film) Vmax 3391，2969, 2933，1712，1452，1379, 1244, 1126, 1103, 1042, 1031 cm-1 ; lH NMR (500 MHz, CD3OD) δ 4.64 (s5 1H, Η-Γ)? 3.80-3.77 (m5 1H，H-6)，3·72-3·71 (m，1H，H-2，)，3.63-3.59 (m，1H， 27 200539863 H-5’)，3.54-3.49 (m，1H，H-4，)，2.30 (t，2H，J=7.5 Hz，H-2) 1.96-1.92 (m，1H，H-3，eq)，1.79-1.74 (m，1H，H-3’ax)，l 61 (m，2H，H-3)，1.56-1.50 (m，2H，H-5)，1·47 (m，2H，H-4)，121 (d，3H，JN6.5 Hz，H-6，)，1.12 (d5 3H，J=6.5 Hz, H-7); 5 13C NMR (125·7 MHz, CD3OD) δ 177.7(01)，97.6(04，， α)，72.4(06)，71.3(C-5，)，70.1(02，)，68.5(C-4，)，38·2(α5)5’ 36.1(03’)，35.0(C-2)，26.5(03)，26· 1(04)，19·4((：·7)5 18.2(C_6，）； 5 C13H25〇6 (Μ +H) m/z 的 HRMS(FAB)計算值為 ι〇 277.1651，實際測定值則為277 1652。 實施例11 6R-(3，6_二脫氧心阿拉伯糖·六吡喃糖基氧基)庚酸 之鹹性加成鹽(Ι·1 ; n=45X=Na)的合成 15

20 將化合物(I) (267mg，l.o mmol)溶解於 Me〇H (2〇 =再於0 π溫度條件下添加Na〇Me(4G Gmg，丨G m ，者’把溫度逐漸添細!室溫程度，並對混合物攪摔 ^。等完成反應後，將Me〇H真空濃1 ^乾㈣去除料層的水，並分㈣化 (271mg，95%) 〇 式驗範例 休眠形成效果之活性的量测 為鑑別本發明之費洛蒙的仗 W休眠形成效果，係將費洛蒙 28 200539863 s basa 培 ds 及 Thomas, Genetics 130 · m m =她梅如 录j所示者。 表3 :(費洛蒙對秀麗線蟲之休眠形成效果活性) 休眠效果 OP 50(160ug/plate)時的費洛蒙休眠形成效果

濃度(ug/plate) 29 200539863 表4:費洛蒙6R(3,6_二脫氧阿拉伯糖-六吡喃糖基氧 基)庚酸的頻譜分析結果 位置 δΗ (mult, J) δ〇 HMBC (H to C)

12345671^2^31 2 3 4 5 64^5^6^ 2.30 (t? 7.5) 1.64 (m) 1.47 (m) 1.50-1.48 (m) 3.80-3.77 (m) 1.14 (d5 6.5) 4.66 (s) 3.73-3.72 (m) 1.97-1.95 (m) 1.79-1.74 (m) 3.54-3.59 (m) 3.64-3.62 (m) 1.24 (d3 6.5) 177.3 34.6 25.5 25.1 37.1 71.3 18.3 96.6 69.0 34.9 6 7 5 5 6 1 5 ? ? 5 Ί 3 4 3 4 7 6 ? ? 5 ? ? 5 5 9. 21223552 .4.2.2 7.0.7. 6 7 1 3 3 4 5 4 5 6 30 1 工業應用性 2 如前所述，本發明首先確認(6R)-6_(3,6-二脫氧-L-阿拉 3 伯糖-六吡喃糖基氧基)庚酸這費洛蒙及其鹽類的立體化學 4 構型。根據這事實，已順利實行有效的全合成，以致對取 5 自秀麗線蟲的費洛蒙克服了微細分離的難題，使該費洛蒙 6 可以量產。 因此，現可使用這費洛蒙來開發與老化、緊張、新陳 代謝、活體訊號傳遞系統、抗癌和肥胖症有關的各種醫用 物質以及一種老化與緊張的抑制劑。此外，也可研究費洛 蒙的活性靶蛋白體。 200539863

以上所舉實施例僅用以說明本發明而已，非用以限制 本發明之範圍。舉凡不違本發明精神所從事的種種修改或 變化，倶屬本發明申請專利範圍。 31 200539863 【圖式簡單說明】 第一圖係本發明具有立體化學結構式(I)之費洛蒙的 HR-MS-FMB 頻譜； 第二圖係本發明之費洛蒙的IR頻譜； 5 第三圖係本發明之費洛蒙的iH-NMR頻譜； 第四圖係本發明之費洛蒙的13C-NMR頻譜； 第五圖係本發明之費洛蒙的13C-NMR DEPT頻譜； 第六圖係本發明之費洛蒙的2D-NMRHMBC頻譜； 第七圖係本發明之費洛蒙的2D-NMRHMQC頻譜； ίο 第八圖係本發明之費洛蒙的2D-NMRROESY頻譜； 第九圖係本發明之費洛蒙的2D-NMRTOCSY頻譜； 第十圖係本發明之費洛蒙的2D-NMRNOE(l)頻譜； 第十一圖係本發明之費洛蒙的2D-NMR NOE(2)頻 譜；以及 15 第十二圖係本發明之費洛蒙的2D_NMRNOE(3)頻譜。 32

Claims (1)

1. 200539863 、申請專利範圍： 1. 一種費洛蒙化合物，其具有如下所示的立體化學結 構式(i-i): co2x

   (CH2)rT 化學結構式(Μ) 其中X是氳、賊或贼土金屬，而η是個1至6的整數。 2. 如申請專利範圍第1項所述之費洛蒙化合物，其中 該結構式(Μ)的化合物是6R(3,6_二脫氧阿拉伯糖-六吡 喃糖基氧基)庚酸。 3. 如申請專利範圍第1項所述之費洛蒙化合物，其中 該結構式(M)的化合物是6R(3,6-二脫氧-L-阿拉伯糖-六吡 喃糖基氧基)庚酸的鹹或鹹土金屬鹽。 4. 如申請專利範圍第1項所述之費洛蒙化合物，其中 該結構式(1-1)的化合物係為一具有立體化學結構式(1-2)的 S形式(S-form)立體異構體： 15 UH 0〆

   (CH2)n" 化學結構式(1-2)。 如申請專利範圍第1項所述之費洛蒙化合物，其中 33 200539863 該結構式(1-1)的化合物係為一具有立體化學結構式(1-3)之 C-l’S形式立體異構體：

   10

   化學結構式(1-3)。 6. —種費洛蒙中間體，其具有如下所示之結構式(X):

   其中心是氳、苯曱醯基或苄基。 7. —種費洛蒙中間體，其具有如下所示之結構式(XI):

   OR2 結構式(XI) 其中R2是氳、苯甲醯基或苄基。 8. —種具有立體化學結構式(M)之費洛蒙化合物的製 備方法，該製備方法包括下列步驟： 34 200539863 在存有路易斯酸催化劑的情況下使結構式(II)的化合 物與結構式(III)的化合物縮醛化； 藉由一氧化劑使獲得的偶聯反應物的一脂肪末端雙鍵 轉變成一有機酸；以及 以一種鹹去除脫氧鼠李糖基的二個0-苯甲醯保護基， 再以一種酸進行酸化；

   化學結構式(1-1) 10

   BzO OBz 結構式(II)

   其中Bz是苯曱醯基或苄基。 9·如申請專利範圍第8項所述之製備方法，其中該催 15化劑是BF3_Et2〇與分子木質碎片（shiVes)。 10.如申請專利範圍第8項所述之製備方法，其中該氧 化劑是KMn〇4 ’而NaHC〇3則作為—補充劑。 U·如申請專利範圍第8項所述之製備方法，其中該醎 35 200539863 是氫氧化鈉(NaOH)或氫氧化鉀(KOH)，而該酸則是離子交 換(amberlite)樹脂型的酸。 12·如申請專利範圍第8項所述之製備方法，其中該結 構式(II)的化合物是從結構式(VII)的化合物所獲得者；

   13.如申請專利範圍第12項所述之製備方法，其中該 結構式(VII)的化合物是將結構式(VI)的化合物予以氧化 而獲得者； OH

   結構式(VI)。 14· 一種使用一具有立體化學結構式(M)及其鹹和鹹 土金屬鹽類之6R(3,6-二脫氧-L-阿拉伯糖-六吡喃糖基氧 基)庚酸的費洛蒙化合物作為醫療劑以治療與老化或緊 15 張有關疾病的用法； 36 200539863 HO

   R R OH 化學結構式(M) 其中X是氫、鹹或鹹土金屬，而n是個1至6的整數。

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