SK287304B6

SK287304B6 - Substituované amínové deriváty ako inhibítory GlyT-1, farmaceutické prostriedky s ich obsahom, ich použitie, spôsob ich prípravy, ich medziprodukty a spôsob ich prípravy

Info

Publication number: SK287304B6
Application number: SK1144-2003A
Authority: SK
Inventors: Ian Egle; William Delaney; Zhaoqing Wang; Richard Shumacher; Allen T. Hopper; Ashok Tehim; Shawn Maddaford
Original assignee: Nps Pharmaceuticals, Inc.
Priority date: 2001-02-16
Filing date: 2002-02-15
Publication date: 2010-06-07
Also published as: JP2004523548A; EP1368336A2; ES2266446T3; WO2002066456A2; US6667336B2; UA75114C2; CZ20032503A3; PT1368336E; EA200300900A1; DK1368336T3; HK1061025A1; EA006636B1; ATE327986T1; DE60211866D1; KR100900020B1; PL365024A1; IL157194A; ZA200307201B; SK11442003A3; HUP0303185A3

Abstract

Vynález poskytuje zlúčeniny vzorca (I) alebo ich farmaceuticky prijateľné soli na liečbu neurologických a neuropsychiatrických ochorení.

Description

Predkladaný vynález sa týka triedy substituovaných amínov, farmaceutických prípravkov obsahujúcich tieto zlúčeniny a spôsobov liečby neurologických a neuropsychiatrických ochorení s použitím takých zlúčenín.

Doterajší stav techniky

Synaptický prenos je komplexnou formou intercelulámej komunikácie, na ktorej sa podieľa komplikovaná zostava špecializovaných štruktúr na pre- a post-synaptických zakončeniach a susedných gliálnych bunkách (K.anner and Schuldiner, CRC Critical Reviews in Biochemistry, 22, 1987: 1032). Transportéry zachytávajú neurotransmitery zo synapsie, čím regulujú koncentrácie neurotransmiterov v synapsii, rovnako ako ich pretrvávanie v synapsii, čo dohromady ovplyvňuje intenzitu synaptického prenosu. Ďalej tým, že bránia šíreniu neurotransmiteru do susedných synapsii, udržujú transportéry spoľahlivosť synaptického prenosu. Konečne tým, že zachycujú uvoľnený neurotransmiter do presynaptického zakončenia umožňujú transportéry opätovné využitie neurotransmiteru.

Transport neurotransmiterov je závislý od transmembránového rozdielu v koncentrácii sodíka a napätia. V podmienkach aktivácie neurónu, napríklad počas záchvatu, môžu transportéry účinkovať opačne, t. j. môžu uvoľňovať neurotransmiter non-exocytotickým spôsobom nezávislým od vápnika (Attwell et al., Neurón, 11, 1993: 401 - 407). Farmakologická modulácia neurotransmiterov transportérmi tak umožňuje modifikáciu synaptickej aktivity, čo je použiteľné pri liečbe neurologických a psychiatrických porúch.

Aminokyselina glycín je hlavným neurotransmiterom v nervovom systéme cicavcov a má tak inhibičnú, ako excitačnú funkciu v synapsiách. Termínom nervový systém je mienený tak centrálny, ako periférny nervový systém. Tieto odlišné funkcie glycínu sú sprostredkované dvoma rôznymi typmi receptorov, ktoré sú každý asociovaný s inou triedou glycínových transportérov. Inhibičné účinky glycínu sú sprostredkované glycínovými receptormi, ktoré sú senzitívne na konvulzívny alkaloid strychnín, a preto sú označované ako „strychnín-senzitívne receptory“. Tieto receptory obsahujú vnútorný chloridový kanál, ktorý sa otvára po väzbe glycínu na receptor; zvýšením priepustnosti chlóru sa zvýši prah pre akčný potenciál. Strychnín-senzitívne glycínové receptory sa nachádzajú predovšetkým v mieche a mozgovom kmeni a farmakologické prípravky, ktoré zvyšujú aktiváciu takých receptorov, tak zvyšujú inhibičnú neurotransmisiu v týchto regiónoch.

Glycín tiež účinkuje v excitačnom prenose tým, že moduluje pôsobenie glutamátu, hlavného excitačného neurotransmiteru v centrálnom nervovom systéme (Johnson and Ascher, Náture, 325,1987: 529 - 531; Fletcher et al., Glycine Transmission, Otterson and Storm-Mathisen, ed., 1990: 193 - 219). Konkrétne, predpokladá sa, že glycín je obligátnym ko-agonistom na triede glutamátových receptorov označovaných ako N-metyl-D-aspartátové (NMDA) receptory. Aktivácia NMDA receptorov zvyšuje vedenie sodíka a vápnika, čo depolarizuje neurón a zvyšuje pravdepodobnosť vzniku akčného potenciálu.

NMDA receptory v hipokampe v mozgu majú významnú úlohu v modeli plasticity synapsii označovanom ako dlhodobá potencializácia (LTP), ktorá je súčasťou niektorých typov učení a pamätí (Hebb, D.O (1949) The Organization of Behavior, Wiley, NY; Bliss a Collingridge (1993) Náture 361: 31 - 39; Morris et al. (1986) Náture 319: 774 - 776). Zvýšená expresia vybraných podjednotiek NMDA receptora pri transgénnych myšiach vedie ku zvýšeným prúdom indukovaným NMDA-receptormi, vyššej LTP a lepšej výkonnosti v niektorých testoch učenia a pamäti (Táng et al. (1999) Náture 401: 63).

Naopak, znížená expresia vybraných podjednotiek NMDA receptorov pri transgénnych myšiach produkuje chovanie podobné ako v modeloch farmakologicky indukovanej schizofrénie, vrátane zosilnenej lokomócie, zosilneného stereotypného chovania a deficitu sociálnych/sexuálnych interakcií (Mohn et al. (1999) Celí 98: 427 - 436). Toto aberantné chovanie môže byť zlepšené s použitím antipsychotík haloperidolu a klozapínu.

NMDA receptory sú prítomné v celom mozgu a početné sú hlavne v mozgovej kôre a v hipokampe.

Molekulárne klonovanie odhalilo existenciu dvoch tried glycínových transportérov v cicavčom mozgu, ktoré sa označujú ako GlyT-1 a GlyT-2. GlyT-1 sa vyskytuje v celom mozgu a mieche a predpokladá sa, že jeho prítomnosť zodpovedá glutamatergnej dráhe a NMDA receptorom (Smith, et al., Neurón, 8, 1992: 927 -

- 935). Molekulové klonovanie ďalej ukázalo existenciu štyroch variantov GlyT-1, označovaných ako GlyT-la, GlyT-lb, GlyT-lc a GlyT-ld. Dva z týchto variantov (la a lb) sa nachádzajú pri hlodavcoch, a každý z nich má jedinečnú distribúciu v mozgu a v periférnych tkanivách (Borowsky et al., Neurón, 10, 1993: 851 -

- 863; Adams et al., J. Neuroscience, 15, 1995: 2524 - 2532). Tretí variant, lc, bol detekovaný iba v ľudských tkanivách (Kim, et al., Molecular Pharmacology, 45, 1994: 608 - 617). Štvrtý variant bol detekovaný v ľudských tkanivách (pozri US patent č. 6 008 015). Tieto varianty vznikajú v dôsledku odlišného zostrihu a využitia exónov a líšia sa vo svojich N-koncových regiónoch. GlyT-2 sa vyskytuje predovšetkým v mozgovom kmeni a mieche, a jeho distribúcia presne zodpovedá výskytu strychnín-senzitívnych glycínových receptorov (Liu et al., J. Biological Chemistry, 268, 1993: 22802 - 22808; Jurský a Nelson, J. Neurochemistry, 64, 1995:

1026 - 1033). Inou odlišnou vlastnosťou transportu glycínu sprostredkovaného GlyT-2 je to, že nie je inhibovaný sarkozínom, ako je tomu v prípade glycínoveho transportu sprostredkovaného GlyT-1. Tieto dáta sú v súlade s predstavou, že regulovaním synaptických koncentrácií glycínu GlyT-1 a GlyT-2 sa selektívne ovplyvňuje aktivita NMDA receptorov a strychnín-senzitívnych glycínových receptorov v príslušnom poradí.

Preto sa predpokladá, že zlúčeniny, ktoré inhibujú alebo aktivujú glycínové transportéry, budú ovplyvňovať funkcie receptora tým, že budú modifikovať koncentrácie glycínu v synapsiách a tým že budú terapeuticky použiteľné pri rôznych ochoreniach.

Napríklad zlúčeniny, ktoré inhibujú GlyT-1 sprostredkovaný transport glycínu, môžu zvyšovať koncentrácie glycínu na NMDA receptoroch, ktoré sú umiestnené - okrem ďalších miest - v prednom mozgu. Toto zvýšenie koncentrácií by mohlo zvýšiť aktivitu NMDA receptorov, čo by snáď mohlo zmierniť príznaky schizofrénie a zlepšiť kognitívne funkcie. Alternatívne, zlúčeniny, ktoré priamo interagujú s glycín- receptorovou zložkou NMDA receptora, môžu mať rovnaké alebo podobné účinky ako zvýšenie alebo zníženie dostupnosti extracelulámeho glycínu spôsobené inhibíciou alebo zosilnením GlyT-1 aktivity, v príslušnom poradí, pozri napríklad Pitkänen et al., Eur. J. Pharmacol., 253, 125 - 129 (1994); Thiels et al., Neuroscience, 46, 501 - 509 (1992); a Kretschmer a Schmidt, J. Neurosci., 16, 1561 - 1569(1996).

Bolo zistené, že mnoho zlúčenín, ktoré sú účinné vo väzbe a inhibícii GlyT-1 transportéru, má tiež toxické účinky, ak sú podané in vivo. Aj keď sú také zlúčeniny užitočným nástrojom na študovanie funkcie transportérov, ich použitie ako farmaceutických prostriedkov limituje toxicita.

Preto je žiaduce poskytnúť zlúčeniny, ktoré ovplyvňujú transport glycínu. Tiež je žiaduce poskytnúť zlúčeniny, ktoré ovplyvňujú transport glycínu, ale ktoré sú dostatočne netoxické na to, aby mohli byť použité vo farmaceutických prostriedkoch.

Podstata vynálezu

Predkladaný vynález sa týka zlúčenín, o ktorých bolo zistené, že sú účinné pri inhibícii GlyT-1 transportu a ktoré sú dostatočne netoxické na to, aby mohli byť použité v medicíne. Presnejšie, zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu majú neočakávaný profil toxicity v porovnaní s ostatnými známymi GlyT-1 inhibítormi. V jednom aspekte predkladaný vynález poskytuje zlúčeniny vzorca (I):

kde

Aľi je tienylová skupina, ktorou môže byť 2-tienyl alebo 3-tienyl a ktorá je voliteľne substituovaná až jedným substituentom vybraným zo skupiny zahrnujúcej metyl alebo etyl; a

Ar₂ je vybraný zo skupiny zahrnujúcej tiofén, furán a substituovaný fenyl, kde substituent na fenylovej skupine je vybraný zo skupiny zahrnujúcej C].₆alkyl, halogén, C₁.₆halogénalkyl, Ci.₆alkoxy, Ci.₆halogénalkoxy, kyano, alebo kde Arj je 2-metylfenyl, keď Ar₂ je 3-tienyl, a ich soli, solváty a hydráty.

V ďalšom aspekte predkladaný vynález poskytuje zlúčeninu: (Z)-N-(l-(4-(3-tienyl)fenyl)-l-(2-metylfenyl)prop-1 -én-3 -yl)sarkozín.

Bolo zistené, že zlúčeniny vzorca (I) a zlúčenina (Z)-N-(l-(4-(3-tienyl)fenyl)-l-(2-metylfenyl)prop-l-én-3-yl)-sarkozín inhibujú glycínový transport sprostredkovaný GlyT-1, alebo sú prekurzory (napríklad proliečivá) takých zlúčenín. Inhibítory GlyT-1 transportu sú použiteľné pri liečbe schizofrénie, rovnako ako iných ochorení CNS, ako sú kognitívne dysfunkcie, demencie (vrátane demencie pri Alzheimerovej chorobe), porúch pozornosti, depresie, celkových vývojových porúch, ako je autizmus, Rettova choroba, detská dezintegratívna porucha, Aspergerova choroba a celkovo inak nešpecifikované vývojové poruchy (napríklad atypický autizmus).

V ďalšom aspekte vynález poskytuje prostriedok obsahujúci zlúčeninu vzorca (I) alebo zlúčeninu (Z)-N-(l-(4-(3-tienyl)-fenyl)-l-(2-metylfenyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín a nosič.

V ďalšom aspekte vynález poskytuje farmaceutický prostriedok obsahujúci zlúčeninu vzorca (I) a farmaceutický prijateľný nosič. V ďalšom aspekte vynález poskytuje farmaceutický prostriedok obsahujúci zlúčeninu vzorca (1) v množstve účinnom na inhibíciu transportu glycínu a farmaceutický prijateľný nosič.

V ďalšom aspekte vynález poskytuje farmaceutický prostriedok obsahujúci zlúčeninu (Z)-N-( 1-(4-(3-tienyl)fenyl)-l-(2-metylfenyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín a farmaceutický prijateľný nosič. V ešte ďalšom aspekte vynález poskytuje farmaceutický prostriedok obsahujúci zlúčeninu (Z)-N-(l-(4-(3-tienyl)-fenyl)-l-(2-metylfenyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín v množstve účinnom na inhibíciu transportu glycínu a farmaceutický prijateľný nosič.

V inom aspekte vynález poskytuje prostriedky obsahujúce zlúčeniny vzorca (1) alebo zlúčeninu (Z)-N-(l-(4-(3-tienyl)fenyl)-l-(2-metylfenyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín v množstve vhodnom pre farmaceutické použitie na liečbu ochorení, pri ktorých je indikovaný inhibítor transportu glycínu. Výhodné sú prostriedky obsahujúce zlúčeniny použiteľné pri liečbe ochorení, pri ktorých je vhodná GlyT-1-sprostredkovaná inhibícia transportu glycínu, ako je napríklad schizofrénia alebo kognitívna dysfunkcia.

Zlúčeniny vzorca (I) alebo zlúčenina (Z)-N-(l-(4-(3-tienyl)fenyl)-l-(2-metylfenyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín môžu byť použité na liečbu pacientov s ochorením, pri ktorých je indikovaná inhibícia transportu glycínu, ktorá bola uvedená. Výhodnou indikáciou je schizofrénia. Zlúčeniny môžu byť použité tiež na výrobu lieku na liečbu pacientov s ochorením, pri ktorom je indikovaná inhibícia transportu glycínu.

Definícia

Termín „alkyl“ označuje uhľovodíkové radikály s priamym alebo rozvetveným reťazcom obsahujúce 1, 2, 3, 4, 5 alebo 6 atómov uhlíka a zahrnuje metyl, etyl a podobne.

Termín C,.₆ označuje alkylový radikál obsahujúci 1, 2, 3, 4, 5 alebo 6 atómov uhlíka.

Termín „alkoxy“ označuje alkylové skupiny zakončené oxy radikály s priamym alebo rozvetveným reťazcom obsahujúce 1, 2, 3, 4, 5 alebo 6 atómov uhlíka a zahrnuje metoxy, etoxy, terc-butoxy skupiny a podobne.

Termín „halogén“ označuje fluór, chlór, bróm a podobne.

Termín „halogénalkyl“ označuje alkylovú skupinu substituovanú jedným alebo viacerými atómami halogénu, ako je -CF₃.

Obdobne, termín „halogénalkoxy označuje alkoxy skupinu substituovanú jedným alebo viacerými atómami halogénu, ako je -OCF₃.

Výhodné uskutočnenia

Medzi výhodné uskutočnenia predkladaného vynálezu patria zlúčeniny vzorca (I), kde Ar, je vybraný zo skupiny zahrnujúcej voliteľne substituovaný 2-tiofén alebo 3-tiofén. Vo výhodnom uskutočnení predkladaného vynálezu je Aľ] 2-tiofén. Vo výhodnom uskutočnení predkladaného vynálezu je Ar_t 2-(3-alkyltiofén), výhodne 2-(3-metyltiofén). V inom výhodnom uskutočnení je Αη 3-tiofén. V ďalšom výhodnom uskutočnení je Ar, 3-(4-alkyltiofén), výhodne 3-(4-metyltiofén).

Vo výhodných uskutočneniach vynálezu je Ar₂ vybraný zo skupiny zahrnujúcej substituovaný fenyl, tiofén a furán. Vo výhodnejšom uskutočnení vynálezu je Ar₂ substituovaný fenyl, v ktorom sú substituenty v 3 alebo 4 pozícii, a kde sú substituenty vybrané z: C[.₆alkyl; halogén; C].₆halogénalkyl; C_b(,alkoxy; Ci_₆halogénalkoxy; a kyano. V inom výhodnom uskutočnení je fenylový substituent v 3 alebo 4 pozícii vybraný zo skupiny zahrnujúcej CF₃, Me, iPr, MeO, CN a CF₃O. Vo výhodnom uskutočnení je Ar₂ 3-metoxyfenyl. V inom výhodnom uskutočnení je Ar₂ 3-metylfenyl. V ešte inom výhodnom uskutočnení je Ar₂ 3-trifluórmetoxyfenyl. V ešte inom uskutočnení je Ar₂ 3-trifluórmetylfenyl. V ešte ďalšom výhodnom uskutočnení je Ar₂ 4-izopropylfenyl, a v ešte ďalšom výhodnom uskutočnení je Ar₂ 3-kyánfenyl.

Vo výhodnom uskutočnení je Ar₂ tiofén. Vo výhodnom uskutočnení vynálezu je Ar₂ 2-tiofén.

V ešte ďalšom výhodnom uskutočnení je Ar₂ 2-furán.

Medzi výhodné uskutočnenia vynálezu patria:

(Z)-N-( 1 -(4-(4-izopropylfenyl)fenyl)-1 -(3-tienyl)prop-1 -én-3-yl)sarkozín, (zlúčenina G(ij);

(Z)-N-( 1 -(4-(3-tienyl)fenyl)-1 -(3-tienyl)prop-1 -én-3-yl)sarkozín, (zlúčenina G(iij); (Z)-N-(l-(4-(2-tienyl)fenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín, (zlúčenina G(iiij); (Z)-N-(l-(4-(2-furyl)fenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín, (zlúčenina G(iv));

(Z)-N-( 1 -(4-(3 -metoxyfenyljfenylj-1 -(3 -tienyljprop-1 -én-3 -yljsarkozín, (zlúčenina G(v)); (Z)-N-(l-(4-(3-metylfenyl)fenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín, (zlúčenina G(vi));

(Z)-N-( 1 -(4-(3-(trifluórmetoxyjfenyljfenylj-1 -(3-tienyl)-prop-1 -én-3-yljsarkozín, (zlúčenina G(viij); (Z)-N-( 1-(4-(3-kyánfenyljfenylj-1 -(3-tienyljprop-1 -én-3-yljsarkozín, (zlúčenina G(viiij); (Z)-N-(l-(4-(3-tienyl)fenyl)-l-(2-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín, (zlúčenina G(ixj); (Z)-N-(l-(4-(3-tienyl)fenyl)-l-(3-(4-metyltienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín, (zlúčenina G(xj);

(Z)-N-( 1 -(4-(3-(trifluórmetyljfenyl)fenylj-1 -(3 -(4-metyltienyl))prop-1 -én-3-yl)sarkozín, (zlúčenina G(xij); (Z)-N-( 1 -(4-(3 -metoxyfenyljfenylj-1 -(3 -(4-metyltienyl j jprop-1 -én-3 -yljsarkozín, (zlúčenina G(xiij);

(Z)-N-( 1-(4-(3 -metylfenyl)fenyl)-1-(2-(3 -metyltienyl)jprop-1 -én-3 -yljsarkozín, (zlúčenina G(xiiij).

Najvýhodnejším uskutočnením predkladaného vynálezu je (Z)-N-(l-(4-(2-furyl)fenyl)4(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín, (zlúčenina G(ivj).

Iným výhodným uskutočnením predkladaného vynálezu je zlúčenina (Z)-N-(l-(4-(3-tienyl)fenyl-l-(2-metylfenyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín (zlúčenina G(xiv)).

V inom uskutočnení predkladaného vynálezu je zlúčenina vzorca (I) poskytnutá v označenej forme, napríklad v rádioaktívne označenej forme (napríklad označenej tým, že zlúčenina obsahuje vo svojej štruktúre ³H alebo ¹⁴C, alebo konjugáciou s ^l25I). Vo výhodnom aspekte predkladaného vynálezu môžu byť tiež zlúčeniny, ktoré sa prednostne viažu na GlyT-1, použité na identifikáciu ligandov GlyT-1 receptora, s použitím techník známych v odbore. Toto môže byť uskutočnené inkubovaním receptora alebo tkaniva za prítomnosti potenciálneho ligandu a potom inkubovaním vzniknutého prípravku s ekvimolámym množstvom rádioaktívne označenej zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu. Ligandy GlyT-1 receptora sa takto určia ako tie zlúčeniny, ktoré významne obsadzujú GlyT-1 miesto a bránia väzbe rádioaktívne označenej zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu. Alternatívne môžu byť potenciálne ligandy GlyT-1 receptora identifikované najprv inkubáciou rádioaktívne označenej formy zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu a potom inkubáciou vzniknutého prípravku za prítomnosti potenciálneho ligandu. Silnejšie ligandy GlyT-1 receptora budú, v ekvimolárnych koncentráciách, vytesňovať rádioaktívne označenú zlúčeninu podľa predkladaného vynálezu z väzby.

Adičné soli zlúčenín vzorca (I) s bázami sú najlepšie pripravené z farmaceutický prijateľných kyselín. Vynález tiež zahrnuje adičné soli s kyselinami, solváty a hydráty zlúčenín podľa predkladaného vynálezu.

Konverzia danej zlúčeniny na požadovanú soľ sa uskutoční s použitím štandardných techník, dobre známych odborníkom v odbore.

E(i-v)

(a): propargylalkohol, Pd(PPh₃)₄, Cul, Et₃N, t. m., cez noc; (b): Red-AÍ, THF, 0 °C, 1 hodina, potom EtOAc, I₂, -78 °C do t. m., cez noc; (c): NBS, PPh₃, CH₂C1₂,-4O °C, 1 hodina; (d): t-butylsarkozín, K₂CO₃, KI, MeCN, t. m., cez noc; (e): AriB(OH)₂, Pd(PPh₃)₄, 2M Na₂CO₃, DME, 90 °C, 4,5-hodiny; (f): Ar₂B(OH)₂, Pd(PPh₃)₄, 2M Na₂CO₃, DME, Δ, 3 hodiny; (g): kyselina mravčia, 40 °C, cez noc.

Zlúčeniny vzorca (1) môžu byť ľahko pripravené spôsobom uvedeným v schéme 1. Medziprodukt B sa pripraví paládiom katalyzovanou reakciou 4-brómjódbenzénu s propargylalkoholom. Zlúčenina B sa premení na jodid C reakciou s nátrium-bis(2-metoxyetoxy)alumíniumhydridom (Red-Al) a potom s jódom. Dvojstupňový proces skladajúci sa z konverzie alkoholu na bromid, po ktorej nasleduje nahradenie sarkozínom, vedie ku vzniku medziproduktu D. Medziprodukt B je hlavne užitočným medziproduktom, pretože umožňuje prípravu mnohých derivátov, v ktorých môže byť arylová skupina orientovaná s kompletnou stereochemickou kontrolou. Napríklad spoločný medziprodukt D reaguje s rôznymi boronátovými kyselinami za zisku zlúčeniny vzorca (E).

Produkty vzorca (E) sú tiež výhodnými chemickými medziproduktmi. Tieto zlúčeniny umožňujú prípravu rôznych zlúčenín so 4'-arylovými skupinami (Ar₂ skupiny). Produkty E reagujú s rôznymi borónovými kyselinami za zisku rôznych zlúčenín vzorca (F), z ktorých môžu byť s použitím kyseliny mravčej odstránené v poslednom stupni chrániace skupiny za zisku konečných zlúčenín typu G.

G(xii)

Zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu môžu byť podané orálne, sublinguálne, rektálne, nazálne, vaginálne, lokálne (vrátane použitia náplastí alebo iných prostriedkov na transdermálne podanie), pulmonálne v aerosóle, alebo parenterálne, vrátane intramuskulámeho, podkožného, intraperitoneálneho, intraarteriálneho, intravenózneho alebo intratekálneho podania. Podanie môže byť uskutočnené s použitím pumpy na periodické alebo kontinuálne podanie. Zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu môžu byť podané samostatne alebo s farmaceutický prijateľnými nosičmi alebo prísadami, v súlade so štandardnou farmaceutickou praxou. Na orálne podanie môžu byť zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu použité vo forme tabliet, kapsúl, pastiliek, žuvacích gúm, piluliek, práškov, sirupov, elixírov, vodných roztokov, suspenzií a podobne. V prípade tabliet patrí medzi použiteľné nosiče laktóza, nátrium-citrát a soli kyseliny fosforečnej. V tabletách sa obvykle použijú rôzne činidlá podporujúce rozpadavosť, ako je magnézium-stearát a mastenec. Na orálne podanie vo forme kapsúl sú použiteľnými riedidlami laktóza a polyetylénglykoly s vysokou molekulovou hmotnosťou. Pokiaľ je to vhodné, môžu byť pridané sladidlá a/alebo ochuťovacie látky. Na parenterálne podanie sa obvykle pripravia sterilné roztoky zlúčenín podľa predkladaného vynálezu a pH týchto roztokov sa upraví na vhodnú hodnotu a pufruje sa. Na intravenózne podanie musí byť kontrolovaná celková koncentrácia rozpustených látok, aby bol prípravok izotonický. Na očné podanie môžu byť masti alebo kvapky podané s použitím bežných prostriedkov, ako sú očné aplikátory alebo kvapkátka. Tiež prostriedky môžu obsahovať mukomimetiká, ako je kyselina hyalurónová, chondroitínsulfát, hydroxypropylmetylcelulóza alebo polyvinylalkohol, konzervačné činidlá, ako je kyselina sorbová, EDTA alebo benzylchrómium-chlorid, a obvyklé množstvá riedidiel a/alebo nosičov. Na pľúcne podanie sú riedidlá a/alebo nosiče vybrané tak, aby umožňovali tvorbu aerosólu.

Capíkové formy zlúčenín podľa predkladaného vynálezu sú použiteľné pre vaginálne, uretrálne a rektálne podanie. Tiež čapíky sú obvykle tvorené zo zmesi substancií, ktoré sú tuhé pri izbovej teplote, ale ktoré sa topia pri telesnej teplote. Medzi substancie používané na výrobu takých foriem patrí kakaový olej, glycerínovaná želatína, hydrogenované rastlinné oleje, zmesi polyetylénglykolov rôznej molekulovej hmotnosti a estery polyetylénglykolu a mastných kyselín. Pozri Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th Ed., Mack Publishing,

Easton, PA, 1980, str. 1530 - 1533, kde je uvedený ďalší opis čapíkových dávkových foriem. Analogické gély alebo krémy môžu byť použité na vaginálne, uretrálne a rektálne podanie.

Odborníkom v odbore bude známych mnoho vehikúl na podanie, vrátane napríklad prípravkov so spomaleným uvoľňovaním, lipozomálnych prípravkov a polymérových matríc.

Príklady farmaceutický prijateľných adičných solí s kyselinami na použitie v predkladanom vynáleze sú soli odvodené od anorganických kyselín, ako je kyselina chlorovodíková, bromovodíková, fosforečná, metafosforečná, dusičná a sírová, a od organických kyselín, ako sú kyselina vínna, octová, citrónová, jablčná, mliečna, fumarová, benzoová, glykolová, glukónová, jantárová, p-toluénsulfónová a arylsulfónová kyselina. Príklady farmaceutický prijateľných adičných solí s bázami na použitie v predkladanom vynáleze sú soli odvodené od netoxických kovov, ako je sodík alebo draslík, amóniové soli a organoamínové soli, ako sú trietylamínové soli. Odborníkom v odbore bude známych mnoho takých solí.

Lekár alebo iný odborník zdravotnej starostlivosti môže určiť vhodnú dávku a terapeutický režim podľa telesnej hmotnosti jedinca, jeho veku a zdravotného stavu. Dávka bude obvykle určená tak, aby sa dosiahli a udržovali sérové koncentrácie zlúčeniny podľa vynálezu medzi približne 0,01 pg/cm³ a približne 1 000 pg/cm³, výhodne medzi približne 0,1 pg/cm³ a približne 100 pg/cm³. Na parenterálne podanie je výhodnou dávkou dávka od približne 0,001 mg/kg do približne 10 mg/kg (alternatívne od približne 0,01 mg/kg do približne 10 mg/kg), výhodnejšie od približne 0,01 mg/kg do približne 1 mg/kg (od približne 0,1 mg/kg do približne 1 mg/kg). Na orálne podanie je výhodnou dávkou dávka od približne 0,001 mg/kg do približne 10 mg/kg (od približne 0,1 mg/kg do približne 10 mg/kg), výhodnejšie od približne 0,01 mg/kg do približne 1 mg/kg (od približne 0,1 mg/kg do približne 1 mg/kg). Na podanie vo forme čapíkov je výhodnou dávkou dávka od približne 0,1 mg/kg do približne 10 mg/kg, výhodnejšie od približne 0,1 mg/kg do približne 1 mg/kg.

Na použitie v testovaní na aktivitu v inhibícii transportu glycínu boli eukaryotické bunky, výhodne QT-6 odvodené od prepeličích fibroblastov, transfektované tak, aby exprimovali jeden zo štyroch známych variantov ľudského GlyT-1, konkrétne GlyT-la, GlyT-lb, GlyT-lc alebo GlyT-ld, alebo ľudský GlyT-2. Sekvencie týchto Glyt-1 transportérov sú opísané v Kim et al., Molec. Pharm. 45: 608 - 617, 1994, s výnimkou sekvencií kódujúcich N-koniec GlyT-la, ktorá je iba odvodená z príslušne potkanej sekvencie. Táto sekvencia kódujúca N-koncový proteín bola teraz potvrdená ako sekvencia súhlasiaca so sekvenciou navrhnutou Krmom a kol. Sekvencia GlyTld je opísaná v U. S. patente č. 6 008 015, ktorý je tu uvedený vo svojej úplnosti ako odkaz. Sekvencia GlyT-2 je opísaná v U. S. patente č. 5 919 653, ktorý je tu uvedený vo svojej úplnosti ako odkaz. Medzi vhodné expresné vektory patria pRc/CMV (Invitrogen), Zap Express Vector (Stratagene Cloning Systems, La Jolla, CA; ďalej Stratagene), pBk/CMV alebo pBk-RSV vektory (Stratagene), Bluescript II SK +/- fagemidove vektory (Stratagene), LacSwitch (Stratagene), pMAM a pMAM neo (Clontech) a ďalšie. Vhodný expresný vektor je schopný vykonať expresiu obsiahnutej GlyT DNA vo vhodnej hostiteľskej bunke, výhodne v necicavčej hostiteľskej bunke, ktorá môže byť eukaryotická, mykotická alebo prokaryotická. Medzi tiež výhodné hostiteľské bunky patria bunky z obojživelníkov, vtákov, húb, hmyzu a plazov.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príklad 1: l-(4-Brómfenyl)prop-l-ín-3-ol (medziprodukt B):

Do roztoku 4-brómjódbenzénu (10,0 g, 35,3 mmol) v trietylamíne (Et₃N, 100 ml) sa pridá propargylalkohol (2,7 ml, 2,57 g, 45,9 mmol), Cul (0,81 g, 4,24 mmol) a Pd(PPh))₄ (1,63 g, 1,41 mmol). Zmes sa mieša cez noc a potom sa reakčná zmes zahustí. Chromatografiou na kolóne (20 - 35 % EtOAc/hexány) sa získa 1-(4-brómfenyl)-l-propín-3-ol B (6,58 g, 88 %) vo forme žltej/oranžovej pevnej látky. 'H NMR (300 MHz, CDC1₃) 1,77 (t, 1H), 4,48 (d, 2H), 7,29 (d, 2H), 7,45 (d, 2H).

Príklad 2: (Z)-l-(4-Brómfenyl)-l-jódprop-l-én-3-ol (medziprodukt C):

Roztok l-(4-brómfenyl)-l-propín-3-olu B (6,58 g, 31,2 mmol) v bezvodom tetrahydrofuráne (THF, 66 ml) sa ochladí v ľadovom kúpeli. Po kvapkách sa počas 15 minút pridá 65 % (hmotn./hmotn.) roztok Red-A1 v toluéne (PhMe, 18,7 ml, 19,4 g, 62,4 mmol). Po 1 hodine sa pridá etylacetát (EtOAc, 3,0 ml, 2,75 g, 31,2 mmol). Reakčná zmes sa ochladí v kúpeli suchý ľad/acetón. Po kvapkách sa pridá roztok I₂ (12,7 g, 49,9 mmol) v bezvodom THF (66 ml). Reakčná zmes sa nechá cez noc pomaly zahriať na izbovú teplotu. Reakcia sa utlmí nasýteným roztokom Na₂SO₃ a zmes sa prefiltruje cez Celit. Filtračný koláč sa dôkladne premyje EtOAc. Filtrát sa premyje vodou a solankou, suší sa (MgSO₄), prefiltruje sa a zahustí sa. Chromatografiou na kolóne (20 % EtO-Ac/hexány) sa získa (Z)-l-(4-brómfenyl)-l-jódpropén-3-ol C (8,82 g, 83 %) vo forme žltej pevnej látky. 'H NMR (300 MHz, CDC1₃) 1,82 (t, 1H), 4,37 (kolabované dd, 2H), 6,25 (t, 1H), 7,34 (d, 2H), 7,44 (d, 2H).

Príklad 3: (Z)-N-(l-(4-Brómfenyl)-l-jódprop-l-én-3-yl)-sarkozín, terc-butylester (medziprodukt D):

Roztok (Z)-l-(4-brómfenyl)-l-jódpropén-3-olu C (8,81 g, 26,0 mmol) v CH₂C1₂ (220 ml) sa ochladí v kúpeli suchý ľad/acetonitril, v atmosfére dusíka. Pridá sa PPh₃ (10,9 g, 41,6 mmol) a N-brómsukcínimid (NBS, 7,40 g, 41,6 mmol). Po 1 hodine sa reakcia utlmí nasýteným roztokom NaHCO₃. Zmes sa premyje nasýteným roztokom NaHCO₃ a solankou, suší sa (Na₂SO₄), prefiltruje sa a zahustí sa. Zvyšok sa ihneď odoberie do bezvodého acetonitrilu (MeCN, 104 ml). Pridá sa terc-butylsarkozín-hydrochlorid (5,20 g, 28,6 mmol), K₂CO₃ (35,9 g, 260 mmol) a KI (21,6 g, 130 mmol). Zmes sa mieša cez noc, potom sa prefiltruje a filtračný koláč sa premyje EtOAc. Filtrát sa rozdelí medzi EtOAc a vodu. Organická fáza sa premyje solankou, suší sa (MgSO₄), prefiltruje sa a zahustí sa. Chromatografiou na kolóne (20 % EtOAc/hexány) sa získa (Z)-N-(l-(4-brómfenyl)-l-jódprop-l-én-3-yl)sarkozín, terc-butylester D (9,63 g, 80 % vo dvoch stupňoch) vo forme svetlohnedého oleja. ’H NMR (300 MHz, CDC1₃)

1,48 (s, 9H), 2,46 (s, 3H), 3,23 (s, 2H), 3,43 (d, 2H), 6,12 (t, 1H), 7,34 (d, 2H), 7,43 (d, 2H).

Príklad 4 -1: (Z)-N-(l-(4-Brómfenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín, terc-butylester (medziprodukt E(i)):

Do roztoku (Z)-N-(l-(4-brómfenyl)-l-jódprop-l-én-3-yl)sarkozínu, íerc-butylesteru D (29,86 g, 64,06 mmol) v dimetoxyetáne (300 ml) sa pridá kyselina 3-tiofénborónová (9,02 g, 70,47 mmol), Pd(PPh₃)₄ (3,70 g, 3,20 mmol) a 2M Na₂CO₃ (300 ml). Reakčná zmes sa zahreje na 90 °C za dôkladného mechanického miešania počas 4,5-hodiny. Zmes sa ochladí a rozdelí sa medzi EtOAc a vodu. Organická fáza sa premyje solankou, suší sa (MgSO₄), prefiltruje sa a zahustí sa. Chromatografiou na kolóne (2 - 5 % acetón/hexány) sa získa (Z)-N-(l-(4-brómfenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozin, terc-butylester E(i) (27,06 g, 78 %) vo forme žltého oleja. ’H NMR (300 MHz, CDC1₃) 1,43 (s, 9H), 2,36 (s, 3H), 3,14 (s, 2H), 3,28(4 2H), 6,16 (7, 1H), 6,86 (d, 1H), 7,12 - 7,14 (m, 3H), 7,32 (kolabované dd, 1H), 7,41 (d, 2H).

Príklad 4-2: (Z)-N-(l-(4-Brómfenyl)-l-(2-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín, terc-butylester (medziprodukt E(ii)):

Podobným spôsobom sa (Z)-N-(l-(4-brómfenyl)-l-(2-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín, terc-butylester E(ii) pripraví zo (Z)-N-(l-(4-brómfenyl)-l-jódprop-l-én-3-yl)sarkozínu, terc-butylesteru D a kyseliny 2-tiofénborónovej, za zisku 243 mg (52 %) žltého oleja. ’H NMR (300 MHz, CDC1₃) 1,43 (s, 9H), 2,39 (s, 3H), 3,16 (s, 2H), 3,38 (d, 2H), 6,16 (s, 1H), 6,90 (d, 1H), 7,04 (kolabované dd, 1H), 7,19 (d, 2H), 7,35 (d, 1H), 7,42 (d, 2H).

Príklad 4-3: (Z)-N-(l-(4-Brómfenyl)-l-(3-(4-metyltienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín, terc-butylester (medziprodukt E(iii)):

Podobným spôsobom sa (Z)-N-(l-(4-brómfenyl)-l-(3-(4-metyltienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín, íerc-butylester E(iii) pripraví zo (Z)-N-(l-(4-brómfenyl)-l-jódprop-l-én-3-yl)sarkozínu, terc-butylesteru D a kyseliny 3-metyl-4-tiofénborónovej, za zisku 574 mg (61 %) žltého oleja. ’H NMR (300 MHz, CDC1₃) 1,42 (s, 9H), 1,85 (s, 3H), 2,33 (s, 3H), 3,10 - 3,12 (m, 4H), 6,35 (t, 1H), 6,99 (d, 1H), 7,03 (d, 1H), 7,10 (d, 2H), 7,38 (d, 2H).

Príklad 4-4: (Z)-N-(l-(4-Brómfenyl)-l-(2-(3-metyltienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín, terc-butylester (medziprodukt E(iv)):

Podobným spôsobom sa (Z)-N-(l-(4-brómfenyl)-l-(2-(3-metyltienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín, terc-butylester E(iv) pripraví zo (Z)-N-(l-(4-brómfenyl)-l-jódprop-l-én-3-yl)sarkozínu, terc-butylesteru D a kyseliny 3-metyl-2-tiofénborónovej, za zisku 436 mg (47 %) žltého oleja. ’H NMR (300 MHz, CDCI3) 1,43 (s, 9H), 1,97 (s, 3H), 2,35 (s, 3H), 3,12 (s, 2H), 3,16 (d, 2H), 6,43 (t, 1H), 6,90 (d, 1H), 7,14 (d, 2H), 7,26 (d, 1H), 7,40 (d, 2H).

Príklad 4-5: (Z)-N-(l-(4-Brómfenyl)-l-(2-metylfenyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín, terc-butylester (medziprodukt E(v)):

Podobným spôsobom sa (Z)-N-(l-(4-brómfenyl)-l-(2-metylfenyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín, terc-butylester E(v) pripraví zo (Z)-N-(l-(4-brómfenyl)-l-jódprop-l-én-3-yl)sarkozínu, terc-butylesteru D a kyseliny 2-toluylborónovej, za zisku 379 mg (66 %) žltého oleja.

Príklad 5 - 1: (Z)-N-(l-(4-(4-Izopropylfenyl)fenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín, terc-butylester (medziprodukt F(i)):

Do roztoku (Z)-N-(l-(4-brómfenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozínu, terc-butylesteru E(i) (21,14 g, 50,05 mmol) v dimetoxyetáne (210 ml) sa pridá kyselina 4-izopropylbenzénborónová (16,41 g, 100,1 mmol), Pd(PPh3)4 (2,89 g, 2,50 mmol) a 2M Na2CC3 (210 ml). Dôkladne miešaná zmes sa zahrieva pri teplote spätného toku počas 2 hodín. Zmes sa ochladí a rozdelí sa medzi EtOAc a vodu. Organická fáza sa premyje solankou, suší sa (MgSO₄), prefiltruje sa a zahustí sa. Chromatografiou na kolóne (2 - 5 % acetón/hexány) nasledovanou druhou chromatografiou (2 - 20 % EtOAc/hexány) sa získa (Z)-N-(l-(4-(4-izopropylfenyl)fenyl)-l-(3-tienyl)prop-l -én-3-yl)sarkozín, terc-butylester F(i) (18,65 g, 81%) vo forme žltého oleja. ’H NMR (300 MHz, CDC1₃) 1,29 (d, 6H), 1,44 (s, 9H), 2,39 (s, 3H), 2,95 (hept, 1H), 3,16 (s, 2H), 3,30 (d, 2H), 6,26 (t, 1H), 6,93 (d, 1H), 7,18 (d, 1H), 7,26-7,35 (m, 5H), 7,50-7,54 (m, 4H).

Príklad 5 - 2: (Z)-N-(l-(4-(3-Tienyl)fenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín, terc-butylester (medziprodukt F(ii)):

Podobným spôsobom sa (Z)-N-(l-(4-(3-tienyl)fenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín, terc-butylester F(ii) pripraví zo (Z)-N-(l-(4-brómfenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozínu, terc-butylesteru E(i) a kyseliny 3-tiofénborónovej, za zisku 1,00 g (50 %) žltého oleja.

Príklad 5 - 3: (Z)-N-(l-(4-(2-Tienyl)fenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín, terc-butylester (medziprodukt F(iii)):

Podobným spôsobom sa (Z)-N-(l-(4-(2-tienyl)fenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín, terc-butylester F(iii) pripraví zo (Z)-N-(l-(4-brómfenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozínu, terc-butylesteru E(i) a kyseliny 2-tiofénborónovej, za zisku 300 mg (64 %) žltého oleja.

Príklad 5-4: (Z)-N-(l-(4-(2-Furyl)fenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín, terc-butylester (medziprodukt F(iv)):

Podobným spôsobom sa (Z)-N-(l-(4-(2-furyl)fenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín, terc-butylester F(iv) pripraví zo (Z)-N-(l-(4-brómfenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozínu, ferc-butylesteru E(i) a kyseliny 2-furán-borónovej, za zisku 216 mg (82 %) žltého oleja. ’H NMR (300 MHz, CDC1₃) 1,44 (s, 9H), 2,38 (s, 3H), 3,16 (s, 2H), 3,30 (d, 2H), 6,23 (t, 1H), 6,48 (d, 1H), 6,64 (d, 1H), 6,90 (d, 1H), 7,16 (d, 1H), 7,26 - 7,35 (m, 3H), 7,46 (s, 1H), 7,58 (d, 2H).

Príklad 5-5: (Z)-N-(l-(4-(3-Metoxyfenyl)fenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín, terc-butylester (medziprodukt F(v)):

Podobným spôsobom sa (Z)-N-(l-(4-(3-metoxyfenyl)fenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín, terc-butylester F(v) pripraví zo (Z)-N-(l-(4-brómfenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozínu, terc-butylesteru E(i) a kyseliny 3-metoxyfenylborónovej, za zisku 241 mg (99 %) žltého oleja. 'H NMR (300 MHz, CDC1₃) 1,44 (s, 9H), 2,39 (s, 3H), 3,17 (s, 2H), 3,30 (d, 2H), 3,86 (s, 3H), 6,26 (t, 1H), 6,88 - 6,93 (m, 2H), 7,12 (s, 1H), 7,18 až 7,19 (m, 2H), 7,33 - 7,38 (m, 4H), 7,52 (d, 2H).

Príklad 5-6: (Z)-N-(l-(4-(3-Metylfenyl)fenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín, terc-butylester (medziprodukt F(vi)):

Podobným spôsobom sa (Z)-N-(l-(4-(3-metylfenyl)fenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín, terc-butylester F(vi) pripraví zo (Z)-N-(l-(4-brómfenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozínu, terc-butylesteru E(i) a kyseliny 3-metylfenylborónovej, za zisku 150 mg (64 %) svetložltého oleja. 'H NMR (300 MHz, CDC1₃) 1,45 (s, 9H), 2,40 (s, 3H), 2,42 (s, 3H), 3,17 (s, 2H), 3,32 (d, 2H), 6,26 (t, 1H), 6,94 (d, 1H), 7,15 - 7,19 (m, 3H), 7,30 - 7,41 (m, 5H), 7,52 (d, 2H).

Príklad 5-7: (Z)-N-(l-(4-(3-(Trifluórmetoxy)fenyl)fenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín, terc-butylester (medziprodukt F(vii)):

Podobným spôsobom sa (Z)-N-(l-(4-(3-(trifluórmetoxy)fenyl)fenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín, terc-butylester F(vii) pripraví zo (Z)-N-(l-(4-brómfenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozínu, terc-butylesteru E(i) a kyseliny 3-(trifluórmetoxy)-fenylborónovej, za zisku 127 mg (51 %) žltého oleja.

Príklad 5-8: (Z)-N-(l-(4-(3-Kyánfenyl)fenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín, terc-butylester (medziprodukt F(viii)):

Podobným spôsobom sa (Z)-N-(l-(4-(3-kyánfenyl)fenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín, terc-butylester F(viii) pripraví zo (Z)-N-(I-(4-brómfenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozínu, terc-butylesteru E(i) a kyseliny 3-kyánfenylborónovej, za zisku 57 mg (77 %) žltého oleja.

Príklad 5-9: (Z)-N-(l-(4-(3-Tienyl)fenyl)-l-(2-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín, terc-butylester (medziprodukt F(ix)):

Podobným spôsobom sa (Z)-N-(l-(4-(3-tienyl)fenyl)-l-(2-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozin, terc-butylester F(ix) pripraví z (Z)-N-(l-(4-brómfenyl)-l-(2-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozínu, terc-butylesteru E(ii) a kyseliny 3-tiofénborónovej, za zisku 152 mg (76 %) žltého oleja. 'H NMR (300 MHz, CDC1₃) 1,44 (s, 9H), 2,40 (s, 3H), 3,18 (s, 2H), 3,41 (d, 2H), 6,24 (t, 1H), 6,94 (d, 1H), 7,06 (dd, 1H), 7,35 - 7,39 (m, 4H), 7,46 (d, 1H), 7,54 (d, 2H).

Príklad 5 - 10: (Z)-N-(l-(4-(3-Tienyl)fenyl)-l-(3-(4-metyl-tienyl))prop-l-én-3-yl)sarkozín, terc-butylester (medziprodukt F(x)):

Podobným spôsobom sa (Z)-N-(l-(4-(3-tienyl)fenyl)-l-(3-(4-metyl-tienyl))prop-l-én-3-yl)sarkozín, terc-butylester F(x) pripraví zo (Z)-N-(l-(4-bróm-fenyl)-l-(3-(4-metyl-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozínu, terc-butylesteru E(iii) a kyseliny 3-tiofénborónovej, za zisku 222 mg (64 %) žltého oleja.

Príklad 5-11: (Z)-N-(I-(4-(3-(Trifluórmetyl)fenyl)fenyl)-I-(3-(4-metyl-tienyl))prop-l-én-3-yl)sarkozín, íerc-butylester (medziprodukt F(xi)):

Podobným spôsobom sa (Z)-N-(l-(4-(3-(trifluórmetyl)fenyl)fenyl)-l-(3-(4-metyltienyl))prop-l-én-3-yl)sarkozín, terc-butylester F(xi) pripraví zo (Z)-N-(l-(4-brómfenyl)-l-(3-(4-metyltienyl)prop-l-én-3-yl)-sarkozínu, terc-butylesteru E(iii) a kyseliny 3-(trifluórmetyl)-fenylborónovej, za zisku 260 mg (54 %) svetložltého oleja.

Príklad 5 - 12: (Z)-N-(l-(4-(3-metoxyfenyl)fenyl)-l-(3-(4-metyltienyl))prop-l-én-3-yl)sarkozín, terc-butylester (Medziprodukt F(xii)):

Podobným spôsobom sa (Z)-N-(l-(4-(3-metoxyfenyl)fenyl)-l-(3-(4-metyltienyl))prop-l-én-3-yl)sarkozín, terc-butylester F(xii) pripraví zo (Z)-N-(l-(4-brómfenyl)-l-(3-(4-metylfenyl)prop-l-én-3-yl)sarkozínu, terc-butylesteru E(iii) a kyseliny 3-metoxyfenylborónovej, za zisku 193 mg (69 %) žltého oleja.

Príklad 5 -13: (Z)-N-(l-(4-(3-Metylfenyl)fenyl)-l-(2-(3-metyltienyl))prop-l-én-3-yl)sarkozín, terc-butylester (medziprodukt F(xiii)):

Podobným spôsobom sa (Z)-N-(l-(4-(3-metylfenyl)fenyl)-l-(2-(3-metyltienyl))prop-l-én-3-yl)sarkozín, terc-butylester F(xiii) pripraví zo (Z)-N-(l-(4-brómfenyl)-l-(2-(3-metyltienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozínu, terc-butylesteru E(iv) a kyseliny 3-metylfenylborónovej, za zisku 176 mg (73 %) žltého oleja. 'H NMR (300 MHz, CDC1₃) 1,44 (s, 9H), 2,02 (s, 3H), 2,37 (s, 3H), 2,41 (s, 3H), 3,14 (s, 2H), 3,19 (d, 2H), 6,50 (t, 1H), 6,92 (d, 1H), 7,16 (d, 1H), 7,26 - 7,39 (m, 6H), 7,50 (d, 2H).

Príklad 5 - 14: (Z)-N-(l-(4-(3-Tienyl)fenyl)-l-(2-metylfenyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín, terc-butylester (medziprodukt F(xiv)):

Podobným spôsobom sa (Z)-N-(l-(4-(3-tienyl)fenyl)-l-(2-metylfenyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín, terc-butylester F(xiv) pripraví zo (Z)-N-(l-(4-brómfenyl)-l-(2-metylfenyl)prop-l-én-3-yl)sarkozínu, terc-butylesteru E(v) a kyseliny 3-tiofénborónovej, za zisku 62 mg (48 %) žltého oleja.

Príklad 6-1: (Z)-N-(l-(4-(4-Izopropylfenyl)fenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín (G(i)):

(Z)-N-(l-(4-(4-Izopropylfenyl)fenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín, terc-butylester F(i) (18,62 g, 40,3 mmol) sa rozpustí v 96 % kyseline mravčej (200 ml). Roztok sa zahrieva pri teplote 40 °C cez noc a potom sa zahustí. Zvyšok sa odparí súčasne s CH₂C1₂. Chromatografiou na kolóne (2 - 15 % MeOH/CH₂C12) sa získa svetložltá pevná látka. Trituráciou s metanolom (MOH) sa získa čistý (Z)-N-(l-(4-(4-izopropylfenyl)fenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín G(i) (11,38 g, 70 %) vo forme bielej pevnej látky. 'H NMR (300 MHz, metanol-d₄) 1,23 (d, 6H), 2,47 (s, 3H), 2,92 (hept, 1H), 3,26 (s, 2H), 3,50 (d, 2H), 6,22 (t, 1H), 6,94 (d, 1H), 7,32 (d, 4H), 7,46 (d, 1H), 7,57 - 7,65 (m, 5H).

Príklad 6-2: (Z)-N-(l-(4-(3-Tienyl)fenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín (G(ii)):

Podobným spôsobom sa (Z)-N-(l-(4-(3-tienyl)fenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín G(ii) pripraví zo (Z)-N-(l-(4-(3-tienyl)fenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozínu, ŕerc-butylesteru F(ii), za zisku 486 mg (61 %) bieleho prášku.

Príklad 6-3: (Z)-N-(l-(4-(2-Tienyl)fenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín (G(iii)):

Podobným spôsobom sa (Z)-N-(l-(4-(2-tienyl)fenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín G(iii) pripraví zo (Z)-N-(l-(4-(2-tienyl)fenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozínu, ŕerc-butylesteru F(iii), za zisku 145 mg (53 %) bieleho prášku.

Príklad 6-4: (Z)-N-(l-(4-(2-Furyl)fenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín (G(iv)):

Podobným spôsobom sa (Z)-N-(l-(4-(2-furyl)fenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín G(iv) pripraví zo (Z)-N-(l-(4-(2-furyl)fenyl)-l-(3-tienyl)-prop-l-én-3-yl)sarkozínu, íerc-butylesteru F(iv), za zisku 158 mg (97 %) bezfarebného oleja. 'H NMR (300 MHz, metanol-d₄) 2,74 (s, 3H), 3,63 (s, 2H), 3,88 (d, 2H), 6,31 (t, 1H), 6,42 (s, 1H), 6,58 (d, 1H), 6,80 (d, 1H), 7,10 (s, 1H), 7,25 (d, 2H), 7,31 (kolabovane dd, 1H), 7,41 (s, 1H), 7,52 (d, 2H).

Príklad 6-5: (Z)-N-(l-(4-(3-Metoxyfenyl)fenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín (G(v)):

Podobným spôsobom sa (Z)-N-(l-(4-(3-metoxyfenyl)fenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín G(v) pripraví zo (Z)-N-(l-(4-(3-metoxyfenyl)fenyl)-l-(3-tienyl)-prop-l-én-3-yl)sarkozínu, ŕerc-butylesteru F(v), za zisku 156 mg (74 %) bielej peny. *H NMR (300 MHz, metanol-d₄) 2,76 (s, 3H), 3,56 (s, 2H), 3,82 (s, 3H), 3,91 (d, 2H), 6,36 (t, 1H), 6,82 - 6,88 (m, 2H), 7,06 - 7,11 (m, 3H), 7,26 - 7,32 (m, 4H), 7,46 (d, 2H).

Príklad 6-6: (Z)-N-(l-(4-(3-Metylfenyl)fenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín (G(vi)):

Podobným spôsobom sa (Z)-N-(l-(4-(3-metylfenyl)fenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín G(vi) pripraví zo (Z)-N-(l-(4-(3-metylfenyl)fenyl)-l-(3-tienyl)-prop-l-én-3-yl)sarkozínu, ŕerc-butylesteru F(vi), za zisku 127 mg (100 %) bezfarebného oleja. *H NMR (300 MHz, metanol-d₄) 2,38 (s, 3H), 2,76 (s, 3H), 3,56 (s, 2H), 3,90 (d, 2H), 6,36 (t, 1H), 6,83 (d, 1H), 7,10-7,15 (m, 2H), 7,24 - 7,33 (m, 6H), 7,46 (d, 2H).

Príklad 6-7: (Z)-N-(l-(4-(3-(Trifluórmetoxy)fenyl)fenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín (G(vii)):

Podobným spôsobom sa (Z)-N-(l-(4-(3-(trifluónnetoxy)fenyl)fenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín G(vii) pripraví zo (Z)-N-(l-(4-(3-(trifluórmetoxy)fenyl)fenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozmu, terc-butylesteru F(vii), za zisku 80 mg (78 %) bieleho prášku.

Príklad 6-8: (Z)-N-(l-(4-(3-Kyánfenyl)fenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín (G(viii)):

Podobným spôsobom sa (Z)-N-(l-(4-(3-kyánfenyl)fenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín G(viii) pripraví z (Z)-N-(l-(4-(3-kyánfenyl)fenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozínu, ŕerc-butylesteru F(viii), za zisku 48 mg (64 %) bieleho prášku.

Príklad 6-9: (Z)-N-(l-(4-(3-tienyl)fenyl)-l-(2-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín (G(ix)):

Podobným spôsobom sa (Z)-N-(l-(4-(3-tienyl)fenyl)-l-(2-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín G(ix) pripraví zo (Z)-N-(l-(4-(3-tienyl)fenyl)-l-(2-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozínu, terc-butylesteru F(ix), za zisku 108 mg (59 %) bieleho prášku. ‘H NMR (300 MHz, CDC1₃) 2,73 (s, 3H), 3,44 (s, 2H), 3,88 (d, 2H), 6,14 (t, 1H), 6,90 (d, 1H), 7,04 (dd, 1H), 7,26 - 7,34 (m, 4H), 7,38 - 7,41 (m, 2H), 7,48 (d, 2H).

Príklad 6 - 10: (Z)-N-(l-(4-(3-Tienyl)fenyl)-l-(3-(4-metyltienyl))prop-l-én-3-yl)sarkozín (G(x)):

Podobným spôsobom sa (Z)-N-(l-(4-(3-tienyl)fenyl)-l-(3-(4-metyltienyl))prop-l-én-3-yl)sarkozín G(x) pripraví zo (Z)-N-(l-(4-(3-tienyl)fenyl)-l-(3-(4-metyltienyl))prop-l-én-3-yl)sarkozínu, íerc-butylesteru F(x), za zisku 157 mg (82 %) bieleho prášku.

Príklad 6-11: (Z)-N-(l-(4-(3-Trifluórmetyl)fenyl)fenyl-l-(3-(4-metyltienyl))prop-l-én-3-yl)sarkozín (G(xi)):

Podobným spôsobom sa (Z)-N-(l-(4-(3-trifluórmetyl)fenyl)fenyl-l-(3-(4-metyltienyl))prop-l-én-3-yl)sarkozín G(xi) pripraví zo (Z)-N-(l-(4-(3-(trifluórmetyl)fenyl)fenyl)-l-(3-(4-metyltienyl))prop-l-én-3-yl)sarkozínu, íerc-butylesteru F(xi), za zisku 99 mg (73 %) bieleho prášku.

Príklad 6 - 12: (Z)-N-(l-(4-(3-Metoxyfenyl)fenyl)-l-(3-(4-metyltienyl))prop-l-én-3-yl)sarkozín (G(xii)):

Podobným spôsobom sa (Z)-N-( 1 -(4-(3-metoxyfenyl)fenyl)-1 -(3-(4-metyltienyl))prop-1 -én-3 -yl)sarkozín G(xií) pripraví zo (Z)-N-(l-(4-(3-metoxyfenyl)fenyl)-l-(3-(4-metyltienyl))prop-l-én-3-yl)sarkozínu, terc-butylesteru F(xii), za zisku 152 mg (69 %) bieleho prášku.

Príklad 6 - 13: (Z)-N-(l-(4-(3-Metylfenyl)fenyl)-l-(2-(3-metyltienyl))prop-l-én-3-yl)sarkozín (G(xiii)):

Podobným spôsobom sa (Z)-N-(l-(4-(3-metylfenyl)fenyl)-l-(2-(3-metyltienyl))prop-l-én-3-yl)sarkozín G(xiii) pripraví zo (Z)-N-(l-(4-(3-metylfenyl)fenyl)-l-(2-(3-metyltienyl))prop-l-én-3-yl)sarkozínu, terc-butylesteru F(xiii), za zisku 129 mg (99 %) bieleho prášku. ‘H NMR (300 MHz, metanol-d₄) 1,97 (s, 3H), 2,38 (s, 3H), 2,80 (s, 3H), 3,58 (s, 2H), 3,81 (d, 2H), 6,65 (t, 1H), 6,90 (d, 1H), 7,15 (kolabované dd, 1H), 7,26 - 7,38 (m, 6H), 7,48 (d, 2H).

Príklad 6 - 14: (Z)-N-(l-(4-(3-Tienyl)fenyl)-l-(2-metylfenyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín (G(xiv)):

Podobným spôsobom sa (Z)-N-(l-(4-(3-tienyl)fenyl)-l-(2-metylfenyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín G(xiv) pripraví zo (Z)-N-(l-(4-(3-tienyl)fenyl)-l-(2-metylfenyl)prop-l-én-3-yl)sarkozínu, terc-butylesteru F(xiv), za zisku 37 mg (61 %) bieleho prášku.

Príklad 7: Test na transport prostredníctvom GlyT-1

Tento príklad ilustruje spôsob na meranie vychytávania glycínu trans-fektovanými kultivovanými bunkami.

Bunky stabilne transfektované GlyT-lC (pozri Kim, et al., Molecular Pharmacology, 45, 1994:608 - 617) sa dvakrát premyli HEPES pufrovaným salinickým roztokom (HBS). Bunky sa potom inkubovali počas 10 minút pri 37 °C (a) bez potenciálneho kompetitora, (b) s 10 mM nerádioaktívneho glycínu alebo (c) s koncentráciou potenciálneho lieku. Rôzne koncentrácie testovaných liekov sa použili na generovanie údajov na výpočet koncentrácií vedúcich k 50 % efektu (napríklad IC₅₀, čo je koncentrácia lieku inhibujúca vychytávanie glycínu o 50 %). Potom sa pridal roztok obsahujúci [³H]glycín v konečnej koncentrácii 50 nM (17,5 Ci/mmol). Bunky sa potom inkubovali za mierneho trepania počas ďalších 30 minút pri 37 °C a potom sa reakčná zmes ašpirovala a premyla sa trikrát ľadovo chladným PBS. Bunky sa potom lýzovali so scintilačným činidlom a zmes sa uviedla do rovnováhy. Rádioaktivita buniek sa stanovila s použitím scintilačnej kamery. Potom sa porovnávali údaje pre bunky kontaktované alebo nekontaktované s testovaným činidlom, v závislosti od typu uskutočneného testu.

Zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu boli aktívne ako GlyT-1 inhibítory.

Príklad 8: Test väzby na väzobné miesto pre glycín asociované s NMDA receptormi

Tento príklad ilustruje spôsob použitý na meranie interakcie zlúčenín s glycínovým miestom na NMDA receptore. V tomto teste sa známa zlúčenina viažuca sa na glycínové miesto NMDA (tritiovaný-MDL 105519, od Amersham), použila na väzbu na tkanivo potkanieho hipokampu. Potom sa pridala testovaná zlúčenina a nechal sa vytesniť naviazaný ligand. Naviazaním testovanej zlúčeniny sa vytesnil ligand a to viedlo ku zníženiu rádioaktivity, ktorá mohla byť kvantifikovaná. Zlúčeniny sa obvykle testovali v dvoch koncentráciách, a pokiaľ bola spozorovaná inhibícia, tak sa zlúčeniny testovali znovu v niekoľkých koncentráciách, za zisku krivky dávka-reakcia, z ktorej môže byť stanovená IC50.

Testované zlúčeniny sa pripravili pre test nariedením s 50 mM Tris-acetátového pufra. Podiely z potkanej hipokampovej membrány použité v teste sa premyli dvakrát chladným 10 mM Tris-acetátovým pufrom a ultracentrifugovali sa pri 20 000 rpm počas 15 minút, s rehomogenizáciou medzi výplachmi. Výsledné pelety sa potom resuspendovali v 50 mM Tris-acetátového pufra za zisku membrán v koncentrácii vhodnej pre test. Nešpecifická väzba sa definovala za prítomnosti 1 mM glycínu. Celková väzba sa určila pri použití iba Tris-acetátoveho pufra.

Reakčná zmes sa pripravila kombinovaním 75 pg prípravku homogenizovaných hipokampových membrán s [³H]-MDL 105519 za zisku konečnej koncentrácie 5 nM a glycínu alebo testovanej zlúčeniny ako roztoku v Tris-acetátovom pufre. Reakčná zmes sa za trepania inkubovala pri izbovej teplote počas 30 minút. Platne sa potom spracovali na GFC filtroch s použitím 48w Brandell Harvestor. GFC filtre sa vopred spracovali aspoň počas 30 minút roztokom 0,5 % BSA v destilovanej vode na redukciu nešpecifickej väzby známeho ligandu na filter. Jamky platne sa premyli 4-5 objemami chladného 50 mM Tris-acetátoveho pufra. Filtre sa potom preniesli do scintilačných skúmaviek a do každej skúmavky sa pridali 2 ml scintilačnej kvapaliny. Skúmavky sa nechali ustáť cez noc a potom sa odčítali v Beckman /3-čítači. Dáta sa analyzovali s použitím Prism softwaru.

Zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu nemali žiadnu významnú väzbu na väzobné miesto pre glycín asociované s NMDA receptorom.

Príklad 9: Test väzby na glycínový receptor

Tento príklad ilustruje test použitý na meranie skríženej reaktivity zlúčenín s glycínovým receptorom. V tomto teste sa známa zlúčenina viažuca sa na glycínový receptor, [³H]-strychnín, použila na väzbu na tkanivo potkanej miechy. Potom sa pridala testovaná zlúčenina a nechal sa vytesniť naviazaný ligand. Naviazaním testovanej zlúčeniny sa vytesnil ligand a to viedlo ku zníženiu rádioaktivity, ktorá mohla byť kvantifikovaná. Zlúčeniny sa obvykle testovali v dvoch koncentráciách, a pokiaľ bola pozorovaná inhibícia, tak sa zlúčeniny testovali znovu v niekoľkých koncentráciách, za zisku krivky dávka-reakcia, z ktorej môže byť stanovená ic₅₀.

Testované zlúčeniny sa pripravili pre test nariedením vo fosforečnane draselnom. Podiely potkaních miechových membrán, použitých v tomto teste, sa premyli dvoma podielmi chladného fosfátového pufra a potom sa vykonalo odstredenie pri 4 °C, 14 000 rpm, medzi výplachmi. Výsledné pelety sa resuspendovali v objeme fosfátového pufra za zisku koncentrácií vhodných pre test. Nešpecifická a celková väzba sa určili s použitím 10 mM konečnej koncentrácie glycínu a iba fosfátového pufra, v príslušnom poradí.

Reakčná zmes sa pripravila zmiešaním 150 pg potkaních miechových membrán s [³H] strychnínom v konečnej koncentrácii 7 nM a glycínu alebo testovanej zlúčeniny. Reakčná zmes sa inkubovala počas 2 hodín za trepania na ľade. Platne sa potom spracovali na GFC filtroch s použitím 48w Brandell Harvestor. GFC filtre sa vopred spracovali aspoň počas 30 minút roztokom 0,5 % BSA v destilovanej vode na redukciu nešpecifickej väzby známeho ligandu na filter. Jamky platne sa premyli 4-5 objemami chladného fosfátového pufra. Filtre sa potom preniesli do scintilačných skúmaviek a do každej skúmavky sa pridali 2 ml scintilačnej kvapaliny. Skúmavky sa nechali ustáť cez noc a potom sa odčítali v Beckman /3-čítači. Dáta sa analyzovali s použitím Prism softwaru.

Zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu nemali žiadnu významnú väzbu na glycínový receptor.

Príklad 10: Test na meranie toxicity pri myšiach

Tento príklad opisuje test toxicity 5-denného chronického orálneho podávania inhibítorov GlyT-1. Zlúčeniny sa podávali orálne (PO) samcom CD-1 myší počas 5 dní, v dávke 40 mg/kg/deň. Denne sa vykonával záznam chovania (klinických príznakov) a telesnej hmotnosti pre všetky testované zlúčeniny.

Samce CD-1 myší sa zakúpili od Charles River Labs (Kingston, NY). Zvieratá mali pri prijatí hmotnosť 20 - 25 g. Zvieratá sa nechali aklimatizovať v boxe s kontrolovanou teplotou/vlhkosťou (72 °F ±5 °F/50 % ±5 %), s obvyklým 12-hodinovým cyklom svetlo/tma (svetlo od 07,00 hod.) počas 5 dní pred testom. Všetky zvieratá sa nechali počas aklimatizácie a testu jesť (Purina Labdiet Rodent krmivo # 5001) a piť (Elizabettown Water Company) ad libitum. Deň pred testom sa zvieratá náhodne rozdelili do skupín. Všetky zvieratá vybrané pre test mali hmotnosť aspoň 20 gramov a zdali sa byť v dobrom stave. Každé zviera sa vážilo denne počas 5 dní. Zvieratá sa nechali na rovnakom mieste počas 3 dní po ukončení chronickej aplikácie lieku.

V deň začatia testu sa pripraví čerstvý zásobný roztok každej testovanej zlúčeniny. Podiely sa nariedili na koncentráciu potrebnú pre dennú aplikáciu. Zásobné roztoky sa uchovávali v chladničke, pokiaľ sa nepoužívali. Každá zlúčenina sa rozpustila v malom množstve destilovanej vody. Jeden ekvivalent hydroxidu sodného (2 N) sa mohol pridať na uľahčenie rozpustenia každej testovanej zlúčeniny. Potom sa pridalo vehikulum v množstve dostatočnom na dosiahnutie konečného objemu. Konečné objemy sa upravili tak, aby zodpovedali percentu voľnej bázy. Vehikulom použitým v pokuse bol hydroxypropyl-0-cyklodextrín (HPCD) Acros, šarža 011849601, rozpustený v destilovanej vode v koncentrácii 10 % hmotn./objem. pH sa upravilo s použitím hydroxidu sodného (2N) na hodnotu testovanej zlúčeniny (obvykle medzi 8 a 10).

Všetky pripravené testované zlúčeniny boli buď v čírom roztoku, alebo v mierne zakalenej suspenzii. Suspenzie sa miešali bezprostredne pred použitím. Všetkým zvieratám sa podávali buď testované zlúčeniny, alebo vehikulá per os (po) pomocou ihiel typu 21, v objeme 10,0 ml/kg. Derme zistené telesné hmotnosti sa použili na stanovenie jednotlivých dávok. Všetky testované zlúčeniny sa odvážili na Denver Instruments analytických váhach (model # A-250). Zvieratá sa vážili na stolných váhach s dolným závesom Ohaus, model # LS2000.

Zvieratá sa hodnotili na zreteľné zmeny chovania (klinické príznaky) bezprostredne po podaní testovaných zlúčenín a potom znovu vo 4. a 24. hodine. Pri zvieratách sa hodnotilo 27 jednotlivých klinických príznakov:

Aktivita: pozoruje sa, či je zviera abnormálne hyper- alebo hypoaktívne.

Ataxia: vratká chôdza, neschopnosť koordinovať vôľou ovládané svalové pohyby.

Katalepsia: stav charakterizovaný bezvládnosťou končatín, ktoré môžu byť umiestené do rôznych polôh, v ktorých zotrvávajú dlhší čas, absencia reakcie na podnety, viditeľný pulz a respirácia a bledá pokožka.

Chromatúria: Chromodacryorrhea: Stav stolice:

Konvulzia:

klonická tonická červené zafarbenie moču, červenavý výtok z očí.

mäkká a vodnatá, tuhá a malá.

generalizovaný intermitentný tonus a relaxácia kostrového svalstva, generalizovaný konštantný svalový tonus, často sprevádzaný natiahnutím predných a/alebo zadných končatín.

modravé sfarbenie externých tkanív (uši, tlapky, chvost), jasne sa určí, či spontánna alebo utratením.

abnormálna retrakcia bulbov do orbity, červenavý výtok z nozdier.

abnormálna protrúzia bulbov. kostrové svalstvo bez tónu.

zviera sa krčí na podlahe, zviera piští alebo nadmerne reaguje na dotyk, sekrécia a vyšší objem slz.

zviera je spontánne na chrbte, zviera zostáva na chrbte, ak je položené do tejto polohy, nadmerná kontrakcia očných zreničiek.

nadmerná dilatácia očných zreničiek, pokles viečok na oboch očiach.

zježenie srsti na chrbte a krku.

Respirácia( 14):

Rigidita:

Salivácia (zvýšená): Sedacia:

Stereotypia:

Tremor:

suché:

chabá: spastická:

jemný hrubý Kyanóza:

Smrť:

Enoftalmia: Epistaxia: Exoftalmia: Ochablosť: Skrčená poloha: Hypersenzitivita na dotyk: Lakrimácia (obe oči): Laterálne ležanie: Strata vzpriamovania: Mióza: Mydriáza: Ptóza viečok: Piloerekcia:

Respiračné fenomény: vlhké (slizničné): bublavé zvuky pri dýchaní, vrzgoty a piskoty počas respirácie, neobvyklé zvýšenie alebo zníženie respiračnej aktivity, končatiny zostávajú v polohe, do ktorej sú umiestené, svalová stuhlosť, končatinami sa ťažko hýbe, zvýšená tvorba a sekrécia slín, zviera reaguje pomaly na dotyk a manipuláciu, konštantné opakovanie niektorých bezúčelných pohybov, konštantné rýchle vibrácie tela a/alebo končatín, rýchle vibrácie tela a/alebo končatín, ktoré sa zvyšujú alebo znižujú v čase.

Akékoľvek zviera, pri ktorom bola pozorovaná (1) strata telesnej hmotnosti tak, že jej hodnota poklesla pod 75 % priemernej hodnoty pre kontrolnú skupinu pre 2 nasledujúce dni, alebo (2) nástup moribundného stavu, pri ktorom zviera neprijímalo normálne potravu ani tekutiny, bolo utratené pred ukončením pokusu.

Údaje pre toxicitu získané v teste, ako je opísané, sú uvedené v tabuľkách 1 až 14 pre zlúčeniny Gi až Gxiv, vrátane. Pozorovanie zvierat sa vykonalo bezprostredne po podaní a potom znovu po 4 hodinách a po 24 hodinách. Pozorovania sa zaznamenávali s použitím hodnôt podľa nasledujúcej škály.

normálny vzhľad aktivita (Ť4) sedacia/letargia piloerekcia stereotypia mäkká stolica chromodacryorrhea

7 epistaxia	14 ptóza viečok	21 rigidita
8 kyanóza	15 strata vzpriamovania	22 ataxia
9 ochablosť	16 chromatúria	23 tremor
10 respirácia	17 salivácia	24 konvulzia
11 skrčenie	18 lakrimácia	25 katalepsia
12 enoftalmia	19 mióza	26 laterálne ležanie
13 exoftalmus	20 mydriáza	27 smrť

Tabuľka 15: Zlúčenina G(iii)

4 hodiny
		Deň
Zviera č.	Dávka mg/kg	1	2	3	4	5
1	40	0	0	0	14	0
2	40	0	0	0	0	0
3	40	0	0	0	14,10	0
24 hodín
		Deň
Zviera č.	Dávka mg/kg	1	2	3	4	5
1	40	0	0	0	0	0
2	40	0	0	0	0	0
3	40	0	0	0	0	0

Tabuľka 2: Zlúčenina G(viii)

4 hodiny
		Deň
Zviera č.	Dávka mg/kg	1	2	3	4	5
1	40	0	0	0	0	0
2	40	0	0	0	0	0
3	40	0	0	0	0	0
24 hodín
		Deň
Zviera č.	Dávka mg/kg	1	2	3	4	5
1	40	0	0	0	0	0
2	40	0	0	0	0	0
3	40	0	0	0	0	0

Tabuľka 16: Zlúčenina G(xiv)

Tabuľka 4: Zlúčenina G(ix)

Tabuľka 17: Zlúčenina G(ii)

4 hodiny
		Deň
Zviera č.	Dávka mg/kg	1	2	3	4	5
1	40	0	1	0	1,22,26,15	1,H
2	40	0	0	0	1,22,24+,26,15,14	1,22,15,14
3	40	0	0	0	0	0
24 hodín
		Deň
Zviera č.	Dávka mg/kg	1	2	3	4	5
1	40	0	0	0	0	0
2	40	0	0	0	0	0
3	40	0	0	0	0	0

H - narážanie hlavou + vyprovokované dotykom

Tabuľka 6: Zlúčenina G(x)

4 hodiny
		Deň
Zviera č.	Dávka mg/kg	1	2	3	4	5
1	40	0	0	0	0	0
2	40	0	0	0	0	0
3	40	0	0	0	0	0
24 hodín
		Deň
Zviera č.	Dávka mg/kg	1	2	3	4	5
1	40	0	0	0	0	--
2	40	0	0	0	0	--
3	40	0	0	0	0	--

Tabuľka 18: Zlúčenina G(xii)

4 hodiny
		Deň
Zviera č.	Dávka mg/kg	1	2	3	4	5
1	40	0	0	0	0	0
2	40	0	0	0	0	0
3	40	0	0	0	0	0
24 hodín
		Deň
Zviera č.	Dávka mg/kg	1	2	3	4	5
1	40	0	0	0	0	--
2	40	0	0	0	0	--
3	40	0	0	0	0	—

Tabuľka 8: Zlúčenina G(xi)

Tabuľka 19: Zlúčenina G(xiii)

Tabuľka 10: Zlúčenina G(i)

Tabuľka 20: Zlúčenina G(v)

Tabuľka 12: Zlúčenina G(vi)

Tabuľka 21: Zlúčenina G(vii)

Tabuľka 14: Zlúčenina G(iv)

4 hodiny
		Deň
Zviera č.	Dávka mg/kg	1	2	3	4	5
1	40	14	0	14	0	14
2	40	1,22,14,10,2	1,22,15,10	0	1,22,14,H,10,2	0
3	40	0	0	14	0	0
24 hodín
		Deň
Zviera č.	Dávka mg/kg	1	2	3	4	5
1	40	0	0	0	0	0
2	40	0	0	0	0	0
3	40	0	0	0	0	0

H - narážanie hlavou

Podľa porovnania sú zlúčeniny vzorca (1) menej toxické než ostatné GlyTl inliibítory rovnako účinné. Napríklad zlúčeniny H, I, J a K uvedené ďalej majú vyššiu toxicitu než zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu, ako je zrejmé z tabuliek 15, 16, 17 a 18.

Tabuľka 15: Zlúčenina H*

		Deň
Zviera č.	Dávka mg/kg	1	2	3	4	5
1	40	0	0	0	1,22,8,14,10,2	1,2
2	40	0	1,22,10,2	1,26,15,3,1 0,2	0	1,2
3	40	1,3,14,2	1,22,14,2	1,22,9,10,2	1,9,26,15,14,10, 2	1,2

* v tomto pokuse bolo chovanie hodnotené iba raz denne

Tabuľka 22: Zlúčenina I

4 hodiny
		Deň
Zviera č.	Dávka mg/kg	1	2	3	4	5
16	40	41,26, 410	41,22,26, 410	41,22, 410	41,22,26, 4lO,I	41,22, 410
17	40	41,22, 410	41,22, 410	41,26, 410	41,26,15, 410	41,26, 410
18	40	41,22,26, 410	41,22, 410	41,22,26, 410	41,22, 410	41,22, 410
24 hodín
		Deň
Zviera č.	Dávka mg/kg	1	2	3	4	5
16	40	0	0	0	0	--
17	40	0	0	0	0	--
18	40	0	0	0	0	—

I — ťažké svrbenie

Tabuľka 23: Zlúčenina J

4 hodiny
		Deň
Zviera č.	Dávka mg/kg	1	2	3	4	5
1	40	0	0	0	0	0
2	40	0	0	0	0	0
3	40	0	0	0	0	0
24 hodín
		Deň
Zviera č.	Dávka mg/kg	1	2	3	4	5
1	40	0	1,2	1,9,18,26,15,14,10,2*	--	--
2	40	0	0	1,6,9,18,26,15,14,10,2*	--	--
3	40	0	2	1,9,18,26,15,14,10,2,23*	--	--

Tabuľka 18: Zlúčenina K

4 hodiny
		Deň
Zviera č.	Dávka mg/kg	1	2	3	4	5
1	40	1		—	--	--
2	40	0	--	--	--	—
3	40	0	1,22,24,15,2	--	--	--
24 hodín
		Deň
Zviera č.	Dávka mg/kg	1	2	3	4	5
1	40	1,22,18,26,15,14,10, 23,27*	..	—	—	—
2	40	1,26,15,14,10,27*	--	--	--
3	40	1,26	1,22,24,15,14,10,23, 27*	—	--	—

* zvieratá boli utratené v dôsledku moribundného stavu

Claims

1. Zlúčenina vzorca (1) kde:

Ar_t je tienylová skupina, ktorou môže byť 2-tienyl alebo 3-tienyl a ktorá je voliteľne substituovaná až jedným substituentom vybraným zo skupiny zahrnujúcej metyl alebo etyl; a

Ar₂ je vybraný zo skupiny zahrnujúcej tiofén, furán a substituovaný fenyl, kde substituent na fenylovej skupine je vybraný zo skupiny zahrnujúcej Ci-ealkyl, halogén, Ci_₆halogénalkyl, Ci_₆alkoxy, C].₆halogénalkoxy, kyano, alebo kde Ar, je 2-metylfenyl, keď Ar₂ je 3-tienyl, a jej soli, solváty a hydráty.

2. Zlúčenina podľa nároku 1, kde Ar₁ je 2-tiofén.

3. Zlúčenina podľa nároku 1, kde Ar_t je 2-(3-metyltiofén).

4. Zlúčenina podľa nároku 1, kde Αη je 3-tiofén.

5 b) konverziu alkoholovej skupiny jodidu C na bromid; a

c) nahradenie bromidu terc-butylesterom sarkozínu za zisku medziproduktu D.

5. Zlúčenina podľa nároku 1, kde Ari je 3-(4-metyltiofén).

6. Zlúčenina podľa nároku 1, kde Ar₂je substituovaný fenyl, kde substituent je vybraný zo skupiny zahrnujúcej CF₃, Me, iPr, MeO, CN a CF₃O.

7. Zlúčenina podľa nároku 1, kde Ar₂ je furán.

8. Zlúčenina podľa nároku 1, kde Ar₂ je tiofén.

9. Zlúčenina podľa nároku 1 vybraná zo skupiny zahrnujúcej : (Z)-N-(l-(4-(4-izopropylfenyl)fenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín; (Z)-N-( 1 -(4-(3-tienyl)fenyl)-1 -(3-tienyl)prop-1 -én-3-yl)sarkozín; (Z)-N-(l-(4-(2-tienyl)fenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín; (Z)-N-( 1 -(4-(2-furyl)fenylj-1 -(3-tienyl)prop-1 -én-3-yl)sarkozín; (Z)-N-( 1 -(4-(3-metoxyfenyl)fenyl)-1 -(3-tienyl)prop-1 -én-3-yl)sarkozín; (Z)-N-( 1 -(4-(3-metylfenyl)fenyl)-1 -(3-tienyl)prop-1 -én-3-yl)sarkozín; (Z)-N-(l-(4-(3-(trifluórmetoxy)fenyl)fenyl)-l-(3-tienyl)-prop-l-én-3-yl)sarkozín;

(Z)-N-(1-(4-(3 -kyánfenyljfenyíj-1 -(3 -tienyljprop-1 -én-3 -yljsarkozín; (Z)-N-( 1 -(4-(3 -tienyljfenyl)-1 -(2-tienyl)prop-1 -én-3-yl)sarkozín;

(Z)-N-( l-(4-(3-tienyl)fenyl)-1 -(3-(4-metyltienyl)prop-1 -én-3-yl)sarkozín; (Z)-N-(l-(4-(3-(trifluórmetyl)fenyl)fenyl)-l-(3-(4-metyltienyl))prop-l-én-3-yl)sarkozín;

(Z)-N-( 1 -(4-(3 -metoxyfenyljfenylj-1 -(3-(4-metyltienyl))prop-l -én-3 -yljsarkozín a (Z)-N-( 1 -(4-(3-metylfenyl)fenyl)-l -(2-(3-metyltienyl))prop-1 -én-3-yl)sarkozín.

10. Zlúčenina podľa nároku 1, ktorou je (Z)-N-(l-(4-(3-tienyl)fenyl)-l-(2-metylfenyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín.

11. Zlúčenina podľa nároku 9, (Z)-N-(l-(4-(2-furyl)fenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín.

12. Zlúčenina podľa nároku 9, (Z)-N-(l-(4-(4-izopropylfenyl)-fenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín.

13. Farmaceutický prostriedok, vyznačujúci sa tým, množstvo zlúčeniny podľa nároku 1 a farmaceutický prijateľný nosič.

14. Farmaceutický prostriedok, vyznačujúci sa tým, množstvo zlúčeniny podľa nároku 10 a farmaceutický prijateľný nosič.

15 pomocou nátrium-bis(2-metoxyetoxy)alumíniumhydridu (Red-Al) a reakciu získaného medziproduktu s jódom za zisku jodidu C;

b) konverziu alkoholovej skupiny jodidu C na bromid; a

c) nahradenie bromidu ŕerc-butylesterom sarkozínu za zisku medziproduktu D;

CO2tBu (D),

d) kondenzáciu medziproduktu D s kyselinou borónovou vzorca Αγ]Β(ΟΗ)₂, kde Ar] je rovnaký, ako je opísané, za prítomnosti paládiového (0) katalyzátora, za zisku medziproduktu vzorca (E).

15. Farmaceutický prostriedok, vyznačujúci sa tým, množstvo zlúčeniny podľa nároku 11a farmaceutický prijateľný nosič.

16. Farmaceutický prostriedok, vyznačujúci sa tým, množstvo zlúčeniny podľa nároku 12 a farmaceutický prijateľný nosič.

17. Použitie zlúčeniny vzorca (1) že že že že obsahuje terapeuticky obsahuje terapeuticky obsahuje terapeuticky obsahuje terapeuticky účinné účinné účinné účinné kde

Ari je tienyl voliteľne substituovaný až jedným metylom alebo etylom, a

Ar₂ je vybraný zo skupiny zahrnujúcej tienyl, furyl a substituovaný fenyl, kde fenylové substituenty sú vybrané zo skupiny zahrnujúcej C].₆alkyl, halogén, Ci_₆halogénalkyl, Ci.₆alkoxy, Ci-ôhalogénalkoxy a kyano, na výrobu lieku na liečbu pacientov s ochorením, pri ktorom je indikovaný inhibítor transportu glycínu, kde ochorenie je vybrané zo skupiny zahrnujúcej schizofréniu, kognitívnu dysfunkciu, demencie (vrátane Alzheimerovej choroby), poruchy pozornosti, depresie, autizmus, Rettovu chorobu, detskú dezintegratívnu poruchu, Aspergerovu chorobu a atypický autizmus.

18. Použitie zlúčeniny vzorca (1) podľa nároku 17, kde ochorením je schizofrénia.

19. Použitie zlúčeniny podľa nároku 18, kde zlúčeninou je (Z)-N-(l-(4-(2-furyl)fenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín.

20. Použitie zlúčeniny podľa nároku 18, kde zlúčeninou je (Z)-N-(l-(4-(4-izopropylfenyl)fenyl)-l-(3-tienyl)prop-1 -én-3-yl)sarkozín.

21. Použitie zlúčeniny podľa nároku 17, kde zlúčeninou je (Z)-N-(l-(4-(2-furyl)fenyl)-l-(3-tienyl)prop-l-én-3-yl)sarkozín.

22. Použitie zlúčeniny podľa nároku 17, kde zlúčeninou je (Z)-N-(l-(4-(4-izopropylfenyl)fenyl)-l-(3-tienyl)prop-1 -én-3 -yl)sarkozín.

23. Použitie zlúčeniny (Z)-N-(l-(4-(3-tienyl)fenyl)-l-(2-metylfenyl)prop-l-én-3-yl)sarkozínu na výrobu lieku na liečbu pacientov s ochorením, pri ktorom je indikovaný inhibítor transportu glycínu, kde ochorenie je vybrané zo skupiny zahrnujúcej schizofréniu, kognitívnu dysfunkciu, demencie (vrátane Alzheimerovej choroby), poruchy pozornosti, depresie, autizmus, Rettovu chorobu, detskú dezintegratívnu poruchu, Aspergerovu chorobu a atypický autizmus.

24. Spôsob prípravy j odídu C;

pomocou nátrium-bis(2-metoxyetoxy)alumíniumhydridu (Red-Al); a

b) reakciu získaného medziproduktu s jódom za zisku jodidu C.

25. Spôsob prípravy medziproduktu D;

CO2tBu (D), vyznačujúci sa tým, že zahrnuje: a) redukciu medziproduktu B pomocou nátrium-bis(2-metoxyetoxy)alumíniumhydridu (Red-Al) a reakciu získaného medziproduktu s jódom za zisku jodidu C;

26. Spôsob podľa nároku 25, vyznačujúci sa tým, že stupeň konverzie (b) zahrnuje reakciu s N-brómsukcínimidom a trifenylfosfmom.

27. Spôsob prípravy medziproduktu E;

^XXcO₂tBu (E);

kde Ar, je tienyl voliteľne substituovaný až jedným metylom alebo etylom, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje:

a) redukciu medziproduktu B

28. Spôsob podľa nároku 27, vyznačujúci sa tým, že stupeň konverzie (b) zahrnuje reakciu s N-brómsukcínimidom a trifenylfosfínom.

29. Spôsob prípravy medziproduktu G;

(G).

kde

Ar₁ je tienyl voliteľne substituovaný až jedným metylom alebo etylom; a

Ar₂ je vybraný zo skupiny zahrnujúcej tienyl, furyl a substituovaný fenyl, kde fenylové substituenty sú vybrané zo skupiny zahrnujúcej C|.₆alkyl, halogén, Ci_₆halogénalkyl, Ci.₆alkoxy, Ci_₆halogénalkoxy a kyano; alebo kde Ari je 2-metylfenyl, keď Ar₂ je 3-tienyl, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje: a) redukciu medziproduktu B pomocou nátrium-bis(2-metoxyetoxy)alumíniumhydridu (Red-Al) a reakciu získaného medziproduktu s jódom za zisku j odídu C;

c) nahradenie bromidu terc-butylesterom sarkozínu za zisku medziproduktu D

CO₂tBu (D),

d) kondenzáciu medziproduktu D s kyselinou borónovou vzorca Ar₁B(OH)₂, kde Ar, je rovnaký, ako je opísané, za prítomnosti paládiového (0) katalyzátora, za zisku medziproduktu vzorca (E)

e) kondenzáciu medziproduktu E s kyselinou arylborónovou vzorca Ar₂B(OH)₂, kde Ar₂ je rovnaký, ako je opísané, za prítomnosti paládiového (0) katalyzátora, za zisku medziproduktu vzorca (F)

f) hydrolýzovanie esterovej skupiny medziproduktu F za zisku zlúčeniny vzorca G.

30. Spôsob podľa nároku 29, vyznačujúci sa tým, že stupeň konverzie (b) zahrnuje reakciu s N-brómsukcínimidom a trifenylfosfmom.

31. Spôsob podľa nároku 29, vyznačujúci sa tým, že stupeň hydrolýzy (f) zahrnuje reakciu s kyselinou mravčou.

32. Spôsob podľa nároku 29 na prípravu zlúčeniny vzorca (1) kde:

Ar| je tiofénová skupina, ktorou môže byť 2 alebo 3 tiofén a ktorá je voliteľne substituovaná až jedným substituentom vybraným zo skupiny zahrnujúcej metyl alebo etyl; a

Ar₂ je vybraný zo skupiny zahrnujúcej tiofén, furán a substituovaný fenyl, kde substituent na fenylovej skupine je vybraný zo skupiny zahrnujúcej C].₆alkyl, halogén, C[.₆halogénalkyl, C[.₆alkoxy, Ci_₆halogénalkoxy, kyano, alebo kde Ar, je 2-metylfenyl, keď Ar₂ je 3-tienyl.

33. Spôsob podľa nároku 29 na prípravu zlúčeniny vybranej zo skupiny zahrnujúcej: (Z)-N-(l-(4-(2-furyljfenyl)-1 -(3-tienyl)prop-1 -én-3 -yljsarkozín a (Z)-N-( 1 -(4-(4-izopropylfenyl)fenyl)-1 -(3-tienyl)prop-1 -én-3-yl)sarkozín.

34. Zlúčenina vzorca (C) (C)

35. Zlúčenina vzorca (D)

Pr CO₂tBu (ΓΎ II Ί Br M (D) 36. Zlúčenina vzorca (E) V ^XCO₂tBu 1 Pr Ar, Br M (E);

kde Aľi je voliteľne substituovaný až jedným mety lom alebo etylom.