SK283031B6

SK283031B6 - Stabilný lyofilizovaný farmaceutický prípravok

Info

Publication number: SK283031B6
Application number: SK525-98A
Authority: SK
Inventors: Colette Bouloumie; Thierry Breul; Laurence Colliere; Philippe Faure
Original assignee: Sanofi-Synthelabo
Priority date: 1995-11-03
Filing date: 1996-10-30
Publication date: 2003-02-04
Also published as: DE69622735T2; MY116578A; EE9800123A; DK0858325T3; CZ287178B6; SK52598A3; CN1124844C; EE04293B1; NZ321616A; AR004255A1; TW442295B; IL124214A; BR9611367A; CA2234140A1; HK1015697A1; KR100367752B1; FR2740686B1; AU713383B2; UA60297C2; NO981967L

Abstract

Stabilný lyofilizovaný farmaceutický prípravok zložený z fázy amorfnej a z fázy kryštalickej, farmaceuticky prijateľných, obsahujúcich najmenej jednu aktívnu neproteinickú látku, a obsahujúci manitol a alanín v hmotnostnom pomere R medzi 0,1 až 1, kde R znamená pomer hmotnosti manitolu k hmotnosti alanínu. Prípravok obsahuje ďalej ešte jedno alebo viac činidiel, tvoriacich matricu, zvolených zo skupiny, ktorú tvoria pektíny, proteíny extrahované z obilia, alebo zo sóje, dextríny, xantáty, želatíny, agar, polysacharidy, algináty, karboxymetylcelulóza, polovinylpyrolidón, akáciová želatína a ich zmesi.ŕ

Description

Oblasť techniky

Predložený vynález sa týka farmaceutického prípravku vo forme lyofilizátu obsahujúceho aspoň jednu účinnú látku nebielkovinovej povahy. Vynález sa vzťahuje hlavne na taký prípravok, ktorý je stabilný pri teplotách od 25 °C do 40 °C a ktorý môže byť buď znova prevedený do kvapalnej formy pridaním rozpúšťadla a tak podávaný parenterálnou či orálnou cestou; alebo priamo podávaný orálnou cestou človeku alebo zvieraťu.

Účinná látka, obsiahnutá v prípravku, môže podľa vynálezu vystupovať samostatne, alebo v kombinácii s inou účinnou látkou, či už bielkovinovej, alebo nebielkovinovej povahy.

Doterajší stav techniky

Je známe, že lyofilizácia môže mať značný vplyv na degradáciu farmaceutický účinných látok v prípravku a taktiež silný dopad na ich stabilitu v lyofilizovanej forme. Premenné, ktoré vplývajú na tieto vlastnosti, sú hlavne pH, množstvo prítomných solí, množstvo a druh pomocných látok v prípravku, zvolený typ ochrany pred degradáciou mrazom (kryoprotekcia), a takisto zvolené teploty, tlak a trvanie procesu zmrazovania, vyparovania a vysušovania. Tieto rozdielne premenné určujú fyzikálny stav získaného lyofilizátu, ktorý môže byť sklovitý amorfný, mäkký amorfný, kryštalický alebo môže byť kombináciou týchto stavov.

Na konzerváciu lyofilizátov sa často používajú aminokyseliny, predovšetkým glycín a viacsýtne alkoholy, hlavne manitol, ale rozsiahla literatúra zaoberajúca sa danou tematikou neposkytuje žiadne informácie o riešení hlavného problému, t. j. problému získania stabilného farmaceutického prípravku so zohľadnením rôznych parametrov zasahujúcich do procesu prípravy a lyofilizácie nebielkovinovej účinnej látky v kombinácii s aminokyselinou alebo viacsýtnym alkoholom.

V literatúre sa najmä uvádza, že prítomnosť aminokyseliny, viacsýtneho alkoholu, napríklad manitolu, kryštalickej alebo amorfnej fázy, môže priniesť popri zaručených výhodách aj nevýhody, ktoré sa prejavia, v prípade lyofilizátov obsahujúcich mimoriadne citlivé účinné látky, ako relatívne krátky čas zachovania látky bez jej rozrušenia a/alebo ako nutné zníženie teplôt skladovania týchto lyofilizátov pod 8 °C. Bolo by však veľmi výhodné, hlave pre ambulantné použitie, dokázať získať prípravok stabilný pri izbovej teplote až po jeho znovuuvedenie do roztoku a tak predísť jeho uchovávaniu v chladničke pred a počas používania.

Úloha viacsýtneho alkoholu a aminokyseliny bola samostatne preskúmaná v prípade ľudského rastového hormónu (hGH), ale ich synergický účinok ešte nie je dostatočne objasnený ( Pikal M.J., Dellemann K.M., Roy M.L., Riggin M.N., The effects of formulation variables on the stability of freeze - dried Human Growth Hormone, Pharm.research., 1991, 8, N °4,427 - 436 j.

Výhody a nevýhody súvisiace s prítomnosťou aminokyselín, manitolu, kryštalickej fázy alebo fázy amorfnej sú uvedené v nasledujúcom texte:

Výhody spojené s prítomnosťou aminokyselín

Dokázalo sa, že prítomnosť glycínu v lyofilizáte viedla ku kryštalizácii molekúl prítomných v roztoku počas zmrazovacej etapy lyofilizácie (Kórey D.J., Schwartz J.B., Ef fects of excipients on the cristallization of pharmaceutical compounds during lyophylization, J Parenteral Sci. Tech., 1989, 43, 2, 80 - 83 ). Táto kryštalizácia účinnej látky umožňuje zlepšiť jej stabilitu.

Alanín v kryštalickej forme má výhodnú schopnosť zabrániť rozrušeniu lyofilizátu počas sublimácie a vysušovania a umožňuje získanie lyofilizátu s väčším špecifickým povrchom, čím sa dosiahne rýchlejšie vysušovanie (Pikal M.J., Freeze-drying of proteins, Biopharm., 26 - 30 october 1990).

Nevýhody spojené s prítomnosťou aminokyselín

Pridanie aminokyseliny k cukru alebo ku viacsýtnemu alkoholu v roztoku na lyofilizáciu sa vo všeobecnosti prejaví znížením teploty premeny cukru na sklovitú hmotu (teplota sklovitej premeny cukru) (de Booy M.P.W.M., de Ruiter R.A., de meere A.L.J., Evaluation of the physical stability fo freeze-dried suerose containing formulations by differential scanning calorimetry, Pharm.Research., 1992, 9, 109 - 114). Spomenuté zníženie teploty sklovitej premeny cukru je spravidla synonymom menšej stability lyofilizátu. (Franks F., Freeze-drying; from empiricism to predictability, Cryoletters, 1990, ll, 93 -110).

Výhody spojené s prítomnosťou manitolu

Manitol, prítomný v lyofilizáte, plní obvykle funkciu balastu lyofilizácie, to znamená, že umožňuje súčasne udržať pevnú štruktúru a zachovať objem lyofilizátu, ktorý zodpovedá objemu roztoku na lyofilizáciu. Ale jeho prítomnosť umožňuje tiež dosiahnutie izotónie v roztoku znova pripravenom na injektovanie. Manitol, ako hlavná pomocná látka v lyofilizáte, je najčastejšie v kryštalickej forme (Lyophilized formulations recombinant tumor necrosis factor, Hora M.S., Rana R.K., Smith F.W., Pharm. Res., 1992,9(1), 33 - 36).

Nevýhody spojené s prítomnosťou manitolu

Uvádza sa, že stupeň hydrolýzy sodnej soli metylprednizolón-sukcinátu v lyofilizovanej forme bol vyšší v prítomnosti manitolu ako v prítomnosti laktózy, a že tento stupeň rástol s množstvom manitolu prítomného v lyofilizáte. Tento jav sa vysvetľoval tým, že kryštalizácia manitolu počas lyofilizácie mení distribúciu vody v matrici lyofilizátu. V dôsledku toho narastá množstvo vody prítomnej v mikrookolí účinnej látky, čo podporuje hydrolýzu účinnej látky a znižuje tak jej stabilitu (The effect of bulking agent on the solid state stability of freeze dried methylprednisolone sodium succinate, Herman B. D., Sinclair B. D., Milión N., Nail S. L., Pharma. Res.,1994,11 (10), 1467 - 1473).

Výhody spojené s prítomnosťou kryštalickej fázy

Prítomnosť rozpustenej kryštalickej látky v zmrazovanom roztoku umožňuje stabilizáciu bielkovín počas rozpúšťania ( Carpenter J.F. & Crowe J.H., Modes of stabilisation of a proteín by organic solutes during dessiccation, Cryobiology, 1988, 25, 459 - 470).Navyše kryštalizácia majoritne zastúpených pomocných látok počas zmrazovania zvyšuje účinnosť sekundárnych procesov sublimácie a vysušovania tým, že sa zväčšuje špecifický povrch na rozhraní tuhej látky a atmosféry v uzavretom lyofilizátore. Takéto zväčšenie špecifického povrchu pri kryštalických formách v porovnaní s formami amorfnými uľahčuje výmeny tepla počas lyofilizácie. Výsledkom tejto zvýšenej účinnosti lyo filizácie je získanie lyofilizovaných foriem s nižším obsahom reziduálnej vody, čo je predpokladom pre nárast stability lyofilizátu pri vyšších teplotách (Kórey D. J., Schwartz J. B., Effects of excipients on the cristallisation of pharmaceutical compounds during lyophilisation, J. Parenteral Sci. Tech., 1989, 43,2, 80 - 83).

Nevýhody spojené s prítomnosťou kryštalickej fázy

Kryštalické látky majú vo všeobecnosti nižšie rýchlosti rozpúšťania ako látky amorfné. Na vytrhnutie molekuly z usporiadanej kryštalickej mriežky je potrebné väčšie množstvo energie ako na jej odtrhnutie z neusporiadaného zoskupenia amorfného stavu. Niekedy sa rýchlosť rozpúšťania stane limitujúcim faktorom pre rýchlu absorpciu týchto látok a môže tak dôjsť k zníženiu ich aktivity, hlavne pri molekulách, ktoré sú v roztoku málo stabilné. Okrem toho dokonalá pravidelnosť kryštálov je ideálnym prípadom, neusporiadanosť a polymorfia danej látky či už samostatnej alebo kombinovanej s inými látkami spôsobuje, že rýchlosti rozpúšťania sú rozdielne nielen pri rôznych látkach, ale dokonca aj pri tej istej látke, čo môže viesť k nereprodukovateľným terapeutickým účinkom (Galenica 2, Biopharmacie 2eme edition, 1982, technique et documentation ).

Dokázalo sa tiež, že strata aktivity lyofilizovaného proteínu priamo súvisí so stupňom kryštalinity kryoprotektívnej látky (Izutsu K. I., Yoshioka S., Terao T., Decreased protein -stabilizing effects of cryoprotectans due to crystallization, Pharm. Research, 1993, 10, N°8, 1232 - 1237; Izutsu K. I., Yoshoika S., Kojima S., Increased stabilizing effects of amphiphilic excipiens on fŕeeze drying of lactate deshydrogenase (LDH) by dispersion into sugar matrixes, Pharm. Res., 1995, 12 (6), 838 - 843) Pri príprave liečiv obsahujúcich bielkoviny je podľa (Hermansky M., Pesak M., Lyophilization of drugs.VI Amorphous and Cristalline forms Cesk.Farm.,1993, 42, (2),95 - 98) potrebné vyhnúť sa kryštalizácii pomocnej látky.

Výhody spojené s prítomnosťou amorfnej fázy

Ako sa už spomenulo pri kryštalickej fáze, amorfná forma sa rozpúšťa rýchlejšie ako forma kryštalická a navyše neprináša nevýhody kryštalických látok týkajúce sa heterogenity a polymorfie.

Na druhej strane, podľa literatúry (Izutsu K. L., Yoshioka S., Terao T., Decreased protein-stabilizing effects of cryoprotectans due to crystallisation, Pharm. Research, 1993, /(?, N°8, 1232 - 1237) prítomnosť prísad v amorfnom stave stabilizuje aktivitu niektorých enzýmov priamo úmerne s koncentráciou prísady.

Kryoprotektívny účinok pomocných látok v získanom lyofilizáte sa prisudzuje amorfnému stavu glycínu (Pikal M. J., Dellemann K. M., Roy M. L.,Riggin M. N., The effects of formulation variables on the stability of freezedried Human Growth Hormone, Pharm. Research, 1991, 8, N°4, 427 - 436).

Nevýhody spojené s prítomnosťou amorfnej fázy

V prítomnosti samotnej pevnej amorfnej fázy lyofilizát inklinuje k vyšším teplotám sklovitej premeny látky počas zmrazovania. V prostredí mäkkej amorfnej fázy je rýchlosť degradačných reakcií omnoho väčšia ako v prostredí fázy kryštalickej (Solid state stability and preformulation study of new parenteral cephalosporin antibiotics (E 1040), Ashizawa K., Uchikawa K., Hattori T., Ishibashi Y., Miyake Y., Sato T., Yakugaku Zasshi, 1990,110(3), 191 -201).

Ďalšou nevýhodou je, že väčšia rýchlosť rozpúšťania amorfných látok môže byť sprevádzaná zníženou stabilitou a následná premena formy prebieha obvykle z amorfného stavu do kryštalického stavu (Galenica 2, Biopharmacie 2ieme edition, 1982, technique et documentation).

Je teda zrejmé, že vedecká literatúra neposkytuje jednoznačné údaje o vplyve pomocných látok na stabilizáciu farmaceutický účinnej látky a neumožňuje ani získať spoľahlivé informácie o vzťahoch medzi štruktúrou lyofilizátu a jeho stabilitou. Takisto úloha viacsýtnych alkoholov a aminokyselín, samostatných alebo v kombinácii s inými látkami, nie je zhrnutá vo forme zovšeobecniteľných vlastností, ale je pozorovaná s protichodnými výsledkami, ktorc závisia od skúmanej látky a od množstva použitých pomocných látok.

Podstata vynálezu

Teraz však bola objavená existencia synergického účinku manitolu a alanínu na stabilizáciu lyofilizovaných farmaceutický účinných látok. Dokázalo sa hlavne, že tento synergický účinok pôsobí iba v úzkej oblasti relatívnych koncentrácií každej z týchto dvoch pomocných látok.

Základom predloženého vynálezu je najmä objav prekvapivého synergického účinku vychádzajúceho z koexistencie amorfnej a kryštalickej fázy', ktorého výsledkom je stabilizácia lyofilizovanej farmaceutický účinnej látky. Vynález opisuje navodenie tohto účinku prednostne pre vzťah manitol/alanín.

Predložený vynález sa teda týka stabilného lyofilizovaného farmaceutického prípravku, zloženého z amorfnej a kryštalickej fázy, farmaceutický prijateľných, obsahujúcich najmenej jednu aktívnu neproteinickú látku, ktorý ďalej obsahuje manitol a alanín v hmotnostnom pomere R medzi 0,1 až 1, kde R znamená pomer hmotnosti manitolu k hmotnosti alanínu s tým, že prípravok obsahuje ďalej ešte jedno alebo viac činidiel, tvoriacich matricu, zvolených zo skupiny, ktorú tvoria pektíny, proteíny extrahované z obilia alebo zo sóje, dextríny, xantáty, želatíny, agar, polysacharidy, algináty, karboxymetylcelulóza, polyvinylpyrolidón, akáciová želatína a ich zmesi.

Účinná látka obsiahnutá v uvedenom prípravku zostáva stabilná v lyofilizovanej forme pri teplotách od 25 °C až po 40 °C. V prípade potreby je rozpustenie získaného lyofilizátu rýchle a úplné. Vzhľad lyofilizátu nie je narušený a obsah vody v lyofilizáte neohrozuje stabilitu účinnej látky.

Dokázalo sa, že pre R v rozmedzí 0,1 a 1 platí:

- lyofilizát je tvorený amorfnou a kryštalickou fázou,

- väčšina amorfnej fázy je tvorená manitolom a účinnou látkou,

- väčšina kryštalickej fázy je tvorená alanínom.

Aj keď vynález nepodáva osobitnú teóriu o stabilizácii, ktorá sa dosiahne zmiešaním jednej alebo viacerých účinných látok nebielkovinovej povahy s manitolom a alanínom v daných pomeroch, môže byť vyjadrená nasledujúca hypotéza:

- Amorfná fáza, ktorej prítomnosť sa dokáže diferenčnou termickou analýzou, zabraňuje degradácii farmaceutický účinnej látky počas zmrazovania. Samotná účinná látka je rozptýlená v tejto amorfnej forme.

- Kryštalická fáza, dokázaná difraktometriou rtg. lúčov, fixuje štruktúru lyofilizátu a zabraňuje jej rozrušeniu.

Z iného hľadiska je predmetom tohto vynálezu získanie stabilných lyofilizátov obsahujúcich účinnú látku, ktorú proti degradácii mrazom ochraňuje amorfná fáza tvorená čiastočne alebo úplne manitolom. V lyofilizáte získanom po sublimácii a vysúšaní zmrazovaného roztoku koexistuje táto amorfná fáza s kryštalickou fázou, ktorú tvorí výhradne alanín.

Predmetom tohto vynálezu je tiež proces prípravy lyofilizovaných farmaceutických prípravkov, počas ktorého sa lyofílizuje zmes účinnej látky nebielkovinovej povahy, manitolu a alaninu. Manitol a alanín sú v tejto zmesi prítomné v pomere R pohybujúcom sa medzi 0,1 a 1, kde R je pomer hmotnosti manitolu ku alaninu.

Ostatné farmaceutický prijateľné pomocné látky, ktoré sa bežne používajú v lyoíilizovaných formách, môžu byť podľa predkladaného vynálezu zavedené do prípravku ako tlmivé roztoky alebo acido-bázické komplexy umožňujúce úpravu pH, ako povrchovo aktívne látky, soli, konzervačné činidlá - hlavne antibakteriálne, antioxidanty a ako chelátotvorné činidlá. Výnimku tvoria tie pomocné látky, ktoré by v lyofilizáte zabraňovali koexistencii amorfnej fázy tvorenej hlavne manitolom s kryštalickou fázou tvorenou hlavne alanínom ako sú napríklad niektoré deriváty bielkovín živočíšneho alebo rastlinného pôvodu a takisto želatíny, dextríny, bielkoviny extrahované zo zŕn obilia alebo sóje, agar alebo xantán, polysacharidy, algináty, karboxymetylcelulózy, pektíny, syntetické polyméry ako polyvinylpyrolidón, alebo komplexy polysacharidového pôvodu ako želatína z akácie. Spomedzi tlmivých roztokov, ktoré môžu byť podľa predkladaného vynálezu zavedené do prípravku, sa osobitne uvádzajú : tlmivé roztoky uhličitanu, boritanu, citrátu, tris(hydroxymctyl)aminometánu, maleínanu, vínanu. Kyseliny alebo zásady tvoriace tieto tlmivé roztoky môžu byť zavedené aj samostatne. Spomedzi povrchovo aktívnych látok, ktoré môžu byť podľa tohto vynálezu zavedené do prípravku sa citujú hlavne: polysorbáty, poloxaméry, tyloxapol a lecitíny. Spomedzi solí, ktoré môžu byť podľa tohto vynálezu zavedené do prípravku, sa osobitne citujú sodné soli, ako etylendiamíntetraacetát (EDTA) tetrasodný; chlorid sodný; 1,4-bis(2-etylhexyl) sulfosukcinát sodný (dokusát), hydrogenuhličitan sodný, glutaman sodný ďalej octan draselný, uhličitan draselný a stearan horečnatý.

Spomedzi konzervačných činidiel, ktoré môžu byť podľa vynálezu zavedené do prípravku, sa osobitne citujú: metyl-4-hydroxybenzoát, propyl-4-hydroxybenzoát, benzetóniumchlorid, merkurotiolát sodný, fenylhydrargyriumnitrát, benzylalkohol, fenol, m-krezol.

Koexistencia amorfnej fázy manitolu a kryštalickej fázy alaninu je nezávislá od prítomnosti a koncentrácie tlmivého roztoku použitého na úpravu pH, ale závisí od pomeru R, ktorý je definovaný.

Príklady prípravy roztokov na lyofilizáciu spľňajúcich kritériá predloženého vynálezu sú nasledovné:

zmieša sa farmaceutický účinná látka; farmaceutický prijateľný tlmivý roztok na úpravu pH; ďalej manitol a alanín v hmotnostnom pomere R = hmotnosť manitolu/hmotnosť alaninu, kde R je medzi 0,1 a 1; voda na injektovateľné preparáty a v prípade potreby konzervačné antibakteriálne činidlá a pomocné látky umožňujúce uvedenie účinnej látky (resp. účinných látok) do roztoku.

Podľa výhodného uskutočnenia podľa vynálezu je zmes alanín/manitol majoritná.

Množstvo prítomnej účinnej látky je limitované jej rozpustnosťou vo vode. Prípravky podľa tohto vynálezu sú však výsledkom lyofilizácie vodných roztokov, v ktorých je účinná látka dokonale rozpustená.

Pomocná látka je prítomná v prípravku v nižšom množstve ako je množstvo zmesi alanín/manitol.

Roztoky na lyofilizáciu sa pripravujú nasledujúcim spôsobom:

Požadované množstvá tlmivého roztoku, manitolu, alanínu, konzervačných činidiel a účinnej látky sú pri vhodnej teplote rozpúšťania pridané do množstva vody potrebného na injektovateľné preparáty; alebo pridané do rozpúšťacieho činidla, ktoré napomáha ich úplnému rozpusteniu. Takto získané roztoky sú filtrované v sterilnom prostredí a rozdelené do nádob prednostne do odmeriek alebo do karpúl.

Lyofilizácia roztokov prebieha nasledovne:

Roztok prejde cyklom zmrazovania, potom cyklom sublimácie a vysušovania, ktoré sú prispôsobené objemu roztoku na lyofilizáciu a nádobe, v ktorej sa tento roztok nachádza.

Prednostne sa vyberá rýchlosť zmrazovania blízka -2 °C/min. v lyofilizátore USIFORD(France) typu SMH15, SMJ100 alebo SMH2000.

Časové rozpätie, teplota a tlak počas procesov sublimácie a vysušovania sú upravované podľa objemu roztoku na lyofilizáciu a podľa požadovaného reziduálneho obsahu vody v lyofilizáte.

Získa sa tak lyofilizát, v ktorom sa alanín nachádza v kryštalizovanej forme a manitol čiastočne alebo úplne vo forme amorfnej. Lyofilizát môže byť uchovávaný pri teplote 25 °C až po teplotu 40 °C bez porušenia chemickej a biologickej stability účinnej látky, ktorú obsahuje. Kompletné informácie o metóde prípravy preparátov injektovateľných po rozpustení zložiek uvedených vo vynáleze sú odborníkom k dispozícii v Remington Pharmaceutical Sciences, 1985, 17th Edition alebo v William N. A. & Poli G. P., The lyophilisation of pharmaceuticals: a litterature review, J Parenteral Sci. Tech., 1984, 38, (2), 48 - 59 alebo v Franks F., Freeze-drying : from empiricism to predictability, Cryoletters, 1990,11,93 - 110.

Účinná látka nebielkovinovej povahy, či už samostatná, alebo v kombinácii s inými látkami, môže patriť medzi analgetiká, antiflogistiká, protirakovinové lieky alebo medzi účinné látky používané v kardiológii, angiológii, gastroenterológii, hematológii a hemostáze, v hepatológii, infektológii, neurológii-psychiatrii, rhinológii, reumatológii, toxikológii, v oblasti diagnostiky, alebo môže pôsobiť aj ako regulátor metabolizmu a výživy.

Ktorákoľvek látka z týchto menovaných skupín liečiv a oblastí biologického pôsobenia môže tvoriť účinnú látku v prípravkoch z predloženého vynálezu. Tieto prípravky predstavujú významný pokrok vo farmaceutických metódach. Najvhodnejšie účinné látky pre prípravky z tohto vynálezu sú predovšetkým tie, ktorých stabilita vo vodnom roztoku je problematická. Môže sa však uvažovať aj o aplikácii tohto vynálezu pre účinné látky, ktoré nemajú výrazné problémy so stabilitou.

V nasledujúcej časti bolo na pomenovanie účinných látok zvolené jednotné medzinárodné názvoslovie.

Účinná látka lyofilizovaných farmaceutických prípravkov z predloženého vynálezu môže byť vybraná zo skupiny, ktorú tvoria:

- fenylalkánové kyseliny, napríklad ketoprofén;

- nesteroidné antiflogistiká typu oxicam, napríklad piroxikam, isoxikam, tenoxicam;

- paracetamol;

- acetylsalicylát lyzínu alebo arginínu;

- kortikosteroidy, napríklad metylprednizolón;

- floroglucinol;

- žlčové kyseliny, napríklad kyselina ursodeoxycholová, alebo jedna z jej farmaceutický prijateľných solí s anorganickými či organickými zásadami, najlepšie jej sodná soľ;

- antracyklíny, napríklad doxorubicín, epirubicin, idarubicín, daunorubicín, pirarubicín;

- deriváty platiny, napríklad cisplatina, oxaliplatina, karboplatina;

- deriváty alkaloidov z vinea minor (zimozeleň menšia), napríklad vinblastín, vinkristín;

- deriváty námeľových alkaloidov, napríklad dihydroergotamín, dihydroergotoxín, nicergolín;

- deriváty purínových a pyrimidínových báz, napríklad acyklovír, gancyklovír, cytarabín;

- prostaglandíny, napríklad sulproston, alprostadil;

- benzodiazepíny, napríklad klorazepát didraselný, devazepid;

- beta-laktámové antibiotiká, napríklad piperacyklín, tazobactam;

- makrolidové antibiotiká, napríklad erytromycín, alebo jeden z jeho derivátov, väčšinou leukomycin;

- antibiotiká zo skupiny tetracyklínov, napríklad myocyklin;

- antibiotiká chloramfenikolového typu, napríklad tiamfenicol;

- antibiotiká spiramycínového typu;

- dusíkaté yperity, napríklad chlorambucil a nitrózomočoviny, napríklad karmustín a streptozocín. Menované látky sú detailnejšie opísané v Pharmacologie, M. Schorderet et col.,1992, 2e edition, chap.69, Ed. Frison. Roche, Paris;

- H₂ - antagonisty, napríklad ranitidín, famotidín alebo jedna z ich farmaceutický prijateľných solí;

- omeprazol a jeho analógy;

- vitamíny, napríklad tiamín, riboflavín, nikotínamid, pyridoxín, pantoténan sodný, biotin, kyselina askorbová, kyselina folová, kyanokobalamín, retinol, cholekalcifcrol, alfatokoferol, kobalamid, hydroxykobalamid;

- protinádorové látky ako je napríklad: taxol, taxoter a ich analógy - dakarbazín, metotrexát, plikamycin, tiotepa, streptozocín;

- kardiovaskulárne liečivá vybrané z tejto skupiny: molzidomín alebo jedna z jeho farmaceutický prijateľných solí, najmä jeho hydrochlorid; linsidomín; acetazolamid; meklofenoxát; diltiazem; nitroprusid sodný;

- hematologické liečivá vybrané z tejto skupiny : tikolpidín alebo jedna z jeho farmaceutický prijateľných soli, hlavne hydrochlorid; molgramostin, kyselina foliniková;

- antikoagulanciá a trombolytiká ako je: heparín, heparin s nízkou molekulovou hmotnosťou vo forme nadroparínu vápenatého, pamaparínu sodného, dalteparínu sodného, enoxaparínu sodného, adreparínu sodného, cetroparínu sodného alebo vo forme prírodných, či syntetických trombolytických pentasacharidov;

- heparinoidy, napríklad lomoparan;

- oxoglutarát diarginínu a farmaceutický prijateľné soli kyseliny oxoglutárovej;

- výťažky z rastlín napríklad na báze vŕby, harpagofytu, ženšeňu a fukusu;

- gén, fragment DNA alebo RNA, určený na génovú terapiu, oligonukleotid, protizmyslový oligonukleotid, nukleotidy naviazané na bielkovinové zlúčeniny ako napríklad časti ribozomálnych podjednotiek, oslabené alebo inaktivované živé vírusy;

- kyselina valprónová a jej analógy;

- metopimazín;

- moxisylit;

- pralidoxín;

- deferoxamín;

- fenobarbital a iné barbituráty;

- klometiazol;

- pamidronát sodný, alandronát sodný, risendronát sodný a iné bifosfonáty aktívne ako antiosteoporotické činidlá hlavne tiludronát alebo disodná soľ{[(4-chlorofenyl)tio]me tylén} bis (fosfonátu) (SR 41319) vo forme hemihydrátu alebo monohydrátu;

-antagonisty 5-HT₂ hlavne ketánserín, ritanserín,(lZ,2E)-l-(2-fluorofenyl)-3 -(4-hydroxyfeny l)-prop-2-én-1 -ón-O-(2-dimetylaminoetyl)oxim (SR 463489) alebo jedna z jeho farmaceutický prijateľných solí;

- antagonisty angiotenzínu II, hlavne tasosartan, telmisartan, losartan draselný losartan naviazaný na hydrochlorotiazid (HCTZ), eprosartan, kandesartan cilexetil, valsartan, irbesartan alebo 2-n-butyl-3-{[2'-l//-tetrazol-5-yl)bifenyl-4-yl]-l,3-diazaspiro[4,4]non-l-én-4-ón (SR 47436) a jeho farmaceutický prijateľné soli;

- fantofarón alebo l-[(p-(3-[(3,4-dimetoxyfenetyl)metylaminoj-propoxy} fenyl)-sulfonyl-2-]izopropylindolizín a jeho farmaceutický prijateľné soli;

- tirapamazín alebo 3-amino-l,2,4-benzotriazín-l,4-dioxid a jeho farmaceutický prijateľné soli;

(2S)-1 -[(2R,3 S)5-chloro-3-(2-chlorofenyl)-1 -(3,4-dimetoxybenzénsulfonyl-3-hydroxy-2,3-dihydrido-lŕ7-indol-2-karbonyl]pyrolidín-2-karboxamid (SR 49059) a jeho farmaceutický prijateľné soli;

N,N-dibutyl-3-{4-[(2-butyl-5-metylsulfonamido)benzofurán-3-yl-karboxyl]fenoxyl}propylamín a jeho farmaceutický prijateľné soli, najmä hydrochlorid (SR 33589);

- 6-(2dietylamino-2-metyl)propylamino-3-fenyl-4-propylpyridazín (SR 46559) a jeho farmaceutický prijateľné soli;

etyl((7S)-7-[(2R)-2-(3-chlorofenyl)-2-hydroxyetylamino]-5,6,7,8-tetrahydronaftalén-2-yloxy}acetát a jeho farmaceutický prijateľné soli hlavne hydrochlorid (SR 58611A);

-1 -(2,4-dichlórfenyl)-3-(N-piperidín-1 -yl-karboxamido)-4-metyl-5-(4-chlorofenyl)-l//-pyrazol a jeho farmaceutický prijateľné soli, hlavne hydrochlorid (SR 141716A);

-4-{ [N-(3,4-dimetoxyfenetyl)]-N-metylaminopropoxyl} -2-benzénsulfonyl-3-izopropyl-l-metylindol (SR 33805) a jeho farmaceutický prijateľné soli;

- kyselina 2-{[l-(7-chlorokinolín-4-yl)-5-(2,6-dimetoxyfenyl)-1 ŕ/-pvrazol-3-karbonyl]amino }adamantán-2karboxylová (SR 48692) a jej farmaceutický prijateľné soli; -N-cyklohexyl-N-etyl-3-(3-chloro-4-cyklohexylfenyl)prop-2-enylamín(SR 31747);

(-)-N-metyl-N-[4-(4-acctylamino-4-fenylpiperidino)-2-(3,4-dichlorofenyl)butyl]-benzamid (SR 48968) a jeho farmaceutický prijateľné soli;

- chlorid (S)-l-{2-[3-(3,4-dichlorofenyl)-l-(3-izopropoxyfeny lacety 1 )p iper idí n-3 -y 1] ety 1} -4-fenyl-1 -azoniabicyklol[2.2.2]oktánu (SR 140333A) a jeho kvartéme farmaceutický prijateľné soli, napríklad benzénsulfonát;

- 4- amino-l-(6-chloropyrid-2-yl)piperidín a jeho farmaceutický prijateľné soli, hlavne hydrochlorid (SR 57227A);

- (S)-N-(l-{3-[l-benzoyl-3-(3,4-dichlorofenyl)piperidín-3-yl]propyl}-4-fenylpiperidín-4-yl)-N-metylacetamid (SR 142801) a jeho farmaceutický prijateľné soli;

- kyselina 2-{[4-(2-chlorofenyl)tiazol-2-yl]aminokarbonyljindol-l-octová (SR 27897)a jej farmaceutický prijateľné soli;

- klopidogrel alebo metyl(+)-(S)-a-(2-chlorofenyl)-4,5,6,7-tetrahydrotieno-[3,2-c]pyridín-5(4/7)-acetát a jeho farmaceutický prijateľné soli, hlavne hydrogenosulfát;

- hydrochlorid l-(2-naftalén-2-yletyl)-4-(3-trifluorometylfcnyl)-l,2,3,6-tetrahydropyridínu (SR57746A) a jeho farmaceutický prijateľné soli, hlavne jeho hydrochlorid;

- N,N-dimetyl-N'-(pyridm-3-yl)metyl-N'-[4-(2,4,6-triizpropylfenyl)tiazol-2-yl]etan-l,2-diamína jeho farmaceutický prijateľné soli, hlavne fumarát (SR 27417);

- kyselina 2-[(5-(2,6-dimetoxyfenyl)-l-{4-[(3-dimetylaminopropyl)metylkarbamoyl]-2-izopropylfenyl-l/7-pyrazol-3-karbonyl)amino]adamantán-2-karboxylová a jej farmaceutický prijateľné soli (SR 142948A);

-3-(l-{4-benzoyl-2-(3,4-difluorofenyl)morfolino-2-yl]etyl}-4-fenylpiperidín-4-yl)-l,ldimetylmočovina a jej farmaceutický prijateľné soli (SR 144190A);

- trihydrochlorid kyseliny 3-[N-{4-[4-(aminoiminometyl)fenyl]-l,3-tiazol-2-yl}-N-(l-karboxymetylpiperidín-4-yl)amino]propiónovej a jeho farmaceutický prijateľné soli (SR 121566);

- etyl 3-[N-{4-[4-(amino(N-etoxykarbonylimmo)metyl)fenyl] -1,3 -ti azol - 2-yl} -N-( 1 -etoxykarbonylmety 1 )piper i d ín-4 -yl)amino]propionát (SR 12187) a jeho farmaceutický prijateľné soli;

- 5-etoxy-1 -[4-(N-/er-butylkarbamoyl)-2-metoxybenzénsulfonyl]-3-spiro-[4-(2-morfolinoetyloxy)cyklohexán]indolín-2-ón (SR 121463) ajeho farmaceutický prijateľné soli.

Preferujú sa hlavne tie prípravky z vynálezu, v ktorých je účinná látka vybraná z nasledujúcej skupiny: kyselina 2-{ [4-(2-chlorofenyl)tiazol-2-yl]aminokarbonyl}indol-l-octová alebo jej draselná soľ, irbesartan, klopidogrel, kyselina ursodeoxycholová a jej sodná soľ, hydrochlorid 1-(2-naftalén-2-yletyl)-4-(3-trifluorometylfenyl)-l,2,3,6-tetrahydropyridínu, fumarát N,N-dimetyl-N'-(pyridín-3-yl)metyl-N'-[4-(2,4,6-triizopropylfenyl)tiazol-2-yl]etán-1,2-diamínu, kyselina 2-[(5-(2,6-dimetoxyfenyl)-l-{4-[(3-dimetylaminopropyl)metylkarbamoyl]-2-izopropylfenyl}-l//-pyrazol-3-karbonyl)amino]adamantán-2-karboxylová, 3-( 1 -{2-[4-benzoyl-2-(3,4-difluorofenyl)morfolino-2-yl]etyl}-4-fenypiperidín-4-yl)-l,l-dimetylmočovina, trihydrochlorid kyseliny 3-[N-{4-[4-(aminoiminometyl)fenyl]-l,3-tiazol-2-yl}-N-(l-karboxymetylpiperidín-4-yl)amino] propiónovej, etyl3-[N-(4-[4-(amino(N-etyl(N-etoxykarboxyl- imino)metyl)fenyl]-l ,3-tiazol-2-yl}-N-(l -(etoxykarboxymetyl)piperidín-4-yl)amino]propionát, 5-etoxy-1 -[4-(N-íer-butylkarbamoyl)-2-metoxybenzénsulfonyl]-3-spiro-[4-(2morfolinoetyloxy)-cyklohexán]indol!n-2-ón a ich farmaceutický prijateľné soli.

Výhodné sú najmä nasledujúce prípravky:

-každý prípravok získaný lyofilizáciou roztoku, v ktorom je manitol s koncentráciou 9 mg/ml, alanín s koncentráciou 18 mg/ml a účinnou látkou je kyselina 2-{[4-(2-chlorofenyl)tiazol-2-yl]aminokarbonyl}indol-l-octová s koncentráciou 1,18 mg/ml alebo jedna z jej ľarmaceuticky prijateľných solí s ekvivalentnou koncentráciou;

-každý prípravok získaný lyofilizáciou roztoku, v ktorom je manitol s koncentráciou 10 mg/ml, alanín s koncentráciou 23 mg/ml a účinnou látkou je irbesartan s koncentráciou 1 mg/ml alebo jedna z jeho farmaceutický prijateľných solí s ekvivalentnou koncentráciou;

-každý prípravok získaný lyofilizáciou roztoku, v ktorom je manitol s koncentráciou 9 mg/ml, alanín s koncentráciou 18 mg/ml a účinnou látkou je hydrochlorid 1 -(2-naftalén-2-yl-etyl)-4-(3-trifluorometyfenyl)-l,2,3,6-tetrahydropyridínu s koncentráciou od 0,01 do 0,2 mg/ml alebo jedna z jeho farmaceutický prijateľných solí s ekvivalentnou koncentráciou.

Takisto farmaceutický prijateľná soľ ktorejkoľvek spomedzi uvedených solitvorných účinných látok môže predstavovať účinnú látku.

Účinná farmaceutická látka je prednostne vyberaná zo skupiny, ktorú tvorí draselná soľ, kyselina SR 27897 ozna čená ďalej ako SR 27897B, irbezartan alebo SR 57746A, klopidogrel, kyselina ursodeoxycholová alebo jej draselná soľ, SR 57746 a SR 27417A.

Na objasnenie predloženého vynálezu boli uskutočnené nasledujúce hodnotenia. Ako príklad farmaceutickej účinnej látky sa zvolil SR 27987B, SR 447436 (irbezartan) a SR 5 7746A.

Následne bolo pripravených, lyofilizovaných a analyzovaných niekoľko roztokov obsahujúcich : SR 27897B s koncentráciou 1 mg/ml; fosforečnanový tlmivý systém (Na₂HPO₄/ NaHjPOú rôznych molarít s pH od 7,8 do 8,25; manitol - alanín v pomere R = hmotnosť manitolu/hmotnosť alanínu, kde R je v rozmedzí 0,1 a 1.

A rovnako sa pripravilo, lyofilizovalo a analyzovalo viacero roztokov obsahujúcich :

SR 47436A s koncentráciou 1 mg/ml; hydroxid draselný v molárnom pomere [KOH]/[SR 47436], ktorý je väčší alebo sa rovná 1; alanín -samostatne alebo v zmesi manitolalanín, kde R v rozmedzí 0,1 až 1 predstavuje podiel hmotnosti manitolu ku hmotnosti alanínu.

A nakoniec bol pripravený, lyofilizovaný a analyzovaný roztok obsahujúci : SR 57746 A vo forme hydrochloridu s koncentráciou 0,11 mg/ml; anhydrid kyseliny citrónovej a zmes manitol-alanín v pomere R = hmotnosť manitolu/hmotnosť alanínu, kde R=0,5.

Uvedená TABUĽKA 1 poukazuje na zloženie skúmaných roztokov obsahujúcich SR 27897B. Pre každý z týchto roztokov platí : R = 0,5; koncentrácie manitolu, alanínu a SR 27897B sa rovnajú 9 mg/ml, 18 mg/ml a 1 mg/ml.

TABUĽKA 1

Vzorka č.	Fosforečnanový tlmivý roztok: mM	pH fosforečnanového tlmivého roztoku
1	5	7,5
2	5	8
3	10	8
4	25	8
5	25	8,5
6	15	8
7	25	7,75
8	25	8
9	25	8,25
10	35	8,25
11	25	8

Nasledujúca TABUĽKA 2 uvádza zloženie skúmaných lyofilizovaných roztokov SR 47436.

TABUĽKA 2

vzorka č.	Manitol mg/ml	Alanín mg/ml	R	KOH mg/ml	SR47436 Mg/ml
12	10	18	0,55	0,137	1
13	10	23	0,43	0,137	1

Ďalej uvedená TABUĽKA 3 uvádza zloženie skúmaných lyofilizovaných roztokov, ktoré obsahujú SR 57746 A vo forme hydrochloridu.

TABUĽKA 3

Vzor ka č.	Manitol mg/ml	Alanín mg/ml	R	Anhydrid kyseliny citrónovej	SR 57746A mg/ml	Polysorbát 80 mg/ml
14	9	18	0,5	7,7	0,11	0
15	9	18	0,5	7,7	0,11	1

Turbidita (stupeň zakalenia) lyofilizátov znova uvedených do roztoku sa určí pomocou turbidimetra Rádio Hach 18900-00. Výsledky sú vyjadrené v nefelometrických jednotkách turbidity (NTU), ktoré sú definované v Štandard methods for examination of water and wastewater vydané Američan Public Health Association.

Organoleptické kritériá sú skúmané vizuálne so zameraním na sfarbenie lyofilizátu, jeho štruktúru (či je porušená, alebo nie ), takisto na prípadný fázový posun medzi povrchovou a vnútornou vrstvou lyofilizátu.

Obsah vody v lyofilizáte sa určí coulometricky podľa metódy opísanej v Ph.Fr. Xéme Ed. V.3.5.6.A., vstreknutím 2 ml metanolu do odmerky s lyofilizátom. Obsah vody sa vyjadruje v percentách na hmotnosť lyofílizátu. Analýza lyofilizátov rôntgenovou difraktometriou sa prevedie na difraktometri SIEMENS D 500 TT; zdroj: CuKal; generátor: 40KV, 25mA; zadný monochromátor; štrbiny 1/1/1/0, 16/0.6; vzorka na nosiči pyrex; oblasť snímania: 4°-40° v krokoch 1 '(29 Bragg)

Diferenčná termická analýza ( DTA ) sa realizuje na prístroji DSC7 Perkin Elmer s nasledujúcimi charakteristikami: kalibrácia pri indiu a ortuti; odber vzorky: 5 až 10 mg do kapsuly s objemom 50 μΐ; počiatočná teplota: 10 °C; rýchlosť zahrievania: 10 °C/min.; konečná teplota: 300 °C.

Stanovenie SR 27897B sa prevedie kvapalinovou chromatografiou (Ph. Eur. 2:(I) V. 6.20.4.) pri 254 nm s použitím chromatografickej kolóny C18 s dĺžkou 25 cm, s vnútorným priemerom 4,6 mm a zrnitosťou 10 pm (Bishoff, referenčné číslo 25461840). Mobilná fáza je tvorená zmesou octanového tlmivého roztoku s pH = 4,0 (ľadová kyselina octová a koncentrovaný amoniak Merck) s acetonitrilom na chromatografiu v objemovom pomere 1 : 1 (Sharlau, referenčné číslo Ac33). Referenčný roztok je tvorený roztokom s 50 pg SR 27897B (dodávateľ Sanofi Recherche) na ml metanolu (Merck, referenčné číslo 6009). Skúmaný roztok sa získa rozpustením lyofílizátu v 100 ml ultrapurifíkovanej vody (Millipore, eau „ Milli-Q“). Prietoková rýchlosť je 2 ml/min. Pre každý chromatogram sa vypočíta plocha charakteristických píkov získaných po vstreknutí 20 μΐ referenčného roztoku a následne po vstreknutí skúmaného roztoku. Obsah SR 27897B v lyofilizáte vyjadrený v mg na odmerku sa môže stanoviť na základe výpočtu týchto dvoch plôch.

Stanovenie látok pridružených ku SR 27897B (nečistôt) nachádzajúcich sa v lyofilizáte počas jeho uchovávania sa takisto uskutoční kvapalinovou chromatografiou na kolóne C18. Množstvo týchto látok je významným parametrom stability lyofílizátu. Mobilná fáza je tvorená gradientom acetonitrilu a octanového tlmivého roztoku s pH 4,0, ktorého zloženie je uvedené v TABUĽKE A.

TABUĽKA A

čas (min.)	Acetonitril (objem)	Octanový tlmivý systém PH 4,0 (objem)
0	20	80
5	30	70
15	60	40
25	70	30
28	20	80
40	20	80

Referenčný roztok je tvorený 10 pg SR 27897B (Sanofi Recherche) na ml metanolu. Skúmaný roztok sa získa rozpustením lyofilizovaného obsahu fľaštičky v 5 mililitroch metanolu. Prietoková rýchlosť je 2 ml/min. Rovnakým spô sobom sa pre každý chromatogram vypočíta plocha špecifických píkov neznámych nečistôt, ktoré sa získajú po vstreknutí 20 μΐ skúmaného roztoku, vzhľadom na plochu piku SR 27897B dosiahnutého po vstreknutí 20 μΐ referenčného roztoku. Na základe týchto výpočtov sa určí obsah každej z nečistôt a celkový obsah nečistôt v lyofílizovanom SR 27897B vyjadrený v percentách na hmotnosť produktu.

Stanovenie SR 47436 sa uskutoční vysokoúčinnou kvapalinovou chromatografiou HPLC (Ph. Eur. 2 (1) V.6.20.4.) pri 220 nm s použitím chromatografickej kolóny C18 z nehrdzavejúcej ocele, dlhej 25 cm, s vonkajším priemerom 8 mm a s vnútorným priemerom 4 mm, oxid kremičitý s priemerom zŕn 7 pm a s pórmi s priemerom 120A, ktorý prešiel úpravou „end capping“ (kolóna, referenčné číslo 720042, dodávateľ Chromoptic). Mobilná fáza je tvorená zmesou 60 objemov fosforečnanového tlmivého roztoku s pH = 3,0 (kyselina fosforečná Prolabo, referenčné číslo 20624295, trietylamín Fluka, referenčné číslo 90340) a 40 objemov acetonitrilu pre chromatografiu (Merck referenčné číslo 14291) s prietokovou rýchlosťou 1 ml/min.

Prvý referenčný roztok je tvorený roztokom 0,5 mg SR 47436 (Sanofi Recherche ) na ml mobilnej fázy. Druhý referenčný roztok je zložený z roztoku, ktorý obsahuje 0,5 mg SR 47436 a 0,5 mg nečistôt zodpovedajúcich vstupnému produktu (Sanofi Recherche) na ml mobilnej fázy. Skúmaný roztok sa získa rozpustením lyofílizátu v 10 ml mobilnej fázy. Reprodukovateľnosť odoziev sa overí opakovaným dávkovaním prvého a druhého referenčného roztoku ( faktor rozlíšenia má byť väčší ako 2 medzi dvoma píkmi po vstreknutí 10 μΐ druhého referenčného roztoku; koeficient variácie plochy piku menší alebo rovnajúci sa 1 % pre sériu 5 vstreknutí po 10 μΐ prvého referenčného roztoku).

Po vstreknutí 10 μΐ z každého referenčného roztoku a 20 μΐ z každého skúmaného roztoku sa výpočtom plôch charakteristických píkov získaných z chromatogramov určí obsah SR 47436 v mg na lyofilizát.

Stanovenie látok pridružených ku SR 47436 sa takisto uskutoční vysokoúčinnou kvapalinovou chromatografiou HPLC (Ph.Eur.2 (I) V 6.20.4.) pri 220 nm s použitím chromatografickej kolóny C18 (pozri stanovenie SR 47436). Mobilná fáza je tvorená zmesou 60 objemov fosforečnanového tlmivého roztoku s pH = 3,1 a so 40 objemami acetonitrilu pre chromatografiu s prietokovou rýchlosťou 1 ml/min. Zloženie obidvoch porovnávacích roztokov je nasledovné : prvý je tvorený roztokom 0,5 mg SR 47436 (Sanofi Recherche) na ml metanolu (dodaný od SDS pod referenčným číslom 0930221) a druhý je zložený z roztoku 0,5 pg SR 47436 na ml metanolu. Skúmaný roztok sa získa rozpustením lyofílizátu v 10 ml vody pre injektovateľné preparáty (PIP).Analýza musí byť prevedená do polhodiny po obnovení roztoku. Reprodukovateľnosť odoziev sa overí opakovaným dávkovaním 10 μΐ vody PIP a 10 μΐ z obidvoch referenčných roztokov (retenčný čas hlavného piku je podobný ako pri referenčných roztokoch, pomer signálu k šumu je pre prvý roztok väčší alebo rovnajúci sa 10). Po vstreknutí 10 μΙ skúmaného roztoku sa výpočtom plôch charakteristických píkov získaných z chromatogramu stanoví obsah danej pridruženej látky a globálny obsah pridružených látok (nečistôt) vyjadrený na hmotnosť produktu.

Stanovenie SR 57746A (Sanofi Recherche) sa vykoná kvapalinovou chromatografiou pri 224 nm s použitím kolóny C18 s dĺžkou 25 dm, s vnútorným priemerom 4 mm a so zrnitosťou (s veľkosťou častíc) 7 pm (Macherey Nagel, referenčné číslo 720042). Mobilnú fázu predstavuje zmes 45 objemov acetonitrilu pre chromatografiu (Rathbum refe renčné číslo RH 1016) s 55 objemami tlmivého roztoku s pH = 3,0 (pripraví sa rozriedením 5,5 ml kyseliny fosforečnej v 950 ml filtrovanej demineralizovanej vody (Millipore Alpha-Q) a následnou úpravou pH na 3,0 roztokom trietylamínu (Fluka referenčné číslo 90340), potom sa pridá 10 ml acetonitrilu a doplní sa filtrovanou dcmincralizovanou vodou na objem 1000 ml). Referenčný roztok je zložený z roztoku 15,0 mg SR 57746A na 100 ml metanolu (Carlo Erba, referenčné číslo 414814). Skúmaný roztok sa získa rozpustením lyofilizátu v 3,0 ml zmesi, ktorú tvorí 25 objemov metanolu a 75 objemov filtrovanej demineralizovanej vody. Prietoková rýchlosť je 1 ml/min. Pre každý z chromatogramov sa odmeria plocha charakteristichých píkov získaných po vstreknúť 10 μΐ referenčného roztoku a následne skúmaného roztoku. Na základe meraní týchto dvoch plôch sa určí obsah SR 57746A v lyofilizáte vyjadrený v mg na odmerku.

Stanovenie látok pridružených ku SR 57746A v lyofilizáte sa zrealizuje takisto pomocou kvapalinovej chromatografie na kolóne s chromatografickými podmienkami, ktoré sú opísané v „Dosages“ z (Ph.Eur. 2.(1) V.6.20.4.). Referenčný roztok je tvorený roztokom 0,15 pg SR 57746A na ml metanolu. Skúmaný roztok sa získa rozpustením obsahu lyofilizátu v 3 ml zmesi, ktorú tvorí 25 objemov metanolu a 75 objemov filtrovanej demineralizovanej vody. Prietoková rýchlosť je 1 ml/min. Rovnakým spôsobom sa zmeria plocha charakteristických píkov neznámych nečistôt získaných na chromatogramoch po vstreknúť 10 μΐ skúmaného roztoku a porovná sa s plochou charakteristického piku pre SR 57746A, ktorý' sa získa po vstreknúť 10 μΐ referenčného roztoku. Týmito meraniami sa môže stanoviť obsah každej z neznámych nečistôt zvlášť a potom aj celkový obsah nečistôt v lyofilizovanom SR 57746A vyjadrený v percentách na plochu.

Analytické výsledky získané použitím týchto rôznych metód sú opísané.

Uvedená TABUĽKA 4 predstavuje výsledky počiatočných testov uskutočnených na lyofilizáte zo SR 27897B, ktoré sledovali obsah vody (v % na hmotnosť lyofilizátu); teplotu sklovitého prechodu Tg (v °C) určenú DTA; turbiditu lyofilizátov uvedených do roztoku vodou PIP (v NTU) a pH.

TABUĽKA 4

vzorka Č.	% vody	Tg°C	TurbiditaNTU	PH
1	0,39	27	58	7,25
2	0,47	25	23	7,2
3	0,6	27	11	7,4
4	0,91	35	2,2	7,6
5	0,89	40	29	7,5
6	0,61	36,7	17	7,6
7	0,93	45,5	33	7,6
8	1,07	46,1	1,4	7,8
9	1,04	45,7	0,5	7,7
10	1,94	45,8	0,8	7,8
11			4,5	7,6

Počas 1, 2 a 6 mesiacov bola ako doplnkový príklad sledovaná stabilita niekoľkých vzoriek lyofilizátov zo SR 27897B a to pri teplotách 5 °C, 25 °C, 40 °C a 50 °C.

TABUĽKA 5, ktorá uvádza celkový obsah pridružených látok (nečistôt) vyskytujúcich sa v lyofilizáte zo SR 27897B po 3 mesiacoch uchovávania pri 50 °C, poukazuje na výbornú stabilitu lyofilizátov po uplynutí tohto času.

TABUĽKA 5

vzorka č.	% nečistôt pri 5 °C	% nečistôt pri 25 °C	% nečistôt pri 40 °C	% nečistôt pri 50 °C
1	<0,27	<0,26		<0,25
2	<0,23	<0,26		<0,24
3	<0,23	<0,26		<0,25
4	<0,26	<0,24		<0,24
5	<0,23	<0,25		<0,26
6			<0,1
7			<0,1
8			<0,1
9			<0,1
10			<0,1
11		<0,1	<0,1

TABUĽKA 6 predstavuje celkový obsah pridružených látok (nečistôt) zistených v lyofilizáte zo SR 27897B po 3 mesiacoch uchovávania pri teplote 50 °C. Lyofilizáty znova majú výbornú stabilitu aj po tomto čase uchovávania.

TABUĽKA 6

vzorka č.	% nečistôt pri 50 °C
1	<0,1
2	<0,1
3	<0,1
4	<0,1
5	<0,1

A konečne TABUĽKA 7 predstavujúca celkový obsah pridružených látok (nečistôt) nájdených v lyofilizátoch zo SR 27897B po 6 mesiacoch skladovania pri teplote 5 °C a pri 40 °C, poukazuje takisto na ich vynikajúcu stabilitu po uplynutí tohto času.

TABUĽKA 7

vzorka č.	% nečistoty pri 5 °C	% nečistoty pri 40 °C
7	<0,1	0,13
8	<0,1	0,1
9	<0,1	0,1
11		<0,1

Difrakcia rtg lúčov

Rtg difrakčné práškové záznamy dvoch lyofilizátov obsahujúcich zmes manitol/alanín v pomere R = (hmotnosť manitolu/hmotnosť alanínu) = 0,5 sú na obrázku 1 - difŕaktogram 1 a 2. Difraktogramy 3 a 4 z obrázka 1 znázorňujú porovnávacie vzorky alanínu a manitolu. Ako môžeme pozorovať na tomto obrázku difrakčné maximá situované medzi 10° a 11° sú špecifické pre kryštalický manitol a nenachádzajú sa v difrakčných záznamoch dvoch lyofilizátov zo SR 27897B.Teda pre R = 0,5 je v kryštalickej forme iba alanín, zatiaľ čo manitol je vo forme amorfnej.

Diferenčná termická analýza

Obrázok 2 predstavuje vplyv hmotnostného pomeru alanínu ku manitolu na teplom sklovitej premeny lyofilizátov. Tento obrázok nám ukazuje, že maximálna teplota je dosiahnutá pre (1/R) > 1, to znamená pre R v rozmedzí 0 a

1. Vo všeobecnosti teplota sklovitej premeny predstavuje

maximálnu teplotu stability lyofilizátu. A teda maximálna	Odmerka z bezfarebného skla, typ 1,	1
teplota stability lyofilizátu je dosiahnutá pre R v rozmedzí	V = 3ml
Oal.	Uzáver zo šedého chlorbutylu Hliníková kapsula Flip-off modrá s	1 1
Uvedená TABUĽKA 8 predkladá výsledky počiatočných	priemerom 13 mm

testov vykonaných na lyofllizátoch zo SR 47436, ktoré sle- * zodpovedajúci 1 mg SR 27898 v kyslej forme dovalí obsah vody, celkový obsah pridružených látok (nečistôt); a takisto na lyofllizátoch znova uvedených do roz- PRÍKLAD 2: Zloženie lyofilizátu zo SR 27897 (zásada), toku vodou PIP so zameraním na pH. ktorý sa znova uvedie do roztoku pridaním 5 ml vody PIP.

TABUĽKA 8
Vzorka č.	% vody	% nečistôt	pH
12	0,5	0,24	6,6
13	0,2	0,1	6,7

Nasledujúca TABUĽKA 9 uvádza celkové obsahy pridružených látok vyjadrené v percentách čistoty SR 47436 v lyofllizátoch zo SR 47436. Pre vzorku 12 sú uvádzané hodnoty po 1 a 2 týždňoch skladovania pri teplotách 5 °C, 25 °C, 35 °C a pri 50 °C.

TABUĽKA 9

Vzorka č. 12	5 °C	25 °C	35 °C	50 °C
1 týždeň	99,89	99,89	99,71	98,47
2 týždeň	99,90	99,82	99,47	97,05

Uvedená TABUĽKA 10 predstavuje celkové obsahy pridružených látok vyjadrené v percentách nečistoty lyofilizátov zo SR 47436 pre vzorku 13 po 3, 6 a 9 mesačnom uchovávaní pri teplotách 5 °C, 25 °C a 35 °C.

TABUĽKA 10
Vzorka č. 13	5 °C	25 °C	35 °C
3. mesiac	0,1 %	0,2 %	0,3 %
6. mesiac	0,2 %	0,3 %	0,6 %
9. mesiac	0,3 %	0,3 %	-

TABUĽKA 11 uvádza celkové obsahy pridružených látok vyjadrené v percentách nečistoty pre lyofilizáty zo SR 57746A po 1 a 3 mesiacoch uchovávania pri teplotách 5 °C, 25 °C a 40 °C; a takisto pre referenčnú vzorku lyofilizátu zo SR 57746Λ, ktorý bol bezprostredne uvedený do roztoku.

TABUĽKA 11

Vzorky č. 14 a 15	5 °C	25 °C	40 °C
Referenčná vzorka		<0,1 %
1. mesiac	<0,1 %	<0,1 %	<0,1 %
3. mesiac	<0,1 %	<0,1 %	<0,1 %

Príklady uskutočnenia vynálezu

PRÍKLAD 1: Zloženie lyofilizátu zo SR 27897 (zásada), ktorý sa znova uvedie do roztoku pridaním lml vody PPI.

ZLOŽKY	Jednotkové množstvo (v mg)
SR 27897B *	1,18 mg
Alanín nežíhaný	18,0 mg
Manitol	9,0 mg
Dihydrát dihydrogenfosforečnanu sod-	0,3 mg
neho nežíhaný
Dodekahydrát hydrogenfosforečnanu	8,5 mg

disodného (nežíhaný)

Zložky	jednotkové množstvo (v mg)
SR 27897B*	5,9 mg
Alanín nežíhaný	90,0 mg
Manitol	45,0 mg
Dihydrát dihydrogenfosforečnanu sodného (nežíhaný)	1,5 mg
Dodekahydrát hydrogensforečnanu disodného(nežíhaný)	42,5 mg
Odmerka z bezfarebného skla typ 1, V = 20ml	1
Uzáver zo sivého chlorbutylu s priemerom 20 mm	1
Hliníková kapsula Flip- off modrá s priemerom 20 mm	1

♦zodpovedá 5 mg SR 27897 v kyslej forme

PRÍKLAD 3: Zloženie lyofilizátu z 5 mg SR 47436, ktorý sa znova uvedie do roztoku pridaním 5 ml vody PIP.

Zložky	Jednotkové množstvo (mg)
SR 47436	5,0 mg
Alanín nežíhaný	115,0 mg
Manitol nežíhaný	50,0 mg
Hydroxid draselný	0,687 mg
Odmerka z bezfarebného skla, typ 1, V = 20ml	1
Uzáver zo sivého chlorbutylu s priemerom 20 mm	1
Hlinníková kapsula s viečkom, priemer 20 mm	1

PRÍKLAD 4: Zloženie lyofilizátu zo SR 57746A (hydrochlorid), ktorý sa znova uvedie do roztoku pridaním 4 ml vody PPI.

Zložky	Jednotkové množstvo (mg)
SR 57746A	0,44 mg
Alanín nežíhaný	72,0 mg
Manitol nežíhaný	36,0 mg
Anhydrid kyseliny citrónovej nežíhaný	30,8 mg
Odmerka z bezfarebného skla, typ 1, V = 20 ml	1
Uzáver zo sivého chlorbutylu s priemerom 20 mm	1
Hliníková kapsula Flip-off modrá, priemer 20 mm	1

PRÍKLAD 5: Zloženie roztoku SR 57746A (hydrochloridu) na lyofilizáciu vyjadrené v koncentráciách pre konečné objemy roztoku, ktoré pridaním adekvátneho množstva vody PPI dosahujú 100 ml.

Zložky	Jednotkové množstvo (mg)
SR 5 7746A Alanín nežihaný Manitol nežihaný Anhydrid kyseliny citrónovej nežihaný Voda pre injektovateľné preparáty Odmerka z bezfarebného skla, typ 1 Uzáver zo sivého chlorbutylu Hliníková kapsula Flip-off modrá	0,11 mg/ml 18,0 mg/ml 9,0 mg/ml 7,7 mg/ml QSP lml 1 1 1

PRÍKLAD 6: Zloženie lyofilizátu zo SR 57746A (hydrochloridu) obsahujúceho od 0,01 do 0,2 mg SR 57746A (hydrochloridu), ktorý sa znova uvedie do roztoku pridaním 1 ml vody PPI.

Zložky	Jednotkové množstvo (mg)
Alanín nežihaný	18,0 mg
Manitol nežihaný	9,0 mg
Anhydrid kyseliny citrónovej nežihaný	7,7 mg
Odmerka z bezfarebného skla, typ 1,	1
V = 3ml
Uzáver zo sivého chlorbutylu	1
Hliníková kapsula Flip-off modrá s	1
priemerom 13 mm

PRÍKLAD 7: Zloženie lyofilizátu zo SR 57746A (hydrochloridu), ktorý sa znova uvedie do roztoku pridaním 4 ml vody PPI.

Zložky	Jednotkové množstvo (mg)
SR 57746A Alanín nežihaný Manitol nežihaný Anhydrid kyseliny citrónovej nežihaný Polysorbát 80 Odmerka z bezfarebného skla, typ 1, V = 20 ml Uzáver zo sivého chlorbutylu s priemerom 20 mm Hliníková kapsula Flip-off modrá, priemer 20 mm	0,44 mg 72,0 mg 36,0 mg 30,8 mg 4,0 mg 1 1 1

PRÍKLAD 8: Zloženie roztoku SR 57746A (hydrochloridu) na lyofilizáciu vyjadrené v koncentráciách pre výsledné objemy roztoku, ktoré sa pridaním adekvátneho množstva vody PIP doplnia na 100 ml.

Zložky	Jednotkové množstvo (mg)
SR 57746A Alanín nežihaný Manitol nežihaný Anhydrid kyseliny citrónovej nežihaný Polysorbát 80 Voda pre injektovateľné preparáty Odmerka z bezfarebného skla, typ 1 Uzáver zo sivého chlorbutylu Hliníková kapsula Flip-off modrá	0,11 mg/ml 18,0 mg/ml 9,0 mg/ml 7,7 mg/ml 1,0 mg/ml QSP 1 ml 1 l 1

Zložky	Jednotkové množstvo (mg)
Alanín nežihaný	18,0 mg
Manitol nežihaný	9,0 mg
Anhydrid kyseliny citrónovej nežihaný	7,7 mg
Polysorbát 80	1,0 mg
Odmerka z bezfarebného skla, typ 1	1
V = 3 ml
Uzáver zo sivého chlorbutylu	1
Hliníková kapsula Flip -off modrá,	1
priemer 13 mm

PATENTOVÉ NÁROKY

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Stabilný lyofilizovaný farmaceutický prípravok zložený z fázy amorfnej a z fázy kryštalickej, farmaceutický prijateľných, obsahujúcich najmenej jednu aktívnu neproteinovú látku, vyznačujúci sa tým, že obsahuje manitol a alanín v hmotnostnom pomere R medzi 0,1 až 1, kde R znamená pomer hmotnosti manitolu k hmotnosti alanínu s tým, žc prípravok obsahuje ďalej ešte jedno alebo viac činidiel, tvoriacich matricu, zvolených zo skupiny ktorú tvoria pektíny, proteiny extrahované z obilia alebo zo sóje, dextríny, xantáty, želatíny, agar, polysacharidy, algináty, karboxymetylcelulóza, polyvinylpyrolidón, akáciová želatína a ich zmesi.

2. Prípravok podľa nároku 1, vyznačujúci sa t ý m , že aktívna látka je obsiahnutá spolu s ďalšou aktívnou látkou proteínovej povahy.

3. Prípravok podľa nároku 1 alebo 2, vyznačujúci sa tým, že obsahuje ďalej ešte najmenej jednu pridanú látku zvolenú zo skupiny, ktorú tvoria pufre, povrchovo aktívne činidlá, konzervačné činidlá, soli, antioxidanty a chelátotvorné činidlá.

4. Prípravok podľa nároku 1 alebo 2, vyznačujúci sa tým, že je určený na rekonštruovanie svojho roztoku na podávanie parenterálnou cestou.

5. Prípravok podľa nároku 1 alebo 2, vyznačujúci sa tým, že je určený na rekonštituovanie svojho roztoku na podávanie orálnou cestou.

6. Prípravok podľa nároku 1 alebo 2, vyznačujúci sa tým, že je vhodný na rekonštituovanie injektovateľného roztoku.

7. Prípravok podľa nároku 1, vyznačujúci sa t ý m , že je určený na priame podávanie orálnou cestou.

8. Prípravok podľa nároku 1, vyznačujúci sa t ý m , že použitá aktívna látka je zvolená zo skupiny, ktorú tvoria kyseliny fenylalkánové, protizápalové nesteroidné látky typu „oxicam“, paracetamol, soli kyseliny acetylsalicylovej s lyzínom a arginínom, žlčové kyseliny, kortikosteroidy, antracyklíny, floroglucinol, deriváty platiny, deriváty alkaloidov zo zimozelene ( Vinea minor), deriváty námeľových alkaloidov z raže, deriváty s purinovým alebo pyrimidinovým základom, prostaglandíny, benzodiazepíny, β-laktámy a antibiotiká.

2 výkresy

PRÍKLAD 9: Zloženie lyofilizátu zo SR 57746A (hydrochloridu) obsahujúceho od 0,01 do 0,2 mg SR 57746A (hydrochloridu), ktorý sa uvedie do roztoku pridaním 1 ml vody PIP.