SK12972002A3

SK12972002A3 - Glukopyranosyloxybenzylbenzenové deriváty, liečivé zmesi obsahujúce tieto látky a medziprodukty na prípravu derivátov

Info

Publication number: SK12972002A3
Application number: SK1297-2002A
Authority: SK
Inventors: Hideki Fujikura; Nobuhiko Fushimi; Toshihiro Nishimura; Kazuya Tatani; Kenji Katsuno; Masahiro Hiratochi; Yoshiki Tokutake; Masayuki Isaji
Original assignee: Kissei Pharmaceutical Co., Ltd
Priority date: 2000-03-17
Filing date: 2001-03-15
Publication date: 2003-07-01
Also published as: KR100660738B1; WO2001068660A1; HUP0300057A3; US7465712B2; RU2254340C2; BG107102A; CA2402609C; CZ20023023A3; MXPA02009034A; AU4114601A; UA72586C2; NO20024424L; AU2001241146B2; AU2001241146B8; DE60115623D1; ATE312114T1; PL358002A1; TWI293305B; KR20020086649A; NO324249B1

Description

Oblasť techniky ₍

Predkladaný vynález sa týka glukopyranosyloxybenzylbenzenových derivátov a ich farmaceutický prijateľných solí, ktoré sú užitočné ako lieky, farmaceutické zmesi obsahujúce tieto látky a ich medz iprodukty.

Doterajší stav techniky

Cukrovka je jednou z chorôb spojenou s životným štýlom, ktorej pôvod je v zmene jedálnych návykov a v nedostatku pohybu. Z tohto dôvodu sa u pacientov s cukrovku uskutočňuje terapia diétou a pohybom. Okrem toho ak je ťažké zaistiť dostatočnú kontrolu a plynulé uskutočňovanie, uskutočňuje sa súčasne liečba liekmi. V súčasnej dobe sa ako antidiabetiká používajú biguanidy, sulfonylmočoviny a látky na zníženie inzulínovej rezistencie. Biguanidy a sulfonylmočoviny však niekedy môžu vykazovať vedľajšie príznaky, biguanidy môžu spôsobovať laktátovú acidozu a sulfonylmočoviny hypoglykémiu. V prípade použitia látok na zníženie inzulínovej rezistencie sú niekedy pozorované vedľajšie príznaky, ako otoky, a majú tiež podiel na vývoji obezity. Preto, aby sa vyriešili tieto problémy, bolo nutné vyvinúť antidiabetiká s novým mechanizmom.

V posledných rokoch sa vyvíjal nový typ antidiabetík, ktoré podporujú vylučovanie glukózy močom tým, že zabraňujú v obličkách (J.

» · · · * e * ^ľ e r c ' e r

C p r r pp**c a znižujú hladinu glukózy v krvi nadmernej resorpcii glukózy

Clin.Invest., Zv. 79 str. 1510-1515 (1987)). Okrem toho je publikované, že SGLT2 (Na+/glukózový kontransportér 2) je prítomný v SI časti obličkových proximálnych tubulov a podiela sa prevažne na resorpcii glukózy pri glomerulárnej filtrácii (J. Clin. Invest., Zv. 93, str.

397-404 (1994))

Preto teda, inhibícia aktivity ľudského SGLT2 zabraňuje resorpcii prebytku glukózy v obličkách, následne podporuje vylučovanie prebytku glukózy močom a normalizuje hladinu glukózy v krvi.

Preto je teda žiadúci rýchly vývoj antidiabetík, ktoré vykazujú silnú inhibičnú aktivitu k ľudskému SGLT2 a majú nový mechanizmus. Pretože takéto látky podporujú vylučovanie prebytku glukózy močom a následné znižovanie akumulácie glukózy v tele, dá sa od nich tiež očakávať, že budú zabraňovať alebo zmierňovať obezitu.

Opis vynálezu

Vynálezcovia svedomito hľadali a študovali zlúčeniny, ktoré majú inhibičnú aktivitu proti ľudskému SGLT2. Výsledkom je nájdenie glukopyranosyloxybenzylbenzenových derivátov, znázornených nasledujúcim všeobecným vzorcom (I), a ktoré vykazujú vynikajúcu inhibičnú aktivitu proti ľudskému SGLT2, ako je uvedené nižšie, čím tvoria základ predkladaného vynálezu.

Predkladaný vynález poskytuje nasledujúce glukopyranosyloxybenzylbenzenové deriváty a ich farmaceutický prijateľné soli, ktoré vykazujú inhibičnú • · aktivitu proti ľudskému SGLT2 in vivo a exkreciu prebytočnej glukózy v moču navozují ??? hypoglykemický účinok v dôsledku zabránenia reabsorbcie takejto glukózy v obličkách, a farmaceutické zmesi obsahujúce rovnaké látky a ich medziprodukty.

To znamená, že predkladaný vynález súvisí s glukopyranosyloxybenzylbenzenovým derivátom, znázorneným všeobecným vzorcom :

kde R¹ predstavuje atóm vodíku alebo hydroxy-(nižšiu alkylovú) skupinu; R² predstavuje nižšiu alkylovú skupinu, nižšiu alkoxylovú skupinu, nižšiu alkyltio skupinu, hydroxy-(nižšiu alkylovú) skupinu, hydroxy(nižšiu alkoxylovú) skupinu, hydroxy-(nižšiu alkytio) skupinu, nižšiu alkoxy-substituovanú (nižšiu alkylovú) skupinu, nižšiu alkoxy-substituovanú (nižšiu alkoxylovú) skupinu alebo nižšiu alkoxy-substituovanú (nižšiu alkytio) skupinu alebo ich farmaceutický prijateľnú sol.

Predkladaný vynález tiež súvisí s farmaceutickými zmesami, obsahujúcimi ako aktívnu zložku glukopyranosyloxybenzylbenzenový derivát, znázornený zhora uvedeným všeobecným vzorcom (I) alebo jeho farmaceutický prijateľnú sol.

Predkladaný vynález súvisí so spôsobom na zabránenie alebo liečbu chorôb spojenou e β s hyperglykémiou, ktorá zahrnuje glukopyranosyloxybenzylbenzenového znázorneného zhora uvedeným všeobecným alebo jeho farmaceutický prijateľnú sol.

Predkladaný vynález súvisí glukopyranosyloxybenzylbenzenového znázorneného zhora uvedeným všeobecným alebo jeho farmaceutický prijateľnú sol na výrobu farmaceutických zmesí na zabránenie alebo liečbu choroby spojenej s hyperglykémiou.

Predkladaný vynález tiež súvisí s benzylfenolovým derivátom znázorneným všeobecným vzorcom:

podávanie derivátu, vzorcom (I) s použitím derivátu, vzorcom (I)

OH alkytio skupinu, skupinu, chránenú kde Jl¹ predstavuje atóm vodíku alebo chránenú hydroxy(nižšiu alkylovú)skupinu; R¹² predstavuje nižšiu alkylovú skupinu, nižšiu alkoxylovú skupinu, nižšiu chránenú hydroxy-(nižšiu alkylovú) chránenú hydroxy-(nižšiu alkoxylovú)skupinu, hydroxy-(nižšiu alkytio)skupinu, nižšiu alkoxy-substituovanú (nižšiu alkylovú)skupinu, nižšiu alkoxy-substituovanú (nižšiu alkoxylovú)skupinu alebo nižšiu alkoxy-substituovanú (nižšiu alkytio)skupinu; s podmienkou, že R¹² nie je metylová skupina, etylová skupina, izopropylová skupina, terc.butylová skupina alebo metoxy skupina, kde R¹¹ je atóm vodíku.

V predkladanom vynáleze, sa termínom „nižšia alkylová skupina rozumie nerozvetvená alebo rozvetvená f R

P P alkylová skupina, ktorá má 1 až 6 atómov uhlíku ako metylová skupina, etylová skupina, propylová skupina, izopropylová skupina, butylová skupina, izobutylová skupina, sek.butylová skupina, terc. butylová skupina, pentylová skupina, izopentylová skupina, neopentylová skupina, terc. pentylová skupina, hexylová skupina alebo podobné; termínom „nižšia alkoxylová skupina” sa rozumie nerozvetvená alebo rozvetvená alkoxylová skupina, ktorá má 1 až 6 atómov uhlíku ako metoxylová skupina, etoxylová skupina, propoxylová skupina, izopropoxylová skupina, butoxylová izobutoxylová terc.butoxylová skupina, skupina, skupina, skupina, skupina, sek.butoxylová pentoxylová izopentoxylová skupina, neopentoxylová skupina, terc. pentoxylová skupina, hexyloxylová skupina alebo podobné; a termínom „nižšia alkytio skupina sa mieni nerozvetvená alebo rozvetvená alkytio skupina, ktorá má 1 až 6 atómov uhlíku ako metyltio skupina, etyltio skupina, propyltio skupina, izopropyltio skupina, butyltio skupina, izobutyltio skupina, sek.butyltio skupina, terc. butyltio skupina, pentyltio skupina, izopentyltio skupina, neopentyltio skupina, terc. Pentyltio skupina, hexyltio skupina alebo podobné. Termínom „hydroxy-(nižšia alkylová)skupina” sa rozumie nerozvetvená alebo rozvetvená hydroxy-alkylová skupina, ktorá má 1 až 6 atómov uhlíku ako hydroxymetylová skupina, 2-hydroxyetylová skupina, 1-hydroxyetylová skupina, 3-hydroxypropylová skupina, 2-hydroxypropylová skupina, 1-hydroxypropylová skupina, 2-hydroxy-lmetyletylová skupina, 4-hydroxybutylová skupina, 3hydroxybutylová skupina, 2-hydroxybutylová skupina, 1hydroxybutylová skupina, 5-hydroxypentylová skupina, 4-hydroxypentylová skupina, 3-hydroxypentylová skupina, 2-hydroxypentylová skupina,1-hydroxypentylová • · skupina,6-hydroxyhexylová skupina,4-hydroxyhexylová skupina,2-hydroxyhexylová skupina alebo podobné alkoxylová)skupina sa skupina,5-hydroxyhexylová skupina,3-hydroxyhexylová skupina,1-hydroxyhexylová ; termínom „hydroxy(nižšia rozumie nerozvetvená alebo rozvetvená hydroxy-alkoxylová skupina, ktorá má 1 až 6 atómov uhlíku ako 2-hydroxyetoxylová skupina, 3hydroxypropoxylová skupina, 2-hydroxypropoxylová skupina, 2-hydroxy-1-metyletoxylová skupina,4hydroxybutoxylová skupina,3-hydroxybutoxylová skupina, 2-hydroxybutoxylová skupina, 5-hydroxypentyloxylová skupina, 4-hydroxypentyloxylová skupina, 3hydroxypentyloxylová skupina, 2-hydroxypentyloxylová skupina, 6-hydroxyhexyloxylová, 5- hydroxyhexyloxylová,

4- hydroxyhexyloxylová, 3- hydroxyhexyloxylová, 2hydroxyhexyloxylová alebo podobné; a termínom „hydroxy(nižšia alkyltio) skupina sa rozumie nerozvetvená alebo rozvetvená hydroxyalkyltio skupina, ktorá má 1 až 6 atómov uhlíku ako hydroxymetylt io skupina, 2-hydroxyetyltio skupina, 1-hydroxyetyltio skupina, 3-hydroxypropyltio skupina, 2-hydroxypropyltio skupina, 1-hydroxypropyltio skupina, 2-hydroxy-lmetyletyltio skupina, 4-hydroxybutyltio skupina, 3hydroxybutyltio skupina, 2-hydroxybutyltio skupina, 1hydroxybutyltio skupina, 5-hydroxypentyltio skupina, 4hydroxypentyltio skupina, 3-hydroxypentyltio skupina, 2-hydroxypentyltio skupina, 1-hydroxypentyltio skupina,

6-hydroxyhexyltio skupina, 4-hydroxyhexyltio skupina,

5-hydroxyhexyltio skupina, 3-hydroxyhexyltio skupina,

2-hydroxyhexyltio skupina, 1-hydroxyhexyltio skupina a r r podobné. Termínom „nižšia alkoxy-substituovaná (nižšia alkylová)skupina sa rozumie zhora uvedená hydroxy(nižšia alkylová)skupina O-alkylovaná zhora uvedenou nižšou alkylovou skupinou; termínom „nižšia alkoxy-substituovaná (nižšia alkoxylová)skupina sa rozumie zhora uvedená hydroxy(nižšia alkoxylová)skupina O-alkylovaná zhora uvedenou nižšou alkylovou skupinou; a termínom „nižšia alkoxy-substituovaná (nižšia alkytio) skupina sa rozumie zhora uvedená hydroxy(nižšia alkytio)skupín a O-alkylovaná zhora uvedenou nižšou alkylovou skupinou.

Termínom „hydroxy-chrániaca skupina sa rozumie hydroxy-chrániaca skupina obecne používaná v organických reakciách, ako je benzylová skupina, metoxymetylová skupina, acetylová skupina alebo podobné.

V substituentu R¹ je uprednostňovaný atóm vodíku alebo hydroxyalkylová skupina, ktorá má 1 až 3 atómy uhlíku. V substituentu R², sú uprednostňované nižšia alkylová skupina, nižšia alkoxylová skupina a hydroxy(nižšia alkylová)skupina, a viac uprednostňované sú alkylová skupina, ktorá má 1 až 4 atómy uhlíku, alkoxylová skupina, ktorá má 1 až 3 atómy uhlíku a hydroxyalkylová skupina, ktorá má 1 až 3 atómy uhlíku.

Napríklad, zlúčeniny predkladaného vynálezu, znázornené zhora uvedeným všeobecným vzorcom (I), môžu byť pripravené použitím benzylfenolového derivátu predkladaného vynálezu, znázorneného všeobecným vzorcom (II) podľa nasledujúceho postupu;

DOPT.»’

or a sált

Proces> 1 r C • *

H,C

0<M_T ^cH’ (IV)

Proces.·,_2 kde

Alkalická hydrolýza predstavuje

alkylovú)skupinu, alkoxylovú)skupinu, hydroxy-(nižšiu hydroxy-(nižšiu hydroxy-(nižšiu atóm vodíku alebo chránenú hydroxy(nižšiu alkylovú)skupinu; R¹² predstavuje nižšiu alkylovú skupinu, nižšiu alkoxylovú skupinu, nižšiu alkytio skupinu, chránenú chránenú chránenú alkyltio)skupinu, nižšiu alkoxy-substituovanú (nižšiu alkylovú)skupinu, nižšiu alkoxy-substituovanú (nižšiu alkoxylovú) skupinu alebo nižšiu alkoxy-substituovanú (nižšiu alkytio) skupinu; X predstavuje odstupujúcu skupinu ako trichlóracetoimidoyloxylová skupina, acetoxylová skupina, atóm brómu alebo fluóru; R¹ a R²majú rovnaký význam, ako je uvedené zhora.

Postup 1

Glykosid znázornený zhora uvedeným všeobecným vzorcom (IV) môže byť pripravený vystavením benzylfenolového derivátu, znázorneného zhora uvedeným všeobecným vzorcom (II) alebo jeho soli glykosidácii použitím glykosylového donoru znázorneného zhora uvedeným všeobecným vzorcom (III), ako je 2,3,4,6tetra-O-acetyl-1-0-trichlóracetoimidoyl-a-Dglukopyranoza, 1,2,3,4,6-penta-O-acety-β-Dglukopyranoza, 2,3,4,6-tetra-O-acetyl-a-Dr e glukopyranosylbrómid a 2,3, 4, 6-tetra-0-acetyl-β-Dglukopyranosylfluórid za prítomnosti aktivačného činidla ako je bórtrifluórid dietyleterový komplex, trifluórmetansulonát strieborný, chlorid ciničitý alebo trimetylsilyl trifluórmetansulfonát v intertnom rozpúšťadle. Ako použité rozpúšťadlo môžu byť uvedené dichlórmetán, toluén, acetonitril, nitrometán, etylacetát, dietyléter, chloroform, z nich zmiešané rozpúšťadlo a im podobné. Teplota reakcie je obvykle od -30 °C po teplotu refluxu, reakčný čas je obvykle od 10 minút do 1 dňa, meniaci sa v závislosti od použitého východzieho materiálu, rozpúšťadla a teplote reakcie.

Postup 2

Zlúčenina (I) predkladaného vynálezu môže byť pripravená vystavením glykosidu, znázorneného zhora uvedeným všeobecným vzorcom (IV) alkalickej hydrolýze na odstránenie hydroxylových chrániacich skupín. Ako použité rozpúšťadlo môžu byť uvedené voda, metanol, etanol, tetrahydrofurán a z nich zmiešané rozpúšťadlo a im podobné, a ako alkalické látky môžu byť použité hydroxid sodný, metoxid sodný, etoxid sodný alebo im podobné. Teplota úpravy je obvykle od 0 °C po teplotu refluxu, čas úpravy je obvykle od 30 minút do 6 hodín, meniaci sa v závislosti od použitého východzieho materiálu, rozpúšťadla a teploty úpravy. Táto úprava môže byť uskutočnená vhodne zmenou alebo pridaním iného postupu obvyklým spôsobom podía použitej hydroxy-chrániacej skupiny.

Napríklad, zlúčeniny predkladaného vynálezu a ich soli, znázornené zhora uvedeným všeobecným vzorcom (II), ktoré sú použité ako východzie materiály vo v · vyššie zmienených postupoch výroby môžu byť pripravené podľa nasledujúceho postupu:

Proces A

Oxidácia použitím Dess-Martinovho činidla

Katalytická Proces D

Hydrogenácia (Príležitostné odstránenie alebo vnesenie chrániacej skupiny) (následná redukcia a vnesení a chrániacej skupiny kde R⁴ je nižšia alkoxykarbonylová skupina

Proces C Odstránenie chrániacej skupiny

Redukcia (následne redukcia a vnesenie chrániacej skupiny, kde R⁴ je nižšia alkoxykarbonylová skupina

alebo sol kde M predstavuje atóm vodíku alebo hydroxychrániacej skupiny; R⁴ predstavuje atóm vodíku, chránenú hydroxy-(nižšiu alkylovú) skupinu alebo nižšiu alkoxykarbonylovú skupinu; jeden z Y a Z je MgBr, MgCl,

Mgl alebo atóm lítia, zatial čo ten druhý je formylová skupina; a R¹¹ a R¹² majú rovnaký význam ako bolo definované zhora.

Postup A

Zlúčenina znázornená zhora uvedeným všeobecným vzorcom (VII) môže byť pripravená kondenzáciou benzaldehydového derivátu, znázorneného zhora uvedeným všeobecným vzorcom (V) , s Grignardovým činidlom alebo lítiovým činidlom, znázorneným zhora uvedeným všeobecným vzorcom (VI), alebo kondenzáciou Grigardovho činidla alebo lítiového činidla, znázorneného zhora uvedeným všeobecným vzorcom (V) s benzaldehydovým derivátom znázorneným zhora uvedeným všeobecným v intertnom rozpúšťadle. Ako použité vzorcom (VI) rozpúšťadlo mozu byť uvedené tetrahydrofurán, dietyleter z nich zmiešané rozpúšťadlo a im podobné. Teplta reakcie je obvykle od -78 °C do teploty refluxu, reakčný čas je obvykle 10 minút meniaci sa v závisosti od použitého materiálu, rozpúšťadla a teploty reakcie.

až 1 deň, východzieho

Postup B

Zlúčenina znázornená zhora uvedeným všeobecným vzorcom (VIII) môže byť pripravená vystavením zlúčeniny, znázornenej zhora uvedeným všeobecným vzorcom (VII), oxidácii použitím Dess-Martinovho činidla v intertnom rozpúšťadle. Ako použité rozpúšťadlo môžu byť uvedené dichlórmetán, chloroform, acetonitril, z nich zmiešané rozpúšťadlo a im podobné. Teplota reakcie je obvykle od 0°C do teploty refluxu, reakčný čas je obvykle 1 hodina až 1 deň, r r meniaci sa v závislosti od použitého východzieho materiálu, rozpúšťadla a teploty reaakcie.

Postup C

Zlúčenina, znázornená zhora uvedeným všeobecným vzorcom (II), môže byť pripravená odstránením chrániacej skupiny M zlúčeniny, znázornenej zhora uvedeným všeobecným vzorcom (VIII), (1) kondenzáciou výslednej zlúčeniny s metylchlóroformátom v prítomnosti bázy ako je trietylamín, diizopropyletylamin alebo N,Ndimetylaminopyridín v intertnom rozpúšťadle a (2) vystavením výsledného uhličitanového derivátu redukcii použitím redukčného činidla ako nátriumborohydrid. Ako použité rozpúšťadlo v reakcii (1) môžu byť uvedené tetrahydrofurán, dichlórmetán, acetonitril, etylacetát, dietyleter, z nich zmiešané rozpúšťadlo a im podobné. Teplota reakcie je obvykle od 0°C do teploty refluxu, reakčný čas je obvykle 30 minút až 1 deň, meniaci sa v závislosti od použitého východzieho materiálu, rozpúšťadla a teplote reakcie. Ako rozpúšťadlo použité v reakcii (2) môže byť uvedený, tetrahydrofurán a voda, a im podobné. Teplota reakcie je obvykle od 0 °C do teploty refluxu, reakčný čas je obvykle 1 hodina až 1 deň, meniaci sa v závislosti od použitého materiálu, rozpúšťadla a V prípade, že R⁴ je nižšia skupina, zlúčeniny predkladaného uvedeným všeobecným teploty reakcie alkoxykarbonylová vynálezu, znázornené zhora vzorcom (II), môžu byť získané redukcii na hydroxymetylovú redukčného činidla ako v intertnom rozpúšťadle a skupiny bežným spôsobom. Ako rozpúšťadlo použité pri vystavením skupiny skupinu použitím hydridu hlinitolitného chránením hydroxylovej r «· redukcii môže byť uvedený dietyleter, tetrahydrofurán, z nich zmiešané rozpúšťadlo a im podobné. Teplota reakcie je obvykle od 0°C do teploty refluxu, reakčný čas je obvykle v závislosti od teplote reakcie minút až 1 deň, meniaci sa použitého materiálu, rozpúšťadle a Zlúčenina predkladaného vynálezu, znázornená zhora uvedeným všeobecným vzorcom (II) môže byť prevedená bežným spôsobom na sol ako sodnú sol alebo draselnú soľ.

Postup D

Zlúčenina predkladaného vynálezu, znázornené zhora uvedeným všeobecným vzorcom (I), môže byť pripravená vystavením zlúčeniny znázornenej zhora uvedeným všeobecným vzorcom (VII) katalytickej hydroagenácii použitím palládiového katalyzátora ako je palládiový uholný prášok v prítomnosti alebo za neprítomnosti kyseliny ako je kyselina chlorovodíková v intertnom rozpúšťadle, a v prípade potreby odstránenm alebo vnesením chrániacej skupiny bežným spôsobom. Ako rozpúšťadlo použité pri katalytickej hydrogenácii môže byť uvedený metanol, etanol, tetrahydrofurán, etylacetát, kyselina octová, izopropanol, z nich zmiešané rozpúšťadlo a im podobné. Teplota reakcie je obvykle od laboratórnej teploty do teploty, refluxu, a reakčný čas je obvykle 30 minút až 1 deň, meniaci východzieho V prípade, skupina, materiálu, \4 ze R je zlúčeniny uvedeným sa v závislosti od použitého rozpúšťadla a teploty reakcie nižšia alkoxykarbonylová predkladaného vynálezu, znázornené zhora všeobecným vzorcom (II), môžu byť získané vystavením skupiny redukcii na hydroxymetylovú skupinu použitím redukčného činidla ako hydridohlinitanu sodného v inertnom rozpúšťadle a chránením hydroxylovej skupiny bežným spôsobom. Ako rozpúšťadlo použité pri redukcii môže byť uvedený dietyleter, tetrahydrofurán, z nich zmiešané rozpúšťadlo a im podobné. Teplota reakcie je obvykle od 0° C do teploty refluxu, reakčný čas je obvykle 10 minút až 1 deň, meniaci sa v závislosti od použitého východzieho materiálu, rozpúšťadla a teploty reakcie. Zlúčeniny predkladaného vynálezu, znázornená zhora uvedeným všeobecným vzorcom (II) môže byť prevedená bežným spôsobom na soľ ako na sodnú soľ alebo draselnú soľ.

Zlúčeniny predkladaného vynálezu získané zhora uvedeným výrobným postupom môžu byť izolované a purifikované bežnými separačnými spôsobmi, ako je frakčná rekryštalizácia, purifikácia použitím chromatografie, extrakcie rozpúšťadlom a extrakcia na pevnej fáze.

Glukopyranosyloxybenzylbenzenové deriváty predkladaného vynálezu, znázornené zhora uvedeným všeobecným vzorcom (I), môžu byť obvyklým spôsobom premenené na svoje farmaceutický prijateľné soli. Príklady takýchto solí, zahrnujú anorganické soli, ako sú sodná sol alebo draselná sol.

Zlúčeniny predkladaného vynálezu, znázornené zhora uvedeným všeobecným vzorcom (I) zahrnujú ich hydráty a ich solváty s farmaceutický prijateľnými rozpúšťadlami ako etanol.

Zlúčeniny predkladaného vynálezu a ich farmaceutický prijateľné soli, znázoranené zhora uvedeným všeobecným vzorcom (I), majú vynikajúcu • · r r ···· r r r e r • t c t c p • e β C < r r c. r r r r e e c c «·. · o r. r p p r r f r · · ~ inhibičnú aktivitu proti ľudskému SGLT2 a sú neobyčajne úžitočné ako prostriedky na prevenciu alebo liečbu cukrovky, diabetických komplikácií, obezity a podobne. Napríkad v nasledujúcej skúške inhibičného účinku na aktivitu ludského SGLT2 preukázali zlúčeniny predkladaného vynálezu silnú inhibičnú aktivitu proti ľudskému SGLT2.

Keď sa farmaceutické zmesi predkladaného vynálezu používajú pri praktickej liečbe, užívajú sa v rôznych typoch dávok, v závislosti od príklady typov dávok môžu granule, jemné granule, suché sirupy, tablety, kapsule, injekcie, roztoky, masti, čapíky, obklady a podobne, ktoré sa používajú orálne alebo parenterálne.

ich aplikácie. Ako byť uvedené prášky,

Tieto farmaceutické zmesi môžu byť pripravené zmiešaním s alebo nariedením a rozpustením v príslušných farmaceutických prísadách ako excipientené látky, dezintegrátory, väzobné látky, lubrikačné látky, dilučné látky, púfry, izotonicita, antiseptiká, zvlhčovadlá, emulgátory, dispergačné činidlá, stabilizátory, rozpúšťacie činidlá, a podobné, a pozostavením zmesi v súlade s obvyklým spôsobom.

Keď sa farmaceutické zmesi predkladaného vynálezu používajú pri praktickej liečbe, je dávka zlúčeniny ako aktívnej zložky, znázornenej zhora uvedeným všeobecným vzorcom (I) alebo jej farmaceutický prijateľná sol, približne odhadnutá v závislosti od veku, pohlavia, telesnej váhy a stupni príznakov a liečbe každého pacienta, a je približne v rozmedzí od 0, 1 do 1000 mg za deň pre dospelú osobu v prípade orálneho podávania, a približne v rozmedzí od 0,01 do e n r r c r r n r ί300 mg za deň pre parenternálnej aplikácie, rozdelená do jednej alebo dávkovaná primerane.

dospelú osobu a denná dávka niekoľkých dávok v prípade môže byť za deň a

Príklady uskutočnenia vynálezu

Predkladaný vynález je ďalej detailnejšie objasnený nasledujúcimi referenčnými príkladmi, príkladmi a príkladmi skúšok. Predkladaný vynález však nie je týmto obmedzený.

Referenčný príklad 1

4-(3-Benzyloxypropyl)brómbenzen ml) , a zmes bola Organická vrstva

Suspenzia hydridu sodného (60 %, 0,97 g), 3-(4brómfenyl)-l-propanolu (1,0 g) a benzylbromidu (0,69 ml) v benzene (24 ml) bola zmiešaná 7 hodín za refluxu. Po ochladení na okolitú teplotu bol k reakčnej zmesi pridaný nasýtený vodný roztok chloridu amónneho (50 extrahovaná etylacentátom (100 ml), bola premytá vodou (40 ml) a solankou (40 ml) a vysušená bezvodým síranom sodným. Rozpúšťadlo bolo odstránené za zníženého tlaku a zvyšok bol purifikovaný kolónovou chromatografiou na silikagélu (eluent: hexán/etylacetát = 20/1) za vzniku

4-(3-benzyloxypropyl)brombenzenu (1,4 g).

¹H-NMR (CDC1₃) δ ppm:

1,85-2,00 (2H, m), 2-60-2,75 (2H,m), 3,47 (2H, t, J=6,2 Hz), 4,50 (2H, s), 7,00-7,10 (2H,m), 7,20-7,45 (7H,m).

Referenčný príklad 2

Metyl 4-(4-etylbenzyl)3—hydroxybenzoát e R r i r r r r r ŕ f r r r r n r. f f r r r f ,

K roztoku l-bromo-4-etylbenzenu (0,41 ml) v tetrahydrofuranu (15 ml) bol pridaný 1,45 mol/1 roztok terc.butyllitia v n-pentanu (2,3 ml) v argónovej atmosfére pri -78 °C. Potom bola zmes miešaná 10 minút pri -78 °C a k reakčnej zmesi bol pridaný roztok 4-formyl-3-hydroxybenzoátu (0,18 g) v tetrahydrofuranu (5 ml) . Po 45 minútovom miešaní zmesi za chladenia ľadom bol k reakčnej zmesi pridaný nasýtený vodný roztok clóridu amónneho a voda, a zmes bola extrahovaná etylacetátom. Extrakt bol premytý vodou a vysušený bezvodým síranom horečnatým, a rozpúšťadlo bolo odstránené za zníženého tlaku. Zvyšok bol purifikovaný kolenovou chromatrografiou na silikagélu (eluent: hexán/etylacetát = 3/1) za vzniku difenylmetanolovej zlúčeniny (0,27 g). Získaná difenylmetanolová zlúčenina (0,27 g) bola rozpustená v metanole (5 ml) a k roztoku bola pridaná koncentrovaná kyselina chlorovodíková (0,08 ml) a 10% palládiový uholnatý prášok (54 mg). Potom bola zmes miešaná 18 hodín vo vodíkovej atmosfére. Pri laboratórnej teplote, katalyzátor bol odstránený filtráciou, a filtrát bol zakoncentrovaný za zníženého tlaku. Zvyšok bol purifikovaný kolónovou chromatografiou na silikagélu (eluent: hexán/etylacetát = 3/1) za vzniku metyl 4-(4-etylbenzyl)-3hydroxybenzoátu (0,20 g).

^XH-NMR (CDClj) δ ppm:

1,22 (3H, t),J=7,6 Hz), 2,62 (2H,q, J=7,6 Hz), 3,89(3H,

s), 4,00 (2H, s), 5,01 (1H, s), 7,05-7,25 (5H, m), 7,47 (1H, d, J=l,6 Hz), 7,56 (1H, dd, J=l,6, 7,8 Hz)

Referenčný príklad 3

Metyl 3-hydroxy-4-(4-propoxybenzyl)benzoát • ·

K roztoku l-allyloxy-4-brombenzenu (3,1 g) v tetrahydrofurán u (70 ml) bol pridaný l,45mol/l roztok terc. butyllitia v n-pentanu (ll ml) v argónovej atmosfére pri -78 °C. Potom bola zmes miešaná 5 minút pri -78 °C a k reakčnej zmesi bol pridaný roztok 4formyl-3-hydroxybenzoátu (0,89 g) v tetrahydrofuránu (15 ml). Po 30 minútovom miešaní zmesi za chladenia ľadom bol k reakčnj zmesi pridaný nasýtený vodný roztok chloridu amónneho a voda, a zmes bola extrahovaná etylacetátom. Extrakt bol premytý vodou a vysušený bezvodým síranom horečnatým, a rozpúšťadlo bolo odstránené za zníženého tlaku. Zvyšok bol purifikovaný kolonovou chromatografiou na silikagélu (eluent: hexán/etylacetát = 3/1) za vzniku diefenylmetanolovej zlúčeniny (0,99g). Získaná difenylmetanolová zlúčenina (0,99 g) bola rozpustená v metanole (10 ml) k roztoku bol pridaný 10'

Potom bola zmes atmosfére pri bol odstránený palládiový uhoľnatý prášok (0,30 g) miešaná 24 hodín vo vodíkovej laboratórnej teplote, katalyzátor filtráciou, a filtrát bol zakoncentrovaný za zníženého tlaku. Zvyšok bol purifikovaný kolonovou chromatografiou na silikagélu (eluent:

hexán/etylacetát = 3/1) za vzniku metyl 3-hydroxy-4-(propoxybenzyl)benzoátu (0,50 g).

(CDC1₃) δ ppm:

1,02	(3H,t, J	= 7,4	Hz), 1,70-1,85	(2H, m) , 3,80-	3,95
(5H,	m), 3,97	(2H,	s), 4,99	(1H, s)	, 6,75-6,90 2H,	m) ,
7,05	-7,20 (3H,	m) ,	7,47 (1H,	, d, J=	1,5 Hz), 7,56	(1H,

dd, J=l,5, 7,8 Hz)

Referenčný príklad 4 • · «e

Metyl 3-hydroxy-4-(4-(2-hydroxyetyl)benzyl)benzoát

K roztoku 2-(brómfenyl)etylalkoholu (1,7 g) v tetrahydrofuránu (100 ml) bol pridaný l,45mol/l roztok terc. butyllitia v n-pentanu (12,6 ml) v argónovej atmosfére pri -78 °C. Potom bola miešaná 10 minút pri -78 a k reakčnej pridaný roztok 4-formyl-3-hydroxybenzoátu v tetrahydrofuránu (10 ml). Po 30 minútovom miešaní zmesi za chladenia ľadom bol k reakčnej zmesi pridaný nasýtený vodný roztok chloridu amónneho a voda, a zmes bola extrahovaná etylacetátom. Extrakt bol premytý vodou a vysušený bezvodým síranom horečnatým, a rozpúšťadlo bolo odstránené za zníženého tlaku. Zvyšok bol purifikovaný kolonovou chromatografiou na hexán/etylacetát = 1/3) za vzniku zlúčeniny (0,28 g). Získaná zmes zmesi bol (0,50 g) silikagélu (eluent difenylmetanolovej laboratórnej difenylmetanolová zlúčenina (0,28 g) bola rozpustená v metanole (5 ml) a k roztoku bol pridaný 10' palladiumuhličitanový prášok (0,14 g) miešaná 14 hodín vo vodíkovej teplote, katalyzátor filtráciou, a filtrát bol zakoncentrovaný za zníženého tlaku. Zvyšok bol purifikovaný kolovonou chromatografiou na silikagélu (eluent: hexán/etylacetát = l/l) za vzniku metyl 3-hydroxy-4-[4- (2hydroxyetyl)benzyl] benzoátu (0,26 g).

^XH-NMR (CDC1₃) δ ppm:

1,37 (1H, t, J = 5,9 Hz), 2,84 (2H, t, J=6,5 Hz), 3,753,95 (5H, m), 4,01 (2H, s), 5,10 (1H,S), 7,05-7,25 (5H,m), 7,47 (1H, d, J=l,6 Hz), 7,56 (1H, dd, J=l,6,

7,8 Hz) k roztoku bol pridaný

Potom bola zmes atmosfére pri bol odstránený r ľ. η

Referenčný príklad 5

2-(4-Izobutylbenzyl)fenol

Grignardové činidlo bolo pripravené z 2benzyloxybróm-benzenu (0,20 g), horčíku (0,025 g), katalytického množstva jódu a tetrahydrofuránu (1 mľ) . Získané Grignardové činidlo bolo pridané k roztoku 4izobutylbenz-aldehydu (0,16 g) v tetrahydrofuránu (2 ml) a zmes bola miešaná 30 minút pri laboratórnej teplote. Reakčná zmes bola purifikovaná kolovonou chromatografiou na aminopropylovom silikagénu (eluent: tetrahydrofurán) za zisku difenylmetanolovej zlúčeniny (0,23). Získaná difenylmetanolová zlúčenina bola rozpustená v etanole (3 ml) a koncentrovanej kyseline chlorovodíkovej (0,1 ml). K tomuto roztoku bolo pridané katalytické množstvo 10% palladium-uhličitanového prášku a zmes bola miešaná cez noc vo vodíkovej atmosfére pri laboratórnej teplote. Katalyzátor bol odstránený filtráciou, a filtrát bola zakoncentrocaný za zníženého tlaku. Zvyšok bol purifikovaný kolonovou chromatografiou na silikagénu (eluent:

dichlórmetan/hexán = 1/1) za vzniku 2-(4izobutylbennyl)fenolu (0,10 g).

^-NMR (CDC1₃) δ ppm:

0/89 (6H, d, J=6,6 Hz), 1,75-1,90 (1H, m), 2,43 (2H,d,

J=7,2 Hz), 3,97 (2H,s), 4,66 (lH,s), 6,75-6,85 (lH,m),

6,85-6,95 (lH,m), 7,00-7,20 (6H,m)

Referenčný príklad 6

2-(4-Izopropoxabenzyl)fenol

Zlúčenina, uvedená v nadpise, bola pripraená podobným spôsobom, ako zlúčenina opísaná v referenčnom

Γ Γ príklade 5 použitím 4-izopropoxybenzaldehydu miesto 4izobutyl-benzaldehydu.

^-NMR (CDC1₃) δ ppm:

1,31 (6H,d, J=6,l Hz),3,93 (2H,s), 4,50 (lH,heptet,

J=6,l Hz), 4,72 (lH,s), 6,75-6,85 (3H,m), 6,85-6,95 (lH,m), 7,05-7,20 (4H,m)

Referenčný príklad 7

2-(4-etoxybenzyl)fenol

Grignarodovo činidlo bolo pripravené obvyklým spôsobom z 4-etoxybrombenzenu (1,5 g), horčíku (0,19 g), katalytického množstva jódu a tetrahydrofuránu (2 ml) . K získanému Grignardovmu činidlu bol po kvapkách pridaný roztok 2-benzyloxybenzaldehydu (1,1 g) v tetrahydrofuránu (15 ml) a zmes bola miešaná 30 minút pri laboratórnej teplote. K reakčnej zmesi bol pridaný nasýtený vodný roztok chloridu amónneho (10 ml) a voda (20 ml), a zmes bola extrahovaná etylacetátom (100 ml). Extrakt bol premytý vodou (20 ml) a solankou (20 ml) a vysušený bezvodým síranom sodným. Potom bolo rozpúšťadlo odstránené za zníženého tlaku. Zvyšok kolonovou chromatografiou na hexán/etylacetáť = 5/1) za vzniku· bol purifikovaný silikagénu (eluent difenylmetanolovej zlúčeniny (1,'7 difenylmetanolová zlúčenina (1,7 g) v etanole (25 ml). K roztoku koncentrovaná kyselina chlorovodíková

g) . Získaná bola rozpustená bola pridaná (0,42 ml) a katalytické množstvo 10% palladiový uholný prášok, a zmes bola miešaná 18 hodín vo vodíkovej atmosfére pri laboratórnej teplote. Katalyzátor bol odstránený filtráciou, a filtrát bol zakoncentrovaný za zníženého tlaku. K zvyšku bol pridaný etylacetát (100 ml) a zmes

bola premytá nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného (30 ml) a solanky (30 ml). Organická vrstva bola vysušená bezvodým síranom sodným, a rozpúšťadlo bolo odstránené za zníženého tlaku. Zvyšok bol purifikovaný kolonovou chromatografiou na silikagélu (eluent: hexán/etylacetát = 8/1) za vzniku 2 - (4-etoxybenzyl)fenolu (0,85 g).

¹H-NMR (CDC1₃) δ ppm:

1,39 (3H,t, J=7,l Hz), 3,93 (2H,s), 4,00 (2H,q, J=7,l Hz), 4,72 (1H, s), 6,75-6,85 (3H,m), 6,85-6,95 (1H, m), 7,05-7,20 (4H, m)

Referenčný príklad 8

2- [4-(3-benzoyloxypropyl) benzyl] fenol

Grignardové činidlo bolo pripravené spôsobom z 4-(3-benzyloxypropyl)brómbenzenu horčíku (0,25 g), katalitického množstva tetrahydofuranu. (10,5 ml). K získanému Grignardovho činidla bol pridaný (metoxymetoxy) benzaldehyd 1,1 g) v tetrahydrofuránu (24 ml) a zmes bola miešaná 25 minút pri 65 °C. Po ochladení na okolitú teplotu bol k reakčnej zmesi pridaný nasýtený vodný roztok chloridu amónneho (10 ml) a voda (20 ml), a zmes bola extrahovaná etylaceátom (100 ml). Extrakt bol premytý vodou (20 ml) a solankou (20 ml). Potom bol extrakt vysušený bezvodým síranom sodným a rozpúšťadlo bolo odstránené za zníženého tlaku, a zvyšok bol purifikovaný kolonovou chromatografiou na silikagélu (eluent: hexán/etylacetát = 5/1) za vzniku difenelymetanolovej zlúčeniny (2,5 g). Získaná difenylmetanolová zúčenina (2,5 g) bola rozpustená v etanole (42 ml) a k roztoku bolo pridané katalytické obvyklým (3,2 g), jódu a roztoku roztok 223 * c * r f r c. t množstvo 10% palladiového uholného prášku, a zmes bola miešaná 7,5 hodiny vo vodíkovej atmosfére pri laboratórnej teplote. Katalyzátor bol odstránený filtráciou, a filtrát bol zakoncentrovaný za zníženého tlaku. Zvyšok bol purifikovaný kolonovou chromatografiou na silikagélu (eluent: hexán/etylacetát = 5/2) za vzniku fenylpropanolovej zlúčeniny (1,6 g) . Potom bola fenylpropanolová zlúčenina (1,6 g) rozpustená v dichlórmetánu (29 ml), bol pridaný 4(dimetylamino)pyridín (0,069 g), trietylamín (1,0 ml) a benzoyl chlorid (0,79 ml) a zmes bola miešaná 3 hodiny pri laboratórnej teplote. K reakčnej zmesi bol pridaný etylacetát (100 ml) a voda (30 ml) a organická vrstva bola oddelená. Extrakt bol premytý solankou a vysušený bezvodým síranom sodným¹ a rozpúšťadlo bolo odstránené za zníženého tlaku. Zvyšok bol purifikovaný kolonovou chromatografiou na silikagélu (eluent: hexán/etylacetát = 20/1) za vzniku estérovej zlúčeniny (2,2 g). Zmes získanej estérovej zlúčeniny (2,2 g), monohydrátu kyseliny p-toluénsulfónovej (0,21 g) a metanolu (28 ml) bola miešaná 24 hodín pri laboratórnej teplote. Reakčná zmes bola zakoncentrovaná za zníženého tlaku a zvyšok bol purifikovaný kolonovou chromatografiou na silikagélu (eluent: hexán/etylacetát = 5/1) za vzniku 2-[4-(3bezoyl-oxypropyl)benzyl] fenolu (l,8g).

¹H-NMR (CDC1₃) δ ppm:

2,00-2,15 (2H,m), 2,70-2,80 (2H,m), (2H, t, J=6,5 Hz), 4,74 (lH,brs),

6,85-6,95 (lH,m), 7,05-7,20 (6H,m)

7,50-7,65 (lH,m), 8,00-8,10 (2H,m)

3,96 (2H,s), 4,33

6,75-6,85 (lH,m), 7,35-7,50 (2H,m) ,

Referenčný príklad 9

2-[4-(2-benzoyloxyetyl)benzyl] fenol r r

- r r.

Zlúčenina, uvedená v nadpise, bola pripravená podobným spôsobom, ako zlúčenina opísaná v referenčnom príkladu 8 použitím 4-(2-benzyloxyetyl)brómbenzenu miesto 4-(3-benzyloxypropyl)brómbenzenu.

‘'H-NMR (CDCla) δ ppm:

3,04 (2H,t,J=7,l Hz), 3,98 (2H,s), 4,51 (2H,t, J=7,l

Hz), 4,66 (1H,S), 6,75-6,85 (lH,m), 6,85-6,95 (lH,m), 7,05-7,25 (6H,m), 7,35-7,50 (2H,m), 7,50-7,60 (lH,m), 7,95-8,05 (2H,m)

Referenčný príklad 10

5-acetoxymetyl-2-(4-etylbenzyl)fenol

K suspenzii hydridu hlinito-litného (95 mg) v dietyleteru (10 ml) bol pridaný roztok metyl 4-(4etylbenzyl)-3-hydroxybenzoátu (0,27 g) v dietyleteru (5 ml) za chladenia ľadom. Potom bola zmes 45 minút zohrievaná pod refluxom a za chladenia ľadom bola k reakčnej zmesi postupne pridaná voda (0,1 ml), 15% vodný roztok hydroxidu sodného (0,1 ml) a voda (0,3 ml) . Potom bola zmes miešaná 5 minút pri laboratórnej teplote, reakčná zmes bola naliata do 0,5 mli/1 kyseliny chlorovodíkovej a extrahovaná etylacetátom. bezvodým síranom horečnatým výsledná zmes bola

Extrakt bol vysušený a rozpúšťadlo bolo odstránené za zníženého tlaku. Zvyšok bol purifikovaný kolonovou chromatografiou na silikagélu (eluent: hexán/etylacetát = 1/1) za vzniku redukovanej zlúčeniny (0,22 g). Potom bola získaná redukovaná zlúčenina

(0,22 g)	rozpustená v	tetrahydrofuránu	(2	ml) a
k roztoku	bol pridaný	vinyl acetát	(2	ml) a
bis)dibutylchlórotin)oxid	(24 mg) a zmes	bola	miešaná
19 hodín	pri 30 °C. Reakčná zmes bola	puri	f i kovaná

.· Γ r r r e e r f r r r r r ľ r r r r e C f ' C r C r r r' : ·.

priamo kolonovou chromatografiou na silikagélu (eluent: hexán/etylacetát = 3/1) za vzniku zlúčeniny 5acetoxymetyl-2 -(4-etylbenzyl)fenolu (0,21 g).

^XH-NMR (CDC1₃) δ ppm:

1,21 (3H,t,J=7,6 Hz), 2,09 (3H,s),' 2,61 (2H,q, J=7,6

Hz), 3,95 (2H,s), 4,74 (lH,s), 5,03 Í2H, s), 6,80 (1H, d, J=l,3 Hz), 6,80-6,90 (lH,m), 7,05-7,20 (5H,m)

Referenčný príklad 11

5-acetoxymetyl-2- (4-propoxybenzyl)fenolu

Zlúčenina, uvedená v nadpise, bola pripravená podobným spôsobom, ako zlúčená opísaná v referenčnom príklade 10 použitím metyl 3-hydroxy-4-(4propoxybenzyl)benzoátu miesto metyl 4-(4-etylbenzyl)-3hydroxybenzoátu.

^XH-NMR (CDCI3) δ ppm:

1,02 (3H,t, J=7,4 Hz), 1,70-1,85 (2H, m), 2,09 (3H,s),

3,88 (2H,t, J=6,6 Hz), 3,91 (2H,s), 5,02 (2H,s), 5,28 (lH,s), 6,70-6,90 (4H,m), 7,00-7,20 (3H,m)

Referenčný príklad 12

2- [4-(2-acetoxyetyl)benzyl]-5-acetoxymetylfenol

Zlúčenina, uvedená v nadpise, bola pripravená podobným spôsobom, ako zlúčenina opísaná v referenčnom príklade 10 použitím metyl 3-hydroxy-4-[4- (2hydroxyetyl)benzyl]benzoátu mieto metyl 4-(etylbenzyl)3- hydroxybenzoátu.

^-NMR (CDCI3) δ ppm:

2,03(3H,s) ,2,09 (3H,s), 2,90 (2H,t, J=7,l, Hz), 3,96 (2H,s), 4,25 (2H, t, J=7,l Hz), 4,82 (lH,s), 5,03 (2H,s), 6,80 (lH,d, J=l,5 Hz), 6,87 (lH,dd, J=l,5 Hz

7,7 Hz), 7,05-7,20 (5H,m) r r

Referekčný príklad 13 2-(4-etyltiobenzyl)fenol

Grignardové činidlo bolo pripravené z l-bróm-4(etyltio)benzenu (1,1 g), horčíku (0,12 g), katalytického množstva jódu a tetrahydrouranu (5 ml). K roztoku Grignardovho činidla bol pridaný roztok 2(metoxymetoxy)benzaldehyd (0,56 g) v tetrahydrofuránu (12 ml) a zmes bola miešaná 10 minút pri 65 °C. Po ochladení na okolitú teplotu bol k reakčnej zmesi pridaný nasýtený vodný roztok chloridu amónneho (5 ml) a voda (20 ml), a zmes bola extrahovaná etylacetátom (80 ml) . Extrakt bol premytý vodou (20 ml) a solankou (20 ml) , vysušený bezvodým síranom sodným a potom bolo odstránené rozpúšťadlo za zníženého tlaku. Zvyšok bol purifikovaný kolonovou chromatografiou na silikagélu (eluent: hexán/etylaceutá = 4/1) za vzniku difenylmetanolovej zlúčeniny (0,90 g). Získaná difenylmetanolová zlúčenina (0,90 g) bola rozpustená v dichlórmetáne (15 ml). K roztoku bolo pridané DessMartinové činidlo (1,1,1-tri)acetyloxy)-1,1-dihydro1,2-benziodoxol-3(1H)-on) (1,5 g), a zmes bola miešaná 26 hodín pri teplote 25 °C. K reakčnej zmesi bol pridaný dietyleter (75 ml) a 1 mol/l vodného roztoku hydroxidu sodného (30 ml) . Zmes bola prudko miešaná a organická fáza bola oddelená. Organická vrstva bola premytá 1 mol/l vodným roztokom hydroxidu sodného (30 ml), vodou (30 ml, 3x) a solankou (30 ml), vysušená bezvodým síranom sodným a rozpúšťadlo bolo odstránené za zníženého tlaku. Zvyšok bol purifikovaný kolonovou chromatografiou na silikagélu (eluent: hexán/etylacetát = 15/1-9/1) za vzniku ketonovej zlúčeniny (0,82 g).

Zmes získanej ketonovej zlúčeniny (0,82 g), monohydrátu p-toluensulfónovej kyseliny (0,10 g) a metanolu (14 ml) e e r e f bola miešaná 4 hodiny pri teplote 60 °C. Po ochladení na okolitú teplotu bola reakčná zmes koncentrovaná za zníženého tlaku. Zvyšok bol purifikovaný kolonovou chromatografiou na silikagélu (eluent: hexán/etylacetát = 15/1) za vzniku odchránenej zlúčeniny (0,69 g).

Získaná odchránená zlúčenina (0,68 g) bola rozpustená v tetrahydrofuránu 11 ml), a k roztoku bol pridaný trietylamín (0,41 ml) a metylchlóroformát (0,22 ml) a zmes bola miešaná 1 hodinu pri 25 °C. K reakčnej zmesi bol ďalej pridaný trietylamín (0,11 ml) a metylchlóroformát (0,061 ml) a zmes bola 30 minút miešaná. Reakčná zmes bola filtrovaná a filtrát bol koncentrovaný za zníženého tlaku. Zvyšok bol rozpustený v tetrahydrofuránu (14 ml) a k roztoku bola pridaná voda (7 ml), a bórhydrid sodný (0,40 g) a zmes bola miešaná 7 hodín pri 25 °C. K reakčnej zmesi bola po kvapkách pridaná 1 mol/l kyselina chlorovodíková 15 ml) a zmes bola extrahovaná etylacetátom (75 ml). Extrakt bol premytý vodou (20 ml) , nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného (20 ml) a solankou (20 ml), vysušený bezvodým síranom sodným, a rozpúšťadlo bolo odstránené za zníženého tlaku. Zvyšok bol purifikovaný kolonovou chromatografiou na silikagélu (eluent: hexán/etylacetát = 8/1) za vzniku 2-(4-etyltiobenzyl)fenolu (0,62 g).

¹H-NMR (CDC1₃) δ ppm:

1,29 (3H,t, J=7,3 Hz), 2,90 (2H,q, J=7,3 Hz), 3,96 (2H,

s), 4,62 (lH,s), 6,75-6,80 (lH,m), 6,85-6,95 (lH,m),

7,05-7,20 (4H,m), 7,20-7,30 (2H,m)

Referenčný príklad 14 2-(4-metoxybenzyl)fenyl glukopyranosid

2,3,4,6-tetra-O-acetyl-β-Dr e e e c *· e e e * c r

K roztoku 2 -(4-metoxybenzyl)fenolu (46 mg) a

2.3.4.6- tetra-O-acetyl-1-0-trichlóracetimidoyl-a-Dglukopyranosy (0,13 g) v dichlórmetánu (2 ml) bol pridaný komplex bórontrifluoriddietyleter (0,033 ml) a zmes bola miešaná 1 hodinu .pri laboratórnej teplote. Reakčná zmes bola purifikovaná kolonovou chromatografiou na aminopropylsilikagélu (eluent: dichlórmetán) za vzniku 2-(4-metoxybenzyl)fenyl

2.3.4.6- tetra-O-acetyl-β-D-glukopyranosidu (0,11 g). ¹H-NMR (CDC1₃) δ ppm:

1,91 (3H,s), 2,03 (3H,s), 2,05 (3H,s), 2,08 (3H,s),

3,77 (3H,s), 3,80-,3-95 (3H,m), 4,17 (lH,dd, J=2,5 12,2

Hz), 4,29 (lH,dd, J=5,5, 12,2 Hz), 5,11 (lH,d, J=7,5

Hz), 5,10-5,25 (lH,m), 5,25-5,40 (2H,m), '6,75-6,85 (2H,m), 6,95-7,10 (5H, m), 7,10-7,25 (lH,m)

Referenčný príklad 15

2- (4-metylbenzyl) f enyl_2,3,4,6 -tetra-O-acetyl-β-Dglukopyranosid

Zlúčenina uvedená v nadpise bola pripravaná podobne ako je opísané v referenčnom príklade 14 použitím 2-(4-metylbenzyl)fenolu miesto 2 - (4metoxybenzyl)fenolu.

^-NMR (CDCI3) δ ppm:

1,89 (3H,s), 2,03 (3H,s), 2,05 (3H,s), 2,07 (3H,s),

2,30 (3H,s), 3,80-3,95 (3H,m), 4,17 (lH,dd, J=2,5 12,3

Hz), 4,28 (IH, dd, J=5,5 12,3 Hz), 5,11 (IH, d, J=7,5 Hz), 5,10-5,25 (IH, m), 5,25-5,40 (2H, m), 6,90-7,20 (8H,m)

Príklad 16

2-Etylbenzyl) f enyl_2,3,4,6- tetra- 0 - ace tyl - βΡglukopyranosid p e

Zlúčenina uvedená v nadpise bola pripravená podobne ako je opísané v referenčnom príklae 14 použitím 2 -(4-etylbenzyl)fenolu miesto 2-(4metoxybenzyl)fenolu.

^XH-NMR (CDC1₃) δ ppm:

1,20	(3H, t, J=	7,6 Hz)	, 1,87 (3H,s), 2,	03 (3H,s), 2,05
(3H,	s), 2,08 (	3H,s),	2,60 (2H,q, J=7,6	Hz), 3,80-4,00
(3H,	m) , 4,18	(1H,dd,	J=2,3 12,3 Hz),	4,28 (1H, dd,
J=5,4	12,2 Hz),	5,11	(1H,d, J=7,5 Hz) ,	5,10-5,25 (1H,

m), 5,25-5,40 (2H, m), 6,90-7,25 (8H,m)

Referenčný príklad 17

2-(4-izobutylbenzyl)fenyl_2,3,4,6-tetra-0-acetyl-β-Dglukopryranosid

Zlúčenina uvedená v nadpise bola pripravená podobne ako je opísané v referenčnom príklade 14 použitím 2 -(4-izobutylbenzyl)fenolu miesto 2-(4metoxybenzyl)fenolu.

^XH-NMR (CDCI3) δ ppm:

0,88 (6H,d, J=6,6Hz), 1,75-1,90 (1H, m), 1,87 (3H,s),

2,03 (3H,s), 2,05 (3H,s), 2,08 (3H,s), 2,42 (2H,d,

J=7,2 Hz), 3,80-3,95 (3H,m), 4,18 (lH,dd, J=2,4 12,3

Hz), 4,29 (lH,dd, J=5,5 12,3 Hz), 5,11 (1H, d, J=7,6

Hz), 5,10-5,25 (1H, m), 5,25-5,40 (2H,m), 6,90-7,25 (8H,m)

Referenčný príklad 18

2- (4-etoxybenzyl) fenyl_2,3,4,6- tetra-0-acetyl-β-Dglukopryranosid

Γ f ŕ f • r i- r.

Zlúčenina uvedená v nadpise bola pripravená podobne ako je opísané v referenčnom príklade 14 použitím 2-(4-etoxybenzyl)fenolu miesto 2-(4metoxybenzyl)fenolu.

^XH-NMR (CDC1₃) δ ppm:

1,39 (3H,t, J=7,0 Hz), 1,91 (3H,s), 2,03' (3H,s), 2,05 (3H,s), 2,07 (3H,s), 3,80-3,95 (3H,m), 3,99 (2H,q,

J=7,0 Hz), 4,18 (lH,dd, J=2,5 12,3 Hz), 4,28 (lH,dd,

J=5,6 12,3 Hz), 5,10 (lH,d, J=7,7 Hz), 5,15-5,25 (lH,m), 5,25-5,40 (2H, m), 6,75-6,85 (2H,m), 6,95-7,10 (5H, m), 7,10-7,20 (lH,m)

Referenčný príklad 19

2-(4-izopropoxybenzyl)fenyl 2,3,4,6-tetra-0-acetyl~p-Dglukopyranosid

Zlúčenina uvedená v nadpise bola pripravená podobne ako je opísané v referenčnom príklade 14 použitím 2-{4-izopropoxybenzyl)fenolu miesto 2-(4metoxybenzyl)fenolu.

^XH-NMR (CDCI3) δ ppm:

1,30 (6H,d, J=6,0 Hz), 1,90 (3H,s), 2,03 (3H,s), 2,05 (3H,s), 2,08 (3H,s), 3,80-3,90 (3H,m), 4,18 (1H, dd,

J=2,3, 12,3 Hz), 4,28 (lH,dd, J=5,5 12,3 Hz), 4,48 (lH,heptet, J=6,0 Hz),5,10 (1H, d, J=7,7Hz), 5,10-5,25 (1H, m), 5,25-5,40 (2H,m), 6,70-6,85 (2H, m), 6,90-7,10 (5H, m), 7,10-7,20 (lH,m)

Referenčný príklad 20

5-acetoxymetyl-2-(4-etylbenzyl)fenyl_2,3,4,6-1etra-0 acetyl-β-D-glukopyranosid ts e Γ ^r < e r· c e c c r <· r, c ' f

C i r r> p <* r r. c c <· e <* r r

Zlúčenina uvedená v nadpise bola pripravená podobne ako je opísané v referenčnom príklade 14 použitím 5-acetoxymetyl-2-(4-etylbenzyl)fenolu miesto 2-(4-metoxybenzyl)fenolu.

¹H-NMR (CDC1₃) δ ppm:

1,20 (3H, t,J=7,6 Hz), 1,88 (3H,s), 2,02 (3H,s), 2,05 (3H,s), 2,07 (3H,s), 2,09 (3H,s), 2,60 (2H,q,J=7,6 Hz),

3,80-3,95 (3H,m), 4,20(lH,dd, J=2,4 12,3 Hz), 4,27 (lH,dd, J=5,3 12,3 Hz), 5,00-5,10 (2H,m), 5,13 (lH,d,

J=7,4 Hz), 5,15-5,40(3H,m), 6,95-7,15 (7H,m)

Referenčný príklad 21

Acetoxymetyl-2 - (4-propoxybenzyl)fenyl 2,3,4,6-tetra-0 acetyl-β-D-glukopyranoaid

Zlúčenina uvedená v nadpise bola pripravená podobne ako je opísané v referenčnom príklade 14 použitím 5-acetoxymetyl-2-(4-propoxybenzyl)fenolu miesto 2-(4-metoxybenzyl)fenolu.

^-NMR (CDCI3) δ ppm:

1,01 (3H,t,	J=7,4 Hz), 1,70-1,85 (2H,m),	1,92	(3H,s),
2,03(3H,s),	2,05 (3H,s) , 2,07 (3H,s) ,	2,09	(3H,s),
3,80-3,95	(5H,m), 4,20 (lH,dd, J=2,4 12,3 Hz)	, 4,27
(lH,dd, J=5	,3 12,3 Hz), 5,00-5,10 (2H, m)	, 5,12'	(ÍH,d,
J=7,4 Hz),	5,15-5,40 (3H,m), 6,75-6,85	(2H,m) ,	6,95-

7,10 (5H,m)

Referenčný príklad 22

2- [4-(2-acetoxyetyl)benzyl]-5-acetoxymetylfenyl

2,3,4,6-tetra-O-acetyl-p-D-glukopyranosid • · ' Γ Γ c • · r r r r r f C f β V r D

-e.....

Zlúčenina uvedená v nadpise bola pripravená podobne ako je opísané v referenčnom príklade 14 použitím 2- [4- (2-acetoxyetyl)benzyl]-5acetoxymetylfenolu miesto 2 -(4-metoxybenzyl)fenolu.

’-H-NMR (CDCls) δ ppm;

1,89 (3H,s), 2,03 (3H,s), 2,03(3H,s), 2,05 (3H,s), 2,07 (3H,s), 2,09 (3H,s), 2,88 (2H,t, J=7,l Hz), 3,85-3,95 (3H,m), 4,15-4,35 (4H,m), 5,00-5,10 (2H,m), 5,13 (1H, d, J=7,5 Hz), 5,15-5,40 (3H,m), 6,95-7,15 (7H, m)

Príklad 1

2-(4-metoxybenzyl)fenyl β-D-glukopyranosid

Metoxid sodný (28% roztok v metanole; 0,12 ml) bol pridaný k roztoku 2-(4-metoxybenzyl)fenyl 2,3,4,6tetra-O-acetyl-p-D-glukopyranosidu (0,11 g) v metanole (4 ml) a zmes bola miešaná 30 minút pri laboratórnej odstránené pri purifikovaný silikagélu teplote. Rozpúšťadlo bolo tlaku. Zvyšok bol chromatografiou na dichlórmetan/metanol = 10/1) za vzniku metoxybenzyl)fenyl β-D-glukopyranosidu (65 mg).

^-NMR (CDC1₃) δ ppm:

3,35-3,55 (4H,m), 3,69 (lH,dd, J=5,l 12,1 Hz), 3,73 (3H,s), 3,80-4,00 (2H,m), 4,03 (lH,d, J=15,l Hz), 4,91 (lH,d, J=7,4 Hz), 6,75-6,85 (2H,m), 6,85-6,95 (lH,m),

6,95-7,10 (lH,m), 7,10-7,20 (4H,m).

znizenom kolonovou (elluent: 2- (4Príklad 2

2-(4-metoxybenzyl)fenyl β-D-glukopyranosid

Zlúčenina uvedená v nadpise bola pripravená podobným spôsobom ako je opísané v príklade 1 použitím e s r f r c c r r n r r r r r <· r r r r -- . r £ f* r ^r <'

2-(4-metylbenzyl)fenyl 2,3,4,6, -tetra-O-acetyl-β-Dglukopyranosidu miesto 2 -(4-metoxybenzyl)fenyl

2,3,4,6, -tetra-0-acetyl-β-D-glukopyranosidu.

^XH-NMR (CDC1₃) δ ppm:

2,27 (3H,s), 3,35-3,55 (4H,m), 3,69 (lH,dd, J=5,2 12,0 Hz), 3,80-3,90 (lH,m), 3,94 (lH,d, J=15,0 Hz), 4,05 (lH,d, J=15,0 Hz), 4,85-4,95 (lH,m), 6,85-6,95 (lH,m),

6,95-7,20 (7H, m).

Príklad 3

2-(4-etylbenzyl)fenyl β-D-glukopyranosid

Zlúčenina uvedená v nadpise bola pripravená podobným spôsobom ako je opísané v príklade 1 použitím 2-(4-etylbenzyl)fenyl 2,3,4,6, -tetra-0-acetyl-β-Dglukopyranosidu miesto 2 -(4-metoxybenzyl)fenyl

2,3,4,6, -tetra-0-acetyl-β-D-glukopyranosidu.

^XH-NMR (CDCI3) δ ppm:

1,15-1,25 (3H,m), 2,50-2,65 (2H,m),

3,65-3,75 (lH,m), 3,80-4,00 (2H, m),

Hz), 4,85-5,00 (1H, m), 6,85-7,10

3,35-3,55 (4H,m),

4,06 (lH,d, J=14,9 (lH,m), 7,00-7,20 (7H,m).

Príklad 4

2-(4-izobutylbenzyl)fenyl β-D-glukopyranosid

Zlúčenina uvedená v nadpise bola pripravená podobným spôsobom ako je opísané v príklade 1 použitím

- (4 - izobutylbenzyl) fenyl 2,3,4,6, -tetra-O-acetyl-β-Ώglukopyranosidu miesto 2 -(4-metoxybenzyl)fenyl

2,3,4,6,-tetra-0-acetyl-β-D-glukopyranosidu.

e e

2,41 (2H, d, J=7,l (lH,m), 3,80-3,95

4,06 (lH,d, J=15,0 ^XH-NMR (CDC1₃) δ ppm:

0,80-0,95 (6H,m), 1,70-1,90 (lH,m),

Hz), 3,30-3,55 (4H,m), 3,60-3,75 (lH,m), 3,95 (1H, d, J=15,0 Hz),

Hz), 4,85-4,95 (1H, m), 6,80-7,20 (8H, m).

Príklad 5

2-(4-etoxybenzyl)fenyl β-D-glukopyranosid

Zlúčenina uvedená v nadpise bola pripravená podobným spôsobom ako je opísané v príklade 1 použitím 2-(4-etoxybenzyl)fenyl 2,3,4,6, -tetra-0-acetyl-β-Dglukopyranosidu miesto 2-(4-metoxybenzyl)fenyl

2,3,4,6, -tetra-0-acetyl-β-D-glukopyranosidu.

¹H-NMR (CDCI3) δ ppm:

1,35 (3H,t, J=6,8 Hz), 3,35-3,55 (4H, m), 3,60-3,75 (lH,m), 3,80-4,10 (5H,m), 4,90 (lH,d, J=7,l Hz), 6,706,85 (2H, m), 6,85-6,95 (lH,m), 7,00-7,20 (5H,m)

Príklad 6

2-(4-izopropoxybenzyl)fenyl β-D-glukopyranosid

Zlúčenina uvedená v nadpise bola pripravená podobným spôsobom ako je opísané v príklade 1 použitím 2-(4-izopropoxybenzyl)fenyl 2,3,4,6, -tetra-0-acetyl-βD-glukopyranosidu miesto 2 -(4-metoxybenzyl)fenyl

2,3,4,6, -tetra-0-acetyl-β-D-glukopyranosidu.

^XH-NMR (CDCI3) δ ppm:

1,27 (6H,d, J=6',0 Hz), 3,35-3,55 (4H,m), 3,69 (lH,dd,

J=5,4, 12,1 Hz) , 3,88	(1H, dd,	J=2 , 0	12,1 Hz) ,	3 , 91
(1H, d, J=15,0 Hz), 4,	02 (lH,d,	J=15,0	Hz), 4,51	(1H,
heptet,J=6,0 Hz), 4,91	(1H, d,	J=7,7	Hz), 6,70	-6,85

r. e r e c c e <* t( r e r r «c i r> r t n r f- >f. r r r, >r ' r ^ľ r (2H, m), 6,85-6,95 (1H, m), 7,00-7,10 (lH,m), 7,10-7,20 (4H,m)

Príklad 7

5-hydroxymetyl-2 - (4-propoxybenzyl) fenyl_β -Dglukopyranósid

Zlúčenina uvedená v nadpise bola pripravená podobným spôsobom ako je opísané v príklade 1 použitím 5-acetoxymetyl-2-(4-propoxybenzyl)fenyl 2,3,4,6,-tetraO-acetyl-p-D-glukopyranosidu miesto 2-(4metoxybenzyl)fenyl 2,3,4,6,-tetra-O-acetyl-β-Όglukopyranosidu.

^XH-NMR (CDC1₃) δ ppm:

1,02 (3H,t, J=7,4 Hz), 1,70-1,85 (2H,m), 3,30-3,55 (4H,m), 3,65-3,75 (lH,m), 3,80-3,95 (4H,m), 4,00(lH,d,

J=15,0 Hz), 4,54 (2H,s), 4,93 (lH,d, J=7,4 Hz), 6,706,85 (2H,m), 6,85-6,95 (lH,m), 7,02 (lH,d, J=7,7 Hz),

7,05-7,20 (3H,m)

Príklad 8

2-(4-etylbenzyl)-5-hydroxymetylfenyl β-D-glukopyranosid

Zlúčenina uvedená v nadpise bola pripravená podobným spôsobom ako je opísané v príklade 1 použitím 5-acetoxymetyl-2-(4-etylbenzyl)fenyl 2,3,4,6,-tetra-0acetyl-β-D-glukopyranosidu miesto 2- (4metoxybenzyl)fenyl 2,3,4,6,-tetra-0-acetyl-β-Dglukopyranosidu .

^XH-NMR (CDCI3) δ ppm:

1,19 (3H,t, J=7,6 Hz), 2,57 (2H,q, J=7,6 Hz), 3,30-3,55 (4H,m), 3,65-3,75 (lH,m), 3,85-4,00 (2H,m),4,04 (lH,d,

J=15,0 Hz), 4,54 (2H,S), 4,93(lH,d, J=7,4 Hz). 6,8536 r c.

• · r. r Γ ° • r < r ŕ e < r < g o r n e r.

C r < t: n e P ft r .· '

6,95 (lH,m), 7,02 (lH,d, J=7,7 Hz), 7,06 (2H,d, J=8,l

Hz), 7,10-7,20 (3H, m)

Príklad 9

2- [4- (2-hydroxyetyl)benzyl] - 5-hydroxyme tyl fenyl_β-Ρglukopyranosid

Zlúčenina uvedená v nadpise bola pripravená podobne ako je opísané v príklade 1 použitím 2-[4-(2acetoxyetyl)benzyl]-5-acetoxymetylfenylu 2,3,4,6 tetra-O-acetyl-β-D-glukopyranosidu miesto 2-(4metoxybenzyl)fenyl glukopyranosidu.

^-NMR (CDC1₃) δ ppm:

2,76 (2H,t, J=7,1 Hz), (3H,m), 3,85-4,00 (2H,m), (2H, s) , 4,92 (lH,d, J=7, (lH,d, J=7,9 Hz), 7,09 (3H,m)

2,3,4,6-tetra-0-acetyl-β-Ρ3,30-3,55 (4H,m), 3,60-3,75

4,05 (lH,d, J=14,6 Hz), 4,54

Hz), 6,85-6,95 (lH,m), 7,03 (2H,d, J=7,8 Hz), 7,10-7,20

Príklad 10

2-[4-(2-hydroxyetyl)benzyl] fenyl β-D-glukopyranosid

K roztoku 2-[4-(2-benzoyloxyetyl)benzyl] fenolu (0,49 g) a 1,2,3,4,6-penta-O-acetyl-β-D-glukopyranosy (1,7 g) v toluénu (5,2 ml) a dichlórmetánu (2,2 ml) bol pridaný komplex bortrifluórid eterátu (0,56 ml), a zmes bola miešaná 8 hodín pri 25 °C. K reakčnej zmesi bol pridaný etylacetát (70 ml) a nasýtený vodný roztok hydrogénuhličitanu sodného (25 ml) a organická vrstva bola oddelená. Organická vrstva bola premytá solankou (25 ml) a vysušená bezvodým síranom sodným, a rozpúšťadlo bolo odstránené za zníženého tlaku. Zvyšok β * c e

	37	t e e r <- r r r	* t r C r t 0 r r c Γ '
r. ©r r c r r r. c <	< c r c r ·* <'
bol rozpustený	v metanole (5	ml) a	bol	pridaný
tetrahydrofurán	(2,5 ml), metoxid sodný	(28%	roztok
v etanole, 0,14	ml) a výsledná	zmes bola	miešaná 12,5

hodiny pri 25 °C. K reakčnej zmesi bol pridaný etylacetát (75 ml) a voda (20 ml) a organická vrstva bola oddelená. Organická vrstva bola premytá solankou (20 ml) a vysušená bezvodým síranom sodným a rozpúšťadlo bolo odstránené za zníženého tlaku. Zvyšok bol rozpustený v metanole (7,5 ml) a bol pridaný metoxid sodný (28% roztok v metanole, 0,085 ml) a výsledná zmes bola miešaná 5 hodín pri 25 °C. Reakčná zmes bola purifikovaná kolonovou chromatografiou na silikagélu (eluent: dichlormetan/metanol = 4/1).

Rozpúšťadlo bolo odstránené za zníženého tlaku, k zvyšku bol pridaný dietyleter a výsledné precipitáty boli získané filtráciou. Výsledná pevná látka bola premytá dietyletérom a vysušená za zníženého tlaku za vzniku 2-[4-(2-hydroxyetyl)benzyl]-fenyl β-Dglukopyranosidu (0,47 g).

¹H-NMR (CDC1₃) δ ppm:

2,76 (2H,t, J=7,l Hz), 3,35-3,55 (4H,m) ,3,65-3,75 (3H,m), 3,88 (lH,dd, J=l,8 11,8 Hz), 3,95 (lH,d, J=15,2

Hz), 4,07 (lH,d, J=15,2 Hz), 4,90 (lH,d, J=7,4 Hz), 6,85-6,95 (1H, m), 7,00-7,20 (7H,m)

Príklad 11

2-[4-(3-hydroxypropy1)benzyl] fenyl β-D-glukopyranosid

Zlúčenina uvedená v nadpise bola podobne pripravená ako je opísané v príklade 10 použitím 2-[4(3-benzoyloxypropyl)benzyl] fenolu miesto 2-[4-(2benzoyloxyetyl)benzyl]fenolu.

¹H-NMR (CDCI3) δ ppm:

r c

1,70-1,85 (2H,m),2,55-2,65 (2H,m), 3,30-3,60 (6H,m),

3,69 (lH,dd, J=5,2 11,9 Hz), 3,88 (lH,dd, J=2,0, 11,9

Hz), 3,95 (lH,d, J=15,l Hz), 4,06 (lH,d, J=15,l Hz),

4,90 (lH,d, J=7,3 Hz), 6,85-6,95 (lH,m), 7,00-7,20 (7H,m) .

I

Príklad 12

2-(4-etyltiobenzyl) fenyl β-D-glukopyranosid

K roztoku 2- (4-etyltiobenzyl)fenolu (0,51 g) a

1,2,3,4,6-penta-O-acetyl-β-D-glukopyranosy (2,4 g) v toluénu (6,3 ml) a dichlórmetánu (2,7 ml) bol pridaný komplex bórontrifluórddietyleter (0,78 ml), a zmes bola miešaná 9 hodín pri laboratórnej teplote. K reakčnej zmesi bol pridaný etykacetát (70 ml) a nasýtený vodný roztk hydrogénuhličitanu sodného (25 ml), a organická vrstva bola oddelená. Organická vrstva bola premytá solankou (25 ml) a vysušená bezvodým síranom sodným, a rozpúšťadlo bolo odstránené za zníženého tlaku. Zvyšok bol rozpustený v metanele (10,5 ml) a k roztoku bol pridaný metoxid sodný (28% roztok v metanole, 0,08 ml) a zmes bola miešaná 18 hodín pri 25 °C. K reakčnej zmesi bol pridaný etylacetát (75 ml) a voda (20 ml) a organická vrstva bola oddelená. Organická vrstva bola premytá solankou (20 ml) a vysušená bezvodým síranom sodným, a rozpúšťadlo bolo odstránené za zníženého tlaku. Zvyšok bol purifikovaný kolonovu chromatografiou na silikagélu (eluent: dichlórmetan/metanol - 10/1). Rozpúšťadlo bolo odstránené za zníženého tlaku, k zvyšku bol pridaný dietyleter a výsledný precipitát bol získaný filtráciou. Výsledná bezfarebná pevná látka bola premytá dietyleterom a vysušená za zníženého tlaku za vzniku 2-(4-etyltiobenzyl)fenyl β-D-glukopyranosidu (0,51 g).

• · r · • · c * e e r * · <

r c « e ee··» ^XH-NMR (CDC1₃) δ ppm:

1,24 (3H,t, J=7,3 Hz), 2,88 (2H,q, J=7,3 Hz), 3,35-3,55 (4H,m), 3,69 (lH,dd, J=5,0, 12,2 Hz), 3,88 (lH,dd, J=2,0 12,2 Hz), 3,95 (lH,d, J=15,l Hz), 4,08 (lH,d, J=15,l Hz), 4,91 (lH,d, J=7,3 Hz), 6,85-7,00 (lH,m),

7,00-7,10 (lH,m), 7,10-7,30 (6H, m).

Príklad skúšky 1

Stanovenie inhibičného účinku na aktivitu ludského

1)

SGLT2

Konštrukcia plazmidového 'vektora exprimujúceho ľudský SGLT2

Príprava cDNA knižnice pre PCR amplifikáciu bola uskutočnená reverznou transkripciou celkovej RNA pripravenej z ľudských obličiek (Ori gen) použitím dT oligonukleotidu ako primeru a preamplifikačného systému Super Script (Gibco-BRL: LIFE TECHNOLOGIES). Fragment DNA kódujúci ľudský SGLT2 bol amplifikovaný PCR reakciou za použitia Pfu DNA polymerázy (Stratagene), v ktorej bola vyššie opísaná cDNA knižnica ľudských obličiek použitá ako templát a nasledujúce oligonukleotidy 0702F, predkladaný ako sekvencia číslo 1 a 0712R, predkladaný ako sekvencia číslo 2, boli použité ako priméry. Amplifikovaný DNA fragment bol ligovaný do pCR-Blunt (Invotrogen), vektora na klonovanie podľa štandardného postupu pre kit. Kompetentné bunky kmeňa HB101 Escherichia coli (TOYOBO) boli transformované podľa obvyklého postupu a selekcie transformantov bola potom uskutočnená na LB agarovom médiu obsahujúcom kanamycín s koncentráciou 50 ug/ml. Plazmidová DNA bola následne extrahovaná a purifikovaná z jedného z transformantov, amplifikácia fragmentov DNA, kódujúceho ludský SGLT2 bola o r uskutočnená PCR reakciou za použitia Pfu DNA Polymerasy (Stratagene), v ktorej nasledujúcie oligonukleotidy 0714F, predkladaný ako sekvencia 3 a 0715R, predkladaný ako sekvencia 4, boli použité ako primery. Amplifi kovaný fragment DNA bol štiepený reštrikčnými enzýmami, Xho I a Hind III a potom purifikovaný pomocou Wizard purifikačného Systému (Promega). Tento purifikovaný fragment DNA bol vložený do zodpovedájúccih reštrikčných miest v pcDNA3.1 (-) Myc/His-B (Invitrogen), vektora na expresiu fúzneho proteínu. Kompetentné bunky kmeňa HB Escherichia coli (TOYOBO) boli transformované podlá obvyklého postupu a selekcia transformantov bola potom uskutočnená na LB agarovom médiu obsahujúcom ampicilín s koncentráciou 100 pg/ml. Plazmidová DNA z tohoto transformantu bola potom extrahovaná a purifikovaná a bola anazlyzovaná nukleotidové sekvencia fragmentu DNA vloženého do polyklonovacích miest vektora pcDNA3.1 (-) Myc/His-Á. V porovnaní s ľudským SGLT2, opísaným Wells et al., (Am. J-Physiol., Zv. 263, str. 459 - 465 (1992)), mal tento kloň substitúciu jednej bázy (ATC, ktorá kóduju izoleucín -433, bol nahradený GTC). Následne bol tiež získaný kloň, v ktorom je valin nahradený izoleucínom433. Tento plazmidový vektor exprimujúci SGLT2, v ktorom je peptid predkladaný jako sekvencia č. 5, fúzovaný ku karboxylovému konci alaninového zvyšku, bol označený KL29.

Sekvencia číslo 1 ATGGAGGAGCACACAGAGGC

Sekvencia číslo 2 GGCATAGAAGCCCCAGAGGA

Sekvencia číslo 3 AACCTCGAGATGGAGGAGCACACAGAGGC

Sekvencia číslo 4 AACAAGCTTGGCATAGAAGCCCCAGAGGA Sekvencia číslo 5 KLGPEQKLISEEDLNSAVDHHHHHH • C C ľ· r f» r· r.

2)

Príprava buniek transientne exprimujúcich ľudský

SGLT2

COS-7 bunky (RIKEN CELL BANK RCB0539) boli pomocou elektroporácie transfekované plazmidom KL29, kódujúcim ľudský SGLT2. Elektroporácia bola uskutočnená pomocou GENE PULSER II (Bio-Rad Laboratories) za týchto podmienok: 0,290 kV, 975 pF, 2 x 10⁶ COS-7 buniek a 20 pg KL29 v 500 pl OPTI-MEM I média (Gibco-BRL: LIFE TECHNOLOGIES) v 0,4 cm kyvetách. Po prenose génu, boli bunky pozberané centrifugáciou a boli resuspendované v OPTI-MEM I médiu (1 ml / kyveta) . Do každej jamky v 96 jamkovej mikrotitračnej doštičke bolo pridané 125 pl tejto bunečnej suspenzie. Po inkubácii cez noc pri 37 °C v 5% CO₂, bolo do každej jamky pridaných 125 pl DMEM média, ktoré obsahovalo 10 % fetálne hovädzie sérum (Sanko Jyunyaku), 100 jednotiek/ ml sodnej soli penicilínu G (Gibco-BRL: LIFE TECHNOLOGIES), 100 pg/ml síranu streptomycínu (Gibco - BRL: LIFE TECHNOLOGIES) . Tieto bunky boli kultivované do ďalšieho dňa a potom boli použité na meranie inhibičnej aktivity príjmu metyl-a-D-glukopyranosidu.

3) Meranie inhibičnej aktivity príjmu metyl-a-Dglukopyranosidu

Potom čo bolo z COS-7 buniek, transientne exprimujúcich ľudský SGLT2, odobrané médium, bolo do každej jamky pridaných 200 s pH 7,4 obsahujúci 140 mM draselný, 1 mM chlorid horečnatý, 10 mM piperazinyl]etansulfonovej (hydroxymetyl)aminometan), minút pri 37 °C. Púfer pridaním 7 pl metylpl prípravného púfru (púfer cholin chlorid, 2 mM chlorid vápenatý, 1 mM chlorid 2-[4-(2-hydroxyetyl)-1kyseliny, a 5 mM tris a bunky boli. inkubované 10 na meranie bol pripravený α-D-(U-14C) glukopyranosidu r r r r e « c t «* r r P Γ r- r e r e * e r ,_crrrrr r e c-T'· . · .· r. r r p (.· ,- , · r (Amersham Pharmacia Biotech) k 525 μΐ pripravenej testovacej vzorky v púfru na príjem (púfer s pH 7,4 obsahujúci 140 mM chlorid sodný, 2 mM chlorid draselný, 1 mM chlorid vápenatý, 1 mM chlorid horečnatý, 5 mM metyl-a-D-glukopyranosid, 10 mM 2-[4-(2-hydroxyetyl)-1piperazinyl]etansulfonovej kyseliny, a 5 mM tris (hydroxymetyl)aminometan) , táto zmes bola premiešaná a potom bol pripravený púfer na meranie príjmu. Ako kontrola bol pripravený púfer na meranie príjmu bez testovacej zlúčeniny. Na odhad základného príjmu za neprítomnosti testovacej zlúčeniny a sodíku, ¹ bol podobne pripravený púfer na meranie základného príjmu, ktorý obsahuje 140 mM cholin chlorid namiesto chloridu sodného. Potom, čo bol odstránený prípravný púfer, bolo do každej jamky pridaných 75 μΐ púfru na meranie príjmu a bunky boli inkubované 2 hodiny pri 37 °C. Potom bol odstránený púfer na meranie a do každej jamky bolo pridaných 200 μΐ premývacieho púfru (púfer s pH 7,4 obsahujúci 140 mM cholin chlorid, 2 mM chlorid draselný, 1 mM chlorid vápenatý, 1 mM chlorid horečnatý, 10 mM metyl-a-D-glukopyranosid, 10 mM 2-[4-(2-hydroxyetyl)-1-piperazinyl]etansulfónovej kyseliny, a 5 mM tris (hydroxymetyl)aminometan), ktorý bol ihneď odstránený. Po ďalších dvoch preumývaniach, boli bunky solibilizované pridaním 75 μΐ 0,2 N hydroxidu sodného do každej jamky. Bunečné lyzáty boli potom prenesené do PicoPlate (Packard) a do každej jamky bolo pridaných 150 pl MicroScint-40 (Packard), a rádioaktivita bola meraná mikrotitračným scintilačným počítadlom TopCount (Packard). Rozdiel v príjmu bol získaný ako 100 % hodnota odpočítaním rádioaktivity základného príjmu od kontroly a potom boli metódou najmenších štvercov z koncentračneinhibičnej krivky spočítané koncentrácie, za ktorých

bolo inhibovaných 50 % príjmu ukázané v nasledujúcej tabuľke 1.

(IC₅₀) . Výsledky sú

Tabuľka 1

Testovacia zlúčenina Hodnota IC₅₀ (nM)

Príklad	1	350
Príklad	2	450
Príkad 3		140
Príklad	4	500
Príklad	5	330
Príklad	6	370
Príklad	7	140
Príklad	8	8,1
Príklad	9	27
Príklad	10	210
Príklad	11	75
Príklad	12	110

Príklad skúšky 2

Stanovenie uľahčujúceho účinku na exkreciu glukózy močom

Ako pokusné zvieratá boli použité cez noc vyhladovelé SD krysy (SLC, samčekovia, 7 týždňov starí, 180-240 g). Desať mg testovacej zlúčeniny bolo rozmiešané alebo rozpustené v 300 μΐ etanolu a potom rozpustené prídavkom 1,2 polyetylénglykolu 400 a 1,5 ml fyziologického roztoku a potom bol pripravený roztok s koncentráciou 3,3 mg/ml. Tri sta μΐ tohto roztoku boli rozpustené v 2,7 ml roztoku na nariedenie (fyziologický roztok: polyetylénglykolu 400:etanolu 5:4:1) a potom bol pripravený roztok 0,33 mg/ml. Len čo boli zistené váhy krýs, roztok testovacej zlúčeniny bol intravenózne aplikovaný do ocasnej žily v dávke 3 ml/kg • · r < r o c r r r r r

f. z- ô r r <» r (1 mg/kg). Ako kontrola bolo intravenózne do ocasnej žily aplikované iba rozpúšťadlo (fyziologický roztok:polyetylénglykol 400: etanol = 5:4:1) s dávkou 3 ml/kg. Ihneď po tejto intravenóznej aplikácii do ocasnej žily, bol krysám orálne aplikovaný roztok glukózy 200 g/1 v dávke 10 ml/kg (2 g/kg) Intravenózna aplikácia do ocasnej žily bola uskutočnená ihlou 26G a 1 ml injekčnou striekačkou. Orálna aplikácia bola uskutočnená žalúdočnou trubicou pre krysy a 2,5 ml injekčnou striekačkou. Počet jedincov v jednej skupine bol 2 alebo 3. Zber moču bol uskutočnený v metabolickej klietke po ukončení orálnych aplikácií. Vzorkový čas pre zber moču bol 24 hodiny po orálnej aplikácii glukózy. Potom, čo bol dokončený zber moču, bol zapísaný objem moču a bola zmeraná koncentrácia glukózy v moču. Koncentrácia glukózy bola meraná pomocou kitu pre laboratorné testovanie: Glucose BTest WAKO (WAKO Pure Chemical Industries, Ltd.). Množstvo exkretovanej glukózy v moču za 24 hodín na 200 g telesnej váhy bolo vypočítané z objemu moču, koncentrácie glukózy v moču a telesnej váhy.

Výsledky sú ukázané v nasledujúcej tabuľke 2

Tabuľka 2

Testovacia zlúčenina	Množstvo extretovanej glukózy v moču (mg)

Príklad	1	27,4
Príklad	7	109, 1
Príklad	8	238,9
Príklad	10	69, 5

Príklad skúšky 3 Test akútnej toxicity

Päť týždňov starí samci ICR myší (CLEA JAPAN, INC. 39-34 g, 5 zvierat v jednej skupine) hladovali 4 hodiny a potom im bola podkožné podaná suspenzia 666 mg/ml, ktorá bola pripravená prídavkom fyziologického roztoku: polyetylénglykolu 400: etanolu (5:4:1) k 2[4-(2-hydroxyetyl)benzyl]fenyl β-D-glukopyranosidu (zlúčenina opísaná v príklade 10) v dávke 3 ml/kg (2000 mg/kg) . Počas 24 hodín po podaní nebolo pozorované žiadne úmrtie.

Priemyselná využiteľnosť

Glukopyranosyloxybenzylbenzenové deriváty predkladaného vynálezu, ktoré sú znázornené vyššie uvedeným všeobecným vzorcom (I) majú vynkajúcu inhibičnú aktivitu proti ľudskému SGLT2. Predkladaný vynález poskytuje látky na zabránenie alebo liečbu cukrovky, diabetických komplikácií, obezity a podobne. Okrem toho, zlúčeniny znázornené vyššie uvedeným všeobecným vzorcom (I) sú dôležité medziprodukty pri výrobe zlúčenín, znázornených všeobecným vzorcom vynálezu, znázornené vyššie uvedeným (I)„ zlúčeniny predkladaného vyššie uvedeným všeobecným vzorcom (I), môžu byť ľahko pripravené prostredníctvom týchto zlúčenín.

Claims

Glukopyranosyoxybenzylbenzenový derivát, znázornený všeobecným vzorcom: Λ?' rs

H<y>

'Oh kde R¹ predstavuje atóm vodíku alebo hydroxy-(nižšiu

Ff -0 alkylovú

R predstavuje nižšiu alkylovú) skupinu; skupinu, nižšiu alkoxylovú skupinu, nižšiu alkytio skupiu, hydroxy-(nižšiu alkylovú) skupinu, hydroxy(nižšiu alkoxylovú) skupinu, hydroxy-(nižšiu alkytio) skupinu, nižšiu alkoxy-substituovanú (nižšiu alkylovú)skupinu, nižšiu alkoxy-substituovanú (nižšiu alkoxylovú)skupinu alebo nižšiu alkoxy-substituovanú (nižšiu alkytio)skupinu alebo ich farmaceutický prijateľnú sol.

Glukopyranosyloxybenzylbenzenový derivát, ako je nárokované podlá patentového nároku 1, znázornený všeobecným vzorcom:

kde R¹ predstavuje atóm vodíku alebo hydroxy-(nižšiu alkylovú) skupinu; R³ predstavuje nižšiu alkylovú skupinu, nižšiu alkoxylovú skupinu, alebo hydroxy(nižšiu alkylovú)skupinu alebo ich farmaceutický prijateľnú sol.

r r
3. Farmaceutická zmes, obsahujúca ako aktívnu zložku glukopyranosyloxybenzylbenzenový derivát, ako je nárokované podlá patentových nárokov 1 alebo 2, alebo jeho farmaceutický prijateľná sol.
4. Farmaceutická zmes, ako je nárokované podľa patentového nároku 3, kde zložkou je inhibítor ľudského SGLT2.
5. Framaceutická zmes, ako je nárokované podľa patentového nároku 4, kde zložkou je prostriedok na zabránenie alebo liečbu cukrovky alebo s ňou spojených komplikácií.
6. Framceutická zmes, ako je nárokované podľa patentového nároku 4, kde zložkou je prostriedok na zabránenie alebo liečbu obezity.
7. Spôsob zabránenia alebo liečby choroby spojenej s hyperglykémiou, ktorý zahrnuje podávanie glukopyranosyloxybenzylbenzenového derivátu ako je nárokované v patentových nárokoch 1 alebo 2, alebo jeho farmaceutický prijateľnú sol.
8. Spôsob zabránenia alebo liečby, ako je nárokované v patentovom nároku 7, kde choroba spojená s hyperglykémiou je cukrovka alebo diabetické komplikácie.

e # e. r e r • r *· e r r p r Spôsob zabránenia alebo liečby, ako je nárokované v patentovom nároku 7, kde choroba spojená s hyperglykémiou je obezita.

Použitie glukopyranosyloxybenzylbenzenového derivátu, ako je nárokované podía patentového nároku 1 alebo 2, alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli, na výrobu farmaceutických zmesi na zabránenie alebo liečbu choroby spojenej s hyperglykémiou.

Použitie glukopyranosyloxybenzylbenzenového derivátu alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli, ako je nárokované podlá patentového nároku 10, kde choroba spojená s hypergylkémiou je cukrovka alebo diabetické komplikácie.

Použitie glukopyranosyloxybenzylbenzenového derivátu aleho jeho farmaceutický prijateľnej soli, ako je nárokované podľa patentového nároku 10, kde choroba spojená s hyperglykémiou je obezita.

Benzylfenolový derivát znázornený všeobecným vzorcom:

VjO OH .R¹² kde R¹¹ predstavuj e atóm vodíku alebo chránenú hydroxy(nižšiu alkylovú) skupinu; R¹² predstavuje nižšiu alkylovú skupinu, nižšiu alkoxylovú skupinu, nižšiu alkytio skupinu, chránenú hydroxy-(nižšiu

o r f r - ' t r r r <

r , r r - ** r c r - <* alkylovú)skupinu, chránenú hydroxy-(nižšiu alkoxylovú) skupinu, chránenú hydroxy-(nižšiu alkylovú) skupinu, nižšiu alkoxy-substituovanú (nižšiu alkylovú)skupinu, nižšiu alkoxy-substituovanú (nižšiu alkoxylovú) skupinu alebo nižšiu alkoxy-substituovanú (nižšiu alkyltio)skupinu; s podmienkou, že R¹² nie je metylová skupina, etylová skupina, izopropylová skupina, terc.butylová skupina alebo metoxylová skupina, keď R¹¹je atóm vodíku.