SK6722000A3

SK6722000A3 - Adenosine derivatives, method for their preparation, pharmaceutical composition containing the same and their use

Info

Publication number: SK6722000A3
Application number: SK672-2000A
Authority: SK
Inventors: Richard Peter Charles Cousins; Brian Cox; Colin David Eldred; Andrew Michael Kenneth Pennell
Original assignee: Glaxo Group Ltd
Priority date: 1997-11-08
Filing date: 1998-11-06
Publication date: 2001-01-18
Also published as: AP2000001801A0; NO20002361D0; HUP0004082A2; WO1999024449A3; PL340921A1; CA2309200A1; TR200002131T2; EE200000285A; ES2222621T3; NO20002361L; AR011229A1; ZA9810125B; IS5477A; HRP20000275A2; AU2048399A; KR20010031875A; BR9813976A; IL135964A0; EP1030857B1; ATE273990T1

Description

Deriváty adenozínu, spôsob ich prípravy, farmaceutický prostriedok s ich obsahom a ich použitie

Oblasť techniky

Predkladaný vynález sa týka nových derivátov adenozínu, spôsobu ich prípravy, farmaceutických prostriedkov s ich obsahom a ich použitia v lekárstve. Podstata vynálezu

Podstatou vynálezu sú deriváty adenozínu všeobecného vzorca I, ktoré majú agonistické účinky na adenozínový receptor A1 r’

NK

HÓ ÓH kde

R² znamená C^alkyl, halogén alebo atóm vodíka;

R³ znamená fluorovanú alkylovú skupinu s priamym alebo rozvetveným reťazcom s až 6 atómami uhlíka;

R¹ znamená skupinu zvolenú zo skupiny:

1) -(alk)_n-(C₃.₇)cykloalkyl vrátane premosteného cykloalkylu, pričom cykloalkylová skupina môže byť prípadne substituovaná jedným alebo viacerými substituentami zo skupiny OH, halogén, -(C₁.₃)alkoxy, kde (alk) znamená C^alkylén a n znamená 0 alebo 1,

2) alifatická heterocyklická skupina so 4 až 6 atómami v kruhu obsahujúca aspoň jeden heteroatóm zvolený z O, N a S, prípadne substituovaný jedným alebo viacerými substituentami zvolenými zo skupiny -(C₁.₃)alkyl, -CO₂-(C_M)alkyl, -CO-íCvaalkyl), -S(=O)_n-(C₁.₃alkyl), -CONR^aR^b, kde skupiny R^a a R^b nezávisle znamenajú atóm vodíka alebo skupinu C^alkyl, alebo =0, kde pokiaľ je v heterocyklickom kruhu prítomný atóm síry, je tento atóm síry prípadne substituovaný skupinou (=0)_n, kde n je 1 alebo 2,

3) priamy alebo rozvetvený C^alkyl, ktorý prípadne obsahuje jeden alebo viacej atómov kyslíka, skupín S(=0)_n, kde n je 0,1 alebo 2, alebo atómov dusíka substituovaných alkylovým reťazcom, kde uvedený alkyl je prípadne substituovaný jednou alebo viacerými z nasledujúcich skupín: fenyl, halogén, hydroxy alebo NR^aR^b, kde R^a a R^b znamenajú obe C^alkyl alebo atóm vodíka,

4) fúzovaný bicyklický aromatický kruh kde B znamená 5- alebo 6-člennú heterocyklickú aromatickú skupinu obsahujúcu jeden alebo viacej atómov O, N alebo S, kde bicyklický kruh je naviazaný na atóm dusíka všeobecného vzorca I cez atóm kruhu A a kruh B je prípadne substituovaný skupinou -CO₂-(C₁.₃alkyl),

5) fenylová skupina prípadne substituovaná jedným alebo viacerými substituentami zvolenými zo skupiny: halogén, -SO₃H, -(alk)_nOH, -(alk)_nkyano, -(O)_n-(C^)alkyl, prípadne substituovaný jedným alebo viacerými atómami halogénu, -(alk)_nnitro, -(O)_m-(alk)_n-CO₂R^c, -(alk)n-CONR^cR^d, -(alk)n-COR^c, -(alk)n-SOR^e, -(alk)n-SO₂NR^cR^d, -(alk)nOR^c, -(alk)n-(CO)_m-NHSO₂R^e, -(alk)n-NHCOR^c, -(alk)nNR^cR^d, kde m a n znamenajú O alebo 1 a alk znamená C^alkylénovú skupinu alebo C₂.₆alkenylovú skupinu,

6) fenylová skupina substituovaná 5- alebo 6-člennou heterocyklickou aromatickou skupinou, kde heterocyklická aromatická skupina je prípadne substituovaná skupinou C^alkyl alebo NR^cR^d pričom skupiny R^c a R^d môžu každá nezávisle znamenať atóm vodíka alebo skupinu C^alkyl, alebo ak môže časť skupiny NR^cR^d, R^c a R^d spolu s atómom

-3dusíka tvoriť 5- alebo 6-členný heterocyklický kruh prípadne obsahujúci iné heteroatómy, tento heterocyklický kruh môže byť prípadne substituovaný jednou alebo viacerými C₁.₃alkylovými skupinami,

R^e znamená C^alkyl, a ich soli a solváty, najmä ich fýziologicky prijateľné solváty a soli.

Látky s agonistickým účinkom na receptor adenozínu A1 všeobecného vzorca I majú vyššiu aktivitu voči adenozínovému receptoru A1 než voči iným subtypom adenozínového receptora, najmä A3. Zlúčeniny podľa vynálezu majú malú alebo žiadnu aktivitu voči receptoru A3.

Bude zrejmé, že ak skupiny R¹ a/alebo R² v zlúčeninách všeobecného vzorca I obsahujú jeden alebo viac asymetrických atómov uhlíka, vynález zahrnuje všetky diastereoizoméry zlúčenín všeobecného vzorca I a ich zmesi. Inak je stereochemická konfigurácia zlúčenín podľa vynálezu taká ako je znázornené vo všeobecnom vzorci I.

Ako sa tu používa, termín „alkyl“ znamená alkylovú skupinu s priamym alebo rozvetveným reťazcom. Príklady vhodných alkylových skupín vo význame R¹ a R²zahrnujú skupiny metyl, etyl, n-propyl, /-propyl, n-butyl, s-butyl, ŕerc-butyl a 2,2dimetylpropyl.

Ako sa tu používa, termín „alkylén“ znamená alkylénovú skupinu obsahujúcu 1 až 6 atómov uhlíka, napríklad metylénovú skupinu.

Ako sa tu používa, termín „C₂.₆alkenyľ znamená alkenylovú skupinu s priamym alebo rozvetveným reťazcom obsahujúcim 2 až 6 atómov uhlíka. Skupina alyl je jeden z príkladov vhodnej C₂.₆alkenylovej skupiny.

Termín „halogén“ znamená fluór, chlór, bróm alebo jód.

Termín alifatická heterocyklická skupina znamená cyklickú skupinu obsahujúcu 4 až 6 atómov uhlíka, kde jeden alebo viac atómov uhlíka je nahradených heteroatómami nezávisle zvolenými zo skupiny dusík, kyslík alebo síra. Táto skupina môže byť prípadne substituovaná ako je definované vyššie.

Termín heterocyklická aromatická skupina označuje aromatický mono- alebo bicyklický kruhový systém obsahujúci od 5 do 10 atómov uhlíka, kde jeden alebo viac atómov uhlíka je nahradených heteroatómami nezávisle zvolenými zo skupiny

-4dusík, kyslík a sira, pričom tento kruhový systém môže byť prípadne substituovaný ako je definované vyššie.

Farmaceutický prijateľné soli zlúčenín všeobecného vzorca I zahrnujú soli odvodené od farmaceutický prijateľných anorganických a organických kyselín. Medzi príklady vhodných kyselín patrí kyselina chlorovodíková, bromovodíková, sírová, dusičná, chlorečná, fumarová, maleínová, fosforečná, glykolová, mliečna, salicylová, jantárová, toluén-p-sulfónová, vinná, octová, citrónová, metánsulfónová, mravčia, benzoová, malónová, naftalén-2-sulfónová a benzénsulfónová. Vhodnou farmaceutický prijateľnou soľou zlúčenín všeobecného vzorca I je hydrochloridová soľ. Ďalšie kyseliny ako je kyselina šťavelová, ktoré samé osebe nie sú farmaceutický prijateľné, môžu byť použité ako medziprodukty na získanie zlúčenín podľa vynálezu a ich farmaceutický prijateľných adičných solí s kyselinami. Solváty môžu byť napríklad hydráty.

Skupina R³ výhodne znamená C^fluóralkylovú skupinu, najmä skupinu fluórmetyl alebo fluóretyl, výhodnejšie skupinu F₂C(Me)-, FCH₂-.

Skupina R² znamená výhodne atóm vodíka, metyl alebo halogén, výhodnejšie atóm vodíka alebo atóm chlóru.

Skupina R¹ môže výhodne znamenať skupinu (alk)_n-C₃.₆cykloalkyl, kde n je 0 alebo 1 a uvedený cykloalkyl je buď substituovaný aspoň jedným substituentom zvoleným z atómu halogénu, najmä fluóru, skupiny OH alebo je nesubstituovaný. n je výhodne 0. Výhodnejšie je cykloalkylová skupina monosubstituovaná buď skupinou OH alebo atómom fluóru a výhodnejšie má cykloalkylový kruh päť atómov uhlíka.

Skupina R¹ môže alternatívne znamenať substituovanú alebo nesubstituovanú alifatickú heterocyklickú skupinu, pričom substituent je zvolený zo skupiny -CO2(C^)-alkyl, -CO-^Jalkyl, -S(=O)n-(C1_3)alkyl, CONR^aR^b (kde R^a a R^b sú určené vyššie), a ak je v kruhu prítomný heteroatóm S, tento heteroatóm môže byť prípadne substituovaný skupinou (=O)n, kde n je 1 alebo 2. Výhodnejšie je heterocyklický kruh nesubstituovaný alebo sú substituenty -CO₂-(C_M)alkyl, alebo ak je heteroatóm S, substituent (=O)_n je naviazaný na heterocyklický atóm síry.

-5Alifatická heterocyklická skupina je výhodne nesubstituovaná alebo ak je substituent -CO₂(C₁ Jalkyl, heteroatóm je N a substituent je priamo naviazaný na uvedený atóm dusíka v kruhu.

Heterocyklický kruh je výhodne šesťčlenný a výhodne obsahuje len heteroatóm O, N alebo S.

Alternatívne môže skupina R¹ znamenať priamu alebo rozvetvenú alkylovú skupinu s 1 až 6 atómami uhlíka, prípadne s aspoň skupinou S(=O)_n a/alebo atómom N substituovaných v reťazci, pričom aj je v reťazci skupina S(=O)_n n je výhodne 1 alebo 2. Alkylová skupina môže byť výhodne nesubstituovaná alebo substituovaná aspoň jednou skupinou OH.

Skupina R¹ môže alternatívne znamenať fenylovú skupinu, ktorá je substituovaná jedným alebo viacerými substituentami zvolenými zo skupiny OH a halogén. Výhodne je skupina fenyl disubstituovaná v polohách 2, 4. Oba substituenty sú výhodne atómy halogénu, najmä atómy fluóru a chlóru. Zvlášť výhodná kombinácia je napríklad 2-fluór a 4-chlór.

Rozumie sa, že predkladaný vynález zahrnuje všetky kombinácie zvláštnych a výhodných skupín uvedených vyššie.

Medzi konkrétne zlúčeniny podľa vynálezu patria nasledujúce látky: 5'-deoxy-5'-fluór-/V-(tetrahydropyrán-4-yl)adenozín, 5'-deoxy-5^,-fluór-2-metyl-/V-(tetrahydropyrán-4-yl)adenozín,

2-chlór-5'-deoxy-5'-fluór-/\/-(tetrahydropyrán-4-yl)adenozín, (2/?,3/?,4S,5S)-2-[2-chlór-6-(tetrahydropyrán-4-ylamino)purín-9-yl]-5-trifluórmetyltetrahydrofurán-3,4-diol, 2-chlór-5'-deoxy-5'-fluór-/\/-(2R-fluórcyklopent-(/?)-yl)adenozín, 2-chlór-5'-deoxy-5'-fluór-/\/-(2S-hydroxycyklopent-(S)-yl)adenozín, A/-(endo-bicyklo[2.2.1]hept-2-yl)-2-chlór-5'-deoxy-5'-fluóradenozín, etylester kyseliny 4-[2-chlór-9-(5S-fluórmetyl-3/?,4S-dihydroxytetrahydrofurán-2F?yl)-9H-purín-6-ylamino]piperidín-1-karboxylovej, 1-{4-[2-chlór-9-(5S-fluórmetyl-3/?,4S-dihydroxytetrahydrofurán-2R-yl)-9H-purín-6ylaminojpiperidín-1-ylJetanón,

A/-(endo-bicyklo[2.2.1]hept-2-yl)-5'-deoxy-5^,-fluóradenozín,

A/-(exo-bicyklo[2.2.1]hept-2-yl)-5'-deoxy-5'-fluóradenozín, 5^,-deoxy-5^,-fluór-/V-(2S-hydroxycyklopent-(S)-yl)adenozín, etylester kyseliny 4-[9-(5S-fluórmetyl-3R,4S-dihydroxytetrahydrofurán-2/?-yl)-9Hpurín-6-ylamino]piperidín-1-karboxylovej,

2-chlór-5^,-deoxy-A/-(1,1-dioxohexahydro-1.delta.6-tiopyrán-4-yl)-5^,-adenozín,

2-ch lór-5'-deoxy-/\/-(2,3-d ihyd roxypropyl)-5'-fluóradenozí n, (2/?,3/?,4S,5S)-2-[6-(cyklopropylmetylamino)purín-9-yl]-(1,1 -difluóretyl)tetrahydrofurán-3,4-diol, (2/?,3/?_I4S,5S)-2-[6-(bicyklo[2.2.1]hept-2-ylamino)purín-9-yl]-(1,1-difluóretyl)tetrahydrofurán-3,4-diol, metylamid kyseliny 2-[9-(5S-fluórmetyl-3/?,4/?-dihydroxytetrahydrofurán-2/?-yl)-9/-/purín-6-ylaminoJetánsulfónovej,

5^,-deoxy-5'-fluór-A/-(2,2-dimetylpropyl)adenozín₁/V-terc-butyl-ô'-deoxy-S'-fluóradenozín, 5'-deoxy-5'-fluór-/\/-(tetrahydrotiopyrán-4-yl)adenozin,

2-chlór-5'-deoxy-5^,-fluór-A/-izobutyladenozín, 2-chlór-5^,-deoxy-5^,-fluór-/\/-(1-metánsulfonylpiperidín-4-yl)adenozínI 2-chlór-5^,-deoxy-/V-(2,2-dimetylpropyl)-5'-fluóradenozín, /V-(exo-bicyklo[2.2.1]hept-2-yl)-2-chlór-5'-deoxy-5'-fluóradenozín, butylester kyseliny 4-[2-chlór-9-(5S-fluórmetyl-3/?I4S-dihydroxytetrahydrofurán-2RyO-gW-purín-e-ylaminolpiperidín-l-karboxylovej, etylamid kyseliny 5'-deoxy-/\/-[(1,1 -dioxohexahydro-1 .delta.6-tiopyrán-4-yl)-5'-fluóradenozínpurín-6-ylamino]piperidín-1-karboxylovej, /V-(4-chlór-2-fluórfenyl)-5'-deoxy-5'-fluóradenozín, etylamid kyseliny 4-[2-chlór-9-(5S-fluórmetyl-3R,4S-dihydroxytetrahydrofurán-2Ryl)-9H-purín-6-ylamino]piperidín-1-karboxylovej.

Zlúčeniny podľa vynálezu sú použiteľné ako inhibítory lipolýzy, t.j. znižujú koncentrácie voľných mastných kyselín v plazme. Tieto zlúčeniny môžu byť teda použité pri liečení hyperlipidémií. Naviac majú tieto zlúčeniny ako dôsledok svojej

-7antilipolytickej aktivity schopnosť znižovať zvýšenú hladinu krvnej glukózy, inzulínu a ketónov v tele a preto môžu byť vhodné na liečenie cukrovky. Pretože antilipolytické prostriedky majú hypolipidemické a hypofibrinogenemické účinky, zlúčeniny môžu mať aj antisklerotické účinky. Antilipolytické aktivita zlúčenín podľa predkladaného vynálezu bola ukázaná ich schopnosťou znižovať koncentráciu neesterifikovaných mastných kyselín (NEFA) u hladujúcich potkanov pri orálnom dávkovaní podľa spôsobu opísaného v P. Strong a ďalší, Clinical Science (1993), 84, 663 - 669.

Naviac k ich antilipolytickým účinkom môžu zlúčeniny podľa vynálezu nezávisle ovplyvňovať srdcovú funkciu znižovaním tepovej frekvencie a vodivosti. Zlúčeniny môžu byť teda použité pri liečení celého radu kardiovaskulárnych porúch, napríklad srdcových arytmií, najmä po infarkte myokardu a angíny.

Naviac sú zlúčeniny podľa vynálezu použiteľné ako kardioprotektívne látky použiteľné pri liečbe ischemickej srdcovej choroby. Termín „ischemická srdcová choroba“, ako sa tu používa, zahrnuje poškodenie spojené tak s ischémiou myokardu ako aj s reperfúziou, napríklad spojenou so zavedením štepu pri koronárnom arteriálnom bypase (CABG), perkutánnou transluminálnou koronárnou angioplastikou (PTCA), kardioplégiou, akútnym infarktom myokardu, trombolýzou, stabilnou a nestabilnou angínou a chirurgickými zákrokmi na srdci vrátane čiastočnej transplantácie srdca. Zlúčeniny podľa vynálezu sú naviac použiteľné na liečenie ischemického poškodenia ďalších orgánov. Zlúčeniny podľa vynálezu môžu byť tiež cenné pri liečení iných porúch vznikajúcich ako dôsledok rozšírenej aterosklerózy, napríklad ochorenia periférnych ciev (PVD) a mŕtvice.

Zlúčeniny môžu tiež inhibovať uvoľňovanie renínu a môžu byť tak použiteľné pri liečení hypertenzie a zlyhania srdca. Zlúčeniny môžu byť tiež použiteľné ako látky ovplyvňujúce centrálnu nervovú sústavu (napríklad ako hypnotiká, sedatíva, analgetiká a/alebo antikonvulzívne látky, ktoré sa používajú najmä pri liečení epilepsie).

Naviac sa môžu zlúčeniny podľa vynálezu používať pri liečení apnoickej pauzy v spánku.

-8Zlúčenina všeobecného vzorca I a jej farmaceutický prijateľné adičné soli s kyselinami sú použiteľné ako analgetická, preto sú použiteľné pri liečení alebo prevencii bolesti. Môžu byť použité na zlepšenie stavu hostiteľa, typicky človeka trpiaceho bolesťou. Môžu byť tiež použité na zmiernenie bolesti u pacienta. Zlúčenina všeobecného vzorca I a jej farmaceutický prijateľné adičné soli s kyselinami môžu byť použité ako preventívne analgetická na liečenie akútnej bolesti ako je bolesť kostrového svalstva, pooperačná bolesť a bolesť pri chirurgickom zákroku, chronická bolesť ako je chronická zápalová bolesť (napríklad pri reumatickej artritíde a osteroartritíde), neuropatická bolesť (napríklad posterpetická neuralgia, neuralgia trigemínu, neuropatie spojené sdiabetom a bolesti udržované sympatikom) a bolesť spojená s rakovinou a fibromyalgiou. Zlúčenina všeobecného vzorca I môže byť tiež použitá pri liečení alebo prevencií bolesti spojenej so stavom ako je migréna, tenzná bolesť hlavy a bolesť spojená s funkčnými ochorením čriev (napríklad IBS), bolesť na hrudi iného než srdcového pôvodu a bolesť žalúdka nevredového pôvodu.

Vynález teda poskytuje zlúčeninu všeobecného vzorca I alebo jej fýziologicky prijateľnú soľ alebo solvát na použitie v lekárstve a najmä pri liečení človeka alebo zvieraťa trpiaceho stavom, pri ktorom je výhodné zníženie koncentrácie voľných mastných kyselín v plazme alebo zníženie tepovej frekvencie a vodivosti alebo ak terapia zahrnuje liečenie ischemického ochorenia srdca, ochorenie periférnych ciev alebo mŕtvicu, alebo ak pacient trpí poruchami CNS, apnoickými poruchami v spánku alebo bolesťou.

V ďalšom uskutočnení poskytuje vynález spôsob liečenia človeka alebo zvieraťa trpiacich stavom, pri ktorom je výhodné zníženie koncentrácie voľných mastných kyselín v plazme alebo zníženie tepovej frekvencie a vodivosti, alebo ak pacient trpí ischemickým ochorením srdca alebo je citlivý na toto ochorenie, alebo ak pacient trpí ochorením CNS alebo apnoickou poruchou v spánku alebo bolesťou, pričom tento spôsob zahrnuje podávanie účinného množstva zlúčeniny všeobecného vzorca I alebo jej farmaceutický prijateľnej soli alebo solvátu.

V ďalšom uskutočnení poskytuje vynález použitie zlúčeniny všeobecného vzorca I alebo jej farmaceutický prijateľnej soli alebo solvátu na výrobu farmaceutického prostriedku na liečenie človeka alebo zvieraťa trpiacich stavom, pri ktorom je výhodné zníženie koncentrácie voľných mastných kyselín v plazme alebo zníženie tepovej frekvencie a vodivosti, alebo ak pacient trpí ischemickým ochorením srdca alebo je citlivý na toto ochorenie, alebo ak pacient trpí ochorením CNS alebo apnoickou poruchou v spánku alebo bolesťou.

Vzhľadom k vyššie uvedenému liečeniu ischemickej choroby bolo zistené, že podľa zvlášť neočakávaného hľadiska predkladaného vynálezu podávanie zlúčeniny všeobecného vzorca I pred ischémiou nielen poskytuje ochranu proti infarktu myokardu, ale ochrana je poskytovaná aj v prípade, ak je zlúčenina všeobecného vzorca I podaná po ischemickej príhode a pred reperfúziou. To znamená, že spôsoby podľa predkladaného vynálezu sú použiteľné nielen pri plánovanej alebo očakávanej ischémii, napríklad pri chirurgickom zákroku na srdci, ale aj v prípadoch náhlej a neočakávanej ischémie, napríklad pri srdcovej príhode a nestabilnej angíne.

Bude zrejmé, že odkazy na liečenie zahrnujú akútne liečenie a prevenciu rovnako ako zmiernenie už vytvorených príznakov.

V ďalšom uskutočnení poskytuje vynález farmaceutický prostriedok obsahujúci aspoň jednu zlúčeninu všeobecného vzorca I alebo jej farmaceutický prijateľnú soľ alebo solvát v spojení s farmaceutický prijateľným nosičom a/alebo pomocnou látkou na použitie v lekárstve a najmä pri liečení človeka alebo zvieraťa trpiacich stavom, pri ktorom je výhodné zníženie koncentrácie voľných mastných kyselín v plazme alebo zníženie tepovej frekvencie a vodivosti, alebo ak pacient trpí ischemickým ochorením srdca alebo je citlivý na toto ochorenie, alebo ak pacient trpí ochorením CNS alebo apnoickou poruchou v spánku alebo bolesťou.

Predkladaný vynález ďalej poskytuje spôsob výroby farmaceutického prostriedku, ktorý zahrnuje miešanie aspoň jednej zlúčeniny všeobecného vzorca I alebo jej farmaceutický prijateľnej soli alebo solvátu s farmaceutický prijateľným nosičom a/alebo pomocnou látkou.

Prostriedky podľa vynálezu môžu byť formulované na topické, orálne, bukálne, parenterálne alebo rektálne podávanie alebo vo forme vhodnej na

-10podávanie inhaláciou alebo insufláciou. Výhodné je orálne podávanie. Farmaceutické prostriedky môžu byť upravené na oneskorené uvoľňovanie.

Na miestne podávanie môže byť farmaceutický prostriedok vhodne vo forme transdermálnej náplasti.

Tablety a kapsuly na orálne podávanie môžu obsahovať bežné pomocné látky ako sú spojivá, napríklad sliz škrobu alebo polyvinylpyrolidónu, plnivá, napríklad laktóza, mikrokryštalická celulóza alebo kukuričný škrob, klzné látky, napríklad stearan horečnatý alebo kyselina stearová, rozvoľňovadlá, napríklad zemiakový škrob, sodná soľ kroskarmalózy alebo sodná soľ glykolátu škroby, alebo zmáčadlá ako je laurylsulfát sodný. Tablety môžu byť poťahované v danej oblasti techniky známym spôsobom. Orálne kvapalné preparáty môžu byť vo forme napríklad vodných alebo olejových suspenzií, roztokov, emulzií, sirupov alebo elixírov alebo môžu byť vo forme suchého produktu na rekonštitúciu s vodou alebo iným vhodným vehikulom pred použitím. Tieto kvapalné prostriedky môžu obsahovať bežné aditíva ako sú suspendujúce látky, napríklad sorbitolový sirup, metylcelulóza alebo karboxymetylcelulóza, emulgátory, napríklad sorbitanmonooleát, nevodné vehikulá (ktoré môžu zahrnovať jedlé oleje), napríklad propylénglykol alebo etylalkohol, a ochranné látky, napríklad metyl- alebo propyl-p-hydroxybenzoáty alebo kyselinu sorbovú. Farmaceutické prostriedky môžu tiež obsahovať, pokiaľ je to vhodné, pufračné soli, aromatické látky, farbivá a sladidlá (napríklad manitol).

Na bukálne podávanie môžu byť farmaceutické prostriedky vo forme tabliet alebo pastiliek formulovaných bežným spôsobom. Zlúčeniny všeobecného vzorca I môžu byť formulované na parenterálne podávanie jednorázovou injekciou alebo kontinuálnou infúziou a môžu byť obsiahnuté v jednotkovej dávke v ampulách alebo v zásobníkoch obsahujúcich viac dávok s pridanou ochrannou látkou, prostriedky môžu byť vo forme suspenzií, roztokov alebo emulzií v olejových alebo vodných vehikulách a môžu obsahovať formulačné činidlá ako suspendujúce, stabilizačné a/alebo dispergačné činidlá. Alternatívne môže byť účinná zložka vo forme prášku na rekonštitúciu s vhodným vehikulom, napríklad sterilnou apyrogennou vodou, pred použitím.

-11 Zlúčeniny všeobecného vzorca I môžu byť tiež formulované ako čapíky, t.j. môžu obsahovať bežné čapíkové základy, ako je kakaové maslo a ďalšie glyceridy.

Navrhovaná dávka zlúčenín podľa vynálezu na podávanie človekovi (telesnej hmotnosti približne 70 kg) je 1 mg až 2 g, výhodne 1 mg až 100 mg účinnej zložky na jednotkovú dávku, ktorá môže byť podávaná napríklad raz až štyrikrát za deň. Bude zrejmé, že môžu by uskutočňované rutinné variácie dávkovania v závislosti na veku a stave pacienta. Dávkovanie bude tiež závisieť na spôsobe podávania.

V ešte inom uskutočnení vynález poskytuje použitie zlúčeniny všeobecného vzorca I alebo jej farmaceutický prijateľnej soli alebo solvátu na výrobu farmaceutického prostriedku na liečenie človeka alebo zvieraťa trpiacich stavom, pri ktorom je výhodné zníženie koncentrácie voľných mastných kyselín v plazme alebo zníženie tepovej frekvencie a vodivosti, alebo ak pacient trpí ischemickým ochorením srdca alebo je citlivý na toto ochorenie, ochorením periférnych ciev (PVD) alebo mŕtvicou, alebo ak pacient trpí ochorením CNS alebo apnoickou poruchou v spánku alebo bolesťou.

Zlúčeniny všeobecného vzorca I a ich fyziologicky prijateľné soli alebo solváty môžu byť pripravené ďalej opísanými spôsobmi, pričom tieto spôsoby tvoria ďalšie uskutočnenie vynálezu. V nasledujúcom opise majú skupiny R¹, R² a R³význam určený pre vzorec I, pokiaľ nie je uvedené inak.

Podľa prvého uskutočnenia všeobecného spôsobu A môže byť zlúčenina všeobecného vzorca I pripravená reakciou zlúčeniny všeobecného vzorca II

(II)

ΡΌ

OP' kde L znamená odštiepiteľnú skupinu ako je atóm halogénu (napríklad atóm chlóru) a skupiny P¹ a P² znamenajú atóm vodíka alebo vhodnú ochrannú skupinu

-12(napríklad acetyl) so zlúčeninou všeobecného vzorca R¹NH₂ alebo jej soľou za bázických podmienok.

Zlúčeniny všeobecného vzorca II môžu byť použité na výrobu zlúčenín všeobecného vzorca I priamo reakciou so skupinou R¹NH₂ buď v neprítomnosti alebo prítomnosti rozpúšťadla ako je alkohol (napríklad nižší alkohol ako je izopropanol, terc-butanol alebo 3-pentanol), éter (napríklad tetrahydrofurán alebo dioxán) substituovaný amid (napríklad dimetylformamid), halogenovaný uhľovodík (napríklad chloroform) alebo acetonitril, výhodne pri zvýšenej teplote (napríklad až do teploty varu rozpúšťadla pod spätným chladičom) v prítomnosti vhodnej látky odstraňujúcej kyselinu, napríklad anorganických báz ako je uhličitan sodný alebo draselný alebo organických báz ako je trietylamín, diizopropyletylamín alebo pyridín.

Pred touto reakciou môže predchádzať alebo po nej nasledovať v prípade potreby odstránenie ochranných skupín P¹ a P² in situ. Napríklad ak skupiny P¹ a P²znamenajú acetyl, môže sa odstránenie uskutočniť amínom ako je amoniak alebo terc-butylamín v rozpúšťadle ako je metanol pri vhodnej teplote.

Zlúčeniny všeobecného vzorca II môžu byť vyrobené reakciou zlúčeniny vzorca III

RK.Ox.·.⁰?³

T T (D p'o op kde P³ znamená vhodnú ochrannú skupinu, napríklad C^alkyl alebo acetyl a skupiny P¹, P² a R³ sú určené vyššie, so zlúčeninou všeobecného vzorca IV

kde L a R² sú určené vyššie.

-13Reakcia sa pohodlne uskutočňuje vo vhodnom rozpúšťadle, ako je acetonitríl v prítomnosti silylačného činidla ako je trimetylsilyltrifluórmetánsulfonát a bázy ako je diazabicyklo[5.4.0]undek-7-én (DBU). Alternatívne je možné zlúčeninu všeobecného vzorca IV najskôr silylovať vhodným silylačným činidlom ako je hexametyldisilazid s následnou reakciou silylovaného medziproduktu so zlúčeninou všeobecného vzorca III a vhodnou Lewisovou kyselinou, napríklad trimetylsilyltrifluórmetánsulfonátom vo vhodnom rozpúšťadle ako je acetonitríl. Zlúčeniny všeobecného vzorca IV sú buď v danej oblasti techniky známe alebo môžu byť pripravené zo známych zlúčenín použitím analogických metód ako sú metódy používané na výrobu známych zlúčenín vzorca IV.

Zlúčeniny všeobecného vzorca III môžu byť vyrobené z alternatívnych chránených zlúčenín náhradou alternatívnych ochranných skupín skupinami P a P², napríklad ak P¹ a P² znamenajú acetyl, zlúčeniny všeobecného vzorca III môžu byť vyrobené zo zlúčenín vzorca V, kde P⁴ a P⁵ znamenajú C^alkyl a P³ je určené vyššie odstránením alkylidénovej ochrannej skupiny katalyzovaním kyselinou ako je napríklad chlorovodík v metanole a následnou acyláciou in situ napríklad acetanhydridom v prítomnosti bázy ako je pyridin v rozpúšťadle ako je dichlórmetán.

(V)

Zlúčeniny všeobecného vzorca V sú známe zlúčeniny alebo môžu byť pripravené spôsobmi analogickými so spôsobmi používanými v danej oblasti techniky na výrobu známych zlúčenín všeobecného vzorca V. Je zrejmé, že acetylová skupina v akejkoľvek z vyššie uvedených zlúčenín môže byť nahradená akoukoľvek vhodnou ochrannou skupinou, napríklad inými estermi.

-14Analogickými spôsobmi môžu byť tiež vyrobené zlúčeniny všeobecného vzorca I alebo II zo zlúčeniny, kde alkylidénové skupiny definované skupinami P⁴ a P⁵ nahradia skupiny P¹ a P². Táto reakcia predstav uje zámenu jednej ochrannej skupiny za inú a uvedené reakcie budú odborníkom v danej oblasti techniky zrejmé.

Podľa spôsobu B je možné zlúčeniny všeobecného vzorca II vyrobiť zo 6chlórpurínribozidu vzorca VI, ktorý je komerčne dostupný alebo sa vyrobí z inozínu.

(VI)

Prvý stupeň tohto spôsobu spočíva v ochrane 2',3'-hydroxylových skupín za vytvorenia zlúčenín všeobecného vzorca VII

(VII) kde P⁴ a P⁵ sú určené vyššie. Tam, kde sú 2',3'-hydroxylové skupiny chránené izopropylidénovou skupinou (P⁴ a P⁵ znamenajú metyl), spôsob sa môže uskutočňovať použitím acetónu a PTSA (kyselina para-toluénsulfónová) alebo inými štandardnými spôsobmi použitím dimetoxypropánu, čo je spôsob známy odborníkom v danej oblasti techniky.

Zlúčenina všeobecného vzorca VII sa potom fluoruje vjedninom kroku použitím TsF (para-toluénsulfonylfluorid) a TBAF (tetra-n-butylamóniumfluorid) v THF (tetrahydrofurán). Takto sa vytvorí zlúčenina všeobecného vzorca VIII.

-15(VIII)

Odborníkom v danej oblasti techniky bude zrejmé, že fluóralkylový substituent v polohe R³ môže byť v tomto stupni modifikovaný. Vo vhodnom stupni môže byť tiež zavedený substituent R².

Nakoniec sa zlúčenina všeobecného vzorca VIII zbaví ochranných skupín za štandardných podmienok, napríklad kyslou živicou Dowex a chlórová skupina sa nahradí R¹NH₂ ako je opísané vyššie, za vytvorenia zlúčeniny všeobecného vzorca ľ

Podľa ďalšieho spôsobu C môžu byť zlúčeniny všeobecného vzorca I pripravené použitím purín-pyrimidín transferázového enzymatického systému. To je schematicky znázornené ďalej.

Schéma ci

6-chlórpurín r¹nh₂

IPA/Hunigsova báza

Krok 1

HN

uridín uracil

-16Schéma - pokračovanie

TsF/TBAF THF

Krok 4

R¹

živica Dowex

Krok 5 - odstránenie ochranných skupín

Zlúčenina všeobecného vzorca (I)

Tento enzymatický systém v kroku 2 premení purínový kruh na cukrový kruh uridínu. Ako je ukázané v reakčnej schéme, skupina R¹NH- už bola zavedená štandardnými spôsobmi, ale odborníkom v danej oblasti techniky bude zrejmé, že tento krok je možné uskutočniť kedykoľvek v priebehu sledu reakcií.

Po kroku 2 je cukrový kruh chránený skupinami P⁴ a P⁵ ako bolo opísané vyššie, napríklad P⁴ a P⁵ znamenajú metyl a následne sa uskutoční fluorácia 5'hydroxylovej skupiny. Zlúčenina sa potom zbaví ochranných skupín za získania zlúčeniny všeobecného vzorca I.

Táto reakčná schéma má demonštrovať použitie enzymatického systému. Odborník v danej oblasti techniky by bol schopný uskutočniť úpravu na výrobu zlúčenín všeobecného vzorca I s inými skupinami R a R³. Takýto štandardný chemický postup je odborníkom v danej oblasti techniky zrejmý.

Ďalší spôsob D zahrnuje premenu zlúčeniny všeobecného vzorca I na inú zlúčeninu všeobecného vzorca I modifikáciou skupiny R¹, R² alebo R³.

Niektoré zlúčeniny všeobecných vzorcov II, III a V sú nové medziprodukty a tvoria preto ďalšie uskutočnenie predkladaného vynálezu.

- 17Zlúčeniny vzorca R¹NH₂ sú buď známe látky alebo môžu byť vyrobené zo známych zlúčenín použitím bežných postupov s niektorými výnimkami uvedenými v experimentálnej časti ďalej.

Určité optické izoméry zlúčeniny všeobecného vzorca I môžu byť získané bežnými spôsobmi, napríklad syntézou z vhodného asymetrického východiskového materiálu použitím akéhokoľvek z opísaných spôsobov, alebo pokiaľ je to vhodné delením zmesi izomérov zlúčeniny všeobecného vzorca I bežnými spôsobmi, napríklad trakčnou kryštalizáciou alebo chromatograficky. Pri vyššie opísaných všeobecných spôsoboch môže byť získaná zlúčenina všeobecného vzorca I vo forme soli, výhodne vo forme farmaceutický prijateľnej soli. Ak je potrebné, tieto soli môžu byť premenené na zodpovedajúce voľné bázy bežnými spôsobmi.

Farmaceutický prijateľné adičné soli s kyselinami zlúčenín všeobecného vzorca I môžu byť pripravené reakciou zlúčeniny všeobecného vzorca I s vhodnou kyselinou v prítomnosti vhodného rozpúšťadla ako je acetonitril, acetón, chloroform, etylacetát alebo alkohol (napríklad metanol, etanol alebo izopropanol). Farmaceutický prijateľné adičné soli s bázami môžu byť získané analogickým spôsobom pôsobením vhodnej bázy na roztok zlúčeniny všeobecného vzorca I. Farmaceutický prijateľné soli môžu byť tiež pripravené z iných solí vrátane iných farmaceutický prijateľných solí zlúčenín všeobecného vzorca I použitím bežných spôsobov.

Vynález je ďalej ilustrovaný nasledujúcimi neobmedzujúcimi príkladmi a medziproduktami.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Štandardné podmienky HPLC sú nasledujúce:

Kolóna, podmienky a eluent pre štandardnú automatizovanú preparatívnu HPLC

Automatizovaná preparatívna kvapalinová chromatografia s vysokou účinnosťou (autoprep. HPLC) sa uskutočnila na kolóne Supelco” ABZ+5 pm 100 mm x 22 mm s elúciou zmesou rozpúšťadiel zloženou z nasledujúcich látok: i) 0,1% kyselina mravčia vo vode a ii) 0,05% kyselina mravčia v acetonitrile, kde eluent je

-18vyjadrený ako percento ii) v zmesi rozpúšťadiel pri prietoku 4 ml za minútu. Pokiaľ nie je uvedené inak, eluent sa použil ako gradient 0 až 95 % zložky ii) v priebehu 20 minút

Systém LC/MS

Použili sa dva alternatívne systémy pre kvapalinovú chromatografiu a hmotnostnú spektroskopiu (LC/MS).

Systém A

Tento systém používal kolónu ABZ+PLUS, 3,3 cm x 4,6 mm a elúciu rozpúšťadlami: A = 0,1% kyselina mravčia (objemové %) + 0,077% octan amónny vo vode (hmotn./obj.); a B = 95:5 acetonitrikvoda + 0,05% kyselina mravčia (objemové %) s prietokom 1 ml za minútu. Použil sa nasledujúci protokol: 100 % A 0,7 minút; A + B zmes, profil gradientu 0 až 100 % B v priebehu 3,5 minúty; zdržanie na 100 % B 3,5 minúty; návrat na 100 % A v priebehu 0,3 minút.

Systém B

Tento systém používal kolónu ABZ+PLUS, 3,3 cm x 2,0 mm selúciou rozpúšťadlami: A = 0,1% kyselina mravčia (objemové %) + 0,077% octan amónny (hmotn./obj.) vo vode; a B = 95:5 acetonitrikvoda + 0,05% kyselina mravčia (objemové %) s prietokom 0,8 ml za minútu. Použil sa nasledujúci protokol gradientu: zmesi A+B, profil gradientu 0 až 100 % B 0,7 v priebehu 3,5 minúty; zdržanie na 100 % B 1,5 minúty; návrat na 100 % A v priebehu 0,5 minúty.

Oba systémy používali prístroje typu micromass „platform“ spectrometer v móde elektrorozprašovacej ionizácie, prepínanie kladných a záporných iónov, rozmedzie hmotnosti 80 až 1000 jednotiek atómovej hmotnosti.

Systém HPLC

Analytický systém HPLC používal kolónu lnertsil^R ODS2 150 mm x 4,6 mm selúciou rozpúšťadlami: A = 0,1% kyselina fosforečná (objemové %) a B = 95:5 acetonitrikvoda + 0,1% kyselina fosforečná (objemové %). Bol použitý nasledujúci

-19protokol pre gradient pri prietoku 1,0 ml/minútu: 100 % A 2 minúty; zmesi A+B, profil gradientu 0 až 100 % B v priebehu 40 minút; zdržanie pri 100 % B 10 minút.

Blesková chromatografia sa uskutočnila buď na silikagéli Merck (Merck 9385) alebo na predplnených silikagélových patrónach (Biotage).

Medziprodukt 1 β-Anomér: 4/?-acetoxy-2S-fluórmetyl-5R-metoxytetrahydrofurán-3S-yl-ester kyseliny octovej β-Anomér: 4/?-acetoxy-2S-fluórmetyl-5S-metoxytetrahydrofurán-3S-yl-ester kyseliny octovej (3aS,4S,6R,6a/?)-4-Fluórmetyl-6-metoxy-2,2-dimetyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol (Sharma, Moheshwar; Li, Yi, X; Ledvina, Miroslav; Bobek, Miroslav, Nucleosides Nucleotides (1995), 14 (9 & 10), 1831 - 52) (4,0 g) sa zahrieval pod spätným chladičom skoncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou (0,8 ml) vmetanole (140 ml) 1,5 hodiny. Roztok sa odparil, pridalo sa väčšie množstvo metanolu (120 ml) a zahrievanie pod spätným chladičom pokračovalo cez noc (16 hodín). Rozpúšťadlo sa znova odparilo vo vákuu, potom sa pridal čerstvý metanol (120 ml) a zahrievanie pod spätným chladičom pokračovalo 15 hodín. Rozpúšťadlo sa odparilo vo vákuu a zvyšok sa azeotropicky destiloval s metanolom (50 ml) za poskytnutia surového diolového medziproduktu ako bezfarebného oleja (3,04 g). Surový diol sa rozpustil v suchom dichlórmetáner (80 ml) a zmiešal sa pyridínom (6,3 ml), acetanhydridom (5,5 ml, 5,85 mmol) a 4-dimetylaminopyridinom (100 ml). Zmes sa miešala pri teplote miestnosti pod dusíkom 16 hodín a rozpúšťadlo sa odparilo vo vákuu za získania svetložltého oleja (4,8 g). Tento olej sa rozdelil medzi dichlórmetán a 8% vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného. Organické vrstvy sa premyli roztokom soli, sušili sa MgSO₄ a odparili vo vákuu za získania svetložltého oleja (4,34 g), čistenie bleskovou chromatografiou na silikagéli (Biotage), elúcia zmesou etylacetát:cyklohexán 25:75 a 40:60 poskytli v nadpise uvedenú zlúčeninu (anoméry α 3β).

-20β-anomér: bezfarebný olej (2,2 g)

TLC SiO₂ (etylacetát:cyklohexán 1:2) Rf = 0,4 α-anomér: bezfarebný olej (0,945 g)

TLC SiO₂ (etylacetát:cyklohexán 1:2) Rf = 0,2.

Medziprodukt 2 4S-Acetoxy-2R-(6-chlórpurín-9-yl)-5S-fluórmetyltetrahydrofurán-3/^:?-yl-ester kyseliny octovej

Suspenzia 6-chlórpurínu (5,53 g) v hexametyldisilazáne (75 ml) a suchom toluéne (75 ml) sa zahrievala pod spätným chladičom v prúde dusíka 2 hodiny. Po ochladení sa rozpúšťadla odparili vo vákuu a zvyšok sa odparil spoločne s toluénom (50 ml). Takto získaný silylovaný purín sa rozpustil v suchom acetonitrile (75 ml) a pridal sa 4R-acetoxy-2S-fluórmetyl-5R-metoxytetrahydrofurán-3S-yl-ester kyseliny octovej (3,03 g) a potom trimetylsilyltrifluórmetánsulfonát (5,0 ml). Roztok sa zahrieval na 90 °C 2 hodiny, potom sa ochladil, vlial do 8% vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného (200 ml). Zmes sa extrahovala etylacetátom a extrakty sa sušili Na₂SO₄ a potom sa odparili vo vákuu. Ďalší surový produkt sa získal zo 4R-acetoxy-2S-fluórmetyl-5R-metoxytetrahydrofurán-3S-yl-ester kyseliny octovej (5,56 g) a 6-chlórpurínu (5,53 g) ako bolo opísané vyššie. Surové produkty sa spojili a čistili bleskovou chromatografiou na silikagéli (Merck 9385) s elúciou éterom za získania v nadpise uvedenej zlúčeniny ako bielej tuhej látky (9,17 g).

TLC SiO₂ (éter) Rf = 0,2.

Medziprodukt 3 4S-Acetoxy-5S-fluórmetyl-2ŕ?-[6-(tetrahydrofurán-4-ylamino)purín-9-yl]tetrahydrofurán-3/?-yl-ester kyseliny octovej

Roztok 4S-acetoxy-2R-(6-chlórpurín-9-yl)-5S-fluórmetyltetrahydrofurán-3R-ylesteru kyseliny octovej (3,03 g) v izopropanole (120 ml) sa zmiešal s diizopropyl

-21 etylaminom (8,4 ml) a hydrochloridom 4-aminotetrahydropyránu (Johnston, Thomas P.; McCaler, george S.; Opliger, Pamela S.; Laster, W. Russell; Montgomery, John A. Kettering-Meyer Lab, J. Med. Chem. (1971), 14(7), 600 - 14). (3,26 g) a zmes sa zahrievala pod spätným chladičom v atmosfére dusíka 8 hodín. Roztok sa ochladil a rozpúšťadlo sa odparilo vo vákuu. Zvyšok sa spracoval 8% hydrogenuhličitanom sodným (150 ml) a extrahoval sa etylacetátom. Extrakty sa sušili Na₂SO₄ a odparili vo vákuu za poskytnutia v nadpise uvedenej zlúčeniny ako peny (3,67 g).

LC/MS (systém A): R_t = 3,81 min.

Medziprodukt 4 (medzinárodná prihláška PCT WO 9507921 A1 950323) 4S-Acetoxy-2/?-(2,6-dichlórpurín-9-yl)-5S-fluórmetyltetrahydrofurán-3R-yl-ester kyseliny octovej

2,6-Dichlórpurín (6,1 g) sa zahrieval s hexametyldisilazánom (112 ml) pri 130 °C za miešania v atmosfére dusíka 2 hodiny. Zmes sa odparila vo vákuu za poskytnutia bielej tuhej látky, ktorá sa azeotropicky destilovala so suchým toluénom (80 ml). Zvyšok sa zmiešal s roztokom 4R-acetoxy-2S-fluórmetyl-5/?-metoxytetrahydrofurán-3S-yl-esteru kyseliny octovej (β-anomér medziproduktu 1) (2,5 g) v suchom acetonitrile (100 ml) a potom s trimetylsilyltrifluórmetánsulfonátom (6,63 ml) a zmes sa zahrievala pod spätným chladičom 2 hodiny. Zmes sa rozdelila medzi nasýtený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného a dichlórmetán a organické vrstvy sa premyli roztokom soli, sušili sa nad MgSO₄ a odparili vo vákuu za poskytnutia hnedej gumy (4,6 g). Čistenie bleskovou chromatografiou na silikagéli (Merck 9385) selúciou zmesou etylacetát:cyklohexán 40:60 poskytlo v nadpise uvedenú zlúčeninu ako bielu penu (2,67 g, 64 %).

TLC SiO₂ (etylacetát:cyklohexán 2:1) R_f = 0,55.

Medziprodukt 5 4S-Acetoxy-2/?-(6-chlór-2-metylpurín-9-yl)-5S-fluórmetyltetrahydrofurán-3/?-yl-ester kyseliny octovej

-226-Chlór-2-metylpurín (Bourguignon, Jean-Jacques; Desaubry, Laurent; Raboisson, Pierre; Wermuth, Camille-Geroges; Lugnier, Claire, Bourguignon, JeanJacques; Desaubry, Laurent; Raboisson, Pierre; Wermuth, Camille Geroges; Lugnier, Claire. Laboratoire de Pharmacochimie Moleculaire, Centre de Neurochimie, Strasbourg, 67084, Fr. J. Med. Chem. (1997), 40(12), 1768 - 1770) (202 mg) sa zahrieval pri 80 °C s hexametyldisilazánom (2 ml) a suchým toluénom (3 ml) 24 hodín. Potom sa pridal suchý toluén (5 ml), rozpúšťadlo sa odparilo vo vákuu a zvyšok sa azeotropicky destiloval s ďalším suchým toluénom (5 ml). K surovému silylovanému purínu sa pridal roztok 4R-acetoxy-2S-fluórmetyl-5Rmetoxytetrahydrofurán-3S-yl-esteru kyseliny octovej (98 mg) v suchom acetonitrile (5 ml) a potom sa pridal trimetylsilyltrifluórmetánsulfonát (0,26 ml). Zmes sa zahrievala pod spätným chladičom 4 hodiny, ponechala sa ochladiť a rozdelila sa medzi nasýtený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (5 ml) a dichlórmetán (40 ml). Organická vrstva sa premyla vodou, sušila sa MgSO₄ a odparila sa vo vákuu za poskytnutia surového produktu. Čistenie bleskovou chromatografiou na silikagéli (Merck 9385) s elúciou zmesou cyklohexán:etylacetát (1:1) poskytlo v nadpise uvedenú zlúčeninu ako bielu tuhú látku (109 mg).

Hmotnostné spektrum m/z 387 (MH⁺).

Medziprodukt 6 4S-Acetoxy-5S-fluórmetyl-2/?-[2-metyl-6-(tetrahydropyrán-4-ylamino)purín-9-yl]tetrahydrofurán-3R-yl-ester kyseliny octovej

Roztok 4S-acetoxy-2R-(6-chlór-2-metylpurín-9-yl)-5S-fluórmetyltetrahydrofurán-3R-yl-esteru kyseliny octovej (108 mg), hydrochlorid 4-aminotetrahydropyránu (153 mg) a diizopropyletylamín (0,13 ml) v izopropanole (10 ml) sa zahrievali pri 80 °C 72 hodín. Rozpúšťadlo sa odparilo vo vákuu za poskytnutia hnedého polotuhého zvyšku. Čistenie bleskovou chromatografiou na silikagéli (Merck 9385) s elúciou zmesou etylacetát:cyklohexán 1:1, etylacetátom a zmesou etylacetát:etanol 10:1 poskytlo v nadpise uvedenú zlúčeninu (61 mg).

-23Hmotnostné spektrum m/z 452 (MH⁺).

Medziprodukt 7

4R,5-Diacetoxy-2-trifluórmetyltetrahydrofurán-3S-ylester kyseliny octovej t

’ (3a/?,6S,6aS)-2,2-Dimetyl-6-trifluórmetyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-ol * (Munier, Pascal; Picq, Dominique; Anker, Daniel; Lab. Chim. Org. Univ. Claude Bernard, Villeurbanne, 69622, Fr. tetrahedron Lett. (1993), 34(51), 8241 - 4) (1,07

g) sa rozpustil v zmesi 9:1 kyselina trifluóroctová:H₂O (15 ml) a roztok sa miešal pri 22 °C 4 hodiny. Roztok sa zakoncentroval vo vákuu a potom opakovane spoločne odparoval s toluénom za získania čírej bezfarebnej gumy. Táto guma sa rozpustila v suchom pyridíne (30 ml), pridal sa acetanhydrid (8,99 ml) a získaný roztok sa miešal pri 22 °C v atmosfére N₂ 3 dni.

Pyridín a nadbytočný acetanhydrid sa odparili vo vákuu a potom sa zvyšok opakovane odparoval spolu s toluénom za získania tmavohnedého oleja. Čistenie bleskovou chromatografiou na kolóne silikagélu (Merck 9385) s elúciou zmesou cyklohexán:etylacetát 1:1 poskytlo v nadpise uvedenú zlúčeninu ako svetložltú gumu (1,37 g).

TLC SiO₂ (etylacetát) R_f = 0,9.

Medziprodukt 8 * 4S-Acetoxy-2R-(2,6-dichlórpurín-9-yl)-5S-trifluórmetyltetrahydrofurán-3/?-yl-ester

I kyseliny octovej

4/?,5-Diacetoxy-2-trifluórmetyltetrahydrofurán-3S-ylester kyseliny octovej (1,09 g) sa rozpustil v bezvodom acetonitrile (5 ml) a pridal sa 2,6-dichlórpurín (0,788 g) a potom 1,8-diazabicyklo[5.4.0]undek-7-én (DBU) (0,676 ml) a trimetylsilyltrifluórmetánsulfonát (0,94 ml) (TMSOTf). Získaný roztok sa miešal pri 22 °C v atmosfére dusíka 16 hodín. Pridal sa ďalší 2,6-dichlórpurín (200 mg) a potom DBU (0,17 ml) a TMSOTf (0,24 ml) a zmes sa miešala pri 22 °C v atmosfére dusíka dni a potom sa zahrievala pod spätným chladičom 4 hodiny. Zmes sa ochladila a rozdelila medzi etylacetát a vodu. Vodná vrstva sa extrahovala etylacetátom a spojené organické extrakty sa sušili nad MgSO₄ a koncentrovali vo vákuu za poskytnutia hnedej gumy. Čistenie bleskovou chromatografiou na silikagéli (Merck 9385) s elúciou zmesou 1:1 cyklohexán:etylacetát poskytlo v nadpise uvedenú zlúčeninu ako svetložltú penu (1,30 g).

TLC SiO₂ (etylacetát) R_f = 0,6.

Medziprodukt 9 4S-Acetoxy-2/?-[2-chlór-6-(tetrahydropyrán-4-ylamino)purin-9-yl]-5S-trifluórmetyltetrahydrofurán-3/?-yl-ester kyseliny octovej

4S-Acetoxy-2ŕ?-(2₁6-dichlórpurín-9-yl)-5S-trifluórmetyltetrahydrofurán-3F?-ylester kyseliny octovej (177 mg) sa zahrieval pri 60 °C s hydrochloridom 4-aminotetrahydropyránu (110 mg) a diizopropyletylamínom (0,17 ml) v izopropanole (5 ml) 2 dni. Rozpúšťadlo sa odparilo vo vákuu a zvyšok sa čistil bleskovou chromatografiou na silikagéli (Merck 9385) s elúciou zmesou etylacetátcyklohexán 2:1, za poskytnutia v nadpise uvedenej zlúčeniny ako bielej peny (0,146 g). Hmotnostné spektrum m/z 508 (MH⁺).

Medziprodukt 10 (3aS,4S,6R,6aR)-4-(1,1 -Difluóretyl)-6-metoxy-2,2-dimetyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol

Roztok 1 -(6/?-metoxy-2,2-dimetyltetrahydro-(3aS,6a/?)-furo[3,4-d][1,3]dioxol4S-yl)etanónu (Hampton, Alexander; Perini, Florion; Haeper, Peter J. Fox Chase Cent. Hampton, Alexander; Perini Florián; Harper, Peter J. Fox Chase Cent. Cancer Med. Sci., Inst. Cancer Res., Philadelphia, Pa, USA, Carbohydr. Res. (1974), 37(2), 359 - 67 (6,53 g) v dichlórmetáne (200 ml) sa zmiešal s trifluoridom dietylaminosírovým (10,4 ml) a zmes sa miešala pri 22 °C 5 dní. Roztok sa opatrne pridal do

-252Μ vodného roztoku uhličitanu sodného (200 ml), zmes sa opatrne pretrepala, organická fáza sa oddelila a vodná vrstva sa ďalej extrahovala dichlórmetánom. Spojené organické vrstvy sa sušili (Na₂SO₄) a odparili. Zvyšok sa čistil chromatografiou na silikagéli (Merck 9385) selúciou cyklohexánom a zmesou cyklohexán:éter (19:1 až 9:1) za poskytnutia v nadpise uvedenej zlúčeniny ako svetložltého oleja (4,72 g).

NMR (CDCI₃): 5,08 δ (1 H, brs, CH), 4,95 δ (1H,brd, CH), 4,59 δ (1H, d, CH), 4,21 δ (1H, dd, CH, JF-C-CH 6,22 Hz), 3,39 δ (3H, s, OMe), 1,68 δ (3H, t, JF-C-CH₃),1,5,

1,33 δ (2 x 3 (2 x 3H, 2xs, 2xCH₃).

Medziprodukt 11 (β-Anomér): rel-4R,5S-diacetoxy-2S-(1,1-difluóretyl)-tetrahydrofurán-3S-ylester kyseliny octovej (α-Anomér): rel-4R,5R-diacetoxy-2S-(1,1-difluóretyl)-tetrahydrofurán-3S-ylester kyseliny octovej (3aS,4S,6/?,6a/?)-4-(1,1 -Difluóretyl)-6-metoxy-2,2-dimetyltetrahydrofuro[3,4-

d][1,3]-dioxol (4,71 g) sa rozpustil v zmesi kyselina octová:voda (4:1, 125 ml) a zmes sa zahrievala pod spätným chladičom 18 hodín. Zvyšok sa dvakrát odparil spoločne s toluénom, rozpustil sa v dichlórmetáne (70 ml) a zmiešal sa pyridínom (8 ml), 4-dimetylaminopyridínom (30 mg) a acetanhydridom (7 ml). Tmavý roztok sa ponechal stáť 41 hodín. Rozpúšťadlá sa odstránili vo vákuu a zvyšok sa znova odparil dvakrát s toluénom. Zvyšok sa rozdelil medzi 8% vodný hydrogénuhličitan sodný a dichlórmetán. Organické extrakty sa sušili (Na₂SO₄) a odparili vo vákuu a zvyšok sa čistil bleskovou chromatografiou na silikagéli (Merck 9385) s elúciou zmesou cyklohexán:éter (1:1 až 2:3 až 1:4) za poskytnutia v nadpise uvedenej zlúčeniny (β-anomér): 2,51 g (41 %); a v nadpise uvedenej zlúčeniny (a-anomér): 2,13 g (35%).

(β-anomér): TLC SiO₂ (éter) R_f = 0,58. (α-anomér): TLC SiO₂ (éter) R_f = 0,51.

-26Medziprodukt 12

4S-Acetoxy-2R-(6-chlórpurin-9-yl)-5S-(1,1 -difluóretyl)tetrahydrofurán-3ŕ?-yl-ester kyseliny octovej

6-Chlórpurín (1,52 g), hexametyldisilazán (10 ml)a toluén (50 ml) sa zahrievali pod spätným chladičom 2 hodiny. Rozpúšťadlá sa odstránili vo vákuu a pridal sa rel-4/?,5/?-diacetoxy-2S-(1,1-difluóretyl)-tetrahydrofurán-3S-ylester kyseliny octovej (2,31 g) v suchom acetonitrile (50 ml) a potom 1,8-diazabicyklo[5.4.0]undek-7-én (2,0 ml, 13,4 mmol) a trimetylsilyltrifluórmetánsulfonát (4,8 ml). Zmes sa miešala pri 22 °C 17 hodín, potom sa zahrievala na 85 °C 90 minút. Zmes sa vliala do 8% vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a extrahovala sa etylacetátom. Organické extrakty sa sušili Na₂SO₄ a odparili sa vo vákuu a zvyšok sa čistil bleskovou chromatografiou na silikagéli (Merck 9385) selúciou zmesou cyklohexán:éter (1:1) a éterom za poskytnutia v nadpise uvedenej zlúčeniny ako svetložltej gumy (2,49 g).

TLC SiO₂ (éter) R_f = 0,30.

Medziprodukt 13

2-(2S-Hydroxy-(S)-cyklopentyl)-izoindol-1,3-dión

Hydrochlorid (1 S,2S)-2-aminocyklopentanolu (1,20 g) sa rozpustil v roztoku metoxidu sodného (497 mg) v metanole (10 ml), prefiltroval sa a odparil vo vákuu. Zvyšok sa rozpustil v toluéne (30 ml) a pridal sa ftalanhydrid (1,55 g) a zmes sa zahrievala pod spätným chladičom 24 hodín. Po ochladení sa pridal etylacetát a zmes sa prefiltrovala. Filtrát sa odparil vo vákuu a zvyšok sa čistil bleskovou chromatografiou na silikagéli (40 g) s elúciou zmesou cyklohexán:etylacetát (2:1) za poskytnutia v nadpise uvedenej zlúčeniny ako bezfarebnej tuhej látky (1,08 g). Hmotnostné spektrum m/z 232 (MH⁺).

-27Medziprodukt 14

2-(2S-Fluór-(S)-cyklopentyl)izoindol-1,3-dión

2-(2S-hydroxy-(S)-cyklopentyl)izoindol-1,3-dión (3,42 g) sa rozpustil v suchom dichlórmetáne (55 ml) a pridal sa trifluorid dietylaminosírový (3,43 ml) a roztok sa zahrieval pod spätným chladičom v atmosfére dusíka 72 hodín. Roztok sa opatrne vlial do 8% roztoku hydrogenuhličitanu sodného (100 ml) a organická fáza sa oddelila. Vodná fáza sa ďalej extrahovala dichlórmetánom a spojené organické vrstvy sa sušili MgSO₄ a odparili sa vo vákuu. Zvyšok sa čistil bleskovou chromatografiou na silikagéli (100 g) s elúciou zmesou cyklohexán:etylacetát (1:1) za poskytnutia v nadpise uvedenej zlúčeniny ako krémového prášku (1,25 g). Hmotnostné spektrum m/z 234 (MH⁺), 251 (MNH₄ ⁺).

Medziprodukt 15

Hydrochlorid (1 S,2S)-2-fluórcyklopentylamínu

2-(2S-Fluór-(S)-cyklopentyl)izoindol-1,3-dión (6,75 g), hydrát hydrazínu (1,55 ml) a etanol (200 ml) sa zmiešali s vodou (1,55 ml) a zahrievali sa pod spätným chladičom 4 hodiny. Zmes sa ochladila na 20 °DC, prefiltrovala sa a filtrát sa zmiešal s koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou v množstve dostatočnom na dosiahnutie pH 1. Roztok sa odparil vo vákuu a vložil sa do vody, prefiltroval sa a filtrát sa odparil vo vákuu. Zvyšok sa rekryštalizoval ( filtráciou za horúca) zo zmesi etylacetát:metanol (3:1) za poskytnutia v nadpise uvednej zlúčeniny ako belevaj tuhej látky (2,59 g).

NMR δ (DMSO) 8,3 (3H, brs, -NH₃ ⁺), 5,04 (1H, dm, CHF, J F-C-H, 52 Hz), 3,49 (1H, brdm, CH, J F-C-C-HL 20 Hz) a 2,2 -1,4 (6H, m, 3 x CH₂).

Príklad 1

5'-Deoxy-5'-fluór-/V-(tetrahydropyrán-4-yl)adenozín

-28Roztok 4S-acetoxy-5S-fluórmetyl-2R-[6-(tetrahydropyrán-4-ylamino)purín-9-yl]tetrahydrofurán-3R-yl-ester kyseliny octovej (3,67 g) v metanole (120 ml) sa zmiešal s roztokom uhličitanu draselného (3,50 g) vo vode (približne 15 ml) a zmes sa miešala pri 23 °C 17 hodín. Získaný roztok sa naniesol priamo na silikagél (20 g) a čistil sa bleskovou chromatografiou na silikagéli (Merck 9385) s elúciou zmesou dichlórmetán:metanol (10:1) za poskytnutia v nadpise uvedenej zlúčeniny ako bezfarebného oleja (2,16 g).

Rekryštalizácia z etanolu (75 ml) poskytla v nadpise uvedenú zlúčeninu ako bezfarebnú tuhú látku (1,48 g).

LC/MS (systém A): R, = 3,25 minút. Hmotnostné spektrum m/z 360 (MH⁺).

Príklad 2

5^,-Deoxy-5^,-fluór-2-metyl-A/-(tetrahydropyrán-4-yl)adenozín

4S-Acetoxy-5S-fluórmetyl-2/?-[2-metyl-6-(tetrahydropyrán-4-ylamino)-purín-9yl]tetrahydrofurán-3/?-yl-ester kyseliny octovej (56 mg) sa miešal s uhličitanom draselným (42 mg) v metanole (2 ml) a vode (2 ml) pri 22 °C 24 hodín. Rozpúšťadlo sa odparilo vo vákuu a zvyšok sa čistil bleskovou chromatografiou na silikagéli (Merck 9385) s elúciou zmesou dichlórmetán:etanol:880 amoniak (100:10:1) za poskytnutia v nadpise uvedenej zlúčeniny ako bielej tuhej látky (44 mg). TLC SiO₂ (CH₂CI₂:EtOH:880 amoniak, 100:10:1) Rf = 0,25. Hmotnostné spektrum m/z 368 (MH⁺).

Príklad 3

2-Chlór-5'-deoxy-5'-fluór-A/-(tetrahydropyrán-4-yl)adenozín

4S-Acetoxy-2/?-[2,6-dichlórpurín-9yl)-5S-fluórmetyltetrahydrofurán-3R-ylester kyseliny octovej (50 mg) sa zahrieval pri 55 až 58 °C s hydrochloridom 4aminotetrahydropyránu (33 mg) a diizopropyletylamínom (0,125 ml) v izopropanole

-29(5 ml) 21 hodín. Po ochladení na teplotu miestnosti sa pridal metanolový roztok amoniaku (4 ml) a zmes sa ponechala stáť pri teplote miestnosti (22 °C) cez noc (16 hodín). Zmes sa odparila dosucha vo vákuu za získania surového produktu, ktorý sa čistil extrakciou na tuhej fáze (5 g, patróna Varian Mega Bondelut, fáza s naviazaným aminopropylom, elúcia (i) CHCI₃, (ii) acetónom, za poskytnutia v nadpise uvedenej zlúčeniny (47 mg).

TLC SiO₂ (CH₂CI₂:MeOH, 9.Ί) Rf = 0,5. Hmotnostné spektrum m/z 388 (MH⁺).

Príklad 4 (2/?,3R,4S,5S)-2-[2-chlór-6-(tetrahydropyrán-4-ylamino)purín-9-yl]-5-trifluórmetyltetrahydrofurán-3,4-diol

4S-Acetoxy-2R-[2-chlór-6-(tetrahydrofurán-4-ylamino)purín-9-yl]-5S-trifluórmetyltetrahydrofurán-3/?-yl-ester kyseliny octovej (141 mg) sa miešal pri teplote miestnosti s uhličitanom draselným (115 mg) v zmesi 2:1 metanooľvoda (6 ml) 17 hodín. Rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu za získania žltej tuhej látky (0,274 g), čistenie bleskovou chromatografiou na silikagéli (Merck 9385) s elúciou etylacetátom a zmesou etylacetát:metanol 9:1 poskytlo v nadpise uvedenú zlúčeninu ako bielu tuhú látku (96 mg).

TLC SiO₂ (etylacetát) Rf = 0,25.

Hmotnostné spektrum m/z 424 (MH⁺).

Príklad 5 (2/?,3R,4S,5S)-2-[6-(Bicyklo[2.2.1]hept-2-ylamino)purín-9-yl]-5-(1,1-difluóretyl)tetrahydrofurán-3,4-diol

4S-Acetoxy-2ŕ?-(6-chlórpurín-9-yl)-5S-(1,1 -difluóretyl)tetrahydrofurán-3/?-ylester kyseliny octovej (70 mg) sa zahrieval pri 80 až 85 °C s hydrochloridom (±)endonorbornylamínu a /V,/V-diizopropyletylaminom (0,18 ml) v izopropanole (5 ml)

-3024 hodín. Rozpúšťadlo sa odstránilo na objem približne 1 ml, pridal sa metanolický amoniak (3 ml) a zmes sa ponechala stáť 17 hodín. Rozpúšťadlo sa odparilo a zvyšok sa čistil extrakciou na tuhej fáze (patróna Varian Bondelut, naviazaný aminopropyl) s elúciou chloroformom (pre elúciu nadbytočného amínu) a zmesou etylacetát:metanol 9:1 za poskytnutia v nadpise uvedenej zlúčeniny (0,025 g). Hmotnostné spektrum m/z 396 (MH⁺).

NMR (MeOD): 8,22 δ (1H, s, heterocyklický CH), 8,17 δ (1 H, s, heterocyklický CH), 6,08 δ (1 H, d, CH), 4,64 δ (1 H, t, CH), 4,49 δ (1 H, dd, CH), 4,40 δ (1 H, bbrs, CH), 4,15 δ (1 H, ddd, CH, JF-C-CH, 7,17 H₃), 2,57 δ (1 H, brt, CH), 2,3 - 2,08 δ (2H, brt+m, 2 x CH), 1,8 -1,5 δ (6H, t+3xCH), 1,5 -1,3 δ (3H, m, 3xCH), 1,04 δ (1H, ddd, CH).

Príklad 6

2-Chlór-5'-deoxy-5'-fluór-/\/-(2R-fluórcyklopent-(R)-yl)-adenozín

Vyrobený z medziproduktu 4 (ako príklad 3)

LC/MS (systém A): R_t = 4,01 min

Hmotnostné spektrum m/z 390 (MH⁺)

Príklad 7

2-Chlór-5'-deoxy-5'-fluór-/\/-(2S-fluórcyklopent-(S)-yl)-adenozín

Vyrobený z medziproduktu 4 (ako príklad 3)

LC/MS (systém A): R_t = 3,55 min

Hmotnostné spektrum m/z 388 (MH⁺)

Príklad 8 /V-(Endobicyklo[2.2.1]hept-2-yl)-2-chlór-5'-deoxy-5'-fluóradenozín

Vyrobený z medziproduktu 4 (ako príklad 3)

-31 LC/MS (systém A): R_t = 4,32 min

Hmotnostné spektrum m/z 398 (MH⁺)

Príklad 9

Etylester kyseliny 4-[2-chlór-9-(5S-fluórmetyl-3/?,4S-dihydroxytetrahydrofurán-2Ryl)-9H-purín-6-ylamino]piperidín-1-karboxylovej

Vyrobený z medziproduktu 4 (ako príklad 3)

LC/MS (systém A): R_t = 3,90

Hmotnostné spektrum m/z 459 (MH⁺)

Príklad 10

1-{4-[2-Chlór-9-(5S-fluórmetyl-3/?,4S-dihydroxytetrahydrofurán-2R-yl)-9H-purín-6ylamino]piperidín-1-yl}etanón

Vyrobený z medziproduktu 4 (ako príklad 1)

LC/MS (systém A): R_t = 3,67

Hmotnostné spektrum m/z 429 (MH⁺)

Príklad 11 /V-íEndobicykloIZ^.IJhept^-yO-S'-deoxy-S'-fluóradenozín

Vyrobený z medziproduktu 2 (ako príklad 1)

LC/MS (systém A): R_t = 4,05 min

Hmotnostné spektrum m/z 364 (MH⁺)

Príklad 12 /V-(Exobicyklo[2.2.1 ]hept-2-yl)-5'-deoxy-5'-fluóradenozín

Vyrobený z medziproduktu 2 (ako príklad 1)

-32Hmotnostné spektrum m/z 364 (ΜΙ-Γ)

HPLC R_t = 14,8 min

Príklad 13

5^,-Deoxy-5'-fluór-/V-(2S-hydroxycyklopent-(S)-yl)-adenozín

Vyrobený z medziproduktu 2 (ako príklad 1)

Hmotnostné spektrum m/z 354 (MH⁺)

HPLC R, = 10,3 min

Príklad 14

Etylester kyseliny 4-[9-(5S-fluórmetyl-3/?,4S-dihydroxytetrahydrofurán-2/?-yl)-9Hpurín-6-ylamino]piperidín-1-karboxylovej

Vyrobený z medziproduktu 2 (ako príklad 1)

Hmotnostné spektrum m/z 425 (MH⁺)

HPLC R_t= 14,0 min

Príklad 15

2-Chlór-5'-deoxy-A/-(1,1 -dioxohexahydro-1 .delta.6-tiopyrán-4-yl)-5'-fluóradenozín

Vyrobený z medziproduktu 4 (ako príklad 3)

LC/MS (systém A): R_t = 3,66 min

Hmotnostné spektrum m/z 436 (MH⁺)

Príklad 16

2-Chlór-5^,-deoxy-/V-(2,3-dihydroxypropyl)-5'-fluóradenozín

Vyrobený z medziproduktu 4 (ako príklad 3)

LC/MS (systém A): R_t = 3,07 min

-33Hmotnostné spektrum m/z 378 (MH⁺)

Príklad 17 (2/?,3/?,4S,5S)-2-[6-(Cyklopropylmetylamino)purín-9-yl]-5-(1,1-difluóretyl)-tetrahydrofurán-3,4-diol

Vyrobený z medziproduktu 12 (ako príklad 5)

LC/MS (systém A): R_t = 3,73 min

Hmotnostné spektrum m/z 356 (MH⁺)

Príklad 18

Metylamid kyseliny 2-[9-(5S-fluórmetyl-3/?,4S-dihydroxytetrahydrofurán-2/?-yl)-9Hpurín-6-ylamino]etánsulfónovej

Vyrobený z medziproduktu 2 (ako príklad 1)

Hmotnostné spektrum m/z 391 (MH⁺)

HPLC R, = 10,1 min

Príklad 19

5'-Deoxy-5^,-fluór-/V-(2,2-dimetylpropyl)adenozín

Vyrobený z medziproduktu 2 (ako príklad 1)

LC/MS (systém A): R, = 4,26 min

Hmotnostné spektrum m/z 340 (MH⁺)

Príklad 20 /V-terc-Butyl-5'-deoxy-5'-fluóradenozín

Vyrobený z medziproduktu 2 (ako príklad 1)

LC/MS (systém A): R_t = 4,29 min

-34Hmotnostné spektrum m/z 326 (MH⁺)

Príklad 21

5^,-Deoxy-5'-fluór-/V-(tetrahydrotiopyrán-4-yl)adenozín

Vyrobený z medziproduktu 2 (ako príklad 1)

LC/MS (systém A): R_t = 4,09 min

Hmotnostné spektrum m/z 370 (MH⁺)

Príklad 22

2-Chlór-5'-deoxy-5'-fluór-/\/-izobutyladenozín

Vyrobený z medziproduktu 4 (ako príklad 3)

LC/MS (systém A): R_t = 4,61 min

Hmotnostné spektrum m/z 360 (MH⁺)

Príklad 23

2-Chlór-5'-deoxy-5^,-fluór-A/-(1-metánsulfonylpiperidín-4-yl)adenozín

Vyrobený z medziproduktu 4 (ako príklad 3)

LC/MS (systém A): R_t = 4,22 min

Hmotnostné spektrum m/z 465 (MH⁺)

Príklad 24

2-Chlór-5'-deoxy-A/-(2,2-dimetylpropyl)-5'-fluóradenozín

Vyrobený z medziproduktu 4 (ako príklad 3)

LC/MS (systém A): R_t = 4,77 min

Hmotnostné spektrum m/z 374 (MH⁺)

-35Príklad 25 /V-(Exobicyklo[2.2.1]hept-2-yl)-2-chlór-5'-deoxy-5'-fluóradenozín

Vyrobený z medziproduktu 4 (ako príklad 3)

LC/MS (systém A): R_t = 4,92 min

Hmotnostné spektrum m/z 398 (MH⁺)

Príklad 26

Butylester kyseliny 4-[2-chlór-9-(5S-fluórmetyl-3/?,4S-dihydroxytetrahydrofurán-2/?yl)-9H-purín-6-ylamino]piperidín-1-karboxylovej

Vyrobený z medziproduktu 4 (ako príklad 3)

LC/MS (systém A): R_t = 4,84 min

Hmotnostné spektrum m/z 487 (MH⁺)

Príklad 27

5'-Deoxy-A/-(1.1 -dioxohexahydro-1 .delta.6-tiopyrán-4-yl)-5'-fluóradenozín

Vyrobený z medziproduktu 2 (ako príklad 1)

LC/MS (systém A): R, = 3,64 min

Hmotnostné spektrum m/z 402 (MH⁺)

Príklad 28 /V-(4-Chlór-2-fluórfenyl)-5^,-deoxy-5'-fluóradenozín

Vyrobený z medziproduktu 2 (ako príklad 1)

LC/MS (systém A): R_t = 4,03 min

Hmotnostné spektrum m/z 398 (MH⁺)

-36Príklad 29

Etylamid kyseliny 4-[2-chlór-9-(5S-fluórmetyl-3R,4S-dihydroxytetrahydrofurán-2Ryl)-9H-purín-6-ylamino]piperidín-1-karboxylovej

Vyrobený z medziproduktu 4 (ako príklad 3) LC/MS (systém A): R, = 4,04 min Hmotnostné spektrum m/z 458 (MH⁺)

Experimenty s reportérovým génom

Agonistická aktivita sa merala na bunkách vaječníkov čínskych škrečkov (CHO) obsahujúcich prvky reportérového génu CRE/SPAP/HYG (CRE = prvok odpovede na cyklický AMP; HYG = rezistencia na hygromycin; SPAP = sekrenovaná placentárna alkalická fosfatáza), ktoré po stimulácii cAMP produkovali SPAP. Použila sa bunková línia, ktorá bola naviac k vyššie uvedeným prvkom stabilne transfekovaná buď ľudským receptorom A1 pre adenozín alebo ľudským receptorom A3 pre adenozín. Bunky sa vysiali do 96-jamkových doštičiek v kultivačnom médiu a kultivovali sa pri 37 °C 1 hodinu. Na meranie účinnosti boli do príslušných jamiek pridávané látky s agonistickým účinkom v rozmedzí koncentrácií približne 1O'¹⁰ až 10 ^s M. Po 15 minútach sa maximálne hladiny cAMP stimulovali prídavkom maximálnej koncentrácie forskolínu. Všetky bunky sa potom inkubovali ďalších 5 hodín pri 37 °C a ochladili sa na teplotu miestnosti a potom sa pridal substrát pre fosfatázu (paranitrofenolfosfát, (pNPP), ktorý sa premení prostredníctvom SPAP na sfarbenú látku) a 96 jamkové doštičky sa odčítali na čítacom zariadení. Z týchto výsledkov sa môže vypočítať závislosť inhibície agonistu produkcie SPAP stimulovanej forskolínom na koncentrácii. Jedným z agonistov testovaných na každej 96-jamkovej doštičke bol štandardný neselektívny agonista, /V-etylkarboxamido-adenozín (NECA), pričom účinnosť všetkých testovaných zlúčenín s agonistickým účinkom sa vyjadruje vzhľadom na účinnosť štandardu NECA.

(ECR = pomer koncentrácie s rovnakou účinnosťou vzhľadom na NECA = 1)

Tabuľka 1

Biologické údaje: receptor Α1, A3, hodnoty ECR pre test reportérového génu

Príklad	A1	A3
1	1,9	>226,0
2	11,8	>226,0
3	2,41	>139,0
4	190,10
5	7,14	>257,0
6	0,91	>156,0
7	0,45	>91,0
8	0,21	>91,0
9	3,0	>129,0
10	66,80	>162,0
11	0,47	>152,0
12	0,54	>152,0
13	1,47	>152,0
14	1,68	>435,0
15	9,16	>435,0
16	7,29	>240,0
17	22,3	>353,0
18	0,71	>353,0
19	3,51	>353,0
20	8,17	>353,0
21	1,64	>353,0
22	3,3	>145,0
23	11,2	48,9
24	7,83	>233,0
25	0,78	>151,0
26	4,5	>233,0
27	6,2	>162,0
28	2,05	>170,0
29	51,6	>236,0

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1- {4-[2-chlór-9-(5S-fluórmetyl-3ŕ?,4S-dihydroxytetrahydrofurán-2R-yl)-9/7-purín-6ylamino]piperidín-1 -yl}etanón, /\/-(endo-bicyklo[2.2.1]hept-2-yl)-5^,-deoxy-5^,-fluóradenozín_I /V-(exo-bicyklo[2.2.1 ]hept-2-yl)-5'-deoxy-5'-fluóradenozín,

1) -(alk)_n-(C₃.₇)cykloalkyl vrátane premosteného cykloalkylu, pričom cykloalkylová skupina môže byť prípadne substituovaná jedným alebo viacerými substituentami zo skupiny OH, halogén, -(C^Jalkoxy, kde (alk) znamená C₁₃alkylén a n znamená 0 alebo 1,

1. Deriváty adenozínu všeobecného vzorca I r’

HÓ ÔH kde

R² znamená C^aalkyl, halogén alebo atóm vodíka;

R³ znamená fluorovanú alkylovú skupinu s priamym alebo rozvetveným reťazcom s 1 až 6 atómami uhlíka;

R¹ znamená skupinu zvolenú zo skupiny

2-chlór-5^,-deoxy-/V-(2,3-dihydroxypropyl)-5^,-fluóradenozín, (2f?_I3/?,4S,5S)-2-[6-(cyklopropylmetylamino)purín-9-yl]-(1,1-difluóretyl)tetrahydrofurán-3,4-diol, (2R_l3/?,4S,5S)-2-[6-(bicyklo[2.2.1]hept-2-ylamino)purín-9-yl]-(1,1-difluóretyl)tetrahydrofurán-3,4-diol, metylamid kyseliny 2-[9-(5S-fluórmetyl-3f?,4/?-dihydroxytetrahydrofurán-2ŕ?-yl)-9/-/purín-6-ylamino]etánsulfónovej,

2- chlór-5'-deoxy-/V-(1,1-dioxohexahydro-1.delta.6-tiopyrán-4-yl)-5^,-adenozín_l

2-chlór-5'-deoxy-5^,-fluór-/\/-(2S-hydroxycyklopent-(S)-yl)adenozín, /V-(endo-bicyklo[2.2.1]hept-2-yl)-2-chlór-5'-deoxy-5'-fluóradenozín, etylester kyseliny 4-[2-chlór-9-(5S-fluórmetyl-3R,4S-dihydroxytetrahydrofurán-2Ryl)-9H-purín-6-ylamino]piperidín-1-karboxylovej,

2-chlór-5'-deoxy-5'-fluór-/\/-(2/?-fluórcyklopent-(R)-yl)adenozín_I

2.6S65

2. Deriváty adenozínu podľa nároku 1, kde skupina R³ znamená C^fluóralkylovú skupinu.

2) alifatická heterocyklická skupina so 4 až 6 atómami v kruhu obsahujúca aspoň jeden heteroatóm zvolený z O, N a S, prípadne substituovaný jedným alebo viacerými substituentami zvolenými zo skupiny -(C₁.₃)alkyl, -CO₂-(C_M)alkyl, -COíC^alkyl), -S(=O)_n-(C₁.₃alkyl), -CONR^aR^b, kde skupiny R^a a R^b nezávisle znamenajú atóm vodíka alebo skupinu C^alkyl, alebo =0, kde pokiaľ je v heterocyklickom kruhu prítomný atóm síry, je tento atóm síry prípadne substituovaný skupinou (=0)_n, kde n je 1 alebo 2,

3. Deriváty adenozínu podľa nároku 2, kde skupina R³ znamená F₂C(Me)alebo FCH₂-.

4. Deriváty adenozínu podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 3, kde skupina R²znamená atóm vodíka, metyl alebo atóm halogénu.

4) fúzovaný bicyklický aromatický kruh kde B znamená 5- alebo 6-člennú heterocyklickú aromatickú skupinu obsahujúcu jeden alebo viacej atómov O, N alebo S, kde bicyklický kruh je naviazaný na atóm dusíka vzorca I cez atóm kruhu A a kruh B je prípadne substituovaný skupinou -CO₂-(C₁.₃alkyl),

5'-deoxy-5^,-fluór-/V-(2,2-dimetylpropyl)adenozínI /V-ŕerc-butyl-ô'-deoxy-S'-fluóradenozín, 5'-deoxy-5'-fluór-A/-(tetrahydrotiopyrán-4-yl)adenozín, 2-chlór-5^,-deoxy-5^,-fluór-/V-izobutyladenozínI 2-chlór-5^,-deoxy-5^,-fluór-A/-(1-metánsulfonylpiperidín-4-yl)adenozín, 2-chlór-5'-deoxy-/V-(2_I2-dimetylpropyl)-5^,-fluóradenozín,

A/-(exo-bicyklo[2.2.1]hept-2-yl)-2-chlór-5'-deoxy-5^,-fluóradenozín,

-43butylester kyseliny 4-[2-chlór-9-(5S-fluórmetyl-3ŕ?,4S-dihydroxytetrahydrofurán-2/?yl)-9H-purín-6-ylamino]piperidín-1-karboxylovej, etylamid kyseliny 5'-deoxy-/\/-[(1,1-dioxohexahydro-1 .delta.6-tiopyrán-4-yl)-5'-fluóradenozínpurín-6-ylamino]piperidín-1-karboxylovej, /V-(4-chlór-2-fluórfenyl)-5'-deoxy-5'-fluóradenozín, etylamid kyseliny 4-[2-chlór-9-(5S-fluórmetyl-3/?,4S-dihydroxytetrahydrofurán-2/?yl)-9H-purín-6-ylamino]piperidín-1-karboxylovej.

5'-deoxy-5'-fluór-/\/-(2S-hydroxycyklopent-(S)-yl)adenozín₁ etylester kyseliny 4-[9-(5S-fluórmetyl-3f?,4S-dihydroxytetrahydrofurán-2F?-yl)-9Hpurín-6-ylaminolpiperidín-l-karboxylovej,

5. Deriváty adenozínu podľa nároku 4, kde skupina R² znamená atóm vodíka alebo chlóru.

5) fenylová skupina prípadne substituovaná jedným alebo viacerými substituentami zvolenými zo skupiny: halogén, -SO₃H, -(alk)_nOH, -(alk)„kyano, -(O)_n-(C^)alkyl, prípadne substituovaný jedným alebo viacerými atómami halogénu, -(alk)_nnitro, -(O)_m-(alk)_n-CO₂R^c, -(alk)n-CONR^cR^d, -(alk)n-COR^c, -(alk)n-SOR^e, -(alk)n-SO₂NR^cR^d, -(alk)nOR^c, -(alk)n-(CO)_m-NHSO₂R^e, -(alk)n-NHCOR^c, -(alk)nNR^cR^d, kde m a n znamenajú 0 alebo 1 a alk znamená C^alkylénovú skupinu alebo C₂.₆alkenylovú skupinu,

6. Deriváty adenozínu podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 5, kde skupina R¹znamená skupinu (alk)_n-C₃.₆cykloalkyl, kde n je 0 alebo 1 a uvedený cykloalkyl je substituovaný aspoň jedným substituentom zvoleným z atómu halogénu, skupiny OH alebo je nesubstituovaný.

6) fenylová skupina substituovaná 5- alebo 6-člennou heterocyklickou aromatickou skupinou, kde heterocyklická aromatická skupina je prípadne substituovaná skupinou C^alkyl alebo NR^cR^d pričom skupiny R^c a R^d môžu každá nezávisle znamenať atóm vodíka alebo skupinu C^alkyl, alebo ak môže časť skupiny NR^cR^d, R^c a R^d spolu s atómom dusíka tvoriť 5- alebo 6-členný heterocyklický kruh prípadne obsahujúci iné heteroatómy, tento heterocyklický kruh môže byť prípadne substituovaný jednou alebo viacerými C₁.₃alkylovými skupinami,

R^e znamená C^alkyl, a ich soli a solváty, najmä ich fyziologicky prijateľné solváty a soli.

7. Deriváty adenozínu podľa nároku 6, kde n je 0.

8. Deriváty adenozínu podľa nároku 6 alebo 7, kde cykloalkylová skupina obsahuje päť atómov v kruhu a je monosubstituovaná skupinou OH alebo atómom fluóru.

9. Deriváty adenozínu podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 5, kde skupina R¹znamená substituovanú alebo nesubstituovanú alifatickú heterocyklickú skupinu, pričom substituent je zvolený zo skupiny -CO2-(CM)-alkyl, -CO-fC^Jalkyl, -S(=O)n(C1_3)alkyl. CONR^aR^b, kde R^a a R^b sú určené v nároku 1, a ak je v kruhu prítomný heteroatóm S, tento heteroatóm môže byť prípadne substituovaný skupinou (=O)n, kde n je 1 alebo 2.

10. Deriváty adenozínu podľa nároku 9, kde heterocyklický kruh nesubstituovaný alebo je substituovaný skupinou -COj-ÍC^Jalkyl, alebo ak je heteroatóm S, substituent (=O)_n je naviazaný na heterocyklický atóm síry.

11. Deriváty adenozínu podľa nároku 9, kde heteroatóm je atóm dusíka a substituent -CO₂(C_M)alkyl je naviazaný na atóme dusíka.

12. Deriváty adenozínu podľa ktoréhokoľvek z nárokov 9 až 11, kde heterocyklický kruh je šesťčlenný a výhodne obsahuje len jeden heteroatóm.

13. Deriváty adenozínu podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 5, kde skupina R¹ znamená substituovanú alebo nesubstituovanú priamu alebo rozvetvenú alkylovú skupinu s 1 až 6 atómami uhlíka, prípadne s aspoň jednou skupinou S(=O)_n a/alebo atómom dusíka substituovaným v reťazci, a n je 1 alebo 2.

14. Deriváty adenozínu podľa nároku 13, kde alkylová skupina je substituovaná aspoň jednou skupinou OH.

15. Deriváty adenozínu podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 5, kde skupina R¹ znamená fenylovú skupinu, ktorá je substituovaná jedným alebo viacerými substituentami zvolenými zo skupiny OH a halogénu.

16. Deriváty adenozínu podľa nároku 15, kde fenylová skupina je disubstituovaná v polohách 2, 4.

17. Deriváty adenozínu podľa nároku 16, kde oba substituenty sú atómy halogénu.

18. Deriváty adenozínu podľa nároku 17, kde substituent v polohe 2 je atóm fluóru a substituent v polohe 4 je atóm chlóru.

19. Deriváty adenozínu podľa nárokov 1, ktorými sú: 5^,-deoxy-5'-fluór-A/-(tetrahydropyrán-4-yl)adenozín, 5^,-deoxy-5^,-fluór-2-metyl-A/-(tetrahydropyrán-4-yl)adenozín, 2-chlór-5'-deoxy-5^,-fluór-/\/-(tetrahydropyrán-4-yl)adenozín_I

UM d

-42(2/?_I3F?,4S,5S)-2-[2-chlór-6-(tetrahydropyrán-4-ylamino)purín-9-yl]-5-trifluórmetyltetrahydrofurán-3,4-diol,

20. Deriváty adenozínu podľa nároku 1, ktoré majú malú alebo nemajú žiadnu aktivitu na adenozínový receptor A3.

21. Spôsob prípravy derivátu adenozínu podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 20, v y z n a č u j ú c i sa t ý m, že sa uskutoční reakcia zlúčeniny všeobecného vzorca II kde L znamená odštiepiteľnú skupinu, R¹, R² a R³ sú určené v nároku 1 a P¹ a P²znamenajú atóm vodíka alebo ochrannú skupinu, so zlúčeninou všeobecného vzorca R¹NH₂ alebo je soľou za bázických podmienok.

22. Farmaceutický prostriedok, v y z n a č u j ú c i sa t ý m, že obsahuje derivát adenozínu podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 20 spolu s farmaceutický prijateľným nosičom a/alebo pomocnou látkou.

23. Deriváty adenozinu podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 20 na použitie v lekárstve.

24. Deriváty adenozinu podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 20 na použitie na liečenie pacienta trpiaceho stavom, pri ktorom je výhodné zníženie koncentrácie voľných mastných kyselín v plazme alebo zníženie tepovej frekvencie alebo ak pacient trpí alebo je náchylný na ischemické ochorenie srdca, ochorenie periférnych ciev alebo mŕtvicu, alebo ak pacient trpí bolesťou, poruchami CNS alebo apnoickými poruchami v spánku.

25. Použitie derivátu adenozinu podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 20 na výrobu liečiva na liečenie pacienta trpiaceho stavom, pri ktorom je výhodné zníženie koncentrácie voľných mastných kyselín v plazme alebo zníženie tepovej frekvencie alebo ak pacient trpí alebo je náchylný na ischemické ochorenie srdca, ochorenie periférnych ciev alebo mŕtvicu, alebo ak pacient trpí bolesťou, poruchami CNS alebo apnoickými poruchami v spánku.