SU1011055A3 - Способ получени вещества,обладающего противоклещевой и глистогонной активностью - Google Patents

Description

s

сд Изобретение относитс  к микробиологической промыитенности и касаетс  получени  вещества, обладающего противоклещевой и глистогонной активностью . Известен способ получени  ве1чества В-41, обладающего инсектицидной и противоклещевой активностью, с испол эованием Streptomyces B- il-Й6 1 . Известен также способ получени  вещества (мильбеницина, облада ющего также и глистогонной активностью с использованием того же продукта 2. Однако известные способы не обеспечивают получени  вещества формулы Ъд 4Us «HS Цель изо1бретени  - получение веuiecrea формулы I, обладающего противо клещевой и глистогонной активностью. П Уставленнй  цель достигаетс  тем что согласно способу получени  вещества , обладающего противоклеи евой и глистогонной активностью формулы I Streptomyces 13- 1-1«б выраи ивают на питательной среде, содержащей источники углерода и азота при 22ЗП Г, с последующим выделением целевого продукта из культуральной жидкости концентрированием и очисткой. При этом выращивание осуи(ествл ют на среде, содержащей в качестве основ ного источника углерода глюкозу в концентрации 6-8% и дополнительного источника углерода - лактозу, мальтозу и/или маисовый крахмал в концентра ции 0, и в качестве источника азо та - смесь муки соевых бобов крупного помола 0,5-1 и сн того молока 1-2. Кроме того, концентрирование и очистку провод т до содержани  целевого продукта 25-50. Вещество, обладающее противоклещевой и глистогонной активностью, получают путем культивировани  штамма Streptomyces Этот штамм депонирован в Исследовательском институте ферментации. Агентства Промышленных Наук и Технологии,Министерства Внешней торговли и промышленности , Япони , под номером , а также под наименованием Бикокен-кинки 1(ЗВ. Выращивают штамм в питательной среде , (ей источники усваиваемого углерода и усваиваемого-азота. К источникам углерода относ тс  глюкоза, сахароза, крахмал, глицерин, экстракт солода, молоза и масло соевьк бобов. Предпочтительным источником углерода  вл етс  глюкоза, используема  в количестве 6-8% ( вес./об, . Вместе с глюкозой используют дополнительные источники углерода - лактозу, мальтозу и кр«)хмал моиса в количестве 0,5 2,0% С вес./об,. Чтобы поддерживать величину рН посто нной, в процессе выраи(ивани  добавл ют избыточное количество глюкозы. К источникам азота относ тс  мука крупного помола соевых бобов, зерна пшеницы, м сной экстракт, пентон, свежие дрожжи, крутой маисовый ликер , сульфат аммони  и нитрат аммони . В качестве источника азота используют смесь муки соевых крупного помола 0,,0% сн того молока 1 ,0-2,0%. При необходимости в среду дл  выращивани  культуры добавл ют аминокислоту (например глицин или аргинин). При необходимости добавл ют также неорганические соли, такие как карбонат кальци , хлорид натри , хлорид кали  или фосфаты, можно также добавл ть другие органические или неорганические материалы, которые способствуют росту микроорганизмов и ускор ют образование вещества. Высокий выход вещества получают при использовании среды, котора  содержит 6-8% глюкозы, 0,5-2% лактозы и/или муки соевых бобов крупного помола и 1,0-2,0% сн того молока. Выращивание осу«1ествл ют в аэробных услови х при 22-3., предпочтительно при 28С. Максимальной производительности вещества достигают спуст  дн после начала выращивани , которое осуществл ют либо при встр хивании, либо в резервуаре с мешалкой . Количество вещества в бульоне определ ют следующим образом. Известное количество, например 3 г, бульона дл  выращивани  культуры заливают в небольшую пробирку, в

31011

которую добавл ют 10 мл ацетона. Затем смесь экстрагируют при встр хивании и подвергают центрифугированию . В образующийс  сверху раствор добавл ют ацетон до общего объема 5 10 мл. Полученный в результате .раствор помещают на заранее подготовленное место на пластинке дл  тонкослойной хроматографии ( силикагель, например Кизельгель 6П F 25) в коли- ю честве, например, 10-20 нл. Затем пластинку про вл ют в течение ч смесью 18:82 { об. ) диоксана и тетра- . хлорида углерода. Пробу исследуют при помощи сканирующего устройства is или тонкослойной хроматографии в области с длиной волны .45.

Вещество выдел ют из бульона дл  выращивани  культуры, использу  натуральный адсорбент (например, акти- -jo вированный углерод, двуокись алюмини  или силикагель, синтетический адсорбент ( например, Лиаиен НР-2ПД абсорбент ( например, Авицел, ионообменную смолу, ионообменный геле- 5 вый фильтр.

Выделение осуществл ют следующим образом.

Бульон дл  ферментации фильтруют с использованием ускорител  фильтровани  (такого как диатомова  земл ) с тем, чтобы получать фильтровальную лепешку, коУорую затем подвергают экстрагированию метанолом. Затем в водный метановый раствор добавл ют воду и полученный в результате раст- 5 вор экстрагируют гексаном. Фазу гексана отдел ют и концентрируют выпариванием при пониженном давлении, в результате чего образуетс  масл нистый материал, содержащий искомое вещество. Этот масл нистый материал помещают в колонну, содержащую силикагель t,например, Вакогель Г.-200) и элюируют, например, смесью 95:5 (Сб) гексана и ацетона с тем, чтобы со- 45 брать фракции, содержащие искомое вещество. Эти фракции концентрируют выпариванием при пониженном давлении, причем снова образуетс  масл нистый материал, который раствор етс  в не- 50 большом количестве метанола, и добавл ют в колонну из материала Сефадекс H-20, затем элюируют метанолом. Собирают фракции, содержащие искомое вещество, растворитель удал ют и ос- 55 таток раствор ют в небольшой количестве метанола. Добавл ют воду и смесь выдерживают при комнатной температу-.

554 ;

ре. В результате получают вещество в виде пены или пузырьков, KOTOpW после разрушени  дают аморфный порошок .

После перекристаллизовывани  из смеси 20:1 ( об. гексана и этилацетата вещество получают в виде небольших игл с т.пл. 186-188 С. Процедуру очистки вещества можно проводить на любой стадии и использовать неочищенный продукт, которьй содержит смесь мильбемицинов и искомое вещество. Если смесь, содержаща  два или более таких веществ, используетс  без полного разделени , то достаточно, чтобы полученный в результате продукт давал 100 эффект при применении против клещей с концентрацией 5 ч./млн. Содержание вещества в неочищенном продукте составл ет предпочтительно не менее вес.%.

Полученное вещество обладает высокой противоклещевой при применении против взрослых клеЩей и  иц, а также глистогонной активностью.

Вещество можзт быть применено против такихклещей, как клещик паутинный двуп тнистый (Tetrahycniis urtrede ), европейский красный клещ (Рапоnychus ulmi), цитрусовый красный клещик (Panonychus citri) и клещи видов Аи lops или Aculus, которые паразитируют на фруктах, растени х и цветах. Вещество также обладает активностью против клещей вида 1х odidas doerma nyssidas и Sareopttdae, которые паразитируют на животных. Вещество обладает также высокой активностью против таких эктопаразитов как Oestrus, Luci1 га Hypoderma, Ctasurophilus, блох,I вшей и т.д., а также насекомых (таких, как тараканы или мухи и некоторых других видов насекомых,  вл ющихс  вредител ми садового и сельского хоз йства, таких как тл  и личинки насекомых других Lepidoptera. Кроме того, вещество  вл етс  активным при применении против круглых червей, таких как черви вида Meloidogyne , и клещей, которые обитают в почве.J

При использовании против клещей или насекомых ве1цество предпочтительно разбавл ют носителем с целью получени  композиций, таких как порошки, крупные порошки, гранулы, мелкие гранулы , смачиваемые порошки, эмульгируемые концентраты или масло. 5 Носитель, используемый дл  получе ни  таких композиций, может быть син тетическим или натуральным, неоргани ческим или органическим и, в общем случае, любым носителем, который обы но добавл ют в инсектициды или акари циды дл  того, чтобы активный ингредиент быстрее достигал объекта, который подвергаетс  обработке( например , растени , клеща или насекомоговредител ), или упростить хранение, транспортировку и работу с активным ингредиентом. Примерами соответствуЮ1 их твердых носителей могут служить неорганические материалы, такие как глина, таль диатомова  земл , каолин, бентонит, карбонат кальци  или синтетический силикат кальци ; натуральные или син тетические смолы, такие как кумароно вые, алкидные и поливинилхлориды; воски, такие как пальмовый и парафин; орехова  скорлупа, например ско лупа грецкого ореха, или мука соевых бобов крупного помола. Примерами соответствующих жидких носителей могут служить вода; спирты , такие как этанол или изопропанол гликоли, такие как этиленгликоль; простые эфиры гликолей, такие как монофениловый простой эфир этиленгликол  или моноэтиловый простой эфи диэтиленгликол ; кетоны, такие как ацетон, метилизобутилкетон, циклогексанон , ацетофенон или изофорон простые эфиры, такие как тетрагидрофуран или диоксан ароматические углеводороды, такие как бензол, толуол , ксилол или метилнафталин) хлорированные углеводороды, такие как трихлорэтилен и тетрахлорид углерода; фракции нефти, имеющие низкие, средние и высокие температуры кипени , содержащие керосин, светлые нефтепродукты или ароматические углеводороды. Вещество можно готовить в виде аэрозол , в этом случае носителем могут быть фторуглероды ( включа  те которые известны под торговой маркой Фреон) , ожиженный не(11т ной газ, диметиловый простой эфир и винилхлоридный мономер. При необходимости композиции могу также содержать поверхностно-активный агент с целью эмульгировани , диспергировани , смачивани  или рас пространени  активного соединени , который может быть как ионным, так и 55« неионным материалом Примерами соответствующих анионных поверхностно-активных агентов могут служить соли натри  и кальци  лигно(.моно)сульфокислоты , соли натри  и кали  олеиновой кислоты, соль натри  лаурил(моно сульфокислоты и соли натри  и кальци  додецилбензол{моно сульфокислоты. Примерами соответствующих катионных поверхностно-активных агентов могут служить высшие алифатические амины и конденсаты высших алифатических аминов с окисью этилена. Примерами неионных поверхностно-активных агентов могут служить глицерины жирных кислот , слоусные эфиры сахарозы жирных кислот, конденсаты окиси этилена с высшими алифатическими спиртами, окиси этилена с высшими жирными кислотами и.окиси этилена с алкилфенолами или алкилнафтолами и сополимеры окиси этилена с окисью пропилена. Протиеоклещевые или инсектицидные композиции в дополнение к вышеуказанным добавкам содержат защитный коллоид (такой как желатин, арабска  смола , казеин, поливиниловый спирт или карбоксиметилцеллюлоза J или тиксотропный агент (такой как поли%осфат натри  или бентонит). Композици  может также содержать другие соединени , обладающие противоклещевой активностью , например 2-(1-метилпропил ) -4, б-динитрофенил-f, &-диметилакрилат , ди-(п-хлорфеИил)-циклопропилкарбонил , N- ( -хлор-2-метилфенил) -N, N-диметилформамин; -2,,,5-тетрахлордифенилсульфон; 1,1-бис-(п-хлорфенил )-2,2,.-трихлорэтанол; 2-втор-бутилфенил-М-метилкарбамат , м-толил-N-метилкарбамат или минеральное масло , чтобы в некоторых случа х увеличить активность композиции; в некоторых случа х можно ожидать синергетический эффект. Вещество можно также использовать в смеси с другими фунгицидами, гербицидами , регул торами роста растений, привлекающими вредителей веществами или удобрени ми. Полученное известным способом вещество обладает активностью против гельминитов у человека и животных и примен етс  в виде напитка или капсулы . Оно может примен тьс  в виде водного раствора или раствора в других подход щих нетоксичных растворител х или в виде суспензии или дисперсии с использованием ускорите 7. 101 лей суспендировани  и смачивающих агентов, таки)$ как бентонит, или других составл ющих. Напиток должен также содержать противопенный агент. Предпочтительно, чтобы напиток содержал активное соединение в количестве 0,01-0,5 или 0,01-0,1 вес,%. Кроме того, вещество можно примен ть в форме сухих твердых капсул, пилюль или таблеток, содержащих заранее определенное количество активного соединени . Такие композиции можно получать при п6мои и гомогенизирующего перемешивани  активного соединени  с одним или несколькими тонкоизмельченными материалами, такими как разбавители, наполнители, дезинтегра торы или св зываюи4ие агенты (например , крахмал, лактоза, тальк, стеара магни  или растительные смолы). Вес активного ингредиента можно варьировать в широких пределах в зав симости от вида животного/которого подвергают обработке, степени заболе вани  и веса тела животного. Вещество можно вводить животным равномерного распределени  его в корме или примен ть в форме шариков . С целью достижени  удовлетворительного антипаразитического эффекта корм должен содержать активное со единение в количестве 0,00010 ,02 вес.. Вещество можно также растворить или диспергировать в жидком носителе и примен ть парентерально животным в виде инъекции в желудок, мышцу , легкие или под кожу. При паренте ральном применении в качестве носите л  предпочтительно используют растительное масло, такое, как арахисовое или хлопковое масло. При паренте ральном применении активное соединение , содержитс  в количестве 0,0550 вес.% от всей композиции. Вещество можно использовать местно, непосредственно на открытом участке кожи , например, распылением. Обработку животных можно проводить в течение короткого промежутка времени, на пример в течение 1-5 дн. Пример 1. Получение вещества . 600 мл предварительно подготовлен ной среды, содержащей 2% вес./об. глюкозы, }% муки соевых бобов крупно го помола, 0,5 насыщенного мамсового/ликера и 0,21 хлорида натри , по|Мещают в колбу Эрлемебера емкостью 58 1 л. Колонии спор штамма Streptomyces. B-Ml-1 6 прививают на упом нутую среду и затем выращивают в течение ЦВ ч при . По истечении этого промежутка времени содержимое двух таких 2литровых колб Эрленмейера перенос т в ферментер, снабженный устройством дл  его встр хивани , емкостью 30 л, который уже содержит 20 л ти1ательно стерилизованной среды дл  выращивани  культуры, содержащей k% вес./об. глюкозы, 1 вес./с, муки соевых бобов крупного помоги, 0,5 вес./об. маисового крахмала, 1 вес./об. сн того молока, 0,2% -вес./об. насыщенного маисового ликера и 0,3 хлорида натри . Значение рН перед стерилизацией 7,2-7,5. Затем культуру инкубируют при 28 С при давлении внутри ферментера 0,5 кг/см в течение 10 дн. После завершени  этой стадии 20 л бульона дл  выращивани  культуры подк fcл ют до рН 3 добавлением серной кислоты, а затем после добавлени  1 кг Селита, вспомогательного фильтрующего материала, смесь фильтруи т под давлением, в результате чего образуетс  фильтровальна  лепешка весомо примерно 3 кГа Эту лепешку экстрагируют при помощи 15л метанола и экстракт фильтруют. 15 л метанолового раствора, полученного таким образом, разбавл ют 5 л воды и экстрагируют 20 л гексана. Полученный гексановый раствор сушат над безводным сульфатом натри  и затем концентрируют выпариванием при пониженном давлении в вод ной бане при , в результате чего образуетс  22 г масл нистого материала. Полученный масл нистый материал раствор ют в 30 мл гексана и адсорбируют на колонне, содержащей 2 кг силикагел , сбалансированного гексаном . Колонну эг оируют смесью гексана и ацетона 95:5(06.). Фракцию объемом 2л, содержащую искомое соединение , собирают и затем концентрируют при пониженном давлении в вод ной бане при +0- 5с, в результате чего образуетс  550 мг масл нистого материала. Этот материал раствор ют в 1 мл метанола и раствор помещают в колонну, содержащую 200 мл Сефадекса LH-20, который сбалансирован метанолом. Затем колонну элюируют метанолом, в результате чего образуетс  фракци  объемом б5 мл, содержаща  искомое вещество. Эту фрак цию концентрируют выпариванием при пониженном давлении при , полученный в результате остаток раствор ют в 2 мл метанола и метаноловый раствор разбавл ют 2 мл воды. Смесь выдерживают при комнатной температуре , в результате чего получаетс  110 мг соединени  в виде аморф ного порошка. Пример 2. Получение вещест ва В 2-литровую колбу, содержащую бООмл предварительно пригото вле нной среды,содержащей % (вес,/об.) саха розы, 0,35% (вес./об.) полипептона и 0,05 («ее./об.) дикалийартофосфа та, прививают колонии спор штамма Streptomyces и затем микроорганизиы выращивают в течение 8 при . Содержимое трех таких колб перенос т затем в резервуар дл  фер ментации емкостью бОО л, в котором уже содержитс  300 л тщательно стерилизованной среды дл  выращивани  культуры, котор.а  содержит 8% в/о глюкозы, 1 в/о муки крупного помола соевых бобов, 0,5 в/о маисового крахмала, 1 в/о сн того молока, 0,2 в/о насыщенного маисового ликера , 0,3% в/о хлорида натри  и 0,05% в/о карбоната кальци . рН сре ды поддерживают на уровне 7,,5. Выращивание осуществл ют при 28С при перемешивании со скоростью 150200 об/мин и внутреннем давлении 0,5-1,0 кг/см -в течение 12 дн. После завершени  этой стадии количество вещества в среде составл ет 180 мкг/мл. В 300 л полученной в результате среды дл  выращивани  культуры рН обеспечиваетс  на уровне 3 при помощи добавлени  серной кислоты, а затем в нее добавл ют 15 Селита, вспомогательного фильтрующего материала, и смесь фильтруют п давлением, в резу ьтате чего образу етс  фильтровальна  лепешка весом kQ кг. Эту лепеш1 у экстрагируют при помощи 200 л метанола и фильтруют. Добавл ют 150 л воды в экстракт метанола и полученную смесь экстрагируют дважды, оба раза при помощи 250 л гексана. Полученный гексановы раствор сушат над безводным сульфат натри  и затем концентрируют выпари ванием при пониженном давлении в во д ной бане при , в результат чего обрадуетс  350 г масла. Это масло раствор ют в lOO мл гексана и адсорбируют на колонне, содержащей 3 кг силикагел , который предварительно сбалансирован гексаном. Колонну элюируют смесью гексана и ацетона 95:5 об. , в результате чего получаетс , фракци  элюата, содержаща  искомое вещество. Эта фракци  концентрируетс  выпариванием при пониженном давлении над вод ной ванной при 045 С , в результате чего образуетс  33 г неочищенных кристаллов. Полученные кристаллы раствор ют в смеси гексана и этилацетона 20:1 (,об., из которой в результате перекристаллизации получают 17, г вещества в виде бесцветных кристаллов в форме игл, которые плав тс  при 186-188 0 и имеют ранее описанные свойства. Пример 3. Порошок. 10 вес.ч. вещества в виде аморфного порошка дс авл ют и тщательно перемешивают с 5 вес.ч. белого углерода . В эту смесь добавл ют 50 вес.ч. глины. Полученную смесь тщательно перемешивают, трижды измельчают в порошок в мельнице тонкого помола ударного типа, а затем снова тщательно перемешивают, в результа те чего образуетс  порошок. Пример k. Смачиваемый порошок . 0 вес.ч. вещества в виде аморфного порошка смешивают с .0 вес .ч. белого углерода. В полученную смесь добавл ют 5 вес.ч. додецилбензолсульфоната натри , 2 вес;.ч. поливинилового спирта и 33 вес.ч. глины. Полученную смесь тщательно перемешивают. Далее смесь трижды измельчают в мельнице тонкого помола ударного типа, снова тщательно перемешивают, в результате чего получаетс  смачиваемый порошок. Пример 5. Эмульгируемые концентраты. 3 вес.ч. вещества в виде аморфного порошка, 7 вес.ч. полиоксиэтиленнонилфенилового простого эфира, 3 вес.ч. додецилбензолсульфоната кальци  и 87 вес.% ксилола перемешивают и фильтруют , в результате чего получаетс  раствор, который можно использовать в качестве эмульгируемого концентрата. Пример 6. Композици  на основе масла. 10 вес.ч. вещества в виде аморфного порошка раствор ют в 10 вес.ч. ксилола и затем в раствор добавл ют

11101

80 вес.ч..машинного масла. Далее смесь фильтруют, в результате чего получаетс  композици  на основе масла ,

П р и м е р.7. Противоклещеаа  активность относительно двуп тнистого паутинного клещика (Tetranychus urtlcae ),

3 вес.% вещества эмульгируют, концентрат приготавливают аналогично примеру 3. Затем концентрат разбавл  ют водой, чтобы получить концентрацию активного соединени , котора  указана в табл. 1, На листву китайской вигны, содержащую взрослых самок Tetranychus urtlcae, разбрызгивают испы ||ваемый раствор в количестве ; 5 см на 2 листа при помощи распы- .

105512 .

глител  типа Мизухо. Далё листву су шат на воздухе и выдерживают в, fep .мостатических услови х при 2 С в течение 72 ч, после чего определ ют

S количество погибших клеи1ей. Это ког личество составл ет 30-35 на лист, в каждом испытании используетс  два листа.

1§ : Эксперимент проводитс  с использованием предпагаемого вещества, а в контрольных экспериментах используют ни льбемицины и ес и известный сельскохоз йственный препа1$ рат Келтан (на основе 1,1-бис(хлорфенил ) -2,2, 2-трихлорэтанола Л Полученные результаты представлены в табл. 1.

Таблица 1

Пример 8. Противоклещева  активность относительно  иц двум тнистого паутинного клещика (Tetra- nychus urticae).

В этом испытании откладывают  йца в возрасте 1 день Tetranychus urticae , которые предварительно нанос тс  на листву китайской вигны. Листь  об| батывают веществом, полученным

предлагаемым способом, а также веществами , приведенными в примере 7. Число  иц на одном листе составл ет примерно 100. Спуст  2 нед. после обработки определ ют число  и1|, которые не вылупились.

Полученные результаты даны в табл.2, где указаны проценты от общего числа  иц. ..

Таблица 2

тивность относительно цитрусового красного клещика (Panonychus citri). Испытание провод т, как в примере 7, за исключением того, что испольВ дополнение к тем результатам, которые приведены в табл. 3 был проведен эксперимент с эмульсией Келта- 25 на с концентрацией 30 ч./млн, но даже при такой концентрации гибель клеща составл ет только 93.

Из приведенных результатов видно, что предлагаемое вещество обладает зо в высшей степени значительной противоклещевой активностью по сравнению с мильбемицинами с(. ио(, которые в свою очередь обладают существенно более высокой активностью по сравнению с известным препаратом против акарицидов Келтаном.

П р и м е р 10. Глистогонна  ктивность против Nematospiroides ubris.

Самцы мыши в возрасте нед. вида RFVL, вес которых 18-22 г, заражают томатическим.способом паразитом виа Nematospiroides dubius. Затем мышей раздел ют на группы из п ти животных кажда , и кажда  мышь полу- 5 чает корм, содержащий предлагаемое вещество в количестве, указанном в табл. k, в течение 7 дн. после заражени  , а затем снова им дают необработанную пищу. Спуст  1 дн.после. 50 заражени  животных усыпл ют и определ ют количество паразитов в малом кишечнике. Результат сравнивают с контрольной группой, котора  подвергаетс  аналогичной процедуре заражени , Ss но не получает предлагаемое вещество.

Результаты глистогонной активности приведены в табл. .

взрослых самок цитрусового красного клещика. Полученные результаты приведены в табл. 3.

Т а

лица

Таблица k

0,05

100

0,005

100

96

0,0005

0,03

32

27,6 0,03

Данные табл. k показывают, что предлагаемое вещество обладает глистогонной активностью, котора  примерно в 2 раза выше, чем активность смеси мильбемицинов.

П р и м е р 11. Глистогонна  активность против Тохосага cati.

Используют в качестве животных 18 кот т 13 самца и 15 самок) весом примерно 1,6-3,0 кг, которые в естественных услови х заражены паразитом Тохосага cati . Каждому котенку стоматическим способом ввод т одну дозу вещества, диспергированного в оливковом масле, в следующих количествах: 2 кот там - 5 мг/кг, 3 кот там - 2,5 мг/кг, 2 кот там - /кг. 3 кот там - 0,5 мг/кг, 3 кот там - 0,25 мг/кг, 2 кот там 0 ,1 мг/кг и 3 кот там - 0,05 мг/кг. Перед обработкой показатель ЯГК (т.е. число  иц на 1 г кала) составл ет 15016250 .Спуст  1 нед после обработки тот же показатель равен нулю у всех кот т. а общее число изгнанных глистов втече- ние той же недели 2-Ю. В результате вскрыти  установлено, что ни у одног котенка глистов нет. Пример 12. Глистогонна  активность против Тохосага canis. В качестве животных используют 13 щенков (3 самца и 10 самок) весом 1,2-13 кг, которые в естественных услови х заражены паразитом Тохосага canis.: Каждому щенку стоматическим способом ввод т одну дозу вещества, диспергированного в оли ковом масле, в следующих количествах: 1 щенку - 5 иг/кг веса животного; 2 Щенкам - 0,25 мг/кг, щенкам - 0,1 мг/кг, 3 щенкам - 0,05 мг/ /кг, 2 щенкам - 0,025 мг/кг и 1 щенку - 0,01 мг/кг. Перед введением препарата показатель ЯГК составл ет lOO-ie iOO. Спуст  1 нед после обработки тот же показатель дл  всех щен ков равен нулю, а общее число изгнан ных глистов в течение той же недели 2-36 на каждого щенка. В результате вскрыти  установлено, что ни у одного щенка глистов нет. ; Пример 13. Глистогонна  активность против Trichuris vulpis. В качестве животных используют 5 собак (2 самки и 3 самца) весом 6,2-11,5 кг в возрасте 2 или 3 лет. Каждому животному стоматическим способом ввод т одну дозу 1 или 5 мг/кг iaieca животного вещества в виде капсулы , покрытой желатином. Установлено , что эти собаки в естественных, услови х заражены паразитом Trichurls vulpus. Перед обработкой показатель ЯГК составл ет 100-3500. Спуст  1 нед после обработки тот же показатель составл ет 0-200, а общее число изгнанных в течение недели глистов 8-451. В результате вскрыти  установлено, что число оставшихс  паразитов составл ет 0-33., т.е. эффективность препарата 92-100. Пример Шо Глистогонна  активность против Ancylostoma canium. В качестве животных используют 5 собак ( 2 самки и 3 самца весом 7,0-11,5 кг в возрасте 2 или 3 лет. Эти собаки в естественных услови х заражены паразитом Ancylostoma canium Каждой собаке стоматическим способом ввод т одну дозу вещества в виде капсулы, покрытой желатином. Вещество ввод т собакам в следующих количествах: 2 собакам - 0,5 м-/кг, веса животного; 2 собакам - 1 мг/кг и 1- собаке - 5 мг/кг. Перед введением соединени  показатель ЯГК соетавл ет 200-1550. Через 1 нед после обработки тот же показатель дл  всех собак равен нулю, а общее число изгнанных глистов в течение недели составл ет t-82 на собаку. В результате вскрыти  установлено, что ни у одной собаки глистов нет. Предлагаемый способ позвол ет получить вещество,обладающее высокой протипоклещевойи глистогонной активностью.

Claims (3)

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВЕЩЕСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО ПРОТИВОКЛЕЩЕВОЙ И ГЛИСТОГОННОЙ АКТИВНОСТЬЮ формулы отличающийся тем, что, штамм Streptomyces В=41=146 выращивают на питательной среде, содержащей источники углерода и азота, при 22-30°С с последующим выделением целевого продукта из культуральной жидкости, концентрированием и очисткой.

2. Способ по п. 1,отличающ и й с я тем, что выращивание осуществляют на среде, содержащей в качестве основного источника углерода глюкозу в концентрации 6-8% и дополнительного источника углерода - лактозу, мальтозу и/или маисовый крахмал в концентрации 0,5^_2% и ,в качестве источника азота - смесь муки соевых бобов крупного помола 0,5-1% и снятого молока 1-2%.

3. Способ поп. ^отличающийся тем, что концентрирование и очистку проводят до содержания целевого продукта 25-50%.

SS01I01ns “