SU1632974A1 - Штамм бактерий РRотеUS VULGaRIS-продуцент рестриктазы Р @ II - Google Patents

Штамм бактерий РRотеUS VULGaRIS-продуцент рестриктазы Р @ II Download PDF

Info

Publication number
SU1632974A1
SU1632974A1 SU874304715A SU4304715A SU1632974A1 SU 1632974 A1 SU1632974 A1 SU 1632974A1 SU 874304715 A SU874304715 A SU 874304715A SU 4304715 A SU4304715 A SU 4304715A SU 1632974 A1 SU1632974 A1 SU 1632974A1
Authority
SU
USSR - Soviet Union
Prior art keywords
strain
proteus vulgaris
restrictase
producer
pvull
Prior art date
Application number
SU874304715A
Other languages
English (en)
Inventor
Сергей Харитонович Дегтярев
Владимир Евгеньевич Репин
Надежда Ивановна Речкунова
Original Assignee
Научно-Исследовательский Конструкторско-Технологический Институт Биологически Активных Веществ
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Научно-Исследовательский Конструкторско-Технологический Институт Биологически Активных Веществ filed Critical Научно-Исследовательский Конструкторско-Технологический Институт Биологически Активных Веществ
Priority to SU874304715A priority Critical patent/SU1632974A1/ru
Application granted granted Critical
Publication of SU1632974A1 publication Critical patent/SU1632974A1/ru

Links

Landscapes

  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Abstract

Изобретение относитс  к биотехнологии и касаетс  получени  нового штамма, продуцирующего сайт-специфическую эндонуклеазу рестрикции Pvu II, узнающую и расщепл ющую последовательность нуклеотидов 5J- CAGCTG-3. Штамм Proteus vulgaris

Description

Изобретение относитс  к биотехнологии и касаетс  получени  нового штамма, продуцирующего сайт-специфическую эндонуклеазу, способную узнавать и расщепл ть последовательность нуклеотидов 5f-CAGCTG-3 , данный сайт узнавани   вл етс  единственным в ДНК плазмиды рВ R 32г и р де челночных плазмид (41р5, 4Rp17, 4Ep2), что определ ет возможность широкого использовани  этой рестриктазы.
Цель изобретени  - вы вление штамма-продуцента Proteus vulgaris В-3671 (84), нетребовательного к питательным средам и синтезирующего одну сайт-специфическую эндонуклеазу, способную узнавать и расщепл ть последовательность нуклеотидов 5;- CaGCTG-З с более высоким выходом.
Штамм выделен как контаминант при глубинном культивировании гемофиль- ных микроорганизмов.
Штамм Proteus vulgaris 84 характеризуетс  следующими признаками.
Морфологические признаки.
Клетки палочковидные размером 0,5- 0,6 мкм на 1,0-2,5 мкм, пр мые или почти пр мые, в стационарной фазе имеетс  вариабельность по размерам. Не образуют эндоспор. Беспигментный, грамотрицательный.
Физиологические признаки.
Факультативный анаэроб, усваивает гЛюкозу с образованием кислоты и гаОЭ
ю
за, выдел ет , индолположительный разжижает желатину, дезаминирует фе нилаланин, каталазоположительный. От типового вида Proteus vulgaris от- личаетс  по способности сбраживать маннозу и ксилозу.
Культуральные признаки. Хорошо растет на обычных комплексных питательных средах (СПАХ МПБ) при температурах 30-37°С и рН 6,8- 7,0. Колонии на агаризованных средах округлые, сероватого оттенка, кра  ровные. При культивировании дает специфический запах.
Хранение штамма осуществл ют под вазелиновым маслом, в растворе глицерина при -70°С или в лиофильно- высушенном состо нии.
Биотехнологические свойства штам- ма.
При исследовании биомассы в ней обнаружена и выделена рестриктаза Pvu II, способна  узнавать и расщепл ть последовательность нуклеотидов 5 -CAGCTG-3;.
Дл  глубинного культивировани  используетс  доступна  дешева  среда на основе рыбного гидролизата, вместо пептоносолевой среды. Предлагае- мый штамм характеризуетс  высоким выходом рестриктазы Pvu II, составл ющим 80-100 тыс.е.а./г (в 2 раза больше , чем у известного штамма).
Пример 1 . Клетки Proteus vul garis 84 бактериологической петлей пересевают на чашки Петри с агаризо- ванной средой (на основе 3,5%-ного рыбного гидролизата), содержащей 1%-ную донорскую кровь. Чашки с за- се нной культурой инкубируют в термостате при 30°С 16 ч. Подросшую културу перенос т в жидкую питательную среду следующего состава: рыбный гид ролизат 3,5%, вода дистиллированна  остальное, рН 7, 2. Культивирование осуществл ют в термостатированных качалках при 30°С; 200 об./мин, до стационарной фазы роста.
Глубинное культивирование прово- д т в ферментере Microferm в аналогичной среде при 30°С, аэрации 1 объем в минуту, 200 об./мин мешалки. В течение культивировани  след т за поддержанием рН и оптической плот
ностью. При достижении ранней стацио нарной фазы роста (оптическа  плотность gee - 2,7) культивирование прекращают . Биомассу осаждают центрифуги
с
ю 15
20
25
0
,,- 4Q 45
55
рованием. Выход биомассы составл ет 3,7 г/л.
Замороженную или сырую биомассу Proteus vulgaris 84 в количестве 10 г перенос т в стакан вместимостью 50 мл, добавл ют 30 мл буфера А, содержащего 0,02М КН,рР04; 0,001 М ЭДТА; 0,01 М 2-меркапто- этанол, рН 7,0, Содержимое стакана суспендируют на магнитной мешалке до получени  однородной суспензии. Ее обрабатывают ультразвуком п ть раз по 40 с (ультразвуковой дезинтегратор MSE), мощность 200-300 Вт, частота 20 кГц, амплитуда 14 мкм) с охлаждением на лед ной бане. Клеточный дебрис отдел ют центрифугированием , 1600 об./мин, 30 мин, центрифуга 1-21.
30 мл осветленного лизата нанос т на колонку с 100 см3 фосфоцеллюлозы Р-11 Сорбированный материал элюиру- ют буфером Б (0,02 М КНгР04; 0,01 М 2-меркаптоэтадол; 0,001 М ЭДТА; 1 М NaCl, рН 7,0) до тех пор, пока поглощение элюата не станет равным поглощению буфером Б. Объем смыва 200 мл.
Смыв перенос т в диализные мешки и диализуют против буфера А (3 л по 8 ч). Супернатант после диализа нанос т на колонку с ДЕАЕ-целлюлозой объемом 8 см3 со скоростью 20 мл/ч. Колонку промывают буфером А. Фермент элюируют линейным градиентом концентрации 0-1 М NaCl, объем градиента 100 мл. Элюат собирают фракци ми по 5,0 мл. Фракции, содержащие фер-. мент, объедин ют и диализуют против буфера А (3 л) в течение 16 ч, нанос т на колонку с фосфоцеллюлозой Р-11 объемом 4,5 см3. Фермент элюируют линейным градиентом 0-1 М NaCl. Объем градиента 50 мл. Элюат собирают по 1 мл фракци ми, общий объем 10 мл. Полученный препарат диализуют в течение 16 ч против 400 мл буфера Б. Выход рестриктазы Pvu II составл ет 100 тыс.е.а./г.
Пример 2. Культивирование биомассы и выделение фермента проводили как и в примере 1, но использовали предварительный пассаж на агари- зованной среде без добавлени  крови. Выход фермента составил 20 тыс.е.а./г.
П р и м е р 3. Получение фермента проводили как в примере 1, но при пассировании штамма Proteus vulgaris 84 В-3671 на агаризованной среде при5 16329746
мен ли 0,5%-ную донорскую кровь. Вы-.-Полученный штамм обладает следуюход фермента составил 80 тыс.е.а./г. преимуществами по сравнению с
П р и м е р 4. Пассирование прово-известным: содержит одну сайт-спедили как в примере 1, но при концент-ДиФическую эндонукпеазу рестрикции
рации крови Т,5%. Наблюдали угнете- Pvu Ы пР°ДУДирует в 2,5 раза больние роста, выход биомассы составилше Ъ евого фермента, чем известный
3 г/л. Выход рестриктазы 90 тыс.е,а./г.штамм нетребователен к питательным
ПримеР5. Получение фермен-средам а также Устойчив при хранета проводили как в примере 2, но,0 ШИ Различньк УСЛОВИЯХ.

Claims (1)

  1. использовали концентрацию рыбногоФормула изобретени 
    гидролизата 4%. Выход фермента неШтамм бактерий Proteus vulgaris
    измен лс , но наблюдаетс  уменьшениеВКПМ В-3671 - продуцент рестриктазы
    урожа  биомассы до 3,2 г/л.. Pvu И«
SU874304715A 1987-09-28 1987-09-28 Штамм бактерий РRотеUS VULGaRIS-продуцент рестриктазы Р @ II SU1632974A1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SU874304715A SU1632974A1 (ru) 1987-09-28 1987-09-28 Штамм бактерий РRотеUS VULGaRIS-продуцент рестриктазы Р @ II

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SU874304715A SU1632974A1 (ru) 1987-09-28 1987-09-28 Штамм бактерий РRотеUS VULGaRIS-продуцент рестриктазы Р @ II

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SU1632974A1 true SU1632974A1 (ru) 1991-03-07

Family

ID=21327249

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SU874304715A SU1632974A1 (ru) 1987-09-28 1987-09-28 Штамм бактерий РRотеUS VULGaRIS-продуцент рестриктазы Р @ II

Country Status (1)

Country Link
SU (1) SU1632974A1 (ru)

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Авторское свидетельство СССР № 1552639, кл. С 12 N 1/14, 1987. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US4064010A (en) Purification of uricase
SU1632974A1 (ru) Штамм бактерий РRотеUS VULGaRIS-продуцент рестриктазы Р @ II
US4062731A (en) Production of uricase from micrococcus luteus
JPS5852227A (ja) 淋菌からの免疫原性複合体
JPS6279777A (ja) ス−パ−オキシドデイスムタ−ゼの製造方法
SU1449579A1 (ru) Питательна среда дл выращивани АRтнRовастеR LUтеUS - продуцента рестриктазы AI и I
EP0224412B1 (fr) Nouvel enzyme, son procédé d'obtention et son application à la préparation de N-(L-aspartyl-1)L-phénylalaninate de méthyle
JPS5863387A (ja) 制限酵素の製造法
SU1659480A1 (ru) Штамм бактерий КLевSIеLLа рNеUмоNIае-продуцент рестриктазы Кр @ 378 1
SU1025725A1 (ru) Штамм бактерий @ @ 24-продуцент эндонуклеазы
SU1551743A1 (ru) Способ получени левана
JPS5928493A (ja) アスパルチルフエニルアラニンアルキルエステルの製造法
JP2690545B2 (ja) 細菌アルカリプロテアーゼの製造方法
SU1622397A1 (ru) Способ получени бактериального лектина, специфичного к сиаловым кислотам
JPH0248231B2 (ja) Shinkikishiranaazeoyobisonoseizoho
RU1804479C (ru) Способ получени культуральной жидкости SеRRатIа маRсеSсеNS, обладающей хитиназной активностью
JPS6349097A (ja) イプシロン−ポリ−l−リシンの製造法
SU1631081A1 (ru) Штамм бактерий ЕSснеRIснIа coLI RFL - продуцент рестриктазы Е со 105I
SU1406160A1 (ru) Способ получени эндонуклеазы рестрикции Fок1 из FLаVовастеRIUм океаNокоIтеS
JPS63156597A (ja) 廃水処理方法
RU1692144C (ru) Способ получения вещества, обладающего литическим действием
JPH0530968A (ja) 新規プロリンジペプチダーゼおよびその製造法
JPH03172190A (ja) 有機代謝産物の採取方法
RU2104014C1 (ru) Состав питательной среды для роста бифидобактерий
SU1095645A1 (ru) Способ получени эндонуклеазы рестрикции