DE3686295T2 - Reinigung von koagulationsfaktoren des blutes und von anderen proteinen auf sulfatierten nicht carbohydratierten matrizen. - Google Patents

Reinigung von koagulationsfaktoren des blutes und von anderen proteinen auf sulfatierten nicht carbohydratierten matrizen.

Info

Publication number
DE3686295T2
DE3686295T2 DE8686108822T DE3686295T DE3686295T2 DE 3686295 T2 DE3686295 T2 DE 3686295T2 DE 8686108822 T DE8686108822 T DE 8686108822T DE 3686295 T DE3686295 T DE 3686295T DE 3686295 T2 DE3686295 T2 DE 3686295T2
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
sulfated
adsorbent
proteins
blood
coagulation factors
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
DE8686108822T
Other languages
English (en)
Other versions
DE3686295D1 (de
Inventor
Robert E Jordan
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Bayer Corp
Original Assignee
Miles Laboratories Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Miles Laboratories Inc filed Critical Miles Laboratories Inc
Application granted granted Critical
Publication of DE3686295D1 publication Critical patent/DE3686295D1/de
Publication of DE3686295T2 publication Critical patent/DE3686295T2/de
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
    • C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
    • C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12N9/647—Blood coagulation factors not provided for in a preceding group or according to more than one of the proceeding groups
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A61K35/16—Blood plasma; Blood serum
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/02—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising inorganic material
    • B01J20/10—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising inorganic material comprising silica or silicate
    • B01J20/103—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising inorganic material comprising silica or silicate comprising silica
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/22—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising organic material
    • B01J20/26—Synthetic macromolecular compounds
    • B01J20/261—Synthetic macromolecular compounds obtained by reactions only involving carbon to carbon unsaturated bonds
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/22—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising organic material
    • B01J20/26—Synthetic macromolecular compounds
    • B01J20/262—Synthetic macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon to carbon unsaturated bonds, e.g. obtained by polycondensation
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/22—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising organic material
    • B01J20/26—Synthetic macromolecular compounds
    • B01J20/264—Synthetic macromolecular compounds derived from different types of monomers, e.g. linear or branched copolymers, block copolymers, graft copolymers
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/22—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising organic material
    • B01J20/26—Synthetic macromolecular compounds
    • B01J20/265—Synthetic macromolecular compounds modified or post-treated polymers
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/28—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties
    • B01J20/28014—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties characterised by their form
    • B01J20/28047—Gels
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
    • B01J20/291—Gel sorbents
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/3071—Washing or leaching
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/3078—Thermal treatment, e.g. calcining or pyrolizing
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/3085—Chemical treatments not covered by groups B01J20/3007 - B01J20/3078
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/3092—Packing of a container, e.g. packing a cartridge or column
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2220/00—Aspects relating to sorbent materials
    • B01J2220/40—Aspects relating to the composition of sorbent or filter aid materials
    • B01J2220/48—Sorbents characterised by the starting material used for their preparation
    • B01J2220/4806—Sorbents characterised by the starting material used for their preparation the starting material being of inorganic character
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2220/00—Aspects relating to sorbent materials
    • B01J2220/50—Aspects relating to the use of sorbent or filter aid materials
    • B01J2220/54—Sorbents specially adapted for analytical or investigative chromatography
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2220/00—Aspects relating to sorbent materials
    • B01J2220/50—Aspects relating to the use of sorbent or filter aid materials
    • B01J2220/58—Use in a single column

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Thermal Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)

Description

  • Die vorliegende Erfindung betrifft eine nicht-carbohydratierte (nicht auf Basis von Kohlenhydraten vorliegende) synthetische Gelmatrix, die in einem Verfahren zur Isolierung und Reinigung von Blutgerinnungsfaktoren und anderen Blutproteinen unter Anwendung von Affinitätschromatographieverfahren verwendet werden kann.
  • Viele nützliche Blutfraktionen und -proteine können aus Blut und Blutplasma durch bekannte Verfahrenstechniken erhalten werden.
  • Andersson et al., US-PSen 3.842.061 und 3.920.625, offenbaren ein vernetztes sulfatiertes Polysaccharidgelmatrix-Adsorbierungsmittel sowie dessen Verwendung zur Isolierung und Reinigung von Antithrombin bzw. Blutkoagulationsfaktoren aus Lebewesengewebematerialien wie Blut, Blutprodukten oder Plasmafraktionen.
  • Menache-Aronson et al., US-PS 4.447.416, offenbaren die Herstellung eines Zwischenprodukts eines gereinigten nicht-thrombogenen Faktor-IX-Konzentrats, enthaltend Faktor IX in größeren therapeutischen Mengen sowie die Faktoren II, VII und X in geringeren, nicht-thrombogenen Mengen.
  • Die bis zum gegenwärtigen Zeitpunkt verwendeten sulfatierten Matrices basierten alle auf der Verwendung von Kohlenhydrat als Rückgrat. Obwohl diese Kohlenhydrat-Matrices sich insbesondere für Auftrennungsarbeiten im Labormaßstab eigneten, ist es evident geworden, daß für die Produktionsarbeit in großem Maßstab Gele mit größerer Festigkeit und Durchflußkapazität und Beständigkeit gegen microbiellen Angriff wünschenswert sein würden.
  • Gemäß der vorliegenden Erfindung wird ein sulfatiertes, synthetisches, nicht-carbohydratiertes Affinitätschromatographiegelmatrix-Adsorbierungsmittel bereitgestellt, umfassend ein sulfatierbares Polymer, ausgewählt aus einer synthetischen organischen Gelmatrix, hergestellt durch Polymerisation mindestens eines polymerisierbaren organischen Monomers, sowie aus Kieselgelpartikeln, wobei das genannte sulfatierbare Polymer mit einem Sulfatiermittel behandelt worden ist, um eine Vielzahl von an das Polymerrückgrat gebundenen Sulfatgruppen zu liefern. In einer weiteren Ausgestaltung der vorliegenden Erfindung wird ein Verfahren zur Isolierung und Reinigung von Blutkoagulierungs- oder -gerinnungsfaktoren und weiteren Blutproteinen zur Verfügung gestellt, wobei man Blut, Plasma, Plasmaproteinkonzentrate oder Gewebekulturflüssigkeiten, enthaltend Blutkoagulierungsfaktoren oder weitere Blutproteine, mit dem sulfatierten synthetischen Gelmatrix-Adsorbierungsmittel gemäß der vorliegenden Erfindung in Kontakt bringt.
  • Das sulfatierte synthetische Gelmatrix-Adsorbierungsmittel kann jedes organische Polymermaterial sein, das sulfatierbar ist und sich für Affinitätschromatographietrennverfahren eignet. Beispiele geeigneter synthetischer Gelmatrices schließen polyhydroxilierte Acrylate, Kieselgelpartikel und Polyvinylbenzol ein, worin die Hydroxylgruppen oder der Benzolrest durch Reaktion der Hydroxylgruppen oder des Benzolrests mit einem geeigneten Sulfatiermittel wie z.B. Sulfonylchlorid, Chlorsulfonsäure und dgl. sulfatiert werden können.
  • Vorzugsweise umfaßt die sulfatierte synthetische Gelmatrix gemäß der vorliegenden Erfindung ein sulfatiertes synthetisches polyhydroxiliertes Acrylat oder Methacrylat oder ein Polyhydroxykieselgel.
  • Eine besonders geeignete sulfatierte polyhydroxylierte Acrylat-Gelmatrix ist eine, die abgeleitet ist aus der Polymerisation des Monomers N-Acryloyl-2-amino-2-hydroxymethyl-1,3-propandiol, das unter dem Warenzeichen TRISACRYL (Reaktifs IBF, Frankreich) im Handel erhältlich ist.
  • Ein besonders geeignetes sulfatiertes Polyhydroxykieselgelmaterial ist eines, das abgeleitet ist aus der Sulfatierung des Polyhydroxykieselgelmaterials, das unter dem Warenzeichen Nugel P-NP (Separation Industries, Metachem, New Jersey, USA) im Handel erhältlich ist.
  • Jedes herkömmliche Verfahren zur Sulfatierung einer organischen Hydroxylgruppe oder eines aromatischen (d.h. Bezol) Kerns kann angewandt werden, um die synthetische Gelmatrix zu sulfatieren. Ein bequemes Sulfatierungsverfahren, das geeignet ist, die oben erwähnten Trisacryl- und Nugel-Matrices zu sulfatieren, stellt eine Modifikation des Verfahrens von Miletich et al., Analytical Biochemistry, 105, 304-310 (1980), dar, beinhaltend die Verwendung von Chlorsulfonsäure in Pyridin.
  • Unter den Blutgerinnungsfaktoren und weiteren Blutproteinen, die gemäß des Verfahrens der vorliegenden Erfindung unter Verwendung der sulfatierten, synthetischen, nicht-carbohydratierten Gelmatrix der Erfindung isoliert und gereinigt werden können, befinden sich Faktor IX, Faktor X, Faktor II, Faktor VII, Faktor VIII, Protein C, Protein S, Prothrombin, Gewebeplasminogenaktivator (TPA) und dergleichen.
  • Die so erhaltenen Blutkoagulierungs- oder -gerinnungsfaktoren und weiteren -proteine, sei es aus Plasma oder Gewebekulturflüssigkeiten unter Anwendung biotechnologischer Verfahren, können zu pharmazeutischen Präparationen zur therapeutischen Verwendung formuliert werden. Die pharmazeutischen Präparationen können mittels bekannter Verfahren behandelt werden, um sie frei von infektiösen Mikroorganismen wie Bakterien und Viren und dgl. zu stellen, einschließlich des Hepatitis B-Virus, Retroviren und der AIDS-verursachenden Agentien (ARV-, HTLV-III- und LAV-Agentien). Solche Behandlungen schließen Sterilfiltration, Hitzebehandlung im Naß- oder Trockenzustand, chemische Behandlung, UV-Bestrahlung und Behandlung mit kolloidaler Kieselsäure ein.
  • Die folgenden Beispiele erläutern lediglich einige Ausgestaltungen der vorliegenden Erfindung und sollen den Umfang der Erfindung nicht einschränken. Alle Teile und Prozentangaben beziehen sich auf das Gewicht und alle Temperaturen auf ºC, wenn nichts anderes angegeben ist.
    • Beispiele A. Herstellung sulfatierter Matrices zur Adsorption von Koagulationsproteinen. Beispiel 1 Herstellung von sulfatiertem Trisacryl
  • Trisacryl ist eine synthetische, nicht-carbohydratierte Gelmatrix, hergestellt durch Polymerisation des Monomers N-Acryloyl-2-amino-2-hydroxymethyl-1,3-propandiol. Trisacryl GF 2000 wird hergestellt von Reaktifs IBF (France) und wurde als eine wässrige Suspension erhalten.
  • 1200 ml suspendiertes Trisacryl GF 2000 wurden an einem Filter aus gesintertem Glas entwässert, und zwar durch abwechselndes Waschen mit destilliertem Wasser (5 x 1200 ml), Methanol (5 x 1200 ml) und Aceton (5 x 1200 ml). Der acetonhaltige Kuchen wurde auf einer Aluminiumfolie ausgebreitet und unter einer Glühlampe in einem Abzug erhitzt, bis das Pulver gründlich getrocknet war (14 h lang). Die Ausbeute des trockenen Trisacryl-Pulvers aus dieser Behandlungsstufe betrug 321 g.
  • Die Sulfatierungsreaktion wurde mittels einer Modifikation des vorher für Dextran-Perlen von Miletich et al. (Analytical Biochemistry, 105, 304-310, 1980) beschriebenen Verfahrens durchgeführt. Das Trisacrylpulver wurde unter Rühren einer Lösung von Chlorsulfonsäure in Pyridin zugefügt, welche durch tropfenweise Zugabe von 428 ml Säure zu 2,14 l Pyridin in einem Trockeneis/Ethanol-Bad erhalten wurde. Die Lösung wurde bis zur vollständigen Auflösung des Pyridiniums vor der Zugabe des Trisacryl-Pulvers auf 70ºC erwärmt. Nach erfoglter Zugabe wurde die Suspension gerührt, bis das Pulver die gesamte Flüssigkeit absorbiert hatte. Die Reaktionsmischung wurde 2 h lang bei 70ºC und dann 16 h lang bei 50ºC gehalten.
  • Der nasse Trisacryl-Kuchen wurde auf Sinterglasfilter auf an eine Wasserstrahlpumpe angeschlossene Saugflaschen übertragen. Die verbleibende Pyridinlösung wurde gesammelt und mit den ersten Waschflüssigkeiten zur Entsorgung vereinigt. Das Gel wurde mit insgesamt 50 l auf pH 10 eingestelltes 2 M NaCl gewaschen. Das Gel wurde dann des weiteren mit 50 l destilliertem Wasser bei pH 10 gewaschen. Das Endgewicht des gewaschenen Gels betrug 1580 g.
  • Das sulfatierte Trisacryl-Gel wurde vor Gebrauch in 10 Volumina eines Puffers äguilibriert, bestehend aus 0,05 M Natriumcitrat, pH 6.5, und 0,10 M Natriumchlorid. pas äguilibrierte Gel wurde dann in die gewünschte Chromatographiersäule gegeben.
    • Beispiel 2 Sulfatierung von Polyhydroxykieselgel
  • Die Sulfatierung von Polyhydroxykieselgel (NuGel P-NP, erhalten von Separation Industries, Metachem, NJ) wurde in ähnlicher Weise wie für Trisacryl in obigem Beispiel 1 durchgeführt. Eine Menge trockener Glasperlen (10 g) wurde zu einer Lösung gegeben, die durch die Zugabe von 12.5 ml Chlorsulfonsäure zu 65 ml Pyridin wie in Beispiel 1 beschrieben hergestellt worden war. Die Suspension wurde 16 h lang bei 70ºC erwärmt, worauf die Pyridinlösung abfiltriert, und die Glasperlen rasch mit 50 Volumina 2 M NaCl-Lösung bei pH 10 gewaschen wurden. Die Glasperlen wurden dann mit 50 Volumina destilliertem Wasser gewaschen. Die Sulfatierung des Materials konnte rasch durch eine Modifikation des kolorimetrischen Verfahrens bestätigt werden, beschrieben von Smith et al (P.K. smith, A.K. Mallia und G.T. Hermanson, Anal. Biochem. 109, 466-473, 1980).
  • Es wurde die fähigkeit des sulfatierten Polyhydroxykieselgels zur Adsorption der Koagulationsfaktoren IX und X getestet. Zu 10 ml Anteilen einer Lösung von gelöstem Prothrombin-Komplex (PTC)-Pulver (0,6% G/V) in 0,05 M Natriumcitrat, pH 6.5, enthaltend 0,1 M NaCl, wurden 2 g entweder des sulfatierten oder des nicht-sulfatierten polyhydroxykieselgels gegeben. Die Suspension wurde an einem Röhrchenschüttler 15 Minuten lang vermischt, worauf die suspension bei niedriger Geschwindigkeit zentrifugiert wurde, um das Gel zu pelletieren. Das Vorliegen von F.IX- und F.X-Aktivitäten wurde in den jeweiligen überständen sowie in der Ausgang-PTC-Lösung ermittelt, die Werte sind in Tabelle 1 angegeben. Tabelle 1 Faktor X-und IX-Aktivitäten in PTC-Lösung, adsorbiert mit sulfatiertem und nicht-sulfatiertem Polyhydroxykieselge Ausgangs-PTC-Lösung Überstand der Adsorption mit night-sulfatiertem Polyhydroxykieselgel Überstand der Adsorption mit sulfatiertem Polyhydroxykieselgel
  • Wie aus den Meßergebnissen der Tabelle ersichtlich, enthält der Überstand des Adsorptionsversuchs mit dem sulfatierten Gel deutlich weniger sowohl an F.IX-als auch an F.X-Aktivität als die Ausgangs-PTC-Lösung. Es tritt eine gewisse Aktivierung an F.IX nach Kontakt mit dem nicht-sulfatierten Material auf. Dennoch belegen die Meßergebnisse, daß das sulfatierte Polyhydroxykieselgel die Fähigkeit besitzt, Koagulationsfaktoren in ersichtlichem Kontrast zur nicht-sulfatierten Form zu adsorbieren.
    • B. Verwendung von sulfatiertem Trisacryl bei der Herstellung von teilgereinigten Koagulationsfaktoren Beispiel 1 Verwendung von sulfatiertem Tirsacryl zur Herstellung eines teilgereinigten Faktors IX aus PTC durch Gradient-Elution (3001-34)
  • Prothrombin-Complex (PTC)-Pulver, ein getrocknetes, Vitamin K-abhängigen Koagulationsfaktor enthaltendes Material, das eine Zwischenstufe beim handelsüblichen Verfahren zur Herstellung von Faktor IX-Konzentrat darstellt, wurde mit 1% G/V in 0,05 M Natriumcitrat, enthaltend 0,1 M NaCl, pH 6.5, aufgelöst. Nach der Auflösung des Pulvers wurde die Lösung an pulverisierter, pyrogener Kieselsäure (Aerosil 380, ein Produkt von Degussa) bei einem G/V-Verhältnis von 1% 45 Minuten lang bei 42ºC adsorbiert. Die Suspension wurde zentrifugiert, und das unlösliche Pelletprodukt von Aerosil und adsorbierten Materialien wurde verworfen. Der Überstand wurde filtriert und auf 10ºC abgekühlt. Die abgekühlte Lösung wurde auf eine Säule (17 cm x 14 cm) gegeben, enthaltend sulfatiertes Trisacryl und äquilibriert in 0,05 M Natriumcitrat, enthaltend 0,1 M NaCl bei pH 6.5. Die Säulendurchflußgeschwindigkeiten betrugen annähernd 10 1/h. Material, das nicht an die Säule gebunden und als ein Durchbruchspeak eluiert wurde, wurde verworfen. Nach der Aufgabe der Probe erfolgte die Aufgabe eines Volumens an Äquilibrationspuffer, welches ausreichte, um das Protein im Eluat auf einen A280-Wert von kleiner 0,1 herabzusetzen. Dann wurde ein 40 l Gradient von NaCl von 0,1 M bis 0,6 M auf die Säule gegeben. Es wurden 1 l-Fraktionen gesammelt und auf ihren Proteingehalt und ihre immunologisch nachweisbaren Mengen an Koagulationsfaktoren IX und X sowie an Protein C analysiert.
  • Protein C und Faktor X wurden nur geringfügig aufgetrennt und eluierten frühzeitig im Gradient bei einer Natriumchloridkonzentration von annähernd 0,15 bis 0,3 M. Von Faktor IX wurde beobachtet, daß er später im Gradient bei annähernd 0,4 M NaCl eluiert wurde, obwohl eine gewisse Überlappung mit F.X auftrat.
  • Die Faktor IX-enthaltenden Regionen der Elution von ähnlichen Säulendurchläufen wurden zusammengefaßt und gegen 0,015 M Natriumcitrat, enthaltend 0,12 M NaCl, dialysiert. Nach Konzentration und Sterilfiltration wurde eine teilgereinigte F.IX-Präparation für Tierversuche mit den folgenden Eigenschaften erhalten:
  • Faktor IX-Aktivität 30.2 Einheiten/ml
  • Proteinkonzentration 4,41 mg/ml
  • F.IX-spez. Aktivität 6,85 Einheiten/mg
  • NAPTT 1:10 163 s 1:100 312 s
    • Beispiel 2
  • Schnellchromatographie von DEAE (Diethylaminoethyl)-Eluat an sulfatiertem Trisacryl unter Quantifizierung der Faktoren II, VII, IX und X.
  • Ein Konzentrat, enthaltend Vitamin K-abhängige Gerinnungsfaktoren, wurde erhalten, indem man Effluens I-Plasma mit DEAE-Sephadex in Kontakt brachte und das adsorbierte Gel wie folgt eluierte. Nach Entfernung des verbrauchten Effluens I wurde das DEAE-Gel aufeinanderfolgend mit (1) 0,2 M Natriumbicarbonat, (2) 0,3 M Nariumbicarbonat und (3) 0,2 M Natriumchlorid, enthaltend 0,01 M Natriumcitrat, pH 6.5, gewaschen. Der Faktor IX und weitere Vitamin K-abhängige Faktoren wurden dann aus den DEAE-Gel mit einem Puffer eluiert, enthaltend 0,055 M NaCl und 0,01 M Natriumcitrat, pH 6.5. Das Eluat wurde diafiltriert gegen sechs Austauschvolumina von 0,05 M Natriumcitrat, enthaltend 0,1 M NaCl, pH 6.5. Es wurden 73 l Eluat erhalten und Anteile davon für anschließende Chromatographierversuche eingefroren. Der Gehalt an Gerinnungsfaktoren im dialysierten Eluat, ausgedrückt als Gesamt-Einheiten, ist in Tabelle 2 angegeben. Tabelle 2 Gehalt an Vitamin K-abhängigen Gerinnungsfaktoren im dialysierten Eluat aus DEAE-Sephadex-Kontakt von Eluat I Einheiten/ml Gesamt-Einheiten Faktor II (Prothrombin) Faktor Protein C Protein S positiv auf Antigen
  • Zum Zwecke der Bestimmung maximaler Durchflußeigenschaften des sulfatierten Trisacrylgels wurde eine Säule mit den folgenden Abmessungen aufgebaut: Höhe = 5 cm, Durchmesser = 25 cm. 8.7 Liter des oben beschriebenen DEAE-Eluats wurden mit Aerosil 380 bei 0,25% G/V bei 5ºC 60 Minuten lang behandelt. Das unlösliche Aerosil wurde durch Filtration entfernt und das geklärte Eluat auf die sulfatierte Trisacrylsäule mit 24 l/h gegeben (es wurden Durchflußgeschwindigkeiten bis hinauf zu 60 l/h mit dieser Säulenkonfiguration erhalten, und zwar ohne sichtbare Deformation des Gels oder deutlichen Verlust an Leistungsvermögen der Säule). Das Elutionsprofil der Säule ist in Fig. 2 gezeigt. Nach Aufgabe des geklärten DEAE-Eluats wurde die Säule mit 0,1 M NaCl, 0,05 M Natriumcitrat, pH 6.5, gewaschen. Es wurden dann Elutionen in getrennten Stufen mit 0,275 M NaCl bzw. 0,55 M NaCl zur differentiellen Elution von Gerinnungsfaktoren durchgeführt. Beide der letzten Elutionsstufen enthielten 0,05 M Natriumcitrat, pH 6.5. In Tabelle 3 ist das Vorliegen der verschiedenen Gerinnungsfaktoren in jeder Reinigungsstufe angegeben. Tabelle 3 Quantifizierung von Gerinnungsfaktoren im in Beispiel 2 dargelegten Reinigungsschema Gesamteinheiten Vorliegen von Antigen Stufe DEAE-Eluat Post-Aerosil-DEAE-Eluat Ungebunder Säulenpeak NaCl-Peak
  • Zwar sind die in diesem Beispiel erhaltenen Auftrennungen nicht optimal, diese Chromatographie verdeutlicht aber die Tatsache, daß eine Aufspaltung Vitamin K-abhängiger Faktoren bei sehr hohen Durchflußgeschwindigkeiten möglich ist. Von besonderer Bedeutung ist die Beobachtung, daß Faktor II (Prothromin) im ungebundenen Eluat eluiert wird und in späteren Elutionsstufen nicht nachweisbar ist. Dieser Faktor wurde im Eluat bestimmt und ist in späteren Elutionsstufen nicht nachweisbar. Dies wurde in ähnlichen Chromatographieläufen unter Anwendung spezifischer F.II-Gerinnungsassays bestätigt. Von Protein C-Antigen wird beobachtet, daß es zusammen mit F.X chromatographiert wird. Die Wiedergewinnung von F.X- und F.IX-Aktivitäten in den verschiedenen Elutionsstufen steht in guter Übereinstimmung mit den Gesamtmengen an auf die Säule aufgegebenen jeweiligen Aktivitäten.
    • Beispiel 3 Stufenweise Elution von Gerinnungsfaktoren aus sulfatiertem Trisacryl unter Hervorhebung der Entfernung von F.X aus dem F.IX
  • Auf eine Säule mit sulfatiertem Trisacryl mit den in Beispiel 1 beschriebenen Abmessungen wurden 5 Liter einer Lösung von DEAE-Eluat, hergestellt wie in Beispiel 2 beschrieben, gegeben. Es wurde keine Aerosil-Adsorption dieser Lösung durchgeführt. Vielmehr wurde die Natriumchloridkonzentration des aufgegebenen DEAE-Eluats auf 0,3 M eingestellt, und zwar vor der Aufgabe. Die Säule wurde ebenfalls in 0,3 M NaCl, 0,05 M Natriumcitrat, pH 6.5, voräquilibriert. Nach Aufgabe der Probe wurde die Säule mit Äguilibrierungspuffer gewaschen, um den A280-Wert des Säuleneluats auf kleiner 0,2 herabzusetzen. Der Faktor IX wurde dann in einer einzigen Stufe mit einem Puffer, enthaltend 0,55 M NaCl, eluiert. Die wiedergewonnenen Mengen an Faktoren IX und X sind in Tabelle 4 angegeben. Tabelle 4 Wiedergewonnene Mengen an Faktoren IX und X bei der Chromatographie mit sulfatiertem Trisacryl von Beispiel 3. Stufe Einheiten/ml Gesamteinheiten DEAE-Eluat(5 1)* ungebundener Peak 0,55 M NaCl-eluierter Peak (8,64 l) nicht nachweisbar
  • Dieses Beispiel belegt, daß es möglich ist, F.X aus der Endpräparation von F.IX wirksam zu entfernen, wie sie aus dem sulfatierten Trisacryl eluiert werden. Da Faktor X, in unserer Erfahrung, die den größten Aufwand verursachende und wahrscheinlichste Begleitsubstanz unter den weiteren Vitamin K-abhängigen Faktoren ist, läßt sich folgern, daß die Gehaltsmengen anderer Gerinnungsfaktoren wie F.II wahrscheinlich sehr gering im hier beschriebenen F.IX-Peak ausfallen. Tatsächlich wurde in anderen ähnlichen Chromatographien Prothrombin als in F.IX-Peaks nicht nachweisbar ermittelt.

Claims (8)

1. Sulfatiertes, synthetisches, nicht-carbohydratiertes Affinitätschromatographiegelmatrix-Adsorbierungsmittel, umfassend ein sulfatierbares Polymer, ausgewählt aus (a) einer synthetischen organischen Gelmatrix, hergestellt durch Polymerisation mindestens eines Polymerisierbaren organischen Monomers, und aus (b) Kieselgelteilchen, wobei das genannte sulfatierbare Polymer mit einem Sulfatiermittel behandelt worden ist, um eine Vielzahl von an das Polymerrückgrat gebundenen Sulfatgruppen bereitzustellen.
2. Affinitätschromatographiegelmatrix-Adsorbierungsmittel gemäß Patentanspruch 1, ausgewählt aus sulfatierten polyhydroxylierten Acrylaten und Methacrylaten und Kieselgelteilchen, sowie aus sulfatiertem Polyvinylbenzol.
3. Affinitätschromatographiegelmatrix-Adsorbierungsmittel gemäß Anspruch 2, worin das Polymer-Rückgrat durch Polymerisation des Monomers N-Acryloyl-2-amino-2-hydroxymethyl-1, 3-propandiol erhältlich ist.
4. Trennreinigungsverfahren von mindestens einem aus der Gruppe der Blutkoagulationsfaktoren und -proteine, ausgewählt aus den Faktoren IX, X, II, VII, VIII, Protein C, Protein S, Prothrombin, sowie eines Gewebeplasminogenaktivators aus einer Quelle genannter Blutkoagulationsfaktoren und -proteine, ausgewählt aus Blut, Blutplasma, Plasmakonzentraten, und aus Gewebekulturflüssigkeiten, erhältlich durch Biotechnologieverfahren, wobei man
(a) das Blut, Blutplasma, die Plasmakonzentrate und die Gewebekulturflüssigkeiten, mit mindestens einem Affinitätschromatographie-Adsorbierungsmittel in Kontakt bringt,
(b) die nicht-adsorbierte Lösung aus dem Adsorbierungsmittel abtrennt und
(c) die adsorbierten Blutkoagulationsfkaotren und -proteine aus- dem Adsorbierungsmittel unter Verwendung eines gewünschte(n)(s) Faktor(en) und Protein(e) wirksam eluierenden Eluierungsmittels eluiert,
wobei als das Adsorbierungsmittel ein sulfatiertes, synthetisches, nicht-carbohydratiertes Affinitätschromatographiegelmatrix-Adsorbierungsmittel enthalten ist, umfassend ein sulfatierbares Polymer, ausgewählt aus
(i) einer synthetischen organischen Gelmatrix, hergestellt durch Polymerisation mindestens eines polymerisierbaren organischen Monomers, und aus
(ii) Kieselgelteilchen,
wobei das genannte sulfatierbare Polymer mit einem Sulfatiermittel behandelt worden ist, um eine Vielzahl von an das Polymerrückgrat gebundenen Sulfatgruppen bereitzustellen.
5. Verfahren gemäß Anspruch 4, wobei das Adsorbierungsmittel ausgewähl ist aus sulfatierten polyhydroxilierten Acrylaten und Methacrylaten und Kieselgelteilchen, sowie aus sulfatiertem Polyvinylbenzol.
6. Verfahren gemäß Anspruch 5, wobei das Adsorbierungsmittel aus sulfatierten polyhydroxilierten Acrylaten und Methacrylaten und Kieselgelteilchen ausgewählt ist.
7. Verfahren gemäß Anspruch 6, wobei das Polymerrückgrat durch Polymerisation des Monomers
N-Acryloyl-2-amino-2-hydroxymethyl-1,3-porpandiol erhältlich ist.
8. Verfahren gemäß Anspruch 4, einschließlich der Behandlungsstufe, um die genannten Blutkoagulationsfaktoren und -proteine nicht-anfällig für Infektionen durch infektiöse Viren zu machen, einschließlich des Hepatitisvirus, Bakterien und Retroviren, einschließlich dem (der) AIDS-verursachenden Agen(s) (tien).
DE8686108822T 1985-07-12 1986-06-28 Reinigung von koagulationsfaktoren des blutes und von anderen proteinen auf sulfatierten nicht carbohydratierten matrizen. Expired - Lifetime DE3686295T2 (de)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US06/754,569 US4721572A (en) 1985-07-12 1985-07-12 Purfication of blood clotting factors and other blood proteins on non-carbohydrate sulfated matrices

Publications (2)

Publication Number Publication Date
DE3686295D1 DE3686295D1 (de) 1992-09-10
DE3686295T2 true DE3686295T2 (de) 1993-01-07

Family

ID=25035374

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE8686108822T Expired - Lifetime DE3686295T2 (de) 1985-07-12 1986-06-28 Reinigung von koagulationsfaktoren des blutes und von anderen proteinen auf sulfatierten nicht carbohydratierten matrizen.

Country Status (7)

Country Link
US (1) US4721572A (de)
EP (1) EP0208215B1 (de)
JP (1) JPH0724723B2 (de)
AT (1) ATE79052T1 (de)
CA (1) CA1265050A (de)
DE (1) DE3686295T2 (de)
ES (1) ES2002098A6 (de)

Families Citing this family (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2586359B1 (fr) * 1985-08-23 1989-09-08 Commissariat Energie Atomique Support solide a base d'alcool polyvinylique capable d'adsorber les lipoproteines et son utilisation pour la separation des lipoproteines de basse densite presentes dans un liquide tel que du plasma sanguin
AT399095B (de) * 1986-03-27 1995-03-27 Vukovich Thomas Dr Verfahren zur auftrennung von proteinen mittels gradientenelution und vorrichtung zur durchführung des verfahrens
JPS63209750A (ja) * 1987-02-25 1988-08-31 Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd 血液凝固第８因子精製用吸着体およびそれを用いた血液凝固第８因子の精製法
EP0476721B1 (de) * 1987-11-20 1995-03-01 Kanegafuchi Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha Methode zur Entfernung von Serum-Amyloid-Protein
US5118614A (en) * 1988-01-18 1992-06-02 Tessek Sdruzeni Praha Concentrates of coagulation factors ii, vii, ix and x, method of their preparation and use
DE3826792C1 (de) * 1988-08-06 1989-07-06 Biotest Pharma Gmbh, 6072 Dreieich, De
DK412389D0 (da) * 1989-01-19 1989-01-19 Novo Nordisk As Fremgangsmaade til udvinding af oprenset epi protein fra en fermenteringsoploesning
DE3914869C1 (de) * 1989-05-05 1990-08-09 Biotest Pharma Gmbh, 6072 Dreieich, De
US5110907A (en) * 1989-08-01 1992-05-05 Alpha Therapeutic Corporation Factor viii complex purification using heparin affinity chromatography
AT402261B (de) * 1991-01-25 1997-03-25 Immuno Ag Komplex enthaltend den gerinnungsfaktor ix
JP3416778B2 (ja) * 1991-10-04 2003-06-16 デイド、ベーリング、インコーポレイテッド 組換えヒト組織因子及び精製された天然及び合成のリン脂質からのプロトロンビン時間試薬の製造
DE4325872C1 (de) * 1993-08-02 1994-08-04 Immuno Ag Virusinaktivierte Faktor Xa-Präparation
AU696924B2 (en) * 1994-04-28 1998-09-24 Dade Behring Inc. Calibrator for prothrombin time (PT) assays
US5589571A (en) * 1994-10-28 1996-12-31 Cor Therapeutics, Inc. Process for production of inhibited forms of activated blood factors
US5714583A (en) 1995-06-07 1998-02-03 Genetics Institute, Inc. Factor IX purification methods
US5731186A (en) * 1996-02-05 1998-03-24 Schering Aktiengesellschaft Method for the production of rDSPA α1
JP2008525381A (ja) * 2004-12-23 2008-07-17 ノボ ノルディスク ヘルス ケア アクチェンゲゼルシャフト 関心のあるビタミンｋ依存性タンパク質を含んでなる組成物中におけるタンパク質混入物の量の減少
ES2526876T3 (es) * 2009-09-10 2015-01-16 Lonza Biologics Plc. Método y sistema para purificación de polipéptidos
US9029517B2 (en) 2010-07-30 2015-05-12 Emd Millipore Corporation Chromatography media and method
US20120156757A1 (en) 2010-12-15 2012-06-21 Millipore Corporation Purification of immunogens using a non-polysaccharide matrix
WO2016036508A1 (en) 2014-09-02 2016-03-10 Emd Millipore Corporation High surface area fiber media with nano-fibrillated surface features
KR102162753B1 (ko) 2014-12-08 2020-10-07 이엠디 밀리포어 코포레이션 혼합층 이온 교환 흡착제
GB201506113D0 (en) 2015-04-10 2015-05-27 Ge Healthcare Bio Sciences Ab Method for chromatography
GB201506117D0 (en) * 2015-04-10 2015-05-27 Ge Healthcare Bio Sciences Ab Method for chromatography

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4022758A (en) * 1973-06-19 1977-05-10 Ab Kabi Isolation of coagulation factors I and VIII from biological material
US3920625A (en) * 1973-06-19 1975-11-18 Kabi Ab Isolation of coagulation factors from biological material using cross linked sulfated, sulfonated carbohydrates
SE405549B (sv) * 1975-10-09 1978-12-18 Pharmacia Fine Chemicals Ab Forfarande for isolering av albumin ur plasmaprodukter genom kromatografisk fraktionering
FR2459479B1 (fr) * 1979-06-21 1983-07-08 Inst Nat Sante Rech Med Procede de separation d'une substance proteinique a partir d'une solution la contenant par filtration d'affinite et application dudit procede aux dosages enzymatiques
US4296096A (en) * 1979-07-05 1981-10-20 Colgate-Palmolive Company High viscosity dentifrice
US4324689A (en) * 1980-02-26 1982-04-13 Shah Ramesh M High carbon content chromatographic packing and method for making same
US4415665A (en) * 1980-12-12 1983-11-15 Pharmacia Fine Chemicals Ab Method of covalently binding biologically active organic substances to polymeric substances
US4447416A (en) * 1982-04-28 1984-05-08 American National Red Cross Plasma protein concentrates of reduced thrombogenicity and their use in clinical replacement therapy
JPS5956161A (ja) * 1982-09-24 1984-03-31 Hitachi Chem Co Ltd 液体クロマトグラフイ−用カラム充てん剤
CA1221307A (en) * 1982-12-02 1987-05-05 Nobutaka Tani Adsorbent and process for preparing the same
EP0168093B1 (de) * 1984-06-27 1988-11-23 Organon Teknika B.V. Binder für Lipoproteine niedriger Dichte
US4606825A (en) * 1985-04-22 1986-08-19 J. T. Baker Chemical Company Purification of immunoglobulin G

Also Published As

Publication number Publication date
EP0208215A3 (en) 1989-05-03
EP0208215A2 (de) 1987-01-14
DE3686295D1 (de) 1992-09-10
ATE79052T1 (de) 1992-08-15
EP0208215B1 (de) 1992-08-05
US4721572A (en) 1988-01-26
JPS6226227A (ja) 1987-02-04
CA1265050A (en) 1990-01-30
JPH0724723B2 (ja) 1995-03-22
ES2002098A6 (es) 1988-07-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE3686295T2 (de) Reinigung von koagulationsfaktoren des blutes und von anderen proteinen auf sulfatierten nicht carbohydratierten matrizen.
DE68906799T2 (de) Verfahren zur reinigung von nukleinsaeuren.
DE68913422T2 (de) Entfernen von Verfahrenschemikalien aus labilen biologischen Gemischen durch hydrophobe Austauschchromatographie.
DE3787445T2 (de) Verfahren zur Isolierung von langkettiger Nukleinsäure.
DE2322552C2 (de) Verfahren zum Abtrennen von Protein A aus Staphylococcus aureus aus einer Flüssigkeit
EP0775150A1 (de) Verfahren zur abreicherung oder entfernung von endotoxinen
AT399095B (de) Verfahren zur auftrennung von proteinen mittels gradientenelution und vorrichtung zur durchführung des verfahrens
JP3438735B2 (ja) 上清ｉｖ、特にｉｖ−４またはコーンフラクションｖまたはそれと類似の上清または画分からヒトアルブミンを単離する方法
EP0714412A1 (de) Heparin enthaltende affinitätsträger
DE3751576T2 (de) Virale Inaktivierung und Reinigung von aktiven Proteinen.
EP0669342B1 (de) Verfahren zur Isolierung und Reinigung Vitamin K-abhängiger Proteine
DE2718542A1 (de) Verfahren zur reinigung von interferon
DE3926539C2 (de)
DE3229132A1 (de) Reinigung von rinder-thrombin
DE3881895T2 (de) Verfahren zur Reinigung von Vitamin-K-abhängigen Blutgerinnungsfaktoren.
DE4342132C1 (de) Verfahren zur Herstellung virusinaktivierte Vitamin K abhängige Plasmakomponenten sowie Protein C und Protein S enthaltender Mittel durch Membran-Chromatographie
DE4113602A1 (de) Endotoxinadsorber und verfahren zu seiner herstellung
EP0035726B1 (de) Verfahren und diagnostisches Mittel zur direkten Bestimmung des Lipidgehaltes der beta-Lipoproteine des Blutes
CH643861A5 (de) Verfahren zum reinigen eines gamma-globulinderivats.
DE4209988A1 (de) Endotoxinadsorber und verfahren zu seiner herstellung
DE3330648C2 (de) Verfahren zum Abtrennen von Lipoproteinen mittels derivatisiertem Polyhydroxymethylen
EP0789620B1 (de) Trennmaterialien und verfahren zu ihrer herstellung
EP0332985B1 (de) Verfahren zum affinitätschromatografischen Reinigen von Faktor XIII
DE1951800A1 (de) Herstellung von Impfstoffen gegen Viruskrankheiten mit Controlliert Poroesem Glas
DE2309280A1 (de) Verfahren zur herstellung von reiner alpha-amylase durch affinitaetschromatographie

Legal Events

Date Code Title Description
8364 No opposition during term of opposition