SU793386A3

SU793386A3 - Способ получени тетрапептидов

Info

Publication number: SU793386A3
Application number: SU782699407A
Authority: SU
Inventors: Арнольд Морган Барри
Original assignee: Рекитт Энд Колман Продактс Лимитед (Фирма)
Priority date: 1977-12-15
Filing date: 1978-12-14
Publication date: 1980-12-30
Also published as: IE782475L; AU4219978A; PL114981B1; FR2411829A1; GR72716B; AU523732B2; NZ189047A; AT363198B; PT68900A; IE47764B1; CS210679B2; ATA899878A; LU80654A1; PL211703A1; ZA786966B; CH638177A5; DK540678A; US4178371A; IL56181A; CA1145330A

Description

или его защищенно.е производное, где значени дл В и С указаны выше, с последующим удалением защитных групп и выдел ют целевой продукт, случае когда

X: NMe или NMePh, при желании окисл ют перекисью водорода или метахлорпербензойной кислотой, дл получени соединени формулы 1, где X: N(0)Mez, N(0)MePh. В тексте использованы следующие сокращени :

-трет-бутилоксикарбонил

вое

8и

-трет-бутил

JBCF - изобутилхлороформат Z - бензилоксикарбонил OCCJ - дициклогексилкарбодиимид оси - дициклогексилмочевина HONSu N-оксисукцинимид NMM - N-метилморфолин OMF - диметилформамид ОМЕ - 1,2-диметоксиэтан THF - тетрагидрофуран МГ - метиленгликоль Различные соединени и промежутоные веществаисследуют способом тонкослойной хроматографии (тс.х.) на силикагелевых пластинках (Кизельгель CF254 ) в следующих системах ЗЕ - метанол,хлороформ 1:2 3F - метанол,хлороформ 1:19 2В - хлороформ, метанол , уксусна кислота 19:9:1 ЗА - хлороформ, метанол ,уксусна кислота, вода60:18:2:3 ( 1) вое - Phe-NHCH2.CH2.NHCOCH3К охлажденному до -20е раствору BOe-Ph-OH (2,65 г) в 20 мл хлористого метилена добавл ют н-метилморфолин (1,01 г) и изобутилхлорформиат (1,37 г), после чего через 2 мин вво д т H2NCH,jCH2NHCOCH3(l/2 г). Температуру реакционной смеси поднимают до комнатной и смесь перемешивают при этой температуре в течение 21 ч, после чего растворитель отгон ют, а смолу раствор ют В хлороформе. Раствор промывают насыщенным раствором NaHCO.j, 10%-ной водной лимонной .кислотой , водой до полной нейтрализации и, наконец, насыщенным солевым раствором. Органическую фазу сушат нгзд суль фатом натри и упаривают досуха, тв дый остаток кристаллизуют из этилаи

за - хлороформ, метанол,уксусна

30: 18:4:6 кислота, вода ЗС - хлороформ, метанол, уксусна

90:27:2:3 кислота, вода 30 - хлороформ, метанол , уксусна кислота,

30:20:2:3 вода

4А -. изобутанол, этилацетат , уксусна

1:1:1:1 кислота, вода 5В - изобутанол,

3:1:1 уксусна кислота,вода 7В - этилацетат, пиридин , уксусна кислота,

60:20:6:11 вода

7с - этилацетат, пиридин , уксусна кислота,

120:20:6:11 вода

7 О - этилацетат, пиридин , уксусна кислота,

240:20:6:11

вода

7F - этилацетат, пиридин , уксусна кислота,

480:20:6:11

вода

8А - хлороформ, изо3:1

пропанол

8В - хлороформ, изо9:1

пропанол

Пример 1. 1-Тирозил-0-алаилглицил-1-фенилаланин-2-ацетамидотиламид .

Его получают согласно следующему пособу OHNHaCHgCHaNH-COCIfj -ISIHCHaCHaNFfCOCHj ккснгСН2:ынсосНз ШГСН2С Н2МГСОСШз . :N HCH:gC3i2KHcocH5 тата, получают амид 1 (3,0 г), RI 7F 0,35. () се-H Ph-NHCH CHaNHCOCH 3 г BOC-Ph-NHCH CH NHCOCH раствор ют в 5 М неС в этилацетате (20 мл) и 2,6 М неб в уксусной кислоте (5 мл), и раствор перемешивают при температуре окружающей среды в течение 30 мин. Растворитель отгон ют и остаток несколько раз растирают с безводным диэтиловым эфиром. Гидрохлорид (2) получают в виде гигроскопического твердого вещества (0,45 г), Rf ЗБ J0,5) . (4) вое GCy Ph NHCH CHxNHCOCHj. Это соединение получают любым из следующих способов. А. К раствору BOe-GCy-Ph-OH (1,0г) и H2,NCH2 CH NHCOCH5(0,4 г) в диметилформамиде , озСпажденному в лед ной бане с сольк, добавл ют 0,78 г N-оксисукцинимида и 0,668 г дициклогексил карбодиимида. Поднимают температуру реакционной смеси до комнатной и пр должают перемешивание в течение ноч отфильтровывают выпавший в осадок оси и фильтрат упаривают. Остаток раствор ют в хлороформе, промывают насьлденньом раствором бикарбоната на ри {250 мл), 10%-ной водной лимон ной кислотой ( мл) и водой до полной нейтрализации, а затем насыщенным солевым раствором. Органичес кую фазу сушат над сульфатом натри и упаривают досуха. Остаток хромато графируют на колонке с силикагелем (,4 см). Элюируют сначала смесь хлороформа изопропанола в соотношении (19:1), затем в соотношении (4:1). Названное соединение получаю в виде смолы (0,60 г) Rr 8В 0,4;Rp 7F 0,2. Б. К охлажденному в бане с твердой углекислотой в смеси с четыреххлористым углеродом раствору 1,072 ВОС-СЕу-ОН в хлористом метилене добавл ют 0,618 г N-метилморфолина и 0,836 г изобутилхлорформиата. При этой же температуре через 2 мин до бавл ют С Н. Ph МНС HgCH NH СОСН 3 (1,75 г) и 0,618 г М-метилморфолина и температуру поднимают до комнатно Реакционную смесь обрабатывают посл перемешивани в течение ночи так, как описано дл соединени 1. Остаток чист т согласно А. Продуктполу чают в виде смолы (0,65 г). Rr. 8В 0,4; Rn 7F 0,2. (5) БОС - Туг (BLJ -D-ABa-Gey-Ph NHCH2.CH2.NHCOCH3 (i) обрабатывают 0,64 г ВОС-С у-Ph-NHCH CHaNHCOCHT ,. 5,5 М нее в этилацетате (5 мл) и 2„6 М нее в уксусной кислоте (5 м при температуре окружающей среды. Тур DAla Через 45 мин растворитель отгон ют и остаток раствор ют в диэтиловом эфире . Гидрохлорид дипептидный получают Б виде гигроскопического твердого вещества (0,54 г), R 3D 0,45. (М) BOC-Tyr(Bu-t )-ОАба-ОН ( г) и СЕ H Gey-Ph-NHCH2CH2lJHCOCH(0,5 г) раствор ют в 3 мл диметилформамида и охла эдают в лед ной бане с солью. Затем к раствору добавл ют 0,355 г N-оксисукцинимида и 0,303 г дициклогексилкарбодиимида , а потом 1,48 г N-метилморфолина. Поднимают температуру реакционной смеси до комнатной и перемешивание продолжают в течение ночи. Выпавшую в осадок дициклогексилмочевину отфильтровывают растворитель отгон ют и остаток распредел ют между этилацетатом и водой. Органический слой промывают насыщенным вoдньuvI раствором бикарбоната натри ( 2x50 мл), 10%-ной водной лимонной кислотой ( мл), водой до нейтрализации , наконец насыщенным солевым раствором. Органический слой сушат над сульфатом натри и упаривают . Тетрапептид получают в виде смолы ( 0,65 г) Rf 7С 0,65; R 3D 0,8. (6) Н-Туr-D-Aea-GEy-Ph-NHCH2CH2NHCOCH 30 ,65 г BOC-Tyr(Bu)-D-Aea-GEy-Ph NHCHgCH2NHCOCH3(0,65 г) обрабатывают 2,6 М HCF в уксусной кислоте вз той в избытке, в течение 45 мин при температуре окружающей среды. Растворитель отгон ют и остаток хроматографируют на колонке с силикагелем (,5 см) в системе ЗА. Полученную смолу сушат лиофилизацией, получают названное соединение(О,45 г). R ЗА 0,3,ci -6,95°(, OMF). Пример 2. и-Тирозил-1-аланилглицил-М-метил-1-фенилаланин-3-диметиламинопропиламид .

(1) BOC-MePh-NHCHiCHiCHaNMe.

Раствор N-хрет-бутилоксикарбонил-N-метилфенилаланин (2,79 г) 1,01 г. N-метилморфолина в дихлорметане 0. (20 мл) при перемешивании охлаждают до -20с, затем к нему добавл ют 1BCF (1,-37. г) и спуст 5 мин NH2CH2 CH2 CH,jNMe2.(l,02 г). Перемешивание продолжают 1 ч при -20с, за- 5

тем температуру поднимают до комнатной и продолжают перемешивание в течение 12 ч. Смесь упаривают, остаток раствор ют в этилацетате (50 мл). Этилацетатный раствор промывают водным раствором бикарбоната натри (насыщенный, 50 мл), водой (2x50 мл) fi 10%-нсй водной уксусной кислотой 12x50 мл) . Кислые экстракты объедин ioт подщелачивают насьпценным раствором бикарбоната натри и экстрагируют этилацетатом ( мл). Этилацетатньае экстракты объедин ют , сушат над сульфатом натри и упаривают, получают названное соединение в виде масла, Ко IE 0,24; Rn ЗА 0,37. (2)H-MePhe-NHCH2CH2.CH2NMe,. 2НСЕ. Масло, получение которого описано в стадии (.1), раствор ют в этилацетате (10 мл), добавл ют НСС в уксусной кислоте (6,63 М, 6 мл) и НС в этилацетате (5,7 М, 6 мл). Раствор перемешивают в течение 2 ч, упариваю получают продукт в виде дихлористоводородной соли (2,2 г), Ro IE 0,02; Rr- ЗА 0,08. (3)BOC-GCy-MePh-NHCHjCH CHjNMe. Раствор трет-бутилоксикарбонилглицича (1,05 г) и 0,606 г N-метилморфолина в дихлорометане (12 мл) при перемешивании охлаждают до -20 С Добавл ют 0,819 г (6 ммоль) изобути хлорформиата и смесь перемешивают в течение 5 мин перед добавлением (2), указанного выше (2,02 г) в 5 мл диметилформамида . Раствор перемешивают в течение 1 ч при -20С и в течение 12 ч при комнатной температуре, затем упаривают. Остаток раствор ют в смеси этилацетата (50 мл) и водного раствора бикарбоната натри (10%-ный 50 мл). Органическую фазу отдел ют, промывают водным бикарбонатом натри (10%-ный, мл) и водой (Зл50 мл) Этнлацетатный раствор сушат над суль фатом натри упаривают, получают наз ванное соединение в виде масла. R IE 0,21; R ЗА 0,37. (4) И - b t- у - М е Р h - N Н С Н 2 С Н 2 С Н N Н с Защищенный дипептид (з) обрабатывают указанным способом (2), получаю дихлористоводородную соль (4) (2,0 г 3 виде белого твердого вещества, Rr IE 0,03; Rr ЗА 0,03. , (5) BOC-Tyr ()-DAEa-Cey-MePh-NHCH2 CH2CH ,2NMe2 . Раствор BOC-Tyr(BU)-D-Ata-OH (1,22. r) , H-Gey-MePh-NHCH2CH2CH2NMe2 V2HCe (1,18 r), 0,345 г N-оксисукцинимида и 0,30 г N-метилморфолина в 20 мл безводного диметилформамида охлаждают до . Добавл ют ССС (0,680 г), смесь перемешивают в течение 18 ч, затем выпаривают. Остаток раствор ют в этилацетате (50 мл и пpp 1Ь Iвaют водным бикарбонатом натри (10%-ный, 2-.50 мл), водой ( 50 мл) , отдел ет этилацетатный слой, сушат, его над сульфатом натри Т DAla Gly и упаривают досуха. Остаток раство ют в метаноле, вынос т в колонку с силикагелем (35 к 2 см) и продукт элюируют системой IF. Фракции, содержащие нужное соединение, собирают, упаривают и остаток раствор ют в этиацетате (100 мл). Этилацетатный раствор промывают водным бикарбонатом натри (10%-ный, 3X100 мл), сушат, упаривают, получают названное тетрапептидное соединение (5) в виде белого твердого вещества Кл IE 0,18; RO ЗА 0,39..т (6) H-Tyr-D-AEa-Cey-MePh-NHCH2 .CH-2CH2NMe2. К раствору 500 мг защищенного тетрапептида (5) в 5 мл этилацетата при перемешивании добавл ют раствор хлористого водорода Б этилацетате(5,7 М, 2,5 мл). Спуст 1 ч реакционную смесь фильтруют и остаток промывают петролейным эфиром, сушат и лиофилизируют из воды, получают продукт (380 мг) в виде белого твердого вещества. Rr 4А 0,27, Rr ЗВ О , 47 , oL J Jl + + 23,6 (, 0,1 М нее). Пример 3. 1-Тирозил-0-аланилглицин-N-L-фенилаланин-2-диметиламинопропиламид-М-окись . (1)ВОС-Туг(Ви)-0-Аеа-СЕy-MePh-NHCH2CH2 .CH2N(0)Me2. К раствору 500 мг БОС Ту г ( Ви) - D-Aea-GEy-MePhe-NHCH2 .CH2.CH2NMe.,(500 мг) в 10 мл метанола добавл ют водный раствор перекиси водорода (30%-на , 0,16 мл) и раствор перемешивают в течение 48 ч при комнатной температуре . Отфильтровывают выпавший осадок, маточник упаривают, получают нужную защищенную N-окись в виде смолы. Rr- IE 0,08; Rf ЗА 0,41. (2)HTyr-O-Ata-GSy.-MePh-NHCH2CH2CH2N (0)Me2. Смолу, полученную в стадии (1), раствор ют в 5 мл этилацетата и к раствору добавл ют раствор HCg в этилацетате (2,63 М, 1 мл). Раствор перемешивают в течение 1 ч, отфильтровывают , сушат твердое вещество и лиофилизируют из воды, получают нужный продукт (240 мг) в виде белого твердого вещества. R 4А 0,56, Rj3B 0,52,roiJ/ + + 18,8° (с l; 0,1 М нее). Пример 4. 1-Тирозил-0-аланилглицил-М-метил-1-фенилаланин-2-диметиламиноэтилам-ид . Это соединение получают согласно следующему способу. MeRh. (1)BOC-MePh-NHCH CH NMe. BOC-MePh-OH и N,N-диметилэтилендиамин конденсируют в услови х описанных в примере 1 (1), получают амид в виде масла. (2)HMePhe-NHCH2.CH2NMe2. 2НСе . М-Защищенный амид из указанной стадии (1) деблокируют в услови х, описанных в примере 1 (2), получают целевую хлористоводородную соль в виде масла, (3) BOC-Tyr(Bu--t-)-D-Ala-Gly-MePh-NHCHxNHCH CHjiNM.. К раствору 700 мг (1,5 ммоль) BOC-Ter(Bu)-DAla-Gly-OH в 7,5 мл безводного тетрагйдрофурана добавл ют 15.2 мг.(1,5 ммоль) N-метилмррфолина ,. раствор охлаждают до -15°С, не., прекраща перемешивани добавл ют 205 мг (1,5 ммоль) изобутилхлорформиата . Через 5 мин ввод т раствор 2НС IH.-MeP.h-NHCH.CH2NMe ( 568 мг, 1,5 lмoль) , а затем 303 мг (3 ммоль) М-метил1у1Орфолина, Спуст 18 ч реакцио,нную смесь упаривают и остаток распредел ют между 50 мл этилацетата и насыщенным водным раствором бикарбоната натри (50 мл Отдел ют этилацетатный слой, промывают его насыщенным водным раствором бикарбоната натри (50 мл), водой (2 X 50 мл) и рассолом (50 мл) сушат над сульфатом натри ;упариваю Остаток хроматографируют на силикаг ле, использу систему 7В.,Подход щие фракций, содержащие продукт,объ един ют, упаривают, получают целево тётрапептидный амид (700 мг) в вид стеклоподобного твердого вещества. (4) 2НС I HTyr-DAIa-Gly-MePh-NHCHjCHjNMCj , Защищенный пептид, полученный ка описано в стадии (З), деблокируют в услови х примера 2(6), получают целевой продукт. После лиофилизации, получают тёт рапептидный амид (200 мг) в виде бе лого твердого вещества, R 7В 0,04; Rr ЗА 0,07; Rf 4А 0,23. ,2° (с 0,50, DMF). Пример 5. и-Тирозил-О-аланилглицил-L - фенил алани нтиоморфолин амид-S-окись. . BOC-P 1-N J Раствор 1,32 г BOC-Ph-OH и 680 м изобутилхлорформиата в 10 мл димети формамида, охлаждают до -2Q°C и при перемешивании добавл ют к нему 520 N-метилморфолина. Спуст 2 мин ввод холодную суспензию, состо щую из 690 мг тиоморфолин гидрохлорида (690 мг) и 520 мг N-метилморфолина в 8 мл диметилформамида. Перемешива ние продолжают в течение 30 мин при -20°С, а затем при комнатной температуре в течение ночи. Растворитель отгон ют, полученный материал распредел ют между этилацетатом и насыщенным водным раствором бикарбоната натри . Этилацетатный слой отдел ют и промывают насыщенным раствором бикарбоната натри , дважды 10%-ным раствором лимонной кислоты в воде, а затем водой и, наконец, насыщенным раствором хлористого натри . Этилацетатный jpacTBOp сушат над сульфатом натри , упаривают, получают тиоморфолинамид в виде смолы (1,5 6)г . /- ( 2) H-Pii-:t js При перемешивании к раствору /-Л 1,05 г S в 3 мл уксусной кислоты при комнатной температуре добавл ют раствор, хлористого водорода в уксусной кислоте(2,6 М, 3 мл) и через двухчасовые интервалы добавл ют еще 3 мл двум порци ми . Растворитель и хлористый водород отгон ют, остаток растирают с безводным диэтиловым эфиром, эфир декантируют, а остаток растирают со свежеперегнанным безводным эфиром, получают фенилаланинтиоморфол.инамид в виде твердого вещества (788 мг). (3)BOC---Gly-Ph --Gly-Ph-N S 384 г BOC-Glv-OH (384 мг) конденсируют с.Ph-N S-HC (572 мг) собом, описанным выше дл ВОС-Pti-N S, использу 258 мг изобутилхлорформиата и 424 мг N-метилморфолина. Получают 774 мг дипептидного амида, (4)ВОС - Tyr(Bu) -БА1а- Oly-Ph- I 697 мг BOO -O y-Ph-7 S смешивают с водной трифторуксусной кислотой (вода : трифторуксусна кислота 1:9,9 мл) в течение 1 1/2 ч.Кислоту отгон ют и остаток растирают с диэтиловым эфиром, получают порошок, который раствор ют в 5 мл безводного 1 мг (5 мл) и довод т рН до 8 с помощью N-метилморфолина (влажна индикаторна бумага). Добавл ют BOC-Tyr(Bu)-DAIa-OH (680 мг) , N-оксисукцинимид (211 мг) в 3 мл диметилформамида, а затем 377 мг дициклогексилкарбодиимида и смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Твердое вещество отфильтровывают и фильтрат упаривают осуха. В остатке получают смолу,которую распредел ют мелоду этилацетатом и насыщенным водным раствором бикарбоната натри . Этилацетатный лой дважды промывают насыщенным одным бикарбонатом.натри , затем рииоды 10%-ной лимонной кислотой в воде, потом водой и насьш енным раствором хлористого натри . Сушат над сульфатом натри ; упаривают и получают защищенный тетрапентидтиоморфо линамид (1,09 г). , . (5) Tyr-BAla-Gly-Fh-J S;: Защищенный тетрапептидтиоморфол амид {1,0 г) перемешивают в водной трифторуксусной кислоте (Н20:CFgCOO 1:9,9 мл) в течение. 11/2 ч..После упаривани и. растирани , с диэтиловы эфиром получают твердое вещество,ко торое чист т хроматографически на силикагеле (хлороформ:метанол:уксу на кислота 60:18-1:1,5), а затем ионообменной хроматографией (смола Сефадекс SP, пиридиниева форма использу градиент от 2% пиридина в воде до 5%. пиридина и 1%-ную уксусную кислоту в воде). Продукт лиофилизируют, получают тетрапептид тиоморфолинамид (495 мг). Туг-БА1а -1, /-V Тур -М1а - С1у -Pii- (10 О мг) в этаноле (50 мл),.обработанный пос ледовательно трем порци ми (20% по объему) перекиси водорода (0,3 мл кажда ) с интервалами в 45 мин при перемешивании при комнатной температуре . После дальнейшего перемешивани в течение 1 ч раствор упаривают досуха, остаток раствор ют в воде (20 мл) и лиофилизируют, полу чают белое твердое вещество (98 мг R ЗА 0,25} R 1C 0,06; R . 5В 0,38 „5 --+53,1(с 0,47, в 0,1 H.-I-ICI ) . Примере. 1-Тирозил-0-алани глииил-1-фенилаланин-2-аминоэтилами Tyr-DAIa-Gl у-MePhe-NH Cfl. CH2NH Z (полученный способом, описанным в мере 4) (350 ME) раствор ют в 20 метанола и добавл ют к суспензии 10% паллади на угле (100 мг) в 10 мл воды. Водород барботируют в течение 4 ч при . Катализатор тем отфильтровывают и растворитель отгон ют при пониженном давлении.О таток раствор ют в небольшом количестве 1% пиридина в воде и внос т , в колонку с Сефадексом ЗР (элюирую градиентом 1% водны.й пиридин - 1 водный пиридин ацетат- 5% вод ный пиридин аде тат) . Соответствую-. щие фракции объедин ют и растворитель отгон ют в вакууме, Продукт (220 мг) сушат вымораживанием из воды, Ri ЗВ 0,45; Ri 4А 0,56; +22,22 (с 0,98; 0,1 M HCI). Пример.. 1-Тирозил-0-aлaнилглицил-N-мeтил-L-фeнилaлaни н-3-тpимeтилaмIvIoний пропил амид ацетат- . - .. .( 1) BQ.C;-;T:y r(-:B-u% D А la-Gly-HePhe .-NHCH-2 CH;2;:c;H2;NHej-OAf.. К раствору;: б 4 6 мг В О С - Т у г ( В и ) -DA I a-G.i:y.-MePh..-NHC(:l2;CH.;2.CHiNMe2 (640 мг). .в 5.;мл эт.анола добавл ют йодистый мети.л; (5;72 :Мг.) /и раствор перемешн.вают. .при. .комнатной температуре , в течение-.-48. ч. Затем, раствор упаривают , ост.аток раствор. ют в этилацетате и .хроматографируют на колонке, с силикагелем (40x2 см), продукт элюируют смесью этилацетат .: Пиридин : уксусна кислота : : вода 90 : 20 : 6 : 1.1. Объедин ют фракции, содержащие целевое соединение ,, .упаривают, . получают твердое вещество (320:мг.) . R. ЗА 0,17; R ЗВ 0,74;. ;R. 4А .0,47. (2) .Н-Ту r-D.AI a-GLy-MeP.he- N НС И . СН, С Н Н е ,,. .АЦет ат Раствор ют- .Указанный, защищенный тетрапептид (ЗОО мг) в эт.илацетате (10 мл) и. краствору .при перемешивании добавл ют раствор HCI в этилаи ,ётате (3 , 9 М , 4. мл). Через 1 чсмесь упаривают, остаток, раствор ют в воде и. внос т на колонку с целлюлозой СМ 52 (35 X. 3 см), продукт элюируют. линей.ным градиентом концентрации от 0,05 -ного водного пиридина до 1%-ного-водного пиридинса1етата . .Объедин ют фракции, содержащие целевое.соединение, упаривают. и остаток лиофилизируют из воды, получают целевой продукт (110 мг) в виде белого твердого вещества. R. ЗВ 0.17; R 4А 0,13; Rr 5В 0,05; ci ,./, -37,75°(с. 0,5,DMF). Пример 8. 1-Тирозил-0-метиоНИЛглицил-N-метил-L-фенилал ани в- 2-димётиламиноэ тиламид-N-окись . (1) вое-Giy-MePh-NH (01-12)2 N (О ) Meg . Краствору BOC-Gly.-MePh-NH (СНа) NMe-j, в 200 мг метанола добавл ют 1,23 г м-хлоронадбензойной кислоты. Реакционную смесь перемешивают при 22°С в течение 2 ч, затем оставл ют при на 18 ч. . Растворитель отгон ют при пони- , женном давлении и остаток раствор ют в 150 мл этилацетата, раствор промывают насыщенным водным раствором бикарбоната натри (2x30 мл), над сульфатом натри и упаривают , получают . N-OKHCb (1,9 г); Rr ЗА 0,76 ; R 4А 0,64. .( 2) НС 1 HGI y-MePh-NH (042)2.(0) Указанную .защищенную N-окись (1,8 г) раствор ют в 10 мл этилацетата и краствору добавл ют уксусную кислоту (10 мл). Затем в раствор ввод т раствор хлористого водорода в этилацетате (3,9М, 12 мл) и смесь перемешивают при 21 С в течение 30 мин. Растворитель отгон ют в вакууме и полученное твердое вещество, растирают с безводным диэтиловым эфиром (2 X 40 мл), Хлористоводородную соль М-окиси (1,5 г) отфильтровывают, R 4А 0,40.

(3) BOC-Tyr(But)-DMet-GI y-MePh-NH (CH,, )2 N(0)Me2.

К раствору 1,8 г ВОС-Ту г (Bu)-DMet-OH в 10 мл безводного THF добавл ют 0,87 г N-оксисукцинимида,

1,5 г HCI-HGIy-MePhe-NH(CH2)2N (0)Me2 и и, 84 мл N-метилморфолина раствор ют в 2 мл безводного THF. Оба раствора смешивают,охлажда до -10°С и добавл ют к смеси 0,87 г дициклогексилкарбодиимида. Смесь перемешивают при -10°С в течение 2 ч, затем при 20°С в течение 18 ч.

Реакционную смесь отфильтровываю и прозрачный маточник упаривают под вакуумом. Полученную смолу распредел ют между этилацетатом (60 мл) и водой (10 мл), органическую фазу отдел ют и промывают 10%-ным водным раствором бикарбоната натри (1x10 мл), а затем экстрагируют 10%-ным водным раствором лимонной кислоты (5x15 мл). Величину рН водной фазы довод т до 7, использу твердый бикарбонат натри , и продукт экстрагируют этилацетатом (3x40 мл). Органическую фазу сушат над сульфатом натри и упаривают, получают смолу (1,35 г). Rn ЗА 0,48

(4) HCI -H-Tyr-OMet-Gly-MePh-NH (CH2 )2.N(0)Me2.

1,11 г BOC-Tyr()-DMet-GI у .-MePh-NH(CH2)2 N(0)Mea раствор ют в смеси трифторуксусной кислоты (36 мл) и воды (4 мл), содержащей анизол (0,2 мл). Смесь перемешивают в течение 30 мин при 22°С, затем упаривают в вакууме. Продукт чист т хроматографией на силикагеле использу градиентную систему (система растворителей ) в качестве элюента. Материал после очистки на колонке Q силикагелем перенос т в колонку с карбоксиметилцеллюлозой , элюируют градиентом от 0,1%-ного водного пиридина до 1,5%ного водного пиридинацетата.

Соответствующие фракции объедин ют , выпаривают, остаток высушиваю повторным вымораживанием из разбавленной HCI, получают целевой гидрохлорид (341 мг).

.Rf ЗВ 0,31; R 4А 0,44;Rf 5S 0,19;Cd::; g +29,30° (с 0,99, О , 1 н . Н С I ) .

.Пример 9. L-Тирозил-О-метионил (сульфоксид) глицил-М-метил-L-фенилаланин-2-диметиламиноэтиламид-Н-окись .

К раствору 418 мг HCl-H-Tyr-DMet-Gly-MePh-NH (CH2)2N(C)Me2 в 150 мл этанола добавл ют 1,46 мл перекиси водорода. Раствор перемешивают при 21°С в течение 24 ч, после чего растворитель отгон ют при пониженном давлении и полученный материал чист т хроматографически на целлюлозе СМ,. использу градиент ,ное элюирование от 0,1%-ного водного I пиридина до. 1,5%-ного водного пири дин- ацетата.

Материал, полученный после очистки на колонке, высушивают повторным вымораживанием из HCI, -получают целевой гидрохлорид (354 мг).

R ЗВ 0,32; Rf 4А 0,43; R 5В 0,32;Со(.ъ° +9,16° (с 1,05; 0,1 н- HCI ) .

В табл.1 указаны подробности получени других соединений формулы I способами, описанными в указанных примерах.

Ниже перечислены другие типичные соединени по насто щему изобретению:

)Wa-Cib-Me,PVi(napa-ce,)-NHCH2CH2N(oMej H-T4r-D№Q-Qt -Ph(nQpa-Ct)-NHCHaCH2.N(.

H-lVn-MU- Gly-KePh-NC

(о)Мвг

J it-tpef if

H-Tyr - DAla - Cly-TTePJi-N:

СНгСН2М(0)Мег

H - Тур - DAla - Cty -ИГеРЙ- К fJ

CH2CHzN(0)Me2

Л - Туг - D Ala - Cly N

ОН2СНгТ Р(о)Мег

СНгСНг

H-Tyjp - HAIa- Cly -MePh TV

CIH2CH2N(0)Me2

H-Typ-DAla-Oly-MePh N

iH-tyr-DAla-OIy-MePh N

CHgCHaWtOjKee

CHgCHs

/

H-Typ-HAla-Ciy-WePh

CHaCHsNfOlMeg

СПгСНе H-TyP-DAla-Gly-MeFh Nci

CHgCHaNlOlMea

CHg снг Cly - KePh IT

СНгОТг 10)Ме2

СНаСНгGly-WrePJh . ISTОИ

С 2СЛ2Т 1о)Гег caijCHa OH25 H Tyi - DAla - GJy -MePn N, CH2GH2N(o) ,-л СНзСНа-С У-ОМ( |.1.,А1а-О у-МеР1да 30 CH2CH2N(0)M.2 СН2СН2Н-ТуР -DAla - Oly -MePli--N - оме CH2CH2N(0)M-e2 СЯгСТз И -Туг - DVU а - 0 y- TePh-K. оКе С1Г2СН2ТЧ(о)Меа Н - Тут - БА1а- Gly - IePh- WiCH2.CH2K(0)MeCH2CH2 aij f- ТУР GlY-MePh-ЖСНо СМгШзРЯ Н-Tyr-UAla- Cly-MeFH -NHOtia cHaWicoTfiicHs HzCiij. H - Туг -DAla - Cly-Ph -N SOg H- Туг-DAla- Cly-KeFh- . li Тур HAla - Cly -HePti -(/

Me

-N N

e

H-T f-DA a-Gbv-Ph

CH,.COO

J

дле

H-T4r-DAEa-Ge.4-ANepti-N::;; 2C2P

5.CH CH NCOWEj

н-т г-вАеа-йеу-меРЪ чнсн2Сн,н( H-Tyr-DVae. -GeN-MePhNHCH,.(.o)Me2 H -D-Ley-cey -MePti NHCH2 CH2H(.o)Me2

H-Tvr-DNbe.u-Ge-y N e,PViNHCH2 CHjNCOW62,

H-Tyr--DTra-c,ey-Me,PhNviCH.jCH2N(o),. H -Tsr -DAta - Qe.i -Wepti NHCH- CH NHMe

20 H-jyv-D )- eph lнcн2al,.,)

H-T jr-ВКШ- aE -MePVi ННСН2 СН2 Ю:; -Ь2 Q 50 55 Q й5 H-T r-Dfkta -Gt -MePti NHCH2CH, H-T l--DA&a-GE-J-N ePliKHCH2CH,.t2 Исходные амины формулы HNRgRX, используемые при получении соедине ий/ описанных в вышеуказанных при Р ®сли они не вл ютс коммерчески доступными, могут быть получены известными способами, либо так как описано в нижеследующих примерах. П р и м е р А. N-Изoaмил-NN-диметилэтилендиамин . (1) Me,CHCH5CONHCI-U CH2NH2: . По капл м при перемешивании добавл ют раствор 5 г (38 ммоль) хлористого изовалероила в дихлорометане к- раствору N ,N-диметилэтилендмамина (3,38 г, 38 ммоль) и N-метилморфолина (7,75 г, 76,7 ммоль) в дихлорметане, при 0°С. Поднимают температуру реакционной смеси до комнатной и продолжают перемешивание в течение 4 ч, затем растворитель отгон ют. Остаток раствор ют в 50 мл 5 М едкого .натра и экстрагируют этилацетатом (2x100 мл). Этиладета1Т промывают насьш енным водным раствором хлористого натри , сушат над сульфатом натри и упаривают. Остаток раствор ют в диэтиловом эфире добавл ют к нему 10 мл 5 М НС I в этилацетате Выпавший в осгщок продукт отфильтровывают, промывают диэтиловым эфиром (5x10 мл) к сушат в глубоком вакууме. Выход 5,43 г; R ЗА 0,40. (2) Me2 CHCH2,CH2.NHCH2,. Раствор ука занного амида (5 г) в безводном тетрагидрофуране (50 мл) по капл м, при перемешивании добавл ют к суспензии LiА 1Нд (4) в безводном тетрагидрофуране (20 мл) при

комнатной температуре. Затем реакционную смесь кип т т с обратным холодильником в течение 4 ч,по9ле чего , использу хроматографию в тонком слое, обнаруживают отсутствие исходного материала. Избыток LiAIH гас т насыщенным водным раствором сульфата натри . Полученную суспензию фильтруют , маточник подкисл ют 10 мл 4 М HCI. Рартворитель отгон ют,остаток растирают с диэтиловым эфиром,фильтруют и осадок высушивают.

Выход 5,51 г.

Пример В. N-Фeнэтил-N,N-диметилэтилендиамин

(1) PhCH CONHCHj CH NH - НС I.

Указанное соединение получа(рт способом, описанным в примере А{1), путем сочетани фенацетил хлорида (1,0 ,47 ммоль) с N,N-димeтилэтилендиамином (0,42 г,б,47 ммоль) в присутствии N-метилморфолина.

Выход 1,38 г; R ЗА 0,80.

(2

PhCH2 CH2NHCH,CH2NH.- HCI,

Целевое соединение получают восстановлением вышеуказанного амида (10 г) с помощью LiА IN4 , как описано в примере А(2). Полученный продукт чист т хроматографией на колонке с силикагелем, использу в качестве элюента систему ЗА.

Выход 4,.

Пример С. N -(2-Аминоэтил)-Nм-диметилмочевина .

(1)PhCHjiOCONHCH CH NHCONMe .

Раствор хлористого диметилкарбамоила (1,39 г) в диэтиловом эфире (15 мл) добавл ют по капл м к перемешиваемому раствору N-метилморфолина (1,57 г) и 2-бензилоксикарбнил минозтиламина (3,02 г) в 110 мл диэтилового эфира. Смесь перемешивают 4 ч, затем оставл ют на два дн . Эфир отгон ют, твердый продукт распредел ют между 10%-ной водной лимонной кислотой и этилацетатом . Этилацетатный слой отдел ют и промывают 10%-ной водной лимонной кислотой, насыщенным раствором бикарбоната натри и насыщенным раствором хлористого натри , а затем сушат над сульфатом натри и упаривают, получают твердое вещество (1,7 г). После перекристаллизации из смесей.этилацетата и петролейного эфира (т.кип. 60-80с) , получают продукт с т.пл. 81-82 с.

(2)H2NCH2CH2NHCONMe2.

1,06 г N-бензилоксикарбонильного соединени раствор ют в 30 мл этанола , содержащем 2,1 мл 2 н. водной сол ной кислоты и подвергают гидрогенолизу над 10%-ной (100 мг)

в течение 1,5 ч. Смесь фильтруют, маточник упаривают, получают целевое соединение в виде хлористоводородной соли, которую используют без дополнительной очистки.

- Пример D. N-Изoaмил-N-мe тилэтилендиамин.

11) BOC-Gly-N(Me)CH.jCH2 СНМе .

К раствору 17,5 (0,1 моль) BOC-GlyOH в 100 МП безводного хлоQ ристого метилена, добавл ют 10,1 г (0,1 моль) N-метилморфолина и 13,7 г (0,1 моль) JBCF при -15°С. Спуст 2 мин добавл ют 13,7 г (0,1 моль) М-метилизоамиламингидрохлорид и

10,1 г N-метилморфолина. Реакционную смесь перемешивают при в течение 15 ч и при комнатной температуре в течение ночи. Растворитель отгон ют и масло раствор ют в этнлацетате , экстрагируют насыщенньп-- бикарбонатом натри (2x100 мл), 10%-ной водной лимонной кислотой (2x100 мл), промывают водой до нейтральной реакции , сушат над сульфатом натри и упаривают.

5 Получают масло. Выход 27 г (количественный ) ; RO 70 0,79.

(2) H2NCH.(Me)CH2CH CHMe2 .

0 12 г BOC-GIy-N(Me)CH2CH2CHMe2

раствор ют в 90%-ной водной трифторуксусной кислоте ( : СРт,СООН 1:9,35 мл). Через 2 мин растворитель отгон ют, оставшеес масло раствое р ют в 50 мл свежевысушенного тетрагидрофурана и добавл ют к диборану в тетрагидрофуране (1М, 150 мл) в атмосфере азота при -20°С. Температуру поднимают до комнатной и реакционную смесь перемешивают в течение, ночи. Осторожно добавл ют 100 мл

метанола дл разложени избытка диборана , растворитель отгон ют, получают масло. Затем масло обрабатывают 50 мл 6 М HCI. Реакционную 5 смесь кип т т с обратным холодильником в течение 3 ч и смесь упаривают. Полученное масло обрабатывают 2М NaOH в течение 1 ч, подкисл ют и упаривают . Маслообразный остаток чист т 0 колоночной хроматографией на силикагеле (колонка 2,5 х 80 см), элюиру целевой продукт системой растворителей ЗА.

Выход 4,4 г, R ЗА 0,20. г Пример Е. Диметил-(2-aминo-4-мeтилпeнтил ) -амин .

(1) BbC-Leu-NMe2.

К раствору 4,62 г (20 ммоль) ВО С-Leu-ОН-в хлористом метилене,

0 охлажденному до -20°С, добавл ют 2,25 мл (20 ммоль) N-метилморфолина и 6,0 г (20 ммоль) хлордифенилфосфатоксид (6,0 г, 20 ммоль), спуст 15 мин добавл ют 5,6 г

5 (125 ммоль) диметиламина. Через

3 ч при раствор упаривают и остаток распредел ют между этилацетатом и водой (50 мл каждого). Органическую фазу отдел ют и промывают 10«-ной водной лимонной кислотой , водным бикарбонатом натри и насыщенным рассолом, сушат над сульфатом натри и остаток упаривают , получают целевой амид (5,15 г

(2) Me2,NCH2CH(NH2,)CH2.CHMe2 .

Раствор 1,3 г (5 ммоль) BOC-Leu-NMe 2. в водной трифторуксусной кислоте ( : 9:1,20 мл) перемешивают в течение 1 ч. Растворитель отгон ют и остаток раствор ют в безводном тетрагидрофуране. Перемешиваемый раствор охлажд,ают до -20°С в атмосфере азота и добавл ют раствор диборана в тетрагидрофуране (1м, 30 мл), Через 5 ч при комнатной температуре добавл ют 10 мл метанола, раствор перемешивают в течение 12 ч и затем упаривают . Остаток раствор ют в 15 NUI водной 2м сол ной кислоты и перемешивают еще в течение 12 ч, реакционную смесь упаривают. Остаток чист т хроматографически на силикагеле (система ). Соответствующие фракции объедин ют, упаривают, получают целевой диамин в виде масла которое при сто нии - кристаллизуетс . При биологических испытани х полученных препаратов самцов или самок морских свинок (штамма Дункан Хартли) убивают ударом по голове, удал ют часть илеума и помещают в баню дл отдельных органов объемо 50 МП. Получают судорожную реакцию при низкочастотной (0,1 Гц)

HTyr-DAIa-GI y-Ph-NH (СН2)э CONH-j,

HTyr-DAIa-Gly-HePh-NH(CH),CONMe2

HTyr-DAla-Gly-MePh-NH(CH)2NH

HTyr-DAIa-Gly-MePh-NH(CH2)COOMe

HTyr-DAIa-GIу -MePh-NH(CH)COOH

СТИГ4УЛЯЦИИ пр моугольными импульсами 0,5 мс. Исследуемое соединение раствор ют в дистиллированной воде ,цл получени исходного раствора в концентрации 1 мг/мл. Делают последовательные разбавлени , использу раствор Кребса, чтобы иметь концентрации 10 мг, 1 мг и 0,1 мг/мл. Соединение испытывают посредством добавлени от 0,1 до О,3 мл растворов к бане дл органов. Затем определ ют зависимость реакции от дозы и сравнивают с зависимостью дл метенкефалина .

При испытани х с отдергиванием хвоста крысы в качестве ноцицептив5 1-ю го раздражител используют гор чую воду (поддерживаемую при ).

Результаты представлены в табл.2, получают при испытании соединений по изобретению с помощью илеума морской свинки , активность по сравнению с метенкефалином при испытании по Гендершоту с сотр. и в испытании с надавливанием крысиного хвоста.

Фармацевтические составы могут быть, например, в форме, пригодной дл парентерального введени , такой , как стерильные водные или масл ные растворы или суспензии дл инъекций. Дозированные парентеральные формы, пригодные дл внутривенного, внутри 1ьнIIeчнoгo или подкожного введени , содержат от 0,1 до 50 мг/мл соединени по изобретению (или эквивалентное количество фармацевтически допустимой его соли). Уровни дозы будут , как правило, дл облегчени боли, в пределах от 0,1 до 100 мг в зависимости от пути введени .

Таблица 1

+52,8 ( c 1,04;0,1 H.

HC I )

Гс/.3в° -43,3

(с 1; DMF)

+26,1

(с 1,0;0,1 н.

НС I )

n

Wljo +23,0

(с 0,85;0,1 н.

НС))

, +25,5

(с 1,07;0,1 н.

НС )

Продолжение табл.1

Продолжение таблГТ

25

Примечание. А- гидролиз прим.11.

Claims

1. Шредер Э., Любке К. Пептиды, ч. I., М., Мир, 1967, с. 116.