SU1561826A3

SU1561826A3 - Способ получени карбоциклических пуриновых нуклеозидов

Info

Publication number: SU1561826A3
Application number: SU874202204A
Authority: SU
Inventors: Танияма Йесио; Хамана Такуми; Марумото Риюдзи; Ямамото Наоки
Original assignee: Такеда Кемикал Индастриз Лтд (Фирма)
Priority date: 1986-03-06
Filing date: 1987-03-05
Publication date: 1990-04-30
Also published as: CS151787A2; JPS6310787A; DD255351A5; CS264290B2; KR870008911A

Abstract

Изобретение относитс к получению карбоциклических пуриновых нуклеозидов формул I и II @ , где Y - пуриновое основание аденин-9-ил, гуанин-9-ил, обладающих противовирусной активностью. Цель - разработка способа получени соединений, обладающих активностью против вирусов РНК. Получение ведут тиокарбонилированием в положении 2Ъ или 3Ъ соединени формулы II, где Y указано, а имеющиес в пуриновом основании амино- и гидроксигруппы защищены один из R₁ и R₂ - OH, а другой - H, при комнатной температуре с последующим восстановлением гидридом трибутилолова в присутствии L,LЪ - азобисизобутиронитрила при 80-100°С и сн тием защитных групп.

Description

ел

о

Изобретение относитс к способу получени новых нуклеозидных аналогов , имеющих циклопентановое кольцо, а именно карбоциклических пуриновых нуклеозидов общей Лормулы

HO-f s-y

nJlf

,f V-/of

где Y - пуриновое основание аденин- 9-ил, изанин-9-ил, обладающих противовирусной активностью .

Цель изобретени - получение новых дидезоксинуклео идных аналогов, обладающих активностью против вирусов РНК.

Пример 1 (ссылочный). Синтез 9-(1R, 2S, TR, 4Ю-4-м тил-2-гидро- ксил-3,6-(тртраизогфопилдисилоксанил) диоксициклоирнт.чн-1 -ил гипоксантина.

С-аналог инозина (10 г 37,5 ммоль) раствор ют в 200 мл безводного днме- тилформамида, добавл ют 1,3-дихлор1 ,1 ,3,3-тетраизопропилдисилоксан

(13 мл, 41 ммоль) и имндазол (11,3 г,

00

ю

О5

О4

165 ммоль) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2,5 ч. Реакционную смесь по капл м добавл ют к 2 л воды, осадок собирают фильтрацией , промывают водой, далее быстро промывают диэтиловым эфиром, сушат и получают указанное в заглавии примера соединение в виде белого порошка (17,2 г). Часть полученного продукта перекристаллизовывают из дихлорметана и получают кристаллы, т.пл. 135-138°С

С-аналог инозина известен из Chemical and Phormaceutical Bulletin 24, 2624 (1976).

II p и м е р 2 (ссылочный). Синтез 9-(1R, 2S, 3R, 4К)-4-метил-2-фено- кситиокарбонилокси-3,6(тетраизопро пилд исилоксанил)диоксициклопентан- t-ил гипоксантина.

Соединение, полученное в ссылочном примере 1 (11,2 г, 22,3 ммоль), раствор ют в 300 мл безводного ацетонит- рила, добавл ют диметиламинопиридин (15,8 г, 53,5 ммоль) и фенокситиокар- бонилхлорид (5 г, 29 ммоль) и смесь перемешивают при комнатной температуре 7 ч. Растворитель удал ют при пониженном давлении, а остаток раствор ют в 250 мл хлороформа. Раствор промывают 0,5 М раствором первичного кислого фосфорнокислого кали (250 мл 2 раза), а затем водой (200 мл), сушат безводным сульфатом натри и концентрируют при пониженном давлении. Получают сироп желтого цвета. Его очищают хроматографией на силикагеле (90 г, растворитель: хлороформ и смесь хлороформа с метиловым спиртом в отношении 60:1) и получают указанное в названии примера соединение в виде стеклоподобного вещества светло-желтого цвета (13,0 г).

Спектр ЯМР (60 МГц, , м.д. 1,0-1,23 (28Н, м); 2,13-2,43 (ЗК, м, Н41, Н5);,3,93-4,10 (2Н, м, Kj); 4,80-5,20 (2К, м, н{ , Н1,) ; 6,00-6,20 (Н, м, Н ); 7,03-7,50 (5Н, м); 7,87 (1Н, с);„8,13 (1Н, с).

II р и м е р 3 (ссылочный)-. Синтез 9(1R, 3S, 4К)-4-метил-3,6-(тет- раизопропилдисилоксанил)диоксицикло пентан-1-ил гипоксантина.

Безводный толуол (30 мл) добавл ют к соединению, полученному в ссылочном примере 2 (13,0 г, 20 ммоль), с последующим концентрированием при пониженном давлении. Остаток раствор ют в 300 мл безводного толуола и

5

0

5

0

5

0

5

0

5

газообразный азот барботируют в раствор в течение 20 мин. После добавлени гидрида трибутилолова (11 мл, 40 ммрль) раствор нагревают при 80°С и добавл ют кристаллический oi ,0 -азо- бисизобутиронитрил (АИБН) (820 мг) четырьм част ми с 15-минутными интервалами . После 3 ч нагревани при перемешивании растворитель удал ют при пониженном давлении. Полученное масло очищают хроматографией на сили- кагеле (80 г, растворитель: хлороформ и смесь хлороформа с метиловым спиртом в соотношени х 60:1 - 30:1) и получают указанное в названии примера соединение в виде бесцветного стеклоподобного вещества (10,4 г). Перекристаллизацией части полученного продукта из этилового спирта получают бесцветные иглы5 т.пл. 200-202 С.

Спектр ЯМР (60 МГц, CDC13), м.д.: 0,93-1,20 (28Н, с); 1,97-2,53 (5Н, м, Н, Н, ф; 3,80-4,07 (2К, м, Н6); 4,43-5,27 (2Н, м, Н, НГ3); 7,87 (1Н, с); 8,20 (1Н, с).

II р и м е р 4 (ссылочный) . Синтез 9-(1R, 3R, 4R)-4-(MOHOMeTOKcn- тркфенилметилокси)-метил-3-гидро- ксилциклопентан-1-ил -(1-метоксиме- тил)гипоксантина.

Соединение, полученное в ссылочном примере 3 (19,8 ммоль), раствор ют в 240 мл безводного диоксана и к раствору быстро добавл ют гидрид натри (880 мг, 21,8 ммоль) при охлаждении льдом и перемешивании, а затем смесь перемешивают при комнатной температуре 1,5 ч. После этого быстро добавл ют к смеси метоксиметилхлорид (2 мл, 21,8 ммоль) при охлаждении льдом. Всю смесь перемешивают при . комнатной температуре 3 ч.

Растворитель удал ют при пониженном давлении, а масл ный остаток раствор ют в 200 мл хлороформа. Раствор промывают буфером 0,1 М бикарбоната триэтиламмони (ТЭАВ) (рН 7,5, 2 раза по 100 мл) и далее водой (200 мл), сушат безводным сульфатом натри и концентрируют при пониженном давлении. Полученный сироп очищают хроматографией на силикагеле (колонка 5,3x7,0 см, растворитель: ацетонова вода, 55 - 80%), что дает бесцветное стеклоподобное соединение (8,5 г).

Это соединение (8,0 г) раствор ют в 32 мл тетрагидрофурача (ТГФ) и добавл ют тригидрат фтористого тетраб у- тиламмони (ТБАо ЗК20) (10 г) и смесь перемешивают при комнатной темпера-1 туре полчаса. Растворитель удал ют при пониженном давлении, а оставшеес масло раствор ют в 100 мл воды. Раствор промывают диэтиловым эфиром (2 раза по 100 мл) и из него устран ют соль тетрабутиламмони обработкой ю на ионообменной смоле Доуэкс-50 (пиридинова форма, 60 мл) .

Элюент и промывочные воды (240 мл) объедин ют и концентрируют, а концент 15 рат обезвоживают азеотропно трем порци ми пиридина. Остаток раствор ют в 100 мл пиридина, добавл ют хлористый монометокситрифенилметил (ММТФМХ) (5,4 г) и смесь перемешивают при 20 37 С 4 ч. Растворитель удал ют при пониженном давлении, а масл ный остаток распредел ют в 0,1 М буферном растворе бикарбоната триэтиламмони (50 мл) и в хлороформе (100 мл), ор- 25 ганический слой промывают водой (100 мл), сушат безводным сульфатом натри и концентрируют при пониженном давлении, а концентрат обезвоживают азеотропной дистилл цией с то- 30 луолом. Получают бесцветный сироп. Фракцию 0,1 М буфера бикарбоната триэтиламмони и промывочные воды объедин ют и концентрируют, при этом восстанавливают монометокситрифенилме- 35 тилированное соединение. Это соединение очищают на смоле НР-20 (190мл; растворитель: вода и 30%-на смесь этанол - вода) и после концентрировани и азеотропной дистилл ции с пи- 40 ридино м монометокситрифенилметилируют аналогично описанному. Оба полученных при этом соединени объедин ют, очищают хроматографией на силикагеле (80 г; растворитель: смесь хлорофор- 45 ма и метанола в отношении 100:1, 60:1, 50:1) и получают бесцветный стекловидный продукт (6,1 г). Раствор части этого продукта в дихлорметане, если его приливать по капл м к н-гексану, 50 дает белый порошок.

Спектр ЯМР (60 КГц, CDC1,) Ј , м.д., 1,87-.,70 (5Н, м, Н, Н 4, Н 5); 3,20- 3,40 (2H, м, Hg); 3,45 (ЗН, с, СНЭОСН2); 3,80 (ЗН, с); 4,30-4,57 55 (1Н, м, К3); 4-87-5,10 (1Н, м, Н,); 5,47 (2Н, с, CH,OCHZ); 6,73-6,9.7 (2Н, м); 7,17-7,53 (12Н, м); 7,73 (1Н, с); 7,98 (1Н, с).

II р и м е р 5 (ссылочный) . Синтез 1-(1R, 3S, 4К)-4-(монометокситрифе : нилметилокси)метил-3-оксициклопентлн- 1-шГ)-(4-карбамолил 5-аминоимидазола)

Соединение, полученное в ссылочном примере 4 (6,1 г, 10,7 ммоль) раствор ют в 490 мл этилового спирта и при нагревании с обратным холодильником быстро добавл ют .теплый 5 М водный раствор гидроокиси натри (130 мл). Нагревание с обратным холодильником продолжают дополнительно 40 мин. Затем растворитель удал ют при, пониженном давлении. Масл ный остаток раствор ют в 200 мл хлороформа и промывают водой (2 раза по 100 мл), затем 0,1 М буфером бикарбоната триэтиламмони (2 раза по 100 мл) vL далее насыщенным водным раствором хлористого натри (100 мл), сушат безводным сульфатом натри , концентрируют при пониженном давлении и получают сироп. Очисткой этого сиропа хроматографией на силикагеле (90 г; растворитель: смесь хлороформетанола в соотношении 100:1 - 20:1) получают бесцветный стеклоподобный продукт (3,2 г). Раствор части этого продукта в хлороформе, добавл емый по капл м к н-пентану при перемешивании, дает белый порошок. Мол. вес 521,616.

Вычислено, %: С 69,08; Н 6,38; N 10,74.

С30НзгК404-0,5НгО.

Найдено, %: С 69,14; Н 6,09; N 10,54.

Спектр ЯМР (100 МГц, CDC13)Ј , м.д.: 1,36-2,52 (5Н, м); 3,00-3,40 (ЗН, м, Kg, ОН); 3,77 (ЗН, с); 4,12- 4,60 (2Н, м, Н{, К э); 4,80-5,28 (2И, ш. с, Нг); 5,64-6,44 (2Н, ш.с, К2); 6,76-6,94 (ЗН, м); 7,15-7,48 (12Н, м; ш.с) .

Пример 6 (ссылочный). Синтез 1-Ј(1R, 3S, 4К)-4-(монометокситрифе нилметилокси)-метил-3-оксициклопен- тан-1-ил}- 4-карбамоил-5-(К-бензоил- S-метилизотиокарбамоил)аминоимида- , зола.

Соединение, полученное в ссылочном примере 5 (0,88 г, 1,7 ммоль) раствор ют в 25 мл безводного ацетона и при нагревании с обратным холодильником в течение более 10 мин по капл м добавл ют раствор бензоилизотиоциана- та (260 мкл, 1,9 ммоль) в ацетоне (8 мл). Растворитель удал ют при пониженном давлении, а полученное стекловидное вещество светло-желтого цве та очищают хроматографией на с&пнка- геле (15 г, растворитель: смесь хло- роЛорма и метилового спирта в отноше- нии 50:1 - 30:1) и получают светло- желтое стекловидное соединение (0,87 г). К этому соединению (0,84 г 1,2 ммоль) добавл ют небольшое количество ацетона и полученный сироп JQ превращают в гомогенный раствор бавлением 12,5 мл 0,2 н. гидроокиси натри и воздействием ультразвука. При перемешивании добавл ют диметил- сульфат (130 мкл, 1,4 ммоль), затем 15 энергичное перемешивание продолжают при комнатной температуре 1 ч, Реакционную смесь смешивают по част м с хлороформом (хлороформ добавл ют два раза по 15 мл), органический слой 2Q промывают 0,1 М буфером бикарбоната триэтиламмони (3 раза по 15 мл), затем насыщенным водным раствором хлористого натри (20 мл), сушат безводным сульфатом натри , концент- 25 рируют при пониженном давлении, а остаток очищают хроматографией на силикагеле (15 г, растворитель: смесь хлороформа и метилового спирта в отношении 100:1 - 60:1). К полученному 30 таким образом стекловидному веществу добавл ют небольшое количество ди- хлорметана, смесь по капл м добавл ют к гексану полученный осадок собирают центрифугированием, сушат и полу- « чают целевое соединение в виде порошка (400 мг). Мол. вес. 689,835.

Вычислено, %: С 67,90; Н 5,70; N 10,15.

)N50S..40

Найдено, %: С 67,45; Н 5,45; N 9,89.

Спектр ЯМР (100 МГц, CDC1,), м.д.: 1,34-2,60 (5Н, м); (2,52 (ЗН, с, S СН3); 3,04-3,44 (ЗН, м, Hg); 3,79 45 (ЗН, с, ОСН3); 4,08-4,44 (1Н, м, Н ); 4,60-5,00 (1Н, м, HJ); 5,64 (1Н, ш.с, ШЦ); 6,72-6,94 (ЗН, м) J 7,12-7,52 (15 Н, м); 7,80-7,96 (2К, м); 11,35 (1Н, ш.с, NH).50

II р и м е р 7 (ссылочный). СИИТРЧ 9-(1R, 3S, 4К)-4-монометокситрифенил метилоксиметил-З-оксициклопентан-1- ил гуанина.

Соединение, полученное в ссылочном « примере 6 (360 мг, 053 ммоль) добавл ют к теплому 6 н. раствору гидроокиси натри (18 мл) и смесь нагревают с обратным холодильником 1 ч. Продукт экстрагируют из реакционной смеси хлороформом, экстракт промываю 0,1 н, буфером бикарбоната триэтиламмони (30 мл), затем насыщенным водным раствором хлористого натри (30 мл), сушат безводным сульфа том натри и подвергают хроматографи на силикагеле (8 г, растворитель: смесь хлороформетилового спирта в отношении 40:1 - 6:1). К полученному таким образом стеклообразному веществу добавл ют небольшое количество ацетона, смесь по капл м добавл ют к бензолу, полученный осадок собираю центрифугированием, сушат и получают целевое соединение (указанное в названии примера) в виде п рошка (210 мг). М( .. вес. 55 S .

Вычислено, л: С и/,Г 5,99; N 12,60.

С„ HMN40, 1, .,0,

Найдено, % ( 6/,О , т 5,; N 12,42.

Спектр ЯМР (100 МГ димешлсуль- Локсид - dg) u , м.д. О- ,60 (5Н, м); 3,01 (2К, ш. с); J,Q 4,20 (1Н,м 4,70 ч,96 UH, м); 6,3/ и1 , с. МНг); Ь,82-7,46 (4Н, к- , - с, Н8); 10,60 ОН, ь.с МП .

Пример8 (с.ьш з 9-(1R, 3S, 4К)-4 оксиметил-°-ок.и циклопентан-1 ил -гуанина.

Соединение, полученное в с ном примере 7 (180 мг, 0,33 MMCjib/, раствор ют в 10 мл 80%-ной уксуси кислоты, раствор перемешивают при 40 С в течение 4,5 ч. Растворитель удал ют при пониженном давлении и далее два раза провод т азеотропн ю дистилл цию с водой. Добавл ют воду (10 мл), смесь промывают эфиром (два раза по 10 мл) и удал ют воду при пониженном давлении, получают указанное в названии примера соединение в виде бесцветных кристаллов (41 мг)

т.пл. 246-248°С./о «4,7 (,5, диметилформамид), Д макс (нанометры)

(Н40): 255, 278 (изгиб пика);

(Н): 257,282;.

(ОН): 256 (изгиб) 273.

Мол. вес, 278, 886,

Вычислено, %: С 48,24; Н 6,00; N 25,11.

С41Н15М5Оэ 0,5 НгО-0,1 . Найдено, %: С 48,61; Н 6,41; N 25,40.

Пример 1. Ы6-бензоил-б -0 (4,4-диметокситрифенилметил)3 -0- (имидазол-1-ил)-тиокарбонил 2 -дезок- сиаристеромицин.

N -бензоил-6 0-(4,4 -диметокси- трифенилметил)-2 -дезоксиаристероми- цин (2,5 г) раствор ют в 10 мл сухого дихлорметана, к раствору добавл ют тиокарбонилдиимидазол (8,0 г) и

смешивают при комнатной темпера-

- 20 ч. Реакционную смесь концент- о суха и подвергают очистке

.. рафией на силикагеле (Kie- i ge. bO, Merck CO, 50 г, раствори- .-it,; тиловый эфир уксусной кислоты) о ./чают стекловидное вещество свет- - -чсе 7того ЦВРТЗ, выход 2,2 г.

Спектр ЯМ (90 МГц, CDC15)Ј , м.д.: 3,80 ,,6Н, S2 СН,0-), 8,35 (1Ы, &, Hg); /о Ом, j, нг).

Пример .. N6-ueH30Hj-6 -0- (4,4 -диметокситрлфенилметил)-2 ,3 - дидезоксиаристеромицин.

Производное 3 -тиокарбонила, полу- ченное в примере 1 (2,0 г), раствор ют в 20 мл сухого диоксана, к полу-, ченному раствору по капл м добавл ют раствор гидрида трибутилолова (4,5 г) в сухом диоксане (10 мл) при нагре- вании с обратным холодильником. Тем временем постепенно добавл ют крис таллы od .oL -азобисизобутилонитрила (500 мг;. Добавление по капл м заканчивают за 20 мин, а нагревание с об- ратным холодильником продолжают 2ч.

Растворитель выпаривают при пониженном давлении, масл ный остаток очищают хроматографией на силикагеле. (40 г, растворитель: хлороформ) и по- лучают бесцветный порошок (1,1 г).

Спектр ЯМР (90 МГц, СВС1Э) , м.д.: 3,80 (6Н, $, 2СКгО-); 4,80-5,20 (Ш, м, Н1,); 3,15 (2Н, д, 2Н6); 8,76 (1НЛ Н4); 9, tO (1H,S,NH-C-).

О

ПримерЗ. 2 ,3 -Дидезоксиаристеромицин .

Соединение, полученное в примере 2 (1jO г), раствор ют в небольшом коли- честве пиридина, к раствору добавл ют 50 мл концентрированной аммиачной воды и нагревают в герметичной трубке , рассчитанной на давление, при 60°С 5 ч. Реакционную смесь концент- рируют досуха, к остатку добавл ют 80%-ную уксусную кислоту (100 мл) и нагревают при 60 С 2 ч с последующей концентрацией реакционной смеси досуха при пониженном давлении. Остаток раствор ют в воде (100 мл) и дважды промывают водой. Водный слой концентрируют досуха, остаток превращают в порошок в эфире и получают 2,3 -ди- дезоксиаристеромицин (0,23 г). Мол. вес 251, 29.

УФ-спектр: Н20 макс (нм) : 260.

Вычислено, %: С 52,57; Н 6,82; N 27,87.

CMH N 0-H20.

Найдено, %: С 52,83; Н 6,95; N 27,54.

Полученный таким образом 2,3 -ди дезоксиаристерог ицин раствор ют в эквивалентной пг весу 1 н. сол ной кислоте . После концентрировани добавл ют этанол и раствор концентрируют досуха .

Эту процедуру повтор ют несколько раз. Остаток лерекристаллизовывают из гор чего э илового спирта и получают кристалла хлористоводородной кислоты, г ill. 173-175°C. Мол.ве 278t 7j.

ВычиЪлено, %: А,40; К 6,15; N 25,12; С1 12,72.

,ц ,0-НС1 0,5 НгО..

Найдено, I: С 47,98; Н 6,06; N 24}84; С1 2,71.

Ul - b,79 (,61, ).

Н р и м е р 4. Соединение, полученное в ссылочном примере 8 (2,5 г) обрабатывают по примерам 1 - 3 и по- лучают кристаллический порошок 9- Л 4R-)-4-оксиметилциклопентан-} - ил гуанидиан (0,3 г), т.пл. 269 С„ Мол. вес 249,27.

УФ А рН 2 макс (нм): 255, 280 (из- гиб пика);

УФ макс (нм): 253,270 (изгиб ) ;

УФ рН 10 макс (нм) : 258 (изгиб) 270.

Вычислено, %: С 53,00; Н 6,07; N 28,10.

с a His()-z.N5-«

Найдено, %: С 52,81; Н 5,86;

N 27,83.

/ci/ f- 4,74 (,57, диметилфор- мамид).

9- Ј(1S, 4R) -4-Оксиметилциклопен- тан-1-ил гипоксантин получают, если вместо N6-6eH30HJi b -0-(4,4 -диметок- ситрифенилмртил)-3 -0-(имидазол-1- ил)-тиокарбонкл -21 -дезоксиаристеро- мицина в примере 1 обрабатывают

изводное гипоксантина способом, по примерам 1 - 3. Мол. вес 234,25.

Вычислено, %: С 56,40; Н 6,02; N -23,92.

С,4Н14К4Ог;

С 56,81 H 6,33;

Найдено, % N 24,52,

II р и м е р 5. 9-(1S, 4К)-4-Окси- метилциклопентан-1-илЗгуанин.

1. Синтез 9-(lR, 3S, 4К)-4-окси- метил-Зтидроксилдиклопентан-1-ил | гипоксантина.

Соединение, полученное в ссылочном примере 3 (12,4 г, 20 ммоль), раство-

р ют в 200 мл толуола и в смесь добавл ют фтористый тетрабутиламмоний (10,46 г,- 40 ммоль) с последующим нагреванием при 75°С 2 ч. Реакционный раствор концентрируют досуха и раст™ вор ют в воде. Раствор подвергают обессоливанию 30 г активированного древесного угл , неочищенный продукт перекристаллизовывают из смеси метилового спирта и этилового эфира и по1 лучают .бесцветные кристаллы (4,6 г), т.пл. 170°С. Мол. вес 268,27.

Вычислено, %: С 49,25; Н 6,01; N 20,88.

СНННК40Э Н„0.

Найдено, %: С 49,08; Н 5,86; N 20,81.

2. Синтез 9-(1R, 3S, 4R)-4 -Монометок ситрифенилметилоксиметил-З-гид- роксилциклопентан-1-ил гипоксантина.

Кристаллическое соединение (2,3 г 9,2 ммоль), полученное описанным методом (1), раствор ют в 100 мл пиридина с последующим добавлением моно- метокситрифенилметилхлорида (3,1 г, 10.ммоль), а затем перемешивают при комнатной температуре в течение 5 ч. Реакционный раствор очищают хроматографией на силикагеле (80 г, растворитель: смесь хлороформа и метиловог спирта в отношении 40:1 - 6:1) и получают желаемый продукт в виде порошка (4,3 г).

Часть полученного продукта пере- кристаллизовывают из смеси хлоро- форма и эфира, т.пл. 244-246 С. Мол. вес 531,60.

Вычислено, %: С 70,04; Н 5,88; N 10,54.

С„Н,. Найдено, %: С 70,39; Н 5,77; N 10,38.

jg

15

182612

3. Синтез 9(1S, 4К)-4-монометок- ситрифенилметилоксиметилциклопентан- 1 -шх/ гипоксантин а.

Соединение, полученное описанным методом (2) (4,32 г, 8,27 ммоль), раствор ют в 70 мл толуола с последующим добавлением тиокарбонилдиими- дазола (2,2 г, 12,4 ммоль) и перемешивают при комнатной температуре 5 ч. Реакционный раствор концентрируют досуха, остаток очищают хроматографией на силикагеле (80 г, растворитель: смесь хлороформа и метанола в отношении 100:1 - 60:1) и получают порошок бледно-желтого цвета (5,2 г). Полученный таким образом продукт раствор ют в 90 мл толуола и подвергают реакции с гидридом трибутилоло- ва (3,4 мл, 12,4 ммоль) и рЈ, oi -азобш1-, сизобутилонитрилом (270 мг, 1,6 ммоль) методом по ссылочному примеру 3 с последующей очисткой хроматографией на силикагеле (100 г, растворитель: этиловый эфир уксусной кислоты и метиловый спирт в отношении 9:1) и получают желаемый продукт (1,63 г). Часть продукта перекристаллизовывают

20

25

0

5

0 5

0

5

из смеси раствора метилового спирта и этилового эфира, т.пл. 175-177 С. Мол. вес 531, 60.

Вычислено, %: С 72,21; Н 6,06; N 10,87.

С3, ,- 0,5 Н20.

Найдено, %: С 72,69; Н 5,88; N 10,92.

4. Синтез 9-K1S, 4К)-4-оксиметил- циклопентан-1 -ил гуанина.

Желаемое соединение может быть получ-ено по ссылочным примерам 4-8 с использованием соединени , полученного методом (3).

Пример 1 (тестовый).

Материалы и методы.

Клетки. Были использованы в данном исследовании лини клеток-носителей лимфотропного Т-клеточного вируса человека тип I (HTLV-l) MT-4 и лини клеток-продуцентов лимфотропного Т-клеточного вируса человека тип III (HTLV-III) MoIt:-4/HTLV. Клетки содержались в среде RMI, 1640 с с добавлением 10% фетальной тел чей сыворотки, 100 ME пенициллина и 100 мкг стрептомицина на 1 мл при 37°С в инкубаторе р атмосфере углекислого газа.

Вирус и вирусна инфекци . Линфо- тропный вирус Т-клеток человека (НТ-2) был получен из недостаточной культуры

клеток-продуцентов MoI - 4 способом, описанным ранее в Virology, 146, 272, 1985. Титр этого вируса 6x10 цито- патических ед/мл. Заражение клеток- . носителей МТ-4 вирусом HTLV-III проводили при кратности инфекции 0,002. Клетки смешивали с вирусным раствором и выращивали 1 ч при 37°С. После а бсорбции зараженные клетки промывали и повторно суспензировали в свежей среде до концентрации 3x105 клеток на 1 мл. Суспензии клеток такой концентрации выращивали как в отсутствии , так и в присутствии различных концентраций карбоциклических 2(,3 - |дидезоксинуклеозидов в инкубаторе при 37 С в атмосфере углекислого газа в течение 6 дней.

Оценка цитопатического действи , индуцированного HIV-HTLV/LAV. Индуцированный KIV-HTLV/LAV цитопатический эффект анализировали путем измерени уменьшени численности жизнеспособных клеток. Выжившие клетки-подсчиты- вали методом исключени окрашивани трипановым синим погибших клеток.

Оценка антигенной экспрессии HIV- HTLV/LAV.

Зараженные вирусом HIV-HTLV клетки МТ-4 с вирусоспецифическими антигенами подсчитывали непр мым иммуно-флуо- ресцентным методом (ИФ). Фиксированные в метаноле клетки инкубировали с разбавленной антивирусной сыворот- кой человека (против вируса HIV-HTLV- III) в течение 30 мин при 37°С. Затем препараты промывали в течение 15 мин фосфатным буферным раствором, содержащим 0,15% хлористого натри . Клет- ки окрашивали флуоресцеинизотиоциана- том, сопр женным с кроличьими антителами против человеческого иммуноглобулина G (продукт Dakoppatts A/S. Copenhogen, Denmark) 30 мин при 37 С и снова промывали фосфатным буферным солевым раствором. Под флуоресцентным микроскопом было подсчитано более 500 клеток и вычислен процент ИФ-по- ложительных клеток.

Из приведенной оценки бало заключено , что предлагаемые соединени имеют выраженную антивирусную активность (против HIV HTLV -III/LAV. и случае 2 ,3 -дидезоксиаристеромицина (пример 3) эффективна концентраци составл ет 50-100 мкмоль, а цитоток- сичность наблюдаетс при 500- 1000 мкмоль соответственно, В случае , 4К)-4-гидроксиметил- циклопентан-1-ил гуанина (пример 5) эффективна концентраци составл ет 100-200 мкмоль, а цитотоксичность 5 наблюдаетс при 500-1000 мкмоль соответственно .

Claims

Формула изобретени

Способ получени карбсциклических пуриновых нуклеозидов общей формулы Г

HO-f s Y

4Ч

где Y - пуриновое основание аденин-9ил , гуанин-9-ил,

отличающийс тем, что, соединение общей формулы II

ЯО-

№

R.

2 Bi

2 1

где Y - имеет указанные значени , а

имеющиес в пуриновом основании амино- и гидроксигруппы защищены;

один из R и К„

- гидроксильна группа, а другой - водород,

подвергают в положении 2 или 3 тиокарбонилированию при комнатной температуре с последующим восстановлением гидридом трибутилолова в присутствии od ,(-азобисизобутиранитрила при 80 - 100 С и сн тием защитных групп.