SU1428464A1

SU1428464A1 - Сорбент дл выделени и очистки тромбопластина и способ его получени

Info

Publication number: SU1428464A1
Application number: SU874205981A
Authority: SU
Inventors: Сергей Михайлович Староверов; Ирина Владимировна Фадеева; Георгий Васильевич Лисичкин; Юрий Васильевич Магеровский; Владимир Анатольевич Монастырский; Анатолий Владимирович Гайда
Original assignee: МГУ им.М.В.Ломоносова; Львовский Научно-Исследовательский Институт Гематологии И Переливания Крови
Priority date: 1987-03-06
Filing date: 1987-03-06
Publication date: 1988-10-07

Abstract

Изобретение относитс к химически модифицированным кремнеземным сорбентам дл хроматографии биополимеров и может быть использовано дл выделени и очистки тромбопластина. Получают сорбент на основе макропористого кремнезема с диаметром пор 45-75 нм, содержащий на поверхности группы формулы -(СН2)зОСН2Х хСН(ОН)СН20СН2СН(ОН)СН2ОН при их поверхностной концентрации 1,2-2,6 групп на 1 нм. Способ получени сорбента заключаетс в последовательной обработке кремнезема с диаметром пор 45-75 нм 7-глицидооксипропилтриэтоксисиланом и глицерином в среде диоксаца в присутствии эфирата трехфтористого бора. При использовании сорбента, получаемого по предлагаемому способу, достигаетс выход тромбопластина 91-94% при очистке 5,6- 6,1 раз, что превышает характеристики известных сорбентов, предназначенных дл аналогичной цели. 2 с.п. ф-лы, 1 табл. с S (Л

Description

4 ГС

00

4 05 4

Изобретение относитс к химически модифицированным кремнеземHbiiM сорбентам дл хроматографии бионолимеров и может быть иснользовано дл выделени и очистки тромбонластина.

Тканевый тромбопластин (фактор III свертывани крови) представл ет собой высокомолекул рный линопротеидный комплекс с мол. м. 300000. Он вл етс инициа- трром внешнего пути свертывани крови, а;ктивиру совместно с факторм Vila тром- бркиназу, котора активирует протромбин, Превраща его в активный тромбин.

Целью изобретени вл етс повышение выхода и степени очистки тромбопластина и создание способа получени сорбента, обеспечива юшего возможность его использовани при хроматографическом выделении тромбопластина.

Пример I. В трехгорлую колбу на 300 мл с термометром, мешалкой и обратным холодильником помещают 20 г сило- .чрома С-80 (средний размер нор 50 нм) и заливают ацетатным буферным раствором с рН 5,6 в количестве 100 мл. Суспензию нагревают на вод ной бане до 90°С и добавл ют 5 г модификатора - у-глицидо- оксипропилтриэтоксисилана. Реакционную смесь нагревают в течение 1 ч при пере- мен1ивании. Полученный модифицированный носитель промывают на фильтре водой, ацетоном, эфиром и далее абсолютированным диоксаном по 100 мл. Промытый сорбент помещают в трехгорлую колбу на 500 мл добавл ют 100 мл абсолютного диоксана, 5 мл эфирата трехфтористого бора, 25 мл глицерина и перемешивают суспензию. После перемешивани суспензию выдерживают 5 мин при комнатной температуре, затем 30 мин нагревают на вод ной бане, фильтруют , промывают диоксаном, водой, 5%-ной уксусной кислотой, водой, ацетоном, эфиром и высуши ают на воздухе. Содержание углерода в полученном сорбенте 2,5%, что соответствует 1,2 привитых групп на 1 им поверхности носител . В ИК-снектрах сорбента обнаружены полосы поглощени в области, см : 3600-3400; 2965-2900; 2815- 2830.

Полученный сорбент используют дл очистки тромбопластина. Экстракт липопро- теидного комплекса тромбопластина готов т следующим образом.

5 г лиофильно высушенного кадавер- ного-мозга человека гомогенизируют в фарфоровой ступке с 50 мл 0,15 М хлористого натри и центрифугируют при 6000 об/мин в течение 20 мин. Осадок отбрасывают , а полученный супернатант подвергают хроматографической очистке.

0

5

0

5

0

5

0

5

0

Колонки размером 20X0,8 см наполн ют сорбентом и уравновешивают раствором, в котором проводили экстракцию тромбопластина . Через колонку со скоростью 0,08- 0,4 мл/см мин пропускают экстракт тромбопластина , собира фракции по 0,85 мл. Во всех фракци х определ ют мутность (поглощени света при 540 нм и длине оптического пути 1 см), содержание белка при помощи кумасси G-250, а также специфическую активность.

При использовании предложенного сорбента выход составл ет 91% при очистке в 5,8 раз.

Пример 2. В услови х примера 1 варьируют диаметр пор исходного кремнезема, снимают ИК-спектры получаемых сорбентов, из данных анализа на углерод и удельной поверхности определ ют содержание групп на 1 нм поверхности, полученные сорбенты используют дл выделени и очистки тромбопластина.

В таблице приведены результаты очистки тромбопластина на предложенном сорбенте с различным диаметром пор, и на известном сорбенте.

Анализ данных, представленных в таблице , показывает, что эффект достигаетс при использовании сорбента предложенной структуры при диа.метре пор исходного носител 45-75 нм и количестве привитых групп 1,2-2,6 групп на 1 нм.

Claims

1.Сорбент дл выделени и очистки тромбопластина на основе макропористого кремнезема с диаметрами пор 45-75 нм с химически привитыми к его поверхности гликолевыми группами, отличающийс тем, что, с целью повышени выхода и степени очистки тромбопластина, он содержит гликолевые группы формулы

(СН2)зОСН2СН(ОН)СН20СН2СП (ОН) X

ХСПгОН

при их поверхностной концентрации 1,2-

2,6 групп/нм .

2.Способ получени сорбента, включающий модифицирование макропористого кремнезема v-глицидооксипропилтриэтокси- силаном с последующей обработкой гид- роксилсодержащим органическим соединением в среде диоксана в присутствии эфирата трехфтористого бора, отличающийс тем, что, с целью обеспечени возможности его использовани при хроматографичес- ким выделении тромбопластина с высоким выходом и высокой степенью чистоты, в качестве гидроксилсодержащего соединени используют глицерин.