TH19326Y - กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยากานามัยซิน (kanamycin) ด้วยแถบสีขั้นตอนเดียว - Google Patents

Abstract

------22/01/2564------(OCR) กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยากานามัยซิน (kanamycin) ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียว เริ่มจากการออกแบบไพรเมอร์ 5 เส้น ที่จำเพาะต่อลำดับเบสของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยากานามัยซิน (kanamycin) ที่มีเบสกลายพันธุ์ที่ตำแหน่ง 1401 เบสเอเปลี่ยนเป็นเบสจี (A --> G) ของยีนอาร์อาร์เอส((rrs) โดย ให้ฟอร์เวิร์ดอินเนอร์ไพรเมอร์ (FIP) ติดฉลากด้วยไบโอติน (biotin) หรือโดกอกซิเจนิน (Digoxigenin) และให้โพ รบไพรเมอร์ (probe) ติดฉลากด้วยสารเรืองแสง (FITC) ในการติดตามปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นบนแผ่นดิพสติค(dipstick) ในระบบนี้ดีเอ็นเอเป้าหมายจะเพิ่มปริมาณภายใต้อุณหภูมิอุณหภูมิ 61 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 1ชั่วโมง ในกล่องให้ความร้อน (heating block) แล้วอ่านผลบนแผ่นดิพสติค (dipstick) เมื่อให้ผลบวก จะปรากฏ เส้นทดสอบสีชมพู บริเวณแถบทดสอบ (T) และแถบควบคุม (C) แสดงว่า ในตัวอย่างพบเบสกลายพันธุ์ที่ตำแหน่ง 1401 เบสเอเปลี่ยนเป็นเบสจี (A --> G) ของยีนอาร์อาร์เอส (rrs) แต่ถ้าผลลบ จะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพู เฉพาะ แถบควบคุม (C) เท่านั้น วิธีการนี้เทียบเท่ากับการตรวจสอบด้วยเทคนิคพีซีอาร์ (PCR) แบบเรียลไทม์ (real time)อีกทั้งยังไม่ต้องใช้เครื่องพีซีอาร์ (PCR) และเครื่องแยกสารพันธุกรรมด้วยกระแสไฟฟ้าในการติดตามผลของปฏิกิริยา ------------ ------13/11/2562------(OCR) หน้า 1 ของจำนวน 1 หน้าบทสรุปการประดิษฐ์ กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยากานามัยซิน (kanamycin) ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียว เริ่มจากการออกแบบไพรเมอร์ 5 เส้น ที่จำเพาะต่อลำดับเบสของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยากานามัยซิน(kanamycin) ที่มีเบสกลายพันธุ์ที่ตำแหน่ง 1401 เบสเอเปลี่ยนเป็นเบสจี (A --> G) ของยีนอาร์อารเอส (rrs) โดยให้ฟอร์เวิร์ดอินเนอร์ไพรเมอร์ (FIP) ติดฉลากด้วยไบโอติน (biotin) หรือไดกอกซิเจนิน (Digoxigenin) และให้โพรบไพรเมอร์ (probe) ติดฉลากด้วยสารเรืองแสง (FITC) ในการติดตามปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นบนแผ่นดิพสติค(dipstick) ในระบบนี้ดีเอ็นเอเป้าหมายจะเพิ่มปริมาณภายได้อุณหภูมิอุณหภูมิ 61 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 1ชั่วโมง ในกล่องให้ความร้อน (heating block) แล้วอ่านผลบนแผ่นดิพสติค (dipstick) เมื่อให้ผลบวก จะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพู บริเวณแถบทดสอบ (T) และแถบควบคุม (C) แสดงว่า ในตัวอย่างพบเบสกลายพันธุ์ที่ตำแหน่ง1401 เบสเอเปลี่ยนเป็นเบสจี (A --> G) ของยีนอาร์อาร์เอส (rrs) แต่ถ้าผลลบ จะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพู เฉพาะแถบควบคุม (C) เท่านั้น วิธีการนี้เทียบเท่ากับการตรวจสอบด้วยเทคนิคพีซีอาร์ (PCR) แบบเรียลไทม์ (real time)อีกทั้งยังไม่ต้องใช้เครื่องพีซีอาร์ (PCR) และเครื่องแยกสารพันธุกรรมด้วยกระแสไฟฟ้าในการติดตามผลของปฏิกิริยา ------------ หน้า 1 ของจำนวน 1 หน้า บทสรุปการประดิษฐ์ กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยากานามัยซิน (kanamycin) ด้วยแถบสีใน ขั้นตอนเดียว เริ่มจากการออกแบบไพรเมอร์ 5 เส้น ที่จำเพาะต่อลำดับเบสของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยากานามัยซิน (kanamycin) ที่มีเบสกลายพันธุที่ตำแหน่ง 1401 เบสเอเปลี่ยนเป็นเบสจี (A --> G) ของยีนอาร์อาร์เอส (rrs) โดย ให้ไพรเมอร์ 1 เส้น ติดฉลากด้วยโบโอติน (biotin) หรือไดกอกซิเจนิน (Digoxigenin) และให้ไพรเมอร์อีก 1 เส้น ติดฉลากด้วยสารเรืองแสง (FITC) ในการติดตามปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นบนแผ่นดิพสติค (dipstick) ในระบบนี้ดีเอ็นเอ เป้าหมายจะเพิ่มปริมาณภายใต้อุณหภูมิอุณหภูมิ 61 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 1 ชั่วโมง ในกล่องให้ความร้อน (heating block) แล้วอ่านผลบนแผ่นดิพสติค (dipstick) เมื่อให้ผลบวก จะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพู บริเวณแถบ ทดสอบ (T) และแถบควบคุม (C) แสดงว่า ในตัวอย่างพบเบสกลายพันธุ์ที่ตำแหน่ง 1401 เบสเอเปลี่ยนเป็นเบสจี (A -> G) ของยีนอาร์อาร์เอส (rrs) แต่ถ้าผลลบ จะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพู เฉพาะแถบควบคุม (C) เท่านั้น วิธีการนี้เทียบเท่ากับการตรวจสอบด้วยเทคนิคพีซีอาร์ (PCR) แบบเรียลไทม์ (real time) อีกทั้งยังไม่ต้องใช้ เครื่องพีซีอาร์ (PCR) และเครื่องแยกสารพันธุกรรมด้วยกระแสไฟฟ้าในการติดตามผลของปฏิกิริยา

Claims (1)

1. ------22/01/2564------(OCR) 1. กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยากานามัยซิน (kanamycin) ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียวที่ซึ่งประกอบด้วยการทำปฏิกิริยาแลมป์ (LAMP) ร่วมกับการประยุกต์ใช้แผ่นดิพสติค (dipstick) การทำปฏิกิริยาแลมป์ (LAMP) 25 ไมโครลิตร ประกอบด้วยฟอร์เวิร์ดอินเนอร์ไพรเมอร์ (FIP) และแบคเวิร์ดอินเนอร์ไพรเมอร์ (BIP) อย่างละ 50 พิโคโมล, ฟอร์เวิร์ดเอาเทอร์ไพรเมอร์ (F3), แบคเวิร์ดเอาเทอร์ไพรเมอร์ (B3) และโพรบไพรเมอร์ (probe) อย่างละ 5 พิโคโมล, ดีเอ็นทีพี (dNTP) 0.8 มิลลิโมลาร์ผสมด้วยสารเบตาอีน (betaine)0.6 โมลาร์, สารแมกนีเซียมซัลเฟส (MgSOa) 4 มิลลิโมลาร์, เอนไซม์ บีเอสที ดีเอ็นเอ โพลีเมอเรส (Bst DNApolymerase) 8 U และสารละลายบัฟเฟอร์ ด้วยการทำปฏิกิริยาแลมป์ (LAMP) ที่อุณหภูมิ 61 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมงจากนั้นดูดสารละลายดังกล่าวปริมาตร 5 ไมโครลิตรใส่ในหลอดที่มีสารละลายบัฟเฟอร์ ปริมาตร100ไมโครลิตร จากนั้นจุ่มแผ่นดิพสติค (dipstick) ลงในสารละลาย รอเวลา 5 นาที แล้วอ่านผลบนแผ่นดิพสติค(dipstick) เมื่อให้ผลบวกจะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพู บริเวณแถบทดสอบ (T) และแถบควบคุม (C) แสดงว่า ในตัวอย่างพบเบสกลายพันธุ์ที่ตำแหน่ง 1401 เบสเอเปลี่ยนเป็นเบสจี (A --> G) ของยีนอาร์อาร์เอส (rrs) แต่ถ้าผลลบ จะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพู เฉพาะแถบควบคุม (C) เท่านั้น วิธีการนี้ใช้ตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยากานามัยซิน (kanamycin) ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียวในผู้ป่วยที่สงสัยการติดเชื้อวัณโรคดื้อยานี้ เพื่อการตรวจวินิจฉัยและป้องกันการระบาดของโรค โดยไม่ต้องใช้เครื่องพีซีอาร์ (PCR thermal cycler) และเครื่องแยกสารพันธุกรรมด้วยกระแสไฟฟ้า กรรมวิธีนี้มีการออกแบบไพรเมอร์สำหรับเทคนิคแลมป์ (LAMP) ในการตรวจเชื้อวัณโรคที่มีเบสกลายพันธุ์เพียงหนึ่งเบส ไพรเมอร์ที่ใช้ในปฏิกิริยาแลมป์ (LAMP) ประกอบด้วยไพรเมอร์ 5 เส้นที่จำเพาะต่อลำดับเบสกลายพันธุ์ที่ตำแหน่ง 1401 เบสเอเปลี่ยนเป็นเบสจี (A --> G) ของยีนอาร์อาร์เอส (rrs) ของเชื้อวัณโรคโดยให้ฟอร์เวิร์ดอินเนอร์ไพรเมอร์ (FIP) ติดฉลากด้วยไบโอติน (biotin) หรือไดกอกซิเจนิน(Digoxigenin) และให้โพรบไพรเมอร์ (probe) ติดฉลากด้วยสารเรืองแสง (FITC) ในการติดตามปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นบนแผ่นดิพสติค (dipstick) ดังนี้ ฟอร์เวิร์ดเอาเทอร์ไพรเมอร์ (F3) ลำดับเบส (5'-3') ACAATggCCggTACAAAgg แบคเวิร์ดเอาเทอรโพรเมอร์ (B3) ลำดับเบส (5'-3') ACCTTCgACAgCTCCCTC แบคเวิร์ดอินเนอร์ไพรเมอร์ (BIP) ลำดับเบส (5'-3') TT gCAgACCCCgAT CCgAACTTTT gAT gCCgCgAggTTAAgC ฟอร์เวิร์ดอินเนอร์ไพรเมอร์ (FIP) ลำดับเบส (5'-30 ไบโอติน (biotin) /ไดกอกซิเจนิน (Digoxigenin; Dig) TgAAgTCggAgTCgCTAgTATTTTTTgTTAC Cg ACTTTCAT g ACTc โพรบไพรเมอร์ (probe) ลำดับเบส (5'-3') FTTC-gTTCCCgggCCTTgTACAC AC ------------ ------13/11/2562------(OCR) หน้า 1 ของจำนวน 1 หน้าข้อถือสิทธิ 1. กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยากานามัยซิน (kanamycin) ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียวที่ซึ่งประกอบด้วยการทำปฏิกิริยาแลมป์ (LAMP) ร่วมกับการประยุกต์ใช้แผ่นดิพสติค (dipstick) การทำปฏิกิริยาแลมป์ (LAMP) 25 ไมโครลิตร ประกอบด้วยฟอร์เวิร์ดอินเนอร์ไพรเมอร์ (FIP) และแบคเวิร์ดอินเนอร์ไพรเมอร์ (BIP) อย่างละ 50 พิโคโมล, ฟอร์เวิร์ดเอาเทอร์ไพรเมอร์ (F3), แบคเวิร์ดเอาเทอร์ไพรเมอร์ (B3) และโพรบไพรเมอร์ (probe) อย่างละ 5 พิโคโมล, ดีเอ็นทีพี (dNTP) 0.8 มิลลิโมลาร์ผสมด้วยสารเบตาอีน (betaine)0.6 โมลาร์, สารแมกนีเซียมฃัลเฟส (MgSO4) 4 มิลลิโมลาร์, เอนไซม์ บีเอสที ดีเอ็นเอ โพลีเมอเรส (Bst DNApolymerase) 8 U และสารละลายบัฟเฟอร์ ด้วยการทำปฏิกิริยาแลมป์ (LAMP) ที่อุณหภูมิ 61 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมงจากนั้นดูดสารละลายดังกล่าวปริมาตร 5 ไมโครลิตรใส่ในหลอดที่มีสารละลายบัฟเฟอร์ ปริมาตร100 ไมโครลิตร จากนั้นจุ่มแผ่นดิพสติค (dipstick) ลงในสารละลาย รอเวลา 5 นาที แล้วอ่านผลบนแผ่นดิพสติค(dipstick) เมื่อให้ผลบวกจะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพู บริเวณแถบทดสอบ (T) และแถบควบคุม (C) แสดงว่า ในตัวอย่างพบเบสกลายพันธุ์ที่ตำแหน่ง 1401 เบสเอเปลี่ยนเป็นเบสจี (A --> G) ของยีนอาร์อาร์เอส (rrs) แต่ถ้าผลลบ จะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพู เฉพาะแถบควบคุม (C) เท่านั้น วิธีการนี้ใช้ตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยากานามัยซิน (kanamycin) ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียวในผู้ป่วยที่สงสัยการติดเชื้อวัณโรคดื้อยานี้ เพื่อการตรวจวินิจฉัยและป้องกันการระบาดของโรค โดยไม่ต้องใช้เครื่องพีซีอาร์ (PCR thermal cycler) และเครื่องแยกสารพันธุกรรมด้วยกระแสไฟฟ้า กรรมวิธีนี้มีการออกแบบไพรเมอร์สำหรับเทคนิคแลมป์ (LAMP) ในการตรวจเชื้อวัณโรคที่มีเบสกลายพันธุ์เพียงหนึ่งเบส ไพรเมอร์ที่ใช้ในปฏิกิริยาแลมป์ (LAMP) ประกอบด้วยไพรเมอร์ 5 เส้นที่จำเพาะต่อลำดับเบสกลายพันธุ์ที่ตำแหน่ง 1401 เบสเอเปลี่ยนเป็นเบสจี (A --> G) ของยีนอาร์อาร์เอส (rrs) ของเชื้อวัณโรคโดยให้ฟอร์เวิร์ดอินเนอร์ไพรเมอร์ (FIP) ติดฉลากด้วยไบโอติน (biotin) หรือไดกอกซิเจนิน(Digoxigenin) และให้โพรบไพรเมอร์ (probe) ติดฉลากด้วยสารเรืองแสง (FITC) ในการติดตามปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นบนแผ่นดิพสติค (dipstick) ดังนี้ ฟอร์เวิร์ดเอาเทอร์ไพรเมอร์ (F3) ลำดับเบส (5'-3') ACAATggCCggTACAAAgg แบคเวิร์ดเอาเทอร์ไพรเมอร์ (B3) ลำดับเบส (5'-3') ACCTTCgACAgCTCCCTC แบคเวิร์ดอินเนอร์ไพรเมอร์ (BIP) ลำดับเบส (5'-3') TTgCAgACCCCgATCCgAACTTTTgATgCCgCgAggTTAAgC ฟอร์เวิร์ดอินเนอร์ไพรเมอร์ (FIP) ลำดับเบส (5'-3') biotin/Dig-TgAAgTCggAgTCgCTAgTATTTTTgTTACCgACTTTCATgACTC โพรบไพรเมอร์ (probe) ลำดับเบส (5'-3') FITC-gTTCCCgggCCTTgTACAC AC Dig = ไดกอกซิเจนิน (Digoxigenin) ------------ หน้า 1 ของจำนวน 1 หน้า ข้อถือสิทธิ 1. กรรมวิธีการตรวจลอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยากานามัยซิน (kanamycin) ด้วยแถบสีใน ขั้นตอนเดียวที่ซึ่งประกอบด้วยการทำปฏิกิริยาแลมป์ (LAMP) ร่วมกับการประยุกต์ใช้แผ่นดีพสติค (dipstick) การ ทำปฏิกิริยาแลมป์ (LAMP) 25 ไมโครลิตร ประกอบด้วยไพรเมอร์ 3 และไพรเมอร์ 4 อย่างละ 50 พิโคโมล, ไพร เมอร์ 1 ไพรเมอร์ 2 และไพรเมอร์ 5 อย่างละ 5 พิโคโมล, ดีเอ็นทีพี (dNTP) 0.8 มิลลิโมลาร์ผสมด้วยสารเบตาอีน (betaine) 0.6 โมลาร์, สารแมกนีเซียมซัลเฟส (MgSO4) 4 มิลลิโมลาร์, เอนไซม์ บีเอสที ดีเอ็นเอ โพลีเมอเรส (IBst DNA polymerase) 8 U และสารละลายบัฟเฟอร์ ด้วยการทำปฏิกิริยาแลมป์ (LAMP) ที่อุณหภูมิ 61 องศา เซลเซียส เป็นเวลา 1 ชั่วโมง จากนั้นดูดสารละลายดังกล่าวจำนวน 5 ไมโครลิตรใส่ในหลอดที่มีสารละลายบัฟเฟอร์ 100 ไมโครลิตรที่อุณหภูมิห้อง จากนั้นจุ่มแผ่นดิพสติค (dipstick) ลงในสารละลาย 5 นาที แล้วอ่านผลบน แผ่นดีพสติค (dipstick) เมื่อให้ผลบวก จะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพู บริเวณแถบทดสอบ (T) และแถบควบคุม (C แสดงว่า ในตัวอย่างพบเบสกลายพันธุ์ที่ตำแหน่ง 1401 เบสเอเปลี่ยนเป็นเบสจี (A --> G) ของยีนอาร์อาร์เอส (rrs) แต่ถ้าผลลบ จะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพู เฉพาะแถบควบคุม (C) เท่านั้น วิธีการนี้ใช้ตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของ เชื้อวัณโรคดื้อต่อยากานามัยซิน (kanamycin) ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียวในผู้ป่วยที่สงสัยการติดเชื้อวัณโรคดื้อยา นี้ เพื่อการตรวจวินิจฉัยและป้องกันการระบาดของโรค โดยไม่ต้องใช้เครื่องพีซีอาร์ (PCR thermal cycler) และ เครื่องแยกสารพันธุกรรมด้วยกระแสไฟฟ้า กรรมวิธีนี้มีการออกแบบไพรเมอร์สำหรับเทคนิคแลมป์ (LAMP) ในการ ตรวจเชื้อวัณโรคที่มีเบสกลายพันธุเพียงหนึ่งเบส ไพรเมอร์ที่ใช้ในปฏิกิริยาแลมป์ (LAMP) ประกอบด้วยไพรเมอร์ 5 เส้น ที่จำเพาะต่อลำดับเบสกลายพันธุ์ที่ตำแหน่ง 1401 เบสเอเปลี่ยนเป็นเบสจี (A --> G) ของยีนอาร์อาร์เอส (rrs) ของเชื้อวัณโรคโดยให้ไพรเมอร์ 4 ติดฉลากด้วยไบโอติน (biotin) หรือไดกอกชิเจนิน (Digoxigenin) และให้ ไพรเมอร์ 5 ติดฉลากด้วยสารเรืองแสง (FITC) ในการติดตามปฏิกิริยาที่เกิดชื้นบนแผ่นดิพสติค (dipstick) ดังนี้ ไพรเมอร์ 1 ลำดับเบส (5'-30 ACAATggCCggTACAAAgg ไพรเมอร์ 2 ลำดับเบส (5'-3') ACCTTCgACAgCTCCCTC ไพรเมอร์ 3 ลำดับเบส (5'-3') TT gCAgACCCCgAT CCgAACTTTT gAT gCCgCgAggTTAAgC ไพรเมอร์ 4 ลำดับเบส (5'-3') bioti n/Di g-T g AAgT Cgg AgTC gCTAgTATTTTT gTTACC g ACTTT CAT g ACT c ไพรเมอร์ 5 ลำดับเบส (5'-3') FITC-gTTCCCgggCCTTgTACACAC Dig = Digoxigenin