SU370228A1 - Библиотека - Google Patents

Description

1

Изобретение отн-оситс  к .микробиологической  ромышленности.

Известен способ получени  2,6-нафталиндикарбоноВОЙ кислоты (НДКК) химическим путем пр мым окислением 2,6-диметилнафталина (ДМН).

Предлагаемый способ получени  2,6-нафталиндикарбоновой кислоты  вл етс  более простым 1ПО .сравнению € известным.

Он дает возможность проводить окисление при помощи микроорганизмов рода Pseudomonas , выращенных на Среде, содержащей глюкозу в качестве И|сточника углерода, в частности вид putida штамм Р, а также микроорганизмы рода Nocardia, выращенные на среде, содержащей в качестве источника углерода н-алканы, в частности вид ораса щтамм 264А. Процесс окислени  ведут при атмосферном давлении при температуре 28- 30° С без образовани  побочных продуктов.

Пример 1. Культуру Pseudomonas поддерживают на м сопептонном агаре (МПА), выращивают в течение суток на среде МПА и суспензию .выроощей культуры высевают в колбы Эрленмейера на 250 мл с жидкой средой, разлитой по 50 мл.

Состав среды следующий, мл:

К2НРО410,0

КН2Р041,0

NH4NO32,0

MgS04-7H2O

FeSO47HaO

СаСЬ-бНгО

CuS04-5H20

НзРОз

ZnS04-H.,O

MnS04-H20

Na2MoO4-2H2O

СЬ-бНгО

СоСЬ-бПоО

Глюкоза

Одновременно с следовые количества 2,6-ДМН и после инкубации в течение 20 час при 30° С в ко бах на качалке внос т 30 мг 2,6-ДМН. Ферментаци  заканчиваетс  спуст  48 час. Культуральную жидкость центрифугируют при 10000 об/мин, упаривают досуха на роторном испарителе при 50° С. Сухой остаток экстрагируют 10%-ным раствором уксусной кислоты в диэтиловом эфире дл  удалени  неиспользованной глюкозы. К сухому остатку после экстракции добавл ют 25%-ный раствор NH4OH. Нерастворимый остаток отфильтровывают и отбрасывают . Фильтрат подкисл ют лед ной СНСООН до рН 6,0 и оставл ют на холоде. Выпавшие кристаллы аммонийной соли 2,6-НДКК отфильтровывают, промывают небольшими порци ми дистиллированной воды и используют дл  идентификации. Идентичность аммонийной соли выделенной кислоты с аммонийной солью известной 2,6-НДКК установлена методами ИК-а 1Ф спектроскопии (1Ф-спектр А-шах 277±1; 286±1; 297+1 растворитель аммиак-изопроланол 6: 1) и методом тонкослойной хроматографии на окиси алюмини  в системе метанол : аммиак : диметилформамид 2:2:1 Rf - 0,28 и на силикагеле (Silufol) в системе абсолютный этанол: аммиак 15:1, Rf - 0,31. Т. пл. свыше 300° С с разложением.

Пример 2. Культуру Nocardia поддерживают на агаризованной среде Бушпель-Хааса с гексадексаном -в качестве источника углерода , выращивают в течение двух суток и суспензию выросшей, культуры высевают -в колбы Эрленмейера на; 250 мл с жидкой средой 8-Е, разлитой по 50 мл.

Состав среды, г/л:

MgSOi-THaO0,8

NaCl0,5

КН2РО40,7

(NH4)2HP04- 1,5

Вода водопроводна  до 1 л.

КН2РО4 и (NH4)2HPO4 стерилизуютс  отдельно на дистиллированной воде.

Гексадекан добавл етс  дробно в течение трех дней в количестве 10 г/л.

Через 24 час после инокулираванн  в среду внос т 50 мг 2,6-ДМН. Процесс трансформации прослеживают с помощью хроматографии . Окисление прекращают на п тые сутки, культуральную л идкость упаривают досуха на роторном испарителе -при 55° С, осадок обрабатывают эфиром дл  удалени  парафина и алкилнафталина. Остаток раствор ют в аммиаке , прогон ют через колонку с окисью алюмини , элюиру  кислоту с колонки смесью аммиака и пропилового спирта, экстракт упаривают досуха и получают аммонийную соль 2,6-НДКК кислоты. Идентичность аммонийной соли выделенной кислоты с аммонийной солью известной 2,6-НДКК установлена методами ИК-а И 1Ф спектроскопии (1Ф-спектр Хшах 277 ± 1, 286±1, 297 + 1, растворитель-аммиак : изопропанол 6:1) и методом тонкослойной хроматографии на окиси алюмини  в системе метанол : аммиак : диметилформамид 2:2:1, Rf - 0,28 и на силикагеле (Silufol), в системе абсолютный этанол: аммиак 15: 1, Rf - 0,31. Т. пл. свыще 300°С с разложением.

Характеристика штамма Р. Выделен из почвенных образцов, вз тых на территории Запорожского коксохимического завода в местах загрузки нафталина.

Культуральные признаки. Колонии на твердых питательных средах гладкие, плоские, блест щие, бесцветные или серовато-белые. На стандартной среде, предложенной Kimeg-etal образует флюоресцирующий пигмент.

Морфологи  культуры. Клетки палочковидные с округленными концами, 1,5-3,0x0,,

подвижные с двум -трем  пол рными жгутиками , грамм-отрицательные.

Экологические признаки. Растет при 4° С, оптимум роста при , не растет при 41° С. Физиологические признаки. Растет на обычных питательных средах, на синтетических средах растет предпочтительнее с нитратной формой азота, чем с аммиачной. Желатину не разжижает, молоко не измен ет, индол не продуцирует . Культура обладает запахом 3-метиламина . Нитраты восстанавливает.

Биохимические признаки. Трансформирует ароматические соединени  нафталинового р да в соокислительных услови х.

Характеристика штамма 264А. Выделен из активных илов Ангарского нефтеперерабатывающего завода.

Культуральные признаки. Колонии на м сопептонном агаре пастообразные, гладкие,

блест щие, розово-палевые; колонии на суслоагаре-слизистые , вод нистые, розоватые.

Морфологи  культуры. 24-часова  культура на м сопептонном бульоне имеет вид крупных палочек и нитей, искривленных с отчетливым

ветвлением, длина отдельных клеток до 20 ц,. Через двое суток культура распадаетс  накокковидные фрагменты и имеет вид конгломератов из кокков.

Экологические признаки. Растет при температуре от 4 до 28° С, при значении рН от 5,0 до 9,0 растет при концентрации солей в среде

до 5,0%.

Физиологические признаки. Строгий аэроб, растет на синтетических средах с добавлением комплекса витаминов группы В, усваивает глюкозу, галактозу, ксилозу, арабинозу, сахарозу , мальтозу, трегалозу, лактозу, раффинозу , маннит, глицерин, этанол, ацетат, бутират, лактат, сукцинат, фенол в качестве источников углерода.

Не усваивает пропионат, цитрат, бензоат. В качестве источников азота усваивает нитратные и аммонийные соли, мочевину, аспарагин , пептон, гидролизат казеина. Нитраты восстанавливает, ассимилирует н-парафин от октана до гептадекана включительно .

Биохимические признаки. Обладает каталазной активностью, пероксидазной не обладает,

экстрацеллюл рную линазу не синтезирует,

желатину, казеин, целлюлозу и крахмал не

гидролизует.

Трансформирует ароматические соединени  бензольного и нафталинового р да в соокислительных услови х.

Предмет изобретени 

1. Способ получени  2,6-нафталиндикарбоновой кислоты путем окислени  2,6-диметилнафталина , отличающийс  тем, что, с целью

упрощени  процесса, окисление провод т при

помощи микроорганизмов. 5 2.Способ по л. 1, отличающийс  тем, что используют .микроорганизмы рода Pseudomonas , выращенные на среде, содержащей глюкозу в качестве источника углерода. 3.Способ по пп. 1 и 2, отличающийс  тем,5 что КЗ рода Pseudomonas используют вид putida штаым Р. б 4. Способ по п. 1, отличающийс  тем, что используют микроорганизмы рода Nocardia, выращенные на среде, содержащей в качестве источника углерода н-алканы. 5. Способ по п. 4, отличающийс  тем, что из рода Nocardia используют вид ораса штамм 264А.