FI82837B - Foerfarande foer framstaellning av gonadoliberinderivat, som inverkar pao de reproduktiva processerna hos djur. - Google Patents

Description

82837

Menetelmä eläinten lisääntymisprosesseihin vaikuttavien gonadoliberiini-johdannaisten valmistamiseksi

Keksintö liittyy uusiin yleiskaavan (I) 123456 789 10 1-L (I)

Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp-X *-Leu-Arg-Pro-Y, mukaisiin gonadoliberiini-johdannaisiin ja niiden terapeuttisesti käyttökelpoisten happojen kanssa muodostettuihin additiosuoloihin. Etenkin keksintö koskee menetelmää mainittujen yhdisteiden valmistamiseksi. Yleiskaavassa (I) X edustaa -OR- tai -NR^-R2-ryhmää, jossa R on Ci_4-alkyyliryhmä ja R1 ja R2 merkitsevät toisistaan riippumatta vetyä,

Ci_4-alkyyli-, fenyyli-, fenyyli(Ci_2~alkyyli)- tai C3_6-sykloalkyyliryhmää, tai ne merkitsevät yhdessä viereisen typpiatomin kanssa indoliino- tai pyrro-lidiinoryhmää, ja Y on glysiiniamidi- tai Ci_4-alkyyliamidiryhmä.

Kaavassa käytetyt lyhenteet ovat identtisiä peptidikemiasta hyväksytyn nimistön kanssa, joka on esitetty esim. julkaisussa J. Biol. Chem. [241, 527 (1966), 247, 977 (1972)].

Muut tässä esityksessä käytetyt lyhenteet ovat seuraavat: EA = etyyliamino, DEA = dietyyliamino, CBA = syklobutyylia-mino, FBA = (l,l-dimetyyli-2-fenyyli)-etyyliamino, IND = l-indolinyyli, PIR = 1-pyrrolidinyyli, ANI = fenyyliamino, BOC = tert-butyylioksi-karbonyyli-ryhmä.

Gonadoliberiinien (muut kirjallisuudesta tunnetut nimet: go-nadotrooppia vapauttava hormoni, GnRH, LH-RH, lutenisoiva ja follikkelia stimuloiva hormoni, LH/FSG-RH) ja sen tunnettujen johdannaisten yleinen ominaisuus on se, että ne pystyvät vapauttamaan lutenisoivaa hormonia (LH) ja follikkelia stimuloivaa hormonia (FSH).

2 82837

Kirjallisuudesta on tunnettua (M. Monahan et ai., Biochemistry 12, 4616-4620 (1973); J. Sandow et ai., Control of Ovulation, Butterworths, London, 1978, s. 49-70), että niillä gonadoliberiinin johdannaisilla, jotka sisältävät 6-asemassa glysiini-osan sijasta D-konfiguraation omaavia aminohappoja tai niiden johdannaisia, etenkin niillä, joissa 10-asemassa oleva glysiiniamidi-osa on substituoitu alifaat-tisen hiiliketjun sisältävillä amidiryhmillä (M. Fujino et ai., J. Med. Chem. 16, 1144 (1973)), on biologinen vaikutus, joka on suurempi ja on kestävämpi kuin gonadoliberiinin vaikutus. Vastakohtana tähän on myös tunnettua, että niillä gonadoliberiini-johdannaisilla, jotka sisältävät 6-asemas-saan L-konfiguraation omaavan aminohapon, kuten L-alaniinin, L-proliinin, L-valiinin (Monahan et ai., Biochemistry 12, 4616 (1973)), L-isoleusiinin (D: Coy et ai., J. Med. Chem.

16, 1140 (1973)) tai aminohappoja, joissa ei ole asymmetria-keskusta, kuten gamma-aminovoihapon, β-alaniinin (J. Rivier et ai., Peptides: Chemistry, Structure, Biology, Ed. R. Walter, J. Meienhofer, Ann Arbor Science Publishers Ind., Michigan, s.803 (1975)) tai sarkosiinin (W. Arnold et al., J. Med. Chem. 17, 314 (1974), on vain minimaalinen aktiivisuus .

Mitä tulee LH-vapautukseen vain eräs erityinen L-konfiguraation omaava gamma-laktaami-rengas on osoittautunut biologisesti tehokkaaksi subtituentiksi 6-asemassa (Weber et ai., Science 210, 656 (1980)).

Keksinnön tehtävänä on saada aikaan uusia gonadoliberiini-johdannaisia, joilla on edullisempi vaikutus kuin tunnetuilla analogeilla.

Keksintö perustuu siihen havaintoon, että jos L-asparagiini-happo yhdistetään β-karboksyyliryhmänsä kautta gonadoliberiinin peptiiniketjun 6-asemaan ja samalla sen alfa-karbok-syyliryhmä jätetään vapaaksi tai liitetään suhteellisen pieneen atomiryhmään, näin saaduilla gonadoliberiini-johdannaisilla on samanlainen biologinen vaikutus tai jopa parempi i 3 82837 kuin gonadoliberiini-johdannaisilla, jotka sisältävät D-aminohapon 6-asemassa.

Yleiskaavan (I) mukaiset yhdisteet valmistetaan keksinnnön mukaan seuraavasti: yleiskaavan (II)

I I

H-Asp-X «- Leu-Arg-Pro-Y (II)

mukainen tetra- tai pentapeptidi tai sen suola, jossa kaavassa X ja Y merkitsevät samaa kuin yllä, kondensoidaan kaavan III

Glp-His-Trp-Ser-Tyr-N3 (III) mukaisen pentapeptidiatsidin kanssa.

Haluttaessa saatu nona- ja vastaavasti dekapeptidi saatetaan reagoimaan farmaseuttisesti sopivan hapon kanssa happoaddi-tiosuolan muodostamiseksi tai haluttaessa vapaa emäs vapautetaan happoadditiosuolasta saattamalla se reagoimaan emäksen kanssa.

Keksinnön mukaisesti farmaseuttisia koostumuksia voidaan valmistaa sekoittamalla yleiskaavan (I) mukainen yhdiste tai sen farmaseuttisesti sopiva suola kanto- ja/tai apuaineiden kanssa tableteiksi, rakeiksi, kapseleiksi, suppositorioiksi, injektioliuoksiksi, nenäsprayksi jne.

Eräs edullinen yleiskaavan (I) mukaisten yhdisteiden edustaja on kaavan (IV)

Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp-DEA^-Leu-Arg-Pro-EA (IV) mukainen yhdiste, joka tuotti androgenoiduissa testirotissa tehokkaamman ovulaation kuin luonnossa esiintyvä LH-RH huolimatta siitä, että kaavan (IV) mukaisella yhdisteellä on suuruusluokaltaan alhaisempi LH:ta vapauttava vaikutus kuin luonnossa esiintyvällä LH-RH:11a.

4 82837

Toisessa testissä 20 yg/kg:n annoksella kaavan (IV) mukaista yhdistettä sterletti- ja merikissa-emokalat saatiin mätimään 80%:sesti kun taas kontrolliryhmässä, joille annettiin samoissa olosuhteissa D-Phe^, deGly10-LH-RH-etyyliamidia, joka tunnetaan kirjallisuudessa superaktiivisena, ei tapahtunut ovulaatiota.

100 yg/annos kaavan (IV) mukaista yhdistettä annettuna i.m. samanaikaisesti hedelmöityksen kanssa lisäsi karjan raskaus-suhdetta 25 - 30%:11a samalla kun sama annos luonnossa esiintyvää LH-RH:ta ei ollut tehokas.

Yhdellä ainoalla 10 yg:n annoksella kaavan (IV) mukaista yhdistettä voitiin saada aikaan sini- ja hopeakettujen kauden ulkopuolinen kiima, kun taas luonnossa esiityvä LH-RH osoittautui tehottomaksi tänä aikana.

Eräs toinen keksinnön mukainen yhdiste (β-Asp-alfa-anilidi)6 -RH-LH lisäsi kalkkunakukkojen sperman ja testosteronin tuotantoa paljon paremmin ja pitempään kuin esim. D-Phe6-LH-RH, jolla on vastaava rakenne. Sama yhdiste vähensi olennaisesti naaraspuolisten kalkkunoiden hautomisaikaa, kun taas luonnossa esiintyvä LH-RH oli tehoton.

Yllä olevat esimerkit osoittavat, että uusilla keksinnön mukaisilla gonadoliberiini-analogeilla on voimakas vaikutus selkärankaisten lisääntymisprosesseihin. Niiden edullinen käyttö on osoitettu useilla testeillä karjanhoidossa.

Yleiskaavan (I) mukaisten yhdisteiden olennaisena etuna on tunnettuihin tehokkaisiin gonadoliberiini-analogeihin se, että ne on muodostettu yksinomaan L-aminohapoista, samalla niiden ovulaation aikaansaava ja testosteronia vapauttava vaikutus, jota tutkittiin biologisilla testeillä, oli parempi kuin niin kutsuttujen superaktiivisten gonadoliberiini-johdannaisten, jotka sisältävät glysiinin tai D-aminohapon 6-asemassa.

Keksinnön mukaisille yhdisteille ja niiden valmistukselle annetaan seuraavat esimerkit. Esimerkeissä määritettiin s 82837 ohutkerroskromatografiset Rf-arvot Kieselgel DC:llä, Alufo-lien/Merck seuraavissa liuotinseoksissa: 1. etyyliasetaatti - pyridiini - etikkahappo - vesi 60:20:6:11 2. etyyliasetaatti - pyridiini - etikkahappo - vesi 120:20:6:11 3. etyyliasetaatti - pyridiini - etikkahappo - vesi 240:20:6:11 4. etyyliasetaatti - pyridiini - etikkahappo - vesi 480:20:6:11 5. etyyliasetaatti - pyridiini - etikkahappo - vesi 30:20:6:11 6. asetoni - kloroformi 1:15 7. asetoni - tolueeni 1:1 8. etikkahappo - bentseeni 1:7 9. n-butanoli - etikkahappo - etyyliasetaatti - vesi 1:1:1:1 10. n-butanoli - etikkahappo - vesi 4:1:l 11. n-butanoli - etikkahappo - vesi 4:1:5 (yläfaasi) 12. etyyliasetaatti - pyridiini - etikkahappo - vesi 5:5:1:3 13. butanoli - pyridiini - etikkahappo - vesi 60:20:6:11

Sulamispisteet on esitetty Celsius-asteina, arvoja ei ole korjattu.

Esimerkki 1

Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp-OMe ^-Leu-Arg-Pro-EA

I I

a) Z-Asp-OMe >-Leu-Arg(N02)-Pro-EA

537 mg (1 mmoolia) H-Leu-Arg(NO2)-PRO-EA:n hydrobromidisuo-laa liuotetaan 10 ml:aan dimetyyliformamidia, sitten 0eC:n lämpötilassa lisätään 447 mg (1 mmoolia) Z-Asp(0PFP)-0Me-johdannaista. Reaktioseoksen pH säädetään arvoon 8 trietyy-liamiinilla sekoittaen, sitten 6 tunnin kuluttua liuos haih- 6 82837 dutetaan tyhjössä. Jäännös trituroidaan ensin eetterin, sitten veden kanssa, suodatetaan, lopuksi saostetaan metanolis-ta lisäämällä eetteriä. Näin saadaan 440 mg (62%) valkoista, amorfista ainetta.

c32h49°10: 719,6 Sp.: 182 - 184 ®C

[a]22 = -58,4° (c = 1, metanoli)

Rf (2) = 0,5; Rf (9) = 0,85; Rf (12) = 0,9.

I I

b) H-Asp-OMe LLeu-Arg-ProEA.2 AcOH 400 mg (0,56 mmoolia) tetrapeptidiä

I I

Z-Asp-OMe l-Leu-Arg(N02)-Pro-EA liuotetaan 20 ml:aan 50%:sta etikkahappoa ja hydrataan palladium hiilikatalysaat-torin (10%:sta, 50 mg) läsnäollessa 4 tuntia. Katalysaattori suodatetaan pois, etikkahappo eliminoidaan tyhjössä ja jäännös trituroidaan eetterillä, suodatetaan ja kuivataan tyhjössä. Saanto: 360 mg (97%).

c28h52n8°10: 660,5

Rf (1) = 0,15; Rf (9) = 0,6; Rf (10) = 0,25; Rf (5) = 0,45

c) Glp-His-Trp-Ser-Ty r-Asp-OMe l-Leu-Arg-Pro-EA

716 mg (1 mmoolia) pentapeptidi-hydratsidia Glp-His-Trp-Ser-Tyr-N2H3 liuotetaan 20 ml:aan dimetyyliformamidia. Liuos jäähdytetään -10eC:seen, minkä jälkeen lisätään 0,7 ml 6 N kloorivetyhappoa ja sitten konsentroitua vesipitoista liuosta, jossa on 75 mg natriumnitrIittiä. Sekoitetaan 10 minuuttia -5®C:ssa, minkä jälkeen reaktioseokseen lisätään 660 mg (1 mmoolia) H-Asp-OMe LLeu-Arg-Pro-EA-diasetaattia ja jäähdytetty liuos, jossa on 0,7 ml trietyyliamiinia 5 ml:ssa dimetyyliformamidia. Tarvittaessa liuoksen pH säädetään ar- i 7 82837 voon 8 trietyyliamiinilla. Liuosta sekoitetaan tunnin ajan -5*C:ssa, sitten 12 tuntia 0*C:ssa ja dimetyyliformamidi eliminoidaan tyhjössä. Jäännös trituroidaan eetterin kanssa, suodatetaan, sitten se fraktioidaan 0,2 N etikkahapossa Sep-hadex G-25-pylväällä. Fraktiot, jotka sisältävät päätuotteen, alistetaan 30%:sessa metanolissa käänteisfaasikroma-tografiaan, jossa pylvään täyteaineena oli Ci0-sidottua silikageeliä (Whatman, LRP-1), sitten puhtaat fraktiot lyo-filisoidaan. Saanto: 712 mg (58%).

C58H80N16°14: 1225 [a]22 . -53,4° (c 1, vesi)

Rf (5) = 0,5; Rf (10) * 0,15; Rf (9) = 0,7 Aminohappoanalyysi: Glu: 1,02; His: 0,97; Ser: 0,95;

Tyr: 1,01; Asp: 1,07; Leu: 1.00;

Pro: 0,93; Arg: 1,02.

Esimerkki 2

I I

Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp-DEA LLeu-Arg-Pro-EA

a) Boc-Asp (OBzl)-DEA

3,23 g (10 mmoolia) tert-butyylioksikarbonyyli-asparagiini-happo-p-bentsyyliesteriä liuotetaan 100 ml:aan dimetyylifor-mamidia 0°C:n lämpötilassa. Liuokseen lisätään 1,35 g (10 mmoolia) N-hydroksibentstriatsolia ja 2.,26 g (11 mmoolia) disykloheksyylikarbodi-imidiä, sitten sitä sekoitetaan 15 minuuttia 0eC:ssa, minkä jälkeen sekoitettuun reaktioseok-seen lisätään tipoittain liuos, jossa on 1,0 ml (0,73 g; 10 mmoolia) dietyyliamiinia 20 ml:ssa etyyliasetaattia. Sekoittamista jatketaan 30 minuuttia oeC:ssa, sitten 4 tuntia huoneenlämpötilassa. Sakka suodatetaan, emäliuos otetaan haihduttamisen jälkeen etyyliasetaattiin ja sitten sitä ravistellaan toistaen 10%:sen kylmän sitruunahappoliuoksen kanssa, kyllästetyllä natriumvetykarbonaattiliuoksella ja kyllästetyllä natriumkloridiliuoksella. Etyyliasetaattifaasi kuivataan vedettömän natriumsulfaatin päällä ja haihdutetaan tyhjössä. Saadaan 3,6 g (95%) vaalean keltaista Öljyä.

___ -- 1 8 82837 c20h30n2°5: 378,2 [α]22 = -58,4· (c»l, metanoli)

Rf (4) = 0,95; Rf (6) = 0,95; Rf (7) * 0,75

b) Boc-Asp-DEA

3.8 g (10 mmoolia) tert-butyylloksikarbonyyliaspartyyli-be-ta-bentsyyliesteri-alfa-dietyyli-amidia liuotetaan 50 ml:aan metanolia ja hydrataan palladium-hiilikatalysaattorin (300 mg, 10%:sta) läsnäollessa 2 tuntia. Katalysaattorin suodattamisen jälkeen liuos haihdutetaan ja kuivataan eksik-kaattorissa. Siten saadaan 2,8 g (100%) vaaleankeltaista vaahtomaista ainetta.

C13H25N2O5: 289,1 [a]22 = 60,1° (c = l, metanoli)

Rf (4) = 0,7; Rf (6) = 0,9; Rf (8) = 0,8.

C) BOC-Asp (OPFP)-DEA

2.9 g (10 mmoolia) tert-butyylioksikarbonyyliasparagiinihap-po-alfa-dietyyli-amidia liuotetaan 100 ml:aan etyyliasetaattia 0e:ssa sekoittaen, sitten lisätään 1,84 g (10 mmoolia) pentafluorifenolia ja 2,26 g (11 mmoolia) disykloheksyyli-karbodi-imidiä. Reaktioseosta sekoitetaan 0°C:n lämpötilassa 30 minuuttia, sitten huoneenlämpötilassa 24 tuntia. Erottuneen sakan suodattamisen jälkeen etyyliasetaattiliuos haihdutetaan, jäännös otetaan petrolieetteriin, erottunut sakka suodatetaan taas pois ja liuos haihdutetaan. Kuivattamisen jälkeen saadaan 4,4 g (99%) väritöntä öljyä.

C19H24N2°5F5: 455,1 [a]22 = -75,0* (c = 1, metanoli

Rf (8) = 0,95; Rf (6) = 0,9; Rf (4) = 0,75; Rf (7) = 0,8.

I 1

d) BOC-Asp-DEA t-Leu-Arg (NC>2)-Pro-EA

9 82837 536 mg (1 mmoolia) H-Leu-Arg(N02)-Pro-etyyliamidin hydrobro-midisuolaa liuotetaan 5 ml:aan dimetyyliformamidia. Liuos jäähdytetään OeC:seen, lisätään 0,14 ml (1 mmoolia) trietyy-liamiinia, sitten lisätään 453 mg (1 mmoolia) tert-butyyli-oksikarbonyyliaspartyyli-alfa-dietyyliamidi-O-pentafluorife-nyyliesteriä. Reaktioseosta sekoitetaan huoneenlämpötilassa 5 tuntia säätämällä ajoittain pH-arvo neutraaliksi trietyy-liamiinilla. Reaktioseoksen haihduttamisen jälkeen jäljelle jäävä aine trituroidaan eetterin kanssa ja sitten se suodatetaan. Noin 7Θ0 mg näin saatua raakatuotetta puhdistetaan kromatografiällä silikageelipylväällä butanolin, etikkahapon ja veden 4:1:l-seoksella. Sopivat fraktiot kerätään, haihdutetaan kuiviin tyhjössä ja jäännös trituroidaan eetterillä. Näin saadaan 470 mg (64%) valkoista jauhetta.

c32h57n10°9: 725,6 [a]22 = _77,2e (c * 1, metanoli)

Sp. = 132 - 133“C

Rf (2) = 0,4; Rf (9) = 0,85; Rf (10) = 0,55.

I 1

e) BOC-Asp-DEA LLeu-Arg-Pro-EA·AcOH

1—I

730 mg (1 mmoolia) tetrapeptidiä BOC-Asp-DEA ‘-Leu-Arg(N02)-

Pro-EA liuotetaan 20 ml:aan 50%:sta etikkahappoa ja hydra-taan palladium-hiili-katalysaattorin (100 mg, 10%:sta) läsnäollessa 3 tuntia. Reaktioseoksen haihduttamisen jälkeen saadaan kromatografisesti yhdenmukainen öljyinen tuote.

c34h9°9: 741,6

Rf (2) = 0,05; Rf (9) = 0,65; Rf (1) = 0,6.

I I

f) H-Asp-DEA ^-Leu-Arg-Pro-EA* 2TFA

I I

740 mg (1 mmoolia) tetrapeptidiä BOC-Asp-DEA LLeu-Arg-

Pro-EA liuotetaan 10 ml:aan trifluorietikkahappoa ja sekoitetaan huoneenlämpötilassa 15 minuuttia. Liuos haihdutetaan 10 82837 tyhjössä. Jäännös trituroidaan eetterin kanssa, suodatetaan ja kuivataan NaOH:n päällä. Näin saadaan 780 mg (96%) hieman hygroskooppista ainetta.

c31h53°9p6: 809,2 [a]22 = -40,6° (c 1, vesi)

Rf (11) = 0,2; Rf (5) = 0,4.

g) Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp-DEA l-Leu-Arg-Pro-EA·2AcOH

286 mg (0,4 mmoolia) pentapeptidi-hydratsidia Glp-His-Trp-Ser-Tyr-N2H3 liuotetaan 25 ml:aan dimetyyliformamidia. Liuos jäähdytetään -10eC:seen ja siihen lisätään tipoittain sekoittaen 0,27 ml 6N kloorivetyhappoa, sitten konsentroitua vesiliuosta, jossa on 30,2 g natriumnitriittiä. 5 minuutin kuluttua lisätään liuos, jossa on 353 mg (0,4 mmoolia) tet- rapeptidin H-Asp-DEA »-Leu-Arg-Pro-EA trifluoriasetaatti- suolaa, joka on valmistettu 1 ml:aan dimetyyliformamidia 0,27 ml:n kanssa -10eC:sta trietyyliamiinia. Tarvittaessa re-aktioseos säädetään neutraaliin pH-arvoon trietyyliamiinil-la, sitten sitä sekoitetaan tunnin ajan -5eC:ssa, tunnin ajan 0eC:ssa ja 12 tuntia huoneenlämpötilassa.

Dimetyyliformamidi eliminoidaan tyhjössä, jäännös alistetaan kromatografiaan silikageelipylväällä etyyliasetaatin, pyridiinin, etikkahapon ja veden 30:20:6:11-seoksella. Sopivat fraktiot kerätään, haihdutetaan tyhjössä, trituroidaan eetterillä, suodatetaan ja kuivataan. Näin saadaan 290 mg (50%) valkoista jauhetta.

C65H95N17°17: 1385 Sp.: 180 -181eC

[a]22 = -64,2° (c = l, metanoii)

Rf (12) = 0,85; Rf (5) = 0,35; Rf (11) = 0,25. Aminohappoanalyysi: Asp: 1,0; Ser: 0,99; Glu: 1,01; Leu: 1,10; Tyr: 1,00; His: 0,92; Arg: 0,98.

i 11 82837

Noudattamalla esimerkkien 1 ja 2 mukaista menetelmää ja käyttämällä halutun lopputuloksen valmistamiseen tarvittavaa aminohappojohdannaista saatiin seuraavat yhdisteet:

Esimerkki 3 I-1

Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp-NH2 LLeu-Arg-Pro-Gly-NH2

Saanto: 56% C57H79N18O14 = 1239 [a]22 * -55,5“ (c = 1, vesi)

Rf (5) = 0,35; Rf (11) = 0,15; Rf (9) = 0,65; Rf (13) = 0,15.

Esimerkki 4 I-1

Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp-FBA LLeu-Arg-Pro-Gly-NH2 Saanto: 51% C67H91N18O14 = 1371 [a]22 = -56,4“ (c - 1, vesi)

Rf (13) = 0,25; Rf (9) = 0,7; Rf (11) = 0,2; Rf (5) = 0,5 Esimerkki 5 I 1

Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp-CBA *-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2

Saanto: 50% c61h85n14: 1291 [a]22 = -44,88“ (c = 1, vesi)

Rf (11) = 0,2; Rf (9) = 0,7; Rf (13) = 0,2; Rf (5) = 0,4 Esimerkki 6 I-1

Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp-PIR ,-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 Saanto: 52% C61H85N18°14: i293 i2 82837 [α]22 = -53,2 (c = 1, vesi)

Rf (13) = 0,15; Rf (9) = 0,6; Rf (11) = 0,2; Rf (5) = 0,4 Esimerkki 7 i 1

Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp-IND *-Leu-Arg-Pro-EA Saanto 49% c65H85N170l3: 1311 [a]22 = 39,6° (c = 0,25; 25% etikkahappo)

Rf (13) = 0,8; Rf (9) = 0,75; Rf (5) = 0,7; Rf (10) = 0,5 Esimerkki 8

| I

Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp-ANI LLeu-Arg-Pro-Gly-NH2

Saanto:55% C63H83N18°14: 1315 [a]22 = -58,3° (c = 1, vesi)

Rf (9) = 0,5; Rf (10) = 0,2; Rf (12) = 0,8

Claims (2)

1. Menetelmä uusien, eläinten lisääntymisprosesseihin vaikuttavien yleiskaavan (I) 123456 7 8 9 10 i L (I) Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp-X LLeu-Arg-Pro-Y, mukaisten gonadoliberilni-johdannaisten ja niiden terapeuttisesti käyttökelpoisten happojen kanssa muodostettujen ad-ditiosuolojen valmistamiseksi, jossa kaavassa X edustaa -OR- tai -nrIr2-ryhmää, jossa R on Ci_4-alkyyliryhmä ja Rl ja R2 merkitsevät toisistaan riippumatta vetyä, Ci_4-alkyyli-, fenyyli-, fenyyli(Ci_2~alkyyli)- tai C3-6-sykloalkyyliryhmää, tai ne merkitsevät yhdessä viereisen typpiatomin kanssa indoliino- tai pyrro-1idiinoryhmää, ja Y on glysiiniamidi- tai Ci_4-alkyyliamidiryhmä, tunnettu siitä, että yleiskaavan (II) I I H-Asp-X LLeu-Arg-Pro-Y (II) mukainen tetra- tai pentapeptidi tai sen suola, jossa kaavassa X ja Y merkitsevät samaa kuin yllä, kondensoidaan kaavan (III) Glp-His-Trp-Ser-Tyr-N3 (III) mukaisen pentapeptidiatsidin kanssa ja haluttaessa saatu nona- tai vastaavasti dekapeptidiamidi saatetaan reagoimaan farmaseuttisesti sopivan hapon kanssa additiosuolan muodostamiseksi tai halutaessa vapaa emäs erotetaan happo-additiosuolasta saattamalla se reagoimaan emäksen kanssa. 14 82837

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että valmistetaan Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp-OMe 1-Leu-Arg-Pro-EA, i 1 Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp-DEA LLeu-Arg-Pro-EA, i 1 Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp-NH2 LLeu-Arg-Pro-Gly-NH2, I-1 Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp-FBA LLeu-Arg-Pro-Gly-NH2, Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp-CBA l-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2, Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp-PIR l-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2, Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp-IND^-Leu-Arg-Pro-EA tai Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp-ANI Lteu-Arg-Pro-Gly-NI^ tai sen terapeuttisesti käyttökelpoiset suolat. i « 82837