SK9072003A3 - Combination therapy using receptor tyrosine kinase inhibitors and angiogenesis inhibitors - Google Patents

Description

Oblasť techniky

Vynález sa týka kombinovanej terapie na liečenie nádorov a nádorových metastáz spočívajúcich v podávaní antagonistov/inhibítorov receptoru tyrosínkinázy, najmä antagonistov ErbB receptoru, výhodnejšie antagonistov EGF (Her 1) receptoru a antiangiogénnych činidiel, s výhodou antagonistov integrínu, poprípade spolu s činidlami alebo formami terapie, ktorá má aditívnu alebo synergickú účinnosť, keď je poskytovaná spolu s uvedenou kombináciou antagonistov/inhibítorov, ako sú podávanie chemoterapeutických činidiel alebo radiačná terapia. Výsledkom terapie môže byť synergický potenciálny nárast inhibičného pôsobenia každého jednotlivého terapeutika na proliferáciu nádorov a poskytovaní účinnej liečby než pri podávaní jednotlivých zložiek samotných.

Doterajší stav techniky

Receptor epidermálného rastového faktoru (EGF receptor alebo EGFR), známy tiež ako c-erbBl/Herl, a produkt neú onkogénu (známeho tiež ako c-erbB2/Her2) sú členmi superrodiny receptoru EFG, ktoré patria do veľkej rodiny receptorových tyrosínkináz.

Sú v interakcii so špecifickými rastovými faktormi na povrchu buniek alebo ku zmenenej expresii génov a k zvýšeniu rýchlosti rastu.

s prírodnými ligandami, ako EGF alebo TGF a, takže aktivujú receptorovú tyrosínkinázu. Kaskáda v smere signalizujúcich proteínov je aktivovaná, čo obecne vedie

C-erbB2 (Her2) je transmembránová tyrosínkináza majúca molekulovú hmotnosť približne 185000, s významnou homológiou s receptorom EGF (Her 1) , i keď špecifický ligand pre Her2 alebo doteraz jasne identifikovaný.

EGF j e transmembránový glykoprot hmotnosť 170000 a nachádza bunečných typoch. Aktivuje zo súboru zahŕňajúceho EGF, a ampiregulín. faktor (TGF-a)

Receptor má molekulovú epiteliálnych ligandami rastový faktor alfa) epidermálny rastový rastový faktor alfa k bunečnej proliferácii a faktory neviažu HER2 (Ulrich 203, 1990). Na rozdiel od eín, ktorý sa na mnohých s aspoň tromi

TGF-oí (transformačný Zistilo sa, že ako (EGF), tak transformačný viažu receptor EGF a vedú rastu nádoru. Tieto rastové a Schlesinger, Celí 61, str. niekoľkých rodín rastových faktorov, ktoré vyvolávajú receptorovú dimerizáciu pôsobením svojej dimérnej povahy (napríklad PDGF), monomerné rastové faktory, ako EGF, obsahujú dve väzobné miesta pre svoje receptory, a preto môžu zosieťovať dva susedné EGF receptory (Lemmon a kol., EMBO J. 16, str. 281, 1997). Receptorová dimerizácia je podstatná pre stimuláciu vnútornej katalytickej aktivity a pre autofosforyláciu receptorov rastového faktoru. Receptorové proteínové tyrosínkinázy (PTK) sú schopné homodimerizácie a héterodimerizácie.

Klinické štúdie naznačujú, že ako receptor EGF, tak c-erbB2 sú nadmerne expresované v niektorých typoch nádorov, najmä prsníka, vaječníkov, močového mechúra, hrubého čreva, obličiek, hlavy a krku a plochých karcinómov pľúc (Mendelsohn, Cancer

Cells 7, str. 359,

1989; Mendelsohn,

Cancer Biology 1, str. 339, 1990). Preto tieto pozorovania stimulovali preklinické výskumy zacielené na inhibíciu funkcie ľudského receptora EGF alebo c-erbB2 ako nové terapeutické prístupy na liečenie rakoviny (napríklad Baselga a kol., J. Clin.

Oncol.

14, str. 737,

1996; Fan a Mendelsohn Curr. Opin.

Oncol. 10, str. 67,

1998) .

Uvádza sa napríklad, že protilátky receptora EGF i protilátky anti HER2 vykazujú hodnotné výsledky v terapii ľudskej rakoviny.

Tak je už humanizovaná monoklonálna protilátka 4D5 (hMAb 4D5,

HERCEPTIN ) obchodne dostupným produktom.

Bolo predvedené, že protilátky anti-EGF receptora pri blokovaní väzby EGF a TGF-α na receptor inhibujú, ako sa zdá, proliferáciu nádorových buniek. Vzhľadom k týmto poznatkom bola vyvinutá rada myších a krysích monoklonálnych protilátok proti EGF receptoru a testovaná na schopnosť inhibovať rast nádorových buniek in vitro a in vivo (Modjtahedi a Dean, J. Oncology 4, str. 277, 1994). Humanizovaná monoklonálna protilátka 425 (hMAb 425) (americký patentový spis číslo 5 558864, európsky patentový spis číslo EP O 531472) a chimérna monoklonálna protilátka 225 (cMAb 225) (Naramura a kol., Cancer Immunol, Immunother. 37, str. 343 až 349, 1993; WO 96/40210), obe zamerané na receptor EGF, ukázali svoju účinnosť v klinických pokusoch. Ukázalo sa, že protilátka C225 inhibuje EGF-sprostredkovaný rast nádorových buniek in vitro a inhibuje tvorenie ľudských nádorov in vivo u holých myši. Okrem toho sa zdá, že pôsobí okrem iného synergicky s určitými chemoterapeutickými činidlami (napríklad dexorubicín, adiamycín, taxol a cisplatín) na vykorenenie ľudských nádorov in vivo v myších modeloch s xenoimplantátmi. Ye a kol. (Oncogéne 18, str. 731, 1999) uvádza, že ľudské rakovinové vaječníkové bunky môžu byť úspešne liečené s kombináciou ako MAb 225 tak hMAb 4D5.

Angiogenézia, čiže neovaskularizácia, je proces tkanivovej vaskularizácie, ktorá vyvoláva prerastanie nových krvných ciev do tkaniva. Proces prebieha infiltráciou endoteliálnych buniek a buniek hladkého svalstva. Predpokladá sa, že proces pokračuje jednou z troch ciest: (1) cievy môžu byť výhonkami stávajúcich

ciev;

(2) nové vytváranie ciev môže pochádzať od

prekurzorových buniek (vaskulogenézia) ; alebo (3) sa môže zväčšovať priemer stávajúcich malých ciev (Blood a kol., Bioch. Biophys. Acta 1032, str. 89, 1990) . Je známe, že cievne endoteliálne bunky obsahujú aspoň päť integrinov závislých na RGD, vrátanie receptora vitronektínu (ανβ₃ alebo ανβ₅) , receptor kolagénu typu I a IV, receptor laminína, receptor systému fibronekín/laminín/kolagén a receptor fibronektína (Davies

Biochem.

51, str. 206, 1993). Je známe, že bunky hladkého svalstva obsahujú aspoň šesť integrinov závislých na RGD vrátane ανβ₃ a οίνβ₅·

Inhibícia adézie buniek in vitro pri použití monoklonálnych protilátok, imunošpecifických pre rôzne integrínové oí alebo β podjednotky, ovplyvňuj e vitronektínový receptor ανβ₃ pri bunkovej adhézii rôznych bunkových typov vrátane mikrovaskulárnych endoteliálnych buniek (Davies a kol., J. Celí. Biol. 51, str. 206, 1993) .

Integríny sú triedou bunkových receptorov, o ktorých je známe, že viažu proteíny extrabunkovej matrice a sprostredkovávajú vzájomné pôsobenie systémov bunkaextracelulárnej matrice a bunka-bunka, označované obecne ako javy bunkovej adhézie. Integrínové receptory tvoria rodinu proteínov s rozličnými štrukturálnymi charakteristikami nekovaletných héterodimérnych glykoproteínových komplexov, vytvorených z podjednotiek a. a β. 0 vitro-nektínovom receptore, pomenovaným podlá jeho originálnej vlastnosti preferenčného viazania na vitronektin, je teraz známe, že sa týka troch rôznych integrinov, označovaných ανβ_χ, ανβ₃ a ανβ₅. Integrín ανβ₁ viaže fibronektin a vitronektin. Integrin ανβ₃ viaže veľmi rozmanité ligandy, vrátane fibrínu, fibrinogénu, laminínu, trombospondínu, vitronektinu a Willebrandového faktoru. Integrín ανβ₅ viaže vitronektin. Je zrejmé, že existujú rôzne integríny s rôznymi ako rôzne integríny a biologické poznávacím špecifičnosti miestom v biologickými podjednotky a funkcie.

funkciami, rovnako majúce rozličné

Jedným významným ligandu pre mnohé integríny je tripeptidová sekvencia arginínglycín-asparagová kyselina (RGD) . RGD sa nachádza vo všetkých ligandoch, definovaných vyššie, pre integríny receptora vitronektinu. Toto poznávacie miesto RGD môže byť zatienené lineárnymi a cyklickými (poly)peptidami, ktoré obsahujú sekvenciu RGD. 0 takých peptidoch RGD je známe, že sú inhibítormi alebo prípadne antagonistami integrínovej funkcie. Je však dôležité poznamenať, že v závislosti na sekvencii a štruktúre peptidu RGD, môže byť špecifičnosť inhibície menená na cielené špecifické integríny. Rôzne polypeptidy RGD s premenlivou integrínovou špecifičnosťou popísali napríklad Cheresch a kol. (Celí 58, str.945, 1989);

a Aumailley a kol. (FEBS Letts. 2 91,	str.	50, 1991)	a sú
popísané v	rôznych patentových spisoch	(napríklad US	číslo
4 517686,	US 4 578079, US 4 589881	, US	4614517,	US 4
661111, US	4792525, EP 0 770622).

Vytváranie nových krvných ciev, čiže angiogenézie, má kľúčovú úlohu v rozvoji malígnej choroby a vzbudila mnoho záujmu vo vývoji činidiel, ktoré inhibujú angiogenéziu (napríklad Holmgren a kol., Náture Medicíne 1, 149, 1995; Folkman, Náture Medicíne 1, str, 27, 1995; O°Reilly a kol., Celí 79, str. 315, 1994). Použitie antagonistov integrínu ανβ₃ na inhibíciu angiogenézie je známe pri spôsoboch inhibície rastu pevných nádorov znížením prísunu krvi do pevného nádoru (napríklad americké patentové spisy číslo US 5 753230 a US 5 766591, ktoré popisujú použitie antagonistov ανβ₃, ako sú syntetické polypeptidy, monoklonálne protilátky a mimetiká ανβ₃, ktoré viažu receptor ανβ₃ a inhibujú angiogenéziu). Spôsoby a látky na inhibíciu ανβ₅ sprostredkované angiogenézie tkanív s použitím antagonistov vitronektinového receptora ανβ₅ sú popísané vo svetovom patentovom spise číslo WO 97/45447. Angiogenézia sa vyznačuje inváziou, migráciou a proliferáciou endoteliálnych buniek, procesy, ktoré závisia na interakcii buniek s extracelulárnymi zložkami matrice. V tomto kontexte integrínové bunkové-matricové receptory sprostredkujú rozširovanie a migráciu buniek. Ukázalo sa, že endoteliálne adhézne receptory integrínu ανβ₃ sú hlavnými aktérmi zaisťovania cievne-špecifického cieľa pre stratégie anti-angiogénneho liečenia (Brooks a kol. Science 264, str. 569, 1994; Friedlander a kol., Science 270, 1995). Potreba cievneho integrínu ανβ₃ v angiogenézii bola predvedená niekoľkými modelmi in vivo, kedy generácia nových krvných ciev transplantovanými ľudskými nádormi bola úplne inhibovaná buď systemickým podávaním peptidovych antagonistov integrínu ανβ₃ a ανβ₅, ako je uvedené vyššie, alebo alternatívne protilátkou ανβ₃ LM609 (Brooks a kol., Celí 79, str. 1157, 1994; ATCC HB 9537). Táto protilátka blokuje receptor integrínu ανβ₃, ktorej aktivácia prírodnými ligandami podporuje apoptózu proliferatívnych angiogénnych cievnych buniek a tým prerušuje dozrievanie nove sa tvoriacich krvných ciev a v každom prípade významne proliferáciu nádorov. Nedávno sa vyskytla správa, že melanomové bunky by mohli tvoriť pavučine podobné obrazce krvných ciev i v neprítomnosti endoteliálnych buniek (Science 285, 14, 1999), čo znamená, že nádory by boli schopné obísť sa bez niektorých antiangiogénnych drog, ktoré sú účinné iba v prítomnosti endoteliálneho tkaniva.

Mnohé molekuly stimulujú migráciu a združovanie, vrátane VEGF, životne dôležitými faktormi

Endothelial

Grown

Factor) selektívny mitogenéziu VEGF je faktor, endoteliálnu proliferáciu,

Ang 1 a bFGF a , sú prežitia. VEGF (Vascular bol identifikovaný ako stimulovať ktorý môže

Najmä sa rastový endoteliálnych buniek.

hlavným sprostredkovateľom nádore a v ischemických očných (molekulová hmotnosť: 46 má zato, že v primárnom je homodimér angiogénny faktor špecifický pre angiogenézie chorobách. VEGF

000) čo je bunky endoteliálne

(Ferrara	a kol.,	Endocrin.	Rev.	13,	str. 18, 1992)
a faktor	vasopermeability	(Senger	a kol., Cancer . Res.
465629,	1986),	ktorý sa	viaže	na	vysoko afinitne
membránou-	-viazané	receptory	s aktivitou	t yro s í nki ná z ovou
aktivitou	(Akoeman	. a kol., J	. Clín.	Invest. 89, str. 244,

1992). Biopsie ľudského nádoru vykazujú zlepšenú expresiu

VEGF mRNA malígnymi bunkami a VEGF receptorom mRNA v susedných endoteliálnych bunkách. Expresia VEGF sa javí ako najväčší v oblastiach nádorov susediacich s vaskulárnou oblasťou nekrózy (Thomas a kol., J. Biol. Chem. 271(2), str. 603, 1996; Folkman, Náture Medicíne 1, str. 27, 1995). Podľa svetového patentového spisu číslo WO 97/45447 pôsobí integrín ανβ₅ na neovaskularizáciu, najmä vyvolanú WEGF, EGF a TGFa₁ a v spise sa uvádza, že antagonista ανβ₅ môže inhibovať angiogenéziu podporovanú VEGF. Účinné protinádorové terapie môžu teda používať cielený receptor VEGF k inhibícii angiogenézie pri použití monoklonálnych protilátok (Witte a kol., Cancer Metastasis Rev. 17(2), str. 155, 1998). O Mab DC-101 je známe, že inhibuje angiogenéziu nádorových buniek.

Ako vyplýva z uvedeného súhrnu, je zrejmé, že EGF, VEGF a integríny ανβ3 a ανβ₅ a ich receptory sú podstatne zahrnuté v proliferácii a angiogenézii nádorov, a že účinné inhibítory, obzvlášť monoklonálne protilátky, zamerané na receptor EGF a/lebo VEGF a/lebo integrínové receptory alebo ktorékoľvek iné receptory proteínovej tyrosínkinázy sú v zás-ade vhodnými kandidátmi pre nádorovú terapiu. Zvláštny záujem sa sústreďuje na monoklonálne protilátky, ktoré môžu špecificky rozoznať ich antigénové epitópy na príslušných receptoroch.

Avšak použitie takých protilátok, ktoré boli úspešné in vitro a v živočíšnych modeloch, nevykázali dostatočnú účinnosť u pacientov s monodrogovou terapiou. Podobné výsledky boli dosiahnuté, keď pri klinických pokusoch sa použili iné antiangiogénne alebo EGF receptorové antagonisti než protilátky. Zdá sa, že nádory, ak je blokovaných niekoľko špecifických miest, môžu použiť iné molekuly povrchu buniek ku kompenzácii uvedeného pôvodného blokovania. Nádory sa teda v skutočnosti nescvrknú behom rôznych anti-angiogénnych alebo antiproliferatívnych terapií. Z týchto dôvodov boli navrhnuté kombinované terapie pre vyhnutie sa tomuto problému, pri použití monoklonálnych protilátok spoločne s cytotoxickými alebo chemoterapeutickými činidlami, alebo v kombinácii s rádioterapiou. A skutočne, klinické pokusy ukázali, že tieto kombinované terapie sú účinnejšie než odpovedajúce monopodávanie. Tak napríklad bola popísaná protilátkovácytokínová fúzna proteínová terapia, ktorá podporuje imunitnú odozvu sprostredkovanú inhibíciou stávajúcich nádorov, ako sú rakovinové metastázy. Napríklad cytokínový interleukín 2 (IL-2) bol fúzovaný na špecifické monoklonálne protilátky KS1/4 a chl4.18 zamerané na s nádorom spojené antigény adhéznej molekuly epiteliálnej bunky (Ep-CAM, KSA, KS1/4 antigén) alebo disialogangliosid GD, na vytvorenie fúznych proteínových 14.18-IL-2 alebo KS1/4-IL-2 (americký patentový spis číslo US 5 650150).

Iný klinický pristúp je založený na podávaní monoklonálnej R protilátky c225 v kombinácii s Herceptínom (Ye a kol. 1999 l.c.). Okrem toho kombinácia anti-EGF receptorových protilátok spolu s neoplastickými činidlami, ako je cisplatín alebo doxorubicín, sú uvedené v patentových spisoch EP 0667 165 (Al) a US 6 217 866); podobná kombinácia, obzvlášť kombinácia Herceptinu^R s cisplatínom a s ostatnými cytotoxickými faktormi je popísaná v literatúre (Génentech, US 5 770195). Synergické účinky medzi antiangiogénnym antagonistom integrínu oíy a vyššie uvedenou fúziou proteínov protilátka-cytokín bola pozorovaná v nádorových metastázach (Lode a kol, Proc. Natl. Acad. Sci. 96, str.1591, 1999; svetový patentový spis číslo WO 00/47227). Spôsoby použitia antagonistov integrínu spoločne s anti-neoplastickými činidlami sú popísané vo svetovom patentovom spise číslo WO 00/38665. Nedávno sa zistilo, že kombinácia gemcitabinu so špecifickou monoklonálnou protilátkou DC-101, ktorá inhibuje angiogenéziu, zvyšuje protinádorovy efekt u rakoviny pankreasu myší v porovnaní s gemcitabínom samotným. V nemeckom patentovom spise číslo DE 198 42415 sa popisuje kombinácia špecifického cyklického peptidu RGD ako inhibítoru integrínu so špecifickými antiangiogenéznymi činidlami. Iné prístupy navrhujú podávanie receptorov EGF blokujúcich činidiel, vrátane protilátok, alebo antagonistov integrínu v kombinácii s ožarovaním alebo s rádioterapiou (napríklad svetový patentový spis číslo WO 99/60023 a WO 00/0038715).

A preto, i keď sú rôzne kombinácie terapií vo výskumnom štádiu a v klinických pokusoch, výstupy týchto terapii nie sú dostatočne produktívne. Je preto potreba vyvíjať ďalšie kombinácie, ktoré môžu vykázať zvýšenú účinnosť a znížené vedľajšie účinky.

Podstata vynálezu

Podstatou vynálezu je farmaceutický prostriedok obsahujúci aspoň jedno činidlo (i) blokujúce aspoň jeden receptor tyrosínkinázy a (ii) aspoň jedno činidlo inhibujúce angiogenéziu, pričom toto činidlo alebo tieto činidlá nie sú cytokínovými imunokonjugátmi, poprípade spolu s farmaceutický prijateľným nosičom, riedidlom alebo excipientom.

Vynález hlavne popisuje nové farmaceutické liečenie založené na novom koncepte nádorovej terapie podávaním pacientom v terapeuticky účinnom množstve činidlo, ktoré blokuje alebo inhibuje receptorovú tyrosínkinázu, s výhodou receptor ErbB a výhodnej šie receptor EGF spolu s antiangiogénnym činidlom. Poprípade môže prostriedok podľa vynálezu obsahovať ďalšie terapeuticky účinné zložky, s výhodou volené zo súboru zahrňujúceho cytotoxické činidlá, chemoterapeutické činidlá a iné farmakologicky účinné zlúčeniny, ktoré môžu podporovať účinnosť uvedených činidiel alebo znižovať vedľajšie účinky uvedených činidiel.

Vynález sa teda týka farmaceutických prostriedkov obsahujúcich výhodné antagonisti receptoru ErbB a protilátku anti-EGFR (ErbBl/Her 1) a ako antiangiogénne činidlo inhibítora alebo antagonistu receptorov integrínu ανβ₃, ανβ₅ alebo ανβ₆, s výhodou lineárny alebo cyklický peptid obsahujúci RGD. Zvlášť sa vynález týka, vo vhodnom uskutočnení, špecifickej kombinovanej terapie zahrňujúcej protilátky anti-EGFR alebo anti-Her2, ako je humanizovaná monoklonálna protilátka 425 (h425, EMD 72000), chimérna

R monoklonálna protilátka 225 (c225) alebo Herceptín výhodne spolu s RGD obsahujúcimi integrínovými inhibítormi, najvýhodnejšie s cyklickým peptidom cyklo(Arg-Gly-Asp-DPhe-NMe-Val), poprípade s chemoterapeutickou zlúčeninou.

Podlá vynálezu môžu byť terapeuticky aktívne činidlá tiež zaistené pomocou farmaceutickej súpravy, kitu, obsahujúceho balíček obsahujúci jeden alebo niekoľko antagonistov tyrosínkinázy, jedno alebo niekoľko aniangiogénnych činidiel a poprípade jedno alebo niekoľko cytotoxických/chemoterapeutických činidiel v samostatnom balení alebo v oddelených kontejneroch. Terapia s týmito kombináciami môže zahrňovať poprípade liečbu ožarovaním.

Vynález sa však týka ďalej kombinovanej terapie pozostávajúcej z podávania iba jednej (fúznej) molekuly, majúcej antireceptorovú tyrosínkinázu, s výhodou aktivitu anti-ErbB receptora a antiangiogénnu aktivitu, poprípade spolu s jedným alebo s niekoľkými cytotoxickými/ chemoterapeutickými činidlami. Príkladom je anti-EGFR protilátka, ako h425 alebo c225, ako uvedené vyššie, a nižšie, ktorá je fúzovaná na C-terminále svojej Fc časti na antihormonálne činidlo známymi rekombinantnými alebo

Ďalším príkladom je jedna . špecifičnosť receptor a druhá je chemickými metódami, protilátka, kde je nukleárny hormónový bišpecifická zameraná na zameraná na receptor EGF.

V zásade môže byť podávanie uskutočňované radiačnou terapiou, pričom liečba ožarovaním môže prebiehať v podstate súbežne alebo pred alebo po podaní drogy. Podávanie rôznych činidiel kombinovanej terapie podľa vynálezu môže byť tiež dosahované v podstate súbežne alebo následne. Nádory majúce receptory na povrchu svojich buniek účastniacich sa vývoja krvných ciev v nádore, môžu byť úspešne liečené kombinovanou terapiou podlá vynálezu.

Je známe, že pre svoj obvykle a použitím nádory vyhľadávajú alternatívne cesty rast. Ak je blokovaná jedna cesta, majú inú cestu expresovaním signálnych ciest. Preto vynálezu môžu blokovať stratégií nádoru

Kombinácie prepnúť na receptorov a rozvoj a schopnosť iných farmaceutické kombinácie podlá niekoľko takých možných vývojových a poskytnúť v dôsledku toho rôzne prednosti.

podľa vynálezu sa hodia na liečenie a na prevenciu nádorov, nádorom podobných neoplastických porúch a nádorových metastáz, ktoré sa vyvíjajú a rastú aktiváciou ich relevantných hormónových receptorov, ktoré sa vyskytujú na povrchu nádorových buniek. S výhodou sa rôzne kombinované činidlá podľa vynálezu podávajú v kombinácii v malom dávkovaní, teda v dávkach nižších, než ktoré boli poprípade použité v klinických situáciách.

Výhodou znižovania dávky zlúčenín, prostriedkov a činidiel a liečby podľa vynálezu podávaním jedincom zahrňuje pokles nástupu škodlivých účinkov spojených s vyššími dávkami.

Napríklad a nižšie, znížením dávky činidla popísaného vyššie sa dosiahne zníženie frekvencie a závažnosti nevoľnosti a zvracania v porovnaní s pozorovaním pri’ vyšších dávkach. Zníženie nástupu škodlivých účinkov je cieľom zlepšenia kvality života pacienta. Ďalšou výhodou znižovania nástupu škodlivých účinkov je zlepšenie pacientovej spolupráce, zníženie počtu hospitalizácií potrebných na zvládnutie škodlivých účinkov a zníženie podania analgetických činidiel potrebných na zmiernenie bolesti spojenej so škodlivými účinkami. Alternatívne môžu tiež spôsoby a kombinácie podľa vynálezu maximalizovať terapeutický efekt pri vyšších dávkach.

Nádory, obsahujúce (nadmerne expresované) receptory

ErbB, s výhodou receptory ErbB 1 (Her 1, EGFR) alebo ErbB2 (Her2) na povrchu buniek, môžu byť s úspechom liečené kombináciou podľa vynálezu. Kombinácie v rámci farmaceutického liečenia podľa vynálezu vykazujú prekvapujúce synergické účinky.

Pri podávaní kombinácie drog je možné pozorovať reálne zmršťovanie a rozpad nádoru behom klinických štúdií, zatiaľ čo neboli zistené žiadne významné škodlivé drogové reakcie. Okrem toho vykazujú trojdrogové kombinácie (receptor tyrosínkinázy, s výhodou činidlo blokujúce receptor ErbB plus antiangiogénne činidlo plus chemoterapeutické činidlo) vynikajúcu účinnosť. Avšak čo je chemoterapeutická droga synergicky účinná alebo nie, závisí iba na droge samotnej, na receptore tyrosínkinázy, s výhodou na agonistu receptora

ErbB a na nádorovej bunke, ktorá je liečená uvedeným činidlom a musí sa obvykle skúšať prípad od prípadu.

Vynález sa obzvlášť týka:

farmaceutického prostriedku obsahujúceho činidlo alebo činidla majúceho (i) aspoň jednu špecificitu blokovania/inhibície receptora tyrosínkinázy a (ii) aspoň jednu špecificitu blokovania/inhibície angiogenézie, pričom toto činidlo alebo tieto činidlá nie sú cytokínovými imunokonjugátmi, poprípade spolu s farmaceutický prijateľným nosičom, riedidlom alebo recipientom;

ako prvej alternatívy farmaceutika obsahujúceho (i) aspoň jedno činidlo blokujúce receptor tyrosínkinázy a (ii) aspoň jedno činidlo inhibujúce angiogenéziu;

ako druhej alternatívy farmaceutika obsahujúceho činidlo blokujúce receptor tyrosínkinázy rovnako ako inhibujúce angiogenéziu, odpovedajúcim prostriedkom ďalej obsahujúcim aspoň jedno cytotoxické s výhodou chemoterapeutické činidlo, zvlášť farmaceutického prostriedku, pričom činidlo (i) má ErbB receptorovú blokujúcu/inhibičnú špecifičnosť, odpovedajúceho farmaceutického prostriedku, pričom špecifičnosť receptoru ErbB uvedeného činidla je odvodená od receptora EGF (ErbBl/Herl) alebo receptora ErbB2/Her2, zvlášť farmaceutického prostriedku, pričom činidlom je protilátka alebo jej funkčne intaktný derivát, obsahujúci väzobné miesto, ktoré sa viaže na epitóp ErbBl (Herl) alebo receptor Erb2(Her2), ako výhodné uskutočnenie farmaceutického prostriedku, v ktorom sú protilátka alebo jej funkčne intaktný derivát volený zo súboru zahrňujúceho:

- humanizovanú monoklonálnu protilátku 4256 (h425),

- chimérnu monoklonálnu protilátku 225 (c225), humanizovanú monoklonálnu protilátku Her2, vrátane humanizovanej chimérnej alebo deimunizovanej funkčne intaktné deriváty, odpovedajúceho farmaceutického prostriedku, kde uvedeným angiogenéznym inhibičným činiteľom je inhibítor integrínu ανβ₃, ανβ₅ alebo ανβ₆, odpovedajúcich farmaceutických prostriedkov, pričom uvedeným inhibítorom integrínu je RGD lineárny alebo cyklický peptid, s výhodou cyklo (Arg-Gly-Asp-DPheNMeVal), ako špecifického uskutočnenia farmaceutického prostriedku, kde uvedenou protilátkou alebo funkčne intaktným jej derivátom je humanizovaná monoklonálna protilátka 425 (h425) alebo chimérna monoklonálna protilátka 225 (c225) , vrátane deimunizovaných foriem a inhibítorom integrínu je cyklo-(Arg-Gly-Asp-DPheNMeVal), obsahujúci poprípade v oddelených kontejneroch alebo obaloch chemoterapeutické činidlo, ktoré je volené zo súboru zahrňujúceho cisplatín, doxorubicín, gemcitabín, docetaxel, paclitaxel a bleomycín, odpovedajúcich farmaceutických prostriedkov, pričom uvedeným inhibítorom integrínu je protilátka alebo jej funkčne intaktný derivát, obsahujúci väzobné miesto, ktoré sa viaže na epitóp receptoru integrínu, voleného s výhodou zo súboru zahrňujúceho protilátky LM609, P1F6, 17E6, 14D9.F8, vrátane ich humanizovaných, chimérnych alebo deimunizovaných verzií, farmaceutických prostriedkov, pričom jedným z činidiel je bišpecifická protilátková alebo héteroprotilátková molekula obsahujúca prvé väzobné miesto, ktoré sa viaže na epitóp alebo receptor tyrosínkinázy, s výhodou receptor ErbB a druhým väzobným miestom, ktoré sa viaže na epitóp receptora angiogenézie je s výhodou receptor integrínu, špecifického odpovedajúceho farmaceutického prostriedku, pričom uvedené monoklonálne protilátky sú volené zo súboru zahrňujúceho: h425, c225 alebo Her2 a monoklonálne protilátky LM609, P1F6 a 17E6, 14D9.F8,

- farmaceutického prostriedku, pričom jedným z činidiel je imunokonjugát zostávajúci z protilátky alebo protilátkového fragmentu tvoriaceho jednu z uvedených blokujúcich špecifičnosťou a neimunologickej molekuly fúzovanej na protilátku alebo fragment protilátky, tvoriaci druhú špecifičnosť,

- odpovedajúceho farmaceutického prostriedku, pričom protilátková časť alebo jej fragment obsahuje väzobné miesto, ktoré sa viaže na epitóp receptora ErbB, s výhodou receptora EGF (Herl) a fúzovaná neimunologická molekula obsahuje väzobné miesto, ktoré sa viaže na epitóp integrínového receptora,

- jeho špecifického farmaceutického prostriedku, kde časť protilátky, ktorá sa viaže na epitóp receptora ErbB, je volená zo súboru monoklonálnych protilátok zahrňujúcich h425, c225 alebo Her2 a neimunologických častí, ktoré sa viažu na epitóp integrínového receptora je cyklo(Arg-Gly-Asp-DPhe-NMeVal),

- farmaceutického kitu obsahujúceho (i) balíček obsahujúce aspoň jeden receptor tyrosínkinázy, inhibujúcej s výhodou blokujúce činidlo receptora ErbB, (ii) balíček obsahujúce aspoň jedno činidlo inhibujúce angiogenéziu, s výhodou činidlo ανβ₃, ανβ₅ alebo ανβ₅, inhibujúci integrínový receptor, výhodnejšie RGD obsahujúce lineárny alebo cyklický peptid, zvlášť cyklo-(Arg-Gly-Asp-DPheNMeVal), poprípade ďalej obsahujúce cytotoxické činidlo v obale,

- odpovedajúceho farmaceutického kitu, kde činidlom blokujúcim ErbB receptor je protilátka alebo jej funkčne intaktný derivát, majúci väzobné miesto, ktoré sa viaže na epitóp uvedeného receptora, pričom protilátka je s výhodou volená zo súboru protilátok zahrňujúceho humanizované monoklonálne protilátky 425 (h425), chimérne monoklonálne protilátky 225 (c225) alebo humanizované monoklonálne protilátky Her2, farmaceutického kitu, kde činidlom inhibujúcim angiogenéziu je protilátka alebo jej aktívny derivát, s výhodou volený zo súboru protilátok zahrňujúceho LM609, P1H6, 17E6 a 14D9.F8, ako špecifického uskutočnenia vynálezu, špecifického farmaceutického kitu obsahujúceho (i) balíček obsahujúci humanizovanú monoklonálnu protilátku 425 (h425), chimérnu monoklonálnu protilátku 225 (c225) alebo jej funkčne intaktný derivát a (ii) balíček obsahujúci cyklo-(Arg-Gly-Asp-DPheNMeVal), poprípade obsahujúci chemoterapeutické činidlo volené zo súboru zahrňujúceho cisplatín, doxorubicín, gemcitabín, docetaxel, paclitaxel, bleomycín, použitie farmaceutického prostriedku alebo vyššie definovaného farmaceutického kitu pre prípravu liečiva na liečenie nádorov a nádorových metastáz, farmaceutického liečenia alebo spôsobu liečenia nádorov alebo nádorových metastáz u pacienta, spočívajúceho v podávaní pacientovi terapeuticky účinného množstva činidla alebo činidiel, majúcich (i) aspoň jednu špecifičnosť blokovania receptora tyrosínkinázy a (ii) aspoň jednu špecifičnosť inhibície angiogenézie, pričom toto činidlo alebo tieto činidlá nie sú cytokínovými imunokonjugátmi, poprípade spolu s cytotoxickým, s výhodou chemoterapeutickým činidlom, pričom je s výhodou toto činidlo (i) protilátka alebo jej funkčne intaktný derivát, obsahujúce väzobné miesto, ktoré sa viaže na epitôp receptora ErbB, s výhodou receptora ErbB (Herl) alebo Erbn2(Her2) a uvedené činidlo

(ii) integrínový inhibítor alebo činidlo blokujúce	ανβ3, ανβ5	alebo ανβ6,
VEGF	receptor
a konečne sa vynález týka
odpovedajúcich spôsobov, pričom	uvedená	protilátka,
zameraná na receptor ErbB,	je	volená	zo súboru

zahrňujúceho humanizovanú monoklonálnu protilátku 425 (h425), chimérnu monoklonálnu protilátku 225 (c225) alebo humanizovanú monoklonálnu protilátku Her2 a antiangiogénnym činiteľom je cyklo-(Arg-Gly-Asp-DPheNMeVal), poprípade spolu s cytotoxickou drogou volenou zo súboru zahrňujúceho cisplatín, doxorubicin, gemcitabín, docetaxel, paclitaxel a bleomycín.

Farmaceutické liečenie s použitím farmaceutických prostriedkov a kitov podľa vynálezu môže byť doprevádzané súbežne alebo následne radiačnou terapiou.

Podľa vynálezu sa dajú rozlíšiť v zásade štyri kombinácie farmaceutických prostriedkov:

(i) činidlo obsahujúce aspoň jeden receptor tyrosínkinázy, s výhodou s ErbB receptorom blokujúcim aktivitu/špecifitu, kombinovanú s činidlom obsahujúcim aspoň jednu antiangiogénnu aktivitu (dvojdrogová kombinácia);

(ii) činidlo obsahujúce aspoň jeden receptor tyrosínkinázy, s výhodou s ErbB receptorom blokujúcim aktivitu/špecifitu, kombinovanú s činidlom obsahujúcim aspoň jednu antiangiogénnu aktivitu a kombinovanú s aspoň jedným chemoterapeutickým činidlom (trojdrogová kombinácia);

(iii)činidlo obsahujúce aspoň jeden receptor tyrosínkinázy, s výhodou s ErbB receptorom blokujúcim aktivitu/špecifitu, kombinovanú s činidlom obsahujúcim aspoň jednu antiangiogénnu aktivitu kombinovanú v jednej molekule (jednodrogová kombinácia majúca dvoj drogovú aktivitu);

(iv) činidlo obsahujúce aspoň jeden receptor tyrosínkinázy, s výhodou s ErbB receptorom blokujúcim aktivitu/špecifitu, kombinovanú s činidlom obsahujúcim aspoň jednu antiangiogénnu aktivitu kombinovanú v jednej molekule, kombinovanú s aspoň jedným chemoterapeutickým činidlom (dvojdrogová kombinácia majúca trojdrogovú aktivitu).

Činidlá sa môžu podávať súbežne alebo postupne v ktoromkoľvek z uvedených prípadov. Podľa vyššie uvedeného, zahrňujú spôsoby podľa vynálezu v zásade nasledujúce kombinácie podávania:

(i) činidlo obsahujúce aspoň jeden . receptor tyrosínkinázy, s výhodou s ErbB receptorom blokujúcim aktivitu/špecifitu, kombinovanú s činidlom obsahujúcim aspoň jednu antiangiogénnu aktivitu (dvojdrogové podanie);

(ii) činidlo obsahujúce aspoň jeden receptor tyrosínkinázy, s výhodou s ErbB receptorom blokujúcim aktivitu/špecifitu, kombinovanú s činidlom obsahujúcim aspoň jednu antiangiogénnu aktivitu (dvojdrogové podanie) a rádioterapiu;

(iii) činidlo obsahujúce aspoň jeden receptor tyrosínkinázy, s výhodou s ErbB receptorom blokujúcim aktivitu/špecifitu, kombinovanú s činidlom obsahujúcim aspoň jednu antiangiogénnu aktivitu kombinovanú s aspoň jedným chemoterapeutickým činidlom(trojdrogové podávanie);

(iv) činidlo obsahujúce aspoň jeden receptor tyrosínkinázy, s výhodou s ErbB receptorom blokujúcim aktivitu/špecifitu, kombinovanú s činidlom obsahujúcim aspoň jednu antiangiogénnu aktivitu kombinovanú s aspoň jedným chemoterapeutickým činidlom (trojdrogové podávanie) a rádioterapia;

(v) činidlo obsahujúce aspoň jeden receptor tyrosínkinázy, s výhodou s ErbB receptorom blokujúcim aktivitu/špecifitu, kombinovanú s činidlom obsahujúcim aspoň jednu antiangiogénnu aktivitu kombinovanú v jednej molekule (jednodrogové podávanie majúce dvojdrogovú aktivitu);

(vi) činidlo obsahujúce aspoň jeden receptor tyrosínkinázy, s výhodou s ErbB receptorom blokujúcim aktivitu/špecifitu, kombinovanú s činidlom obsahujúcim aspoň jednu antiangiogénnu aktivitu kombinovanú v jednej molekule (jednodrogové podávanie majúce dvojdrogovú aktivitu) a rádioterapiu, (vii) činidlo obsahujúce aspoň jeden receptor tyrosínkinázy, s výhodou s ErbB receptorom blokujúcim aktivitu/špecifitu, kombinovanú s činidlom obsahujúcim aspoň jednu antiangiogénnu aktivitu kombinovanú v jednej molekule, kombinovanú s aspoň jedným chemoterapeutickým činidlom (dvojdrogová kombinácia majúca trojdrogovú aktivitu) ;

(viii)činidlo obsahujúce aspoň jeden receptor tyrosínkinázy, s výhodou s ErbB receptorom blokujúcim aktivitu/špecifitu, kombinovanú s činidlom obsahujúcim aspoň jednu antiangiogénnu aktivitu kombinovanú v jednej molekule, kombinovanú s aspoň jedným chemoterapeutickým činidlom (dvojdrogová kombinácia majúca trojdrogovú aktivitu) a rádioterapiu.

Farmaceutické kombinácie a spôsoby podlá vynálezu poskytujú rôzne prednosti. Kombinácie vhodné na liečenie a na prevenciu nádorov, nádorov podobným a neoplaziovým chorobám.

výhodou sa rôzne kombinové činidlá vynálezu podávajú v kombinácii v malých dávkach, teda dávkach, ktoré sú nižšie než obvykle používané v klinických situáciách. Výhodou znižovania dávky zlúčenín, prostriedkov a činidiel a liečby podľa vynálezu podávané cicavcom, je pokles nástupu škodlivých účinkov spojených s vyššími dávkami. Napríklad znížením dávky chemoterapeutického činidla, ako sú metotrexát, doxorubicín, gemcitabín, docetaxel, paclitaxel, bleomycin a cisplatin, dochádza k zníženiu frekvencie a závažnosti nevoľnosti a zvracania v porovnaní s pozorovaním pri vyšších dávkach. Podobné prednosti sú pozorované v prípade zlúčenín, prostriedkov, činidiel a terapie v kombinácii s integrínovými antagonistami podľa vynálezu. Zníženie výskytu škodlivých účinkov je cieľom zlepšenia kvality života pacienta. Ďalšou výhodou znižovania výskytu škodlivých účinkov je zlepšenie pacientovej spolupráce, zníženie počtu hospitalizácií potrebných na zvládnutie škodlivých účinkov a zníženia podávania analgetík potrebných na zmiernenie bolesti spojenej so škodlivými účinkami. Alternatívne môžu tiež spôsoby a kombinácie podľa vynálezu maximalizovať terapeutický efekt pri vyšších dávkach.

Podrobný popis vynálezu

Pokial nie je inak uvedené používané výrazy a vety majú významy a definície ďalej popísané. Okrem toho tieto definície a významy popisujú vynález podrobnejšie, vrátane výhodných uskutočnení.

Receptor alebo receptorová molekula je rozpustný alebo na membránu viazaný/asociovaný proteín alebo glykoproteín obsahujúci jednu alebo niekoľko domén, ku ktorým sa ligand viaže na vytvorenie komplexu receptor-ligand. Väzbou ligandu, ktorým môže byť agonista alebo antagonista, je receptor aktivovaný alebo inaktivovaný a môže iniciovať alebo blokovať signalizačnú dráhu.

Ligand alebo receptorový ligand je prírodná alebo syntetická zlúčenina, ktorá viaže receptorovú molekulu na vytvorenie komplexu reptor-ligand. Pod pojmom ligand sa rozumejú agonisti, antagonisti a zlúčeniny s parciálnym agonistovým/antagonistovým pôsobením.

Agonista alebo syntetická zlúčenina, ktorá viaže receptorový agonista je prírodná alebo receptor na vytvorenie aktiváciou receptoru komplexu, iniciujúceho receptor-agonistového komplexu a poprípade receptor-agonistového signalizáciu dráhy a ďalšie biologické procesy.

Antagonista alebo receptorový antagonista je prírodná alebo syntetická zlúčenina majúca biologické pôsobenie opačné než agonista. Antagonista viaže receptor a blokuje pôsobenie receptorového agonistu pre receptor. Antagonista je definovaný svojou schopnosťou blokovať pôsobenie agonistu. Receptorovým antagonistom môže byť tiež protilátka alebo jej imunoterapeuticky účinný fragment. Zoznam a pojednanie o výhodných antagonistoch podľa vynálezu je v ďalšom texte.

ErbB receptor je receptorová proteínová tyrosínkináza, ktorá patrí do rodiny ErbB receptorov a zahrňuje receptory EGFR (ErbBl), ErbB2, ErbB3 a ErbB4 a iné členy tejto rodiny, ktoré budú v budúcnosti definované. Receptor ErbB obsahuje obvykle extracelulárnu doménu, ktorá môže viazať ligand ErbB; lipofílny transmembránovú doménu; konzervovanú intracelulárnu doménu tyrosínkinázy;

a karboxyl-terminálovú signalizujúcu doménu zahrňujúcu niekoľko tyrosínových zbytkov, ktoré môžu byť fosforylované. Receptorom ErbB môže byť receptor ErbB natívna sekvencia alebo jeho variant sekvencia aminokyselín. S výhodou je ErbB receptorom natívnej sekvencie ľudského receptora ErbB.

ErbBl sa týka génu kódujúceho proteínový produkt EGFR. Najvýhodnejší je receptor EGF (Herl). Výrazy Herl a ErbBl sa tu používajú zameniteľné a týkajú sa ľudského proteínu Herl. Výrazy Her2 a ErbB2 sa tu používajú zameniteľné a týkajú sa ľudského proteínu Her2. Podľa vynálezu sa dáva prednosť receptorom ErbBl (EGFR).

ErbB ligand je polypeptid, ktorý sa viaže na receptor ErbB a/lebo ho aktivuje. ErbB ligandy, ktoré viažu EGFR zahrňujú EGF, TGF-a, ampiregulín, betacellulín, HB-EGF a epiregulín.

Tyrosínkinázový antagonista/inhibítor sú prírodné alebo syntetické činidlá, ktoré sú schopné inhibovať alebo blokovať tyrosínkinázy, vrátane receptora tyrosínkinázy, ktoré majú špecifický význam pre vynález. Výraz zahrňuje ErbB receptorové antagonisti/inhibítory ďalej podrobnejšie definované. S výnimkou týchto antagonistov, s výhodou anti-ErbB receptorovej protilátky prídavné vhodné tyrosínokinázové antagonisti podľa vynálezu sú chemické zlúčeniny, ktoré vykázali účinnosť v monodrogovej terapii, napríklad rakoviny prsníka a prostaty. Vhodné inhibítory tyrosínkinázy indolkarbazolového typu je možné získať pri využití informácií v patentovej literatúre (napríklad americký patentový spis číslo US 5 516771, US 5 654427,US 5 461146 a US 5 650407) .

V americkom patentovom spise číslo US 5 475110, US 5 591855 a US 5 594009 a vo svetovom patentovom spise číslo WO 96/11933 sú uvedené inhibítory tyrosínkinázy pyrrolokarbazolového typu a rakovina prostaty. Výhodnými dennými dávkami inhibítorov chemickej tyrosínkinázy, definovaných vyššie, je 1 pg/kg až 1 g/kg telesnej hmotnosti. Výhodnejšie je dávkovanie inhibítorov tyrosínkinázy 0,01 mg/kg až 100 mg/kg telesnej hmotnosti denne.

ErbB receptor antagonista/inhibítor je prírodná a syntetická molekula, ktorá viaže a blokuj e alebo inhibuje receptor ErbB a je preto členom rodiny (receptor)tyrosínkinázový antagonista/inhibítor .

Tak blokovanie receptoru agonistov bráni väzbe ErbB ligandu (agonista) a aktivácia receptorového komplexu agonista/ ligand. Antagonisti ErbB môžu byť zamerané na Herl (alebo EGFR/Herl) alebo Her2. Výhodní antagonisti podlá vynálezu sú zameraní na receptor EGF (EGFR, Herl). Antagonisti ErbB receptoru môžu byť protilátka alebo jej imunoterapeuticky účinný fragment alebo neimunobiologické molekuly, ako je peptid, polypeptidový proteín. Zahrnuté sú i chemické molekuly, avšak protilátky EGFR a anti-Her2 sú výhodnými antagonistami podľa vynálezu. Výhodnými protilátkami podľa vynálezu sú protilátky Her-1 a anti-Her2, výhodnejšie anti-Herl. Výhodnými anti-Herl protilátkami sú MAb425, s výhodou humanizovaný Mab425 (hMAb425, americký patentový spis číslo US 5 558864, európsky patentový spis číslo EP 0 531472) a chimérny MAb225 (cMAb 225, americký patentový spis číslo US 4 943533 a európsky patentový spis číslo EP

Ο 359282). Najvýhodnejšia je monoklonálna protilátka h425, ktorá vykázala v monodrogovej terapii vysokú účinnosť so zníženými škodlivými a vedľajšími účinkami. Najvýhodnejšou R anti-Her2 protilátkou je HERCEPTIN (obchodný produkt spoločnosti Génetech/Roche).

Účinní EGF receptorov! antagonisti podľa vynálezu môžu byť tiež iné prírodné alebo syntetické chemické zlúčeniny. Ako príklady výhodných molekúl tejto kategórie sa uvádzajú organické zlúčeniny, organokovovej zlúčeniny a soli organických a organokovových zlúčenín. Účinnými antagonistami receptora ErbB podľa vynálezu môžu byť tiež malé molekuly. Malé molekuly podľa vynálezu sú nebiologické vyššie definované molekuly, majúce molekulovú hmotnosť približne nepresahujúcu 400. S výhodou nemajú proteínovú alebo peptidovú štruktúru a najvýhodnejšie sú to synteticky vyrábané chemické zlúčeniny. Ako príklady výhodných malých molekúl sa uvádzajú organické zlúčeniny, organokovovej zlúčeniny, soli organických zlúčenín a organokovových zlúčenín.

Mnohé malé molekuly boli popísané ako užitočné na inhibíciu EGF receptora a/lebo receptora Her2. Ako príklady sa uvádzajú: styrylom substituované héteroarylové zlúčeniny (americký patentový spis číslo US 5 656655); bis monocyklické a/lebo bicyklické arylohéteroarylové, karbocyklické a héterokarbocyklické zlúčeniny (americký patentový spis číslo US 5 646153) ; tricyklické pyrimidínové zlúčeniny (americký patentový spis číslo US 5 679683); deriváty chinazolína majúce inhibičnú aktivitu receptora tyrosínkinázy (americký patentový spis číslo US 5 616582); héteroaryletenediylové alebo héteroaryletenediylarylové zlúčeniny (americký patentový spis číslo US 5 196446); zlúčenina označená ako 6-(2,6-dichlórfenyl)2-(4-(2-dietylamínoetoxy)fenylamíno)-8-metyl -8H-pyrido (2,3)-5-pyrimidín-7-on (Panek a kol. J. Pharmacol. Exp . Therap. 283, str. 1433, 1997) inhibujúce rodinu receptorov EGFR, PDGFR a FGFR.

Výrazom anti-angiogénne činidlo sa tu vždy mieni prírodná alebo syntetická zlúčenina, ktorá blokuje, alebo do istej miery ovplyvňuje rozvoj krvných ciev. Antiangiogénnou molekulou môže byť napríklad biologická molekula, ktorá sa viaže a blokuje angiogénny rastový faktor alebo receptor rastového faktoru. Výhodná antiangiogénna molekula sa tu viaže na receptor, s výhodou integrínový receptor alebo receptor VEGF. Pojem zahrňuje podľa vynálezu tiež prodrogu uvedeného angiogénneho činidla. Existuje mnoho molekúl s rôznou štruktúrou a rôzneho pôvodu, ktoré vykazujú antiangiogénne vlastnosti. Najzávažnejšími triedami inhibujúcimi alebo blokujúcimi angiogenéziu, ktoré sú vhodné podľa vynálezu, sú napríklad:

(i) antimitotiká, ako je flurouracil, mytomycín-C, taxol;

(ii) metabolity'estrogénu ako je 2-metoxyestradiol;

(iii) inhibítory matricovej metaloproteínázy (MMP), ktoré inhibujú metaloproteínázy zinku (napríklad betimastat, BB16, TIMPy, minocyklín, GM6001, alebo zlúčeniny popísané v publikácii Inhibition of Matrix Metalloproteinases: Therapeutic Applications (Golub, Annals of the New York Academy of Science, sv. 878a; Greenwald, Zuzker (vydavatelia) , 1999);

(iv) antiangiogénne multifunkčné činidlá a faktory, ako je IFNa (americký patentový spis číslo US 4 530901, US 4 503035, US 5 231176), angiostatín a plazminogénové fragmenty (napríklad kringle 1-4, kringle 5, kringle 1-3 (O°Reilly, M.S. a kol., Celí (Cambridge, Mass.) 79(2) str. 315 až 328, 1994; Cao a kol., J. Biol. Chem. 271, str.

29461 až 29467, 1996; Cao a kol., J. Biol. Chem 272, str. 22924 až 22928, 1997), endostatin (O°Reilly, M.S. a kol., Celí 88 (2), 277, 1997 a svetový patentový spis číslo WO

97/15666), trombospondín (TSP-l; Frazier, Curr Opin Celí Biol. 3(5), str. 792, 1991); doštičkový faktor 4 (PF4);

(v) inhibitory plazminogénové aktivátor/urokinázy;

(vi) antagonisti urokinázového receptoru;

(vii) heparinázy;

(viii) analógy fumagilínu ako TNP-470;

(ix) inhibitory tyrosínkinázy ako SUI 01 (mnohé vyššie a nižšie zmienené ErbB receptorové antagonisti (antagonisti EGFR/Her2) sú tiež inhibitory tyrosínkinázy a môžu preto vykazovať blokujúce aktivity anti-EGF receptora, ktorých výsledkom je inhibícia rastu nádora i anti-angiogénna aktivita, ktorá vedie k inhibícii vývoja krvných ciev a endoteiliálnych buniek);

(x) suramín a analógy suramínu;

(xi) angiostatické steroidy;

(xii) antagonisti VEGF a bFGF;

(xiii)antagonisti receptoru VEGF ako sú protilátky receptora anti-VEGF (DC-101);

(xiv) antagonisti flk-1 a flt-1; , (xv) inhibitory cyklooxygenázy-II ako COX-II;

(xvi) antagonisti integrínu a antagonisti receptora integrínu, ako sú antagonisti oí_v a antagonisti receptora a_v, napríklad protilátky receptora anti- a_v a peptidy RGD. Antagonistom integrínu (receptora) podlá vynálezu sa dáva prednosť.

Integrínoví antagonisti/inhibítory alebo integrínové receptorové antagonisti/inhibitiony sú prírodné alebo syntetické molekuly, ktoré blokujú a inhibujú integrínovy receptor. V niektorých prípadoch zahrňuje tento pojem antagonisti zameraní na ligandy integrínového receptoru (ako pre α\>β₃: vitronektín, fibrín, fibrinogén, von Willebrandov faktor, trombospondín, laminín; pre c: vitronektín; pre ανβι:

fibronektín

Prednosť sa receptory integrínu (receptora) nepeptidy, podľa vynálezu, môžu byť prírodné pept idomimet iká,

Antagonisti alebo syntetické imunoglobulíny, alebo ich funkčné fragmenty, integrínu peptidy, ako sú protilátky alebo imunokonjugáty (fúzne proteíny). Výhodné inhibítory integrínu podľa vynálezu sú zamerané na integríny receptoru a_v (napríklad ανβ₃, ανβ₅, ανβ₆ a podtriedy).

Výhodnými inhibítormi integrínu sú antagonisti a_v a obzvlášť antagonisti ανβ₃. Výhodnými antagonistami oy podľa vynálezu sú peptidy RGD, antagonisti peptidomimetík (nepeptidov) a protilátky antiintegrínových receptorov, ako sú látky blokujúce receptory ay. Príklady neimunologických antagonistov ανβ₃ sú popísané v americkom patentovom spise číslo US 5 753230 a US 5 766591. Výhodnými antagonistami ' sú lineárne a cyklické RGD obsahujúce peptidy. Cyklické peptidy sú spravidla stabilnejšie a vykazujú zvýšený polčas životnosti séra. Najvýhodnejším integrínovým antagonistom podľa vynálezu je však cyklo-(Arg-Gly-Asp-DPhe-NMeVal) (EMD 121974,

R

Cilengitide , Merck KgaA, Nemecko; európsky patentový spis číslo EP 0 770622), ktorý je účinný v blokovaní integrínových receptorov ανβ₃, ανβι, ανβ₆, ανβ₈, οίϊ^β₃. Vhodné peptidy i peptidomimetiká (nepeptidy), antagonisti integrínového receptora ανβ₃, ανβ₅, ανβ₆, sú popísaní vo vedeckej i v patentovej literatúre (napríklad Hoekstra a Poulter Curr. Med. Chem 5, str. 195, 1998; svetový patentový spis číslo WO 95/32710; WO 95/37655; WO 97/01540; WO 97/37655; WO 97/45137; WO 97/41844; WO 98/08840; WO 98/18460; WO 98/18461; WO 98/25892; WO 98/ 31359, WO 98/30542; WO 99/15506; WO 99/15507; WO 99/31061; WO 00/06169; európsky patentový spis číslo EP 0 853084; EP 0 854140; EP 0 854145; americký patentový spis číslo US 5780426; a US 6 048 861). Ako patentové spisy, týkajúce sa benzazepínových ako tiež príbuzných benzdiazepénových a benzcyklohepténových ανβ₃ integrínových receptorových

antagonistov,	ktoré sú	tiež vhodné na	použitie podlá
vynálezu,	sa	uvádzajú	svetový patentový	spis číslo	WO
96/00574;	WO	96/00730;	WO	96/06087; WO	96/26190;	WO
97/24119;	WO	97/24122;	WO	97/24124; WO	98/15278;	WO
99/05107;WO99/	06049; WO	99/15170; WO;99/15178;	WO
97/34865;	WO	97/01540;	WO	98/30542; WO	99/11626 a	WO

99/15508. Iní antagonisti integrínového receptora spôsobujúceho sťahy konformačného prstenca chrbtice sú popísaní tiež v patentových spisoch (svetový patentový spis číslo WO 98/08840; WO 99/30709; WO 99/30713; WO

99/31099; WO 00/09503; US 5 919 792; americký patentový spis číslo US 5 925655; US 5 981546 a US . 6 017926) .

V patentovom spise číslo US 6 048 861 a WO 00/72801 je popísaná rada derivátov kyseliny nonanovej, ktoré sú mocnými antagonistami integrínového receptoru ανβ₃. Iní chemickí malí molekuloví antagonisti integrínového receptora (väčšinou antagonisti vitronektínu) sú popísaní vo svetovom patentovom spise číslo WO 00/38665. Ukázalo sa, že i iní anatagonisti receptora ανβ₃ sú účinní v inhibícii angiogenézie. Napríklad syntetickí antagonisti receptora ako (S)-10,ll-dihydro-3-[3 -(pyridín-2-ylamíno)30

1-propyloxy]-5H-dibenzo [a,d]cykloheptén -10-octová kyselina (známa ako SB-265123) boli testovaní v rade cicavčích modelových systémov (Keenan a kol., Bioorg. Med.Chem. Let. 8(22), str. 3171, 1998; Ward a kol., Drug Metab. Dispos. 27(11), str. 1232, 1999). Testy na identifikáciu antagonistov integrínu vhodných na použitie ako antagonistov popísal napríklad Smith a kol. (J. Biol. Chem. 265, str. 12267, 1990) a sú v príslušnej patentovej literatúre. Protilátky receptora anti-integrinu sú tiež dobre známe. Vhodné monoklonálne protilátky antiintegrínu (napríklad ανβ₃, ανβ₅, ανβ₆) môžu byť modifikované na zahrnutie ich fragmentov viažucich antigén, vrátane F(ab) , Fab a upravené Fv alebo jednoreťazcová protilátka. Jednou vhodnou a s výhodou používanou monoklonálnou protilátkou, zameranou proti integrínovému receptoru ανβ₃, je LM609 (Brooks a kol., Celí 79, str. 1157, 1994, ATCC HB 9537) . Mocná špecifická protilátka anti- ανβ₅, P1F6 je popísaná vo svetovom patentovom spise číslo WO 97/45447, a tiež sa jej dáva prednosť podlá vynálezu. Ďalšou vhodnou selektívnou ανβ₅ protilátkou je MAb 14D9.F8 (svetový patentový spis číslo WO 99/37683, DSM ATCC2331, Merck KGaA, Nemecko) a MAb 17.E6 (európsky patentový spis číslo EP 0 719859, DSM ACC2160, Merck KGaA, Nemecko), ktorý je selektívne zameraný na reťazec a_v integrínového receptoru. Inou vhodnou antiintegrínovou protilátkou je obchodne dostupný Vitraxín^R.

Výraz protilátka alebo imunoglobulín sa používa v najširšom význame a zvlášť sa týka intaktných monoklonálnych protilátok, polyklonálnych protilátok, multišpecifických protilátok (napríklad bišpecifických protilátok) tvorených z aspoň dvoch intaktných protilátok a protilátkových fragmentov pokiaľ vykazujú žiadúcu biologickú aktivitu. Pojem zahrňuje obecne héteroprotilátky, ktoré sa skladajú zo dvoch alebo z niekoľkých protilátok alebo z ich fragmentov s rôznou väzobnou špecifičnosťou, ktoré sú spolu zviazané. V závislosti na sekvencii aminokyselín ich konštantných regiónov, môžu byť intaktné protilátky označené ako odlišné protilátkové(imunoglobulínové) triedy. Existuje päť hlavných tried intaktných protilátok: lgA, lgD, IgE, lgG a lgM a niekoľko z nich sa môže ďalej deliť na podtriedy (izotypy), napríklad lgGl, lgG2, lgG3, lgG4, lgA a lgA2. Konštantné domény ťažkého reťazca, ktoré odpovedajú rôznym triedam protilátok sa delta, epsilon, gama a T. Výhodnou hlavnou vynálezu je lgG, obzvlášť lgGl a obvykle glykoproteíny s molekulovou 150000 a zostávajú z dvoch rovnakých a z dvoch rovnakých ťažkých (H) reťazcov.

viazaný na ťažký reťazec počet disulfidových väzieb rôznych imunoglobulínových reťazec má tiež pravidelne označujú, a, triedou podľa Protilátky sú lgG2.

hmotnosťou približne ľahkých (L) reťazcov reťazec je disulfidovou kolisa medzi väzbou, zatiaľ čo ťažkými reťazcami izotypov. Každý ľahký a vzdialené intrareťazcové ťažký reťazec má na jednom nasledovanú radou konštantných domén, obsahujú hypervariabilné ktoré obsahujú antigénové špecifičnosť protilátky a vzhľadom k afinite/avidite protilátky.

obecne

Každý ľahký kovalentnou regióny väzobné oblasti región z komplementarity determining región) (Ll), 50-56 (L2) disulfidové mostky. Každý ťažký konci premenlivú doménu (VH)

Premenlivé regióny alebo regióny CDR, miesto a zodpovedajú za FR, ktoré sú významné Hypervariabilný aminokyselín (complementarity obsahuje zbytky určujúceho regiónu alebo CDR (napríklad zbytky 24-34 a 89-97 (L3) vo variabilnej doméne

31-35 (Hl), 50-65 (H2) a 95-102 (H3) vo ľahkého reťazca a variabilnej doméne ťažkého reťazca; a/lebo vytvárajú tieto zbytky hypervariabilnej slučky (napríklad zbytky 26-32 (Ll) , 50-52 (L2) a 91-96 (L3) vo variabilnej doméne ľahkého reťazca a 26-32 (Hl), 53-55 (H2) a 96-101 (H3) vo variabilnej doméne ťažkého reťazca (Chothia a Lesk J. Mol. Biol. 196, str. 901 až 917, 1987) . Zbytky FR (rámcový región) sú zbytky variabilnej domény iné než zbytky hypervariabilného regiónu, ako definované. Každý ľahký reťazec má variabilnú doménu na konci (VL) a konštantnú doménu na svojom druhom konci. Konštantná doména ľahkého reťazca prilieha k prvej konštantnej doméne ťažkého reťazca a premenlivá doména ľahkého reťazca prilieha k premenlivej doméne ťažkého reťazca. Má sa za to, že zvláštne zbytky aminokyselín tvorí medzivrstvu medzi variabilnými doménami ľahkého a ťažkého reťazca. Ľahkými reťazcami protilátok od ktoréhokoľvek druhu stavovcov môžu byť zaradené do dvoch zreteľne odlišných typov, nazývaných kappa (k) a lambda (1) na základe sekvencii aminokyselín ich konštantných domén.

MonoklonáInou protilátkou sa mieni protilátka získaná z populácie v podstate homogénnych protilátok, teda jednotlivé protilátky predstavujúce populáciu, sú rovnaké až na možné, prírodné sa vyskytujúce mutácie, ktoré môžu byť obsiahnuté v malých množstvách. Monoklonálne protilátky sú vysoko špecifické, alebo sú zamerané na jediné antigénne miesto. Okrem toho na rozdiel od polyklonálnych protilátkovych prostriedkov, ktoré obsahujú rôzne protilátky, zamerané proti rôznym determinantom (epitópom), je každá monoklonálna protilátka zameraná proti jednotlivému determinantov! na antigéne. Vedľa svojej špecifičnosti majú monoklonálne protilátky výhodu v tom, že môžu byť syntetizované neznečistené ostatnými protilátkami. Spôsoby prípravy monoklonáIných protilátok zahrňujú spôsob hybridomy, ktorý popísali

Kohler a Milstein (Náture 256, str. 495, 1975) a ktoré sú popísaní v knihe Monoclonal Antibody Technology, The

Production and Characterization of Rodent and Human

Hybridomas (vydavateľ Burdon a kol., Laboratory

Techniques in Biochemistry and Molecular

Biology, sv.

Elsevier Science Publishers, Amsterdam) alebo sa môže uskutočňovať známymi rekombinantnými (napríklad americký patentový spis číslo Monoklonálne protilátky sa

DNA

US môžu tiež izolovať spôsobmi fagových protilátkových knihovní technikami, ktoré popísal napríklad Clackson a kol.

(Náture 352, str. 624 až 628,

1991) a Marks a kol. (J.

Mol. Biol.,

222:58, 1 až 597,

1991).

Výraz chimérna protilátka znamená protilátky, v ktorých je časť ťažkého a/lebo ľahkého reťazca totožná so sekvenciou alebo homologická k odpovedajúcim sekvenciám v protilátkach odvodených od zvláštnych druhov alebo patriacich k zvláštnej triede alebo podtriede protilátok, zatiaľ čo zbytok reťazca (reťazcov) je totožný alebo homologický s odpovedajúcimi sekvenciami v protilátkach odvodených z iných druhov alebo patriacich k triede alebo podtriede inej protilátky, rovnako ako fragmenty takých protilátok, pokiaľ vykazujú žiadanú biologickú aktivitu (americký patentový spis číslo US 4 816567; Morrison a kol., Proc. Nat. Acad. Sci. USA 81, str. 6851 až 6855, 1984)). Spôsoby prípravy chimérnych a humanizovaných protilátok sú v obore tiež známe. Napríklad spôsoby prípravy chimérnych protilátok sú popísané v patentových spisoch Boss (Celltech) a Cabilly (Génentech) (americký patentový spis číslo US 4 816397, US 4 816567).

Humanizovanými protilátkami sú tu mienené formy neľudské (napríklad hlodavcové) chimérne protilátky, ktoré obsahujú minimálnu sekvenciu odvodenú od neľudského zbytky z narazené zbytky (donorové druhov alebo neľudský (CDRy) protilátkami ktorých sú recipientu regiónu myš, krysa, neľudských králik imunoglobulínu. Väčšinou sú humanizovanými ľudské imunoglobulíny (recipient antibody), v hypervariabilného regiónu hypervarlabilného protilátky), ako sú primát, majúce žiadanú špecifičnosť, a kapacitu. V niektorých prípadoch sú úseky základnej štruktúry (FR) ľudského imunoglobulínu nahradené odpovedajúcimi humanizovaná afinitu neľudskými protilátky môžu zbytkami.

Okrem toho nenachádzajú protilátke. zj emneniu v recipientovej

Tieto modifikácie humanizovaná protilátkovej protilátka bude obsahovať zbytky, protilátke alebo v sa uskutočňujú k charakteristiky.

ktoré sa donorovej ďalšiemu

Obecne jednu a spravidla dve premenlivé alebo skoro všetky ostatné odpovedajú slučkám neľudského alebo v podstate imunoglobulínovej obsahuje poprípade imunoglobulínového konštantného všetky sekvencie.

tiež obsahovať v podstate domény, v ktorých hypervarlabilné imunoglobulínu a FR sú slučkami aspoň všetky slučky všetky ľudskej

Humanizovaná protilátka aspoň jednu regiónu (Fc), časť regiónu ľudského imunoglobulínu. humanizovaných protilátok popísal (americký patentový spis číslo (Celltech, americký patentový spis

Spôsoby napríklad spravidla prípravy Winter

US číslo sú

225539) a Boss

US 4 816397).

Protilátkové fragmenty protilátky, s výhodou obsahujúcej jej alebo variabilný región. Príklady fragmentov sú fragmenty časti intaktnej antigén-viažúci protilátkových Fab, Fab°, F(ab°)2, Fv a Fc, diabody, protilátkové lineárne molekuly;

protilátkových protilátka obsahujúca antigén-viažúci vytvorené z protilátky, jednoreťazcové a multišpecifické protilátky fragmentov. Intaktná je variabilný región rovnako ako konštantnú doménu ľahkého reťazca (CL) a konštantné domény ťažkého reťazca, CH1, CH2 a CH3. S výhodou má intaktná protilátka jednu alebo niekoľko efektorových funkcií. Papainová digescia protilátok produkuje dva identické antigén viažuce fragmenty, nazývané fragmenty Fab, z ktorých každý obsahuje jedno antigén viažuce miesto a región CL a CH1 a zbývajúci fragment Fc, ktorého meno ukazuje na jeho schopnosť pohotovej kryštalizácie. Región Fc protilátok obsahuje spravidla CH2, CH3 a pantovú oblasť hlavnej protilátkovej triedy lgGl alebo lgG2. Pantová oblasť je skupina približne 15 aminokyselinových zbytkov, ktoré kombinujú región CH1 s regiónom CH2-CH3. Pepsinové spracovanie poskytuje fragment F(ab°)2, ktorý má dve antigén-viažuce miesta a je stále schopný zosieťovať antigén. Fv je minimálny antigénový fragment, ktorý obsahuje úplné antigén-poznávacie a antigén viažuce miesto. Tento región obsahuje dimér jedného ťažkého reťazca a variabilnú doménu ľahkého reťazca v tesnom nekovalentnom spojení. V tejto konfigurácii dochádza k interakcii troch ’hypervariabilných regiónov (CDR) každej variabilnej domény k definovaniu antigén-viažuceho miesta na povrchu diméra VH-VL. Spoločne prepožičiava šesť hypervariabilných regiónov protilátke antigén-viažuci špecifičnosť. Avšak i samotná variabilná doména (alebo polovica Fv obsahujúceho iba tri hypervariabilné regióny špecifické pre antigén) má schopnosť rozoznať a viazať antigén, i keď pri nižšej afinite než celé viažuce miesto. Fragment Fab tiež obsahuje konštantnú doménu ľahkého reťazca a prvú konštantnú doménu (CH1) ťažkého reťazca. Fragmenty Fab' sa líšia od fragmentov Fab pridaním niekoľkých zbytkov na karboxy zakončeniach· domény CH1 ťažkého reťazca vrátane jedného alebo niekoľkých cysteinov z pantovej oblasti protilátky. Pôvodne sa fragmenty protilátky F(ab°)2 pripravujú ako páry fragmentov Fab°, ktoré majú medzi sebou pantové cysteíny. Sú známe i iné chemické spoje

Bioconjugate

1996; americký patentový spis

Jednoreťazcové Fv alebo scFv fragmentov protilátok (napríklad Hermanson, Techniques, Academic Press, číslo US 4

342566).

protilátkové pričom tieto reťazci. S fragmenty domény sú výhodou polypeptidový spojovník umožňuje scFv vytvárať antigénu. Jednoreťazcové ich popísal Pluckthun Antibodies, sv.

113, obsahujú V prítomné v obsahuj e medzi a V, domény protilátky, samotnom polypeptidovom polypeptid doménami VH žiadanú štruktúru

Fv ďalej a VL, čo pre väzbu Fv protilátky sú známe, napríklad (The Pharmacology of Monoclonal vydavatelia Rosenburg a Moore,

Springer-Verlag, New York, str. 269 až 315, 1994; svetový patentový spis číslo WO 93/16185; americký patentový spis číslo US 5 571894; US 5 587458; Huston a kol., Proc. Natl. Acad. Sci 85, str. 5879, 1988; alebo Skerra a Plueckthun,

Science 240, str. 1038, 1988).

Bišpecifické protilátky sú jednotlivé divalentné protilátky (alebo ich imunoterapeuticky účinné fragmenty), ktoré majú dve miesta špecificky rozdielne viažuce antigén. Napríklad prvé miesto viažuci antigén je zameraný na receptor angiogenézie (napríklad integrín alebo receptor VEEGF), zatiaľ čo druhé miesto viažuci antigén je zameraný na receptor ErbB (napríklad EGFR alebo Her2). Bišpecifické protilátky je možné pripravovať chemickými spôsobmi (Kranz a kol., Proc. Nat. Acad. Sci. USA 78, str. 5807, 1981), spôsoby polydomu (americký patentový spis číslo US 4 474893) alebo spôsoby rekombinantnej DNA, ktoré sú o sebe známe. Ďalšie spôsoby sú popísané vo svetovom patentovom spise číslo WO 91/00360, WO 92/05793 a WO 96/04305. Bišpecifické protilátky je možné tiež pripravovať z jednoreťazcových protilátok (napríklad Huston a kol., Proc. Natl. Acad. Sci 85, str. 5879, 1988); Skerra a Plueckthun, Science 240, str. 1038,1988). Sú to analógy protilátkových variabilných regiónov pripravovaných ako samotný polypeptidový reťazec. Na vytvorenie bišpecifického väzobného činidla môžu byť spojené dohromady jednoreťazcové protilátky chemicky alebo v obore známymi metódami génového inžinierstva. Je tiež možné pripravovať bišpecifické protilátky podľa vynálezu použitím leucín zipových sekvencií. Použité sekvencie sa odvodzujú od leucínových zipových regiónov transkripčných faktorov Fos a Jun (Landschulz a kol., Science 240, str. 1759, 1988; tiež Maniatis a Ábel, Náture 341, str. 24,

1989) . Leucínové zipy sekvencie dlhé približne každom siedmom zbytku.

a-slučky amphipatické hydrofóbnej odpovedajúce prednostne héterodiméry strane leucínovým špecifické aminokyselinové až 40 zbytkov s leucínom na Také zipové sekvencie tvoria s leucínovými zbytkami na dimérovej formácie. Peptidy zipom proteínov Fos a Jun tvoria (O°Shea a kol., Science 245, str.

sú

646, 1989) . Zip obsahujúce bišpecifické protilátky a spôsoby jeho prípravy sú tiež popísané vo svetovom patentovom spise číslo WO 92/10209 a WO 93/11162. Bišpecifickou protilátkou podľa vynálezu môžu byť protilátka zameraná na VEGF receptor a ανβ₃ receptor ako je uvedené vyššie, so zreteľom na protilátky majúce samotnú špecifičnosť.

Héteroprotilátky sú dve alebo niekoľko protilátok alebo protilátky viažuce fragmenty, ktoré sú spolu viazané, pričom každá má inú väzobnú špecifičnosť. Héteroprotilátky sa môžu pripravovať konjunkciou dvoch alebo niekoľkých protilátok alebo protilátkových fragmentov. Výhodné protilátky zostávajú zo zosietených fragmentov Fab/Fab'. Ku konjunkcii protilátok je možné použiť rady kopulačných alebo zosieťujúcich činidiel. Ako príklady sa uvádzajú proteín A, karbodiimid, Nsukcinimidyl-S-acetyl-tioacetát (SATA) a N-sukcinimidyl-3(2-pyridylditio)propionát (SPDP) (napríklad Karpovsky a kol., J. Exp. Med. 160, str. 1686, 1984; Liu a kol., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82, str. 8648, 1985) . Iné spôsoby popísal Paulus (Behring Inst. Mitt. NO. 78, str. 118, 1985; Brennan a kol., Science 30 m:81 1985; alebo Glennie a kol., J.Immunol 139, str. 2367, 1987). Iný spôsob používa o-fenylendimaleimid (oPDM) pre kopuláciu voľných fragmentov Fab' (svetový patentový spis číslo WO 01/03493). Multišpecifickými protilátkami sú podľa vynálezu tiež vhodné a je možné ich pripraviť napríklad podľa svetového patentového spisu číslo WO 94/13804 a WO 98/50431.

Výrazom fúzny protein sa tu vždy mieni prírodná alebo syntetická molekula zostávajúca z jedného alebo z niekoľkých proteínov alebo peptidov alebo z ich fragmentov majúcich rôznu špecifičnosť, ktoré sú spolu poprípade fúzované spojovníkovou molekulou. Ako špecifické prevedenie zahrňuje výraz fúzované konštrukty, pričom aspoň jeden proteín alebo peptid je imunoglobulín alebo protilátka, poprípade ich časti (imunokonjugáty).

Výrazom imunokonjugát sa tu mienia protilátky alebo poprípade imunoglobulín, alebo jeho imunologický účinný fragment, ktorý je fúzovaný kovalentnou väzbou na neimunologicky účinnú molekulu. S výhodou je fúznym partnerom peptid alebo proteín, ktorý môže byť glykosylovaný. Neprotilátková molekula môže byť viazaná na C-zakončenie konštantných ťažkých reťazcov protilátky alebo na N-zakončenia variabilných ľahkých a/lebo ťažkých reťazcov. Fúzni partneri môžu byť viazaní spojovníkovou molekulou, ktorou je spravidla 3 až 15 aminokyselinových zbytkov obsahujúcich peptid. Imunokonjugáty podľa vynálezu zostávajú z imunoglobulínu alebo jeho imunoterapeuticky účinných fragmentov, zameraných na receptor tyrosinkinázy, s výhodou na receptor ErbB (ErbBl/ErbB2) a na inťegrínový antagonistický peptid, alebo na angiogénny receptor, s výhodou na integrínový alebo VEGF receptor a na TNFa alebo na fúzny proteín zostávajúci v podstate z TNFa a IFNgama alebo na iný vhodný cytokín, ktorý je viazaný s N-zakončenim na C-zakončeni uvedeného imunoglobulínu, s výhodou na jeho Fc-časť. Pojem zahrňuje tiež odpovedajúce fúzne konštrukty obsahujúce bišpecifické alebo multišpecifické imunoglobulíny (protilátky) alebo ich fragmenty.

Výrazom funkčne intaktný derivát sa tu vždy mieni fragment alebo časť, modifikácia variant, homológ alebo deimunizovaná forma (modifikácia, kde sú odstránené epitópy, ktoré zodpovedajú pri imunitnej odozve) zlúčeniny, napríklad peptidu, proteínu, protilátky (imunoglobulínu) a imunokonjugátu, ktoré majú v zásade rovnakú biologickú a/lebo terapeutickú funkciu v porovnaní s pôvodnými zlúčeninami, napríklad peptidami, proteínami, protilátkami (imunoglobulínmi) a imunokonjugátmi. Avšak pojem zahrňuje tiež také deriváty, ktoré vykazujú zníženú alebo zlepšenú účinnosť.

Výraz cytokín je generické označenie proteínov uvoľňovaných jednou bunečnou populáciou, ktoré pôsobí na inú bunku ako intercelulárne mediátory. Príklady takých citokínov sú lymfokíny, minokíny a tradičné polypeptidové hormóny. K cytokínom patrí tiež rastový hormón, ako je ľudský rastový hormón, N-metyonilový ludský rastový hormón a hovädzí rastový hormón; paratyroidný hormón; tyroxín; inzulín; proinzulín; relaxín; pro-relaxín; glykoproteínové hormóny ako hormóny stimulujúce folikuly (FSH), tyroid stimulujúci hormón (TSH) a lutenizujúci hormón (LH); hepatický rastový faktor, fibroblastový rastový faktor; prolaktín; placentový laktogén; myší s gonadotropinom asociovaný peptid; inhibín; aktivín; vaskulárny endoteliálny rastový faktor (VEGF); integrín; trombopoietín (TPO); nervové rastové faktory ako ΝΘΕβ; doštičkový rastový faktor; transformačné rastové faktory (TGF) , ako je TGFoí a TZGFP; erytroproteitín (EPO) ; interferóny, ako IFNa, ΙΓΝβ a IFNgama; kolónie stimulujúce faktory ako M-CSF, GM-CSF a G-CSF; interleukíny, ako IL-1, IL-la, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL10, IL-11, IL-12 a TNFa alebo TNFp. Výhodnými cytokínmi podľa vynálezu sú interferóny a THFa.

Výrazom cytotoxické činidlo sa vždy mieni látka, ktorá inhibuje alebo zabraňuje funkciu buniek a/lebo spôsobuje deštrukciu buniek. Tento výraz zahŕňa tiež rádioaktívne izotopy, chemoterapeutické činidlá a toxíny ako sú enzymaticky aktívne toxíny bakteriálneho, hubového alebo živočíšneho pôvodu, alebo ich fragmenty. Výraz môže zahrňovať tiež členy cytokínovej rodiny, s výhodou IFNgama rovnako ako anti-neoplastické činidlá majúce tiež cytotoxickú aktivitu.

Výrazom chemoterapeutické činidlo alebo antineoplastické činidlo sa tu vždy mienia členovia triedy cytotoxických činidiel ako je uvedené vyššie a zahrňujú chemické činidlá, ktoré pôsobia antineoplasticky, t.j., že zabraňujú rozvoju, dozrievaniu alebo rozšíreniu neoplastických buniek priamo na nádorovej bunke, napríklad cytostatickými alebo cytotoxickými účinkami a nie nepriamo mechanizmami, ako je modifikácia biologickej odozvy. Vhodnými chemoterapeutickými činidlami podľa vynálezu sú s výhodou prírodné alebo syntetické chemické zlúčeniny, avšak biologické molekuly, ako sú napríklad proteíny a polypeptidy nie sú výslovne vylúčené. Existuje velký anti-neoplastických vývoj i, počet klinicky overených obchodne dostupných a v predklinickom mohli byť zahrnuté do vynálezu nádorov/neoplazie kombinovanou terapiou citovanými s inými zdôrazniť, činidiel poprípade pre s TNFa anti-angiogénickymi činidlami, činidlami ako sú antagonisti EGF. že chemoterapeutické činidlá je spolu s uvedenou kombináciou drog, chemoterapeutických činidiel napríklad mechlóretamín etyléniminové zlúčeniny, zlúčeniny s ktoré by liečenie a vyššie poprípade

Je treba možné podávať

Príklady sú alkylačné (nitrogén mustards), činidlá, alkylsulfonáty a ostatné alkylačným pôsobením, ako nitrosomočoviny, cisplatín a dakarbazín; antimetabolity, napríklad kyselina folová, antagonisti purinu alebo pyrimidínu; inhibitory, napríklad vinea alkaloidy podopyllotoxínu; cytotoxické antibiotiká mitotické cymptotecinu. chemoterapie deriváty deriváty činidlá alebo decarbazín (dusíková

Ako výhodné chemoterapeutické sa uvádzajú amifostín (etyol), cisplatín, (DTIC), dactinomycín (DTIC) , horčica), streptozocín, carrbnustín (BCNU), lomustín (CCNU), mechlóretamín cyklofosfamid, doxorubicín (adriamycín) doxorubicín lipo (doxil) gemcitabín (gemzar), daunorubicín, daunorubicín lipo prokarbazín, mitomycín, cytarabín, etoposid, 5-fluórouracil (5-FU), vinblastín, vineristín, bleomycín, (daunoxome), metotrexát, paclitaxel (taxol), docetaxel (taxotere), aldesleukín, carboplatín, camptotecín, CPT-11, 10-hydroxy-7-etylcamptotecín (SN38), dacarbazin, floxuridín, fludarabín, hydroxymočovina, asparaginázia, busulfan, cladribín, ifosfamid, idarubicín, mesna, interferón alfa, interferón beta, irinotecan, mitoxantrón, topotecan, leuprolid, megestrol, melphalan, merkaptopurín, plicamycín, mitotan, pegaspargase, pentostatín, pipobróman, plicamycín, streptozocín, tamoxifén, teniposid, testolaktón, tioguanín, tiotepa, uracilová horčica, vinorelbín, chlorambucil a ich kombinácie.

Najvýhodnejšími chemoterapeutickými činidlami podľa vynálezu sú cisplatín, gemcitabín, doxorubicín, paclitaxel (taxol) a bleomycín.

Výrazom rakovina a nádor sa tu vždy mieni fyziologický stav cicavcov, ktorý je spravidla charakterizovaný neregulovaným rastom buniek. Pomocou farmaceutických prostriedkov podľa vynálezu sa môžu liečiť nádory, ako sú nádory prsníku, srdca, pľúc, tenkého a hrubého čreva, sleziny, ľadvín, močového mechúra, hlavy a krku, vaječníkov, prostaty, mozgu, pankreasu, pokožky, kostí, kostného morku, krvi, brzlíku, maternice, vajec, cervixu a pečene. Zvlášť ide o nádory zo súboru zahŕňajúceho adenóm, angiosarkóm, astrocyatóm, epiteliálny karcinóm, germinóm, glioblastom, gliom, hamartóm, hemangioendoteliom, hemangiosarkóm, hematóm, hepatoblastóm, leukémia, lymfóm, medulloblastóm, melanóm, neuroblastóm, osteosarkóm, retinoblastóm, rabdomyosarkóm, sarcoma a teratóm. Nádory zo súboru zahrňujúceho akrálny povrchný malígny melanóm, radiačnú keratózu, edenokarcinóm, adenoid cystický karcinóm, adenomas, adenosarkóma, adenošupinatý karcinóm, astrocyklické nádory, karcinóm Bartoliniho žliaz, karcinóm bazálnych buniek, karcinóm bronchiálnej žľazy, kapilárny karcinoidný karcinóm, karcinosarkóm, pórovitý cholangiokarcinóm, chondosarkóm, cievnatý papilom/carcinom, jasné bunky karcinóm, cystadenóm, endodermálny sínusový nádor, endometriálnu hyperplaziu, endometriálny sarkóm stromatu, endometroidný adenokarcinóm, ependymal, epiteloid, Evingov fibrolamelárnu fokálnu nádory zárodočných hermangiblastóm, hepatický adenóm, karcinóm, sarkóm, gastrinóm, glukagonóm, hemangiom, hepatocellular neoplaziu, interepiteliálnu invazívny šupinatý bunečný buniek, leiomyosarkóm, melanom, malígne medulloepitelialiom, metastatický neuroblastóm, nodulárny melanóm, oligodendrogliálny papilárny hypofýzové blastóm, rabdomyosarkóm, buniek, nádor, šupinový submesoteliálny nediferencovaný vipoma,

Farmaceutické zahrňovať činidlá, účinky spojené s (adj unkt ívnou akomkoľvek obmedzení protirakovinových resorpcie a činidlá zabraňujú s chemoterapiou, znižujú výskyt povrchný malígny melanóm, mezoteliálne nádory, melanóm, meningeálny mucoepidermoidný neuroepiteliálny ovsený bunečný (oat osteosarkóm, pancreatický adenokarcinóm, epifizárne plazmocytóm, pseudosarkóm, ľadvinových buniek, sarkóm, sérový karcinóm, karcinóm mäkkého tkaniva, somatostatín karcinóm, serózny nádory, karcinóm nádor, karcinóm šupinových povrchový šíriaci sa karcinóm, uveálny melanóm, kožný dobre diferencovaný karcinóm a Wilmov nádor.

zlúčeniny podľa vynálezu ktoré znižujú alebo vylučujú kombinačnou terapiou podľa terapiou) príkladne, teda bez činidla, ktoré znižujú drog, napríklad kardioprotektívne činidlá.

výskytu nevoľnosti a rádioterapiou alebo infekcií spojených nodulárnu hyperplaziu, buniek, glioblastóm, hemangioendoteliom, hepatickú adenomatózu, inzulínom, intaepiteliálnu šupinatú bunečnú neoplaziu, karcinóm, karcinóm veľkých malígny medulloblastóm, mezoteliálny karcinóm, adenokarcinómonový celí) karcinóm, polypeptid, bunečné pulmonárny retinoblastóm, karcinóm malých sekretujúci buniek, melanóm, karcinóm, môžu vedľajšie vynálezu zámeru na toxické účinky inhibítory kostnej Tieto adjunktívne zvracaniu spojené operáciou, alebo s podávaním myelosupresívnych protirakovinových drog. Adjunktívne činidlá sú v obore dobre známe. Imunoterapeutické činidlá podlá vynálezu sa môžu prídavné podávať s adjuvanty podlá BCG a so stimulátormi imunitného systému. Okrem toho môžu zlúčeniny zahrňovať imunoterapeutické činidlá alebo chemoterapeutické činidlá, ktoré obsahujú cytotoxicky účinné radiačné označené izotopy, alebo iné cytotoxické činidlá ako sú cytotoxické peptidy (napríklad cytokíny) alebo cytotoxické drogy a podobné.

Pojem farmaceutický kit na liečenie nádorov alebo nádorových metastáz je súprava na použitie reakčných činidiel nádorov a nádorových metastáz.

podľa vynálezu je spravidla formulované prostriedok, ako a spravidla inštrukcie pri

Reakčné spôsoboch liečenia činidlo v kite ako terapeutický preto môže byť v ktorýchkolvek z v kite.

Takými suspenzie a/lebo tablety, antagonistov

Reakčné činidlá môžu je popísané, a variantov foriem vhodných na distribúciu formami môžu byť kvapaliny, a podobné formulácie na fúzneho proteínu podlá podávanie oddelene alternatívne môžu prášky, zaistenie uvedených kombinované obale. Obal spôsobov alebo v prostriedku môže obsahovať vynálezu. byť v oddelených obaloch vhodných na podľa byť v samostatnom kontejneri množstvo postačujúce pre reakčných činidiel podľa popísaných spôsobov liečenia. Kit podľa vynálezu obsahuje materiálov obsiahnutých v jednu alebo niekoľkých dávok tiež inštrukcie pre použitie obale.

Pojem farmaceutické liečenie sa týka terapeutických metód podlá vynálezu na ošetrovanie nádorových buniek v nádoroch a nádorových metastázach, ktoré sú založené na kombinovanom použití angiogenéziu inhibujúcej (antianiogéneznu) terapiu a protinádorovéj imunoterapie použitými činidlami blokujúcich receptor tyrosínkinázy s výhodou antagonistov ErbB, predovšetkým protilátok antiErbBl (EGFR,Herl)/anti-ErbB2(Her2) . Viacej než jeden typ angiogenéziu inhubujúceho činidla sa môže použiť v kombinácii s viacej než jedným typom výhodne anti-ErbB receptor inhibujúceho činidla. Kombinované použitie môže nastať súčasne, postupne alebo so zavedením časového odkladu medzi ošetrením. Ktorékoľvek zo špecifických liečiv môže byť podané viac krát než raz v priebehu ošetrenia. Spôsob môže spočívať v synergistickom inhibičnom účinku proliferácie rakovinových buniek každého jednotlivého liečiva, poskytujúcim účinnejšie ošetrenie než pri podaní jednotlivej zložky samotnej. Spôsob podľa vynálezu teda zahrňuje podávanie pacientovi v kombinácii množstva antiangiogénického činidla a anti-ErbB receptora (Her2/Her2), ktoré nemôžu viesť k účinnej inhibícii angiogenézie, alebo aktivity protinádorových buniek, ak sú podávané v tom istom množstve samostatne. Spôsob podľa vynálezu zahrňuje množstvo variantov pre uskutočnenie jednotlivých krokov. Napríklad činidlo podľa vynálezu môže byť podávané súčasne, postupne alebo oddelene. Okrem toho činidlo blokujúce receptor tyrosínkinázy a antiangiogénické činidlo sa môžu podávať oddelene v časovom intervale približne troch týždňov medzi jednotlivým podaním, teda v podstate bezprostredne po podaní prvého aktívneho činidla do až troch týždňov po podaní prvého činidla. Spôsob je možné uskutočňovať po chirurgickom zákroku. Alternatívne môže byť chirurgický zákrok uskutočňovaný v priebehu intervalu medzi podaním prvého a druhého aktívneho činidla. Príkladom tohto spôsobu je kombinácia súčasnej metódy s chirurgickým odstránením nádoru. Pri ošetrovaní podľa vynálezu sa spravidla podáva terapeutický prostriedok v jednom alebo v niekoľkých cykloch podaní. Napríklad ak sa uskutočňuje súčasné podanie, terapeutický prostriedok obsahujúci obe činidlá, sa podáva behom časovej periódy od dvoch dni do troch týždňov v jedinom cykle. Potom môže byť cyklus ošetrenia opakovaný podľa posúdení ošetrujúceho lekára. Podobne pri postupnej aplikácii, môže byť doba podania pre každé jednotlivé ošetrenie stanovená spravidla na pokrytie tej istej časovej periódy. Interval medzi cyklami kolísa od nuly do dvoch polypeptidy alebo podľa vynálezu môžu alebo mesiacov.

Monoklonálne protilátky, nimet iká/chemoterapeut iká injekciou postupnou má byť ošetrované, v tele pre systemické podávanie ošetrené intravenóznym prostriedkov, v úvahu ktoré organické byť podávané parenterálne infúziou v priebehu času. I keď tkanivo, môže byť spravidla prístupné je najčastejšie terapeutických iné tkanivá a prostriedky podania pokiaľ tkanivo obsahuje cieľovú , a preto podaním prichádzajú je pravdepodobné, že cieľové molekulu. Preto monoklonálne protilátky, polypeptiody alebo organické činidlá podľa vynálezu je možné podávať intraokulárne, intravenózne, intraperitoneálne, intramuskulárne, subkutánne, intrakavitálne, a infúziou a transdermálne, ortotopickou injekciou môžu sa podávať tiež peristaltickými prostriedkami. Terapeutické prostriedky, obsahujúce napríklad integrínový antagonistu podľa vynálezu, sa podávajú obvykle intravenózne v jednej dávke napríklad ako injekcie. Terapeutické prostriedky podľa vynálezu obsahujú fyziologicky prijateľný nosič spolu s príslušným popísaným činidlom, rozpusteným alebo dispergovaným ako účinná zložka.

Výrazom farmaceutický prijateľný a jeho gramatickými tvarmi sa vždy mienia prostriedky, nosiče, riedidlá a reakčné činidlá a tento výraz je používaný zámenne a znamená, že materiály sú schopné podaniu cicavcom bez vytvárania nežiadúcich fyziologických účinkov, ako sú napríklad nevoľnosť, závrate a zažívacie bolesti. Príprava farmakologického prostriedku, ktorý obsahuje aktívne podiely rozpustené alebo dispergované je v obore dostatočne známa a nemusí byť obmedzená v závislosti na formulácii. Spravidla sa také prostriedky pripravujú ako injekcie buď ako tekuté roztoky alebo ako suspenzie, môžu sa však tiež pripravovať pevné formy vhodné na rozpustenie alebo suspendovanie v tekutine pred použitím. Prostriedok môže byť tiež emulgovaný. Účinnú zložku je možné zmiešavať s excipientami, ktoré sú farmaceutický prijateľné a kompatibilné s účinnou zložkou a v množstve vhodnom na použitie v liečebných spôsoboch podľa vynálezu. Vhodnými excipientami sú napríklad voda, soľanka, dextróza, glycerol, etanol a ich zmesi. Okrem toho môže prostriedok poprípade obsahovať malé množstvo pomocných látok, ako sú napríklad zmáčadlá alebo emulgačné činidlá, pH pufre, ktoré podporujú účinnosť účinných zložiek. Terapeutický prostriedok podľa vynálezu môže obsahovať farmaceutický prijateľné soli zložiek. Farmaceutický prijateľnými soľami môžu byť adičné soli s kyselinami (vytvárané s voľnými aminoskupinami polypeptidu) zo súboru zahrňujúceho anorganické kyseliny, ako je kyselina chlorovodíková alebo ortofosforečná, alebo organické kyseliny, ako je napríklad kyselina octová, vinná a mandľová. Soli vytvorené s voľnými karboxylovými skupinami, môžu byť tiež odvodené od anorganických zásad, ako sú napríklad hydroxid sodný, draselný, amónny, vápenatý alebo železitý a od organických zásad, ako je napríklad izopropylamín, trimetylamín, 2-etylamínoetanol, histidín a prokaín. Obzvlášť výhodné sú soli kyseliny chlorovodíkovej používanej v príprave cyklických polypeptidových αν antagonistov. Fyziologicky prijateľné nosiče sú v obore dobre známe. Príklady tekutých nosičov sú sterilné vodné roztoky, ktoré neobsahujú žiadne materiály prídavné k účinným látkam a voda alebo obsahujúce pufer ako je fosforečnan sodný s fyziologickou hodnotou pH a alebo fyziologická solanka, ako je soľanka pufrovaná fosfátom. Vodné nosiče môžu však obsahovať viac než jednu pufrovú soľ, rovnako ako soli, ako sú chlorid sodný alebo draselný, dextrózu, polyetylénglykol a iné soluty. Tekuté prostriedky môžu obsahovať tiež tekuté fáze prídavné s vodou alebo na vylúčenie vody. Príklady takých prídavných tekutých fáz sú glycerín, rastlinné oleje, ako je kokosový olej a emulzia voda-olej.

Spravidla je terapeuticky imunoterapeutického činidla vo forme účinné množstvo napríklad receptorovej protilátky alebo protilátkového alebo protilátkového konjugátu alebo fragmentu < je podané postačujúce rozmedzí receptorové v množstve protilátky, takom, že ak anti-ErbB fragmentu, antiangiogénne alebo vo prijateľnom plazmovej mikrogramu s výhodou /ml a obvykle približne dávka kolísať prostriedku koncentrácie je na konj ugátu fyziologicky dosiahnutie približne 0,01 (ml) až približne 100 pg/ml, (pg) na mililiter v rozmedzí približne 1 pg/ml až približne 5 pg pg/ml. Inak vyjadrené - môže približne 0,1 mg/kg až rozmedzí približne 0,2 v rozmedzí v rozmedzí

300 mg/kg, s približne 200

0,5 mg/kg i výhodou v ) mg/kg, najvýhodnejšie až približne 20 mg/kg v jednej približne mg/kg až približne alebo v niekoľkých denných dávkach po dobu jedného alebo niekoľkých dni. Pokiaľ je imunoterapeutické činidlo vo forme fragmentu alebo konjugátu monoklonálnej protilátky, môže sa množstvo nastaviť na základe hmoty fragment/konjugát vztiahnuté k hmote protilátky ako celku. Výhodná koncentrácia v plazme v molarite je v rozmedzí približne 2 mikromolárne (μΜ) až približne 5 milimolárne (mM) a s výhodou v rozmedzí 100 μΜ až 1 mM protilátkového antagonistu. Terapeuticky účinné množstvo činidla podlá vynálezu, ktorým je neimunoterapeutický peptid alebo proteínový polypeptid (napríklad IFN-alfa) alebo iná malá molekula podobnej veľkosti je spravidla také množstvo polypeptidu, že pri podaní vo forme fyziologicky prijateľného prostriedku postačí na dosiahnutie koncentrácie v plazme v rozmedzí približne 0,2 mikrogramy (ug) na mililiter (Ml) až približne 200 pg/ml, s výhodou v rozmedzí približne 1 μ/ml až približne 150 pg/ml. Vztiahnuto na polypeptid majúci hmotnosť približne 500 g na mol, je výhodná plazmová koncentrácia polypeptidového antagonistu v molarite v rozmedzí približne 2 mikromolárne (μΜ) až približne 5 milimolárne (mM) a s výhodou v rozmedzí približne 100 μΜ až 1 mM. Spravidla dávka účinného činidla, ktorým je s výhodou chemický antagonista alebo (chemické) chemoterapeutické činidlo podľa vynálezu (ani imunoterapeutické činidlo ani neimunoterapeutické peptid/protein) je v rozmedzí 10 mg až 1000 mg, s výhodou v rozmedzí približne 20 až 200 mg a výhodnejšie v rozmedzí 50 až 100 mg na kg telesnej hmotnosti za deň.

Výraz terapeuticky účinné alebo terapeuticky účinné množstvo sa týka množstva drogy účinnej na liečenie chorôb alebo poruchy cicavca. V prípade rakoviny môže terapeuticky účinné množstvo drogy znižovať počet rakovinových buniek; znižovať veľkosť nádoru, inhibovať (napríklad do istej miery spomaľovať a s výhodou ukončiť) metastázu nádoru; inhibovať do istej miery rast nádoru a/lebo zmierniť do istej miery jeden alebo niekoľko symptómov spojených s rakovinou. Droga môže do istej miery brániť rastu a/lebo zabiť stávajúce rakovinové bunky, môže byť cytostatická a/lebo cytotoxická. Pre terapiu rakoviny, môže byť účinnosť napríklad meraná posúdením doby do progresie choroby (TTP) a/lebo stanovení rýchlosti odozvy (RR) ·

Vynález bližšie objasňujú výsledky klinických testov.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Nasleduje krátka správa o klinickej skúške.

Pacient, 45 ročný, pôvodne trpel progresívnym karcinómom plochej bunky hornej čeluste (squamous celí carcinoma of the superior maxilla) superior maxilla.

EMD 7200: Monoklonálna ľudská protilátka 425 (h425),

Merck KgaA, Nemecko

EMD 121974: Cyklo-(Arg-Gly-Asp-DPhe-NMeVal),

Cilengitide^R, Merck KgaA, Nemecko

Chemoterapeutiká: rôzne (napríklad gemcitabín, cisplatín) .

História prípadu a klinické nálezy/stav na začiatku súcitného použitia liečby:

V júli 1997 sa pacient po prvý krát dostal do nemeckého ústavu Virchov Klinikum. Uskutočnila sa biopsia podozrivého veľkého nádoru hornej čeľuste (maxily). Histológia ukázala karcinóm plochej bunky klasifikovaný ako T4 NÔ MO. 5. augusta 1997 sa uskutočnila čiastočná resekcia hornej maxily a resekcia regionálnych miazgových uzlín. Histológia ukázala, že nebol dosiahnutý čistý zbytok, takže boli uskutočnené ďalšie resekcie behom tej istej doby hospitalizácie. V dôsledku nepriaznivej histologickej klasifikácie sa pacient podrobil pooperačnej radiačnej terapii až 50,4 Gray od septembra do októbra 1997. V júli roku 1998 bolo podozrenie na postup choroby, čo viedlo k hospitalizácii. Histológia teraz ukázala adenokarcinóm plochej bunky. Po konzultácii s rádioterapeutmi bola doporučená nová rádioterapia, ktorá sa začala v auguste 1998. Súčasne bol pacient liečený gemcitabínom (100 mg) ako rádiosenzitizátorom. Šesťtýždňová liečba viedla k úplnej klinickej remisii. Po kombinovanej rádiochemoterapii dostal pacient liečbu 1000 mg gemcitabínu (5 cyklov 16 podaní).

V marci 1999 sa znovu objavil postup karcinómu, čo viedlo k novej radiačnej terapii a palliatívnej resekcii nádoru. V auguste 1999 znovu nádor postúpil a začalo sa s chemoterapiou cisplatínom (75 mg/m²) a dodetaxelom (75 mg/m²). Po troch podaniach sa terapia ukončila vzhľadom k nedostatočnému účinku na rast nádoru.

Difúzne krvácanie z veľkej hmoty nádoru vyžadovalo transfúziu erytrocytových koncentrátov.

Priebeh súcitného použitia systému antiangiogénne činidlo/chemoterapeutické činidlo:

Po liečbe EMD 121974 (600 mg/m²) a gemcitabínom (Gemzar) (1000 mg/m²) v novembri 1999 bola zistená regresia nádoru. Od polovice januára 2000 bol pacient schopný počuť opäť na svoje ľavé ucho a bol schopný otvárať ústa o 30 % viacej než v decembri 1999. Povrch nádoru vykazoval známky granulácie a hojenia rany. Krvácanie ustalo a transfúzie už neboli nutné.

Pacient bol liečený EMD 121974 a Gemzar od 17.11.1999 do 30.03.2000. Od 06.04.2000 do 28.04.2000 boli pacientovi poskytované EMD 121974, Gemzar a chemoterapie 5.FU, cisplatín a rescuvolin, pretože sa zistila progresia nádoru. Liečenie 'chemoterapiou bolo ukončené pre hematotoxicitu pokračovalo sa liečbou samotným

Cilengitínom. Od apríla do júna 2000 dostával pacient 600 mg/m² EMD 121974 dvakrát týždne, čo viedlo iba ku stabilnej chorobe.

Pacientov stav sa zhoršil po niekoľkých týždňoch a pacient bol liečený zvýšenou dávkou 1200 mg/m² EMD 121974 dvakrát týždne.

Liečenia podávaním h425 + Cilengitidu + chemoterapeutika: EMD 72 000 bol po prvý krát podávaný v novembri 2 000 v dávke 200 mg (polhodinová infúzia) po premedikácii systémom dexamatason/dimetindenmalát (Fenistil) a ranitidínom (Zantic). 0 týždeň neskoršie pacient dostal prídavné gemcitabín (1000 mg/m²). Týždenný plán liečby bol: pondelok: 1200 mg/m² Cilengitidu (jednohodinová infúzia), utorok 200 mg EMD 72000 (polhodinová infúzia) nasledovaný 1000 mg/m² gemcitabín (jednohodinová infúzia), piatok 1200 mg/m² Cilengitid (jednohodinová infúzia). Po tomto liečení bol pozorovaný rozpad hmoty nádoru. Hmoty nádoru boli chirurgicky odstránené pri niekoľkých príležitostiach. Účinok kombinovaného liečenia bol považovaný za výnimočne pozoruhodný ošetrovacím lekárom. Neboli pozorované žiadne škodlivé reakcie drogy v závislosti na EMD 121974 a EMD 72000. Pacientov stav zostal už nezmenený.

Claims (42)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Farmaceutický prostriedok, vyznačujúci sa tým, že obsahuje činidlo alebo činidlá zo súboru zahrňujúceho (i) aspoň jedno činidlo špecificky blokujúce receptor tyrosínkinázu a (ii) aspoň jedno činidlo špecificky inhibujúce angiogenéziu, pričom toto činidlo alebo tieto činidlá nie sú cytokínovými imunokonjugátmi cytokínu, poprípade spolu s farmaceutický prijateľným nosičom, riedidlom alebo excipientom.
2. 2. Farmaceutický prostriedok podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že obsahuje ďalej cytotoxické činidlo.
3. 3. Farmaceutický prostriedok podľa nároku 1 alebo 2, v y - značujúci sa tým, že obsahuje (i) aspoň jedno činidlo špecificky blokujúce receptor tyrosínkinázy a ' (ii) aspoň jedno činidlo špecificky inhibujúce angiogenéziu.
4. 4. Farmaceutický prostriedok podľa nároku 1 alebo 2, v y značujúci sa tým, že obsahuje činidlo špecificky blokujúci receptor tyrosínkinázy ako tiež špecificky inhibujúce angiogenézie.
5. 5. Farmaceutický prostriedok podľa nároku 3, vyznačujúci sa tým, že činidlo (i) špecificky blokuje receptor ErbB.
6. 6. Farmaceutický prostriedok podľa nároku 5, vyznačujúci sa tým, že špecifičnosť receptora ErbB uvedeného činidla je vo vzťahu k receptorovi EGF (ErbBl/Hetrl) alebo receptora ErbB2/Her2.
7. 7. Farmaceutický prostriedok podľa nároku 6, vyznačujúci sa tým, že činidlo je protilátka alebo jej funkčne intaktný derivát obsahujúci väzobné miesto, ktoré sa viaže na epitóp receptora ErbBl (Herl) alebo Erb2(Her2).
8. 8. Farmaceutický prostriedok podľa nároku 7, vyznačujúci sa tým, že je protilátka alebo jej funkčne intaktný derivát volený zo súboru zahrňujúceho:

   - humanizovanú monoklonálnu protilátku 4256 (h425)

   - chimérickú monoklonálnu protilátku 225 (c225)

   - humanizovanú monoklonálnu protilátku Her2.
9. 9. Farmaceutický prostriedok podľa nároku 1 až 8, vyznačujúci sa tým, že uvedeným angiogenéznym inhibičným činiteľom je integrinový inhibítor ανβι, ανβ₅ alebo ανβ₆.
10. 10. Farmaceutický prostriedok podľa nároku 9, vyznačujúci sa tým, že inhibítorom integrínu je RGD obsahujúci lineárny alebo cyklický peptid.
11. 11. Farmaceutický prostriedok podľa nároku 10, vyznačujúci sa tým, že peptidom je cyklo(Arg-Gly-AspDPhe-NMeVal),
12. 12. Farmaceutický prostriedok podľa nároku 7a 9, vyznačujúci sa tým, že protilátkou alebo jej funkčne intaktným derivátom je humanizovaná monoklonálna protilátka 425 (h425) alebo chimérická monoklonálna protilátka 225 (c225) a inhibítorom integrínu je cyklo(Arg-Gly-Asp-DPhe-NMeVal).
13. 13. Farmaceutický prostriedok podľa nároku 12, vyznačujúci sa tým, že ďalej obsahuje chemoterapeutické činidlo, ktorým je akákoľvek zlúčenina zo súboru zahrňujúceho cisplatín, doxorubicín, gemcitabín, docetaxel, paclitaxel a bleomycín.
14. 14. Farmaceutický prostriedok podľa nároku 9, vyzná-

    čujúci s a tým, že inhibítorom integrínu je protilátka alebo jej funkčne intaktný derivát, obsahujúci väzobné miesto, ktoré sa viaže na epitóp receptora integrínu.
15. 15. Farmaceutický prostriedok podľa nároku 14, vyznačujúci sa tým, že protilátkou je LM609 alebo

    P1F6 .
16. 16. Farmaceutický prostriedok podľa nároku 4, vyznačujúci sa tým, že činidlom je bišpecifická protilátková alebo héteroprotilátková molekula obsahujúca prvé väzobné miesto, ktoré sa viaže na epitóp receptora tyrosinkinázy a druhé väzobné miesto, ktoré sa viaže na epitóp receptora angiogenézie.
17. 17. Farmaceutický prostriedok podľa nároku 16, vyznačujúci sa. tým, že bišpecifické protilátková alebo héteroprotilátková molekula obsahuje prvé väzobné miesto, ktoré sa viaže na epitóp receptora ErbB a druhé väzobné miesto, ktoré sa viaže na epitóp integrinového receptora.
18. 18. Farmaceutický prostriedok podľa nároku 17, vyznačujúci sa tým, že väzobné miesta, ktoré viažu na epitóp receptora ErbB, sú volené zo súboru zahrňujúceho monoklonálne protilátky h425, C3225 alebo Her 2 a väzobné miesta, ktoré sa viažu na epitóp integrinového receptora, sú volené zo súboru zahrňujúceho monoklonálne protilátky LM609 a P1F6 .
19. 19. Farmaceutický prostriedok podľa nároku 4, vyznačujúci sa tým, že činidlom je imunokonjugát pozostávajúci z protilátky alebo z protilátkového fragmentu majúceho jednu z uvedených špecifičnosti a z neimunologickej molekuly fúzovanej na protilátku alebo na fragment protilátky majúci druhú špecifičnosť.
20. 20. Farmaceutický prostriedok podľa nároku 19, vyznačujúci sa tým, že protilátková časť alebo jej fragment obsahuje väzobné miesto, ktoré sa viaže na epitóp receptora ErbB a fúzovaná neimunologická molekula obsahuje väzobné miesto, ktoré sa viaže na epitóp integrinového receptora.
21. 21. Farmaceutický prostriedok podlá nároku 20, vyznačujúci sa tým, že protilátková časť, ktorá sa viaže na epitóp receptora ErbB, je volená zo súboru zahrňujúceho monoklonálnu protilátku h425, c225 alebo Her 2 a neimunologickú časť, ktorá sa viaže na epitóp integrínového receptora je cyklo(Arg-Gly-Asp-DPhe-NMeVal).
22. 22. Farmaceutický kit, v že obsahuje (i) balíček obsahujúci receptor ErbB, (ii) balíček obsahujúci angiogenéziu.

    aspoň aspoň ačujúci sa tým, jedno činidlo blokujúce jedno činidlo inhibujúce
23. 23. Farmaceutický kit, podlá nároku 22, vyznačuj úc i sa t ý m, že obsahuje balíček obsahujúci cytotoxické činidlo.
24. 24. Farmaceutický kit, vyznačujúci sa tým, že obsahuje (i) balíček obsahujúci aspoň jedno činidlo blokujúce receptor ErbB a aspoň jedno činidlo inhibujúce angiogenéziu, (ii) balíček obsahujúci cytotoxické činidlo.
25. 25. Farmaceutický kit, podlá nároku 22 až 24, vyznačujúci sa tým, že činidlom blokujúcim receptor ErbB je protilátka alebo jej funkčne intaktný derivát majúci väzobné miesto, ktoré sa viaže na epitóp uvedeného receptora.
26. 26. Farmaceutický kit, podľa nároku 25, vyznačuj úc i sa t ý m, že protilátka alebo jej funkčne intaktný derivát sú volené zo súboru zahrňujúceho humanizovanú monoklonálnu protilátku 425 (h425), chimérnu monoklonálnu protilátku 225 (c225) alebo humanizovanú monoklonálnu protilátku Her2.
27. 27. Farmaceutický kit, podľa nároku 22 až 26, vyznačujúci sa tým, že činidlom inhibujúcim angiogenéziu je inhibítor integrínu α\>β₃, ανβ₅ alebo ανβ₆.
28. 28. Farmaceutický kit, podľa nároku 27, vyznačuj úc i sa t ý m, že integrinovým inhibítorom je RGD obsahujúci lineárny alebo cyklický peptid.
29. 29. Farmaceutický kit, podľa nároku 28, vyznačuj úc i sa t ý m, že peptidom je cyklo(Arg-Gly-Asp-DPheNMeVal).
30. 30. Farmaceutický kit, podľa nároku 22 až 26, vyznačujúci sa tým, že činidlom inhibujúcim angiogenéziu je protilátka alebo funkčne intaktný jej derivát.
31. 31. Farmaceutický kit, podľa nároku 30, vyznačuj úc i sa t ý m, že protilátkou je LM609 alebo P1F6.
32. 32. Farmaceutický kit, podľa nároku 22, vyznačuj úc i sa t ý m, že obsahuje (i) balíček obsahujúci humanizovanú monoklonálnu protilátku 425 (h425), chimérnu monoklonálnu protilátku 2256 )c225) alebo jej funkčný intaktný derivát (ii) balíček obsahujúci cyklo(Arg-Gly-Asp-DPheNMeVal).
33. 33. Farmaceutický kit, podľa nároku 32, vyznačuj úc i sa t ý m, že ďalej obsahuje chemoterapeutické činidlo, ktorým je akákoľvek zlúčenina zo súboru zahrňujúceho cisplatín, doxorubicín, gemcitabín, docetaxel, paclitaxel a bleomycín.
34. 34. Použitie farmaceutického prostriedku alebo farmaceutického kitu definovaného v ktoromkoľvek z nárokov 1 až 33 pre výrobu liečiva na liečenie nádorov a nádorových metastáz.
35. 35. Spôsob ošetrovania nádorov a nádorových metastáz pacienta, vyznačujúci sa tým, že sa pacientovi podáva terapeuticky účinné množstvo činidla alebo činidiel majúcich (i) aspoň jednu špecifičnosť blokovania receptora tyrosínkinázy a (ii) aspoň jednu špecifičnosť inhibujúcu angiogenéziu, pričom toto činidlo alebo činidlá nie sú cytokínovým imunokonj ugátom.
36. 36. Spôsob podľa nároku 35, vyznačujúci sa tým, že prídavné sa pacientovi podáva cytotoxické činidlo.
37. 37. Spôsob podľa nároku 35 alebo 36, vyznačuj úci sa t ý m, že činidlo alebo činidlá majú špecifičnosť blokovania receptora tyrosínkinázy.
38. 38. Spôsob podľa nároku 37, vyznačujúci sa tým, že špecifičnosť receptora ErbB uvedeného činidla je vo vzťahu k receptora EGF (ErbBl/Herl) alebo ErbB2/Her2.
39. 39. Spôsob podľa nároku 38 vyznačujúci sa tým, že činidlom, je protilátka alebo jej funkčne intaktný derivát obsahujúci väzobné miesto, ktoré sa viaže na epitóp receptora ErbBl(Herl) alebo ErbB2(her2).
40. 40. Spôsob podlá nároku 39, vyznačujúci sa tým, že protilátka alebo jej derivát sú volené zo súboru zahrňujúceho humanizovanú monoklonálnu protilátku 425 (h425), chimérnu monoklonálnu protilátku 225 (c225) alebo humanizovanú monoklonálnu protilátku Her2.
41. 41. Spôsob podľa nároku 35 až 40, vyznačujúci sa t ý m, že činidlom inhibujúcim angiogenéziu je inhibítor integrínu ανβ₃, ανβ₅ alebo ανβ₆ alebo činidlo blokujúce receptor VEGF.
42. 42. Spôsob podľa nároku 41, vyznačujúci sa tým, že sa pacientovi podáva terapeuticky účinné množstvo (i) humanizovanej monoklonálnej protilátky 425 (h425) alebo chimérnej monoklonálnej protilátky 225 (c225), (ii) cyklo(Arg-Gly-Asp-DPhe-NMeVal), a poprípade