TH17934C3 - กรรมวิธีการตรวจสอบหาเชื้อวัณโรคชนิดมัยโคแบคทีเรียมทูเบอร์คูโลซิส(Mycobacteriumtuberculosis)ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียว - Google Patents

Abstract

บทสรุปการประดิษฐ์ซึ่งจะปรากฏบนหน้าประกาศโฆษณาReadFile:หน้า1ของจำนวน1หน้าบทสรุปการประดิษฐ์กรรมวิธีการตรวจสอบหาเชื้อวัณโรคชนิดมัยโคแบคทีเรียมทูเบอร์คูโลซิส(Mycobacteriumtuberculosis)ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียวเริ่มจากการออกแบบไพรเมอร์5เส้นที่จำเพาะต่อลำดับเบสของเชื้อวัณโรคบนยีนไอเอส6110(/56110)ซึ่งโดยให้ไพรเมอร์1เส้นติดฉลากด้วยไบโอติน(biotin)หรือไดกอกซิเจนิน(Digoxigenin)และให้ไพรเมอร์อีก1เส้นติดฉลากด้วยสารเรืองแสง(FITC)ในการติดตามปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นบนแผ่นดิพสติค(dipstick)ในระบบนี้ดีเอ็นเอเป้าหมายจะถูกเพิ่มปริมาณภายใต้อุณหภูมิอุณหภูมิ61องศาเซลเซียสเป็นเวลา45นาทีในกล่องให้ความร้อน(heatingblock)แล้วอ่านผลบนแผ่นดิพสติค(dipstick)เมื่อให้ผลบวกจะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพูบริเวณแถบทดสอบ(T)และแถบควบคุม(C)แสดงว่าในตัวอย่างพบเชื้อวัณโรคแต่ถ้าผลลบจะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพูเฉพาะแถบควบคุม(C)เท่านั้นวิธีการนี้เทียบเท่ากับการตรวจสอบด้วยเทคนิคพีซีอาร์(PCR)แบบเรียลไทม์(realtime)อีกทั้งยังไม่ต้องใช้เครื่องพีซีอาร์(PCR)และเครื่องแยกสารพันธุกรรมด้วยกระแสไฟฟ้าในการติดตามผลของปฏิกิริยา

Claims (5)

ข้อถือสิทธฺ์(ทั้งหมด)ซึ่งจะไม่ปรากฏบนหน้าประกาศโฆษณา:------04/12/2563------(OCR)

1. กรรมวิธีการตรวจสอบหาเชื้อวัณโรคชนิดมัยโคแบคทีเรียมทูเบอร์คูโลซิส(Mycobacteriumtuberculosis)ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียวที่ซึ่งประกอบด้วยการทำปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)ร่วมกับการประยุกต์ใช้แผ่นแถบสีดิพสติค(dipstick)การทำปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)25ไมโครลิตรประกอบด้วยไพรเมอร์3และไพรเมอร์4อย่างละ50พิโคโมล,ไพรเมอร์1ไพรเมอร์2และไพรเมอร์5อย่างละ5พิโคโมล,ดีเอ็นทีพี(dNTP)0.8มิลลิโมลาร์ผสมด้วยสารเบตาอีน(betaine)0.6โมลาร์,สารแมกนีเซียมซัลเฟส(MgS04)4มิลลิโมลาร์,เอนไซม์บีเอสทีดีเอ็นเอโพลีเมอเรส(BstDNApolymerase)8Uและสารละลายบัฟเฟอร์ด้วยการทำปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)ที่อุณหภูมิ61องศาเซลเซียสเป็นเวลา45นาทีจากนั้นดูดสารละลายดังกล่าวจำนวน5ไมโครลิตรใส่ในหลอดที่มีสารละลายบัฟเฟอร์100ไมโครลิตรที่อุณหภูมิห้องแล้วจุ่มแผ่นดิพสติค(dipstick)ลงในสารละลาย5นาทีแล้วอ่านผลเมื่อให้ผลบวกจะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพูบริเวณแถบทดสอบ(T)และแถบVควบคุม(0)แสดงว่าในตัวอย่างพบเชื้อวัณโรคแต่ถ้าผลลบจะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพูเฉพาะแถบควบคุม(C)เท่านั้นวิธีการนี้ใช้ในการตรวจลำดับเบสของเชื้อวัณโรคบนยีนไอเอส6110(/56110)ในผู้ป่วยที่สงสัยการติดเชื้อวัณโรคนี้เพื่อการตรวจวินิจฉัยและป้องกันการระบาดของโรคโดยไม่ต้องใช้เครื่องพีซีอาร์(PCRthermalcycler)และเครื่องแยกสารพันธุกรรมด้วยกระแสไฟฟ้ากรรมวิธีนี้ออกแบบไพรเมอร์สำหรับเทคนิคแลมป์(LAMP)ที่ใช้ในการตรวจเชื้อวัณโรคในปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)ประกอบด้วยไพรเมอร์5เส้นที่จำเพาะต่อลำดับเบสของเชื้อวัณโรคบนยีนไอเอส6110(IS6110)โดยให้ไพรเมอร์4ติดฉลากด้วยไบโอติน(biotin)หรือไดกอกซิเจนิน(Digoxigenin)และให้ไพรเมอร์5ติดฉลากด้วยสารเรืองแสง(FITC)ในการติดตามปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นบนแผ่นดิพสติค(dipstick)ดังนี้ไพรเมอร์1ลำดับเบส(5'-3')CgATggCgAACTCAAggAgไพรเมอร์2ลำดับเบส(5'-3')TggCCggATCAgCgATCไพรเมอร์3ลำดับเบส(5'-3')AgCCACACTTTgCgggCACTTTCACATcAgCCgCgTccไพรเมอร์4ลำดับเบส(5'-3')ไบโอติน(biotin)/ไดกอกซิเจนิน(Digoxigenin)gAggTggCCAgATgCACCgTCTTTTggTCCTgCgggCTTTgไพรเมอร์5ลำดับเบส(5'-3')FITC-ACggCTgATgACCAAACTCg------------แก้ไข04/12/2561 หน้า1ของจำนวน1หน้าข้อถือสิทธิ 1. กรรมวิธีการตรวจสอบหาเชื้อวัณโรคชนิดมัยโคแบคทีเรียมทูเบอร์คูโลซิส(Mycobacteriumtuberculosis)ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียวที่ซึ่งประกอบด้วยการทำปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)ร่วมกับการประยุกต์ใช้แผ่นแถบสีดิพสติค(dipstick)การทำปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)25ไมโครลิตรประกอบด้วยไพรเมอร์3และไพรเมอร์4อย่างละ50พิโคโมล,ไพรเมอร์1ไพรเมอร์2และไพรเมอร์5อย่างละ5พิโคโมล,ดีเอ็นทีพี(dNTP)0.8มิลลิโมลาร์ผสมด้วยสารเบตาอีน(betaine)0.6โมลาร์,สารแมกนีเซียมซัลเฟส(MgSO4)4มิลลิโมลาร์,เอนไซม์บีเอสทีดีเอ็นเอโพลีเมอเรส(BstDNApolymerase)8Uและสารละลายบัฟเฟอร์ด้วยการทำปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)ที่อุณหภูมิ61องศาเซลเซียสเป็นเวลา45นาทีจากนั้นดูดสารละลายดังกล่าวจำนวน5ไมโครลิตรใส่ในหลอดที่มีสารละลายบัฟเฟอร์100ไมโครลิตรที่อุณหภูมิห้องแล้วจุ่มแผ่นดิพสติ(dipstick)ลงในสารละลาย5นาทีแล้วอ่านผลเมื่อให้ผลบวกจะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพูบริเวณแถบทดสอบ(T)และแถบควบคุม(C)แสดงว่าในตัวอย่างพบเชื้อวัณโรคแต่ถ้าผลลบจะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพูเฉพาะแถบควบคุม(C)เท่านั้นวิธีการนี้ใช้ในการตรวจลำดับเบสของเชื้อวัณโรคบนยีนไอเอส6110(/S6110)ในผู้ป่วยที่สงสัยการติดเชื้อวัณโรคนี้เพื่อการตรวจวินิจฉัยและป้องกันการระบาดของโรคโดยไม่ต้องใช้เครื่องพีซีอาร์(PCRthermalcycler)และเครื่องแยกสารพันธุกรรมด้วยกระแสไฟฟ้ากรรมวิธีนี้ออกแบบไพรเมอร์สำหรับเทคนิคแลมป์(LAMP)ที่ใช้ในการตรวจเชื้อวัณโรคในปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)ประกอบด้วยไพรเมอร์5เส้นที่จำเพาะต่อลำดับเบสของเชื้อวัณโรคบนยีนไอเอส6110(/S6110)โดยให้ไพรเมอร์4ติดฉลากด้วยไบโอติน(biotin)หรือไดกอกซิเจนิน(Digoxigenin)และให้ไพรเมอร์5ติดฉลากด้วยสารเรืองแสง(FITC)ในการติดตามปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นบนแผ่นดิพสติค(dipstick)ดังนี้ ไพรเมอร์1ลำดับเบส(5'-3')CgATggCgAACTCAAggAg ไพรเมอร์2ลำดับเบส(5'-3')TggCCggATCAgCgATC ไพรเมอร์3ลำดับเบส(5'-3') AgCCACACTTTgCgggCACTTTcACATcAgCCgCgTcc ไพรเมอร์4ลำดับเบส(5'-3') biotin/Dig-gAggTggCCAgATgCACCgTCTTTTggTCCTgCgggCTTTg ไพรเมอร์5ลำดับเบส(5'-3') FITC-ACggCTgATgACCAAACTCg Dig=Digoxigenin ---------------------------------------------------------------------------------------------------- หน้า1ของจำนวน2หน้า ข้อถือสิทธิ 1. กรรมวิธีการตรวจสอบหาเชื้อวัณโรคชนิดมัยโคแบคทีเรียมทูเบอร์คูโลซิส(Mycobacteriumtuberculosis)ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียวที่ซึ่งประกอบด้วยการทำปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)ร่วมกับการประยุกต์ใช้แผ่นดิพสติค(dipstick)ภายในปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)25ไมโครลิตรประกอบด้วยไพรเมอร์3และไพรเมอร์4อย่างละ50พิโคโมล,ไพรเมอร์1ไพรเมอร์2และไพรเมอร์5อย่างละ5พิโคโมล,ดีเอ็นทีพี(dNTP)0.8มิลลิโมลาร์ผสมด้วยสารเบตาอีน(betaine)0.6โมลาร์,สารแมกนีเซียมซัลเฟส(MgS04)4มิลลิโมลาร์,เอนไซม์บีเอสทีดีเอ็นเอโพลีเมอเรส(BstDNApolymerase)8Uและสารละลายบัฟเฟอร์ใช้ในการตรวจลำดับเบสของเชื้อวัณโรคบนยีนไอเอส6110(/56110)การออกแบบไพรเมอร์สำหรับเทคนิคแลมป์(LAMP)ที่ใช้ในการตรวจเชื้อวัณโรคในปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)ประกอบด้วยไพรเมอร์5เส้นที่จำเพาะต่อลำดับเบสของเชื้อวัณโรคบนยีนไอเอส6110(/56110)โดยให้ไพรเมอร์4ติดฉลากด้วยไบโอติน(biotin)หรือไดกอกซิเจนิน(Digoxigenin)และให้ไพรเมอร์5ติดฉลากด้วยสารเรืองแสง(FITC)ในการติดตามปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นบนแผ่นดิพสติค(dipstick)ดังนี้ ไพรเมอร์1ลำดับเบส(5'-3')CgATggCgAACTCAAggAg ไพรเมอร์2ลำดับเบส(5'-3')TggCCggATCAgCgATC ไพรเมอร์3ลำดับเบส(5'-3') AgCCACACTTTgCgggCACTTTcACATcAgCCgCgTcc ไพรเมอร์4ลำดับเบส(5'-3') biotin/Dig-gAggTggCCAgATgCACCgTCTTTTggTCCTgCgggCTTTg ไพรเมอร์5ลำดับเบส(5'-3') FITC-ACggCTgATgACCAAACTCg Dig=Digoxigenin

2. กรรมวิธีการตรวจสอบหาเชื้อวัณโรคชนิดมัยโคแบคทีเรียมทูเบอร์คูโลซิส(Mycobacteriumtuberculosis)ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียวตามข้อถือสิทธิ1ที่ซึ่งสภาวะที่เหมาะสมในการตรวจผลผลิตจากแลมป์(LAMP)บนแผ่นดิพสติค(dipstick)มีลักษณะเฉพาะคือทำปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)ที่อุณหภูมิ61องศาเซลเซียสเป็นเวลา45นาทีแล้วดูดสารละลายดังกล่าวจำนวน5ไมโครลิตรใส่ในหลอดที่มีสารละลายบัฟเฟอร์100ไมโครลิตรที่อุณหภูมิห้องจากนั้นจุ่มแผ่นดิพสติค(dipstick)ลงในสารละลาย5นาทีแล้วอ่านผล

3. กรรมวิธีการตรวจสอบหาเชื้อวัณโรคชนิดมัยโคแบคทีเรียมทูเบอร์คูโลซิส(Mycobacteriumtuberculosis)ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียวตามข้อถือสิทธิ1ที่ซึ่งปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)มีขั้นตอนการเพิ่มปริมาณสารพันธุกรรมของเชื้อวัณโรคเป็นเวลา45นาทีที่อุณหภูมิ61องศาเซลเซียสโดยให้ไพรเมอร์4ติดฉลากด้วยไบโอติน(biotin)หรือไดกอกซีเจนิน(Digoxigenin)และให้ไพรเมอร์5ติดฉลากด้วยสารเรืองแสง(FITC)ในการติดตามปฏิกิริยาที่เกิดชื้นด้วยการอ่านผลบนแผ่นดิพสติค(dipstick)เมื่อให้ผลบวกจะปรากฏเส้นทดสอบสีขมพูบริเวณแถบทดสอบ(T)และแถบควบคุม(C)แสดงว่าในตัวอย่างพบเชื้อวัณโรคแต่ถ้าผลลบจะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพูเฉพาะแถบควบคุม(C)เท่านั้น

4. กรรมวิธีการตรวจสอบหาเชื้อวัณโรคชนิดมัยโคแบคทีเรียมทูเบอร์คูโลซิส(Mycobacteriumtuberculosis)ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียวตามข้อถือสิทธิ1ที่ซึ่งมีลักษณะเฉพาะคือไม่ต้องใช้เครื่องพีซีอาร์(PCRthermalcycler)และเครื่องแยกสารพันธุกรรมด้วยกระแสไฟฟ้า หน้า2ของจำนวน2หน้า

5. กรรมวิธีการตรวจสอบหาเชื้อวัณโรคชนิดมัยโคแบคทีเรียมทูเบอร์คูโลซิส(Mycobacteriumtuberculosis)ด้วยแถบสีในชั้นตอนเดียวตามข้อถือสิทธิ1ที่ซึ่งเป็นเทคนิคการตรวจสอบหาเชื้อวัณโรคด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียวในผู้ป่วยที่สงสัยการติดเชื้อวัณโรคนี้เพื่อการตรวจวินิจฉัยและป้องกันการระบาดของโรค