SU1565888A1 - Способ получени кератиназы - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к получению препаратов кератиназы и может быть применено в микробиологической промышленности, биохимии микроорганизмов и медицине. С целью сокращени  времени ведени  процесса и увеличени  выхода кератиназы в качестве продуцента используют STREPTOMYCES CHROMOGENES S. GRAECUS ЛИА 0832, культивирование которого осуществл ют на питательной среде, содержащей минеральные источники азота и углерода и воду, при начальном значении PH от 10 до 11. Предлагаемый способ получени  кератиназы позвол ет повысить выход фермента в 11 раз (34 ед/мл) и сократить врем  культивировани  с 9 сут. до 48 ч по сравнению с известным способом. 1 табл.

Description

Изобретение относитс  к получению препаратов кератиназы и может быть применено в биотехнологии, биохимии микроорганизмов, медицине.

Целью изобретени   вл етс  увеличение выхода фермента и сокращение времени ведени  процесса культивировани .

Способ культивировани  Strepto- myces chromogenes S.g. ЛИА 0832 осуществл ют следующим образом.

В среде состава, мае.%: картофельный крахмал 50; соева  мука 5; перо 10, углекислый кальций 4j фосфорнокислый калий однозаметенныл О,Я, сульфат железа 0,01; сульфат цинка 0,02; водопроводна  вода остакыюр. довод т величину рН 1 н. нртрмм до 10,0-11,0. Затем стерилизуют при давлении 0,1 МП а в течение 1 о. После охлаждени  засевают 5% 48-часового посевного материала Stropto- myres chromogeres S.g. JIJIA 0832 и культивируют в колбах объемом мм, содержащих по 100 мл среды на ю- чалке (220 об/мин) при 2/°Г в TI u - ние 48 ч. Конечное значение рН К - 6,8.

СП

о

СП

ос

00

оо

За единицу протеолигической ак- вности принимают такое количество ермента, которое за 1 мин при 30°С атализирует переход в неосаждаемое ГХУ состо ние количество казенна, содержащее микроэквивалент тирозина. За единицу кератиназной активности принимают такое количество фермента , которое в результате протеоли- за 200 мг кератина при 37°С в течение 3 ч в присутствии 5 мл О,Ш бо- ;затного буфера рН 9,2, 0,5 мл хлорида магни  и дистиллированной воды (дл  доведени  объема до 10 мл) дает повышение оптической плотности опытных проб над контрольными, равное 0,1, при измерении на спектрофотометре ( Л 280 ммк)„

Пример 1. Продуцент кера- иназы S.chromogenes S.g. ЛИА 0832 ыращивают в течение 11 сут при на™ альном значении рН 7,8. Протеолити- еска  активность через 11 сут со- тавл ет 0,142 ед/мл, а кератиназна  равна нулю.

Пример 2. S.chromogenes S.g ЛИА 0832 выращивают 48 ч, Протеоли™ ическа  активность составл ет 0,158 ед/мл, а кератиназна  0,8 ед/мл Услови  культивировани  аналогичны примеру 1.

Пример 3. S.chromogenes S.g ЛИА 0832 выращивают 120 ч. Услови  культивировани  аналогичны примеру 1 Протеолитическа  активность 0,996 ед/мл, кератинаэыа  1,1 ед/мл.

Пример 4. S.chromogenes S.g ЛИА 0832 выращивают 120 ч при начальном значении рН 9. Протеолитическа  активность 1,956 ед/мл, кератиназна  2,1 ед/мл.

Пример 5. S.chromogenes S0g ЛИА 0832 выращивают 120 ч при началь

Q 5

5

°

0

5

ном значении рН 10. Протеолитическа  активность 2,622 ед/мл, кератиназна  2,7 ед/мл.

Пример 6. S.chromogenes S.g. ЛИА 0832 выращивают 120 ч при начальном значении рН 11,0. Протеолитическа  активность 3,111 ед/мл, кератиназна  8 ед/мл.

Пример 7. S.chromogenes S.g. ЛИА 0832 выращивают 48 ч при начальном значении рН 11,0. Протеолити- ческа  активность 6,044 ед/мл, кера-, тиназна  34 ед/мл.

В таблице представлены результаты , показывающие преимущества предлагаемого способа по сравнению с известным .

Выращивание S.chromogenes S.g. ЛИА 0832 в предлагаемых услови х повышает пратеолитическую активность в 5,2 раза, а кератиназную в 11,3 раза по сравнению с известным способом и сокращает врем  выращивани  на 9 сут.

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   Способ получени  кератиназы, предусматривающий культивирование - продуцента на питательной среде, содержащей минеральные соли, источники углеродного и азотного питани  и воду , при оптимальной температуре до достижени  максимальной активности фермента, отличающийс  тем, что, с целью повышени  выхода фермента и сокращени  времени ведени  процесса, в качестве продуцента используют штамм актиномицета Strep- tomyces chrotnogenes S. graecus ЛИА 0832, а культивирование осуществл ют при начальном значении рН 10-11.