JPS58155093A - ｌ−カルボンの微生物学的製造方法 - Google Patents
ｌ−カルボンの微生物学的製造方法Info
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- JPS58155093A JPS58155093A JP57185327A JP18532782A JPS58155093A JP S58155093 A JPS58155093 A JP S58155093A JP 57185327 A JP57185327 A JP 57185327A JP 18532782 A JP18532782 A JP 18532782A JP S58155093 A JPS58155093 A JP S58155093A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は微生物学的手段による１−α−又はβ−ピネン
からの１−カルボンの製造に関する。
からの１−カルボンの製造に関する。
１−カルボンはケトン系テルペンであり、スペアミント
油の主成分であり、例えば、チューインガム、練歯磨、
トイレトリー、食品、飲物中に幅広（使われている重要
な風味付与物質である。
油の主成分であり、例えば、チューインガム、練歯磨、
トイレトリー、食品、飲物中に幅広（使われている重要
な風味付与物質である。
過去、１−カルボンは天然スペアミントがう単離され℃
いるか、例えば米国特許２７９６４２８号公報記載の複
雑な合成化学反応で製造されている。
いるか、例えば米国特許２７９６４２８号公報記載の複
雑な合成化学反応で製造されている。
微生物学的手段により１−カルボンを得るための多数の
試みも記載されている。例えば、公告された特願昭４７
−３８９９８号公報には、０コリネバクテリア属菌を使
ってのリモネンからのカルボンの製造方法が記載されて
いる。細菌にょるａ−ピネ／の分解はＦｅｒｍｅｎｔａ
ｔ ｉｏｎ ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＴｏｄａｙ （１
９７２） ６０９に記載されている；しかし、多数の
テルペノイド分離生成物が（特にシスーツヨンｋ）ラン
ス−カルベオール）確認すしているにも関らず、１−カ
ルボンをこの方法で生成できるという提案はない。
試みも記載されている。例えば、公告された特願昭４７
−３８９９８号公報には、０コリネバクテリア属菌を使
ってのリモネンからのカルボンの製造方法が記載されて
いる。細菌にょるａ−ピネ／の分解はＦｅｒｍｅｎｔａ
ｔ ｉｏｎ ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＴｏｄａｙ （１
９７２） ６０９に記載されている；しかし、多数の
テルペノイド分離生成物が（特にシスーツヨンｋ）ラン
ス−カルベオール）確認すしているにも関らず、１−カ
ルボンをこの方法で生成できるという提案はない。
今や、１−α−ピネンや１−β−ピネンを１−。
カルボンへ直接酸化できるーシンイドモナス属の新規生
物を単離した。１−α−ピネンと１−β−ピネンは共に
特定の天然ターペンチン油の主成分であり、従って、安
価がり容易に入手できる出発物かくて、本発明により、
１−ａ−又は１−β−ピネンから１−カルボンを製造す
るための微生物学的方法が提供される。特に、本発明に
より、シンメトモナス属の１−カルボン産生微生物を水
性栄養培地で１−α−ピネン又は１−β−ピネンの存在
下でシンイドモナス属の１−カルボン産生微生物を培養
することからなる１−カルボンの製法が提供される。
物を単離した。１−α−ピネンと１−β−ピネンは共に
特定の天然ターペンチン油の主成分であり、従って、安
価がり容易に入手できる出発物かくて、本発明により、
１−ａ−又は１−β−ピネンから１−カルボンを製造す
るための微生物学的方法が提供される。特に、本発明に
より、シンメトモナス属の１−カルボン産生微生物を水
性栄養培地で１−α−ピネン又は１−β−ピネンの存在
下でシンイドモナス属の１−カルボン産生微生物を培養
することからなる１−カルボンの製法が提供される。
本発明の１−カルボン産生生物は下水サンプルから単離
し、１９８１年７月１６日に国立産ｌ業用微生物収集機
関（ＮＣＩＢ）に寄託ム１１６７１として寄託された。
し、１９８１年７月１６日に国立産ｌ業用微生物収集機
関（ＮＣＩＢ）に寄託ム１１６７１として寄託された。
このバチルスはシンイドモナス属に属す新規菌株として
確立され、Ｒ，Ｂ。
確立され、Ｒ，Ｂ。
Ｂｕｃｈａｎ と Ｎ、Ｅ、Ｑｉｂｂｏｎｓ との
編集による” Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ
ｏｆ ｌ）ｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅＢａｃｔｅ口ｏ
ｌｏｇｙ”第８版によると特性は次の通りである。
編集による” Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ
ｏｆ ｌ）ｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅＢａｃｔｅ口ｏ
ｌｏｇｙ”第８版によると特性は次の通りである。
細胞形態学（オキンイト”ＣＭ３培養寒天、６０℃）Ｇ
陰性、桿状細胞、０．８×約２．４×約４．８μｍ（指
数；型相）、２日で短稈、１〜４個の極毛で運動Ｏ 集落形態学（０Ｍ３．３０℃、２日） 集落は環状、凸型、完全、なめらかで輝いている、・２
日でわずかに黄色、７日で薄黄色。
陰性、桿状細胞、０．８×約２．４×約４．８μｍ（指
数；型相）、２日で短稈、１〜４個の極毛で運動Ｏ 集落形態学（０Ｍ３．３０℃、２日） 集落は環状、凸型、完全、なめらかで輝いている、・２
日でわずかに黄色、７日で薄黄色。
生理学
次条件で２５℃（特記した場合を除く）で増殖が生じた
。
。
１０〜４１℃の０Ｍ３ （５℃、４５℃では不可）；
ｐＨ７，４（０Ｍ３ ）； ０．０５ＭＮａ＋（０，８
３ＭＮａ＋では不可） （ＣＭ １ ＋４．５ ％Ｎａ
ｃｌ ）（Ｃ原料用培地、後記）；ＮＨ４＋を唯一のＮ
％とし、グルコースえの他の唯一のＣ源を有する無機塩
培地（増殖因子含まず）。
ｐＨ７，４（０Ｍ３ ）； ０．０５ＭＮａ＋（０，８
３ＭＮａ＋では不可） （ＣＭ １ ＋４．５ ％Ｎａ
ｃｌ ）（Ｃ原料用培地、後記）；ＮＨ４＋を唯一のＮ
％とし、グルコースえの他の唯一のＣ源を有する無機塩
培地（増殖因子含まず）。
増殖はペニシリン４単位、ストレプトマイシン２５μ鼠
２．４−ジアミノ−６，７−ジインプロピルプテリジ
ンホスフェート３５μＩに耐性であり、クロラムフェニ
コール５０μｇ１テトラサイクＩＪン２５μｇ１ノボビ
オシン５μ１１ポリミキシンＢ２５０単位に感受性だっ
た（ＣＭ３上でディスク状、２５℃） 生化学反応（特記した場合を除き２５℃）十二カタラー
ゼ（′５０℃）；コバクスオキシダーゼ（６０℃）；グ
ルコース上での酸化攻撃（３０℃）；ゼラチン加水分解
；オルト−ニトロフェニル−β−ガラクトピラノシド；
トリプトン水からのアンモニア（弱）。
２．４−ジアミノ−６，７−ジインプロピルプテリジ
ンホスフェート３５μＩに耐性であり、クロラムフェニ
コール５０μｇ１テトラサイクＩＪン２５μｇ１ノボビ
オシン５μ１１ポリミキシンＢ２５０単位に感受性だっ
た（ＣＭ３上でディスク状、２５℃） 生化学反応（特記した場合を除き２５℃）十二カタラー
ゼ（′５０℃）；コバクスオキシダーゼ（６０℃）；グ
ルコース上での酸化攻撃（３０℃）；ゼラチン加水分解
；オルト−ニトロフェニル−β−ガラクトピラノシド；
トリプトン水からのアンモニア（弱）。
一ニゲルコース上での発酵攻撃（６０℃）；細胞内Ｃ保
存としてのポリ−β−ヒドロキシブチレート蓄積（Ｂｅ
ｒｇｅｙ （Ｆ）マ＝ コアル２１９頁のＤＬ−β−ヒ
ドロキシブチレートの非利用性からの仮定）； Ｈ２、
ＣＯ，，０，の雰囲気中での独立栄養増殖；螢光顔料；
ビオシアニン；アルギニン、ジノ１イドロラーゼ、ＭΦ
ｌ１ｅｒの；リシンデカルボキシラーゼ、ＭΦ目ｅｒの
；オルニチンデカルボキシラーゼ、Ｍ＠１ｌｅｒの；硝
酸塩から亜硝酸塩へ：硝酸塩からＮへ；デオキシリポ又
りレアーゼ；ゼラチン穿刺液化（２０℃で２８日）；カ
ゼイン加水分解；スターチ加水分解；卵黄レシチナーゼ
；卵黄リパーゼ；ツイーン（商標）８０加水分解：つレ
アーゼ；三重糖鉄培地から硫化水素；インビール産生；
メチルレット；ホゲスープロスヵウェル（アセチルメチ
ルカルビノール産生）；グルコｉス／−？ソトン／水／
糖から酸へ；グルコース／−！プトン／水／糖からガス
へ；シュクロースからレバンへ。
存としてのポリ−β−ヒドロキシブチレート蓄積（Ｂｅ
ｒｇｅｙ （Ｆ）マ＝ コアル２１９頁のＤＬ−β−ヒ
ドロキシブチレートの非利用性からの仮定）； Ｈ２、
ＣＯ，，０，の雰囲気中での独立栄養増殖；螢光顔料；
ビオシアニン；アルギニン、ジノ１イドロラーゼ、ＭΦ
ｌ１ｅｒの；リシンデカルボキシラーゼ、ＭΦ目ｅｒの
；オルニチンデカルボキシラーゼ、Ｍ＠１ｌｅｒの；硝
酸塩から亜硝酸塩へ：硝酸塩からＮへ；デオキシリポ又
りレアーゼ；ゼラチン穿刺液化（２０℃で２８日）；カ
ゼイン加水分解；スターチ加水分解；卵黄レシチナーゼ
；卵黄リパーゼ；ツイーン（商標）８０加水分解：つレ
アーゼ；三重糖鉄培地から硫化水素；インビール産生；
メチルレット；ホゲスープロスヵウェル（アセチルメチ
ルカルビノール産生）；グルコｉス／−？ソトン／水／
糖から酸へ；グルコース／−！プトン／水／糖からガス
へ；シュクロースからレバンへ。
Ｃ原料用性
Ｂｅｒｇｅｙの１９７４年版の ” Ｍａｎｕａｌ ｏ
ｆ −Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ Ｂａｃｔｅｒｉ
ｓｌｏｇｙ” のプソイドモナス菌に対する表に列挙さ
れ１おり、Ｒ，Ｙ。
ｆ −Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ Ｂａｃｔｅｒｉ
ｓｌｏｇｙ” のプソイドモナス菌に対する表に列挙さ
れ１おり、Ｒ，Ｙ。
５ｔａｎｉｅｒ等（１）Ｊｏｇｅ ｎ０Ｍ１：ｃｒｏｂ
ｉｏｌ、 ４３．１５９（１９６６）に記載のプソイド
モナス菌に対する順序での化合物（Ｎ、 Ｊ、Ｐａ１ｌ
ｅｒｏｎｉ ＆Ｉｄ Ｄｏｕｄｏ−ｒｏｆｆ）Ａ、 Ｒ
ｅｖ、 Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌ、１０．７３（１９７
２）に記載の０プロスとしての培地、わずかに変更）。
ｉｏｌ、 ４３．１５９（１９６６）に記載のプソイド
モナス菌に対する順序での化合物（Ｎ、 Ｊ、Ｐａ１ｌ
ｅｒｏｎｉ ＆Ｉｄ Ｄｏｕｄｏ−ｒｏｆｆ）Ａ、 Ｒ
ｅｖ、 Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌ、１０．７３（１９７
２）に記載の０プロスとしての培地、わずかに変更）。
十：Ｄ−キシロース；Ｌ−アラビノース：Ｌ−ラムノー
ス；Ｄ−グルコース、；Ｄ−フルクトース；シュクロー
ス；セロビオース；アセテート；フロピ第５ネート；ブ
チレート；ＤＬ−ラクテート；エタノール；Ｐ−ヒドロ
キシベンゾエート；β−アラニン；Ｌ−ヒスチジン。
ス；Ｄ−グルコース、；Ｄ−フルクトース；シュクロー
ス；セロビオース；アセテート；フロピ第５ネート；ブ
チレート；ＤＬ−ラクテート；エタノール；Ｐ−ヒドロ
キシベンゾエート；β−アラニン；Ｌ−ヒスチジン。
ｍ：り−リボース；サッカラード；マロネート；Ｔ）（
−）−タルトラード；メンタルトラード；ＤＬ−β−ヒ
ドロキシブチレート；グリコラート；レブリネート；シ
トラコネート；メサコネート；エリスリトール；ンルビ
トール；メソーイノシトール；アドニトール；フロピレ
ンゲリコール；２．６−プチレングリコール；メタノー
ル；ゲラニオール；ｍ−ヒドロキシベンゾエート；テス
トステロン；Ｌ−バリン；Ｌ−アルギニ／；ヘンシルア
ミン；ベタイン；ペントチネート。
−）−タルトラード；メンタルトラード；ＤＬ−β−ヒ
ドロキシブチレート；グリコラート；レブリネート；シ
トラコネート；メサコネート；エリスリトール；ンルビ
トール；メソーイノシトール；アドニトール；フロピレ
ンゲリコール；２．６−プチレングリコール；メタノー
ル；ゲラニオール；ｍ−ヒドロキシベンゾエート；テス
トステロン；Ｌ−バリン；Ｌ−アルギニ／；ヘンシルア
ミン；ベタイン；ペントチネート。
本発明には、Ｘ線や紫外線の照射や、ナイトロジエンマ
スタート９や同様な突然変異源薬剤での処理等の様々な
手段によりこの微生物から得られる突然変異体の使用も
含まれる。但し、かかる突然変異体が１−α−又は１−
β−ピネンから１−カルボンを産生できることを条件と
する。本発明の微生物のいづれの菌種の１−カルボン産
生能も、本明細書記載の説明や実施例により１−α−又
は１−β−ピネンの存在下でそれを培養し、基質サンプ
ルをクロマト分析に付すことにより基質中の１−カルボ
ンを検出することにより容易に決定できる。
スタート９や同様な突然変異源薬剤での処理等の様々な
手段によりこの微生物から得られる突然変異体の使用も
含まれる。但し、かかる突然変異体が１−α−又は１−
β−ピネンから１−カルボンを産生できることを条件と
する。本発明の微生物のいづれの菌種の１−カルボン産
生能も、本明細書記載の説明や実施例により１−α−又
は１−β−ピネンの存在下でそれを培養し、基質サンプ
ルをクロマト分析に付すことにより基質中の１−カルボ
ンを検出することにより容易に決定できる。
本発明で使う水性発酵培地には１−ａ−又は１−β−ピ
ネンの他に様々なＣ源〔グルコース、グリセリン、スタ
ーチ、シュクロース等の炭水化物、炭化水素（例えばｎ
−アルカン、）〕を含めてよい。
ネンの他に様々なＣ源〔グルコース、グリセリン、スタ
ーチ、シュクロース等の炭水化物、炭化水素（例えばｎ
−アルカン、）〕を含めてよい。
含めなければならない、他栄養素は資化できるＮ源と無
機塩である。
機塩である。
硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸ナトリウム
又はカリウム、尿素、アミノ酸、はプトンその他の蛋白
消火物等の多（のＮ源が適当である。
又はカリウム、尿素、アミノ酸、はプトンその他の蛋白
消火物等の多（のＮ源が適当である。
必要なら微量必須ミネラルとビタミンを添加できる。
無機元素、特にＰ（例えばリン酸塩として供給）Ｍ、９
（硫酸Ｍ９として供給できる）、Ｓ（硫酸塩として供
給）、Ｋ、Ｎａも塩としてから、それらを不純物として
含む複合培地の成分として供給しなければならない。Ｃ
ａ、 ＦｅｌＭｎ、 Ｚｎ、 Ｃｕ１Ｃｏ。
（硫酸Ｍ９として供給できる）、Ｓ（硫酸塩として供
給）、Ｋ、Ｎａも塩としてから、それらを不純物として
含む複合培地の成分として供給しなければならない。Ｃ
ａ、 ＦｅｌＭｎ、 Ｚｎ、 Ｃｕ１Ｃｏ。
ＭＯ等の微量元素も同様に供給できる。
該プンイドモナスＳｐ菌株を２２〜６６℃、ｐ）１６．
５〜ｚ８で培養すると、１〜３日の発酵後に有意な収率
で１−カルボンが得られる。
５〜ｚ８で培養すると、１〜３日の発酵後に有意な収率
で１−カルボンが得られる。
この生物の接種物は、培養寒天等の適当な培地で増殖さ
せた菌株の細胞を１７ａ−又は１−β−ピネンと炭水化
物を含む振とりフラスコ中の水性栄養培地に移すことに
より製造される。適当な温度（例えば２８℃で２４時間
）で充分な時間振とう、培養後にこの接種物のアリコー
トを発酵機内の同様な滅菌培地に移し、圧縮空気を圧入
して攪拌、通気した。媒地ｐＨをアルカリの添加、例え
ばＮａＯＨかアンモニアの水溶液の添加により適当な値
、好ましくは６．８〜ｚＯ１に維持する。
せた菌株の細胞を１７ａ−又は１−β−ピネンと炭水化
物を含む振とりフラスコ中の水性栄養培地に移すことに
より製造される。適当な温度（例えば２８℃で２４時間
）で充分な時間振とう、培養後にこの接種物のアリコー
トを発酵機内の同様な滅菌培地に移し、圧縮空気を圧入
して攪拌、通気した。媒地ｐＨをアルカリの添加、例え
ばＮａＯＨかアンモニアの水溶液の添加により適当な値
、好ましくは６．８〜ｚＯ１に維持する。
例えば気液クロマトグラフィーな使ってのサンプル分析
により示される如（有意量の１−カルボンが発酵媒地に
蓄積したら、当業界で良く知られている水不溶性有機液
の回収法で媒地から生成物を回収する。培養液を水非和
性有機溶媒で抽出し、遠心分離で有機相と水相を４離し
、有機相を乾燥１１、蒸留して溶媒と残留ピネンな除け
ば粗生成物が得られる。この抽出に適当な溶媒は四塩化
炭素、。
により示される如（有意量の１−カルボンが発酵媒地に
蓄積したら、当業界で良く知られている水不溶性有機液
の回収法で媒地から生成物を回収する。培養液を水非和
性有機溶媒で抽出し、遠心分離で有機相と水相を４離し
、有機相を乾燥１１、蒸留して溶媒と残留ピネンな除け
ば粗生成物が得られる。この抽出に適当な溶媒は四塩化
炭素、。
ジクロルメタン、ジエチルエーテル等である。所望なら
ば標準法、例えばクロマトグラフィーか減圧分別蒸留を
使い粗生成物を更に精製できる。
ば標準法、例えばクロマトグラフィーか減圧分別蒸留を
使い粗生成物を更に精製できる。
以下の実施例により本発明を例示する。
実施例１゜
特記ない限り同−織地を全実施例で使った。この織地は
、オルトリン酸二ナトリウム・二水和物３．０４．！ｉ
＋、オルトリン酸水素二カリウム５．３１ｇ、硫酸アン
モニウム０．５ｇを蒸留水に溶かして１１としたもので
ある。これを１２０℃で１５分間滅菌した。２０℃に迄
冷却後に２１／の次組成の滅菌液を無菌添加した。
、オルトリン酸二ナトリウム・二水和物３．０４．！ｉ
＋、オルトリン酸水素二カリウム５．３１ｇ、硫酸アン
モニウム０．５ｇを蒸留水に溶かして１１としたもので
ある。これを１２０℃で１５分間滅菌した。２０℃に迄
冷却後に２１／の次組成の滅菌液を無菌添加した。
炭酸カルシウム２．５ｇ；酸化亜鉛０．５ｇ；硫酸第一
鉄・七水和物７０ｇ；塩化第一マツガン・二水和物１．
２５ ｇ ；塩化第一銅・二水和物０．２９；塩化第一
コバルト・六水和物ｏ、ｓｇ；ホウ酸０．１ｇ；塩化マ
グネシウム１２５Ｉ；モリブデン酸ナトリウム・二水和
物０．６ｇ；ＩＯＭ塩酸９７ ｒｘｌ ；蒸留水（全量
を１１とする量）。
鉄・七水和物７０ｇ；塩化第一マツガン・二水和物１．
２５ ｇ ；塩化第一銅・二水和物０．２９；塩化第一
コバルト・六水和物ｏ、ｓｇ；ホウ酸０．１ｇ；塩化マ
グネシウム１２５Ｉ；モリブデン酸ナトリウム・二水和
物０．６ｇ；ＩＯＭ塩酸９７ ｒｘｌ ；蒸留水（全量
を１１とする量）。
この溶液なｒ過滅菌した。
２０Ｗ／のこの滅菌培地をアルミニウム箔被覆ゴム栓が
備わった３ ００ｄの滅菌三角フラスコに加えた。これ
にＣ源としてｆ過滅菌１−α−ピネン０．１罰を加えた
。フラスコに４１のプソイドモナスＮＣＩＢＡ１１６７
１の２４時間１−α−ピネン増殖培養菌を接種した。６
つの同一のフラスコを同時に作り、２８℃の回転振とう
機にのせ、２２０ｒ％で２４．４８．７２時間振とうし
た。所望期間後に培養物を２０−のジエチルエーテルで
抽出した。エーテル層を分離し、サンプルを気液クロマ
イグラフィーに付した。
備わった３ ００ｄの滅菌三角フラスコに加えた。これ
にＣ源としてｆ過滅菌１−α−ピネン０．１罰を加えた
。フラスコに４１のプソイドモナスＮＣＩＢＡ１１６７
１の２４時間１−α−ピネン増殖培養菌を接種した。６
つの同一のフラスコを同時に作り、２８℃の回転振とう
機にのせ、２２０ｒ％で２４．４８．７２時間振とうし
た。所望期間後に培養物を２０−のジエチルエーテルで
抽出した。エーテル層を分離し、サンプルを気液クロマ
イグラフィーに付した。
標準１−カルボンと同一の保持時間のピークを観察し、
面積を標準カルボン溶液のものと比べ、様々な時点での
培養物中の濃度を評価した。
面積を標準カルボン溶液のものと比べ、様々な時点での
培養物中の濃度を評価した。
２４時間で５．６■／ｌ；４８時間で１３，４■／ｌ；
７２時間で２．７■・／ｌ。
７２時間で２．７■・／ｌ。
生成物はＧＣ−質量分光学、１−カルボンの標準サンプ
ルとの比較により確μした。
ルとの比較により確μした。
実施例２
久方法で織地の硫酸アンモニウム濃度を２．０９／ｌに
上げた。２１の培地を含む全容量６１の発酵機を滅菌し
、１０ＷＬｔの１−α−ピネンな加え、更に１−α−ピ
ネンな操作中１１／時の速度で連続してポンプ送りした
。２００ｍ／時で空気を加え、１０００Ｐで攪拌した。
上げた。２１の培地を含む全容量６１の発酵機を滅菌し
、１０ＷＬｔの１−α−ピネンな加え、更に１−α−ピ
ネンな操作中１１／時の速度で連続してポンプ送りした
。２００ｍ／時で空気を加え、１０００Ｐで攪拌した。
温度を２８℃にコントロールし、ｐＨを水酸化アンモニ
ウムの５％溶液の自動添加で６．８と７．０の間にコン
トロールした。１−ａ−ピネンで増殖させたプソイドモ
ナス１１６７１の４８時時間項養菌２００−を接種した
。接種後次の時点で１−ａ−ピネンを追加した。
ウムの５％溶液の自動添加で６．８と７．０の間にコン
トロールした。１−ａ−ピネンで増殖させたプソイドモ
ナス１１６７１の４８時時間項養菌２００−を接種した
。接種後次の時点で１−ａ−ピネンを追加した。
０時間（１０Ｗ／）；１″１５時間（１０ｄ）；２１時
間（１０＋ａｌ） ； ２２．５時間（２０１ｕ、）。
間（１０＋ａｌ） ； ２２．５時間（２０１ｕ、）。
最大カルボン形成は２４．５ｍ＝後（ガスクロマトグラ
フィーにより８．２■／ｌ濃度のカルボンが測定された
）に観察された。
フィーにより８．２■／ｌ濃度のカルボンが測定された
）に観察された。
実施例６゜
本実施例では織地の硫酸アンモニウム濃度は４１１／ｌ
だった。５０１の滅菌媒地を全容量が７５１の発酵・機
で作った。この織地に５１／分で通気し、４５０Ｐで攪
拌した。
だった。５０１の滅菌媒地を全容量が７５１の発酵・機
で作った。この織地に５１／分で通気し、４５０Ｐで攪
拌した。
温度を２８℃にコントロールし、ＮａｏＨの１０重量％
溶液の自動添加によりｐＨを６．８にコントロールした
っ １−α−ピネン（２５０ｄ）を加え、ノンイドモナ
スＮＣＩＢム１１６７１の４８時時間項養菌２４００ｔ
ｎｌを接種した。ピネンを次の如く追加した。
溶液の自動添加によりｐＨを６．８にコントロールした
っ １−α−ピネン（２５０ｄ）を加え、ノンイドモナ
スＮＣＩＢム１１６７１の４８時時間項養菌２４００ｔ
ｎｌを接種した。ピネンを次の如く追加した。
０時間（２５０ｍ／）：３時間（７５（ｌｔ／）；３時
間（５００ｍＡ）；１９時間（２５０ｍＪ）；２３時間
（２５０ｍｌ）。
間（５００ｍＡ）；１９時間（２５０ｍＪ）；２３時間
（２５０ｍｌ）。
培養液サンプルのエーテル抽出液のガスクロマトグラフ
ィーによジカルボン産生を追打した。
ィーによジカルボン産生を追打した。
２５時間後に７．ＵＱ／ｌのカルボンが生産された。
発酵を停止した。四塩化炭素（９１）を発酵機に加え、
４５０ ｒｐｌで１５分間攪拌した。攪拌機を止め、液
を一液放置した。有機層を分離し、蒸発して、６４ＷＩ
９の１−カルボンを含むと９／Ｃで推定された５ｃｃを
得た。分取ガスクロマトグラフィー、分取薄層クロマト
グラフィーによる精製で（気液クロマトグラフィーによ
る）純度が９９４を越える１−カルボン（２，４■）を
得た。ＮＭＲスペクトルは文献記載スはクトルと一致し
た。
４５０ ｒｐｌで１５分間攪拌した。攪拌機を止め、液
を一液放置した。有機層を分離し、蒸発して、６４ＷＩ
９の１−カルボンを含むと９／Ｃで推定された５ｃｃを
得た。分取ガスクロマトグラフィー、分取薄層クロマト
グラフィーによる精製で（気液クロマトグラフィーによ
る）純度が９９４を越える１−カルボン（２，４■）を
得た。ＮＭＲスペクトルは文献記載スはクトルと一致し
た。
０−
旋光度：〔α） −−４８゜
８９
（文献値−６２，５° ；即ち、光学的に８９％純度の
１、−異性体）。
１、−異性体）。
実施例４゜
実施例６に記載の如く発酵を達成した。
但し、１−β−ピネンを使って１−カルボンを生成した
。
。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 第１項 １−カルボンの製造方法において、 ジンイト９モナス属に属するカルボン産生微生物を１−
α−ピネンと１−β−ピネンの存在下で水性栄養培地で
培養し、１−カルボンを発酵培地から回収することから
なる方法。 第２項 微生物がジンイ属菌上ナス属菌株Ｎ ” Ｉ ＢＡ１１
６７１である、特許請求の範囲第１項記載の方法。 第３項 培養を温度２８℃、ｐＨ６，８〜ｚＯで行なう、特許請
求の範囲第２項記載の方法。 第４項 １−α−又は１−β−ピネンが唯一のＣ源として存在す
る、特許請求の範囲１−３項のいづれかの項に記−載の
方法。 第５項 生成１−カルボンを水非凰和性有機溶媒での抽出で回収
する、特許請求の範囲第１−４項のいづれかの項に記載
の方法。 第６項 好気的条件下、Ｎ資化源と必須無機塩からなる水性栄養
培地中で１−α−ピネンか１−β−ピネンの存在下で培
養した時に１−α−又は１−β−ピネンを１−カルボン
に転化できることを特徴とする、 単離され、生物学的に純粋な微生物であるプンイドモナ
ス属菌株ＮＣＩＢＡ１１６７１とその突然変異体７．
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB8131667 | 1981-10-21 | ||
| GB8131667 | 1981-10-21 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58155093A true JPS58155093A (ja) | 1983-09-14 |
| JPS6257310B2 JPS6257310B2 (ja) | 1987-11-30 |
Family
ID=10525292
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57185327A Granted JPS58155093A (ja) | 1981-10-21 | 1982-10-21 | ｌ−カルボンの微生物学的製造方法 |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4495284A (ja) |
| EP (1) | EP0077682B1 (ja) |
| JP (1) | JPS58155093A (ja) |
| AR (1) | AR229890A1 (ja) |
| AU (1) | AU536819B2 (ja) |
| BR (1) | BR8206120A (ja) |
| CA (1) | CA1184863A (ja) |
| DE (1) | DE3265641D1 (ja) |
| DK (1) | DK463282A (ja) |
| GR (1) | GR76764B (ja) |
| MX (1) | MX7196E (ja) |
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|---|---|---|---|---|
| CA1184863A (en) * | 1981-10-21 | 1985-04-02 | Peter M. Rhodes | Microbiological process for the preparation of 1- carvone |
| US5688673A (en) * | 1994-08-15 | 1997-11-18 | Board Of Trustees Operating Michigan State University | Process for the preparation of monoterpenes using bacterium containing recombinant DNA |
| US6156533A (en) * | 1997-05-16 | 2000-12-05 | Board Of Trustees Operating Michigan State University | Method for degradation of pinenes by bacillus isolates |
| CA2648786A1 (en) * | 2005-06-10 | 2007-04-05 | Florida Atlantic University | Sustainable supply of bioactive marine products |
| ES2525398B2 (es) * | 2013-06-21 | 2015-07-13 | Universitat De València | Cepas de Pseudomonas sp. y usos de las mismas |
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|---|---|---|---|---|
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| CA1184863A (en) * | 1981-10-21 | 1985-04-02 | Peter M. Rhodes | Microbiological process for the preparation of 1- carvone |
-
1982
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- 1982-10-19 AR AR291009A patent/AR229890A1/es active
- 1982-10-19 DE DE8282305540T patent/DE3265641D1/de not_active Expired
- 1982-10-20 MX MX8210332U patent/MX7196E/es unknown
- 1982-10-20 AU AU89638/82A patent/AU536819B2/en not_active Ceased
- 1982-10-20 GR GR69584A patent/GR76764B/el unknown
- 1982-10-20 BR BR8206120A patent/BR8206120A/pt unknown
- 1982-10-21 JP JP57185327A patent/JPS58155093A/ja active Granted
- 1982-11-22 US US06/443,805 patent/US4495284A/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
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| EP0077682B1 (en) | 1985-08-21 |
| BR8206120A (pt) | 1983-09-20 |
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| CA1184863A (en) | 1985-04-02 |
| AU536819B2 (en) | 1984-05-24 |
| US4495284A (en) | 1985-01-22 |
| AR229890A1 (es) | 1983-12-30 |
| EP0077682A1 (en) | 1983-04-27 |
| GR76764B (ja) | 1984-08-31 |
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| MX7196E (es) | 1987-12-23 |
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