TW200530234A - Substituted 1H-pyrrolo[3,2-b, 3,2-c, and 2,3-c]pyridine-2-carboxamides and related analogs as inhibitors of casein kinase Iε - Google Patents

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200530234 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明之背景 1·本發明之領域 本發明係關於一系列取代的1H-吡咯並[3,2^)；|吨〆 羧醯胺、1H-吡咯並[3,2_c]吡啶-2-羧醯胺和ιΗ、吡二t [2,3-c]吡啶_2-羧醯胺。更準確地說，本發明係關於夂# = 基取代和3-雜環硫基取代的1H_吡咯並[3,2七]吡啶:硫 醯胺、1H-吡咯並[3,2-c]吡啶-2-羧醯胺、1H-吡咯並[23綾 吡啶-2-鲮醯胺以及相關類似物。本發明還涉及製造這此<] 合物的方法。本發明涉及的化合物是人酪蛋白數酶= 酸化活性的抑制劑，因此，作為藥物製劑，尤其是在汐块 和/或預防與中樞神經系統相關的疾病和失調方面是很^ = 【先前技術】 2· 技術說明 έ從單細胞生物到人類，很多生物的行為都顯示了節律 性變化。如果在恒定的條件下該節律持續出現，且具有一 天左右的週期，而且對溫度具有很小的依賴性，那麼該節 律就被稱為“生理節律，，（Konopka，尺丄andBe丽，s (1971)

Proc· Nat· Acad· Sci· USA 68, 2112-2116)。 生理節律由内源性生物節律發生器（生物鐘)產生，並且 存在於包括人類、真菌、昆嘉和細菌在内的大多數生物機 200530234 體中（Dunlap，J.C· (1999) Cell 96, 271-290; Hastings，J.W· et al. Circadian Rhythms, The Physiology of Biological Timing. In: Prosser， C.L. ed. Neural and Integrative Animal Physiology，New York: Wiley-Liss (1991) 435-546; Allada，R· 5 et al· (1998) Cell 93, 791-804; Kondo et al· (1994) Science 266，1233-1236; Crosthwaite，S.K· et al· (1997) Science 276, 763-769; Shearman, L.P· et al· (1997) Neuron, 19，1261_ _ 1269)。生理節律可以自我維持並保持恒定，即使是在完全 黑暗的條件下也是如此。但是，它也可以被環境信號例如 1〇 亮光和溫度的循環變化等校準（同步）為新的晝夜節律。 (Pittendrigh，C.S. (1993) Annu. Rev. Physiol·，55，16_54; Takahashi, J.S. (1995) Annu. Rev. Neurosci. 18, 531-553; Albrecht, U· et al· (1997) Cell，91，1055-1064)。生物鐘對於 維持生物節律是必不可少的，而且可以調節各種各樣的生 15 理節律行為，例如行為的晝夜波動、食物攝入和睡眠週期 等，也可以調節各種各樣的生理變化，例如激素分泌和體 溫波動等(Hastings，M· (1997) Trends Neurosci· 20, 459-464; Reppert，S.M· and Weaver, D.R· (1997) Cell 89, 487-490)。 對於果蠅(乃⑺如/的遺傳和分子生物 20 學研究導致了對某些生理節律相關基因的認識。這些研究 導致了一條精密自動調節、由基於轉錄/轉譯的負反饋回路 組成的信號通路的發現（Dunlap，J.C· (1999) Cell, 96, 271-290; Dunlap，J.C· (1996) Annu· Rev· Genet. 30, 579,601; Hall，J.C· (1996) Neuron, 17, 799-802)。果蠅中生理節律振 200530234

盪器的核心元件包括兩種刺激性蛋白dCLOCK/dBMAL (CYCLE)和兩種抑制性蛋白 dPERIOD(dPER)和 dTIMELESS(dTIM)。dCLOCK 和 dBMAL 異二聚化而形成 轉錄因子dCLOCK/dBMAL，該轉錄因子促進兩個分別名為 5 果繩週期基因φπ)和果繩永悝基因

(Dras6^/»7fl 从沿/w)的表達。來自這些基因的mRNA 最終被轉錄而生成dPER和dTIM蛋白。在幾小時内，該蛋 g 白產物dPER和dTI-M即在細胞質中被合成並構酸化，達 到臨界水準，並形成轉位進入細胞核的異二聚體。一旦進 ίο 入細胞核，dPER和dTIM就開始對自身的轉錄產生負調節 子的作用，dPER和dTIM的累積下降，結果φπ和冶如 基因又再次被 dCLOCK/dBMAL 啟動（Zylka，M.J. et al. (1998) Neuron 20，1103-1110; Lowrey, RL· et al· (2000) 288, 483-491)。dper基因是控制成蟲羽化(成蟲從蛹中飛出）行為 15 和運動活性的生理節律的必需因子（Konopka，R.J.，& 修 Benzer, S. (1971) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 68, 2112-2116)。per基因的錯義突變可以縮短或延長生理 節律的週期，而無義突變則導致行為的無節律性(Hall， J.C· (1995) Trends Neurosci· 18, 230-240)。 20 對於哺乳動物，下丘腦前部視交叉上核（SCN)是一個主 要的生物鐘部位（參閱panda et al，（2〇〇2) Nature 417, 329-335; Reppert，S.M· and Weaver, D.R· (1997) Cell，89, 487-490)。由於亮光直接和間接地通過視網膜至sCN的通 路而發生作用，SCN生物鐘被白晝黑夜的週期變化調節為 200530234 每天 24 小時。（Klein, D.C· et al· (1991) Suprachiasmatic Nuclei: The Mind’s Clock，Oxford Univeristy Press, New York)。在嚙齒動物的scN中，已有3個Per基因被鑒定和 免掩：，1分別被命名為小葚、Perl (mPerJ)、mPer2和 。這些哺乳動物基因的蛋白產物(mpERl、mPER2、 mPER3)共旱若干個同源區，每種哺乳動物的尸基因編碼 一種具有蛋白二聚化結構域的PAS蛋白（PER、ARNT和SIM 是最早被發現共享這種功能很重要的二聚化結構域的蛋 白’ PAS則是這三種蛋白第一個字母的縮寫），PAS與昆蟲 PER蛋白的PAS結構域高度同源。在生理節律日中，所有 Per信使RNAs (mRNAs)和蛋白質的水平均呈週期性變化並 密切參與生物鐘正向和負向的調控，但只有mPERl和 mPER2的週期性變化對亮光有響應(Zylka，m.J. et al. (1998) Neuron 20, 1103-1110·; Albrecht，U· et al·，（1997) Cell 91， 1055-1064; Shearman，L.P· et al· (1997) Neuron 19， 1261-1269)。果蠅基因的哺乳動物同源物已被克隆並 被命名為m7Vw。然而，尚無證據證明mPER-mTIM之間 存在著在果蠅中所觀察到的類似相互作用。有人提議，在 哺乳動物生物鐘分子作用過程中，pER_pER的相互作用可 能已經代替了 PER-ΤΙΜ二聚體的功能(Zylka，MJ· et al·， (1998) Neuron 21，1115-1122)。另一種可能性是 PERI 和 PER2中的節律形成了調節生物鐘蛋白轉譯活性的負反饋 回路(通過PAS結構域），隨後驅動了兩個Per基因或其中之 一的表達（Shearman，L.P· et al. (1997) Neuron 19, 200530234 1261-1269) 〇 理解哺乳動物生物鐘的這3個mPer基因的作用一直是 很多研究的主題。由於mPER蛋白與dPER在結構上的同 源性，預期mPER蛋白在哺乳動物反饋回路中將作為負性 因素而起作用。據認為，PER1參與了反饋回路中其自身轉 錄的負向調節，但最近有證據表明它也涉及輸入端信號通

路（Hastings，Μ·Η· et al· (1999) Proc. Natl· Acad· Sci· USA 26，15211-15216) °PER2是人們對其特徵最瞭解的蛋白。 mPER2突變型小鼠在其PAS二聚化結構域幾基 端缺少87個氨基酸殘基，其在標準的晝夜循環環境中的生 理節律週期縮短，但在完全黑暗的環境中則顯示了無節律 性。此突變同時也減少了 SCN中和瓜Per2的週期性 表達，這表明在體内可能有調節的作用 (Zheng，B· et al· (1999) Nature 400, 169-173)。已有報導顯 示’ PER2在中樞生物鐘“傳動裝置”的調節中具有雙重作 用（Shearman，L.R et al· (2000) Science 288, 1013-1018)。該 項研究顯示，PER2與隱色素(CRY)蛋白結合並轉位到細胞 核内，由CRY負調節被CLOCK和BMAL1正性轉錄複合 體所驅動的轉錄。在進入細胞核時，PER2通過一種目前尚 未弄清的機理正向調節BMAL1的轉錄，並因此啟動生物鐘 的正向動作。對於PER3的功能知之尚少，然而，在 基因剔除小鼠中’觀察到了一種對於生理節律活動的微妙 影響。因此’有人認為PER3涉及生理節律調控輸出端信號 通路（Shearman，L.P· et al· (2000) Mol· Cell· Biol· 17, 200530234 6269初5)。據報導，mPER蛋白彼此間可相互作用，灿啦 可以作為mPERl和mPER2的載體，將它們導人細胞核内， 這對於在SCN中產生生理節律信號是很關鍵的（Kume κ et al. (1999) Cell 98? 193-205; Takano, A. et al. (2000)9 FEBS 5 Letters，477, 106-112)。 有人假没，生物鐘組成部分的鱗酸化可調節其週期的 長短。關於特異性蛋白激酶可調節果蠅生理節律的第_個 _ 遺傳學證據是新基因doubletime(必〇的發現，該基因編碼一 種蛋白絲氨酸/蘇氨酸激酶（Price j.l· et al· (1998) Cell 94 i〇 83_95; Kloss Β· et aL (1998) Cell 94, 97-107)。伽的錯義突 餐:可導致生理節律的改變。dbt的無效等位基因可引起 dPER的低磷酸化和無節律性。 與DBT最緊密相關的哺乳動物激酶是赂蛋白激酶ιε (CKIs)和酪蛋白激酶15 (α〇δ) 〇兩種激酶都顯示可與 15 mPERl結合，若干項研究也顯示CKIs可使小鼠的PER1 和人的PER1兩者都發生構酸化（Price J丄.et al. (1998) Cell 94, 83-95; Kloss B. et al· (1998) Cell 94, 97-107)。在一 項關於以野生型hCKIs共轉染人類胚胎腎293T細胞的研究 中，hPERl顯示出磷酸化的顯著增加（其證據是分子量的變 2〇 化）。在這項研究中，磷酸化的hPERl半衰期大約為12小 時，而非磷酸化的hPERl則在細胞中保持穩定達24小時以 上。這暗示hPERl的磷酸化導致了蛋白質穩定性的下降 (Kessler, G.A· et al· (2000) NeuroReport，11，951-955)。另一 項研究也顯示PERI被hCKIs磷酸化的結果既包括胞質滯 200530234 留、核轉位，也包括蛋白不穩定性(Vielhaber，E. etal. (2000)

Mol· Cell· Biol· 13, 4888-4899; Takano, A· et al· (2000) FEBS

Letters 477, 106-112)。 對於疋選擇CKIs還是CKI3作為哺乳動物的一種可 5 能的調節物’ 一直未找到生化方面的理由，直到Lowery等 人((2000) Science 288, 483-491)發現在敛利亞黃金倉鼠中， CKIs 的半顯性突變（tau 突變，Ralph MR andMenaker, # Μ· (1988) Science 241，1225-1227)引起了雜合動物和純合 動物的生理節律日都被縮短(分別為221l和2〇h)。在這一 10 例子中，〇ΚΙε活性水準的下降引起了 PER磷酸化的減少， 推測較高水準的細胞質PER蛋白可引起核轉位的加強及生 理節律週期的改變。最近有人建議，通過哺乳動物生物鐘 蛋白hPERl和hPER2的轉譯後修飾，CKIS可能也參與了 生理祕性的調節[Camacho, F. et al., (2001) FEBS Letters 15 489(2,3)，159_165]。因此，^ΚΙε 和/或 CKI5 的小分子抑 φ 提供了改變生理節律的新手段。如下文所述，生理節 律的改變可用於睡眠障礙或情緒障礙的治療。 美國專利6,555,328 Β1披露了某些_方法，以在細 胞中蓥定可改變生理節律的化合物。這些方法以一種試驗 2〇 性化合物為基礎’它可以改變人路蛋白激酶Ιε和/或人路 蛋白激酶ΐδ使生物鐘蛋白hPEIU、hpER2和融幻發生 磷酸化的能力。例如’可用hCKIs和㈣或Μ丘‘ ，而細胞。為了評價對哪的抑制作用和哪抑 制劑與生理節律生物學的關係，開發了一種可定期監視生 -11- 理節律的高通量細胞分析方法(33rd Annual Meeting，s⑽ for Neurosci., November 8-12, 2003, Abstract numbers 284.1, 284.2，and 284.3)。這種分析方法包括了恒定表達一種 似peW 構建物的Ray成纖維細胞’因此能夠通過對光 的，出進行數天的監視而反復估算螢光素酶的活性，從而 測定活細胞中Μρπ/啟動子的有節律的活性。該分析方法 的這種反復敎的方式，可以就d㈣麟於生理節 律的辰度依賴性作用進行精確和可重現的評價，並將對 〇Κΐε的抑制作用與生理節律週期的改變相關聯。

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20 200530234 睡眠障礙分為四個主要類別，包括原發性睡眠障礙(分 為睡眠異常和類睡症）、與醫藥/精神障礙相關義眠障礙， 祕及類由於資料不足而無法分類的暫擬睡眠障礙。原發 障礙據認為是起因於負責睡眠—覺醒啟動的内在系 布旦疋彡統)或定時系統(生理節律系統）。醜異常是啟動 障礙’包姉發性絲、魏症(過度嚷 以另Γ睡症、呼吸相關的睡眠障礙、生理節律性睡眠障礙 個月說明的睡眠異常。原發性失眠的特點為持續性(-=上)難以啟動和維持睡眠或非康復性睡眠。與原發性 民:目關的睡眠困難可引起顯著的精神痛苦或傷害，包括 生理ίϊ、注意力不射、疲勞和不適、情緒變壞和倦怠。 眠性睡眠障礙包括時差综合征、輪班工作引起的睡 早、睡眠時相祕綜合姊睡眠時相後移综合征& 0998^ Wa^ner and W.A. Hening, Annals of Pharmacotherapy ，680-691)。在生理節律日的某些時期内，屬於強 -12- 200530234 制睡眠模式的人其覺醒時間相對於睡眠時間占了較高的百 分比（Dijk and Lockley，J· Appl physi〇1 (2〇〇2) %， 852-862)。普遍公認的是，隨著年齡的增長，我們睡眠的生 理節律也有所變化，往往導致睡眠品質下降(Am j physi〇1 Endocrinol Metab· (2〇〇2) 2於，E297—E3〇3)。因此，生理節

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20 律時相外的睡眠在品質和數量上都可能會有損失，這一點 已由輪班工作和飛行時差所引起的睡眠變化得到例證。人 類生物鐘的紊亂可以引起睡眠障礙，而調節生理節律的製 齊jl，例如ckis和/或CKI5抑制劑，也許可用於治療睡目^ Ρ早礙，尤其疋生理郎律性睡眠障礙。 情緒障礙可分為憂鬱症(“單極性憂鬱症”）、躁鬱症 極性憂鬱症以及兩__學為基礎的情轉礙，包括 由-般性醫學狀況引起的情_礙和物㈣導的情 :鬱ί鬱=為嚴重憂鬱症、輕度憂鬱症以及未加說明的 :鬱症。•鬱症分為-型躁鬱症和二型躁鬱症。觀察結果 明即模式詞可用於說明反復發作的嚴重憂擎 以及一型踪鬱症和二型躁鬱症 二 的無，、嗜睡、飲食過量、體重增: 不清i季季節模式發作的嚴重憂鬱症的特性。尚 中還是躁地:現在反復發作的嚴重憂鬱障礙 狂更可能呈現季節模式。在某些人中，辟 ^ 年齡和性別的變化而變化。其發病 •13- 200530234 率隨緯度的增加而增加；年紀較輕的人憂鬱症在冬季發作 的風險較高；而女性占以季節模式發作人群的60%到 90%。文獻中常用的術語季節性情感障礙(SAD)是一種情緒 障礙亞型。在《精神障礙診斷和統計手冊IV》 5 (DSM-IV)(American Psychiatric Association: “Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders，，，Fourth Edition， Text Revision. Washington, DC，American Psychiatric _ Association, 2000)中，當描述一型躁鬱症、二型躁郁症或復 發性嚴重憂鬱症的季節性嚴重發作時，季節性情感障礙被 ίο 注明“具有季節模式”(Ε· M· Tam et al·，Can. J. Psychiatry (1995) 40, 457-466)。DSM-IV中描述了憂鬱症、嚴重憂鬱 症、嚴重憂鬱症發作、一型躁誉症、二型躁營症以及季節 效應的特性和診斷。 罹患嚴重憂鬱症的患者，包括以通常在冬季反復發作 15 的憂鬱症為特徵的SAD的患者，對光照療法顯示出積極的 ^ 反應（Kripke，Journal of Affective Disorders (1998) 49(2)， 109-117)。由於強光療法可成功地應用於Sad和嚴重憂鬱 症患者，使得人們提出了幾種假設，以解釋光線治療作用 的基本機理。這些假設包括了“生理節律假設，，，該假設認 20 為可將強光的抗憂鬱作用跟與睡眠相關的生理節律發生器 的時相位移聯繫起來（Ε· M· Tam et al·，Can· J· Psychiatry (1995) 40, 457_466)。以下事實支持光照療法和生理節律之 間的聯繫：對於嚴重憂鬱症臨床有效的光照療法伴隨著生 理節律時相的位移，而且光照療法的臨床效果似乎依賴於 -14- 200530234 光如療法的日守相位移能力（Czeisler et al.，The Journal 〇f Physiology (2000) 526 (Part 3)，683-694; Terman et al·，Arch· Gen· Psychiatry (2001) 58, 69-75)。另外，光照療法也顯承 可促進和加強嚴重憂鬱症藥物療法的效果(Benedetti et ai·， 5

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20 J· Clin· Psychiatry (2003) 64, 648-653)。因此，可以預料， 對於酪蛋白激酶Ιε和/或酪蛋白激酶Ιδ的抑制作用可弓丨 起生理節律時相的位移，並且這種抑制作用提供了一種潛 在的治療情緒障礙的臨床有效單一療法或結合療法。 、應该說明，睡眠紊亂是許多精神障礙的一種判斷性痴 狀（W.V· McCall，J· Clin· Psychiatry (2001) 62 (suppl 10)， 27- 32)。睡眠紊亂是憂鬱症的一個共同特點。失眠症是憂鬱 症報導中常見的一種睡眠紊亂，9〇%以上的憂鬱症患者患有 失眠症（Μ·Ε· Thase，J· Clin· Psychiatry (1999) 60 (suppl 17)， 28- 3l)。累積性證據證明原發性失眠和嚴重憂鬱症具有共同 的么病機制。有人假設，促腎上腺皮質激素釋放因子(crf) ^動過強（由於遺傳傾向性或可能的早期應激反應）和情緒 緊張引起了過分和持久的睡眠紊亂，並最終導致原發性失 眠在非緊張條件下CRF分泌的生理節律性可能在正常的 ^眠—覺醒表現中起了 1的作用（GS. Ri—n and 丁· 士 〇=’ J· Clln psychiatry (2〇〇1) 62 (su卯i 1〇)，39一45)。因此， t生理即律性的製劑，例如通過對路蛋白激酶1ε和/或 Ιδ的抑制’對於由於CRF分泌受影響而引起 反臀症的治療可能是报有用的。 以上所引用的所有參考文獻均以其整體而引述於此。 •15- 200530234 因此，本發明的一個目的是提供一系 ，物伽胺，料並[3叫二 抑制劑。本發明的這一目的和其他目的將通過二 發明的詳細討論而變得顯而易見。 X下關於本 【發明内容】

10 15 个货r明I稱迹 本發明提供了結構式為⑴的取代的1H_吡咯並 =2-祕胺、1H_鱗並[3,2々比咬_2伽胺、瓜 V ，A吡啶鲮醯胺以及相關類似物，及其藥學卜 又的鹽或立體異龍，作為人酿蛋自數_ L磷、^ =，劑；本發明還提供了使祕構式為(1)之化合物來户 鬱區神經系統疾病和異常的方法’例如治療包括嚴重： β 型躁鬱症和二型雜症等仙的情緒障礙 < 飞，生理節律性睡眠障礙例如輪班工作$丨^的睡眠障 私行蛉差反應綜合症，睡眠時相前移综合症和睡 移综合症等在内的睡眠障礙。 Τ相後 、相應地，本發明的一個廣義的具體實施例是針對红 通式為(I)之化合物 、〜構 20 其中： :Ή或Cl、6鏈烷基； 疋取5R6 ; 是芳基或雜環； 是Η、ci-6鏈烷基、c 氧基、CP3、南素、s:6鏈烯基、 C21鏈炔基、烷 NR5R6 ; 、SH、S-Ci-6 鏈烷基、N〇2、NH2 或

10 R5是Η或Cl-6鏈烷基； R6是Η或鏈烷基； x 是 S或 S(0)n; L或Μ之—是N，而 是C，其中R4只與κ 、匕或河中的另兩個原子分別 子結合； 、、L、Μ或是苯環上另一個C原 15 m是卜2或3 ;以及 n是1或2 ; 或其藥學上可接受的鹽或立體異構體。 ，發明之-具體實施例 20

Ri r2 r3 R4 載體和一種結構式為⑴的療二;物 予上可接受的鹽或立體異構體。 本發明之另一具體實施例係關於一種通過給患者施用 結構式為(I)的療效量化合物來抑制酪蛋白激酶Ιε的方法。 本發明之另/具體實施例係關於一種治療患有疾病或 異苇但通過抑制胳蛋白激_ Ιε其病情得到改善的患者的方 去’包括給前述患者施用結構式為(I)的療效量化合物。 -17- 200530234 本發明之另一且 的化合物的製程。…Λ U”製借結構式為(I) 本發明之又__^ 〇r ^ 本發明之製，備 矣&明之詳jgj^明 ，於的術語“立體異構體，，普遍適用於其區別僅 ;’、二a取向不同的各種分子的所有異構體。該 10 15 鏡像異構體(對映異構體)、鏡像異構體的: : 、外消旋物的混合物），幾何異構體(順式/反 如有機化學中所常用的，本文中所用的術語“R”和“s，, 是表不一種手性中心的具體構型。符號“R”(右）是指當沿著 鍵向優先次序最低的基團看時，基團優先次序(從最^次 低)為順時針關係的手性中心的構型。符號“s，，(左）是指當沿 著鍵向優先次序最低的基團看時，基團優先次序(從最高至 次低)為反時針關係的手性中心的構型。基團的優先次序根 據次序規則而決定，該規則首先是根據原子序數的大小(原 子序數遞減的次序）來決定優先次序。關於優先次序的列表 和討論可參閱：iSiereoc/zemz•价少 〇/ Ogawz’c Com/?⑽《办， Ernest L. Eliel5 Samuel H. Wilen and Lewis N. Mander, editors，Wiley-Interscience, John Wiley & Sons，Inc” New York，1994。 -18- 20 200530234 、除I(R)〜（S)系統以外，較老的D —l系統也可用於本 表不、、、巴對構型，尤其是用於氨基酸。在此系統中Fischer 的方白疋使主鏈上的1號碳原子位於頂端。詞頭“D，， ;代表、、°構中官能（決定）基團是在手性中心碳原子右邊 5 的^構體絕斜構型，而詞頭“L”則用於結構中官能（決定)基 團是在手性中心碳原子左邊的異構體絕對構型。 曰本文中所用的術語“互變異構體，，或“互變異構現象，，指 籲 ^兩種(或兩種以上)化合物的共存，這些化合物之間的區 別/、在於個（或一個以上）活動原子的位置和電子分佈，例 1〇 如嗣一稀醇互變異構體或互變異構現象。 本文中所用的術語“鏈烷基，，指的是含有一至六個碳原 子的直鏈或支鏈飽和脂肪烴基，包括曱基、乙基、丙基、 異丙基、丁基、仲丁基、叔丁基以及類似基團。 本文中所用的術語“鏈烯基，，指的是含有二至六個碳原 子的直鏈或支鏈的單價不飽和脂肪族鏈，包括乙稀基、1_ φ 曱基乙烯基、L曱基-1-丙烯基、1-丁烯基、1_己烯基、2-^基-2-丙烯基、2,4•己二烯基、丨_丙烯基、2_丙烯基、2_丁 烯基、2-戊烯基以及類似基團。 本文中所用“鏈炔基，，指的是含有二至六個碳原子且含 20 有至少一個三鍵的直鏈或支鏈的單價不飽和脂肪族鏈，包 括乙炔基、^丙炔基、卜丁炔基、1_己炔基、2-丙炔基、2_ 丁炔基、2-戍炔基以及類似基團。 本文中所用的術語“烷氧基”指的是一個單價的取代 基，它是含有一至六個碳原子、通過一個醚氧原子連接且 -19- 200530234 在f醚氧原子上具有自由價鍵的直鏈或支鏈鏈烷基，包括 甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、仲丁氧基、 叔丁氧基以及類似基團。 本文中所用的術語“C^Cs環烷基，，指的是含有三至八 2碳原子的飽和烴環結構，包括環丙基、環丁基、環戊基、 裱已基、環庚基以及類似基團。 产本文中所用的術語“芳基，，或“Ar”指的是任何穩定的單 衣、雙％或二環的碳原子結構，每個環最多可含有七個環 =子’且其中至少-個環是未被取代的或選自以下一組基 的一至二個取代基取代的芳香環：亞甲基二氧基、羥基、 飞燒乳基、鹵素、Cl_6鏈烷基、c2_6鏈烯基、c2-6鏈炔 :—氟甲基、二氟甲氧基、_N02、_NH2、-NH(Cr6鏈烷 二)、-N(CV6鏈烷基L、_NH醯基、和_n(Ci_6鏈烷基)醯基。 :基，，或=，，的例子包括苯基、2遗苯基、3_氯苯基、4_氣 =基、2·氟苯基、3_氣苯基、4_氟苯基、2_溴苯基、溴苯 =^溴苯基、2.三氣甲基苯基、3士氟甲基苯基、三氣 :苯基、2_甲氧基苯基、3_甲氧基苯基、4_甲氧基苯基、 =基苯基、3.氨基苯基、4_氨基苯基、2_甲基苯基、甲 笨基4 "曱基苯基、硝基苯基、肖基苯基、心麟基苯 ;2,4:一氯苯基、2,3·二氣苯基、3,5•二甲基苯基、三氣 ^基苯基、3-三氟甲氧基苯基味三氣甲氧基苯基、蔡基、 =蔡基和聯f基。術語“芳基IC6鏈烧基)”包括2-甲基 、3-曱基苯基、‘曱基苯基、苯基甲基（苯曱基）、苯 土乙基、對甲氧基笨曱基、對氟笨甲基以及對氯苯甲基。 -20- 200530234 -至基”指的是含有與1基連接的 基、丙、丁 J鏈2鏈飽和脂肪烴基團，包括乙醯 ,^ 土 異丁醯基、以及類似基團。 的5至7元白吾雜環”或“雜環的”指的是一種穩定 ❹8至11元的雙環雜環，它可以 =的也可以是不飽和的，且 個選自Ν、0和S的雜馬I, 似芏一 〃原子組成，其中的氮和硫雜原子也

10 15 20 :以魏化’氮雜原子切以鮮，而且可包括任何 =由以上所定義的任何_鮮_合的雙環基團。該 雜裱可以連接！任-個雜原子或碳原子上，導致一種穩定 的、、’^構豸雜環可以是未取代的或被一至三個選自以下一 組基團的取代絲代：h絲基、域、錢、Cl.6鏈 絲、c2-6鏈縣、c2_6鏈炔基、三氟甲基、三氟甲氧基、 N〇2 應2、-ΝΗ%·6鏈烧基）、_N(Ci_6鏈烧基)2、_NH 醯 ，、以及-N(Cl_6鏈烷基)醯基。這類雜環單元的例子包括呱 咬基、料基、2·氧聽嗪基、2_氧代輕基、2氧代吼咯 烷基、2-氧代氮雜基、氮雜基、吡咯基、吡咯烷基、吡唑 基、吡唑烷基、咪唑基、咪唑啉基、咪唑烷基、吼啶基、 吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基、噁唑基、噁唑烷基、異噁唑基、 異噁唑烷基、嗎啉基、噻唑基、噻唑烷基、異噻唑基、奎 寧環基、異噻唑烷基、吲哚基、喹啉基、異喹啉基、苯並 咪唑基、噻二唑基、苯並。比喃基、苯並σ塞唑基、苯並噁唑 基、吱喃基、四氫呋喃基、苯並呋喃基、四氫吼喃基、噻 吩基、苯並噻吩基、噻嗎琳基，以及噁二唑基。 -21 - 200530234 本文中所用的術語“鹵素”或“i”指的是氟、氯、溴或 蛾豕族的成員。 當任何可變物(例如芳基、雜環、、R2、R3、R4等) 在任何組成部分或在本發明之結構式為⑴之化合物中出現 5 一次以上時，它每次出現時的定義與它在其他每次出現時 的定義是無關的。而且，取代基和/或可變物的組合只有合 這種組合可產生穩定化合物的情況下才是允許的。 # 本文中所用的術語“治療，，，無論為動詞或名詞形式， 指的是： 1〇 Ο預防某種疾病、異常或症狀在容易罹患但尚未被診斷 為已經患有疾病、異常和/或症狀的患者身上發生； (11)抑制某種疾病、異常或症狀，例如抑制其發展；以及 (iii)減輕某種疾病、異常或症狀，例如，促使疾病、異常 和/或症狀的消退。 15 A本文中的術語“患者，，指的是罹患某種具體疾病、 • 異常或症狀的溫血動物，例如哺乳動物。應該明確地理解， 豚鼠、狗、猶、大鼠、小鼠、馬、牛、羊以及人’均屬于 此術§吾意思範圍之内的動物例子。 本文中所用的術#‘‘疾病，，指的是疾病、不適或身體功 20 能、系統或器官的中斷、停止或異常。 本文中所用的術4異常”指的是由於基因或胚胎的發 ^良A，或由於外源因素例如中毒、受傷或疾病而引起的 身體功能、結構或此兩者的紊亂。 本文中所用的術語“情況，，指的是生命、健康或體力的 -22 - 200530234 狀況。 本文中所㈣術語“馳，，指的是赫的預防。 本文中所用的術語“睡眠障礙，，、或‘‘睡眠失調，，指的是 失眠症。 5 本文巾所㈣術語“失W旨較在ϋ常應該睡眠的 期間，在不存在外來干擾例如噪音、亮光等情況下仍不能 睡眠；而且不能睡眠的程度變化可以從輾轉難眠或受到干 • 擾的微睡狀態、至正常睡眠持續時間的縮短乃至絕對的覺 醒狀悲。術語‘‘失眠症”包括原發性睡眠障礙、與精神奮亂 10 有關的睡眠障礙、物質引起的睡眠障礙，以及由於正常的 睡眠:覺醒週期的變化(換班、輪班工作引起的睡眠障礙、 或飛行時差反應綜合症等）而引起的生理節律性睡眠障礙。 本文中所用的術語“原發性失眠症”指的是難以入睡、 難以維持睡眠或難以獲得有助於恢復體力的睡眠，不是由 15 於精神紊亂或由於食用或吸用某些物質（物質引起的失眠) 後的生理作用而造成的失眠症。 籲 本文中所用的術語“生理節奏失調引起的睡眠障礙，，包 括也行日t差反應或飛行時差反應綜合症、輪班工作引起的 睡眠障礙、睡眠時相前移綜合症和睡眠時相後移綜合症。 20 本文中所用的術語“有效抑制量的化合物，，或“有效酪 蛋白激酶Ιε抑制量的化合物，，指的是為了治療適合於^ 種治療的罹患疾病、異常或症狀的患者，經由適當的輪入 途徑而產生生物效應的足夠量化合物。 本文中所用的術語“療效量”指的是對於指定疾病、異 -23- 200530234 常或f狀的治療是有效的化合物劑量。 文中所用的術語“藥學上可接受的豳，，匕,、奋田认乂 何由熟悉本技術領域者 &的，日在適用於任 無毒性有機鹽或無機 a =合於作為藥物使用的 形成合適的鹽的代蚊已知的或將來發現的。可

10 15

脂肪族、環基胺或料族胺，或虱减鎂；氰、 二乙胺、異丙基二乙;胺、二曱胺、三w 鹽的代表性酸包括無機酸， Π’：機酸，例如乙酸、丙酸、乙醇酸、乳酸、丙嗣 二酸、反丁烯二酸、蘋果酸、酒石酸、檸 壞缝、順丁烯二酸、_順丁烯二酸和二經基 ^丁稀二酸、苯甲酸、苯基乙酸、4·氨基苯甲酸、4-經基苯 鄰氨基苯甲酸、肉桂酸、水揚酸、4_氨基水揚酸、 2:苯氧基苯甲酸、2_乙酸基苯甲酸，苯乙醇酸等；以及有機 石黃酸，例如曱磺酸和對曱苯磺酸。 本文中所用的術語“藥用載體，，指的是可用於配製醫藥 活性化合物，且在使用條件下基本上無毒性和非致敏性的 已知醫藥賦形劑。這些賦形劑的確切比例取決於活性化合 物的溶解度和化學性質、所選擇的給藥途徑以及標準的醫 藥規範。儘管該化合物本身是有效的且能直接使用，在實 現本，明之各種方法時，較佳的還是將活性成分納入含有 種藥用載體的組合物。此外，該活性成分的比例可在約 1°/〇至約90%的重量範圍内變化。 -24- 20 200530234 此外’可能㈣在本巾請書中的縮寫詞將具有以下含 意··

Me(甲基）、Et(乙基）、Ph(苯基）、玢洲三乙胺）、 p-TsOH(對甲苯磺酸）、TsCl(對甲笨磺醯氯）、hept(庚烷）、 5 DMF(一曱基甲醯胺）、NMP(1-甲基比咯烧酮或曱基 吼咯炫酮）、IPA(異丙醇或異丙基醇）、tfa(三氟乙酸）、 DBU(1，8_二氮雜雙環[5.4.0]十一烯_7)、dbng，^二氮雜雙 環[4·3·0]壬烯-5)、rt或r.t·(室溫或環境溫度）、min或min (分 鐘）、h(小時或數小時）、UV(紫外線）、LCMS(液相層析質譜 ίο 法）、t-Boc或(叔丁氧基羰基）、Bn(苯基）、t_Bu(叔丁基）、 i-Pr(異丙基）、HOAc(乙酸）、EtOAc(乙酸乙酯）、Et20(二乙 醚）、EtOH(乙醇）、g (克）、mg(毫克）、gg(微克）、ng(納克）、 mL(毫升）、(微升）、L (公升）、HPLC(高效液相層析）、 TLC、tic或Tic(薄層層析法）、g/L(克/升）、Si02(石夕膠）、 15 L/min(公升/分鐘）、mL/min(毫升/分鐘）、mmol(毫摩爾）、 Μ(摩爾）、mM(毫摩爾）、μΜ(微摩爾）、nM(納摩爾）、pCi(微 鲁 居里）、CPM(每分鐘次數）、rpm(每分鐘轉數）、mm(毫米）、 μπι(微米）、μ(微米）、nm(納米）、ppm(百萬分之一）、psi(磅 /平方英寸）、叫.或equiv·(當量）、Rt(保留時間）、°C(攝氏 20 度），以及K(凱氏度）。 相應地’本發明的一廣義具體實施例係關於結構式為 〇〇之化合物 -25- 200530234

10

15 其中，&是Η或Cw鏈烷基；R2是NR5R6 ; R3是芳基或雜 環；是Η、鏈烷基、C2-6鏈烯基、C2-6鏈炔基、Cm 烷氧基、CF3、鹵素、SH、S-Ck鏈烷基，N02、NH2或NR5R6; R5是Η或CV6鏈烷基；R6是Η或CV6鏈烷基；X是S或 S(0)n ; K，L或Μ之一是N，而K、L或Μ中的另兩個原 子分別是C，其中R4只與K、L、Μ或是苯環上另一個C 原子結合；m是1，2或3 ;以及η是1或2 ; 本發明的一具體實施例是關於L是Ν、Κ和Μ分別是 C的化合物。 本發明的另一具體實施例是關於L是Ν，Κ和Μ分別 是C，、：R4、R5和116分別是H，以及R3是芳基的化合 物。以下化合物是此具體實施例範圍内的代表性例子： 3 -苯硫基-1 H-u比咯並[3，2_c] ^比咬酿胺’ 3-(3-氣苯硫基-111-0比洛並[3,2-(^]11比17定-2-竣酿胺’以及 3 -(4 -氣本硫^基-111-°比洛並[3，2-c] ^比咬-2-竣酿胺。 本發明的另一具體實施例是關於Μ是N，K和L分別 是C的化合物。 本發明的再一個具體實施例是關於Μ是Ν，Κ和L分 別是C，心、R4、R5和R6分別是Η，以及R3是芳基或雜 環的化合物。以下化合物是此具體實施例範圍内的代表性 -26- 20 200530234 例子： 3-苯硫基-1 Η-ϋ比洛並[2,3-c] ntb °定-2-竣酿胺’ 3-(3-氟苯硫基)-1Η-吡咯並[2,3-c]吡啶-2-羧醯胺， 3-(3-曱氧基苯硫基)-1Η·吡咯並[2,3-c]吡啶-2·羧醯胺， 5 3-(3-氯苯硫基)-1Η-吡咯並[2,3-c]吡啶-2-羧醯胺， 3-(2-三氟曱基苯硫基)-1Η-吡咯並[2,3-c]吡啶-2-羧醯胺， 3-(2-三氟甲氧基苯硫基)-1Η-吡咯並[2,3-c]吡啶-2_羧醯胺， 3-(2-曱氧基苯硫基)-1Η-吡咯並[2,3-c]吡啶-2-羧醯胺，以及 ® 3-(吡啶-2-苯硫基)-1Η-吡咯並[2,3-c]吡啶-2-羧醯胺。 ίο 本發明的另一具體實施例是關於K是N，L和Μ分別 是C的化合物。 本發明的又一具體實施例是關於Κ是N，L和Μ分別 是C，&是Q_6鏈烷基，R5是Η，^是Η或Cu鏈烷基， 以及R3是芳基或雜環的化合物。以下化合物是此具體實施 15 例範圍内的代表性例子： 1·曱基-3-苯硫基-1H-吡咯並[3,2-b]吡啶-2-羧醯甲胺， 鲁 1 -曱基-3-苯硫基-1 比並[3，2-b]σ比σ定-2-棱酿胺’以及 3-苯硫基-1丙基1Η-吡咯並[3,2-b]吡啶-2-羧醯胺。 本發明的又一具體實施例是關於K是N，L和Μ分別 2〇 是C，&、尺4和R5分別是H，R3是芳基，以及是Cm 鏈烧基的化合物。以下化合物是此具體實施例範圍内的代 表性例子： 3-(3-三氟曱氧基苯硫基-1H-吡咯並[3，2-b]吡啶-2_羧醯曱 胺， -27- 200530234 3-(3 -氣苯硫基-1 Η-11比咯並[3，2_b]ϋ比咬-2-竣酸甲胺’ 3-(3-氟苯硫基-1Η-吡咯並[3,2-b]吡啶-2_羧醯曱胺，以及 3-本硫基並[3,2-1)]σ比°定-2-竣酿曱胺。 本發明的又一具體實施例是關於Κ是N，L和Μ分別 5 是C，Κ、R4、R5和R6分別是Η，以及R3是雜環的化合 物。以下化合物是此具體實施例範圍内的代表性例子： 3 -(啥1^ - 8-基硫基)_ 1 H-atb 並[3，2_b]ϋ 比 °定-2-竣酿胺’ 3 -(。比ϋ定-2-硫基)_ 1 Η-ϋ比咯並[3，2-b] ^比°定-2-竣_酿_胺’ 3- (ϋ比^定-4-基硫基）-1 H-ntb咯亚[3，2-b]utb σ定S篮胺，以及 ίο 3 - 塞吩_2_硫基)-1Η-17比咯亚[3，2-b] °比^定-2-竣^酿胺。 本發明的又一具體實施例是關於K是N，L和Μ分別 是C，Ri、R5和R6分別是Η，以及R3是芳基的化合物。 以下化合物是此具體實施例範圍内的代表性例子： 3-苯硫基-1 H-atb洛並[3，2-b]π比咬-2-竣酿胺’ 15 3-(3 -氣苯疏^基)-1 Η-ϋ比嘻並[3，2-b] ^比咬-2-竣酿胺’ 3-(3 -氣苯硫基)-1 H-atb洛並[3，2-ϊ)]σΛσ定-2-竣酿胺’ 3-(3->臭苯硫基)-1 H_atb洛亚[3，2-b]υ比ϋ定-2-竣酿胺’ 3-(2-氯苯硫基)-1Η-吡咯並[3,2-b]吡啶_2_羧醯胺， 3-(4-氣苯硫基)-1 H-u比各並[3，2-b]u比咬-2-竣酿胺’ 2〇 3-(2,4-二氣苯疏基)-111-0比洛並[3,2-13]111比咬-2-竣§篮胺’ 3-(2-氟苯硫基)_1Η-吡咯並[3,2-b]吡啶-2-羧醯胺， 3-(2,3-二氣苯硫基)-1 Η-π比洛並[3，2-b]吼咬-2-竣酿胺’ 3-(2-三氟曱基苯硫基)-1Η-吡咯並[3,2-b]吡啶-2-羧醯胺， 3-(3-二氣曱基苯硫基)-111-1|1比咯並[3,2-1)]111比°定-2-竣酿胺’ -28- 200530234 3-(2-氨基苯硫基)-1Η-σΛρ各並[3,2-b]n比。定_2_羧醯胺， 3-(2,5-二氯苯硫基)-1Η-ϋ比略並[3,2-b]吨咬_2_叛醢胺， 3-(2_曱氧基苯硫基)-111』比口各並[3,2_冲比务2-叛醯胺， 3 - (3_曱氧基苯硫基比略並[3,2-b]^^_2-叛醢胺， 5 3-(3-氨基苯硫基)-1Η-ϋ比17各並[3,2-b]u比π定_2_缓醯胺， 3-(4-硝基苯硫基)-1Η-σ比嘻並[3,2_1)]吼。定_2_叛醯胺， 3-(3-硝基本硫基)-111-11比嘻並[3,2-1)]11比咬_2_1>羧酿胺， 馨 3-鄰曱本基硫基-iH-吼17各並[3,2-b]ab^_2_叛醯胺， 3-對甲本基硫基比17各並[3,2-|3]°比唆_2-羧醯胺， 1〇 3-(3,5·二甲基苯硫基)-1H_吡略並[3,2-b]吡啶-2-羧醯胺， 3-間甲本基硫基-iH-u比嘻並[3,2-bp比咬-2-幾醯胺， 乙基苯硫基)-1Η-σ比σ各並[3,2-b]^tn定-2-羧醯胺， 3-(3-二氟甲氧基苯硫基)_ih-吡略並[3,2七]吡ϋ定-2-羧醯胺， 3-(3-氟苯硫基）-5-甲氧基吼嘻並|；3,2-1)]吼咬-2-竣醯 15 胺，以及 3-(3_甲氧基苯硫基)_5_甲氧基比洛並口义以比唆_2_魏 攀 醯胺。 本發明之化合物可通過與本技術領域内已知製程類似 的些製程來製備。反應示意圖1、2和3以及對應的文 ° 子敘述’敘述了本發明之各種化合物的製備。提供所披露 的方法和例子是出於說明的目的，而絕不是限制本發明的 範圍。本文中所述的為製備各種不同化合物而供選擇的試 劑、反應條件，以及各種步驟的其他排列組合，對於一般 的熟悉本技術的人員是很明顯的。/表1、表2和表3總結 -29- 200530234 了本發明的化合物實例，表4則總結了化合物實例的生物 資料。 化學合成

0 HO〜A

OR (R4)m^^N02 3

不意圖1披露了從市售的2-氯-3-硝基。比啶（la-1，其 中K是N，L和Μ分別是C)、3-氯-4>_硝基，比啶（ib-Ι，其 中L是N，K和Μ分別是c)或4-氣-3-硝基吡啶（l.c-Ι， 中Μ疋Ν ’ Κ和L分別是C)、或一任意取代的氯代硝基 %°定1合成本發明之化合物的方法。化合物編號的第一位 數字是示意圖1-3中任一示意圖所示的對應化合物或結構 -30- 200530234 式的編號’例如，laq中的第一位數字1是示意圖i所示 的化合物1或結構式1。隨後的字母標記“a，，、“b，，或“c，，則 表示該化合物分別為1 H_吡咯並[3，2_b]吡啶羧醯胺系列 (“a”’又稱為4-氮雜。弓卜朵系列）、m_0比咯並[3,2_c]a比啶-2- 羧醯胺系列（“b”，又稱為5-氮雜吲哚系列）和-1H-吡咯並 [2,3-c]u比啶-2-羧醯胺系列(“c，，，又稱為6_氮雜吲哚系列）的 前體或一員。化合物蝙號中破折號後的最後一位數字或幾 位數字則表示該結構系列中的某一具體化合物。若化合物 僅由一個數字表示’則該數字指的是示意圖1_3中任一示 意，所不的對應化合物或結構式，而且應該理解，此討論 通常包括如上所述的以“a，，、“b，，和“c，，所表示的三個結構系 列0 在不意圖1之步騍a中，於約50〇C至約70°C的溫度 下將氯代瑣基°比°疋1分批加入含有過量丙二酸二酯的丙 :酉夂-酉日驗金屬鹽中’例如，含有過量丙二酸二乙醋或丙 一酉夂—甲酯的丙一酸二乙酯或丙二酸二甲酯的鈉、鉀或鋰 ^正如熟悉本技術者所熟知的那樣，可通過將一種鹼金 屬例如金屬鈉加入過量的丙二酸二酯而製備丙二酸二酯的 鹼金屬鹽。於約50QC至約70cC進行反應約3小時後，將 該混合物在室溫下放置約12至約24小時。若反應尚未完 全’則於80°C加熱該混合物約2小時至約4小時，然後予 以濃縮以脫除過量的丙二酸酸二酯，再以濃的無機酸例如 鹽酉文或硫酸以及水處理。該混合物被加熱至約1ΟΟ。。至約 110°C並保持約5小時至約9小時以實現脫羧反應。將哼 '31 - 200530234 混合物在室溫下放置約12小時至約24小時後’用適當的 溶劑例如乙基醚和乙酸乙酯洗滌，用鹼金屬氫氧化物例如 氫氧化鈉或氫氧化鉀鹼化至pH值約為8至9,再用一適當 有機溶劑例如乙酸乙酯萃取。在減壓下過濾和濃縮該有機 萃取物，即得所需的曱基硝基吡啶2。通過此“步驟”製備化 合物2的方法被稱為“一爸兩步合成法”。

10 15 或者，在示意圖1之步驟a中，可通過化合物1與曱 基·酸之間的龄木|馬合反應（Suzuki coupling)來製備甲基 硝基吡啶2。於是，將氣代硝基吡啶1、甲基硼酸、碳酸鉀 和四（三苯基膦)紅(0) [Pd(PPh3)4]的混合物，在一適當的非 質子溶劑例如二噁烷中，於約110〇C至約120°C加熱約12 小時至約16小時。將該反應混合物冷卻至室溫，通過層析 法濃縮和純化，即得甲基硝基吡啶2。 有利的是，現已發現化合物2也可以按照示意圖1之 步驟a通過一釜兩步合成法來製備。相應地，將化合物1 加入了種極性溶劑例如二甲基曱醯胺或N _曱基_ 2 _吡咯烷 ，加入約2至約2.5當量的驗，例如叔丁醇鉀、乙醇 、w氣化納叔丁醇納或六甲基二石夕氮烧納鹽，在約i60c =下擾拌約3G min。然後用約當量的丙 在約·至約35°c的溫度下處理該 。量的i=mln後」於約29°c至約44°c的溫度下用約 Ψ^, α 1在一種極性溶劑例如二甲基曱醯胺$ λτ 甲基吧錢酮中的溶液處 ；:甲二或Ν- 約’C直至如熟悉本技術者所_通=::= 20 200530234 $層析分析表明反應已經完全。最有利的是，用約2.0當 量的丙二酸二乙酯來凝聚化合物1，其中，N_曱基_2_吡咯 烷酮疋較佳的溶劑，約2·2至約2·5當量的叔丁醇鈉是較佳 的驗’而且上述的加料次序、反應溫度和時間被用於此更 5 為有利的化合物2的“一釜兩步合成法，，的這一部分（步驟 a)。當反應完全時，用無機酸和水、較佳的是用約4.2當量 的碗^酸，在約100QC的溫度下處理該混合物約12小時， • 以貫現脫羧反應。然後，用冰水淬冷反應物並用一種適當 的溶劑例如曱苯萃取，即得化合物2。通過這一有利的“步 1〇 驟^’來合成化合物2心1(2-甲基-3-硝基吡啶)的方法，導致 了用丙二酸二乙酯凝聚化合物的反應時間驚人地顯著 縮短（約2小時相對於約3天），且可以顯著提高的總產率（約 80%相對於30-68%)生成化合物2a-1，並且無需經過層析純 化步驟即可得到顯著提高的分離純度(>96%)。此方法的一 15 個優點是，其產率和分離純度具有重現性。還有一個優點 是，此方法可避免使用金屬鈉和比較昂貴的試劑例如四（三 鲁 苯基膦)鈀(〇)，而以上所披露的製備化合物2的其他方法則 必需使用這些試劑。 如示意圖1之步驟b所顯示的，2-經基-3-(石肖基u比咬基) 2〇 丙烯酸乙酯3可通過用一種適當的驗例如乙醇鋼、乙醇鐘、 叔丁醇鋰、叔丁醇鈉、叔丁醇鉀或六曱基二矽氮院鋰鹽， 在一種適當溶劑例如乙醇或叔丁醇中，處理甲基確基。比。定 -2的方式來製備；然後再用一種乙二酸二酯例如乙二酸二 曱酯或乙二酸二乙酯在室溫下處理該反應混合物，並將該 -33- 200530234 反應混合物在室溫下放置約12小時至約48小時。然後， 該反應混合物用一種無機酸例如鹽酸或硫酸處理至pH值 約為1。過遽收集沉殿物，隨後用一種適當的溶劑例如6 醇和二異丙驗分別洗務，即得2_經基_3领基Π比咬基）丙婦 5 酸乙酯3或它的互變異構酮酯。 有利的是，現已發現化合物3也可按照示意圖丨之资 驟b通過另-方法合成，通過在大約2〇c至室溫的溫度下 鲁㈣地將化合物2加人乙二酸二乙g旨和—種適#的驗^ 種適當的溶劑中的預混合溶液。相應地，一種適當的驗例 1〇 如乙醇納、乙醇鐘、叔丁醇鐘、叔丁醇納、叔丁醇鉀或六 甲基二石夕氮燒鐘鹽，在約2〇c的溫度下被加入—種適舍的 溶劑例如四氫七南。攪拌該混合物約2 : -〇.3〇C至約代的溫度下加人約3#量的乙二酸 在，10分鐘之後，在約4 V至約9 〇c的溫度下加入約i 15 #量的化合物2的溶液和-種適當溶劑，例如四氫咬喃。 任該此口物自然升溫至室溫。當如熟悉本技術者所熟知地 通過HPLC分析或其他層析分析表明反應已經完全時，將 該反應混合物冷卻至約！，並用飽和氯化錢溶液在約i 〇C至約9 〇C的溫度下處理。用水和/或一種共溶劑例如里 20 ㈣進—步稀釋即分離出化合物3。最有利的是，按照上述 的加料次序、反應溫度和條件，用乙二酸二乙酷來凝聚化 e物2其中，乙醇鈉是較佳的驗，四氫呋喃是較佳的溶 劑。通過這一更有利的“步驟b，，來合成化合物(2_羥基 -3-(3-瑣基比啶-2)_丙烯酸乙醋）的方法，導致了反應時間驚 -34- 200530234 j顯著縮短(從約2至3天縮短至約2小_，且可以_ 提冋的產=(約88%相對於32_68%)生成化合物如]。 如不思圖1之步驟c所顯示，所需的1H-吡咯並[3,2-b] 錢领酸醋、1H•鱗並[3,2_十比咬I叛酸喊1Η〜各 並[2,3 c]比定幾酸醋這些中間體*，可以通過一種適當 取Π羥基士(硝基吡啶基)丙烯酸酉旨3或其互變異構_ 酷=基的催化還原或化學還原來製備，同時形成轉環

St二Ϊ 4。因此’化合物3和-種適當催化劑例如 劑在-種適當溶_如乙醇或甲醇中的混合物， 技麟所熟知的方式，在約 至約謂 至約3小時，在純化之後，生成中間 合物4。有利的是，化合物4通過此方法製備時，盆中益匕 5 有利' 15 量）。u 可達到較低的催化劑裝載量10〇/〇(重 錢ίΐ ’2_經基-3-(確基°比°定基）丙缔酸乙酯3或盆互 將化合物3、SnCl2 *TiCl4在化合物4。例如 混合物，在回流條件下加執4小=:溶劑例如乙醇中€ 熟知的方法純化之後，即物再Γ熟悉本技術者戶 ®將乙二酸^一乙酉旨用卜人私》, 4可以籍由熟悉本技術者所孰知的 一乙酉旨 化為其他適當的㈣示意圖，;之 -35. 20 200530234 製備可通過以Τ μ 鈉存在時處理乙：驟而實現二在一種鹼例如碳酸鉀或碳酸 加熱該混合物約二”液，在，、5G至約80 〇c 地，通過薄層展拼直至如熟悉本技術者所熟知 完全。用水稀=法或其他W的層析分析表明反應已經 或萃取方式分離μ反應物且"^悉本技術麵熟知的過濾 一、刀雖，即得甲酯5。 的方:示?驟e所示，籍由熟悉本技術者所熟知 約-至二:體:旨/或5轉化為酿胺 -適當極性、、容2氣氧錢溶液在室溫下處理酷4或5在 天，或於約i5t 醇或乙醇中的溶液約1天至約3 者所熟知的溶液約1G小時’在簡悉本技術 溫下將…;?二得伯醯胺“或者，^ 15 物中約3天至約吉：：：化叙減和氯化鐘的混合 =的其他合適的層析分析====術; 奸ί所熟知的方法將醯胺6從該反應混合物 刀出來。稭由熟悉本技術者所熟知的方法，用Ci6鏈 烧基胺處理巾間職㈣《 4《5,可製備N_Cl_6鏈烧 基取代的醯胺6。例如，可以用。鏈縣胺例如濃的甲 胺水/合液或以過量的純Ci·6鏈燒基胺處理中間體氮雜，哚 酯4或5,並通過薄層層析法或熟悉本技術者所熟知的其 他層析^析方法監視反應是否完成。在財稀釋該反應物 之後或籍由熟悉本技術者所熟知的萃取方法，可收集所需 的N-Cw鏈烷基醯胺6。用Cw二鏈烷基胺對中間體氮雜 -36 - 20 200530234 吲11 木酯4或5進行類似的處理，即得對扃 基醯胺6。 了應的N_Q—6二鏈烧 吟乙Γ:的广安照示意圖1之步驟e，通過將氮㈣ 全來=備:人 液並在壓力&齡至反應完 水衣備伯駚胺6。以甲醇為溶劑的做 始材料的溶解度並顯著地縮短了反應， 十牛之下通過醋交換而轉化為對應的氮雜 引木甲酉曰5，但在該反應條件下酯4和 為所需的伯酿胺6。最好是使用7N的氨甲=轉化 ^ 50 °Γ AA tr 4的甲醇洛液、在 、 的反應溫度和約35 psi的初始髮 反應達約49 *時。在此期間反應爸内 ^牛下進仃该

Pf通過HPLC層析分析或熟悉本技術^力下= 約 析分析來料歧歧^成。知的其他層 15 姑2不意圖1之步驟f所示’中間體醯胺6籍由孰朵太 技術者所热知的方法在吡咯環的3 •位發生硫 如’用-種適當的驗例如氫化鈉或氫化 ^ ^ ，酿胺6在—適當溶劑例如二甲基甲醯胺或购== 然後’用-種適當的二芳基二硫化物處理，再於^ 、、'至約1〇〇〇C加熱該混合物達約12小時至約2〇小、护、。 二層析分析或熟悉本技術者所熟知的其他層析； 方去▲視反應過程。然後，濃縮該反應物 ^ 由熟悉本技術者所孰知的方法分心 ，籍 結構式為⑴之化合物並以層析法純化所需的 或者，用-種適當的二芳基二破化物(約 1.1 當量)處理 ‘37- 20 200530234 中間體醯胺6和約15當量碳酸絶在一適當溶劑例如二甲 基甲I胺或NMP中的現合物，然後，於約9〇〇c至約湖〇c 加合物約12小時至約2()小時。通過薄層層析分析 ，热f本技術者所熟知的其他層析分析方法監視反應過 私籍由也‘本技術者所熟知的方法分離並以層析法純化 所需的結構式為(1)之化合物。使用適當取代的雙雜環二硫

化物可以類似方式製備出結構式為(I)且其中R3-X是雜環-S 0 的化合物。 1 告曰有利的是，可以按照示意圖1之步驟f，通過將約1.5 10 §里一芳基二硫化物、約2當量碳酸铯以及約1當量胺6 — =加入較佳的溶劑NMP中來合成結構式為(1)之化合物。於 約120。(：加熱該混合物約21小時。通過HPLc或熟悉本 技術者所熟知的其他層析分析方法監視反應過程。如果需 15 吏反應完全，可選擇加入約0·5當量碳酸鉋，並繼續加 15 熱約4小時。當通過層析分析確定反應已完全，將反應物 _ 並傾入水中淬冷，再籍由熟悉本技術者所熟知的方法 分離並純化所需的結構式為⑴之化合物。當以這種方式製 備、、、"構式為⑴之化合物時，反應時間驚人地顯著縮短，且 可以較鬲的產率（85%至59%)和足夠高的純度有利地獲得 ° 結構式為(I)之化合物，使得不需要對產品進行進一步的層 析法純化。 如示意圖1之步驟g所示，可以通過用一種適當的溶 劑Μ列如13_二甲基-3,4,5,6·四氫_2(m)_嘧啶酮和c16二 鏈燒基硫酸酯，以及一種適當的驗，例如碳酸鎚，在室溫 • 38· 200530234 10 15 20 下處理結構式為(I)且其中1是Η的化合物溶液約12小時 至約20小時，可使結構式為（1)之化合物中吡咯環上气原^ 實現N-烷基化。通過薄層層析分析或熟悉本技術者=熟知 的其他層析分析方法來確定反應是否完全。當反應完全 日守，用水稀釋该反應混合物，再籍由熟悉本技術者^熟知 的方法分離並純化結構式為(1)且其中Rl*Ci_6鏈烷基的'化 合物。通過在適當的鹼例如碳酸鉋存在時，用豳代 處理結構式為(I)且其中是H的化合物的^比啶溶液'，並加 熱約0.25小時至約3小時，可以實現結構式為⑴之化合: 中°比洛壤上氮原子的N·：^基化。冷卻該反應混合物， =釋或濃縮至乾，並用乙酸乙g|萃取。籍由熟悉本技 的層析分析方法進行濃縮和純化，即得結構式_ ς Rj CrC6鏈烧基的化合物。其他為熟悉本技 严=的、使結構式為(1)且其中& & h的化合物中吡咯 原子貫現队絲化方法也可以使用，例如，在—種 的溶劑例如二甲基？醯胺或ΝΜΡ中，用—種適當 的^人°虱化納或叔丁醇鉀處理結構式為(1)且其中R1是Η 柘：物’然後加入Cl-6鹵代烷例如碘丙烷。通過薄層 熟知的其他層析分析方法來確i 完全時，用水稀釋該反應混合物， 且其中&是q.6鏈燒基的化合物。 ’ -39- 200530234 不意圖2

如示意圖2所示，通過用過硼酸鈉的水溶液處理一適 當芳基硫化物在一適當有機溶液例如曱醇中的溶液，再將 5 該混合物於室溫下放置約12至約24小時，即可製備二芳 基二硫化物。二芳基二硫化物可用熟悉本技術者所熟知的 | 方法進行分離和純化。雙雜環二硫化物例如二(2-噻吩基) 二硫化物可以相似的方式製備。 示意圖3

示意圖3彼露了 1H-吡咯並[3,2-c]吡啶-2-羧酸曱酯 5b-l的合成。在示意圖3之步驟h中，（3-块代^比唆-4-基) 氨基曱酸-1,1-二曱基乙酯（7b_l)、3,3-二乙氧基-1-丙炔、一 15 種驗例如三乙胺或Hunig氏鹼(N，N-二異丙基乙胺）、二氯二 種適當的溶劑 1〇 15 20 200530234 (二苯基膦)把(η)以及碘化銅的混合物，在— 例如乾燥的DMF中並在惰性氣氛裏於約9〇。 時。冷卻該反應混合物至約70 cC，並用〜 加熱約3小 18-二氮雜雙環[5·4·0]十一碳烯_7(DBU)或1 ^ : ^鹼例如 [4.3.0]壬烯_5(DBN)處理，然後於約％ 鼠雜雙環 认6 π 携拌約3小時苒 於至 >皿下授拌約12小時。將該反應混合物倒 用水和鹽水洗滌，並將有機相乾燥、過濾和⑽ 夂-曰， 己氧基甲基)-1Η-吡咯並[3,2-c]吡啶小竣妒^、、、即付二 (8b-l)，該產物用層析法或熟悉本技術者所熟知一 τ 土 曰 純化。如示意圖3之步驟i所示，化合物的/、他方法 性條件下進行，即得m•鱗並[Μ外㈣·/1的水解在= 物8b_l用一種無機酸例如鹽酸在室溫下卢 搭將化& 間，例如約20/J、時，通過用熟悉本技術者:又：：：： 分離該產品混合物之後，即得心比略並n 〇厅^口的層析法 (9b_l)和2-甲醯基K略並[3,2♦匕^定〗]比疋2甲搭 I乙醋的混合物。通過與一種適當的酸例—斤， 種適當的溶劑例如二氣曱烷一起回流加熱 $ ?:年 呪咯並[3,2-c]吼啶小羧酸-1，1_二甲基乙Γ ·酏土 _1H， 印得.鱗並[心]岭2_甲1 gp 雜水^ 1 〇如示音圖 2 之步驟j所示，在一種適當的溶劑例如ψ ^ ⑴ΝΤ醇中，用化鈉 和一氧化猛處理1Η-ϋ比π各並[3,2-cl11比口定_9 ® -^ 疋a甲醛(9b_l)，並冷 部至約0°C且攪拌約5小時，在進行過嗆 ^ 心藏、用水洗滌和籍 由热悉本技術者所熟知的方法分離之德， Γ., 便即得1H-吡咯並 L3,2-c]吡啶-2-羧酸曱酯5b-l。 -41 · 200530234 本文所彼露的本發明的各種方法中所使 物的各種具體實關’可用於㈣本文所_各2齡 異常。如本文所述’本發明之方法所使用的各 夠抑制酪蛋白激酶Ιε的作用。本發明的一且 t a 了-種治療情緒障礙和睡眠障礙的方法。在本=例^ 具體實施例中，情緒障礙可為憂鬱症或躁#症 重獻本發明之另一具體實施例係關於躁 療’其中搞繁症疋-型躁醫症或二型躁鬱症。本發明之 另-具體實施例係關於睡眠障礙的治療。本發明之^一且 體實施例係關於睡眠障礙的治療，其中該睡^障礙曰一藉 生理節律性睡眠障礙。本發日狀又—具體實施例係^於生 理節律性睡眠障礙的治療，其中該生理節律性睡眠障礙是 15 20 因輪班工作引起的睡眠障礙、飛行時差反應综合症，睡眠 時相前移綜合症和睡眠時純移綜合症。熟悉本技術者將 很容易理解’此翻文闡述的疾病和異常並非 =、 而是為了制本發明之化合㈣功效。故應理解，本=明 == 勿治療任何因路蛋白激酶L受到抑制而得 到改善的疾病或異常。 孰知另一具體實施例中，以熟悉製藥技術者所 了本發明之結構式為⑴之化合物的醫藥組 介的固i、丰劑可以是可作為活性成分的載體或媒 枯摘抛τ體或液體材料。適當的載體或賦形劑是本 眾所周知的。醫藥組合物可適合於Π服、吸入， -42- 200530234 =射和局部使用，並可以片劑、膠囊、懸浮液、糖漿、喷 務劑、吸入劑、栓劑、油膏、粉末、溶液等形式給患者使 用。本文中所用的術語“醫藥載體，，指的是一種或—種以上 的賦形劑。如本文所述，本發明之醫藥組合物可抑制赂蛋 白激酶Ιε，因此對於治療因酪蛋白激酶^受到抑制而得到 改善的疾病或異常是很有用的。 在用本發明之化合物製備藥劑時，應注意保證經由選 定途徑，包括口腔、注射和皮下途徑，輸入有效量的一種 和多種活性化合物以產生生物效應。例如，有效的輸入途 徑可包括皮下、靜脈、經皮、鼻腔、直腸、陰道等，包括 植管釋放以及直接將活性成分/或組合物注入體内組織。 對於口腔給藥方式，該化合物可配製成包括或不包括 惰性稀釋劑或可食用載體的固體或液體製劑，例如勝囊， 丸劑、片劑、錠劑、粉末、溶液、懸浮或乳化液。膠囊、 丸劑、片劑、鍵劑等也可以含有一種或多種以下佐劑：枯 合劑，例如微晶質纖維素，黃芪膠；賦形劑，例如澱粉或 乳糖；崩散劑，例如藻酸、澱粉等；潤滑劑，例如硬脂酸、 硬脂酸鎮或 Sterotex (Stokely-Van Camp Inc·, Indinapolis，

Indiana);助滑劑，例如膠狀二氧化石夕；甜味劑，例如薦糖 或糖精；以及調味劑，例如薄荷、水揚酸甲酯或水果香精。 當劑量單位形式是膠囊時，它也可含有一種液體載體，例 如聚乙二醇或一種脂肪油。所使用的材料應該是藥學純而 且在用量範園内是無毒的。或者，醫藥組合物也可製成適 合於長期釋放的形式，用熟悉本技術者所熟知的方法，以 -43- 200530234 每曰一次、每週一次或每 、 的本發明之結構式為(1)之< 二次的適當方式，提供療效量 種含有活性成份的易蝕性物。例如，可以設想使用一 對於注射給藥方式，此各 可接受的稀釋劑和藥用 j可作為其在-種生理上 劑量輸入體内；該稀釋劑可/液或懸洋液’以可注射 或未加人表面活化_ 疋無11液體，例如水油乳液 賦形劑。可⑽製備$此^丨，以及其他藥學上可接受的 油、動物、«或表性的油是來源於石 10 15 -般而言，水、生理鹽水、1，化生/由、丑油和礦物油。 7 Ά- VI V, ^ ^ ^ 现 葡刼糖以及相關的糖的水溶液、 知及丙—醇之類的二元醇是較佳的液體載體，尤其是 對於可注射的溶液。注射賴劑可被韻在魏瓶、一次 性使用的注射器或由惰性塑膠或玻璃製成的多劑量小瓶 中。 上述的溶液或懸浮液也可包括一種或多種以下佐劑： 無菌稀釋劑，例如注射用水，生理鹽水、非揮發性油、聚 乙一醇、甘油’丙二醇或其他合成溶劑；抗菌劑，例如抗 壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑，例如乙二胺四乙酸；緩衝 劑，例如醋酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽，以及調節滲透壓的 試劑，例如氯化鈉或葡萄糖。 此化合物可以皮膚貼片、長效注射或持續性釋放活性 成分的植入製劑的形式給藥。活性成份可被壓入藥丸或小 圓筒而作為長效注射劑或植入製劑被植入皮下或肌肉。植 入製劑也可使用惰性材料，例如生物降解型聚合物和合成 -44- 20 200530234 矽膠。適當的藥用載體和配製技術可在標準的教科書内查 至'\，例如 Remington: The Science and Practice of Pharmacy， 19th edition, Volumes 1 and 2，1995，Mack Publishing Co.，

Easton，Pennsylvania，U.S.A.，其作為參考引述在此。 在治療如本文所述的各種疾病的過程中，適量的劑量 水準是每天約0·01 mg/kg至約250 mg/kg，較佳的是每天 0.05 mg/kg至約100 mg/kg，最佳的是每天約〇·〇5 mg/kg至 約40 mg/kg。該化合物可按每天1至4次及根據所治療疾 病或異常的本質而攝入。 【實施方式】 實例 以下實例旨在更詳細地說明本發明，絕不是以任何方 式限制本發明的範圍。表1、表2和表3總結了本發明所製 備的化合物的實例。由於意識到本文中所述的硝基化合物 具有潛在的爆炸傾向，故在處理此類化合物時甚為謹慎。 除非另行說明，所有初始材料、試劑和溶劑均購自商 業供應商，且未經進一步純化就予以使用。所有反應均使 用乾燥的試劑和溶劑在惰性氣氛中進行。進行快速層析時 使用EM Science矽膠60 (40-63 mm)並按照文獻使用所述 的溶劑體系（Still，w· c·; Kahn，Μ·; Mitm，A· Rapid Chromatographic Technique for Preparative Separations with

Moderate Resolution· J· 〇rg· Chem·，1978, 43, 2923-2925)。 進行薄層層析時使用〇·25 mm塗矽膠60F-254板(EM)並使 -45- 200530234 用碘蒸氣、紫外線，或一種染色劑例如ΚΜη04溶液顯色(若 提及其他染色液，則為按此文獻所述而製備：“Thin-Layer Chromatography，A Laboratory Handbook”，Egon Stahl，Ed·; Springer-VerlagBerlin-Heidelberg，NewYork，1969) o 5 紅外(IR)光譜是在一台Nexus 670 FTIR (Nicolet)光譜 儀上記錄的，樣品則按照說明而製備，結果以波數(cm**1) 表示。4 NMR核磁共振光譜是在Varian Gemini 300和/ 或 Mercury 300、Unity 400、或 Unity plus 和 /或 Inova ® 500MHz光譜儀上記錄的，化學位移（δ)以ppm為單位，以 ίο 四曱基矽烷(〇·〇 ppm)或氣仿(CDC13，7.26 ppm)為參照物。 除非另行說明，13C NMR核磁共振光譜是在Varian Unity (100.57兆赫’ 13C頻率）光譜儀上記錄的，化學位移(δ)以 ppm為單位，以CDCl3(77.0ppm)為參照物。質譜(MS)是 在Finnigan MAT公司的TSQ 700型質譜系統上，於120 eV 15 條件下通過曱烷的化學離子化而獲得的（CI，120 eV)。液相 層析質譜(LCMS)是在與Gilson 215液體處理儀連接的 鲁 Micromass LCT上進行的。高精度質譜分析(精密質譜)是用

Micromass QTOF質譜儀，以電喷灑(ESI)方式於質譜精度 10,000進行的。為質子化分子離子(M+1)(其中Μ是指分子 2〇 離子)確定了確切的質量值。 製備吡咯並『3.2-bl吲哚（4-氤雜吲哚） 2-曱基-3-梢基吼咬，2a-l (示意圖1之步驟a) -46- 200530234 在氮封下將金屬鈉(3.化)在1小時内分批加入預埶至 90°C的含有79mL丙-醢- r阽沾一 π陡、， 、…、 内一S夂一乙g日的二口燒瓶。降低溫度至

10

60 〇C並在15 min期間分批加入2_氯_3_硝基吡啶（w， 25.0g)。反應物之顏色變為深紅色。將溶液保持在的。^達 3 h，然後於室溫下#置過夜。TLC|頁示出剩餘的起始材料。 將溶液加熱至80 %再保持3h (反應完成）。在減壓下除去 丙二酸二乙酯，將深棕色剩餘物溶於濃H2S〇4(18mL)與水 (32 mL)的混合物中。將混合物於1〇5 〇c加熱7 h (脫^反 應），然後於室溫下靜置過夜。用3xl50mLEt2O和2x2〇〇mL

EtOAc洗滌該混合物，丟棄洗滌液。用Na〇H鹼化水相至 pH 值 8-9 ’ 再用 3x200mL EtOAc 萃取。用 Celite® (石夕藻土) 過濾合併的有機萃取物（Celite Corporation，137 West

Central Avenue，Lompor，California 93436)並在減壓下脫除 溶劑。剩餘物結晶即得 2a_l (15.0 g ’ 68%)，rnp 29-31。(^。 15 2-甲基-3-硝基吡啶，2a-l (示意圖1之步驟a、 _ 加熱2-氯-3-石肖基吼口定(la-1，7·9 g，49·8 mmol)、甲基 石朋酸（1.10 當量 54·8 mmo卜 3·30 g)、K2C03 (3·0 當量，150 mmo卜 20·7 g)和 Pd(PPh3)4 (1·2 g，1.2 mmol)在二噁燒(25〇 2〇 mL)中的混合物至ll〇°C，並維持16h。任反應物冷卻至室 溫，濃縮為深色油，在Si〇2上進行快速層析分析(庚院/扮2〇 3:1 ’用少量CHfl2稀釋該油以用於層析柱），即得化合 物 2a-l (Niu，C·; Li，J·; Doyle, T· W·; Chen，S-H·

Tetrahedron，1998, 6311-6318)。 -47- 200530234

5

10 15 將NMP(2.0L)加入- 12L帶授拌器、溫度探頭和回流 冷凝器並配有A氣體接頭的三口燒瓶，冷卻至16。〇。一 次性加入叔丁醇鈉(0·675 kg，6·81 m〇1，2·2當量，按97% 純度校準），立即可觀察到放熱現象且溫度升至29。攪 拌該混合物30 min以使叔丁醇鈉部份溶解，然後於2〇 % 至35 在70 min内加入丙二酸二乙酯（〇 943 L，6 i9 mol，2.0當量）’同時連續地進行冷卻即形成一均相溶液。 擾拌20 min並將2_氯-3_硝基。比咬（hq，〇 491 3 〇9 mo卜1·〇當量）和ΝΜΡ(1·〇 L)的溶液於29 〇C至44在7〇 mm内加入該反應混合物。加熱該反應混合物至5〇。。。以 HPLC 監視反應進展（Agilent 1100 系列；waters Symmertry C8 (5 μ)層析柱(3·9 x 150 mm)，流量為 ι·〇 mL/min。等度 洗脫：CH3CN/0.1% TFA 水溶液，50/50 ; λ = 220 nm。RT : 丙二酸二乙酯=2.6 min，2-氯-3-硝基吡啶=2.7 min ,2-(3-石肖基σ比咬-2)-丙二酸二乙酯=3·9 min)。通常，在1-2 h之内 轉化率可達99%以上。停止加熱並於50。(^至59 〇c在45min 内加入6M H2S04 (2·17 L)。在加入過程中形成一種稠的固 狀沉殿。加熱該混合物至1〇〇 〇C。開始放出氣體。如上所 述以HPLC監視反應進展(RT: 2-曱基-3-硝基吡啶2a-l = 2·0 min ’ 2-(3-石肖基^比17定-2)-丙二酸二乙g旨二3·9 min)。通常， 在12 h之内可觀察到轉化率達99%以上。任混合物冷卻至 40°C再倒入冰水中（20 kg，PH值1.5)。於-11°C至-6°C在 -48- 20 200530234 =加入25% NaOH水溶液(2·65 L)直至pH值為11。 二笨(4.〇L)並攪拌該混合物lOmin。通過Ceiite®矽藻 ^過濾該混合物以脫除無機固體，用甲苯(6.0 L)洗滌濾 餅。進行f分離並用甲苯(6·0 L和4·〇 L)萃取水相兩次。通 ^ Celite矽澡土過濾合併後的甲苯相並用甲苯（1〇 L)洗 滌濾餅。合併甲苯濾出液並用水洗滌（2 x 3.0 L)。乾燥 (MgS〇4)曱苯相、過濾和濃縮，即得油狀2-甲基-3-硝基。比

10 定2a-l (〇·34 kg，80%產率，根據剩餘的NMP和甲苯校 準）HPLC分析顯示該物質純度為^o/oc^HNMRi^CDCh) δ 2·87 (s，3H)，7·35 (dd，1H，4·8，8·1 Hz)，8·27 (dd， 1H ’ 1·4，8·ΐ Hz)，δ 8·72 (dd，1H，1·4，4·8 Hz)。 2二皇基-3_(3-硝某吡噔而烯酸乙酯，(示查圈1之步 驟b) 15 在N2封下將2·2 g (0.0956克原子)鈉加入一含有無水 乙醇500 mL的三口燒瓶。在鈉全部反應完畢後，點滴加入 ❿ 乙二酸二乙酯（98mL)，然後加入化合物2a-l (1當量）。加 入後顏色從淡黃色變為棕色。將所得溶液在室溫下放置2 天。用5N HC1 (pH值=1)處理該橙色混合物，經過濾收集 2〇 沉澱物並用lOOmLEtOH和200 mL二異丙基醚洗滌濾餅， 即得3a-l，即2-羥基-3-(3-硝基吡啶-2)-丙烯酸乙酯（iU=H， 20g，86%)或其酮一酯互變異構體，或酮一烯醇互變異構體 混合物。1HNMR(DMSO-i/6) δ 8.83-(dd，1H，1·1，5.0 Hz)，8.65 (dd，1H，1·5，8.4 Hz)，7·56 (dd，1H，/二 5·0， -49- 200530234 8.4 Hz)，7·11 (s，1H)，3.47 (bs，1H)，4·28 (q，2H，/二 7 j

Hz)，1·30 (t，3H，7.0 Hz)。 2-經基-3_(3-硝基11比咬-2)-丙摊酸乙酯，3a-l (示韋i[ i 5 驟b) 將四氳呋喃（2·7 L)加入一 22 L帶攪拌器、溫度探頭 和加料漏斗並配有A氣體入口接頭的三口燒瓶，冷卻至約 2 °C。一次性加入乙醇納（0.409 kg，6.02 mol，2.0當量）。 * 可觀察到輕微放熱現象且溫度升至2·7 。攪拌該混合物 ίο 20 min，於-0·3至4 °C在50 min内加入乙二酸二乙醋（1 22 L，9.03 mol，3·0當量）（輕微放熱），然後攪拌該混合物1〇 min。於4至9 °C在22 min内加入2-甲基-3-硝基吡咬 (2a-l，0.415 kg，3·01 mol，1.0 當量）的 THF (0.625 L)溶液，

不必冷卻。任該混合物溫度在1 h之内升至室溫。以HPLC 15 監視反應進展(Agilent 1100系列，使用以下條件：Waters

Symmertry C8 (5 μ)層析柱(3·9 X 150 mm)，流量為 1·〇 _ mL/min ; CH3CN/0.1% TFA 水溶液，55/45 ; λ = 210 nm ; RT · 2-曱基-3-石肖基口比咬 2a-l = 1.8 min，3a-l = 2.7 min)。 通常，在2-3 h之内可觀察到產品轉化率達99%以上。在 20 反應過程中，形成稠的紅色沉殿。冷卻該反應混合物至約 1°C ’並於1 °c至9。(：加入飽和NHqCl溶液(2.0 L)。加水 (5.9 L) (pH值7.4)，然後加入IPA (3.5 L)。攪拌該混合物1 h並經過濾收集紅色固體。用ipa/H2〇(1 : 4，8 〇L)，Η2〇 (15 L)洗滌濾餅並用空氣乾燥。乾燥濾餅(4〇。〇〇.丨比·汞 -50- 200530234 柱），即得 3a_l (0.635 kg，89%)。4 NMR (CDC13) δ 1.40 (t， 3H，J 二 7 Hz)，4.38 (q，2H，J = 7 Hz)，7.36 (m，2H)，8.42 (dd，1H 1.5，8.4 Hz)，8.66 (dd，1H，《7=1.5, 4.8 Hz)， 14.52 (2，1H，OH)。 5 111-°比嘻並丨3,2-b]p比咬-2-羰酸乙醋，4a-l(示意圖1之步驟c) 在EtOH (350mL)中於室溫、1200 psi條件下，在10% I巴石炭催化劑（5.5g)上氳化3a-l (20g) 3小時。通過Celite® _ 紗澡土過滤该反應混合物並濃縮遽液即得醋4a-l (RfH)， 10 產率為39%。 或者，在回流條件下用SnCl2(5.0當量）、TiCl4(2.5當 量)在EtOH中還原3a-l為時4h，冷卻至室溫，濃縮並用 石夕膠層析法純化’即得醋4a-l (R4=H)，產率為81%。4

NMR (DMSO-i/6) δ 13·48 (bs，1H)，8.80 (dd，1H，〇·7， 15 5.4 Hz)，8·56 (dd，1H，J二 〇·7，8·4 Hz)，7·80 (dd，1H，J =5·5，8·4 Hz)，7·37 (s，1H)，4·40 (q，2H，J = 7.0 Hz)， • 1.38 (t，3H，7.0 Hz)。 1H-吡咯並丨3，：L-b丨吡啶_2-羧酸乙酯，4a-l(示意圖1之步驟e) 20 將化合物 3a-l (56·8 g，0.24 mol)、乙醇（1〇〇〇/0 (即 200 proof)，850 mL，15 份)和 1〇〇/0 Pd/C (5·7 g，10%(重）)加入 一 2L厚壁Parr反應器。將反應釜與Parr氫化器連接，以 氫置換該系統並將該橙色漿料加壓至45 psi。在室溫下振搖 1 h，在此期間溫度上升至57 QC。當反應混合物溫度穩定 51 200530234 在35 °C時，緩慢地加熱該反應物至40 Qc並維持3 h。當 以TLC (石夕膠，1% MeOH的CH2C12溶液)確定反應已完全 時’冷卻該反應混合物至室溫，通過Celite®石夕藻土過濾漿 料，用政011洗滌濾餅(4^:20〇1111〇。濃縮黃色濾出液即得 5 固體(41.6 g)，加入乙酸乙g旨（302 mL)並在蒸汽浴中加熱。 冷卻該混合物至室溫並加入庚烧（600 mL)以沉殿產品。在 冰浴中攪拌該混合物1 h，過濾並用庚烷（1〇〇!!11〇洗滌渡 _ 餅。乾燥濾餅(50 oC/0.1 in·汞柱)24 h，即得4a-l淺灰色 固體(36.6g，81% 產率）。hNMRpMSO-A) l.36(t，3H， i〇 1 2 3 4 5 6·〇 Hz)，4·36 (q，2H，J = 7.0 Hz)，7·19 (s，1H)，7·25 (dd，1H，J = 4·5，8·1 Hz)，7·82 (d，1H，J = 8·1 Hz)，8·44 (d ’ 1H，4·5 Hz)，δ 12·11 (s，1H)。 -52- 1 並丨3,2_bl吡啶-2-羧醯胺，6a-l (示意圖1之步驟e) 2 15 將酯4a-l溶於5N氨的MeOH溶液，加熱至55 °C並 3 維持10 h，在精製以後即得醯胺6a_l (R2= NH2，R4= H)， 4 • 產率為 44%，mp 332 °C (dec·)。咕 NMR (DMSO〇 δ 11 ·72 5 (bs，1H)，8.36 (dd，1H，1·5，4·5 Hz)，8·10 (bs，1H)， 6 76 (dd，1H，2·2，8·2 Hz)，7·52 (bs，1H)，7.24 (s， 20 1H)，7·17 (dd，1H，4·5，8·2 Hz) 〇 1£L·选咯並丨3,2-b〗吡啶-2·羧醯胺，6a-l i示意圖1之步驟e) 將酯4a-l溶於7N氨的MeOH溶液，在室溫下攪拌數 天，以TLC (10%MeOH/CH2Cl2)監視反應。當反應完全時， 200530234 濃縮反應物至最小體積，用過量水稀釋，經過濾收集沉澱 物並乾燥，即得醯胺6a-l (RfNH2，RfH)，產率接近理論 值。 5 1H-吡咯並丨3,2-b〗吡啶-2-羧醯胺，6a-l (示意圖1 將酯4a-l懸浮在濃NH4OH中，在室溫下攪拌數天， 以TLC (10% MeOH/CI^Cl2)監視反應。當反應完全時，濃 縮反應物至最小體積，用過量水稀釋，經過濾收集沉殿物 * 並乾燥，即得醯胺6a_l (RfNH2，R4=H)，產率接近理論值。 10 1Η-ρ比略並丨3,2-b〗11比咬_2_魏酿胺’ 6a-l (不意圖1之步鄉e) 將 7#NH3 的 MeOH (1·5 L，10.5 mol，20 當量）溶液 加入處於室溫的3 L加壓反應器，然後加入固體氮雜π弓卜朵 酯4a-l (100 g，0.53 mol)。缓慢地加熱漿料至50 °C，即得 15 一透明溶液。可觀察到初始壓力35 psi於4 h内下降至16 psi。於50°C維持反應49h。可觀察到最終壓力為i〇psi。 _ 以HPLC監視反應的進展（Agilent系列1100，使用以下條 件：Waters Symmertry C8 (5 μ)層析柱(3·9 X 150 mm)，流 量為1·0 mL/min，梯度洗脫條件：時間(min)，水：乙腈一 2〇 甲醇比例（乙腈—曱醇為1: 1溶液）0min，70:30; lOmin， 20 : 80 ; 15 min，70 : 30 ; 20 min，70 ·· 30 ; = 210 nm， 入2 — 220 nm ’ >瓜里 1 ·〇 j^L/niin ’ Rt ·乙 S旨 4a_l = 5·6 min， 曱酯5a-l=4.2min，醯胺6a_l=2.2min)。可觀察到在反 應中形成對應的甲1旨Sa-1 ’且5a-l也作為反應的中間 -53- 200530234 體。冷卻反應至4 °C並以真空過濾分離所得沉澱物。用甲 基叔丁基醚(2 X 100 mL)洗滌濾餅並乾燥(40 Qc/0.1 in汞柱) 20 h，即得 6a-l 灰色固體(78·6 g，93%)。NMR (DMSO-i/6) δ 7·17 (dd，1H，J = 4.5，8·4Ηζ)，7·53，8.11 (2s, 2H，NH2)， 7·76 (d，1H，J = Hz)，8·37 (d，1H，1.5 Hz)，11·72 (s，1H，NH)。 IH_n比咯並吡啶-2-羧醯甲胺，6a_2 在室溫下攪拌4-氮雜吲哚酯4a-l(R=Et，R4=H)的曱胺 (40%(重量）水溶液）溶液16h，以TLC監視反應（10% MeOH/CI^Cl2)。當反應完全時，用過量水稀釋該反應物， 經過濾收集沉澱物並乾燥，即得6a-2 (R2=NHCH3，R4=H) 乳白色固體(參閱一般合成方法VI)。MS Obs 176.07 (M+l)。 S方基二硫化物和雙雜環二硫化物初始材料的一般_婦方 法（示意圖2) 邊擾拌邊將過蝴酸納(22 mmol)的水(20 mL)溶液加入 未取代的或適當取代的苯硫醇（17.2 mmol，1·〇當量）的 MeOH (30 mL)溶液，然後在室溫下將該反應物放置過夜。 經過濾收集固體並用曱醇洗滌，即得所需的二芳基二硫化 物。其他二硫化物包括雙雜環二硫化物（例如雙(2_噻吩基） 二硫化物）可以與上述二芳基二硫化物的製備方法相似的 方式製備。 ' -54- 200530234 二酯交換，示意圖1之步驟d) 將K2C〇3 (ι·2〇當量，50·7 mmol)加入4_氮雜吲哚-2-叛酸乙酯4a (42.3 mmol)的MeOH (50 mL)溶液，攪拌並加 熱至55〇C並維持！ h。以TLC監視反應(Et2〇/庚烷）。當反 5 應完全時’在真空中濃縮反應物，用水稀釋並攪拌15 min。 經過濾收集固體並在真空烘箱内於65 °C乾燥3h，即得約 90%至約100%所需的4-氮雜吲哚-2-羧酸曱酯5a。 ’ 二^利用NH4oh的醯胺化，示意圖i之舟戚 ίο el 在室溫下攪拌4·氮雜吲哚羧酸酯4a或5a (40.0 mmol) 在濃NH4〇H (i〇〇 niL)中的懸浮液和LiCl (1.0當量），為時 16 h。經過濾收集乳白色固體，用水洗滌並用空氣乾燥， 即得伯醯胺6a (60-75%)。 15 一般仓威方;tjan利用ns3zm^〇h的醯胺化，示音圄1之 ⑩ 步驟e) 攪拌4-氮雜吲哚_2_羧酸乙酯4a (4.67 mmol)在7N NH3/MeOH (20 mL)中的懸浮液，並加入Licl (i 〇當量，4 67 20 mmol)。在室溫下攪拌該反應物5天，以TLC監視反應（10%

MeOH/CH’l2) ’在此期間形成了沉澱物。濃縮該反應物至 隶小體積，用水稀釋並經過濾收集固體。用水洗務濾餅並 在真空中於60。0進行乾燥，即得伯醯胺6a (>90%)。 «55- 200530234 二·粒合成NaH爲鹼的3-硫代若基化，示意圖 1之步驟f) 將4-氮雜吲哚_2_羧醯胺63(8.18 111111〇1)的0厘？(5 11^) 溶液在N2封下於室溫加入NaH (60%油分散體，1.2當量， 9.8mmo1)在 DMF(75mL)中的 懸浮液。在5 min後，一次 性加入一芳基二硫化物（1〇當量，818 mm〇i)，然後邊擾拌 邊加熱該反應物至95。(：並維持16 h。反應後將反應混合物 分配於 EtOAc/H2〇 兩相之間並以 TLC (10% MeOH/CH2Cl2) 監視。當反應完全時，在真空中濃縮該反應混合物，用水 稀釋，攪拌30 min，過濾並用空氣乾燥濾餅。在si〇2上層 析粗制固體，用9 : 1 CH2Cl2/MeOH洗脫，即得3-芳基硫 醚 la (RpH)。 二^合成方_^iVb (利用Cs，CCK的3_硇代芸基化，示意圖 1之步驟f) 將 Cs2C03 (1〇〇 mg，〇·31 mmol)加入溶於乾燥 DMF (10 mL)的4-氮雜u引n朵_2_叛醯胺6a (0·42 mmol)，然後加入二

方基一硫化物（1· 1當量，0.46 mmol)。在N2封下於95 0C 加熱反應物16h (以TLC/LCMS監視反應是否完全）。任反 應物冷卻至室溫，然後邊攪拌邊倒入冰冷的水中。經過濾 收集沉澱物並在真空烘箱内於40 °C乾燥，即得粗制產品茶 色水晶固體。以層析法在Si〇2上純化即得3_芳基硫醚Ia (RfH) 〇 -56- 200530234 二&金成方法v(吡略環^示意圖j之舟驟g) 邊攪拌邊將二曱基硫酸酯（1·5當量，〇·36 mm〇1)和

Cs’O3 (2·0當量’ 0·48 mmol)加入3-取代_4_氮雜吲嗓_2_甲 醯胺 la (R严H，0.24 mmol)和 二曱基-3,4,5,6-四氬 -2-(1Η)-嘧啶酮（5·0 mL)。在室溫下攪拌反應物16 h，以 TLCdOXMeOH/CE^d2)監視反應。當反應完全時，濃縮 反應物至最小體積，用水稀釋，經過濾收集沉澱物。用水 洗滌濾餅並於40 °C在真空之中乾燥，即得^甲基_3_取代 -4-氮雜吲哚-2-曱醯胺 la (Ι^=<：Η3，65%)。 其他為熟悉本技術者所熟知的使結構式為⑴之化合物 中比略％上氮原子貝現燒基化方法也可以使用。例如， 通過在一種適當的極性溶劑例如二曱基曱醯胺或ΝΜρ 中，以一種適當的鹼例如氫氧化鈉或叔丁醇鉀，處理結構 式為(I)且其中心是Η之化合物，然後再加入一種鹵代烷例 如碘丙烷，即得結構式為⑴且其中Ri是丙基的化合物。 二AiAjr法胺和其他伸醯胺的一般製備方 法(示意1| ΐ之步驟e) 將心氮雜吲哚酯4或5與CU6鏈烷基胺(例如40% (重） 曱胺水溶液或純曱胺）一起在室溫下攪拌16h，以TLC(10% MeOH/CHfl2)監視反應。當反應完全時，用過量水稀釋該 反應物，經過濾收集固體沉澱物並乾燥即得仲醯胺6 (R2 = 鏈烷基），產率接近理論值。 -57- 200530234 3·笨硫基_1H_吡咯並『3,2-bl吡必鱗胺’ Ia1。 如一般合成方法IVb中所述，將二苯二硫化物（1.0當 量）加入1H-吡咯並[3,2-b]吡啶I羧醯胺（6a-l，Η ; I·0 當量）的DMF (100 mL)溶液，即得Ia-1茶色水晶固體 5 (81%)，mp 251 °C，TLC Rf。〇·49· 4 NMR (DMSO-i/6) δ 12·48 (bs，1H)，8·45 (dd，1H，L5，4·4 Hz)，8·11 (bs ’ 1H)，7.89 (dd，1H，1.5，4·〇 Hz 重疊於 bs，1H)，7.31 (dd，1H，《/= 1·4，4·5 Hz)，7·28 (dd，1.5，4·5 Hz，1H) 鲁 7·21 (m，2H)，7·13·7·05 (m，3H) ; m/z = 270.06 (M + H)。 10 分析：C14HuN3SO 計算值·· C，62.44 ; Η，4·12 ; N，15·6。 實際值·· C，62.31 ; Η，4·08 ; N，15.39。 基_1Η-吡咯並丨3,2-bl吡嘧-2-羧醢胺，la-1，使用過立

在氮封下將NMP (1.20 L)加入一 3 L帶機械攪拌器、 溫度探頭和回流冷凝器的三口燒瓶。一次性加入二苯二瑞 化物（177.8 g，1.5 當量）、Cs2C03 (351.9 g，2.0 當量）和醯 胺6a-l (87.5 g，0.54 mol)。於120 QC加熱該反應混合物 21 h。以HPLC監視反應的進展(Agilent系列1100,使用以 下條件：Waters Symmertry C8 (5 78)層析柱（3·9 X 150 mm) ’流量為1·〇 mL/min，梯度洗脫條件：時間（min)，水： 乙腈—甲醇比例（乙腈一曱醇為1: 1溶液）0 min，70 ·· 30 ; 10 min，30 : 70 ; 15 min，30 : 70 ; 20 min，70 : 30 ; 25 min， 70 · 30，Μ = 210 nm ’ λ2 = 300 nm，流量：ι·〇 mL/min。（RT : •58· 200530234 醯胺 6a-l = 2·1 min，產品 iu = 5.7 min，PhSSPh=14.0 min，ΝΜΡ=1·9 min)。若反應不完全，則再加 Cs2C03 (87·97 g，〇·5當量）並於120。(：再維持反應4 h。冷卻該反應混合 物至室溫，倒入冰水中並攪拌1h。經過濾收集棕色固體， 5 用水洗滌濾餅兩次並用空氣乾燥6 h。在室溫下用20%

EtOAc/庚烧將固體調成浆料兩次以脫除phSSPh。用木炭在 THF中進行粗制產品脫色並回流1 h，過濾並精製，即得 _ Ia-Ι淺棕色固體。在乙醇（丨2份）中將ia-i調成漿料，再回

流加熱1 h，在冰浴中攪拌冷卻。經過濾收集固體，用冷的 ίο EtOH 洗滌並乾燥(40 oC/0.1 in·汞柱）即得 Ia-Ι。4 NMR (DMSO〇 δ 7·05-7·32 (m，6H)，7·91 (m，2H)，8·12 (s， 1Η，ΝΗ2)，8·45 (dd，1Η，《/= 4·5，0·9 Hz)，12·50 (s，1Η， ΝΗ)。分析：C12HuN3OS 計算值：62.44%C，4·12%Η， 15·60%Ν ;實際值：62.31%C，4·08%Η，15·39%Ν。 15 3-(3-氟笨硫基V1H-吡咯並丨3.2-b〗吡啶-2_#醯胺，la-2 _ 如一般合成方法IVb中所述，用二(3-氟苯基)二硫化物 (1·90 g，1.0當量)處理1H-吡咯並P，2-b]吡啶-2-羧醯胺6a-l (1.20 g，74.4 mmol)的 DMF (1〇〇 mL)溶液，即得 la-2 乳白 2〇 色固體（1.73g，80.8%)，mp 235-237 〇C，TLCRf=0.49。4 NMR (DMSO-i/6) δ 12·52 (bs，1H)，8·45 (dd，1H，/= 1.2,4.5 Hz)，8·10 (bs，1H)，7·90 (dd，lH，《/= 1.2,8·2 Hz)，7.83-(bs， 1H)，7.27 (重疊 dd，1H，J二 4·5，8.2 Hz 和 dd，/= 7·8， 14.0 Hz，1H)，6·97-6·82 (m，3H) ; MS Obs 288 (Μ + 1); -59- 200530234 LC/MS ·· a 二 100%〇 分析：C14H10FN3SO 計算值：C，58.53 ; Η，3.51 ; N，14.62.實際值·· C，57·95 ; Η，3·54 ; N，14·25。 3_(3-氮笨硫基V1H-吡咯並丨3,2-b〗吡啶-2-羧醯胺，la-3 5 如一般合成方法IVb所述，用二(3-氣苯基)二硫化物 (2.13g，1.0當量）處理1H-吡咯並[3,2-b]吡啶-2-羧醯胺6a-l (1.20g，74.4 mmol)的 DMF (100 mL)溶液，即得 la-3 乳白 色固體（1.95g，86·3%)，mp 246.5-248 〇C，TLCRf =0.49。 • 巾 NMR (DMSO-i/6) δ 12.54 (bs，1H)，8·45 (dd，1H，J = ίο 1·2,4·5 Hz)，8·11 (bs，1H)，7.90 (dd，1H，1·3，8·3 Hz) 重疊於 7.84 (bs，1H)，7.31 (dd，1H，/=4·5，8·2 Hz) 7.22 (m，2H)，7·06_6·99 (m，2H)。分析·· C14H1()C1N3S0 計算值： C，55·36 ; Η，3·32 ; N，13.83.實際值：C，54.94 ; Η， 3·26 ; Ν，13.62。 15 3-(3-溴笨硫基)-1Η_吡咯並丨3,2-b〗吡啶-2-羧醯胺，Ia_4 ⑩ 如一般合成方法IVb所述，用二(3-漠苯基)二硫化物 (1·1當量）處理1H-吡咯並[3,2-b]吡啶-2-羧醯胺6a-l (1.0當 量）的DMF溶液，即得la-4乳白色固體。iHNMRpMSO-A) 2〇 69 12·55 (bs，1H)，8·46 (dd，1H，1·2,4·5 Hz)，8·10 (bs， 1H)，7.91 (dd，1H，1.2，8·2 Hz)重疊於 7·85 (bs，1H)， 7.33-(dd，1H，4·7，8.5 Hz)，7·20 (m，2H)，7.05-7.00 (m， 2H)。MS Obs 348.1 (M+ 1)。 200530234 ,卜十戒-2-幾醯胺，Ia，5 猶苯絲)·1Η_鱗並丨鮮基)二琉化物 (1·1當量）處理1H_ 口比略並[3，>b] 口比咬叛酉皿=a •田 量）的DMF溶液，即得iW和 m 、 以 Md，lH，/= 1·〇,4·5Ηζ)， (DMSO〇 δ 12.61 (bs，1Η)，7 1ΐΤΛ r〆 8 〇 Hz)，7·76 (bs，1H)， 8·09 (bs，1H)，7.95 (d，1H，’ , 1TT r , r 、7 34 (dd，lH，J = 4.5， 7.49 (dd，lH，1·5，7·5 Hz) ’ ’· 7 5 Hz)，7.08 (dt，lH，/ = 8·0Ηζ)，7.l4(dt，lH，1·5，/·〕 V 】5,7.5Hz^MSObs 304.7

1·5，7·5 Hz)，6.49 (dd，1H，L (M + 1) 〇 f 忒-2-羧醯胺，la-6 3-(4-氣苯硫基)_1Η_€咯亦丨 ，用二(4-氣苯基)二硫化物 如一般合成方法IVb所述 长 ^ 地^定-2-叛鉍胺6a-l (1.0當 (1.1當量）處理1H-比咯並[3,2-b]也疋 量）的DMF溶液，即得ia-6 MS Obs 304·7 (Μ + 1) 〇 15

L 乳白色固體，mP = 266 0C， ^ , 比唆-2_鼓醯胺，la-7 3-(2,4_二氣茉葙某）-1 H-吡咯^ 用二(2,4-一氣苯基)二硫化 如一般合成方法IVb所述⑺ 、， , 1 h*]口比咬-2-叛酿胺 6a-l (1·0 物（L1當量）處理1Η-吡咯並[3,2_bj 乙曰、 < 多丨白色固體，mp = 266 〇C， 當量）的DMF溶液，即得la刀扎㈡ MS Obs 339.2 (M + 1) 〇

3-(2-氟茉硫某V1H -ϋ比 咯並丨3^1^2Α鱗胺1 la-8 20 200530234 如一般合成方法IVb所述，用二(2-氟苯基）二硫化物 (1.1當量）處理1H-吡咯並[3,2-b]吡啶-2-羧醯胺6a-l (1.0當 量）的DMF溶液，即得la-8乳白色固體。4 NMR (DMSO-i/6) δ 12.57 (bs，1H)，8.45 (dd，1H，1·2,4·2 Hz)， 5 8·15 (bs，1H)，7·90 (dd，1H，/= 1·2，8·1 Hz)重疊於 7·84 (bs，1H)，7·31 (dd，1H，/= 4.5，8.2 Hz)，7·20 (m，2H)， 6.98 (m，1H)，6·69 (m，1H)。MS Obs 288·2 (M + 1) 〇 • 3-(2,3-二氣笨硫基)_111-吡咯並丨3,2-1)〗吡啶-2-羧醯胺，1注-9 10 如一般合成方法IVb所述，用二(2,3-二氯苯基)二硫化 物（1.1當量）處理1H·吡咯並[3,2-b]吡啶-2-羧醯胺6a-l (1.0 當量）的DMF溶液，即得la-9乳白色固體。4 NMR (DMS0-i/6) δ 12.62 (bs，1H)，8·44 (dd，1H，/= 1·2,4·5 Hz)， 8.10 (bs，1Η)，7.93-(dd，1Η，1·2，8·3 Hz)，7·75 (bs， 15 1H)，7·35 (m，2H)，7·07 (t，1H，8·1 Hz)，6·40 (dd， 1H，> 1.4，8·1 Hz) 〇 MS Obs 338.1 (M + 1)。 3-(2•三氟甲基笨硫基)-1Η-吡咯並丨3,2-bl吡啶-2-羧醯胺， la-10 2〇 如一般合成方法IVb所述，用二(2-三氟曱基苯基)二硫 化物（1.1當量）處理1H-吡咯並[3,2-b]吡啶-2-羧醯胺6a-l (1.0當量）的DMF溶液，即得la-10乳白色固體。iHNMR (DMSOW6) δ 12.65 (bs，1H)，8·47 (dd，1H，1·5,4·5 Hz)， 8.15 (bs，1H)，7·92 (dd，1H，J二 1·2，8.2 Hz)，7.75 (bs， -62- 200530234 重疊 dd，2H)，7·34 (m，3H)，6.75 (d，1H，J = 7.8 Hz); MS Obs 338·2 (M + 1)。 3-(3-三氟甲基茉硫基)-1Η·吡咯並丨3,2-b〗吡啶-2-羧醯胺， 5 la-11 如一般合成方法IVb所述，用二(3-三氟曱基苯基)二硫 化物（1.1當量）處理1H-吡咯並[3,2-b]吡啶-2-羧醯胺6a-l (1·0當量）的DMF溶液，即得la-11乳白色固體。MS Obs ® 338.06 (Μ + 1) 〇 ίο 3-(2-氨基笨硫基)_1Η·吡咯並丨3,2-bl吡啶-2-羧醯胺，la-12 如一般合成方法IVb所述，用二(2-氨基苯基)二硫化物 (1.1當量）處理1H-吡咯並[3,2七]啦啶-2-羧醯胺（1·0當量） 6a-l的DMF溶液，即得Ia_12乳白色固體。4 NMR is (DMSO-i/6)3 12.29 (bs，1H)，8.49 (dd，1H，J= 1.3,4.5 Hz)， 8.18 和 8.15 (重疊 bs，2H)，7.83-(dd，1Η，/= 1·4,8.2 Hz)， • 7.28 (dd，1H，X5，8·3 Hz)，7·15 (dd，1H，/ 二 1.4， 7.8 Hz)，6.93-(m，1H)，6·62 (d，1H，6.9 Hz)，6·39 (m， 1H)，5.74 (重疊 bs，2H) ; MS Obs 288,2 (M + 1)。 20 3-(2,5-二氮笨硫基V1H-吡咯並丨3,2-b】吡啶-2-羧醯胺， la-13 如一般合成方法IVb所述，用二(2,5-二氯苯基)二硫化 物（1·1當量）處理1H-吡咯並[3,2-b]吡啶-2-羧醯胺6a-l (1·0 •63- 200530234 當量）的DMF溶液，即得Ia-13乳白色固體。4 NMR (DMSO-i/6)3 12.68(bs，lH)，8.46(dd，1Η，《/= 1·3,4·5Ηζ)， 8·10 (bs，1H)，7·94 (dd，1H，1·2，8·2 Hz)，7·77 (bs， 1H)，7.52 (明顯 d，1H，8·5 Hz)，7.35 (dd，1H，J二 4·5， 5 8·4 Hz)，7.20 (dd，1H，J二 2·5，8·5 Hz)，6·37 (明顯 d，1H， 2·5 Hz) ; MS Obs 338·1 (Μ + 1)。 3-(2-甲氣基笨硫基)_1H-吡咯並丨3,2-b〗吡啶-2-羧醯胺，Ia_14 * 如一般合成方法IVb所述，用二(2-曱氧基苯基)二硫化 ίο 物（1.1當量）處理1H-吡咯並[3,2-b]吡啶-2-羧醯胺6a-l (1·0 當量）的DMF溶液，即得la-14乳白色固體。4 NMR (DMS0-i/6) δ 12·48 (bs，1H)，8·44 (dd，1Η，/= 1·5,4·5 Hz)， 8·10 (bs，1Η)，7·90 (dd，1Η，1·2，8·0 Hz)，7·60 (bs， 1H)，7·30 (m，3H)，6·71 (明顯 t，1H)，6·50 (明顯 d，1H)， 15 3·91 (s，3H) ; MS Obs 300.3 (M + 1)。 _ 3-(3-甲氡基笨硫基)-1Η-吡咯並『3,2-b〗吡啶-2-羧醯胺，la-15

如一般合成方法IVb所述，用二(3-甲氧基苯基)二硫化 物（1.1當量）處理1H-吡咯並[3,2-b]吡啶-2-羧醯胺6a-l(1.0 2〇 當量）的DMF溶液，即得la-15乳白色固體。4 NMR (DMSOW6)3 12.51 (bs，1H)，8.46 (dd，1H，J= 1·5,4·5 Hz)， 8·10 (bs，1H)，7.89 (dd，1H，1·5，8·3 Hz 重疊於 bs， 1H)，7·32 (dd，1H，4·5，8·2 Hz)，7·13-(明顯 t，1H，/ =8·0 Hz) 6·62 (m，3H)，3·64 (s，3H); MS Obs 300.3 (M+l)。 -64- 200530234 3-(3_氨基笨硫基)-1Η-吡咯並丨3,2-bl吡啶-2-羧醯胺，Ia-16

如一般合成方法IVb所述，用二(3-氨基苯基)二硫化物 (1.1當量）處理1H-吡咯並[3,2-b]吡啶-2-羧醯胺6a-l (1.0當 5 量）的DMF溶液，即得la-16乳白色固體。4 NMR (DMSOd6)5 12.40(bs，lH)，8.44(dd，1H，J= 1·5,4·5Ηζ)， 8·10 (bs，1H)，7·86 (dd，1H，/= 1·5，8.3 Hz 重迭於 bs， 1H)，7·28 (dd，1H，4.5，8.2 Hz)，7·13·(明顯 t，1H，《/ • = 7·8 Hz) 6·28 (m，3H)，5.08 (bs，2H) ; MS MS Obs 288.08 ίο (M + 1) o 3-(4-硝基笨硫基V1H-吡咯並丨3,2-b〗吡啶-2-羧醯胺，Ia_17

如一般合成方法IVb所述，用二(4-硝基苯基)二硫化物 (1.1當量）處理1H-吡咯並[3,2-b]吡啶-2-羧醯胺6a-l (1·0當 15 量）的DMF溶液，即得la-17乳白色固體。4 NMR (DMSOW6) δ 12.63-(bs，1H)，8.43-(dd，1Η，·/= 1·5,4·5 Hz)， ❿ 8·05 (m，3H)，7.91 (m，1H)，7.50 (bs，1H)，7·32 (dd，1Η， /= 4.5，8·1 Hz)，7·18 (明顯 d，2H，9·0 Hz) ; MS Obs 315.05 (M+ 1)。 3-(3-硝基笨硫基V1H-吡咯並丨3,2-b〗吡啶_2-羧醯胺，la-18

如一般合成方法IVb所述，用二(3-确基苯基)二硫化物 (1.1當量）處理1H-吡咯並[3,2-b]吡啶-2-羧醯胺6a-l (1·0當 量）的DMF溶液，即得la-18乳白色固體。4 NMR -65- 20 200530234 (DMSO-i/6)5 12.59(bs，1Η)，8·45 (dd，1H，J= 1·5,4·6Ηζ)， 8·11 (bs，1H)，7.96-7.81 (m，4H)，7.50 (m，2H)，7.33-(dd， 1H，4·5，8·4 Hz) ; MS Obs 315.1 (M + 1)。 5 3-鄰甲笨基笨硫基-1H-吡咯並丨3,2-b〗吡啶-2-羧醯胺，la-19 如一般合成方法IVb所述，用二（鄰曱苯基)二硫化物 (1.1當量）處理1H』比咯並[3,2-b]吼啶-2-羧醯胺6a_l (1·0當 量）的DMF溶液，即得la-19乳白色固體。：if! NMR _ (DMS0-c/6) δ 12·5 (bs，1H)，8·41 (dd，1H，J = 1·5，4·5 Hz)， ίο 8.05 (bs，1Η)，7·90 (dd，1Η，1·5，8·3 Hz)重疊於 7·87 (bs，1H)，7.31 (m，1H)，7·29 (m，1H)，7.00 (m，2H)， 6.4 (m，1H)，3.3-(s，3H) 〇 MS Obs 284·3 (M + 1) 〇 3-掛甲笨基笨硫基-1H-吡咯並丨3,2_b〗吡啶-2-羧醯胺，la-20 15 如一般合成方法IVb所述，用二(對甲苯基)二硫化物 (1.1當量）處理1H-吡咯並[3,2-b]吡啶-2_羧醯胺6a_l (1.0當 _ 量）的DMF溶液，即得la-20乳白色固體。4 NMR (DMSO-i/6)3 12.42(bs，lH)，8.44(dd，1H，J= 1·5,4·5Ηζ)， 8.10(bs，1H)，7.91 (bs，1H)重疊於 7.86(dd，1H，J= 1·5， 2〇 7.9 Hz)，7·28 (dd，1H，3·7，8·3 Hz)，7.00 (重疊 ds， 4H，12.5 Hz)，3·31 (s，3H) ; MS Obs 284 (Μ + 1) 〇 3-(3,5-二甲基笨硫基）-1Η-吡咯並丨3,2-bl吡啶-2-羧醯胺， la-21 -66- 200530234 如一般合成方法IVb所述，用二(3,5-二曱基苯基)二硫 化物（1.1當量）處理1H-吡咯並[3,2-b]吡啶-2-羧醯胺6a-l (1.0當量）的DMF溶液，即得la-21乳白色固體。iHNMR (DMSOd6) δ 12.45 (bs，1H)，8·45 (dd，1H，《/= 1·2,4·5 Hz)， 8·12 (bs，1H)，7·90 (dd，1H，1·2，8·0 Hz)重疊於(bs， 1H)，7.3-(dd，1H，·/= 4.5，8·2 Hz)，6·76 (s，1H)，6·7 (s， 2H)，2.05 (s，6H) 〇 MS Obs 298·3 (M + 1)。 — 3-間甲笨基笨硫基-1H-吡咯並丨3,2-b〗吡啶-2-羧醯胺，la-22 10 如一般合成方法IVb所述，用二（間甲苯基)二硫化物 (1.1當量）處理1H-吡咯並[3,2-b]吡啶-2-羧醯胺6a-l (1·0當 量）的DMF溶液，即得Ia_22乳白色固體。4 NMR (DMS0-i/6) δ 10·2 (bs，1H)，8.62 (dd，1H，/= 1·0，4·4 Hz)， 8·19 (bs，1Η)，7·85 (dd，1Η，1·3，8·4 Hz)，7.28 (重疊 15 dd，1H，J = 4·5，8·3 Hz 並且 7·24 (s，1H)，7·1-6·9 (m， 4H)，2.22 (s，3H)。MS Obs 284 (M + 1) 〇 • 3-(2-乙基笨硫基V1H-吡咯並丨3,2_b〗吡啶_2-羧酿胺，la-23 如一般合成方法IVb所述，用二(2-乙基苯基)二硫化物 2〇 (1.1當量）處理1H-吡咯並[3,2-b]吡啶-2-羧醯胺6a_l (1·0當 量）的DMF溶液，即得la-23乳白色固體。4 NMR (DMS0d6) δ 12.5 (bs，1H)，8·42 (dd，1H，/= 1·5，4·4 Hz)， 8·1 (bs，1Η)，7·91 (dd，1Η，1·5，8·1 Hz)，7.82 (bs， 1H)，7.30 (m，1H)，7·2 (m，1H)，7·05 (m，1H)，6·95 (m， -67- 200530234 ι ς (Ί; ， 3H)。MS Obs 298·3 1Η)，6·5(ιη，lH)，2.9(q，2H)，13八 (M+ 1)。 γ沛『3.2-bl11比唆-2-叛醯 3_(3_三氟甲氧基苯硫基 胺，la-24 勝 ！— ，雨二三氟曱氧基苯基) 如-般合成方法IVb所▲ 计比咬_2_魏酸胺

ίο 15

二硫化物（1.1當量）處理lH-吡以_24乳白色固體。iH 6a-l (1.0當量）的DMF溶浪，即付8衫㈣，m，i 5， NMR (DMSOO δ 12·56 (bs，⑻，m，厂 15，8·3 Hz)， 4·5 Hz)，8Λ2 (bs，1H)，7·92 (匕，4 *，8 3 Hz)重疊於 7% 7·85 (bs，1H)，7.33 (dd，lH ’ / ，2H)。MS 〇bs 354Λ (m，1H) ’ 7·1 (m，1H)重迭於 (M+ 1) ο 比淀叛酿胺， 3-(喹啉-8-基笨基).1H- ^ la-25

用二(8-啥琳基)二硫化物 如一般合成方法Ivb所述，广羧醯胺6a_1(10當 、1.1當篁)處理1H“比η各並[3,2-b] 固體，MS 〇bs321 J 量）的DMF溶液，即得彳 (M+ 1) 、 遗-2-叛醮胺 ’ Ia_26 啶-2-苯硫基I_1H_吡哈二吡啶基二硫化物 如一般合成方法IVb所述’ 羧醯胺(1.〇當

(1.1當量）處理1H-吡咯並[3，>bJ -68 一 20 200530234 量）的DMF溶液，即得Ia-26乳白色固體。4 NMR (DMSO-i/6)3 12·51 (bs，lH)，8.42(dd，1Η，/= 1·4,4·5Ηζ)， 8·34 (dd，1H，：l，4 Hz) 8.06 (bs，1H)，7·89 (dd，1H， 1.4，8.3 Hz)重疊於 7·82 (bs，1H)，7.53-(dd，1H，J二 5 1.8，7·5 Hz)，7·30 (dd，1H，4·3，8·2 Hz)，7.10 (dd， 1H，J 二 4.9，7.4 Hz)，6.74 (d，1H，J二 8· 1 Hz)。MS Obs 271 ·1 (M + 1) 〇 • 3-(吡啶-4-基笨硫基VIH-吡咯並丨3,2-bl吡啶-2-羧醯胺， ίο la-27 如一般合成方法IVb所述，用4,4’-二°比咬基二硫化物 (Aldrithiol 4) (1.1當量）處理1H-吡咯並[3,2-b]吼啶-2-羧醯 胺6a-l(1.0當量）的DMF溶液，即得la-27乳白色固體。 4 NMR (DMS0-i/6) δ 12·5 (bs，1H)，8.44 (dd，1H，/= 1·5， 15 4·5 Hz)，8.27 (dd，2H，1·5，4·5 Hz)，8.07 (bs，1H)， 7.93-(dd，1H，/= 1.4，8.3 Hz)，7.73-(bs，1H)，7.33-(dd， ❿ 1H，/ = 4·5，8·2 Hz)，6·94 (dd，2H，/ = 1·5，4·5 Hz)。 MS Obs 271.07 (Μ + 1) 〇 2〇 3-(1^吩_2-笨硫基)-1 H-p比並丨竣酿胺 ’ la-28 如一般合成方法IVb所述，用2,2’-二(噻吩基)二硫化 物（1.1當量）處理1H-吡咯並[3,2-b]吡啶-2-羧醯胺6a_l(1.0 當量）的DMF溶液，即得la-28乳白色固體。4 NMR (DMSOd6) δ 12.34 (bs，1H)，8·50 (d，1H，/= 4.4 Hz)，8.21 -69- 200530234 (bs，1H)，8·00 (bs，1H)，7.83-(d，1H，/: 8·3 Hz)，7 42 (d 1H，5·3 Hz)，7·26 (dd，2H，X5，8.2 Hz)，6 92 ⑽ 1H，3·6，5·2 Hz)。MS Obs 276.01 (M + 1)。 l·:·甲基-3-苯氇^|^洛並丨3,2_b〗吡啶_2_羧醯29

10 15 如一般合成方法v所述，用二甲基硫酸酯（l 5者量) 處理3-苯硫基_1H_吡咯並[3,2_b]吡啶_2_羧醯^ I Ia_33-(1.0當量）的DMF溶液，即得Ia-29乳白色 MS Obs 298·09 (M+1)。 ί二甲基_3_苯遗基dH-吡略並丨3.2-b】吡啶-2-羧醯29 在室溫下將碘曱烷(20毫克，0.164 mmol)加入3_苯碚 基比洛並[3,2-b]吼啶·2-羧醯曱胺（Ia-33,47毫克Γ 0.166111111〇1)、〇82(^03 (65 毫克，0.2 111111〇1)和口比咬（15111[) 的混合物。在一密封容器内於60 0C加熱反應物3小時。 再加入碘曱烷(20毫克）並以層析法監視反應的進展。'各 反應完全時，冷卻該混合物，濃縮至乾並從鹽水相萃取二 乙酉文乙S旨相。分離該有機相並濃縮。籍由快速層析法純化 剩餘物兩次(Si02 3 gm，用〇-4%MeOH的DCM溶液洗脫； Si〇2, 1 gm，用庚烷：DCM(1 : 1)洗脫），即得標題化合物（10 毫克）白色固體，1HNMR(CDC13)和 LC-MS(m/e=297)結果 與標題化合物結構一致。 3-(3-三氟甲氧基茉硫基)_ih_吡咯並吡咭醯甲 20 200530234 胺，Ia-30 如一般合成方法IVb所述，用二(3_三氟曱氧基苯基) 二硫化物（1」當量）處理1H-吡咯並[3,2_b]吡啶-2-羧醯曱醯 胺6a-2 (1.0當量）的DMF溶液，即得Ia-30乳白色固體， 5 MS Obs 368.03 (M + 1)。 3-(3_氣笨硫基V1H-吡咯並丨3,2-bl吡啶-2-羧醯甲胺，la-31 如一般合成方法IVb所述，用二(3-氯苯基)二硫化物 • (1.1當量）處理1H-吡咯並[3,2-b]吡啶-2-羧醯曱醯胺6a-2 ίο (1.0當量）的DMF溶液，即得la-31乳白色固體，MS Obs 318.03 (Μ + 1) 〇 3-(3_氟笨硫基)-1Η-吡咯並丨3,2-b〗吡啶-2-羧醯甲胺，la-32 如一般合成方法IVb所述，用二(3-氟苯基)二硫化物 15 (1·1當量）處理1H-吡咯並[3,2-b]吡啶-2-羧醯曱醯胺6a-2 (1.0當量）的DMF溶液，即得la-32乳白色固體，MS Obs • 305.05 (M+ 1) 〇 3-笨硫基-1Η-吡咯並丨3,2-b〗吡啶-2-羧醯甲胺，Ia_33 20 如一般合成方法IVb所述，用二（苯基)二硫化物（1.1當 量）處理1H-吡咯並[3,2-b]吡啶-2-羧醯曱醯胺6a-2 (1.0當 量）的DMF溶液，即得la-33乳白色固體。4 NMR (DMSO-i/6)3 12.48(bs，lH)，8.45(dd，1H，J= 1·5,4·4Ηζ)， 8.11 (bs，1H)，7·89 (dd，1H，1·5，4.0 Hz 重疊於 bs， -71 - 200530234 1H)，7·31 (dd，1H，1·4，4.5 Hz)，7·28 (dd，1·5， 4·5 Hz，1H) 7·21 (m，2H)，7·13-7·05 (m，3H)，2.9 (d，3H， / 二 4.2 Hz) ; MS Obs 284.06 (M + 1)。 1-甲基-3_笨硫基_111_0比略並丨3,2-b〗p比咬_2-藉酿脸，Ta-34 如一般合成方法V所述，用二甲基硫酸酯（ι·5當量) 處理3_苯硫基洛並[3,2-b]11比咬-2-緩酿胺ia_i (1〇 當量）的DMF溶液，即得la-34乳白色固體，MS Obs 284.06 (M[ + 1) 〇 ί"甲基-3-表硫基-1Η_Ρ比洛並『3,2_bl11比唆-2_轉醯胺，ja-34 [示意圖I，步驟0 將破甲烷(20毫克，0.14 mmol)在室溫下加入3-苯硫基 •1H-吡咯並[3,2-b]吡啶-2-羧醯胺（Ia-Ι，27毫克，〇.1 mmol)、Cs2C03_(43 毫克，0.13 1!1111〇1)在。比咬(0.5 mL)裏的 混合物。在一密封容器内於8〇 〇C加熱反應物15niin。冷卻 該混合物並從水相萃取至乙酸乙酯相。分離該有機溶液並 蒸發。籍由快速層析法(矽膠，3 gm，用0-4% MeOH的二 氯曱烧溶液洗脫）純化剩餘物(33毫克），即得標題化合物 (11 mg)白色固體，iH NMR (CDC13)和 LC-MS (m/e = 283) 結果與標題化合物結構一致。 甲氳基1H_吡咯並丨3,2_b丨吡嗆鉍醯 胺，la'私 -72- 200530234 如一般合成方法ivb所述’用^一 (3 -氣本基）-—硫化物 (1.1當量）處理5_甲氧基dH-吡咯並[3,2-b]吡啶_2_羧醯胺 (1.0當量，從對應的乙醋製俤，Frydman，B· ; Reil，S· J·; Boned，J· ; Rap〇p〇rt，H j 〇rg· chem· 1968, 33, 3762-6)的 DMF溶液，即得Ia_35乳白色固體，MS 〇bs 318 〇3 (M+1)。 甲氣暴1]»-吡咯並丨咣啶-2-羧 mm 9 ι^3β 如一般合成方法IVb戶斤述’用二(3-曱氧基苯基)二硫化 物（1.1當量）處理5_曱氧基lH-吡洛並[3,2-b]吼咬-2-羧醯胺 (1·〇當量，從對應的乙酯製備，Frydman，B· ; Reil，S· J·; Boned，J· ; Rapoport，Η· J· Org· Chem· 1968, 33, 3762_6)的 DMF溶液，即得la-36乳白色固體，MS Obs 330.01 (M+l)。 丙-lH-吡略祐丨3·2-1>ΐ吡啶·2-羧醯胺，Ta-π 按照一般合成方法V，在CsWO3 (1.5當量)存在條件 下’用碘丙烷（1.5當量）處理3-苯硫基_1H-吡咯並[3,2_bp比 啶-2-羧醯胺Ia-1 (1〇當量）的DMF溶液，在層析後即得 Ia_37 乳白色固體，MS Obs 312.06 (M + 1)。 ^棊-1Η_°比_度复丨3,2-b〗吡啶-2_羧, τ (#名画丄，步驟g) —將^溴丙烧（19耄克，〇·ι54 mmol)在室溫下加入3_ 苯硫基·1Η“比咯並[3,2仲比啶-2-羧醯胺(la-l，31·5毫克， -73- 200530234 0.12mm〇l)、Cs2C〇3(60 毫克，0185腿〇1)在〇 比啶（〇5响 裏的混合物。在一密封容器内於8〇。〇加熱反應物ι小時。 冷卻該混合物並從水相萃取至乙旨。分離有機相並I 發。籍由快速製備層析法(Si〇2, 2 gm，用庚烷·· DCM洗脫 然後用（M% MeOH的DCM溶液洗脫)純化剩餘物(33毫 克），即得標題化合物（11.5毫克）白色固體，iH NMR (CDCW 和LC-MS (m/e=311)結果與標題化合物結構一致。 座淹並丨3,2_c]吲哚仏氣雜吨哚、的事備

基乙酯，8b-l (示意圖3，舟輝h) 在氬封下加熱(3-碘代吡啶-4-基）氨基曱酸]，二甲基 乙酯（13.3 g，41 ·56 mmol，Darnbrough，Shelley; Mervic， 15 Miljenko; Condon, Stephen M.; Burns, Christopher J. Synthetic

Communications (2001) 31(2i)，3273_328〇)、3,3-二乙氧基小 鲁 丙快（5 96 mL，41·56 mmole)、三乙胺(23 mL，166 mmol)、 一虱一（二本基膦）絶（Π) (1·46 g，2.08 mmol)和蛾化銅 (237mg，1.25mmol)在乾燥DMF中的溶液至90 °C並維持3 20 h。任該反應混合物冷卻至70 〇C並加入DBU (12.5ml，83.12 mmol)。於70 0C攪拌該反應物3 h，然後在室溫下攪拌過 夜。將該反應混合物倒入Et0Ac，用水和鹽水洗滌(2次）， 在MgS〇4上乾燥’過濾並濃縮即得油狀標題化合物。籍由 快速製備層析法(石夕膠，用l〇_20%EtOAc/n庚烧洗脫)純化 -74- 200530234 該油狀化合物，即得9.8 g透明油狀標題化合物，τιχ (矽 膠，30°/。EtOAc/庚烷，R尸〇·3〇)。 此比咯卿-㈣-2丄路^^示音圖3，步驟η 5 將6ml濃HC1加入2-(二乙氧基曱基)-1Η-妨並[3,2-c] 口比咬]-誠_U_二甲基乙酉旨⑽七9,8 g，3〇6麵〇1)在 H)〇ml THF巾的溶液。在室溫下攪拌該反應混合物2〇 h， ’ _入£t(Ue，祕和碳酸氮納 •和鹽水洗滌’在MgS〇4上乾燥有機相，過滤並雜，即得 1〇 2_ 甲酿基 _1H_〇 比0各並[3,2-C]〇tbd-_-l，l-:M6^ 1H-轉並[3,2♦岭2-甲_混合物^ _。籍由快 速層析法(鄉’ ^MeOH/CHA洗脫)分離該混合物， 即得2-甲醯基_1H“比嘻並[3,2外比咬+叛酸“，卜二甲基乙 酯（5.0 g)油狀化合物和1H-吡咯並[3,2_c]吡啶_2_曱醛 15 (1·〇幻茶色固體。將TFA (5.0 mL)點滴加入2_甲醯基_1H_ 吡咯亚[3,2-C]吡啶心羧酸-U-二曱基乙酯（5.0 g，20.3 攀 mm〇1)在士250 mL二氯甲烧中的溶液。回流加熱該反應混合 物3小B寸，濃縮，用3〇〇mLEt〇Ac稀釋剩餘物，用飽和碳 酸，鈉溶液和鹽水洗滌(3次），乾燥有機相（MgS04)，過濾 2〇 並濃縮’即得1H“比咯並[3,2_c]n比啶_2_曱醛外](2 24 g) 純淨固體。

ικ洛羧酸甲酯，Sb_K示章圄3，步驟D 將氰化鈉(5.44g，ill mmol)和二氧化猛（9.65 g，111 -75- 200530234 5

10 15

mmol)在氬封下加入〇 〇c的m_吡咯並[3,2<吡啶！曱醛 C9b_l ’ 3·24 g，22·19 mmol)的曱醇溶液。攪拌該反應混合 物5h’通過Celite®矽藻土過濾並用5〇〇mlEt〇Ac稀釋。 用水和鹽水洗滌有機相（2次），在碳酸鈉上乾燥，過濾並濃 縮，即得標題化合物(3.27g)純淨茶色固體。用上述從乙醋 4a-l合成化合物的任何方法，俨α 1制处 ^

Mm 川叫万凌，攸5b_l製備1H-吡咯 並[3,2_c]u比咬-2-竣酿胺Gb-i。 咯並丨3,2-c1^2_m醯歴，6blLiR^H^^1 之步驟a_c，e) 如同上述從化合物la_l合成同分異構2_甲基_3_硝基 吡啶類似物2a-l，從3-氯4-硝基吡啶lb-Ι製備孓甲基_4_ 石肖基吼啶（2b-l)。用上述從化合物2a-l製備3a_i的任何 方法’從化合物2b-l製備2-輕基-3-(4-瑣基u比咬_3_基）丙稀 酸酯(3b_l)。用上述從化合物3a-l製備4a-l的任何方法， 從化合物3b_l製備1H-吡咯並[3,2-c]吡啶_2_羧酸乙醋 (4b-l)。用上述從化合物4a_l合成化合物6a-l的任何方 法，從化合物4b-l製備lH-吡咯並[3,2<>比啶-2-羧醯胺 6b-l。 3-笨硫基-1H-吡士象酿胺

如一般合成方法lvb所述，用二苯二硫化物（1·1當量) 處理lH-α比咯並[3,2_小比啶幾酿胺处-1 (ι·〇當量）的 DMF(100 mL)溶液，即得讣-1乳白色固體·· 4 NMR -76 - 20 200530234 (DMSO〇 δ 12.48 (bs，1H)，8.70 (s，1H)，8·29 (d，5·8 Hz，1H)，8·04 (bs，1H)，7.76 (bs，1H)，7.44 (dd，1·卜 5·7 Hz，1Η)，7·26 (m，2H)，7.14 (m，3H);m/z = 270.1 (M+H)。 5 3-(3-氟笨硫基-1H·吡咯並丨3,2-cl吡啶-2-羧醯胺，Ib-2

如一般合成方法IVb所述，用二(3-氟苯基)二硫化物 (1·1當量）處理1H_吡咯並[3,2-c]吡啶-2-羧醯胺6b-l (1·0當 量）的DMF(lOOmL)溶液，即得Ib-2乳白色固體"HNMR • (DMSO_〇 δ 12.63-(bs，1H)，8·71 (s，1H)，8·31 (d，5·8 ίο Hz，1Η)，8·06 (bs，1Η)，7·74 (bs，1Η)，7·46 (d，5·8 Hz， 1H)，7.3-(m，1H)，6·99·6·89 (重疊 m，3H); m/z = 288·06 (M + 1) 〇 3-(4•氣笨硫基KLH-吡咯並丨3,2_cl吡啶-2-羧醯胺，Ib-3 15 如一般合成方法IVb所述，用二(4-氯苯基)二硫化物 (1.1當量）處理1H-吡咯並[3,2_c]吡啶-2-羧醯胺6b-l (1.0當 • 量）的DMF(lOOmL)溶液，即得Ib-3乳白色固體"HNMR (DMSO-i/6) δ 12.61 (bs，1H)，8·71 (bs，1H)，8.30 (d，1H， X5 Hz)，8·07 (bs，1H)，7.76 (bs，1H)，7.45 (d，1H， 2〇 5.7 Hz)，7·32 (d，2H，《/= 8.7 Hz)，7.12 (d，2H，8.5

Hz)，m/z = 304 (M + 1) o 吡咯並丨2,3-cl吲哚（6-氮雜吲哚）的製備 -77- 200530234 1H-吡咯並丨2,3-c〗吡啶-2_羧醢胺，6c-l (R4 = Η，示意圖1 之步驟a-c，e) 如同上述從化合物la-1合成同分異構2-甲基-3-硝基 外匕17定類似物2a-l ’從4-氣-3-瑣基σ比咬lc-1製備4·甲基-3-5 硝基吡啶（2c-l)。用上述從化合物2a-l製備3a-l的任何方 法，從化合物2c-l製備2-羥基-3-(3-硝基吡啶-4-基）丙烯酸 酯（3c-l)。用上述從化合物3a-l製備4a-l的任何方法，從 化合物3〇1製備1H-吡咯並[2,3-c]吡啶-2-羧酸乙酯 ® (4e-l)。用上述從化合物4a-l合成化合物6a-l的任何方 ίο 法，從化合物4e-l製備1H-吡咯並[2,3-c]吡啶-2_羧醢胺 6c_l 〇 3-笨硫基-1H_吡咯並丨2,3-c〗吡啶-2-羧醯胺，Ic-1 如一般合成方法IVb所述，將(二苯)二硫化物（1·0當量) 15 加入-1Η_σ比嘻並[2,3-c]4b^-2-叛醯胺6c-l (1.0當量）的 DMF (100 mL)溶液，即得Ic-1茶色水晶固體：4 NMR • (DMSO-A) δ 12·4 (bs，1H)，8·86 (s，1H)，8·18 (m，2H)， 7·84 (bs，1Η)，7·42 (d，·/= 5·5 Hz，1Η)，7·24 (m，2Η)， 7·14 (m，1H)，7.03-(d，8·3 Hz，2H) ; m/z = 270·1 (Μ + H)。 20 3-笨磺醯基-1Η_吡咯並丨2,3-cl吡啶-2-羧醯胺，Ic-2 用 Η2〇2 (30% w/v，131 μΐ^，2.5 mmol)和 Na2C03 (212 毫克，2.0 mmol)處理3-苯硫基-1H_吼洛並[2,3-c]^t咬-2-叛 醯胺6〇1 (1.0 mmol)。在室溫下攪拌16 h，用水急冷該反 -78- 200530234 應物，並用EtOAc萃取。用鹽水洗滌萃取物，乾烯有機相 (MgS04)並濃縮，即得Ie_2乳白色固體；MS Obs3〇3 (M+1)。 3-(3-氟笨硫基KLH-吡吹酿胺’ Ic·3 如一般合成方法IVb所述，用一(3-氟笨基)一硫化物 (1·〇當量）處理1H·吼略並[2,3-#比咬_2邊醯胺6c-1 (1.0當 量）的DMF (100 mL)溶液，即得Ic-3茶色固體：1]H NMR (DMS0〇 δ 12.77 (bs，1H)，S·87 (s ’ 1H) ’ 8 2 (d，5 2 Hz，1H)部份地重疊於 8.13-(bs ’ 1H) ’ 7·81 (bs ’ ！H)，7·42 (d，5·5 Hz，1H)，7·26 (m，⑻，6·96 ，1H)，6·84 (m， 2H) ; m/z = 288.04 (M + H) 0 3-(3_甲氣基笨硫基)_1H-吡略幾酿胺’ I<>4 如一般合成方法IVb所述，用一Ο甲氧基本基)二硫化 物（1.0當量）處理1H-吡咯益[2,3_c]"比咬^羧醯胺6c-l (1·〇 當量）的DMF(lOOmL)溶液，即得1<>4茶色固體·· hNMR (DMSOO δ 12·8 (bs，1H)，8·89 (s’ 1H)，8.2 (d，J= 5·3 Hz， 1H)重疊於 8·19 (bs，1H)，7·81 (bS ’ 1印 ’ 741 (d，J= 5·4 Hz，1H)，7·19 (m，1H)，6·61 0，lH)，部份重疊於 6.56 (m， 2H)，3·65 (s，3H) ; m/z = 300·1 + ° 3-(3-氣笨硫基V1H-吡咯並’ Ie_5 如一般合成方法IVb所述’用一(3、氯苯基)二硫化物 (1.0當量）處理1H-吡咯並[2,3<]也。疋幾酸胺6e-l (ΐ·〇當 -79- 200530234 量）的DMF (100 mL)溶液，即得Ic-5乳白色固體：hNMR (DMSO-ί/6)δ 12.8(bs，lH)，8.87(s，lH)，8.2(d，J=5.3Hz， 1H)重疊於 8.17(bs，lH)，7.82(bs，1Η)，7·41 (d，J=5.4Hz， 1H)，7·2 (m，2H)，7.05 (s，1H)，6.95 (d，J = 7.3 Hz，1H); 5 m/z = 304 (M + H) 〇 3-(2-三氟甲基笨硫基）-lH_吡咯並丨2,3-c〗吡啶_2-羧醯胺， Ic-6 * 如一般合成方法IVb所述，用二(2-三氟曱基二苯)二硫 ίο 化物（1.0當量）處理1H-吡咯並[2,3-c]吡啶-2-羧醯胺6〇1 (1.0當量）的DMF (100 mL)溶液，即得Ic-6乳白色固體： iHNMRpMSO-A) 69 12.9 (bs，1H)，8.9 (bs，1H)，8.19 (m， 2H)，7·79 (m，1H)，7.33-(m，2H)，7.46 (d，/ = 5·5 Hz， 1H)，7.14 (m，1H)，6·75 (dd，1·3，7·5 Hz，1H) ; m/z = 15 338 (M + H) 〇 • 3-(2-三氟甲氣基笨硫基V1H-吡咯並丨2,3-c〗吡啶-2-羧醯 胺，Ic-7 如一般合成方法IVb所述，用二(2-三氟曱氧基苯基） 2〇 二硫化物（1.0當量）處理1H-吡咯並[2,3-c]吡啶-2-羧醯胺 6c-l (1.0當量）的DMF(lOOmL)，即得Ic-7茶色固體·· 4 NMR (DMSO-i/6) δ 12·8 (bs，1H)，8.89 (s，1H)，8.2 (d，/ = 5·3 Hz，1H)重疊於 8·14 (bs，1H)，7·8 (bs，1H)，7·36 (m， 2H)，7·1 (dd，1·0，8·3 Hz，1H)，6.98 (m，2H) ; m/z = 200530234 354 (Μ + Η) 〇 3-(2-甲氧基笨硫基)_1Η-吡咯並丨2,3-c〗吡啶-2-羧醯胺，Ic-8 如一般合成方法IVb所述，用（2-曱氧基二苯)二硫化物 5 (1.0當量）處理1H-吡咯並[2,3-c]吡啶-2-羧醯胺6c-l (1.0當 量）的DMF(lOOmL)溶液，即得Ic-8乳白色固體：iHNMR (DMSOO δ 12.40 (bs，1H)，8·89 (bs，1H)，8·3·8·16 (m， lH)，7.86(s，1Η)重疊於 7.77(m，lH)，7.46(d，J=5.5Hz， • 1H)，7·14 (m，1H)，7.03_(dd，1·0，8.3 Hz，1H)，6.75 ίο (dd，/= 1.3，7.5 Hz，1H)，6.50 (dd，/= 1·5，7.8 Hz，1H)， 3·89 (s，3H) ; m/z = 300·1 (M + H) 〇 3-(吡啶-2-笨硫基)-lH-吡咯並丨2,3-c〗吡啶-2-羧醯胺，Ic-9 如一般方法IVb所述，將2,2二啦淀基二硫化物 15 (Aldrithiol 2，1.1當量）加入-1H-吡咯並[2,3_c]吡啶-2-羧醯 胺（1·〇當量）的DMF(lOOmL)溶液，即得Ic-9乳白色固體： • ^NMR (DMSO-A) δ 12.75 (bs，1H)，8.86 (s，1H)，8·35 (dd，1Η，14，4·5 Hz)，8·19 (dd，1Η，J = 1，4 Hz)， 8.1 (bs，1H)，7.85 (bs，1H)，7.54 (dd，1H，J= 1.8,7.5 Hz)， 2〇 7.42 (d，5.5 Hz，1H)，7.10 (dd，1H，4·9，7·4 Hz)， 6·74 (d，1H，8·1 Hz)，m/z = 271·1 (M + H)。 表1 3-取代_1H-吡咯並[3,2-b]吼啶-2-羧醯胺類la -81 - 200530234 ^γί/Κ2

\ Ri 化合物編號 Ri r2 r3x R4 la-1 H nh2 c6h5s H la-2 H nh2 3 - F-C6H4S H la-3 H nh2 3-Cl-C6H4S H la-4 H nh2 3-Br-C6H4S H la-5 H nh2 2-Cl-C6H4S H la-6 H nh2 4-Cl-C6H4S H la-7 H nh2 2,4-(Cl)rC6H3S H la-8 H nh2 2-F-C6H4S H la-9 H nh2 2,3-(Cl)2-C6H3S H la-10 H nh2 2-CF3-C6H4S H la-11 H nh2 3-CFrC6H4S H la-12 H nh2 2-NHrC6H4S H la-13 H nh2 2,5-(Cl)rC6H3S H la-14 H nh2 2-CH30-C6H4S H la-15 H nh2 3-CH30-C6H4S H la-16 H nh2 3-NHrC6H4S H la-17 H nh2 4-N02-C6H4S H la-18 H nh2 3-N〇2-C6H4S H -82- 200530234

la-19 H nh2 2-CH3-C6H4S H la-20 H nh2 4-CH3-C6H4S H la-21 H nh2 3,5-(CH3)2-C6H3S H la-22 H nh2 3-CHrC6H4S H la-23 H nh2 2-CH3CH2-C6H4S H la-24 H nh2 3-CF30-C6H4S H la-25 H nh2 s H la-26 H nh2 定硫 H la-27 H nh2 4-吡啶硫 H la - 28 H nh2 2_噻吩硫 H la-29 ch3 NHCH3 c6h5s H la - 30 H NHCH3 3-CF30-C6H4S H la-31 H nhch3 3-Cl-C6H4S H la-32 H NHCH3 3-F-C6H4S H la-33 H nhch3 c6h5s H la-34 ch3 nh2 c6h5s H la-35 H nh2 3-F-C6H4S 5-CH30 la-36 H nh2 3-CH30-C6H4S 5-CH3O la-37 CH3(CH2)2 nh2 c6h5s H -83- 200530234 表2 3-取代-1H-吡咯並[3,2-c]吡啶-2_羧醯胺lb

化合物編號 Ri r2 r3x R4 Ib-1 Η νη2 c6h5s H Ib-2 Η νη2 3-F-C6H4S H Ib-3 Η νη2 4-Cl-C6H4S H 表3 5 3-取代-1Η_ϋ比咯並[2,3-十比唆-2-羧醯胺Ic ^R3

化合物編號 Ri r2 r3x R4 Ic-1 H nh2 c6h5s H Ic-2 H nh2 C6H5S(0)2 H Ic-3 H nh2 3-F-C6H4S H Ic-4 H nh2 3-CH30-C6H4S H Ic-5 H nh2 3-Cl_C6H4S H Ic-6 H nh2 2-CF3-C6H4S H Ic-7 H nh2 2-CF30-C6H4S H Ic-8 H nh2 2-CH30-C6H4S H Ic-9 H nh2 2-吡啶硫 H -84- 200530234 生物學實例

目的：此試驗利用試管33Ρ-ΑΤΡ過濾試驗，測量各種化合 物對於酪蛋白激酶I7Q所引起的底物酪蛋白磷酸化的抑制 致應。用5種濃度的化合物一式兩份進行測試，以產生1〇 微摩爾濃度時的IC5〇值或抑制百分率，其資料列於表4中。 材料： 設備：

Beckman Biomek 2000 Liquid Handling Robot (液體操 作機械手系統）

Beckman Multimek 96 Automated 96 Channel Pipettor (自動96通道移液器）

Millipore Vacuum Manifold Basic Kit # MAVM0960R (真空抽吸裝置）

Titertek Multidrop Liquid Dispenser (液體分配器） Packard TopCount NXT Liquid Scintillation Counter (液 相閃爍計數器） 培養板：

Costar EIA/RIA Plate #9018 (培養板）

Falcon 96 well U bottom Polystyrene Plate #353910 (96 -85 - 200530234 孔u形底聚苯乙烯培養板）

Millipore Multiscreen 96 well Filtration Plates #MAPHNOB50 (96 孔過濾板）

Millipore Multiscreen TopCount Adapter Plates # 5 SE3M203V6 (適配器） 化學品： EGTA 購自 SIGMA #E-3889 •酪蛋白（脫磷酸化)購自SIGMA#C-4032 10 ATP 購自 SIGMA #A-7699 DTT 購自 Fisher Biotech# BP 1725 三氯乙酸購自SIGMA# T-6399 33

P-ATP lmCi/37MBq 購自 Perkin Elmer Life Sciences # NEG-602H 15 酶： 路蛋白激_： Ιε最終濃度〇.58mg/ml，由法國Aventis醫 藥公司通過發酵和純化過程製備。以上作為1〇〇 等 分試樣儲存於-8〇°C。 20 化合物： 測試用化合物以冷凍的溶於100〇/〇 DMSO的1〇 mM 化合物儲備液的形式提供。 -86 - 200530234 試驗條件： 最終试驗物總體積為每孔50 μΐ^，由以下試劑組成： 5 稀釋的化合物儲備液（10、：1、0」、0.01或0.001 μΜ)， 5 5 PL脫磷酸化酪蛋白，最終濃度〇·2叩/叫， 20 gLCKU ’最終濃度3 n_L，以及 20 μΐ^ γ-33ρ_Ατρ，最終濃度 〇 〇2 ，與冷的 ΑΤρ I 混合(最終1〇 μΜ)。 10 方法： 1· 500 mL新鮮試驗緩衝液，由以下試劑組成：5〇niMTris pH 值 7·5，1〇 mIVI MgCl2,2 mM DTT 和 1 mM EGTA。 2·被評估的化合物是10 pL溶於100% DMSO的10 mM 儲備液。使用Biomek 2000液體機械手系統，進行系 15 列稀釋以製備最終的10、1、0.1、0.01和0.001 μΜ化 馨 合物稀釋液，作為5 pL添加液加入Falcon U形底培養 板。通常，每96孔培養板測試8種化合物，第1行和 第12行則作為對照孔。一種常規的篩選試驗將包括32 種化合物，相當於4塊試驗培養板。 20 3·試驗培養板佈置圖按照以下模式CKlePlateMap.xls設 定。 -87- 200530234

CKl£過濾試驗板圖譜

〇.〇10.001uM 6 7 8 9 10 11 12 化合物5 化合物5 化飾β 化合物β 化飾 化雜 化潍8 化合物8

國——酶+酪蛋白+緩衝劑獻ΔΤΡ γ-- s 1 化合物+酪蛋白+33P-ATP

10 1 0.1 0.010.001uM

蛋白+緩衝劑+33P-ATP

4· 一旦按照說明加入5 μί化合物，即於適當的孔内加入 5 pL脫磷酸化酪蛋白（溶解於蒸餾水)(〇·2 pg^L)和20 μΐ^ CKls (3 ng/pL) 〇 5·最後，加入 20 μί γ-33Ρ-ΑΤΡ (0·02 μ(：ί/μί)/10 μΜ 冷的 ATP (均等於每孔2xl〇6 CPM)。 6·渦旋振盪含有上述50 |nL反應物的Falcon U形底試驗 培養板，然後於室溫下培養2小時。 ’·在2小時的最後階段，通過使用Beckman Multimek往 試驗培養板内加入65 μί冰冷的2 mM ATP (在試驗緩 衝液中製備）來終止反應。 8·同時’將以蒸餾水製備的25 μ!> 100%冰冷TCA加入 對應型號的Millipore ΜΑΡΗ過濾板。 9·使用一掌上型8通道移液器，將100 gL反應混合物 -88- 200530234 從Falcon U形底培養板轉移至一預先浸透TCA的 Millipore MAPH 過濾板。 10·輕輕地擾拌MilliporeMAPH過濾板，在室溫下靜置至 少30 min以沉澱蛋白質。 5 11·在30 min之後將過濾板放在Millipore真空抽吸裝置 上，在不超過8mm汞柱的條件下過濾，因為MAPH過 濾板在較高的真空條件下容易發生“氣塞”。 12·過濾板用 2 X 150 μι 20% TCA，2 X 150 pL 10% TCA 和 _ 2 X 15〇 pL 5% TCA按順序洗滌和過滤(每板共洗滌6 ίο 次/每孔 900 μί)。 13 ·讓培養板在室溫下乾燥過夜。次日，用Titertek Multidrop分配器按每孔40 μΐ^加入Packard Microscint-20閃爍液；將培養板密封並在packard TopcoimtNXT閃爍計數器上計數，每孔2min (記錄每 15 孔 CPM 值）。 • 計算： 1· $錄每分計數值(CPM)資料，並輸入一專有資料計算和 存檔資料庫(IDBS公司ActivityBase5 〇版) 20 2·每板的行1反映了在無抑制性化合物存在的情況下酶 的總磷酸化活性，因此代表了 100%。行12反映了在 無抑制性化合物和酶存在的情況下任何非特定的磷酸 化/保留放射活性。通常可見到約1%“非特定的，，總 CPM 〇 •89· 200530234 3·通過確定每板的“總的，，和“非特定的”cpm，就能對應 於每種濃度的試驗化合物底物而確定對於酶的填酸化 能力的抑制百分率。利用Activitybase計算協定 PG0027-CK1-D-BL)所包括的非線性曲線契合程式， 5 可將這一抑制百分率資料用於計算化合物的IC5〇值（即 化合物能抑制50%活性時的濃度）（研究：RESR0290)。 4·動力學研究確定了此試驗系統中ATP的Km值為21 μΜ 〇 10 £ϊΡδ抑制劑的酪蛋白激酶169鏈菌素親和素膜培卷板 試驗 目的：在鏈菌素親和素膜(SAM)生物素捕獲板上(Promega V7542)評估試驗化合物的CKIS活性 15 用品和試劑 HEPES SIGMA# H3375 MW = 238·3; β-甘油填酸酯 SIGMA ♦ # G-9891 MW = 216·0 ; EDTA 0·5Μ，pH 值 8·0 GibcoBRL ; 原釩酸鈉 ACROS # 205330500 MW = 183.9 ; DTT (DL-二 硫代丁 四醇）SIGMA # D-5545 MW = 154.2 ;氯化鎂 2〇 ACROS # 41341-5000 MW =203.3 ； ATP SIGMA # A-7699 MW = 551.1 ; γ33Ρ ATP NEN # NEG602H ;酪蛋白激酶 Ιδ SIGMA # C4455 ;路蛋白激酶1底物新英格蘭肽生物素 RRKDLHDDEEDEAMSITA MW = 2470 200530234 製備激酶緩衝液(KB，100 mL)如下： 50 mM HEPES，pH 值 8.0 5 mL 的 1M 儲備液 10 mM MgCl 10 mM β-甘油磷酸鹽 2.5 mM EDTA 500 1 mM原釩酸鈉 1 mM DTT 水

1 mL的1M儲備液 1 mL的1M儲備液 500 pL的500 mM儲備液 100 pL的1M儲備液 100 pL的1 M儲備液 92.3 mL 按如下步驟製備ATP Master Mix : 製備1 mL的1M ATP水溶液(1MATP儲備液）。 在 12 mL KB 中： 加入12 pL的1M ATP溶液，然後 加入 12 μΐ^ 的 33p ATP (1〇 pCi/ul)，NEG602H，Perkin Elmer 按如下步驟準備反應培養板並進行試驗：

L在反應培養板孔内每孔加入10 的KB ，加入或不加 入試驗化合物抑制劑。 2·每孔加入60 pL的kb。 3.每孔加入的500 μΜ肽底物。 4· 將培養板升溫至37 。 5.每孔加入1〇 μί的CK169 1:10稀釋液=0.42 pg或0.68 單位。 200530234 6· 母孔加入10 μι的ATP Master Mix以引發反應。 7· 將反應培養板置入37 °C培養箱培養10 min。 5

10 8·用1〇 gL的1M ATP終止反應。轉移20 pL至SAM培 養板並在室溫下放置 10 min 〇 9·用1〇〇 μι的2M NaCl溶液洗滌3次，然後用100 pL 的2MNaCl和1%H3P04溶液洗滌3次，然後再用100 μΐ水在一真空抽吸裝置上洗滌3次。 10·在燈下乾燥該過渡板30 min。 11 ·您封培養板底部並加入20 pL的MicroScint 20。 12·在TOPCOUNT上讀取數值。 細胞生理節律試驗步驟 細胞培養：每3-4天（匯合率約為10-20%)將鼠 -1成纖維細胞(P2C4)培養液分開並轉移至150 cm2排氣式 聚苯乙烯組織培養燒瓶(Falcon# 35-5001)内，並於37 °C和 5% C〇2條件下維持在增殖培養基[EMEM (Cellgro # 10-010-CV) ; 10% 胚胎牛血清(FBS ; Gibco# 16000-044); 以及 50 I.U./mL 青黴素一鏈黴素(Cellgro # 30_001-C1)] 中。 穩定轉染：用含有用於穩定轉染的Zeocin抗性選擇性標記 基因和mPer-1促進子驅動的螢光素酶報導基因載體，對匯 合率為30-50%的鼠-1成纖維細胞培養液進行共轉染。在 24-48小時之後，將培養液分開轉移至96孔培養板，並在 -92- 200530234 添有 50-100 gg/mL Zeocin (Invitrogen # 45_〇43〇)的增殖培 養基中維持10-14天。通過在增殖培養基中添加1〇曰〇 ^ 榮光素(Pr〇mega#E1603)，估計了 Zeocin抗性穩定轉染劑 的報導基® H並在TopCW _計數印砂㈣ 5 M°dd # C384VGG)上測試螢光素酶活性。使用50%馬血清 [HS(Gibco# 16050-122)]的血清衝擊，對表達Ze〇dn抗性 和驅動的螢光素酶活性的鼠-][克隆進行同步化，並 估計了該克隆的生理節律報導活性。鼠一成纖 維細胞克隆P2C4被選擇用於化合物測試。 10 同步化協定：將鼠-1成纖維細胞(P2C4)塗在 (40-50%匯合率）不透明96孔組織培養板(perkinElmer # 6005680)上，並維持在添有 1〇〇 pg/mLZe〇cin(lnvitrogen# 45-0430)的增殖培養基中，直至培養液達到1〇〇%匯合率 15 (48-72 h)。於37 °C和5%二氧化碳條件下，用1〇〇 pL同 步化培養基[EMEM (Cellgro # 10-010-CV) ; 100 I.U./mL 青 _ 黴素一鏈黴素(Cellgro # 30-001-C1) ; 50% HS (Gibco # 16050-122)]進行培養液同步化，爲時2小時。在同步化 之後，用 100 pL EMEM (Cellgro # 10-010-CV)在室溫下淋 20 洗培養液10 min。在淋洗以後，將培養基更換為300 pL不 依賴於 C02 的培養基[C02.I (Gibco # 18045-088) ; 2mM L 穀酸胺(Cellgro # 25-005-C1); 100 I.U./mL 青黴素一鏈黴素 (Cellgro # 30-001-C1) ; 100 μΜ 螢光素（Promega # E1603)]。將欲測試生理節律效應的化合物加入0.3% -93- 200530234 DMSO(最終濃度）中的不依賴於c〇2的培養基。立即用 TopSeal_A薄膜(packard#6〇〇5185)密封培養基，並轉移進 行螢光素酶活性測量。 自動化生理節律報導基因測量：在同步化之後，將試驗培 養板置於一組織培養箱（F〇rma Scientific Model #3914)内維 持在37 °C。通過在T〇pC〇unt閃爍計數器（Packard Model #C384V00)上測量相對光輸出量而估計活體内螢光素酶活 F生。使用〇RCA機械手系統（Beckman Instruments)和 SAMKNT 自動定時軟體（3.3 版；SAGIAN/Beckman Instruments)，將培養板從培養箱轉移至讀數器。 資料分析：使用 Microsoft Excel 和 XLfit (2.0.9 版；IDBS) ，行資料登錄、運用和繪圖。通過測定數天内相對光輸出 里極小值之間的間隔或通過傅立葉變換進行週期分析。兩 種方法·在一系列生理節律週期内產生了幾乎相同的估計週 期。效能被記錄為EC37t+lh，它是導致1小時延長期的有效 微摩爾濃度。通過在XLfit中以週期改變(γ轴)相對於試驗 1 匕合物濃度(X軸)所表示的雙曲線與資料的擬合進行了資 料分析，ECw,則以内插法從此曲線求出。 -94- 200530234 表4 生物學資料

化合物編號 酪蛋白激酶Ιε33Ρ-ΑΤΡ過濾板試驗 IC5〇 (nM) 細胞試驗 EC3785ih (μΜ) la-1 36* 0.27 la-2 74* 0.51 la-3 26* 0.31 la-4 25* 0.12 la-5 6531* 1.13 la-6 491* 13.8 la-7 >104 la-8 531 0.75 Ia_9 >104 la-10 2889 2.94 la-11 709 la-12 36* 0.44 la-13 〉104 la-14 669 la-15 109* 1.1 la-16 424* la-17 9788 la-18 186* >10 la-19 140 la-20 261 >10 la-21 6876 la-22 73* >10 la-23 6482 la-24 219 -95- 200530234

la-25 1553 2.26 la-26 190 la-27 2978 la-28 53* la-29 >104 la-30 〉104 la-31 >104 la-32 〉104 la-33 >104 la-34 339* la-35 896* la-36 86 la-37 123 Ib-1 1127* Ib-2 466 Ib-3 7957 Ic-1 388* Ic-2 >l〇4* Ic-3 1844 Ic-4 397 Ic-5 375 Ic-6 759 Ic-7 1286 Ic-8 442 Ic-9 291 *表示平均2次或2次以上測定的平均值。 -96-

Claims (1)

1. 200530234 十、申請專利範圍： h 一種結構式為（I)的化合物 X r3

   其中：

   10

   15 Rl是Η或CK6鏈烷基； R2 是 NR5R6 ; R3是芳基或雜環； 4疋H CU6鏈燒基，（^2-6鏈烯基，02-6鏈块基，c 院氧基，CF3，函素，SH，S-Cw鏈烷基，N U6 顺2或取爪； 2， R5是Η或Cw鏈烷基； 是Η或cU6鏈烷基； X 是 S 或 S(〇)n ; K，L或Μ之一是N，而K、L或Μ中的另兩個原子 分別是C，其中R4只與Κ、L、]y[或是苯環上另 一個C原子結合； m是卜2或3 ;以及 n 是1或2 ;或 一種藥學上可接受的鹽或其立體異構體。 2·如專利申請範圍第1項所述之化合物，其中l是N， K和Μ分別是c。 、 -97- 20 200530234 3. 如專利申請範圍第2項所述之化合物，其中R4，R4， R5和R6分別是η，R3是芳基。 4. 如專利申請範圍第3項所述之化合物是選自包括下列 之化合物： 5

   10 15

   3 -苯硫基-1 洛並[3，2-c] ^比唆-2_竣隨胺’ 3-(3 -氣-苯硫基洛並[3,2_ο]πΐ^σ定_2_竣酿胺和 3_(4-氣-苯硫基-111_°比洛並[3,2-〇]11比12定-2-竣酸胺。 5. 如專利申請範圍第1項所述之化合物，其中Μ是Ν， Κ和L分別是C。 6. 如專利申請範圍第5項所述之化合物，其中Ri，R4， R5和R6分別是Η，R3是芳基或雜環。 7. 如專利申請範圍第6項所述之化合物是選自包括下列 之化合物： 3-本硫基-1 Η-ϋ比略^並[2,3_c]σ比σ定-2-竣酿胺’ 3-(3-氣苯硫基洛並[2,3-c]u比咬-2-竣酿胺’ 3-(3-曱氧基-苯硫基)-1Η-σ比咯並[2,3-c]17比咬-2-叛酿胺’ 3-(3 -氮-苯硫基)-1 H-Utb咯並[2,3-c]吼σ定-2-竣酿胺’ 3-(2-二氣甲基-苯硫基）-111-11比嘻並[2,3-〇]1[1比咬-2-叛酿 胺， 3-(2-三氟曱氧基-苯硫基)-1Η-吡咯並[2,3-c]吡啶-2-羧 醯胺， 3-(2-曱氧基-本石泉基）-1Η-11比並[2,3-c]ϋ比咬-2-竣酿 胺，以及 3-(吡啶-2-苯硫基)-1Η-吡咯並[2,3-c]吡啶-2_羧醯胺。 -98- 20 200530234 8. 如專利申請範圍第1項所述之化合物，其中K是N， L和Μ分別是C。 9. 如專利申請範圍第8項所述之化合物，其中心是Cm 鏈烷基，R5是Η，116是Η或Q_6鏈烷基，R3是芳基。 5 1(λ如專利申請範圍第9項所述之化合物，其選自包括下 列之化合物： 1-甲基-3-苯硫基-1 並[3，2-b]ϋ比。定_2_竣酿甲胺’ 1-甲基-3-本硫基-111-1[7比略並》[3,2-1)]1[7比11定-2_竣酿>胺’以 • 及 ίο 3 -本硫基_ 1 -丙基_ 1 H-^tb咯並[3，2-b]ϋ比ϋ定-2-竣^酿胺。 11. 如專利申請範圍第8項所述之化合物，其中&，R4和 R5分別是Η，R3是芳基，R6是CV6鏈烷基。 12. 如專利申請範圍第11項所述之化合物，其選自包括下 列之化合物： is 3-(3-三氟曱氧基苯硫基-1H-吡咯並[3,2-b]吡啶-2-羧醯 曱胺， 3-(3-氣苯硫基-1H-17比洛並[3，2-1)]0比0定-2-竣酿甲胺’ 3-(3 -氣苯硫基-1Η-σ比咯並[3,2-b]a比咬-2-竣酿曱胺’以 及 2〇 3-本硫基-1H-11比並[3，2-b]ϋ比σ定·2-繞酿甲胺。 13. 如專利申請範圍第8項所述之化合物，其中R!，R4， R5和R6分別是Η，R3是雜環。 14. 如專利申請範圍第13項所述之化合物，其選自包括下 列之化合物： -99- 200530234 3 -(啥琳-8-基硫基)-1 Η-ϋ比咯並[3，2-b]。比σ定-2-竣隨胺’ 3 - (^比ϋ定-2-石荒-1 比[3，2-b]外匕σ定-2-竣酉篮胺’ 3_(11比^定-4-基硫基)-111-11比咯並[3,2-1)]11比0定-2-竣酿胺’以 及 5 3 - (σ塞吩-2-硫基)-1 Η-σ比格^並[3，2-b]外匕^定-2-竣酿胺。 15. 如專利申請範圍第8項所述之化合物，其中，R5和 R6分別是Η，R3是芳基。 16. 如專利申請範圍第15項所述之化合物，其選自包括下 ® 列之化合物： ίο 3 -本疏基-1 Η-ϋ比亚[3，2-b]。比口定-2-讀_酿胺， 3-(3-氟苯硫基)-lH-吡咯並[3,2-b]吡啶-2-羧醯胺， 3-(3 -氮苯硫基)-lH_utb洛並[3，2-b] 0比咬-2-竣酿胺’ 3-(3->臭本硫^基)-111-10比並[SJ-bptbu定-2-竣酿胺， 3-(2-氣苯硫基)-1H-吡咯並[3,2-b]吡啶-2-羧醯胺， 15 3_(4-氣苯碗„基)-111-1[|比咯並[3,2-1)]11比咬-2-竣酿胺’ 3-(2,4_二氣苯硫基)-111-11比洛並[3,2-1)]17比11定-2_竣酿胺’ • 3-(2-氟苯硫基)-1Η-吡咯並[3,2-b]吡啶-2_羧醯胺， 3-(2,3-二氯苯硫基)_1H-吡咯並[3,2-b]吡啶-2-羧醯胺， 3-(2-三氟曱基苯硫基）-1H-吡咯並[3，2-b]吡啶-2-羧醯 20 胺， 3-(3-三氟甲基苯硫基）-1H-吡咯並[3，2-b]吡啶-2_羧醯 胺， 3-(2·氨基苯硫基)-1Η-吡咯並[3,2-b]吡啶-2-羧醯胺， 3-(2,5-二氣苯硫基)-111-1：1比咯並[3,2-11)]0比咬-2-竣酿胺’ -100- 200530234 3-(2-曱氧基苯硫基)-1Η-吡咯並[3,2-b]吡啶-2-羧醯胺， 3-(3-曱氧基苯硫基)-1Η-吡咯並[3,2-b]吡啶-2-羧醯胺， 3-(3-氨基苯硫基)-1Η-吡咯並[3,2-b]吡啶-2-羧醯胺， 3 - (4-硝基本石荒基)-1 Η-ϋ比並[3，2-b] ^比咬-2-竣酿胺’ 3-(3-硝基苯硫基)-1Η-吡咯並[3,2_b]吡啶-2-羧醯胺， 3_鄰甲苯基硫基-1Η-σ比略並[3,2-b]n比咬-2-竣酿胺’ 3-對曱苯基硫基-1H-吡咯並[3,2-b]吡啶-2-羧醯胺，

   3-(3，5-二曱基苯硫基）-1H-吡咯並[3，2-b]吡啶-2-羧醯 胺， 3-間曱苯基硫基-1H-11比洛並[3,2-b]°比σ定-2_竣酿胺’ 3-(2-乙基苯硫基）-1Η_ϋ比略並[3，2-b] °比咬-2 -竣酿胺’ 3-(3-三氟曱氧基苯硫基）-m-吡咯並[3,2-b]吡啶-2-羧 酿胺， 3-(3 -亂苯石荒基)-5_曱氧基-1H-σ比洛並[3，2-b]σ比咬-2-竣 醯胺，以及 3-(3-曱氧基苯硫基)-5-曱氧基1Η-吡咯並[3,2-b]吡啶-2- 羧醯胺。 17. —種醫藥組合物，含有一種藥用載體和一種結構式為 (I)的療效量化合物，或其藥學上可接受的鹽或立體異 構體，

   (I) -101 - 200530234 其中z 心是Η或Ci_6鏈烷基； R2 是 NR5R6 ; R3是芳基或雜環； 5

   10 15

   R4是η、Cw鏈烷基、C2-6鏈烯基、C2-6鏈炔基、Cw 烷氧基、CF3、鹵素、SH、S-Ck鏈烷基、N〇2、 NH2 或 NR5R6 ; R5是Η或CV6鏈烷基； R6是Η或Cm鏈烷基； X 是 S 或 s(o)n; K，L或Μ之一是N，而K、L或Μ中的另兩個原子 分別是C，其中R4只與K、L、Μ或是苯環上另 一個C原子結合； m 是1、2或3 ;以及 η 是1或2。 18. —種抑制患者體内酿蛋白激酶Ιε活性的方法，包括給 前述患者施用結構式為(I)的療效量化合物，或其藥學 上可接受的鹽或立體異構體，

   其中： 心是Η或Cu鏈烷基； -102- 20 200530234 R2 是 NR5R6 ; R3是芳基或雜環； R4是η、CV6鏈烷基、C2-6-鏈烯基、C2-6鏈炔基、 Cw烷氧基、CF3、鹵素、SH、S-Cw鏈烷基、N02、 NH2 或 NR5R6 ; R5是Η或Cu鏈烷基； R6是Η或C^6鏈烷基； X 是 s 或 s(o)n;

   10 15

   K，L或Μ之一是N，而K、L或Μ中的另兩個原子 分別是C，其中R4只與Κ、L、Μ或是苯環上另 一個C原子結合； m 是1，2或3 ;以及 η 是1或2。 19. 一種治療患有疾病或異常但通過抑制路蛋白激酶Ιε 其病情得到改善的患者的方法，包括給前述患者施用 結構式為(I)的療效量化合物，或其藥學上可接受的鹽 或立體異構體，

   其中： 心是Η或CV6鏈烷基； R2 是NR5R6; -103- 20 200530234 r3是芳基或雜環； R4是Η、CU6鏈烷基、C2-6-鏈烯基、C2-6鏈炔基、 Cw烷氧基、CF3、鹵素、SH、S-CU6鏈烷基、N02、 NH2 或 NR5R6 ; 5 R5是Η或Cm鏈烷基； R6是11或<^6鏈烷基； X 是 S 或 s(o)n; K，L或Μ之一是N，而K、L或Μ中的另兩個原子 •分別是C，其中R4只與Κ、L、Μ或是苯環上另 ίο 一個C原子結合； m 是1，2或3 ;以及 η 是1或2。 20.如專利申請範圍第19項所述之方法，其中所述疾病或 異常是情緒障礙或睡眠障礙。 15 21.如專利申請範圍第20項所述之方法，其中所述異常是 情緒障礙。 • 22·如專利申請範圍第21項所述之方法，其中所述情緒障 礙屬於憂鬱症或躁鬱症。 23. 如專利申請範圍第22項所述之方法，其中所述憂鬱症 20 是嚴重憂鬱症。 24. 如專利申請範圍第22項所述之方法，其中所述躁鬱症 屬於一型躁鬱症和二型躁鬱症。 25·如專利申請範圍第20項所述之方法，其中所述異常是 睡眠障礙。 -104- 200530234 26. 27. 5 28.

   15 如專利申請範圍第25項所述之方法，其中所述睡眠障 礙是一種生理節律性睡眠障礙。 如專利申請範圍第26項所述之方法，其中所述生理節 律性睡眠障礙包括輪班工作引起的睡眠障礙、飛行時 差反應綜合症、睡眠時相前移綜合症和睡眠時相後移 綜合症。 一種製備結構式為（I)的化合物的方法

   其中： I 是Η ; R2 是 ΝΗ2 ; R3是芳基或雜環； R4是Η、Ci-6鍵烧基、C2-6鍵細基、C2-6鍵快基、 Cm烷氧基、CF3、鹵素、SH、S-C^鏈烷基、N02、 NH2 或 NR5R6 ; R5是Η或Cm鏈烷基； R6是Η或匕6鏈烷基； X 是S ; K，L或Μ之一是N，而K、L或Μ中的另兩個原子 分別是C，其中R4只與Κ、L、Μ或是苯環上另 一個C原子結合；以及 -105- 200530234 m 是1，2或3 ; 5

   10 15

   其步驟包括在一種適當溶劑中用一種適當的驗驗處理 一種丙二酸二酯，加入未取代的或取代的2-氯-3-頌基 口比咬、3-氣-4-硝基11比0定或4-氣-3-頌基17比11定’加熱該反 應混合物直至反應完全，用一種無機酸處理該反應混 合物，以及加熱該反應混合物直至脫羧反應完全，以 製備一種未取代的或取代的2-曱基-3-硝基吡啶、3-甲 基-4-硝基^比17定或4-甲基-3-硝基^比^定。 29. 如專利申請範圍第28項所述之方法，其中丙二酸二酯 是丙二酸二乙g旨，驗是叔丁醇納，溶劑是N-曱基-2-吡咯烷酮，無機酸是硫酸。 30. 如專利申請範圍第29項所述之方法，其中製備了 2-曱基-3-石肖基。比11定。 31. 如專利申請範圍第28項所述之方法，其進一步包括以 下步驟：將未取代的或取代的2-甲基-3-硝基吡啶、3-曱基-4-石肖基ϋ比ϋ定或4-甲基-3-石肖基0比咬加入由種適 當溶劑、一種適當的鹼以及乙二酸二酯組成的混合 物，以製備未取代的或取代的2-羥基-3-(3-硝基吡啶 -2) -丙稀酸S旨、2-經基-3-(4-頌基ϋ比ϋ定-3-基）丙細酸S旨或 2-經基-3_(3-補基^比σ定-4-基）丙細酸S旨’或其對應的互 變異構酮。 32. 如專利申請範圍第31項所述之方法，其中乙二酸二酯 是乙二酸二乙S旨，溶劑的是四氫吱喃，驗是乙醇納。 33. 如專利申請範圍第32項所述之方法，其中製備了 2- -106- 20 9 200530234 羥基-3-(3-硝基吡啶-2)-丙烯酸酯乙酯。 5

   10 15

   34. 如專利申請範圍第28項所述之方法，其進一步包括以 下步驟：在一種含有適當催化劑的適當溶劑中，還原 未取代的或取代的2-羥基-3-(3-硝基吼啶-2)-丙烯酸 酯、2-羥基-3-(4-硝基吡啶-3-基）丙烯酸酯或2-羥基 •3-(3-硝基11比咬-4-基）丙細酸醋，以製備未取代的或取 代的1H-吡咯並[3,2-b]吡啶-2-羧酸酯、1H-吡咯並[3,2-c] 吡啶-2-羧酸酯或1H-吡咯並[2,3-c]吡啶-2-羧酸酯。 35. 如專利申請範圍第34項所述之方法，其中溶劑是無水 乙醇，催化劑是把碳催化劑。 36. 如專利申請範圍第35項所述之方法，其中製備了 1H-吡咯並[3,2-b]吡啶-2-羧酸乙酯。 37. 如專利申請範圍第28項所述之方法，其進一步包括以 下步驟：在一種適當溶劑的氨溶液中加入未取代的或 取代的1Η·σ比咯並[3,2-b]11比咬-2-叛酸酯、1Η_σ比嘻並 [3,2-c]吡啶-2-羧酸酯或1Η-吡咯並[2,3-c]吡啶-2-羧酸 酯，以製備未取代的或取代的1H-吡咯並[3,2-b]吡啶 -2-羧醯胺、1H-吡咯並[3,2-c]吡啶-2-羧醯胺或1H-吡咯 並[2,3-c]wba定-2-叛醯胺。 38. 如專利申請範圍第37項所述之方法，其中溶劑是曱 醇。 39. 如專利申請範圍第38項所述之方法，其中製備了 1H-吼咯並[3,2-b]吡啶-2-羧醯胺。 如專利申請範圍第28項所述之方法，其進一步包括以 -107- 40. 20 200530234 下步驟：將未取代的或取代的1H_吡咯並[3,2-b]吡啶 -2-羧醯胺、1H-吡咯並[3,2〇吡啶i羧醯胺或-1H-吡咯 並[2,3-c]吡啶-2-羧醯胺，一種過量的適當的鹼、和一 種二芳基二硫化物或一種雙雜環二硫化物加入一種適 當溶劑中並加熱，即得結構式為（I)且其中Ri是氫之化 合物。

   15 41· ^專利申請範圍第40項所述之方法，其中該過量的鹼 疋約2·〇當量至約2.5當量，驗是碳酸鉋，並且二芳基 二硫化物是二苯二硫化物或二(3_氟苯基)二硫化物。 2·如專利申睛範圍第41項所述之方法，其中製備了 3_ 苯硫基-1Η』比咯並[3,2-b]啦啶-2-羧醯胺。 43·如專利申請範圍第41項所述之方法，其中製備了 3_(3一 氟苯硫基)吡咯並[3,2-b]吼啶-2-綾醯胺。 44· 一種結構式為⑴的化合物，

   通過包括以下步驟的製程製備： a· 在一種適當溶劑中用一種適當的鹼處理一種丙二 酸一 S旨’加入未取代的或取代的2_氮_3-石肖基吼 咬、3-氯冰確基α比唆或4-氯冬硝基u比咬，加熱該 反應混合物直至反應完全，用一種無機酸處理該 反應混合物，以及加熱該反應混合物直至脫羧反 -108- 200530234 Λ b· 10 c. 15 d. 20 應完全’以製備-種未取代的或取代的2_甲基-3_ 硝基吼啶、3-甲基-4-硝基D比啶或4_甲基_3•硝基吼 口定。 將未取代的或取代的2-甲基硝基吡啶、3_甲基 4-硝基咕定或4-甲基-3-硝基n比咬力口入由一種適 當溶劑…種適當的驗以及乙二酸二g旨組成的混 合物’以製備未取代的或取代的2_經基_3_(3_頌基 ^定-2)-丙歸酸黯、2_經基_3·(4_硝基錢·3_基)丙 烯酸醋或2令基_3_(3·石肖基喊·4·基）丙烯酸醋， 或其對應的互變異構酮。 f種s有適當催化劑的適當溶劑中，還原未取 =的或取代的2_羥基_3你确基吡啶_2)_丙婦酸 A _工土 （釦硝基吡啶I基）丙烯酸酯或2-羥 的或基ϋ比啶基）丙烯酸酯，以製備未取代 吡的比咯並[3,2七]吡啶1羧酸酯、1Η- 她旨或心叫並[2,3-c] 的劑的氨溶液中加入未取代的或取代 並[^阶比咬^-羧酸醋^-^各並 _酉旨二制幾酸喊1H“比洛並[2,3-小比咬-2-[3,2-b]吡—衣備未取代的或取代的％吡咯並 羧醯胺或tp2、羧醯胺、1Η·吡咯並[3,2-C]吡啶_2_ 將未取代的咯並[2,3-C]吡啶-2-羧醯胺。 、或取代的1H “比咯並[3,2-b]吼啶-2-羧 -109- 200530234 醯胺、1H-吡咯並[3,2-c]吡啶-2-羧醯胺或-1H-吼咯 並[2,3-c]吡啶-2-羧醯胺，一種過量的適當的鹼、 和一種二芳基二硫化物或一種雙雜環二硫化物加 入一種適當溶劑中並加熱，即得結構式為（I)之化 合物，其中 Ri 是 Η ; R2 是 ΝΗ2 ; R3是芳基或雜環；

   10 R4 是11、(^6鏈烷基、€2-6鏈烯基、0：2-6鏈炔基、 烷氧基、CF3、鹵素、311、3-0：1-6鏈烷基、 no2、NH2 或 NR5R6 ; R5是Η或Cm鏈烷基； R6 是Η或Cu鏈烷基； X 是 s 或 s(o)n; 15

   K、L或Μ之一是N，而K、L或Μ中的另兩個 原子分別是C，其中R4只與K、L、Μ或是 苯環上另一個C原子結合； m 是1、2或3。 •110- 200530234 七、指定代表圖： (一） 本案指定代表圖為··第（）圖。矣 (二） 本代表圖之元件符號簡單說明： 無

   八、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式： 無