RU1804479C - Способ получени культуральной жидкости SеRRатIа маRсеSсеNS, обладающей хитиназной активностью - Google Patents

Способ получени культуральной жидкости SеRRатIа маRсеSсеNS, обладающей хитиназной активностью

Info

Publication number
RU1804479C
RU1804479C SU914907003A SU4907003A RU1804479C RU 1804479 C RU1804479 C RU 1804479C SU 914907003 A SU914907003 A SU 914907003A SU 4907003 A SU4907003 A SU 4907003A RU 1804479 C RU1804479 C RU 1804479C
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
serratia marcescens
chitinase activity
source
chitinase
hours
Prior art date
Application number
SU914907003A
Other languages
English (en)
Inventor
Дельбэр Вафовна Юсупова
Ольга Васьяновна Порфирьева
Розалина Борисовна Соколова
Елена Владимировна Трухина
Ирина Павловна Тюлина
Ольга Сергеевна Синявина
Владимир Иванович Гребеньков
Сергей Юрьевич Ожерельев
Original Assignee
Дельбэр Вафовна Юсупова
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Дельбэр Вафовна Юсупова filed Critical Дельбэр Вафовна Юсупова
Priority to SU914907003A priority Critical patent/RU1804479C/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU1804479C publication Critical patent/RU1804479C/ru

Links

Landscapes

  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Abstract

Использование: биотехнологи , касаетс  способа получени  культуральной жидкости Serratia mercescens с хитиназной активностью. Хитиназа (К.Ф. 3. 2.1.4) может быть использована дл  биоконверсии хи- тинсодержащих отходов в белок одноклеточных дрожжей, борьбы с насекомыми и патогенными грибами, вредител ми сельскохоз йственных растений, как биохимический реагент в лабораторной практике. Сущность изобретени : осуществл ют культивирование мутантного штамма Serratia marcescens ВКПМ В-4870 на среде, содержащей , г/л: цитрат аммони  5,0; глицерин 5,0; К2НРО« 10,0; MgS04«7H20 0.5; NaCI 0,5; FeO/jO,025; кукурузный экстракт 2,5; рН среды 7,6 в течение 24 ч при 30°С с аэрацией. 1 табл. fe

Description

Изобретение относитс  к биотехнологии и касаетс  получени  ферментов хити- наз, в частности хитиназы Serratia marcescens (К.Ф.3.2.1.4), котора  может быть использована дл  биоконверсии хи- тинсодержащих отходов в белок одноклеточных дрожжей, борьбы с насекомыми, патогенными грибами и нематодами, вредител ми сельскохоз йственных растений, в качестве биохимического реактива при количественном и качественном определении хитина в составе клеточной стенки грибов и других биологических объектов, дл  разрушени  клеточной стенки грибов.
Целью изобретени   вл етс  повышение активности и упрощение способа.
Поставленна  цель достигаетс  тем, что мутантный штамм S. marcescens 28-13 (коллекционный номер ВКПМ В-4870) выращиваетс  на водной питательной среде, содержащей в качестве источника углерода - глицерин, источник азота - цитрат аммони . источника фосфора - калий фосфорнокислый двузамещенный, источника витаминов - кукурузный экстракт, а также натрий хлористый, магний сернокислый и железо сернокислое. Культивирование проводили на качалке в течение 24 ч при 30°С.
Пример 1. При постановке опытов используют среду следующего состава, г/л: глицерин 5,0; цитрат аммони  5.0; К2НР04 10,0; MgS04 7H20 0,5; NaCI 0.5: FeS04 0,025;
кукурузный экстракт 15 (по сухой массе). рН среды 7,6.
Подготовка посевного материала. Культуру S. marcescens 28-13 выращивают в течение суток в пробирках со скошенным м сопептонным агаром при 30°С. Выросшие клетки смывают 0,5% физиологическим раствором. Полученный таким образом посевной материал засевают в колбы с питательной средой из расчета 0,05 оптических единиц (Дбзо) на мл среды.
Постановка опыта. Посевной материал засевают в конические колбы с 200 мл питательной среды. Отношение объема питательной среды к объему колбы 1:5. Посевы выращивают на качалке (200 об/мин) при 30 С в течение 72 ч. Пробы отбирают через каждые 24 ч. Бактериальные клетки отдел ют центрифугированием при 16000 g в течение 10 мин. В надосадочной жидкости определ ют хитиназную активность и содержание белка по методу Лоури.
Определение хитиназной активности. Хитиназную активность определ ют по количеству образующегос  при гидролизе коллоидного хитина Ы-ацетил-О-глюкоза- мина с динитросалициловой кислотой согласно методике (1).
Инкубационна  смесь объемом 1 мл содержит 0,5 мл 0,1 М фосфатного буфера, рН 6,75; 0,4 мл 1,25% коллоидного хитина, 0,1 мл культуральной жидкости. Реакционную смесь инкубируют при 50°С в течение 30 мин. Затем пробы разбавл ют в 2 раза дистиллированной водой, негидролизованный хитин отдел ют центрифугированием при 7000 об/мин в течение 10 мин, а в надосадочной жидкости определ ют количество N- ацетил-О-глюкозамина. Дл  этого к пробе 1 мл добавл ют равный объем реактива, содержащего динитросалициловую кислоту и нагревают в кип щей вод ной бане в течение 15 мин. Пробы охлаждают и измер ют поглощение при 570 нм. Количество М-аце- тил-О-глюкозамина рассчитывают по калибровочной кривой. За единицу принимают количество фермента, которое при гидролизе коллоидного хитина освобождает 1 мкМ М-ацетил-О-глюкозамина за 1 ч инкубации .
Коллоидный хитин получают согласно известной методике. К 1 г тонко размолотого хитина добавл ют последовательно 5 мл ацетона и 30 мл концентрированной сол ной кислоты при посто нном перемешивании . Полученную однородную смесь фильтруют через стеклоткань так, чтобы фильтрат поступал в колбу, содержащую 1,5 л 30%-ного этанола при посто нном перемешивании . Через 2 ч хлопь  коллоидного хитина отдел ют центрифугированием при 3000 g 30 мин и отмывают от кислоты дистиллированной водой до нейтрального рН.
Коллоидный хитин дополнительно гомогенизируют , диализуют в течение суток против воды и используют в опытах.
Уровень хитиназной активности через 24 ч выращивани  равн лс  117 ед. через 48
ц 122 ед. через 72 ч 123 ед. Таким образом. высокий уровень хитиназной активности в культуральной жидкости достигаетс  на 24 ч культивировани  и практически не увеличиваетс  в процессе дальнейшего выращивани  бактерий в течение 72 ч.
Уровень хитиназной активности, равный 117-127 ед на мл культуральной жидкости , в 2,2 раза превышает хитиназную активность, полученную ранее (прототип).
Сравнительные данные хитиназной активности S. marcescens, полученные различными авторами при использовании разных способов, суммированы в таблице.
Таким образом, предлагаемый нами
способ получени  культуральной жидкости S. marcescens с хитиназной активностью позвол ет на более простой среде, не содержащей хитина, за более короткое врем  ферментации получить вдвое большее количество хитиназы. Штамм 28-13 внедр етс  в производство как высокопродуктивный продуцент эндонуклеазы. Предлагаемый способ получени  культуральной жидкости с хитиназной активностью с использованием штамма 28-13 не требует изменений в технологическом процессе при его внедрении в производство.

Claims (1)

  1. Формула изобретени 
    Способ получени  культуральной жидкости Serratia marcescens, обладающей хитиназной активностью, предусматривающий культивирование в услови х аэрации и
    перемешивани  штамма продуцента на водной питательной среде, содержащей источники углерода, азота, витаминов, фосфора и сернокислый магний, отличающий- с   тем, что, с целью повышени  активности
    и упрощени  способа, в качестве продуцента используют штамм Serratia marcescens ВКПМ В-4870, культивирование ведут в течение 24 ч на среде, дополнительно содержащей хлористый натр ий, сернокислое
    железо, в качестве источника углерода - глицерин, источника азота - цитрат аммони , источника фосфора - фосфорнокислый двузамещенный калий и источника витаминов - кукурузный экстракт
    Примечание. М-АГА-М-ацетил-О-глюкозамин.
SU914907003A 1991-01-02 1991-01-02 Способ получени культуральной жидкости SеRRатIа маRсеSсеNS, обладающей хитиназной активностью RU1804479C (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SU914907003A RU1804479C (ru) 1991-01-02 1991-01-02 Способ получени культуральной жидкости SеRRатIа маRсеSсеNS, обладающей хитиназной активностью

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SU914907003A RU1804479C (ru) 1991-01-02 1991-01-02 Способ получени культуральной жидкости SеRRатIа маRсеSсеNS, обладающей хитиназной активностью

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU1804479C true RU1804479C (ru) 1993-03-23

Family

ID=21558144

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SU914907003A RU1804479C (ru) 1991-01-02 1991-01-02 Способ получени культуральной жидкости SеRRатIа маRсеSсеNS, обладающей хитиназной активностью

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU1804479C (ru)

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Чигалейчик А.Г., Пириева Д.А. и Рыбкин . С.С., Хитиназа Serration marcescens ВКМВ-851. - Прикладна .биохими и микробиологи , .1976, Т. 12. вып. 4, с. 581-586. Roberts R.L. СаЫЬ Ё. Serratia marcescens Chltlnaze: one - step purification and use for the determination of chltln. Annal. Biochem, 1982, v. 127, № 2, p. 402-412. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Koepsell et al. Enzymatic synthesis of dextran
CN107488615B (zh) 一株高产脂肪酶的假单胞菌及其发酵产酶方法
EP0752470B1 (de) Verfahren zur Massenkultivierung von Ciliaten
JPH0670754A (ja) シュードモナス・アエルギノーザおよびl−ラムノースのバイオテクノロジー的製造方法へのその使用
US4985364A (en) Preparation of cyclopropanecarboxylic acids
JPS6156086A (ja) α−オキシ酸およびその塩の微生物学的製造法
DE69738080T2 (de) Biokatalysatoren mit amin-acylase aktivität
US2978384A (en) Method for the production of 1-glutamic acid
SU521849A3 (ru) Способ получени цефалоспорина с
RU1804479C (ru) Способ получени культуральной жидкости SеRRатIа маRсеSсеNS, обладающей хитиназной активностью
EP0343330A2 (en) Biotransformation of L-tyrosine and L-phenylalanine to 2,5-dihydroxyphenylacetic acid
DE2811303B2 (de) Enzymatisch* Komplexe, die zur Umwandlung racemischer Hydantoine in optisch aktive Aminosäuren geeignet sind, sowie deren Anwendung
RU1773939C (ru) Способ получени культуральной жидкости SеRRатIа маRсеSсеNS, обладающей хитиназной активностью
JPS58152496A (ja) バリエナミンおよびバリダミンの製造法
US3589982A (en) Production of l-asparaginase
SU1090261A3 (ru) Способ получени биомассы базидиомицетов
JP2001517429A (ja) 繊毛虫(原生動物)の連続大量培養を用いた生物由来の貴重物質を生産する発酵法
DE4316646A1 (de) Lävansucraseenzym, Verfahren zu dessen Herstellung, Mikroorganismen, die es produzieren und Zusammensetzungen, die es enthalten
RU2627182C1 (ru) Штамм Aneurinibacillus migulanus и его применение для получения грамицидина С
SU1263711A1 (ru) Питательна среда дл выделени и отбора бактерий-продуцентов протеазы
RU2104014C1 (ru) Состав питательной среды для роста бифидобактерий
SU1705338A1 (ru) Штамм дрожжей CaNDIDa ReQUINII - продуцент алкогольдегидрогеназы
SU577229A1 (ru) Способ получени гексокиназы
SU1652341A1 (ru) Штамм бактерий РSеUDомоNаS SтUтZеRI - продуцент рестриктазы PSU I
RU2044052C1 (ru) Штамм культивируемых клеток растений eritrichium incanum (turcz.) a.dc.ssp. sichotense (m.pop.) starchenko, используемый для получения препарата, обладающего хитиназной и хитозаназной активностью