SK287183B6

SK287183B6 - Glukopyranozyloxybenzylbenzenový derivát, farmaceutická kompozícia s jeho obsahom, ich použitie a medziprodukt

Info

Publication number: SK287183B6
Application number: SK1297-2002A
Authority: SK
Inventors: Hideki Fujikura; Nobuhiko Fushimi; Toshihiro Nishimura; Kazuya Tatani; Kenji Katsuno; Masahiro Hiratochi; Yoshiki Tokutake; Masayuki Isaji
Original assignee: Kissei Pharmaceutical Co., Ltd.
Priority date: 2000-03-17
Filing date: 2001-03-15
Publication date: 2010-02-08
Also published as: US7465712B2; NZ521369A; RU2002124873A; CN1177857C; JP3773450B2; TR200202200T2; AU2001241146B8; ZA200207418B; WO2001068660A1; HUP0300057A3; EP1270584A1; BG107102A; IL151757A0; BR0109323A; UA72586C2; NO20024424D0; NO20024424L; IL151757A; CZ20023023A3; US20040053855A1

Abstract

Opísaný je glukopyranozyloxybenzénový derivát všeobecného vzorca (I), kde R1 predstavuje atóm vodíka alebo hydroxy (C1-6 alkylovú) skupinu; R2 predstavuje C1-6 alkylovú skupinu, C1-6 alkoxylovú skupinu, C1-6 alkyltioskupinu, hydroxy (C1-6 alkylovú) skupinu, hydroxy (C1-6 alkoxylovú) skupinu, hydroxy (C1-6 alkyltio) skupinu, C1-6 alkoxysubstituovanú (C1-6 alkylovú) skupinu, C1-6 alkoxysubstituovanú (C1-6 alkoxylovú) skupinu alebo C1-6 alkoxysubstituovanú (C1-6 alkyltio) skupinu alebo jeho farmaceuticky prijateľná soľ, farmaceutická kompozícia s jeho obsahom, ktorá je inhibítorom ľudského SGLT2 a sama osebe je použiteľná na prevenciu alebo liečenie cukrovky alebo s ňou spojených komplikácií, použitie tohto derivátu na výrobu liečiva na prevenciu alebo liečenie choroby spojenej s hyperglykémiou, ako je cukrovka, diabetická komplikácia alebo obezita a benzylfenylový medziprodukt.

Description

Oblasť techniky

Vynález sa týka glukopyranozyloxybenzylbenzénových derivátov a ich farmaceutický prijateľných solí, ktoré sú užitočné na prevenciu alebo liečenie cukrovky alebo s ňou spojených komplikácií. Týka sa aj farmaceutickej kompozície s jeho obsahom a použitia týchto derivátov na výrobu liečiva. Okrem toho sa tiež týka medziproduktov.

Doterajší stav techniky

Cukrovka je jednou z chorôb spojenou so životným štýlom, ktorej pôvod je v zmene jedálnych návykov a v nedostatku pohybu. Z tohto dôvodu sa u pacientov s cukrovkou uskutočňuje terapia diétou a pohybom. Okrem toho ak je ťažké zaistiť dostatočnú kontrolu a plynulé uskutočňovanie, uskutočňuje sa súčasne liečba liekmi. V súčasnosti sa ako antidiabetiká používajú biguanidy, sulfonylmočoviny a látky na zníženie inzulínovej rezistencie. Biguanidy a sulfonylmočoviny však niekedy môžu mať vedľajšie príznaky, biguanidy môžu spôsobovať laktátovú acidózu a sulfonylmočoviny hypoglykémiu. V prípade použitia látok na zníženie inzulínovej rezistencie sú niekedy pozorované vedľajšie príznaky, ako opuchy, a majú tiež podiel na vývoji obezity. Preto, aby sa vyriešili tieto problémy, bolo nutné vyvinúť antidiabetiká s novým mechanizmom.

V posledných rokoch sa vyvíjal nový typ antidiabetík, ktoré podporujú vylučovanie glukózy močom a znižujú hladinu glukózy v krvi tým, že zabraňujú nadmernej resorpcii glukózy v obličkách (J. Clin. Invest., Zv. 79 str. 1510 - 1515 (1987)). Okrem toho je publikované, že SGLT2 (Na+/glukózový kontransportér 2) je prítomný v S1 časti obličkových proximálnych tubulov a podieľa sa prevažne na resorpcii glukózy pri glomerulámej filtrácii (J. Clin. Invest. Zv. 93, str. 397 - 404 (1994)). Preto teda, inhibicia aktivity ľudského SGLT2 zabraňuje resorpcii prebytku glukózy v obličkách, následne podporuje vylučovanie prebytku glukózy močom a normalizuje hladinu glukózy v krvi.

Preto je teda žiaduci rýchly vývoj antidiabetík, ktoré majú silnú inhibičnú aktivitu k ľudskému SGLT2 a majú nový mechanizmus. Pretože takéto látky podporujú vylučovanie prebytku glukózy močom a následne znižovanie akumulácie glukózy v tele, dá sa od nich tiež očakávať, že budú zabraňovať alebo zmierňovať obezitu.

Podstata vynálezu

Vynálezcovia svedomito hľadali a študovali zlúčeniny, ktoré majú inhibičnú aktivitu proti ľudskému SGLT2. Výsledkom je nájdenie glukopyranozyloxybenzylbenzénových derivátov, znázornených nasledujúcim všeobecným vzorcom (I), a ktoré majú vynikajúcu inhibičnú aktivitu proti ľudskému SGLT2, ako je uvedené, čím tvoria základ predkladaného vynálezu.

Predkladaný vynález poskytuje nasledujúce glukopyranozyloxybenzylbenzénové deriváty a ich farmaceutický prijateľné soli, ktoré majú inhibičnú aktivitu proti ľudskému SGLT2 in vivo a exkréciu prebytočnej glukózy v moči navodzujú hypoglykemický účinok v dôsledku zabránenia reabsorpcie takejto glukózy v obličkách, a farmaceutické zmesi obsahujúce rovnaké látky a ich medziprodukty.

Predmetom vynálezu je teda glukopyranozyloxybenzylbenzénový derivát všeobecného vzorca (I)

HO'

HO γ'ΌΗ OH kde R¹ predstavuje atóm vodíka alebo hydroxy(nižšiu alkylovú) skupinu; R² predstavuje nižšiu alkylovú skupinu, nižšiu alkoxylovú skupinu, nižšiu alkyltioskupinu, hydroxy(nižšiu alkylovú) skupinu, hydroxy(nižšiu alkoxylovú) skupinu, hydroxy(nižšiu alkyltiojskupinu, nižšiu alkylovú skupinu substituovanú nižšou alkoxyskupinou, nižšiu alkoxylovú skupinu substituovanú nižšou alkoxyskupinou alebo nižšiu alkyltioskupinu substituovanú nižšou alkoxyskupinou, alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ. Ak nie je uvedené inak, označenie „nižší“ sa v opise vzťahuje na reťazec s 1 až 6 atómmi uhlíka.

Predkladaný vynález tiež súvisí s farmaceutickými zmesami, obsahujúcimi ako aktívnu zložku glukopyranozyloxybenzylbenzénový derivát, znázornený uvedeným všeobecným vzorcom (I) alebo jeho farmaceutický prijateľnú soľ.

Predkladaný vynález súvisí so spôsobom na zabránenie alebo liečbu chorôb spojenou s hyperglykémiou, ktorá zahrnuje podávanie glukopyranozyloxybenzylbenzénového derivátu, znázorneného uvedeným všeobecným vzorcom (I) alebo jeho farmaceutický prijateľnú soľ.

Predkladaný vynález súvisí s použitím glukopyranozyloxybenzylbenzénového derivátu, znázorneného uvedeným všeobecným vzorcom (I) alebo jeho farmaceutický prijateľnú soľ na výrobu farmaceutických zmesí na zabránenie alebo liečbu choroby spojenej s hyperglykémiou.

Predmetom vynálezu je tiež benzylfenolový derivát všeobecného vzorca (II)

OH kde R¹¹ predstavuje atóm vodíka alebo chránenú hydroxy(nižšiu alkylovú) skupinu; R¹² predstavuje nižšiu alkylovú skupinu, nižšiu alkoxylovú skupinu, nižšiu alkyltioskupinu, chránenú hydroxy(nižšiu alkylovú) skupinu, chránenú hydroxy(nižšiu alkoxylovú) skupinu, chránenú hydroxy(nižšiu alkyltio)skupinu, nižšiu alkylovú skupinu substituovanú nižšou alkoxyskupinou, nižšiu alkoxylovú skupinu substituovanú nižšou alkoxyskupinou alebo nižšiu alkyltioskupinu substituovanú nižšou alkoxyskupinou; s podmienkou, že R¹² nie je metylová skupina, etylová skupina, izopropylová skupina, terc-butylová skupina alebo metoxylová skupina, keď R¹¹ je atóm vodíka, alebo jeho soľ, ako medziprodukt na výrobu glukopyranozyloxybenzylbenzénových derivátov všeobecného vzorca (I).

V predkladanom vynáleze sa termínom „nižšia alkylová skupina“ rozumie nerozvetvená alebo rozvetvená alkylová skupina, ktorá má 1 až 6 atómov uhlíka ako metylová skupina, etylová skupina, propylová skupina, izopropylová skupina, butylová skupina, izobutylová skupina, sek.butylová skupina, terc, butylová skupina, pentylová skupina, izopentylová skupina, neopentylová skupina, terc, pentylová skupina, hexylova skupina alebo podobné; termínom „nižšia alkoxylová skupina“ sa rozumie nerozvetvená alebo rozvetvená alkoxylová skupina, ktorá má 1 až 6 atómov uhlíka ako metoxylová skupina, etoxylová skupina, propoxylová skupina, izopropoxylová skupina, butoxylová skupina, izobutoxylová skupina, sek.butoxylová skupina, terc.butoxylová skupina, pentoxylová skupina, izopentoxylová skupina, neopentoxylová skupina, terc, pentoxylová skupina, hexyloxylová skupina alebo podobné; a termínom „nižšia alkytio skupina“ sa mieni nerozvetvená alebo rozvetvená alkytio skupina, ktorá má 1 až 6 atómov uhlíka ako metyltio skupina, etyltio skupina, propyltio skupina, izopropyltio skupina, butyltio skupina, izobutyltio skupina, sek.butyltio skupina, terc, butyltio skupina, pentyltio skupina, izopentyltio skupina, neopentyltio skupina, terc, pentyltio skupina, hexyltio skupina alebo podobné. Termínom „hydroxy-(nižšia alkylová)skupina“ sa rozumie nerozvetvená alebo rozvetvená hydroxy-alkylová skupina, ktorá má 1 až 6 atómov uhlíka ako hydroxymetylová skupina, 2-hydroxyetylová skupina, 1-hydroxyetylová skupina, 3-hydroxypropylová skupina, 2-hydroxypropylová skupina, 1-hydroxypropylová skupina, 2-hydroxy-l-metyletylová skupina, 4-hydroxybutylová skupina, 3-hydroxybutylová skupina, 2-hydroxybutylová skupina, 1-hydroxybutylová skupina, 5-hydroxypentylová skupina, 4-hydroxypentylová skupina, 3-hydroxypentylová skupina, 2-hydroxypentylová skupina, 1-hydroxypentylová skupina, 6-hydroxyhexylová skupina, 5-hydroxyhexylová skupina, 4-hydroxyhexylová skupina, 3-hydroxyhexylová skupina, 2-hydroxyhexylová skupina, 1-hydroxyhexylová skupina alebo podobné; termínom „hydroxy(nižšia alkoxylová)skupina sa rozumie nerozvetvená alebo rozvetvená hydroxy-alkoxylová skupina, ktorá má 1 až 6 atómov uhlíka ako 2-hydroxyetoxylová skupina, 3-hydroxypropoxylová skupina, 2-hydroxypropoxylová skupina, 2-hydroxy-l-metyletoxylová skupina, 4-hydroxybutoxylová skupina, 3-hydroxybutoxylová skupina, 2-hydroxybutoxylová skupina, 5-hydroxypentyloxylová skupina, 4-hydroxypentyloxylová skupina, 3-hydroxypentyloxylová skupina, 2-hydroxypentyloxylová skupina, 6-hydroxyhexyloxylová, 5-hydroxyhexyloxylová, 4-hydroxyhexyloxylová, 3-hydroxyhexyloxylová, 2-hydroxyhexyloxylová alebo podobné; a termínom „hydroxy(nižšia alkyltio) skupina sa rozumie nerozvetvená alebo rozvetvená hydroxyalkyltio skupina, ktorá má 1 až 6 atómov uhlíka ako hydroxymetyltio skupina, 2-hydroxyetyltio skupina, 1-hydroxyetyltio skupina, 3-hydroxypropyltio skupina, 2-hydroxypropyltio skupina, 1-hydroxypropyltio skupina, 2-hydroxy-1-metyletyltio skupina, 4-hydroxybutyltio skupina, 3-hydroxybutyltio skupina, 2-hydroxybutyltio skupina, 1-hydroxybutyltio skupina, 5-hydroxypentyltio skupina, 4-hydroxypentyltio skupina, 3-hydroxypentyltio skupina, 2-hydroxypentyltio skupina, 1-hydroxypentyltio skupina, 6-hydroxyhexyltio skupina, 5-hydroxyhexyltio skupina, 4-hydroxyhexyltio skupina, 3-hydroxyhexyltio skupina, 2-hydroxyhexyltio skupina, 1-hydroxyhexyltio skupina a podobné. Termínom „nižšia alkoxy-substituovaná (nižšia alkylová)skupina sa rozumie uvedená hydroxy(nižšia alkylová skupina O-alkylovaná uvedenou nižšou alkylovou skupinou; termínom „nižšia alkoxy-substituovaná (nižšia alkoxylovájskupina sa rozumie uvedená hydroxy(nižšia alkoxylovájskupina O-alkylovaná uvedenou nižšou alkylovou skupinou; a termínom „nižšia alkoxy-substituovaná (nižšia alkytio) skupina sa rozumie uvedená hydroxy(nižšia alkytiojskupina O-alkylovaná uvedenou nižšou alkylovou skupinou.

Termínom „hydroxy-chrániaca skupina“ sa rozumie hydroxy-chrániaca skupina všeobecne používaná v organických reakciách, ako je benzylová skupina, metoxymetylová skupina, acetylová skupina alebo podobné.

V substituente R¹ je uprednostňovaný atóm vodíka alebo hydroxyalkylová skupina, ktorá má 1 až 3 atómy uhlíka. V substituente R² sú uprednostňované nižšia alkylová skupina, nižšia alkoxylová skupina a hydroxy (nižšia alkylová)skupina, a viac uprednostňované sú alkylová skupina, ktorá má 1 až 4 atómy uhlíka, alkoxylová skupina, ktorá má 1 až 3 atómy uhlíka a hydroxyalkylová skupina, ktorá má 1 až 3 atómy uhlíka.

Napríklad, zlúčeniny predkladaného vynálezu, znázornené uvedeným všeobecným vzorcom (I), môžu byť pripravené použitím benzylfenolového derivátu predkladaného vynálezu, znázorneného všeobecným vzorcom (II) podľa nasledujúceho postupu:

Proces:· 1

Proces.·. 2

--------------------------->Alkalická hydrolýza kde R¹¹ predstavuje atóm vodíka alebo chránenú hydroxy(nižšiu alkylovújskupinu; R¹² predstavuje nižšiu alkylovú skupinu, nižšiu alkoxylovú skupinu, nižšiu alkytio skupinu, chránenú hydroxy-(nižšiu alkylovújskupinu, chránenú hydroxy-(nižšiu alkoxylovújskupinu, chránenú hydroxy-(nižšiu alkyltiojskupinu, nižšiu alkoxy-substituovanú (nižšiu alkylovújskupinu, nižšiu alkoxy-substituovanú (nižšiu alkoxylovú) skupinu alebo nižšiu alkoxy-substituovanú (nižšiu alkytio) skupinu; X predstavuje odstupujúcu skupinu ako trichlóracetoimidoyloxylová skupina, acetoxylová skupina, atóm brómu alebo fluóru; R¹ a R² majú rovnaký význam, ako je uvedené.

Postup 1

Glykozid znázornený uvedeným všeobecným vzorcom (IV) môže byť pripravený vystavením benzylfenolového derivátu, znázorneného uvedeným všeobecným vzorcom (II) alebo jeho soli glykozidácii použitím glykozylového donoru znázorneného uvedeným všeobecným vzorcom (III), ako je 2,3,4,6-tetra-O-acetyl-l-0-trichlóracetoimidoyl-o!-D-glukopyranóza, l,2,3,4,6-penta-0-acety-/3-D-glukopvranóza, 2,3,4,6-tetra-Oacetyl-a-D-glukopyranozylbromid a 2,3,4,6-tetra-O-acetyl-/3-D-glukopyranozylfluorid za prítomnosti aktivačného činidla, ako je bórtrifluorid dietyléterový komplex, trifluórmetánsulonát strieborný, chlorid ciničitý alebo trimetylsilyl trifluórmetansulfonát v intertnom rozpúšťadle. Ako použité rozpúšťadlo môžu byť uvedené dichlórmetán, toluén, acetonitril, nitrometán, etylacetát, dietyléter, chloroform, z nich zmiešané rozpúšťadlo a im podobné. Teplota reakcie je obvykle od -30 °C po teplotu refluxu, reakčný čas je obvykle od 10 minút do 1 dňa, meniaci sa v závislosti od použitého východiskového materiálu, rozpúšťadla a teploty reakcie.

Postup 2

Zlúčenina (I) predkladaného vynálezu môže byť pripravená vystavením glykozidu, znázorneného uvedeným všeobecným vzorcom (IV) alkalickej hydrolýze na odstránenie hydroxylových chrániacich skupín. Ako použité rozpúšťadlo môžu byť uvedené voda, metanol, etanol, tetrahydrofurán a z nich zmiešané rozpúšťadlo a im podobné, a ako alkalické látky môžu byť použité hydroxid sodný, metoxid sodný, etoxid sodný alebo im podobné. Teplota úpravy je obvykle od 0 °C po teplotu refluxu, čas úpravy je obvykle od 30 minút do 6 hodín, meniaci sa v závislosti od použitého východiskového materiálu, rozpúšťadla a teploty úpravy. Táto úprava môže byť uskutočnená vhodne zmenou alebo pridaním iného postupu obvyklým spôsobom podľa použitej hydroxy-chrániacej skupiny.

Napríklad, zlúčeniny predkladaného vynálezu a ich soli, znázornené uvedeným všeobecným vzorcom (II), ktoré sú použité ako východiskové materiály v zmienených postupoch výroby, môžu byť pripravené podľa nasledujúceho postupu:

Dess-Martinovno činidla

Katalytická Proces D Proces C Hydrogenácia (Príležitostné odstránenie alebo vnesenie chrániacej skupiny) (následná redukcia a

Odstránenie chrániacej skupiny Redukcia (následne redukcia a vnesenie chrániacej skupiny, kde R⁴ je nižšia vnesenia alkoxykarbonylová skupina chrániacej skupiny kde R⁴ je nižšia alkoxykarbonylová skupina

alebo soľ, kde M predstavuje atóm vodíka alebo hydroxychrániacej skupiny; R⁴ predstavuje atóm vodíka, chránenú hydroxy-(nižšiu alkylovú) skupinu alebo nižšiu alkoxykarbonylovú skupinu; jeden z Y a Z je MgBr, MgCl, Mgl alebo atóm lítia, zatiaľ čo ten druhý je formylová skupina; a R¹¹ a R¹² majú rovnaký význam, ako bolo definované.

Postup A

Zlúčenina znázornená uvedeným všeobecným vzorcom (VII) môže byť pripravená kondenzáciou benzaldehydového derivátu, znázorneného uvedeným všeobecným vzorcom (V), s Grignardovým činidlom alebo lítiovým činidlom, znázorneným uvedeným všeobecným vzorcom (VI), alebo kondenzáciou Grigardovho činidla alebo lítiového činidla, znázorneného uvedeným všeobecným vzorcom (V) s benzaldehydovým derivátom znázorneným uvedeným všeobecným vzorcom (VI) v intertnom rozpúšťadle. Ako použité rozpúšťadlo môžu byť uvedené tetrahydrofurán, dietyléter z nich zmiešané rozpúšťadlo a im podobné. Teplota reakcie je obvykle od -78 °C do teploty refluxu, reakčný čas je obvykle 10 minút až 1 deň, meniaci sa v závislosti od použitého východiskového materiálu, rozpúšťadla a teploty reakcie.

Postup B

Zlúčenina znázornená uvedeným všeobecným vzorcom (VIII) môže byť pripravená vystavením zlúčeniny, znázornenej uvedeným všeobecným vzorcom (VII), oxidácii použitím Dess-Martinovho činidla v intertnom rozpúšťadle. Ako použité rozpúšťadlo môžu byť uvedené dichlórmetan, chloroform, acetonitril, z nich zmiešané rozpúšťadlo a im podobné. Teplota reakcie je obvykle od 0 °C do teploty refluxu, reakčný čas je obvykle 1 hodina až 1 deň, meniaci sa v závislosti od použitého východiskového materiálu, rozpúšťadla a teploty reaakcie.

Postup C

Zlúčenina, znázornená uvedeným všeobecným vzorcom (II), môže byť pripravená odstránením chrániacej skupiny M zlúčeniny, znázornenej uvedeným všeobecným vzorcom (VIII), (1) kondenzáciou výslednej zlúčeniny s metylchloroformátom v prítomnosti bázy, ako je trietylamín, diizopropyletylamín alebo N,N-dimetylaminopyridín v intertnom rozpúšťadle a (2) vystavením výsledného uhličitanového derivátu redukcii použitím redukčného činidla ako nátriumborohydrid. Ako použité rozpúšťadlo v reakcii (1) môžu byť uvedené tetrahydrofurán, dichlórmetán, acetonitril, etylacetát, dietyléter, z nich zmiešané rozpúšťadlo a im podobné. Teplota reakcie je obvykle od 0 °C do teploty refluxu, reakčný čas je obvykle 30 minút až 1 deň, meniaci sa v závislosti od použitého východiskového materiálu, rozpúšťadla a teploty reakcie. Ako rozpúšťadlo použité v reakcii (2) môže byť uvedený tetrahydrofurán a voda, a im podobné. Teplota reakcie je obvykle od 0 °C do teploty refluxu, reakčný čas je obvykle 1 hodina až 1 deň, meniaci sa v závislosti od použitého materiálu, rozpúšťadla a teploty reakcie. V prípade, že R⁴ je nižšia alkoxykarbonylová skupina, zlúčeniny predkladaného vynálezu, znázornené uvedeným všeobecným vzorcom (II), môžu byť získané vystavením skupiny redukcii na hydroxymetylovú skupinu použitím redukčného činidla ako hydridu hlinitolítneho v intertnom rozpúšťadle a chránením hydroxylovej skupiny bežným spôsobom. Ako rozpúšťadlo použité pri redukcii môže byť uvedený dietyléter, tetrahydroftirán, z nich zmiešané rozpúšťadlo a im podobné. Teplota reakcie je obvykle od 0 °C do teploty refluxu, reakčný čas je obvykle 10 minút až 1 deň, meniaci sa v závislosti od použitého materiálu, rozpúšťadla a teploty reakcie. Zlúčenina predkladaného vynálezu, znázornená uvedeným všeobecným vzorcom (II), môže byť prevedená bežným spôsobom na soľ ako sodnú soľ alebo draselnú soľ.

Postup D

Zlúčenina predkladaného vynálezu, znázornená uvedeným všeobecným vzorcom (I), môže byť pripravená vystavením zlúčeniny znázornenej uvedeným všeobecným vzorcom (VII) katalytickej hydroagenácii použitím palládiového katalyzátora, ako je palládiový uhoľný prášok v prítomnosti alebo za neprítomnosti kyseliny, ako je kyselina chlorovodíková v intertnom rozpúšťadle, a v prípade potreby odstránením alebo vnesením chrániacej skupiny bežným spôsobom. Ako rozpúšťadlo použité pri katalytickej hydrogenácii môže byť uvedený metanol, etanol, tetrahydrofurán, etylacetát, kyselina octová, izopropanol, z nich zmiešané rozpúšťadlo a im podobné. Teplota reakcie je obvykle od laboratórnej teploty do teploty refluxu, a reakčný čas je obvykle 30 minút až 1 deň, meniaci sa v závislosti od použitého východiskového materiálu, rozpúšťadla a teploty reakcie. V prípade, že R⁴ je nižšia alkoxykarbonylová skupina, zlúčeniny predkladaného vynálezu, znázornené uvedeným všeobecným vzorcom (II), môžu byť získané vystavením skupiny redukcii na hydroxymetylovú skupinu použitím redukčného činidla ako hydridohlinitanu sodného v inertnom rozpúšťadle a chránením hydroxylovej skupiny bežným spôsobom. Ako rozpúšťadlo použité pri redukcii môže byť uvedený dietyléter, tetrahydrofurán, z nich zmiešané rozpúšťadlo a im podobné. Teplota vynálezu, znázornená uvedeným všeobecným vzorcom (II), môže byť prevedená bežným spôsobom na soľ ako na sodnú soľ alebo draselnú soľ.

Zlúčeniny predkladaného vynálezu získané uvedeným výrobným postupom môžu byť izolované a purifikované bežnými separačnými spôsobmi, ako je fŕakčná rekryštalizácia, purifikácia použitím chromatografie, extrakcie rozpúšťadlom a extrakcia na pevnej fáze.

Glukopyranozyloxybenzylbenzénové deriváty predkladaného vynálezu, znázornené uvedeným všeobecným vzorcom (I), môžu byť obvyklými spôsobom premenené na svoje farmaceutický prijateľné soli. Príklady takýchto solí zahrnujú anorganické soli, ako sú sodná soľ alebo draselná soľ.

Zlúčeniny predkladaného vynálezu, znázornené uvedeným všeobecným vzorcom (I), zahrnujú ich hydráty a ich solváty s farmaceutický prijateľnými rozpúšťadlami ako etanol.

Zlúčeniny predkladaného vynálezu a ich farmaceutický prijateľné soli, znázornené uvedeným všeobecným vzorcom (I), majú vynikajúcu inhibičnú aktivitu proti ľudskému SGLT2 a sú neobyčajne užitočné ako prostriedky na prevenciu alebo liečbu cukrovky, diabetických komplikácií, obezity a podobne. Napríkad v nasledujúcej skúške inhibičného účinku na aktivitu ľudského SGLT2 preukázali zlúčeniny predkladaného vynálezu silnú inhibičnú aktivitu proti ľudskému SGLT2.

Keď sa farmaceutické zmesi predkladaného vynálezu používajú pri praktickej liečbe, užívajú sa v rôznych typoch dávok, v závislosti od ich aplikácie. Ako príklady typov dávok môžu byť uvedené prášky, granuly, jemné granuly, suché sirupy, tablety, kapsuly, injekcie, roztoky, masti, čapíky, obklady a podobne, ktoré sa používajú orálne alebo parenterálne.

Tieto farmaceutické zmesi môžu byť pripravené zmiešaním s alebo nariedením a rozpustením v príslušných farmaceutických prísadách ako excipientné látky, dezintegrátory, väzobné látky, lubrikačné látky, dilučné látky, pufŕy, izotonicita, antiseptiká, zvlhčovadlá, emulgátory, dispergačné činidlá, stabilizátory, rozpúšťacie činidlá a podobné, a pozostavením zmesi v súlade s obvyklým spôsobom.

Keď sa farmaceutické zmesi predkladaného vynálezu používajú pri praktickej liečbe, je dávka zlúčeniny ako aktívnej zložky, znázornenej uvedeným, všeobecným vzorcom (I) alebo jej farmaceutický prijateľná soľ, približne odhadnutá v závislosti od veku, pohlavia, telesnej váhy a stupňa príznakov a liečby každého pacienta, a je približne v rozmedzí od 0,1 do 1 000 mg za deň pre dospelú osobu v prípade orálneho podávania, a približne v rozmedzí od 0,01 do 300 mg za deň pre dospelú osobu v prípade parenterálnej aplikácie, a denná dávka môže byť rozdelená do jednej alebo niekoľkých dávok za deň a dávkovaná primerane.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Predkladaný vynález je ďalej detailnejšie objasnený nasledujúcimi referenčnými príkladmi, príkladmi a príkladmi skúšok. Predkladaný vynález však nie je týmto obmedzený.

Referenčný príklad 1

4-(3 -Benzyloxypropyljbrómbenzén

Suspenzia hydridu sodného (60 %, 0,97 g), 3-(4-brómfenyl)-l-propanolu (1,0 g) a benzylbromidu (0,69 ml) v benzéne (24 ml) bola zmiešaná 7 hodín za refluxu. Po ochladení na okolitú teplotu bol k reakčnej zmesi pridaný nasýtený vodný roztok chloridu amónneho (50 ml), a zmes bola extrahovaná etylacetátom (100 ml). Organická vrstva bola premytá vodou (40 ml) a soľankou (40 ml) a vysušená bezvodým síranom sodným. Rozpúšťadlo bolo odstránené za zníženého tlaku a zvyšok bol purifikovaný kolónovou chromatografiou na silikagéli (eluent: hexán/etylacetát = 20/1) za vzniku 4-(3-benzyloxypropyl)brómbenzénu (1,4 g). 'H-NMR (CDClj) δ ppm:

1,85 - 2,00 (2H, m), 2 - 60 - 2,75 (2H,m), 3,47 (2H, t, J = 6,2 Hz), 4,50 (2H, s), 7,00 - 7,10 (2H,m), 7,20 až 7,45 (7H,m).

Referenčný príklad 2

Metyl 4-(4-etylbenzyl)3-hydroxybenzoát

K roztoku l-bromo-4-etylbenzénu (0,41 ml) v tetrahydrofuráne (15 ml) bol pridaný 1,45 mol/1 roztok terc.butyllítia v n-pentáne (2,3 ml) v argónovej atmosfére pri -78 °C. Potom bola zmes miešaná 10 minút pri -78 °C a k reakčnej zmesi bol pridaný roztok 4-formyl-3-hydroxybenzoátu (0,18 g; v tetrahydrofuráne (5 ml). Po 45 minútovom miešaní zmesi za chladenia ľadom bol k reakčnej zmesi pridaný nasýtený vodný roztok chloridu amónneho a voda, a zmes bola extrahovaná etylacetátom. Extrakt bol premytý vodou a vysušený bezvodým síranom horečnatým, a rozpúšťadlo bolo odstránené za zníženého tlaku. Zvyšok bol purifikovaný kolónovou chromatrografiou na silikagéli (eluent: hexán/etylacetát = 3/1) za vzniku difenylmetanolovej zlúčeniny (0,27 g). Získaná difenylmetanolová zlúčenina (0,27 g) bola rozpustená v metanole (5 ml) a k roztoku bola pridaná koncentrovaná kyselina chlorovodíková (0,08 ml) a 10 % palládiový uhoľnatý prášok (54 mg). Potom bola zmes miešaná 18 hodín vo vodíkovej atmosfére. Pri laboratórnej teplote bol katalyzátor odstránený filtráciou a filtrát bol zakoncentrovaný za zníženého tlaku. Zvyšok bol purifikovaný kolónovou chromatografiou na silikagéli (eluent: hexán/etylacetát 3/1) za vzniku metyl 4-(4-etylbenzyl)-3-hydroxybenzoátu (0,20 g).

’H-NMR (CDCIj) δ ppm:

1,22 (3H, t), J = 7,6 Hz), 2,62 (2H, q, J = 7,6 Hz), 3,89 (3H, s), 4,00 (2H, s), 5,01 (1H, s), 7,05 - 7,25 (5H, m), 7,47 (1H, d, J = 1,6 Hz), 7,56 (1H, dd, J = 1,6, 7,8 Hz)

Referenčný príklad 3

Metyl 3-hydroxy-4-(4-propoxybenzyl)benzoát

K roztoku l-allyloxy-4-brombenzénu (3,1 g) v tetrahydrofuráne (70 ml) bol pridaný 1,45 mol/1 roztok terc, butyllítia v n-pentáne (11 ml) v argónovej atmosfére pri -78 °C. Potom bola zmes miešaná 5 minút pri -76 °C a k reakčnej zmesi bol pridaný roztok 4-formyl-3-hydroxybenzoátu (0,89 g) v tetrahydrofuráne (15 ml). Po 30 minútovom miešaní zmesi za chladenia ľadom bol k reakčnej zmesi pridaný nasýtený vodný roztok chloridu amónneho a voda, a zmes bola extrahovaná etylacetátom. Extrakt bol premytý vodou a vysušený bezvodým síranom horečnatým, a rozpúšťadlo bolo odstránené za zníženého tlaku. Zvyšok bol purifikovaný kolónovou chromatografiou na silikagéli (eluent: hexán/etylacetát = 3/1) za vzniku diefenylmetanolovej zlúčeniny (0,99 g). Získaná difenylmetanolová zlúčenina (0,99 g) bola rozpustená v metanole (10 ml) a k roztoku bol pridaný 10 % palládiový uhoľnatý prášok (0,30 g). Potom bola zmes miešaná 24 hodín vo vodíkovej atmosfére pri laboratórnej teplote, katalyzátor bol odstránený filtráciou, a filtrát bol zakoncentrovaný za zníženého tlaku. Zvyšok bol purifikovaný kolónovou chromatografiou na silikagéli (eluent: hexán/etylacetát = 3/1) za vzniku metyl 3-hydroxy-4-(-propoxybenzyl)benzoátu (0,50 g).

'H-NMR (CDC1₃) δ ppm:

1,02 (3H, t, J = 7,4 Hz), 1,70 - 1,85 (2H, m), 3,80 - 3,95 (5H, m), 3,97 (2H, s), 4,99 (1H, s), 6,75 - 6,90 2H, m), 7,05 - 7,20 (3H, m), 7,47 (1H, d, J = 1,5 Hz), 7,56 (1H, dd, J = 1,5, 7,8 Hz)

Referenčný príklad 4

Metyl 3-hydroxy-4-(4-(2-hydroxyetyl)benzyl)benzoát

K roztoku 2-(brómfenyl)etylalkoholu (1,7 g) v tetrahydrofuráne (100 ml) bol pridaný 1,45 mol/1 roztok terc, butyllítia v n-pentáne (12,6 ml) v argónovej atmosfére pri -78 °C. Potom bola zmes miešaná 10 minút pri -78 a k reakčnej zmesi bol pridaný roztok 4-formyl-3-hydroxybenzoátu (0,50 g) v tetrahydrofuráne (10 ml). Po 30 minútovom miešaní zmesi za chladenia ľadom bol k reakčnej zmesi pridaný nasýtený vodný roztok chloridu amónneho a voda, a zmes bola extrahovaná etylacetátom. Extrakt bol premytý vodou a vysušený bezvodým síranom horečnatým, a rozpúšťadlo bolo odstránené za zníženého tlaku. Zvyšok bol purifikovaný kolónovou chromatografiou na silikagéli (eluent: hexán/etylacetát = 1/3) za vzniku difenylmetanolovej zlúčeniny (0,28 g). Získaná difenylmetanolová zlúčenina (0,28 g) bola rozpustená v metanole (5 ml) a k roztoku bol pridaný 10 % palládiumuhličitanový prášok (0,14 g). Potom bola zmes miešaná 14 hodín vo vodíkovej atmosfére pri laboratórnej teplote, katalyzátor bol odstránený filtráciou, a filtrát bol zakoncentrovaný za zníženého tlaku. Zvyšok bol purifikovaný kolónovou chromatografiou na silikagéli (eluent: hexán/etylacetát = = 1/1) za vzniku metyl 3-hydroxy-4-[4-(2-hydroxyetyl)benzyl] benzoátu (0,26 g).

'H-NMR (CDC10 ô ppm:

1,37 (1H, t, J = 5,9 Hz), 2,84 (2H, t, J = 6,5 Hz), 3,75 - 3,95 (5H, m), 4,01 (2H, s), 5,10 (1H, s), 7,05 - 7,25 (5H, m), 7,47 (1H, d, J = 1,6 Hz), 7,56 (1H, dd, J = 1,6, 7,8 Hz)

Referenčný príklad 5 2-(4-Izobutylbenzyl)fenol

Grignardové činidlo bolo pripravené z 2-benzyloxybróm-benzénu (0,20 g), horčíka (0,025 g), katalytického množstva jódu a tetrahydrofuránu (1 ml). Získané Grignardové činidlo bolo pridané k roztoku 4-izobutylbenzaldehydu (0,16 g) v tetrahydrofuráne (2 ml) a zmes bola miešaná 30 minút pri laboratórnej teplote. Reakčná zmes bola purifikovaná kolónovou chromatografiou na aminopropylovom silikagéli (eluent: tetrahydrofurán) za zisku difenylmetanolovej zlúčeniny (0,23). Získaná difenylmetanolová zlúčenina bola rozpustená v etanole (3 ml) a koncentrovanej kyseline chlorovodíkovej (0,1 ml). K tomuto roztoku bolo pridané katalytické množstvo 10 % palládium-uhličitanového prášku a zmes bola miešaná cez noc vo vodíkovej atmosfére pri laboratórnej teplote. Katalyzátor bol odstránený filtráciou a filtrát bol zakoncentrovaný za zníženého tlaku. Zvyšok bol purifikovaný kolónovou chromatografiou na silikagéli (eluent: dichlórmetán/hexán =1/1) za vzniku 2-(4-izobutylbenzyl)fenolu (0,10 g).

'H-NMR (CDClj) á ppm:

0,89 (6H, d, J = 6,6 Hz), 1,75 - 1,90 (1H, m), 2,43 (2H, d, J = 7,2 Hz), 3,97 (2H, s), 4,66 (1H, s), 6,75 - 6,85 (1H, m), 6,85 - 6,95 (1H, m), 7,00 - 7,20 (6H, m)

Referenčný príklad 6

2-(4-Izopropoxabenzyl)fenol

Zlúčenina, uvedená v nadpise, bola pripravená podobným spôsobom, ako zlúčenina opísaná v referenčnom príklade 5 použitím 4-izopropoxybenzaldehydu miesto 4-izobutyl-benzaldehydu.

'H-NMR, (CDClj) Ô ppm:

1,31 (6H, d, J = 6,1 Hz):,3,93 (2H, s), 4,50 (1H, heptet, J = 6,1 Hz), 4,72 (1H, s), 6,75 - 6,85 (3H, m), 6,85 až 6,95 (1H, m), 7,05 - 7,20 (4H, m)

Referenčný príklad 7 2-(4-Etoxybenzyl)fenol

Grignardovo činidlo bolo pripravené obvyklým spôsobom zo 4-etoxybrombenzénu (1,5 g), horčíka (0,19 g), katalytického množstva jódu a tetrahydrofuránu (2 ml). K získanému Grignardovmu činidlu bol po kvapkách pridaný roztok 2-benzyloxybenzaldehydu (1,1 g) v tetrahydrofuráne (15 m) a zmes bola miešaná 30 minút pri laboratórnej teplote. K reakčnej zmesi bol pridaný nasýtený vodný roztok chloridu amónneho (10 ml) a voda (20 ml), a zmes bola extrahovaná etylacetátom (100 ml). Extrakt bol premytý vodou (20 ml) a soľankou (20 ml) a vysušený bezvodým síranom sodným. Potom bolo rozpúšťadlo odstránené za zníženého tlaku. Zvyšok bol purifikovaný kolónovou chromatografiou na silikagéli (eluent: hexán/etylacetát = 5/1) za vzniku difenylmetanolovej zlúčeniny (1,7 g). Získaná difenylmetanolová zlúčenina (1,7 g) bola rozpustená v etanole (25 ml). K roztoku bola pridaná koncentrovaná kyselina chlorovodíková (0,42 ml) a katalytické množstvo 10 % palládiový uhoľný prášok, a zmes bola miešaná 18 hodín vo vodíkovej atmosfére pri laboratórnej teplote. Katalyzátor bol odstránený filtráciou a filtrát bol zakoncentrovaný za zníženého tlaku. K zvyšku bol pridaný etylacetát (100 ml) a zmes bola premytá nasýteným vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného (30 ml; a soľanky (30 ml). Organická vrstva bola vysušená bezvodým síranom sodným a rozpúšťad lo bolo odstránené za zníženého tlaku. Zvyšok bol purifikovaný kolónovou chromatografiou na silikagéli (eluent: hexán/etylacetát = 8/1) za vzniku 2-(4-etoxybenzyl)fenolu (0,85 g).

'H-NMR (CDC1₃) δ ppm:

1,39 (3H, t, J = 7,1 Hz), 3,93 (2H, s), 4,00 (2H, q) J = 7,1 Hz), 4,72 (1H, s), 6,75 - 6,85 (3H, m), 6,85 - 6,95 (1H, m), 7,05 -7,20 (4H, m)

Referenčný príklad 8 2-[4-(3-Benzoyloxypropyl)benzyl]fenol

Grignardové činidlo bolo pripravené obvyklým spôsobom zo 4-(3-benzyloxypropyl)brómbenzénu (3,2 g), horčíka (0,25 g), katalytického množstva jódu a tetrahydrofuránu (10,5 ml). K získanému roztoku Grignardovho činidla bol pridaný roztok 2-(metoxymetoxy) benzaldehyd 1,1 g) v tetrahydrofuráne (24 ml) a zmes bola miešaná 25 minút pri 65 °C. Po ochladení na okolitú teplotu bol k reakčnej zmesi pridaný nasýtený vodný roztok chloridu amónneho (10 ml) a voda (20 ml), a zmes bola extrahovaná etylaceátom (100 ml). Extrakt bol premytý vodou (20 ml) a soľankou (20 ml). Potom bol extrakt vysušený bezvodým síranom sodným a rozpúšťadlo bolo odstránené za zníženého tlaku, a zvyšok bol purifikovaný kolónovou chromatografiou na silikagéli (eluent: hexán/etylacetát = 5/1) za vzniku difenylmetanolovej zlúčeniny (2,5 g). Získaná difenylmetanolová zúčenina (2,5 g) bola rozpustená v etanole (42 ml) a k roztoku bolo pridané katalytické množstvo 10 % palládiového uhoľného prášku, a zmes bola miešaná 7,5-hodiny vo vodíkovej atmosfére pri laboratórnej teplote. Katalyzátor bol odstránený filtráciou a filtrát bol zakoncentrovaný za zníženého tlaku. Zvyšok bol purifikovaný kolónovou chromatografiou ne silikagéli (eluent: hexán/etylacetát = 5/2) za vzniku fenylpropanolovej zlúčeniny (1,6 g). Potom bola fenylpropanolová zlúčenina (1,6 g) rozpustená v dichlórmetáne (29 ml), bol pridaný 4-(dimetylamino)pyridín (0,069 g), trietylamín (1,0 ml) a benzoylchlorid (0,79 ml) a zmes bola miešaná 3 hodiny pri laboratórnej teplote. K reakčnej zmesi bol pridaný etylacetát (100 ml) a voda (30 ml) a organická vrstva bola oddelená. Extrakt bol premytý soľankou a vysušený bezvodým síranom sodným a rozpúšťadlo bolo odstránené za zníženého tlaku. Zvyšok bol purifikovaný kolónovou chromatografiou na silikagéli (eluent: hexán/etylacetát - 20/1) za vzniku esterovej zlúčeniny (2,2 g). Zmes získanej esterovej zlúčeniny (2,2 g), monohydrátu kyseliny p-toluénsulfónovej (0,21 g) a metanolu (28 ml) bola miešaná 24 hodín pri laboratórnej teplote. Reakčná zmes bola zakoncentrovaná za zníženého tlaku a zvyšok bol purifikovaný kolónovou chromatografiou na silikagéli (eluent: hexán/etylacetát = 5/1) za vzniku 2-[4-(3-bezoyl-oxypropyl)benzyl] fenolu (1,8 g).

'H-NMR (CDC1₃) ô ppm:

2,00 - 2,15 (2H, m), 2,70 - 2,80 (2H, m), 3,96 (2H, s), 4,33 (2H, t, J = 6,5 Hz), 4,74 (1H, brs), 6,75 - 6,85 (1H, m), 6,85 - 6,95 (1H, m), 7,05 - 7,20 (6H, m), 7,35 - 7,50 (2H, m), 7,50 - 7,65 (1H, m), 8,00 - 8,10 (2H, m)

Referenčný príklad 9 2-[4-(2-Benzoyloxyetyl)benzyl]fenol

Zlúčenina, uvedená v nadpise, bola pripravená podobným spôsobom ako zlúčenina opísaná v referenčnom príklade 8 použitím 4-(2-benzyloxyetyl)brómbenzénu miesto 4-(3-benzyloxypropyl)brómbenzénu. ’H-NMR (CDClj) δ ppm:

3,04 (2H, t, J = 7,1 Hz), 3,98 (2H, s), 4,51 (2H, t, J = 7,1 Hz), 4,66 (1H, s), 6,75 - 6,85 (1H, m), 6,85 - 6,95 (1H, m), 7,05 - 7,25 (6H, m), 7,35 - 7,50 (2H, m), 7,50 - 7,60 (1H, m), 7,95 - 8,05 (2H, m)

Referenčný príklad 10 5-Acetoxymetyl-2-(4-etylbenzyl)fenol

K suspenzii hydridu hlinito-lítneho (95 mg) v dietyléteri (10 ml) bol pridaný roztok metyl 4-(4-etylbenzyl)-3-hydroxybenzoátu (0,27 g) v dietyléteri (5 ml) za chladenia ľadom. Potom bola zmes 45 minút zohrievaná pod refluxom a za chladenia ľadom bola k reakčnej zmesi postupne pridaná voda (0,1 ml), 15 % vodný roztok hydroxidu sodného (0,1 ml) a voda (0,3 ml). Potom bola zmes miešaná 5 minút pri laboratórnej teplote, reakčné zmes bola naliata do 0,5 ml/1 kyseliny chlorovodíkovej a výsledná zmes bola extrahovaná etylacetátom. Extrakt bol vysušený bezvodým síranom horečnatým a rozpúšťadlo bolo odstránené za zníženého tlaku. Zvyšok bol purifikovaný kolónovou chromatografiou na silikagéli (eluent: hexán/etylacetát = = 1/1) za vzniku redukovanej zlúčeniny (0,22 g). Potom bola získaná redukovaná zlúčenina (0,22 g) rozpustená v tetrahydrofuráne (2 ml) a k roztoku bol pridaný vinyl acetát (2 ml) a bis)dibutylchlórotin)oxid (24 mg) a zmes bola miešaná 19 hodín pri 30 °C. Reakčná zmes bola purifikovaná priamo kolónovou chromatografiou na silikagéli (eluent: hexán/etylacetát = 3/1) za vzniku zlúčeniny 5-acetoxymetyl-2-(4-etylbenzyl)fenolu (0,21 g)· ’H-NMR (CDC1₃) δ ppm:

1,21 (3H, t, J = 7,6 Hz), 2,09 (3H, s), 2,61 (2H, q, J = 7,6 Hz), 3,95 (2H, s), 4,74 (1H, s), 5,03 (2H, s), 6,80 (1H, d, J = 1,3 Hz), 6,80 - 6,90 (1H, m), 7,05 - 7,20 (5H, m)

Referenčný príklad 11 5-Acetoxymetyl-2-(4-propoxybenzyl)fenolu

Zlúčenina, uvedená v nadpise, bola pripravená podobným spôsobom ako zlúčenina opísaná v referenčnom príklade 10 použitím metyl 3-hydroxy-4-(4-propoxybenzyl)benzoátu miesto metyl 4-(4-etylbenzyl)-3-hydroxybenzoátu.

‘H-NMR (CDC1₃) δ ppm:

1,02 (3H, t, J = 7,4 Hz), 1,70 - 1,85 (2H, m), 2,09 (3H, s), 3,88 (2H, t, J = 6,6 Hz), 3,91 (2H, s), 5,02 (2H, s),

5.28 (1H, s), 6,70 - 6,90 (4H, m), 7,00 - 7,20 (3H, m)

Referenčný príklad 12 2-[4-(2-Acetoxyetyl)benzyl]-5-acetoxymetylfenol

Zlúčenina, uvedená v nadpise, bola pripravená podobným spôsobom ako zlúčenina opísaná v referenčnom príklade 10 použitím metyl 3-hydroxy-4-[4-(2-hydroxyetyl)benzyl]benzoátu mieto metyl 4-(etylbenzyl)-3 -hydroxybenzoátu.

'H-NMR (CDCI3) δ ppm:

2,03 (3H, s), 2,09 (3H, s), 2,90 (2H, t, J = 7,1, Hz), 3,96 (2H, s), 4,25 (2H, t, J = 7,1 Hz), 4,82 (1H, s), 5,03 (2H, s), 6,80 (1H, d, J = 1,5 Hz), 6,87 (1H, dd, J = 1,5 Hz 7,7 Hz), 7,05 - 7,20 (5H, m)

Referenčný príklad 13 2-(4-Etyltiobenzyl)fenol

Grignardové činidlo bolo pripravené z l-bróm-4-(etyltio)benzénu (1,1 g), horčíka (0,12 g), katalytického množstva jódu a tetrahydrofuránu (5 ml). K roztoku Grignardovho činidla bol pridaný roztok l-(metoxymetoxy)benzaldehyd (0,56 g) v tetrahydrofuráne (12 ml) a zmes bola miešaná 10 minút pri 65 °C. Po ochladení na okolitú teplotu bol k reakčnej zmesi pridaný nasýtený vodný roztok chloridu amónneho (5 ml) a voda (20 ml), a zmes bola extrahovaná etylacetátom (80 ml). Extrakt bol premytý vodou (20 ml) a soľankou (20 ml), vysušený bezvodým síranom sodným a potom bolo odstránené rozpúšťadlo za zníženého tlaku. Zvyšok bol purifikovaný kolónovou chromatografiou na silikagéli (eluent: hexán/etylacetát = 4/1) za vzniku difenylmetanolovej zlúčeniny (0,90 g). Získaná difenylmetanolová zlúčenina (0,90 g) bola rozpustená v dichlórmetáne (15 ml). K roztoku bolo pridané Dess-Martinové činidlo (1,1,1-tri)acetyloxy)-1,1-dihydro-1,2-benziodoxol-3(lH)-on) (1,5 g), a zmes bola miešaná 26 hodín pri teplote 25 °C. K reakčnej zmesi bol pridaný dietyléter (75 ml) a 1 mol/1 vodného roztoku hydroxidu sodného (30 ml). Zmes bola prudko miešaná a organická fáza bola oddelená. Organická vrstva bola premytá 1 mol/1 vodným roztokom hydroxidu sodného (30 ml), vodou (30 ml, 3x) a soľankou (30 ml), vysušená bezvodým síranom sodným a rozpúšťadlo bolo odstránené za zníženého tlaku. Zvyšok bol purifikovaný kolónovou chromatografiou na silikagéli (eluent: hexán/etylacetát = 15/1 - 9/1) za vzniku ketónovej zlúčeniny (0,82 g). Zmes získanej ketónovej zlúčeniny (0,82 g), monohydrátu p-toluénsulfónovej kyseliny (0,10 g) a metanolu (14 ml) bola miešaná 4 hodiny pri teplote 60 °C. Po ochladení na okolitú teplotu bola reakčná zmes koncentrovaná za zníženého tlaku. Zvyšok bol purifikovaný kolónovou chromatografiou na silikagéli (eluent: hexán/etylacetát = 15/1), za vzniku odchránenej zlúčeniny (0,69 g). Získaná odchránená zlúčenina (0,68 g) bola rozpustená v tetrahydrofuráne (11 ml), a k roztoku bol pridaný trietylamín (0,41 ml) a metylchloroformát (0,22 m) a zmes bola miešaná 1 hodinu pri 25 °C. K reakčnej zmesi bol ďalej pridaný trietylamín (0,11 ml) a metylchloroformiát (0,061 ml) a zmes bola 30 minút miešaná. Reakčná zmes bola filtrovaná a filtrát bol koncentrovaný za zníženého tlaku. Zvyšok bol rozpustený v tetrahydrofuráne (14 ml) a k roztoku bola pridaná voda (7 ml) a bórhydrid sodný (0,40 g) a zmes bola miešaná 7 hodín pri 25 °C. K reakčnej zmesi bola po kvapkách pridaná 1 mol/1 kyselina chlorovodíková (15 ml) a zmes bola extrahovaná etylacetátom (75 ml). Extrakt bol premytý vodou (20 ml), nasýteným vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného (20 ml) a soľankou (20 ml), vysušený bezvodým síranom sodným, a rozpúšťadlo bolo odstránené za zníženého tlaku. Zvyšok bol purifikovaný kolónovou chromatografiou na silikagéli (eluent: hexán/etylacetát = 8/1) za vzniku 2-(4-etyltiobenzyl)fenolu (0,62 g). ‘H-NMR (CDCI3) δ ppm:

1.29 (3H, t, J = 7,3 Hz), 2,90 (2H, q, J = 7,3 Hz), 3,96 (2H, s), 4,62 (1H, s), 6,75 - 6,80 (1H, m), 6,85 - 6,95 (1H, m), 7,05 - 7,20 (4H, m), 7,20 - 7,30 (2H, m)

Referenčný príklad 14

2-(4-Metoxybenzyl)fenyl 2,3,4,6-tetra-O-acetyl-/3-D-glukopyranozid

K roztoku 2-(4-metoxybenzyl)fenolu (46 mg) a 2,3,4,6-tetra-O-acetyl-l-O-trichlóracetimidoyl-a-D-glukopyianozyl (0,13 g) v dichlórmetáne (2 ml) bol pridaný komplex bórontrifluoriddietyléter (0,033 ml) a zmes bola miešaná 1 hodinu pri laboratórnej teplote. Reakčná zmes bola purifikovaná kolónovou chromatografiou na aminopropylsilikagéli (eluent: dichlórmetán) za vzniku 2-(4-metoxybenzyl)fenyl 2,3,4,6-tetra-O-acetyl-/3-D-glukopyranozidu (0,11 g).

'H-NMR (CDC1₃) δ ppm:

1,91 (3H, s), 2,03 (3H, s), 2,05 (3H, s), 2,08 (3H, s), 3,77 (3H, s), 3,80 - 3,95 (3H, m), 4,17 (1H, dd, J = 2,5

12.2 Hz), 4,29 (1H, dd, J = 5,5, 12,2 Hz), 5,11 (1H, d, J = 7,5 Hz), 5,10 - 5,25 (1H, m), 5,25 - 5,40 (2H, m),

6,75 - 6,85 (2H, m), 6,95 - 7,10 (5H, m), 7,10 - 7,25 (1H, m)

Referenčný príklad 15

2-(4-Metylbenzyl)fenyl 2,3,4,6-tetra-O-acetyl-/3-D-glukopyranozid

Zlúčenina uvedená v nadpise bola pripravená podobne, ako je opísané v referenčnom príklade 14 použitím 2-(4-metylbenzyl)fenolu miesto 2-(4-metoxybenzyl)fenolu.

’H-NMR (CDCIj) δ ppm:

1.89 (3H, s), 2,03 (3H, s), 2,05 (3H, s), 2,07 (3H, s), 2,30 (3H, s), 3,80 - 3,95 (3H, m), 4,17 (1H, dd, J = 2,5

12.3 Hz), 4,28 (1H, dd, J = 5,5 12,3 Hz), 5,11 (1H, d, J = 7,5 Hz), 5,10 - 5,25 (1H, m), 5,25 - 5,40 (2H, m),

6.90 - 7,20 (8H, m)

Príklad 16

2-Etylbenzyl)fenyl 2,3,4,6-tetra-O-acetyl-/3D-glukopyranozid

Zlúčenina uvedená v nadpise bola pripravená podobne, ako je opísané v referenčnom príklade 14 použitím 2-(4-etylbenzyl)fenolu miesto 2-(4-metoxybenzyl)fenolu.

’H-NMR (CDCI3 IÔ ppm:

1,20 (3H, t, J = 7,6 Hz), 1,87 (3H, s), 2,03 (3H, s), 2,05 (3H, s), 2,08 (3H, s), 2,60 (2H, q, J = 7,6 Hz), 3,80 až 4,00 (3H, m), 4,18 (1H, dd, J = 2,3 12,3 Hz), 4,28 (1E, dd, J = 5,4 12,2 Hz), 5,11 (1H, d, J = 7,5 Hz), 5,10 až 5,25 (1H, m), 5,25 - 5,40 (2H, m), 6,90 - 7,25 (8H, m)

Referenčný príklad 17

2-(4-Izobutylbenzyl)fenyl 2,3,4,6-tetra-O-acetyl-ie-D-glukopyranozid

Zlúčenina uvedená v nadpise bola pripravená podobne, ako je opísané v referenčnom príklade 14 použitím 2-(4-izobutylbenzyl)fenolu miesto 2-(4-metoxybenzyl)fenolu.

’H-NMR (CDCI3) δ ppm:

0,88 (6H, d, J = 6,6 Hz), 1,75 - 1,90 (1H, m), 1,87 (3H, s), 2,03 (3H, s), 2,05 (3H, s), 2,08 (3H, s), 2,42 (2H, d, J = 7,2 Hz), 3,80 - 3,95 (3H, m), 4,18 (1H, dd, J = 2,4 12,3 Hz), 4,29 (1H, dd, J = 5,5 12,3 Hz), 5,11 (1H, d, J = 7,6 Hz), 5,10 - 5,25 (1H, m), 5,25 - 5,40 (2H, m), 6,90 - 7,25 (8H, m)

Referenčný príklad 18

2-(4-Etoxybenzyl)fenyl 2,3,4,6-tetra-O-acetyl-/J-D-glukopyranozid

Zlúčenina uvedená v nadpise bola pripravená podobne, ako je opísané v referenčnom príklade 14 použitím 2-(4-etoxybenzyl)fenolu miesto 2-(4-metoxybenzyl)fenolu.

’H-NMR (CDCI3) δ ppm:

1,39 (3H, t, J = 7,0 Hz), 1,91 (3H, s), 2,03 (3H, s), 2,05 (3H, s), 2,07 (3H, s), 3,80 - 3,95 (3H, m), 3,99 (2H, q, J = 7,0 Hz), 4,18 (1H, dd, J = 2,5 12,3 Hz), 4,28 (1H, dd, J = 5,6 12,3 Hz), 5,10 (1H, d, J = 7,7 Hz), 5,15 - 5,25 (1H, m), 5,25 - 5,40 (2H, m), 6,75 - 6,85 (2H, m), 6,95 - 7,10 (5H, m), 7,10 - 7,20 (1H, m)

Referenčný príklad 19

2-(4-Izopropoxybenzyl)fenyl 2,3,4,6-tetra-O-acetyl-/3-D-glukopyranozid

Zlúčenina uvedená v nadpise bola pripravená podobne, ako je opísané v referenčnom príklade 14 použitím 2-(4-izopropoxybenzyl)fenolu miesto 2-(4-metoxybenzyl)fenolu.

’H-NMR (CDCI3) ô ppm:

1,30 (6H, d, J = 6,0 Hz), 1,90 (3H, s), 2,03 (3H, s), 2,05 (3H, s), 2,08 (3H, s), 3,80 - 3,90 (3H, m), 4,18 (1H, dd, J = 2,3, 12,3 Hz), 4,28 (1H, dd, J = 5,5 12,3 Hz), 4,48 (1H, heptet, J = 6,0 Hz), 5,10 (1H, d, J = 7,7 Hz), 5,10 - 5,25 (1H, m), 5,25 - 5,40 (2H, m), 6,70 - 6,85 (2H, m), 6,90 - 7,10 (5H, m), 7,10 - 7,20 (1H, m)

Referenčný príklad 20

5-Acetoxymetyl-2-(4-etylbenzyl)fenyl 2,3,4,6-tetra-0-acetyl-(3-D-glukopyranozid

Zlúčenina uvedená v nadpise bola pripravená podobne, ako je opísané v referenčnom príklade 14 použitím 5-acetoxymetyl-2-(4-etylbenzyl)fenolu miesto 2-(4-metoxybenzyl)fenolu.

’H-NMR (CDC1₃) δ ppm:

1,20 (3H, t, J = 7,6 Hz), 1,88 (3H, s), 2,02 (3H, s), 2,05 (3H, s), 2,07 (3H, s), 2,09 (3H, s), 2,60 (2H, q, J = 7,6 Hz), 3,80 - 3,95 (3H, m), 4,20 (1H, dd, J = 2,4 12,3 Hz), 4,27 (2H, dd, J = 5,3 12,3 Hz), 5,00 - 5,10 (2H, m), 5,13 (1H, d, J = 7,4 Hz), 5,15 - 5,40 (3H, m), 6,95 - 7,15 (7H, m)

Referenčný príklad 21 Acetoxymetyl-2-(4-propoxybenzyl)fenyl2,3,4,6-tetra-0-acetyl-/3-D-glukopyranozid

Zlúčenina uvedená v nadpise bola pripravená podobne, ako je opísané v referenčnom príklade 14 použitím 5-acetoxymetyl-2-4-propoxybenzyl)fenolu miesto 2-(4-metoxybenzyl)fenolu.

'H-NMR (CDC1₃) δ ppm:

1,01 (3H, t, J = 7,4 Hz), 1,70 - 1,85 (2H, m), 1,92 (3H, s), 2,03 (3H, s), 2,05 (3H, s), 2,07 (3H, s), 2,09 (3H, s), 3,80 - 3,95 (5H, m), 4,20 (1H, dd, J = 2,4 12,3 Hz), 4,27 (1H, dd, J = 5,3 12,3 Hz), 5,00 - 5,10 (2H, m), 5,12 (1H, d, J =7,4 Hz), 5,15 - 5,40 (3H, m), 6,75 - 6,85 (2H, m), 6,95 - 7,10 (5H, m)

Referenčný príklad 22 2-[4-(2-Acetoxyetyl)benzyl]-5-acetoxymetylfenyl 2,3,4,6-tetra-O-acetyl-0-D-glukopyranozid

Zlúčenina uvedená v nadpise bola pripravená podobne, ako je opísané v referenčnom príklade 14 použitím 2-[4-(2-acetoxyetyl)benzyl]-5-acetoxymetylfenolu miesto 2-(4-metoxybenzyl)fenolu.

'H-NMR (CDCI3) δ ppm:

1,89 (3H, s), 2,03 (3H, s), 2,03 (3H, s), 2,05 (3H, s), 2,07 (3H, s), 2,09 (3H, s), 2,88 (2H, t, J = 7,1 Hz), 3,85 - 3,95 (3H, m), 4,15 - 4,35 (4H, m), 5,00 - 5,10 (2H, m), 5,13 (1H, d, J = 7,5 Hz), 5,15 - 5,40 (3H, m), 6,95 -7,15(7H,m)

Príklad 1

2-(4-Metoxybenzyl)fenyl /3-D-glukopyranozid

Metoxid sodný (28 % roztok v metanole; 0,12 ml) bol pridaný k roztoku 2-(4-metoxybenzyl)fenyl 2,3,4,6-tetra-O-acetyl-/3-D-glukopyranozidu (0,11 g) v metanole (4 ml) a zmes bola miešaná 30 minút pri laboratórnej teplote. Rozpúšťadlo bolo odstránené pri zníženom tlaku. Zvyšok bol purifikovaný kolónovou chromatografiou na silikagéli (eluent: dichlórmetán/metanol = 10/1) za vzniku 2-(4-metoxybenzyl)fenyl β-D-glukopyranozidu (65 mg).

'H-NMR (CDCI3) δ ppm:

3,35 - 3,55 (4H, m), 3,69 (1H, dd, J = 5,1 12,1 Hz), 3,73 (3H, s), 3,80 - 4,00 (2H, m), 4,03 (1H, d, J = 15,1 Hz), 4,91 (1H, d, J = 7,4 Hz), 6,75 - 6,85 (2H, m), 6,85 - 6,95 (1H, m), 6,95 - 7,10 (1H, m), 7,10 - 7,20 (4H, m).

Príklad 2

2-(4-Metoxybenzyl)fenyl /3-D-glukopyranozid

Zlúčenina uvedená v nadpise bola pripravená podobným spôsobom, ako je opísané v príklade 1 použitím 2-(4-metylbenzyl)fenyl 2,3,4,6,-tetra-O-acetyl-/3-D-glukopyranozidu miesto 2-(4-metoxybenzyl)fenyl 2,3,4,6,-tetra-O-acetyl-/3-D-glukopyranozidu.

'H-NMR (CDCI3) δ ppm:

2,27 (3H, s), 3,35 - 3,55 (4H, m), 3,69 (1H, dd, J = 5,2 12,0 Hz), 3,80 - 3,90 (1H, m), 3,94 (1H, d, J = 15,0 Hz), 4,05 (1H, d, J = 15,0 Hz), 4,85 - 4,95 (1H, m), 6,85 - 6,95 (1H, m), 6,95 - 7,20 (7H, m).

Príklad 3

2-(4-Etylbenzyl)fenyl /3-D-glukopyranozid

Zlúčenina uvedená v nadpise bola pripravená podobným spôsobom ako je opísané v príklade 1 použitím 2-(4-etylbenzyl)fenyl 2,3,4,6,-tetra-O-acetyl-/3-D-glukopyranozidu miesto 2-(4-metoxybenzyl)fenyl 2,3,4,6,-tetra-O-acetyl-/3-D-glukopyranozidu.

'H-NMR (CDCI3) δ ppm:

1,15 - 1,25 (3H, m), 2,50 - 2,65 (2H, m), 3,35 - 3,55 (4H, m), 3,65 - 3,75 (1H, m), 3,80 - 4,00 (2H, m), 4,06 (1H, d, J = 14,9 Hz), 4,85 - 5,00 (1H, m), 6,85 - 7,10 (1H, m), 7,00 - 7,20 (7H, m).

Príklad 4

2-(4-Izobutylbenzyl)fenyl /3-D-glukopyranozid

Zlúčenina uvedená v nadpise bola pripravená podobným spôsobom, ako je opísané v príklade 1 použitím 2-(4-izobutylbenzyl)fenyl 2,3,4,6,-tetra-O-acetyl-/3-D-glukopyranozidu miesto 2-(4-metoxybenzyl)fenyl

2,3,4,6,-tetra-O-acetyl-/3-D-glukopyranozidu.

'H-NMR (CDClj) δ ppm:

0,80 - 0,95 (6H, m), 1,70 - 1,90 (1H, m), 2,41 (2H, d, J = 7,1 Hz), 3,30 - 3,55 (4H, m), 3,60 - 3,75 (1H, m), 3,80 - 3,95 (1H, m), 3,95 (1H, d, J = 15,0 Hz), 4,06 (1H, d, J = 15,0 Hz), 4,85 - 4,95 (1H, m), 6,80 - 7,20 (8H, m).

Príklad 5

2-(4-Etoxybenzyl)fenyl /3-D-glukopyranozid

Zlúčenina uvedená v nadpise bola pripravená podobným spôsobom, ako je opísané v príklade 1 použitím 2-(4-etoxybenzyl)fenyl 2,3,4,6,-tetra-O-acetyl-/3-D-glukopyranozidu miesto 2-(4-metoxybenzyl)fenyl

2.3.4.6, -tetra-O-acetyl-/3-D-glukopyranozidu.

Ή-NMR (CDCIj) ô ppm:

1,35 (3H, t, J = 6,8 Hz), 3,35 - 3,55 (4H, m), 3,60 - 3,75 (1H, m), 3,80 - 4,10 (5H, m), 4,90 (1H, d, J = 7,1 Hz), 6,70 - 6,85 (2H, m), 6,85 - 6,95 (1H, m), 7,00 - 7,20 (5H, m)

Príklad 6

2-(4-Izopropoxybenzyl)fenyl /3-D-glukopyranozid

Zlúčenina uvedená v nadpise bola pripravená podobným spôsobom, ako je opísané v príklade 1 použitím 2-(4-izopropoxybenzyl)fenyl 2,3,4,6,-tetra-0-acetyl-/3-D-glukopyranozidu miesto 2-(4-metoxybenzyl)fenyl

2.3.4.6, -tetra-O-acetyl-ŕJ-D-glukopyranozidu.

'H-NMR (CDCIj) ô ppm:

1,27 (6H, d, J = 6,0 Hz), 3,35 - 3,55 (4H, m), 3,69 (1H, dd, J = 5,4, 12,1 Hz), 3,88 (1H, dd, J = 2,0 12,1 Hz), 3,91 (1H, d, J = 15,0 Hz), 4,02 (1H, d, J = 15,0 Hz), 4,51 (1H, heptet, J = 6,0 Hz), 4,91 (1H, d, J = 7,7 Hz), 6,70 - 6,85 (2H, m), 6,85 - 6,95 (1H, m), 7,00 - 7,10 (1H, m), 7,10 - 7,20 (4H, m)

Príklad 7

5-Hydroxymetyl-2-(4-propoxybenzyl) fenyl /3-D-glukopyranozid

Zlúčenina uvedená v nadpise bola pripravená podobným spôsobom, ako je opísané v príklade 1 použitím 5-acetoxymetyl-2-(4-propoxybenzyl)fenyl 2, 3,4,6,-tetra-O-acetyl-/3-D-glukopyranozidu miesto 2-(4-metoxybenzyl)fenyl 2,3,4,6,-tetra-O-acetyl-/3-D-glukopyranozidu.

'H-NMR (CDC1₃) δ ppm:

1,02 (3H, t, J = 7,4 Hz), 1,70 - 1,85 (2H, m), 3,30 - 3,55 (4H, m), 3,65 - 3,75 (1H, m), 3,80 - 3,95 (4H, m), 4,00 (1H, d, J = 15,0 Hz), 4,54 (2H, s), 4,93 (1H, d, J = 7,4 Hz), 6,70 - 6,85 (2H, m), 6,85 - 6,95 (1H, m), 7,02 (1H, d, J = 7,7 Hz), 7,05 - 7,20 (3H, m)

Príklad 8

2-(4-Etylbenzyl)-5 -hydroxymetylfenyl /3-D-glukopyranozid

Zlúčenina uvedená v nadpise bola pripravená podobným spôsobom ako je opísané v príklade 1 použitím 5-acetoxymetyl-2-(4-etylbenzyl)fenyl 2,3,4,6,-tetra-0-acetyl-/3-D-glukopyranozidu miesto 2-(4-metoxybenzyl)fenyl 2,3,4,6,-tetra-O-acetyl-/3-D-glukopyranozidu.

’H-NMR (CDC1₃) δ ppm:

1,19 (3H, t, J = 7,6 Hz), 2,57 (2H, q, J = 7,6 Hz), 3,30 - 3,55 (4H, m), 3,65 - 3,75 (1H, m), 3,85 - 4,00 (2H, m),4,04 (1H, d, J = 15,0 Hz), 4,54 (2H, s), 4,93 (1H, d, J = 7,4 Hz). 6,85 - 6,95 (1H, m), 7,02 (1H, d, J = 7,7 Hz), 7,06 (2H, d, J = 8,1 Hz), 7,10 - 7,20 (3H, m)

Príklad 9

2-[4-(2-Hydroxyetyl)benzyl]-5-hydroxymetylfenyl /3-D-glukopyranozid

Zlúčenina uvedená v nadpise bola pripravená podobne, ako je opísané v príklade 1 použitím 2-[4-(2-acetoxyetyl)benzyl]-5-acetoxymetylfenylu 2,3,4,6-tetra-O-acetyl-/3-D-glukopyranozidu miesto 2-(4-metoxybenzyl)fenyl 2,3,4,6-tetra-0-acetyl-/3-D-glukopyranozidu.

'H-NMR (CDC1₃) δ ppm:

2,76 (2H, t, J = 7,1 Hz), 3,30 - 3,55 (4H, m), 3,60 - 3,75 (3H, m), 3,85 - 4,00 (2H, m), 4,05 (1H, d, J = 14,6 Hz), 4,54 (2H, s), 4,92 (1H, d, J = 7,2 Hz), 6,85 - 6,95 (1H, m), 7,03 (1H, d, J = 7,9 Hz), 7,09 (2H, d, J = 7,8 Hz), 7,10- 7,20 (3H, m)

Príklad 10

2-[4-(2-Hydroxyetyl)benzyl]fenyl /3-D-glukopyranozid

K roztoku 2-[4-(2-benzoyloxyetyl)benzyl] fenolu (0,49 g) a l,2,3,4,6-penta-O-acetyl-/?-D-glukopyranózy (1,7 g) v toluéne (5,2 ml) a dichlórmetáne (2,2 ml) bol pridaný komplex bórtrifluorid eterátu (0,56 ml), a zmes bola miešaná 8 hodín pri 25 °C. K reakčnej zmesi bol pridaný etylacetát (70 ml) a nasýtený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (25 ml) a organická vrstva bola oddelená. Organická vrstva bola premytá soľankou (25 ml) a vysušená bezvodým síranom sodným, a rozpúšťadlo bolo odstránené za zníženého tlaku. Zvyšok bol rozpustený v metanole (5 ml) a bol pridaný tetrahydrofurán (1,5 ml), metoxid sodný (28 % roztok v etanole, 0,14 ml) a výsledná zmes bola miešaná 12,5 hodiny pri 25 °C. K reakčnej zmesi bol pridaný etylacetát (75 ml) a voda (20 ml) a organická vrstva bola oddelená. Organická vrstva bola premytá soľankou (20 ml) a vysušená bezvodým síranom sodným a rozpúšťadlo bolo odstránené za zníženého tlaku. Zvyšok bol rozpustený v metanole (7,5 ml) a bol pridaný metoxid sodný (28 % roztok v metanole, 0,085 ml) a výsledná zmes bola miešaná 5 hodín pri 25 °C. Reakčná zmes bola purifikovaná kolónovou chromatografiou na silikagéli (eluent: dichlórmetán/metanol = 4/1). Rozpúšťadlo bolo odstránené za zníženého tlaku, k zvyšku bol pridaný dietyléter a výsledné precipitáty boli získané filtráciou. Výsledná pevná látka bola premytá dietyléterom a vysušená za zníženého tlaku za vzniku 2-[4-(2-hydroxyetyl)benzyl]-fenyl 0-D-glukopyranozidu (0,47 g).

'H-NMR (CDC1₃) δ ppm:

2,76 (2H, t, J = 7,1 Hz), 3,35 - 3,55 (4H, m), 3,65 - 3,75 (3H, m), 3,88 (1H, dd, J = 1,8 11,8 Hz), 3,95 (1H, d, J = 15,2 Hz), 4,07 (1H, d, J = 15,2 Hz), 4,90 (1H, d, J = 7,4 Hz), 6,85 - 6,95 (1H, m), 7,00 - 7,20 (7H, m)

Príklad 11

2- [4-(3 -Hydroxypropyl)benzyl]fenyl /3-D-glukopyranozid

Zlúčenina uvedená v nadpise bola podobne pripravená ako je opísané v príklade 10 použitím 2-[4-(3-benzoyloxypropyl)benzyl] fenolu miesto 2-[4-(2-benzoyloxyetyl)benzyl]fenolu.

‘H-NMR (CDCI3) δ ppm:

1,70 - 1,85 (2H, m), 2,55 - 2,65 (2H, m), 3,30 - 3,60 (6H, m), 3,69 (1H, dd, J = 5,2 11,9 Hz), 3,88 (1H, dd, J = 2,0, 11,9 Hz), 3,95 (1H, d, J = 15,1 Hz), 4,06 (1H, d, J = 15,1 Hz), 4,90 (1H, d, J = 7,3 Hz), 6,85 - 6,95 (1H, m), 7,00 - 7,20 (7H, m).

Príklad 12

2-(4-Etyltiobenzyl)fenyl 0-D-glukopyranozid

K roztoku 2-(4-etyltiobenzyl)fenolu (0,51 g) a l,2,3,4,6-penta-O-acetyl-/5-D-glukopyranozidu (2,4 g) v toluéne (6,3 ml) a dichlórmetáne (2,7 ml) bol pridaný komplex bórontrifluórddietyléter (0,78 ml), a zmes bola miešaná 9 hodín pri laboratórnej teplote. K reakčnej zmesi bol pridaný etylacetát (70 ml) a nasýtený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (25 ml), a organická vrstva bola oddelená. Organická vrstva bola premytá soľankou (25 ml) a vysušená bezvodým síranom sodným, a rozpúšťadlo bolo odstránené za zníženého tlaku. Zvyšok bol rozpustený v metanole (10,5 ml) a k roztoku bol pridaný metoxid sodný (28 % roztok v metanole, 0,08 ml) a zmes bola miešaná 18 hodín pri 25 °C. K reakčnej zmesi bol pridaný etylacetát (75 ml) a voda (20 ml) a organická vrstva bola oddelená. Organická vrstva bola premytá soľankou (20 ml) a vysušená bezvodým síranom sodným, a rozpúšťadlo bolo odstránené za zníženého tlaku. Zvyšok bol purifikovaný kolónovou chromatografiou na silikagéli (eluent: dichlórmetán/metanol = 10/1). Rozpúšťadlo bolo odstránené za zníženého tlaku, k zvyšku bol pridaný dietyléter a výsledný precipitát bol získaný filtráciou. Výsledná bezfarebná pevná látka bola premytá dietyléterom a vysušená za zníženého tlaku za vzniku 2-(4-etyltiobenzyl)fenyl ý-D-glukopyranozidu (0,51 g).

'H-NMR (CDCb) δ ppm:

1,24 (3H, t, J = 7,3 Hz), 2,88 (2H, q, J = 7,3 Hz), 3,35 - 3,55 (4H, m), 3,69 (1H, dd, J = 5,0, 12,2 Hz), 3,88 (1H, dd, J = 2,0 12,2 Hz), 3,95 (1H, d, J = 15,1 Hz), 4,08 (1H, d, J = 15,1 Hz), 4,91 (1H, d, J = 7,3 Hz), 6,85 - 7,00 (1H, m), 7,00 - 7,10 (1H, m;, 7,10 - 7,30 (6H, m).

Príklad skúšky 1 Stanovenie inhibičného účinku na aktivitu ľudského SGLT2

1. Konštrukcia plazmidového vektora exprimujúceho ľudský SGLT2

Príprava cDNA knižnice pre PCR amplifikáciu bola uskutočnená reverznou transkripciou celkovej RNA pripravenej z ľudských obličiek (Ori gen) použitím dT oligonukleotidu ako priméru a preamplifikačného systému Super Script (Gibco-BRL: LIFE TECHNOLOGIES). Fragment DNA kódujúci ľudský SGLT2 bol amplifikovaný PCR reakciou s použitím Pfu DNA polymerázy (Stratagene), v ktorej bola opísaná cDNA knižnica ľudských obličiek použitá ako templát a nasledujúce oligonukleotidy 07C2F, predkladaný ako sekvencia číslo 1 a 0712R, predkladaný ako sekvencia číslo 2, boli použité ako priméry. Amplifikovaný DNA fragment bol ligovaný do pCR-Blunt (Invotrogen) vektora na klonovanie podľa štandardného postupu pre kit. Kompetentné bunky kmeňa HB101 Escherichia coli (TOYOBO) boli transformované podľa obvyklého postupu a selekcia transformantov bola potom uskutočnená na LB agarovom médiu obsahujúcom kanamycín s koncentráciou 50 ug/ml. Plazmidová DNA bola následne extrahovaná a purifikovaná z jedného z transformantov, amplifikácia fragmentov DNA, kódujúceho ľudský SGLT2 bola uskutočnená PCR reakciou s použitím Pfu DNA Polymerasy (Stratagene), v ktorej nasledujúce oligonukleotidy 0714F, predkladaný ako sekvencia 3 a C715R, predkladaný ako sekvencia 4, boli použité ako priméry. Amplifikovaný fragment DNA bol štiepený reštrikčnými enzýmami, Xho I a Eind III a potom purifikovaný pomocou Wizard purifikačného Systému (Promega). Tento purifikovaný fragment DNA bol vložený do zodpovedajúcich reštrikčných miest v pcDNA3.1 (-) Myc/His-B (Invitrogen), vektora na expresiu fuzneho proteinu. Kompetentné bunky kmeňa H3 Escherichia coli (TOYOBO) boli transformované podľa obvyklého postupu a selekcia transformantov bola potom uskutočnená na LB agarovom médiu obsahujúcom ampicilin s koncentráciou 100 pg/ml. Plazmidová DNA z tohto transformantu bola potom extrahovaná a purifikovaná a bola anazlyzovaná nukleotidová sekvencia fragmentu DNA vloženého do polyklonovacích miest vektora pcDNA3.1 (-) Myc/His-A. V porovnaní s ľudským SGLT2, opísaným Wells et al., (Am. J-Physiol., Zv. 263, str. 459 - 465 (1992)), mal tento kloň substitúciu jednej bázy (ATC, ktorá kóduje izoleucin -433, bol nahradený GTC). Následne bol tiež získaný kloň, v ktorom je valin nahradený izoleucínom - 433. Tento plazmidový vektor exprimujúci SGLT2, v ktorom je peptid predkladaný ako sekvencia č. 5, fuzovaný ku karboxylovému koncu alanínového zvyšku, bol označený KL29.

Sekvencia číslo 1 ATGGAGGAGCACACAGAGGC Sekvencia číslo 2 GGGATAGAAGCCCCAGAGGA Sekvencia číslo 3 AACCTCGAGATGGAGGAGCACACAGAGGC Sekvencia číslo 4 AACAAGGTTGGCATAGAAGCCCCAGAGGA Sekvencia číslo 5 KLGPEQKLISEEDLNSAVDHHHHHH

2. Príprava buniek transientne exprimujúcich ľudský SGLT2

COS-7 bunky (RIKEN CELL BANK RCB0539) boli pomocou elektroporácie transfekované plazmidom KL29, kódujúcim ľudský SGLT2. Elektroporácia bola uskutočnená pomocou GENE PULSER II (Bio-Rad Laboratories) za týchto podmienok: 0,290 kV, 975 pF, 2 x 10⁶ COS-7 buniek a 20 pg KL29 v 500 pl OPTIMEM I média (Giboo-BRL: LIFE TECHNOLOGIES) v 0,4 cm kyvetách. Po prenose génu boli bunky pozberané centrifugáciou a boli resuspendované v OPTI-MEM I médiu (1 ml/kyveta). Do každej jamky v 96 jamkovej mikrotitračnej doštičke bolo pridané 125 pl tejto bunkovej suspenzie. Po inkubácii cez noc pri 37 °C v 5 % CO₂ bolo do každej jamky pridaných 125 pl DMEM média, ktoré obsahovalo 10 % fetálne hovädzie sérum (Sanko Jyunyaku), 100 jednotiek/ml sodnej soli penicilínu G (Giboo-BRL: LIFE TECHNOLOGIES), 100 pg/ml síranu streptomycínu (Gibco - BRL: LIFE TECHNOLOGIES). Tieto bunky boli kultivované do ďalšieho dňa a potom boli použité na meranie inhibičnej aktivity príjmu metyl-a-D-glukopyranozidu.

3. Meranie inhibičnej aktivity príjmu metyl-a-D-glukopyranozidu

Potom čo bolo z COS-7 buniek, transientne exprimujúcich ľudský SGLT2, odobrané médium, bolo do každej jamky pridaných 200 pl prípravného pufra (pufer s pH 7,4 obsahujúci 140 mM cholín chlorid, 2 mM chlorid draselný, 1 mM chlorid vápenatý, 1 mM chlorid horečnatý, 10 mM 2-[4-(2-hydroxyetyl)-l-piperazinyljetánsulfónovej kyseliny, a 5 mM tris (hydroxymetyl)aminometán), a bunky boli inkubované 10 minút pri 37 °C. Pufer na meranie bol pripravený pridaním 7 pl metyl-a-D-(U-14C) glukopyranozidu (Amersham Pharmacia Biotech) k 525 pl pripravenej testovacej vzorky v pufri na príjem (pufer s pH 7,4 obsahujúci 140 mM chlorid sodný, 2 mM chlorid draselný, 1 mM chlorid vápenatý, 1 mM chlorid horečnatý, 5 mM metyl-a-D-glukopyranozid, 10 mM 2-[4-(2-hydroxyetyl-l-piperazinyl]etánsulfónovej kyseliny, a 5 mM tris (hydroxymetyl)aminometán), táto zmes bola premiešaná a potom bol pripravený pufer na meranie príjmu. Ako kontrola bol pripravený pufer na meranie príjmu bez testovacej zlúčeniny. Na odhad základného príjmu za neprítomnosti testovacej zlúčeniny a sodíka bol podobne pripravený pufer na meranie základného príjmu, ktorý obsahuje 140 mM cholín chlorid namiesto chloridu sodného. Potom, čo bol odstránený pripravený pufer, bolo do každej jamky pridaných 75 μΐ pufra na meranie príjmu a bunky boli inkubované 2 hodiny pri 37 °C. Potom bol odstránený pufer na meranie a do každej jamky bolo pridaných 200 μΐ premývacieho pufra (pufer s pH 7,4 obsahujúci 140 mM cholín chlorid, 2 mM chlorid draselný, 1 mM chlorid vápenatý, 1 mM chlorid horečnatý, 10 mM metyl-a-D-glukopyranozid, 10 mM 2-[4-(2-hydroxyetyl)-l-piperazinyl]etánsulfónovej kyseliny, a 5 mM tris (hydroxymetyl)aminometán), ktorý bol ihneď odstránený. Po ďalších dvoch preumývaniach boli bunky solibilizované pridaním 75 μΐ 0,2 N hydroxidu sodného do každej jamky. Bunkové lyzáty boli potom prenesené do PicoPiate (Packard) a do každej jamky bolo pridaných 150 μΐ MicroScint-40 (Packard), a rádioaktivita bola meraná mikrotitračným scintilačným počítadlom TopCount (Packard). Rozdiel v príjme bol získaný ako 100 % hodnota odpočítaním rádioaktivity základného príjmu od kontroly a potom boli metódou najmenších štvorcov z koncentračno-inhibičnej krivky spočítané koncentrácie, za ktorých bolo inhibovaných 50 % príjmu (IC₅₀). Výsledky sú ukázané v nasledujúcej tabuľke 1.

Tabuľka 1

Testovacia zlúčenina Hodnota IC₅o (nM)

Príklad 1	350
Príklad 2	450
Príklad 3	140
Príklad 4	500
Príklad 5	330
Príklad 6	370
Príklad 7	140
Príklad 8	8,1
Príklad 9	27
Príklad 10	210
Príklad 11	75

Príklad 12

110

Príklad skúšky 2

Stanovenie uľahčujúceho účinku na exkréciu glukózy močom

Ako pokusné zvieratá boli použité cez noc vyhladovené SD krysy (SLC, samčeky, 7 týždňov staré, 180 až 240 g). Desať mg testovacej zlúčeniny bolo rozmiešané alebo rozpustené v 300 μΐ etanolu a potom rozpustené prídavkom 1,2 polyetylénglykolu 400 a 1,5 ml fyziologického roztoku a potom bol pripravený roztok s koncentráciou 3,3 mg/ml. Tristo μΐ tohto roztoku bolo rozpustené v 2,7 ml roztoku na nariedenie (fyziologický roztok : polyetylénglykolu 400 : etanolu 5 : 4 : 1) a potom bol pripravený roztok 0,33 mg/ml. Len čo boli zistené váhy krýs, roztok testovacej zlúčeniny bol intravenózne aplikovaný do chvostovej žily v dávke 3 ml/kg (1 mg/kg). Ako kontrola bolo intravenózne do chvostovej žily aplikované iba rozpúšťadlo (fyziologický roztok : polyetylénglykol 400 : etanol = 5 : 4 : 1) s dávkou 3 ml/kg. Ihneď po tejto intravenóznej aplikácii do chvostovej žily bol krysám orálne aplikovaný roztok glukózy 200 g/1 v dávke 10 ml/kg (2 g/kg). Intravenózna aplikácia do chvostovej žily bola uskutočnená ihlou 26G a 1 ml injekčnou striekačkou. Orálna aplikácia bola uskutočnená žalúdočnou trubicou pre krysy a 2,5 ml injekčnou striekačkou. Počet jedincov v jednej skupine bol 2 alebo 3. Zber moču bol uskutočnený v metabolickej klietke po ukončení orálnych aplikácií. Vzorkový čas na zber moču bol 24 hodín po orálnej aplikácii glukózy. Potom, čo bol dokončený zber moču, bol zapísaný objem moču a bola zmeraná koncentrácia glukózy v moči. Koncentrácia glukózy bola meraná pomocou kitu pre laboratórne testovanie: Glucose B-Test WAKO (WAKO Pure Chemical Industries, Ltd.). Množstvo exkretovanej glukózy v moči za 24 hodín na 200 g telesnej váhy bolo vypočítané z objemu moču, koncentrácie glukózy v moči a telesnej váhy.

Výsledky sú ukázané v nasledujúcej tabuľke 2.

Tabuľka 2

Testovacia zlúčenina	Množstvo extretovanej glukózy v moči (mg)
Príklad 1	27,4
Príklad 7	109,1
Príklad 8	238,9
Príklad 10	69,5

Príklad skúšky 3

Test akútnej toxicity

Päť týždňov staré samce ICR myší (CLEA JAPAK, INC. 39 - 34 g, 5 zvierat v jednej skupine) hladovali 4 hodiny a potom im bola podkožné podaná suspenzia 666 mg/ml, ktorá bola pripravená prídavkom fyziologického roztoku: polyetylénglykolu 400 : etanolu (5 : 4 : 1) k 2-[4-2-hydroxyetyl)benzyl]fenyl 0-D-glukopyranozidu (zlúčenina opísaná v príklade 10) v dávke 3 ml/kg (2 000 mg/kg). Počas 24 hodín po podaní nebolo pozorované žiadne úmrtie.

Priemyselná využiteľnosť

Glukopyranozyloxybenzylbenzénové deriváty predkladaného vynálezu, ktoré sú znázornené uvedeným všeobecným vzorcom (I), majú vynikajúcu inhibičnú aktivitu proti ľudskému SGLT2. Predkladaný vynález poskytuje látky na zabránenie alebo liečbu cukrovky, diabetických komplikácií, obezity a podobne. Okrem toho, zlúčeniny znázornené uvedeným všeobecným vzorcom (I) sú dôležité medziprodukty pri výrobe zlúče nín, znázornených uvedeným všeobecným vzorcom (I), zlúčeniny predkladaného vynálezu, znázornené uvedeným všeobecným vzorcom (I), môžu byť ľahko pripravené prostredníctvom týchto zlúčenín.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Glukopyranozyloxybenzylbenzénový derivát všeobecného vzorca (I) kde R¹ predstavuje atóm vodíka alebo hydroxy(Ci_6 alkylovú) skupinu; R² predstavuje Ci_6 alkylovú skupinu, C]_₆ alkoxylovú skupinu, Ci_₆ alkyltioskupinu, hydroxy (C|.₆ alkylovú) skupinu, hydroxy (Ci_₆ alkoxylovú) skupinu, hydroxy (C[.₆ alkyltio) skupinu, C].₆ alkylovú skupinu substituovanú Ci.₆ alkoxyskupinou, C|.₍₎ alkoxylovú skupinu substituovanú Ci_₆ alkoxyskupinou alebo Cm alkyltioskupinu substituovanú C|.₆ alkoxyskupinou, alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ.
2. Glukopyranozyloxybenzylbenzénový derivát podľa nároku 1 všeobecného vzorca (I), kde R¹ predstavuje atóm vodíka alebo hydroxy (C i_6 alkylovú) skupinu; a R² predstavuje C|.ň alkylovú skupinu, C|.₍, alkoxylovú skupinu alebo hydroxy (C|_₆ alkylovú) skupinu, alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ.
3. Farmaceutická kompozícia, vyznačujúca sa tým, že ako aktívnu zložku obsahuje glukopyranozyloxybenzylbenzénový derivát podľa nároku 1 alebo 2 alebo jeho farmaceutický prijateľnú soľ.
4. Farmaceutická kompozícia podľa nároku 3, vyznačujúca sa tým, že je inhibítorom ľudského SGLT2.
5. Farmaceutická kompozícia podľa nároku 4 na použitie na prevenciu alebo liečenie cukrovky alebo s ňou spojených komplikácií.
6. Farmaceutická kompozícia podľa nároku 4 na použitie na prevenciu alebo liečenie obezity.
7. Použitie glukopyranozyloxybenzylbenzénového derivátu podľa nároku 1 alebo 2 alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli na výrobu liečiva na prevenciu alebo liečenie choroby spojenej s hyperglykémiou.
8. Použitie podľa nároku 7, kde chorobou spojenou s hyperglykémiou je cukrovka alebo diabetická komplikácia.
9. Použitie podľa nároku 7, kde chorobou spojenou s hyperglykémiou je obezita.
10. Benzylfenolový derivát všeobecného vzorca (II) (II) , kde R¹¹ predstavuje atóm vodíka alebo chránenú hydroxy (C^ alkylovú) skupinu; R¹² predstavuje Ci_₆ alkylovú skupinu, Cj.6 alkoxylovú skupinu, Ci__s alkyltioskupinu, chránenú hydroxy (C_{t 6} alkylovú) skupinu, chránenú hydroxylC,^ alkoxylovú) skupinu, chránenú hydroxy (C]_6 alkyltio) skupinu, C|.6 alkylovú skupinu substituovanú C,.₆ alkoxyskupinou, C₁₆ alkoxylovú skupinu substituovanú C[._Ŕ alkoxyskupinou alebo C|.₍, alkyltioskupinu substituovanú C_M alkoxyskupinou; s podmienkou, že R¹² nie je metylová skupina, etylová skupina, izopropylová skupina, terc-butylová skupina alebo metoxylová skupina, keď R¹¹ je atóm vodíka, alebo jeho soľ, ako medziprodukt na výrobu glukopyranozyloxybenzylbenzénových derivátov podľa nároku 1 alebo 2.