TW200529869A

TW200529869A - Delivery system for drug and cell therapy

Info

Publication number: TW200529869A
Application number: TW093105776A
Authority: TW
Inventors: Vladimir Sabetsky
Original assignee: Technology Dev Company Ltd
Priority date: 2003-03-04
Filing date: 2004-03-04
Publication date: 2005-09-16
Also published as: EA200501422A1; KR20060014027A; AU2004216909A1; ECSP056076A; US20100167985A1; JP2006519840A; US20040234616A1; AU2004216911A1; US20110097385A1; NO20054533D0; ECSP056077A; CA2518148A1; JP2006519252A; EP1454630B1; JP2006519253A; NO20054539L; MXPA05009493A; WO2004078196A1; BRPI0408097A; AR046485A1

Description

200529869 玖、發明說明：本申請案係請求下列美國臨時申請案之利益，其序號為 2003年3月4日提出申請之60/451歎聰年$月$日提出" 之_67,601 ;施年5月9日提出令請之__7 ;及細年8 月15日提出中請之6_5，G97，其揭示内容係以全文併於本文供參考。 ' 【發明所屬之技術領域】肽及核酸之微粒子基質物質。【先前技術】一般而言，本發明係騎直接供系統與局部輸送治療劑於身體組織内或其上，及供組織工程用之生物物質發展。特定言之，本發明係針對生物可相容植入物之製造，其包含細胞、生物活性物質或其組合，及針對用於輸送蛋^質: ，，生物物質詞已被替代地用以描述衍生自生物來源之物質，或描述用於人體療法之物質。本發明係關於後者。”生物可相容”一詞係於本文中用Μ意謂獨自或併用治療劑（包括活細胞）之物質不會產生外物反應或纖維變性。葡聚醣為藉由一些微生物或藉由生物化學方法合成之高分子量多it。具平均分子量為約75伽之葡聚醣，具有類似血漿之膠體滲透壓，因此其水溶液係於臨床上被使用作為血水擴張％丨】。主珠粒形式之交聯葡聚醣係為被使用於蛋白質 GPC之”交聯葡聚糖（sephadex®)”，及由Pharmacia為達成微載體細胞培養物之特殊要求條件所發展之”Cyt〇dex®，，之基礎。例如，美國專利案號6,395,302與6,303，148 (Hennink等人）係揭示連 91760 200529869 接各種生物物質至交聯葡聚醣粒子。但是，以交聯葡聚醣為基礎之珠粒一般不能用於植入物製造，原因是其潛在毒性，此係由於應用交聯劑所致（Blain J.F.，Maghni K.，Pelletier S.及 Sirois P.Inflamm· Res· 48 (1999): 386-392)。美國專利4,713，249 (Schroder)係描述一種製造生物活性物質用之積貯基質之方法。根據此項專利，所主張之積貯基質係包含碳水化合物微粒子，藉由結晶化作用被安定化，其意謂使用非共價鍵。下述用於製造所主張結晶碳水化合物微粒子之方法，係由Schroder描述。聚合體碳水化合物與生物學上活性物質之溶液係在一或多種親水性溶劑中形成。然後’使碳水化合物與生物活性物質之混合物在液體疏水性媒質中乳化，以形成球形液滴。接著，將乳化液引進包含丙酮、乙醇或甲醇之結晶用媒質中，以形成具有以非共價方式交聯之結晶性聚合體碳水化合物基質之球體，該基質係摻有0.001-50重量％之生物學上活性物質。因此，生物活性物質係在使球體結晶之前被提供至溶液中。SehrGder並未描述藉由多步驟方法製成之微粒子之微結構。編如之多步驟方法很複雜，並使用有機溶劑，其對細胞可能有毒，且必須欲移除。【發明内容】 1在哺乳動物中降低血糖之方法，其包括對該哺乳動以經口万式或藉由注射或吸入投予治療上有效量y士曰聚醋微粒子與胰島素，以降低該哺乳動物 ::：物可為單相或結構化多相組合物，以供騰島素输治 91760 200529869 劑之受控釋出。【實施方式】較佳具體實施例之詳述 A·微粒子形成本案發明人已於實驗上發現具有平均直徑範圍從0.5至3 5 微米之結晶葡聚_微粒子，係在溫度範圍2〇_9〇°c下，自發性地在具有分子量範圍從1·〇至200·0 kDa之葡聚醣（40 - 65% W/W) 之濃水溶液中形成。若期望在室溫下形成微粒子，則可使用2至18 kDa葡聚醣溶液。當然，若需要，則微粒子亦可在南於室溫之溫度下形成2至18 kDa溶液。微粒子可自發性地製自較高分子量葡聚醣溶液，譬如2〇至75 kDa溶液，在高於室溫之較高溫度下，譬如約40至約70°C。微粒子可具有任何適當形狀’譬如規則或不規則形狀，但較佳為球形，且較佳為10微米直徑或較低，譬如0.5至5微米。透射式電子顯微鏡術顯現出結晶葡聚醣微粒子之微孔性結構（參閱圖2A、2B)。微粒子孔隙度較佳為至少1〇體積百分比’譬如約10至約50百分比，更佳為約2〇至約4〇百分比。因此’此結構包含具有巨孔性區域位於粒子間之微孔性微粒子。結晶葡聚醣微粒子之含水懸浮液之喷霧乾燥，已証實製造具有直徑範圍從10.0至150.0微米之結晶葡聚醣微粒子之實質上球形聚集體之可能性（參閱圖3)。形成葡聚醣微粒子方法之非限制性實例，係如下述。將得自AmershamBi〇sciences之5〇.〇克葡聚醣T4〇 (4〇 kDa分子量）添加 91760 200529869 至500 *升貫驗罜燒杯中之5〇〇克無菌蒸餾水内，以在層流下獲得5Ww/w溶液。將混合物在㈣（水浴）下，於磁擾掉器上，在5〇rpm下攪拌，直到葡聚醣完全溶解並獲得透明溶液為止。溶液可被抽真空，以移除所有夾雜空氣。將此透明溶液置於6(TC下之實驗室烘箱中，於Tyvek<g^f蓋下。35小時後，由於形成結晶葡聚醣微粒予之結果，故發展出混濁黏稠懸浮液。為排除未結晶之葡聚醣，故將微粒子藉由離心分離，例如 3,〇〇〇克，30分鐘’以3x250毫升蒸館無菌水洗滌，或藉由微粒子之經稀釋懸浮液之過濾，例如一份微粒子與10份水 (3x250毫升蒸館無菌水，經過滅菌滤器）。離心/洗條係在層流下進行。將微粒子置於500毫升實驗室燒杯中，於Tyve]^ 中目盍下，並在60 C實驗室烘箱中乾燥8小時，以達到約5%之夂饬δ里。所形成之乾粉包含具有平均直徑為約2微米之粒子。 B•以結晶葡聚醣微粒子為基礎之植入物結晶葡聚醣微粒子及其聚集體之濃縮懸浮液，係在使用老鼠 < 貫驗中被嘗試作為植入物，以測試其在注入動物體中後之生物相容性。圖4與5顯示在實驗動物（老鼠）中，於皮下（圖句與肌内（圖 5)注射後，在組織中之植入物。於18〇天期間，在動物組織中未檢出發炎反應。圖6A、6B及6C顯示個別在注射後i、4及28天，於老鼠肌肉組織中之植入物。圖7A與7B顯示在注射後18〇天，於老鼠 91760 200529869 肌肉組織中之植入物。圖8A、8B及8C顯示個別在皮下注射後第4、第11及第28天時之植入物。圖8D與8E顯示皮下注射後180天之植入物。圖 8F與8G顯示皮下注射後一年之植入物。如圖8G中所示，正常組織而非傷疤組織在植入物位置形成。巨分子自植入物之緩慢釋出，已被註實於實驗中，其中係在〉王射前使巨分子溶於結晶葡聚醣微粒子或其聚集體之含水懸浮液中。圖9與10顯示含有螢光標識巨分子（FITC_葡聚醣，MW5〇〇k〇a) 足植入物，且在肌間注射後第14天，巨分子自植入物緩慢釋出，進入老鼠肌肉組織中（圖9)，及在質粒〇]^八自植入物釋出之後，報告子基因在老鼠肌肉組織中之表現（圖1〇)。因此，結晶葡聚醣微粒子可用於定時釋出標識物，譬如螢光標識物，單獨或併用治療劑。 C·以兩相系統為基礎之植入物以結晶葡聚醣微粒子及其聚集體為基礎之植入物之自組結構，可以兩相系統為基礎形成。膠態系統，譬如油之液滴、微脂粒、微與毫微粒子，可被分散於結晶葡聚醣微粒子之懸浮液中，並注射至哺乳動物體中，以在投藥後形成釋出治療劑之植入物。例如，在油之情況中，可形成植入物結構之特殊種類，其中油核心係被殼層園繞，殼層係由被分散於水或有機聚合體譬如多醣（例如葡聚醣）之水溶液中之結晶葡聚醣微粒子或其聚集體所組成。所述之結構可被稱為膠囊。應注意的 91760 -10- 200529869 疋此敗層可包含大致上球形之殼層，其係在膠囊被組織圍繞時造成。但是，當膠囊位於接近障壁譬如基質、骨頭或腸壁時，該膠囊可包含核心，位於一個側面上之一或多個微粒子壁，與另一個側面上之障壁之間。再者，雖然使用油作為說明例，但該核心可包含其他物質，馨如其他聚合體、細胞等。為形成此膠囊結構，故應用兩相含水系統。當不同聚合體之水溶液被混合高於某些濃度時，其經常形成不可溶混液體兩相溶液。各液相經常包含大於90%水，且可被緩衝並製成等滲性。若將細胞或粒子懸浮液添加至此種系統中，則經常發現細胞或粒子已不相等地分配於液相之間。此優先分配行為可作為不同細胞群集或粒子之分離程序之基礎使用，因為在此等系統中之分配係直接決定於細胞或粒子表面性質。未具有相同表面性質之細胞或粒子，顯示足夠不同之分配行為。兩種聚合體相之競爭吸附係依聚合體之化學性質而定。兩相聚合體方法已被應用於分離或分配細胞、蛋白質、核酸及礦物％ (於含水兩相系統中之分配作用，，，1985, H. Wai时， D· Brooks及D· Fisher編著，大學出版社出版）。關於結晶葡聚醣微粒子分佈在衍生自例如葡聚醣/聚乙二醇（PEG)混合物之相系統中之實驗，發現葡聚醣微粒子較喜歡在葡聚醣相中，而另一個PEG相可被分散於此葡聚醣相中以开y成W/W乳化液，而反之在pEG相體積大於葡聚醣相體積之情況中亦然，如圖11與丨2中所示。 91760 200529869 圖11為I>EG水溶液在含有結晶葡聚醣微粒子之葡聚醣水溶液中之乳化液照片。在圖11之結構中，pEG相之體積係小於葡聚醣相之體積。葡聚醣相含有葡聚醣與結晶葡聚醣微粒子。因此，PEG相係形成於一或多個球體形核心中，被葡聚膽/葡聚醣微粒子殼層圍繞（意即一種封閉之孔隙結構）。圖12為含有結晶葡聚_微粒子之葡聚醣水溶液，在押〇水溶液中之乳化液照片，其中PEG相之體積係大於葡聚醣相之體積。於此情況中，葡聚醣相係形成於一或多個球體形核心中，含有被PEG相圍繞之葡聚醣微粒子（意即開孔結構，其係在PEG消散於組織液體中時，於活體内形成）。正如可在圖12中所見及者，較小體積（液滴）葡聚醣相係形成於大球形葡聚醣/葡聚醣微粒子核心中（圖12之底部右邊），包含葡聚醣/葡聚醣微粒子之較小球體係接合至其上，並與其融合0 因此，當第一相（譬如PEG相及其夾雜物，譬如治療劑）之體積對第二相（譬如葡聚醣相及其夾雜物，譬如葡聚醣微粒子）之體積之比例小於一時，則膠囊係經由被第二相殼層所圍繞之第一相核心自組而形成。若該組合物含有治療劑，譬如胰島素，其較喜歡分配至PEG相中，與葡聚醣微粒子，其較喜歡分配至葡聚醣相中，則治療劑係選擇性地分配至 PEG核心中，而微粒子係選擇性地分配並藉由自組而形成環繞PEG核心之殼層。乳化液可經由混合已個別製成之葡聚醣與pEG相而製成，且兩者可為個別較喜歡在PEG相中或在葡聚醣相中之不同類 91760 -12- 200529869 ^子八之懸浮液。其原理是分子（譬如巨分子、dna、質 t ’刀子聚集體(譬如微粒子、細胞、微脂粒、蛋白皙等: 分配至不同聚人赌如& 、 /、寺）口 ^ 。依其表面結構及粒子在聚合體溶干 < 界面能而定。 /災化醣U权子乏含水兩相系統注射至實驗組織中，發顼形士、a ^ ^ ；— 形成具有如圖13與丨4中所示膠囊結構之植入葡水醣相之體積係大於兩相系統中之PEG相體積。圖13 與14均顯示具有PEG核心與葡聚醣/葡聚醣微粒子殼層之勝囊係於活體内藉自組形成（意即在注人哺乳動物組織中之後) 此敗層包含巨多孔區域在相鄰微粒子之間，以及微孔性區域在微粒子本身之中。自兩相系統形成膠囊結構之方法之非限制性實例，係如下述。使10克葡聚醣T40(40kDa分子量）與2克PEG溶於其中添加25克結晶葡聚醣微粒子而含有⑺⑻叨之犯毫升比印μ⑧）胰島素溶液中。此等步驟係在層流條件下進行。將混合物於磁攪拌器上，在1〇〇 rpm及室溫下攪拌3〇分鐘，以形成均勻混合物（意即懸浮液）。1_〇克此懸浮液含有8U][胰島素。應注意的是，葡聚醣微粒子可製自與在兩相系統中所提供之葡聚醣溶液不同分子量之葡聚醣溶液。因此，結晶葡聚醋微粒子可在較低分子量葡聚醣溶液中形成，譬如2至2〇]^& 溶液，相較於被提供於兩相系統中之葡聚醣溶液，其可為4〇至500 kDa葡聚醣溶液，譬如40至75 kDa溶液。這是有利的，因為較高分子量葡聚醣溶液，譬如40與70 kDa溶液已受到較寬廣管理認可，並可在較低濃度下用以形成膠囊之殼層。 91760 -13- 200529869 供而未具再者，較此較低分子量溶液可用以降低實際上在活體内提供有此較低分子量葡聚醣溶液之結晶化作用時間。再低分子量微粒子可較容易溶解於活體内。製自兩相系統4膠囊結構是有利的，因相較於包含微妒單相之組合物，其允許治療劑自核心較均勻且延長釋出再者，咸信利用此膠囊結構，相較於若使用單相系統，口能需要較低量之微粒子以達成治療劑之相同或較佳定時7 出。又再者，藉由控制微粒子在兩相系統中之量，睪 1 a 禮

應注意的是，雖然使用PEG與葡聚醣作為兩相物質之實例，但顯示下述分配行為之任何其他適當物質可替代使用。圖15A係概要地說明不同類型粒子在含水兩相系統中之分配行為，，三種類型之分子或分子聚集體，其較佳為粒子10、12及14，與兩相16與18，係示於圖15A中。但是，可以有兩種或大於二種類型之粒子。粒子可為微粒子，譬如微球體或耄微球體，製自有機及/或無機物質、微脂粒、活細胞、病毒及巨分子。第一類型粒子1〇係優先分離至第一相16中。第二類型粒子12係優先分離至第一 16與第二18相之邊界。第二類型粒子14係優先分離至第二相18中。因此 5藉由類似前述非限制性實例，第一種粒子10可包含治療 91760 -14- 200529869 劑，第二種12及/或第三種14粒子可包含結晶葡聚醣微粒子，第一相16可包含PEG相，而第二相18可包含葡聚醣相。若較少量之第一相16被提供於較大量之第二相18中，如圖 15A之區域20中所示，則膠囊類型結構形成，其包含第一相 16之不連續球體，含有一濃度之第一類型粒子1〇，位於第二相18中。第二類型粒子12可位於液相16、18之界面，並充作膠囊之殼層。粒子14係被分散在第二相18中，及/或形成膠囊之殼層。對照上而言，若較少量之第二相18被提供於較大量之第一相16中，如圖15八之區域22中所示，則膠囊類型結構形成，其包含第二相18之不連續球體，含有一濃度之第三類型粒子14 ’位於第一相16中。第二類型粒子12可位於液相16、18 足界面’並充作膠囊之殼層。粒子10係被分散在第一相16 中，及/或形成膠囊之殼層。此兩相系統20與22可作為植入物使用，譬如藉由注射、以手術方式植入或經口輸送至哺 =動物中，譬如動物或人類。因此，膠囊係形成結構化三广兀植入物，具有核心充作儲器或積貯，以供治療劑經過入/之又控釋出。對照上而言，具有均勻分佈微粒子之植係為未經結構化之植入物。應注意的是，為經口輸送兩相系統所形&一 &城、夜 · y风 < 〜構，可一般性地被描述為結構化懸浮一包含經分散之PEG相與連續葡聚醣相。 f 、’予（思即分子聚集體）10、12及14可被液體物質 (例如油類）咬八、中。例戎刀子取代，其係選擇性地分配至液相之一療劑，譬如胰島素，可被分配在PEG /葡聚醣 91760 200529869 兩相系統之PEG相中。由於腩良妾、夷島素係键擇性地分配至PEG相中’故PEG相係形成膠囊結構之本再< 口胰島素核心。應注意的是 ’雖然某些粒子與治療劑俾撰遲地 π刎你選擇性地分配，但”經選擇性地分配"-詞未必意謂⑽百分比之粒子或治療劑係分配至液相之-中。但是，大部份經選擇性分配之物種，較佳為_ 經分配之物種係分配至液相之一，。 Τ ^ 卞例如，雖然大部份騰島素係分配至PEG相中，作一 JZ|7 //V Hi # ± r 1 一部伤胰島素可能仍留在葡聚醣相中。

圖15B係說明概要地示於圖15A中之兩相系統為基礎之植入物結構橫截面之掃描式電子顯微鏡影像。包含第一葡聚醣相、第二PEG相及結晶葡聚醣微粒子之兩相含水組合物，係被注入瓊脂糖凝膠中。此凝膠之組成係模擬哺乳動物組織，其方式是使結晶葡聚醣微粒子停止自注射側面擴散。

圖15B中之影像係說明核_殼植入物結構之形成。此核心包含被殼層34圍繞之區域3〇與32。區域30為在切創此凝膠以供橫截面SEM成像之前被充填j>EG相區域之空隙。當凝膠在杈向切片期間被切割時，pEG相區域係滴出此凝膠。區域Μ 為核心4外部，包含位於結晶葡聚醣微粒子中之PEG液滴。區域34為包含結晶葡聚醣微粒子之殼層，其係圍繞含之核心並使其固定在適當位置上。在不希望被特定理論束縛下，本案發明人認為圖15B中所不4核-殼結構，係藉由如概要地示於圖15c中之自組形成雖;、、：弟 16與第二相，譬如不同、不相容聚合體之水落敗’係在適當儲存容器19中，譬如在玻璃燒杯或小玻瓶 91760 -16 - 200529869 中，但一個相16係上升高於另一相18。汪入會限制液相16與18自由流動之物質中時“嬖、且合物被物組織或基材，譬如模擬該組織之凝m = ^動成核-殼結構。首先，存在於較小體積中之液相：：二：略球形，如圖15C之中間部份所示。然後，此、形成-個相之大約球形核心，被另一：曰接合而

...^ ^ 成臂固、、堯，如圖15C 斗底#所不。雖然多相系統之兩相系統實例已被說明，但若需要，此多相系統可具有大於兩相。 D·細胞治療以哺乳動物細胞進行之實驗，已話實利用剛才所述之技術以於身體中輸送被結晶葡聚酷微粒子聚集體之表面所吸附 (參閱圖3與12)或被巨孔性結構（參閱wu)或膠囊（參閱㈣與14)内邵之相同表面所吸收之細胞之可能性。一般而言，在膠態系統中以自發性組構為基礎之治療用自動、、且構物貝，可含有結晶葡聚醋微粒子或其他粒子，譬如ρ^Α 、PLGA、PMMA、海藻酸鹽、細胞等，供植入物用。例如，圖16A-16D係說明HeLa細胞與結晶葡聚醣微粒子在葡聚醣_ peg兩相系統中之分配。在圖16A中，係說明兩相系統。包 έ細胞之PEG相之核心，係示於照片之上方部份中，而葡聚 _ /葡聚醣微粒子（nCDMn)殼層係示於下方部份中。自殼層分離進入核心中之PEG相之液滴，係示於核心與殼層區域之邊界。圖16B顯示葡聚醣微粒子在PEG/葡聚醣雨相系統中之分配。PEG相16係在上方，而含有葡聚醣微粒子之葡聚醣相18係在底部。圖i6C與16D顯示HeLa細胞在含有結晶葡聚 91760 -17- 200529869 醣微粒子表面之葡聚醣相中。植入物可為"儲器，，類型植人物，且可用於細儲益”類型植入物可改良藥物動力學(無，，突發作用”)，且確保生物活性物質之持續# ώ。” #器„類型植人物之”核心” :除了植入物之結構”負載”細胞以夕卜，可含有任何類型之活性物質。此核心可含有治療用肽與蛋白f、核酸、疫苗、病毒及細胞。圖17係概要地說明以自動組構物質為基礎以提供治療成份 <細胞替補療法之實例H以結晶葡聚醣微粒子為基礎之封閉孔隙植入物，可用於第Z型糖尿病治療、癌症治療、巴金生氏病治療及其他以利用治療蛋白質與肽為基礎之適當治療。在圖17中，植入物40含有結晶葡聚醣微粒子12 14膠囊或双層包復移植細胞42。任何適當細胞均可使用 ’譬如產生胰島素之/5-細胞、K細胞、胰細胞或幹細胞。如圖17中所示，結晶葡聚醣微粒子膠囊對血糖糾（以及對氧、營養物及其他刺激）為多孔性，但不可透過免疫系統細胞 ’其太大以致不能進入膠囊以攻擊產生胰島素之細胞。血糖44會滲透經過結晶葡聚膽微粒子膠囊，並刺激胰島素46 自會產生胰島素之細胞生產。然後，胰島素係擴散經過結晶葡聚醣微粒子膠囊，進入血液48中。因此，包覆會產生胰島素細胞之結晶葡聚醣微粒子，可被植入哺乳動物譬如人類中，以治療糖尿病。結晶葡聚醣微粒子膠囊可於活體内形成，且不需要外科手術。此種技術在此項技藝中係被稱為”可注射組織工程”。再者，結晶葡 91760 -18 - 200529869 聚醣微粒子膠囊不需要使用有毒交聯化學品。植人物較佳可被用以提供長期作用之胰島素製劑，以壓抑肝葡萄糖生產’且在斷食狀態中保持接近正常血糖量，其中時間-作用形態未具有尖峰。應注意的是，細胞療法可用以治療其他疾病。例如，包覆會產生多巴胺細胞之結晶葡聚醣微粒子，可用以治療巴金生氏病，如概要地於圖18中所示者。再者，如圖18中所示，結晶葡聚醣微粒子膠囊之結構可被逆轉，以致細胞Μ係形成殼層，其係包覆微粒子12、14，在哺乳動物組織％中。例如，病患之自有細胞或幹細胞可位於微粒子外部。對照上而1，得自病患以外來源之細胞，譬如得自供應者，可位於微粒子殼層内部，如圖17中所示，以保護細胞隔離病患之自身免疫反應。這開啟活體内組織工程用於治療譬如糖尿病與其他症狀之可能性。 E•骨頭移植替代物骨頭移植程序係涉及利用無論是自身移植組織，其中組織係知集自病患，或同種移植組織，其係採取自供應者或屍體。使用兩種基本標準以判斷成功移植_骨傳導與骨謗發。採集自身移植組織需要在供體位置手術，其可能造成其自有併發症，譬如發炎、感染及慢性疼痛。可被採集之骨頭組織量亦有限，亦造成供應問題。同種移植係藉由排除供體位置發病與有限供應問題，而避開自身移植之一些缺點。但是，同種移植亦存在一些危險雖然许多方法可減少疾病傳遞之危險，但用以消毒組織 91760 -19- 200529869 之治療藥品會移除蛋白質與因子，降低或消除組織之骨誘發率。再者，已發展數種針對自身移植與同種移植之替代物，。許多此等替代物係使用多種材料，包括天然與合成聚_ 、、陶究材料及複合物。其他替代方法係併入因子-與細^ 為基礎之策略，其係無論是單獨使用或併用其他物質。許多骨頭移植替代物係為天然或合成，且可單獨使用或併用重組生長因子，譬如轉變生長因子(TGF)、血小板衍生之生長因子（PDGF)、成、纖維細胞生|因子（FGF)及骨頭形態發生蛋白質（BMP)。細胞為基礎之骨頭移植替代物係單獨使用細胞以產生新穎組織，或被接種於載體基質（例如間葉幹細胞）上。、關於聚合體為基礎之骨頭移植替代物，係使用可降解與不可降解聚合體，單獨或併用其他物質，譬如得自〇—公司之—開孔性聚乳酸聚合师pLA)。可降解合成聚合體就像天然聚合體一樣，係被身體吸收。具有被身體吸收 2入物之利益，係為身體本身能夠完全痊癒，未有外來物仏留下。為達此目的，一些公司已使用可降解聚合體，譬如禾乳酸與聚乳酸-共-乙醇酸（PLGA)作為孤立裝置，及作為自身移植與同種移植之增量劑。例如，B〇neTec公司已發展出一種多孔性PLGA泡沫基質，利用微粒子瀝濾法以引致多孔性。OsteoBiologics公司具有混合增量劑，其為一種作為移植增量劑使用之微粒子PLGA產物。在此具體貫施例之一個較佳方面，於前述具體實施例中所 91760 -20 - 200529869 ^、Η陳、、口曰曰葡聚醣微粒子，係作為骨頭移植替代物使用’且併用治療劑’其係在該身體之特殊位置提供骨質形成。供骨質形成之任何適當治療劑均可使用，譬如肽、幹細胞或蛋白f，包括但不限於上文所提及之間葉幹細胞、TGF PDGF FGF & BMP。治療劑可位於多孔性微粒子之孔隙中。例如，治療劑可於結晶化作用後被提供於結晶葡聚酷微粒子之孔隙中。於此項具體實施例之另一個較佳方面，關於活體内植入物开y成之方法，係包括製備微粒子在第一個液相中之懸浮液，製備微粒子在與第一個液相不可溶混之第二個液相中之懸浮液，製備乳化液，其中第一個液相為連續相，而第二個液相為分散相，並將此乳化液注射至哺乳動物身體中。較佳係使用此乳化液作為骨頭移植替代物。在第一個與第二個液相中之微粒子，較佳係為不同。例如，在第一相中之微粒子可為非聚合體微粒子，譬如多孔性陶瓷微粒子，而在第二相中之微粒子可為聚合體微粒子，譬如上文所提及之多孔性結晶葡聚醣微粒子。若需要，第二個液相可含有治療劑，在身體之特殊位置提供骨質形成。治療劑可位於多孔性微粒子之孔隙中。 F· 口服胰島素輸送媒劑在本發明之另一項較佳具體實施例中，本案發明人已發現多孔性（意即微孔性）微粒子之組合物可作為媒劑使用，供口服輸送蛋白質，譬如胰島素。多孔性微粒子可為任何適 s夕孔性彳政粒子’其使得能夠口服投丁騰島素，且顯著降 91760 ^ 21 - 200529869 低血糖，譬如在口服投藥60分鐘内30%降低。微粒子較佳為生物黏著劑粒子，譬如會至少暫時黏著至哺乳動物腸壁，以允許胰島素輸送經過腸壁之粒子。此多孔性微粒子最佳係包含上述結晶葡聚醣微粒子。在圖19中所示本發明之一項較佳具體實施例中，本案發明人已發現結晶葡聚醣微粒子12、14及胰島素46之含水懸浮液，經口投予哺乳動物53，譬如兔子，在降低血糖含量上，係與肌内注射單獨之胰島素，大約同樣地有效。圖19係概要地說明胰島素46自經口投予之包含微粒子之組合物％，滲透經過哺乳動物53腸52壁。由於兔子為關於人類在藥物測試上之一種常用模式，故本案發明人認為包含結晶葡聚醣微粒子與胰島素之液體或固體組合物54，譬如含水顯浮液、溶液、片劑或膠囊，當經口投予時，亦在人類中有效降低血糖含量。下述貫例係說明使用結晶葡聚醣微粒子之口服胰島素輸送。此項研究係涉及灰鼠兔子（2·3±0·2公斤），並觀察其對於經口投予含水懸浮液之回應，該懸浮液包含根據本文中所述方法製成之結晶葡聚醣微粒子，與人類重組胰島素。使 3.0 克葡聚瞻 Τ20 (Pharmacia，Uppsala，Sweden)溶於 2_0 克水中，並放置在溫度60 C下之箱中。三小時後，經由在3,〇〇〇克下離心，以3x5.0毫升水洗滌結晶葡聚醣微粒子。然後，使結晶葡聚醣微粒子懸浮於2.0耄升水中，並使其在室溫下乾燥。將所形成之乾％用以製備含有胰島素之懸浮液，以供口服胰島素輸送實驗。含有胰島素之懸浮液係經由混合25〇毫克 91760 -22 - 200529869 微粒子U毫升（12UI)或0.6毫升（24UI)胰島素⑽喊㈣滅

Actrapid HM Penfill，40 W /毫升）；及蒸餾水以達到2 〇毫升體積而製成。 K a 將此懸浮液之試樣(2·〇毫升）以導管引進兔子之喉嚨中，接著引進10.0毫升飲用水。在此懸浮液引進之前，動物未進食 3小時。血液試樣係取自兔子耳靜脈，並分析葡萄糖濃度。血糖係使用葡萄糖氧化酶方法，於,，—次接觸系統葡萄糖分析斋 ’’（Lifescan Johnson & Johnson, Milpitas，CA，USA)上，在適冬校準後度量。 ^ 實例1至8為涉及八隻兔子之比較實例。實例9至14為涉及五隻兔子之根據本發明實例。在比較實例1與2 (摘錄於表j中之對照實驗#1)中，係將人類重組胰島素之水溶液，於每隻動物121；1之劑量下，以肌内万式引進兩隻兔子中。在比較實例3與4(摘錄於表中之對照實驗#2)中，兔子係保持原狀（意即未對此兩隻兔子提供胰島素或其他注射）。在比較實例5與6(摘錄於表冚中之對照實驗#3)中，係將未使用騰島素之結晶葡聚醣微粒子之心浮液以& 口方式提供予兩隻兔子。在比較實例7與8 (摘錄於表IV中《對照實驗樹）中，係將市講獲得之交聯葡聚糖 (SePhadeX)G-150微粒子與胰島素（241；1)之懸浮液，以經口方式才疋仏予兩隻兔子。根據AmershamBi〇sdenca網站，§印^如^^七〇微粒子為珠狀凝膠微粒子，具有2〇至15〇微米直徑，經由以環氧氯丙烷使葡聚醣交聯而製成。在根據本發明較佳具體實她例《貫例9-14(摘錄於表v中）中，係將結晶葡聚醋微粒子 91760 -23- 200529869 與胰島素（24UI)之懸浮液，以經口方式提供予五隻兔子。其結果係摘錄於下表I-V中。

表I 免子/ 實例# 胰島素劑量 0分鐘毫克/ 公合 30分鐘毫克/ 公合 60分鐘毫克/ 公合 90分鐘毫克/ 公合 120分鐘毫克/ 公合 #1 12 UI 肌肉内 91 68 58 49 51 #2 12 UI 肌肉内 87 65 64 57 58

表II 兔子/ 實例# 胰島素劑量 0分鐘毫克/ 公合 30分鐘毫克/ 公合 60分鐘毫克/ 公合 90分鐘毫克/ 公合 120分鐘毫克/ 公合 #3 0.0 98 87 87 89 86 #4 0.0 88 90 91 94 87

表III 兔子/ 實例# 胰島素劑量 0分鐘毫克/ 公合 30分鐘毫克/ 公合 60分鐘毫克/ 公合 90分鐘毫克/ 公合 120分鐘毫克/ 公合 #5 0.0 92 99 94 95 92 #6 0.0 90 93 93 93 92

表IV 兔子/ 實例# 騰島素劑量 0分鐘毫克/ 公合 30分鐘毫克/ 公合 60分鐘毫克/ 公合 90分鐘毫克/ 公合 120分鐘毫克/ 公合 #7 24 UI 經口 85 82 86 81 83 #8 24 UI 經口 84 75 86 76 77 91760 -24- 200529869 """""Γ -——--- 兄亍/ 實驗# 劑量 u勿ί里毫克/ 公合 30分鐘毫克/ 68 60分鐘毫克/ 合 59 90分鐘毫克/ 120分鐘毫克/ #9 24 UI 經口 ---—- 94 公合 58 公合 57 #10 24 UI 經口 "^ 64 —----- 52 54 52 #ι 1 η λ τττ ~~^^ "^ 什i 1 Ζτ· UI 經口 /〇 52 51 49 48 #12 24 UI 經口 ---—— 92 ^----- 64 ---- 52 53 47 #13 24 UI 經口 53 '~~--- 48 38 49 #14 24 UI 經^— -—--- 97 . 60 —~~-- 38 54 52 於表ι-ν中之數據顯示糖^^^- 〜、p葡匈糖）在哺乳動物血液中之平均降低，在12UI胰島素係莽、猎由肌内〉王射投予（實例1-2) 與24UI胰島素係經口（意@ ； . 乂口服万式）伴隨著結晶葡聚醣 “子-起投丁 (貫例9_14)時，係為相當。在口服w 八於曰丄斗—m㈡田在口服投樂後60 刀叙’取大匍匈糖降低為約35 产八佑形能+、、土、、々60百分比。葡萄糖之濃度刀佈形恐，在 >王射與口服輸送相同。應注意的是，可投予幻” ”係、為貝際上予·姨島素。1二丁：他…島素。例如，可投至三次胰島素之口广，與所注射胰島素之量比較，二至高三小時。'、服投桌，會產生血糖之類似降低，歷經習知事實是胰島素本身係被酵素降解，且不會完整地被吸 91760 -25- 200529869 收橫過胃腸黏膜（AmidonGL，LeeHJ，肽與擬肽藥物之吸收，

Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol· 1994; 34: 321-41)。但是，實例 9_14 顯示結晶葡聚醣微粒子可作為媒劑，用於口服輸送蛋白質，譬如胰島素，因為所接受之低血糖作用係為顯著的。在不希望被特定理論或作用模式束縛下，本案發明人認為使用多孔性結晶葡聚醣微粒子在含水懸浮液中作為胰島素輸送基質，係保護胰島素免於被腸酵素顯著降解，並允許胰島素被完整吸收越過胃腸黏膜。此胰島素可位於微孔性微粒子中之微孔内，及/或在微粒子間之大孔中。對照上而言，使用交聯SephadexG-150葡聚醣微粒子與胰島素（表IV，膏例7-8)在血糖濃度上不會產生可感覺得到之降低。正如實例9-14中所提供者，在對哺乳動物投予含有結晶葡聚醣微粒子與胰島素之組合物後6〇分鐘，於該哺乳動物中之血糖濃度係被降低達至少5百分比，較佳為至少3〇百分比 (意即，在哺乳動物中之血糖值，於懸浮液投藥後6〇分鐘，係低於就在此懸浮液投藥前所度量值之至少5百分比，較佳為至少30百分比）。在哺乳動物中之血糖濃度，較佳係被降低達至少5百分比，譬如至少30百分比，較佳係在將組合物投予讜哺乳動物後30分鐘，達約35至約40百分比。較佳係在對該哺乳動物投予此懸浮液後6〇分鐘，於哺乳動物中之血糖濃度係被降低達約35至約60百分比，例如35至45百分比。與就在投藥前之血糖濃度比較，於哺乳動物中之血糖濃度，更佳係在對該哺乳動物投予組合物後之整個期間被降低，範圍從30至240分鐘，譬如30至12〇分鐘。例如，在哺 91760 -26- 200529869 乳動物中之血糖濃度，較佳係在對該哺乳動物投予組合物後’於範圍從難·分鐘期間，較佳為30至12〇分鐘，降低達至少1〇百分比，較佳為至少百分比，更佳係達至少％百分比，譬如達35至45百分比。因此，本發明之較佳具體實施例係提供一種在哺乳動物中降低錢之方法，其方式是經口投予治療上有效量之包含結晶葡聚醣微粒子愈月秦I； I “人” 、” 彳权卞胰馬素< 組合物。組合物之”治療上有放里可由被治療疾病、傷害或病症之不利症狀或病徵之預防或改善作決定。此組合物較佳係包含具有平均直徑為约〇.5至約5微米之結晶葡聚醣微粒子與胰島素之含水懸浮液。再者’微粒子較佳為多孔性微粒子，其係在添加姨島素至懸浮液之前結晶，以致胰島素係被定位，與微粒予之表面接觸，及/或在微粒子之孔隙中。 # 結晶微粒子較佳係包含葡聚醣分子（意即聚合體分子），並 :藉由多個氫鍵、凡得瓦力及/或離子㈣定在—起，及實質上未具有共價鍵於葡聚醋分子之間。因此，在微粒子中 ^分子較佳係未故意經交聯（意即交聯步驟未進行），且微 =子未含有共價鍵於分子之間，或低於轉共價鍵於分子之間。雖然在圖19中係說明包含騰島素與微粒子之單相組合物54 但上述且示於圖叫私吨况及細中之兩相組合物 I可使用。例如，包含一個葡聚醣相、—個pEG相之兩相組 «物，可使用結晶葡聚聽微粒子與胰島素。於活體内，此級合物具有自組膠囊結構，其包含一個含有結晶葡聚醣微 91760 -27- 200529869 粒子之壁或殼層，及一個含有PEG與胰島素之核心。接受胰島素口服投藥之哺乳動物，較佳係包括需要降低血糖之人類，譬如患有糖尿病之人類。因此，本發明之較佳具體實施例係提供一種在需要治療之人類中治療糖尿病之方法’其方式是經口投予胰島素與上述結晶葡聚醣微粒子之懸浮液。

可將任何治療上有效量之胰島素投予哺乳動物。胰島素之量可基於哺乳動物之類型（意即人類或兔子）、哺乳動物之體重、懸浮液之組成、所要血糖降低之量及其他因素而改變。胰島素在此懸浮液中含量之一項非限制性實例，係為每克懸浮液約10UI至約2,500UI人類重組胰島素，譬如約12UI 至約30 UI，譬如24 UI之人類重組胰島素。但是，此量可按需要而改變。本發明不應被視為受限於上述較佳具體實施例。其他基質物質可用於口服胰島素輸送，譬如有機或無機微孔性粒：。此等粒子較佳為微粒子，其係加強胰島素穿透經過胃腸黏膜及/或其錢組合物安定化。再者，雖然此料液較佳係僅含有水溶劑1質；及胰高素溶液或懸浮液；但此輸送系統亦可含有其他物質。例如，此組合物可含有第二相，譬如兩相系統之PEG相。因此，本發明之另一個較佳方面包括-種在哺乳動物中降低血糖之方法，纟包括對該哺乳動物經口投予包含治療上有效量之胰島素與基質物質之扯合物，以在對該哺乳動物投予此懸浮液後⑻分鐘，降低节哺乳動物之血糖達至少3G百分比。於本發明之另-個較^ 91760 -28- 200529869 方面’一種對哺乳動物投予懸浮液之方法係包括對該哺乳動物經口投予結晶葡聚醣微粒子及治療上有效量之胰島素之含水懸浮液。 μ 如上述，作為基質物質用於胰島素或其他物之口服投藥之結晶葡聚聽微粒子，可藉任心成（參閱例如圖丨）。微粒子較佳係藉任何本文中所述較佳且體實施例之方法製成。微粒子較佳但未必在未使用有機溶劑之水溶液中㈣。目立匕，於本發明之一個較佳方面，治療上有效量之胰島素與結晶葡聚醣微粒子，係在微粒子已被結晶後，被合併在水巾，以形成胰島素與結晶葡聚醋微粒子之含水懸浮液。可在將胰島素添加至水之前、同時及/ 或之後，將微粒子添加至水中。再者，微粒子可在其係於其中形成之溶劑中，經口投予哺乳動物。或者，可使其移離其係於其中形成之溶劑，並置於水或其他供口服投藥之水溶液中，或、經乾燥並以固體形式提供，譬如片劑或膠囊，供口服投藥。 7 結晶葡聚酷微粒子及治療上有效量之騰島素之含水懸浮液 (或胰島素與基質物質之其料當料液，譬如胰島素與微孔性微粒子之懸浮液），較佳係以服用之醫藥組合物提供，其係供口服投藥至人類。在本發明之一個較佳方面，組合物係位於容器巾，其量係供單次口服投藥至人類。容器；包括任何可容納懸浮液之容器，譬如塑膠或玻璃瓶、管件、滴管、喷嘴、袋囊及/或其他適當容器。此容器含有足供組合物單次口服劑量之懸浮液量。 91760 -29- 200529869 於本發明之另一較佳方面，組合物係位於任何適當容哭中，其量適於多重口服投藥劑量。容器含有口服劑:投;人類之說明書。說明書可被印刷在容器上，譬如亩 ^ 直接列印在容器上或在貼附至容器之貼紙上，或裝在容器内，馨如列印在紙片上，裝在容器中，置於硬紙板箱中或在藥^信封中。說明書可描述隨著每一劑量應被服用之組合物量7劑量應被服用之頻率’如何度量供口服投藥之組合物劑量，1

及/或供管理保健執行者及/或需要此藥物之病患用之任何其他適當口服藥物說明書。或者，說明書可包含以電子方式或聽見方式取得服藥與投藥說明書之指示，譬如連結至含有說明書之網站，或電話號碼或錄音，纟中說明書係以可聽見方式提供。於本發明之另-較佳方面，位於容器中之結晶葡聚醣微米子及治療上有效量之胰島素之含水懸浮液，係被提供於,

藥組合物套件中’具有該組合物對有需要之人類口服投身之說明書。套件可包含說明書’被印刷貼附至容器之貼紙上，成万、很 ^ R 及、、，氏荇袈在谷态中，譬如在硬細板相或，房L封中，包括瓶子（意即容器），及說明書薄片。應注意的是，供口服投藥之組合物可呈含水懸浮液形式，仁:使用^他輸送形式，以降低哺乳動物中之血糖。例如夕孔陡結晶葡聚醣微粒子與胰島素可以片劑或經口投予。 :〇 ^式對哺乳動物(譬如人類)以經口方式投予此組合物，首弁# g θ # 〜曰曰匍聚醣微粒子與胰島素之溶液乾燥，譬 91760 -30- 200529869 如凍乾，α形成粉末：然後’可將粉末壓縮成片劑，伴隨著選用ι藥學上可接文<賦形劑，或置於藥學上可接受之膠囊中。於本發明之另-較佳方面，包含結晶葡聚酷微粒子及治療上有效量胰島素之組合物’可藉吸人投予哺乳動物，譬如人類。於此情況中，係將組合物置於適合藉吸入對哺乳動物投予醫藥組合物之容器中，譬如吸入器，當被擠壓或壓縮時，其係提供經計量之組合物劑量。較佳係自吸入器，藉由噴塗呈溶液或懸浮液形式之組合物，經過嘴巴，對哺乳動物提供此組合物。較佳係將組合物輸送至哺乳動物之肺臟（意即肺輸送）。 G·可注射胰島素輸送媒劑本案發明人已發現被注射至哺乳動物譬如大白鼠與兔子中 <結晶葡聚醣微粒子與胰島素之組合物，相較於相同單獨胰島素相同劑量之注射，令人意外地延長胰島素之功效期間。圖20係概要地說明使用注射器56，藉由注射包含微粒子12、14與胰島素46之單相組合物，在哺乳動物形成植入物40。圖21係概要地說明藉由注射兩相組合物，在哺乳動物53中形成結構化植入物40，該組合物包含一個葡聚醣相18，含有經選擇性地分配之結晶葡聚醣微粒予ΐ2、μ ，及一個PEG相16，含有經選擇性地分配之治療劑忉，包括胰島素。葡聚醣相18係形成殼層，環繞PE(^al6核心。由於大白鼠與兔子為供人類在藥物測試上之常用模式，故本安發明人認為包含結晶葡聚醣微粒子與胰島素者，當注入成 91760 -31- 200529869 年與兒重人類中時，在延長胰島素功效之期間上亦有效。貫例15-22係說明使用結晶葡聚醣微粒子作為可注射胰島素輸送媒劑，相較於單獨注射胰島素之優點。此實驗係涉及老鼠，且觀察係來自其對於皮下注射包含結晶葡聚醋微粒子人人邊重、、且胰島素之含水懸浮液⑺

Penfill®，40UI/ 毫升）之回應。孩懸序液係按下述製成。使5_〇克葡聚醣Ή〇 (pharmada，Upps也， Sweden)溶於20.0克水中。使溶液經過〇·22微米濾器（他丨邱⑽， Bedford，MA)過濾，並凍乾。使3 〇克所形成之粉末溶於3 〇克無菌水中，並放置在溫度60t:下之箱子中。6小時後，將結晶葡聚醣微粒子在3,000克下離心，以知5〇毫升無菌水洗滌。最後’將所製成之結晶葡聚醣微粒子懸浮液與胰島素水溶液混合，並使用纟關於老氣之實.驗中。將此懸浮液之試樣引進老鼠之雙腳中，且動物血液試樣係取自每隻老鼠之尾部，並分析葡萄糖濃度。血糖係使用葡萄糖氧化酶方法，在一次接觸系統葡萄糖分析器（UfescanJ〇hns〇n&j〇hns〇n， Milpitas，CA，USA)上，於適當校準後度量。在比較實例15中，無胰島素被注入老藏中。在比較實例16 、17及21中’係將單獨之胰島素(〇5UI)注入三隻老鼠中。在實例㈣及22中，係將胰島素(〇5UI)與結晶葡聚醣微粒子植入物注入四隻老鼠中。其結果係摘錄於表％中。 91760 -32- 200529869

糖在動物血液中（意即血糖）之平均降低，當使用與未使結晶葡聚醣微粒子，施加〇·5υι肌肉内時，係極為不同。d 表VI中所示，在比較實例16、17及21之老鼠中之葡萄糖〃里，於注射後最初45分鐘期間，係為約相同或低於實例及22老鼠中之葡萄糖含量。在比較實例16、17及2丨與實1 18-20及22之老鼠中，於注射後12〇分鐘，葡萄糖含為 91760 -33- 200529869 相同。但是，在比較實例16、17及21老鼠中之葡萄糖含量，於 >王射後210至390分鐘，係為約三倍高於實例18-2〇及22老鼠中之葡萄糖含量。事實上，在實例18】及22老鼠中之血糖含量，於注射後丨20分鐘至390分鐘，並未實質上增加（意即並未增加超過10%，仍然保持相同或降低）。對照上而言，在以相同胰島素注射之比較實例16、17及21老鼠中之血糖含量，於注射後120至390分鐘，係實質上增加。結晶葡聚醣微粒子/胰島素注射，會降低血糖，歷經比單獨注射相同劑τ <胰島素較長之時間。因此，含有結晶葡聚醣微粒子與胰島素之組合物，可被配藥以供注射。、下述關於兔子之實驗，亦証實結晶葡聚醣微粒子/胰島素注射係如何降低血糖，且保持血液胰島素之基底含量，歷經比單獨注射相同劑量之相同胰島素較長之時間。以皮下万式/王射 < 包含ActrapidHM®短效胰島素與結晶葡聚醣微粒子 <、、且口物，係令人意外地發現會延長此短效胰高素之功效期間’至超過以皮下方式單獨注射之長效胰島素隱⑽㈣ HM®之功效期間。、功效期間-詞係意謂降低血糖濃度及/或保持血液騰島素 -、基底S里至所要之含量，與會造成血糖尖峰之外部事牛《如進食操關。因&，功效期間一詞係為相對術語， f夷島素與徒粒子組合物，與相同劑量之單獨相同之功效作比較。拖丄、 ’、換3 <，功效期間係為作用期間或藥理學延㈣間’其可在斷食狀態之病患中度*，以比較，、與微粒子组合物對單獨之相同劑量相同胰島素之功 91760 200529869 效。如圖22A與22B中所示，包含ActrapidHM®短效胰島素與結晶葡聚醣微粒子之組合物，會延長胰島素之吸收，且延長血糖過少作用（意即胰島素之功效期間）達至少二十四小時，譬如約二十八至約三^--小時，相較於約二至約八小時之單獨ActrapidHM⑧胰島素（圖22Β)及約十七至約二十四小時之單獨"Monotard HM，’® 胰島素（圖 22A)。Actrapid HM® 與 Monotard HM® 兩種胰島素均為Novo Nordisk之產物，且得自公司資訊之此等胰島素組合物在人類中之所廣告功效期間係個別為八與二十四小時。在圖22A與22B中，上方線條係說明未被投予胰島素之完整兔子之對照線條。圖22A與22B之y-軸為對相同8 UI劑量胰島素之血糖濃度之相對正規化尺度。圖中之數據係經調整，以對各圖顯示在一個圖形中，及顯示胰島素注射後之動物血液中之血糖含量。於圖22A與22B中所示之數據，係按下述獲得。監測灰鼠兔子（2·3± 0·3公斤）關於其對於注射包含結晶葡聚醣微粒子與短效胰島素Actrapid ΗΜ®配方之回應。將此配方之試樣以皮下方式注入兔子中。長效胰島素MonotardHM®(40UI /毫升）與短效胰島素Actrapid HM®係以皮下方式注入個別兔子中，未使用微粒子，且作為對照組使用。動物血液試樣係採取自兔子耳靜脈，並分析葡萄糖濃度。血糖濃度係使用葡萄糖分析器（One_Touch⑧ Lifescan，Johnson & Johnson，Milpitas，CA，USA)於適當校正後度量。 91760 -35- 200529869 在比較實例23與24中’兩隻完整兔子未被提供任何胰島素在比車乂貝例25與26中，係將長效胰島素M_tard HM@之水溶液，以8UI劑量，以皮下方式引進兩隻兔子巾。在實例27. 29中係、將、、，“θ冑聚醣微粒子與短效月夷島素&卿id聰⑧之顯浮液，以8UI劑量，以皮下方式引進三隻兔 ^ 係摘錄於表Vn中。〃 °果

上文實例27_29係說明結晶葡細_丽⑧之組.合物，係提供延長作用，超過長效騰3 M_dHM:之作用’且咸認係相當於得自一之長效(每曰'入服藥）胰島素葛拉金（glargine) Lantus®之作用（參閱 ww,ventis-usx0nvPls/lantus_TXT^ 〇 , Lantus@^ ^ _ 被稀釋或14任何其他胰島素或溶液混合。若胰島稀釋或混合’則U咖⑧及/或混合胰島素之藥物動力學4 力作用形態(例如作用之展開，達尖峰作用之時間)可能以 91760 -36- 200529869 不可預期《万式改變。對照上而t，結晶葡聚醣微粒子與胰島素之組合物並未如此受到限制，因為任何適當胰島素，譬如人類騰島素，均可使用。在結晶葡聚醣微粒子與胰島素之、、且a物中，胰島素與微粒子之比例可按需要而改變再者，任何適當胰島素可用以定製配合針對個別病患之胰島素治療。因此，作為典型胰島素之說胰島素。

ActrapidHM®係被使用於此組合物中，明例，且此組合物並不限於此品牌之正如實例23至29所示，含有結晶葡聚酷微粒子與騰島素之 ’且口物係有效保持胰島素功效期間，比未使用微粒子之相同劑量相同胰島素，歷經至少_長，譬如至少㈣較長’較佳為卿至侧較長之時間。含有微粒子之胰島素組合物係有效保持血液胰島素與血糖濃度之所要基底含量， & Hill微粒子之㈣劑量相同騰島素’歷經至少聊較長，譬如職至竭較長之時間。因此，含有微粒子之組合物《功效期間，係為至少24小時’這允許其每曰僅被注射一次至哺乳動物中，譬如有需要之人類。此長持續性騰島素結晶葡聚醣微粒子組合物，係比先前技長持續性胰島素組合物更安全，因其可達成長持續性功效’而未使用如在先前技藝組合物中之較高劑量騰島素監例如，若8UI劑量之短期作用騰島素已被敎出對病患為 =上安全’未具有劑量過度之顯著危險，則包含相同短 :用胰島素與結晶葡聚_微粒子之組合物，可在相同⑽ ㈣作用騰島素下，提供較長作用功效期間，未具 91760 -37- 200529869 有劑量過度之顯著危險，即使斤有胰島素立即被釋入疬奉中亦然。再者，與先前技藝組合心成本節約，因其係延長功效而未物編、技藝長效糖尿病治療劑係以胰島：、夷島素1。現行先前 ^月夷島素<類似物製成，嬖如得自Aventis之Lantus®胰島素。對昭口 4人a …上而吕，含有結晶葡聚醣微粒子惑、、且5物較佳係含有人類 ^ a 、里，且胰島素，其安全作用形悲係、，至確亙。因此，此組合物會、、、 H降低不利反應之危險，及注射至糖尿病患者之次數，於斥疋杈呵搪尿病患者之生命品質0 可注射組合物可包括單相系統，其包含胰島素與微粒子，或兩相系統，其係、形成PEG與騰島素核心，及葡聚膽與葡聚赌微粒子殼層’以提供又更大之功效期間。再者，此組合物包含可流動單相或多相膠態系統（意即懸浮液或乳化液），其係相對較容易注射至哺乳動物中。下述實例係說明使用可注射兩相組合物，其包含葡聚醋相、PEG相、月夷島素及結晶葡聚醣微粒子。咸信當被注入哺乳 # 動物中時’此組合物係形成具有三次元膠囊結構之結構化儲器型植入物。在此膠囊結構中，微粒子係選擇性地分配土葡氷醣相中，而胰島素係選擇性地分配至PEG相中。含有从粒子之葡聚醣相係形成殼層，環繞包含胰島素之PEG相之核〜。此結構化植入物允許從核心經過殼層之受控釋出。在比較貫例30中，〇.5UIActrapidHM®胰島素（looui/毫升）係以皮下万式注入老鼠中。在實例31中，〇·4克結晶葡聚醣微辛子係被刀散在具有分子量70 kDa葡聚醣（Pharmacia，Sweden)之 91760 -38- 200529869 0·6毫升20% (W/W)水溶液中，以形成懸浮液。使10毫克具有分子賀6kDa之PEG(Fluka)溶於0.1毫升ActrapidHM®胰島素 (100 UI /毫升）中，以形成溶液。將〇·05毫升PEG與胰島素溶液，和0.15毫升微粒子與葡聚醣懸浮液混合，以形成兩相組合物或混合物。將含有0.5UI胰島素之0·02毫升兩相混合物以皮下方式注射至老鼠中。其結果係示於表νιπ中。

表 VIII

正如可在表ΥΙΠ中所見及者，兩相組合物之功效期間係比單獨胰島素較長。再者’此兩相組合物係比單獨胰島素較逐漸地降低血糖濃度。在不希望被特定理論束縛下，咸作此等作用係由於胰島素自膠囊結構之核心受控釋出所致。° 再者，含有微粒子之組合物可針對每一病患個別地調整，

其方：是調節胰島素及/或微粒子之量，以允許病患每天在同-時間（意即每24小時—次，每48小時—次，及复他等等） :王：組合物。因此，組合物之功效期間可針對每一病患作凋整。對兩相系統，自膠囊核心之由控制微粒子之量，以…素釋出形態’可藉里以技制恥囊殼層之厚度作4 雖然本發明人不期望被任何特定理論所束縛^ 鼠與兔子中使用結晶葡聚醣微粒子之相同持續性作用’ Τ被解釋為胰島 …夷島素《長為基礎之植人物之擴散（意即胰島素自動;；=醣微粒子刊釋出）。由於 91760 -39- 200529869 老机與兔子為人類在藥物、、目

+物測成上常用之模式，故在上文表VI 至VIII中顯示之數據，扣山& m , 4曰出利用結晶葡聚醣微粒子為基礎之植入物，使其能夠發展登）展又控釋出 < 輸送系統，具有經改良之藥物動力學與動力學牿Π PT A、々刀子特欲，且更艮好地符合基底胰島素病患譬如人類之需求。 H·物質 "胰島素”-詞係被解釋為涵蓋騰島素類似物、天然萃取之人類胰島素、重組產生之人来陆t 、厘王<人"員胰島素、自牛及/或豬來源萃取之騰島素、重組產生之豬盥丰將，、午胰島素，及任何此等胰島素產物之混合物。此術語係意欲函蓋通常以實質上純化形式被使用於治療糖尿病患者之多肤中，而且涵蓋利用此術語於其市購可得之醫藥形式上，其係加入其他賦形劑。此胰島素較佳為重組所產生，且可經脫水(完全乾燥)或在溶液中。 "胰島素類似物"、"單體性胰島素"等術語，可於本文中交換使用，且欲予涵蓋如上文定義，•騰島素”之任何形式，其令在多肽鏈内之-或多個胺基酸已被替代胺基酸置換，及/或其中—或多個胺基酸已被刪除，或其中—或多個其他 =酸已被加入多肽鏈或胺基酸順序中，其在降低血糖含 I中无作胰島素。一般而言，本發明較佳具體實施例之”胰島素類似物”一詞’係包括”胰高素利思普羅(1-撕 ’如在美國專利5’547,929中所揭示者’以其全文併於本文供參考’·胰島素類似物包括LysPro胰島素及類似人麵胰島素，以及其他”超姨島素類似物”，其切島素類似物影響血清 91760 -40- 200529869 葡萄糖含量之能力’當與習用胰島素比較時，係實質上被加強：以及肝選擇性騰島素類似物’其在肝臟中係比在脂 :組織中更具活性。較佳類似物為單體性胰島素類似物，其係為用於與胰島素相同一般目的之似胰島素化合物，譬如騰島素利思普羅（lispiO)，意即被投予以降低血糖含量之化合物。

、類似物"一詞係指一種分子，其係與被视為可比擬之分i 分擔共同功能活性，且典型上亦分擔共同結構特徵。 ”重組體”-詞係指被表現在原核細⑽中之任何型式之無相繁殖治療劑，或基因工程之分子，或分子之結合庫，其3 ，二步被處理成另一種狀態，以形成第二個結合庫，尤其是^含有保護基之分子，該保護基會提高治_之物理化學、藥理學及臨床安全性。木再者’本文中所述之治療劑並不㈣胰島素。任何其他適田，口療劑均可併用微粒子，用於口服輸送、吸人輸送、注

射輸送及手術移植輸送。例如’通當治療劑可包括肽、多肽或蛋白質，於分子大小 ^之範圍，從0.5K道爾呑至15〇尺道爾呑。特定言之，肽、夕肽或蛋白質治療劑包括糖尿病助劑；譬如上述騰島素血胰島素類似物；糊精；胰增血糖素；以活性劑；免疫調制肽與蛋白質，譬如細胞活素、化學細胞活素、淋巴細胞活素；紅豆杉醇；間白血球活素，譬如間白血球活素q、間白血球活素_2，及干擾素；促紅血球生成素；溶解血栓劑與肝素，抗蛋白酶、柷胰蛋白酶及胺氯吡咪；rhDNase ;抗生素 91760 -41 - 200529869 及其他抗傳染劑；激素與生長因子，譬如甲狀旁腺激素、 LH-RH及GnRH類似物；核酸；DDAVP ;降血鈣素；環孢素；二坐核芬，酵素，肝素；造血因子；環抱素；疫苗；免疫球蛋白；影響血管肽；反有意義劑；寡核苷酸，及核苷酸類似物。其他適當治療劑包括病毒、細胞、基因，及其他具有治療性質之藥劑，譬如其他適當疫苗與分子治療劑。 ’’糊精π —詞包括天然人類糊精，牛、豬、大白鼠、兔子糊精，以及合成、半合成或重組糊精或糊精類似物，包括普拉林太(pramlintide)，及其他糊精催動劑。 π免疫調制蛋白質” 一詞包括細胞活素、化學細胞活素、淋巴細胞活素互補成份、生長激素、免疫系統輔助與黏連分子，及其人類或非人類動物專一性之受體。可使用之實例包括 GM-CSF、G-CSF、IL-2、IL-12、0X40、〇X4〇L(gp34)、趨淋巴素、CD40、CD40L。可使用之實例包括間白血球活素，例如間白血球活素1至15 ;干擾素α、々或r ;腫瘤壞死因子、粒性細胞-巨噬細胞菌落刺激因子（GM_CSF)、巨噬細胞菌落刺激因子（M-CSF)、粒性細胞菌落刺激因子（G_CSF)，化學細胞活素，譬如嗜中性白血球活化蛋白質MAP);巨噬細胞化學吸引劑與活化因子（MCAF)、、巨噬細胞炎性肽MIIMa與MHMb，互補成份及其受體，或輔助分子，譬如B7i 、B7.2 ’ ICAM-1、2或3，及細胞活素受體。〇χ4〇與〇χ4〇-配位體(gp34)係為其他可使用之免疫調制蛋白質實例。免疫調制蛋白質，針對不同㈣，可為人類或非人類動物專一性，且對本發明之目的而言，視情況及當可合宜#，可被表 91760 -42- 200529869 示為胞外功能部位及其他片段，具有天然生成蛋白質之結 2活性’及其突變種，以及其與其他多肽順序之融合蛋白貝例如具有免疫球蛋白重鍵恒定功能部位。在使超過— 種免疫，周制蛋白質編碼之核#酸順序被插人之情況中，其可包D例如超過一種細胞活素或細胞活素與輔助，黏連分子之組合。於本又中使用之"干擾素"或”IFN"術語，係意謂高度同系物種專-性蛋白f之族群，其會抑制病毒複製與細胞增生，及調制免疫回應。干擾素係基於其細胞來源與抗原性，而被分類成三個種類’意即…干擾素(白血球）、糸干擾素 (成.截，隹,、、田胞）及r_干擾素（免疫活性細胞）。各組群之重組形式與類似物已被發展，且為市購可得。^各組群中之亞土係以抗原/1構特倣為基礎。至少24種具有不同胺基酸順序之:擾素被分類成亞型UH)已藉由使此等肽編碼之臟單離與定序而被確認U擾素”、” α干擾素”、"干擾素α "、”人類白血球干擾素"及"”術語，可於本文中交換使用’以描述此組群之成員。依此方式製成之人類白血球干擾素，含有具不同胺基酸順序之人類白血球干擾素之混合物。 ”促紅血球生成素” 一詞係適用於合成、半合成、重組、天然、人類、猴子或其他動物或微生物單離之多肽產物，具有部份或全部原始結構構形（意即胺基酸殘基之連續順序），及天然生成促紅血球生成素（包括其對偶質變型）之—戋多種生物學性質（例如免疫學性質及活體内與活體外生物學 91760 -43- 200529869 活性）。此等多肽之獨特特徵亦為藉由基因組或〇£^八無性繁殖或藉由基因合成所獲得外源DNA順序之原核生物或真核生物宿王表現（例如藉由細菌、酵母及哺乳動物細胞在培養物中）之產物。微生物表現於脊椎動物（例如哺乳動物與鳥頜）細胞中之產物，其進一步特徵可為免除與人類蛋白質或其他污染物缔合，該污染物可能在其天然哺乳動物細胞環境中或在胞外流體譬如血漿或尿液中與促紅血球生成素缔合。典型酵母（例如釀酒酵母）或原核生物（例如大腸桿菌）宿王細胞之產物，係未與任何哺乳動物蛋白質缔合。依所採用惑佰王而足，本發明之多肽可被哺乳動物或其他真核生物碳水化合物糖基化，或可為未經糖基化。多肽亦可包含原始甲硫胺酸胺基酸殘基（在位置屮。本發明之新穎糖蛋白產物包括具有原始結構構形者，其充分複製天然生成（例如人類）促紅血球生成素之構形，以允許擁有其一或多種生物學性質，及具有一般碳水化合物組成，異於天然生成（例如人類）促紅血球生成素之組成。、尿激酶（Abbokinase)及其他用以控制凝 π抗蛋白酶π與π蛋白酶-抑制劑”術語於與受體具反應性之合成、半合成、 ”肝素”與”溶解血栓劑"術語，係包括抗凝血因子，譬如肝素、低分子量肝素、組織血纖維蛋白溶酶原活化劑（tpa) 血因子。可交換使用，且適用重組、天然生成或非天然生成、可溶性或經固定劑，或充作抗體、酵素或核酸。其包括會調制體液免疫回應之受體，會調制細胞免疫回應之受體（例如Τ-細胞受體）及會調制神經病回應之受體（例 91760 -44- 200529869 如麴胺酸Sa受體、甘胺酸受體、[胺基丁酸（GABA)受體）。其包括細胞活素受體（牵涉關節炎、敗血性休克、移植排斥、自身免疫性疾病及炎性疾病），與呈現抗原對細胞毒性τ_ 細胞受體及/或Τ-輔助細胞受體有關聯之主要組織適應 (MHC)種類I與II文體（牵涉自身免疫疾病）及凝血酶受體（牵涉凝血、心血管疾病）。亦包括會辨識自體抗原之抗體，譬如牵涉自身免疫病症之抗體，及會辨識病毒（例如ΗΙγ單純癌療病毒）及/或微生物抗原之抗體。 ”激素”與”生長因子”術語係包括激素釋放激素，譬如生長激素、甲狀腺激素、甲狀腺釋放激素（trh 釋放激素（_)、促黃體生成《、促黃體生成激素-釋放 ^ ^ (LHRH ^ ^ ^ ^ ^ #1 ^ # ^ #J , # . # (leupr〇1.de) 、疊爾提瑞斯_疏）、哥“林(g_din)、那發瑞林(nafareiin) 、丹那唑（danazol)等），來自天然、人類、豬、牛、羊、合成、半合成或重組來源。其亦包括生長激素釋放抑制因：類似物，譬如八瑞歐肽（〇_tide)(Sand〇statin)。在此生物治療劑種類中之其他藥劑，包括供子宮收縮（例如催產素）、多尿病（例如血壓加壓素）、唁中性白血球減少症（例如GCSF)用之藥劑’供呼吸病症（例如超氧化歧化酶）、RDS(例如界面活性劑，視情況包括脫輔基蛋白)用之藥劑，及其類似物。 ”酵素”-詞包括重組脫氧核糖核酸酶，譬如蛋白酶(例如絲胺酸蛋白酶，譬如胰蛋白酶與凝血酶）、聚合酶（例如腿聚合酶、隱聚合酶）、逆轉錄酶及激酶，牽涉關節炎、骨質_、炎性疾病、糖尿病、過敏反應、 91760 -45- 200529869 器官移植排斥、致癌基因活化作用（例如三氫葉酸鹽還原酶）、訊息轉導、自體循環調節、轉錄、DNA複製及修復之酵素。 ”核酸”一詞包括含有天然或非天然生成核甞之DNA或欣八 4任何片段，或能夠經由互補氫鍵專一性地結合至其他核酸或寡核苷酸之其他類蛋白質劑，且亦能夠結合至非核酸配位體。疫遍π —同係指刺激體液與細胞免疫回應之治療組合物，播淪疋經單離，或經過抗原呈現細胞，譬如經活化之樹突細胞，其係能夠活化Τ-細胞，以產生多價細胞免疫回應，以抵抗所選定之抗原。此有效抗原呈現細胞係經由使細胞於活體外曝露至多肽複合物而被刺激。多肽複合物可包含樹突細胞結合蛋白質與多肽抗原，但較佳情況是，此多肽 k原係為無論是組織專一腫瘤抗原或致癌基因之基因產物。但是，應明瞭其他抗原，譬如病毒抗原，可使用於此種組合中，以產生免疫刺激回應。在另一項較佳具體實施例中’形成免疫刺激多肽複合物一部份之樹突細胞結合蛋白質係為GM-CSF。在進一步較佳具體實施例中，形成此複合物一邵份之多肽抗原，係為腫瘤專一抗原前列腺酸磷酸酯酶。在又其他較佳具體實施例中，多肽抗原可為任一種致癌基因產物肽抗原。多肽複合物亦可在樹突細胞結合蛋白質與多肽抗原之間含有鏈結肽。多肽複合物可包含樹突細胞結合蛋白質，以共價方式連結至多肽抗原，此種多肽複合物較佳係製自樹突細胞結合蛋白質，較佳為GM_CSF與多 91760 -46- 200529869 肽抗原。多肽抗原較佳為組織專一腫瘤抗原，譬如前列腺酸磷酸酯酶（PAP)，或致癌基因產物，譬如Her2、P21RAS及p53 ，但是，其他具體實施例，譬如病毒抗原，亦在本發明之範圍内。 ”免疫球蛋白”一詞係涵蓋涉及宿主防禦機制之多肽寡核苷酸，譬如被一或多個基因載體編碼與給碼，使核酸之不同結合部份基團在宿主防禦細胞中共概，或偶合經表現之載體以桌助治療人類或動物病患。被包含在此多肽種類中之藥劑，包括IgG、IgE、lgM、IgD，無論是個別地或彼此併用。其他適當治療劑包括親腎上腺皮質激素、表皮生長因子、血小板衍生之生長因子（PDGF)、催乳激素、粒化素、促黃體生成激素釋放激素（LHRH)催動劑、LHRH拮抗劑、胃泌素、四肽胃泌素、五肽胃泌素、尿抑胃激素、分泌活素、腦啡肽、腦内啡、血管收縮素、腫瘤壞死因子（TNF)、神經生長因子⑼证）、肝素酶、骨頭形態發生蛋白質（BMP)、hANP、似胰高血糖激素肽（GLIM)、間白血球活素_n叨七）、veg_f 、重組B型肝炎表面抗原（rHBsAg)、腎浩素、血管舒緩激肽才千菌肽夕粒菌素、黏菌素、短桿菌路肽、滅革蘭菌素，及其合成類似物、改質物及具藥理學活性之片段，酵素、細胞活素、抗體及疫苗。葡聚醣微粒子一詞係包括未經取代之葡聚醣微粒子與經取代之葡聚醣微粒子。例如，經取代之葡聚醣微粒子係包括被迺當基團譬如甲基取代之葡聚醣，至高達不會妨礙葡聚醣微粒子結晶化作用之程度，譬如至高達3.5或較低百分比 91760 -47- 200529869 之分枝。平均微粒子直徑較佳為約0.5至約5微米，更佳為約 1至約2微米。再者，雖然多孔性未經交聯之葡聚醋微粒子，譬如結晶微粒子，係較佳地與治療劑-起使用，但可替代地使用其他適當有機或無機微粒子，譬如其他聚合體微粒子，包括多醣、PLA、歸、PMMA、聚醯亞胺、聚酉旨、丙晞酸酿、丙烯醯胺、醋酸乙烯酯或其他聚合物質，生物物質粒子，嬖如海蕩酸鹽與細胞，或無機粒子，譬如梦石、玻璃或鱗酸轉。較佳微粒子係為生物可降解。較佳係使用多孔性微粒子。微粒子最佳係具有足夠多孔性，以包含治療劑於孔隙中，且提供治療劑自孔隙之定時釋出。換言之，治療劑係隨著時間自孔隙釋出，譬如在超過5分鐘内，較佳係在超過 30分鐘内，最佳係在超過一小時内，譬如在數小時至數天内，而非全部立即。因此，粒子物質、孔隙大小及孔隙體積可以所使用治療劑之類型，為輸送所必須治療劑之體積，治療劑之輸送期間，其中治療劑將被輸送之環境，及其他因素為基礎作選擇。因此，於本發明之一項較佳方面，治療劑係至少部份位於多孔性微粒子之孔隙中。治療劑較佳係未被包覆在微粒子中（意即，微粒子未充作其中治療劑核心在殼層内部之殼層），且未被黏附至微粒子之表面。但是，若需要，則除了位於彳政粒子 < 孔隙中以外，一部份治療劑亦可被包覆在微粒子殼層中，及/或黏附至微粒子表面。治療劑定位在孔隙中，係提供治療劑之最適宜定時釋出。對照上而言，黏附至 91760 -48- 200529869 u粒子表面〈治療劑經常太快速地被釋出，而被包覆在微 ' 、σ療^經常不會足夠快地被釋出，然後當微粒子曰崩解時王# 乂即釋出。在兩相系統中，至少奶％治療劑車y係么於核〜中，被包含微粒子之壁或殼層所圍繞。 I·製造方法 u粒子可、I由任何適當方法形成。較佳係在微粒子形成後 ::微粒子與治療劑合併。目此，微粒子，譬如結晶葡聚醣：粒子’係藉任何適當方法形&，然後將治療劑與微粒子耩任何適當方法合併。對照上而言，在一些先前技藝方法中’係將治療劑包覆至微粒子殼層中，其方式是提供粒子先質物質與治療劑至溶液中，然後使先質物質譬如單體或寡聚物結晶或交聯’以包覆治療劑核心於微粒子殼層中。治療劑較佳係在微粒子形成後，被提供至多孔性微粒子之孔隙中。因此，係首先形成多孔性微粒子，然後將治療劑提供至含有微粒子之溶液中，以允許治療劑渗透至微粒子之孔隙中田然，於此方法中，一些治療劑亦可變成黏附至微粒子之表面。因此，一種製造未經交聯多孔性結晶葡聚醣微粒子之方法，係包括製備葡聚醣溶液，譬如葡聚醣水溶液，進行結晶方法，以形成結晶多孔性葡聚醣微粒子，及若需要則自溶液單離結晶多孔性葡聚醣微粒子。然後，使治療劑渗透至微粒子之孔隙巾’其方式是提供治療劑至含有微粒予之結晶化作用溶液中’或藉由提供經單離之微粒子與治療劑至第二種溶液中’譬如第二種水溶液。例如，結晶葡聚：微 91760 -49- 200529869 粒子可在第—種低分子量葡聚醣水溶液中形成，孽如2至厕4聚醣溶液。然後，自第一種溶液中移除微粒子，接者置於具有較高分子量葡聚酷之第二種葡聚醣水溶液中，譬如40至5_a溶液，例如4〇至75伽溶液。第=種溶液可包含兩相系統之第一相，然後與第二相合併，譬如含有治療劑之PEG相。一種類似方法可與其他多孔性微粒子一起使 ./、中/口療%"系在多孔性微粒子藉由任何適當微粒子形成方法（包括但不歸結晶化作用）形成後，接著渗透至微粒子之孔隙中。組合物之成份，譬如胰島素、微粒子及一或多個水相，可以任何適當順序相繼地或同時合併。微粒子較佳係藉自組方式，製自未含有有機溶劑與有機反應促進劑之溶液，該促進劑會留下有機殘留物於微粒子中因此，例如葡聚醣微粒子較佳係藉自組方式製自葡聚醣水溶液。但是，若需要則亦可使用有機溶劑及/或有機反應促進劑。於此情況中，微粒子可在後續使用之前經純化，以移除有害之有機殘留物。如上文所述，具有第一相核心與第二相壁或殼層之膠囊結構’可於活體内或活體外製自兩相組合物。此組合物可為乾燥粉末，譬如經凍乾並以粉末或多孔性濾餅儲存。當組合物準備被投予哺乳動物時，其係經水解並以經口方式或藉由注射投予哺乳動物。包含微粒子與治療劑之組合物，當此組合物經配藥以供注射時，較佳係為可流動膠態系統。可流動膠態系統之實例包括乳化液與懸浮液，其可使用一般規格注射器或針頭， 91760 -50- 200529869 注入哺乳動物中，而無過度困難。對昭上而耳，_些先前技藝組合物係包含治療劑，在葡聚醣水凝膠中或在；聯葡聚醣基質中。葡聚醣水凝膠與交聯葡义蝶卷貝，若未經特別地製，備，並非可流動組合物。於本發明之另—較佳方面，微粒子係包含會黏著至哺乳動物黏膜之微粒子。黏著性微粒子較佳係為上述之多孔性微粒子。這進一步改良治療劑之有效輸送。

於本發明之另一較佳方面，微粒子係包含以下微粒子，其表面已經特殊改質以提高治療劑對微粒子表面之黏著性，並使治療劑之輸送達最佳化。微粒子表面可含有增加治療劑黏著性之任何適當改質。

本發明之前述說明文已被提出，以達說明與描述之目的。並不意欲無遺漏或將本發明限制於所揭示之精確形式，且修正與變異在明白上文陳述内容之後均為可能，或可由本發明之實施而獲得。附圖與說明係經選擇，以闡釋本發明 <原理及其實際應用。本發明之範圍係意欲被隨文所附之申凊專利範圍及其等效事物所界定。於本專利說明書中所引用之所有公報與專利申請案及專利 ’均以其全文併於本文供參考。【圖式簡單說明】圖1為自發性地在具有MW70.0kDa之葡聚醣之55_0% (W/W) 水落液中形成之結晶葡聚醣微粒子之照片。圖2A為圖1中所示結晶葡聚醣微粒子之橫截面照片。圖2B為圖2A中所示微粒子之橫截面照片。可見及微粒子 91760 -51- 200529869 之微孔結構。圖3為結晶葡聚醣微粒子之聚集體之照片。圖4為以皮下方式注射之植入物之照片，其包含藉由圖3 所示之結晶葡聚醣微粒子。圖5為肌内注射之植入物之照片，其包含藉由圖3所示之結晶葡聚醣微粒子。圖6A、6B及6C為具有經注射植入物之老鼠肌肉之橫截面照片，該植入物包含結晶葡聚醣微粒子（個別為注射後第i 、第4及第28天）。圖7A與7B為具有經注射植入物之老鼠肌肉之橫截面照片，遠植入物包含結晶葡聚瞻微粒子（於注射後180天）。 .圖8八，86,8(：，80,8艮8?及80為具有經注射植入物之老鼠皮膚之橫截面照片，該植入物包含結晶葡聚醣微粒子（個別為注射後第1天、第4天、第28天、18〇天、ι8〇天、1年及1年）。圖9為在肌間注射後第14天，螢光標識巨分子自包含結晶葡聚醣微粒子之植人物缓慢釋出，進人老鼠肌肉組織中^ 照片。圖10為在質粒DNA自植人物釋出之後，報告子基因在老鼠肌肉組織中表現之照片。圖11為PEG水溶液在含有JSM祕一可圖1所不結晶葡聚醣微粒子之葡聚醣(MW500kDa)水溶液中之乳化液之照片。圖12為含有圖1所示結晶轺臀聽献粒子之葡聚醣（MW 50C _水溶液在PEG水溶液中之乳化液之照片。圖13為PEG水溶液在含有圖1 … q 1所不結晶葡聚醣微粒子之有 91760 -52 - 200529869 聚醣（MW 500 kDa)水溶液中之乳化液之肌内注射照片。圖14為PEG水溶液在含有圖1所示結晶葡聚醣微粒子之葡聚醣(MW 500 kDa)水溶液中之乳化液之皮下注射照片。圖15A與15C係概要地說明不同類型之粒子與液相，在含水兩相系統中之分配行為。圖15B為以兩相系統為基礎之植入物結構之橫截面照片。圖16A、16B、16C及16D為HeLa細胞與結晶葡聚醣微粒子在兩相系統中分配之照片。圖17與18係概要地說明根據本發方法。明具體實施例之細胞治療圖19 劑輸送方:及21係概要地卿據本發明具體實施例之治療圖22A與22B為各種含胰島素組合物對血糖濃度之圖表。 I 【囷式代表符號說明】間之相對正規化 10 粒子1 12 粒子2 14 粒子3 液相1 液相2 19 儲存容器 2〇液相系統 22 液相系統 30 區域 91760 -53- 200529869 32 區域 34 殼層 40 植入物 42 細胞 44 葡萄糖 46 膜島素 48 血液 50 組織 52 腸 53 哺乳動物 54 口服組合物 56 注射器 91760

Claims

200529869 拾、申請專利範園： 1.:種可流動醫藥組合物，纟包含生物可降解與生物可相容成份’欲被提供於哺乳動物身體内或其上，且適合形成生物可p牛解、生物可相容、三次元結構化物體，此組合物包含多相可流動膠態系統與治療劑，以在該身體中或其上提供局部或系統治療作用。 2. -種欲被提供於哺乳動物身體内或其上之㈣組合物，其包含：第一相；第二相；第-種分子或分子聚集體，其係適合優先地分配至第一相中；及其係適合優先地分配至第第二種分子或分子聚集體，二相中；其中第二種種分子或分鄰近第當組合物被提供至該哺乳動物身體中時，分子或分子聚集體係自組一個壁，子聚集體。其中膠態系統為含有 3·根據申請專利範圍第1項之組合物微粒子之液體懸浮液或乳化液。 4·根據申請專利範圍第2項之組合物，其f 第一種分子或分子聚集體包含治療劑；第二種分子或分子聚集體包含微粒子· 該壁包含微粒子殼層，環繞含有治療劑之核心。 5.根據申請專利範圍第3或4項之組合物，其中微粒子為多 91760 200529869 孔性微粒子，且其中知人私也拉丄、、、甲、、且口物係精由汪射提供至哺乳動物身體中。 6. 根據申請專利範圍第5項之細人4 甘间示J貝芡組合物，其中多孔性微粒子為聚合體微粒子。 7. 根據中請專利範園第6項之組合物，纟中多孔性微粒子為結晶葡聚醣微粒子，具有平均直徑範圍從〇5至5〇微米。 8·根據申請專利範圍第丨至7項中任一項之組合物，其中組合物為含有彳政粒予混合物之液體兩相系統。 9. 根據申請專利範園第8項之組合物，其中兩相系統，當被提供於活體内時，係形成膠囊結構，此膠囊結構包含第一相核心，與圍繞該核心之第二相殼層。 10. 根據申請專利範圍第9項之組合物，其中治療劑係選擇性地分配至核心液相中，而微粒子係選擇性地分配至殼層液相中。 11·根據申請專利範圍第8至10項中任一項之組合物，其中治療劑係選自包括肽、蛋白質、核酸、病毒、細胞及其組合。 12·根據申請專利範圍第9至11項中任一項之組合物，其中核心包含PEG水相與選擇性地經分配之胰島素，且殼層包含葡聚醣水相與選擇性地經分配之結晶葡聚醣微粒子。 13.根據申請專利範圍第2項之組合物，其中：組合物包含可流動組合物，或經乾燥組合物，其可藉由水合作用賦與可流動性；第一種分子或分子聚集體係選自包括微粒子、巨分子、細胞、微脂粒、DNA、質粒及蛋白質；及 91760 200529869 第二種分子或分子聚集體係選自包括微粒子、巨分子、細胞、微脂粒、DNA、質粒及蛋白質。 14. 一種於活體内形成生物可相容植入物之方法，其包括· 形成可流動醫藥組合物，其包含多相膠態系統與治療劑；注射該可流動醫藥組合物至哺乳動物身體中；及在哺乳動物身體中，藉自組形成生物可降解且生物可相容之結構化植入物。 15· —種提供醫藥組合物於哺乳動物身體内或其上之方法，其包括：提供醫藥組合物，其包含·· 第一相；第二相；第一種分子或分子聚集體，其係適合優先地分配至第一相中；及第二種分子或分子聚集體，其係適合優先地分配至第二相中；及提供該醫藥組合物至哺乳動物身體内或其上，當組合物被提供至該哺乳動物身體内或其上時，其中第二種分子或分子聚集體係自組一個壁，鄰近第一種分子或分子聚集體。 16.根據中明專利範圍第14項之方法，其中膠態系統為含有极粒子之液體懸浮液或乳化液。 17·根據申請專利範圍第15項之方法，其中： 91760 200529869 第一種分子或分子聚集體包含治療劑；第二種分子或分子聚集體包含微粒子· 孩壁包含微粒子 18·根據申請專利範圍第16或17項之方法，甘Α ^ …心々决，其中微粒子為聚合體微粒子，且哺乳動物身體包括人類或動物身體。 19_根據申請專利範圍第18項之方法，其中聚合體微粒子為多孔性微粒子。见根據中請㈣範圍第19項之方法’其中多孔性微粒予為結晶葡聚醣微粒子，具有平均直徑範圍從〇·5至5 〇微米。 21_根據申請專利範圍第14至20項中任一項之方法，其中組合物為含有微粒子之兩相系統。 22. 根據申請專利範圍第21項之方法，其中兩相系統，當被提供於活體内時，係形成膠囊結構，此膠囊結構包含第一相核心，與圍繞該核心之第二相殼層。 23. 根據申請專利範圍第22項之方法，其中治療劑係選擇性地被分配在核心中，而微粒子係選擇性地被分配在殼層中。 24·根據申請專利範圍第21至23項中任一項之方法，其中治療劑係選自包括肽、蛋白質、核酸、病毒及細胞。 25·根據申請專利範圍第22至24項中任一項之方法，其中核心包含PEG水相與選擇性地經分配之胰島素，而殼層包含葡聚醣水相與選擇性地經分配之結晶葡聚醣微粒子。 26.根據申請專利範圍第15項之方法，其中：組合物包含可流動組合物，或經乾燥組合物，其係在 91760 200529869 被提供至哺乳動物身體内之前，藉由水合作用，賦與可流動性；第一種分子或分子聚集體係選自包括微粒子、巨分子、細胞、微脂粒、DN A、質粒及蛋白質；及第二種分子或分子聚集體係選自包括微粒子、巨分子、細胞、微脂粒、DNA、質粒及蛋白質。 27·-種可流動組合物’纟包含生物可相容且生物可降解微粒子與標識物在流體中之膠態懸浮液或乳化液。 28·根據申請專利範圍第27項之組合物，其中：微粒子包含結晶葡聚醣微粒子；標識物包含榮光巨分子，當組合物位於哺乳動物身體中時，其係可控制地自組合物釋出。 29. 根據中請㈣範圍第27項之組合物，其切㈣浮液包含膠囊’其具有包含選擇性地經分配之標識物之第一相殼層’與包含選擇性地經分配之微粒子之第二相核心。 30. —種於活體内形成生物可相容植入物之方法，其包括：提供組合物，其包含生物可* ^日# G 口玍籾j相谷且生物可降解微粒子與標識物在流體中之膠態懸浮液或乳化液；及引進該醫藥組合物至哺乳動物身體中。 31·根據申請專利範圍第3〇項之方法，其中：微粒子包含結晶葡聚醣微粒子；結晶葡聚醣微粒子係與喷乳動物身體為生物可相容，且在哺乳動物身體内為生物可降解，·及標識物包含螢光巨分子。 91760 200529869 32.根據申請專利範圍第3〇項之方法，其中當懸浮液被引進哺乳動物身體内時，該膠態懸浮液係自組成為膠囊，具有包含選擇性地經分配之標識物之第一相核心，與包含選擇性地經分配之微粒子之第二相殼層。 33· —種細胞治療方法，其包括在有需要之哺乳動物中提供被包圍在結晶葡聚醣微粒子膠囊中或與其外部表面接觸之細胞。 34·根據申請專利範圍第33項之方法，其中：細胞係被包圍在膠囊中，以致細胞係包含膠囊之核心 ’而微粒子係包含包圍該核心之殼層；及滅:層對氧與營養物為多孔性，但不可透過免疫系統細胞。 35. 根據申請專利範圍第34項之方法，其中細胞包括會產生胰島素之細胞，其係產生並釋出胰島素，經過膠囊進入哺乳動物血液中，以降低血糖，以回應血糖滲透至膠囊中。 36. 根據申請專利範圍第34項之方法，其中細胞包括並非來自正被投予該組合物之哺乳動物之細胞。 37·根據申請專利範圍第33項之方法，其中：細胞係接觸膠囊之外部表面；且細胞係包含正被投予該組合物之哺乳動物之細胞。 38. —種骨頭移植替代物，其包含多孔性結晶葡聚醣微粒子。 39·根據申請專利範圍第38項之骨頭移植替代物，其進一步包含治療劑，位於微粒子之孔隙中，其係在身體之特殊 91760 200529869 位置上提供骨質形成。 40.-種形成骨頭移植替代物之方法，其包括提供多孔性結晶葡聚醣微粒子至哺乳動物身體中之骨頭移植位置，並形成包含多孔性結晶葡聚醣微粒子之骨頭移植替代物。礼根據申請專利範圍第40項之方法，其進一步包括：製備多孔性結晶葡聚醣微粒子在第一個液相中之懸浮液；製備第二種微粒子在與第一個液相不可溶混之第二個液相中之懸浮液；製備乳化液，其中第二個液相為連續相，而第一個液相為分散相；及注射該乳化液至哺乳動物身體内。 42·根據申請專利範圍第41項之方法，其中：第二種微粒子包含陶瓷微粒子；且在身體之特殊位置上提供骨質形成之治療劑，係位於夕孔性結晶葡聚膽微粒子之孔隙中。 43. —種方法，其包括：提供結晶葡聚醣微粒子；及在微粒子已被結晶之後’將治療上有效量之胰島素盘結晶葡聚瞻微粒子合併在溶液中’以形成胰島素與結2 葡聚醣微粒子之懸浮液。、" 44.根據申請專利範圍第43項之方法，其淮—本a上 % 一步包括對哺乳動物投予該懸浮液。 45·根據申請專利範圍第44項之方法，其中： 91760 200529869 結土 5微米之晶葡聚酷微粒子包含具有平均直徑為〇·5 微粒子；機溶劑中形成微粒子；提供微粒子之步驟係包括在非有溶液包括水溶液；及哺乳動物包括人類。 46. 根據中請專利範圍第44項之方法，其進__步包括乾燥該懸浮液，以提供包含結晶葡聚醣微粒子與胰島素之組= 物。 47. —種製造未經叉聯結晶多孔性葡聚醣微粒子之方法，其包括：〃 ⑷製備缺乏有機溶劑之葡聚醣水溶液； ⑼在溫度高於室溫下進行結晶程序，以形成葡聚醣微粒子；及 ⑷自該溶液單離未經交聯之結晶多孔性結晶葡聚醣微粒子。 48·根據申請專利範圍第47項之方法，其中：葡聚醣溶液包含具有分子量為2至200 kDa之葡聚醣；及該結晶程序係在40至99°C之溫度下進行。 49·根據申請專利範圍第48項之方法，其中：微粒子係自發性地由該溶液形成；葡聚醋溶液包含具有分子量為20至75 kDa之葡聚醋；及結晶程序係在40至70°C之溫度下進行。 50.根據申請專利範圍第47項之方法，其進一步包括將微粒子與胰島素合併。 91760 200529869 51·種製^在彳政粒子孔隙中含有治療劑之多孔性結晶葡聚醣微粒子之方法，其包括·· 才疋供包含已形成之多孔性結晶葡聚醣微粒子之懸浮液 ;且提供治療劑於此懸浮液中，以致使治療劑滲透至多孔性微粒子之孔隙中。 52·根據申請專利範圍第51項之方法，其中提供懸浮液之步驟係包括：製備葡聚醣水溶液；進行結晶程序，以形成多孔性結晶葡聚醣微粒子；自該溶液單離微粒子；及提供微粒子至包含治療劑之膠態系統中。 53·根據申請專利範圍第52項之方法，其中·· 治療劑包含胰島素；且膠態系統包含懸浮液’其包含胰島素與微粒子。

54. —種組合物，其包含：胰島素；與多孔性結晶葡聚醣微粒子；子a併於組合物中之前其中微粒子係在胰島素與微粒形成。 55.根據申請專利乾圍第54項之組合物，甘士 λ 口物，其中組合物包含流動膠態組合物，而微粒子包Α复女τ ^ 。具有平均直徑為0.5 : 微米之微粒子。 56·根據申請專利範圍第54項之組合物，，、平胰島素係位於 91760 200529869 結晶葡聚醣微粒子之孔隙中，但未被包覆在各微粒子之内部。 57·根據申請專利範圍第54項之組合物，其中胰島素係選擇性地經分配在第一個聚合體相中，而微粒子係選擇性地經分配在第二個聚合體相中，以致組合物係在引進哺乳動物身體内時形成結構化植入物。 58· —種組合物，其包含：胰島素；第一種聚合體；第二種聚合體，其係與第一種聚合體不相容；及微粒子。 59·根據申請專利範圍第58項之組合物，其中組合物包含可流動膠態組合物，而微粒子包含具有平均直徑為〇5至$ 微米之結晶葡聚醣微粒子。 6〇·根據申請專利範圍第59項之組合物，其中第一種聚合體包含葡聚醣，而第二種聚合體包含PEG。 61·根據申請專利範圍第6〇項之組合物，其中胰島素係選擇 2地經分配在PEG相中，而微粒子係選擇性地經分配在葡聚醣相中，以致組合物在引進哺乳動物身體内時，係形成包含PEG相核心與葡聚醣相殼層之結構化植入物。 62·-種在哺乳動物中降低血糖之方法，其包括對該哺乳動物提供治療上有效量之包含結晶葡聚軸粒子與騰島素之組合物’以降低該哺乳動物之血糖，其中微粒子係在胰島素與微粒子合併於組合物中之前形成。 91760 -10- 200529869 63.根據申請專利範圍第62項之方法，其中組合物包含可流動膠態組合物’而微粒子包含具有平均直徑為〇5至5微米之結晶葡聚醣微粒子。 64·根據申請專利範圍第63項之方法，其中·· 組合物包含兩相組合物，其包含葡聚醣相與pEG相；胰島素係選擇性地經分配在PEG相中，而微粒子係選擇性地經分配在葡聚醣相中；及組合物係在引進哺乳動物身體内之後，形成包含peg 相核〜與葡聚醣相殼層之結構化植入物。 65_根據申請專利範圍第64項之方法，其進-步包括以接受該組合物之哺乳動物身體為基礎，控制殼層之厚度，以控制胰島素自植入物之釋出。 66.根據中請專利範圍第62項之m中組合物係被提供至患有糖尿病之人類，以降低該人類中之血糖濃度。 I種在哺乳動物中降低血糖之方法，其包括對該哺乳動物注射治療上有效量之包含結晶葡聚醣微粒子與騰島辛《組合物’以降低該哺乳動物之血糖，其中微粒子係在胰島素與微粒子合併於組合物中之前形成。 68.根據申請專利範圍第67項之方法，其中組合物包含可流動膠態组合物，而微粒子包含具有平均直徑為〇5至5微米之結晶葡聚醣微粒子。 69·根據申請專利範圍第68項之方法，其中：組合物包含兩相組合物，其包含葡聚酷相與pEG相；胰島素係選擇性地經分配在peg相中，而微粒子係選 91760 200529869 擇性地經分配在葡聚醣相中；及組合物係在注入哺乳動物牙内乏後，形成包本PEG 相核心與葡聚醣相殼層之結構化植入物。 ° 70.根據中請專利範圍第69項之方法，其進_步包括以接與孩組合物《哺乳動物身體為基礎，控制殼層之厚度，= 控制騰島素自植入物之釋出。 71·根據申請專利範圍第67靖之太 s…… Ά万去，其中組合物係被提供至患有糖尿病之人類，以陁你二，

Λ以降低孩人類中之血糖濃度。 72. —種經配藥之醫藥組合物，、、、匕口、、、口日日葡聚醣微粒子及治療上有效量之胰島素，其中組合物係經配藥以供注射至人類’且微粒子係在胰島素與微粒子合併於組合物中之前形成。 73. 根據申請專利範圍第72項之組合物，其中：組合物包含可流動膠態組合物；且

微粒子包含具有平均直徑為〇.5至5微米之結晶葡㈣微粒子。 74·根據申睛專利範圍第乃項之組合物，其中：、、且a物包含兩相組合物，其包含葡聚醣相與pEG相；胰島素係選擇性地經分配在PEG相中，而微粒子係選擇性地經分配在葡聚醣相中；及組合物係在注入人類身體内之後，形成包含pEG相核心與葡聚醣相殼層之結構化植入物。 75· —種經配藥之醫藥組合物，其包含結晶葡聚醣微粒子及治療上有效量之第一種胰島素，其中組合物係經配藥以 91760 -12- 200529869 對哺乳動物注射，且當被注入哺乳動物中時，組合物之功效期間係比未使用該微粒子之相同劑量相同第一種胰島素在哺乳動物中之功效期間較長至少30%。 76·根據申請專利範圍第75項之組合物，其中·_ 組合物包含可流動膠態組合物，· 微粒子包含具有平均直徑為〇.5至5微米之結晶葡聚醣微粒子；及、微粒子係在第一種胰島素與微粒子合併於組合物中之前形成。 77‘根據申請專利範圍第76項之組合物，其中：组合物包含兩相組合物，其包含葡聚醋相與觸相’· 第一種騰島素係選擇性地經分配在舰相中，而微粒子係選擇性地經分配在葡聚醣相中；及組合物係在注入哺乳動物身體内之後，形成包含PEG 相核心與葡聚醣相殼層之結構化植入物。 78·根據申請專利範圍第乃項之組合物，其中·· 當被注入哺乳動物内時， f組合物 <功效期間為至少24 小時；且當被注入哺乳動物内時，八口物乏功效期間係比未会用該微粒子之相同劑量相# 相冋弟一種胰島素在哺乳動物之功效期間較長至少1〇〇%。 1 79· —種在哺乳動物中降低血糖之、方法’其包括對該哺乳重物注射治療上有效量之包本 3 ' 、。、、、口日曰匍聚醣微粒子盥第一满胰島素之組合物，以降低^/、低礅哺乳動物之血糖，其中組合 91760 -13. 200529869 物在該哺乳動物中> # 4 T <力效期間，係比未使用該微粒子之相同劑量相同第一種I主+ 種騰島素在哺乳動物中之功效期間較長至少30%。 80.根據申請專利範圍第79項之方法，其中：組合物包含可流動膠態組合物；微粒子包含具有平均直徑為〇5至5微米之結晶葡聚膽微粒子；及微粒子係在第一稀陆a. jb 種騰島素與微粒子合併於組合物中之前形成。 81·根據申請專利範圍第8〇項之方法，其中· 口物。口兩相組合物，其包含葡聚醣相與p阳相；夷島素係达擇性地經分配在pEG相中，而微粒子係選擇性地經分配在葡聚醣相中；及組合物係在注入哺I丨私4 礼動物身f豆内之後，形成包含pEG 相核心與葡聚醣相殼層之結構化植入物。 82.根據申請專利範圍第乃項之方法，其中· 當被注入哺乳動物内時，纽合物之功效期間係為 24小時；且組合物在哺乳動物中> # % a 中'^力效期間係比未使用該微粒子之相同劑量相同第一種腌I 夷島素在哺乳動物中之功效期間較長至少100%。 83· —種在哺乳動物中降俏、此降低血糖《万法’其包括對該哺乳動物經口投予治療上右诗曰、& a #、 T疋匕含結晶葡聚醣微粒子盥胰島素之組合物，以降低該哺乳動物之血糖。 - 91760 -14- 200529869 84.根據申請專利範圍第83項之方法，其中組合物包含具有平均直徑為約〇·5至約5微米之結晶葡聚醣微粒子與胰島素之含水懸浮液。 85·根據申請專利範圍第84項之方法，其中該方法包括對需要降低血糖之人類經口投予該懸浮液。 86. —種在有需要之人類中治療糖尿病之方法，其方式是經口投予申請專利範圍第84項之懸浮液。 87·根據申請專利範圍第84項之方法，其中微粒子為多孔性微粒子，其係在添加胰島素至懸浮液中之前形成結晶，以致使胰島素被定位，與微粒子之表面接觸或在微粒子之孔隙中。 8«.根據申請專利範圍第84項之方法，其中治療上有效量之胰島素，係為每克懸浮液包含約1〇至約2,5〇〇 UI之人類重組胰島素。 89·根據申請專利範圍第84項之方法，其中在哺乳動物中之血糖濃度’係在投予此懸浮液至哺乳動物後6〇分鐘，被降低達至少5百分比。 90·根據申請專利範圍第89項之方法，其中在哺乳動物中之血糖濃度，係在投予此懸浮液至哺乳動物後6〇分鐘，被降低達約30百分比至約60百分比。 91. 根據申請專利範圍第84項之方法，其中在哺乳動物中之糖;辰度’係在投予此懸浮液至哺乳動物後分鐘，被降低達至少30百分比。 92. 根據申請專利範圍第84項之方法，其中在哺乳動物中之 91760 200529869 血糖濃度’係在投予此懸浮液至哺乳動物後，於範圍從3〇分4里至240分鐘之期間内，被降低達至少$百分比。 93·根據申請專利範圍第84項之方法，其中在哺乳動物中之血糖濃度，係在投予此懸浮液至哺乳動物後，於範圍從3〇分鐘至120分鐘之期間内被降低。 94.根據申請專利範圍第83項之方法，其中：組合物包含兩相組合物，其包含葡聚醣相與pEG相；胰島素係選擇性地經分配在PEG相中，而微粒子係選擇性地經分配在葡聚醣相中；及當組合物存在於哺乳動物身體中時，此組合物包含一種結構，其包含PEG相核心與葡聚醣相殼層或壁。 95· -種在哺乳動物中降低血糖之方法，其包括對該哺乳動物經口投予包含治療上有效量之胰島素與基質物質之組合物，以在投予此懸浮液至哺乳動物後6〇分鐘，降低該哺乳動物之血糖達至少5百分比。 96·根據申請專利範圍第96項之方法，其中組合物包含含水懸浮液，而基質物質包含具有平均直徑為約〇·5至約5微米之結晶葡聚醣微粒子。 97·根據申請專利範圍第97项之方法，其中微粒子為多孔性微粒子’其係在添加胰島素至此懸浮液之前形成結晶，乂致使胰島素係被疋#，與微粒子之表面接觸，或在微粒子之孔隙中。 98·根據申請專利範圍第96项之方法，其中此方法包括對需要降低血糖之人類經口投予該組合物。 91760 ~ 16 - 200529869 "·種在有需要之人類中治療糖尿病之方法，其方式是經口投予申請專利範圍第98項之組合物。 100.根據申請專利範圍第96項之方法，其中治療上有效量之騰島素係為每克懸浮液包含約10至約2,500 m之人類重組胰島素。 101·根據中請專利範圍第96項之方法，丨中在哺乳動物中之血糖濃度，係在投予組合物至哺乳動物後60分鐘，被降低達約30百分比至約6〇百分比。脱·根據中請專利範圍第96項之方法，纟中在哺乳動物中之血糖濃度，係在投予組合物至哺乳動物後30分鐘，被降低達至少30百分比。飢根據:請專利範圍第96項之方法，丨中在哺乳動物中之 t糖辰度’係纟投予組合物至哺乳動物I，於範圍從邠为知至120分鐘之期間内，被降低達至少3〇百分比。飢根據中請專利範圍第96項之方法，纟中在哺乳動物中之血糖濃度，係在投予組合物至哺乳動物後，於範圍從30 分鐘至240分鐘之期間内被降低。肌根據中請專利範圍第96項之方法，纟中組合物係呈片劑或膠囊形式。 1〇6·根據申請專利範圍第96項之方法，其中：組合物包含兩相組合物，其包含葡聚酷相與PEG相；胰島素係選擇性地經分配在PEG相中，而微粒子係選擇性地經分配在葡聚醣相中；及當組合物存在於哺乳動物身體中時，Λ組合物包含一 91760 -17- 200529869 種結構，其包含peg相核心與葡聚醣相殼層或壁。 1〇7·—種對哺乳動物投予懸浮液之方法，其包括對該哺乳動物經口投予結晶葡聚醣微粒子及治療上有效量之胰島素之含水懸浮液。 108·—種經配藥之醫藥組合物，其包含結晶葡聚醣微粒子及治療上有效量之胰島素，其中該組合物係經配藥，以供口服投藥至人類。 1〇9·根據申請專利範圍第109項之組合物，其中·· 結晶葡聚醣微粒子包含葡聚醣分子，藉由氫鍵、凡得瓦力或離子鍵固定在一起’且在葡聚醣分子之間實質上未具有共價鍵；及結晶葡聚醣微粒子係包含具有平均直徑為約〇·5至約5 微米之多孔性微粒子，且致使胰島素被定位，與微粒子之表面接觸或在微粒子之孔隙中。 110·根據申請專利範圍第1〇9項之組合物，其中組合物包含結晶葡聚醣微粒子及治療上有效量胰島素之含水懸浮液。 111·根據申請專利範圍第項之組合物，其中組合物係位於容器中，其量係經分配以供單次口服投藥至人類。 112·根據申請專利範圍第1〇9項之組合物，其中組合物係位於客器中，具有關於口服劑量投予人類之說明書，被列印於容器上或裝在容器中。 113·根據申請專利範圍第ι〇9項之組合物，其中組合物包含片劑’其包含藥學上可接受之載劑媒質、、結晶葡聚醣微粒子及治療上有效量之胰島素。 91760 -18 - 200529869 114. 根據申請專利範圍第109項之組合物，其中組合物包含膠囊，其包含藥學上可接受之殼層、結晶葡聚醣微粒子及治療上有效量之胰島素。 ’ 115. —種醫藥組合物套件，其包含： ‘ 結晶葡聚醣微粒子及治療上有效量胰島素之含水懸浮液，位於容器中；與關於組合物口服投予有需要人類之說明書。 116. —種醫藥套件，其包含：參第一種裝置，用於對哺乳動物經口投藥，以在投予此懸浮液至哺乳動物後60分鐘，降低哺乳動物之血糖達至少30百分比；與含有該第一種裝置之儲存容器。 117. —種片劑，其包含藥學上可接受之載劑媒質、結晶葡聚醋微粒子及治療上有效量之胰島素。 118. —種膠囊，其包含藥學上可接受之殼層、結晶葡聚醣微粒子及治療上有效量之胰島素。 φ 119. 一種吸入器，其包含：適合藉吸入對哺乳動物投予一劑量之醫藥組合物之容器；與一種醫藥組合物，其包含結晶葡聚醣微粒子及治療上有效量之胰島素，位於該容器中。 120. —種在哺乳動物中降低血糖之方法，其包括藉吸入對該哺乳動物投予治療上有效量之包含結晶葡聚醣微粒子與 ’ 胰島素之組合物，以降低哺乳動物之血糖。 91760 -19-