TH19454C3 - กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาฟลูออโรควิโนโลน(fluoroquinolone)ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียว - Google Patents

Abstract

บทสรุปการประดิษฐ์ซึ่งจะปรากฏบนหน้าประกาศโฆษณาReadFile:------22/01/2564------(OCR)กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาฟลูออโรควิโนโลน(fluoroquinolone)ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียวเริ่มจากการออกแบบไพรเมอร์5เส้นที่จำเพาะต่อลำดับเบสของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาฟลูออโรควิโนโลน(fluoroquinolone)ที่มีเบสกลายพันธุ์ของกรดอะมิโนที่ตำแหน่ง94บนยีนไจอาร์เอ(gyrA)โดยให้ฟอร์เวิร์ดอินเนอร์ไพรเมอร์(FIP)ติดฉลากด้วยไบโอติน(biotin)หรือไดกอกซิเจนิน(Digoxigenin)และให้โพรบไพรเมอร์(probe)ติดฉลากด้วยสารเรืองแสง(FITC)ในการติดตามปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นบนแผ่นดิพสติค(dipstick)ในระบบนี้ดีเอ็นเอเป้าหมายจะถูกเพิ่มปริมาณภายใต้อุณหภูมิอุณหภูมิ61องศาเซลเซียสเนินเวลา1ชั่วโมงในกล่องให้ความร้อน(heatingblock)แล้วอ่านผลบนแผ่นดิพสติค(dipstick)เมื่อให้ผลบวกจะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพูบริเวณแถบทดสอบ(T)และแถบควบคุม(C)แสดงว่าในตัวอย่างพบเบสกลายพันธุ์ของกรดอะมิโนที่ตำแหน่ง94บนยีนไจอาร์เอ(gyrA)แต่ถ้าผลลบจะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพูเฉพาะแถบควบคุม(C)เท่านั้นวิธีการนี้เทียบเท่ากับการตรวจสอบด้วยเทคนิคพีซีอาร์(PCR)แบบเรียลไทม์(realtime)อีกทั้งยังไม่ต้องใช้เครื่องพีซีอาร์(PCR)และเครื่องแยกสารพันธุกรรมด้วยกระแสไฟฟ้าในการติดตามผลของปฏิกิริยา------------------13/11/2562------(OCR)หน้า1ของจำนวน1หน้าบทสรุปการประดิษฐ์กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาฟลูออโรควิโนโลน(fluoroquinolone)ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียวเริ่มจากการออกแบบไพรเมอร์5เส้นที่จำเพาะต่อลำดับเบสของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาฟลูออโรควิโนโลน(fluoroquinolone)ที่มีเบสกลายพันธุ์ของกรดอะมิโนที่ตำแหน่ง94บนยีนไจอาร์เอ(gyrA)โดยให้ฟอร์เวิร์ดอินเนอร์ไพรเมอร์(FIP)ติดฉลากด้วยไบโอติน(biotin)หรือไดกอกซิเจนิน(Digoxigenin)และให้โพรบไพรเมอร์(probe)ติดฉลากด้วยสารเรืองแสง(FITC)ในการติดตามปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นบนแผ่นดิพสติค(dipstick)ในระบบนี้ดีเอ็นเอเป้าหมายจะถูกเพิ่มปริมาณภายใต้อุณหภูมิอุณหภูมิ61องศาเซลเซียสเป็นเวลา1ชั่วโมงในกล่องให้ความร้อน(heatingblock)แล้วอ่านผลบนแผ่นดิพสติค(dipstick)เมื่อให้ผลบวกจะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพูบริเวณแถบทดสอบ(T)และแถบควบคุม(C)แสดงว่าในตัวอย่างพบเบสกลายพันธุ์ของกรดอะมิโนที่ตำแหน่ง94บนยีนไจอาร์เอ(gyrA)แต่ถ้าผลลบจะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพูเฉพาะแถบควบคุม(C)เท่านั้นวิธีการนี้เทียบเท่ากับการตรวจสอบด้วยเทคนิคพีซีอาร์(PCR)แบบเรียลไทม์(realtime)อีกทั้งยังไม่ต้องใช้เครื่องพีซีอาร์(PCR)และเครื่องแยกสารพันธุกรรมด้วยกระแสไฟฟ้าในการติดตามผลของปฏิกิริยา------------หน้า1ของจำนวน1หน้าบทสรุปการประดิษฐ์กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาฟลูออโรควิโนโลน(fluoroquinolone)ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียวเริ่มจากการออกแบบไพรเมอร์5เส้นที่จำเพาะต่อลำดับเบสของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไรแฟมพิซิน(Rifampicin)ที่มีเบสกลายพันธุของกรดอะมิโนที่ตำแหน่ง94บนยีนไจอาท์เอ(gyrA)โดยให้ไพรเมอร์1เส้นติดฉลากด้วยไบโอติน(biotin)หรือไดกอกซิเจนิน(Digoxigenin)และให้ไพรเมอร์อีก1เส้นติดฉลากด้วยสารเรืองแสง(FITC)ในการติดตามปฏิกิริยาที่เกิดชื้นบนแผ่นดิพสติค(dipstick)ในระบบนี้ดีเอ็นเอเป้าหมายจะถูกเพิ่มปริมาณภายใต้อุณหภูมิอุณหภูมิ61องศาเซลเซียสเป็นเวลา1ชั่วโมงในกล่องให้ความร้อน(heatingblock)แล้วอ่านผลบนแผ่นดิพสติค(dipstick)เมื่อให้ผลบวกจะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพูบริเวณแถบทดสอบ(T)และแถบควบคุม(C)แสดงว่าในตัวอย่างพบเบสกลายพันธุของกรดอะมิโนที่ตำแหน่ง94บนยีนไจอาร์เอ(gyrA)แต่ถ้าผลลบจะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพูเฉพาะแถบควบคุม(C)เท่านั้นวิธีการนี้เทียบเท่ากับการตรวจสอบด้วยเทคนิคพีซีอาร์(PCR)แบบเรียลไทม์(realtime)อีกทั้งยังไม่ต้องใช้เครื่องพีซีอาร์(PCR)และเครื่องแยกสารพันธุกรรมด้วยกระแสไฟฟ้าในการติดตามผลของปฏิกิริยา

Claims (1)

ข้อถือสิทธฺ์(ทั้งหมด)ซึ่งจะไม่ปรากฏบนหน้าประกาศโฆษณา:------22/01/2564------(OCR) 1.กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาฟลูออโรควิโนโลน(fluoroquinolone)ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียวที่ซึ่งประกอบด้วยการทำปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)ร่วมกับการประยุกต์ใช้แผ่นดิพสติค(dipstick)การทำปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)25ไมโครลิตรประกอบด้วยฟอร์เวิร์ดอินเนอร์ไพรเมอร์(FIP)และแบคเวิร์ดอินเนอร์ไพรเมอร์(BIP)อย่างละ50พิโคโมล,ฟอร์เวิร์ดเอาเทอร์ไพรเมอร์(F3),แบคเวิร์ดเอาเทอร์ไพรเมอร์(B3)และโพรบไพรเมอร์(probe)อย่างละ5พิโคโมล,ดีเอ็นทีพี(dNTP)0.8มิลลิโมลาร์ผสมด้วยสารเบตาอีน(betaine)0.6โมลาร์,สารแมกนีเซียมซัลเฟส(MgSOa)4มิลลิโมลาร์,เอนไซม์บีเอสทีดีเอ็นเอโพลีเมอเรส(fistDNApolymerase)8Uและสารละลายบัฟเฟอร์ด้วยการทำปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)ที่อุณหภูมิ61องศาเซลเซียสเป็นเวลา1ชั่วโมงจากนั้นดูดสารละลายดังกล่าวปริมาตร5ไมโครลิตรใส่ในหลอดที่มีสารละลายบัฟเฟอร์100ไมโครลิตรที่อุณหภูมิห้องจากนั้นจุ่มแผ่นดิพสติค(dipstick)ลงในสารละลายรอเวลา5นาทีแล้วอ่านผลบนแผ่นดิพสติค(dipstick)เมื่อให้ผลบวกจะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพูบริเวณแถบทดสอบ(T)และแถบควบคุม(C)แสดงว่าในตัวอย่างพบเบสกลายพันธุ์ของกรดอะมิโนที่ตำแหน่ง94บนยีนไจอาร์เอ(gyrA)แต่ถ้าผลลบจะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพูเฉพาะแถบควบคุม(C)เท่านั้นวิธีการนี้ใช้ตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาฟลูออโรควิโนโลน(fluoroquinolone)ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียวในผู้ป่วยที่สงสัยการติดเชื้อวัณโรคดื้อยานี้เพื่อวินิจฉัยและป้องกันการระบาดของโรคโดยไม่ต้องใช้เครื่องพีซีอาร์(PCRthermalcycler)และเครื่องแยกสารพันธุกรรมด้วยกระแสไฟฟ้ากรรมวิธีนี้มีการออกแบบไพรเมอร์สำหรับเทคนิคแลมป์(LAMP)ในการตรวจเชื้อวัณโรคที่มีเบสกลายพันธุ์เพียงหนึ่งเบสไพรเมอร์ที่ใช้ในปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)ประกอบด้วยไพรเมอร์5เส้นที่จำเพาะต่อลำดับเบสกลายพันธุ์ของกรดอะมิโนที่ตำแหน่ง94บนยีนโจอาร์เอ(gyrA)ของเชื้อวัณโรคโดยให้ฟอร์เวิร์ดอินเนอร์ไพรเมอร์(FIP)ติดฉลากด้วยไบโอติน(biotin)หรือไดกอกซิเจนิน(Digoxigenin)และให้โพรบไพรเมอร์(probe)ติดฉลากด้วยสารเรืองแสง(FITC)ในการติดตามปฏิกิริยาที่เกิดชื้นบนแผ่นดิพสติค(dipstick)ดังนี้ฟอร์เวิร์ดเอาเทอร์ไพรเมอร์(F3)ลำดับเบส(5'-3')gAgCAggAgATgCAgCgCแบคเวิร์ดเอาเทอร์โพรเมอร์(B3)ลำดับเบส(5'-30gTTgCCCTggCCgTCCAแบคเวิร์ดอินเนอร์ไพรเมอร์(BIP)ลำดับเบส(5-3')ATgCACgggCTTgAgCCCgTTTTACATCgACTATgCgATgAgCgCgATgAgCฟอร์เวิร์ดอินเนอร์ไพรเมอร์(FIP)ลำดับเบส(5'-3')ไบโอติน(biotin)/ไดกอกซิเจนิน(Digoxigenin;Dig)AATgTTCgATTCCggCTTCCgCTTTTCCATgCgCACCAggCTTCโพรบไพรเมอร์(probe)ลำดับเบส(5'-3')FITC-CCgAgACCATgggCAACT------------------13/11/2562------(OCR)หน้า1ของจำนวน1หน้าข้อถือสิทธิ 1.กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาฟลูออโรควิโนโลน(fluoroquinolone)ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียวที่ซึ่งประกอบด้วยการทำปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)ร่วมกับการประยุกต์ใช้แผ่นดิพสติค(dipstick)การทำปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)25ไมโครลิตรประกอบด้วยฟอร์เวิร์ดอินเนอร์ไพรเมอร์(FIP)และแบคเวิร์ดอินเนอร์ไพรเมอร์(BIP)อย่างละ50พิโคโมล,ฟอร์เวิร์ดเอาเทอร์ไพรเมอร์(F3),แบคเวิร์ดเอาเทอร์ไพรเมอร์(B3)และโพรบไพรเมอร์(probe)อย่างละ5พิโคโมล,ดีเอ็นทีพี(dNTP)0.8มิลลิโมลาร์ผสมด้วยสารเบตาอีน(betaine)0.6โมลาร์,สารแมกนีเซียมซัลเฟส(MgSO4)4มิลลิโมลาร์,เอนไซม์บีเอสทีดีเอ็นเอโพลีเมอเรส(BstDNApolymerase)8Uและสารละลายบัฟเฟอร์ด้วยการทำปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)ที่อุณหภูมิ61องศาเซลเซียสเป็นเวลา1ชั่วโมงจากนั้นดูดสารละลายดังกล่าวปริมาตร5ไมโครลิตรใส่ในหลอดที่มีสารละลายบัฟเฟอร์100ไมโครลิตรที่อุณหภูมิห้องจากนั้นจุ่มแผ่นดิพสติค(dipstick)ลงในสารละลายรอเวลา5นาทีแล้วอ่านผลบนแผ่นดิพสติค(dipstick)เมื่อให้ผลบวกจะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพูบริเวณแถบทดสอบ(T)และแถบควบคุม(C)แสดงว่าในตัวอย่างพบเบสกลายพันธุ์ของกรดอะมิโนที่ตำแหน่ง94บนยีนไจอาร์เอ(gyrA)แต่ถ้าผลลบจะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพูเฉพาะแถบควบคุม(C)เท่านั้นวิธีการนี้ใช้ตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาฟลูออโรควิโนโลน(fluoroquinolone)ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียวในผู้ป่วยที่สงสัยการติดเชื้อวัณโรคดื้อยานี้เพื่อวินิจฉัยและป้องกันการระบาดของโรคโดยไม่ต้องใช้เครื่องพีซีอาร์(PCRthermalcycler)และเครื่องแยกสารพันธุกรรมด้วยกระแสไฟฟ้ากรรมวิธีนี้มีการออกแบบไพรเมอร์สำหรับเทคนิคแลมป์(LAMP)ในการตรวจเชื้อวัณโรคที่มีเบสกลายพันธุ์เพียงหนึ่งเบสไพรเมอร์ที่ใช้ในปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)ประกอบด้วยไพรเมอร์5เส้นที่จำเพาะต่อลำดับเบสกลายพันธุ์ของกรดอะมิโนที่ตำแหน่ง94บนยีนไจอาร์ไอ(gyrA)ของเชื้อวัณโรคโดยให้ฟอร์เวิร์ดอินเนอร์ไพรเมอร์(FIP)ติดฉลากด้วยไบโอติน(biotin)หรือไดกอกซิเจนิน(Digoxigenin)และให้โพรบไพรเมอร์(probe)ติดฉลากด้วยสารเรืองแสง(FITC)ในการติดตามปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นบนแผ่นดิพสติค(dipstick)ดังนี้ฟอร์เวิร์ดเอาเทอร์ไพรเมอร์(F3)ลำดับเบส(5'-3')gAgCAggAgATgCAgCgCแบคเวิร์ดเอาเทอร์ไพรเมอร์(B3)ลำดับเบส(5'-3')gTTgCCCTggCCgTCCAแบคเวิร์ดอินเนอร์ไพรเมอร์(BIP)ลำดับเบส(5'-3')ATgCACgggCTTgAgCCCgTTTTACATCgACTATgCgATgAgCฟอร์เวิร์ดอินเนอร์ไพรเมอร์(FIP)ลำดับเบส(5'-3')biotin/Dig-AATgTTCgATTCCggCTTCCgCTTTTCCATgCgCACCAggCTTCโพรบไพรเมอร์(probe)ลำดับเบส(5'-3')FITC-CCgAgACCATgggCAACTDig=ไดกอกซิเจนิน(Digoxigenin)------------หน้า1ของจำนวน1หน้าข้อถือสิทธิ

1. กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาฟลูออโรควิโนโลน(fluoroquinolone)ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียวที่ซึ่งประกอบด้วยการทำปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)ร่วมกับการประยุกต์ใช้แผ่นดิพสติค(dipstick)การทำปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)25ไมโครลิตรประกอบด้วยไพรเมอร์3และไพรเมอร์4อย่างละ50พิโคโมล,ไพรเมอร์1ไพรเมอร์2และไพรเมอร์5อย่างละ5พิโคโมล,ดีเอ็นทีพี(dNTP)0.8มิลลิโมลาร์ผสมด้วยสารเบตาอีน(betaine)0.6โมลาร์,สารแมกนีเซียมซัลเฟส(MgS04)4มิลลิโมลาร์,เอนไซม์บีเอสทีดีเอ็นเอโพลีเมอเรส(BstDNApolymerase)8Uและสารละลายบัฟเฟอร์ด้วยการทำปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)ที่อุณหภูมิ61องศาเซลเซียสเป็นเวลา1ชั่วโมงจากนั้นดูดสารละลายดังกล่าวจำนวน5ไมโครลิตรใส่ในหลอดที่มีสารละลายบัฟเฟอร์100ไมโครลิตรที่อุณหภูมิห้องจากนั้นจุ่มแผ่นดิพสติค(dipstick)ลงในสารละลาย5นาทีแล้วอ่านผลบนแผ่นดิพสติค(dipstick)เมื่อให้ผลบวกจะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพูบริเวณแถบทดสอบ(T)และแถบควบคุม(C)แสดงว่าในตัวอย่างพบเบสกลายพันธุ์ของกรดอะมิโนที่ตำแหน่ง94บนยีนไจอาร์เอ(gyrA)แต่ถ้าผลลบจะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพูเฉพาะแถบควบคุม(C)เท่านั้นวิธีการนี้ใช้ตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาฟลูออโรควิโนโลน(fluoroquinolone)ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียวในผู้ป่วยที่สงสัยการติดเชื้อวัณโรคดื้อยานี้เพื่อการตรวจวินิจฉัยและป้องกันการระบาดของโรคโดยไม่ต้องใช้เครื่องพีซีอาร์(PCRthermalcycler)และเครื่องแยกสารพันธุกรรมด้วยกระแสไฟฟ้ากรรมวิธีนี้มีการออกแบบไพรเมอร์สำหรับเทคนิคแลมป์(LAMP)ในการตรวจเชื้อวัณโรคที่มีเบสกลายพันธุ์เพียงหนึ่งเบสไพรเมอร์ที่ใช้ในปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)ประกอบด้วยไพรเมอร์5เส้นที่จำเพาะต่อลำดับเบสกลายพันธุของกรดอะมิโนที่ตำแหน่ง94บนยีนไจอาร์เอ(gyrA)ของเชื้อวัณโรคโดยให้ไพรเมอร์4ติดฉลากด้วยไบโอติน(biotin)หรือไดกอกซิเจนีน(Digoxigenin)และให้ไพรเมอร์5ติดฉลากด้วยสารเรืองแสง(FITC)ในการติดตามปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นบนแผ่นดิพสติค(dipstick)ดังนี้ไพรเมอร์1ลำดับเบส(5-3')gAgCAggAgATgCAgCgCไพรเมอร์2ลำดับเบส(5-3')gTTgCCCTggCCgTCCAไพรเมอร์3ลำดับเบส(5'-3')ATgCACgggCTTgAgCCCgTTTTACATCgACTATgCgATgAgCไพรเมอร์4ลำดับเบส(5'-3')biotin/Dig-AATgTTCgATTCCggCTTCCgCTTTTCCATgCgCACCAggCTTCไพรเมอร์5ลำดับเบส(5'-3')FITC-CCgAgACCATgggCAACTDig=Digoxigenin