SE464814B - Gonadoliberinderivat innehaallande en beta-aspartylgrupp, ett foerfarande foer framstaellning daerav och farmaceutiska preparat innehaallande desamma - Google Patents

Description

464 814 2 Genom litteraturen är det känt (M. Monahan et al., Bio- chemistry 12, 4616-4620 /1973/; J. Sandow et al., Control of Ovulation, Butterworths, London, 1978, sid. 49-70) att de derivat av gonadoliberin som innehåller i position 6 istället för en glycinrest aminosyror med D-konfigura- tion eller derivat därav och vidare att de derivat vari gly- cinamidresten i position 10 är ersatt med amidgrupper med alifatisk kolkedja ((M. Fujino et al., J.Med.Chem. 16, 1144 (1973)) utövar en biologisk verkan, som är stegrad och har längre duration än den hos gonadoliberin. I motsats till detta är det även känt att de gonadoliberinderivat som in- nehåller en aminosyra med L-konfiguration i position 6, så- som L-alanin, L-prolin, L-valin (Monahan et al., Biochemistry lg, 4616 /1973/), L-isoleucin (D. Coy et al., J.Med.Chem. 16, 1140 /1973/) eller aminosyror utan några asymmetriska centra, såsom gamma-aminosmörsyra, p-alanin (J. Rivier et al., Peptides: Chemistry, Structure, Biology, Ed. R. Walter, J. Meienhofer, Ann Arbor Science Publishers Inc., Michigan, sid. 803 /1975/) eller sarkosin (W. Arnold et al., J. Med.

Chem. ll, 314 /1974/) uppvisar endast minimal aktivitet.

Beträffande LH-frigöringen har endast en speciell gamma-lak- tamring med L-konfiguration visat sig vara en biologiskt ef- fektiv substituent i position 6 (Veber et al., Science 210, 656 /1980/).

Uppfinningen har till syfte att tillhandahålla nya gonado- liberinderivat, som utövar en fördelaktigare verkan än de kända analogerna.

Uppfinningen baserar sig på den upptäckten att om L-aspara- ginsyra inbyggs via sin p-karboxylgrupp i position 6 i pep- tidkedjan i gonadoliberin och samtidigt dess alfa-karboxyl- grupp lämnas fri eller är bunden till en relativt liten atomgrupp, de på så sätt erhållna gonadoliberinderivaten 3 464 814 utövar en biologisk verkan, som liknar den eller till och med är bättre än den hos gonadoliberinderivaten innehållan- de en D-aminosyra i position 6.

Föreningarna med den allmänna formeln (I) kan framställas på följande sätt: a1) en tetra- eller pentapeptid med den allmänna formeln (II) H-Asp-X LLeu-Arg-Pro-Y (II) vari X och Y har ovan angivna betydelser, kondenseras med pentapeptidaziden med formeln Glp-His-Trp-Ser-Tyr-N3 eller az) en hexapeptid med den allmänna formeln (III) E I Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp-X (III) vari X har ovan angivna betydelse och E är en hydroxyl-, azid- eller N-succinimidoxigrupp eller en fenoxigrupp, som eventuellt är substituerad med en nitrogrupp eller en eller flera halogenatomer, företrädesvis en p-nitro-, 2,4,6-tri- klorfenoxi-, pentaklorfenoxi- eller pentafluorfenoxigrupp, kondenseras med en tri- eller tetrapeptid med den allmänna formeln (IV) H-Leu-Arg-Pro-Y (IV) vari Y har ovan angivna betydelse eller a3) om föreningar med den allmänna formeln (I) skall fram- ställas, vari en glycinamidgrupp föreligger i molekylens C-ände, kopplas BOC-glycin till ett klormetylerat poly- styren-divinylbensen-harts innehållande 1 - 3 %, företrä- desvis 2 % tvärbindningar, från de på så sätt erhållna föreningarna med formeln (V) BOC-Gly-O-CH2-polymer (V) 464 814 4 avspjälkar BOC-gruppen, därefter kopplar man utgående från C-änden aminosyror med skyddsgrupper i lämplig ordning till peptidpolymeren genom att man periodiskt upprepar av- spjälknings- och kopplingsprocesserna och därefter av- spjälkas den färdiga peptiden från peptidpolymeren genom ammonolys och skyddsgrupperna elimineras genom behandling med vätefluorid, eller a4) när föreningar med formeln (I) skall framställas, vari en glycinamidgrupp föreligger i molekylens C-ände, kopplas BOC-glycin till ett polystyren-divinylbensen-harts innehål- lande benshydrylaminogrupper och 1-3 %, företrädesvis 2 % tvärbindningar och från den på så sätt erhållna föreningen med formeln (VI) BOC-Gly-NH-C?-polymer (VI) Cefis avspjälkar BOC-gruppen, varefter man utgående från C-änden kopplar aminosyror försedda med skyddsgrupper i lämplig ord- till peptidpolymere: genom att man periodiskt upprepar av- spjälknings- och kopplingsprocesserna och den färdiga pep- tiden avspjälkas och skyddsgrupperna elimineras från pep- tidpolymeren genom behandling med vätefluorid, eller as) när föreningar ned den allmänna formeln (I) skall fram- ställas, vari en Pro-Y-grupp föreligger i molekylens C-än- de, varvid Y har ovan angivna betydelse, BOC-prolin bindes till ett klormetylerat polystyren-divinylbensen-harts inne- hållande 1 - 3 %, företrädesvis 2 % tvärbindningar och från den på så sätt erhållna föreningen med formeln (VII) BOC-Pro-O-CH2-polymer (VII) avspjälkar BOC-gruppen, varefter utgående från C-änden ami- nosyror försedda med skyddsgrupper kopplas i lämplig ord- ning till peptidpolymeren genom att man periodiskt upprepar avspjälknings- och kopplingsprocesserna och den färdiga pep- 464 814 tiden avspjälkas från peptidpolymeren genom aminolys och skyddsgrupperna elimineras genom behandling med vätefluo- rid.

Vid förfarandet a1) kan en tetra- eller pentapeptidkompo- nent framställas genom fragmentkondensation eller stegvis kedjeförlängning på i och för sig känt sätt genom aktive- ring med en azid, blandanhydrid, karbodiimid, aktiv ester eller någon annan aktiverande grupp. Lämpligen acyleras H-Leu-Arg(N02)-Pro-Y-tri- eller tetrapeptid, där Y har ovan angivna betydelse, med asparaginsyraderivat med den allmän- na formeln (VIII) i Z-Asp-X (VIII) vari Z är en tert.-butyloxikarbonyl- eller en bensyloxikarb- onylgrupp och X och E har ovan angivna betydelser, med en tert.-butyloxikarbonyl- eller bensyloxikarbonylskyddsgrupp pâ aminogruppen, varefter skyddsgrupperna elimineras från den erhållna föreningen.

Vid förfarande az) framställes hexapeptiden med formeln (III) lämpligen genom acylering av asparaginsyraderivat med formeln ?'Rß H-Asp-X (IX) vari X har ovan angivna betydelse och R3 är väte, en metyl-, bensyl- eller tert.-butylgrupp, med en Glp-His-Trp-Ser-Tyr- -N -pentapeptidazid. 3 De peptidsyntesmetoder som utnyttjar fastfasreaktioner och som användes vid förfarandet a3) är kända genom litteratu- ren (J.M. Stewart: "Solid Phase Peptide Synthesis", Free- 464 814 6 man and Co., San Francisco, 1969).

Talrika gonadoliberinanaloger har framställts genom auto- matiskt kontrollerad fastfassyntes (D. Coy et al., Bio- chemistry lå, 323 /1974/; D. Coy et al., J. Med. Chem. 12, 423 /1976/); förfarandet a4) skiljer sig från de kända genom att man använder ett aminosyraderivat med den all- männa formeln (X) BOC-äsp-X (X) O-R3 vari X har ovan angivna betydelse och R3 är väte, en p- -nitrofenylgrupp eller en pentafluorfenylgrupp, som ami- nosyra i position 6. För temporärt skydd av de övriga ami- nosyrasidokedjorna i molekylen användes grupper, som där- efter kan elimineras genom inverkan av vätefluorid; exem- pelvis p-toluensulfonylgruppen när det gäller arginin och histidin och bensylgruppen när det gäller serin och tyro- sin.

Om sâ önskas omsättes den erhållna nona- respektive deka- peptidamiden med en farmaceutiskt godtagbar syra för bild- ning av ett syraadditionssalt eller om så önskas frigöres den fria basen från syraadditionssaltet genom omsättning därav med en bas och om så önskas omvandlas den erhållna nona- respektive dekapeptidamiden till ett metallkomplex.

Enligt uppfinningen kan farmaceutiska kompositioner framstäl- las genom att man blandar en förening med den allmänna for- meln (I) eller ett farmaceutiskt godtagbart salt eller kom- plex därav med bärare och/eller adjuvantia i form av tab- letter, dragëer, kapslar, suppositorier, injicerbara lös- ningar, nässprayer etc.

En fördelaktig representant för föreningarna med den allmän- 7 464 814) na formeln (I) är föreningen med formeln (XI) _ 1 I Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp-DEA Leu-Arg-Pro-EA (XI) som på androgeniserade försöksrâttor framkallar en ovulation i högre verkningsgrad än det nativa LH-RH, trots det faktum att föreningen med formeln (XI) utövar en LH-frigörande ver- kan som till storleksordningen är mindre än verkan av det nativa LH-RH.

Vid ett annat försök lade under inverkan av 20 mg/kg av för- eningen med formeln (XI) sterletthonfiskar och havskatthon- fiskar rom till 80 % medan i den kontrollgrupp till vilken under samma betingelser D-Phe6, desGly10-LH-RH-etylamid, som i litteraturen är känd att vara superaktiv, administre- rades någon ovulation icke inträdde. En dos av 100 pg av föreningen med formeln (XI) administrerad intramuskulärt samtidigt med inseminationen ökade dräktighetsgraden hos boskap med 25 - 30 % medan samma dos av det nativa LH-RH icke var verkningsfull.

Med en enda dos om 10 pg av föreningen med formeln (XI) kun- de brunst hos blå- och silverrävar framkallas utanför den normala brunsttiden, medan det nativa LH-RH visade sig vara ineffektivt vid denna tidpunkt.

En annan förening enligt uppfinningen, (2-Asp-alfa-anilid)6- -LH-RH, ökade spermie- och testosteronproduktionen hos kal- kontuppar mycket bättre och långvarigare än exempelvis D-Phe6-LH-RH med analog struktur. Samma förening reducera- de väsentligt ruvningstiden för kalkonhönor medan det nati- va LH-RH var ineffektivt.

Exemplen ovan visar att de nya gonadoliberianalogerna enligt uppfinningen utövar en kraftig verkan på de reproduktiva pro- cesserna hos vertebrater. Deras fördelaktiga användning har bekräftats genom talrika försök vid djuruppfödning. 464 814 En väsentlig fördel med föreningarna med den allmänna formeln (I) jämfört med de kända gonadoliberinanalogerna med hög effekt är att de uteslutande är uppbyggda av L- -aminosyror, varvid samtidigt deras ovulationsinduceran- = de och testeronfrigörande verkningar, som har undersökts vid biologiska provningar, är bättre än motsvarande verk- < ningar hos så kallade superaktiva gonadoliberinderivat in- nehâllande glycin eller D-aminosyra i position 6.

För föreningarna enligt uppfinningen och framställningen därav ges följande utföringsexempel. I exemplen bestämdes de tunnskiktskromatografiska Rf-värdena på Kieselgel DC- -plattor, Alufolien/Merck i följande lösningsmedelsbland- ningar: 1. etylacetat - pyridin - ättiksyra - vatten 60:20:6:11 2. etylacetat - pyridin - ättiksyra - vatten 120:20:6:11 3. etylacetat - pyridin - ättiksyra - vatten 240:20:6:11 4. etylacetat - pyridin - ättiksyra - vatten 480:20:6:11 . etylacetat - pyridin - ättiksyra - vatten 30:20:6:11 6. aceton - kloroform 1:15 7. aceton - toluen 1:1 8. ättiksyra - bensen 1:7 9. n-butanol - ättiksyra - etylacetat - vatten 1:1:1:1 . n-butanol - ättiksyra - vatten 4:1:1 11. n-butanol - ättiksyra - vatten 4:1:5 (övre fas) 12. etylacetat - pyridin - ättiksyra - vatten 5:5:1:3 13. butanol - pyridin - ättiksyra - vatten 60:20:6:11 Smältpunkten anges i OC och dessa värden är icke korrige- rade. ä Exempel 1 _ - 'i-L Glp-H1s-Trp-Ser-Tyr-Asp-OMe Leu-Arg-Pro-EA a) Z-Asp-OMe LLeu-Arg(NO2)-Pro-EA 9 4654 8'l4 Hydrobromidsaltet av 537 mg (1 mmol) H-Leu-Arg(NO2)-Pro-EA upplöses i 10 ml dimetylformamid och därefter tillsättes vid en temperatur av 0° 447 mg (1 mmol) av ett Z-Asp(0PFP)- OMe-derivat. Reaktionsblandningens pH-värde inställes på 8 med trietylamin under omröring och därefter indunstasg lösningen i vakuum efter 6 timmar. Återstoden tritureras först med eter och därefter med vatten, filtreras och ut- fälles slutligen ur metanol genom tillsats av eter. Pâ så sätt erhåller man 440 mg (62%) av en vit amorf substans. c32H49N9o10= 319,6 Smp.: 182-184 C fik]š2 = -58,40 (c=1, metanol) Rf (2) = 0,5; Rf (9) = 0,85; Rf (12) = 0,9. b) H-Asp-OMe LLeu-Arg-ProEA.2 AcOH . 11% 400 mg (0,56 mmol) av tetrapeptiden Z-Asp-OMe Leu- Arg(NO2)-Pro-EA upplöses i 20 ml 50-procentig ättiksyra och hydreras i närvaro av 50 mg av en 10-procentig palla- dium/träkol-katalysator under 4 timmar. Katalysatorn av- filtreras, ättiksyran elimineras i vakuum och återstoden tritureras med eter, filtreras och torkas i vakuum. Utbyte: 360 mg (97%). c28H52N8o10= 660,5 Rf (1) = 0,15; Rf (9) = 0,6; Rf (10) = 0,25; Rf (5) = 0,45. c) Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp-OMe LLeu-Arg-Pro-EA 716 mg (1 mmol) av pentapeptidhydraziden Glp-His-Trp-Ser- Tyr-N2H3 upplöses i 20 ml dimetylformamid. Lösningen kyles till -10°C, varefter 0,7 ml av en 6 N klorvätesyralösning och därefter en koncentrerad vattenlösning av 75 mg natrium- nitrit tillsättes. Efter omröring 10 minuter vid -50 sättes 660 mg (1 mmol) H-Asp-One LLeu-Arg-Pro-EA-diacetat och en kyld lösning av 0,7 ml trietylamin i 5 ml dimetylformamid till reaktionsblandningen. Om så erfordras inställes lös- 4654 8'14 10 ningens pH-värde på 8 med trietylamin. Lösningen omröres 1 timme vid -50 och därefter 12 timmar vid 00 och dimetyl- formamiden avlägsnas i vakuum. Återstoden tritureras med eter, filtreras och fraktioneras därefter i 0,2 N ättik- syra på en Sephadex G-25-kolonn. De fraktioner som inne- håller huvudprodukten underkastas kromatografi på en revers- faskolonn innehållande C18-bunden silikagel (Whatman, LRP-1) i en 30-procentig vattenlösning av metanol och därefter lyofiliseras de rena fraktionerna. Utbyte 712 mg (58%).

C O 1225 H N se so 16 14* [ojšz = -s3,4° (c=1, vatten) Rf (5) = 0,5; Rf (10) = 0,15; Rf (9) = 0,7 Aminosyraanalys: Glu: 1,02; His. 0,97; Ser: 0,95; Tyr: 1,01; Asp: 1,07; Leu: 1,00; Pro: 0,93; Arg: 1,02.

Exempel 2 . P--r--L Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp-DBA Leu-Arg-Pro-EA a) Boc-Asp (OBzl)-DEA 3,23 g (10 mmol) tert.-butyloxikarbonylasparaginsyra-fi>- bensylester upplöses i 100 ml dimetylformamid vid en tempe- ratur av 0O.1,35 g (10 mmol) N-hydroxibenstriazol och 2,26 g (11 mmol) dicyklohexylkarbodiimid sättes till lösningen och därefter omröres den 15 minuter vid 00, varefter en lösning av 1,0 ml (0,73 g; 10 mmol) dietylamin i 20 ml etylacetat sättes droppvis till den omrörda reaktionsbland- ningen. Omröringen fortsättes 30 minuter vid 00 och däref- ter 4 timmar vid rumstemperatur. Fällningen filtreras, moderluten upptas efter indunstning i etylacetat och skakas upprepade gånger med en 10-procentig kall citronsyralös- ning, en mättad natriumvätekarbonatlösning och en mättad natriumkloridlösning. Etylacetatfasen torkas över vatten- fritt natriumsulfat och indunstas i vakuum. Man erhåller 3,6 g (95%) av en blekgul olja. u- " 464 814 C2OH3ON205: 378,2 [öqšz = -58,40 (c=1, metanol) Rf (4) = 0,95; Rf (5) = 0,95; Rf (7) = 0,75 b) EOC-Asp-DEA 3,8 g (10 mmol) tert.-butyloxikarbonylasparagyl-(ö-bensyl- ester-06-dietylamid upplöses i 50 ml metanol och hydreras i närvaro av 300 mg av en 10-procentig palladium/träkol- katalysator 2 timmar. Efter avfiltrering av katalysatorn indunstas lösningen och torkas i en exikator. Man erhål- ler på så sätt 2,8 g (100%) av en blekgul skummig substans. c13H25N2o5= 289,1 22 o ߥ7D = -60,1 (c=1, metanol) Rf (4) = 0,7; Rf (6) = 0,9; Rf (8) = 0,8. c) soc-Asp (OPFP)-DBA 2,9 g (10 mmol) tert.-butyloxikarbonylasparaginsyra-<1- dietylamid upplöses i 100 ml dietylacetat vid 00 under om- röring och därefter tillsättes 1,84 g (10 mmol) pentafluor- fenol och 2,26 g (11 mmol) dicyklohexylkarbodiimid. Reak- tionsblandningen omröres 30 minuter vid en temperatur av OOC och därefter 24 timmar vid rumstemperatur. Efter av- filtrering av den avskilda fällningen indunstas etylacetat- lösningen, återstoden upptages i petroleumeter, den avskil- da fällningen avfiltreras ånyo och lösningen indunstas.

Efter torkning erhålles 4,4 g (99%) av en färglös olja. c19H24N2o5F5= 455,1 fi%7š2 = -75,00 (c=1, metanol) Rf (8) = 0,95; Rf (6) = 0,9; Rf (4) = 0,75; Rf (7) = 0,8. d) BOC-Asp-DEA LLeu-Arg (N02)-Pro-EA Hydrobromidsaltet av 536 mg (1 mmol) H-Leu-Arg(NO2)-Pro- etylamid upplöses i 5 ml dimetylformamid. Lösningen kyles 464 814 12 till o°, 0,14 mi (1 mmol) trietylamin tillsättes och däref- ter tillsättes 453 mg (1 mmol) tert.-butyloxikarbonylaspar- tyl-c¥-dietylamid-(5-pentafluorfenylester. Reaktionsbland- ningen omröres 5 timar vid rumstemperatur under det att pH-värdet justeras då och då till neutralt värde med trietyl- amin. Efter indunstning av reaktionsblandningen tritureras den kvarvarande substansen med eter och filtreras därefter.

Den på så sätt erhållna râprodukten om ca 780 mg renas genom kromatografi på en silikagelkolonn i en 4:1:1-blandning av n-butanol, ättiksyra och vatten. De lämpliga fraktionerna ifråga tillvaratas och indunstas till torrhet i vakuum och återstoden tritureras med eter. På så sätt erhåller man 470 mg (64%) av ett vitt pulver.

C H N O 725,6 32 57 10 9* 22 o _ [Qin = -77,2 (c-1, metanol) smp.= = 132-133°c Rf (2) = 0,4; Rf (9) = 0,85; Rf (10) = 0.55. f I _ e) BOC-Asp-DBA Leu-Arg-Pro-EA.AcOh 730 mg (1 mmol) av tetrapeptiden BOC-Asp-DEA LLeu-Arg- (N02)-Pro-EA upplöses i 20 ml 50-procentig ättiksyra och hydreras i närvaro av 100 mg av en 10-procentig palladium/- träkol-katalysator under 3 timmar. Efter indunstning av reaktionsblandningen erhålles en kromatografiskt enhetlig oljig produkt. c34H63N9o9= 741,6 Rf (2) = 0,05; Rf (9) = 0,65: Rf (1) = 0.6- f) H-Asp-DEA LLeu-Arg-Pro-EA.2TFA 740 mg (1 mmol) av tetrapeptiden BOC-Asp-DEA LLeu-Arg- Pro-EA upplöses i 10 ml trifluorättiksyra och omröres 15 minuter vid rumstemperatur. Lösningen indunstas i vakuum. Återstoden tritureras med eter, filtreras och torkas över NaOH. På så sätt erhåller man 780 mg (96%) av en något 1); “3 464 814 hygroskopisk substans.

H53O9N9F6: 809,2 C31 gayåz = -4o,e° (c=1, vatten) Rf (11) = 0,2; Rf (5) = 0,4.

. I ““1 g) Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp-DEA Leu-Arg-Pro-EA.2AcOH 286 mg (0,4 mmol) av pentapeptidhydraziden Glp-His-Trp-Ser- Tyr-NZH3 upplöses i 25 ml dimetylformamid. Lösningen kyles till -10OC och under omröring tillsättes droppvis 0,27 ml 6 N klorvätesyra och därefter en koncentrerad vattenlösning av 30,2 mg natriumnitrit. Efter 5 minuter tillsättes en lös- ning av trifluoracetatsaltet av 353 mg (0,4 mmol) av tetra- peptiden H-Asp-DEA LLeu-Arg-Pro-EA, framställd i 1 ml di- metylformamid med 0,27 ml trietylamin av -100. Om så er- fordras inställes reaktionsblandningen på neutralt pH-värde nédtrietylamin och omröres därefter 1 timme vid en tempera- tur av -50, 1 timme vid Oo och 12 timmar vid rumstemperatur.

Dimetylformamiden avlägsnas i vakuum, återstoden underkas- tas kromatografi på en silikagelkolonn med en 30:20:6:11- blandning av etylacetat, pyridin, ättiksyra och vatten. De lämpliga fraktionerna ifråga tillvaratas, indunstas i vakuum, tritureras med eter, filtreras och torkas. På så sätt er- håller man 290 mg (50%) av ett vitt pulver.

C65H95N17O17: 1385 smp.= 180-1s1°c fiäjšz = -64,20 (c=1, metanol) Rf (12) = 0,85; Rf (5) = 0,35; Rf (11) = 0,25.

Aminosyraanalys: Asp: 1,0; Ser: 0,99; Glu: 1,01; Leu: 1,10; Tyr: 1,00; His: 0,92; Arg: 0,98.

Exempel 3 . 1 I Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp-NH2 Leu-Arg-Pro-Gly-NH a) BOC-Asp(0Bzl)-OPFP 2 4654 8'14 14 3,23 g (10 mmol) tert.-butyloxikarbonylasparaginsyra-©- bensylester upplöses i 50 ml etylacetat. Lösningen kyles till 0° och under omröring tillsättes 1,84 g (10 mmol) pentafluorfenol och 2,26 g (11 mmol) dicyklohexylkarbodi- imid. Reaktionsblandningen omröres 30 minuter vid 00 och vid rumstemperatur under 12 timmar. Efter filtrering in- dunstas lösningen i vakuum, återstoden upplöses i 15 ml eter och kristalliseras genom tillsats av 15 ml petroleum- eter vid en temperatur av -200.

Utbyte: 3,75 9 (70%).

H N O F 489,3 C22 20 1 6 5* Ääjšz = -18,10 (c=1, etylacetat) Rf (7) = 0,9; Rf (4) = 0,95. b) BOC-Asp(OBzl)-NH2 Till en lösning av 970 mg (2 mmol) tert.-butyloxikarbonyl- asparaginsyra- (å -bensylester- Ol -pentafluorfenylester i ml metanol sättes 10 ml metanol mättad med ammoniak vid 00 och omröres 30 minuter vid 0°. Lösningsmedlet avdrives i vakuum och återstoden kristalliseras ur en blandning av metanol och eter.

Analys för formeln C16H22N2O5 (322,1): Beräknat: C 59,62; H 6,83; N 8,69; Funnet: C 59,2; H 6,98; N 8,8. smp.= 159-161°c [äišz = +1,1° (c=1, metanol) Rf (7) = 0,5; Rf (8) = 0,75; Rf (4) = 0,9; Rf (6) = 0,95. c) BOC-Asp-NH2 480 mg (1,5 mmol) tert.-butyloxikarbonylasparaginsyra-(5- bensylester-11-amid upplöses i 10 ml metanol och hydreras i närvaro av 50 mg av en 10-procentig palladium/träkol- katalysator under 1 timme. Efter avfiltrering av katalysa- *S 464 814 torn avdrives lösningsmedlet i vakuum och återstoden kris- talliseras ur en vattenlösning av etanol.

Utbyte: 246 mg (93%).

C9H16N2O5: 23â,2 Smp.: 145-146 C fix7š2 = -2,20 (c=1, metanol) Rf (7) = 0,05; Rf (8) = 0,2; Rf (4) = 0,3; Rf (6) = 0,1.

. I I d) Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp-NH2 Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 Syntesen av peptiden i fast fas, spjälkning av polymeren med vätefluorid liksom den kromatografiska reningen av rå- peptiden utföres såsom beskrivits i exempel 4/c med den skillnaden att man som 6-aminosyra använder den enligt exempel 3/c framställda föreningen. Man erhåller 72 mg (12%) av en ren substans.

C57H79N1s°14 = 1239 fik7š2 = -55,50 (c=1, vatten) Rf (5) = 0,35; Rf (11) = 0,15; Rf (9) = 0,65; Rf (13) = 0,15.

Aminosyraanalys: Glu: 0,96; His: 1,04; Ser: 0,93; Tyr: 1,02; Leu: 1,02; Pro: 0,94; Gly: 1,00; Asp: 1,1.

Exempel 4 Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp-FBA LLeu-Arg-Pro-Gly-NH2 a) BOC-Asp(OBzl)-tX-[2-(4-klorfenyl)-isobutylamid] g (15 mmol) tert.-butyloxikarbonylasparaginsyra-(5- bensylester upplöses i 100 ml etylacetat, som kyles till OOC, och 2,1 g N-hydroxibenstriazol, 3,75 g dicyklohexyl- karbodiimid och en lösning av 3,5 g 2-(4-klorfenyl)-isobu- tylamin i 20 ml dimetylformamid sättes till den omrörda reaktionsblandningen. Blandningen omröres 12 timmar vid rumstemperatur och därefter filtreras lösningen. Etylace- 16 464 814 tatlösningen utskakas med en 10-procentig citronsyralösning, en mättad natriumvätekarbonatlösning och en mättad natrium- kloridlösning, torkas över vattenfritt natriumsulfat, filtre- ras och indunstas i vakuum. Den kvarvarande färglösa oljan ll kristalliserar långsamt. Kristallerna tvättas med en bland- ning av eter och petroleumeter och torkas därefter.

Utbyte: 5,5 g (75%).

C26H33N2O5Cš: 488,2 Smp.: 60-61 C ÅQYÉZ = -12,20 (c=1, metanol) Rf (7) = 0,75; Rf (8) = 0,6. b) BOC-Asp-FBA En lösning av 2,3 g (4,7 mmol) tert.-butyloxikarbonylaspa- raginsyra- ß -bensylester- GX-[Z- (p-klorfenyl) -isobutylamidj i 30 ml metanol hydreras i närvaro av 200 mg av en 10-pro- centig palladium/träkol-katalysator under 2 timmar och där- efter avfiltreras katalysatorn och lösningsmedlet avdrives i vakuum. Återstoden tritureras i eter och kristalliseras ur metanol med eter.

Utbyte: 1,5 g (87%).

Analys för formeln C19H28N2O5 (364,2): Beräknat: C 62,63; H 7,69; Funnet: C 62,3 ; H 7,58. smp. = 94-96°c fiäfâz = -19° (c=1, metanol) Rf (3) = 0,2; Rf (2) = 0,3; Rf (7) = 0,15; Rf (8) = 0,8; Rf (10) = 0,15.

. I I c) Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp-FBA Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 , 1 g (0,5 mmol) benshydrylaminpolymer införes i reaktionskär- let i en automatisk peptidsyntetisator (Beckman 990B) och omröres i 30 ml diklormetan 4 timmar. De skyddade amino- 17 464 8143 syraderivaten kopplas med polymeren i lämplig ordning medelst en cyklisk upprepning av följande steg 1-10: 1. tvättning med 30 ml diklormetan - 3x3 minuter 2. tvättning med 30 ml av en 1:2-blandning av trifluor- ättiksyra och diklormetan - 5 och 25 minuter 3. tvättning med 30 ml diklormetan - 3x3 minuter 4. tvättning med 30 ml etanol - 3x3 minuter . tvättning med 30 ml kloroform - 3x3 minuter 6. tvättning med 30 ml av en 1:9-blandning av trietyl- amin och kloroform - 2x10 minuter 7. tvättning med 30 ml kloroform - 3x3 minuter 8. tvättning med 30 ml diklormetan - 3x3 minuter 9. inkubering av 1,5 mmol BOC-aminosyraderivat och 1,5 mmol diisopropylkarbodiimid i 30 ml diklormetan - 120 minuter . tvättning med 30 ml diklormetan - 3x3 minuter.

De skyddade aminosyraderivaten är följande: BOC-Gly-OH, BOC-Pro-OH, SOC-Arg(ToS)-OH, BOC-Leu-OH, BOC-Asp-FBA, BOC-Tyr(Bzl)-OH, BOC-Ser(B2l)-OH, BOC-Trp-OH, BOC-His(Tos)-OH och Glp.

Efter koppling av samtliga aminosyror torkas det färdiga peptidpolymerhartset i vakuum och omröres med 50 ml konden- serad vätefluorid vid 00 i närvaro av 6 ml anisol under 45 minuter. Vätefluoriden avlägsnas i en vattenfri kvävgas- ström, återstoden utfälles med eter och filtreras. Den filtrerade substansen suspenderas i 50-procentig ättiksyra och filtreras och filtratet indunstas i vakuum. Återstoden ledes genom en Sephadex G-25-kolonn i 50-procentig ättik- syralösning. Den rena huvudfraktionen underkastas kromato- grafi på en silikagelkolonn med lösningsmedelsblandning 10.

De fraktioner som innehåller den rena substansen indunstas och lyofiliseras.

Utbyte: 70 mg (10%). 11614 8'14- 18 C67H91N18O14 = 1371 fiäfšz = -56,40 (c=1, vatten) Rf (13) = 0,25; Rf (9) = 0,7; Rf (11) = 0,2; Rf (5) = 0,5.

Aminosyraanalys: Glu: 0,97; His: 1,05; Ser: 0,94; Pro: 0,95; Tyr: 1,02; Asp: 1,02; Leu: 1,01; Gly: 1,00.

Exempel 5 . 7 I Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp-CBA Leu-Arg-Pro-Gly-NH a) BOC-Asp(OBzl)-CBA 2 2,4 g (5 mmol) tert.-butyloxikarbonylasparaginsyra-(5- bensylester-CX-pentafluorfenylester, framställd enligt exempel 3/a, upplöses i 20 ml etylacetat och kyles till 00 och en kyld lösning av 0,42 ml (5 mmol) cyklobutylamin i 2 ml etylacetat sättes droppvis därtill. Reaktionsbland- ningen omröres 2 timmar vid rumstemperatur, tvättas däref- ter med en 10-procentig citronsyralösning, en mättad nat- riumvätekarbonatlösning och mättad natriumkloridlösning, torkas över vattenfritt natriumsulfat, filtreras och in- dunstas i vakuum. Aterstoden kristalliseras ur eter med petroleumeter.

Utbyte: 1,16 g (89%).

C20H28N2O5:0376,2 Smp.: 84-86 C [xjšz = 5,70 (c=1, metanol) Rf (8) = 0,9; Rf (10) = 0,9; Rf (7) = 0,75; Rf (11) = 0,95. b) BOC-Asp-CBA 1 g (2,65 mmol) tert.-butyloxikarbonylasparaginsyra-F>- bensylester-cx-cyklobutylamid upplöses i 20 ml metanol och hydreras i närvaro av 100 mg av en 10-procentig palladiuml- träkol-katalysator under 2 timmar. Efter avfiltrering av katalysatorn indunstas lösningen i vakuum och återstoden kristalliseras ur vattenhaltig etanol.

Utbyte: 600 mg (79%). 19 464 8142 Analys förformeln C13H22N2O5 (286,1): Beräknat: C 54,54; H 7,69; Funnet: C 53,9; H 7,68. smp.= 149-1so°c fiäišz = -9,50 (c=1, metanol) Rf (8) = 0,2; Rf (10) = 0,75; Rf (7) = 0,05 c) Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp-CBA LLeu-Arg-Pro-Gly-NH2 Fastfassyntesen av peptiden, avspjälkningen från polymeren med vätefluorid liksom den kromatografiska reningen av rå- peptiden utföres såsom beskrivits i exempel 4/c med den skillnaden att man som 6-aminosyra använder den enligt exempel 5/b använda föreningen. På så sätt erhåller man 68 mg (10,5%) av den rena peptiden.

C61H85N18O14: 1291 ßxfšz = -44,880 (c=1, vatten) Rf (11) = 0,2; Rf (9) = 0,7; Rf (13) = 0,2; Rf (5) = 0,4.

Aminosyraanalys: Glu: 1,05; His: 0,96; Ser: 0,94; Tyr: 0,98; Asp: 1,07; Leu: 1,02; Pro: 0,96; Gly: 1,00.

Exempel 6 . | I Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp-PIR Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 a) BOC-ASP(OBZl)-PIR 3,2 g (10 mmol) tert.-butyloxikarbonylasparaginsyra-(5- bensylester upplöses i 5 ml etylacetat och vid en tempera- tur av 00 tillsättes 1,35 g N-hydroxibenstriazol, 2,26 g dicyklohexylkarbodiimid och en lösning av 0,8 ml pyrroli- din i 2 ml etylacetat. Reaktionsblandningen omröres 2 tim- mar vid rumstemperatur och utskakas därefter med en 10- procentig citronsyralösning, en mättad natriumvätekarbonat- lösning och en mättad natriumkloridlösning. Den organiska fasen torkas över vattenfritt natriumsulfat, filtreras och 464 814 indunstas i vakuum. Aterstoden upplöses i eter, filtreras och indunstas ånyo. På så sätt erhåller man 3,4 g (90%) av en olja. c20H28N205= 376,2 fiqyšz = -s4,4° (c=1, metanol) Rf (7) = 0,75; Rf (4) = 0,95; Rf (8) = 0,85; Rf (6) = 0,0 b) BOC-Asp-PIR En lösning av 3 g (8 mmol) tert.-butyloxikarbonylaspara- ginsyra-lë-bensylester-ct-pyrrolidin i 30 ml metanol hydre- ras i närvaro av 250 mg av en 10-procentig palladium/trä- kol-katalysator under 2 timmar, därefter avfiltreras kata- lysatorn och lösningen indunstas. Den kvarvarande oljan torkas över svavelsyra.

Utbyte: 21,1 g (92%). c13H22N205= 286,2 smp.= 124-12s°c ßxiåz = -39,9° (c=1, metanol) Rf (8) = 0,3; Rf (7) = 0,2. c) Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp-PIR LLeu-Arg-Pro-Gly-NH2 Fastfassyntesen av peptiden, avspjälkningen från polymeren med väteklorid liksom den kromatografiska reningen av rå- peptiden utföres i enlighet med exempel 4/c med den skill- naden att man som 6-aminosyra använder den enligt exempel 6/b använda föreningen. På så sätt erhåller man 78 mg (12%) av den rena peptiden.

C61H85N18O14: 1293 Åfijâz = -53,2 (C=1, vatten) Rf (13) = 0,15; Rf (9) = 0,6; Rf (11) = 0,2; Rf (5) = 0,4.

Aminosyraanalys: Gly: 0,97; His: 1,01; Ser: 0,94; Tyr: 1,03; Asp: 1,05; Leu: 1,00; Pos: 0,94. 2' 464 814 Exempel 7 Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp-IND LLeu-Arg-Pro-EA a) BOC-Asp(OBzl)-IND 3,23 g G0 mmol) tert.-butyloxikarbonylasparaginsyra- - bensylester upplöses i 50 ml etylacetat. Lösningen kyles till 00 och under omröring tillsättes 2,3 g dicyklohexyl- karbodiimid och 1,19 g indolin. Reaktionsblandningen omrö- res över natten vid rumstemperatur, därefter filtreras den påföljande dag och, filtratet tvättas 3 gånger vardera med -procentig citronsyra, en mättad natriumvätekarbonatlös- ning och en mättad natriumkloridlösning, torkas över vatten- fritt natriumsulfat och indunstas. Den kvarvarande oljan kristalliseras ur etanol med vatten. utbyte: 3,7 g (89%).

C24H28N2O5:°424,1 Smp.: 75-76 C fiajšz = -7o,9° (c=1, etanol) Rf (7) = 0,9. b) H-Asp(OBzl)-IND.TFA 800 mg (1,9 mmol) tert.-butyloxikarbonylasparaginsyra-[5- bensylester-CX-indolin upplöses i 5 ml trifluorättiksyra och omröres 15 minuter vid rumstemperatur. Trifluorättik- syran avlägsnas i vakuum och återstoden tritureras med eter, filtreras och torkas och kristalliseras därefter ur etanol med eter.

Utbyte: 780 mg (94%). c21H21N2o5F3=043s,1 smp.= 114-115 c ÅQÜÉZ = -5,80 (c=1, metanol) Rf (7) = Û|27 Rf (4) = 0,65. c) Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp(OBzl)-IND 464 814 22 716 mg (1 mmol) av pentapeptidhydraziden Glp-His-Trp-Ser- Tyr-N2H3 upplöses i 10 ml dimetylformamid. Lösningen kyles till -100 och därefter tillsättes en koncentrerad vatten- lösning av 0,7 ml 6 N klorvätesyra och 75 mg natriumnitrit.

Reaktionsblandningen omröres 10 minuter vid -50 och däref- ter tillsättes en lösning av trifluoracetatsaltet av 438 mg (1 mmol) H-Asp(OBzl)-indolin framställd med 0,7 ml trietyl- aminoch 2 ml dimetylformamid. Om så erfordras inställes pH-värdet på 8 med trietylamin. Blandningen omröres 1 tim- me vid -50 och vid 00 under 12 timmar. Dimetylformamiden avdestilleras i vakuum, återstoden tritureras med vatten, filtreras, tvättas med etanol och etylacetat, upplöses där- efter i dimetylformamid, behandlas med träkol i varmt till- stånd och kristalliseras genom tillsats av eter.

Utbyte: 600 mg (60%) C53H56N10O11: 1008,9 smp.= 172-174°c Rf (9) = 0,7; Rf (10) = 0,4; Rf (1) = 0,35. d) Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp-IND En lösning av 500 mg (0,5flUDl)aV hexapeptiåen Glp-His- Trp-Ser-Tyr-Asp(0Bzl)-IND i 0,5 ml dimetylformamid och ml av en 50-procentig ättiksyralösning hydreras i när- varo av 50 mg av en 10-procentig palladium/träkol-kataly- sator under 2 timmar. Efter avfiltrering av katalysatorn avdrives lösningsmedlet i vakuum och återstoden kristalli- seras ur dimetylformamid med eter.

Utbyte: 380 mg (83%). smp.= 219-221°c fiqyšz -37,7° (c=1, aimetylformamid) Rf (9) = 0,6; Rf (10) = 0,4; Rf (1) = 0,1. e) Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp-IND LLeu-Arg-Pro-EA En lösning av 42 g (0,044 mmol) av hexapeptiden Glp-His- 23 464 814 Trp-Ser-Tyr-Asp-IND i 1 ml dimetylformamid kyldes till OO och 7,8 pl diisopropylkarbodiimid tillsättes. Efter omrö- ring 10 minuter tillsättes en lösning i dimetylformamid av mg (0,044 mmol) H-Leu-Arg-Pro-EA-hydroklorid, neutrali- serad med trietylamin. Reaktionsblandningen omröres 12 tim- mar vid rumstemperatur och därefter avdrives lösningsmed- let i vakuum. Återstoden underkastas kromatografi på en Sephadex G-25-kolonn i 0,2 N ättiksyra. De fraktioner som innehåller huvudprodukten tillvaratas och lyofiliseras.

Utbyte: 28 mg (48%).

C65H85N17O13: 1311 ßgïâz = 39,e° (c=o,z5; 25% ättiksyra) Rf (13) = 0,8; Rf (9) = 0,75; Rf (5) = 0,7; Rf (10) = 0,5.

Exemgel 8 _ I '__““" Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp-ANI Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 a) BOC-Asp(OBzl)-ANI 3,23 g (10 mmol) tert.-butyloxikarbonylasparaginsyra-15- bensylester upplöses i 50 ml etylacetat och kyles till 00 och 0,96 g anilin och 2,26 g dicyklohexylkarbodiimid till- sättes. Reaktionsblandningen omröres 6 timmar vid rumstem- peratur, lösningen avfiltreras och tvättas därefter med en -procentig citronsyralösning, en mättad natriumvätekarbo- natlösning och en mättad natriumkloridlösning, torkas över vattenfritt natriumsulfat och indunstas i vakuum. De kris- taller som erhålles efter avdrivning tritureras med petro- leumeter, filtreras och torkas.

Utbyte: 4 9 (96%). ç22H26N2o5= 338,3 smp.= 105-106 c [䶚2 = -60 (c=1, dimetylformamid) Rf (11) = 0,8; Rf (12) = 0,95; Rf (8) = 0,4. 464 814 24 b) BOC-Asp-ANI 3 g tert.-butyloxikarbonylasparaginsyra- ß-bensylester-=h- anilid upplöses i 20 ml metanol och hydreras i närvaro av 300 mg av en 10-procentig palladium/träkol-katalysator.

Katalysatorn avfiltreras, lösningsmedlet avdrives i vakuum ; och återstoden kristalliseras ur etanol med vatten.

Utbyte: 2,05 g (88%).

Analys för formeln C H N O (308,2): 20 2 5 Beräknat: C 58,44; H 6,49; Funnet: C 58,6; H 6,56. smp.= 157-15s°c [Q7š2 = -120 (c=1, dimetylformamid) Rf (11) = 0,7; Rf (12) = 0,85; Rf (8) = 0,05.

,. F“““““““1 c) Glp-his-Trp-Ser-Tyr-Asp-ANI Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 Fastfassyntesen av peptiden, avspjälkningen av polymeren med vätefluorid liksom den kromatografiska reningen av rå- peptiden utföres i enlighet med exempel 4/c med den skill- naden att man som 6-aminosyra använder den enligt exempel 8/b framställda föreningen. Pâ så sätt erhåller man 82 mg (12,5%) av den rena produkten.

C H N O 1315 ' es 831814* [ÄÛÉ2 = -58,30 (c=1, vatten) Rf (9) = 0,5; Rf (10) = 0,2; Rf (12) = 0,8, Aminosyraanalys: NH3: 1,23; Arg: 0,95; Asp: 1,1; Glu: 1,08; Pro: 1,01; Gly: 1,00; Leu: 1,1; Tvr: 0,85; Ser: 0,99.

LH

Claims (4)

*5 464 814 RAIEEIEEEY

1. Gonadoliberinderivat, k ä n n e t e c k n a d e därav, att de har den allmänna formeln (I) 1 2 3 4 5 6 7 3 9 19 Glp-Bis-Trp-Ser-Tyr-As' p-X LLeu-Arg-Pro-L ( I) vari X är en -0-R-grupp, där R är en C1_4-alkylgrupp, eller en R1 -N// -grupp, där Rl och R2 oberoende av varandra är w väte eller en C1_5-alkyl-, fenyl- eller klorfenylisobutyl- grupp eller en av R1 och R2 är väte och den andra är en cyklobutylgrupp eller de tillsammans med den närliggande kväveatomen är en 1-indolinyl- eller 1-pyrrolidinylgrupp och Y är en glycinamid- eller en C1_4-alkylaminogrupp, additionssalter bildade med terapeutiskt användbara syrcr och komplex därav.

2. Gonadoliberinderivat enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a d e därav, att de är Glp-lla-frp-Sar-'Iyr-Anp-Olu LInu-Azç-Pto-M, Glp-Bia-'Irp-Sar-'Syr-Alp-DBA LLau-Arq-Pro-IA, Glp-Bla-frp-Saz-Iyr-Aap-Nlz Luu-Arç-Pro-Gly-.llr Glp-Bl1-frp-Sa:-fyr-Asp-rßh Lau-Arg-Pro-Gly-Ilz, Glp-81:-frp-Ser-Ty:-Asp-CEA Ltau-Arg-Pro-Gly-Ilz, Glp-Bia-trp-Scr-ryr-As' p-PII LIau-Azg-Pro-Gly-Iä , Glp-81:-Trp-Sa:-Ty:-Asp-IND Lian-Arg-?ro-IA, Glp-Bla-Trp-Sa:-Ty:-Asp-ANI Lbeu-Arg-Pro-Gly-Niz, 464 814 ze och terapeutiskt användbara salter och komplex därav, varvid använda förkortningar är följande: DEA = dietylamino; FBA = 2-(4-klorfenylisobutyl)-isobutylamino; CBA = cyklo- butylamino; PIR = pyrrolidinyl; IND = indolinyl; ANI = anilino och EA = etylamino.

3. Förfarande för framställning av gonadoliberinderivat enligt krav 1 med den allmänna formeln (I) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Glp-Hís-Trp-Ser-Tyr-Asp-X LLeu-Arg-Pro-Y (I) vari X är en -0-R-grupp, där R är en C1_4-alkylgrupp, eller en 1 -N//R -grupp, där Rl och R2 oberoende av varandra är \R2 väte, en C1_5-alkyl-, fenyl- eller klorfenylisobutylgrupp eller en av R1 och R2 är väte och den andra är en cyklo- butylgrupp eller de tillsammans med den närliggande kväve- atomen är en l-indolinyl- eller 1-pyrrolidinylgrupp och Y är en glycinamid- eller en C1_4-alkylaminogrupp, och komplex därav, k ä n n e t e c k n a t därav, att al) en tetra- eller pentapeptid med den allmänna formeln (II) H-Ašp-X LLeu-Arg-Pro-Y (II) vari X och Y har ovan angivna betydelser, kondenseras med pentapeptidaziden Glp-His-Trp-Ser-Tyr-N3 eller az) en hexapeptid med den allmänna formeln (III) E Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Agp-X (III) vari X har ovan angivna betydelse och E är en hydroxyl-, å* 464 814m azid- eller N-succinimidoxigrupp eller en fenoxigrupp eventuellt substituerad med en nitrogrupp eller en eller flera halogenatomer, företrädesvis med en p-nitro-, 2,4,6- triklorfenoxi-, pentaklorfenoxi- eller pentafluorfenoxigrupp, kondenseras med en tri- eller tetrapeptid med den allmänna formeln (IV) H-Leu-Arg-Pr0-Y (IV) vari Y har ovan angivna betydelse eller a3) när föreningar med den allmänna formeln (I) skall framställas, vari en glycinamidgrupp föreligger i molekylens C-ände, BOC-glycin kopplas till ett klormetylerat polystyren- divinylbensenharts innehållande 1-3%, företrädesvis 2% tvärbindningar, BOC-gruppen avspjälkas från de på så sätt erhållna föreningarna med formeln (V) BOC-Gly-O-CH2-polymer (V) därefter utgående från C-änden aminosyror med skyddsgrupper kopplas i lämplig ordning till peptidpolymeren genom periodisk upprepning av avspjälknings- och kopplingsproces- serna och att den färdiga peptiden avspjälkas från peptid- polymeren genom ammonolys och att skyddsgrupperna elimineras genom behandling med vätefluorid eller a4) när föreningar med den allmänna formeln (I) skall framställas, vari en glycinamidgrupp föreligger i molekylens C-ände, BOC-glycin kopplas till ett polystyren-divinylbensen- harts innehållande bensydrylaminogrupper och 1-3%, företrä- desvis 2% tvärbindningar och från den på så sätt erhållna föreningen med formeln (VI) BOC-Gly-NH-?H-polymer C6H5 (VI) BOC-gruppen avspjälkas därefter utgående från C-änden 464 814 ß aminosyror försedda med skyddsgrupper kopplas i lämplig ordning genom periodisk upprepning av avspjälknings- och kopplingsreaktionerna och den färdiga peptiden avspjälkas och skyddsgrupperna elimineras från peptidpolymeren genom behandling med vätefluorid eller a5) när föreningar med den allmänna formeln (I) skall fram- ställas, vari det föreligger en -Pro-Y-grupp i molekylens C-ände, varvid Y har ovan angivna betydelse, BOC-prolin bindes till ett klormetylerat polystyren-divinyl-bensenharts innehållande 1-3%, företrädesvis 2% tvärbindningar och från den på så sätt erhållna föreningen med formeln (VII) BOC-Pro-O-CH2-polymer (VII) BOC-gruppen avspjälkas, därefter utgående från C-änden aminosyror försedda med skyddsgrupper kopplas i lämplig ordning till peptidpolymeren genom periodisk upprepning av avspjälknings- och kopplingsreaktionerna och den färdiga peptiden avspjälkas från peptidpolymeren genom aminolys och skyddsgrupperna elimineras genom behandling med vätefluorid och om så önskas den erhållna nona- respektive dekapeptid- amiden omsättes med en farmaceutiskt godtagbar syra för bildning av ett syraadditionssalt eller om så önskas den fria basen separeras från syraadditionssaltet genom omsätt- ning därav med en bas och om så önskas den erhållna nona- respektive dekapeptidamiden omvandlas till ett metallkomplex.

4. Farmaceutiska beredningar utövande en kraftig verkan på den reproduktiva processen hos vertebrater, k ä n n e t e c k n a d e därav, att de som aktiv komponent innehåller en aktiv mängd av en förening med den allmänna formeln (I) enligt krav 1 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp-X Lien-Arg-Pro-Y, (I) 1.9 464 814 vari X är en -0-R-grupp, där R är en C1_4-alkylgrupp, eller en R1 _N/ \\\ -grupp, där Rl och R2 oberoende av varandra är R2 väte eller en C1_5-alkyl-, fenyl- eller klorfenylisobutyl- grupp eller en av Rl och R2 är väte och den andra är en cyklobutylgrupp eller de tillsammans med den närliggande kväveatomen är en l-indolinyl- eller 1-pyrrolidinylgrupp och Y är en glycinamid- eller en C1_4-alkylaminogrupp eller ett farmaceutiskt godtagbart salt eller komplex därav, i blandning med farmaceutiska bärare, fyllmedel, utspädnings- medel och adjuvantia.