SU487111A1 - Способ получени 6-метил-2-нафтойной кислоты - Google Patents

Description

3,ОХ;0,6 ц, подвижные с двум -трем  пол рными жгутиками, грамотрицательные.

Экологические признаки. Растет в интервале температур 4-37°С, не растет при 41°С. Оптимальна  гемпература дл  роста 28°С.

Физиологические признак и. Растет па обычных питательных средах, органических и минеральных, ассимилирует углеводы за исключением ксилозы.

На минеральных средах растет предпочтительнее с нитратной формой алота, чем с аммонийной .

Желатину не разжижает, молоко не измен ет , нитраты восстанавливает, крахмал не гидролизует , инозит не усваивает.

Биохимические признак и. Окисл ет нафталин до салициловой кислоты. Салицилат окисл ет полностью.

Характеристика бактерии Р s е п d о ш о п а S f 1 U о г е S с е п S штамм 44. Выделен из почвенных образцов, вз тых на территории Енакиевского коксохимического завода .

К у л ь т у р а л ь и ы е п р и знак и. Колонии па твердых питательных средах гладкие, плоские , блест щие, бесцветные или серовато-белые . На стандартной среде Кинга образует флюоресцирующий пигмент. На м со-пептоином бульоне растет, образу  муть и пленку и продуциру  зеленый фл1ооресцируюп.ий иигмент .

Морфологи  культуры. Клетки палочковидные с округленными концами, 1,5- 3,ОХЭ,6ц, подвижные с двум -трем  пол рными жгутиками, грамотрицательные.

Экологические признаки. Растет в интервале температур 4-30°С, пе растет при 37°С и 41°С. Оптимальна  температура дл  роста 28-30°С.

Ф и 3 и о л о г и ч е с к и е признак и. Растет на обыч1гых питательиых средах, органических и минеральных, ассимилирует углеводы . Ма минеральных средах нредпочтительнее растет с аммонийной формой алота, чем с пит )атной.

Желат1 н разжижает, молоко свертывает, крахмал гидролизует, нитраты иосстаиавливает , ииолит ус1 аинает, гиппурат и глицин не использует .

Б и о X и м и ч е с к и е п р и знак и. Окис;1 ет нафталин до салициловой кисло i i. Салицилат окисл ет полиостью.

Предлагаемый способ по сн етс  примерами его выполиеии .

Пример 1. Культуру Pseudomonas putida штамм 7 поддерживают на кос ках с МПА. Ипокул т готов т путем разведени  в стерильной водопроводной воде культуры, выросшей на кос ках с МПА.

Плотность суспензии клеток, использ емой в качестве инокул та, составл ет 2,0 единицы по шкале оптической плотности нефелометра.

Культуру в течение 24 час вырашивают при 29-30°С иа среде МПА, разлитой в медицинские матрацы по 250 мл в каждый. В конце этого времени провод т смыв культуры с агаризованной поверхности среды АША фосфатным буфером рН 8,5-8,8.

Бактериальную суспеизию центрифугируют 10 мин при 8-10000 об/мин, дважды промывают фосфатным 6yqbepoM и ресуспеидируют в таком же буфере.

100 мл суспензии с оптической плотностью 2,2, что составл ет 1,5 г в пересчете иа сухой вес клеток, внос т о медицинские колбы на 750 мл и одновременно добавл ют по 100 мл (0,64 моль) 2,6-днметилпафталина.

Трансформацию провод т при 29-ЗО С в колбах на качалке в течение 12-15 час. Затем бактериальные клетки отдел ют центрифугироваиием при 8-10000 об/мин.

Надосадочную жидкость фильтруют через стекл нный фильтр, упаривают ма роторном испарителе при 40С, концентриру  первоначальный объем в 4-5 раз.

Сконцентрированный раствор охлаждают до 5-6°С и к охлажденному раствору приливают 4-5-кратный объем этнлоиого спирта, охлажденного до , дл  осаждени  белков.

Через 20--25 мин осадок отдел ют фильтрованием через стекл нный фильтр. Фильтрат подкисл ют 10% НС1 до рН 3,0 и упаривают досуха на роторном испарителе при 40°С.

Сухой остаток экстрагируют абсолютным этанолом и провод т препаративюе выделение конечного продукта окислени  путем тонкослойпой хроматографии на пластипках «Silufo UV-254 в системе: бензол-метанолуксусна  кислота (45 : 4: 2).

В качестве элюирующего агента используют абсолютиый этиловый спирт. Элюат упаривают досуха на роторном испарителе и высушивают иод вакуумом. Концентрацию конечного продукта определ ют снектрофотометрически.

Выход 6-метил-2-нафтойпой кислоты равен 0,33 моль.

Пример 2. Культуру Pseudomonas putida пиамм 7 выращивают на агаризованиой среде Чапека с глюкозой. Среду Чапека разливают в медицинские матрацы по 250 мл в каждый и после сте м-к иза1и и провод т «закашивание среды и матрацах.

Инокул т готов т аналогично тому, как указано в примере I. Инкубацию провод т при 29 в течение 24 час. ДальнеЙ пий про1осс , Kaic указано в примере 1.

Выход ко ечного продукта равен 0,30 моль.

Пример 3. Культуру Pseudomonas fluorescens штамм 44 поддерживают иа кос ках Ш1А. Дл  получени  биомассы выращивание культуры провод т па среде с МПА.

Остальиые этапы ведени  процесса такие, как описано в примере 1.

Выход конечного продукта равен 0,35 моль.

Пример 4. Культуру Pseudomonas fluorescens штамм 44 выращивают на среде Чапека с глюкозой. Дальше процесс провод т, как описано в примере 1. Выход конечного продукта равен 0,32 моль.

Предмет изобретени 

Claims (5)

1.Способ получени  6-метил-2-нафтойнон кислоты окислением 2,6-диметилнафталина при помощи микроорганизмов в жидкой среде в аэробных услови х с последующим выделением готового продукта, отличающийс  тем, что, с целью сокращени  продолжительности процесса, окисление 2,6-диметилнафталина провод т при помощи микроорганизмов, относ щихс  к роду Pseudomonas.

2.Способ по п. 1, отличающийс  тем.

что из рода Pseudomonas используют вид Pseudomonas putida.

3.Способ по пп. 1 и 2, отличающийс  тем, что из вида Pseudomonas putida используют Pseudomonas putida щтамм 7.

4.Способ по п. 1, отличающийс  тем, что из рода Pseudomonas используют вид Pseudomonas fluorescens.

5.Способ по пп. 1, 4, отличающийс  тем, что из вида Pseudomonas iluorescens используют Pseudomonas fluorescens щтамм 44.