SU810721A1

SU810721A1 - Способ получени нерастворимыхКОМплЕКСОВ пРОТЕОлиТичЕСКиХ фЕР-MEHTOB

Info

Publication number: SU810721A1
Application number: SU782649428A
Authority: SU
Inventors: Игорь Федорович Мишунин; Юрий Вениаминович Костенко; Ирина Николаевна Баширова
Original assignee: Ордена Трудового Красного Знамениинститут Биохимии Им.A.B.Палладинаан Украинской Ccp
Priority date: 1978-07-26
Filing date: 1978-07-26
Publication date: 1981-03-07

Description

Изобретение относится к технологии получения нерастворимых ферментных комплексов и может быть использовано в ферментной промышленности.

В настоящее время ферментные препараты находят широкое применение в различных отраслях промышленности для гидролиза белковых субстратов из сырья животного и растительного происхождения.

Обычно в технологических процессах ферментные препараты используются однократно, так как их растворы загрязняются продуктами реакции, после чего активный ферментный раствор становится отходом, что снижает рентабельность производства.

Более перспективным является использование иммобилизованных ферментных препаратов. Однако большинство известных способов получения таких нерастворимых ферментных препаратов достаточно сложны и поэтому неприемлемы для воспроизведения их в промышленных условиях, стоимость получаемых ферментных препаратов достаточно высокая.

Известен способ получения нерастворимых комплексов протеолитических ферментов (в частности трипсина), согласно которому, 2,5%-ный раствор фермента в буфере обрабатывают раствором глутарового альдегида при концентрации последнего в реакционной смеси до 2% в течение нескольких часов, затем проводят осаждение фермента сульфатом аммония (степень насыщения 80%) при перемешивании в течение 2 ч. Затем удаляют непрореагировавший альдегид добавлением NaHSO₃, отделяют осадок фильтрованием, который многократно промывают 0,15 М раствором NaCl, буфером и водой и подвергают лиофильной сушке [1].

Недостатком данного способа является его продолжительность, наличие большогочисла операций, необходимость проведения лиофилизации.

Целью изобретения является упрощение процесса при сохранении высокой активности целевого продукта, а также обеспечение. возможности внедрения способа в производство.

Указанная цель достигается тем, что вкачестве раствора фермента используют 10%-ный водный раствор фермента, в качестве раствора альдегида — раствор формалина (при концентрации последнего в смеси 2,5—3%), обработку ведут в течение 30—40 мин. Осадок отделяют центрифугированием и сушат при комнатной температуре.

Согласно изобретению, описывается способ получения нерастворимых комплек810721 сов протеолитических ферментов путем обработки 10%-ного водного раствора фермента раствором формалина при концентрации его в реакционной смеси 2,5—3% в течение 30—40 мин, отделения осадка центрифугированием, промывания осадка водой и сушки при комнатной температуре.

Описываемый способ обеспечивает, кроме того, возможность дополнительного извлечения целевого продукта из промывных вод, полученных в результате промывки осадка, путем их объединения после

4—5 промывок, упаривания в вакууме, повторной обработки формалином, центрифугирования и сушки.

Описываемый способ обеспечивает получение нерастворимых комплексов протеолитических ферментов с высокой удельной активностью на уровне 2—2,5 ед/мг белка (по Кунитцу), что составляет 60—70% от исходной.

Получаемые ферментные препараты могут быть использованы в технологических процессах 10—15 раз без потери активности.

Пример 1. 1 кг протезима (активность 0,650—0,750 ед/мг), выпускаемого опытным производством ИОХ АН УССР, растворяют в 10 л дистиллированной воды и в раствор добавляют 40%-ный формалин до концентрации 2,5%. Раствор при перемешивании и температуре 20°С выдерживают 30 мин, после чего выпавший осадок отделяют центрифугированием при 2000 об/мин в течение 20 мин. Осадок суспензируют в 10 л воды и вновь центрифугируют. Надосадочную жидкость сливают и осадок вновь промывают водой. Эту промывку повторяют 5 раз. После пятой промывки протеолитическая активность в надосадочной жидкости отсутствует. Промывные воды упаривают в вакууме до концентрации протезима, соответствующей исходному раствору, (1 кг в 10 л воды) и вновь обрабатывают формалином. Осадок ферментного препарата после пятой промывки высушивают в токе воздуха при комнатной температуре, после чего измельчают до размера частиц 0,2--0,5 мм в диаметре.

Полученный препарат протезима нерастворим в воде и готов для промышленного использования.

Для определения протеолитической активности 2 мг нерастворимого протезима суспензируют в 1 мл воды и определения проводят по Кунитцу. Активность полученного препарата 2—2,5 ед/мг белка, что составляет 60—70% от исходной.

Ниже приведены данные, характеризующие активность препарата, полученного данным способом при многократном его использовании. В 15 циклах активность пре парата составляет 0,690—0,720 ед/мг, что соответствует уровню 96—95% от исходной.

Номер miK/i.a	Активность нерастворимого протезима. ^/Е/ 280/мл	Помео цикла	Активность нерастворимого протезима, ^/Е/ 280/мл
1	0.720	и	0.710
2	0,710	12	0,715
3	0.710	13	0.690
4	0.730	14	0.720
5	0,695	15	0.680
6	0.715	16	0,670
'i	0,705	17	0,630
8	0.720	18	0,635
9	0,710	19	0.610
10 .	0,700	20	0.590

Пример 2. 1 кг протосубтилина Г-ЗХ (активность 0,05—0,06 ед/мг), выпускаемого Вильнюсским ферментным заводом, растворяют в 10 л дистиллированной воды, добавляют 3,5%-ный раствор формалина и 25 дальнейшую обработку проводят так, как описано в примере 1.

Активность полученного нерастворимого препарата протосубтилина 2—2,5 ел-'мг белка, что составляет 60—70% от исход30 ной.

Полученные ферментные препараты с высокой удельной активностью предназначены для гидролиза белка в растворах, представляющих собой отходы пищевой, 35 химической и легкой промышленности. После отделения ферментного препарата, полученные белковые гидролизаты могут быть использованы в животноводстве.

Claims

40 Формула изобретен и я

Способ получения нерастворимых комплексов протеолитических ферментов, включающий обработку раствора фермента ра створом альдегида, отделение осадка, про45 мывку его водой и сушку, о т л и ч а ю щ и йся тем, что, с целью упрощения процесса при сохранении высокой активности, в качестве раствора фермента используют 10%-ный водный раствор фермента, в каче50 стве раствора альдегида — раствор формалина при концентрации последнего в реакционной смеси 2,5—3%, обработку ведут в течение 30—40 мин, отделение осадка осуществляют центрифугированием, а суш55 ку проводят при комнатной температуре.