TH17937C3 - กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด(isoniazid)บนยีนไอเอ็นเอชเอ(inhA)ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียว - Google Patents

Abstract

บทสรุปการประดิษฐ์ซึ่งจะปรากฏบนหน้าประกาศโฆษณาReadFile:------16/12/2563------(OCR)กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด(isoniazid)บนยีนไอเอ็นเอชเอ(inhA)ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียวเริ่มจากการออกแบบไพรเมอร์5เส้นที่จำเพาะต่อลำดับเบสของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด(isoniazid)ที่มีเบสกลายพันธุ์ที่ตำแหน่งโพรโมเตอร์(promoter)ที่15ซึ่งเบสซีเปลี่ยนเป็นเบสที(C-15-T)ของยีนไอเอ็นเอชเอ(inhA)ซึ่งโดยให้ไพรเมอร์1เส้นติดฉลากด้วยไบโอติน(biotin)หรือไดกอกซิเจนิน(Digoxigenin)และให้ไพรเมอร์อีก1เส้นติดฉลากด้วยสารเรืองแสง(FITC)ในการติดตามปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นบนแผ่นดิพสติค(dipstick)ในระบบนี้ดีเอ็นเอเป้าหมายจะถูกเพิ่มปริมาณภายใต้อุณหภูมิอุณหภูมิ61องศาเซลเซียสเป็นเวลา1ชั่วโมงในกล่องให้ความร้อน(heatingblock)แล้วอ่านผลบนแผ่นดิพสติค(dipstick)เมื่อให้ผลบวกจะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพูบริเวณแถบทดสอบ(T)และแถบควบคุม(C)แสดงว่าในตัวอย่างพบเบสกลายพันธุ์ที่ตำแหน่งโพรโมเตอร์(promoter)ที่15ซึ่งเบสซีเปลี่ยนเป็นเบสที(C-15-T)ของยีนไอเอ็นเอชเอ(inhA)แต่ถ้าผลลบจะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพูเฉพาะแถบควบคุม(C)เท่านั้นวิธีการนี้เทียบเท่ากับการตรวจสอบด้วยเทคนิคพีซีอาร์(PCR)แบบเรียลไทม์(realtime)อีกทั้งยังไม่ต้องใช้เครื่องพีซีอาร์(PCR)และเครื่องแยกสารพันธุกรรมด้วยกระแสไฟฟ้าในการติดตามผลของปฏิกิริยา------------หน้า1ของจำนวน1หน้าบทสรุปการประดิษฐ์กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด(isoniazid)บนยีนไอเอ็นเอชเอ(inhA)ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียวเริ่มจากการออกแบบไพรเมอร์5เส้นที่จำเพาะต่อลำดับเบสของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด(isoniazid)ที่มีเบสกลายพันธุ์ที่ตำแหน่งโพรโมเตอร์(promoter)ที่15ซึ่งเบสซีเปลี่ยนเป็นเบสที(C-15-T)ขอยีนไอเอ็นเอชเอ(inhA)ซึ่งโดยให้ไพรเมอร์1เส้นติดฉลากด้วยไบโอติน(biotin)หรือไดกอกซิเจนิน(Digoxigenin)และให้ไพรเมอร์อีก1เส้นติดฉลากด้วยสารเรืองแสง(FITC)ในการติดตามปฏิกิริยาที่เกิดชื้นบนแผ่นดิพสติค(dipstick)ในระบบนี้ดีเอ็นเอเป๋าหมายจะถูกเพิ่มปริมาณภายใต้อุณหภูมิอุณหภูมิ61องศาเซลเซียสเป็นเวลา1ชั่วโมงในกล่องให้ความร้อน(heatingblock)แล้วอ่านผลบนแผ่นดิพสติค(dipstick)เมื่อให้ผลบวกจะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพูบริเวณแถบทดสอบ(T)และแถบควบคุม(C)แสดงว่าในตัวอย่างพบเบสกลายพันธุ์ที่ตำแหน่งโพรโมเตอร์(promoter)ที่15ซึ่งเบสซีเปลี่ยนเป็นเบสที(C-15-T)ของยีนไอเอ็นเอชเอ(inhA)แต่ถ้าผลลบจะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพูเฉพาะแถบควบคุม(C)เท่านั้นวิธีการนี้เทียบเท่ากับการตรวจสอบด้วยเทคนิคพีซีอาร์(PCR)แบบเรียลไทม์(realtime)อีกทั้งยังไม่ต้องใช้เครื่องพีซีอาร์(PCR)และเครื่องแยกสารพันธุกรรมด้วยกระแสไฟฟ้าในการติดตามผลของปฏิกิริยา

Claims (5)

ข้อถือสิทธฺ์(ทั้งหมด)ซึ่งจะไม่ปรากฏบนหน้าประกาศโฆษณา:------16/12/2563------(OCR) 1.กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด(isoniazid)บนยีนไอเอ็นเอชเอ(inhA)ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียวที่ซึ่งประกอบด้วยการทำปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)ร่วมกับการประยุกต์ใช้แผ่นดิพสติค(dipstick)ในการทำปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)25ไมโครลิตรประกอบด้วยไพรเมอร์3และไพรเมอร์4อย่างละ50พิโคโมล,ไพรเมอร์1ไพรเมอร์2และไพรเมอร์5อย่างละ5พิโคโมล,ดีเอ็นทีพี(dNTP)0.8มิลลิโมลาร์ผสมด้วยสารเบตาอีน(betaine)0.6โมลาร์,สารแมกนีเซียมซัลเฟส(MgSO4)4มิลลิโมลาร์,เอนไซม์บีเอสทีดีเอ็นเอโพลีเมอเรส(BstDNApolymerase)8Uและสารละลายบัฟเฟอร์โดยการทำปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)ทำที่อุณหภูมิ61องศาเซลเซียสเป็นเวลา1ชั่วโมงหลังจากนั้นดูดสารละลายดังกล่าวจำนวน5ไมโครลิตรใส่ในหลอดที่มีสารละลายบัฟเฟอร์100ไมโครลิตรที่อุณหภูมิห้องจากนั้นจุ่มแผ่นดิพสติค(dipstick)ลงในสารละลาย5นาทีแล้วอ่านผลบนแผ่นดิพสติค(dipstick)เมื่อให้ผลบวกจะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพูบริเวณแถบทดสอบ(T)และแถบควบคุม(C)แสดงว่าในตัวอย่างพบเบสกลายพันธุ์ที่ตำแหน่งโพรโมเตอร์(promoter)ที่15ซึ่งเบสซีเปลี่ยนเป็นเบสที(C-15-T)ขอยีนไอเอ็นเอชเอ(inhA)แต่ถ้าผลลบจะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพูเฉพาะแถบควบคุม(C)เท่านั้นวิธีการนี้ใช้ในการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด(isoniazid)ในยีนไอเอ็นเอชเอ(inhA)ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียวในผู้ป่วยที่สงสัยการติดเชื้อนี้เพื่อการตรวจวินิจฉัยและป้องกันการระบาดของวัณโรคดื้อยาไอโซไนอะซิด(isoniazid)โดยไม่ต้องใช้เครื่องพีซีอาร์(PCRthermalcycler)และเครื่องแยกสารพันธุกรรมด้วยกระแสไฟฟ้ากรรมวิธีนี้มีการออกแบบไพรเมอร์สำหรับเทคนิคแลมป์(LAMP)ในการตรวจเชื้อวัณโรคที่มีเบสกลายพันธุ์เพียงหนึ่งเบสไพรเมอร์ที่ใช้ในปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)ประกอบด้วยไพรเมอร์5เส้นที่จำเพาะต่อลำดับเบสกลายพันธุ์ที่ตำแหน่งโพรโมเตอร์(promoter)ที่15ซึ่งเบสซีเปลี่ยนเป็นเบสที(C-15-T)ขอยีนไอเอ็นเอชเอ(inhA)ของเชื้อวัณโรคโดยให้ไพรเมอร์4ติดฉลากด้วยไบโอติน(biotin)หรือไดกอกซิเจนิน(Digoxigenin)โดยกำหนดให้เบสตัวสุดท้ายของปลาย3'ในไพรเมอร์4ตรงกับตำแหน่งเบสกลายพันธุที่ตำแหน่งโพรโมเตอร์(promoter)ที่15ซึ่งเบสซีเปลี่ยนเป็นเบสที(C-15-T)ขอยีนไอเอ็นเอชเอ(inhA)และให้ไพรเมอร์5ติดฉลากด้วยสารเรืองแสง(FITC)ในการติดตามปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นบนแผ่นดิพสติค(dipstick)ดังนี้ไพรเมอร์1ลำดับเบส(5'-3')gCTgAgTCACACCgACAAACไพรเมอร์2ลำดับเบส(5'-3')CCggTTTCCTCCggTAACCไพรเมอร์3ลำดับเบส(5'-3')CCACgAgCgTAACgTggCTgCTTTTgTCACgAgCgTAACCCCAไพรเมอร์4ลำดับเบส(5'-3')ไบโอติน(biotin)/ไดกอกซิเจนิน(Digoxigenin)ATCgCAgCCACgTTACgCTCTTTTgTCACCCCgACAACCTATTTไพรเมอร์5ลำดับเบส(5'-3')FITC-TggACATACCgATTTCggCCC------------แก้ไข04/12/2561 หน้า1ของจำนวน2หน้าข้อถือสิทธิ 1.กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด(isoniazid)บนยีนไอเอ็นเอชเอ(inhA)ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียวที่ซึ่งประกอบด้วยการทำปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)ร่วมกับการประยุกต์ใช้แผ่นดิพสติค(dipstick)ในการทำปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)25ไมโครลิตรประกอบด้วยไพรเมอร์3และไพรเมอร์4อย่างละ50พิโคโมล,ไพรเมอร์1ไพรเมอร์2และไพรเมอร์5อย่างละ5พิโคโมล,ดีเอ็นทีพี(dNTP)0.8มิลลิโมลาร์ผสมด้วยสารเบตาอีน(betaine)0.6โมลาร์,สารแมกนีเซียมซัลเฟส(MgSO4)4มิลลิโมลาร์,เอนไซม์บีเอสทีดีเอ็นเอโพลีเมอเรส(BstDNApolymerase)8Uและสารละลายบัฟเฟอร์โดยการทำปฏิกิริยาแลป์(LAMP)ทำที่อุณหภูมิ61องศาเซลเซียสเป็นเวลา1ชั่วโมงหลังจากนั้นดูดสารละลายดังกล่าวจำนวน5ไมโครลิตรใส่ในหลอดที่มีสารละลายบัฟเฟอร์100ไมโครลิตรที่อุณหภูมิห้องจากนั้นจุ่มแผ่นดิพสติค(dipstick)ลงในสารละลาย5นาทีแล้วอ่านผลบนแผ่นดิพสติค(dipstick)เมื่อให้ผลบวกจะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพูบริเวณแถบทดสอบ(T)และแถบควบคุม(C)แสดงว่าในตัวอย่างพบเบสกลายพันธุ์ที่ตำแหน่งโพรโมเตอร์(peomoter)ที่15ซึ่งเบสซีเปลี่ยนเป็นเบสที(C-15-T)ของยีนไอเอ็นเอชเอ(inhA)แต่ถ้าผลลบจะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพูเฉพาะแถบควบคุม(C)เท่านั้นวิธีการนี้ใช้ในการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด(isoniazid)ในยีนไอเอ็นเอชเอ(inhA)ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียวในผู้ป่วยที่สงสัยการติดเชื้อนี้เพื่อการตรวจวินิจฉัยและป้องกันการระบาดของวัณโรคดื้อยาไอโซไนอะซิด(isoniazid)โดยไม่ต้องใช้เครื่องพีซีอาร์(PCRthermalcycler)และเครื่องแยกสารพันธุกรรมด้วยกระแสไฟฟ้ากรรมวิธีนี้มีการออกแบบไพรเมอร์สำหรับเทคนิคแลมป์(LAMP)ในการตรวจเชื้อวัณโรคที่มีเบสกลายพันธุ์เพียงหนึ่งเบสไพรเมอร์ที่ใช้ในปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)ประกอบด้วยไพรเมอร์5เส้นที่จำเพาะต่อลำดับเบสกลายพันธุที่ตำแหน่งโพรโมเตอร์(promoter)ที่15ซึ่งเบสซีเปลี่ยนเป็นเบสที(C-15-T)ขอยีนไอเอ็นเอชเอ(inhA)ของเชื้อวัณโรคโดยให้ไพรเมอร์3ติดฉลากด้วยไบโอติน(biotin)หรือไดกอกซิเจนิน(Digoxigenin)โดยกำหนดให้เบสตัวสุดท้ายของปลาย3'ในไพรเมอร์4ตรงกับตำแหน่งเบสกลายพันธุ์ที่ตำแหน่งโพรโมเตอร์(promoter)ที่15ซึ่งเบสซีเปลี่ยนเป็นเบสที(C-15-T)ของยีนไอเอ็นเอชเอiinhA)และให้ไพรเมอร์5ติดฉลากด้วยสารเรืองแสง(FITC)ในการติดตามปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นบนแผ่นดิพสติค(dipstick)ดังนี้ ไพรเมอร์1ลำดับเบส(5'-3')gCTgAgTCACACCgACAAAC ไพรเมอร์2ลำดับเบส(5'-3')CCggTTTCCTCCggTAACC ไพรเมอร์3ลำดับเบส(5'-3') CCACgAgCgTAACgTggCTgCTTTTTCACgAgCgTAACCCCA ไพรเมอร์4ลำดับเบส(5'-3') Biotin/Dig-ATCgCAgCCACgTTACgCTCTTTTgTCACCCCgACAACCTATTT ไพรเมอร์5ลำดับเบส(5'-3')FITC-TggACATACCgATTTCggCCC Dig=Digoxigenin ---------------------------------------------------------------------------------------------------- หน้า1ของจำนวน2หน้า ข้อถือสิทธิ

1.กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด(isoniazid)บนยีนไอเอ็นเอชเอ(inhA)ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียวที่ซึ่งประกอบด้วยการทำปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)ร่วมกับการประยุกต์ใช้แผ่นดิพสติค(dipstick)ภายในปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)25ไมโครลิตรประกอบด้วยไพรเมอร์3และไพรเมอร์4อย่างละ50พิโคโมล,ไพรเมอร์1ไพรเมอร์2และไพรเมอร์5อย่างละ5พิโคโมล,ดีเอ็นทีพี(dNTP)0.8มิลลิโมลาร์ผสมด้วยสารเบตาอีน(betaine)0.6โมลาร์,สารแมกนีเซียมซัลเฟส(MgS04)4มิลลิโมลาร์,เอนไซม์บีเอสทีดีเอ็นเอโพลีเมอเรส(BstDNApolymerase)8บและสารละลายบัฟเฟอร์ใช้ในการตรวจลำดับเบสกลายพันธุ์ที่ตำแหน่งโพรโมเตอร์(promoter)ที่15ซึ่งเบสซีเปลี่ยนเป็นเบสที(C-15-T)ของยีนไอเอ็นเอชเอ(inhA)ของเชื้อวัณโรคการออกแบบไพรเมอร์สำหรับเทคนิคแลมป์(LAMP)ในการตรวจเชื้อวัณโรคที่มีเบสกลายพันธุ์เพียงหนึ่งเบสไพรเมอร์ที่ใช้ในปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)ประกอบด้วยไพรเมอร์5เส้นที่จำเพาะต่อลำดับเบสกลายพันธุที่ตำแหน่งโพรโมเตอร์(promoter)ที่15ซึ่งเบสซีเปลี่ยนเป็นเบสที(C-15-T)ขอยีนไอเอ็นเอชเอ(inhA)ของเชื้อวัณโรคโดยให้ไพรเมอร์3ติดฉลากด้วยไบโอติน(biotin)หรือไดกอกซิเจนิน(Digoxigenin)โดยกำหนดให้เบสตัวสุดท้ายของปลาย3'ในไพรเมอร์4ตรงกับตำแหน่งเบสกลายพันธุ์ที่ตำแหน่งโพรโมเตอร์(promoter)ที่15ซึ่งเบสซีเปลี่ยนเป็นเบสที(C-15-T)ขอยีนไอเอ็นเอชเอiinhA)และให้ไพรเมอร์5ติดฉลากด้วยสารเรืองแสง(FITC)ในการติดตามปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นบนแผ่นดิพสติค(dipstick)ดังนี้ ไพรเมอร์1ลำดับเบส(5'-3')gCTgAgTCACACCgACAAAC ไพรเมอร์2ลำดับเบส(5'-3')CCggTTTCCTCCggTAACC ไพรเมอร์3ลำดับเบส(5'-3') CCACgAgCgTAACgTggCTgCTTTTTCACgAgCgTAACCCCA ไพรเมอร์4ลำดับเบส(5'-3') Biotin/Dig-ATCgCAgCCACgTTACgCTCTTTTgTCACCCCgACAACCTATTT ไพรเมอร์5ลำดับเบส(5'-3')FITC-TggACATACCgATTTCggCCC Dig=Digoxigenin

2.กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด(isoniazid)บนยีนไอเอ็นเอชเอ(inhA)ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียวตามข้อถือสิทธิ1ที่ซึ่งสภาวะที่เหมาะสมในการตรวจผลผลิตจากแลมป์(LAMP)บนแผ่นดิพสติค(dipstick)มีลักษณะเฉพาะคือทำปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)ที่อุณหภูมิ61องศาเซลเซียสเป็นเวลา1ชั่วโมงแล้วดูดสารละลายดังกล่าวจำนวน5ไมโครลิตรใส่ในหลอดที่มีสารละลายบัฟเฟอร์100ไมโครลิตรที่อุณหภูมิห้องจากนั้นจุ่มแผ่นดิพสติค(dipstick)ลงในสารละลาย5นาทีแล้วอ่านผล

3.กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด(isoniazid)บนยีนไอเอ็นเอชเอ(inhA)ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียวตามข้อถือสิทธิ1ที่ซึ่งปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)มีขั้นตอนการเพิ่มปริมาณสารพันธุกรรมของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด(isoniazid)เป็นเวลา1ชั่วโมงที่อุณหภูมิ61องศาเซลเซียสโดยให้ไพรเมอร์4ติดฉลากด้วยไบโอติน(biotin)หรือไดกอกซิเจนิน(Digoxigenin)และให้ไพรเมอร์5ติดฉลากด้วยสารเรืองแสง(FITC)ในการติดตามปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นด้วยการอ่านผลบนแผ่นดิพสติค(dipstick)เมื่อให้ผลบวกจะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพูบริเวณแถบทดสอบ(T)และแถบควบคุม(C)แสดงว่าในตัวอย่างพบเบสกลายพันธุที่ตำแหน่งโพรโมเตอร์(promoter)ที่15ซึ่งเบสซีเปลี่ยนเนินเบสที(C-15-T)ของยีนไอเอ็นเอชเอ(inhA)แต่ถ้าผลลบจะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพูเฉพาะแถบควบคุม(C)เท่านั้น หน้า2ของจำนวน2หน้า

4.กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด(isoniazid)บนยีนไอเอ็นเอชเอ(inhA)ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียวตามข้อถือสิทธิ1ที่ซึ่งมีลักษณะเฉพาะคือไม่ต้องใช้เครื่องพีซีอาร์(PCRthermalcycler)และเครื่องแยกสารพันธุกรรมด้วยกระแสไฟฟ้า

5.กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด(isoniazid)ในยีฟ่อเอ็นเอชเอ(inhA)ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียวตามข้อถือสิทธิ1ที่ซึ่งใช้สำหรับการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไอโซไนอะซิด(isoniazid)บนยีนไอเอ็นเอชเอ(inhA)ด้วยแถบสีที่เปลี่ยนแปลงในผู้ป่วยที่สงสัยการติดเชื้อนี้เพื่อการตรวจวินิจฉัยและป้องกันการระบาดของวัณโรคดื้อยาไอโซไนอะซิด(isoniazid)