SU932992A3 - Способ получени орторомбической монолитиевой соли @ -никотинамидадениндинуклеотид-дигидрата - Google Patents

Description

(5) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ОРТОРОМБИЧЕСКОЙ МОНОЛИТИЕВОЙ СОЛИ -НИКОТИНАМИДАДЕНИНДИНУКЛЕОТИДДИГИДРАТА

1

ИзоЬретение относитс  к способу полумени  нового соединени  - орто ромбической монолитиевой соли -никотинамидадениидинуклеотиддигидрата

,) с пространственной группой g Р 2 / 2-f с размерами клетки

0 10,,ООЗА ;Ъг15,, ;

С 17,,осад и углами 0 /Ь Т 90 которое может быть использовано в ферментативном анализе при JQ определении ферментативных активностей и концентраций субстрата дл  клинической диагностики.

Известно получение кристаллическо |в го никотинамидадениндинуклеотида в виде свободной кислоты flj.

Однако данна  кислота очень гигроскопична и быстро расплываетс  на воздухе, что вызывает определенные 20 трудности при использовании ее в ферментативном анализе при определении активности и концентрации субстрата дл  клинической диагностики 2.26

Известен также способ получени  кристаллических солей и водных растворов путем осаждени  целевого про ,дукта органическим растворителем 3j«

Цель изобретени  - получение нового кристаллического соединени , расшир ющего арсенал средства воздействи  на живой организм.

Поставленна  цель достигаетс  тем, что в способе получени  орторомбической монолитиевой соли Р -никотинамидадениндинуклеотиддигидрата с пространственной группой Р 2/f 2 2f „с размерами клетки а 10,,ООЗА ; Ъ 15,839±0,00«А ; С 17,821

0,004А и углами о11- / 90° к разбавленному.водному раствору/ -никотинамидадениндинуклеотида 8 форме свободной кислоты прибавл ют гидроокись лити  или катионообменных в литиевой форме до рН 3-7, предпочтительно З,7,0 или к водному раствору аморфной монолитиевой солиJJ-никотинамидздениндинуклеоУида прибавл ют гидроокись лити  до рН 3-7.

предпотительно до рН 3,,0, к полуценному водному раствору при , предпочтительно при комнатной температуре , прибавл ют смешивающийс  с водой органический растворитель до s начала помутнени  раствора и кристаллизуют целевой продукт при 4-30с. В качестве смешиваемого с водой органического растворител  в предлагаемом способе может примен тьс  О , в основном любой растворитель, обладающий этими свойствами. Однако предпочтение отдаетс  низким спиртам, кетонам , нитрилам и циклическим эфирам , в частности метанолу, этанолу, 15 Н-пропанолу, изопропанолу, ацетону, ацетонитрилу или диоксану.

.Пример 1. 1 г соли лити  (полученной пропусканием раствора свободной кислоты через 20 C gv-50 в виде лити , с последующей лиофилизацией раствор ют в 2 мл воды, при комнатной температуре при перемешивании капл ми добавл ют 1,2 мл ацетона до начала помутнени . При 25 20-25 С происходит кристаллизаци . Выкристаллизованный продукт спуст  30 ч отсасывают, дважды промывают небольшим количеством ацетона с водой

(1:2) и просушивают в вакууме над зо . Р2.05 Выход составл ет 900 мг (90 использовани  лиофилизата).

-

Пример 2. 1г лиофилизированной соли лити  р -НАД раствор ют в 2 мл воды и при комнатной температуре при перемешивании капл ми добавл ют 3,6 мл метанола до начала помутнени . аналогично примеру 1. После сушки получают 900 мг { использовани ) кристаллизованной .соли лити .

Пример 3- 1 г Jb -НАД в виде лиофилизированной свободной кислоты раствор ют в 0,75 мл НлО и при перемешивании путем накапыванин 1,3 мл 1-М-гидроокиси лити  довод т рН до . Затем добавл ют 2 мл метанола и оставл ют л/30 ч при 20-25°С. После обработки , аналогичный примеру 1, получают 900 мг (901 использовани ) крис ° таллизованной соли лити  р -НАД.

Пример t. 1г лиофизированной соли лити  (Ь -НАД раствор ют в 2 мл воды и аналогично примеру 1 добавл ют 0,8 мл изопропанола. После 55 отсасывани , промывани  и сушки получают 800 мг (80% использовани ; кристаллизованной соли лити .

Пример 5. 0,5 мг лиофилизированной соли лити  /3-НАД раствор ю в 1 мл воды и аналогично примеру 1 добавл ют 0,85 мл диоксана. Выход кристаллизации составл ет 70 от использованного лиофилизата.

Пример 6. 0,5г лиофилизированной соли лити  Р-НАД раствор ют в 1 мл воды и аналогично примеру 1 медленно добавл ют 0, мл ацетонитрила . Кристаллизационную соль лити  получают с выходом 80 относительно исполь.зованного лиофилизата.

Пример 7. 0,5 г лиофилизированной соли лити  р-НАД раствор ют в 1 мл воды и оставл ют при комнатной температуре. Спуст  су начинаетс  осаждение кристаллов. Дл  полной кристаллизации оставл ют еще на 3- сут при комнатной температуре Выход составл ет kO% относительно использовани  лиофилизата.

Анализ орторомбической соли монолити 

Суммарна  формула

. 2КгО

Мол рный вес 705,

НАД (ферментативный

с АДХ), %- 93,5

Вода,5,5

Литий,1,17

Т.пл., С203-203,5

Элементный анализ:

Найдено,С 35,28;Н 3,99; N 13,59

. Р 8,73.

Вычислено,%: С 35,76; Н 4,28;

N 13.90; Р 8,78. Кристаллографические данные: Система кристаллов Орторомбическа  90°

Угол о1 , р , Пространственна 

Р2х,, группа о Размеры клетки,А

а 10,,003 Ъ 15,,00+ с 17,821 ±0, Плотность кристаллов, г/см1,65 Кристалл состоит из единицы формулы в ассиметрическом единстве.

Claims (3)

1. Пример 8. (дополнительный дл  верхнего предельного знамени  рН) 1 г Р -НАД лиофилизованной свободной кислоты раствор ютс  в 0,8 мл и при перемешивании с помощью ,k мл 1 н. гидроокиси лити  регулируют рН до. 7- После этого добавл ют 2,2 мл метанола и раствор оставл ют при 20-25 С на 2k-kB ч. 5 После переработки, аналогичной примеру 1, получают 900 мг (90% вво да) кристаллизованной fr- НАД соли лити . Пример 9 дополнительный. 1 г р -НАД( лиофилизованной свобод ной кислоты раствор ют в 1 мл HjO при комнатной температуре и при помощи О, .мл 1 н. гидроокиси лити  при перемешивании регулируют рН до 3,3- Затем добавл ют 1 мл метано ла и смесь оставл ют дл  кристаллизации при 20-25°С в течение дн. После переработки, аналогичной примеру 1 .получают 200 мг (20 ввода кристаллизованной Р- -НАД соли лити  Пример 10 дополнительный. 1 г лиофилизованной /J -НАД соли лити  раствор ют в 2 мл Н„О (величина рН составл ет 3,7) и при охлаждении до смешивают с 2 мл метанола. Осажденный приблизительно после 30 ч отстаивани  при 20-25 С кристаллизат перерабатывают аналогично примеру 1. Получают 900 мг ( 90 ввода) кристаллизованной fi-НАД соли лити . Пример 11.дополнительный. 1 г лиофилизованной Jb -НАД соли лити  раствор ют в Z мл Н-О С величина рН составл ет 3,7) , раствор нагревают доч-50 С и в него добавл ют при перемешивании 2 мл метанола . Оставл ют смесь на 2«-30 ч дл  кристаллизации при 20-25С и затем перерабатывают аналогично примеру 1 Получают 850 мг (85 ввода) криста . лизованной соли лити . 2 Формула изобретени  Способ получени  орторомбической монолитиевой соли | -никотинамидадениндинуклеотиддигидрата с пространственной группой Р2 f 2 - S размерами клетки а« 10,073tO,003A; 1 15.839±0,OOW ; С 17,821 f O.OOjA и углами с/. ft 30, отличающийс  тем, что к разбавленному водному раствору р-никотинамидадениндинуклеотида в форме свободной кислоты прибавл ют гидроокись лити  или катионообменник в литиевой форме до рН 3-7, предпочтительно 3,7-,О или к водному раствору аморфной монолитиевой соли р-никотинамидадениндинуклеотида прибавл ют гидроокись лити  до рН 3-7, предпочтительно 3,7-,О, к полученному водному раствору при 1050 0 , предпочгителвнЪ при комнатной температуре, прибавл ют смешивающийс  с водой органический растворитель до начала помутнени  раствсгра и кристаллизуют целевой продукт при . Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе 1.Winer A.D. Кристаллизаци  никотинаминадениндинуклеотида.J .Biol. Chem, 239 (Ю) 3598, 196.
2. 2.Dalziel К.Очистка . никотинамидадениндинуклеотида и кинетичес кие эффекты нуклеотидных поимесей.J .Biol.Chem., 238, 1538 {19бЗ).
3. 3.Патент США № 370065, кл. 260-21-1,5, опублик. 1972.