ES2226697T3 - Metodo para detectar proteina y kit que emplea el mismo. - Google Patents
Metodo para detectar proteina y kit que emplea el mismo.Info
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Abstract
Un procedimiento para controlar la limpieza de una superficie tratada con compuestos de amonio cuaternario detectando la proteína presente sobre dicha superficie, comprendiendo dicho procedimiento las etapas de: - tratar dicha superficie con un compuesto de amonio cuaternario tipo desinfectante (o antimicrobiano); - transferir las sustancias presentes en una porción sujeto de la superficie así tratada a un medio de obtención de muestras que comprende una porción con capacidad de absorber agua que comprende un polímero insoluble en agua; - poner en contacto las sustancias transferidas a dicho medio de obtención de muestras con un reactivo capaz de formar o cambiar de color al reaccionar con proteína, en el que dicho reactivo es un compuesto no octahalogenado que se selecciona del grupo que consiste en fenolsulfonaftaleínas y cresolsulfonaftaleínas; - determinar visualmente el cambio o la formación de color por la reacción de dicho reactivo con proteína; en el que las sustancias que se transfieren al medio de obtención de muestras se ponen también en contacto con un tensioactivo no iónico.
Description
Método para detectar proteína y kit que emplea el
mismo.
La presente invención se refiere a un
procedimiento para controlar la limpieza de una superficie tratada
con compuestos de amonio cuaternario detectando la proteína
presente sobre la superficie de una muestra en la que la superficie
se trata con un compuesto de amonio cuaternario tipo desinfectante
(o antimicrobiano), las sustancias presentes en una porción de la
superficie tratada de ese modo se transfieren a un medio de
obtención de muestras y subsiguientemente, estas sustancias se
ponen en contacto con un reactivo capaz de formar o cambiar de
color al reaccionar con proteína. La invención se refiere también a
un kit para detectar proteína usando este procedimiento.
La suciedad (es decir polución o contaminación)
de origen principalmente orgánico y que típicamente comprende
proteína, carbohidrato y/o grasa, puede estar presentes en la
superficie de objetos que entran en contacto con alimentos. Este
tipo de suciedad se asocia generalmente a la contaminación
bacteriana o microbiana que puede representar un riesgo para la
salud. Para visualizar dicha suciedad es conveniente usar un
reactivo, tales como ciertos tintes, que se une a la proteína. Al
revelar la suciedad que contiene proteínas, puede visualizarse
indirectamente la localización de la contaminación y puede ser
objetivo de una limpieza efectiva. En consecuencia, en el pasado se
han desarrollado procedimientos para detectar fácilmente la
proteína.
En la mayoría de los procedimientos conocidos
para la detección de proteína, la superficie de una muestra se pone
directamente en contacto con un reactivo capaz de formar un color
al reaccionar con proteína. Estos procedimientos conocidos son
menos deseables porque el material de color formado permanece en la
superficie de la muestra y a menudo difícilmente puede eliminarse
con agua. Como resultado, la porción en cuestión de la muestra
puede contaminarse fácilmente. Otro problema asociado a estos
procedimientos conocidos es que generalmente requieren un tiempo de
detección largo.
El documento
WO-A-93/19152 describe una
composición acuosa de limpieza que comprende un tinte que revela la
proteína; un disolvente miscible en agua y un tensioactivo,
preferiblemente un tensioactivo alcoxilado. El tinte se une a la
proteína para formar un complejo de color visible y así revelar la
suciedad, mientras el tensioactivo (y también algo el disolvente)
realiza la función de limpieza para eliminar la suciedad. Al
visualizar la proteína, la suciedad puede ser objetivo de
limpieza.
Para solventar los inconvenientes mencionados
anteriormente, el documento
EP-A-738.891 (Konica) describe un
procedimiento para detectar la presencia de proteína transfiriendo
una sustancia a detectar de la superficie de una muestra a una
porción con capacidad de absorber agua de un medio de obtención de
muestras (comprendiendo dicha porción un polímero sintético
insoluble en agua). Este procedimiento resuelve el problema de la
contaminación de la muestra. Además, el tiempo de detección para
realizar un buen análisis podría expeditarse usando este
procedimiento. En este documento de la técnica anterior, se menciona
explícitamente que la porción con capacidad de absorber agua del
medio de obtención de muestras usado en el procedimiento que se
describe en esa memoria contiene un polímero sintético.
El procedimiento que se describe en el documento
EP-A-738.891 incluye además las
etapas de poner en contacto las sustancias transferidas con un
reactivo capaz de formar color al reaccionar con proteína y de
medir el color formado por esta reacción para determinar la
presencia de proteína en la sustancia en cuestión.
Cuando se aplica este procedimiento para el
control de la higiene, se ha encontrado que generalmente
proporciona buenos resultados usando cualquiera de los diversos
procedimientos de detección de proteínas que se describen en el
documento EP-A-738.891. Sin embargo,
cuando se aplicó este procedimiento de control de la higiene usando
el procedimiento de tinte Coomassie para la detección de proteínas
para controlar la limpieza de superficies tratadas con compuestos
de amonio cuaternario, se encontró que los residuos de estos
compuestos pueden influir negativamente en el procedimiento de
detección. La razón es que estos compuestos pueden reaccionar con
el reactivo que forma el color, provocando la formación de un color
intenso incluso en ausencia de proteína. Este efecto se denomina
lectura de falso positivo provocado por los compuestos de amonio
cuaternario.
Además, la técnica anterior contiene diversos
documentos que se refieren a composiciones que contienen colorante,
dispositivos de análisis y procedimientos para determinar la
presencia o concentración de proteínas, tales como albúmina, en
fluidos corporales, tales como orina.
Por ejemplo, el documento
EP-A-545.128 describe un
procedimiento, en el que se aplica una composición que contiene un
colorante, un tampón y un compuesto polimérico hidrófobo para medir
la presencia de proteína en la orina. En este documento se menciona
que, al usar esta composición, se reduce el número de lecturas de
falso positivo debido a la presencia de compuestos de amonio
cuaternario, tales como péptidos, aminoácidos y creatinina.
Además, el documento
DE-A-25 10 633 describe un
procedimiento para detectar proteínas en orina, en el que se aplica
una composición que incluye una sulfoftaleína octahalogenada, como
colorante. Esta composición además contiene un polipropilenglicol
inmiscible en agua para superar la interferencia con compuestos que
contienen N presentes en la muestra de orina analizada y para
reducir las reacciones de falso positivo.
El documento
US-A-4 239 495 describe un sistema
de reactivos acuosos para la determinación cuantitativa de proteína
en un fluido biológico tal como suero, fluido cerebroespinal y
muestras de orina. El sistema contiene tinte Azul Brillante de
Coomassie G-250, un ácido fuerte monobásico que
tiene una pK_{a} inferior a 3, un ácido fosfónico polibásico y un
tensioactivo no iónico, soluble en agua que se caracteriza porque
es un copolímero de bloque que contiene segmentos de óxido de
polietileno en los extremos separados por un segmento de óxido de
polipropileno.
Se hace notar que los documentos de la técnica
anterior que se refieren a procedimientos para determinar la
presencia de proteína en muestras de orina, no describen nada sobre
la influencia negativa provocada por compuestos de amonio
cuaternario tipo desinfectante en el procedimiento de detección para
determinar la presencia de proteína en una superficie limpiada
previamente.
A la vista de lo anterior, es un objeto de la
presente invención eliminar, o al menos reducir, este efecto
negativo que provoca lecturas de falso positivo y que está
provocado por residuos de los compuestos de amonio cuaternario tipo
desinfectante en los resultados de este procedimiento de detección,
como se describe en el documento
EP-A-738.891 (Konica).
A este respecto, estos compuestos de amonio
cuaternario tipo desinfectante (o antimicrobiano) efectivo pueden
definirse generalmente como que son compuestos de amonio
cuaternario que tienen la fórmula (R_{1}) (R_{2}) (R_{3})
(R_{4}) N^{+}X^{-} en los que R_{1}, R_{2}, R_{3} y
R_{4} son independientemente un grupo alifático
C_{1}-C_{24}, un grupo hidroxialifático
C_{1}-C_{4}, bencilo, (alquil
C_{1}-C_{24})bencilo o halobencilo y
X^{-} representa un anión capaz de conferir solubilidad o
dispersibilidad en agua al compuesto, tal como cloruro, bromuro,
yoduro, sulfato, metilsulfato y otros.
Los autores sorprendentemente han encontrado que
este objeto puede lograrse cuando se ponen en contacto las
sustancias que se transfieren al medio de obtención de muestras con
un tensioactivo no iónico o bipolar como se especifica en la
reivindicación 1.
Los autores han encontrado también, que este
procedimiento de detección puede llevarse a cabo de forma ventajosa
cuando se aplica un medio de obtención de muestras que tiene una
porción con capacidad de absorber agua que comprende un polímero
insoluble en agua. Este polímero puede ser un polímero sintético o
un polímero no sintético. Preferiblemente se usa celulosa como
polímero no sintético.
En consecuencia, en un aspecto, la presente
invención proporciona un procedimiento para controlar la limpieza
de una superficie tratada con compuestos de amonio cuaternario
detectando la proteína presente sobre dicha superficie,
comprendiendo dicho procedimiento las etapas de:
- tratar dicha superficie con un compuesto de
amonio cuaternario tipo desinfectante (o antimicrobiano);
- transferir las sustancias presentes en una
porción objeto de la superficie así tratada a un medio de obtención
de muestras que comprende una porción con capacidad de absorber
agua que comprende un polímero insoluble en agua;
- poner en contacto las sustancias transferidas a
dicho medio de obtención de muestras con un reactivo capaz de
formar o cambiar de color al reaccionar con proteína, en el que
dicho reactivo es un compuesto no octahalogenado que se selecciona
del grupo que consiste en fenolsulfonaftaleínas y
cresolsulfonaftaleínas;
- determinar visualmente el cambio o la formación
de color por la reacción de dicho reactivo con proteína;
en el que las sustancias que se transfieren al
medio de obtención de muestras se ponen también en contacto con un
tensioactivo bipolar o un tensioactivo no iónico que se selecciona
del grupo que consiste en
(i) condensados de ácidos carboxílicos alifáticos
que tienen de 8 a 18 átomos de carbono en una cadena alifática y
que incorporan de 2 a 50 unidades de óxido de etileno y/o óxido de
propileno y/o óxido de butileno,
(ii) condensados de alcoholes alifáticos que
tienen de 6 a 24 átomos de carbono y que incorporan de 2 a 50
unidades de óxido de etileno y/o óxido de propileno y/o óxido de
butileno,
(iii) condensados de alquilfenoles que tienen de
6 a 12 átomos de carbono y que incorporan de 2 a 25 moles de óxido
de etileno y/o óxido de propileno y/o óxido de butileno,
(iv) derivados de polioxietileno de ésteres de
ácidos monograsos, digrasos y trigrasos en los que el componente de
ácido graso tiene entre 12 y 24 átomos de carbono y las cadenas de
polietileno contienen entre 4 y 30 unidades de óxido de
etileno,
(v) copolímeros de bloque de
polioxietileno-polioxipropileno que tienen la
fórmula:
HO(CH_{2}CH_{2}O)_{a}(CH(CH_{3})CH_{2}O)_{b}(CH_{2}CH_{2}O)_{c}H
\
o
HO(CH(CH_{3})CH_{2}O)_{d}(CH_{2}CH_{2}O)_{e}(CH(CH_{3})CH_{2}O)_{f}H
en las que a, b, c, d, e y f son
números enteros de 1 a 350 que reflejan los bloques respectivos de
óxido de polietileno y óxido de polipropileno de dicho polímero, en
el que el componente de polioxietileno del polímero de bloque es al
menos aproximadamente 10% del polímero de
bloque,
(vi) alquilglicósidos que tienen la fórmula:
R^{4}O(R^{5}O) _{n}
(Z^{1})_{p}
en la que R^{4} es un radical
orgánico monovalente que se selecciona de un radical alifático
saturado monovalente, alifático insaturado o aromático tal como
alquilo, hidroxialquilo, alquenilo, hidroxialquenilo, arilo,
alquilarilo, hidroxialquilarilo, arilalquilo, alquenilarilo,
arilalquenilo que tiene de 6 a 30 átomos de carbono, en la que
R^{5} es un radical hidrocarbonado divalente que contiene de 2 a
4 átomos de carbono tal como etileno, propileno o butileno (más
preferiblemente la unidad (R^{5}O)_{n} representa
unidades que se repiten de óxido de etileno, óxido de propileno y/o
sus combinaciones aleatorias o de bloques); n es un número entero
de 0 a 12; Z^{1} representa un resto que se deriva de un sacárido
reductor que contiene 5 ó 6 átomos de carbono (más preferiblemente
una unidad de glucosa); y p es un número de 0,5 a aproximadamente
10. Un tensioactivo bipolar adecuado para usarse en el
procedimiento de la presente invención es un compuesto con una
porción hidrófila que consiste en restos cargados positivamente así
como restos cargados negativamente y un componente alifático y/o
aromático sin carga hidrófoba que tiene de aproximadamente 6
aproximadamente 30 átomos de carbono. Este compuesto contiene un
número igual de restos cargados positiva y negativamente que
proporcionan un compuesto global sin carga o neutro que tiene un
valor de pH en el intervalo de aproximadamente 1-9,
más preferiblemente de
2-5.
Ejemplos de restos cargados negativamente son
grupos aniónicos tales como sulfato, sulfonato, fosfato o
fosfonato. Ejemplos de grupos bipolares principales son
sulfonabetaínas, taurina, ésteres de ácido fosfórico con colina o
aminoetanol.
Tipos adecuados de tensioactivo bipolar son
sulfonato de
3-(3-colamidopropil)dimetilamoniopropano
(CHAPS) y sulfonato de
3-(3-colamidapropil)dimetilamonio-2-hidroxi-1-propano
(CHAPSO).
En otro aspecto, la invención proporciona un kit
para controlar la limpieza de una superficie tratada con compuestos
de amonio cuaternario detectando proteína sobre dicha superficie,
incluyendo dicho kit una combinación de un compuesto de amonio
cuaternario tipo desinfectante (o antimicrobiano); un medio de
obtención de muestras que comprende una porción con capacidad de
absorber agua que comprende un polímero insoluble en agua, para
transferir sustancias presentes en la porción objeto de la
superficie de una muestra; un reactivo capaz de formar o cambiar de
color al reaccionar con proteína, en el que dicho reactivo es un
compuesto no octahalogenado que se selecciona del grupo que consiste
en fenolsulfonaftaleínas y cresolsulfonaftaleínas; y un
tensioactivo no iónico o bipolar como se define en la
reivindicación 1. El polímero usado en la presente invención puede
ser un polímero sintético o un polímero no sintético, tal como
celulosa.
El procedimiento de acuerdo con la presente
invención es un procedimiento para controlar la limpieza de una
superficie tratada con compuestos de amonio cuaternario tratando la
superficie con compuestos de amonio cuaternario tipo desinfectante
y detectando la presencia de proteínas en la superficie.
Cuando se aplica este procedimiento, se encontró
que era posible ocultar (es decir, eliminar) el efecto de hasta 300
microgramos de cualquiera de los compuestos de amonio cuaternario
de ese tipo por muestra.
Por otra parte, se encontró que este tipo de
compuestos de amonio cuaternario provoca una fuerte formación de
color en 1 minuto cuando no había presente ningún tensioactivo no
iónico tal como se define anteriormente.
Para evitar los efectos de desecado, los mejores
resultados se obtienen cuando la formación de color debida a la
proteína en la muestra se controla en los 20 minutos siguientes a
la obtención de la muestra en cuestión.
El procedimiento de la presente invención se
lleva a cabo preferiblemente usando el siguiente procedimiento
después de tratar la superficie con compuestos de amonio
cuaternario tipo desinfectante.
Las sustancias que pueden contener proteína se
transfieren de una porción de la superficie de una muestra a un
medio de obtención de muestras. Subsiguientemente, el medio de
obtención de muestras se pone en contacto con una solución
preparada previamente que contiene un tensioactivo no iónico o
bipolar tal como se define anteriormente y el reactivo capaz de
formar o cambiar de color al reaccionar con la proteína, añadiendo
dicha solución a la porción del medio de obtención de muestras al
que se transfieren las sustancias.
Esta solución, que es de forma deseable una
solución acuosa, se añade preferiblemente gota a gota a la porción
del medio de obtención de muestras sobre el que se transfieren las
sustancias.
Después se lleva a cabo la detección cualitativa
de proteína determinando visualmente el cambio o formación de color
producido por la reacción de dicho reactivo con la proteína.
Preferiblemente, en el procedimiento de la
invención se usa un tensioactivo no iónico que se selecciona del
grupo que consiste en condensados de alcoholes alifáticos que
tienen de 6 a 24 átomos de carbono y que incorporan de 2 a 50
unidades de óxido de etileno. Más preferiblemente, el tensioactivo
no iónico que se usa en la invención es un condensado, tal como se
menciona anteriormente, que incorpora de 20 a 25 unidades de óxido
de etileno. Lo más preferiblemente, este tensioactivo no iónico
tipo etoxilado tiene un valor de HLB en el intervalo de
12-20.
Cuando se aplica una solución que contiene el
tensioactivo no iónico o bipolar y el reactivo capaz de formar
color, la concentración del tensioactivo no iónico en la solución
acuosa está de forma deseable en el intervalo de
1-20%, más preferiblemente 2-15% en
peso.
En el procedimiento de la invención, el medio de
obtención de muestras comprende un polímero insoluble en agua
(sintético o no sintético) al que pueden transferirse las
sustancias que contienen proteína que están presentes en la
superficie de una muestra. Si este polímero es un polímero no
sintético, puede ser celulosa, acetato de celulosa o celulosa
acetilada.
El medio de obtención de muestras para usarse en
el procedimiento de la presente invención puede tener cualquier
forma siempre que tenga una porción que posea una gran capacidad de
absorción de agua.
Además, es preferible para una obtención de
muestras más fácil unir un miembro de sujeción a la porción con
capacidad de absorber agua que comprende el polímero no
sintético.
Ejemplos de medios deseables de obtención de
muestras de ese tipo incluyen los siguientes:
- un medio de obtención de muestras en forma de
bastoncillo que tiene la torunda con capacidad de absorber agua al
final de un palillo;
- un medio de obtención de muestras en forma de
cinta que se compone de unaporción con capacidad de absorber agua
que se localiza en una cinta;
- un medio de obtención de muestras en forma de
sello en el que la capa con capacidad de absorber agua que contiene
el polímero no sintético se une a la superficie de muestreo de un
mango tipo sello;
- un medio de obtención de muestras en forma de
papel de filtro que contiene el polímero no sintético preparado en
forma de un papel de filtro; y
- un medio de obtención de muestras en forma de
tira que comprende un sustrato, tal como una película plástica y
una capa con capacidad de absorber agua que contiene el polímero no
sintético y que se localiza sobre el sustrato, estando cortado
dicho medio de obtención de muestras en forma de una tira y teniendo
un espacio para su manipulación.
Al usar cualquier medio de obtención de muestras
de la lista anterior, puede llevarse a cabo la etapa de transferir
las sustancias de la superficie de una muestra al medio de
obtención de muestras mediante frotado, contacto con presión y
absorción. Para el procedimiento de frotado, puede aplicarse de
forma adecuada un medio de obtención de muestras en forma de una
torunda de algodón conectado a un palillo o un filtro de membrana.
Para el procedimiento de contacto con presión, puede ser adecuado
un medio de obtención de muestras en forma de cinta o en forma de
sello. Además, para el procedimiento de absorción, puede aplicarse
de forma efectiva un medio de obtención de muestras en forma de
bastoncillo o de papel de filtro para absorber las sustancias a
transferir.
El medio de obtención de muestras que se usa en
el procedimiento de la presente invención preferiblemente tiene una
porción con capacidad de absorber agua, que puede humedecerse con
un medio acuoso. Más preferiblemente, en el procedimiento de la
invención, la porción con capacidad de absorber agua se humedece
usando un medio acuoso antes de transferir sobre ella las
sustancias de la superficie de muestra.
Como medio acuoso adecuado para humedecer la
porción con capacidad de absorción pueden mencionarse una solución
isotónica de cloruro sódico, agua purificada tal como agua
destilada o agua desionizada, una solución acuosa que contiene un
agente tensioactivo aniónico, una solución acuosa al
2-95% de disolvente orgánico miscible en agua tal
como acetona, etanol, alcohol propílico o metiletilcetona.
Las sustancias que se transfieren al medio de
obtención de muestras de la superficie de muestra se ponen en
contacto con un reactivo capaz de cambiar o formar color al
reaccionar con proteína para detectar la presencia de proteína en
las sustancias transferidas. En el procedimiento de la invención,
pueden utilizarse como reactivos para detectar proteína los
necesarios para la detección de acuerdo con los diversos
procedimientos de detección de proteínas, tales como el
procedimiento de reacción en bureta, procedimiento de Lowry,
procedimiento de tinción con Coomassie, procedimiento de BCA y
procedimiento de reacción con ninhidrina. El reactivo para detectar
proteína es un compuesto no octahalogenado que se selecciona del
grupo que consiste en fenolsulfonaftaleínas y
cresolsulfonaftaleínas. Los reactivos adecuados son, por ejemplo,
azul de bromofenol, verde de bromocresol, púrpura de bromocresol,
rojo de bromofenol, azul de bromotimol y bromoclorofenol. Se
obtuvieron resultados muy buenos cuando se usó verde de
bromocresol. La reacción de las sustancias transferidas con el
reactivo puede realizarse a temperatura ambiente.
El kit de detección de proteínas para aplicar el
procedimiento de la invención mencionado anteriormente, incluye un
compuesto de amonio cuaternario tipo desinfectante (o
antimicrobiano); un medio de obtención de muestras tal como se
define anteriormente, un reactivo de detección de proteínas capaz de
reaccionar con proteínas y cambiar o producir color tal como se
define anteriormente, y un tensioactivo no iónico o bipolar tal
como se define anteriormente y adecuado para eliminar el efecto
negativo descrito anteriormente de los compuestos de amonio
cuaternario en el procedimiento de detección de proteínas. De forma
deseable, el kit de detección de proteínas de la invención incluye
también una solución humectante.
La invención se ilustra además mediante los
siguientes ejemplos no limitantes, en los que las partes y
porcentajes son en peso a no ser que se indique lo contrario.
En los ejemplos se usan las siguientes
abreviaturas:
- Dehydol® TA20: tensioactivo no iónico, alcohol
etoxilado C16-C18 que contiene de media 20 grupos
EO;
- Lutensol® AT25: tensioactivo no iónico, alcohol
etoxilado C16-C18 que contiene de media 25 grupos
EO;
- Tween® 20: tensioactivo no iónico, monolaurato
de polioxietilenosorbitan;
- IPA: alcohol isopropílico;
- ADBAC: compuesto de amonio cuaternario, cloruro
de n-alquil-dimetilbencilamonio, en
el que n es C12, C14 o C16 (Arquad);
- BSA: albúmina de suero bovino;
- BCG: verde de bromocresol
- CHAPS: sulfonato de
(colamidopropil)dimetilaminopropano (tensioactivo
bipolar).
Ejemplos A,
1-4
En estos ejemplos, se determinó el límite de
detección de las diversas soluciones que contenían colorantes con
respecto a la detección de ADBAC y BSA. El colorante presente en
estas soluciones era verde de bromocresol.
Estas soluciones tienen las siguientes
composiciones:
Se aplicaron dos niveles del compuesto de amonio
cuaternario ADBAC sobre placas de acero inoxidable que tenían una
superficie de 10 cm^{2}. Los niveles de ADBAC por placa de acero
inoxidable eran: 100 \mug y 200 \mug.
La cantidad de ADBAC a aplicar a las placas de
acero inoxidable se calculó asumiendo que, después de aplicar una
solución que contenía ADBAC, permanece un nivel residual de agua de
1 mm sobre la superficie de la placa de acero inoxidable. Usando
este supuesto puede calcularse que después de secar habrá presentes
respectivamente 100 mg o 200 mg de ADBAC por m^{2} en una
superficie después de aplicar una solución que contiene 100 ppm o
200 ppm respectivamente de ADBAC para desinfectar esa superficie.
Dado que se toman muestras de una superficie de 10 cm^{2} en el
presente ejemplo, puede inferirse que, cuando se usa una solución
que contiene, por ejemplo 200 ppm de ADBAC, se recogen 200 \mug
de ADBAC cuando se toman muestras de la superficie de la placa de
acero inoxidable.
Se obtuvieron muestras de la superficie de estas
placas aplicando una tira plástica que tenía una almohadilla de
celulosa sobre ella. Antes de obtener las muestras, se humedeció la
almohadilla de la tira con una solución que consistía en IPA al 30%
y agua al 70%. Después de obtener las muestras, se añadió una de
las soluciones anteriores que contenían colorante a la almohadilla
de celulosa. El color se valoró (i) inmediatamente después de
añadir las soluciones que contenían colorante (es decir, a t = 0
minutos), (ii) después de 2 minutos, y (iii) después de 5 minutos.
El desarrollo del color se valoró usando los siguientes símbolos:
-, +/-, +, ++, donde - quiere decir naranja, +/- quiere decir verde
claro, + quiere decir verde, y ++ quiere decir verde oscuro. En
relación con lo anterior, un color naranja quiere decir ausencia de
proteína, mientras que un color verde es indicativo de la presencia
de proteína, cuando no se da una reacción de falso positivo.
Los resultados del desarrollo del color se
muestran en la Tabla 1.
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Puede verse que el Ejemplo A, en el que se aplicó
una solución que no contenía ningún tensioactivo muestra el
desarrollo de un color verde oscuro que quiere decir una reacción
fuerte de falso positivo provocada por la presencia de ADBAC sobre
las placas de las que se obtuvieron muestras. Por otra parte, en los
Ejemplos 1-4 en los que se aplicaron soluciones que
contenían diversos tensioactivos no iónicos o bipolars tal como se
muestra anteriormente, no se observó desarrollo de color verde. En
otras palabras, no se detectaron reacciones de falso positivo en
los Ejemplos 1-4. Se infiere que la adición de los
tensioactivos indicados a la solución que contenía colorante se
observó que inhibía de forma efectiva las reacciones de falso
positivo en presencia del compuesto de amonio cuaternario ADBAC y
en ausencia de proteína.
En los siguientes experimentos se investigó la
adecuación de los tensioactivos no iónicos y bipolars descritos
para detectar diversas cantidades de proteínas (BSA) sobre las
superficies en ausencia de ADBAC.
Para este fin, se aplicaron diversos niveles de
BSA sobre placas de acero inoxidable que tenían una superficie de
10 cm^{2}. Los niveles de BSA aplicados por placa de acero
inoxidable fueron: 20 \mug, 30 \mug y 50 \mug.
La valoración del desarrollo de color se realizó
usando los mismos signos que se aplicaron en los experimentos
anteriores (véase la Tabla 1). También el significado de los signos
es el mismo: un color naranja quiere decir ausencia de proteína,
mientras que un color verde es indicativo de la presencia de
proteína.
Los resultados del desarrollo del color se
muestran en la Tabla 2.
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Puede verse que el límite de detección cuando se
usa la solución de los Ejemplos 1-4 no es
significativamente diferente del que se da cuando se aplica la
solución del Ejemplo comparativo A que no contiene tensioactivo no
iónico o bipolar.
En este ejemplo, se describen experimentos en los
que se analizó la presencia de BSA combinada con el compuesto de
amonio cuaternario ADBAC.
Primero, se añadió una cantidad predeterminada de
BSA a una placa de acero inoxidable (que tenía una superficie de 10
cm^{2}) y después de desecar, se añadió ADBAC a dicha placa.
La cantidad de ADBAC a aplicar a las placas de
acero inoxidable analizadas se calculó usando los mismos supuestos
que se aplicaron en los experimentos que se describen
anteriormente. Se obtuvieron muestras de la superficie de 10
cm^{2} de las placas de acero inoxidable a las que se aplicaron
diversas cantidades de BSA y ADBAC usando las soluciones que
contenían los colorantes de los Ejemplos 1-4.
También el procedimiento de obtención de muestras y el procedimiento
de valoración de muestras para estimar el desarrollo de color eran
iguales a los de los Ejemplos 1-4. El desarrollo de
color se valoró inmediatamente después de la adición de solución
que contenía colorante, después de 2 minutos y después de 5
minutos.
Los resultados de los niveles de BSA de 50
\mug, 100 \mug y 150 \mug se muestran respectivamente en las
Tablas 3, 4 y 5.
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A partir de los resultados que se muestran en las
Tablas 3-5, puede inferirse que usando las
soluciones que contienen colorantes de los Ejemplos
1-4 puede detectarse BSA en presencia de compuestos
de amonio cuaternario después de al menos 2 minutos.
Claims (8)
1. Un procedimiento para controlar la limpieza de
una superficie tratada con compuestos de amonio cuaternario
detectando la proteína presente sobre dicha superficie,
comprendiendo dicho procedimiento las etapas de:
- tratar dicha superficie con un compuesto de
amonio cuaternario tipo desinfectante (o antimicrobiano);
- transferir las sustancias presentes en una
porción sujeto de la superficie así tratada a un medio de obtención
de muestras que comprende una porción con capacidad de absorber
agua que comprende un polímero insoluble en agua;
- poner en contacto las sustancias transferidas a
dicho medio de obtención de muestras con un reactivo capaz de
formar o cambiar de color al reaccionar con proteína, en el que
dicho reactivo es un compuesto no octahalogenado que se selecciona
del grupo que consiste en fenolsulfonaftaleínas y
cresolsulfonaftaleínas;
- determinar visualmente el cambio o la formación
de color por la reacción de dicho reactivo con proteína;
en el que las sustancias que se transfieren al
medio de obtención de muestras se ponen también en contacto con un
tensioactivo no iónico que se selecciona del grupo que consiste
en
(i) condensados de ácidos carboxílicos alifáticos
que tienen de 8 a 18 átomos de carbono en una cadena alifática y
que incorporan de 2 a 50 unidades de óxido de etileno y/o óxido de
propileno y/o óxido de butileno,
(ii) condensados de alcoholes alifáticos que
tienen de 6 a 24 átomos de carbono y que incorporan de 2 a 50
unidades de óxido de etileno y/o óxido de propileno y/o óxido de
butileno,
(iii) condensados de alquilfenoles que tienen de
6 a 12 átomos de carbono y que incorporan de 2 a 25 moles de óxido
de etileno y/o óxido de propileno y/o óxido de butileno,
(iv) derivados de polioxietileno de ésteres de
ácidos monograsos, digrasos y trigrasos en los que el componente de
ácido graso tiene entre 12 y 24 átomos de carbono y las cadenas de
polietileno contienen entre 4 y 30 unidades de óxido de
etileno,
(v) copolímeros de bloque de
polioxietileno-polioxipropileno que tienen la
fórmula:
HO(CH_{2}CH_{2}O)_{a}(CH(CH_{3})CH_{2}O)_{b}(CH_{2}CH_{2}O)_{c}H
\
o
HO(CH(CH_{3})CH_{2}O)_{d}(CH_{2}CH_{2}O)_{e}(CH(CH_{3})CH_{2}O)_{f}H
en las que a, b, c, d, e y f son
números enteros de 1 a 350 que reflejan los bloques respectivos de
óxido de polietileno y óxido de polipropileno de dicho polímero, en
el que el componente de polioxietileno del polímero de bloque es al
menos aproximadamente 10% del polímero de
bloque,
(vi) alquilglicósidos que tienen la fórmula:
R^{4}O(R^{5}O)_{n}(Z^{1})_{p}
en la que R^{4} es un radical
orgánico monovalente que se selecciona de un radical alifático
saturado monovalente, alifático insaturado o aromático tal como
alquilo, hidroxialquilo, alquenilo, hidroxialquenilo, arilo,
alquilarilo, hidroxialquilarilo, arilalquilo, alquenilarilo,
arilalquenilo que tiene de 6 a 30 átomos de carbono, en la que
R^{5} es un radical hidrocarbonado divalente que contiene de 2 a
4 átomos de carbono tal como etileno, propileno o butileno (más
preferiblemente la unidad (R^{5}O)_{n} representa
unidades que se repiten de óxido de etileno, óxido de propileno y/o
sus combinaciones aleatorias o de bloques); n es un número entero
de 0 a 12; Z^{1} representa un resto que se deriva de un sacárido
reductor que contiene 5 ó 6 átomos de carbono (más preferiblemente
una unidad de glucosa); y p es un número de 0,5 a
10,
o un tensioactivo bipolar o mezclas de estos
tensioactivos.
2. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación
1, en el que el tensioactivo no iónico que se selecciona del grupo
que consiste en condensados de alcoholes alifáticos que incluyen de
6 a 24 átomos de carbono, que incorporan de 20 a 25 unidades de
óxido de etileno y que tienen un valor de HLB en el intervalo de
12-20.
3. El procedimiento de acuerdo con la
reivindicación 1, en el que el tensioactivo no iónico o bipolar y
el reactivo capaz de formar color al reaccionar con proteína están
contenidos en una solución y en el que las etapas de poner en
contacto las sustancias transferidas a dicho medio de obtención de
muestras con dicho reactivo y con dicho tensioactivo no iónico o
bipolar se llevan a cabo añadiendo dicha solución a la porción del
medio de obtención de muestras al que se transfieren las
sustancias.
4. El procedimiento de acuerdo con la
reivindicación 3, en el que la solución que contiene el
tensioactivo no iónico o bipolar y el reactivo se añade gota a gota
a la porción del medio de obtención de muestras al que se
transfieren las sustancias.
5. El procedimiento de acuerdo con la
reivindicación 3 ó 4, en el que la solución contiene del 1 al 20%
en peso, preferiblemente del 2 al 15% en peso del tensioactivo no
iónico o bipolar.
6. El procedimiento de acuerdo con una cualquiera
de las reivindicaciones 1-5, en el que la porción
con capacidad de absorber agua del medio de obtención de muestras
se humedece con un fluido humectante antes de la etapa de
transferencia.
7. Un kit para controlar la limpieza de una
superficie tratada con compuestos de amonio cuaternario detectando
proteína sobre dicha superficie, incluyendo dicho kit una
combinación de un compuesto de amonio cuaternario tipo desinfectante
(o antimicrobiano); un medio de obtención de muestras que comprende
una porción con capacidad de absorber agua que comprende un
polímero insoluble en agua, para transferir sustancias presentes en
la porción sujeto de la superficie de una muestra; un reactivo
capaz de formar o cambiar de color al reaccionar con proteína; y un
tensioactivo no iónico o bipolar como se define en la
reivindicación 1, en el que dicho reactivo capaz de formar o cambiar
de color al reaccionar con proteína es un compuesto no
octahalogenado que se selecciona del grupo que consiste en
fenolsulfonaftaleínas y cresolsulfonaftaleínas
8. Un kit de acuerdo con la reivindicación 7, en
el que el reactivo y el tensioactivo no iónico o bipolar son
componentes de una solución.
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