SU1622397A1 - Способ получени бактериального лектина, специфичного к сиаловым кислотам - Google Patents

Description

1

(21)4471130/13

(22)01.08.88

(46) 23.01.91. Бкш. I. 3

(71)Институт микробиологии и вирусологии им. Л.К.Заболотного

(72)В.С.Подгорский, Э.А.Коваленко, И.А.Симоненко и В.М.Лахтин

(53)547.9(088.8)-

(56)Лахтин В.М.Лектины в исследовании белков и углеподов./Итоги науки и техники, ВИНИТИ: Биотехнологи , 1987, с. 288.

Бондарчук А.А., Ажмцкий Т.Ю. Характеристика ферментативного комплекса из Вас.mesentericus.-Микробиологический журнал, 1981, 40, 6,с.687-690.

(54)СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БАКТЕРИАЛЬНОГО ЛЕКТИНА, СПЕЦИФИЧНОГО К СИАЛОВЬт КИСЛОТАМ

(57)Изобретение относитс  к микро- биологической промышленности,а именно

к способу получени  бактериального лек- тина, специфичного к сиаловым кислотам . Цель изобретени  - упрощение способа получени  бактериального сиало- специфического лектина, а также увеличение выхода целевого продукта. Сущность изобретени  заключаетс  в том, что, в качестве источника сырь  используют непатогенную культуру Baccil- lus mesentericus ВКПМ В-2466, способную синтезировать внеклеточные сиало- специфичные пектины. Продуцент выращивают в течение 14-16 ч глубинным способом на полусинтетической среде с биостимул тором - лвтолизатом из пивных дрожжейi Целевой продукт с выходом 46,8-602 получают осаждением культуралыюй жидкости сульфатом аммони  при насыщении 60-70%, диализом и хран т в замороженном состо нии при -10°С. 1 з.п.ф-лы.

2

(Л

с

Изобретение относитс  к микробиологической промышленности, а именно к способу получени  бактериального лек- тина, специфичного к сиаловым кислотам .

Цель изобретени  - повышение выхода целевого продукта и упрощение способа.

В качестве источника сырь  используетс  непатогенна  культура Baccil- lus mesentericus ВКПМ В-2466, у которой обнаружена способность к биосинтезу внеклеточных сиалоспецифичных лектинов. Продуцент выращиваетс  глубинным способом на среде, содержащей в качестве биостимул тора предпочтительно автолизат из пивных дрожжей , что сокращает врем  культивнро- вани  до 14-16 ч по сравнению с 21- 24 ч выращивани  на среде, содержащей автолизат из хлебопекарских дрожжей . Препарат выдел ют осаждением сернокислым аммонием при насыщении 60-70% и очисткой диализом, хран т в замороженном состо нии при -10 С. Выход целевого продукта 46,8% - 60%. Пример 1. Бактерии Bacil- kus mesentericus ВКЛМ В-2466 выращивают глубинным способом на качалках (160 об./мин) в течение 21-24 ч при 37°С в колбах Эрленмейера со 100 мл питательной среды следующего

состава, г/л: желатин 10,0, КНгРО 1,6, MgS04 0,75, ZnS04 0,25, FeSO4 l7HeO 0,02, Nad 0,02, (NH4)2 S04 0,05, CaCl2 0,08, мальтоза 1,0, an- толизат из хлебопекарских дрожжей 1,5. Бактериальную биомассу отдел ют центрифугированием при 6000 g в течение 20 мин. К культуральной жидкости (1 л) прибавл ют 242,03 г (NH4)4S04 №0% насыщени ) и оставл ют на ночь при 4°С. Выпавший хлопьевидный осадок отдел ют центрифугированием при 6000 g в течение 25 мин, раствор ют в 5 мл дистиллированной воды и диализуют 6-8 ч против водопроводной воды при комнатной температуре , затем ночь - против дистиллированной воды при А°С, осадок отдел ют центрифугированием при 8000 в в течение 15 мин, супернатант хран т в замороженном состо нии при -10еС. Выход целевого продукта по активности 2,6%.

Пример 2. Услови  выращива- ни , питательна  среда и выделение бактериального лектина аналогичны приведенным в примере 1, за исключением сульфата аммони , используемого дл  осаждени  препарата: на 1 л культуральной жидкости (КЖ) 390,0 г ( (60% насыщени ). Выход целевого продукта по активности 16,1%

Пример 3. Услови  выращивани , питательна  среда, выделение бактериального лектина такие же, как в примере 1, за исключением количества сульфата аммони , используемого дл  осаждени  лектина: на 1 л КЖ добавл ли 472,0 г (NH4) (70% насыщени ). Выход целевого продукта по активности 33,0%.

Пример 4. Услови  культивировани  продуцента и выделение лектина (40% насыщени  сульфатом аммони ) аналогичны приведенным в примере 1 В питательной среде в качестве биостимул тора вместо автолиэата из .

хлебопекарских дрожжей использовали автолизат из пивных дрожжей из такого же расчета. На 14-16 ч роста продуцента из культуральной жидкости (после отделени  биомассы) проводили выделение сиалоспецифичного лектина, как описано в примере 1. Выход целевого продукта по активности 2,2%.

Пример 5. Услови  выращивани  и питательна  среда с автолиза- том из пивных дрожжей аналогичны приведенным в примере 4. Дл  осаждени  препарата из 1 л КЖ использовали 390,0 г сернокислого аммони  (60% насыщени ). Выход целевого продукта по активности 46,8%.

Пример 6. Услови  выращивани  и питательна  среда с автолизатом из пивных дрожжей такие же, как и в примере 4. Дл  осаждени  сиалоспецифичного бактериального лектнна из 1 л ЮК использовали 472,0 г сернокислого аммони  (70% насыщени ). Выход целевого продукта по активности 60%.

Claims (2)

1.Способ получени  бактериального лектина, специфичного к сиаловым кислотам, включающий выращивание бактериальной культуры-продуцента глубиным методом на питательной среде с биостимул торами, отделение биомассы , осаждение препарата сернокислым аммонием и очистку диализом, отличающийс  тем, что, с целью повышени  выхода целевого продукта и упрощени  способа, в каче- |стве культуры-продуцента используют штамм бактерий Bacillus mesenteri- cus ВКПМ В-2466.

2.Способ по п. 1, отличающийс  тем, что при осаждении используют сернокислый аммоний при степени насыщени  60-70%.