TW200306313A - Phosphatase inhibitors - Google Patents

Description

1 200306313 玖、發明說明 (發明說明應敘明：發明所屬之技術領域、先前技術、内容、實施方式及圖式簡單說明) 本發明係關於嘧啶并[5,4^][1，2,4]三畊-5,7-二胺化合 物，其係用於抑制蛋白質酷胺酸磷酸酶，尤其是P T PIB。 本發明尤其關於下式之化合物或其醫藥上可接受鹽

其中 R1及R2係獨立選自包含氫之基，或 R1 及 R2—起形成化學鍵、-CH2-、0、-NH-或-N-R3， R3為低級烷基或-CH2-Ar，且

Ar係選自包含未經取代之苯基；未經取代之莕基；以 低級烷基、低級烷氧基、芳基、環烷基、低級烷基-芳基、 低級燒氧基芳基、低級烷基-環烷基、低級烷氧基-環烷 基、鹵基、氰基或三氟甲基單-或二-取代之苯基；及以低 級烷基、低級烷氧基、芳基、環烷基、低級烷基-芳基、 低級烷氧基-芳基、低級烷基-環烷基、低級烷氧基-環烷 基或鹵基； 單-或二-取代之莕基。 蛋白質酪胺酸磷酸酶（PTPases)為調節細胞成長及變異 之程序中主要之酶。此等酶之抑制在酪胺酸磷醯化去磷醯 化扮演一角色之多重示訊路徑之調節中扮演角色。PTPIB 為特殊之蛋白質酪胺酸磷酸酶，其通常用作酶種類之原生 200306313 (2) I發明就擎績、頁、 類成員。 PTP as es抑制劑經了解為用於治療糖尿病之可能之治療 劑。例如見Μ 〇 e 11 e r等人，3 ( 5 ): 5 2 7 - 4 0，醫藥發現及發展當 前之建議，2000;或 Zhang，Zhong-Yin, 5 : 4 1 6 - 2 3 ,化學生物 學之當前建議，2001。 經發現下式之化合物及其醫藥上可接受鹽：

其中R1及R2之定義如下，可抑制蛋白質酪胺酸磷酸酶， 尤其是PTPIB，且因此可用於降低哺乳動物之血液葡萄糖 濃度。 置於說明書中所用之 ''低級烷基〃 一詞（單獨或併用） 意指最多含六個羰原子之直鏈或支鏈烷基，如甲基、乙 基、正丙基、異丙基、正丁基、第二丁基、異丁基、第三 丁基、正戊基、正己基等。低級烷基可為未經取代，或以 一或多個獨立選自環烷基、硝基、芳氧基、芳基、羥基、 鹵素、氰基、低級燒氧基、低級燒si基、低級燒基疏基、 低級燒基亞硫酿基、低級燒基績酸基及經取代胺基之基取 代。經取代低級烷基之實例包含2 -羥基乙基、3 -氧代丁 基、氰基甲基及2 -硝基丙基。 ''環烷基〃一詞意指未經取代或經取代之3 -至7 -員碳 環。本發明所用之取代基為羥基、鹵素、氰基、低級烷氧 200306313 (3) I熒明多頁 基、低級燒酿基、低級燒基、芳酿基、低級燒基硫基、低 級烷基亞硫醯基、低級烷基磺醯基、芳基、雜芳基及經取 代之胺基。 ''低級烷氧基〃一詞意指最多含六個碳原子之直鏈或支 鏈垸氧基，如甲氧基、以氧基、正丙氧基、異丙氧基、正 丁氧基、第三丁氧基等。 A低級燒基硫基〃一詞意指經二價硫原子键結之低級燒 基，例如甲基氫硫基或異丙基氫硫基。

v'芳基〃一詞意指單-或雙環芳系基，如苯基或莕基， 其為未經取代或以慣用之取代基取代。較佳之取代基為低 級烷基、低級烷氧基、羥基、低級烷基、氫基、羥基烷基、 鹵素、低級烷基硫基、低級烷基亞硫醯基、低級烷基磺醯 基、氰基、硝基、全氟烷基、烷醯基、芳醯基、芳基炔基、 低級炔基、及低級烷醯基胺基。最佳之取代基為低級烷 基、低級烷氧基、羥基、氯素、氰基及全氟低級烷基。本 發明可用之芳基實例為苯基、對-甲苯基、對-甲氧基苯 基、對-氯苯基、間-羥基苯基、間-甲基硫苯基、2 -甲基-5 - # 硝基苯基、2，6 -二氯苯基、1-苯基等。 ''低級烷基-芳基〃 一詞意指其中一或多個氫原子被之 前定義之芳基取代之之前定義之低級烷基。任何慣用之低 級烷基•芳基均可用於本發明中，如苄基等。 低級烷氧基-芳基〃一詞意指其中一或多個氫原子被 之前定義之芳基取代之之前定義之低級烷氧基。任何慣用 之低級烷氧基-芳基均可用於本發明中，如苄基氧基。 200306313 (4) 發明# η月續頁 ''低級烷氧基羰基〃一詞意指經羰基鍵結之低級烷氧 基。烷氧基羰基之實例為乙氧基羰基等。

''醫藥上可接受鹽〃一詞意指可維持式I化合物之生理 效力及性質，且由適當之無毒有機或無機酸或有機或無機 驗形成之慣用酸加成鹽或驗加成鹽。列舉之酸加成鹽包含 由無機酸所衍生者，如鹽酸、氫溴酸、氫硤酸、硫酸、胺 石黃酸、轉酸及硝酸，及由有機酸所衍生者，如對-甲苯續 酸、水楊酸、甲烷磺酸、草酸、丁二酸、擰檬酸、馬來酸、 乳酸、富馬酸、等。列舉之驗加成鹽包含由铵、钾及季按 氫氧化物，例如四甲基銨氫氧化物所衍生者。醫藥化合物 (亦即藥物）經化學改質成鹽為醫藥化學習知之技術，以獲 得改善之化合物物理及化學安定性、吸濕性、流動性及溶 解度。例如見H . A n s e 1等人.，醫藥藥劑形式及藥物輸送系 統（第 6版 1 99 5 )第 196 及 1 45 6- 1 45 7 頁。 本發明包括式I之化合物及其醫藥上可接受鹽：

依據本發明， R1及R2係獨立選自包含氫之基，或 R1 及 R2—起形成化學鍵、-CH2-、-0-、-NH-或-N-R3， R。為低級健基或-C Η 2 - A r ’且

Ar係選自包含未經取代之苯基；未經取代之莕基；以 低級烷基、低級烷氧基、芳基、環烷基、低級烷基-芳基、 200306313 發明說明續頁 低級燒氧基芳基、低級纪基-壤燒基、低級燒氧基-壤坑 基、鹵基、篆基或二氣甲基早-或二-取代之豕基，及以低 級烷基、低級烷氧基、芳基、環烷基、低級烷基-芳基、 低級燒氧基-芳基、低級垸基-環烷基、低級烷氧基-環烷 基或鹵基單-或二-取代之莕基。 式I之化合物中，較佳之化合物為式II之化合物：

其中Ar係選自包含未經取代之苯基；未經取代之莕基； 以低級烷基、低級烷氧基、芳基、環烷基、低級烷基-芳 基、低級烷氧基芳基、低級烷基-環烷基、低級烷氧基-環烷基、鹵基、氰基或三氟甲基單-或二-取代之苯基；及 以低級烷基、低級烷氧基、芳基、環烷基、低級烷基-芳 基、低級烷氧基-芳基、低級烷基-環烷基、低級烷氧基-環烷基或鹵基單-或二-取代之莕基。 式II化合物之較佳具體例中，Αι:為未經取代之苯基或未 · 經取代之莕基。 式II化合物之另一較佳具體例中，Ar為以低級烷基、低 級烷氧基、芳基、環烷基、低級烷基-芳基、低級烷氧基-芳基、鹵基、氰基或三氟甲基單-取代之苯基。 式II化合物之又另一較佳具體例中，Ar為以低級烷基、 · 低級烷氧基、鹵基、氰基或三氟甲基單取代之苯基。 式II化合物之又另一較佳具體例中，Ar為以低級烷基、 -10- 200306313 (6) 锋明就h|續頁 低級烷氧基、函基或氰基雙-取代之苯基。 式11化合物之又另一較佳具體例中，A r為以低級烷基、 低級燒氧基、低級燒基-芳基、低級燒氧基-芳基或鹵基早 -取代之莕基。 式11化合物之又另一較佳具體例中，A r為以低級烷基、 低級烷氧基或鹵基單-取代之萘基。 式II化合物之又另一較佳具體例中，Ar為以低級烷基、 低級烷氧基或鹵基雙-取代之莕基。 本發明之化合物可以立體異構物存在，尤其是對映體及 非立體異構物，所有均包含於本發明之範圍中。 本發明之較佳化合物系選自下列之化合物： 1 · 3-哌啡-1-基甲基嘧啶并[5,4-e][l，2,4]三畊- 5,7-二胺； 2.3-二乙基胺基甲基嘧啶并[5,44][1，2,4]三畊-5,7-二胺； 3 . 3 -吡咯啶-1 -基甲基嘧啶并[5，4 - e] [ 1，2，4 ]三畊-5，7 -二 胺； 4. 3-哌啶-1-基甲基嘧啶并[5,4-e][l，2,4]三畊- 5,7-二胺； 5. 3-嗎啉-4-基甲基嘧啶并[5,4-e][l，2,4]三畊- 5,7-二胺； 6. 3-(4-甲基哌畊-1-基甲基）嘧啶并[5,4-e][l，2,4]三畊 -5，7 -二胺； 7. 3-(4 -芊基哌畊-1-基甲基）嘧啶并[5,4-e][l，2,4]三畊 -5，7 -二胺， 8. 3-(4-莕-2-基甲基哌畊-1-基甲基）嘧啶并[5,4-e][l，2,4] 三畊-5，7 -二胺； 9. 3-(4-萘-1-基甲基哌畊-1-基甲基）嘧啶并[5,4-e][l，2,4] 200306313 發明藏感績頁 甲基）σ密淀并 并[5,4-e][l，2,4] 并[5,4-e][l，2,4] 并[5,4-e][l，2,4] 甲基]嘧啶并 并[5,4-e][l，2,4] 甲基]嘧啶并 甲基]喊p定并 并[5,4-e][l，2,4] P基]α密淀并 甲基]p密咬并 (7) 三畊-5,7 -二胺； 10.3- (4-聯苯-4-基甲基哌畊-1-基 [5.44] [1，2,4]三畊-5,7-二胺； 1 1 .3-[4-(2 -氯芊基）哌畊-1-基甲基]嘧啶 三畊-5，7 -二胺； 12.3- [4-(3 -氯芊基）哌畊-1-基甲基]嘧啶 三畊-5,7 -二胺； 13.3- [4-(4-氯芊基）-哌畊-1-基甲基]嘧啶 三畊-5，7 -二胺； 14.3- [4-(3-甲氧基芊基）-哌畊-1-基 [5,4-e][l，2,4]三畊-5,7-二胺； 15.3- [4-(3-氟芊基）-哌畊-1-基甲基]嘧啶 三畊-5，7 -二胺； 16·3-[4-(3 -三氟甲基芊基）-哌畊-1-基 [5,4-e][l，2,4]三畊-5,7-二胺； 17.3- [4-(4-三氟甲基芊基）-哌畊-1-基 [5.44] [1，2,4]三畊-5,7-二胺； 18.3- [4-(3-溴芊基）-哌畊_1_基甲基]嘧啶 三畊-5，7 -二胺； 19·3-[4-(3-氣基卞基）-♦ ρ井-1 -基 ε [5.44] [1，2,4]三畊-5,7-二胺； 20·3-[4-(2,4-二甲基芊基）-哌畊-1-基 [5.44] [1，2,4]三畊-5,7-二胺； 21·3-[4-(4 -乙基-2 -甲基莕-1-基甲基）-哌畊-1-基甲基]嘧 200306313 (8) I發朋說明續頁 啶并[5,4^；|[1，2,4]三畊-5,7-二胺；及 22·3-[4-(4-卞基氧基卞基）-峰1^井-1 -基甲基]?密足并 [5,4-e][l，2,4]三畊-5,7-二胺。

本發明最佳之化合物係選自如下： I 3-二乙基胺基甲基嘧啶并[5,44][1，2,4]三畊-5,7-二胺； 3-(4 -芊基哌畊-1-基甲基）嘧啶并[5,4-e][l，2,4]三畊 -5，7 -二月$ , 3-(4-莕-2-基甲基哌畊-1-基甲基）嘧啶并[5,4-e][l,2,4] 三畊-5，7 -二胺； · 3-(4-莕-1-基甲基哌畊-1-基甲基）嘧啶并[5,4-e][l，2,4] 三畊-5,7 -二胺； 3-(4-聯木-4-基甲基♦呼-1 -基曱基）喃ρ定并 [5,44][1，2,4]三畊-5,7-二胺； 3-[4-(2,4-二甲基苄基）哌畊-1-基曱基]嘧啶并 [5,4-e][l，2,4]三畊-5,7-二胺； 3-[4-(4 -乙基-2-甲基莕-1-基甲基）哌畊-1-基甲基]嘧啶 并[5,4-e][l，2,4]三畊-5,7-二胺； _ 3 - [4-(4-芊基氧基芊基）哌畊-1-基甲基]嘧啶并 [5,4-e][l，2,4]三畊-5,7-二胺。 另一較佳者為製備式I化合物之方法，包括使下式3之化 合物

-13 - 3 200306313 (9) 發、明it明續頁 在式R4NHR5之化合物（其中R4為-CH2CH2Ri，且R5為 -CH2CH2R2，且R1及R2之定義如前）存在下反應。 亦較佳者為用作治療活性物質之式I化合物。 又較佳者製備用於預防及/或治療糖尿病之醫藥之式I 化合物。 本發明另一較佳之目的為包括式I化合物及治療上惰性 之載劑之醫藥組合物。

本發明另一較佳具體例為依據前述之方法製造之前之 式I化合物， 又較佳者為治療及/或預防與血液葡萄糖含量有關之疾 病之方法，該方法包括投予有效量之式I化合物。最佳者 為治療其中之疾病為糖尿病之方法。 本發明之化合物呈現活體外之ΡΤΡΓΒ，且顯示可降低活 體内血液葡萄糖含量。因此，本發明之化合物可用於治療 糖尿病。

本發明之化合物可口服、直腸或非腸胃投藥，例如靜 脈、肌肉内、皮下、腦脊髓膜内或經皮投藥；或舌下投藥， 或以〇 p t h a 1 m a 1 〇 g i c a 1製劑投藥。列舉之投藥形式為口服投 藥用之膠囊、鍵劑、懸浮液或溶液，栓劑、注射溶液、眼 藥水、藥膏或噴霧溶液。 較佳之投藥形式為靜脈内、肌肉内、口服或吸入投藥。 本發明化合物投藥之有效計量一特定活性成分之性質、年 齡疾病患之需求以及投藥之方式而定。劑量可以任何慣用 -14- 200306313 發明說明:績頁 之方式決定，例如劑量限制之臨床試驗。通常，較佳之劑 量為每日每公斤體重約0.1至1 0 0毫克，且最佳之劑量為每 曰每公斤1 - 2 5毫克。 本發明尚包括含有醫藥有效量之本發明化合物及醫藥 可接受載劑之醫藥組合物。該組合物可以任何慣用之方式 調配。鍵劑及粒劑可含一系列結合劑、填料、載劑或稀釋 劑。液態組合物可為例如於無菌水互溶之溶液。膠囊除活 性成分外，可含填料或增稠劑。另外，亦可含味道改善添 加劑以及通常用作防腐劑之物質，安定劑、保水劑及乳化 劑以及改變等滲壓之鹽、緩衝劑及其他添加劑。 先前提及之載劑物質及稀釋劑可包括任一種慣用之醫 藥可接受有機或無機物質，例如水、明膠、乳糖、澱粉、 硬脂酸鍰、滑石、阿拉伯膠、聚燒二醇等。 口服單位劑量形式如錠劑及膠囊較好含2 5毫克至1 0 0 0 毫克之本發明化合物。本發明化合物可以任何慣用之方式 製備。特殊方法敘述於下列反應圖1至3中。 反應圖

CI 3 -15 - 200306313 發明說朋續頁

中間物氯甲基化合物3係由如反應圖1中所列之市售 2,4 -二胺基-2 -氫硫基嘧啶半硫酸鹽1製備。1經S -甲基化 (例如使用氫氧化鈉及甲基碘），接著在標準條件下亞硝醯 化（例如，在約5 0 °C下使用硝酸鈉與乙酸），獲得中間物芳 基亞硝醯基衍生物2。在室溫下於適當溶劑（如二甲基甲醯 胺）中以聯胺取代2之硫甲基，接著在酸性條件（例如HC1) 中，加熱（例如約8 5 °C )與市售氯甲基乙醛二乙基縮醛縮 合，獲得氯甲基衍生物3。 反應圖2

3 R4NHR5

4 接著在適當溶劑如乙醇中，加熱（例如約8 0 - 1 0 0 °C )使氯 甲基衍生物3與各種已知之胺反應，獲得反應圖2中所列之 相對應胺基甲基衍生物4。針對反應圖2中之胺R4NR5，R4 為- CH2CH2Ri，R5為-CH2CH2R2，且R1及R2之定義均如先 前之定義。 反應圖3

哌畊衍生物5(例如R4及R5—起形成- CH2CH2NHCH2CH2- -16- 200306313 發吼說唣續頁^ (12) 基團之衍生物4)係由氣甲基衍生物3及反應圖2中所列之 旅畊製備。衍生物5以各種已知之：ί完基鹵化物（例如R3 B r 或R31，其中R3之定義如前）烷化係在適當溶劑如二甲基甲 醯胺中，使用適當之鹼如碳酸鉀，於室溫下進行，獲得反 應圖3中所列之二烷基化哌畊衍生物6。 實例 實例1 6 -甲基硫基-5 -亞硝基^密ρ足-2，4 -二胺

.0 sch3 步·驟1 :於含105克KOH之1升水攪拌溶液中添加2,4-二 胺基-6-氫硫基嘧啶半硫酸鹽1(70.0克），接著添加甲基碘 (9 1毫升）。所得混合物劇烈攪拌4小時，接著過濾固態沉 澱物，以水洗滌且空氣乾燥隔夜，獲得5 4.0克褐色固態6 -甲基硫基嘧啶-2，4 -二胺。 Φ lU NMR (DMSO-d6? ppm): 6.20 (s, 2H)? 5.90 (s? 2H)? 5.55 (s，1H)，2·30 (s，3H) 〇 步驟2 :於含6 -甲基硫基嘧啶- 2,4-二胺（50.0克；32 1毫 . 莫耳）之水（1 0 0 0毫升）攪拌懸浮液中添加5 0 0毫升2N乙 % 酸。使混合物升溫至50°C，且快速添加NaN02溶液（24.0 克，含3 5 3毫莫耳之200毫升H20)。5 0°C下1小時後，使深 藍紫色混合物冷卻至室溫且過濾。以水洗滌藍紫色固體數 -17- 200306313 (13) 發明攀明續頁 次，最後以乙醚洗滌。使固體空氣乾燥，獲得5 1 .0克藍紫 色固態6 -甲基硫基-5 -亞硝基嘧啶-2，4 -二胺2。 ]R NMR (DMSO-d6, ppm): 9.70 (s, 1H), 8.10 (s, 1H)? 7. 95 (m，2H)，2.43 (s，3H)。 實例2 6 -聯胺基-5 -亞硝基σ密淀-2，4 -二胺

在室溫下，將聯胺水合物（5 5 %溶液，1 4.5毫升）快速添 加於含6 -甲基硫基-5-亞硝基嘧啶-2，4-二胺2之DMF懸浮 液（12.0克，64.9毫莫耳）中。使混合物攪拌隔夜，接著過 濾淡粉紅色混合物，且以DMF洗滌固·體數次，接著以乙醚 洗滌，再經空氣乾燥，獲得9.5 3克淡份紅色固態6 -聯胺基 -5 -亞硝基嘧啶-2，4 -二胺。 {R NMR (DMSO-d6? ppm): 8.00 (s? 1H), 7.40 (s9 1H), · 7.05 (m，2H)，5·35 (m，2H)。 實例3 3-氯甲基嘧啶并[5,44][1，2,4]三畊-5,7-二胺

-18- 200306313 /1/iN 發明說唞續頁 (14) 1 、 - 將濃HC1( 14毫升）添加於攪拌之冰冷DMF (3 5 0毫升） 中，接著添加7 · 1 4克6 -聯胺基-5 -亞硝基嘧啶· 2，4 -二胺。5 分鐘後，於約2分鐘内添加氯乙醛二乙基縮酸（1 5.4毫 升）。移開冷卻浴，且使混合物升溫至室溫。1小時後’使 混合物升溫至8 5 °C 1 · 5小時，接著使其於2 · 5小時内卻至室 溫。混合物經過濾移除小量棕色不可溶物質，以濃NH4〇Η 溶液使濾液成為鹼性，且以等體積水稀釋。使混合物一旁 靜置1小時，接著過濾收集橘/棕色固體，使其於真空中Ρ2〇5 上進一步乾燥，獲得3.50克3 -氯甲基嘧啶并[5,4-e]n，2,4] 三畊-5，7 -二胺3。 lB NMR (DMSO-d65 ppm): 8.25 (s5 2H), 7.95 (s, 1H)? 7.30 (bs，1H)，5.02 (s，2H)。 實例4 3-哌畊-1-基甲基嘧啶并[5,4-e][l，2,4]三畊- 5,7-二胺 NH.

使含3-氯甲基嘧啶并[5,4_e][l，2,4]三畊-5,7-二胺 3(2.00克，9.5毫莫耳）及哌畊（2.50克，29毫莫耳）之無水乙 醇混合物於密封管中加熱至i 〇 〇。(： 4小時。接著使混合物冷 卻至室溫且蒸發。粗產物以逆相HPLC(Rainin Ci8, 0%CH3CN 至 30% CH3CN梯度，CH3CN/H20，0.1% TFA)純 化，且於真空中移除ch3cn後凍乾含產物之淡黃色餾份， 200306313 (15) 丨發職明讀胃 獲得1.44克黃色3-岐p井-1-基甲基σ密淀并[5,4-e][l，2,4]三 口井-5，7 -二胺5之三氟乙酸鹽。 lH NMR (DMSO-d6, ppm): 9.55 (s, 1H), 9.40 (s, 1H), 8.80 (s，2H), 8.45 (s，1H), 4.15 (s，2H)，3.10 (m，4H)，2.80 (m，4 H) 〇 實例5 3-二乙基胺基甲基嘧啶并[5,4-e][l，2,4]三畊- 5,7-二胺

使含3-氯甲基嘧啶并[5,44][1，2,4]三畊-5,7-二胺3(200 毫克，0.95毫莫耳）及二乙胺（2.00毫升）之無水乙醇（2.0毫 升）混合物於密封管中加熱至1 〇〇 °C 5小時。接著使混合物 冷卻至室溫且真空濃縮。粗產物以逆相Η P L C (R a i n i n C ! 8， 0%CH3CN 至 30% CH3CN梯度，CH3CN/H2〇，0.1% TFA)純 化，且於真空中移除CH3CN後凍乾含產物之淡黃色餾份， 獲得65毫克黃色3-二乙基胺基甲基嘧啶并[5,4-e][l，2,4] 三畊-5,7 -二胺5之三氟乙酸鹽。 !H NMR (DMSO-d6? ppm)： 9.10 (bs3 1H), 8.90 (bs? 1H)? 8.15 (bs，2H)，4·80 (s，2H)，3.25(q，4H)，1.30 (t，6H)。 實例6 3*^比p各淀-1-基甲基π密淀并[5,4-e][l，2,4]二呼- 5,7 - 一月备 -20- 200306313 (16)

發明;說明續頁

使含3-氯甲基嘧啶并[5,4-e][l,2,4]三畊-5,7-二胺3(70 毫克，0.3 3毫莫耳）及1 . 〇毫升吡咯啶之混合物於密封管中 加熱至8 0 °C 7小時。接著使混合物冷卻至室溫且真空濃 縮。粗產物以逆相 Η P L C (R a i n i n C ! 8，0 % C Η 3 C N 至 3 0 % CH3CN梯度，CH3CN/H20，0.1% TFA)純化，且於真空中 移除CH3CN後凍乾含產物之淡黃色餾份，獲得50毫克黃色 3-吡咯啶-1-基甲基嘧啶并[5,4-e][l，2,4]三畊-5,7-二胺5 之三氟乙酸鹽。 lH NMR (DMSO-d6? ppm): 9.15 (bs, 1H), 8.88 (bs? 1H)? 8.20 (bs，2H)，3,67 (s，2H)，3.20 (bm，2H)，1.85-2.10 (m， 4H)。 實例7 3-哌啶-1-基甲基嘧啶并[5,4-e][l，2,4]三呼- 5,7-二胺

使含3-氯甲基嘧啶并[5,44][1，2,4]三畊-5,7-二胺3(70 愛克’ 0.33¾莫耳）及1.〇毫升π瓜淀之混合物於密封管中加 熱至8 0 °C 7小時。接著使混合物冷卻至室溫且真空濃縮。 粗產物以逆相 HPLC(Rainin C 18，0%CH3CN 至 3 0% CH3CN

-21- 200306313 (17) 發明說明續頁 ::::_|___|_____圍 梯度，CH3CN/H20，0.1% TFA)純化，且於真空中移除 C H3CN後凍乾含產物之淡黃色餾份，獲得1 1 1毫克黃色3-哌啶-1-基甲基嘧啶并[5,4-e][l，2,4]三畊- 5,7-二胺5之三 氟乙酸鹽。 [H NMR (DMSO-d6? ppm): 9.18 (bs, 1H), 8.95 (bs, 1H), 8.30 (bs，2H)，4.80 (s，2H)，3.50 (bm，2H), 3.10 (bm，2H)， 1.3 5 - 1.90 (m5 6H)。

實例8 3_嗎啉-4-基甲基嘧啶并[5,4-e][l，2,4]三畊- 5,7-二胺

使含3-氯甲基嘧啶并[5,44][1，2,4]三畊-5,7-二胺3(200 毫克，0.9 5毫莫耳）及2.0毫升嗎啉之混合物於密封管中加 熱至8 0 °C 7小時。接著使混合物冷卻至室溫且真空濃縮。 粗產物以逆相 HPLC(Rainin C18，0%CH3CN 至 30% CH3CN 梯度，CH3CN/H2〇，0. 1 % TFA)純化，且於真空中移除 CH3CN後凍乾含產物之淡黃色餾份，獲得261毫克黃色3-嗎啉-4-基甲基嘧啶并[5,4-e][l，2,4]三畊- 5,7·二胺5之三 氟乙酸鹽。 NMR (DMSO-d6, ppm): 9.25 (bs, 1H), 9.00 (bs, 1H)? 8.30 (bs, 2H)，4.80 (s, 2H)，3.85(m，4H) 5 3.3 0 (m, 4H)。 實例9 -22 - 200306313 (18) 發晛說明續頁 3-(4 -甲基哌畊-1-基甲基）嘧啶并[5,4-e][l，2,4]三畊 -5，7 -二胺

使含3-氯甲基嘧啶并[5,4-€][1，2,4]三畊-5,7-二胺3(200 毫克，〇·95毫莫耳）及N-甲基哌畊（2·00毫升）之混合物於密 ® 封管中加熱至8 0 °C 7小時。接著使混合物冷卻至室溫且真 空濃縮。粗產物以逆相HPLC (Rainin C18，0% CH3CN至 30% CH3CN梯度，CH3CN/H20, 0.1% TFA)純化，且於真 空中移除CH3CN後凍乾含產物之淡黃色餾份，獲得178毫 克黃色3-(4 -甲基哌畊-1-基甲基）嘧啶并[5,4-e][l，2,4]三 畊-5,7-二胺5之三氟乙酸鹽。 lU NMR (D20? ppm): 4.45 (s? 2H)? 3.10-3.60 (m? 8H), 2.90 (s，3H)。 _ 實例1 0 3-(4-苄基哌畊-1-基甲基）嘧啶并[5,44][1，2,4]三畊 -5，7 -二胺 # NH0

-23 - 200306313 發明:說明·績頁 使含3-氯甲基嘧啶并[5,4-e][l，2,4]三畊- 5,7-二胺3(48 毫克，0.23毫莫耳）及N-芊基哌畊（0.12毫升）之混合物於密 封管中加熱至9 0 °C 2小時。接著使混合物冷卻至室溫且真 空濃縮。粗產物以逆相HPLC(Rainin C18, 0% CH3CN至50〇/〇 CH3CN梯度，CH3CN/H20，0.1% TFA)純化，且於真空中 移除CH3CN後凍乾含產物之淡黃色餾份，獲得26毫克黃色 3-(4-芊基哌畊-1-基甲基）嘧啶并[5,4^][1，2,4]三畊-5,7-二胺5之三氟乙酸鹽。 lR NMR (DMSO-d6? ppm): 7.50 (m, 5H)? 4.34 (s? 2H), 4·25 (s，2H)，2.90-3.40 (m，8H)。 實例11 3-(4-莕-2-基甲基哌畊-1-基甲基）嘧啶并[5,44][1，2,4] 三畊-5,7-二胺

於含3-哌畊-1-基甲基嘧啶并[5,4-e][l，2,4]三畊- 5,7-二 胺TFA鹽5 (30毫克，0.05毫莫耳；於實例4中製備）之無水 DMF( 1.0毫升）攪拌溶液中添加2-溴甲基蓁（17毫克，0.075 毫莫耳），接著添加碳酸鉀（28毫克，0.20毫莫耳）。使混合 物於室溫下攪拌24小時，接著置於CH3CN/H2〇/0.1% TFA 中。混合物以逆相 HPLC(Rainin C18，0% CH3CN 至 30% CH3CN梯度，CH3CN/H20，0.1% TFA)純化，且於真空中 -24- 200306313 (20) 發明聲明續頁 移除CH3CN後凍乾含產物之淡黃色餾份，獲得19毫克黃色 3-(4-莕-2 -基哌畊-1-基甲基）嘧啶并[5,4-e][l，2,4]三畊 -5,7 -二胺之三氟乙酸鹽。 lH NMR (DMSO-d65 ppm): 9.37 (bs, 1H), 9.23 (bs? 1H), 8.20 (bs，1H)，7.98 (m，5H)，7.57 (m，3H)，4.45 (bs，2H)， 4.15 (bs，2H)，2.60-3.3 5 (m，8H) 〇 實例1 2

3-(4 -萘-1-基甲基喊_ -1-基甲基）p密淀并[5,4-e][l，2,4] 三畊-5,7-二胺

H2N

於含3 -哌畊-1-基甲基嘧啶并[5,4 -e][l，2,4]三畊-5,7 -二 胺TFA鹽5 (70毫克，0.1 2毫莫耳；於實例4中製備）之無水 DMF(1.0毫升）攪拌溶液中添加1-氯甲基莕（0.023毫升， 0.18毫莫耳），接著添加碳酸鉀（65毫克，0.470毫莫耳）。 使混合物於室溫下攪拌24小時，接著置於CH3CN/H2O/0.1% TFA 中。混合物以逆相 HPLC(Rainin C18，0%CH3CN 至 30% CH3CN梯度，CH3CN/H20，0.1% TFA)純化，且於真空中 移除CH3CN後凍乾含產物之淡黃色餾份，獲得35毫克黃色 3-(4 -萘-1-基哌畊-1-基甲基）嘧啶并[5,4-e][l，2,4]三畊 -5,7 -二胺之三氟乙酸鹽。 [H NMR (DMSO-d6, ppm): 9.36 (bs? 1H), 9.23 (bs? 1H), -25- 200306313 疹明說明續頁 .^ ” ^ -- (21) —- 8.53 (bs,lH), 8.32 (m, 1H), 8.23 (bs, 1H), 8.00 (m, 2H), 7.60 (m, 4H), 4.68 (bs, 2H), 4.23 (bs, 2H), 2.80-3.40 (m, 8H)。 實例1 3 3-(4-聯苯-4-基甲基哌畊-1-基甲基）嘧啶并[5,4^][1，2,4] 三畊-5，7 -二胺

於含3-哌畊-1-基甲基嘧啶并[5,4-e][l，2,4]三畊- 5,7-二 胺TFA鹽5 (30毫克，0.05毫莫耳；於實例4中製備）之無水 DMF(1.0毫升）攪拌溶液中添加4 -氯甲基聯苯（15毫克， 〇·〇8毫莫耳），接著添加碳酸鉀（28毫克，0.20毫莫耳）。使 混合物於室溫下攪拌24小時，接著置於CH3CN/H2O/0.1% TFA 中。混合物以逆相 HPLC(Rainin Ci8，0%CH3CN 至 30% CH3CN梯度，CH3CN/H2〇，0.1% TFA)純化，且於真空中 移除CH3CN後凍乾含產物之淡黃色餾份，獲得20毫克黃色 3-(4-聯苯-4-基甲基哌畊-1-基甲基）嘧啶并[5,4-e][l，2,4] 三畊-5,7 -二胺之三氟乙酸鹽。 {H NMR (DMSO-d6, ppm): 9.60 (s, 1H), 9.43 (s, 1H), 8.83 (bs，1H)，8.53 (bs，1H)，7.3 5 -7.82 (m，9H), 4.33 (s， 2H)，4.15 (s，2H)，2.70-3.40 (m，8H)。 -26- 200306313 (22) 發明說明績頁 實例1 4 3-[4-(2-氯芊基）哌畊-1-基甲基]嘧啶并[5,44][1，2,4]三畊 -5，7 -二胺

於含3-哌畊-1-基甲基嘧啶并[5,4-e][l，2,4]三畊- 5,7-二 胺TFA鹽5(50毫克，0.08毫莫耳；於實例4中製備）之無水 DMF( 1.0毫升）攪拌溶液中添加鄰-氯芊基氯（0.015毫升， 0 · 1 2毫莫耳），接著添加碳酸鉀（5 5毫克，0 · 4 0毫莫耳）。使 混合物於室溫下攪拌24小時，接著置於CH3CN/H2O/0.1°/〇 TFA中。混合物以逆相 HPLC(Rainin C18，0%CH3CN 至 50% CH3CN梯度，CH3CN/H20，0 . 1 % TFA)純化，且於真空中 移除CH3CN後凍乾含產物之淡黃色餾份，獲得17毫克黃色 3-[4-(2-氯芊基）哌畊-1-基甲基]嘧啶并[5,44][1，2,4]三畊 · -5,7 -二胺之三氟乙酸鹽。 lR NMR (MeOH-d4? ppm): 7.40-7.70 (m? 4H), 4.44 (s, 2H)，4·36 (s，2H)，2.80-3.40 (m，8H)。 · 實例1 5 3-[4-(3-氯芊基）哌畊-1-基甲基]嘧啶并[5,4^][1，2,4]三畊 -5，7 -二胺 -27- 200306313 (23)

CI 發明說,明續頁 ；、:、、 於含3-哌畊-1-基甲基嘧啶并[5,4-e][l，2,4]三畊- 5,7-二 胺TFA鹽5 (50毫克，0.08毫莫耳；於實例4中製備）之無水 DMF(1.0毫升）攪拌溶液中添加間-氯芊基氯（0.015毫升，

0 · 1 2毫莫耳），接著添加碳酸鉀（5 5毫克，0 · 4 0毫莫耳）。使 混合物於室溫下攪拌24小時，接著置於CH3CN/H2O/0.1% TFA 中。混合物以逆相 HPLC(Rainin C18, 0% CH3CN 至 50% CH3CN梯度，CH3CN/H20，0.1% TFA)純化，且於真空中 移除CH3CN後凍乾含產物之淡黃色餾份，獲得9毫克黃色 3-[4-(3-氯芊基）哌畊-1-基甲基]嘧啶并[5,4-e][l，2,4]三畊 -5，7 -二胺之三氟乙酸鹽。 ]H NMR (MeOH-d4? ppm): 7.40-7.5 8 (m? 4H)? 4.32 (s? 4H)，2.80-3.40 (m，8H)。

實例1 6 3-[4-(4-氯芊基）哌畊-1-基甲基]嘧啶并[5,4-e][l，2,4]三畊 -5，7 -二胺

H2N 於含3-哌畊-1-基甲基嘧啶并[5,4-e][l，2,4]三畊- 5,7-二 -28- 200306313 (24) 發明㈣:枣规買

胺T F A鹽5 ( 5 0毫克，〇 . 〇 8毫莫耳；於實例4中製備）之無水 DMF(1.0毫升）攪拌溶液中添加對-氯芊基氯（29毫克，0.18 毫莫耳），接著添加碳酸鉀（5 5毫克，0 · 4 0毫莫耳）。使混合 物於室溫下攪摔24小時，接著置於CH3CN/H2O/0.1% TFA 中。混合物以逆相 HPLC(Rainin C18，0% CH3CN 至 50% CH3CN梯度，CH3CN/H2〇，0.1% TFA)純化，且於真空中 移除CH3CN後凍乾含產物之淡黃色餾份，獲得21毫克黃色 3-[4-(4-氯芊基）哌畊-1-基甲基]嘧啶并[5,4-e][l，2,4]三畊 -5,7 -二胺之三氟乙酸鹽。 lU NMR (MeOH-d45 ppm): 8.20 (m5 4H)? 4.30 (s, 4H), 2.8 8-3.40 (m，8H)。 實例1 7 3-[4-(3 -甲氧基芊基）哌畊-1-基甲基]嘧啶并[5,4-e][l，2,4] 三畊-5,7-二胺 -

MH

於含3-哌畊-1-基曱基嘧啶并[5,4-e][l，2,4]三畊- 5,7-二 胺TFA鹽5(50亳克，0.08毫莫耳；於實例4中製備）之無水 DMF( 1.0毫升）攪拌溶液中添加間-甲氧基芊基氯（19毫 克，0.12毫莫耳），接著添加碳酸鉀（55毫克，0.40毫莫耳）。 使混合物於室溫下攪拌24小時，接著置於CH3CN/H2O/0.1% TFA中。混合物以逆相 HPLC(Rainin C18, 0% CH3CN 至 50% -29- (25) (25)200306313 CH3CN梯度，CH3CN/H20，〇·1% TFA)純化，且於真空中 移除C Η3 C N後凍乾含產物之淡黃色餾份，獲得3 0毫克黃色 3-[4-(3 -甲氧基芊基）哌畊-1-基甲基]嘧啶并[5,4-e][l，2,4] 三畊-5，7 -二胺之三氟乙酸鹽。 1 Η N M R (M e Ο Η - d 4，p p m): 7 · 4 0 (m，1 Η)，7 · 0 6 (m，3 Η) 4.30 (s，2H)，4_23 (s，2H)，3.81 (s，3H)，2.80-3.40 (m ’ 8H)。 實例1 8 3-[4-(3-氟芊基）哌畊-1-基甲基]嘧啶并[5,4-e][l，2,4]三啡 · -5，7 -二胺

於含3 -哌畊-1 -基甲基嘧啶并[5，4 - e ] [ 1，2，4 ]三畊-5，7 _二 胺TFA鹽5(50毫克，0.08毫莫耳；於實例4中製備）之無水 DMF( 1.0毫升）攪摔溶液中添加間-氟苄基氯（〇·〇ι43毫 _ 升，0_12毫莫耳），接著添加碳酸鉀（55毫克，0.40毫莫耳）。 使混合物於室溫下揽拌24小時，接著置於 CH3CN/H2O/0.1% TFA中。混合物以逆相 HPLC(Rainin C18， · 0%CH3CN 至 50% CH3CN梯度，CH3CN/H2〇，0.1〇/〇 TFA)純 化，且於真空中移除CH3CN後凍乾含產物之淡黃色餾份， 獲得11毫克黃色3-[4-(3 -氟芊基）喊p井-1-基甲基]P密症并 [5,44][1，2,4]三畊-5,7-二胺之三氟乙酸鹽。 -30 - 200306313 發明說明續頁 (26) L——- lH NMR (MeOH-d4, ppm): 7.18-7.60 (m, 4H), 4.33 (s, 2H)，4.27 (s，2H), 2.8 3 -3.3 8 (m，8H)。 實例1 9 3-[4-(3-三氟甲基芊基）哌畊-卜基甲基]嘧啶并 [5,4-e][l，2,4]三畊-5,7-二胺

MH

於含3-哌畊-1-基甲基嘧啶并[5,4-e][l，2,4]三畊- 5,7-二 胺TFA鹽5(50毫克，0.08毫莫耳；於實例4中製備）之無水 DMF( 1.0毫升）攪拌溶液中添加間-三氟甲基芊基溴（0.021 毫升，0.14毫莫耳），接著添加碳酸鉀（55毫克，0.40毫莫 耳）。使混合物於室溫下攪拌24小時，接著置於 CH3CN/H2O/0. 1% TFA 中。混合物以逆相 HPLC(Rainin C18， 0%CH3CN 至 50% CH3CN梯度，CH3CN/H20，0·1% TFA)純 化，且於真空中移除CH3CN後凍乾含產物之淡黃色餾份， ® 獲得13毫克黃色3-[4-(3-三氟甲基芊基）哌喷-1-基甲基]嘧 啶并[5,4-e][l，2,4]三畊- 5,7-二胺之三氟乙酸鹽。 lH NMR (MeOH-d4 , ppm): 7.63 -7.92 (m? 4H), 4.38 (s? Λ 2H), 4.32 (s，2H)，2.8 5 - 3.3 8 (m，8H)。 實例2 0 3-[4-(4-三氟甲基芊基）哌畊-1-基甲基]嘧啶并 [5,4-e][l，2,4]三畊-5,7-二胺 -31 - 200306313 (27)

於含3-峰_-1-基甲基。密淀并[5,4-6][1，2,4]三_-5,7-二 胺TFA鹽5(50毫克，0.08毫莫耳；於實例4中製備）之無水 DMF( 1.0毫升）攪摔溶液中添加對-三氟甲基芊基溴（0.021 毫升，0.14毫莫耳），接著添加碳酸鉀（55毫克，0.40毫莫 耳）。使混合物於室溫下攪拌24小時，接著置於 CH3CN/H2O/0.1% TFA 中。混合物以逆相 HPLC(Rainin C18, 0%CH3CN 至 50% CH3CN梯度，CH3CN/H20，0.1% TFA)純 化，且於真空中移除CH3CN後凍乾含產物之淡黃色餾份， 獲得22毫克黃色3-[4-(4-三氟甲基芊基）哌畊-1-基甲基]嘧 啶并[5,44][1，2,4]三畊-5,7-二胺之三氟乙酸鹽。

4 NMR (MeOH-d4，ppm): 7.77 (m，4H)，4.37 (s，2H), 4.33 (s，2H), 2.90-3.3 8 (m，8H) 〇 實例2 1 3-[4-(3-溴芊基）哌畊-1-基甲基]嘧啶并[5,41][1，2,4]三畊 -5，7 -二胺

於含3-哌畊-1-基甲基嘧啶并[5,4-e][l，2,4]三畊- 5,7-二 -32- 200306313 (28) SS^績頁 胺TFA鹽5(50毫克，0.08毫莫耳；於實例4中製備）之無水 DMF( 1.0毫升）攪拌溶液中添加間-溴苄基溴（34毫克，0.14 毫莫耳），接著添加碳酸钾（5 5毫克，〇 · 4 0毫莫耳）。使混合 物於室溫下攪拌24小時，接著置於CH3CN/H2O/0.1% TFA · 中。混合物以逆相 HPLC(Rainin C18，0% CH3CN 至 50% ， CH3CN梯度，CH3CN/H20，0.1% TFA)純化，且於真空中 移除CH3CN後凍乾含產物之淡黃色餾份，獲得15毫克黃·色 3_[4-(3-溴苄基）哌畊-1-基甲基]嘧啶并[5,4-e][l，2,4]三畊 φ -5,7 -二胺之三氟乙酸鹽。 lR NMR (MeOH-d4? ppm): 7.3 8-7.80 (m5 4H), 4.30 (s? 4H)，2.8 5 - 3 .3 8 (m，8H)。 實例22 3-[4-(3-氰基爷基）喊0井-1-基甲基]p密淀并[5,4-e][i，2,4] 三畊-5，7 -二胺

於含3-哌畊-1-基甲基嘧啶并[5,44][1，2,4]三畊-5,7-二 胺TFA鹽5(50毫克，〇.〇8毫莫耳；於實例4中製備）之無水 DMF( 1 ·0毫升）攪拌溶液中添加間-氰基芊基溴（23毫克， 0.18毫莫耳），接著添加碳酸鉀（55毫克，〇.4〇毫莫耳）。使 混合物於室溫下攪拌24小時，接著置於CH3 CN/H2〇/〇 . 1 % TFA 中。混合物以逆相 HPLC(Rainin Ci8，〇〇/〇CH3CN 至 50% -33- 200306313 (29) 萌供買: CH3CN梯度，CH3CN/H20，0.1% TFA)純化，且於真空中 移除CH/N後凍乾含產物之淡黃色餾份，獲得12毫克黃色 3-[4-(3 -氰基芊基）喊畊-1-基甲基]嘧淀并[5,4-e][l，2,4] 三呼-5,7 -二胺之三氟乙酸鹽。 lH NMR (MeOH-d45 ppm): 7.60-7.92 (m? 4H), 4.37 (s? 2H), 4.27 (s，2H)，2.9 5 -3.3 5 (m，8H)。 實例2 3 3-[4-(2,4-二甲基苄基）哌畊-i-基甲基]嘧啶并 [5,44][1，2,4]三啩-5,7-二胺

於含3-哌畊-1-基甲基嘧啶并[5,4-e][l，2,4]三畊-5,7-二 胺TFA鹽5 (50毫克，〇.〇8毫莫耳；於實例4中製備）之無水 DMF(1.0毫升）攪拌溶液中添加2,4-二甲基芊基氯（0.020毫 升，〇_13毫莫耳），接著添加碳酸鉀（55毫克，0.40毫莫耳）。鲁 使混合物於室溫下攪拌24小時，接著置於CH3CN/H2O/0.1% TFA 中。混合物以逆相 HPLC(Rainin C 丨 8, 0% CH3CN 至 50% CH3CN梯度，CH3CN/H20，0.1% TFA)純化，且於真空中 · 移除CH3CN後凍乾含產物之淡黃色餾份，獲得10毫克黃色 ψ 3-[4-(2,4-二甲基芊基）哌畊-1-基甲基]嘧啶并[5,44][1，2,4] 三畊-5,7 -二胺之三氟乙酸鹽。 -34- 200306313 (30) 發朗說吸續頁 lH NMR (dmso-d6, ppm)： 9.40 (bs, 1H), 8.17 (bs, 2H)? 7.00-7.40 (m，3H)，4.28 (bs，2H)，4.10 (bs，2H)，2.95-3.35 (m，8H)，2.34 (s，3H)，2.28 (s，3H) 〇 實例24 3-[4-(4 -乙基-2-甲基莕-1-基甲基）成基甲基]p密咬并

[5,4_e][l，2,4]三畊-5,7-二胺 NH

於含3-喊畊-1-基曱基嘧啶并[5,44][1，2,4]三_-5,7-二 胺TFA鹽5 (50毫克，〇.〇8毫莫耳；於實例4中製備）之無水 DMF(1.0毫升）攪摔溶液中添加1-氯甲基-2-甲基莕（34毫 克，0.18毫莫耳），接著添加碳酸鉀（55毫克，0.40毫莫耳）。 使混合物於室溫下攪拌24小時，接著置於CH3CN/H20/0.1 % TFA 中。混合物以逆相 HPLC(Rainin C18, 0% CH3CN 至 50% CH3CN梯度，CH3CN/H20，0.1% TFA)純化，且於真空中 移除C Η 3 C N後滚乾含產物之淡黃色館份，獲得2 3毫克黃色 3-[4-(4 -乙基-2-甲基莕-1-基甲基）哌畊-1-基甲基]嘧啶并 [5,44][1，2,4]三畊-5,7-二胺之三氟乙酸鹽。 lH NMR (MeOH-d45 ppm): 8.07 (m, 1H)? 7.92 (m? 2H), 7·40-7·50 (m，3H)，4.90 (s，2H), 4·37 (s，2H)，2.70 (s，3H)， 2.8 0- 3.4 5 (m，8H)。 -35- 200306313 (31) 發明說明續頁 實例2 5 3-[4-(4-苄基氧基苄基）哌畊-ΐ_基甲基]嘧啶并 [5,44][1，2,4]三味- 5,7 -二胺

於含3-哌畊-1-基甲基嘧啶并[5,4_e][1，2,4]三畊-5,7•二 胺TF A鹽5 ( 5 0毫克，〇 · 〇 8毫莫耳；於實例4中製備）之無水 DMF(1.0^升）檟;拌溶液中添加1-氯甲基-2_甲基苔（27毫 克，0.12毫莫耳），接著添加碳酸鉀（58毫克，0.42毫莫耳）。 使混合物於室溫下攪摔24小時，接著置於CH3CN/H2O/0.1 % T F A 中。混合物以逆相 Η P L C (R a i n i n C 丨 8，0 % c Η 3 C N 至 5 0 〇/〇 CH3CN梯度，CH3CN/H20，0.1% TFA)純化，且於真空中 移除CH3CN後凍乾含產物之淡黃色餾份，獲得23毫克黃色 3-[4-(4-芊基氧基芊基）哌畊-1-基甲基]嘧啶并[5,44][1，2,4] 三畊-5，7 -二胺之三氟乙酸鹽。 lH NMR (dmso-d6? ppm): 9.63 (s, 1H), 9.50 (s, 1H)? 8.91 (bs，1H)，8.77 (bs，1H)，7.40 (ni，7H)，7.05 (m，2H)， 5.12 (s, 2H)? 4.25 (s, 2H)5 4.17 (s, 2H)3 2.6 0-3.40 (m, 8H) 實例2 6 PTPIB之活體夕卜抑制 使用慣用之分子生物技術 白人類cDNA複製人類 -36- 200306313 (32) PTPIB(1-321)。cDNA排序與公告之人類PTPIB排序 (Accession編號M33689)相同蛋白質係如Barford D.等人 之 J. Mol Biol (1994) 239, 726-730 所述般自 E. cali表現且 純化。 PTP酶之分析 PTP酶活性之測量係使用下列二方法之一進行： 測量P T PIB抑制活性之第一種方法係使用以胰島素受 體絲胺酸自磷醯化位置1 146(TRDI(pY)E)之胺機酸排序為 主之絲胺酸磷醯化呔作為基材。反應條件如下： 在含 37·5 mM Mes 緩衝液 pH 6.2，140 mM NaCl，0.05% BSA及3 00 nM DTT之緩衝液中，以化合物培養PTPIB (〇·5-2 nM)15分鐘。反應藉由添加50 μΜ基材起始。室溫 (2 2-2 5 °C )下20分鐘後，以ΚΟΗ終止反應，且使用先前所 述（Harder 等人，1 994 Biochem J. 298; 3 95)之 Malachite G r e e η測量游離磷酸鹽之量。

第二種方法係用於測量一盤ΡΤΡ酶之一般ΡΤΡ酶抑制活 性。在各酵素之Km處使用受體（6,8-二氟-4-甲基 umbelliferyl嶙酸鹽（DiFMUP ;購自 Molecular Probes)。緩 衝條件與上述Malachite Green分析相同，但使用37.5 mM 二乙基戊二酸酯pH 6.2取代MES。反應已KOH終止。此 時’二脫磷醯化產物發出螢光且讀取螢光值。（激發：3 6 0 mM/發光：46〇 mM)。 針對動態實驗，係使用相同緩衝條件，但使用酵素起始 反應’且在1 0分鐘後終止反應。依據上述活體外分析，本 -37- 200306313 (33) 發明:說明讀頁 發明化合物之？丁？181<^5〇低於5〇〇0^1，較好低於1〇〇。 如上述活體外分析般，實例4 - 2 5所有化合物之ρ τ PIB 1C 5〇均低於30 μΜ。 實例2 7 老鼠模型中化合物對血液葡萄糖量之影響 為測量抗糖尿病作用，係使化合物在第2形糖尿病及肥 胖症之活體模型中充分建立之齟齒動物中試驗。 肥胖之ob/ob鼠 使用雄性或雌性 〇b/〇b(C57BL6/J)鼠（Diabetologia 14, 141-148 (1978)) (Jackson Labs) 40-50克分析化合物除降 低三酸甘油酯外，液降低葡萄糖。老鼠先以其葡萄糖量及 體重為主，預篩選成1 〇 -12組。老鼠在水及慾望下維持維 持一般麵齒類動物之飲食。以強灌（懸浮於1 % N a - C M C中） 使老鼠每日接收化合物五天。投藥前，藉由輾碎一部份尾 巴且由尾巴之血管收集血液讀取第一天預投藥之血液葡 萄糖讀數。第五天治療後二小時以相同方法進行葡萄糖之 另一次測量。接著將動物麻醉，且使其失血死亡。收集血 液及組織供分析用。當化合物相較於治療之老鼠，其血液 中葡萄糖在統計上明顯（PS0.05)下降時則視同活性。 飲食引發夕肮胖C57BL6/I鼠（DIO鼠\ 弟2類糖尿病之老乳可藉由使其維持高脂肪飲食* _ 6個

月產生（Diabetes 3 7:1 1 63 -67 Sept 1 9 8 8)。使雄性 C57B16/J 老鼠（年齡3-4週）處於高脂肪飲食中4-6週。此時會血糖過 高且血胰島素過多’且體重40-50克。口服治療前先將DI0 200306313 (34) 發明細翁頁 鼠（n = 6)稱重，且關在籠中二小時。以強飼投藥前，如上 述般由尾巴血管取得預投藥（時間為零）之葡萄糖讀數。 老鼠以化合物治療每日依次持續5天。對照用老鼠則不 投予化合物。第五天投藥前（零時）測量葡萄糖，且在投藥 後2小時及4小時測量。投藥後第四小時測量胰島素及三酸 甘油酯。若動物中化合物之作用相較於對照用經治療動 物，在統計上顯示使葡萄糖、胰島素及三酸甘油酯明顯的 (PS0.05)下降，則化合物視同活性。 實例5、1 0及1 3之化合物已經依據實例2 7之程序，於老 鼠活體中試驗，且顯示可使血液中葡萄糖至少下降1 5 %。 -39-

Claims (1)

1. 200306313 拾、申請專利範圍 1 . 一種下式之化合物，或其醫藥上可接受鹽

   其中 R1及R2係獨立選自包含氫之基，或 R1 及 R2—起形成化學鍵、-CH2-、-0-、-NH-或-N-R3， R J為低級燒基或-C Η 2 - A r ’且

   Ar係選自包含未經取代之苯基；未經取代之莕基； 以低級烷基、低級烷氧基、芳基、環烷基、低級烷基· 芳基、低級烷氧基芳基、低級烷基-環烷基、低級烷氧 基-環烷基、函基、氰基或三氟甲基單-或二-取代之苯 基；及以低級烷基、低級烷氧基、芳基、環烷基、低 級燒基-芳基、低級燒氧基-芳基、低級纟克基-緣虎基、 低級烷氧基-環烷基或鹵基單-或二-取代之莕基。 2 .如申請專利範圍第1項之化合物，或其醫藥上可接受理 鹽，其具有下式

   II 200306313 申請專利範圍讀頁 其中Ar係選自包含未經取代之苯基；未經取代之苯 基；以低級烷基、低級烷氧基、芳基、環烷基、低級 燒基-芳基、低級烷氧基芳基、低級烷基-環烷基、低級 烷氧基-環烷基、i基、氰基或三氟甲基單-或二-取代 之苯基；及以低級烷基、低級烷氧基、芳基、環烷基、 低級烷基-芳基、低級烷氧基-芳基、低級烷基-環烷 基、低級烷氧基-環烷基或鹵基單-或二-取代之莕基。 3 ·如申請專利範圍第1或2項之化合物，其中Ar為未經取 代之苯基或未經取代之莕基。 4. 如申請專利範圍第1或2項之化合物，其中Ar為以低級 烷基、低級烷氧基、芳基、環烷基、低級烷基-芳基、 低級烷氧基-芳基、I#基、氰基或三氟甲基之單取代苯 5. 如申請專利範圍第1或2項之化合物，其中Ar為以低級 烷基、滴基烷氧基、卣基、氰基或三氟甲基單取代之 苯基。 6. 如申請專利範圍第1或2項之化合物，其中Ar為以低級 烷基；低級烷氧基、函基或氰基雙取代之苯基。 7. 如申請專利範圍第1或2項之化合物，其中Ar為以低級 烷基、低級烷氧基、低級烷基-芳基、低級烷氧基-芳 基或iS基之單取代莕基。 8. 如申請專利範圍第1或2項之化合物，其中Ar為以低級 烷基、低級烷氧基或自基單取代之萘基。 9. 如申請專利範圍第1或2項之化合物，其中Ar為以低級 200306313 申請專利範園讀頁 烷基、低級烷氧基或鹵基雙取代之莕基。 1 〇 .如申請專利範圍第1或2項之化合物，其係選自： 3-二乙基胺基甲基嘧啶并[5,4-e][l，2,4]三畊-5,7-二 胺； ‘ 3-(4 -芊基哌畊-1-基甲基）嘧啶并[5,4-e][l，2,4]三畊 丨 -5，7 -二胺； 3-(4-莕-2-基甲基哌畊-1-基甲基）嘧啶并[5,4-e][l，2,4] 三畊-5，7 -二胺； · 3-(4-莕-1-基甲基哌畊-1-基甲基）嘧啶并[5,4-e][l，2,4] 三畊-5，7 -二胺； 3-(4-聯苯-4-基甲基哌畊-1-基甲基）嘧啶并 [5.44] [1，2,4]三畊-5,7-二胺； 3·[4·(2,4-二甲基苄基）哌啩-1-基甲基]嘧啶并 [5.44] [1，2,4]三畊-5,7-二胺； 3-[4-(4 -乙基-2-甲基莕-1-基甲基）哌畊-1-基甲基]嘧啶 并[5,44][1，2,4]三畊-5,7-二胺；及 _ 3-[4-(4-苄基氧基苄基）哌畊-1-基甲基]嘧啶并 [5.44] [1，2,4]三畊-5,7-二胺。 1 1 . 一種製備如申請專利範圍第1或2項化合物之方法，包 括在式R4NHR5之化合物 ·

   3 200306313 其中 R4 為-CH2CH2Ri，且 R5 為-CH2CH2R2，且 R1 及 R2 存在 下，如申請專利範圍第1項所定義使式3之化合物反應。 1 2 .如申請專利範圍第1或2項之化合物，其係用作治療活 性物質。 1 3 .如申請專利範圍第1或2項之化合物，其係用於製備預 防及/或治療糖尿病之藥劑。 1 4 · 一種包括如申請專利範圍第1或2項之化合物及治療上 惰性載劑之醫藥組合物。 1 5 .如申請專利範圍第1或2項之化合物，其係依據申請專 利範圍第1 1項之方法製備。 1 6 . —種用於預防及/或治療與血液葡萄糖量有關疾病之 醫藥組合物，該組合物包括有效量之如申請專利範圍 第1或2項之化合物。 1 7 .如申請專利範圍第1 6項之方法，其中該疾病為糖尿病。 200306313 陸、（一）、本案指定代表圖為：第_圖 (二）、本代表圖之元件代表符號簡單說明：

   柒、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式：

   I 續