TH17936C3 - กรรมวิธีการตรวจสอบยีนกลายพันธุ์ของเชื้อสแตฟิโลค็อกคัสออเรียส(Staphylococcusaureus)ที่ดื้อยาเมทิซิลิน(methicillin)ด้วยแถบสี - Google Patents

Abstract

บทสรุปการประดิษฐ์ซึ่งจะปรากฏบนหน้าประกาศโฆษณาReadFile:หน้า1ของจำนวน1หน้าบทสรุปการประดิษฐ์กรรมวิธีการตรวจสอบยีนกลายพันธุ์ของเชื้อสแตฟิโลค็อกคัสออเรียส(Staphylococcusaureus)ที่ดื้อยาเมทิซิลิน(methicillin)ด้วยแถบสีเริ่มจากการออกแบบไพรเมอร์5เส้นที่จำเพาะต่อลำดับเบสของเชื้อสแตฟิโลค็อกคัสออเรียส(Staphylococcusaureus)ที่ดื้อยาเมทิซิลิน(methicillin)บนยีนเมคเอ(ทาecA)ซึ่งโดยให้ไพรเมอร์1เส้นติดฉลากด้วยไบโอติน(biotin)หรือไดกอกซิเจนิน(Digoxigenin)และให้ไพรเมอร์อีก1เส้นติดฉลากด้วยสารเรืองแสง(FITC)ในการติดตามปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นบนแผ่นดิพสติค(dipstick)ในระบบนี้ดีเอ็นเอเป้าหมายจะถูกเพิ่มปริมาณภายใต้อุณหภูมิอุณหภูมิ61องศาเซลเซียสเป็นเวลา45นาทีในกล่องให้ความร้อน(heatingblock)แล้วอ่านผลบนแผ่นดิพสติค(dipstick)เมื่อให้ผลบวกจะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพูบริเวณแถบทดสอบ(T)และแถบควบคุม(C)แสดงว่าในตัวอย่างพบเชื้อสแตฟิโลค็อกคัสออเรียส(Staphylococcusaureus)ที่ดื้อยาเมทีซิลิน(methicillin)แต่ถ้าผลลบจะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพูเฉพาะแถบควบคุม(C)เท่านั้นวิธีการนี้เทียบเท่ากับการตรวจสอบด้วยเทคนิคพีซีอาร์(PCR)แบบเรียลไทม์(realtime)อีกทั้งยังไม่ต้องใช้เครื่องพีซีอาร์(PCR)และเครื่องแยกสารพันธุกรรมด้วยกระแสไฟฟ้าในการติดตามผลของปฏิกิริยา

Claims (5)

ข้อถือสิทธฺ์(ทั้งหมด)ซึ่งจะไม่ปรากฏบนหน้าประกาศโฆษณา:------04/12/2563------(OCR) 1.กรรมวิธีการตรวจสอบยีนกลายพันธุ์ของเชื้อสแตฟิโลค็อกคัสออเรียส(Staphylococcusaureus)ที่ดื้อยาเมทิซิลิน(methicillin)ด้วยแถบสีที่ซึ่งประกอบด้วยการทำปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)ร่วมกับการประยุกต์ใช้แผ่นดิพสติค(dipstick)การทำปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)25ไมโครลิตรประกอบด้วยไพรเมอร์3และไพรเมอร์4อย่างละ50พิโคโมล,ไพรเมอร์1ไพรเมอร์2และไพรเมอร์5อย่างละ5พิโคโมล,ดีเอ็นทีพี(dNTP)0.8มิลลิโมลาริผสมด้วยสารเบตาอีน(betaine)0.6โมลาริ,สารแมกนีเซียมซัลเฟส(MgSOa)4มิลลิโมลาร์,เอนไซม์บีเอสทีดีเอ็นเอโพลีเมอเรส(BstDNApolymerase)8Uและสารละลายบัฟเฟอร์ด้วยการทำปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)ที่อุณหภูมิ61องศาเซลเซียสเป็นเวลา45นาทีจากนั้นดูดสารละลายดังกล่าวจำนวน5ไมโครลิตรใส่ในหลอดใหม่ที่มีสารละลายบัฟเฟอร์100ไมโครลิตรที่อุณหภูมิห้องจากนั้นจุ่มแผ่นติพสติค(dipstick)ลงในสารละลาย5นาทีแล้วอ่านผลบนแผ่นดิพสติค(dipstick)เมื่อให้ผลบวกจะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพูบริเวณแถบทดสอบ(T)และแถบควบคุม(C)แสดงว่าในตัวอย่างพบเชื้อสแตฟิลค็อกคัสออเรียส(Staphylococcusaureus)ที่ดื้อยาเมทิซิลิน(methicillin)แต่ถ้าผลลบจะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพูเฉพาะแถบควบคุม(C)เท่านั้นวิธีการนี้ไม่ต้องใช้เครื่องพีซีอาร์(PCRthermalcycler)และเครื่องแยกสารพันธุกรรมด้วยกระแสไฟฟ้าและเป็นการตรวจสอบหาเชื้อสแตฟิโลค็อกคัสออเรียส(Staphylococcusaureus)ที่ดื้อยาเมทิซิลิน(methicillin)ด้วยแผ่นดิพสติค(dipstick)ในผู้ป่วยที่สงสัยการติดเชื้อนี้เพื่อการตรวจวินิจฉัยและป้องกันการระบาดของโรคกรรมวิธีนี้ออกแบบไพรเมอร์สำหรับเทคนิคแลมป์(LAMP)ที่ใช้ในการตรวจเชื้อสแตฟิโลค็อกคัสออเรียส(Staphylococcusaureus)ที่ดื้อยาเมทิซิลิน(methicillin)ในปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)ประกอบด้วยไพรเมอริ5เส้นที่จำเพาะต่อลำดับเบสของเชื้อสแตฟิโลค็อกคัสออเพส(Staphylococcusaureus)ที่ดื้อยาเมทีซิลิน(methicillin)บนยีนเมคเอ(mecA)โดยให้ไพรเมอร์4ติดฉลากด้วยไบโอติน(biotin)หรือไดกอกซิเจนิน(Digoxigenin)และให้ไพรเมอร์5ติดฉลากด้วยสารเรืองแสง(FITC)ในการติดตามปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นบนแผ่นดิพสติค(dipstick)ดังนี้ไพรเมอร์1ลำดับเบส(5'-3')CATTgATCgCAACgTTCAAไพรเมอร์2ลำดับเบส(5'-3')AgATACATTCTTTggAACgATgไพรเมอร์3ลำดับเบส(5'-3')TgCATTCCTggAATAATgACgCTTTTgTTAAAgAAgATggTATgTggAAgไพรเมอร์4ลำดับเบส(5'-3')ไบโอติน(biotin)/ไดกอกซิเจนิน(Digoxigenin)CAgAACgTggTAAAATTTTAgACCgTTTTCCTAATCTCATATgTgTTCCTgTAไพรเมอร์5ลำดับเบส(5'-3')FITC-AAACAATgTggAATTggCCA------------แก้ไข04/12/2561 หน้า1ของจำนวน2หน้าข้อถือสิทธิ 1.กรรมวิธีการตรวจสอบยีนกลายพันธุ์ของเชื้อสแตฟิโลค็อกคัสออเรียส(Staphylococcusaureus)ที่ดื้อยาเมทิซิลิน(methicillin)ด้วยแถบสีที่ซึ่งประกอบด้วยการทำปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)ร่วมกับการประยุกต์ใช้แผ่นดิพสติค(dipstick)การทำปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)25ไมโครลิตรประกอบด้วยไพรเมอร์3และไพรเมอร์4อย่างละ50พิโคโมล,ไพรเมอร์1ไพรเมอร์2และไพรเมอร์5อย่างละ5พิโคโมล,ดีเอ็นทีพี(dNTP)0.8มิลลิโมลาร์ผสมด้วยสารเบตาอีน(betaine)0.6โมลาร์,สารแมกนีเซียมซัลเฟส(MgSO4)4มิลลิโมลาร์,เอนไซม์บีเอสทีดีเอ็นเอโพลีเมอเรส(BstDNApolymerase)8Uและสารละลายบัฟเฟอร์ด้วยการทำปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)ที่อุณหภูมิ61องศาเซลเซียสเป็นเวลา45นาทีจากนั้นดูดสารละลายดังกล่าวจำนวน5ไมโครลิตรใส่ในหลอดใหม่ที่มีสารละลายบัฟเฟอร์100ไมโครลิตรที่อุณหภูมิห้องจากนั้นจุ่มแผ่นดิพสติค(dipstick)ลงในสารละลาย5นาทีแล้วอ่านผลบนแผ่นดิพสติค(dipstick)เมื่อให้ผลบวกจะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพูบริเวณแถบทดสอบ(T)และแถบควบคุม(C)แสดงว่าในตัวอย่างพบเชื้อสแตฟิโลค็อกคัสออเรียส(Staphylococcusaureus)ที่ดื้อยาเมทิซิลิน(methicillin)แต่ถ้าผลลบจะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพูเฉพาะแถบควบคุม(C)เท่านั้นวิธีการนี้ไม่ต้องใช้เครื่องพีซีอาร์(PCRthermalcycler)และเครื่องแยกสารพันธุกรรมด้วยกระแสไฟฟ้าและเป็นการตรวจสอบหาเชื้อสแตฟิโลค็อกคัสออเรียส(Staphylococcusaureus)ที่ดื้อยาเมทิซิลิน(methicillin)ด้วยแผ่นดิพสติค(dipstick)ในผู้ป่วยที่สงสัยการติดเชื้อนี้เพื่อการตรวจวินิจฉัยและป้องกันการระบาดของโรคกรรมวิธีนี้ออกแบบไพรเมอร์สำหรับเทคนิคแลมป์(LAMP)ที่ใช้โนการตรวจเชื้อสแตฟิโลค็อกคัสออเรียส(Staphylococcusaureus)ที่ดื้อยาเมทิซิลิน(methicillin)ในปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)ประกอบด้วยไพรเมอร์5เส้นที่จำเพาะต่อลำดับเบสของเชื้อสแตฟิโลค็อกคัสออเรียส(Staphylococcusaureus)ที่ดื้อยาเมทิซิลิน(methicillin)บนยีนเมคเอ(mecA)โดยให้โพรเมอร์4ติดฉลากด้วยไบโอติน(biotin)หรือไดกอกซิเจนิน(Digoxigenin)และให้ไพรเมอร์5ติดฉลากด้วยสารเรืองแสง(FITC)ในการติดตามปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นบนแผ่นดิพสติค(dipstick)ดังนี้ ไพรเมอร์1ลำดับเบส(5'-3')CATTgATCgCAACgTTCAA ไพรเมอร์2ลำดับเบส(5'-3')AgATACATTCTTTggAACgAT ไพรเมอร์3ลำดับเบส(5'-3') TgCATTCCTggAATAATgACgCTTTTgTTAAAgAAgATggTATgTggAAg ไพรเมอร์4ลำดับเบส(5'-3') biotin/Dig-cAgAACgTggTAAAATTTTAgACCgTTTTCCTAATCTCATATgTgTTCCTgTA ไพรเมอร์5ลำดับเบส(5'-3') FITC-AAACAATgTggAATTggCCA Dig=Digoxigenin ---------------------------------------------------------------------------------------------------- หน้า1ของจำนวน2หน้า ข้อถือสิทธิ

1. กรรมวิธีการตรวจสอบยีนกลายพันธุ์ของเชื้อสแตฟิโลค็อกคัสออเรียส(Staphylococcusaureus)ที่ดื้อยาเมทิซิลิน(methicillin)ด้วยแถบสีที่ซึ่งประกอบด้วยการทำปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)ร่วมกับการประยุกต์ใช้แผ่นดิพสติค(dipstick)ภายในปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)25ไมใครลิตรประกอบด้วยไพรเมอร์3และไพรเมอร์4อย่างละ50พิโคโมล,ไพรเมอร์1ไพรเมอร์2และไพรเมอร์5อย่างละ5พิโคโมล,ดีเอ็นทีพี(dNTP)0.8มิลลิโมลาร์ผสมด้วยสารเบตาอีน(betaine)0.6โมลาร์,สารแมกนีเซียมซัลเฟส(MgSOa)4มิลลิโมลาร์,เอนไซม์บีเอสทีดีเอ็นเอโพลีเมอเรส(BstDNApolymerase)8Uและสารละลายบัฟเฟอร์ใช้โนการตรวจลำดับเบสของยีนกลายพันธุ์ของเชื้อสแตฟิโลค็อกคัสออเรียส(Staphylococcusaureus)ที่ดื้อยาเมทิซิลิน(methicillin)บนยีนเมคเอ(mecA)การออกแบบไพรเมอร์สำหรับเทคนิคแลมป์(LAMP)ที่ใช้โนการตรวจเชื้อสแตฟิโลค็อกคัสออเรียส(Staphylococcusaureus)ที่ดื้อยาเมทิซิลิน(methicillin)ในปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)ประกอบด้วยไพรเมอร์5เส้นที่จำเพาะต่อลำดับเบสของเชื้อสแตฟิโลค็อกคัสออเรียส(Staphylococcusaureus)ที่ดื้อยาเมทิซิลิน(methicillin)บนยีนเมคเอ(mecA)โดยให้โพรเมอร์4ติดฉลากด้วยไบโอติน(biotin)หรือไดกอกซิเจนิน(Digoxigenin)และให้ไพรเมอร์5ติดฉลากด้วยสารเรืองแสง(FITC)ในการติดตามปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นบนแผ่นดิพสติค(dipstick)ดังนี้ ไพรเมอร์1ลำดับเบส(5'-3')CATTgATCgCAACgTTCAA ไพรเมอร์2ลำดับเบส(5'-3')AgATACATTCTTTggAACgAT ไพรเมอร์3ลำดับเบส(5'-3') TgCATTCCTggAATAATgACgCTTTTgTTAAAgAAgATggTATgTggAAg ไพรเมอร์4ลำดับเบส(5'-3') biotin/Dig-cAgAACgTggTAAAATTTTAgACCgTTTTCCTAATCTCATATgTgTTCCTgTA ไพรเมอร์5ลำดับเบส(5'-3') FITC-AAACAATgTggAATTggCCA Dig=Digoxigenin

2. กรรมวิธีการตรวจสอบยีนกลายพันธุ์ของเชื้อสแตฟิโลค็อกคัสออเรียส(Staphylococcusaureus)ที่ดื้อยาเมทิซิลิน(methicillin)ด้วยแถบสีตามข้อถือสิทธิ1ที่ซึ่งสภาวะที่เหมาะสมในการตรวจผลผลิตจากแลมป์(LAMP)บนแผ่นดิพสติค(dipstick)มีลักษณะเฉพาะคือทำปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)ที่อุณหภูมิ61องศาเซลเซียสเป็นเวลา45นาทีแล้วดูดสารละลายดังกล่าวจำนวน5ไมโครลิตรใส่ในหลอดที่มีสารละลายบัฟเฟอร์100ไมโครลิตรที่อุณหภูมิห้องจากนั้นจุ่มแผ่นดิพสติค(dipstick)ลงในสารละลาย5นาทีแล้วอ่านผล

3. กรรมวิธีการตรวจสอบยีนกลายพันธุ์ของเชื้อสแตฟิโลค็อกคัลออเรียส(Staphylococcusaureus)ที่ดื้อยาเมทีซิลิน(methicillin)ด้วยแถบสีตามข้อถือสิทธิ1ที่ซึ่งปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)มีขนตอนการเพิ่มปริมาณสารพันธุกรรมของเชื้อสแตฟิโลค็อกคัสออเรียส(Staphylococcusaureus)ที่ดื้อยาเมทีซิลิน(methicillin)เป็นเวลา45นาทีที่อุณหภูมิ61องศาเซลเซียสโดยให้ไพรเมอร์4ติดฉลากด้วยไบโอติน(biotin)หรือไดกอกซิเจนิน(Digoxigenin)และให้ไพรเมอร์5ติดฉลากด้วยสารเรืองแสง(FITC)ในการติดตามปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นด้วยการอ่านผลบนแผ่นดิพสติค(dipstick)เมื่อให้ผลบวกจะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพูบริเวณแถบทดสอบ(T)และแถบควบคุม(C)แสดงว่าในตัวอย่างพบเชื้อสแตฟิโลค็อกคัสออเรียส(Staphylococcusaureus)ที่ดื้อยาเมทีซิลิน(methicillin)แต่ถ้าผลลบจะปรากฏเส้นทดสอบสีซมพูเฉพาะแถบควบคุม(C)เท่านั้น หน้า2ของจำนวน2หน้า

4. กรรมวิธีการตรวจสอบยีนกลายพันธุ์ของเชื้อสแตฟิโลค็อกคัสออเรียส(Staphylococcusaureus)ที่ดื้อยาเมทิซิลิน(methicillin)ด้วยแถบสีตามข้อถือสิทธิ1ที่ซึ่งมีลักษณะเฉพาะคือไม่ต้องใช้เครื่องพีซีอาร์(PCRthermalcycler)และเครื่องแยกสารพันธุกรรมด้วยกระแสไฟฟ้า

5. กรรมวิธีการตรวจสอบยีนกลายพันธุ์ของเชื้อสแตฟิโลค็อกคัสออเรียส(Staphylococcusaureus)ที่ดื้อยาเมทิซิลิน(methicillin)ด้วยแถบสีตามข้อถือสิทธิ1ที่ซึ่งเป็นเทคนิคการตรวจสอบหาเชื้อสแตฟิโลค็อกคัศออเรียส(Staphylococcusaureus)ที่ดื้อยาเมทิซิลิน(methicillin)ด้วยแถบสีในผู้ป่วยที่สงสัยการติดเชื้อนี้เพื่อการตรวจวินิจฉัยและป้องกันการระบาดของโรค