SU557785A1

SU557785A1 - Способ переработки биомассы микроорганизмов

Info

Publication number: SU557785A1
Application number: SU2123885A
Authority: SU
Inventors: Сергей Васильевич Рогожин; Владимир Александрович Сергеев; Даниил Григорьевич Вальковский; Анатолий Михайлович Мамцис; Валерий Петрович Варламов; Николай Николаевич Осипов
Original assignee: Ордена Ленина Институт Элементоорганических Соединений Ан Ссср
Priority date: 1975-04-09
Filing date: 1975-04-09
Publication date: 1977-05-15

Description

1

Изобретение относитс к микробиологической промышленности и касаетс комплексной переработки биомассы микроорганизмов с получением пищевого белка, липидов и гидролизатов нуклеиновых кислот.

Известен способ последовательного извлечени липидов, нуклеиновых кислот и белков из клеток микроорганизмов 1. По этому способу микроорганизмы подвергают полному обезжириванию с одновременной дезинтеграцией оболочек в среде органического растворител в кавитационной мельнице с последующим выделением липидов из органического сло , удалением растворител из дезинтеграта , например сушкой при 60-65°С. Из последнего экстрагируют нуклеиновые кислоты растворами солей, например 10%-ным раствором NaCl, при нагревании до 100°С, а из оставшейс пасты извлекают белок, например , экстракцией 0,2 н. раствором NaOH. Однако этот метод позвол ет получить лишь полимерную нуклеиновую кислоту, требуюшую дальнейшей обработки и белок в денатурированном состо нии, затрудн ющем его дальнейшее использование.

Известен также способ выделени белков из клеточного материала, согласно которому клеточный материал перед воздействием кавитации обезвоживают, клеточную суспензию готов т на органическом растворителе.

дезинтегрированный материал сушат, например , в вакууме дл удалени растворител , после чего белок и нуклеиновые кислоты экстрагируют раствором шелочи и осаждают белковонуклеиновой кислотой, например кислотой в изоэлектрической точке 2. Однако этот способ трудоемок, и кроме того он не позвол ет получить белок высокого качества с заданными функциональными свойствами.

С целью устранени денатурирующего действи на белок высоких темпертур, получени гидролизатов нуклеиновых кислот заданного состава, упрощени способа, а также получени белка с улучшенными функциональными

свойствами предлагают способ, отличаюшийс от известного тем, что осаЛСденный белковонуклеиновый концентрат раствор ют в буфере при рП 7,5-8,9, обрабатывают нуклеолитическим ферментом, например экзонуклеазой А-5, с последующим выделением белка и гидролизата нуклеиновых кислот.

Пример I. 9 г обезвоженных дрожжей Saccharomyces cerevisial дезинтегрируют в кавитационной мельнице в этиловом спирте

в течение 30 мин. После удалени растворител и сушки дезинтеграта из него экстрагируют 0,2 н.-раствором NaOH (100 мл) белковонуклеиновый комплекс при 20°С в течение 20 мин при перемешивании. Затем отдел ют

клеточные оболочки центрированием при

7000 об/мин. Из .полученного экстракта осаждают белковонуклеиновый комплекс, снижа рН до 4,0 НС1 и также отдел ют его центрифугированием при 6000 об/мин. Белковонуклеиновый комплекс раствор ют в 30 мл буфера с рН 8,9, добавл ют 0,5 мл раствора экзонуклеазы А-5 (к. ф. з. 1.4.1) с удельной активностью .300 л. а./мл и инкубируют в течение 24 ч при 37°С, после чего рН снижают до 4,0 НС1 и отдел ют белок от гидролизата нуклеиновых кислот в виде осадка центрифугированием при 4000 об/мин.

Получают 3,5 г белка с содержанием нуклеиновых кислот 1,7% и 20 мл гидролизата нуклеиновых кислот с содержанием 5-мононуклеотидов 60% и с концентрацией остаточного белка 2,0%.

Пример 2. 50 г обезвоженных дрожжей Sacchoromyces cerevisial дезинтегрируют в кавитационной мельнице в хлористом метилене в течение 30 мин. После удалени растворител из дезинтеграта экстрагируют 02 н. раствором NaOH (500 мл) белковонуклеиновый комплекс при 20°С в течение 20 мин. При перемешивании после отделени клеточных оболочек и выделени белковонуклеинового комплекса (пример 1) последний раствор ют в 100 мл 0,2 н. фосфатного буфера (рН 7,5), внос т 3 мл раствора панкриатической РНКазы , циклизующей (к. ф. 2.7.7.16) с удельной активностью 400 е. а/мл и инкубируют в течение 8 ч при 37°С. При этом посто нно удал ют образующиес продукты гидролиза нуклеиновых кислот в диализный мешочек, помещенный в реакционный сосуд. По окончании гидролиза гидролизат собирают и упаривают до концентрации олигонуклеотидов 20- 40 мг/мл. Белок осаждают, снижа рН до 4,0 СИ НС1 и отдел ют его от раствора центрифугированием .

Claims

1.Авторское свидетельство № 274059, М., Кл.2 С 12D 13/06, 1969.

2.Авторское свидетельство № 246525, М., Кл.2 А 23J 1/18, 1968 (прототип).