TW200524606A - Nucleoside compounds for treating viral infections - Google Patents

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200524606 九、發明說明： 有關申請案之前後參照 本案為2004年6月4曰申請之美國專利申請案序列號碼 10/861，090之部份連續申請案，該申請案根據35 U.S.C.§ 119(e)主張2003年10月27曰申請之美國臨時專利申請案序 列號碼60/5 15,153之利益。本案亦根據35 U.S.C.§119(e)主 張2004年8月1 8曰申請之美國臨時專利申請案序列號碼 60/602,815之利益。這些申請案全部併入本文供參考。 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於製備用於治療哺乳類至少部份涉及一種黃 病毒科病毒感染之特定化合物之方法。本發明亦關於這些 方法中所用之新穎中間物。 【先前技術】 參考資料 下列公開係以寫在右上角之號碼引據於本案中。 1. Giangaspero, et al.5 Arch. Virol. Suppl., 7:53-62(1993)； 2. Giangaspero, et al., Int. J. STD. AIDS, 4(5):300-302 (1993)； 3. Yolken, et al., Lancet, 1(8637):517-20(1989)； 4. Wilks，et al·，Lancet，1(8629):107(1989); 5. Giangaspero, et al., Lancet, 2:1 10(1988)； 6. Potts, et al., Lancet, 1(8539):972-973(1987)； 7. Cornberg，et al·，’’Hepatitis C: therapeutic perspectives，’’ Forum (Genova), 11(2):154-62(2001)； 96973.doc 200524606 8. Dymock, et al.5 Antivir. Chem. Chemother. 11 (2):79-96 (2000)； 9. Devos等人之國際專利案公開案WO 02/18404 A2，2002 年3月7曰公開； 10. Sommadossi等人之國際專利案公開案WO 01/90121， 2001年5月23曰公開； 11· Carroll，S.S·等人之國際專利案公開案WO 02057287， 2002年7月25日公開； 12. Carroll，S.S_等人之國際專利案公開案WO 02057425， 2002年7月25曰公開； 13. Roberts等人之美國專利申請案序列號碼10/861，090， 2004年6月4曰申請； 14. Roberts等人之美國專利申請案序列號碼10/861,311， 2〇〇4年6月4曰申請。 上述公開及申請案全部併入本文供參考如同各公開或申 請案特定及獨立顯示全部併入供參考之程度。 此技藝之狀態 黃病毒科病毒包含三屬：瘦病毒，黃病毒，及C肝炎病毒 (hepacivirus)。在這些屬中，黃病毒及C肝炎病毒為人類重 要的病原，流行於全世界。有38種黃病毒與人類疾病有關， 包括登革熱病毒，黃熱病病毒，及日本腦炎病毒。黃病毒 引起一範圍之急性熱病及腦炎及出血疾病。C肝炎病毒目前 感染約2至3%之世界人口，引起持續性感染，導致慢性肝 病，肝硬變，肝細胞癌，及肝衰竭。人類瘟病毒不如動物 96973.doc 200524606 痕病毒具有廣泛特徵。然而’血清學研究顯示人類相當大 暴露於瘟病毒。人類瘟病毒感染顯示於幾種疾病，包括， 但不限於’先天性腦傷害，嬰兒胃腸炎，及人類免疫不全 病毒（HIV)陽性病人之慢性腹萬。I-6 目前無抗病毒藥物用於預防或治療瘟病毒或黃病毒感 染。對於c肝炎病毒（即HCV)感染，干擾素a(IFN)目前在美 國為唯一核准之藥物。HCV為輸血後及散發性非A#B肝炎 之主要病因。HCV感染潛在於高比例可能多年無臨床徵候 群之慢性感染（及傳染性）帶原者。 目前唯一可接受之慢性HCV之治療為干擾素（IFN-a)，其 需要至少6個月之治療，及/或利巴維靈（ribavirin)，其可抑 制感染細胞中病毒複製’亦可使一些人之肝功能增強。 IFN-α屬於一種天然小蛋白質，具有特別之生物學作用， 如抗病毒，免疫調節，及抗腫瘤活性，係由大部份動物之 有核細胞對於幾種疾病，特別是病毒感染，反應所產生及 分泌。IFN-a為生長及分化之一種重要調節劑，影響細胞聯 絡及免疫控制。然而，HCV以干擾素治療具有有限之長期 功效，反應率為約25%。此外，HCV以干擾素治療通常具有 不良副作用’如疲勞’發燒’發冷，頭痛，肌痛，關節痛， 略微禿髮’精神影響及有關疾病，自體免疫現象及有關疾 病，及曱狀腺功能不良。 利巴維靈（Ribavirin)(l-p_D-呋喃核糖基-1h_i，2,4-三唾 -3-羧醯胺）為一種肉苷5’-單磷酸去氫酶（IMpdh)之抑制 劑，可增強IFN-α治療HCV之功效。儘管利巴維靈加入，以 96973.doc 200524606 目前干擾素-a(IFN)及利巴維靈之標準治療，大於5〇%之病 人並未去除該病毒。迄今，慢性C肝炎之標準治療已變為 PEG-IFN合併利巴維靈。然而，許多病人仍有顯著副作用， 主要與利巴維靈有關。利巴維靈引起1 〇_2〇%以目前推薦劑 量治療之病人顯著溶血，且該藥物形成畸形及具有胚胎毒 性。 使用其他方法對抗病毒。包括例如使用反意（antisense) 寡核苷酸或核糖酶（ribozymes)以抑制HCV複製。此外，直 接抑制HCV蛋白質及干擾病毒複製之低分子量化合物被視 為吸引人之控制HCV感染之方法。NS3/4A絲胺酸蛋白酶， 核糖核酸（RNA)螺旋酶，RNA-依賴性RNA聚合酶被視為新 藥之潛在目標。7,8

Devos等人9述及嘌呤及嘧啶核苷衍生物及其作為HCv RNA複製之抑制劑之用途。Sommadossi等人10述及1，，2,或 3’-經修釋之核苷及其用於治療感染HCV之宿主之用途。 Carroll等人u，12述及核苷作為rnA-依賴性RNA病毒聚合酶 之抑制劑。 最近，Roberts等人13，“揭示某些7_(2,經取代呋喃核 糖基）-4-胺基-5-(選擇性經取代之乙炔基）_吡咯并[2,3_y 嘧啶化合物具有對抗HCV之有效活性。這些參考資料全部 併入本文供參考。 【發明内容】

本發明係關於可用於治療哺乳類至少部份涉及—種黃病 毒科病毒之病毒感染之新穎化合物。本發明特別關於下式I 96973.doc 200524606 之化合物

其中 Y係選自一鍵’ -CH2-或; W，W1及W2各獨立選自氫及一種醫藥可接受之前藥；及 其醫藥可接受鹽或部份鹽。 在一個較佳具體實施例中，γ為氧。 在另一個較佳具體實施例中，w，W1及W2各獨立為氫或 一種醫藥可接受之前藥，選自醯基，氧基醯基，膦酸基， 填酸基’碟酸S旨’胺基膦酸基（phosphonamidate)，二胺基 磷酸基（phosphorodiamidate)，胺基磷酸（phosphoramidate) 單酯，環狀胺基磷酸基，環狀二胺基磷酸基，胺基磷酸二 酉旨’及-C(0)CHR2NH2 ’其中R2係選自氫，炫基，經取代之 烷基，芳基，經取代之芳基，環烷基，經取代之環烷基， 雜芳基，經取代之雜芳基，雜環基，及經取代之雜環基。 R2較佳為一種胺基酸之支鏈。較佳W為氫，或W1為氫，或 W為氫。更佳w及W1為氫，或W及W2為氫，或w1及W2為 氫。甚至更佳w，W1及W2為氫。 96973.doc -10- 200524606 在另一個較佳具體實施例中，W1及W2為氫，W為氫或一 種醫藥可接受之前藥，選自醯基，氧基醯基，膦酸基，磷 酸酯，磷酸基，胺基膦酸基，二胺基磷酸基，胺基磷酸單 酯，環狀胺基磷酸基，環狀二胺基鱗酸基，胺基磷酸二酯， 及-c(o)chr2nh2。 在一個特佳具體實施例中，W1及W2為氫，W係以下式表 不 · R3

0 R2

H OR1 其中r2如上述定義，R3為氫或烷基，R1係選自烷基，經取 代之烧基，芳基，經取代之芳基，環烷基，經取代之環烷 基’雜芳基，經取代之雜芳基，雜環，及經取代之雜環。 在一個較佳具體實施例中，R2係由L_胺基酸衍生。 在另一個特佳具體實施例中，W及W2為氫，W1係以下式 表示 R2 h2n

0 其中R2如上述定義。 本發明之一個特佳方面係關於下式π之化合物： 96973.doc -11- 200524606

其中 w係選自氫及一種醫藥可接受之前藥； 或其醫藥可接受鹽或部份鹽。 本發明之較佳化合物包括下表I所述者：

表I

96973.doc -12- 200524606

96973.doc 13- 200524606

7·(2’-甲基-3，-〇-L-丙胺酸酯 -β-D-吱喃核糖基）-4-胺基- 5-(乙 炔_1_基）-吡咯并[2,3_d]嘧啶 (22b) 本發明化合物作為抗病毒劑有效，或可用作製備抗病毒 劑之中間物，如本文中所述。 本發明亦關於醫藥組合物，包含一種醫藥可接受之稀釋 劑及治療有效量之一種本文中所述之化合物或一或多種該 化合物之混合物。 本發明另關於治療哺乳類至少部份涉及一種黃病毒科病 毒（如HCV)之病毒感染之方法，該方法包含對於已診斷具有 該病毒感染或有發展該病毒感染危險之哺乳類施用一種醫 藥組合物，包含一種醫藥可接受之稀釋劑及治療有效量之 一種本文中所述之化合物或一或多種該化合物之混合物。 在本發明之另一具體實施例中，提供治療或預防哺乳類 病毒感染之方法，其中本發明化合物係與治療有效量之一 或多種有效對抗HCV之劑合併施用。對抗HCV之有效劑包 括利巴、隹1 (ribavirin)，來福維靈（iev〇virin)，維拉米定 (viramidine)，胸腺素（thymosin)a-l，NS3絲胺酸蛋白酶之 抑制劑，及肉苷單磷酸去氫酶，干擾素义，或聚乙二醇化 (pegylated)干擾素〜之抑制劑，單獨或合併利巴維靈或來福 維靈。對抗HCV有效之其他劑較佳為干擾素_α或聚乙二醇 96973.doc -14 - 200524606 化干擾素-α單獨或合併利巴維靈或來福維靈。 【實施方式】 本發明係關於用於治療黃病毒科病毒，如c肝炎病毒，减 染之化合物，組合物，及方法。然而，在詳細說明本發明 前，先定義下列術語： 定義 本文中所用之術語”烷基”表具有1至6個碳原子，更佳 2個碳原子之烷基。此術語之實例為甲基，乙基，正丙基， 異丙基，正丁基，第三丁基，正戊基等。 ”經取代之烷基”表烷基具有1至3個，較佳1至2個，取代 基選自烷氧基，經取代之烷氧基，醯基，醯基胺基，酸基 氧基，氧基醯基，胺基，經取代之胺基，胺基醯基，芳基， 經取代之芳基，芳基氧基，經取代之芳基氧基，氰基，鹵 素，羥基，硝基，羧基，羧基酯，環烷基，經取代之環烷 基，雜芳基，經取代之雜芳基，雜環，及經取代之雜環。 π烷氧基”表’’烷基-0-M，其包括例如甲氧基，乙氧基，正 丙氧基，異丙氧基，正丁氧基，第三丁氧基，第二丁氧基， 正戊氧基等。 π經取代之烧氧基π表π經取代之烧基 ’’醯基’’表烧基- C(O)- ’經取代之烧基<(0)-，烯基_c(〇)-， 經取代之烯基-C(O)-，炔基-c(0)·，經取代之炔基_c(〇)_， 環统基-c(o)-，經取代之環烷基_C(0)·，芳基_c(〇)_，經取 代之芳基-C(O)-，雜芳基-c(0)-，經取代之雜芳基_〇(〇)_， 雜環-C(O)-，及經取代之雜環_(^(〇)_。 96973.doc -15- 200524606 π醯基胺*’j-C(0)NR4R4，其中各R4獨立選自氫，烷基， 經取代之烷基，烯基，經取代之烯基，炔基，經取代之炔 基，芳基，經取代之芳基，環烷基，經取代之環烷基，雜 芳基，經取代之雜芳基，雜環，經取代之雜環，及其中各 R4與氮原子連接在一起形成一個雜環或經取代之雜環。 π醯基氧基”表烷基-C(0)0-，經取代之烷基-C(0)0-，烯 基-C(0)0-，經取代之烯基-C(0)0-，炔基-C(0)0-，經取代 之炔基-C(0)0-，芳基-C(0)0-，經取代之芳基-c(o)o-，環 烷基-c(o)o-，經取代之環烷基-c(o)o-，雜芳基-c(o)o-， 經取代之雜芳基-c(o)o-，雜環-c(o)o-，及經取代之雜環 -C(0)0- 〇 ”氧基醯基’’表烷基-oc(o)_，經取代之烷基_oc(o)-，烯 基-oc(o)-，經取代之烯基-oc(o)-，炔基-oc(o)-，經取代 之炔基-oc(o)-，芳基-oc(o)-，經取代之芳基_oc(o)-，環 烷基-oc(o)-，經取代之環烷基-oc(o)·，雜芳基-oc(o)_， 經取代之雜芳基-oc(o)-，雜環-oc(o)-，及經取代之雜環 -OC(O)- 〇 π烯基”表具有2至6個碳原子，較佳2至4個碳原子，及具 有至少1個，較佳1-2個位置烯基不飽和之烯基。該基之實 例為乙烯基（乙烯-1-基），烯丙基，丁-3-烯-1-基等。 π經取代之烯基”表烯基具有1至3個，較佳1至2個，取代 基選自烷氧基，經取代之烷氧基，醯基，醯基胺基，醯基 氧基，胺基，經取代之胺基，胺基醯基，芳基，經取代之 芳基，芳基氧基，經取代之芳基氧基，氰基，齒素，羥基， 96973.doc •16- 200524606 硝基，緩基，祕_，環㈣，經取代之環縣，雜芳基， 經取代之雜芳基，雜環，及經取代之雜環，但是任何羥基 取代基不連接於乙烯基（不飽和）之碳原子。較佳之經取代之 烯基係選自，但不限於，2,2-二氣乙烯_丨·基，2_甲氧基乙烯 -1 -基等。 應明瞭，術語，，經取代之烯基”包括E(順式）及2(反式）異構 物，如適合。該異構物可為純異構化合物或£及2成份之混 合物。 ’’炔基”表具有至少1個位置之炔基不飽和，且具有2至6個 石反原子，更佳2至4個碳原子之不飽和烴。較佳之炔基係選 自，但不限於，乙炔_1_基，丙炔基，丙炔基，卜甲基 丙-2-快_1_基，丁炔_ι_基，丁炔_2_基，丁炔基等。 經取代之快基”表炔基具有1至3個，較佳1至2個，取代 基選自烧氧基，經取代之烷氧基，醯基，醯基胺基，醯基 氧基，胺基，經取代之胺基，胺基醯基，芳基，經取代之 芳基，芳基氧基，經取代之芳基氧基，氰基，鹵素，羥基， 硝基，羧基，羧基酯，環烷基，經取代之環烷基，雜芳基， 經取代之雜芳基，雜環，及經取代之雜環。較佳之經取代 之炔基係選自，但不限於，2-氟乙炔-1-基，3,3,3_三氟丙炔 -1-基，3-胺基丙炔-1-基，3-羥基丙炔-1-基等。 ’’胺基"表-NH2。 ’’經取代之胺基，，表-NR，R”，其中R’及R”獨立選自氫，烷 基，經取代之烧基，烯基，經取代之烯基，炔基，經取代 之炔基，芳基，經取代之芳基，環烷基，經取代之環烷基， 96973.doc -17- 200524606 雜芳基，經取代之雜芳基，雜環，經取代之雜環，及其中 R’及R”與相接之氮連接在一起形成一個雜環或經取代之雜 環基，但是R’及R”不均為氫。當R’為氫及R”為烷基時，經 取代之胺基在本文中有時稱為烷基胺基。當R’及R"為烷基 時，經取代之胺基在本文中有時稱為二烷基胺基。 ”胺基醯基’’表-NR5C(0)烷基，-NR5C(0)經取代之烷基， -NR5C(0)環烷基，-NR5C(0)經取代之環烷基，-NR5C(〇)婦 基，-nr5c(o)經取代之烯基，-NR5C(0)炔基，-NR5C(〇)經 取代之炔基，_NR5C(0)芳基，-NR5C(0)經取代之芳基， -NR5c(〇)雜芳基，_NR5C(0)經取代之雜芳基，-NR5c(〇)雜 環’及-NR5C(〇)經取代之雜環，其中R5為氫或烷基。 "芳基’’或”Ar”表6至14個碳原子之一價芳族碳環基，具有 單環（例如笨基）或多個縮合環（例如萘基或蒽基），該縮合環 可為或可不為芳族（例如2-苯并吟唑啉酮，2H-1，4-苯并 基等），但是連接點係在一個芳族碳原子。較佳 之芳基包括笨基及萘基。 ’’經取代之芳基”，包括，，經取代之苯基"，表芳基或笨基經 1至3個取代基，較佳1至2個取代基，選自羥基，醯基，隨 基胺基’醯基氧基，烧基，經取代之烧基，烧氧基，經取 代之燒氧基，烯基，經取代之烯基，炔基，經取代之炔基， 胺基’經取代之胺基，胺基醯基，芳基，經取代之芳基， 芳基氧基，經取代之芳基氧基，環烷氧基，經取代之環燒 氧基，羧基，羧基酯，氰基，硫醇，硫烷基，經取代之琉 烧基’琉芳基，經取代之硫芳基，硫雜芳基，經取代之琉 96973.doc -18- 200524606 雜芳基，硫環烷基，經取代之硫環烷基，硫雜環，經取代 之硫雜環取代，環烷基，經取代之環烷基，鹵，硝基，雜 芳基，經取代之雜芳基，雜環，經取代之雜環，雜芳基氧 基，經取代之雜芳基氧基，雜環氧基，及經取代之雜環氧 基取代。 π芳基氧基”表芳基-0-，其包括例如苯氧基，萘氧基等。 ’’經取代之芳基氧基"表經取代之芳基·〇·。 叛基表-COOH或其鹽。 羧基酯’’表_c(0)0-烷基，-c(0)0-經取代之烷基，-c(〇)〇· 芳基，及-c(0)0-經取代之芳基，其中烷基，經取代之烷基， 芳基，及經取代之芳基如本文中定義。 π環烷基"表3至10個碳原子具有單或多環之環狀烷基，其 中一或多個環可為芳族或雜芳族，但是連接點係經由環烷 基之環原子。該基包括例如金剛烷基，環丙基，環丁基， 環戊基，環辛基等。 經取代之辕烧基"表飽和或不飽和（但非芳族）環烧基具 有1至5個取代基選自酮基（=0),硫基（=s)，烷基，經取代 之烷基，烷氧基，經取代之烷氧基，醯基，醯基胺基，醯 基氧基，胺基，經取代之胺基，胺基醯基，芳基，經取代 之芳基，芳基氧基，經取代之芳基氧基，氰基，鹵素，羥 基，硝基，竣基，緩基醋，環烧基，經取代之環烧基，雜 芳基，經取代之雜芳基，雜環，及經取代之雜環。 ”環烷氧基"表-0-環烷基。 ’’經取代之環烷氧基”表-ο-經取代之環烷基。 96973.doc -19- 200524606 π 甲醯基。 ”鹵”或n鹵素"表說，氣，漠，及峨，較佳為氣或氣。 雜芳基”表1至10個碳原子及丨至4個雜原子選自氧，氮， 及硫於環中之芳族基。硫及氮雜原子亦可以氧化形式存 在，如>Ν(〇)，>8(0)及>S(〇)2。該雜芳基可具有一個單環（例 如吨啶基或呋喃基）或多個縮合環（例如峭畊基或苯并嘧吩 基），其中縮合環可為或可不為芳族及/或含有一個雜原子， 但是連接點係經由芳族雜芳基之一個原子。較佳之雜芳基 包括吡啶基，吡咯基，，塞吩基，啕哚基，硫苯基，及呋喃 基。 ’’經取代之雜芳基”表雜芳基經1至3個選自相同於經取代 之芳基所定義之取代基取代。 ’·雜芳基氧基”表_〇_雜芳基，”經取代之雜芳基氧基，，表七· 經取代之雜芳基。 ’’雜環”或”雜環基”或，，雜環烷基，，表具有—個單環或多個 縮合環，1至10個碳原子，及丨至4個雜原子選自氮，氧，硫， >S(0)，及>s(〇)2於環中之飽和或不飽和基（但非雜芳基）， 其中，在稠合環系統中，一或多個環可為環烷基，芳基， 或雜芳基，但是連接點係經由雜環。 ’’經取代之雜環"或"經取代之雜環烷基，，表雜環經丨至3個 相同於經取代之環烷基所定義之取代基取代。 雜環及雜芳基之實例包括，但不限於，氮咀，吡咯，咪 坐，。比唑，吡啶，π比畊，嘧啶，嗒啩，吲啩，異吲哚，吲 木，一氫吲嗓，吲唑，嘌呤，喹淋畊，異喹琳，喹啦，吹 96973.doc -20- 200524606 畊，萘基吡啶，喹喏啉，喹唑啉，唑啉，喋啶，咔唑，咔 啉，菲啶，吖啶，啡啉，異嘍唑，啡畊，異呤唑，啡啰啩， 啡嘍畊，咪唑啶，咪唑啉，哌啶，哌畊，吲哚啉，酞醯亞 胺’ 1，2,3,4_四氫異啥琳’ 4,5,6,7•四氫苯并间噻吩，噻唾， 嘍唑啶，嘧吩，苯并[b]噻吩，嗎啉基’硫嗎啉基（亦稱為嘧 嗎琳基）’喊唆基，ϋ比略咬，四氫σ夫喃基等。 ’·雜環氧基”表-0-雜環，”經取代之雜環氧基”表_〇_經取代 之雜環。 π磷酸基"表_0Ρ(0)(0Η)2(單磷酸基或磷醯基）， -0Ρ(0)(0Η)0Ρ(0)(0Η)2(二磷酸基或二磷醯基），及 (三磷酸基或三磷酿 基），或其鹽，包括其部份鹽。當然，應明瞭，一 _，二_， 及三磷酸基（磷醯基，二磷醯基，及三磷醯基）之初氧包括在 例如核糖5位置之氧原子。 ’’磷酸酯’’表上述一-，二_，及三磷酸基之一或多個羥基以 一個烷氧基#代。 ’’膦酸基’’表 _〇P(〇)(R6)(〇H)或 〇p(〇)(r6)(〇r6)或其鹽， 包括其部份鹽，其中各R6獨立選自氫，烧基，經取代之院 基，緩酸，及叛基醋。當然，應明瞭，鱗酸基之初氧包括 在例如核糖5位置之氧原子。 一胺基麟酸基（PhosPhorodiamidate)n表下列基： 〇

(Rt)2n —I (R7)2N /、中各R可相同或不同，各為氫，烷基，經取代之烷基， 96973.doc -21- 200524606 環烷基，或經取代之環烷基。特佳之二胺基磷酸基為下列 基··

’’胺基填酸（phosphoramidate)單酯，，表下列之基，其中R2 及R3如上述定義。在一個較佳具體實施例中，R2係由卩胺 基酸衍生。 R3 < /2 y~(M §,

〇 m OH ••胺基磷酸二酯”表下列之基，其中R1，R2及R3如上述定 義。在一個較佳具體實施例中，R2係由L-胺基酸衍生。 R3

OR1 ，，環狀胺基磷酸基’’表下列之基，其中n為1至3，較佳η為1

η ，，環狀二胺基磷酸基”表下列之基’其中η為1至3 ’較佳η 為1至2。 -22- 96973.doc 200524606 Η If . 产π π n胺基膦酸基（phosphonamidate)”表下列之基，其中R"為 氫，烧基，經取代之烧基，環烧基，或經取代之環烧基。

CHjRH ”硫醇”表-SH基。 ”硫烷基’’或”烷基硫醚’’或’’硫烷氧基’’表-S-烷基。 ”經取代之硫烷基”或π經取代之烷基硫醚”或”經取代之硫 烷氧基”表-S-經取代之烷基。 ”硫環烷基’’表-S-環烷基，f’經取代之硫環烷基’’表經取 代之環烧基。 ”硫芳基’’表-S-芳基，”經取代之硫芳基’’表-S-經取代之芳 基。 ”硫雜芳基”表-s-雜芳基，”經取代之硫雜芳基n表-S-經取 代之雜芳基。 ”硫雜環’’表-S-雜環，”經取代之硫雜環π表經取代之雜 環。 術語”胺基酸支鏈π表式R13NHCH(R12)COOH之α-胺基酸 之R12取代基，其中R12係選自氫，烷基，經取代之烷基，及 芳基，R13為氫或與R12及連接之氮及碳原子分別一起形成一 個雜環。α·胺基酸支鏈較佳為20種天然L胺基酸之一之支 鏈。 96973.doc -23- 200524606 術語”醫藥可接受之前藥”表此技藝認可之一或多個官能 基之修釋’该官能基在活體内可代謝以提供一種本發明化 合物或其活性代謝物。該官能基在此技藝中眾所周知，包 括用於·基及/或胺基取代之醯基，一-，二_，及三碟酸之 酉旨，其中一或多個側羥基轉化為烷氧基，經取代之烷氧基， 芳基氧基，或經取代之芳基氧基等。 術5吾醫藥可接受鹽"表一種化合物之醫藥可接受鹽，該 鹽係由此技藝中眾所周知之各種有機及無機相對離子所衍 生，包括例如鈉，鉀，鈣，鎂，銨，四烷基銨等；當該分 子含有一個鹼官能基時，有機或無機酸之鹽為例如鹽酸 鹽，氫溴酸鹽，酒石酸鹽，甲磺酸鹽，醋酸鹽，順丁烯二 酸鹽，草酸鹽等。 術語”醫藥可接受之部份鹽，，表化合物具有一個取代基有 多於一個基可形成鹽，但是少於最大量之基實際上形成 鹽。例如，一個二磷酸基可形成多種鹽，若僅部份離子化， 生成之基在本文中有時稱為一種部份鹽。 應明瞭，在上述定義之所有取代基中，以彼等之其他取 代基定義之取代基（例如經取代之芳基具有一個經取代之 芳基作為取代基，而該取代基本身經一個經取代之芳基取 代等）所達成之聚合物不包括在本發明中。在該等情況中， 最大數目之該等取代基為三個。亦即，上述各定義係以一 個限制約束，例如經取代之芳基係限於經取代之芳基-(經 取代之芳基）·經取代之芳基。 相似地，應明瞭，上彼定τ > 嚟上迷疋義不包括不許可之取代型式（例 96973.doc -24 - 200524606 如甲基經5個氟取代，或羥基在烯或炔不飽和基2 α位卜該 不許可之取代型式為熟習技藝人士所周知。 一般合成方法 本發明化合物可由輕易可得之起始物質使用下列一般方 法及程序製備。應明瞭’其中顯示典型或較佳方法條件（即 反應溫度，時間，反應物之莫耳比例，溶劑，壓力等），其 他方法條件亦可使用’除非另外說明。最佳反應條件可隨 所用之特定反應物或溶劑而變化，但是該等條件可由熟習 技藝人士以一般最佳程序決定。 另外，本發明方法使用需要之保護基以防止某些官能基 進行不欲之反應。各種官能基之適合保護基及用以保= 去保護特$ 之適合條件為此技#中眾所周知。例 如，許多保護基述於T. w. Greene and G M Wuts，

Protecting Groups in Organic Synthesis, Third Edition, Wiley, NewYork，1999,及其中所引據之參考資料。 ， 此外，本發明化合物含有一或多個對掌中心，該等化合 物可製備或分離呈純立體異構物，即各對映體或非對映 體’或富含立體異構物之混合物。所有該等立體異構物(及 富含之混合物）均包括在本發明之範圍内，除非另外說明。 純立體異構物（或富含之混合物）可使用例如此技藝中眾所 周知之光學活性起始物質或立體選擇性試劑製備。或者， 該等化合物之消旋混合物可使用例如對掌管柱層析，對掌 解析劑等分離。 用於下列反應之起始物質為一般已知之化合物，或可以 96973.doc -25- 200524606 已知程序或其顯而易知之修釋製備。例如，許多起始物質 可得自商業上供應者，如Aldrich Chemical Co. (Milwaukee， Wisconsin，USA)，Bachem (Torrance，California，USA)， Emka-Chemce or Sigma (St· Louis，Missouri，USA)。其他可 以標準參考書中所述之程序或其顯而易知之修釋製備，如 Fieser and Fieserfs Reagents for Organic Synthesis, Volumes 1 -15(John Wiley and Sons, 1991)，Rodd’s Chemistry of Carbon Compounds， Volumes 1-5 and Supplementals (Elsevier Science Publishers, 1989)，Organic Reactions, Volumes 1-40 (John Wiley and Sons, 1991), March’s Advanced Organic Chemistry，（John Wiley and Sons， 4 Edition) ， 及 Larock’s Comprehensive Organic Transformations(VCH Publishers Inc·，1989)。特定言之，本 發明化合物可以一般有機化學及特別核苷及核苷酸類似物 合成技藝中已知之各種方法製備。製備核苷及核苷酸類似 物之一般回讀包括 1) Michelson Α·Μ· "The Chemistry of Nucleosides and Nucleotides，’’ Academic Press, New York， 1963; 2) Goodman L. ’’Basic Principles in Nucleic Acid Chemistry，’’ Academic Press，New York，1974，vol· 1，Ch· 2 ;及3)"Synthetic Procedures in Nucleic Acid Chemistry，’’

Eds. Zorbach W. & Tipson R., Wiley, New York, 1973, vol. 1 & 2。 本發明化合物之合成一般依據一種會聚性（convergent) 或線性合成途徑，如下述。下列概圖1例示製備7-(2f-甲基 96973.doc •26- 200524606 -β-D-呋喃核糖基）-4-胺基-5-(乙炔·1-基）-吡咯并[2,3-d]嘧 唆之二種不同方法。 概囷1

; ; i ϊ HO OH HO OH 7 10 96973.doc -27- 200524606 特定言之，在概圖1中，商業上可得之心氯_吡咯并 嘧啶，化合物2,與略微過量，較佳約1〇5至2當量之沐碘_ 琥㈣亞胺在一種適合惰性稀釋劑（如DMF，乙猜等）中接 觸，轉化為4-氯-5-碘-吼咯并[2,3_d]l^，化合物3。反應 典型在約0至約4(TC，較佳在周圍條件進行，直到反應實質 亡完成為止。反應較佳在黑暗中(例如在一個落覆蓋之反應 室中）進行，典型在約6至24小時内完成。4•氣-5•碘“比咯并 [2,3-小密淀，化合物3,可以習知方法如過遽，蒸發等分離。 純化較佳以結晶完成，化合物3之產率大於。 4氣5-碘-吼咯并[2,3-d]喊啶，化合物3，在周圍條件併 入-種適合惰性溶劑（如乙腈’ DMF#)中。略微過量之氯 化鈉，典型約^丨至M，較佳約1〇4當量，相對於化合物3， 逐份加入溶液中。生成之系統在周圍條件以攪拌維持約〇 5 至4小時，較佳約2小時。在反應實質上完成時，任何不溶 f生粒子以過遽由反應混合物移❺。此遽液中化合物3之納鹽 (未顯示）不進一步純化而用於下一步驟。 息 另外1-甲氧基-2-甲基-3,5-二-0-(2,4-二氣苯甲基;n咬 南核糖，化合物8 (述於下），溶於一種適合之惰性稀釋劑（如 虱仿，二氣甲烷，四氫呋喃等）中，生成之系統冷卻至約〇 至10°C。當場製備對應之卜漠_2_甲基_3,5_二_〇_(2，心二氣苯 曱基）-D-呋喃核糖（未顯示），由與冒泡通入反應系統之溴化 虱氣體反應至反應實質上完A，典型在0.1至1小時内發 生生成之產物以蒸發獲得，較佳在不超過2〇°c之溫度， 殘餘之微量溴化氫在真空中（較佳在少於約15 torr之壓力） 96973.doc -28- 200524606 移除。 過量 ，化合物3 典型約1β〇1至約2當量（更佳1β5至2當量） 之鈉鹽與1-溴-2-甲基_3,5·二-〇_(2,4- -翕芏田甘、,+ 一虱本甲基）-D_呋喃 核糖在一種適合溶劑（如乙腈，DMF等）中合併。反應典型 維持在周圍條件至實質上完成，典型在約6至約24小時内發 生。生成之產物7-(2，-甲基·3，，5，_二_〇_(2,4_二氯苯甲 ，化合物 基）-β-D-呋喃核糖基）-4·氯-5-碘-吡咯并[2,3_d]嘧啶 4’以習知程序分離。較佳反應溶液中和，溶劑蒸發。然後 化合物4以一種適合溶劑（例如曱苯，二甲苯等）碾製。產物 以急驟層析’然後結晶純化。 然後二氣苯曱基保護基以習知程序移除，如甲基 二-0-(2,4_二氯苯甲基）-β·0_呋喃核糖基）_4_氣_5-碘_ 吡咯并[2,3-d]嘧啶，化合物4,與Bel;接觸，獲得7_(2，_甲基 -β-D-呋喃核糖基）-4-胺基-5-碘-吡咯并[2,3-d]嘧啶，化合物 5。反應較佳在一種惰性稀釋劑（如氣仿，二氣甲烷等）中進 行。反應混合物最初維持在約_60至約-8〇〇c約丨至約4小時， 然後溫熱至-40至〇°C直到反應實質上完成為止，典型在is 24小時後發生。然後反應以甲醇淬火，然後以一種鹼，較 佳以氫氧化銨，使pH升高至約7中和。生成之7-(2匕曱基 卬呋喃核糖基）-4-氯-5-碘-吡咯并[2,3-d]嘧啶，化合物 5 ’以習知方法如過濾，蒸發，層析，沉澱等分離。 然後化合物5之4_氯與過量液態氨接觸而胺化。反應較佳 在約75至約90 °C於一個壓力反應器中典型維持在約1〇〇至 約500 psi進行。反應繼續至實質上完成，典型在約12至48 96973.doc -29- 200524606 J夺内冬生。生成之7-(2、甲基呋喃核糖基）-4_胺基 埃比17各并[2,3_d]哺啶，化合物6，以習知方法如過濾，蒸 發，層析，沉澱等分離。 如圖1所示，7_(2，-甲基呋喃核糖基）_4_氯-5_碘-吡咯 并[2,3_d]’咬’化合物5，或7_(2，·甲基·p_D-呋喃核糖基）_4_ 胺土 比略并〇d]嘴唆，化合物6，之埃基轉化為對 應之（三甲基）矽烷基乙炔基。轉化係由化合物5或6先溶於一 種適合惰性稀釋劑（如DMF，THF，或DMF/THF 3 : 7比例之 此曰物）中而完成。然後催化量之碘化亞銅（Cul)及四（三苯 膦）鈀（〇)與過量，典型U至2當量，（三甲基石夕烷基）乙炔加 反應/% a物中。反應較佳在一種驗（如三乙胺）存在下進 行，較佳在一種惰性氣壓下進行。反應典型在約1〇至約3〇 c進行至實質上完成，典型在約12至48小時内發生。 化合物5所衍生之產物，即7-(2，_甲基呋喃核糖基）_4· 氣-5-(三甲基矽烷基乙炔基p比咯并[2,3·_啶，化合物 10，以t知方法如過濾，蒸發，層析，沉澱等分離。 化合物6所衍生之產物，即7_(2，_甲基-卜仏呋喃核糖基）_4· 胺基-5-(三甲基矽烷基_乙炔基）_吡咯并[2,3_d]嘧啶，化合物 7，以！知方法如過濾，蒸發，層析，沉澱等分離。 然後化合物7可以去矽烷基化轉化為乙炔衍生物（·^ξ CH)，其係經由習知方法使用氫氧化銨，碳酸鉀，或氣陰離 子發生。例如，7-(2，-甲基呋喃核糖基）_4_胺基_5_(三 曱基矽烷基-乙炔基）-吡咯并[2,3_d]嘧啶，化合物7,與氫氧 化銨在甲醇中反應，產生化合物1。 96973.doc -30 - 200524606 或者，去矽烷基化及胺化可使用化合物10與濃氨反應， 產生化合物1。 ’ 在另一具體實施例中，化合物3先如上述以三f基矽烷基 乙炔處理，形成化合物5a。化合物化可如上述偶合於2,_尹 基-3,5-一 -〇-(2,4-二氣苯甲基）_D_呋喃核糖，形成化合物 7a。最後由該糖移除2,4_二氣苯甲基保護基，產生化合物1〇。 下列概圖2例示製備7_(2，-甲基呋喃核糖基)-4-胺基 -5-(乙快小基）料并[2,3_d]_，化合物卜之合成變異。 概圖2

96973.doc •31- 200524606 在概圖2中，7_(2，-甲其r v - η ， 1 Y 基·3,5-一-〇·(2,4-二氣笨甲基）-β-Ιχ 呋喃核糖基)-4-氯-5_碘-吡咯并[2,3_d]嘧啶，化合物4,以上 述方法胺化，產生7-(2，-甲基-3,，5，-二-〇_(2,4_二氣笨甲 基）-β如夫喃核糖基）_4.胺基·5_‘㈣并[2,3__淀，化合 物12。此化合物用作各反應概圖之焦點，可用以製備'(2、 甲基-β-D十南核糖基）_4•胺基·5•(乙块小基）“比哈并[2知 嘴咬，化合物1。 ’ ] /第-個具體實施例中，化合物12之祕保護基使用三 虱化硼以上述概圖i中所述之方式移除，獲得甲茂 -β-D-呋喃核糖基）_4_胺基，·5·碘·吡咯并[2,3_d]嘧啶化入二 6。然後化合物6使用催化量之蛾化亞銅（CuI)及四（三笨 纪（〇)與過量’典型U至2當量’（三甲基石夕统基）乙快—起 在-種上述驗存在下轉化為對應之7_(2，甲基仙“夫喃核 糖基）-4·胺基·5_(三f基魏基乙炔基）“比4并[2,3_d]嘴 咬，化合物7。 在-個具體實施例中，7_(2._甲基仙十南核糖基）·4·胺 基-5-(三甲基矽烷基乙炔基）·吡咯并[2,3_d]嘧啶化合物7， 如上述去矽烷基化，產生化合物1。 在另一具體實施例中，化合物12使用催化量之碘化亞銅 (Cul)及四（三苯膦）鈀（〇)與過量，典型hl至2當量，（三甲基 矽烷基）乙炔一起在一種上述鹼存在下轉化為對應之7_(2·_ 甲基3,5 一-0-(2,4-一氣苯甲基）_p_D_呋喃核糖基胺基 -5-(三甲基矽烷基乙炔基）·吡咯并[2,3 d]嘧啶化合物Μ。 化合物13進行去矽烷基化及移除羥基保護基，產生化合 96973.doc -32· 200524606 物1。如概圖2中所示，這二個步驟之次序不重要，在一個 具體實施例中，去矽烷基化先以上述方式進行，獲得7_(2f_ 甲基3，5 _一-〇_(2,4-二氣笨甲基呋喃核糖基）_4-胺基 -5-乙炔基-吡咯并[2,3_d]嘧啶，化合物14，然後亦如上述移 除羥基保護基，獲得化合物1。在另一具體實施例中，羥基 保護基之移除先進行，獲得7_(2, 甲基糖基^ 胺基-5-(三甲基矽烷基_乙炔基）_吡咯并[2,3_d]嘧啶，化合物 7 ’然後進行去矽烷基化，產生化合物1。 或者，化合物7a可由化合物4與三曱基矽烷基乙炔如上述 反應而製備。化合物7a之三甲基矽烷基可如上述移除獲 得化合物15。化合物16係由化合物15之苯甲基保護基移除 而製備。化合物1 5使用上述技術胺化，產生化合物i。 在另一替代方法中，化合物7a可以液態氨胺化而直接轉 化為化合物14。 上述概圖1及2中所用之2_經取代之核糖可以此技藝中眾 所周知之方法製備。例如，這些化合物之一種起㈣質為 一種經適當取代之糖，具有2，_〇H及2，_H。該糖可購買，或 可以任何已知方法製備，包括標準表異構，取代，氧化及/ 或還原技術。例如，可使用商業上可得之i，3,5_三_〇·苯甲 醯基-a-D-呋咕核糖（Pfanstiel Lab〇rat〇ries，—·）。然後該經 取代之糖可以適當氧化劑在一種相纟溶劑中於適合溫度氧 化，產生2 -經修釋之糖。可能之氧化劑為例如戴斯·馬丁 (Dess-Martin)過破試劑，Ac2〇+DCC於DMS〇中史溫 氧化劑（DMS〇，草醯氣，三乙胺），瓊斯（Jones)試劑（鉻酸 96973.doc •33· 200524606 及硫酸之混合物），柯琳斯（Collins’s)試劑（二σ比σ定氧化 Cr(VI))，柯瑞（Corey丨s)試劑（氣鉻酸吡錠），二鉻酸吡錠，g曼 式二鉻酸鹽，過猛酸鉀，Mn〇2，四氧化釕，相轉移催化劑， 如鉻酸或過猛酸鹽載於一種聚合物上，Cl2-^咬，H2〇2-l目 酸銨，NaBr02-CAN，NaOCl於HOAc中，亞鉻酸銅，氧化 銅，雷氏（Raney)鎳，醋酸鈀，梅蘊-龐哚夫-維利 (Meerwin-Pondorf-Verley)試劑（第三丁醪鋁與另一種酮），及 N-溴琥拍醯亞胺。 一種有機金屬碳親核劑，如一種格納（Grignard)試劑，一 種有機鋰，二烷基銅鋰，或CH3-SiMe4於TBAF中，與該酮 及適合非質子溶劑在適合溫度偶合，產生2’-甲基糖。例如， 可使用 CH3MgBr/TiCl4 或 CH3MgBi7CeCl3，如 Wolfe et al. 1997，J· Org· Chem· 62:1754-1759中所述。甲基化糖可選擇 性以一種適合保護基，較佳為醯基，經取代之烷基，或矽 烧基，以熟習技藝人士周知之方法保護，如Greene et al.， Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons，Second Edition，1991教導。 除上述外，本文中所述合成方法中所用之2’-C-經取代之 糖為此技藝中眾所周知，述於例如Sommadossi，et al.1G及 Carrol，et al·11’12，全部併入本文供參考。 下列概圖3述及一種經保護之糖之另一種合成，該糖可用 於偶合於本文中所述之驗基。 96973.doc -34- 200524606

概囷3

其中Ph為苯基，X’為一個適合離去基，如鹵。 上述概圖3中糖a之形成係如Mandal，S.B·，et al·，Synth· Commun. 1993，9，ρ· 1239所述由商業上可得之D-核糖開始 而完成。經基經保護形成糖b述於界出>%0.：^.61&1.，丁61:· Lett· 1990，31，ρ·4787。糖 c 及 d係使用 Ning，J. et al.， Carbohy dr. Res. 2001，330，ρ.165之方法及本文中戶斤述之方 法製備。糖e係使用格納（Grignard)反應之一種修釋方法， 以CH3MgBr或其他適合有機金屬，如本文中所述（不需要鈦 /鈽）製備。最後，其後偶合反應中所用之鹵化糖（X=鹵）係使 用上述製造糖b中所用之相同保護方法製備。該鹵化係述於 Seela之美國專利6,211，158。 然後，任何所述之核苷可以熟習技藝人士周知之方法去 保護，如 Greene et al·，Protective Groups in Organic Synthesis，John Wiley and Sons，Second Edition，1991教導。 另一種製造可用於偶合雜環鹼基之經保護之糖之方法述 96973.doc -35- 200524606 於下列概圖4。 概囷4

在概圖4中’化合物g之羥基之甲基化係以習知方法進 行，獲得化合物h。化合物h之2, 3及5經基各以2,4·二氣苯 曱基保遵，獲得化合物i。化合物i之2-(2，，4，-二氣笨甲基）之 選擇性去保護係經由與氣化亞錫在一種適合溶劑（如二氣 甲烧’氯仿等）中於低溫（例如約〇至5。〇)接觸而進行，直到 反應完成為止，例如24-72小時，獲得化合物j。2-經基之氧 96973.doc -36- 200524606 化係如本文中所述進行，獲得化合物k。亦如本文中所述進 行甲基化，獲得化合物1。 W，W1或W2非氫之化合物使用上述製備之化合物作為起 始物質之製備可使用下列前藥製備之回顧中所述之方法完 成： 1) Cooperwood，J. S. et al·，’’Nucleoside and Nucleotide prodrugs，1’ in Ed(s) Chu，C. K. Recent Advances in Nucleosides (2002)，92-147 ° 2) Zemlicka，J· et al·，Biochimica et Biophysica Acta (2002)， 158(2-3)，276-286。 3) Wagner, C. et al.5 Medicinal Research Reviews (2002), 20(6)，417-451 〇 4) Meier，C. et al·，Synlett (1998)，（3)，233-242。 例如，l-[5-(炔基）-4-胺基^比咯并[2,3-d]嘧啶]-2’-C-甲基 -β-D-呋喃核糖苷化合物之5’-羥基轉化為一種磷酸基，二磷 酸基，或三填酸基類似物可使用D.W. Hutchinson，（Ed· Leroy b. Townsend) ffThe Synthesis, reaction and Properties of Nucleoside Mono-，Di-，Tri-, and tertaphosphate and Nucleosides with Changes in the Phosphoryl Residue，’’ Chemistry of Nucleosides and Nucleotides，Plenum Press， (1991) 2中所述之方法製備。 呋喃核糖苷之胺基酸酯之製備可如下列概圖5中所示完 成： 概圊5 96973.doc -37- 200524606

所欲Boc-保護之胺基酸（較佳為L_胺基酸）及n，n，_羰基二 咪唑溶於一種惰性溶劑（如THF)中。反應混合物保持在約2〇 至約40C之間約〇·5至24小時。含有略微過量之所欲核苷於 一種惰性溶劑（如DMF)中之溶液加入B〇c-保護之胺基酸混 合物中，在約40至約8〇°C加熱約2至約24小時。結構異構物 之混合物使用習知技術如蒸發，沉澱，過濾，結晶，層析 等分離。 然後所欲酯使用例如i :丨體積/體積丁]?八/1：)(：]^溶液在約2〇 及約40°C酸化約〇·ι至約i小時及蒸發。殘餘物溶於水中， 在力0至約30 C保持約2至約24小時。混合物可以 使用標準技術及條件分離所欲產物。 雖然上述概圖證明去氮雜嘌呤前藥之產生，但是此方法 可用於任何所欲核苷化合物。同樣地，胺基酸可以對於反 應條件適合之任何保護基保護。這些保護基在此技藝中眾 96973.doc -38- 200524606 所周知。 圖6中所示 吱喃核糖苷之其他烷基酯之製備可如下列概 完成： 概囷6

化合物U容於-種無水溶劑（如„比咬）中，一種石夕烧基^如 第三丁基氣二苯基傾）加人，在糖之5,_位置形成—個保護 基。可使用任何可至5，·位置且可以移除生成最終所欲之3，-酯之保護基。此反應係在約10至40。。之溫度進行約4至24小 時。所欲醯基氣加人經保護之核苦化合物3()中，攪摔約4至 約24小時’形成化合物3 1。盆可使用# 八」便用^準技術如分離，結 晶，萃取，過濾、，層析等分離及純化。化合物32係由移除 5’-位置之保護基而製備。其可由化合物％與氟化四丁敍於 96973.doc -39· 200524606 THF中之1M溶液反應而完成。最終產物係使用標準技術如 分離，結晶，萃取，過濾，層析等分離及純化。 雖然上述概圖證明去氮雜嘌呤前藥之產生，但是此方法 可用於任何所欲核苷化合物。 利用性，測試，及施用 利用性 本發明提供具有抗病毒（包括C肝炎病毒）活性之新穎化 合物。本發明化合物係由抑制涉及複製之酶（包括RNA依賴 性RNA聚合酶）而抑制病毒複製。彼等亦可抑制黃病毒科病 毒（如HCV)之活性或增生中所用之其他酶。 本發明化合物亦可用作核苷前藥。因此，彼等吸收入細 胞内，在細胞内可由激酶磷酸化成三磷酸鹽，然後為聚合 酶（NS5b)之抑制劑及/或用作鏈終止劑。 本發明化合物可單獨或與其他治療病毒之化合物合併使 用。 醫藥組合物之施用 本發明化合物一般以治療有效量以相似用途之劑之任何 T接义之;?也用方式施用。本發明化合物（即活性成份）之實際 量依許夕因素而定，如所治療疾病之嚴重性，個體之年齡 及有關健康，所用化合物之效力，施用途徑及形式，及其 他因素。該藥物可一天施用多於一次，較佳一天施用一或 二次。 式1化合物之治療有效量範圍可由約〇·〇5至50毫克/接受 者每公斤體重/天；較佳約〇·〇1·25毫克/公斤/天，更佳約〇5 96973.doc 200524606 至ι〇毫克/公斤/天。因此，施用於一位70公斤之人，劑量範 圍最佳為每天約35-70毫克。 本發明化合物一般以醫藥組合物以下列任一途徑施用·· 經口，全身（例如經皮，經鼻内，或以栓劑），或非經腸（例 如經肌肉内，經靜脈内，或經皮下）施用。較佳施用方式為 口服，使用習知每天劑量，其可根據疾患程度而調整。組 合物可呈錠，藥丸，膠囊，半固體，粉末，持續釋放調配 物，溶液，懸浮液，醜劑，氣溶膠，或任何其他適合組合 物。施用本發明化合物之另一較佳方式為吸入。 調配物之選擇依各種因素而定，如藥物施用之方式及藥 物，生物可利用性。對於經由吸入輸送，化合物可調配呈 液態溶液，懸浮液，氣溶膠，或乾燥粉末，裝人_種適合 之，用分配器中。有幾種藥劑吸人裝置：霧化器吸入器， 計量，入器（MDI)，及乾燥粉末吸入器（Dpi)。霧化器裝置 產生高速度空氣流，使得治療劑（其調配呈液體形式）噴灌呈 霧’進入病人之啤吸道。讀典型為以一種壓縮氣體包裝 之调配物。在開動時’該裝置以壓縮氣體釋出一測量量之 治療劑，因此提供_插A m . ^

’、種如用一疋置藥劑之可信賴方法。DPI 为配冶療劑之自由流動粉 杨末^/式，其可在呼吸期間由裝置 分散於病人吸入之空 乳机為獲得自由流動之粉末，治療 劑與一種賦形劑如乳糖調旦 ’、 劂里里之治療劑以膠囊形式 貝丁存，並以開動分配。

最近，已特別針對顯示 調配物，基於生物可利 不良生物可利用性之藥物發展醫 用性可由增加表面積（即減少粒子 96973.doc -41 - 200524606 大小）而增加之原理。例如，美國專利4，m，288述及一種醫 藥調配物具有粒子大小範圍由1G至IGOOnm，其中活性物質 載於大分子之交聯基質上。美國專利5，145,684述及一種醫 藥調配物之製造中藥物在一種表面修釋劑存在下粉碎 成奈米粒子（平均粒子大小_叫，然後分散於—種液體介 質中’獲得-種具有顯著高生物可利用性之醫藥調配物。 該組合物一般包含一種式I化合物合併至少一種醫藥可 接受之賦形劑。可接受之賦形劑無毒性，協助施用，不會 不利地衫響式I化合物之治療利益。該賦形劑可為任何固 體液體半固體，或在氣溶膠組合物之情況，氣體賦开》 劑，一般為熟習技藝人士可得。 固體醫藥賦形劑包括澱粉，纖維素，滑石，葡萄糖，乳 糖，嚴糖，明膠，麥芽糖，米，麵粉m夕膠，硬脂 酸鎮，硬脂酸納’ n硬脂酸s旨，氣钱，乾燥脫脂牛 奶等。液體及半固體賦形劑可選自甘油，丙二醇，水，乙 醇，及各種油’包括石》’動物，植物，或合成來源，例 如化生油，大旦油，礦油，麻油等。較佳之液體載劑，特 別用於注射溶液，包括水，食鹽水，右旋糖水溶液，及二 醇0 可使用壓縮氣體以分散本發明化合物之氣溶膠形式。適 合此目的之惰性氣體為氮，二氧化碳等。其他適合醫藥賦 形劑及其調配物述於 Remingt〇n，s pharmaceutical Sciences， E.W. Martin (Mack Publishing Company，18th ed·，1990)。 調配物中化合物之量可在熟習技藝人士所用之全部範圍 96973.doc -42- 200524606 内變化。調配物典型含有，基於重量百分比（重量°/❶），約 0 · 0 1 - 9 9 · 9 9重量％之一種式I化合物，基於總調配物計，其 餘為一或多種適合之醫藥賦形劑。化合物較佳以約1-80重 量％之量存在。含有一種式I化合物之代表性醫藥調配物述 於下文。 此外，本發明係關於一種醫藥組合物，包含治療有效量 之一種本發明化合物合併治療有效量之另一種對抗RNA依 賴性RNA病毒（特別是對抗HCV)之有效劑。對抗HCV之有效 劑包括，但不限於，利巴維靈（ribavirin)，來福維靈 (levovirin)，維拉米定（viramidine)，胸腺素（thymosin) α -1， HCV NS3絲胺酸蛋白酶之抑制劑，或肉苷單磷酸去氫，干 擾素-α，聚乙二醇化（pegylated)干擾素-a(peginterferon-a) 之抑制劑，干擾素-a及利巴維靈之合併物，聚乙二醇化干 擾素-a及利巴維靈之合併物，干擾素-a及來福維靈之合併 物，及聚乙二醇化干擾素-a及來福維靈之合併物。干擾素-a 包括，但不限於，重組之干擾素-a2a(如ROFERON干擾素， 可得自 Hoffman-LaRoche，Nutley，NJ)，干擾素-a2b(如 Intron-A干擾素，可得自 Schering Corp·，Kenilworth，New Jersey，US A)，一種同意（consensus)干擾素，及一種純化之 干擾素-a產物。利巴維靈及其對抗HCV之活性之討論參見 J.O. Saunders and S.A. Raybuck，’’Inosine Monophosphate Dehydrogenase: Consideration of Structure, Kinetics and Therapeutic Potential,Ann. Rep. Med, Chem., 35:201-210 (2000) 〇 96973.doc -43- 200524606 實例 下列實例及本文中下列簡寫具有下列意義。若無定義 則該術語具有一般所接受之意義。

AcOH或 HOAc =醋酸 Ac2〇 =醋酸酐 Ar =芳基氫 atm =氣壓 CAN =石肖酸鏔飾 bs =寬單線 cm =公分 d =二重線 dd =雙二重線 dt =雙三重線 DBU =1，8-二氮雜雙環[5.4.0]十一-7-烯 DCB =2,4-二氣苯甲基 DCM =二氣甲烧 DCC =二環己基碳化二醯亞胺 DMEM =戴貝可（Delbecco’s)最小伊格 (eagles)培養基 DMF =二曱基甲醯胺 DMSO =二曱亞石風 DTT =二硫蘇糖醇（threitol) EDTA =乙二胺四醋酸 Fmoc =9-第基甲基氯甲酸酯 96973.doc -44- 200524606 eq.或 eq =當量 g =克 h或hr =小時 HCV =c肝炎病毒 HPLC =高性能液態層析 IC50 ==抑制5 0%之抑制濃度 IPTG ==異丙基β-D-l-硫半乳哌喃糖苷 IU =國際單位 Kg =公斤 L =升 m =多重線 M =莫耳濃度 Me =甲基 mg =毫克 min =分鐘 mL mm =毫升 =毫米 mM =毫莫耳濃度 mmol =毫莫耳 MS =質譜 mp =溶點 ng nm =奈克 =奈米 nM =奈莫耳濃度 96973.doc -45- 200524606 NMR =核磁共振 NTA ==氮基三醋酸 NTP =核苷三磷酸 RP HPLC =逆相高性能液態層析 S =單線 t =三重線 TBAF =氟化四丁基錄 TC50 = 50%細胞毒性之毒性濃度 TEA =三乙胺 TFA =三氟醋酸 THF =四氫σ夫喃 Tic 或 TLC =薄層層析 UTP =尿普三碟酸 uv =紫外線 μL =微升 Mg =微克 μΜ =微莫耳濃度 v/v =體積比體積 wt% =重量百分比 此外，所有反應及熔解溫度為攝氏度，除非另外說明， 及所有百分率為莫耳百分率，除非另外說明。 在下列實例及本文中其他部份，所請求之化合物使用下 列編碼系統： 96973.doc -46- 200524606

實例1 糖中間物1-甲氧基-2 -曱基-3,5_二- 0-(2,4 -二氣苯甲基）-D-呋喃核糖（化合物8)之合成 標題化合物係使用 Martin，P·，Helv. Chim. Acta，1995，78, 486及Carroll等人之國際專利申請案WO 02/057287 A2中 所述之方法製備。 實例2 7-(2’-甲基-p-D-呋喃核糖基）-4-胺基-5-(乙炔-1-基）_吡咯并 [2,3-d]嘧啶（化合物1)之製備

HO ΟΗ 步驟1· 4_氣_5_碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶（化合物3) 4-氯-7H-。比咯并[2,3_d]嘧啶 10.75 克（70 毫莫耳）(TororTto Research Chemicals，Inc)及 N-峨琥 ίό 醯亞胺（16.8 克，75 毫 莫耳）溶於400毫升無水DMF中，在周圍溫度於黑暗中過 96973.doc -47- 200524606 夜。溶劑蒸發。黃色殘餘物懸浮於熱Na2S03之10%溶液中， 過濾，以熱水洗二次，由乙醇中結晶，獲得14.6克（74.6%) 標題化合物，呈灰白色結晶。母液蒸發至1/3體積，再由乙 醇中結晶，獲得2.47克（12.3%)標題產物。 總產率接近100%。 熔點 212-214(分解） UV Xmax : 307, 266, 230, 227 nm (甲醇） MS : 277.93 (M-H)，313 (M+C1) lH-NMR (DMSO-d6) ： 12.94 (s, 1H, NH), 8.58 (s, 1H, H-2)，7.94 (s，1H，H-8) 步驟 2· 7-(2，-甲基-3，，5，-二-〇-(2,4-二氣苯曱基）_p-D-呋喃 核糖基）-4•氣-5-碘-吡咯并[2,3-d】嘧啶（化合物4) 上述所獲得之鹼（化合物3)(33.5克，120毫莫耳）懸浮於 1000毫升CH^CN中。NaH(5克，125毫莫耳60%於油中）逐份 加入，反應混合物在室溫攪拌至NaH溶解（約2小時）。1 -甲 氧基-2-甲基-3,5-二-0-(2,4-二氣苯甲基）-β-〇-呋喃核糖（化 合物8,參見上述實例1)(33克，60毫莫耳）溶於1〇〇〇毫升DCM 中’在冰/水浴中冷卻至4°C。HBr氣體冒泡通入DCM溶液約 30分鐘。反應以TLC偵測至起始之糖消失為止（醚/己烷丨：9 體積/體積）。在反應完成時，溶劑以不高於2〇它之浴溫蒸 發’在真空中保持30分鐘以移除微量之HBr。預先形成之鹼 3之Na鹽溶液快速過濾，濾液加入糖成份中。反應混合物保 持在周圍溫度過夜’然後以HC1/二氧六圜中和，蒸發。曱 苯（3 00毫升）加入，形成未反應之雜環鹼之淡黃褐色沉澱 96973.doc -48 - 200524606 物’過慮移除。遽液濃縮至約1 5 0毫升體積，褒載於具有石夕 膠之2升玻璃渡器上。濾、器以1升曱苯洗，產物以1 〇 %醋酸 乙酯於甲苯中（約9升溶劑）溶離。溶劑蒸發，殘餘物由乙醇 結晶，獲得27.5克（55·6°/〇)標題核苷。 熔點67-70° iH-NMR (DMSO-d6): 8.66 (s，1H，H-2)，8.07 (s，1H，Η-8)， 7.62-7.34 (m，6Η，一 氟苯基），6.22 (s，1H，Η-Γ)，5.64 (s 1Η，Η-3’），4.78-4.55 (m，4Η，CH2-苯甲基，2、〇Η，Η-4，）， 4.20(8，211，（：112-苯甲基），3.97-3。93及 3.78-3.75 ((1〇1，111， Η·5’），0·92 (s，3Η，2·-甲基） MS : 743.99 (Μ+Η) 〇 步驟3· 7-(2’·曱基-p-D-呋喃核糖基）_4•氣_5·碘-吡咯并 [2,3-d]嘧啶（化合物5) 在上述步驟之化合物4 (27·5克）於DCM(800毫升）中在-70 °C之溶液内逐滴加入三氯化硼（1M於DCM中，400毫升）。混 合物在-70°C攪拌2.5小時，在-20°C攪拌過夜。反應由加入 甲醇/001\4(500毫升，1:1)淬火，生成之混合物在-2〇。〇攪 拌30分鐘，然後在相同溫度以氨水溶液中和。固體過渡， 以甲醇/DCM(1 : 1，體積/體積）洗3次。濾液與2〇〇毫升矽膠 合併’蒸發至乾。乾燥殘餘物分布於1 5〇〇毫升乙腈及3〇〇毫 升己烧之間。收集乙腈，以己烷萃取3次，蒸發。殘餘物溶 於醋酸乙醋（600毫升）中，以水，鹽水洗5次，以硫酸鈉乾燥， 洛發。殘餘物以急驟層析在矽膠上以甲醇/丙酮1 ·· 2體積/ 體積（約3升）由小量未反應之鹼純化。溶劑蒸發，殘餘物由 96973.doc -49- 200524606 丙酮/己烷結晶，獲得12.9克（82%)標題核苦5。 iH-NMR (DMSO-d6): 8.84 (s，1H，Η-2)，8·20 (s，1H，H-8)， 6.21 (s，1Η，Η-Γ)，4·00·3·60 (m，糖），〇·84 (s，3Η，2’-曱基） MS ·· 426.26 (M+H) 0 熔點 182-185 步称4· 7_(2匕甲基_p-D-吱味核糖基）_4_胺基·5_破-n比洛并 [2,3-d]嘧啶（化合物6) 上述製備之核苦5(1.5克’ 3.5¾莫耳）在金屬壓力反應器 中以液態氨在85°C處理24小時。在氨蒸發後，殘餘物溶於 曱醇中，與矽膠（約20毫升）加入，濃縮至乾。然後攜帶產物 之矽膠裝入一個矽膠管柱（5x10公分）上於丙酮中，然後溶 離，收集50毫升溶離份。溶離份2-8含有標題化合物。丙_ 蒸發，殘餘物由甲醇/乙腈結晶，獲得1.2克（84%)標題核苦。 熔點220-222(分解） W-NMR (DMSO-d6): 8.20 (s，1H，H-2)，7.80 (s，1H，H-8)， 6.80-6.50 (bs，2H，NH2)，6·09 (s，1H，Η-Γ)，5.19 (t，1H，糖）， 5.13-5.11(m，2H，糖），4.00-3.70 (m，3H，糖），3.60-3.20 (m， 1H，糖），0.84 (s，3H，2’-甲基）。 MS 407.32 (M+H)。 步驟5· 7-(2’-甲基-p-D-呋喃核糖基）_‘胺基_5-(三甲基矽烷 基乙炔-1-基）-。比咯并[2,3-d】嘧啶（化合物7) 上述步驟中合成之胺基核芽6(1.7克，4.2毫莫耳）溶於12 毫升無水DMF及28毫升無水THF之混合物中。三乙胺（3.6 毫莫耳，0.5毫升）及Cul(l毫莫耳，8〇毫克）加入，燒瓶中裝 96973.doc -50 - 200524606 入氬。四（三苯膦）鈀（0)(0.04毫莫耳，46毫克），然後（三曱 基矽烷基）乙炔（1.5當量）加入，混合物在氬下攪拌2〇小時。 然後溶劑蒸發，殘餘物溶於丙酮中，然後經一個玻璃濾器 漏斗上之矽膠（5x10公分）過濾。丙酮蒸發，殘餘物溶於乙腈 中，再經相同大小之矽膠管柱過濾，以乙腈溶離。乙腈濃 縮至小體積，然後約10體積之醚加入，溶液以聲波處理5分 鐘。形成標題化合物之白色結晶，獲得〇·8克化合物7(71。/〇)。 熔點188-191(分解） iH-NMR (DMSO-d6): 8.17 (s，1H，H-2)，7.92 (s，1H，H-8)， 7.20-6.80 (t，2H，NH2)，5.83 (s，1H，H-l，），3.75-3.20 (m， 糖），0·45 (s，3H，2’·甲基），〇 (s，9H，Si(CH3)3)。 步驟6·標題化合物7-(2，_甲基-p_D-呋喃核糖基卜‘胺基 _5_(乙炔-1-基）-吡咯并[2,3_d]嘧啶（化合物u之製備 矽烷基化核苷7(1克，2.6毫莫耳）溶於1〇毫升甲醇中，1〇 宅升NH4〇H加入，混合物在周圍溫度1小時。溶劑蒸發，殘 餘物溶於甲醇中，與矽膠（30毫升）共蒸發。乾燥矽石裝載於 具有矽膠（4x6公分）之玻璃濾器上，化合物以丙酮溶離。溶 劑蒸發，殘餘物由甲醇/乙腈結晶，獲得〇5克（62%); 熔點209-219 (分解）； MS 305.13 (M+H)； ^-NMR (DMSO-d6)： 8.10 (s, iH, H-2), 7.94 (s, 1H, H-8), 6.08 (s, 1H，H-l')，5.32-5.13 (m, 3H，糖），3 96_3 62 (m，4H, 糖），0·68 (s，3H，甲基）。 實例3 96973.doc -51 - 200524606 7-(2f•甲基-3’_0-L-纈胺酸酯-p_D-呋喃核糖基）_4胺基 胃5_(乙炔-1-基）_〇比洛并[2,3_d]鳴咬（22a)之製備 此化合物之合成概要示於概圖5。

ΒοΜ呆護之L-纈胺酸（271毫克，丨.25毫莫耳）及N，N、羰基 二咪唑（203毫克，1.25毫莫耳）溶於5毫升THF中，保持在^ 圍溫度2小時。化合物1(3〇〇毫克，}毫莫耳）於5毫升DMF中 之溶液加入，混合物在65°C加熱過夜。反應混合物之HPlc 分析證明起始之核苷及5，-一醯基化產物（化合物21a)存 在。目標之B 〇c顯胺酸衍生物（化合物2 1 a)以製備性Rp HPLC 由 0至 100% B，A-0.1% TFA於水中，B-0.1% TFA於 CH3CN 中分離。產率為40%(二種異構物之混合物i : 5)。 主要異構物·· MS 504 (M+1)； NMR (CD3OD) : δ 8.11 & 7.93 (s，1H，鹼），6.23 (s，1H， Η-Γ)，5.44 (d，1Η，Η-3’），4·27 (dt，1Η，Η-4，），4.02-3.96 & 3.75-3.70 (dd，1H，H-54及 H-5，b)，3.42 (d，1H，cx_H)，2.21 (m，1H，β-Η)，0.9 (m，9H，Boc)，0·89 (s，3H，2，-CH3)。 次要異構物： MS 504 (M+1)； NMR (CD3OD) : δ 8·92 & 8.10 (s，1H，鹼），6.28 (s，1H， H-l’），5.53 (d，1H，H-3，），4.32 (dt，1H，H-4，），4·10-4·05 & 3·80-3·74 (dd，1H，H-5*a及 H-5fb)，3.43 (d，1H，α-Η)，2.21 (m，1H，β-Η)，1.3-0.9 (m，15H，Boc & Val-CH3)，0.89 (s，3H， 2，-CH3) 〇 96973.doc -52- 200524606 上述步驟之酯以TFA/DCM 1 : 1體積/體積在室溫處理2〇 为鐘’蒸發。殘餘物溶於水中，在丨〇過夜。混合物以Rp HPLC由0至100% B分離，緩衝液如上述。收集最長滯留時 間之化合物，蒸發，鑑定為核苷22&之3，·異構物。 MS 404.14 (M+1)； UV (pHl) ： 251 nm5 282 nm ； NMR (CD3OD) : δ 8·17 & 7·87 (s，1H，鹼），6.21 (s，1H， H-l’），4·72 (d，1H，α·Η)，4·12-3·82 (m，4H，糖），2.28 (m，1H， β·Η)，1·08 (dd，6H，Val-CH3)，0.84 (s，3H，2，-CH3)。 在乾燥條件中貯存3天或在溶液中貯存幾小時後，化合物 轉變為二種異構物之混合物。 實例4 7_(2’_甲基-3，_0-L-丙胺酸酯_p_D_呋喃核糖基）·‘胺基 -5_(乙炔-1-基）-«比洛并[2,3_d],咬（之2…之合成 化合物22b如上述22a使用B0C保護之L_丙胺酸合成； MS 376.17 (M+1)； NMR (CD3〇D) : δ 8.61 & 8.28 (s，1H，鹼），6 38 (s，1H， H-l )，4.12 (m，5H，α-Η & 糖），1 71 (d，3H，Ala CH3)，i (m，1H，β·Η)，0.85 (s，3H，2、CH3)。 在乾燥條件中貯存3小時或在溶液中貯存3〇分鐘後，化合 物22b轉變為二種異構物之混合物。 實例5 M2’·甲基-3，-〇-三甲基乙醯基呋喃核糖基>4_胺基 -5-(乙炔-1-基）_,比咯并[2,3_d]嘧啶（32 ,其中烷基為第三丁 96973.doc -53- 200524606 基）之合成 化合物1 (150毫克，〇·5毫莫耳）溶於1〇毫升無水吨咬中。 然後第二丁基氯二苯基矽烷（274毫升，丨毫莫耳）加入，反應 混合物在室溫維持16小時。三甲基乙醯基氣（9〇微升，〇.75 笔莫耳）加入反應混合物中，混合物攪拌丨6小時。混合物溶 於70毫升氣仿中，以水（3〇毫升），1〇% NaHC〇3(3〇毫升）萃 取，以NaeCU乾燥，蒸發，與甲苯共蒸發以移除微量吡啶。 生成之油〉谷於20耄升THF中，氟化四丁基錢於THF中之1M 溶液2毫升加入。在16小時内，溶劑蒸發，生成之油溶於1〇 毫升DMF中，以製備性RPHPLC由0至100% B分離20分鐘， F=10毫升/分鐘。管柱Phenominex 250x20毫米，Synergi 4μ， Hydro ΡΡ 80Α。緩衝液Α-水，緩衝液B-CH3CN。目標化合 物之滯留時間為15分鐘。收集對應溶離份，蒸發，獲得淡 黃褐色泡沫。 MS 389.10 (M+1)； 4 NMR (DMSO-d6): 8.20 & 7.80 (s，1H，鹼），6·04 (s，IH， Η-Γ)，3.92-3.80 (m，6Η，糖），3.40 (s，9H，CH3-乙醯基）， 0.65 (s，3H，CH3-2丨）。 實例6 7-(2f-甲基-p_D·呋喃核糖基）_4_胺基-5-(乙炔_1_基）·吡咯并 [2,3-d]嘧啶5’-三磷酸鹽之合成 7-(2’ -甲基- β- D-0夫喃核糖基）-4 -胺基- 5- (乙快-1-基）-。比口各 并[2,3-d]嘧啶（0.1毫莫耳）與無水DMF共蒸發3次，溶於2毫 升PO(OMe)3中，冷卻至5°C，P0C13(35微升）及質子海綿（64 96973.doc -54- 200524606

毫克）加入。混合物在5 °C攪拌3小時，然後焦磷酸四丁銨（2 宅莫耳，4毫升’於DMF中之〇 · 5 Μ溶液）加入，混合物在相 同溫度再保持2小時。反應以（Et3N)HC03緩衝液（pH 7.5)， 然後以水淬火。溶劑蒸發，殘餘物溶於甲醇毫升）中，以 醚（30毫升）沉澱。固體殘餘物以離子交換（ie)hplC在Vydac 管柱（250x10毫米）上以〇至loo% b純化。緩衝液A為25 mM NaH2P04/Na2HP04，PH 3，緩衝液 B 為 310 mM

NaH2P04/Na2HP04，pH 3。收集最後之峰，濃縮至5毫升體 積，以RP HPLC在Phenominex管柱（250x20毫米）上以〇至 100%緩衝液B於緩衝液A中之濃度梯度再純化。緩衝液八為 醋酸三乙基銨之0.5 Μ水溶液，緩衝液b為醋酸三乙基銨之 0 · 5 Μ乙腈溶液。含有標題化合物之溶離份合併，蒸發，與 水共蒸發3次，由水冰凍乾燥； MS : 542.99 (Μ-Η)，270.99 (1/2 Μ-Η); UV (0.1% TFA) Xmax : 212.24，235.62，277.98 ; iH-NMR : 8.01 & 7.59 (s，各 1H，鹼），6.00 (s，1H，H-1*)， 4.32-4.00 (m，4H，糖），3.55 (s，1H，乙炔基），〇·65 (s，3H， 曱基-2’）； 31P-NMR ·· -8·60 (d，1P，Ρ-α)，-10.12 (d，1P，Ρ·γ)，_21.42 (t，1Ρ，Ρ-β)。 實例7 7-(2甲基-β-D-呋喃核糖基）_4_胺基-5-(乙炔-1-基）_吡咯并 [2,3-d】嘧啶5’-磷酸鹽之合成 7-(2*-甲基-β-D-呋喃核糖基）-4-胺基-5-(乙炔-1-基）-吡咯 96973.doc -55- 200524606 并[2,3-d]嘧啶（〇·1毫莫耳）與無水DMF共蒸發3次，溶於2毫 升PO(OMe)3中，冷卻至5°C，P〇ci3(35微升）及質子海綿（64 毫克）加入。混合物在5°C攪拌3小時。反應以（以以用匸…緩 衝液（pH 7.5)，然後以水淬火。溶劑蒸發，殘餘物溶於甲醇 (3毫升）中，以醚（30毫升）沉澱。固體殘餘物以離子交換 HPLC在Vydac管柱（250x10毫米）上以〇至1〇〇% b純化。緩衝 液 A為 25 mM NaH2P04/Na2HP04，pH 3，緩衝液 b 為 310 mN1 NaH2P04/Na2HP04，pH 3。收集最後之峰，濃縮至5毫升體 積，以RP HPLC在Phenominex管柱（250x20毫米）上以〇至 100%緩衝液B於緩衝液A中之濃度梯度再純化。緩衝液八為 醋酸二乙基鏔之0.5 Μ水溶液，緩衝液b為醋酸三乙基錢之 〇 · 5 Μ乙腈溶液。含有標題化合物之溶離份合併，蒸發，與 水共蒸發3次，由水冰凍乾燥； MS ： 384.12 (M-H)； H-NMR · 7.97 & 7.67 (s，各 1H，驗），6·12 (s，1H，Η_Γ)， 4.10-3.85 (m，4Η，糖），3.15 (s，1Η，乙炔基），〇·87 (s，3Η， 甲基-2J ; 31P_NMR : 5·02 (s，IP)。

比較實例A 7-(2’_C_甲基_p_Dj喊核糖基）_4·胺基_5-(丙块小基）比略 并[2,3-d]嘧啶之製備 96973.doc -56- 200524606

在實例2步驟4之產物（5〇。〇毫克，〇·123毫莫耳）於3 2毫升 THF-DMF(2 : 1體積/體積）中之溶液内加入CuI(9 2毫克， 〇·〇48毫莫耳），TEA(16微升，〇.113毫莫耳），四（三苯膊）把 (0)(14.0毫克，0·012毫莫耳），溶液以氬脫氣。溶液冷卻至 〇°C，丙炔氣體冒泡通入溶液丨分鐘。然後反應混合物緩慢 溫熱至室溫歷4小時。丙炔加入反應混合物之程序再重複2 次，直到TLC顯示無起始物質為止。反應混合物在真空中 濃縮’吸收入DMF中，以RP HPLC在？11如0111111以管柱 (250x20毫米）上使用乙腈於水中之濃度梯度〇至5〇%以丨❹毫 升/分鐘純化30分鐘，獲得26毫克（66%)標題化合物； iH-NMR (CD3OD) : 8_07 (s，1H)，7.67 (s，1H)，6.19 (s， 1H)，4.11-3.84 (m，4H，糖），2.09 (s，3H)，〇·82 (s，3H); MS 319.11 (Μ+Η)。

比較實例B 7-(2’_C·甲基-β-D-咬喃核糖基）-4-胺基-5-( 丁炔-1-基）比洛 并[2,3-d]嘧啶之製備 96973.doc -57- 200524606

在實例2步驟4之產物（50·0毫克，〇123毫莫耳）於3·2毫升 THF-DMF (2 : 1體積/體積）中之溶液内加入CuI (9·2毫克， 0.048 cfe莫耳），TEA (16微升，〇·ιΐ3毫莫耳），四（三苯膦） 把（0)(14 ·0毫克，0.012毫莫耳），溶液以氬脫氣 。溶液冷卻 至〇°C ’ 丁炔氣體冒泡通入溶液1分鐘。然後反應混合物緩 慢溫熱至室溫歷4小時。反應混合物在真空中濃縮，吸收入 DMF中，以RP HPLC在Phenominex管柱（250x20毫米）上使用 乙腈於水中之濃度梯度〇至50%以10毫升/分鐘純化30分 鐘，獲得13毫克（32%)標題化合物； !H-NMR (CD3OD) ： 8.08 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 6.19 (s, 1H)，4.11-3.80 (m，4H，糖），2.48 (q，2H)，1·26 (t，3H)，0.83 (s，3H); MS 333.13 (M+H)。

比較實例C 7_(2f_C-甲基-β-D-呋喃核糖基）-4-胺基-5-(3-羥基丙炔-1 -基）·吡咯并[2,3-d]嘧啶之製備 96973.doc -58 - 200524606

、古液由實例2步驟4之產物（50·0毫克，0el231毫莫耳） /笔升甲基甲醯胺中製造。溶液以氬冒泡脫氣，並以聲 :处刀鐘。在此溶液中加入三乙胺（16.0微升，0.1145毫 莫耳）/、化鋼（9·4毫克，0.0492毫莫耳），及四（三苯膦）鈀 (0)(14.2¾克’ 0 0123毫莫耳然後炔丙基氧基三甲基矽 烷（113.7微升，〇·7386毫莫耳）加入。混合物在氬下攪拌4小 時。在完成時，混合物在真空中濃縮。反應粗物質溶於 升一甲基甲醯胺中，以去離子水稀釋至5〇毫升，然後經嘧 里（celite)墊洗。溶液再濃縮至乾，然後再溶於1〇毫升二甲 基曱醯胺及3.5毫升水中。標題化合物WHpLC純化； !H-NMR (CD3OD) ： 8.10 (s5 1H), 7.80 (s, 1H), 6.21 (s, 1H)，4.44 (d，2H)，4.11-3.82 (m，4H)，〇·83 (s，3H)。MS ·· 335.13 (m/z) 0

比較實例D 7_(2’-C-甲基_P-D-呋味核糖基）-4_胺基_5_(3-胺基丙炔小 基）-吡咯并[2,3-d】嘧啶之製備 96973.doc -59- 200524606

步称1·丙·2·炔基胺基甲酸9H-苐-9_基甲酯 在炔丙基胺（250微升，3.645毫莫耳）於二異丙基乙基胺 (1·273毫升，7.290毫莫耳）中之溶液内加入9-苐基甲基氣甲 酸酯（Fmoc)，溶於7毫升二甲基甲醯胺中。混合物在氬下於 室溫攪拌過夜。在完成後，溶液在真空中減少。進行醋酸 乙酯/水萃取程序以分離產物；MS : 278.10 (m/z)。 步驟2· 7-(2f-C-甲基核糖基）_4_胺基-5-(3_胺基丙 炔-1-基）-吡咯并[2,3-d]嘧啶 一種溶液由實例2步驟4之產物（124.5毫克，0.3065毫莫耳） 於10毫升二甲基甲醯胺中製造，以氬冒泡脫氣，並以聲波 處理5分鐘。在此溶液中加入三乙胺（39· 7微升，〇285〇毫莫 耳）’峨化銅（23.5毫克’ 〇·ΐ 226毫莫耳），及四（三苯膦）把 (〇)(35.4毫克，0.0307毫莫耳）。步驟1之Fmoc_炔丙基胺 (465.9毫克，0.1680毫莫耳）加入，混合物在氬下擾拌4小 時。在完成時，混合物在真空中濃縮。反應粗物質溶於1毫 升DMF中，然後以去離子水稀釋至5〇毫升，然後經p塞里 (celite)墊洗。溶液蒸發至乾，再溶於ι·〇毫升dmf及3·5毫升 水中。標題化合物以HPLC純化； 96973.doc -60- 200524606 iH-NMR (DMF-d7) : 8.17 (s，1H)，8.08 (s5 1H)，6.28 (s， 1H)，5,80-5.32 (m，3H)，4.19-3.82 (m，4H)，3.37-3.30 (m， 2H)，0·83 (s，3H) 〇 MS : 334.15 (m/z)。 生物學實例 實例1.抗C肝炎活性 化合物可由抑制HCV聚合酶，抑制複製循環中所需之其 他酶，或其他途徑而顯示抗C肝炎活性。許多分析已公開以 評估這些活性。一種評估HCV病毒於培養中總體增加之一 般方法揭示於Miles等人之美國專利5,738,985。活體外分析 已報告於 Ferrari et al·，Jnl. of Vir·，73 : 1649-1654，1999 ; Ishii et al·，Hepatology，29 : 1227-1235, 1999; Lohmann et al·，Jnl。of Bio. Chem·，274:10807-10815，1999 ;及

Yamashita et al·，Jnl. of Bio. Chem·，273:15479-15486, 1998。

Emory University 1996年 9 月 27 日申請之 WO 97/12033， 發明人為C. Hagedorn及A· Reinoldus，主張1995年9月申請 之美國臨時專利申請案序列號碼60/004,3 83之優先權，述及 一種HCV聚合酶分析方法，可用以評估本文中所述化合物 之活性。另一種HCV聚合酶分析方法已報告於

Bartholomeusz，et al·，Hepatitis C Virus (HCV) RNA polymerase assay using cloned HCV non-structural proteins ; Antiviral Therapy 1996 : 1 (Supp 4) 1 8-24 o 測量激酶之活性由HCV藥物減少之篩檢方法揭示於 Katze等人之美國專利6,030,785，Delvecchio等人之美國專 96973.doc -61 - 200524606 利6,228,576，及Jubin等人之美國專利5,759,795。測量所提 HCV藥物之蛋白酶抑制活性之篩檢方法揭示於Su等人之美 國專利5,861，267 ，De Francesco等人之美國專利 5,739,002，及 Houghton等人之美國專利 5,597,691。 實例2.複製子分析 使用一種細胞株ET(Huh-lucubineo-ET)以篩檢本發明化 合物對於HCV RNA依賴性RNA聚合酶之活性。ET細胞株以 窩藏I389luc-ubi_neo/NS3-37ET之RNA轉錄產物轉感染；複 製子具有螢火蟲螢光素酶（luciferase)-泛有素（ubiquitin)-新 黴素（neomycin)填酸轉移酶融合蛋白質及EMCV-IRES驅動 之NS3-5B聚合蛋白質，含有細胞培養適應突變（E1202G ; T1280I ; K1846T)(Krieger et al·，2001，未公開）。ET細胞生 長於DMEM，補充10%胎牛血清，2 mM麩醯胺，青黴素（1〇〇 IU/毫升）/鏈黴素（100微克/毫升），lx非必需胺基酸，及250 微克/毫升G418("Geneticinn)。彼等均可得自Life Technologies (Bethesda，MD)。細胞在 96 p井平板中以 0.5-1.OxlO4個細胞/畊平板培養，在加入核苷類似物之前培 育24小時。然後化合物加入細胞中以達成最終濃度5或50 μΜ。螢光素酶活性係在48-72小時後由加入一種溶解緩衝液 及基質（型錄號碼Glo-溶解緩衝液Ε2661及Bright-Glo螢光 素酶系統E2620 Promega，Madison，WI)測量。在分析期間 細胞不應太匯合。複製之抑制百分比相對於無化合物之對 照作圖。在相同條件下，化合物之細胞毒性使用細胞增生 試劑WST-1 (Roche，Germany)測定。選擇顯示抗病毒活性’ 96973.doc -62- 200524606 但無顯著細胞毒性之化合物以測定IC5G及TC5〇。對於這些測 定’使用各化合物之6個稀釋液。化合物典型稀釋3倍以達 25〇倍之濃度範圍。IC50&tc5()值係由各濃度之抑制％配合 下列方程式計算： 抑制 ％ = 100°/〇/[(IC50/[I】）b+l】 其中b為希爾（Hill，s)係數。 本發明化合物及一些同系物及類似物之數據示於下表Η 及 III 〇

表II

R

R HCV複製子 IC50 (μΜ) HCV複製子 TC5〇 (μΜ) -H 0.09 >50 >50 >50 -ch2ch^ >50 >50 -ch2oh >50 >50 -ch2nh2 >50 >50 為形成下表III中所示之5-乙基核苷，5-乙炔核皆，化合 物1 ’使用Pd/C在氫存在下於高壓，較佳在一種溶劑（如甲 醇）中氫化。 96973.doc -63 - 200524606 表in R NH2

OH OH R HCV複製子 IC50 (μΜ) HCV複製子 TC50 (μΜ) Hv % 0.09 >50 >50 >50 實例3·重組HCV-NS5b之選殖及表現 NS5b蛋白質之密碼序列係以PCR由pFKI389luc/NS3-3f/ET 如 Lohmann，V·，et al. (1999) Science 285, 1 10-1 13 所述使用 下列引子（primers)選殖： aggacatggatccgcggggtcgggcacgagacag (SEQ. ID. NO. 1) aaggctggcatgcactcaatgtcctacacatggac (SEQ. ID. NO. 2) 選殖片段喪失C端第21個胺基酸殘基。選殖片段插入一個 IPTG可誘發之表現質體，其提供一個抗原決定部位（epitope) 標記（tag)(His)6於蛋白質之羧基端。 重組酶表現於XL-1細胞’在誘發表現後’該蛋白質在一 個鎳-NTA管柱上使用親和力層析純化。貯存條件為1 〇 mM Tris-HCl pH 7.5，50 mM NaC卜 0_1 mM EDTA，1 mM DTT， 96973.doc -64- 200524606 20%甘油，於-20°C。 實例4· HCV-NS5b酶分析 聚合酶活性係由測量放射標示之UTP使用一種生物素化 雜聚物模板（其包括一部份HCV基因組）併入一種RNA產物 中而分析。分析混合物（50微升）典型含有10 mM Tris-HCl (pH 7.5)，5 mM MgCl2，0·2 mM EDTA，10 mM KCn，1單 位 /微升 RNAsin，1 mM DTT，10 μΜ 各 NTP，包括[3H]-UTP， 及10奈克（ng)/微升雜聚物模板。試驗化合物最初溶於100% DMSO中，再於含有5% DMSO之緩衝水溶液中稀釋。化合 物典型以1 riM至100 μΜ間之濃度試驗。反應由加入酶開 始，在37°C繼續2小時。反應以8微升100 mM EDTA淬火， 反應混合物（30微升）移入抗生蛋白鏈菌素（streptavidin)塗 覆之閃爍親近微滴定板（FlashPlates)，在4°C培育過夜。併 入之放射活性以閃燦計數測定。 調配物實例 下列為含有一種本發明化合物之代表性醫藥調配物 實例1 :錠調配物 下列成份密切地混合，壓成單一刻痕錠。 成份 每錠之量 本發明化合物 400 玉米澱粉 50 交聯羧曱基纖維素鈉 25 乳糖 120 硬脂酸鎂 5 96973.doc -65- 200524606 實例2 ··膝囊調配物 下列成份密切地混合，裝入一個硬殼明膠膠囊。 成份 每膠囊之量（毫克） 本發明化合物 200 乳糖，喷乾 148 硬脂酸鎂 2 實例3 :懸浮液調配物 列成份混合形成一種經口施用之懸浮液。 成份 量 本發明化合物 1.0克 反丁烯二酸 0.5克 氣化納 2·0克 對羥基苯曱酸甲酯 0.15 克 對羥基苯甲酸丙酯 0.05 克 糖顆粒 25.0 克 山梨糖醇（70%溶液） 13.00克 Veegum K (Vanderbilt Co.) 1.0克 調味劑 0.035毫升 著色劑 0.5宅克 蒸餾水 適量至100毫升 實例4 :注射調配物 列成份混合形成一種注射調配物 0 成份 量 本發明化合物 0.2毫克_20毫克 96973.doc -66 - 200524606 醋酸鈉緩衝液溶液，0.4 Μ 2.0毫升

HC1(1N)或NaOH(lN) 適量至適合之pH 水（蒸餾，滅菌） 適量至20毫升 實例5 :栓劑調配物 總重量2.5克之栓劑係由本發明化合物與Witepsol® H-15(飽和植物脂肪酸之三酸甘油g旨；Riches-Nelson，Inc·， New York)混合而製備，具有下列組成： 成份 量 本發明化合物 500毫克

Witepsol® H-15 剩餘量 96973.doc -67

Claims (1)

1. 200524606 十、申請專利範圍： 1 ·下式I之化合物：

   其中 γ係選自由一鍵，_ch2-或_〇_所組成之群； w，W1及W2各獨立選自由氫及一種醫藥可接受之前藥 所組成之群；及 其醫藥可接受鹽或部份鹽。 2. 如請求項1之化合物，其中Y為氧。 3. 如請求項1之化合物，其中w，wi及w2各獨立為氫或一種 醫藥可接受之前藥，選自醯基，氧基醯基，膦酸基，磷酸 基’鱗酸醋’胺基膦酸基（phosphonamidate)，二胺基鱗酸 基（phosphor*odiamidate)，胺基磷酸（phosph〇rarnidate)單 酯’環狀胺基磷酸基，環狀二胺基磷酸基，胺基磷酸二酯， 及-C(0)CHR2NH2所組成之群，其中R2係選自由氫，烷基， Ik取代之烧基’ ^基’經取代之芳基，環烧基，經取代之 環烷基，雜芳基，經取代之雜芳基，雜環，經取代之雜環， 及一種胺基酸之支鏈所組成之群。 4. 如請求項3之化合物，其中W為氫，或Wi為氫，或W2為氮。 96973.doc 200524606 5·如請求項3之化合物，其中w及W1為氫，或W及W2為氫， 或W1及W2為氫。 6.如請求項3之化合物，其中w，W1及W2為氫。 7·如請求項5之化合物，其中w1及W2為氫，W為氫或一種醫 藥可接受之前藥，選自由醯基，氧基醯基，膦酸基，磷酸 西曰’碟酸基，胺基膦酸基（ph〇Sph〇namidate)，二胺基填酸 基（Phosphorodiamidate)，胺基磷酸（phosphoramidate)單 醋’環狀胺基磷酸基，環狀二胺基磷酸基，胺基磷酸二酯， 及-C(〇)CHR2NH2所組成之群，其中R2係選自由氫，烷基， 經取代之烷基，芳基，經取代之芳基，環烷基，經取代之 環烧基’雜芳基，經取代之雜芳基，雜環，經取代之雜環， 及一種胺基酸之支鏈所組成之群。 8·如請求項7之化合物，其中w1及W2為氫，W係以下式表示：

   其中R2係選自由氫，烷基，經取代之烷基，芳基，經取 代之芳基，環烷基，經取代之環烷基，雜芳基，經取代 之雜芳基，雜環，經取代之雜環，及一種胺基酸之支鏈 所組成之群； R3為氫或烷基；及 R1係選自由烷基，經取代之烷基，芳基，經取代之芳 基，環烷基，經取代之環烷基，雜芳基，經取代之雜芳 96973.doc 200524606 基’雜環，及經取代之雜環所組成之群。 9·如睛求項5之化合物，其中w&w2為氫，w1係以下式表 不 · R2 H2N

   Ο 其中R2係選自由氫，烷基，經取代之烷基，芳基，經取 代之芳基，環烷基，經取代之環烷基，雜芳基，經取代 之雜芳基，雜環，經取代之雜環，及一種胺基酸之支鏈 所組成之群。 10· 一種下式II之化合物：

   其中 W係選自由氫及一種醫藥可接受之前藥所組成之群； 或其醫藥可接受鹽或部份鹽。 11·如請求項10之化合物，其中w單獨為氮或一種醫藥可接 受之前藥，it自由醯基，氧基酿基，鱗酸基，鱗酸基， 鱗酸醋1基膦酸基（phosphonamidate)，^基^基 96973.doc 200524606 (phosphorodiamidate)，胺基填酸（phosphoramidate)單 酯，環狀胺基磷酸基，環狀二胺基磷酸基，胺基磷酸二 酯，及_C(0)CHR2NH2所組成之群，其中R2係選自由氫， 烷基，經取代之烷基，芳基，經取代之芳基，環烷基， 經取代之環烷基，雜芳基，經取代之雜芳基，雜環，經 取代之雜環，及一種胺基酸之支鏈所組成之群。 12·如請求項丨丨之化合物，其中w係以下式表示：

   OR1 其中R2係選自由氫，烷基，經取代之烷基，芳基，經取 代之芳基，環烷基，經取代之環烷基’雜芳基，經取代 之雜芳基’雜環’經取代之雜環，及—種胺基酸之支鍵 所組成之群； r3為氫或烷基；及 R1係選自g基，絲代之絲，芳基，經取代之 基，環院基，經取代之環院基，料基，經取代之雜 基，雜環，及經取代之雜環所組成之群。 13. 14, 一種甲基·β·Β·Μ核糖基）_4_胺基·5·(乙伊 基^各并[2,3_d]㈣或其醫藥可接受鹽或部份越。、 一種7似_甲基鱗酸基如夫喃核糖基）1胺 Η 乙炔-iW各并[2,3_d]M 部份鹽。 西杀』接叉鹽 96973.doc -4- 200524606 15. 16. 17. 18. 19. 20. 21. 22. 一種7-(2，-C_甲基巧，·二磷酸 乙炔-i-基]十各并[2 3 d；^D“夫喃核糖基）-4-胺基 部份鹽。 彳[’3_d]〇^或其㈣可接受鹽或 二7 = 部份鹽。…各开[2’3_d]嘧啶或其醫藥可接受鹽或 甲基-5，-(笨氧基七丙胺酿基)磷 D· 喃核糖基）_4_胺基(乙炔 基）·°比略并[2,3_d]喷咬 其醫樂可接受鹽或部份鹽。 -種7·(2’.甲基_3’_〇_L•绳胺酸醋仙“夫喃核糖基）冰胺 基_5-(乙炔·i-基)·吡咯并[2,3_d]嘧啶或其醫藥可接受鹽 或部份鹽。 (2甲基3-0-L-丙胺酸酯呋喃核糖基）_4_胺 基巧-(乙炔-1-基）“比咯并啶或其醫藥可接受鹽 或部份鹽。 一種醫藥組合物，包含一種醫藥可接受之稀釋劑及治療 有效量之一種如請求項1至丨9中任何一項之化合物或一 或多種該等化合物之混合物。 如請求項20之醫藥組合物，其中該組合物另包含治療有 效量之一或多種對抗HCV之有效劑。 如明求項21之醫藥組合物，其中該一或多種劑係選自由 利巴維靈（ribavirin)，來福維靈（levovirin)，胸腺素 (thymosin)a-l，NS3絲胺酸蛋白酶，及肉苷單磷酸去氫 酶之抑制劑，干擾素-a之抑制劑所組成之群，或聚乙二 96973.doc -5- 200524606 醇化（pegylated)干擾素-α，單獨或合併利巴維靈或來福 維靈。 23. 如請求項22之醫藥組合物，其中該一或多種劑為干擾素 -α或聚乙二醇化（pegylated)干擾素-α，單獨或合併利巴 維靈或來福維靈。 24. 一種治療及/或抑制哺乳類病毒感染之方法，該感染至少 部份涉及一種黃病毒科（flaviviridae)病毒，該方法包含 對於已診斷具有該病毒感染或有發展該病毒感染危險 之哺乳類施用一種如請求項20之醫藥組合物。 25·如請求項24之方法，其中該病毒為C肝炎病毒。 26. 如請求項25之方法，其中該醫藥組合物另包含治療有效 量之一或多種有效對抗HCV之劑。 27. 如請求項26之方法，其中該一或多種劑係選自由利巴維 靈（ribavirin)，來福維靈（levovirin)，維拉米定 (viramidine)，胸腺素（thymosin)a-1，NS3 絲胺酸蛋白酶 之抑制劑，及肉苷單磷酸去氫酶，干擾素-a，聚乙二醇 化（pegylated)干擾素_a之抑制劑所組成之群，單獨或合 併利巴維靈或來福維靈。 28. 如請求項27之方法，其中該一或多種劑為干擾素-α或聚 乙二醇化（pegylated)干擾素-a，單獨或合併利巴維靈或 來福維靈。 96973.doc 200524606 七、指定代表圖： (一) 本案指定代表圖為：（無） (二) 本代表圖之元件符號簡單說明： 八、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式：

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