TH17935C3 - กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไรแฟมพิซิน(Rifampicin)ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียว - Google Patents

Abstract

บทสรุปการประดิษฐ์ซึ่งจะปรากฏบนหน้าประกาศโฆษณาReadFile:------04/12/2563------(OCR)กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไรแฟมพิซิน(Rifampicin)ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียวเริ่มจากการออกแบบไพรเมอร์5เส้นที่จำเพาะต่อลำดับเบสของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไรแฟมพิซิน(Rifampicin)ที่มีเบสกลายพันธุ์ที่ตำแหน่ง531ของยีนอารโพบี(rpoB)ซึ่งโดยให้ไพรเมอร์1เส้นติดฉลากด้วยไบโอติน(biotin)หรือไดกอกซิเจนิน(Digoxigenin)และให้ไพรเมอร์อีก1เส้นติดฉลากด้วยสารเรืองแสง(FITC)ในการติดตามปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นบนแผ่นดิพสติค(dipstick)ในระบบนี้ดีเอ็นเอเป้าหมายจะถูกเพิ่มปริมาณภายใต้อุณหภูมิอุณหภูมิ61องศาเซลเซียสเป็นเวลา1ชั่วโมงในกล่องให้ความร้อน(heatingblock)แล้วอ่านผลบนแผ่นดิพสติค(dipstick)เมื่อให้ผลบวกจะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพูบริเวณแถบทดสอบ(T)และแถบควบคุม(C)แสดงว่าในตัวอย่างพบเบสกลายพันธุ์ที่ตำแหน่ง531ของยีนอาร์โพบี(rpoB)แต่ถ้าผลลบจะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพูเฉพาะแถบควบคุม(C)เท่านั้นวิธีการนี้เทียบเท่ากับการตรวจสอบด้วยเทคนิคพีซีอาร์(PCR)แบบเรียลไทม์(realtime)อีกทั้งยังไม่ต้องใช้เครื่องพีซีอาร์(PCR)และเครื่องแยกสารพันธุกรรมด้วยกระแสไฟฟ้าในการติดตามผลของปฏิกิริยา------------หน้า1ของจำนวน1หน้าบทสรุปการประดิษฐ์กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไรแฟมพิซิน(Rifampicin)ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียวเริ่มจากการออกแบบไพรเมอร์5เส้นที่จำเพาะต่อลำดับเบสของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไรแฟมพิซิน(Rifampicin)ที่มีเบสกลายพันธุ์ที่ตำแหน่ง531ของยีนอาร์โพบี(rpoB)ซึ่งโดยให้ไพรเมอร์1เส้นติดฉลากด้วยใบโอติน(biotin)หรือไดกอกซิเจนิน(Digoxigenin)และให้ไพรเมอร์อีก1เส้นติดฉลากด้วยสารเรืองแสง(FITC)ในการติดตามปฏิกิริยาที่เกิดชื้นบนแผ่นดิพสติค(dipstick)ในระบบนี้ดีเอ็นเอเป้าหมายจะถูกเพิ่มปริมาณภายใต้อุณหภูมิอุณหภูมิ61องศาเซลเซียสเป็นเวลา1ชั่วโมงในกล่องให้ความร้อน(heatingblock)แล้วอ่านผลบนแผ่นดิพสติค(dipstick)เมื่อให้ผลบวกจะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพูบริเวณแถบทดสอบ(T)และแถบควบคุม(0แสดงว่าในตัวอย่างพบเบสกลายพันธุที่ตำแหน่ง531ของยีนอาร์โพบี(rpoB)แต่ถ้าผลลบจะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพูเฉพาะแถบควบคุม(C)เท่านั้นวิธีการนี้เทียบเท่ากับการตรวจสอบด้วยเทคนิคพีซีอาร์(PCR)แบบเรียลไทม์(realtime)อีกทั้งยังไม่ต้องใช้เครื่องพีซีอาร์(PCR)และเครื่องแยกสารพันธุกรรมด้วยกระแสไฟฟ้าในการติดตามผลของปฏิกิริยา

Claims (5)

ข้อถือสิทธฺ์(ทั้งหมด)ซึ่งจะไม่ปรากฏบนหน้าประกาศโฆษณา:------04/12/2563------(OCR) 1.กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไรแฟมพิซิน(Rifampicin)ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียวที่ซึ่งประกอบด้วยการทำปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)ร่วมกับการประยุกต์ใช้แผ่นดิพสติค(dipstick)การทำปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)25ไมโครลิตรประกอบด้วยไพรเมอร์3และไพรเมอร์4อย่างละ50พิโคโมล,ไพรเมอร์1ไพรเมอร์2และไพรเมอร์5อย่างละ5พิโคโมล,ดีเอ็นทีพี(dNTP)0.8มิลลิโมลาร์ผสมด้วยสารเบตาอีน(betaine)0.6โมลาร์,สารแมกนีเซียมซัลเฟส(MgSOa)4มิลลิโมลาร์,เอนไซม์บีเอสทีดีเอ็นเอโพลีเมอเรส(BstDNApolymerase)8Uและสารละลายบัฟเฟอร์ด้วยการทำปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)ที่อุณหภูมิ61องศาเซลเซียสเป็นเวลา1ชั่วโมงจากนั้นดูดสารละลายดังกล่าวจำนวน5ไมโครลิตรใส่ในหลอดที่มีสารละลายบัฟเฟอร์100ไมโครลิตรที่อุณหภูมิห้องจากนั้นจุ่มแผ่นดิพสติค(dipstick)ลงในสารละลาย5นาทีแล้วอ่านผลบนแผ่นดิพสติค(dipstick)เมื่อให้ผลบวกจะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพูบริเวณแถบทดสอบ(T)และแถบควบคุม(C)แสดงว่าในตัวอย่างพบเบสกลายพันธุ์ที่ตำแหน่ง531ของยีนอาร์โพบีirpoB)แต่ถ้าผลลบจะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพูเฉพาะแถบควบคุม(C)เท่านั้นวิธีการนี้ใช้ตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไรแฟมพิซิน(Rifampicin)ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียวในผู้ป่วยที่สงสัยการติดเชื้อวัณโรคดื้อยานี้เพื่อการตรวจวินิจฉัยและน่องกันการระบาดของโรคโดยไม่ต้องใช้เครื่องพีซีอาร์(PCRthermalcycler)และเครื่องแยกสารพันธุกรรมด้วยกระแสไฟฟ้ากรรมวิธีนี้มีการออกแบบไพรเมอร์สำหรับเทคนิคแลมป์(LAMP)ในการตรวจเชื้อวัณโรคที่มีเบสกลายพันธุ์เพียงหนึ่งเบสไพรเมอร์ที่ใช้ในปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)ประกอบด้วยไพรเมอร์5เส้นที่จำเพาะต่อลำดับเบสกลายพันธุ์ที่ตำแหน่ง531ของยีนอาร์โพบี(rpoB)ของเชื้อวัณโรคโดยให้ไพรเมอร์4ติดฉลากด้วยไบโอติน(biotin)หรือไดกอกซิเจนิน(Digoxigenin)และให้ไพรเมอร์5ติดฉลากด้วยสารเรืองแสง(FITC)ในการติดตามปฏิกิริยาที่เกิดชื้นบนแผ่นดิพสติค(dipstick)ดังนี้ไพรเมอร์1ลำดับเบส(5'-3')gCATgTCgCggATggAgไพรเมอร์2ลำดับเบส(5'-3')ACgCTCACgTgACAgACCไพรเมอร์3ลำดับเบส(5'-3')ACCggCCggATgTTgATCAACgTTTTgTCCgggAgCggATgAไพรเมอร์4ลำดับเบส(5'-3')ไบโอติน(biotin)/ไดกอกซิเจนิน(Digoxigenin)AAggAgTTCTTCggCACCAgCCTTTTCCgggCCCCAgCgCAAไพรเมอร์5ลำดับเบส(5'-3')FITC-AgCCAATTCATggACCAgAA------------แก้ไข04/12/2561 หน้า1ของจำนวน2หน้าข้อถือสิทธิ 1.กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไรแฟมพิซิน(Rifampicin)ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียวที่ซึ่งประกอบด้วยการทำปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)ร่วมกับการประยุกต์ใช้แผ่นดิพสติค(dipstick)การทำปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)25ไมโครลิตรประกอบด้วยไพรเมอร์3และไพรเมอร์4อย่างละ50พิโคโมล,ไพรเมอร์1ไพรเมอร์2และไพรเมอร์5อย่างละ5พิโคโมล,ดีเอ็นทีพี(dNTP)0.8มิลลิโมลาร์ผสมด้วยสารเบตาอีน(betaine)0.6โมลาร์,สารแมกนีเซียมซัลเฟส(MgS04)4มิลลิโมลาร์,เอนไซม์บีเอสทีดีเอ็นเอโพลีเมอเรส(BstDNApolymerase)8Uและสารละลายบัฟเฟอร์ด้วยการทำปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)ที่อุณหภูมิ61องศาเซลเซียสเป็นเวลา1ชั่วโมงจากนั้นดูดสารละลายดังกล่าวจำนวน5ไมโครลิตรใส่ในหลอดที่มีสารละลายบัฟเฟอร์100ไมโครลิตรที่อุณหภูมิห้องจากนั้นจุ่มแผ่นดิพสติค(dipstick)ลงในสารละลาย5นาทีแล้วอ่านผลบนแผ่นดิพสติค(dipstick)เมื่อให้ผลบวกจะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพูบริเวณแถบทดสอบ(T)และแถบควบคุม(C)แสดงว่าในตัวอย่างพบเบสกลายพันธุ์ที่ตำแหน่ง531ของยีนอาร์โพบี(rpoB)แต่ถ้าผลลบจะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพูเฉพาะแถบควบคุม(C)เท่านั้นวิธีการนี้ใช้ตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไรแฟมพิซิน(Rifampicin)ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียวในผู้ป่วยที่สงสัยการติดเชื้อวัณโรคดื้อยานี้เพื่อการตรวจวินิจฉัยและป้องกันการระบาดของโรคโดยไม่ต้องใช้เครื่องพีซีอาร์(PCRthermalcycler)และเครื่องแยกสารพันธุกรรมด้วยกระแสไฟฟ้ากรรมวิธีนี้มีการออกแบบไพรเมอร์สำหรับเทคนิคแลมป์(LAMP)ในการตรวจเชื้อวัณโรคที่มีเบสกลายพันธุ์เพียงหนึ่งเบสไพรเมอร์ที่ใช้ในปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)ประกอบด้วยไพรเมอร์5เส้นที่จำเพาะต่อลำดับเบสกลายพันธุ์ที่ตำแหน่ง531ของยีนอาร์โพบี(rpoB)ของเชื้อวัณโรคโดยให้ไพรเมอร์4ติดฉลากด้วยไบโอติน(biotin)หรือไดกอกซิเจนิน(Digoxigenin)และให้ไพรเมอร์5ติดฉลากด้วยสารเรืองแสง(FITC)ในการติดตามปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นบนแผ่นดิพสติค(dipstick)ดังนี้ ไพรเมอร์1ลำดับเบส(5'-3')gCATgTCgCggATggAg ไพรเมอร์2ลำดับเบส(5'-3')ACgCTCACgTgACAgACC ไพรเมอร์3ลำดับเบส(5'-3') ACCggCCggATgTTgATCAACgTTTTgTCCgggAgCggATgA ไพรเมอร์4ลำดับเบส(5'-3') biotin/Dig-AAggAgTTCTTCggCACCAgCCTTTTCCgggCCCCAgCgCAA ไพรเมอร์5ลำดับเบส(5'-3') FITC-AgCCAATTCATggACCAgAA Dig=Digoxigenin ---------------------------------------------------------------------------------------------------- หน้า1ของจำนวน2หน้า ข้อถือสิทธิ

1. กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไรแฟมพิซิน(Rifampicin)ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียวที่ซึ่งประกอบด้วยการทำปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)ร่วมกับการประยุกต์ใช้แผ่นดิพสติค(dipstick)ภายในปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)25ไมโครลิตรประกอบด้วยไพรเมอร์3และไพรเมอร์4อย่างละ50พิโคโมล,ไพรเมอร์1ไพรเมอร์2และไพรเมอร์5อย่างละ5พิโคโมล,ดีเอ็นทีพี(dNTP)0.8มิลลิโมลาร์ผสมด้วยสารเบตาอีน(betaine)0.6โมลาร์,สารแมกนีเซียมซัลเฟส(MgS04)4มิลลิโมลาร์,เอนไซม์ปีเอสทีดีเอ็นเอโพลีเมอเรส(BstDNApolymerase)8Uและสารละลายบัฟเฟอร์ใช้ในการตรวจลำดับเบสกลายพันธุ์ที่ตำแหน่ง531ของยีนอาร์โพบี(rpoB)ของเชื้อวัณโรคการออกแบบไพรเมอร์สำหรับเทคนิคแลมป์(LAMP)ในการตรวจเชื้อวัณโรคที่มีเบสกลายพันธุ์เพียงหนึ่งเบสไพรเมอร์ที่ใช้ในปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)ประกอบด้วยไพรเมอร์5เส้นที่จำเพาะต่อลำดับเบสกลายพันธุ์ที่ตำแหน่ง531ของยีนอาร์โพบี(rpoB)ของเชื้อวัณโรคโดยให้ไพรเมอร์4ติดฉลากด้วยไบโอติน(biotin)หรือไดกอกซิเจนิน(Digoxigenin)และให้ไพรเมอร์5ติดฉลากด้วยสารเรืองแสง(FITC)ในการติดตามปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นบนแผ่นดิพสติค(dipstick)ดังนี้ ไพรเมอร์1ลำดับเบส(5'-3')gCATgTCgCggATggAg ไพรเมอร์2ลำดับเบส(5'-3')ACgCTCACgTgACAgACC ไพรเมอร์3ลำดับเบส(5'-3') ACCggCCggATgTTgATCAACgTTTTgTCCgggAgCggATgA ไพรเมอร์4ลำดับเบส(5'-3') biotin/Dig-AAggAgTTCTTCggCACCAgCCTTTTCCgggCCCCAgCgCAA ไพรเมอร์5ลำดับเบส(5'-3') FITC-AgCCAATTCATggACCAgAA Dig=Digoxigenin

2. กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไรแฟมพิซิน(Rifampicin)ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียวตามข้อถือสิทธิ1ที่ซึ่งสภาวะที่เหมาะสมในการตรวจผลผลิตจากแลมป์(LAMP)บนแผ่นดิพสติค(dipstick)มีลักษณะเฉพาะคือทำปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)ที่อุณหภูมิ61องศาเซลเซียสเป็นเวลา1ชั่วโมงแล้วดูดสารละลายดังกล่าวจำนวน5ไมโครลิตรใส่ในหลอดที่มีสารละลายบัฟเฟอร์100ไมโครลิตรที่อุณหภูมิห้องจากนั้นจุ่มแผ่นติพสติค(dipstick)ลงในสารละลาย5นาทีแล้วอ่านผล

3. กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไรแฟมพิซิน(Rifampicin)ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียวตามข้อถือสิทธิ1ที่ซึ่งปฏิกิริยาแลมป์(LAMP)มีขั้นตอนการเพิ่มปริมาณสารพันธุกรรมของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไรแฟมพิซิน(rifampicin)เป็นเวลา1ชั่วโมงที่อุณหภูมิ61องศาเซลเซียสโดยให้ไพรเมอร์4ติดฉลากด้วยไบโอติน(biotin)หรือไดกอกซิเจนิน(Digoxigenin)และให้ไพรเมอร์5ติดฉลากด้วยสารเรืองแสง(FITC)ในการติดตามปฏิกิริยาที่เกิดชื้นด้วยการอ่านผลบนแผ่นดิพสติค(dipstick)เมื่อให้ผลบวกจะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพูบริเวณแถบทดสอบ(T)และแถบควบคุม(C)แสดงว่าในตัวอย่างพบเบสกลายพันธุ์ที่ตำแหน่ง531ของยีนอาร์โพบี(rpoB)แต่ล้าผลลบจะปรากฏเส้นทดสอบสีชมพูเฉพาะแถบควบคุม(C)เท่านั้น

4. กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไรแฟมพิซิน(Rifampicin)ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียวตามข้อถือสิทธิ1ที่ซึ่งมีลักษณะเฉพาะคือไม่ต้องใช้เครื่องพีซีอาร์(PCRthermalcycler)และเครื่องแยกสารพันธุกรรมด้วยกระแสไฟฟ้า หน้า2ของจำนวน2หน้า

5. กรรมวิธีการตรวจสอบเบสกลายพันธุ์ของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไรแฟมพิซิน(Rifampicin)ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียวตามข้อถือสิทธิ1ที่ซึ่งเป็นเทคนิคการตรวจสอบเบสกลายพันธุของเชื้อวัณโรคดื้อต่อยาไรแฟมพิซิน(Rifampicin)ด้วยแถบสีในขั้นตอนเดียวในผู้ป่วยที่สงสัยการติดเชื้อวัณโรคดื้อยานี้เพื่อการตรวจวินิจฉัยและป้องกันการระบาดของโรค