SU1632974A1 - Штамм бактерий РRотеUS VULGaRIS-продуцент рестриктазы Р @ II - Google Patents
Штамм бактерий РRотеUS VULGaRIS-продуцент рестриктазы Р @ II Download PDFInfo
- Publication number
- SU1632974A1 SU1632974A1 SU874304715A SU4304715A SU1632974A1 SU 1632974 A1 SU1632974 A1 SU 1632974A1 SU 874304715 A SU874304715 A SU 874304715A SU 4304715 A SU4304715 A SU 4304715A SU 1632974 A1 SU1632974 A1 SU 1632974A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- strain
- proteus vulgaris
- restrictase
- producer
- pvull
- Prior art date
Links
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относитс к биотехнологии и касаетс получени нового штамма, продуцирующего сайт-специфическую эндонуклеазу рестрикции Pvu II, узнающую и расщепл ющую последовательность нуклеотидов 5J- CAGCTG-3. Штамм Proteus vulgaris
Description
Изобретение относитс к биотехнологии и касаетс получени нового штамма, продуцирующего сайт-специфическую эндонуклеазу, способную узнавать и расщепл ть последовательность нуклеотидов 5f-CAGCTG-3 , данный сайт узнавани вл етс единственным в ДНК плазмиды рВ R 32г и р де челночных плазмид (41р5, 4Rp17, 4Ep2), что определ ет возможность широкого использовани этой рестриктазы.
Цель изобретени - вы вление штамма-продуцента Proteus vulgaris В-3671 (84), нетребовательного к питательным средам и синтезирующего одну сайт-специфическую эндонуклеазу, способную узнавать и расщепл ть последовательность нуклеотидов 5;- CaGCTG-З с более высоким выходом.
Штамм выделен как контаминант при глубинном культивировании гемофиль- ных микроорганизмов.
Штамм Proteus vulgaris 84 характеризуетс следующими признаками.
Морфологические признаки.
Клетки палочковидные размером 0,5- 0,6 мкм на 1,0-2,5 мкм, пр мые или почти пр мые, в стационарной фазе имеетс вариабельность по размерам. Не образуют эндоспор. Беспигментный, грамотрицательный.
Физиологические признаки.
Факультативный анаэроб, усваивает гЛюкозу с образованием кислоты и гаОЭ
ю
&ь
за, выдел ет , индолположительный разжижает желатину, дезаминирует фе нилаланин, каталазоположительный. От типового вида Proteus vulgaris от- личаетс по способности сбраживать маннозу и ксилозу.
Культуральные признаки. Хорошо растет на обычных комплексных питательных средах (СПАХ МПБ) при температурах 30-37°С и рН 6,8- 7,0. Колонии на агаризованных средах округлые, сероватого оттенка, кра ровные. При культивировании дает специфический запах.
Хранение штамма осуществл ют под вазелиновым маслом, в растворе глицерина при -70°С или в лиофильно- высушенном состо нии.
Биотехнологические свойства штам- ма.
При исследовании биомассы в ней обнаружена и выделена рестриктаза Pvu II, способна узнавать и расщепл ть последовательность нуклеотидов 5 -CAGCTG-3;.
Дл глубинного культивировани используетс доступна дешева среда на основе рыбного гидролизата, вместо пептоносолевой среды. Предлагае- мый штамм характеризуетс высоким выходом рестриктазы Pvu II, составл ющим 80-100 тыс.е.а./г (в 2 раза больше , чем у известного штамма).
Пример 1 . Клетки Proteus vul garis 84 бактериологической петлей пересевают на чашки Петри с агаризо- ванной средой (на основе 3,5%-ного рыбного гидролизата), содержащей 1%-ную донорскую кровь. Чашки с за- се нной культурой инкубируют в термостате при 30°С 16 ч. Подросшую културу перенос т в жидкую питательную среду следующего состава: рыбный гид ролизат 3,5%, вода дистиллированна остальное, рН 7, 2. Культивирование осуществл ют в термостатированных качалках при 30°С; 200 об./мин, до стационарной фазы роста.
Глубинное культивирование прово- д т в ферментере Microferm в аналогичной среде при 30°С, аэрации 1 объем в минуту, 200 об./мин мешалки. В течение культивировани след т за поддержанием рН и оптической плот
ностью. При достижении ранней стацио нарной фазы роста (оптическа плотность gee - 2,7) культивирование прекращают . Биомассу осаждают центрифуги
с
ю 15
20
25
0
,,- 4Q 45
55
рованием. Выход биомассы составл ет 3,7 г/л.
Замороженную или сырую биомассу Proteus vulgaris 84 в количестве 10 г перенос т в стакан вместимостью 50 мл, добавл ют 30 мл буфера А, содержащего 0,02М КН,рР04; 0,001 М ЭДТА; 0,01 М 2-меркапто- этанол, рН 7,0, Содержимое стакана суспендируют на магнитной мешалке до получени однородной суспензии. Ее обрабатывают ультразвуком п ть раз по 40 с (ультразвуковой дезинтегратор MSE), мощность 200-300 Вт, частота 20 кГц, амплитуда 14 мкм) с охлаждением на лед ной бане. Клеточный дебрис отдел ют центрифугированием , 1600 об./мин, 30 мин, центрифуга 1-21.
30 мл осветленного лизата нанос т на колонку с 100 см3 фосфоцеллюлозы Р-11 Сорбированный материал элюиру- ют буфером Б (0,02 М КНгР04; 0,01 М 2-меркаптоэтадол; 0,001 М ЭДТА; 1 М NaCl, рН 7,0) до тех пор, пока поглощение элюата не станет равным поглощению буфером Б. Объем смыва 200 мл.
Смыв перенос т в диализные мешки и диализуют против буфера А (3 л по 8 ч). Супернатант после диализа нанос т на колонку с ДЕАЕ-целлюлозой объемом 8 см3 со скоростью 20 мл/ч. Колонку промывают буфером А. Фермент элюируют линейным градиентом концентрации 0-1 М NaCl, объем градиента 100 мл. Элюат собирают фракци ми по 5,0 мл. Фракции, содержащие фер-. мент, объедин ют и диализуют против буфера А (3 л) в течение 16 ч, нанос т на колонку с фосфоцеллюлозой Р-11 объемом 4,5 см3. Фермент элюируют линейным градиентом 0-1 М NaCl. Объем градиента 50 мл. Элюат собирают по 1 мл фракци ми, общий объем 10 мл. Полученный препарат диализуют в течение 16 ч против 400 мл буфера Б. Выход рестриктазы Pvu II составл ет 100 тыс.е.а./г.
Пример 2. Культивирование биомассы и выделение фермента проводили как и в примере 1, но использовали предварительный пассаж на агари- зованной среде без добавлени крови. Выход фермента составил 20 тыс.е.а./г.
П р и м е р 3. Получение фермента проводили как в примере 1, но при пассировании штамма Proteus vulgaris 84 В-3671 на агаризованной среде при5 16329746
мен ли 0,5%-ную донорскую кровь. Вы-.-Полученный штамм обладает следуюход фермента составил 80 тыс.е.а./г. преимуществами по сравнению с
П р и м е р 4. Пассирование прово-известным: содержит одну сайт-спедили как в примере 1, но при концент-ДиФическую эндонукпеазу рестрикции
рации крови Т,5%. Наблюдали угнете- Pvu Ы пР°ДУДирует в 2,5 раза больние роста, выход биомассы составилше Ъ евого фермента, чем известный
3 г/л. Выход рестриктазы 90 тыс.е,а./г.штамм нетребователен к питательным
ПримеР5. Получение фермен-средам а также Устойчив при хранета проводили как в примере 2, но,0 ШИ Различньк УСЛОВИЯХ.
Claims (1)
- использовали концентрацию рыбногоФормула изобретенигидролизата 4%. Выход фермента неШтамм бактерий Proteus vulgarisизмен лс , но наблюдаетс уменьшениеВКПМ В-3671 - продуцент рестриктазыурожа биомассы до 3,2 г/л.. Pvu И«
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU874304715A SU1632974A1 (ru) | 1987-09-28 | 1987-09-28 | Штамм бактерий РRотеUS VULGaRIS-продуцент рестриктазы Р @ II |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU874304715A SU1632974A1 (ru) | 1987-09-28 | 1987-09-28 | Штамм бактерий РRотеUS VULGaRIS-продуцент рестриктазы Р @ II |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU1632974A1 true SU1632974A1 (ru) | 1991-03-07 |
Family
ID=21327249
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU874304715A SU1632974A1 (ru) | 1987-09-28 | 1987-09-28 | Штамм бактерий РRотеUS VULGaRIS-продуцент рестриктазы Р @ II |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
SU (1) | SU1632974A1 (ru) |
-
1987
- 1987-09-28 SU SU874304715A patent/SU1632974A1/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Авторское свидетельство СССР № 1552639, кл. С 12 N 1/14, 1987. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US4064010A (en) | Purification of uricase | |
SU1632974A1 (ru) | Штамм бактерий РRотеUS VULGaRIS-продуцент рестриктазы Р @ II | |
US4062731A (en) | Production of uricase from micrococcus luteus | |
JPS5852227A (ja) | 淋菌からの免疫原性複合体 | |
JPS6279777A (ja) | ス−パ−オキシドデイスムタ−ゼの製造方法 | |
SU1449579A1 (ru) | Питательна среда дл выращивани АRтнRовастеR LUтеUS - продуцента рестриктазы AI и I | |
EP0224412B1 (fr) | Nouvel enzyme, son procédé d'obtention et son application à la préparation de N-(L-aspartyl-1)L-phénylalaninate de méthyle | |
JPS5863387A (ja) | 制限酵素の製造法 | |
SU1659480A1 (ru) | Штамм бактерий КLевSIеLLа рNеUмоNIае-продуцент рестриктазы Кр @ 378 1 | |
SU1025725A1 (ru) | Штамм бактерий @ @ 24-продуцент эндонуклеазы | |
SU1551743A1 (ru) | Способ получени левана | |
JPS5928493A (ja) | アスパルチルフエニルアラニンアルキルエステルの製造法 | |
JP2690545B2 (ja) | 細菌アルカリプロテアーゼの製造方法 | |
SU1622397A1 (ru) | Способ получени бактериального лектина, специфичного к сиаловым кислотам | |
JPH0248231B2 (ja) | Shinkikishiranaazeoyobisonoseizoho | |
RU1804479C (ru) | Способ получени культуральной жидкости SеRRатIа маRсеSсеNS, обладающей хитиназной активностью | |
JPS6349097A (ja) | イプシロン−ポリ−l−リシンの製造法 | |
SU1631081A1 (ru) | Штамм бактерий ЕSснеRIснIа coLI RFL - продуцент рестриктазы Е со 105I | |
SU1406160A1 (ru) | Способ получени эндонуклеазы рестрикции Fок1 из FLаVовастеRIUм океаNокоIтеS | |
JPS63156597A (ja) | 廃水処理方法 | |
RU1692144C (ru) | Способ получения вещества, обладающего литическим действием | |
JPH0530968A (ja) | 新規プロリンジペプチダーゼおよびその製造法 | |
JPH03172190A (ja) | 有機代謝産物の採取方法 | |
RU2104014C1 (ru) | Состав питательной среды для роста бифидобактерий | |
SU1095645A1 (ru) | Способ получени эндонуклеазы рестрикции |