SU633501A3 - Реагент дл обнаружени белка в моче - Google Patents

Description

1

Изобретение относитс  к диагностическим средствам и может быть использовано в диагностике почечных заболеваний.

Известен реагент дл  обнаружени  белка в моче, состо щий из носител , индикатора и буфера 1.

Однако известный реагент вступает в реакцию как с белком, так и с побочными продуктами.

Целью изобретени   вл етс  повышение специфичности реакции путем устранени  взаимодействи  реагента с побочными продуктами .

Эта цель достигаетс  тем, что реагент в качестве индикатора содержит октагалогенсульфофталеин дополнительно содержит полипропиленгликоль, а также смачиватель при следующем соотношении ингредиентов в г на 100 мл раствора:

Октагалогенсульфофталеин0 ,02-0,2

Г1олипропиленгликоль0 ,5-5

Буфер10 30

Смачиватель0,1 -1,0

Claims (2)

1. В качестве, способного всасывать носител  примен ют фильтровальную бумагу, но также может быть применен волокнистый прочес, асбест и подобные материалы. Полипропиленгликоли , которые используют дл  реагента, должны иметь молекул рный вес примерно от 500 до 10000, могут быть использованы линейные по ипропнленгликоли , блокполимерные продукты, полученные из окиси пропилена и окиси этилена, а также разветвленные соединени , в которых окись пропилена заполимеризована с такими многоато.мнымн спирталш, как, например, триметилолпропан, глицерин и.1и пентаэритрит , и которые в некоторых случа х модифицированы дополнительно окисью этилена. В качестве индикатора используют октагалогенсульфофталеины , например октабромфенолсульфофталеин (тетрабромфеноловый синий), октахлорфенолсульфофталеин (тетрахлорфеноловый синий), а также смешанные галогенированные соединени , например 3,,5 -тетрабромфенол-3,4,5,6-тетрахлорсульфофталеин , 3,,5 -тетрахлорфенол-3 ,4,5,6-тетрабромсульфофталеин и 3,3 -дихлор-5,5 -дибромфенол-3,4,5,6-тетра .хлорсульфофта.чсин. Особенно предпочтительными  ш  ютс  индикаторы, которые содержат в положени х ,3Д.5.5%етыре атома хлора. Реагент дл  обнаружени  белка требует применени  сильного буфера, который даже при погружении в содержащуюс  в теле жидкость, имеющую другое значение рН, сохран ет посто нное значение рН. При применении сульфофталеиновых индикаторов буфер устанавливают на значение рН, которое лежит несколько ниже области рН перехода индикатора и тогда индикатор мало окрашиваетс . По отношению к очень малым концентраци м белка лучша  чувствительность достигаетс  тогда, когда значение рН буфера лежнт в области перехода индикатора, рН должно быть от 2,5 до 4,5. При более низких значени х рН в большинстве случаев происходит ослабление белковой реакции при большем усилении реакции с азотистыми основани ми и обычной мочей. Предпочтительное значение рН .зависит от индикатора, а также от типа пропиленгликол  и прочих реагентов, при которых значение рН и количество буфера измен ют таким образом, чтобы индикатор после погружени  в свободную от присутстви  белка мочу имел еще чистую окраску. В качестве буфера могут быть использованы смеси, состо щие нз лимонной,  блочПропиленглнколь0 ,5- 5, Буфер10-30 Индикатор0,02-0,2 Поверхностно-активное вспомогательное средство0,0-1,0 В качестве растворител  дл  ингредиентов примен ют смеси, состо щие из воды и низшего спирта, в которых они растворимы . Но можно также сначала осуществл ть предварительную пропитку буфером из воды и после этого производить последующую пропитку остальными составными част ми нз органического раствора. Готовый реагент может примен тьс  известным способом, может быть приклеен к ручке или запечатан мемсду синтетическим полимером и сеткой с мелкими отверсти ми . Пример I. Фильтровальную бумагу (Шл йхер и Шюль 2316) последовательно пропитывают следующими двум  растворам и и в каждом случае производ т сушку при 60°С. Раствор 1. Д}имонна  кислота, моногидрат, г20 Аммиак, 25%-ный водный раствор, млОколо 10 Вода дистиллированна , м-лДо 100 Раствор имеет значение рН 4,1 ной, винной кислот и других, а также нз их щелочных или аммонийных солей. Дл  лучшего диспергировани  добавл ют поверхностно-активные вещества. Дл  этого могут быть применены неноногенные агенты смачивани , а именно этоксилнрованные спирты жирного р да и фенолы с 1-4 оксизтнленовыми группами. Агенты смачивани  анионного типа уснливают реакцию с азотистыми основани ми, в то врем  как поверхностно-активные вещества катионного типа вызывают сильно искаженную положительную реакцию индикатора в том случае, когда примен ют не очень кислый буфер, который тормозит белковую реакцию. По этой причине эти поверхностно-активные вещества не пригодны . Дополнительно можно также вводить агенты набухани  или загустители, которые могут затрудн ть сход реагентов с носител , такими агентами может быть гндрооксиэтилцеллюлоза и гидроксипропилцеллюлоза. Могут быть также добавлены в реагент комплексосбразователи, например сульфат магни . Пропиленгликоли, а также остальные составные части примен ют в следующих количествах , в расчете на 100 мл пронитывающего раствора, г: предпочтительно1- 2 -м-15-20 0.05-0,1 0,2 -0,5 Раствор 2. 3 ,3,5 ,5 -тетрахлорфенол-3 ,4,5,6-тетрабромсульфофталеин (рН 3,9), мг50 Полнпропиленгликоль со средним молекул рным весом 1200 (Полигликоль П 1200 (R), г2 Метиловый спирт, мл до 100 Реагент реагирует с нормальной мочой, принима  желтый цвет, а с содержащей альбумин мочой рринимает окраску от зеленой до сине-зеленой с сильной интенсивностью . Моча с содержанием хинина примерно 100 мг°/о дает такую же зеленую окраску, что и моча с содержанием 5 мг%. альбумина . Реактивна  бумага такого же состава, но без пропиленгликол  реагирует с нормальной мочой, принима  зеленую окраску. Зелена  окраска от 5 мг% альбумина с надежностью не может быть отличена от этой отрицательной окраски. Поэтому сравнивают с реакцией 25 мг альбумина: уже примерно 25 мг% хинина имитируют это количес о белка. В случае обычного быстрого теста 25 хинина уже имитируют присутствие 5 мг% альбумина. Пример 2. Фильтровальную бумагу (Шл йхер и Шюль 2316) последовательно пропитывают следующими двум  растворами и производ т сушку при 60°С. Раствор 1. Лимонна  кислота, моногидрат, г20 Аммиак, 25/о-ный водный раствор, млОколо 6 Вода дистиллированна , млДо 100 рН раствора устанавливают на значение 3,1. Раствор 2 З,3,5,5,3,4,5,6-Октабромфенолсульфофталеин {тетрабромфеноловыйсиний , рН 3,6), мг50 Полипропиленгликоль, средний молелул рныи вес 2000, г 1 Нонилфенол, этерифицированный 1-2оксиэтиленовыми остатками, г0.4 Метиловый спирт, млДо 100 Оба указанных раствора примен ют также с половинным количеством растворител  и перед пропиткой производ т их объединение . Реагент реагирует с нормальной мочой, принима  желтую окраску, и с содержащей альбумин мочой реагирует, принима  зеленую окраску высокой интенсивности. Моча с содержанием хинина примерно 50 дает такую же зеленую окраску, как и моча с 5 мг% альбумина. Реагент такого же состава, но без пропиленгликол  реагирует с нормальной мочой , принима  слабую зеленую окраску. Примерно 10 мг °/о хинина в случае этой реактивной бумаги имитирует 5 мг% альбумина . Если вместо нонилфенола, этерифицированного 1-2 оксиэтиленовыми остатками, примен ют 0,4 г кокосового спирта, этерифицн| )ованного 2 оксиэтиленовыми остатками , или 0,2 г трибутилфенола, этерифицированного 4 оксиэтнленовыми остатками, то получают практически идентичный реагент. Пример 3. Фильтровальную бумагу (Шл йхер и Шюль 2316) сначала пропитывают 15°/о-ным водным раствором натрийдигидроцитрата (рИ 3,5) и сушат при 60°С. Последующую пропитку производ т раствором следующего состава, после чего каждый раз производ т сушку при 60°С: А.3,3,5,5,3,4,5,6-Окта X лорфенолсульфофта леин , мг50 Полипропиленгликоль , г1 Метиловый спирт,, мл До 100 Свойства полученного реагента соответвуют свойствам реагента, полученного в имере 1. Б.З,3 -Дибром-5, 5-дихлорфенил-3,4,5,6-тетрахлорсульфофталеин , мг50 Десмофен 7200 ( R).r1 Метиловый спирт, млДо 100 Свойства полученного реагента соответвуют свойствам бумаги, полученной в прире 2. С.3,3,5,5 -Тетрабромфенол -3,4,5,6-тетраулорсульфофталеин , мг 50 Десмофен 7200 (R).r1 Метиловый спирт, млДо 100 Свойства пат ученного реагента соответвуют свойствам бумаги, полученной в прире 2. Пример 4. Фильтровальную бумагу л йхер и Шюль 2316) пропитывают приденными ниже двум  растворами и провод т сушку при 60°С. Раствор 1. Яблочна  кислота , г15 6 н.раствор гидроокиси натри , мл Около 16 Гидроксиэтилцеллюлоза (Натрозоль 250G(R),r 2 Вода дистиллирована , мл До 100 рН раствора устанавливают на значении 3,5. Раствор 2. Тетрабромфеноловый синий, г0,6 Полигликоль Р 1200 (R),r3 ХлороформДо 100 Свойства полученного реагента соответвуют свойствам бумаги, полученной в прире
2. 2. Предлагаемый реагент обладает высой чувствительностью по отноп1ению к бел , не вступа  во взаимодействие с побоч-. ми продуктами. . Формула изобретени  Реагент дл  обнаружени  белка в мо , состо щий из носител , индикатора и фера, отличающийс  тем, что, с целью пошени  специфичности реакции путем устнени  взаимодействи  реагента с побочми продуктами, в качестве индикатора

   7 . , 633501 - .8

   содержит октагалогенсульфофталеин, до-Буфер 10 - 30

   полнительно содержит полипропиленгликольСмачиватель 0,1 - 1,0

   а также смачиватель, при следующем со-Источники информации, прин тые во вниотношении ингредиентов в г на 100 мл раст-мание при экспертизе;

   вора:-5 - 1. Руководство по клиническим лабораОктагалогенсульфо-торным исследовани м. Составлено

   фталсин 0,02-0,2 В. Е. Предтеченским. «Медицина, 1964,

   Полипропиленгликоль 0,5-5с. 351.